TW201400505A

TW201400505A - 人類化ｔａｕ抗體

Info

Publication number: TW201400505A
Application number: TW102112202A
Authority: TW
Inventors: Andrea Pfeifer; Andreas Muhs; Maria Pihlgren; Oskar Adolfsson; Leuven Fred Van; Gai Ayalon; Danielle Marie Di Cara; Isidro Hotzel
Original assignee: Ac Immune Sa; Univ Leuven Kath; Genentech Inc
Priority date: 2012-04-05
Filing date: 2013-04-03
Publication date: 2014-01-01
Also published as: WO2013151762A1; MX2014011958A; JP6293731B2; IL234942A0; CN104520322B; KR102132041B1; JP2015521158A; US9657091B2; RU2644242C2; EP2834270B1; HK1209137A1; EP2834270A1; US20150175682A1; KR20150003274A; AR092818A1; CA2869438A1; SG11201406347TA; CN104520322A; BR112014024769A2; MX356800B

Abstract

本發明提供在處理由神經纖維纏結引起或與其相關之疾病及病症時用於治療及診斷用途之方法及組合物。具體而言，本發明係關於特異性識別並結合至磷酸化病理tau蛋白-構型異構物之人類化抗體，及涉及該等抗體之方法及組合物，供在處理tau病變(包括阿茲海默氏症(Alzheimer’s Disease,AD))時用於治療及診斷用途。

Description

人類化TAU抗體

本發明係關於在由神經纖維纏結引起或與其相關之疾病及病症之治療中用於治療及診斷用途之方法及組合物。具體而言，本發明係關於特異性識別並結合至磷酸化病理tau蛋白-構型異構物之人類化抗體以及涉及該等抗體之在tau病變(包括阿茲海默氏症(AD))之治療中用於治療及診斷用途之方法及組合物。

神經纖維纏結及神經纖維串連(neuropil thread,NT)係阿茲海默氏症(AD)之主要神經病理學標誌。其由在天冬醯胺醯基或天冬胺醯基殘基上歷經翻譯後修飾(包括磷酸化、脫醯胺及異構化)之微管相關tau蛋白組成。其起源於過度磷酸化tau蛋白及其構型異構物之聚集。AD與許多神經退化性tau病變，尤其與特定類型之額顳葉癡呆(FTD)共用此病理學。

Tau蛋白係易溶「天然非摺疊」蛋白，其極易結合至微管(MT)以促進其組裝及穩定性。MT對於神經元之細胞支架完整性且因而對於神經元迴路之適當形成及運行、因此對於學習及記憶十分重要。tau與MT之結合受動態磷酸化及脫磷酸化控制，如主要在活體外及在非神經元細胞中經證實。由於可能磷酸化位點之數量較大(>80個)，故在活體內每一者之確切貢獻及負責激酶之一致性仍在很大程度上不明確。

在AD腦中，tau病理學產生晚於類澱粉病變理學且因此大概反應類澱粉病變理學，其構成類澱粉蛋白級聯假說之本質。此係基於且由在AD症候群及唐氏症候群(Down syndrome)患者中之研究指示，且藉由在基因轉殖小鼠中之研究利用組合之類澱粉病變理學與tau病理學印證(Lewis等人，2001；Oddo等人，2004；Ribe等人，2005；Muyllaert等人，2006；2008；Terwel等人，2008)。

該兩種病理學在人類AD患者中之確切時序以及類澱粉蛋白與tau病理學之聯繫機制仍在很大程度上未知，但已提出涉及發揮作用之神經元信號傳導路徑之活化或GSK3及cdk5作為主要「tau-激酶」(由Muyllaert等人所綜述，2006,2008)。

tau病變在AD中並非無害副作用而係主要病理執行者之假說係基於相互充分印證之可靠遺傳、病理學及實驗觀察：．在由類澱粉蛋白蛋白前體(APP)或早老素突變引起之早髮型家族性AD病例中，必然致病原因係類澱粉蛋白累積，但病理學總是包含附帶tau病變，此與在晚髮型偶發性AD病例中相同；．最近，若干臨床1期及2期研究例示認知功能障礙及癡呆之嚴重性與tau病變相關且與類澱粉病變理學無關，該等研究包括類澱粉蛋白之PIB-PET成像並鑑別許多「偽陽性」：具有高腦類澱粉蛋白負載之認知正常個體；．在家族性FTD中，tau病變係由tau突變體引發並直接引起神經退化而無類澱粉病變理學；．在實驗小鼠模型中，由類澱粉病變理學引起之認知缺陷在不存在tau蛋白時幾乎完全緩解(Roberson等人，2007)。

合併之論據支持在AD及相關神經退化性tau病變中tau蛋白係認知終止之主要參與者的假說。

突出的新興AD治療係藉由被動免疫療法利用特異性mAb來清除經推測具有神經毒性或突觸毒性之類澱粉蛋白肽及其聚集體。

如此處所提出，預計針對tau病理學之免疫療法抵製已知或推定引起突觸功能障礙及神經退化之病理tau蛋白-構型異構物。有人提出所引起之類澱粉病變理學與過度磷酸化tau蛋白之神經元內聚集體在導致AD之輕度認知損害(MCI)至重度癡呆之病理事件之認知級聯及退化級聯中以協同方式作用。因此，與目前單一療法相反，針對tau之藥療法與針對類澱粉蛋白(或其他任一者)之藥療法之組合將構成較佳且實質上更有效之AD治療。

靶向tau蛋白之其他治療方法稀少且主要包含：

．認為使tau之磷酸化增加至病理級別之激酶的抑制劑

．阻斷過度磷酸化tau蛋白之細胞質聚集之化合物。

該等方法具有多個特異性及療效缺點，其共同問題係在試圖改變APP及類澱粉蛋白之代謝時全部突出連續研究對額外治療選項(包括針對tau之免疫療法)之重要性。

實際上，對於在活體內定義病理學tau構型異構物尚未取得成果，更不必說靶向。在Aβ42 II期臨床試驗中，似乎未充分考慮纏結病理學且未進行更深入分析(Nicoll等人，2003；Masliah等人，2005)。另一方面，在具有組合AD樣病理學之臨床前小鼠模型中靶向類澱粉蛋白之實驗免疫療法亦展示對tau病理學之影響，但tau聚集體存留(Oddo等人，2004)。

有人對於藉助免疫療法處置細胞內tau蛋白之可行性存有一些疑問。在tau病變小鼠模型中之最近實驗研究消除了該等疑問(Asuni等人，2007)。其顯示使用來源於tau蛋白之磷酸化肽進行疫苗接種可達成纏結病理學降低及功能改良。該等數據印證了在帕金森氏病(Parkinson’s Disease,PD)及路易氏體病(Lewy body disease)模型中靶向α-突觸核蛋白之免疫療法(Masliah等人，2005,2011)及在肌肉萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)模型中靶向超氧化物歧化酶(Urushitiani等人，2007)之免疫療法的先前報道。該等疾病係細胞內蛋白導致突觸缺陷及神經退化之實例，迄今尚未完全瞭解其機制。另一方面，在細菌中產生並經分離得到之全長重組tau蛋白似乎不適宜作為疫苗，因為所用佐劑(即弗氏完全佐劑(complete Freunds)及百日咳毒素)會造成該研究之負面結果(Rosenmann等人，2006)。

已使用需要Ser-409磷酸化(pS409)之Tau表位作為早期出現於AD中之Tau磷酸化位點之標記物(Jicha等人，1999)。此磷酸化具有蛋白激酶A(PKA)依賴性，且在早期AD病例中在受影響神經元中先於或同步於神經纖維病理學之成對螺旋絲狀體(paired helical filament,PHF)形成之初期及最終擴散。在機理研究中，亦顯示pS409係Tau寡聚(涉及PHF及神經纖維纏結組裝之過程)之直接決定因素(Vanhelmont等人，2010；Alonso等人，2008)。此外，pS409降低Tau與微管(MT)結合之能力，即便不為Tau之MT-結合結構域之一部分，此表明S409磷酸化亦不利於Tau-微管相互作用(Vandebroek等人，2006)。已顯示包含抗原肽Tau 401至418[pS404/pS409]之脂質體疫苗在野生型C57BL/6小鼠中及在Tau-缺乏小鼠中誘導特異性IgG抗體(WO2010/115843)。

在人類中使用齧齒類動物抗體之長期療法將產生抗球蛋白免疫反應，此可在投與後約8天至12天時檢測到並在約20天至30天時達到峰值。若遭遇該抗球蛋白反應，則必須在不超過約10天後中斷治療並阻止以後進行重複治療，因為其將導致重新且更快速的二次抗球蛋白反應發作。儘管齧齒類動物抗體與人類抗體共享很大程度的序列保守性，但在齧齒類動物抗體與人類抗體之間存在許多序列差異，其足以使得齧齒類動物抗體在人類中具有免疫原性。

可藉由直接在人類中產生抗體或藉由生成「人類」、「人類化」(亦稱「改形」抗體(reshaped antibody))或「人源化(humaneered)」抗體來克服此問題。人類化抗體具有可變區胺基酸序列，其含有拼接至人類或人類樣框架序列中之來源於齧齒類動物之CDR。由於人類化抗體之特異性係由來源於齧齒類動物之CDR提供，故其殘基使用基本上未變且僅進行可允許之較小修飾，從而不會顯著妨礙該抗體對其靶標抗原之親和力及特異性。框架殘基可來源於任一靈長類或尤其任一人類可變區或可為其組合且所得經設計可變區將視為改形。

為最大化在改形抗體中保持親和力之可能性，適當選擇框架區甚為重要。已知框架序列用於固定CDR於其正確空間定向以便與抗原相互作用，且框架殘基有時甚至會參與抗原結合。為維持抗體對其抗原之親和力，選擇與齧齒類動物框架之序列最類似之人類框架序列係有利的。然後仍可能需要用齧齒類動物框架中之相應殘基替代人類框架序列中之一或多種胺基酸以避免親和力損失。可藉由電腦建模來幫助此替代。

人類患者對被動及/或主動免疫療法之需要長期未得到滿足，該等免疫療法作用以抵製已知或推定引起神經退化性病症之病理蛋白構型異構物，例如AD中類澱粉蛋白肽及其聚集體以及對於AD與類澱粉蛋白一樣典型之過度磷酸化tau蛋白之神經元內聚集體。

此未滿足之需要在本發明之範圍內得以滿足，本發明提供新穎方法及組合物，該組合物包含高度特異性且高度有效之抗體，尤其嵌合抗體(包括其片段)、更具體而言能夠特異性識別並結合至tau蛋白之特異性主要病理磷酸化表位之部分地或完全人類化抗體(包括其片段)。具體而言，本發明針對tau蛋白上，尤其聚集tau蛋白上認為在tau病變(包括AD)中負責突觸毒性及神經毒性之線性及構形、簡單及複雜磷酸化表位提供特異性抗體。

在一實施例中，本發明係關於識別並結合至Tau蛋白上至少一個不同結合位點之抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合抗體或其片段、或人類化抗體或其片段。

如各實施例中所述之本發明抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合或人類化抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其聚集Tau蛋白上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該抗體對可溶性及不溶性Tau蛋白具有高結合親和力，並調節尤其腦中可溶性及不溶性Tau含量，尤其具有(a)至少100nM，尤其至少80nM，尤其至少70nM，尤其至少50nM，尤其至少10nM，尤其至少8nM，尤其至少5nM，尤其至少2nM，尤其至少1nM，尤其至少500pM，尤其至少400pM，尤其至少300pM，尤其至少200pM，尤其至少100pM，尤其至少50pM之解離常數及/或(b)10⁴M^-1s^-1或更大，尤其介於3×10⁴M^-1s^-1至5×10⁴M^-1s^-1之間或更大，尤其10⁵M^-1s^-1或更大；尤其0.5×10⁵M^-1s^-1至9×10⁵M^-1s^-1或更大；尤其10⁶M^-1s^-1或更大，尤其1×10⁶M^-1s^-1至4×10⁶M^-1s^-1或更大，尤其10⁷M^-1s^-1或更大之締合速率常數。

在某些實施例中，本發明係關於如各實施例中所述之本發明抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合或人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該抗體具有高結合親和力以及至少100nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少80nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少70nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少10nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少200pM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少100pM之解離常數及10⁶M^-1s^-1或更大之締合速率常數。

在本發明之各實施例中，如各實施例中所述之本發明抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合或人類化抗體特異性識別並結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白，尤其微管相關tau蛋白，尤其聚集微管相關且過度磷酸化之tau蛋白(例如存於成對螺旋絲狀體(PHF)中者，PHF係神經纖維纏結、神經纖維串連及失養性軸突中之主要結構)上之磷酸化表位，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位。

在本發明之特定實施例中，人類tau蛋白係如SEQ ID NO：19中顯示之人類Tau蛋白。

在一實施例中，本發明提供抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其如SEQ ID NO：19中顯示之人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該表位包含如SEQ ID NO：19中顯示之人類Tau蛋白之胺基酸殘基aa 404至411且需要位置409絲胺酸磷酸化(pS409)。

在特定實施例中，本發明提供抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之抗體，該抗體優先識別並結合至一些或所有選自由H407、pS409、N410及V411組成之群之Tau胺基酸殘基、但尤其pS409。

在另一特定實施例中，該抗體或片段亦識別並結合至pS404殘基，即便在較小程度上。具體而言，對pS404殘基之結合總計為對pS409殘基之結合的約10%，尤其約20%，尤其約30%。

在一實施例中，本發明提供抗體，尤其單株抗體，尤其嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其如SEQ ID NO：19中顯示之人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該表位包含如SEQ ID NO：19中顯示之人類Tau蛋白之胺基酸殘基aa 405至411(包含磷酸化位置409絲胺酸(Ser)(pS409))，且其中該抗體或其功能片段優先識別並結合至一些或所有選自由H407、pS409、N410及V411組成之群之Tau胺基酸殘基、但尤其pS409。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3，或與其至少50%、至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3，或與其至少50%、至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少 96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列。

本發明之一實施例係關於嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2或與其至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少81%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2或與其至少71%、至少75%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少82%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少50%、至少68%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少85%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2或與其至少75%一致之胺基酸序列、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少20%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少85%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少70%一致之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少90%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少90%一致之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少95%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少95%一致之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少98%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少98%一致之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3。

在一實施例中，本發明提供嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3。本發明進一步係關於嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其片段，其包含整合至來源於人類或靈長類之框架區中之至少2個肽，尤其至少3個肽，尤其至少4個肽，尤其至少5個肽，尤其6個肽，該等肽不同且展示選自由下列組成之序列群之胺基酸序列：代表重鏈可變區(HCVR)之CDR1之SEQ ID NO：1、代表重鏈可變區(HCVR)之 CDR2之SEQ ID NO：2及代表重鏈可變區(HCVR)之CDR3之SEQ ID NO：3及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR1之SEQ ID NO：4、代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR2之SEQ ID NO：5及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR3之SEQ ID NO：6，其中相同CDR不能在該抗體中出現兩次。

本發明進一步係關於嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其片段，其包含整合至來源於人類或靈長類之框架區中之至少2個肽，尤其至少3個肽，尤其至少4個肽，尤其至少5個肽，尤其6個肽，該等肽不同且展示選自由下列組成之序列群之胺基酸序列：代表重鏈可變區(HCVR)之CDR1之SEQ ID NO：1、代表代表重鏈可變區(HCVR)之CDR2之SEQ ID NO：2及代表代表重鏈可變區(HCVR)之CDR3之SEQ ID NO：3及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR1之SEQ ID NO：10、代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR2之SEQ ID NO：5及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR3之SEQ ID NO：6，其中相同CDR不能在該抗體中出現兩次。

在特定實施例中，本發明係關於嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其片段，其包含整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有以下胺基酸序列之肽：代表重鏈可變區(HCVR)之CDR1之SEQ ID NO：1、代表重鏈可變區(HCVR)之CDR2之SEQ ID NO：2及代表重鏈可變區(HCVR)之CDR3之SEQ ID NO：3及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR1之SEQ ID NO：4、代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR2之SEQ ID NO：5及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR3之SEQ ID NO：6。

在特定實施例中，本發明係關於嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其片段，其包含整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有以下胺基酸序列之肽：代表重鏈可變區(HCVR)之CDR1之SEQ ID NO：1、代表重鏈可變區(HCVR)之CDR2之SEQ ID NO：2及代表重鏈可變區(HCVR)之CDR3之SEQ ID NO：3及代表輕鏈可變區(LCVR)之 CDR1之SEQ ID NO：10、代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR2之SEQ ID NO：5及代表輕鏈可變區(LCVR)之CDR3之SEQ ID NO：6。在一實施例中，本發明提供人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該抗體或抗體片段包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%，尤其至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：8中所顯示序列具有至少89%，尤其至少90%，尤其至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%，尤其至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：9中所顯示序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99% 或100%一致性之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：8中所顯示序列具有至少89%一致性之胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：9中所顯示序列具有至少90%一致性之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少90%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：8中所顯示序列具有至少90%一致性之胺基酸序列；或 b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少90%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：9中所顯示序列具有至少90%一致性之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少95%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：8中所顯示序列具有至少95%一致性之胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少95%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：9中所顯示序列具有至少95%一致性之胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合抗體包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：8中所顯示之胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：9中所顯示胺基酸序列。

在一實施例中，本發明提供人類化抗體或其功能片段，尤其人類化單株抗體或其功能片段，尤其任一先前實施例之人類化抗體，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，該抗體進一步包含重鏈恆定區及輕鏈恆定區，尤其如SEQ ID NO：14至17中顯示之重鏈恆定區及如SEQ ID NO：18中顯示之輕鏈恆定區。

在一實施例中，任一先前實施例之該人類化抗體或其功能片段包含在鉸鏈區中具有突變，尤其在鉸鏈區中具有防止Fab臂交換且由此產生雙特異性抗體之突變的重鏈恆定區。在特定實施例中，重鏈鉸鏈區包含在位置228Ser交換成為Pro(S228P)。

在一實施例中，任一先前實施例之該人類化抗體或其功能片段包含在C-端處具有修飾(例如，缺失或突變)之重鏈恆定區。在特定實施例中，重鏈包含C-端離胺酸之缺失(des-K)。恆定區之Fc區之此C-端離胺酸(殘基447，根據EU編號系統)可(例如)在抗體純化期間或藉助編碼抗體之核酸之重組工程去除。此突變防止產生細胞(例如，CHO細胞)之抗體對C-端離胺酸之任意酶促切割。

在另一實施例中，任一先前實施例之該人類化抗體或其功能片段包含在C-端處無修飾(例如，缺失或突變)之重鏈恆定區。在特定實施例中，重鏈恆定區包含C-端離胺酸(重鏈恆定區C-端之離胺酸)。因此，本發明抗體可包含去除K447或所有K447之抗體或具有及不具有K447殘基之抗體之混合物。

在本發明之一實施例中，任一先前實施例之結合肽係抗體，尤其-IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同種型之抗體，尤其多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體或全人類抗體。在本發明之一實施例中，任一先前實施例之結合肽係抗體，尤其IgG1 N297G同種型之抗體，在該抗體Fc區中在297位(EU編號系統)具有天冬醯胺酸至甘胺酸取代，尤其多株抗體、單株抗體、嵌合抗體、人類化抗體或全人類抗體。

本發明之一實施例係關於編碼任一先前實施例之結合肽之聚核苷酸。

在一實施例中，該聚核苷酸包含核酸分子，其包含編碼抗體可變區之核苷酸序列，該抗體可變區包含代表重鏈可變區(HCVR)互補決定區(CDR)1、2及3之SEQ ID NO：1至3。

在另一實施例中，該聚核苷酸包含核酸分子，其包含編碼抗體可變區之核苷酸序列，該抗體可變區包含代表輕鏈可變區(LCVR)互補決定區(CDR)1、2及3之SEQ ID NO：4至6。

在另一實施例中，該聚核苷酸包含核酸分子，其包含編碼抗體可變區之核苷酸序列，該抗體可變區包含代表輕鏈可變區(LCVR)之互補決定區(CDR)1、2及3之SEQ ID NO：10、5及6。

在一實施例中，本發明係關於包含選自由下列組成之群之核酸分子之聚核苷酸：a.包含如SEQ ID NO：11中所示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：12中所示之核苷酸序列的核酸分子；或b.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或c.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或d.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少95%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少95%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或e.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或；f.包含互補股與a)至e)中任一者之核酸分子雜交之核苷酸序列的核酸分子；g.包含因遺傳密碼簡併而偏離a)至f)中任一者中所定義之核苷酸序列之核苷酸序列的核酸分子。

在一實施例中，本發明係關於包含選自由下列組成之群之核酸分子之聚核苷酸：a.包含如SEQ ID NO：11中所示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：13中所示之核苷酸序列的核酸分子；或b.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：13中所顯示序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或c.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：13中所顯示序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或d.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少95%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：13中所顯示序列具有至少95%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或e.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：13中所顯示序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或；f.包含互補股與a)至e)中任一者之核酸分子雜交之核苷酸序列的核酸分子；g.包含因遺傳密碼簡併而偏離a)至f)中任一者中所定義之核苷酸序列之核苷酸序列的核酸分子。

在一實施例中，本發明係關於包含含有如SEQ ID NO：11中顯示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：12中顯示之核苷酸序列之核酸分子之聚核苷酸。

在一實施例中，本發明係關於包含含有如SEQ ID NO：11中顯示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：13中顯示之核苷酸序列之核酸分子之聚核苷酸。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：7之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21之重鏈可變區(HCVR)。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：31之重鏈。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：8之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：9之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23之輕鏈。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：31之重鏈及SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23之輕鏈。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：7之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區及SEQ ID NO：8之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：7之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區及SEQ ID NO：9之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區。

本發明進一步提供人類化抗體或其片段，其包含SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區及SEQ ID NO：8或SEQ ID NO：9之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區。

在一實施例中，本發明係關於編碼任一先前實施例之人類化抗體之聚核苷酸。

如各實施例中所述之本發明嵌合或人類化抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其聚集Tau蛋白上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該等抗體對可溶性及不溶性Tau蛋白具有高結合親和力，並調節尤其腦中可溶性及不溶性Tau 含量，尤其具有(c)至少100nM，尤其至少80nM，尤其至少70nM，尤其至少50nM，尤其至少10nM，尤其至少8nM，尤其至少5nM，尤其至少2nM，尤其至少1nM，尤其至少500pM，尤其至少400pM，尤其至少300pM，尤其至少200pM，尤其至少100pM，尤其至少50pM之解離常數及/或(d)10⁴M^-1s^-1或更大，尤其介於3×10⁴M^-1s^-1至5×10⁴M^-1s^-1之間或更大，尤其10⁵M^-1s^-1或更大；尤其0.5×10⁵M^-1s^-1至9×10⁵M^-1s^-1或更大；尤其10⁶M^-1s^-1或更大，尤其1×10⁶M^-1s^-1至4×10⁶M^-1s^-1或更大，尤其10⁷M^-1s^-1或更大之締合速率常數。

在某些實施例中，本發明係關於如各實施例中所述之本發明嵌合或人類化抗體，該等抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該等抗體具有高結合親和力以及至少100nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少80nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少70nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少10nM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少200pM之解離常數及10⁵M^-1s^-1或更大之締合速率常數，尤其至少100pM之解離常數及10⁶M^-1s^-1或更大之締合速率常數。

在本發明之各實施例中，如各實施例中所述之本發明嵌合或人類化抗體特異性識別並結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白，尤其微管相關tau蛋白，尤其聚集微管相關且過度磷酸化之tau蛋白(例如存於成對螺旋絲狀體(PHF)中者，PHF係神經纖維纏結、神經纖維串連及失養性軸突中之主要結構)上之磷酸化表位，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位。

因此，任一先前實施例之嵌合或人類化抗體可用於哺乳動物或人類中，在可溶性tau蛋白及/或可溶性磷酸化tau蛋白含量增加之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中，降低總可溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白之含量。

任一先前實施例之嵌合或人類化抗體亦可用於哺乳動物或人類中，在含有過度磷酸化tau蛋白之成對螺旋絲狀體(pTau PHF)含量增加之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中，降低含有該等pTau成對螺旋絲狀體(pTau PHF)之含量。

在哺乳動物或人類中，在該等tau蛋白變體含量增加(其造成該哺乳動物或人類之tau-蛋白相關疾病、病症或病況)之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中，降低總可溶性tau蛋白及/或可溶性磷酸化tau蛋白及/或pTau成對螺旋絲狀體(pTau PHF)含量時，可改善及/或緩解與該等tau-蛋白相關疾病、病症或病況相關之症狀。

因此，任一先前實施例之嵌合或人類化抗體可用於療法，尤其人類療法，以減慢或終止tau-蛋白相關疾病、病症或病況之進程。

任一先前實施例之嵌合或人類化抗體可進一步用於療法，尤其人類療法中，以改善或緩解與tau-蛋白相關疾病、病症或病況相關之症狀，例如，包括推理、情境判斷、記憶能力、學習、空間導航等認知功能損害或喪失。

在一實施例中，本發明係關於任一先前實施例之嵌合或人類化抗體，其用於療法，尤其用於預防或治療tau病變、tau-蛋白相關疾病及病症之群，或用於緩解與tau病變相關之症狀。

在一實施例中，本發明係關於任一先前實施例之嵌合或人類化抗體，其用於保持或提高患有tau病變之哺乳動物之認知記憶能力。

先前實施例之肽或抗體與腦上tau纏結及pTau之結合性可分別藉由所選腦切片之蛋白質免疫反應性測試及腦勻漿之西方墨點法(Western blotting)來測定，如實例中所述。

在另一實施例中，本發明提供醫藥組合物，其包含治療有效量之任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或其組合，視情況連同醫藥上可接受之載劑。

在一實施例中，任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合係用於療法，尤其人類療法，供治療或緩解tau-蛋白相關疾病或病症(包括神經退化性病症，例如tau病變)之症狀。

因此，在為患有該疾病或病況之動物，尤其哺乳動物，尤其人類投與任一先前實施例之嵌合或人類化抗體及/或醫藥組合物後，該等抗體及/或醫藥組合物可用於減慢或終止tau-蛋白相關疾病、病症或病況之進程。

在投與患有該疾病或病況之動物，尤其哺乳動物，尤其人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體及/或醫藥組合物後，該等抗體及/或醫藥組合物可進一步用於改善或緩解與tau-蛋白相關疾病、病症或病況相關之症狀，例如，包括推理、情境判斷、記憶能力、學習、空間導航等認知功能損害或喪失。

在一實施例中，任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合用於預防或治療神經纖維病灶之形成(tau病變之主要腦病理學)引起或相關之疾病及病症，其包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症，包括(但不限於)阿茲海默氏症、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊手型癡呆、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克氏病(Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease)、包涵體肌炎及朊病毒蛋白(prion protein)大腦類澱粉蛋白血管病、外傷性腦損傷，且進一步包括不顯示獨特類澱粉病理學之疾病或病症，包括(但不限於)關島型肌肉萎縮性脊髓側索硬化症/帕金森氏病-癡呆複合症(amyotrophic lateral sclerosis/parkinsonism-dementia complex of Guam)、非關島型運動神經元病(Non-Guamanian motor neuron disease)伴隨神經纖維纏結、嗜銀顆粒性癡呆(argyrophilic grain dementia)、皮質基底核退化(corticobasal degeneration)、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、因第17對染色體異常導致的額顳葉癡呆伴隨帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病(Hallevorden-Spatz disease)、多系統萎縮、C型尼曼-匹克二氏病(Niemann-Pick disease)、蒼白球腦橋黑質退化(Pallido-ponto-nigral degeneration)、匹克症(Pick’s disease)、進行性皮質下膠質增生、進行性核上麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、單純纏結型癡呆(Tangle only dementia)、腦炎後帕金森氏病、肌強直性營養不良(Myotonic dystrophy)。

在一實施例中，任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合用於治療阿茲海默氏症。

在本發明之一實施例中，提供調節動物，尤其哺乳動物或人類尤其腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中可溶性及/或不溶性Tau含量之方法，其包含投與該動物，尤其該哺乳動物或人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合。

在一態樣中，調節係關於降低含有增加之可溶性tau蛋白及/或可溶性磷酸化tau蛋白含量之動物，尤其哺乳動物或人類之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中可溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白之含量。

在本發明之一實施例中，提供降低含有增加之不溶性tau蛋白，尤其pTau成對螺旋絲狀體(pTau PHF)含量之動物，尤其哺乳動物或人類之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中不溶性tau蛋白，尤其含有過度磷酸化tau蛋白(pTau PHF)之成對螺旋絲狀體含量之方法，其包含投與該動物，尤其該哺乳動物或人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合。

在一實施例中，本發明係關於減慢或終止動物，尤其哺乳動物或人類tau-蛋白相關疾病、病症或病況之進程之方法，其包含投與患有該疾病或病況之該動物，尤其該哺乳動物或人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合。

在一實施例中，本發明係關於改善或緩解與動物，尤其哺乳動物或人類tau-蛋白相關疾病、病症或病況相關之症狀(例如，包括推理、情境判斷、記憶能力、學習、空間導航等認知功能損害或喪失)之方法，其包含投與患有該疾病或病況之該動物，尤其該哺乳動物或人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合。

在一實施例中，本發明係關於保持或增加患有tau病變之哺乳動物之認知記憶能力之方法。

在本發明之再一實施例中，提供治療tau-蛋白相關疾病或病症(包括神經退化性疾病或病症，例如tau病變)之方法，其包含投與患有該疾病或病症之動物，尤其哺乳動物、但尤其人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合。

在本發明之一實施例中，提供治療神經纖維病灶之形成(tau病變之主要腦病理學)引起或相關之疾病及病症之方法，該等疾病及病症包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症，包括(但不限於)阿茲海默氏症、庫賈氏病、拳擊手型癡呆、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克氏病、包涵體肌炎及朊病毒蛋白大腦類澱粉蛋白血管病、外傷性腦損傷，且進一步包括不顯示獨特類澱粉病理學之疾病或病症，包括(但不限於)關島型肌肉萎縮性脊髓側索硬化症/帕金森氏病-癡呆複合症、非關島型運動神經元病伴隨神經纖維纏結、嗜銀顆粒性癡呆、皮質基底核退化、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、因第17對染色體異常導致的額顳葉癡呆伴隨帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮、C型尼曼-匹克二氏病、蒼白球腦橋黑質退化、匹克症、進行性皮質下膠質增生、進行性核上麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、單純纏結型癡呆、腦炎後帕金森氏病、肌強直性營養不良，該方法包含投與患有該疾病或病症之動物，尤其哺乳動物、但尤其人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、醫藥組合物、或其組合。

在本發明之另一實施例中，提供誘導患有神經退化性病症(例如tau病變)之動物，尤其哺乳動物或人類被動免疫反應之方法，此藉由投與該動物或人類任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段、或聚核苷酸、或醫藥組合物、或其組合。

在本發明之再一實施例中，提供診斷患者tau-蛋白相關疾病、病症或病況之方法，其包含在樣品中或原位檢測任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段與tau蛋白之表位之免疫特異性結合，其包括以下步驟：a.使該樣品或懷疑含有tau蛋白之特定身體部分或身體區域與任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段接觸，其中該抗體或其片段結合該tau蛋白之表位； b.使該抗體或其功能片段與該tau蛋白結合以形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau蛋白之存在或不存在之相關性。

在本發明之再一實施例中，提供診斷患者tau-蛋白相關疾病、病症或病況之傾向之方法，其包含在樣品中或原位檢測任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段與tau蛋白之表位之免疫特異性結合，其包括以下步驟：a.使該樣品或懷疑含有tau抗原之特定身體部分或身體區域與任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段接觸，該抗體或其片段結合該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau抗原結合以形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau抗原之存在或不存在之相關性；e.比較該免疫複合物之量與正常對照值；其中該聚集體之量比正常對照值增加時表示該患者患有tau-蛋白相關疾病或病況或具有發生風險。

在本發明之一實施例中，提供在利用任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段治療後監測患者之最小殘留疾病(minimal residual disease)之方法，其中該方法包含：a.使該樣品或懷疑含有tau抗原之特定身體部分或身體區域與任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段接觸，該抗體或其片段結合至該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau抗原結合以形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及 d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau抗原之存在或不存在之相關性，e.比較該免疫複合物之量與正常對照值，其中該聚集體之量比正常對照值增加時表示該患者仍患有最小殘留疾病。

在一實施例中，提供預測經任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段治療之患者之反應性之方法，其包含a.使該樣品或懷疑含有tau抗原之特定身體部分或身體區域與任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段接觸，該抗體或其片段結合至該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau抗原結合以形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau抗原之存在或不存在之相關性，e.比較該治療開始之前及之後該免疫複合物之量，其中該聚集體之量減少指示該患者對該治療具有高度反應可能性。

在另一實施例中，本發明係關於用於檢測及診斷tau-蛋白相關疾病、病症或病況之測試套組，其包含任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段。

在一實施例中，該測試套組出於以下之目的包含容納一或多種任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段之容器及抗體使用說明書：結合至tau抗原以形成免疫複合物並檢測該免疫複合物之形成以取得該免疫複合物之存在或不存在與tau抗原之存在或不存在之相關性。

在另一實施例中，本發明係關於產生任一先前實施例之嵌合或人類化抗體或其功能片段之細胞系，尤其細菌細胞系，尤其大腸桿菌(E.coli)細胞系。

在一實施例中，本發明係關於細胞系，其係2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H。

在一實施例中，本發明係關於細胞系，其係2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L。

在一實施例中，本發明係關於細胞系，其係2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H。

在一實施例中，本發明係關於細胞系，其係2012年3月6日以DSM 25746寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L。

圖式

圖1顯示人類化抗-pTau抗體hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1與pTau疫苗肽(T4.5)之結合，其不與同一肽之非磷酸化版本(T4.6)結合。

圖2顯示經人類化抗-pTau抗體hACI-36-2B6-Ab1染色之20個月齡Tau基因轉殖(biGT)小鼠腦中之Tau纏結。顯示在皮質(A)及海馬迴(B)中Tau纏結之染色，且在海馬迴(B)中看到神經纖維串連染色。

圖3顯示經人類化抗-pTau抗體hACI-36-3A8-Ab1染色劑染色之20個月齡Tau基因轉殖(biGT)小鼠腦中之Tau纏結。顯示在皮質(A)及海馬迴(B)中Tau纏結之染色，且在海馬迴(B)中可看到神經纖維串連染色。

圖4顯示hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈。

圖5顯示hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈。

圖6顯示hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1之重鏈。

序列

SEQ ID NO：1示分別由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H及2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1之重鏈可變區(HCVR)之CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO：2示分別由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H及2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1之重鏈可變區(HCVR)之CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO：3示分別由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H及2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1之重鏈可變區(HCVR)之CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO：4示由2012年3月6日寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈可變區(LCVR)之CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO：5示分別由2012年3月6日以DSM 25746寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L及2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈可變區(LCVR)之CDR2之胺基酸序列。

SEQ ID NO：6示分別由2012年3月6日以DSM 25746寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L及2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈可變區(LCVR)之CDR3之胺基酸序列。

SEQ ID NO：7示分別由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H及2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6- Ab1之重鏈可變區(HCVR)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：8示由2012年3月6日以DSM 25746寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈可變區(LCVR)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：9示由2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈可變區(LCVR)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：10示由2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈可變區(LCVR)之CDR1之胺基酸序列。

SEQ ID NO：11示由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈(H)及由2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之重鏈(H)之核苷酸序列。

SEQ ID NO：12示由2012年3月6日以DSM 25746寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈(L)之核苷酸序列。

SEQ ID NO：13示由2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈(L)之核苷酸序列。

SEQ ID NO：14示由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈及由2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之重鏈之CH1重鏈恆定區(HC)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：15示由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈及由2012年3 月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之重鏈之鉸鏈重鏈恆定區(HC)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：16示由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈及由2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之重鏈之CH2重鏈恆定區(HC)之胺基酸序列。人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈之CH2重鏈恆定區(HC)之胺基酸序列亦示於圖6C中。

SEQ ID NO：17示由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈及由2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之重鏈之CH3重鏈恆定區(HC)之胺基酸序列。SEQ ID NO：17示具有C-端離胺酸之缺失(des-K)之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之重鏈之CH3重鏈恆定區(HC)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：18示由2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H產生之人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈恆定區(LC)及由2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌2B6A10C11-H產生之人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈恆定區(LC)之胺基酸序列。人類化抗體hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈恆定區(LC)之胺基酸序列亦示於圖4B及圖5B中。

SEQ ID NO：19示人類Tau之最長同型異構體(441aa)，亦稱為Tau40。

SEQ ID NO：20示人類化抗體hACl-36-3A8-Ab1.v2之重鏈可變區(HCVR)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：21示人類化抗體hACl-36-2B6-Ab1.v2之重鏈可變區(HCVR)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：22示以下人類化抗體之輕鏈(L)之胺基酸序列：hACl-36-3A8-Ab1(IgG4)、hACl-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)、hACl-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)及hACl-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)。hACl-36-3A8-Ab1(IgG4)、hACl-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)、hACl-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)及hACl-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)之輕鏈(L)之胺基酸序列亦示於圖5中。

SEQ ID NO：23示以下人類化抗體之輕鏈(L)之胺基酸序列：hACl-36-2B6-Ab1(IgG4)、hACl-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)、hACl-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)及hACl-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)。hACl-36-2B6-Ab1(IgG4)、hACl-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)、hACl-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)及hACl-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)之輕鏈(L)之胺基酸序列亦示於圖4中。

SEQ ID NO：24示人類化抗體hACl-36-3A8-Ab1(IgG4)之重鏈(H)之胺基酸序列。人類化抗體hACl-36-3A8-Ab1(IgG4)之重鏈(H)之胺基酸序列亦示於圖6中。

SEQ ID NO：25示人類化抗體hACl-36-2B6-Ab1(IgG4)之重鏈(H)之胺基酸序列。注意：SEQ ID NO 25與SEQ ID NO：24相同，且其亦示於圖6中。

SEQ ID NO：26示人類化抗體hACl-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)之重鏈(H)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：27示人類化抗體hACl-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)之重鏈(H)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：28示人類化抗體hACl-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)之重鏈(H)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：29示人類化抗體hACl-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)之重鏈(H)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：30示人類化抗體hACl-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)之重鏈(H)之胺基酸序列。

SEQ ID NO：31示人類化抗體hACl-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)之重鏈(H)之胺基酸序列。

術語之定義

本文所用術語「多肽」、「肽」及「蛋白」可互換且定義為意指由肽鍵連接之胺基酸組成之生物分子。

除非上下文不合適，否則本文所用術語「一(a,an)」及「該(the)」意指「一或多個」且包括複數個。

本文所用術語肽「肽」或「結合肽「可互換且係指α碳經由肽鍵連接之胺基酸(通常為L-胺基酸)鏈，該等肽鍵係藉由一個胺基酸之α碳之羧基與另一胺基酸之α碳之胺基間的縮合反應來形成。鏈之一端(即，胺基端)處之端胺基酸具有游離胺基，而鏈之另一端(即，羧基端)處之端胺基酸具有游離羧基。因此，術語「胺基端」(縮寫為N-端)係指肽之胺基端處之胺基酸上的游離α胺基、或肽內任一其他位置處之胺基酸的α胺基(當參與肽鍵時亞胺基)。相似地，術語”羧基端”(縮寫為C-端)係指肽之羧基端處之胺基酸上的游離羧基、或肽內任一其他位置處之胺基酸的羧基。結合肽可構成如本文所定義之抗體，例如多株或單株抗體、人類或人類化抗體、雙特異性抗體、駱駝科動物抗體等、或其功能部分。

本文所用術語「其功能片段」或「片段」係指功能肽片段，即抗體或抗體鏈中包含胺基酸殘基少於完整(intact或complete)抗體或抗體鏈但具有與其所來源之抗體基本上相同(生物)活性的部分(part或portion)，即該等片段仍能夠在生物體中、但尤其在動物，尤其哺乳動物或人類中誘發高度特異性，尤其構形特異性免疫反應，其高度有效且能夠預防或緩解tau病變或與tau病變相關之症狀。具體而言，該等片段仍含有如本文所使用及定義之tau肽之特異性病理磷酸化表位。可經由對完整(intact或complete)抗體或抗體鏈實施化學處理或酶促處理來獲得片段。亦可藉由重組方式來獲得片段。例示性片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc及/或Fv片段。術語「抗原結合片段」係指免疫球蛋白或抗體中結合抗原或與完整抗體(即，與其所來源之完整抗體)競爭結合(即，特異性結合)抗原之多肽片段。

藉由重組DNA技術或藉由酶促或化學切割完整免疫球蛋白來產生結合片段。結合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fabc、Fv、單鏈及單鏈抗體。

「片段」亦係指包含另一多肽之胺基酸序列之至少5個鄰接胺基酸殘基、至少10個鄰接胺基酸殘基、至少15個鄰接胺基酸殘基、至少20個鄰接胺基酸殘基、至少25個鄰接胺基酸殘基、至少40個鄰接胺基酸殘基、至少50個鄰接胺基酸殘基、至少60個鄰接胺基殘基、至少70個鄰接胺基酸殘基、至少80個鄰接胺基酸殘基、至少90個鄰接胺基酸殘基、至少100個鄰接胺基酸殘基、至少125個鄰接胺基酸殘基、至少150個鄰接胺基酸殘基、至少175個鄰接胺基酸殘基、至少200個鄰接胺基酸殘基或至少250個鄰接胺基酸殘基之胺基酸序列之肽或多肽。在特定實施例中，多肽之片段保留多肽之至少一個功能。

通常，構成肽之胺基酸係於胺基端開始且沿朝向肽之羧基端之方向增加按順序編號。因此，當稱一個胺基酸「跟隨」另一者時，該胺基酸之位置比前一胺基酸更靠近肽之羧基端。

本文所用術語「殘基」係指藉由醯胺鍵納入肽中之胺基酸。因此，胺基酸可為天然胺基酸或除非另有限制，否則可涵蓋天然胺基酸之已知類似物(即，胺基酸模擬物)，其以與天然胺基酸相似之方式起作用。此外，醯胺鍵模擬物包括熟習此項技術者熟知之肽骨架修飾。

本文所用片語「基本上由...組成」不包括該片語所提及任何會實質上改變肽之基本性質之要素。因此，對肽「基本上由...組成」之說明不包括會實質上改變該肽之生物活性之任何胺基酸取代、添加或缺失。

此外，熟習此項技術者應認識到，如上文所提及，改變、添加或缺失經編碼序列中之單一胺基酸或較小百分比之胺基酸(通常小於5%、更通常小於1%)的個別取代、缺失或添加係經保守修飾之變化形式，其中該等改變導致用化學相似胺基酸取代胺基酸。提供功能相似胺基酸之保守取代表為業內所熟知。以下6組各含有可彼此進行保守取代之胺基酸：1)丙胺酸(A)、絲胺酸(S)、蘇胺酸(T)；2)天冬胺酸(D)、麩胺酸(E)；3)天冬醯胺酸(N)、麩醯胺酸(Q)；4)精胺酸(R)、離胺酸(K)；5)異白胺酸(I)、白胺酸(L)、甲硫胺酸(M)、纈胺酸(V)；及6)苯丙胺酸(F)、酪胺酸(Y)、色胺酸(W)。

片語「經分離」或「生物純」係指實質上或基本上不含如在天然狀態中發現之通常所伴隨之組份的材料。因此，本文所述肽不含有通常與其原位環境相關之材料。通常，本文所述經分離免疫原性肽係至少約80%純、一般至少約90%純且較佳至少約95%純，如藉由銀染色凝膠上之譜帶強度所量測。

蛋白純度或同源性可藉由多種業內熟知方法來指示，例如對蛋白樣品實施聚丙烯醯胺凝膠電泳，隨後在染色後用肉眼檢驗。出於某些目的，將需要高解析度並使用HPLC或類似方式進行純化。

當免疫原性肽長度相對較短(即，小於約50胺基酸)時，其通常係使用標準化學肽合成技術來合成。

固相合成係本文所述免疫原性肽之較佳化學合成方法，其中將序列之C-端胺基酸附接至不溶性載體，隨後依次添加序列中之其餘胺基酸。熟習此項技術者已知固相合成技術。

或者，使用重組核酸方法來合成本文所述免疫原性肽。通常，此包括生成編碼肽之核酸序列，在特定啟動子控制下將核酸放置於表現卡匣(expression cassette)，在宿主中表現肽，分離出表現肽或多肽及視需要復原肽。足以全程指導技術人員該等程序之技術可參見文獻。

在表現後，可根據標準程序來純化重組肽，包括硫酸銨沈澱、親和力管柱、管柱層析、凝膠電泳及諸如此類。用作治療劑之實質上純組合物具有約50%至95%同源性較佳，且80%至95%或更大之同源性最佳。

熟習此項技術者應認識到，在化學合成、生物表現或純化後，免疫原性肽可具有實質上不同於構成肽之天然構形之構形。在此情形下，通常需要使抗增生肽變性並還原且然後使肽重新摺疊成較佳構形。使蛋白還原並變性及誘導重新摺疊之方法為熟習此項技術者所熟知。

經純化蛋白之抗原性可藉由(例如)證實與針對該蛋白自身產生之免疫血清或抗血清反應來確認。

本文所用術語「檢測(detecting或detected)」意指使用已知技術(例如免疫化學或組織學方法)來檢測生物分子，且係指定性或定量地確定所研究生物分子之存在或濃度。

「經分離」意指生物分子擺脫至少一些與其天然存在之組份。

本文所用術語”抗體(antibody或antibodies)”係業內認可之術語且應理解為係指結合至已知抗原之分子或分子之活性片段，尤其免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子之免疫活性部分，即含有特異性結合抗原之結合位點之分子。免疫球蛋白係包含一或多個實質上藉由免疫球蛋白κ及λ、α、γ、δ、ε及μ恆定區基因以及無數免疫球蛋白可變區基因編碼之多肽的蛋白。將輕鏈分類為κ或λ。將重鏈分類為γ、μ、α、δ或ε，進而分別定義免疫球蛋白種類IgG、IgM、IgA、IgD及IgE。亦已知重鏈之子類。舉例而言，人類IgG重鏈可為IgG1、IgG2、IgG3及IgG4子類中之任一者。本發明免疫球蛋白可為任一類型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA及IgY)或子類(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)之免疫球蛋白分子。在一實施例中，IgG重鏈係在Fc區297位包含天冬醯胺酸至甘胺酸取代之IgG1 N297G。

效應子功能降低之抗體包括彼等Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329(根據EU編號系統)中之一或多者經取代者(美國專利第6,737,056號)。該等Fc突變體包括在胺基酸位點265、269、270、297及327中之兩者或更多者處經取代之Fc突變體，包括殘基265及297經丙胺酸取代之所謂的「DANA」Fc突變體(美國專利第7,332,581號)。

闡述對FcR具有改良或減小之結合之某些抗體變體。(例如，參見美國專利第6,737,056號；WO 2004/056312及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2)：6591-6604(2001))。

在某些實施例中，抗體變體包含具有一或多個改良ADCC之胺基酸取代(例如，在Fc區298位、333位及/或334位(殘基之EU編號)之取代)之Fc區。

在一些實施例中，在Fc區中作出改變以改變(即，改良或減小)C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)，例如，如美國專利第6,194,551號、WO 99/51642及Idusogie等人J.Immunol.164：4178-4184(2000)中所述。

具有增加之半衰期及改良之對新生Fc受體(FcRn)(其負責母源IgG至胎兒之轉移(Guyer等人，J.Immunol.117：587(1976)及Kim等人，J.Immunol.24：249(1994)))之結合之抗體闡述於US2005/0014934A1(Hinton等人)中。彼等抗體包含其中具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代之Fc區。該等Fc變體包括彼等在以下Fc區殘基中之一或多者具有取代者：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，Fc區殘基434經取代者(美國專利第7,371,826號)。

關於Fc區變體之其他實例亦參見Duncan & Winter,Nature 322：738-40(1988)；美國專利第5,648,260號；美國專利第5,624,821號；及WO 94/29351。

在提及抗體時，本文所用「特異性結合」意指該抗體以比對結構上不同抗原更大之親和力結合至其靶標抗原。

已知典型免疫球蛋白結構單元包含四聚體。每一四聚體係由兩個相同多肽鏈對組成，每一對皆具有一個「輕」鏈(約25kDa)及一個「重」鏈(約50kDa至70kDa)。每一鏈之N-端定義主要負責抗原識別之約100個至110個或更多個胺基酸之可變區。術語可變輕鏈(V_L)及可變重鏈(V_H)分別係指該等輕鏈及重鏈。

抗體以全長完整抗體或以藉由經各種肽酶或化學物質消化產生之多個具有良好特徵之片段存在。因此，舉例而言，胃蛋白酶在鉸鏈區中之二硫鍵以下消化抗體以產生F(ab’)₂(Fab二聚體)，其自身係藉助二硫鍵連結至V_H-CH₁之輕鏈。可在溫和條件下還原F(ab’)₂以使鉸鏈區中之二硫鍵斷裂，藉此將F(ab’)₂二聚體轉化成Fab’單體。Fab’單體基本上係具有一部分鉸鏈區之Fab片段(關於其他抗體片段之更詳細說明參見Fundamental Immunology,W.E.Paul編輯，Raven Press,N.Y.(1993))。儘管各種抗體片段係依據完整抗體之消化定義，但技術人員應瞭解，多個抗體片段中之任一者可以化學方式或藉由利用重組DNA 方法來重新合成。因此，本文所用術語抗體亦包括藉由修飾整個抗體產生或重新合成之抗體片段或藉由使用重組DNA方法獲得之抗體及片段。

「抗體」在本發明範圍內意欲包括單株抗體、多株抗體、嵌合抗體、單鏈抗體、雙特異性抗體、猿猴化(simianized)抗體、人類及人類化抗體、駱駝科動物抗體、雙特異性抗體以及其功能部分或活性片段。結合至已知抗原之分子之活性片段之實例包括經分離輕鏈及重鏈、Fab、Fab/c、Fv、Fab’及F(ab’)₂片段，包括Fab免疫球蛋白表現文庫之產物及上文所提及抗體及片段中任一者之表位結合片段。

該等活性片段可藉由多種技術自本發明抗體獲得。舉例而言，純化單株抗體可用酶(例如胃蛋白酶)切割，且實施HPLC凝膠過濾。隨後可收集含有Fab片段之適當部分並藉由膜過濾及諸如此類濃縮。關於分離抗體活性片段之一般技術的進一步說明(例如)參見Khaw,B.A.等人J.Nucl.Med.23：1011-1019(1982)；Rousseaux等人Methods Enzymology,121：663-69,Academic Press,(1986)。

重組抗體可為習用全長抗體、自蛋白分解消化獲知之活性抗體片段、獨特活性抗體片段(例如Fv或單鏈Fv(scFv))、結構域缺失抗體及諸如此類。Fv抗體之大小為約50KDa且包含輕鏈及重鏈可變區。單鏈Fv(「scFv」)多肽係以共價方式連接之VH：：VL異源二聚體，其可自包括直接連結或藉助編碼肽之連接體連結之編碼VH及VL之序列之核酸表現。參見Huston等人(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.USA,85：5879-5883。天然聚集但以化學方式自抗體V區分離的輕多肽鏈及重多肽鏈轉化成scFv分子之多種結構將摺疊成實質上與抗原結合位點之結構類似之三維結構。例如，參見美國專利第5,091,513號、第5,132,405號及第4,956,778號。

組合位點係指抗體分子參與抗原結合之部分。抗原結合位點係由重(「H」)鏈及輕(「L」)鏈之N-端可變(「V」)區之胺基酸殘基形成。抗體可變區包含3個高度趨異性伸縮區(divergent stretch)(稱為「高度可變區」或「互補決定區」(CDR))，其插入更保守的側翼伸縮區(flanking stretch)(稱為「框架區」(FR))之間。在抗體分子中，輕鏈(LCDR1、LCDR2及LCDR3)之3個高度可變區與重鏈(HCDR1、HCDR2及HCDR3)之3個高度可變區在三維空間中相對於彼此安置以形成抗原結合表面或袋狀區(pocket)。因此，抗體組合位點代表構成抗體CDR之胺基酸及構成結合位點袋狀區之任何框架殘基。

可使用業內熟知方法來確定在構成組合位點之特定抗體中胺基酸殘基之身份。舉例而言，抗體CDR可識別為Kabat等人最初定義之高度可變區(參見，「Sequences of Proteins of Immunological Interest」，E.Kabat等人，U.S.Department of Health and Human Services；Johnson,G及Wu，TT(2001)Kabat Database and its applications：future directions.Nucleic Acids Research,29：205-206；http：//immuno.bme.nwa.edu)。CDR之位置亦可識別為Chothia及其他人最初所述之結構環結構(參見Chothia及Lesk，J.Mol.Biol.196,901(1987)；Chothia等人，Nature 342,877(1989)；及Tramontano等人，J.Mol.Biol.215,175(1990))。其他方法包括「AbM定義」，其係Kabat與Chothia間之折衷且係使用Oxford Molecular AbM抗體建模軟體(現為Accelrys)得到；或Macallum等人之CDR「接觸定義」(「Antibody-antigen interactions：contact analysis and binding site topography」，J Mol Biol.，1996年10月11日；262(5)：732-45)。以下圖表基於各種已知定義識別CDR。

可僅自序列鑑別抗體中CDR之一般準則如下：LCDR1：開始-大致殘基24。

殘基前始終係Cys。

殘基後始終係Trp。通常，TRP跟隨TYR-GLN，但亦可跟隨LEU-GLN、PHE-GLN或TYR-LEU。

長度係10個至17個殘基。

LCDR2：開始-L1末端後16個殘基。

序列前通常係ILE-TYR，但亦可係VAL-TYR、ILE-LYS或ILE-PHE。

長度通常係7個殘基。

LCDR3：開始-通常L2末端後33個殘基。

殘基前係Cys。

序列後係PHE-GLY-X-GLY。

長度係7個至11個殘基。

HCDR1：開始-大致在殘基26處(CYS後4個殘基)[Chothia/AbM定義]，Kabat定義5個殘基之後開始。

序列前係CYS-X-X-X。

殘基後係TRP，其通常跟隨VAL，但亦跟隨ILE或ALA。

在AbM定義下長度係10至12個殘基，而Chothia定義不包括最後4個殘基。

HCDR2：開始-CDR-H1末端後15個殘基(Kabat/AbM定義)。

序列前通常係LEU-GLU-TRP-ILE-GLY(SEQ ID NO.1)，但可能存在多種變化。

序列後係LYS/ARG-LEU/ILE/VAL/PHE/THR/ALA-THR/SER/ILE/ALA。

在Kabat定義下長度係16個至19個殘基(AbM定義7個殘基之前結束)。

HCDR3：開始-在CDR-H2末端後33個殘基(CYS後2個殘基)。

序列前係CYS-X-X(通常係CYS-ALA-ARG)。

序列後係TRP-GLY-X-GLY。

長度係3個至25個殘基。

可使用業內熟知方法(例如分子建模及X-射線結晶學)來確定特定抗體之胺基酸殘基之身份，該等胺基酸殘基在CDR外部，但因具有為組合位點之襯裏之一部分的側鏈而構成該組合位點之一部分(即，其可藉助組合位點連接)。例如，參見Riechmann等人，(1988)Nature,332：323-327。

嵌合抗體係彼等抗體之一或多個區來自一個物種動物及抗體之一或多個區來自不同物種動物者。較佳嵌合抗體係包括來自靈長類免疫球蛋白之區者。用於人類臨床使用之嵌合抗體通常理解為具有來自非人類動物(例如齧齒類動物)之可變區與來自人類之恆定區。相比之下，人類化抗體使用來自非人類抗體之CDR，其中大多數或全部可變框架區及全部恆定區來自人類免疫球蛋白。人類嵌合抗體通常理解為具有來自齧齒類動物之可變區。典型人類嵌合抗體具有人類重鏈恆定區及人類輕鏈恆定區，其中重鏈可變區及輕鏈可變區兩者均來自齧齒類動物抗體。嵌合抗體可包括人類恆定區之天然胺基酸序列及天然齧齒類動物可變區序列之一些變化。可藉由業內熟知方法來製備嵌合及人類化抗體，包括CDR接枝法(例如，參見美國專利第5,843,708號；第6,180,370號；第5,693,762號；第5,585,089號；第5,530,101號)、鏈置換(chain shuffling)策略(例如，參見美國專利第5,565,332號；Rader等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1998)95：8910-8915)、分子建模策略(美國專利第5,639,641號)及諸如此類。

在雙鏈抗體之情形下，本文所用「人類化抗體」係至少一個鏈經人類化者。人類化抗體鏈具有一或多個框架區係人類來源之可變區。單鏈人類化抗體係該鏈具有一或多個框架區係人類來源之可變區者。人類化抗體鏈或其片段之可變區之非人類部分來源於非人類來源，尤其非人類抗體，通常齧齒類動物來源之非人類抗體。人類化抗體之非人類貢獻通常係以至少一個CDR區形式提供，CDR區散佈於來源於一種(或多種)人類免疫球蛋白之框架區中。另外，可改變框架支撐殘基以保持結合親和力。人類化抗體可進一步包含恆定區(例如，在輕鏈之情形下至少一個恆定區或其部分，且在重鏈之情形下較佳3個恆定區)。人類化抗體之恆定區(若存在)通常係人類來源。

人類化抗體可進一步包含恆定區(例如，在輕鏈之情形下至少一個恆定區或其部分，且在重鏈之情形下較佳3個恆定區)。人類化抗體之恆定區(若存在)通常係人類來源。

人類化抗體可進一步係指具有一或多個框架區具有人類或靈長類動物胺基酸之可變區之抗體。另外，可改變框架支撐殘基以保持結合親和力。獲得「人類化抗體」之方法為熟習此項技術者所熟知。(例如，參見Queen等人，Proc.Natl Acad Sci USA,86：10029-10032(1989)；Hodgson等人，Bio/Technoloy,9：421(1991))。

「人類化抗體」亦可藉由新穎遺傳工程方法獲得，該方法使得能在諸如兔等大型動物中產生親和力成熟人類樣多株抗體(http：//www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php)。

術語「全人類抗體」或「人類」抗體意指來源於攜帶人類抗體基因之基因轉殖小鼠或人類細胞之抗體。然而，對於人類免疫系統而言，「全人類」、「人類」及「人類化」抗體間之差異可忽略不計或不存在，且因此該三者全部可具有相等療效及安全性。

本文所用術語恆定區(CR)係指免疫球蛋白之恆定區基因。恆定區基因編碼抗體分子提供效應子功能之部分。對於嵌合人類抗體及人類化抗體而言，非人類(例如，鼠類)恆定區通常經人類恆定區取代。個體嵌合或人類化抗體之恆定區通常來源於人類免疫球蛋白。重鏈恆定區可選自以下5個同種型中之任一者：α、δ、ε、γ或μ。此外，各子類之重鏈(例如IgG子類之重鏈)負責不同效應子功能，且因此藉由選擇期望重鏈恆定區可產生具有期望效應子功能之抗體。可在本發明範圍內使用之恆定區係γ 1(IgG1)，尤其γ 1(IgG1)同種型、γ 1 N297G(IgG1 N297G)、γ 3(IgG3)且尤其γ 4(IgG4)之Fc區。輕鏈恆定區可具有κ或λ型、較佳κ型。在一實施例中，輕鏈恆定區係人類κ恆定鏈(Heiter等人(1980)Cell 22：197-207)且重恆定鏈係人類IgG4恆定鏈。

術語「單株抗體」亦為業內所公認且係指在實驗室中自單一純系大量產生且僅識別一種抗原之抗體。單株抗體通常由藉由將通常短命之抗體產生B細胞與快速生長細胞(例如癌細胞，有時稱為「永生」細胞)融合來製得。所得雜交細胞或融合瘤快速繁殖，從而生成產生大量抗體之純系。出於本發明之目的，「單株抗體」亦應理解為包含由尚未達到完全單選殖性之母源純系產生之抗體。

所用術語「雜交」係指習用雜交情況，較佳係指使用5xSSPE、1% SDS、1xDenhardts溶液作為溶液及/或雜交溫度介於35℃與70℃之間、較佳65℃的雜交情況。雜交後，較佳在介於35℃與70℃之間之溫度下、較佳在65℃下首先用2xSSC、1% SDS實施洗滌，且隨後用0.2xSSC實施洗滌(關於SSPE、SSC及Denhardts溶液之定義參見Sambrook等人，在上述引文中)。如(例如)Sambrook等人(見上文)所述之嚴格雜交情況尤佳。例如，若雜交及洗滌如上文所指示發生於65℃下，則展示尤佳嚴格雜交情況。非嚴格雜交情況(例如在45℃下實施雜交及洗滌)欠佳且在35℃下更欠佳。

藉由序列一致性來確定兩個序列之間之「同源性」。若欲比較之兩個序列彼此之長度不同，則序列一致性較佳係關於與較長序列之核苷酸殘基一致之較短序列之核苷酸殘基之百分比。照慣例，可利用電腦程式(例如Bestfit程式(Wisconsin Sequence Analysis Package，Unix版本8，Genetics Computer Group,University Research Park,575 Science Drive Madison,WI 53711))來測定序列一致性。Bestfit利用局部同源性演算法(Smith及Waterman，Advances in Applied Mathematics 2(1981),482-489)來尋找兩個序列之間具有最高序列一致性之區段。當使用Bestfit或另一序列對準程式來測定特定序列與本發明參照序列是否具有(例如)95%一致性時，較佳調整參數以使得在參照序列之整個長度上計算一致性百分比並容許參照序列中核苷酸總數的至多5%具有同源性差距。當使用Bestfit時，較佳保留所謂的可選參數於其預先設定(「預設」)值下。給定序列與本發明上述序列之間之比較出現的偏差可能由(例如)添加、缺失、取代、插入或重組引起。較佳地，亦可利用程式「fasta20u66」(版本2.0u66，1998年9月，William R.Pearson及University of Virginia；亦參見W.R.Pearson(1990),Methods in Enzymology 183,63-98隨附實例及http：//workbench.sdsc.edu/)實施該序列比較。出於此目的，可使用「預設」參數設定。

本發明抗體可為免疫球蛋白或抗體，其應理解為其每一結合位點相同(若多價)，或者，在替代方案中，可為「雙特異性」或「雙官能抗體」。

「雙特異性」或「雙官能抗體」係具有兩個不同重鏈/輕鏈對及兩個不同結合位點之人工雜交抗體。雙特異性抗體可由多種方法產生，包括雜交瘤之融合或Fab’片段之連接。例如，參見Songsivilai及Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79：315-321(1990)；Kostelny等人，J.Immunol.148,1547-1553(1992)。

術語「抗原」係指可在生物體，尤其動物、更尤其哺乳動物(包括人類)中誘導免疫反應之實體或其片段。該術語包括免疫原及負責抗原性或抗原決定簇之區。

本文所用術語「可溶性」意指部分或完全溶解於水溶液中。

本文所用術語「免疫原性物」亦係指針對免疫原性試劑誘發或增強抗體、T-細胞及其他反應性免疫細胞之產生且有助於人類或動物中之免疫反應之物質。

當個體針對所投與用以減輕或緩解欲治療病症之本發明免疫原性組合物產生足量抗體、T-細胞及其他反應性免疫細胞時，發生免疫反應。

本文所用術語免疫原性係指抗原在投與接受者時誘發免疫反應(體液性或細胞性)之能力的量度。本發明係關於降低個體人類嵌合或人類化抗體之免疫原性之方法。

免疫原性降低之人類化抗體係指相對於親代抗體(例如，鼠類抗體)展示降低之免疫原性之人類化抗體。

實質上保持親代抗體之結合性質之人類化抗體係指保持特異性結合用於產生該人類化抗體之親代抗體所識別抗原之能力的人類化抗體。較佳地，人類化抗體應展示與親代抗體相同或實質上相同之抗原結合親和力及抗體親抗原性(avidity)。理想地，抗體之親和力應不小於親代抗體親和力的10%，更佳地不小於約30%，且最較佳地，親和力應不小於親代抗體的50%。用於分析抗原結合親和力之方法為業內所熟知且包括半最大結合分析、競爭分析及Scatchard分析。適宜抗原結合分析闡述於本申請案中。

「回復突變(back mutation)」係於編碼人類化抗體之核苷酸序列中引入之突變，該突變所產生之胺基酸對應於親代抗體(例如，供體抗體，例如，鼠類抗體)中之胺基酸。可在本發明抗體之人類化期間保留來自親代抗體之某些框架殘基，以實質上保持親代抗體之結合性質，而同時使所得抗體之潛在免疫原性降至最低。在本發明之一實施例中，親代抗體係源於小鼠。舉例而言，回復突變將人類框架殘基變成親代鼠類殘基。可回復突變之框架殘基之實例包括(但不限於)正規殘基(canonical residue)、界面填充殘基(interface packing residue)、鄰近結合位點之罕見親代殘基、「游標區(Vernier Zone)」(其形成支托CDR之平臺)中之殘基(Foote & Winter,1992,J.Mol.Biol.224,487-499)及彼等鄰近CDR H3者。

本文所用「保守變化」係指與天然蛋白質相比，分別在突變體多肽之三級結構中產生最小變化或在突變體多肽之抗原決定子中產生最小變化的實質上為構形或抗原中性之改變。當提及本發明抗體及抗體片段時，保守變化意指不會使抗體無法結合至個體受體之胺基酸取代法。熟習此項技術者應能夠預測在維持構形或抗原中性之高機率同時可進行哪些胺基酸取代。此等指導原則提供於(例如)Berzofsky,(1985)Science 229：932-940及Bowie等人(1990)Science 247：1306-1310中。影響維持構形及抗原中性之可能性之考慮因素包括(但不限於)：(a)疏水性胺基酸之取代較不容易影響抗原性，因為疏水性殘基比較可能位於蛋白質內部；(b)生理化學上類似之胺基酸之取代較不容易影響構形，因為經取代胺基酸在結構上擬似天然胺基酸；及(c)改變進化上保守之序列可能對構形產生不利影響，因為此等保守性質表示該胺基酸序列可能具有功能重要性。熟習此項技術者使用熟知分析法即可得知蛋白質構形之改變，例如(但不限於)微量補體固定法(microcomplement fixation method)(Wasserman等人(1961)J.Immunol.87：290-295；Levine等人(1967)Meth.Enzymol.11：928-936)及透過使用構形依賴性單株抗體之結合性研究(Lewis等人(1983)Biochem.22：948-954)。

熟悉此相關技術者習知且咸了解術語「融合瘤」係指由產生抗體之細胞與永生細胞融合產生之細胞，例如多發性骨髓瘤細胞。此雜交細胞能夠產生抗體之連續供應。關於融合方法之更詳細說明，參見上文及下文實例對「單株抗體」之定義。

本文所用術語「載劑」意指可在其中納入抗原肽或超分子構築體或可與其相連之結構，藉此使抗原肽或該肽之一部分展現或暴露於人類或動物之免疫系統。本發明內容中，任一適宜用於動物或人類療法之粒子(例如，囊泡、粒子或微粒體)皆可用作載劑。

該術語「載劑」進一步包含遞送方法，其中可藉由遞送機制將包含抗原肽之超分子抗原構造組合物運送至期望位點。該遞送系統之一實例利用膠體金屬，例如膠體金。

可用於本發明超分子抗原構造組合物之載劑蛋白包括(但不限於)麥芽糖結合肽「MBP」；牛血清白蛋白「BSA」；鑰孔蟲戚血藍蛋白 (keyhole lympet hemocyanin)「KLH」；卵白蛋白；鞭毛蛋白；甲狀腺球蛋白；任一物種之血清白蛋白；任一物種之γ球蛋白；同源細胞(syngeneic cell)；具有Ia抗原之同源細胞；及D-及/或L-胺基酸之聚合物。

此外，術語「治療有效量」或「醫藥上有效量」係指當投與人類或動物時足以在該人類或動物中產生療效之結合肽之量。熟習此項技術者容易依照常規程序確定有效量。

「pTau PHF」、「PHF」及「成對螺旋絲狀體」在本文中同義使用且係指於電子顯微鏡上看到之以160nm週期纏繞成螺旋之絲狀體對。寬度在10nm與22nm之間變化。PHF係阿茲海默氏症(AD)之神經纖維纏結及神經纖維串連中之主要結構。亦可在一些但非全部神經炎斑點相關良性軸突中看到PHF。PHF之主要組份係過度磷酸化形式之微管相關tau蛋白。PHF可部分地由二硫鍵連接之反向平行過度磷酸化tau蛋白組成。可截去PHF tau C-端20個胺基酸殘基。PHF形成之潛在機制係尚未確定，但tau過度磷酸化可使其脫離微管，從而增加神經元內部可形成PHF之可溶性tau彙集物。

在本發明範圍內，經證實，經誘導對本發明抗原組合物反應之抗體具有極大的T-細胞依賴性。就此而言，使用裸小鼠模型且對裸小鼠進行疫苗接種並量測抗體反應以在經免疫裸小鼠中評估本發明抗原組合物誘導之Aβ-特異性抗體反應。裸小鼠攜帶Foxn1nu突變且因此因缺乏適當胸腺而T-細胞功能降低。

本文所用「醫藥上有效量」係指醫藥組合物中之活性成份適於治癒、或至少部分地阻止所治療疾病、病症或病況或任何其相關併發症之症狀之劑量。

本發明提供識別並結合至tau蛋白之主要病理磷酸化表位之結合肽。具體而言，本發明提供對抗tau蛋白上認為在tau病變(包括AD)中負責突觸毒性及神經毒性之線性及構形、簡單及複雜磷酸化表位之特異性抗體。

因此，在一實施例中，本發明係關於嵌合或人類化抗體或其功能片段，該抗體識別並特異性結合至哺乳動物，尤其人類Tau蛋白或其片段上之磷酸化表位，尤其病理tau蛋白構型異構物，但在一實施例中不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該結合肽或抗體具有高結合親和力以及至少10nM，尤其至少8nM，尤其至少5nM，尤其至少2nM，尤其至少1nM，尤其至少500pM，尤其至少400pM，尤其至少300pM，尤其至少200pM，尤其至少100pM，尤其至少50pM之解離常數。

本文所用「可溶性Tau」蛋白係指由完全溶解之Tau蛋白/肽單體或Tau樣肽/蛋白、或經修飾或經截短Tau肽/蛋白或Tau肽/蛋白單體之其他衍生物及Tau蛋白寡聚物二者組成之蛋白。「可溶性Tau」尤其不包括神經纖維纏結(NFT)。

本文所用「不溶性Tau」分別係指形成寡聚或聚合結構之Tau肽或蛋白、或Tau樣肽/蛋白、或經修飾或經截短Tau肽/蛋白或Tau肽/蛋白之其他衍生物之多個聚集單體，其在活體外在水性介質中且在活體內在哺乳動物或人類身體中、更具體而言在腦中均不溶，但尤其係指在哺乳動物或人類身體中、更具體而言在腦中不溶之Tau或經修飾或經截短Tau肽/蛋白或其衍生物之多個聚集單體。「不溶性Tau」尤其包括神經纖維纏結(NFT)。

本文所用「單體Tau」或「Tau單體」係指完全溶解之Tau蛋白而在水性介質中無聚集複合物。

「聚集Tau」、「寡聚Tau」及「Tau寡聚物」分別係指形成寡聚或聚合結構之Tau肽或蛋白、或Tau樣肽/蛋白、或經修飾或經截短Tau肽/蛋白或Tau肽/蛋白之其他衍生物之多個聚集單體，其在活體外在水性介質中及在活體內在哺乳動物或人類身體中、更具體而言在腦中均不溶或可溶，但尤其係指在哺乳動物或人類身體中、更具體而言在腦中不溶或可溶之Tau或經修飾或經截短Tau肽/蛋白或其衍生物之多個聚集單體。

「調節抗體」係指如本文在各實施例中所述之抗體或其功能性片段，其可向上調控(例如，活化或刺激)、向下調控(例如，抑制(inhibit或suppress))或者改變含有增加之可溶性tau蛋白及/或可溶性磷酸化tau蛋白含量之動物，尤其哺乳動物或人類之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中可溶性及/或不溶性Tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白之功能性質、生物活性或含量。調節抗體或其功能片段可作用以直接或間接調節tau蛋白或編碼該tau蛋白之多肽。在某些實施例中，調節抗體或其功能片段降低含有增加之可溶性tau蛋白及/或可溶性磷酸化tau蛋白含量之動物，尤其哺乳動物或人類之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中可溶性及不溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白之含量。

在一實施例中，本發明提供醫藥組合物，其包含治療有效量之本文所闡述並主張之任一實施例之嵌合抗體或人類化抗體、或包含編碼該結合肽或抗體之核酸序列之聚核苷酸、或其組合與醫藥上可接受之載劑。

適宜醫藥載劑、稀釋劑及/或賦形劑為業內所熟知且包括(例如)磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(例如油/水乳液)、各種類型之潤濕劑、無菌溶液等。

本文所用術語「治療」、「預防(prevent,preventing及prevention」係指藉由投與預防劑或治療劑來預防個體病症之一或多種症狀之復發或發作。

人類化抗體之構造

藉由參照本文所包括之特定實施例之以下詳細說明可更容易地瞭解本發明。儘管已參照本發明某些實施例之具體細節闡述本發明，但不欲將該等細節視為對本發明之範圍之限制。

可設計不同HCVR及LCVR區，其包含可自包埋於天然或經修飾來源於人類或靈長類之框架區中之供體抗體(例如，鼠類抗體)獲得之非人類CDR。該修飾可尤其關於框架區內一或多個胺基酸殘基與各別子組中在此位置更常見之非人類殘基，尤其鼠類殘基或具有與各別子組中在此位置更常見者類似性質之殘基的交換。

對框架區之修飾使得框架序列用於固定CDR於其正確空間定向以便與抗原相互作用，且框架殘基有時甚至會參與抗原結合。在本發明之一實施例中實施量測以進一步適應所選人類框架序列以使其與齧齒類動物框架之序列最類似以最大化在重新成形抗體中保持親和力之可能性。

因此，可取代人類框架區中之鼠類殘基。具體而言，可分別取代重鏈可變(HCVR)區之人類框架區中47位或94位或二者及輕鏈可變(LCVR)區之人類框架區中45位及/或87位及/或50位及/或53位鼠類殘基。

可使用已知技術在生理上可接受之調配物中製備本發明之嵌合抗體或人類化抗體及其活性片段且其可包含醫藥上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。舉例而言，將本發明及如本文所述之抗體與醫藥上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑組合以形成治療組合物。適宜醫藥載劑、稀釋劑及/或賦形劑為業內所熟知且包括(例如)磷酸鹽緩衝鹽水溶液、水、乳液(例如油/水乳液)、各種類型之潤濕劑、無菌溶液等。

本發明醫藥組合物之調配物可根據熟習此項技術者已知之標準方法達成。

本發明組合物可以適宜醫藥上有效之劑量以固體、液體或氣溶膠形式投與個體。固體組合物之實例包括丸劑、乳霜及可植入劑量單元。丸劑可經口投與。治療性乳霜可經局部投與。可植入劑量單元可於(例如)腫瘤部位局部投與，或可(例如)經皮下植入用於治療性組合物之全身性釋放。液體組合物之實例包括適於經肌內、經皮下、經靜脈內、經動脈內注射之調配物及用於局部及眼內投與之調配物。氣溶膠調配物之實例包括用於投與肺之吸入器調配物。

組合物可藉由標準投與途徑投與。一般而言，組合物可藉由局部、經口、直腸、鼻、皮內、腹膜內或非經腸(例如，靜脈內、皮下或肌內)途徑投與。

另外，可將組合物納入持續釋放之基質(例如生物可降解聚合物)中，在期望遞送處(例如腫瘤部位)之附近植入該等聚合物。該方法包括投與單次劑量、以預定時間間隔投與重複劑量及在預定時段內持續投與。

本文所用持續釋放之基質係由可藉由酶促或酸/鹼水解或藉由溶解降解之材料(一般為聚合物)製得之基質。在將基質插入機體後，酶及體液對基質起作用。期望藉由諸如以下等生物相容材料來選擇持續釋放之基質：脂質體、聚乳酸(polylactide,polylactide acid)、聚乙醇酸交酯(乙醇酸聚合物)、聚乳酸共乙交酯(乳酸與乙醇酸之共聚物)、聚酸酐、聚(原酸)酯、多肽、透明質酸、膠原、硫酸軟骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚胺基酸、胺基酸(例如苯丙胺酸、酪胺酸、異白胺酸)、聚核苷酸、聚乙烯丙烯、聚乙烯基吡咯啶酮及聚矽氧。較佳生物可降解基質係聚乳酸、聚乙醇酸交酯或聚乳酸共乙交酯(乳酸與乙醇酸之共聚物)中一者之基質。

熟習相關技術者已熟知，組合物之劑量應端視不同因素而定，例如所治療病況、所用具體組合物及其他臨床因素，例如患者之重量、大小、性別及一般健康狀況、機體表面積、欲投與之具體化合物或組合物、同時投與之其他藥物及投與途徑。

本發明組合物可與其他包含生物活性物質或化合物(例如，已知用於tau病變及/或類澱粉變性症之藥療法、與類澱粉蛋白或類澱粉蛋白樣蛋白(例如參與阿茲海默氏症之β類澱粉蛋白)相關之疾病及病症之群之化合物)之組合物組合投與。

另一生物活性物質或化合物可藉由與本發明治療性疫苗相同或相似之機制或藉由不相關之作用機制或藉由多種相關及/或不相關之作用機制來施加其生物效應。

通常，另一生物活性化合物可包括中子透射增強劑、精神治療性藥物、乙醯膽鹼酯酶抑制劑、鈣通道阻斷劑、生物胺、苯二氮平安定劑(benzodiazepine tranquillizer)、乙醯膽鹼合成、儲存或釋放增強劑、乙醯膽鹼突觸後受體激動劑、單胺氧化酶-A或-B抑制劑、N-甲基-D-天冬胺酸鹽麩胺酸鹽受體拮抗劑、非類固醇消炎藥物、抗氧化劑及血清素能受體拮抗劑。

具體而言，生物活性劑或化合物可包含至少一種選自由下列組成之群之化合物：抵抗氧化應激之化合物；抗細胞凋亡化合物；金屬螯合劑；DNA修復抑制劑，例如哌侖西平(pirenzepin)及代謝物；3-胺基-1-丙磺酸(3APS)；1,3-丙二磺酸鹽(1,3 PDS)；分泌酶活化劑；[β]- 及7-分泌酶抑制劑；tau蛋白；神經遞質、β摺疊結構破壞劑；消炎分子；「非典型抗精神病劑」，例如氯氮平(clozapine)、齊拉西酮(ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奧氮平(olanzapine)；或膽鹼酯酶抑制劑(ChEI)，例如他克林(tacrine)、利斯的明(rivastigmine)、多奈哌齊(donepezil)及/或加蘭他敏(galantamine)；及其他藥物及營養添加劑，例如維生素B 12、半胱胺酸、乙醯膽鹼前體、卵磷脂、膽鹼、銀杏提取物(Ginkgo biloba)、乙醯基-L-肉鹼、艾地苯醌(idebenone)、丙戊茶鹼(propentofylline)或黃嘌呤衍生物；以及本發明結合肽(包括抗體，尤其單株抗體及其活性片段)及視情況醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑及疾病治療說明書。

在再一實施例中，本發明組合物可包含菸鹼酸(niacin)或美金剛(memantine)以及本發明之嵌合抗體或人類化抗體(包括抗體，尤其單株抗體及其活性片段)及視情況醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。

在本發明之再一實施例中，提供組合物，其包含「非典型抗精神病劑」，例如氯氮平、齊拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奧氮平，該等藥劑用於治療正性及負性精神病症狀，包括幻覺、妄想、思維障礙(表現為顯著的不連貫、思維出軌(derailment)、言語岔開)及古怪或錯亂性行為、以及興趣缺失、冷漠感情、情感淡漠及社交退縮；以及本發明之嵌合抗體或人類化抗體或其活性片段、及視情況醫藥上可接受之載劑及/或稀釋劑及/或賦形劑。

除本發明之嵌合抗體或人類化抗體外，可適用於組合物中之其他化合物亦為揭示於(例如)WO 2004/058258(尤其參見第16頁及第17頁)中者，包括治療藥物靶標(第36頁至第39頁)、鏈烷磺酸及烷醇磺酸(第39頁至第51頁)、膽鹼酯酶抑制劑(第51頁至第56頁)、NMDA受體拮抗劑(第56頁至第58頁)、雌激素(第58頁至第59頁)、非類固醇消炎藥物(第60頁至第61頁)、抗氧化劑(第61頁至第62頁)、過氧化物酶體增生劑活化受體(PPAR)激動劑(第63頁至第67頁)、膽固醇降低劑(第68頁至第75頁)；類澱粉抑制劑(第75頁至第77頁)、類澱粉形成抑制劑(第77頁至第78頁)、金屬螯合劑(第78頁至第79頁)、抗精神病劑及抗抑鬱劑(第80頁至第82頁)、營養添加劑(第83頁至第89頁)及提高腦中生物活性物質之可用性之化合物(參見第89頁至第93頁)及前藥(第93頁及第94頁)，該文件以引用方式併入本文中，但尤其為上文所述頁面所提及之化合物。

蛋白性醫藥活性物質可以介於1ng/劑量與30mg/劑量之間之量存在。通常，投與方案應在介於0.1μg與10mg本發明抗體之範圍內，尤其在1.0μg至1.0mg之範圍內且更尤其在介於1.0μg與100μg之範圍內，其中所有屬於該等範圍內之個別數字亦為本發明之一部分。若經由連續輸注進行投與，則更恰當劑量可在介於0.01μg與10mg單位/公斤體重/小時之範圍內，其中所有屬於該等範圍內之個別數字亦為本發明之一部分。

投與將通常為非經腸(例如靜脈內或皮下)。用於非經腸投與之製劑包括無菌水性或非水性溶液、懸浮液及乳液。非水性溶劑包括(但不限於)丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄欖油)及可注射有機酯(例如油酸乙酯)。水性溶劑可選自由下列組成之群：水、醇/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水及緩衝介質。非經腸媒劑包括氯化鈉溶液、林格氏右旋糖(Ringer’s dextrose)、右旋糖及氯化鈉、乳酸林格氏液或固定油。靜脈內媒劑包括流體及營養補充劑、電解質補充劑(例如基於林格氏右旋糖者)及其他。亦可存在防腐劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。

醫藥組合物可進一步包含尤其人類來源之蛋白性載劑，例如血清白蛋白或免疫球蛋白。在本發明醫藥組合物中可存在其他生物活性劑，此端視其期望用途而定。

當結合靶標位於腦中時，本發明之某些實施例提供本發明之嵌合抗體或人類化抗體(包括其活性片段)以通過血腦障壁。某些神經退化性疾病與血腦障壁之滲透性增加相關，使得可容易地將本發明結合肽(包括抗體或其活性片段)引入腦中。當血腦障壁仍完好時，存在若干業內已知之方法跨過其運送分子，包括(但不限於)物理方法、基於脂質之方法及基於受體及通道之方法。

跨過血腦障壁運送本發明之嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段之物理方法包括(但不限於)完全繞開血腦障壁或藉由在血腦障壁中生成開口。繞開方法包括(但不限於)直接注射至腦(例如，參見Papanastassiou等人，Gene Therapy 9：398-406(2002))及在腦中植入遞送裝置(例如，參見Gill等人，Nature Med.9：589-595(2003)；及Gliadel Wafers(TM),Guildford Pharmaceutical)。在障壁中生成開口之方法包括(但不限於)超音波處理(例如，參見美國專利公開案第2002/0038086號)、滲透壓(例如，藉由投與高滲甘露醇(Neuwelt,E.A.,Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation，第1卷及第2卷，Plenum Press,N.Y.(1989))、藉由(例如)緩激肽或透化劑A-7之透化(例如，參見美國專利第5,112,596號、第5,268,164號、第5,506,206號及第5,686,416號)及用含有編碼結合肽或抗原結合片段之基因之載體轉染跨越血腦障壁之神經元(例如，參見美國專利公開案第2003/0083299號)。

跨過血腦障壁運送本發明之嵌合抗體或人類化抗體(包括抗體，尤其單株抗體、或其活性片段)之基於脂質之方法包括(但不限於)將本發明之嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段囊封於偶聯至其活性片段並結合至血腦障壁之血管內皮上之受體的脂質體中(例如，參見美國專利申請公開案第20020025313號)及將本發明結合肽(包括抗體，尤其單株抗體、或其活性片段)塗覆於低密度脂蛋白粒子(例如，參見美國專利申請公開案第20040204354號)或脂蛋白元E(例如，參見美國專利申請公開案第20040131692號)中。

跨過血腦障壁運送本發明之嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段的基於受體及通道之方法包括(但不限於)使用糖皮質激素阻斷劑來增加血腦障壁之滲透性(例如，參見美國專利申請公開案第2002/0065259號、第2003/0162695號及第2005/0124533號)；活化鉀通道(例如，參見美國專利申請公開案第2005/0089473號)，抑制ABC藥物運送蛋白(例如，參見美國專利申請公開案第2003/0073713號)；用運鐵蛋白塗覆抗體並調節一或多種運鐵蛋白受體之活性(例如，參見美國專利申請公開案第2003/0129186號)及將該等抗體陽離子化(例如，參見美國專利第5,004,697號)。

另外，本發明抗體可經改造以有利於藉助各種開發的BBB受體(即，運鐵蛋白受體、胰島素受體、低密度脂蛋白受體相關蛋白8、葡萄糖運送蛋白1(Glut1)及諸如此類)跨過血腦障壁(BBB)的受體介導之運送(RMT)(例如，參見WO9502421)。舉例而言，可使本發明抗體具有多特異性以靶向tau及BBB受體。多特異性抗體之非限制性實例包括雙特異性抗體，其中該抗體之一個臂係本發明之抗體片段且該抗體之另一個臂靶向介導跨過BBB運送之BBB受體。舉例而言，BBB受體可包括運鐵蛋白受體(TfR)、胰島素受體、胰島素樣生長因子受體(IGF受體)、低密度脂蛋白受體相關蛋白8(LRP8)、低密度脂蛋白受體相關蛋白1(LRP1)、葡萄糖運送蛋白1(Glut1)及肝素結合表皮生長因子樣生長因子(HB-EGF)。

可在長期時間內對個體單次或反覆投與本發明之嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段、或本發明醫藥組合物。投與持續時間可介於1週與至多12個月之間或更久。在此時間期間，結合肽、抗體或醫藥組合物可每週1次、每2週1次、每3週1次、每4週1次等或以更高或更低頻率投與，此端視欲治療個體之需要而定。

在又一實施例中，本發明提供用於檢測及診斷tau-蛋白相關疾病、病症或病況(包括神經退化性疾病或病症，例如tau病變)之方法及套組，該等經退化性疾病或病症包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症，包括(但不限於)阿茲海默氏症、庫賈氏病、拳擊手型癡呆、唐氏症候群、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克氏病、包涵體肌炎及朊病毒蛋白大腦類澱粉蛋白血管病、外傷性腦損傷，且進一步包括不顯示獨特類澱粉病理學之疾病或病症，包括(但不限於)關島型肌肉萎縮性脊髓側索硬化症/帕金森氏病-癡呆複合症、非關島型運動神經元病伴隨神經纖維纏結、嗜銀顆粒性癡呆、皮質基底核退化、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、因第17對染色體異常導致的額顳葉癡呆伴隨帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病、多系統萎縮、C型尼曼-匹克二氏病、蒼白球腦橋黑質退化、匹克症、進行性皮質下膠質增生、進行性核上麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、單純纏結型癡呆、腦炎後帕金森氏病、肌強直性營養不良。病理異常可由神經纖維病灶之形成(tau病變之主要腦病理學)引起或與其相關。

此外，本發明提供用於以下之方法及套組：診斷tau-蛋白相關疾病、病症或病況(包括神經退化性疾病或病症，例如tau病變)之傾向，該等經退化性疾病或病症包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症)；或監測患者之最小殘留疾病或預測患者對利用本發明之嵌合抗體或人類化抗體或本發明及如本文所述之組合物治療之反應性。該等方法包括常用於檢測或量化生物試樣或原位條件中之物質之已知免疫方法。

診斷有需要的個體，尤其哺乳動物、更具體而言人類tau-蛋白相關疾病或病況(包括神經退化性疾病或病症，例如tau病變，該等經退化性疾病或病症包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症)或tau-蛋白相關疾病或病況之傾向可藉由在樣品中或原位檢測本發明結合肽，尤其抗體，尤其單株抗體或其活性片段與tau蛋白之表位之免疫特異性結合來達成，其包括使該樣品或懷疑含有tau蛋白之特定身體部分或身體區域與結合該tau蛋白之表位之抗體接觸，使該抗體與該tau蛋白結合以形成免疫複合物，檢測該免疫複合物之形成及將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau蛋白之存在或不存在之相關性，視情況比較該免疫複合物之量與正常對照值，其中該免疫複合物之量比正常對照值增加時表示該個體患有tau蛋白相關疾病或病況或具有發生風險。

在利用本發明結合肽(包括抗體，尤其單株抗體及其活性片段)或本發明組合物治療後監測個體，尤其哺乳動物、更具體而言人類之最小殘留疾病可藉由在樣品中或原位檢測本發明結合肽，尤其抗體，尤其單株抗體或其活性片段與該tau蛋白之表位之免疫特異性結合來達成，其包括使該樣品或懷疑含有tau蛋白之特定身體部分或身體區域與結合該tau蛋白之表位之本發明結合肽(包括抗體，尤其單株抗體及其活性片段)接觸，使本發明結合肽(包括抗體，尤其單株抗體及其活性片段)與該tau蛋白結合以形成免疫複合物，檢測該免疫複合物之形成及將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau蛋白之存在或不存在之相關性，視情況比較該免疫複合物之量與正常對照值，其中該免疫複合物之量比正常對照值增加時表示該個體可能仍患有最小殘留疾病。

預測個體，尤其哺乳動物、更具體而言人類對利用本發明嵌合抗體或人類化抗體、或本發明組合物治療之反應性可藉由在樣品中或原位檢測結合肽，尤其單株抗體或其活性片段與該tau蛋白之表位之免疫特異性結合來達成，其包括使該樣品或懷疑含有tau蛋白之特定身體部分或身體區域與結合該tau蛋白之表位之本發明結合肽(包括抗體，尤其單株抗體及其活性片段)接觸，使本發明嵌合抗體或人類化抗體或其活性片段與tau蛋白結合以形成免疫複合物，檢測該免疫複合物之形成及將該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau蛋白之存在或不存在之相關性，視情況比較治療開始之前及之後該免疫複合物之量，其中該免疫複合物之量減少說明該患者具有對該治療有反應之高可能性。

可用於診斷tau蛋白相關疾病或病況、用於診斷tau蛋白相關疾病或病況(包括神經退化性疾病或病症，例如tau病變，該等經退化性疾病或病症包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症)之傾向、或用於監測患者之最小殘留疾病或用於預測患者對利用本發明嵌合抗體或人類化抗體或其活性片段、或本發明及如本文所述之組合物治療之反應性的生物樣品係例如自生物體獲得之流體(例如血清、血漿、唾液、胃分泌、黏液、腦脊髓液、淋巴液及諸如此類)或組織或細胞樣品，例如神經、腦、心臟或血管組織。在測定試樣中存在或不存在tau蛋白時，可使用熟習此項技術者已知之任一免疫分析，例如利用間接檢測方法使用二級試劑進行檢測之分析、ELISA分析及免疫沈澱及凝集分析。該等分析之詳細說明示於(例如)Harlow及Lane，Antibodies：A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory,New York 1988 555-612；頒與Maertens及Stuyver、Zrein等人之WO96/13590(1998)及WO96/29605。

對於原位診斷，可藉由業內已知方法(例如，靜脈內、皮下、鼻內、腹膜內、大腦內、動脈內注射)將本發明嵌合抗體或人類化抗體(包括抗體或其活性片段)投與欲診斷之生物體，以使得本發明抗體與類澱粉蛋白蛋白上之表位區之間可發生特異性結合。按慣例，結合肽/抗原複合物可方便地藉助附接至本發明嵌合抗體或人類化抗體、或其功能片段之標記或任一其他業內已知檢測方法來檢測。

用於診斷應用或用於診斷tau蛋白相關疾病或病況(包括神經退化性疾病或病症，例如tau病變，其包含神經退化性疾病或病症之異源性群，包括顯示tau病理學與類澱粉病變理學共存之疾病或病症)之傾向、或用於監測患者之最小殘留疾病或用於預測患者對利用本發明嵌合抗體或人類化抗體(包括抗體或其活性片段)或本發明及如本文所述之組合物治療之反應性等應用的免疫分析通常依賴於經標記抗原、結合肽或二級試劑進行檢測。該等可用通常為熟習此項技術者已知之化合物標記的蛋白或試劑包括酶、放射性同位素以及螢光、發光及發色物質，包括(但不限於)有色粒子，例如膠體金及乳膠珠粒。其中，放射性標記可用於幾乎所有類型之分析及多數變化形式。當必須避免放射性時或當需要快速獲得結果時，酶偶聯標記尤其有用。螢光染料之應用儘管需要昂貴的設備，但可提供極靈敏之檢測方法。用於該等分析中之結合肽係本文所主張揭示者，包括抗體，尤其單株抗體、多株抗體及經親和力純化之多株抗體。

或者，可藉由與經標記之對免疫球蛋白具有親和力之物質(例如蛋白A或G或第二抗體)反應來間接標記本發明嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段。本發明之嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段可與第二物質偶聯且用對偶聯至該抗體之該第二物質具有親和力的經標記第三物質檢測。舉例而言，本發明之嵌合抗體或人類化抗體、或其活性片段可偶聯至生物素且使用經標記抗生物素蛋白(avidin)或抗生蛋白鏈菌素(streptavidin)來檢測結合肽/生物素偶聯物。類似地，結合肽可偶聯至半抗原且使用經標記抗半抗原結合肽來檢測結合肽/半抗原偶聯物。

熟習此項技術者應瞭解該等及其他可用於本發明中之適宜標記。該等標記與結合肽或其片段之結合可使用熟習此項技術者習知之標準技術達成。典型技術由Kennedy,J.H.，等人，1976(Clin.Chim.Acta 70：1-31)及Schurs,A.H.W.M.等人1977(Clin.Chim Acta 57：1-40)闡述。下文所提及之偶合技術係戊二醛法、高碘酸鹽法、二馬來醯亞胺法及其他，所有該等方法皆以引用方式併入本文中。

現行免疫分析利用雙抗體法來檢測分析物之存在，其中該抗體藉由與已經可檢測標記標示之第二抗體的反應性來間接地標示。第二抗體較佳為結合獲得單株抗體之動物之抗體者。換言之，若單株抗體係小鼠抗體，則經標記第二抗體係抗小鼠抗體。對於欲在本文所述分析中使用之抗體而言，此標記較佳為經抗體塗覆之珠粒，尤其磁性珠粒。對於欲在本文所述免疫分析中使用之抗體而言，標記較佳為可檢測分子，例如放射性、螢光或電化學發光物質。

替代性雙抗體系統因其適於快速確定分析物之存在而經常稱為快速格式化系統(fast format system)，其亦可在本發明範圍內使用。該系統需要在抗體與分析物之間具有高親和力。根據本發明之一個實施例，使用每一抗體皆對澱粉樣蛋白具有特異性之成對抗體來確定tau蛋白之存在。該等成對抗體中之一者在本文中稱為「檢測抗體」且該成對抗體中之另一者在本文中稱為「捕獲抗體」。本發明單株抗體可用作捕獲抗體或檢測抗體。本發明單株抗體亦可在單一分析中同時用作捕獲與檢測抗體二者。因此，本發明之一實施例使用雙抗體三明治法(double-antibody sandwich method)來檢測生物體液樣品中之tau蛋白。在此方法中，將分析物(tau蛋白)夾持於檢測抗體與捕獲抗體之間，捕獲抗體可逆地固定至固體載體上。檢測抗體將含有可檢測標記，以鑑別抗體-分析物三明治之存在及因此分析物之存在。

例示性固相物質包括(但不限於)微量滴定板、聚苯乙烯試管、磁性、塑膠或玻璃珠粒及載玻片，其為放射免疫分析及酶免疫分析領域內所熟知。將抗體偶合至固相之方法亦為熟習此項技術者所熟知。最近，已使用多種多孔材料(例如耐綸(nylon)、硝化纖維、乙酸纖維素、玻璃纖維及其他多孔聚合物)作為固體載體。

本發明亦係關於用於檢測生物樣品中tau蛋白之診斷套組，其包含如上文所定義之組合物。此外，本發明係關於後一診斷套組，其除如上文所定義之組合物外亦包含如上文所定義之檢測試劑。術語「診斷套組」一般而言係指業內已知之任一診斷套組。更特定而言，後一術語係指如Zrein等人(1998)中所述之診斷套組。

本發明之再一目的係提供用於檢測及診斷tau蛋白相關疾病及病況之新穎免疫探針及測試套組，其包含本發明結合肽。對於免疫探針而言，將結合肽直接或間接地附接至適宜報告分子，例如酶或放射性核素。該測試套組出於以下目的包括容納一或多種本發明結合肽之容器及抗體使用說明書：結合至tau抗原以形成免疫複合物並檢測該免疫複合物之形成，以取得該免疫複合物之存在或不存在與該tau抗原之存在或不存在之相關性。

實例1.藉助ELISA之hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1與T4肽之結合 1.1.方法 1.1.1磷酸化Tau結合分析

使用ELISA分析來測試抗體與pTau之結合。用10μg/mL來源於Tau之肽Tau401至418(位置409絲胺酸磷酸化(T4.5)或未磷酸化(T4.6))塗覆Nunc MaxiSorp 96孔板(Nunc,Denmark)。在4℃下使塗層在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS；Sigma-Aldrich,Switzerland)中過夜。用0.05% Tween20/PBS充分洗滌板且然後在37℃下用存於0.05% Tween20/PBS中之1%牛血清白蛋白(BSA；Sigma-Aldrich)阻斷1小時。然後以8種兩倍稀釋液(以0.5μg/mL開始)添加欲測試之含有抗體之上清液，並在37℃下培育2小時。然後如先前所述洗滌板，並在37℃下經2小時以存於0.05% Tween20/PBS中之1/2,000稀釋液添加鹼性磷酸酶(AP)偶聯山羊抗-人類IgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories,England)。在洗滌後，用對-硝基苯磷酸氫二鈉六水合物(pNPP；Sigma-Aldrich,Switzerland)磷酸酶受質溶液培育板，並在培育1小時後使用微板讀數器(Tecan,Switzerland)在405nm下讀數。結果以光學密度(O.D.)表示。

1.2.結果

在肽T4.5及T4.6上使用直接法ELISA測試人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1與pTau靶標之結合。該兩種抗體均展示對靶標之高結合(圖1)。未觀察到與相應非磷酸化Tau肽(T4.6)結合。從而證實抗體hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1與靶標之高結合。

實例2.使用hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1藉助TAUPIR對20個月齡基因轉殖tau病變(biGT)小鼠腦中pTau之染色 2.1.方法 2.1.1抗-Tau抗體與來自Tau基因轉殖動物之腦切片上之Tau纏結之結合(TAUPIR)

使用老齡(>18個月齡)雙基因轉殖biGT(GSK-3β基因轉殖小鼠與TPLH小鼠雜交，含有具有P301L突變之人類Tau之最長同型異構體(441aa))tau病變小鼠之腦切片。在PBS中將腦切片洗滌5min，然後在環境溫度下在1.5%存於PBS：MeOH(1：1)中之H₂O₂中培育15min以阻斷內源性過氧化酶活性。在PBST(PBS/0.1% TritonX100)中將切片洗滌3次後，將在室溫下在PBST+10% FCS(胎牛血清)阻斷液中其培育30min。然後在4℃下用含有欲測試抗體之未經稀釋之上清液將切片培育過夜。接著在PBST中將切片洗滌3次，然後在室溫下用存於PBST/10% FCS中之HRP-偶聯抗-人類IgG4(Invitrogen)二級抗體培育1小時。在檢測前，用PBST將切片洗滌3次並在50mM Tris/HCl(pH 7.6)中培育5min。藉由以下方式來實施檢測：在二胺基聯苯胺(DAB：1片存於10ml 50mM Tris.HCl+3μl 30% H₂O₂中；MP Biomedicals,USA)中將切片培育3min。藉由在PBST中將切片洗滌3次來終止反應。然後將切片轉移至矽烷化玻璃板上並在50℃溫熱板上風乾2小時。培育與Mayers蘇木素(Fluka Chemie,Switzerland)聯用實施對比染色1min，隨後在流動自來水中實施洗滌步驟4min。藉由使切片在50%乙醇浴、70%乙醇浴、90%乙醇浴中並在100%乙醇浴中(2次)、然後在二甲苯中(2次)中通過進行脫水1min。最後，在蓋玻片下用DePeX(BDH Chemicals有限公司，England)實施封固。

2.2.結果

藉由TAUPIR染色來評估人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1及hACI-36-3A8-Ab1與基因轉殖tau病變(biGT)小鼠腦中pTau之結合。抗體hACI-36-2B6-Ab1(圖2A及圖2B)及hACI-36-3A8-Ab1(圖3A及圖3B)展示與存於tau病變小鼠腦中之Tau纏結及神經纖維串連之結合。

實例3.結合研究II：藉助Biacore/SPR之抗體親和力 3.1方法 3.1.1 SPR結合分析

為評估hACI-36-2B6-Ab1與肽T4.5間之結合相互作用，將抗體hACI-36-2B6-Ab1固定至感測器晶片上，且然後注射T4.5作為分析物。

在Biacore T100儀器(GE Healthcare)上實施SPR實驗。固定用試劑(EDC、NHS及乙醇胺)及感測器晶片CM7(羧甲基聚葡萄醣)係購自GE Healthcare。流動緩衝液係PBS(Dulbecco’s PBS,Sigma)。為正確定向用於結合至肽T4.5之抗體，經由蛋白G將抗體偶聯至感測器表面。為此，用10mM乙酸鈉(pH 4.0)(GE Healthcare)將重組蛋白G(Sigma)自存於水中之儲備液(2mg/mL)稀釋至50μg/mL。然後將此蛋白溶液偶聯至使用EDC/NHS預先活化之CM7感測器晶片之流動槽(fc)2。偶聯後，使乙醇胺流經該表面並得到在fc1上9860 RU及在fc2上9492 RU之最終固定量。然後用10mM磷酸鹽緩衝液(pH 7.4)將hACI-36-2B6-Ab1稀釋至100μg/mL並以2μL/min注射85s，得到8340RU之固定量。為確保在注射肽T4.5前獲得平坦基線，使PBS流經感測器表面約2h且然後系統用PBS灌注2次。使用流動緩衝液利用兩倍連續稀釋液來分析5個濃度之肽T4.5(50nM→800nM)。使用單循環動力學法自最低濃度開始實施注射並以50μL/min之速率流經fc 1及2二者。每一濃度之肽之締合時間及解離時間均實施90s。自fc 2減去fc 1之反應以校正儀器噪音、本體折射變化及與羧甲基聚葡萄醣表面之非特異性結合。使用Biacore T100評估軟體使用用於數值積分及總體分析之演算法來實施動力學分析。將所有數據同時擬合至1：1同源(Langmuir)模型以進行曲線擬合。

所用肽

3.2結果

使用SPR實時監測tau肽與人類化抗體hACI-36-2B6-Ab1之結合。可使用抗體結合之結合階段及解離階段之分析夾測定締合速率常數 (k _a)、解離速率常數(k _d)以及解離常數K_D。實施肽T4.5與經固定抗體hACI-36-2B6-Ab1之結合之動力學分析，其展示0.54×10⁵M^-1s^-1之快速締合速率常數及36.0×10^-4s^-1之解離速率常數(下表)。

實例4.表位圖譜分析 4.1方法 4.1.1表位圖譜分析

藉助ELISA使用不同磷酸化及非磷酸化肽文庫來實施抗-磷酸化Tau人類化單株抗體之表位圖譜分析。掃描期望表位之肽文庫之胺基酸序列顯示於表5A中。另外，創建如表5B中所顯示之結合至抗體之肽序列之每一殘基經丙胺酸(Ala)取代之肽文庫。每一文庫由存於肽疫苗中之跨越磷酸化及非磷酸化序列之短生物素化肽組成。肽文庫係購自ANAWA Trading SA。根據製造商(Mimotopes)說明書實施表位圖譜分析。簡言之，在4℃下用0.1%BSA磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)阻斷經抗生蛋白鏈菌素塗覆之板(NUNC)，過夜。在用PBS-0.05% Tween 20洗滌後，在室溫下用來自每一文庫之不同肽(在含有0.1% BSA、0.1%疊氮化鈉之PBS中稀釋至10μM最終濃度)塗覆板，保持1小時。在洗滌後，在室溫下用以不同稀釋度存於含有2% BSA及0.1%疊氮化鈉之PBS中之欲測試抗體將板培育1小時。再次洗滌板並在室溫下用以1/2000稀釋之AP-偶聯山羊抗-人類IgG(Jackson目錄號109-055-098，批號95531)培育30min至1小時。在最終洗滌後，用對-硝基苯磷酸氫二鈉六水合物(pNPP；Sigma-Aldrich,Buchs,Switzerland)磷酸酶受質溶液培育板，並在培育2小時後使用ELISA讀數板在405nm下讀數。若光學密度(O.D.)超過背景O.D至少2倍，則結合視為陽性。

4.2結果

使用ELISA測定hACI-36-2B6-Ab1結合至表5A及5B中所顯示肽之表位。針對包含人類Tau之最長同型異構體(TAU441)之胺基酸殘基404至411(其中S409磷酸化(pS409))且優先結合至Tau胺基酸殘基H407、pS409、N410及V411之區分析抗體hACI-36-2B6-Ab1之表位圖譜。

寄存：

根據布達佩斯條約(Budapest Treaty)的條款，將以下細菌質粒(經轉化之大腸桿菌)以瑞士AC Immune SA(PSE-EPFL Building B,1015 Lausanne,Switzerland)及「德國微生物及細胞保存中心(Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)」(Braunschweig,Inhoffenstrasse 7 B,38124 Braunschweig)之名義寄存：

表7.重鏈及輕鏈之全長胺基酸序列

參考文獻列表

Alonso A.D.等人(1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A., 94, 298 - 303

Alonso AC等人(2008)，Curr Alzheimer Res 5:375 - 384.

Alving等人，(1992)Infect. Immun. 60:2438 - 2444

Asuni等人，(2007)J Neurosc. 27 (34), 9115 - 29

Braak H.等人(1993)，Eur.Neurol., 33, 403 - 408

Gill等人，Nature Med. 9：589 - 595(2003)

Greenberg S.G.等人(1992)，J Biol.Chem., 267, 564 - 569.

Harlow及Lane，Antibodies: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory, New York 1988 555 - 612)

Hodgson等人，(1991) Bio/Technoloy, 9：421

Hoffmann R.等人(1997)，Biochemistry, 36, 8114 - 8124.

Jicha GA, Weaver等人(1999)，J Neurosci 19:7486 - 7494.

Kabat EA, Wu TT, Perry HM, Gottesman KS, Foeller C. Sequences of proteins of Immunological Interest, US Department of Health and Human Services, 1991

Kennedy, J. H.等人，1976(Clin. Chim. Acta 70:1 - 31)

Khaw, B. A.等人(1982)J. Nucl. Med. 23:1011 - 1019

Lewis等人，(2000) Nature Genetics, 25 :402 - 405

Masliah等人，(2005) Neuron, 46(6), 857 - 68

Masliah等人，(2011) PLoS ONE，第6(4)卷，e19338，第1頁至第17頁

Muhs等人，(2007) Proc Natl Acad Sci USA, 104(23), 9810 - 5

Muyllaert等人，(2006) Rev Neurol, 162(10), 903 - 907

Muyllaert等人，(2008) Genes Brain Behav.，增刊1，57 - 66

Neuwelt, E. A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation，第1卷及第2卷，Plenum Press, N. Y. (1989)

Nicolau等人(2002) Proc Natl. Acad. Sci USA 99, 2332 - 2337

Nicoll等人，(2003) Nature Med, 9, 448 - 452

Oddo等人，(2004) Neuron, 43, 321 - 332

Queen等人，(1989) Proc. Natl Acad Sci USA, 86:10029 - 10032

Papanastassiou等人，Gene Therapy 9: 398 - 406 (2002)

Reig S.，等人(1995)，Acta Neuropathol., 90, 441 - 447

Ribe等人，(2005) Neurobiol Dis, 20(3), 814 - 22

Roberson等人，(2007) Science, 316 (5825), 750 - 4

Rosenmann等人，(2006) Arch Neurol, 63(10), 1459 - 67

Rousseaux等人，Methods Enzymology, (1986), Academic Press 121:663 - 69

Schurs, A. H. W. M.等人1977 {Clin. Chim Acta 57:1 - 40}

Terwel等人，(2006) J Biol Chem, 280, 3963 - 3973

Terwel等人，(2008) Am J pathol., 172(3), 786 - 98

Urushitiani等人，(2007) Proc. Natl Acad Sci USA, 104 (79), 2495 - 500

Vandebroek T等人，「Phosphorylation and Aggregation of Protein Tau in Humanized Yeast Cells and in Transgenic Mouse Brain」；7th International Conference on Alzheimer’s and Parkinson’s Disease, Sorrento, Italy，2005年3月9日至13日，第15頁至第19頁

Vandebroek T等人(2006)，J Biol Chem 281:25388 - 25397

Vanhelmont T等人(2010), FEMS Yeast Res 10:992 - 1005

Wagner等人(2002) Journal of Liposome Research，第12(3)卷，第259頁至第270頁

WO 2010/115843

WO 2004/058258

WO 96/13590

WO 96/29605

美國專利申請案第2002/0038086號

美國專利申請案第2003/0083299號

美國專利申請案第2002/0025313號

美國專利申請案第2004/0204354號

美國專利申請案第2004/0131692號

美國專利申請案第2002/0065259號

美國專利申請案第2003/0162695號

美國專利申請案第2005/0124533號

美國專利申請案第2005/0089473號

美國專利申請案第2003/0073713號

美國專利申請案第2003/0129186號

美國專利第5,112,596號

美國專利第5,268,164號

美國專利第5,506,206號

美國專利第5,686,416號

美國專利第5,004,697號

<110> 瑞士商AC免疫公司比利時魯汶大學美商建南德克公司

<120> 抗體

<140> TW 102122202

<141> 2013-04-05

<150> US 61/620,880

<151> 2012-04-05

<160> 57

<170> PatentIn version 3.4

<210> 1

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之HCVR CDR1

<400> 1

<210> 2

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之HCVR CDR2

<400> 2

<210> 3

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之HCVR CDR3

<400> 3

<210> 4

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1之LCVR CDR1

<400> 4

<210> 5

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之LCVR CDR2

<400> 5

<210> 6

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之LCVR CDR3

<400> 6

<210> 7

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之HCVR

<400> 7

<210> 8

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1之LCVR

<400> 8

<210> 9

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1之LCVR

<400> 9

<210> 10

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1之LCVR CDR1

<400> 10

<210> 11

<211> 2850

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及 hACI-36-2B6-Ab1之重鏈(H)

<400> 11

<210> 12

<211> 2067

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1之輕鏈(L)

<400> 12

<210> 13

<211> 2067

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1之輕鏈(L)

<400> 13

<210> 14

<211> 98

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1 之重鏈恒定區(HC)CH1

<400> 14

<210> 15

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1 之重鏈恒定區(HC)鉸鏈

<400> 15

<210> 16

<211> 110

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1 之重鏈恒定區(HC)CH2

<400> 16

<210> 17

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1 之重鏈恒定區(HC)CH3

<400> 17

<210> 18

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1及hACI-36-2B6-Ab1 之輕鏈恒定區(LC)

<400> 18

<210> 19

<211> 441

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<223> 人類Tau之最長同型異構體(441aa)，亦稱為Tau40

<400> 19

<210> 20

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1.v2之重鏈可變區 (HCVR)之經修飾胺基酸序列

<400> 20

<210> 21

<211> 115

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1.v2之重鏈可變區 (HCVR)之經修飾胺基酸序列

<400> 21

<210> 22

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1(IgG4)、hACI-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)、 hACI-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)、hACI-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G) 之輕鏈之全長胺基酸序列

<400> 22

<210> 23

<211> 219

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1(IgG4)、hACI-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)、 hACI-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)、hACI-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G) 之輕鏈之全長胺基酸序列

<400> 23

<210> 24

<211> 441

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1(IgG4)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 24

<210> 25

<211> 441

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1(IgG4)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 25

<210> 26

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 26

<210> 27

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 27

<210> 28

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 28

<210> 29

<211> 442

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 29

<210> 30

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 30

<210> 31

<211> 445

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 抗體hACI-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)之重鏈之全長胺基酸序列

<400> 31

<210> 32

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 肽T4.5

<400> 32

<210> 33

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Tau(441)之序列(胺基酸編號401至408)

<400> 33

<210> 34

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 34

<210> 35

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 35

<210> 36

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 36

<210> 37

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 37

<210> 38

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 38

<210> 39

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 39

<210> 40

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 40

<210> 41

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 41

<210> 42

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 42

<210> 43

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 43

<210> 44

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 用於抗體表位圖譜分析之Tau文庫之肽

<400> 44

<210> 45

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 45

<210> 46

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 46

<210> 47

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 47

<210> 48

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 48

<210> 49

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 49

<210> 50

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 50

<210> 51

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 51

<210> 52

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 52

<210> 53

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 53

<210> 54

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 54

<210> 55

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 55

<210> 56

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 56

<210> 57

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> Ala-掃描文庫之肽

<400> 57

Claims

一種嵌合抗體或其功能片段、或人類化抗體或其功能片段，該抗體識別並特異性結合至如SEQ ID NO：19中顯示之人類Tau蛋白上或其片段上之磷酸化表位，但不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位，其中該表位包含Tau aa 404至411且需要位置409Ser磷酸化(pS409)。
如請求項1之嵌合或人類化抗體或其功能片段，其優先結合至Tau胺基酸殘基H407、pS409、N410及V411。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%一致之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少81%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2或與其至少71%、至少75%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少82%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少50%、至少68%、至少70%、至少80%，尤其至少85%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少85%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2或與其至少75%一致之胺基酸序列、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少20%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1或與其至少85%一致之胺基酸序列、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少70%一致之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少90%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少90%一致之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少95%一致之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4或SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3或與其至少95%一致之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3；及/或第二結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：4中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其包含第一結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：1中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：2中所顯示胺基酸序列之CDR2、及具有SEQ ID NO：3中所顯示胺基酸序列之CDR3；及/或第二結合結構域，其含有依次整合至來源於人類或靈長類之框架區中之具有SEQ ID NO：10中所顯示胺基酸序列之CDR1、具有SEQ ID NO：5中所顯示胺基酸序列之CDR2及具有SEQ ID NO：6中所顯示胺基酸序列之CDR3。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其中該抗體或抗體片段包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%，尤其至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%，尤其至少90%、至少91%、至少 92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：8中所顯示序列具有至少89%，尤其至少90%，尤其至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%，尤其至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%，尤其至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：9中所顯示序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%，尤其至少95%，尤其至少96%，尤其至少97%，尤其至少98%，尤其至少99%或100%一致性之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其中該抗體或抗體片段包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：8中所顯示序列具有至少89%一致性之胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示序列具有至少84%一致性之胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有與SEQ ID NO：9中所顯示序列具有至少90%一致性之胺基酸序列。
如請求項1或2之人類化抗體或其功能片段，其中該抗體或抗體片段包含a.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：8中所顯示胺基酸序列；或b.第一結合結構域，尤其重鏈可變區(HCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21中所顯示胺基酸序列；及/或第二結合結構域，尤其輕鏈可變區(LCVR)之結合結構域，其含有SEQ ID NO：9中所顯示胺基酸序列。
如前述請求項中任一項之人類化抗體或其功能片段，其中該抗體或抗體片段包含重鏈恆定區及輕鏈恆定區，尤其如SEQ ID NO：14至17中顯示之重鏈恆定區及如SEQ ID NO：18中顯示之輕鏈恆定區。
如請求項13之人類化抗體或其功能片段，其包含在鉸鏈區中具有突變，尤其在鉸鏈區中具有防止Fab臂交換且由此產生雙特異性抗體之突變的重鏈恆定區。
如請求項14之人類化抗體或其功能片段，其中該重鏈鉸鏈區包含在位置228Ser交換成為Pro(S228P)。
如前述請求項中任一項之人類化抗體或其功能片段，其包含在 C-端處具有突變之重鏈恆定區。
如請求項16之人類化抗體或其功能片段，其中該重鏈包含C-端離胺酸之缺失(des-K)。
如前述請求項中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段，其中該抗體具有IgG1、IgG1 N297G、IgG2、IgG3或IgG4同種型。
如前述請求項中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段，其中該抗體或片段之K_D介於0.1nM與80nM之間，尤其介於0.1nM與70nM之間，尤其介於0.1nM與67nM之間。
一種聚核苷酸，其編碼如前述請求項中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段。
如請求項20之聚核苷酸，其包含選自由下列組成之群之核酸分子：a.包含如SEQ ID NO：11中所示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：12中所示之核苷酸序列的核酸分子；或b.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少85%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或c.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少90%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或d.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少95%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少95%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或e.包含與SEQ ID NO：11中所顯示序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列及/或與SEQ ID NO：12中所顯示序列具有至少98%序列一致性之核苷酸序列的核酸分子；或； f.包含其互補股與a)至e)中任一者之核酸分子雜交之核苷酸序列的核酸分子；g.包含因遺傳密碼簡併而偏離a)至f)中任一者中所定義之核苷酸序列之核苷酸序列的核酸分子。
如請求項20或21之聚核苷酸，其包含含有如SEQ ID NO：11中顯示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：12中顯示之核苷酸序列的核酸分子。
如請求項20或21之聚核苷酸，其包含含有如SEQ ID NO：11中顯示之核苷酸序列及/或如SEQ ID NO：13中顯示之核苷酸序列的核酸分子。
如請求項20之聚核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區的核苷酸序列。
如請求項20或21之聚核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO：8之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區的核苷酸序列。
如請求項20或21之聚核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO：9之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區的核苷酸序列。
如請求項20之聚核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區及SEQ ID NO：8之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區的核苷酸序列。
如請求項20之聚核苷酸，其包含編碼SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：20或SEQ ID NO：21之重鏈可變區(HCVR)及SEQ ID NO：14至17之重鏈恆定區及SEQ ID NO：9之輕鏈可變區(LCVR)及SEQ ID NO：18之輕鏈恆定區的核苷酸序列。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段，該抗體或片段特異性識別並結合至人類Tau蛋白上之磷酸化表位，該人類Tau蛋白係聚集之微管相關且過度磷酸化之tau蛋白，例如以成對螺旋絲狀體(paired helical filament,PHF)存在者；但不結合至相應未磷酸化表位及/或非相關表位。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段，其用於檢測神經纖維纏結、神經纖維串連(neuropil thread)及失養性軸突。
一種醫藥組合物，其包含如請求項1至19、29或30中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段，與醫藥上可接受之載劑或賦形劑。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於哺乳動物或人類中，在可溶性tau蛋白及/或可溶性磷酸化tau蛋白含量增加之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中，降低總可溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白之含量。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於哺乳動物或人類中，在含有過度磷酸化tau蛋白之成對螺旋絲狀體(pTau PHF)含量增加之腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中，降低該等pTau成對螺旋絲狀體(pTau PHF)含量。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於療法。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於改善或緩解與tau-蛋白相關疾病、病症或病況相關之症狀，例如，包括推理、情境判斷、記憶能力、學習、空間導航在內之認知功能損害或喪失。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於預防或治療tau病變、tau-蛋白相關疾病及病症之群，或用於緩解與tau病變相關之症狀。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於保持或增加患有tau病變之哺乳動物之認知記憶能力。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於預防或治療由神經纖維病灶之形成引起或與其相關之疾病及病症。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於預防或治療神經退化性疾病或病症。
如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段或如請求項31之組合物，其用於預防或治療阿茲海默氏症(Alzheimer’s Disease)、庫賈氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳擊手型癡呆、唐氏症候群(Down Syndrome)、傑茨曼-斯脫司勒-史茵克氏病(Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease)、包涵體肌炎及朊病毒蛋白大腦類澱粉蛋白血管病、外傷性腦損傷，且進一步用於預防或治療不顯示獨特類澱粉病理學之疾病或病症，包括(但不限於)關島型肌肉萎縮性脊髓側索硬化症/帕金森氏病-癡呆複合症(amyotrophic lateral sclerosis/parkinsonism-dementia complex of Guam)、非關島型運動神經元病(Non-Guamanian motor neuron disease)伴隨神經纖維纏結、嗜銀顆粒性癡呆(argyrophilic grain dementia)、皮質基底核退化(corticobasal degeneration)、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、因第17對染色體異常導致的額顳葉癡呆伴隨帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病 (Hallevorden-Spatz disease)、多系統萎縮、C型尼曼-匹克二氏病(Niemann-Pick disease)、蒼白球腦橋黑質退化(Pallido-ponto-nigral degeneration)、匹克症(Pick’s disease)、進行性皮質下膠質增生、進行性核上麻痺、亞急性硬化性泛腦炎、單純纏結型癡呆(Tangle only dementia)、腦炎後帕金森氏病、肌強直性營養不良(Myotonic dystrophy)。
一種調節哺乳動物或人類尤其腦中，尤其腦皮質及/或海馬迴中可溶性及/或不溶性Tau含量之方法，其包括為該哺乳動物或人類投與如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段、或如請求項20至28中任一項之聚核苷酸、或如請求項31之醫藥組合物、或其組合。
一種減慢或終止哺乳動物或人類之tau-蛋白相關疾病、病症或病況之進程之方法，其包括為患有該疾病或病況之該哺乳動物或人類投與如請求項11至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段、或如請求項20至28中任一項之聚核苷酸、或如請求項31之醫藥組合物、或其組合。
一種改善或緩解哺乳動物或人類之與tau-蛋白相關疾病、病症或病況相關之症狀之方法，該等症狀係例如包括推理、情境判斷、記憶能力、學習、空間導航等認知功能損害或喪失，該方法包括為患有該疾病或病況之該哺乳動物或人類投與如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段、或如請求項20至28中任一項之聚核苷酸、或如請求項31之醫藥組合物、或其組合。
一種診斷患者之tau-蛋白相關疾病、病症或病況之方法，其包括在樣品中或原位檢測如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段與該tau蛋白之表位之免疫特異性結合，其包括以下步驟：a.使該樣品或懷疑含有tau蛋白之特定身體部分或身體區域與如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體或與其功能片段接觸，其中該抗體或其片段會結合該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau蛋白結合形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau蛋白之存在或不存在之相關性。
一種診斷患者tau-蛋白相關疾病、病症或病況之傾向之方法，其包括在樣品中或原位檢測如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段與該tau蛋白之表位之免疫特異性結合，其包括以下步驟：a.使該樣品或懷疑含有tau抗原之特定身體部分或身體區域與如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段接觸，該抗體或其片段會結合該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau抗原結合形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau抗原之存在或不存在之相關性；e.比較該免疫複合物之量與正常對照值；其中該聚集體之量比正常對照值增加時表示該患者患有tau-蛋白相關疾病或病況或具有發生風險。
一種在接受如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段治療後監測患者之最小殘留疾病(minimal residual disease)之方法，其中該方法包含：a.使該樣品或懷疑含有tau抗原之特定身體部分或身體區域與如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段接觸，該抗體或其片段會結合至該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau抗原結合形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau抗原之存在或不存在之相關性，e.比較該免疫複合物之量與正常對照值，其中該聚集體之量比正常對照值增加時表示該患者仍患有最小殘留疾病。
一種預測接受如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段治療之患者之反應性之方法，其包含a.使該樣品或懷疑含有tau抗原之特定身體部分或身體區域與如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體、或其功能片段接觸，該抗體或其片段會結合至該tau蛋白之表位；b.使該抗體或其功能片段與該tau抗原結合形成免疫複合物；c.檢測該免疫複合物之形成；及d.取得該免疫複合物之存在或不存在與該樣品或特定身體部分或區域中tau抗原之存在或不存在之相關性，e.比較該治療開始之前及之後該免疫複合物之量，其中該聚集體之量減少時表示該患者對該治療具有高度反應可能性。
一種用於檢測及診斷tau-蛋白相關疾病、病症或病況之測試套組，其包含如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段。
一種載體，其包含如請求項20至28中任一項之聚核苷酸，其中該聚核苷酸係以操作方式連接。
一種宿主細胞，其包含如請求項49之載體。
如請求項50之宿主細胞，其產生如請求項1至19中任一項之嵌合或人類化抗體或其功能片段。
如請求項50或51之宿主細胞，其係哺乳動物細胞。
如請求項50或51之宿主細胞，其係中國倉鼠卵巢細胞(Chinese Hamster Ovary cell)。
如請求項51之宿主細胞，其係2012年3月6日以DSM 25743寄存之大腸桿菌(Escherichia coli)2B6A10C11-H。
如請求項51之宿主細胞，其係2012年3月6日以DSM 25744寄存之大腸桿菌2B6A10C11-L。
如請求項51之宿主細胞，其係2012年3月6日以DSM 25745寄存之大腸桿菌3A8A12G7-H。
如請求項51之宿主細胞，其係2012年3月6日以DSM 25746寄存之大腸桿菌3A8A12G7-L。
一種產生如前述請求項中任一項之人類化抗體或其功能片段之方法，其包括在適於該抗體或片段表現之條件下培養如請求項50至57之宿主細胞，及回收該抗體或片段。
如請求項1至15及18中任一項之人類化抗體或其功能片段，其包含重鏈恆定區，其中該重鏈恆定區在其C-端處包含離胺酸。
如請求項1至12中任一項之人類化抗體或其功能片段，其包含重鏈，其中該重鏈包含SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、 SEQ ID NO：30或SEQ ID NO：31之胺基酸序列。
如請求項60之人類化抗體或其功能片段，其進一步包含輕鏈恆定區，其中該輕鏈恆定區包含SEQ ID NO：18之胺基酸序列。
如請求項1至12或60中任一項之人類化抗體或其功能片段，其進一步包含輕鏈，其中該輕鏈包含SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：23之胺基酸序列。