CN104520322A

CN104520322A - 人源化tau抗体

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Publication number: CN104520322A
Application number: CN201380029178.2A
Authority: CN
Inventors: A·普法伊费尔; A·穆斯; M·皮尔格伦; O·阿道夫松; F·V·勒文; G·阿亚隆; D·M·迪卡拉; I·霍策尔
Original assignee: Katholieke Universiteit Leuven; AC Immune SA; Genentech Inc
Current assignee: Katholieke Universiteit Leuven; AC Immune SA; Genentech Inc
Priority date: 2012-04-05
Filing date: 2013-03-15
Publication date: 2015-04-15
Anticipated expiration: 2033-03-15
Also published as: MX2014011958A; CA2869438C; WO2013151762A1; CN104520322B; KR102132041B1; RU2644242C2; IL234942A0; AR092818A1; KR20150003274A; SG11201406347TA; US9657091B2; US20150175682A1; BR112014024769A2; JP6293731B2; TW201400505A; RU2014144331A; EP2834270B1; HK1209137A1; AU2013243861A1; MX356800B

Abstract

本发明提供在处理由神经纤维缠结引起或与其相关的疾病和病症时用于治疗和诊断用途的方法和组合物。具体来说，本发明涉及特异性识别并结合至磷酸化病理tau蛋白-构象异构物的人源化抗体，和涉及所述抗体的方法和组合物，其等供在处理包括阿兹海默氏症(AD)在内的tau病变时用于治疗和诊断用途。

Description

人源化TAU抗体

发明领域

本发明涉及在由神经纤维缠结引起或与其相关的疾病及病症的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物。具体来说，本发明涉及特异性识别并结合至磷酸化病理tau蛋白-构象异构物的人源化抗体以及涉及所述抗体的在tau病变(包括阿兹海默氏症(AD))的治疗中用于治疗和诊断用途的方法和组合物。

发明背景

神经纤维缠结和神经纤维串连(neuropil thread，NT)为阿兹海默氏症(AD)的主要神经病理学标志。其由在天冬酰胺酰基或天冬胺酰基残基上历经翻译后修饰(包括磷酸化、脱酰胺以及异构化)的微管相关tau蛋白组成。其起源于过度磷酸化tau蛋白和其构象异构物的聚集。AD与许多神经退化性tau病变，尤其与特定类型的额颞叶痴呆(FTD)共享此病理学。

Tau蛋白为易溶“天然非折叠”蛋白，其极易结合至微管(MT)以促进其组装和稳定性。MT对于神经元的细胞支架完整性并且因而对于神经元回路的适当形成和运行、因此对于学习和记忆十分重要。tau与MT的结合受动态磷酸化和脱磷酸化控制，如主要在体外和在非神经元细胞中所证实。由于可能磷酸化位点的数量较大(>80个)，故在体内每一个位点的确切贡献和负责激酶的身份仍在很大程度上不明确。

在AD脑中，tau病理学的发展晚于类淀粉蛋白病理学并且因此大概对类淀粉蛋白病理学作出应答，这构成类淀粉蛋白级联假说的本质。此是基于并且由在AD综合征和唐氏综合征(Down syndrome)患者中的研究指示，且通过在基因转殖小鼠中的研究利用组合的类淀粉蛋白病理学与tau病理学来印证(Lewis等,2001；Oddo等,2004；Ribe等,2005；Muyllaert等,2006；2008；Terwel等,2008)。

两种病理学在人AD患者中的确切时机以及类淀粉蛋白与tau病理学的联系机制仍在很大程度上未知，但已提出涉及发挥作用的神经元信号传导路径的活化或GSK3和cdk5作为主要“tau-激酶”(由Muyllaert等所综述，2006,2008)。

tau病变在AD中并非无害副作用而是主要病理执行者的假说是基于相互充分印证的可靠遗传、病理学以及实验观察：

·在由类淀粉蛋白蛋白前体(APP)或早老素突变引起的早发型家族性AD病例中，必然致病原因是类淀粉蛋白累积，但病理学总是包含附带tau病变，这与在晚发型偶发性AD病例中相同；

·最近，如果干临床1期和2期研究例示认知功能障碍和痴呆的严重性与tau病变相关，与类淀粉蛋白病理学无关，所述研究包括类淀粉蛋白的PIB-PET成像并鉴别许多“伪阳性”：具有高脑类淀粉蛋白负荷的认知正常个体；

·在家族性FTD中，tau病变是由tau突变体引发并直接引起神经退化而无类淀粉蛋白病理学；

·在实验小鼠模型中，由类淀粉蛋白病理学引起的认知缺陷在不存在tau蛋白时几乎完全缓解(Roberson等,2007)。

合并的论据支持在AD和相关神经退化性tau病变中tau蛋白是认知终止的主要参与者的假说。

突出的新兴AD治疗是通过被动免疫疗法利用特异性mAb来清除被推测具有神经毒性或突触毒性的类淀粉蛋白肽和其聚集体。

如此处所提出，预计靶向tau病理学的免疫疗法抵制已知或推定引起突触功能障碍和神经退化的病理tau蛋白-构象异构物。提出所引起的类淀粉蛋白病理学与过度磷酸化tau蛋白的神经元内聚集体在导致AD的轻度认知损害(MCI)至重度痴呆的病理事件的认知级联和退化级联中以协同方式作用。因此，与目前单一疗法相反，针对tau的药疗法与针对类淀粉蛋白(或其它任一者)的药疗法的组合将构成优选并且实质上更有效的AD治疗。

靶向tau蛋白的其它治疗方法稀少并且主要包含：

·认为使tau的磷酸化增加至病理水平的激酶的抑制剂

·封闭过度磷酸化tau蛋白的细胞质聚集的化合物。

这些方法具有多个特异性和疗效缺点，其共同问题是在试图改变APP和类淀粉蛋白的代谢时全部突出连续研究对额外治疗选项(包括针对tau的免疫疗法)的重要性。

实际上，尚未致力于在体内定义病理学tau构象异构物，更不必说靶向。在Aβ42II期临床试验中，似乎未充分考虑缠结病理学并且也未进行更深入分析(Nicoll等,2003；Masliah等,2005)。另一方面，在具有组合AD样病理学的临床前小鼠模型中靶向类淀粉蛋白的实验免疫疗法还展示对tau病理学的影响，但tau聚集体持续存留(Oddo等,2004)。

有人对于通过免疫疗法处置细胞内tau蛋白的可行性存有一些疑问。在tau病变小鼠模型中的最近实验研究消除了这些疑问(Asuni等,2007)。其显示使用来源于tau蛋白的磷酸化肽进行疫苗接种可达成缠结病理学降低和功能改善。这些数据印证了在帕金森氏病(Parkinson’sDisease，PD)和路易氏体病(Lewy body disease)模型中靶向α-突触核蛋白的免疫疗法(Masliah等,2005,2011)以及在肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症(ALS)模型中靶向超氧化物歧化酶(Urushitiani等,2007)的免疫疗法的先前报道。这些疾病是细胞内蛋白导致突触缺陷和神经退化的实例，迄今尚未完全了解其机制。另一方面，在细菌中产生并分离得到的全长重组tau蛋白似乎不适宜作为疫苗，但所用佐剂(即弗氏完全佐剂(complete Freunds)和百日咳毒素)会造成所述研究的阴性结果(Rosenmann等,2006)。

已使用需要Ser-409磷酸化(pS409)的Tau表位作为早期出现于AD中的Tau磷酸化位点的标记物(Jicha等,1999)。这种磷酸化具有蛋白激酶A(PKA)依赖性，并且在早期AD病例中在受影响神经元中先于或同步于神经纤维病理学的成对螺旋丝状体(paired helicalfilament，PHF)形成的初期和最终扩散。在机理研究中，还显示pS409是Tau寡聚(涉及PHF和神经纤维缠结组装的过程)的直接决定因素(Vanhelmont等,2010；Alonso等,2008)。此外，pS409降低Tau与微管(MT)结合的能力，即便不为Tau的MT-结合结构域的一部分，从而表明S409磷酸化还不利于Tau-微管相互作用(Vandebroek等,2006)。已显示包含抗原肽Tau 401至418[pS404/pS409]的脂质体疫苗在野生型C57BL/6小鼠中和在Tau-缺乏小鼠中诱导特异性IgG抗体(WO2010/115843)。

在人中使用啮齿类动物抗体的长期疗法将产生抗球蛋白免疫反应，这可在施用后约8天至12天时检测到并在约20天至30天时达到峰值。如果遭遇所述抗球蛋白反应，则必须在不超过约10天后中断治疗并阻止以后进行重复治疗，因为其将导致重新且更快速的二级抗球蛋白反应发作。尽管啮齿类动物抗体与人抗体共享很大程度的序列保守性，但在啮齿类动物抗体与人抗体之间存在许多序列差异，其足以使得啮齿类动物抗体在人中具有免疫原性。

可通过直接在人中产生抗体或通过生成“人”、“人源化”(还称“改形”抗体(reshaped antibody))或“人工程化(humaneered)”抗体来克服这一问题。人源化抗体具有可变区氨基酸序列，其含有拼接至人或人样框架序列中的来源于啮齿类动物的CDR。由于人源化抗体的特异性是由来源于啮齿类动物的CDR提供，故其残基使用基本上未变并且仅进行可允许的较小修饰，从而不会显著干扰所述抗体对其靶标抗原的亲和力和特异性。框架残基可来源于任一灵长类或尤其任一人可变区或可为其组合且所得经设计可变区将视为改形。

为最大化在改形抗体中保持亲和力的可能性，适当选择框架区甚为重要。已知框架序列用于将CDR固定在其正确空间定向以便与抗原相互作用，并且框架残基有时甚至会参与抗原结合。为维持抗体对其抗原的亲和力，选择与啮齿类动物框架的序列最类似的人框架序列是有利的。然后仍可能需要用啮齿类动物框架中的相应残基替代人框架序列中的一个或多个氨基酸以避免亲和力损失。可通过计算机建模来帮助此替代。

人患者对被动和/或主动免疫疗法的需要长期未得到满足，所述免疫疗法起作用以抵制已知或推定引起神经退化性病症的病理蛋白构象异构物，如AD中类淀粉蛋白肽和其聚集体以及对于AD与类淀粉蛋白一样典型的过度磷酸化tau蛋白的神经元内聚集体。

发明概述

此未满足的需要在本发明的范围内得以满足，本发明提供新颖方法和组合物，所述组合物包含高度特异性且高度有效的抗体，尤其嵌合抗体(包括其片段)、更具体来说能够特异性识别并结合至tau蛋白的特异性主要病理磷酸化表位的部分地或完全人源化抗体(包括其片段)。具体来说，本发明针对tau蛋白上，尤其聚集tau蛋白上认为在tau病变(包括AD)中造成突触毒性和神经毒性的线性和构象、简单和复杂磷酸化表位提供特异性抗体。

在一个实施方案中，本发明涉及识别并结合至Tau蛋白上至少一个不同结合位点的抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合抗体或其片段、或人源化抗体或其片段。

如不同实施方案中所述的本发明抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合或人源化抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其聚集Tau蛋白上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述抗体对可溶性和不溶性Tau蛋白具有高结合亲和力，并调节尤其脑中可溶性和不溶性Tau含量，并且尤其具有

(a)至少100nM，尤其至少80nM，尤其至少70nM，尤其至少50nM，尤其至少10nM，尤其至少8nM，尤其至少5nM，尤其至少2nM，尤其至少1nM，尤其至少500pM，尤其至少400pM，尤其至少300pM，尤其至少200pM，尤其至少100pM，尤其至少50pM的解离常数和/或

(b)10⁴M^-1s^-1或更大，尤其介于3×10⁴M^-1s^-1至5×10⁴M^-1s^-1之间或更大，尤其10⁵M^-1s^-1或更大；尤其0.5×10⁵M^-1s^-1至9×10⁵M^-1s^-1或更大；尤其10⁶M^-1s^-1或更大，尤其1×10⁶M^-1s^-1至4×10⁶M^-1s^-1或更大，尤其10⁷M^-1s^-1或更大的缔合速率常数。

在某些实施方案中，本发明涉及如不同实施方案中所述的本发明抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合或人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述抗体具有高结合亲和力以及至少100nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少80nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少70nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少10nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少200pM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少100pM的解离常数和10⁶M^-1s^-1或更大的缔合速率常数。

在本发明的不同实施方案中，如不同实施方案中所述的本发明抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合或人源化抗体特异性识别并结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白，尤其微管相关tau蛋白，尤其聚集微管相关且过度磷酸化的tau蛋白(例如存于成对螺旋丝状体(PHF)中者，PHF是神经纤维缠结、神经纤维串连以及失养性轴突中的主要结构)上的磷酸化表位，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位。

在本发明的特定实施方案中，人tau蛋白是如SEQ ID NO:19中显示的人Tau蛋白。

在一个实施方案中，本发明提供抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其如SEQ ID NO:19中显示的人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述表位包含如SEQ ID NO:19中显示的人Tau蛋白的氨基酸残基aa404至411且需要位置409丝氨酸磷酸化(pS409)。

在特定实施方案中，本发明提供抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的抗体，所述抗体优先识别并结合至一些或所有选自由H407、pS409、N410以及V411组成的组的Tau氨基酸残基、但尤其pS409。

在另一特定实施方案中，所述抗体或片段还识别并结合至pS404残基，即便在较小程度上。具体来说，对pS404残基的结合总计为对pS409残基的结合的约10％，尤其约20％，尤其约30％。

在一个实施方案中，本发明提供抗体，尤其单克隆抗体，尤其嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其如SEQ ID NO:19中显示的人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述表位包含如SEQ ID NO:19中显示的人Tau蛋白的氨基酸残基aa405至411(包含磷酸化的位置409的丝氨酸(Ser)(pS409))，并且其中所述抗体或其功能片段优先识别并结合至一些或所有选自由H407、pS409、N410及V411组成的组的Tau氨基酸残基、但尤其pS409。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列以及CDR3，其具有SEQ IDNO:3中所显示氨基酸序列，或与其至少50％、至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列，或与其至少50％、至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列。

本发明的一个实施方案涉及嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列或与其至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列或与其至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列或与其至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列或与其至少81％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列或与其至少71％、至少75％、至少8％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ IDNO:10中所显示氨基酸序列或与其至少82％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少50％、至少68％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列或与其至少85％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列或与其至少75％一致的氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少20％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列或与其至少85％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少70％一致的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少90％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2其具有SEQ IDNO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少90％一致的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少95％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ IDNO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少95％一致的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少98％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ IDNO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ IDNO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少98％一致的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列。本发明进一步涉及嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其片段，其包含整合至来源于人或灵长类的框架区中的至少2个肽，尤其至少3个肽，尤其至少4个肽，尤其至少5个肽，尤其6个肽，所述肽不同且展示选自由下列组成的序列组的氨基酸序列：代表重链可变区(HCVR)的CDR1的SEQ IDNO:1、代表重链可变区(HCVR)的CDR2的SEQ ID NO:2以及代表重链可变区(HCVR)的CDR3的SEQ ID NO:3，和代表轻链可变区(LCVR)的CDR1的SEQ ID NO:4、代表轻链可变区(LCVR)的CDR2的SEQ ID NO:5以及代表轻链可变区(LCVR)的CDR3的SEQ ID NO:6，其中相同CDR不能在所述抗体中出现两次。

本发明进一步涉及嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其片段，其包含整合至来源于人或灵长类的框架区中的至少2个肽，尤其至少3个肽，尤其至少4个肽，尤其至少5个肽，尤其6个肽，所述肽不同且展示选自由下列组成的序列组的氨基酸序列：代表重链可变区(HCVR)的CDR1的SEQ ID NO:1、代表代表重链可变区(HCVR)的CDR2的SEQ ID NO:2以及代表代表重链可变区(HCVR)的CDR3的SEQ ID NO:3，和代表轻链可变区(LCVR)的CDR1的SEQ ID NO:10、代表轻链可变区(LCVR)的CDR2的SEQ ID NO:5以及代表轻链可变区(LCVR)的CDR3的SEQ ID NO:6，其中相同CDR不能在所述抗体中出现两次。

在特定实施方案中，本发明涉及嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其片段，其包含整合至来源于人或灵长类的框架区中的具有以下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)的CDR1的SEQ IDNO:1、代表重链可变区(HCVR)的CDR2的SEQ ID NO:2以及代表重链可变区(HCVR)的CDR3的SEQ ID NO:3，和代表轻链可变区(LCVR)的CDR1的SEQ ID NO:4、代表轻链可变区(LCVR)的CDR2的SEQ ID NO:5以及代表轻链可变区(LCVR)的CDR3的SEQ ID NO:6。

在特定实施方案中，本发明涉及嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其片段，其包含整合至来源于人或灵长类的框架区中的具有以下氨基酸序列的肽：代表重链可变区(HCVR)的CDR1的SEQ IDNO:1、代表重链可变区(HCVR)的CDR2的SEQ ID NO:2以及代表重链可变区(HCVR)的CDR3的SEQ ID NO:3，和代表轻链可变区(LCVR)的CDR1的SEQ ID NO:10、代表轻链可变区(LCVR)的CDR2的SEQ ID NO 5以及代表轻链可变区(LCVR)的CDR3的SEQ ID NO:6。在一个实施方案中，本发明提供人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述抗体或抗体片段包含

a.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少84％，尤其至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:8中所显示序列具有至少89％，尤其至少90％，尤其至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致性的氨基酸序列；或

b.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少84％，尤其至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:9中所显示序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致性的氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合抗体包含

a.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少84％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:8中所显示序列具有至少89％一致性的氨基酸序列；或

b.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少84％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:9中所显示序列具有至少90％一致性的氨基酸序列。

a.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少90％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:8中所显示序列具有至少90％一致性的氨基酸序列；或

b.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少90％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:9中所显示序列具有至少90％一致性的氨基酸序列。

a.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少95％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:8中所显示序列具有至少95％一致性的氨基酸序列；或

b.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示序列具有至少95％一致性的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有与SEQ ID NO:9中所显示序列具有至少95％一致性的氨基酸序列。

a.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有SEQ ID NO:8中所显示的氨基酸序列；或

b.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有SEQ ID NO:9中所显示氨基酸序列。

在一个实施方案中，本发明提供人源化抗体或其功能片段，尤其人源化单克隆抗体或其功能片段，尤其任一先前实施方案的人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，所述抗体进一步包含重链恒定区及轻链恒定区，尤其如SEQ ID NO:14至17中显示的重链恒定区及如SEQ ID NO:18中显示的轻链恒定区。

在一个实施方案中，任一先前实施方案的所述人源化抗体或其功能片段包含在铰链区中具有突变，尤其在铰链区中具有防止Fab臂交换且由此产生双特异性抗体的突变的重链恒定区。在特定实施方案中，重链铰链区包含在位置228的Ser交换成为Pro(S228P)。

在一个实施方案中，任一先前实施方案的所述人源化抗体或其功能片段包含在C-端处具有修饰(例如，缺失或突变)的重链恒定区。在特定实施方案中，重链包含C-端赖氨酸的缺失(des-K)。恒定区的Fc区的此C-端赖氨酸(残基447，根据EU编号系统)可(例如)在抗体纯化期间或通过编码抗体的核酸的重组工程去除。此突变防止抗体产生细胞(例如，CHO细胞)对C-端赖氨酸的任意酶促裂解。

在另一个实施方案中，任一先前实施方案的所述人源化抗体或其功能片段包含在C-端处无修饰(例如，缺失或突变)的重链恒定区。在特定实施方案中，重链恒定区包含C-端赖氨酸(重链恒定区C-端的赖氨酸)。因此，本发明抗体可包含去除K447或所有K447的抗体或具有和没有K447残基的抗体的混合物。

在本发明的一个实施方案中，任一先前实施方案的结合肽是抗体，尤其-IgG1、IgG2、IgG3或IgG4同种型的抗体，尤其多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。在本发明的一个实施方案中，任一先前实施方案的结合肽是抗体，尤其IgG1 N297G同种型的抗体，在所述抗体Fc区中在297位(EU编号系统)具有天冬酰胺酸至甘氨酸取代，尤其多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或全人抗体。

本发明的一个实施方案涉及编码任一先前实施方案的结合肽的多核苷酸。

在一个实施方案中，所述多核苷酸包含核酸分子，其包含编码抗体可变区的核苷酸序列，所述抗体可变区包含代表重链可变区(HCVR)的互补决定区(CDR)1、2以及3的SEQ ID NO:1至3。

在另一个实施方案中，所述多核苷酸包含核酸分子，其包含编码抗体可变区的核苷酸序列，所述抗体可变区包含代表轻链可变区(LCVR)的互补决定区(CDR)1、2以及3的SEQ ID NO:4至6。

在另一个实施方案中，所述多核苷酸包含核酸分子，其包含编码抗体可变区的核苷酸序列，所述抗体可变区包含代表轻链可变区(LCVR)的互补决定区(CDR)1、2以及3的SEQ ID NO:10、5以及6。

在一个实施方案中，本发明涉及包含选自由下列组成的组的核酸分子的多核苷酸：

a.包含如SEQ ID NO:11中所示的核苷酸序列和/或如SEQ IDNO:12中所示的核苷酸序列的核酸分子；或

b.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少85％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:12中所显示序列具有至少85％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

c.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:12中所显示序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

d.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少95％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:12中所显示序列具有至少95％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

e.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少98％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:12中所显示序列具有至少98％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或；

f.包含互补股与a)至e)中任一者的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

g.包含因遗传密码简并而偏离a)至f)中任一者中所定义的核苷酸序列的核苷酸序列的核酸分子。

a.包含如SEQ ID NO:11中所示的核苷酸序列和/或如SEQ IDNO:13中所示的核苷酸序列的核酸分子；或

b.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少85％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:13中所显示序列具有至少85％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

c.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:13中所显示序列具有至少90％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

d.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少95％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:13中所显示序列具有至少95％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

e.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少98％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:13中所显示序列具有至少98％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或；

在一个实施方案中，本发明涉及包含含有如SEQ ID NO:11中显示的核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:12中显示的核苷酸序列的核酸分子的多核苷酸。

在一个实施方案中，本发明涉及包含含有如SEQ ID NO:11中显示的核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:13中显示的核苷酸序列的核酸分子的多核苷酸。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:7的重链可变区(HCVR)以及SEQ ID NO:14至17的重链恒定区。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的重链可变区(HCVR)。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的重链可变区(HCVR)以及SEQ ID NO:14至17的重链恒定区。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31的重链。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:8的轻链可变区(LCVR)以及SEQ ID NO:18的轻链恒定区。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:9的轻链可变区(LCVR)以及SEQ ID NO:18的轻链恒定区。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的轻链。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31的重链以及SEQ IDNO:22或SEQ ID NO:23的轻链。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:7的重链可变区(HCVR)和SEQ ID NO:14至17的重链恒定区，以及SEQ ID NO:8的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:7的重链可变区(HCVR)和SEQ ID NO:14至17的重链恒定区以及SEQID NO:9的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区。

本发明进一步提供人源化抗体或其片段，其包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的重链可变区(HCVR)和SEQ ID NO:14至17的重链恒定区以及SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:9的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区。

在一个实施方案中，本发明涉及编码任一先前实施方案的人源化抗体的多核苷酸。

如不同实施方案中所述的本发明嵌合或人源化抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其聚集Tau蛋白上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述抗体对可溶性和不溶性Tau蛋白具有高结合亲和力，并调节尤其脑中可溶性和不溶性Tau含量，并且尤其具有

(c)至少100nM，尤其至少80nM，尤其至少70nM，尤其至少50nM，尤其至少10nM，尤其至少8nM，尤其至少5nM，尤其至少2nM，尤其至少1nM，尤其至少500pM，尤其至少400pM，尤其至少300pM，尤其至少200pM，尤其至少100pM，尤其至少50pM的解离常数和/或

(d)10⁴M^-1s^-1或更大，尤其介于3×10⁴M^-1s^-1至5×10⁴M^-1s^-1之间或更大，尤其10⁵M^-1s^-1或更大；尤其0.5×10⁵M^-1s^-1至9×10⁵M^-1s^-1或更大；尤其10⁶M^-1s^-1或更大，尤其1×10⁶M^-1s^-1至4×10⁶M^-1s^-1或更大，尤其10⁷M^-1s^-1或更大的缔合速率常数。

在某些实施方案中，本发明涉及如不同实施方案中所述的本发明嵌合或人源化抗体，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述抗体具有高结合亲和力以及至少100nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少80nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少70nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少10nM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少200pM的解离常数和10⁵M^-1s^-1或更大的缔合速率常数，尤其至少100pM的解离常数和10⁶M^-1s^-1或更大的缔合速率常数。

在本发明的不同实施方案中，如不同实施方案中所述的本发明嵌合或人源化抗体特异性识别并结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白，尤其微管相关tau蛋白，尤其聚集微管相关且过度磷酸化的tau蛋白(如存于成对螺旋丝状体(PHF)中者，PHF是神经纤维缠结、神经纤维串连以及失养性轴突中的主要结构)上的磷酸化表位，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位。

因此，任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体可用于哺乳动物或人中，在可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白含量增加的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中，降低总可溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白的含量。

任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体还可用于哺乳动物或人中，在含有过度磷酸化tau蛋白的成对螺旋丝状体(pTau PHF)含量增加的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中，降低所述pTau成对螺旋丝状体(pTau PHF)的含量。

在哺乳动物或人中，在所述tau蛋白变体含量增加(其造成所述哺乳动物或人的tau-蛋白相关疾病、病症或病况)的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中，降低总可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白和/或pTau成对螺旋丝状体(pTau PHF)含量时，可改善和/或缓解与所述tau-蛋白相关疾病、病症或病况相关的症状。

因此，任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体可用于疗法，尤其人疗法，以减慢或终止tau-蛋白相关疾病、病症或病况的进程。

任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体可进一步用于疗法，尤其人疗法中，以改善或缓解与tau-蛋白相关疾病、病症或病况相关的症状，例如像，包括推理、情境判断、记忆能力、学习、空间导航等认知功能损害或丧失。

在一个实施方案中，本发明涉及任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体，其用于疗法，尤其用于预防或治疗tau病变，一组tau-蛋白相关疾病和病症，或用于缓解与tau病变相关的症状。

在一个实施方案中，本发明涉及任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体，其用于保持或提高患有tau病变的哺乳动物的认知记忆能力。

先前实施方案的肽或抗体与脑上tau缠结和pTau的结合性可分别通过所选脑切片的蛋白质免疫反应性测试和脑匀浆的西方墨点法(Western blotting)来测定，如实施例中所述。

在另一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或其组合，任选地连同药学上可接受的载体。

在一个实施方案中，任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合是用于疗法，尤其人疗法，供治疗或缓解tau-蛋白相关疾病或病症(包括神经退化性病症，例如tau病变)的症状。

因此，在对患有所述疾病或病况的动物，尤其哺乳动物，尤其人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体和/或药物组合物后，所述抗体和/或药物组合物可用于减慢或终止tau-蛋白相关疾病、病症或病况的进程。

在对患有所述疾病或病况的动物，尤其哺乳动物，尤其人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体和/或药物组合物后，所述抗体和/或药物组合物可进一步用于改善或缓解与tau-蛋白相关疾病、病症或病况相关的症状，例如象，包括推理、情境判断、记忆能力、学习、空间导航等认知功能损害或丧失。

在一个实施方案中，任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合用于预防或治疗神经纤维病变的形成(tau病变的主要脑病理学)引起或相关的疾病及病症，其包括神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症，包括但不限于阿兹海默氏症、库贾氏病(Creutzfeldt-Jacob disease)、拳击手型痴呆、唐氏综合征、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病(Gerstmann--Scheinkerdisease)、包涵体肌炎及朊病毒蛋白(prion protein)大脑类淀粉蛋白血管病、外伤性脑损伤，且进一步包括不显示独特类淀粉蛋白病理学的疾病或病症，包括但不限于关岛型肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症/帕金森氏病-痴呆复合症(amyotrophic lateral sclerosis/parkinsonism-dementiacomplex of Guam)、非关岛型运动神经元病(Non-Guamanian motorneuron disease)伴随神经纤维缠结、嗜银颗粒性痴呆(argyrophilic graindementia)、皮质基底核退化(corticobasal degeneration)、弥漫性神经纤维缠结伴随钙化、因第17对染色体异常导致的额颞叶痴呆伴随帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病(Hallevorden-Spatz disease)、多系统萎缩、C型尼曼-匹克二氏病(Niemann-Pick disease)、苍白球脑桥黑质退化(Pallido-ponto-nigral degeneration)、匹克症(Pick’s disease)、进行性皮质下胶质增生、进行性核上麻痹、亚急性硬化性泛脑炎、单纯缠结型痴呆(Tangle only dementia)、脑炎后帕金森氏病、肌强直性营养不良(Myotonic dystrophy)。

在一个实施方案中，任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合用于治疗阿兹海默氏症。

在本发明的一个实施方案中，提供调节动物，尤其哺乳动物或人尤其脑中，尤其脑皮质和/或海马回中可溶性和/或不溶性Tau含量的方法，其包括对所述动物，尤其所述哺乳动物或人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合。

在一方面中，调节涉及降低含有增加的可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白含量的动物，尤其哺乳动物或人的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中可溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白的含量。

在本发明的一个实施方案中，提供降低含有增加的不溶性tau蛋白，尤其pTau成对螺旋丝状体(pTau PHF)含量的动物，尤其哺乳动物或人的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中不溶性tau蛋白，尤其含有过度磷酸化tau蛋白(pTau PHF)的成对螺旋丝状体含量的方法，其包括对所述动物，尤其所述哺乳动物或人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合。

在一个实施方案中，本发明涉及减慢或终止动物，尤其哺乳动物或人tau-蛋白相关疾病、病症或病况的进程的方法，其包括对患有所述疾病或病况的所述动物，尤其所述哺乳动物或人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合。

在一个实施方案中，本发明涉及改善或缓解与动物，尤其哺乳动物或人tau-蛋白相关疾病、病症或病况相关的症状(例如，包括推理、情境判断、记忆能力、学习、空间导航等认知功能损害或丧失)的方法，其包括对患有所述疾病或病况的所述动物，尤其所述哺乳动物或人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合。

在一个实施方案中，本发明涉及保持或增加患有tau病变的哺乳动物的认知记忆能力的方法。

在本发明的再一实施方案中，提供治疗tau-蛋白相关疾病或病症(包括神经退化性疾病或病症，例如tau病变)的方法，其包括对患有所述疾病或病症的动物，尤其哺乳动物、但尤其人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合。

在本发明的一个实施方案中，提供治疗神经纤维病变的形成(tau病变的主要脑病理学)引起或相关的疾病及病症的方法，所述疾病及病症包含神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症，包括但不限于阿兹海默氏症、库贾氏病、拳击手型痴呆、唐氏综合征、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、包涵体肌炎及朊病毒蛋白大脑类淀粉蛋白血管病、外伤性脑损伤，且进一步包括不显示独特类淀粉蛋白病理学的疾病或病症，包括但不限于关岛型肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症/帕金森氏病-痴呆复合症、非关岛型运动神经元病伴随神经纤维缠结、嗜银颗粒性痴呆、皮质基底核退化、弥漫性神经纤维缠结伴随钙化、因第17对染色体异常导致的额颞叶痴呆伴随帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病、多系统萎缩、C型尼曼-匹克二氏病、苍白球脑桥黑质退化、匹克症、进行性皮质下胶质增生、进行性核上麻痹、亚急性硬化性泛脑炎、单纯缠结型痴呆、脑炎后帕金森氏病、肌强直性营养不良，所述方法包含对患有所述疾病或病症的动物，尤其哺乳动物、但尤其人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、药物组合物、或其组合。

在本发明的另一实施方案中，提供诱导患有神经退化性病症(例如tau病变)的动物，尤其哺乳动物或人被动免疫反应的方法，这通过对所述动物或人施用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段、或多核苷酸、或药物组合物、或其组合。

在本发明的再一实施方案中，提供一种诊断患者tau-蛋白相关疾病、病症或病况的方法，其包含在样品中或原位检测任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段与tau蛋白的表位的免疫特异性结合，其包括以下步骤：

a.使所述样品或怀疑含有tau蛋白的特定身体部分或身体区域与任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段接触，其中所述抗体或其片段结合所述tau蛋白的表位；

b.使所述抗体或其功能片段与所述tau蛋白结合以形成免疫复合物；

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

d.将所述免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中tau蛋白的存在或不存在相关联。

在本发明的再一实施方案中，提供一种诊断患者tau-蛋白相关疾病、病症或病况的倾向的方法，其包含在样品中或原位检测任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段与tau蛋白的表位的免疫特异性结合，其包括以下步骤：

a.使所述样品或怀疑含有tau抗原的特定身体部分或身体区域与任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段接触，所述抗体或其片段结合所述tau蛋白的表位；

b.使所述抗体或其功能片段与所述tau抗原结合以形成免疫复合物；

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

d.将所述免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中tau抗原的存在或不存在相关联；

e.比较所述免疫复合物的量与正常对照值；

其中所述聚集体的量比正常对照值增加时表示所述患者患有tau-蛋白相关疾病或病况或具有发生风险。

在本发明的一个实施方案中，提供一种在利用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段治疗后监测患者的最小残留疾病(minimal residual disease)的方法，其中所述方法包括：

a.使所述样品或怀疑含有tau抗原的特定身体部分或身体区域与任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段接触，所述抗体或其片段结合至所述tau蛋白的表位；

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

d.将所述免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中tau抗原的存在或不存在相关联，

e.比较所述免疫复合物的量与正常对照值，

其中所述聚集体的量比正常对照值增加时表示所述患者仍患有最小残留疾病。

在一个实施方案中，提供一种预测用任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段治疗的患者的反应性的方法，其包含

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

e.比较所述治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，

其中所述聚集体的量减少指示所述患者对所述治疗具有高度反应可能性。

在另一实施方案中，本发明涉及一种用于检测和诊断tau-蛋白相关疾病、病症或病况的测试试剂盒，其包含任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段。

在一个实施方案中，所述测试试剂盒包括容纳一种或多种任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段的容器和抗体使用说明书，以用于以下目的：结合至tau抗原以形成免疫复合物并检测所述免疫复合物的形成以使得所述免疫复合物的存在或不存在与tau抗原的存在或不存在相关联。

在另一实施方案中，本发明涉及产生任一先前实施方案的嵌合或人源化抗体或其功能片段的细胞系，尤其细菌细胞系，尤其大肠杆菌(E.coli)细胞系。

在一个实施方案中，本发明涉及细胞系，其是2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H。

在一个实施方案中，本发明涉及细胞系，其是2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L。

在一个实施方案中，本发明涉及细胞系，其是2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H。

在一个实施方案中，本发明涉及细胞系，其是2012年3月6日以DSM 25746寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L。

附图和序列简述

图式

图1显示人源化抗-pTau抗体hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1与pTau疫苗肽(T4.5)的结合，其不与同一肽的非磷酸化形式(T4.6)结合。

图2显示经人源化抗-pTau抗体hACI-36-2B6-Ab1染色的20个月龄Tau基因转殖(biGT)小鼠脑中的Tau缠结。显示在皮质(A)和海马回(B)中Tau缠结的染色，且在海马回(B)中看到神经纤维串连染色。

图3显示经人源化抗-pTau抗体hACI-36-3A8-Ab1染色剂染色的20个月龄Tau基因转殖(biGT)小鼠脑中的Tau缠结。显示在皮质(A)和海马回(B)中Tau缠结的染色，且在海马回(B)中可看到神经纤维串连染色。

图4显示hACI-36-2B6-Ab1的轻链。

图5显示hACI-36-3A8-Ab1的轻链。

图6显示hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1的重链。

序列

SEQ ID NO:1示出分别由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H和2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1和hACI-36-2B6-Ab1的重链可变区(HCVR)的CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:2出示分别由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H和2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1和hACI-36-2B6-Ab1的重链可变区(HCVR)的CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:3示出分别由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H和2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1和hACI-36-2B6-Ab1的重链可变区(HCVR)的CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:4示出由2012年3月6日寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的轻链可变区(LCVR)的CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:5示出分别由2012年3月6日以DSM 25746寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L和2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1和hACI-36-2B6-Ab1的轻链可变区(LCVR)的CDR2的氨基酸序列。

SEQ ID NO:6示出分别由2012年3月6日以DSM 25746寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L和2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1和hACI-36-2B6-Ab1的轻链可变区(LCVR)的CDR3的氨基酸序列。

SEQ ID NO:7示出分别由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H和2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1和hACI-36-2B6-Ab1的重链可变区(HCVR)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:8示出由2012年3月6日以DSM 25746寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的轻链可变区(LCVR)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:9示出由2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的轻链可变区(LCVR)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:10示出由2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的轻链可变区(LCVR)的CDR1的氨基酸序列。

SEQ ID NO:11示出由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链(H)和由2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的重链(H)的核苷酸序列。

SEQ ID NO:12示出由2012年3月6日以DSM 25746寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的轻链(L)的核苷酸序列。

SEQ ID NO:13示出由2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的轻链(L)的核苷酸序列。

SEQ ID NO:14示出由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链和由2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的重链的CH1重链恒定区(HC)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:15示出由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链和由2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的重链的铰链重链恒定区(HC)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:16示出由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链和由2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的重链的CH2重链恒定区(HC)的氨基酸序列。人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链的CH2重链恒定区(HC)的氨基酸序列还示于图6C中。

SEQ ID NO:17示出由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链和由2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的重链的CH3重链恒定区(HC)的氨基酸序列。SEQ ID NO:17示出具有C-端赖氨酸的缺失(des-K)的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的重链的CH3重链恒定区(HC)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:18示出由2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H产生的人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的轻链恒定区(LC)和由2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H产生的人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的轻链恒定区(LC)的氨基酸序列。人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1的轻链恒定区(LC)的氨基酸序列还示于图4B和图5B中。

SEQ ID NO:19示出人Tau的最长同型异构体(441aa)，还称为Tau40。

SEQ ID NO:20示出人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1.v2的重链可变区(HCVR)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:21示出人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1.v2的重链可变区(HCVR)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:22示出以下人源化抗体的轻链(L)的氨基酸序列：hACI-36-3A8-Ab1(IgG4)、hACI-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)、hACI-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)以及hACI-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)。hACI-36-3A8-Ab1(IgG4)、hACI-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)、hACI-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)以及hACI-36-3A8-Ab1.v4(IgG1 N297G)的轻链(L)的氨基酸序列还示于图5中。

SEQ ID NO:23示出以下人源化抗体的轻链(L)的氨基酸序列：hACI-36-2B6-Ab1(IgG4)、hACI-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)、hACI-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)以及hACI-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)。hACI-36-2B6-Ab1(IgG4)、hACI-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)、hACI-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)以及hACI-36-2B6-Ab1.v4(IgG1 N297G)的轻链(L)的氨基酸序列还示于图4中。

SEQ ID NO:24示出人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1(IgG4)的重链(H)的氨基酸序列。人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1(IgG4)的重链(H)的氨基酸序列还示于图6中。

SEQ ID NO:25示出人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1(IgG4)的重链(H)的氨基酸序列。注意：SEQ ID NO 25与SEQ ID NO:24相同，且其还示于图6中。

SEQ ID NO:26示出人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1.v2(IgG4)的重链(H)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:27示出人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1.v3(IgG1)的重链(H)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:28示出人源化抗体hACI-36-3A8-Ab1.v4(IgG1N297G)的重链(H)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:29示出人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1.v2(IgG4)的重链(H)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:30示出人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1.v3(IgG1)的重链(H)的氨基酸序列。

SEQ ID NO:31示出人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1.v4(IgG1N297G)的重链(H)的氨基酸序列。

发明详述

术语的定义

本文所用术语“多肽、“肽”以及“蛋白”可互换且定义为意指由肽键连接的氨基酸组成的生物分子。

除非上下文不合适，否则本文所用术语“一(a、an)”以及“所述(the)”意指“一或多个”且包括复数个。

本文所用术语“肽”或“结合肽”可互换且是指α碳经由肽键连接的氨基酸(通常为L-氨基酸)链，所述肽键是通过一个氨基酸的α碳的羧基与另一氨基酸的α碳的氨基间的缩合反应来形成。链的一端(即，氨基端)处的端氨基酸具有游离氨基，而链的另一端(即，羧基端)处的端氨基酸具有游离羧基。因此，术语“氨基端”(缩写为N-端)是指氨基酸上的在肽的氨基端处的游离α氨基、或氨基酸的在肽内任一其它位置处的α氨基(当参与肽键时亚氨基)。相似地，术语“羧基端”(缩写为C-端)是指氨基酸上的在肽的羧基端处的游离羧基、或氨基酸的在肽内任一其它位置处的羧基。结合肽可构成如本文所定义的抗体，例如多克隆或单克隆抗体、人或人源化抗体、双特异性抗体、骆驼科动物抗体等、或其功能部分。

本文所用术语“其功能片段”或“片段”是指功能肽片段，即抗体或抗体链中包含氨基酸残基少于完整(intact或complete)抗体或抗体链但具有与其所来源的抗体基本上相同(生物)活性的部分(part或portion)，即所述片段仍能够在生物体中、但尤其在动物，尤其哺乳动物或人中诱发高度特异性，尤其构象特异性免疫反应，其高度有效且能够预防或缓解tau病变或与tau病变相关的症状。具体来说，所述片段仍含有如本文所使用和定义的tau肽的特异性病理磷酸化表位。可经由对完整(intact或complete)抗体或抗体链实施化学处理或酶促处理来获得片段。还可通过重组方式来获得片段。例示性片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2、Fabc和/或Fv片段。术语“抗原结合片段”是指免疫球蛋白或抗体中结合抗原或与完整抗体(即，与其所来源的完整抗体)竞争结合(即，特异性结合)抗原的多肽片段。

通过重组DNA技术或通过酶促或化学裂解完整免疫球蛋白来产生结合片段。结合片段包括Fab、Fab’、F(ab’)₂、Fabc、Fv、单链以及单链抗体。

“片段”还指包含另一多肽的氨基酸序列的至少5个邻接氨基酸残基、至少10个邻接氨基酸残基、至少15个邻接氨基酸残基、至少20个邻接氨基酸残基、至少25个邻接氨基酸残基、至少40个邻接氨基酸残基、至少50个邻接氨基酸残基、至少60个邻接氨基残基、至少70个邻接氨基酸残基、至少80个邻接氨基酸残基、至少90个邻接氨基酸残基、至少100个邻接氨基酸残基、至少125个邻接氨基酸残基、至少150个邻接氨基酸残基、至少175个邻接氨基酸残基、至少200个邻接氨基酸残基或至少250个邻接氨基酸残基的氨基酸序列的肽或多肽。在特定实施方案中，多肽的片段保留多肽的至少一个功能。

通常，构成肽的氨基酸是从氨基端开始且沿朝向肽的羧基端的方向增加按顺序编号。因此，当称一个氨基酸“跟随”另一个时，所述氨基酸的位置比前一氨基酸更靠近肽的羧基端。

本文所用术语“残基”是指通过酰胺键并入肽中的氨基酸。因此，氨基酸可为天然氨基酸或除非另有限制，否则可涵盖天然氨基酸的已知类似物(即，氨基酸模拟物)，其以与天然氨基酸相似的方式起作用。此外，酰胺键模拟物包括本领域技术人员熟知的肽骨架修饰。

本文所用短语“基本上由…组成”不包括所述词组所提及的任何会实质上改变肽的基本性质的要素。因此，对肽“基本上由…组成”的说明不包括会实质上改变所述肽的生物活性的任何氨基酸取代、添加或缺失。

此外，本领域技术人员应认识到，如上文所提及，改变、添加或缺失所编码序列中的单一氨基酸或较小百分比的氨基酸(通常小于5％、更通常小于1％)的个别取代、缺失或添加是保守修饰的变化形式，其中所述改变导致用化学相似氨基酸取代氨基酸。提供功能相似氨基酸的保守取代表为本领域所熟知。以下六组各含有可彼此进行保守取代的氨基酸：

1)丙氨酸(A)、丝氨酸(S)、苏氨酸(T)；

2)天冬氨酸(D)、谷氨酸(E)；

3)天冬酰胺酸(N)、谷酰胺酸(Q)；

4)精氨酸(R)、赖氨酸(K)；

5)异亮胺酸(I)、亮胺酸(L)、蛋氨酸(M)、缬氨酸(V)；以及

6)苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)、色氨酸(W)。

短语“经分离”或“生物纯”是指实质上或基本上不含如在天然状态中发现的通常所伴随的组分的材料。因此，本文所述肽不含有通常与其原位环境相关的材料。通常，本文所述经分离免疫原性肽是至少约80％纯、一般至少约90％纯且优选至少约95％纯，如通过银染色凝胶上的谱带强度所测量。

蛋白纯度或同源性可通过多种本领域熟知方法来指示，如对蛋白样品实施聚丙烯酰胺凝胶电泳，随后在染色后可视化。出于某些目的，将需要高拆分度并使用HPLC或类似方式进行纯化。

当免疫原性肽长度相对较短(即，小于约50个氨基酸)时，其通常是使用标准化学肽合成技术来合成。

固相合成是本文所述免疫原性肽的优选化学合成方法，其中将序列的C-端氨基酸附接至不溶性载体，随后依次添加序列中的其余氨基酸。本领域技术人员已知固相合成技术。

或者，使用重组核酸方法来合成本文所述免疫原性肽。通常，这包括生成编码肽的核酸序列，在特定启动子控制下将核酸放置于表达盒(expression cassette)，在宿主中表达肽，分离出表达的肽或多肽以及在需要时，复原所述肽。足以全程指导技术人员所述程序的技术可参见文献。

在表达后，可根据标准程序来纯化重组肽，包括硫酸铵沉淀、亲和力管柱、管柱色谱法、凝胶电泳等。对于用作治疗剂，优选实质上纯的具有约50％至95％同源性的组合物，并且最优选具有80％至95％或更大的同源性。

本领域技术人员应认识到，在化学合成、生物表达或纯化后，免疫原性肽可具有实质上不同于构成肽的天然构象的构象。在这种情形下，通常需要使抗增生肽变性并还原并且然后使肽重新折叠成优选构象。使蛋白还原并变性并且诱导重新折叠的方法为本领域技术人员所熟知。

经纯化蛋白的抗原性可通过(例如)证实与针对所述蛋白自身产生的免疫血清或抗血清反应来确认。

本文所用术语“检测(detecting或detected)”意指使用已知技术(例如免疫化学或组织学方法)来检测生物分子，且是指定性或定量地确定所研究生物分子的存在或浓度。

“经分离”意指生物分子不含至少一些与其天然存在的组分。

本文所用术语“抗体(antibody或antibodies)”是本领域认可的术语并且应理解为是指结合至已知抗原的分子或分子的活性片段，尤其免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有特异性结合抗原的结合位点的分子。免疫球蛋白是包含一个或多个实质上通过免疫球蛋白κ和λ、α、γ、δ、ε以及μ恒定区基因以及无数免疫球蛋白可变区基因编码的多肽的蛋白。将轻链分类为κ或λ。将重链分类为γ、μ、α、δ或ε，进而分别定义免疫球蛋白种类IgG、IgM、IgA、IgD以及IgE。还已知重链的子类。举例来说，人IgG重链可为IgG1、IgG2、IgG3以及IgG4子类中的任一种。本发明免疫球蛋白可为任一类型(IgG、IgM、IgD、IgE、IgA以及IgY)或子类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1以及IgA2)的免疫球蛋白分子。在一个实施方案中，IgG重链是在Fc区297位包含天冬酰胺酸至甘氨酸的取代的IgG1 N297G。

效应子功能降低的抗体包括Fc区残基238、265、269、270、297、327以及329(根据EU编号系统)中的一个或多个被取代的那些抗体(美国专利第6,737,056号)。所述Fc突变体包括在氨基酸位点265、269、270、297及327中的两者或更多者处经取代的Fc突变体，包括残基265及297经丙氨酸取代的所谓的”DANA”Fc突变体(美国专利第7,332,581号)。

描述了对FcR具有改善或减小的结合的某些抗体变体。(例如，参见美国专利第6,737,056号；WO 2004/056312以及Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。

在某些实施方案中，抗体变体包含具有一个或多个改善ADCC的氨基酸取代(例如，在Fc区298位、333位和/或334位(残基的EU编号)的取代)的Fc区。

在一些实施方案中，在Fc区中作出改变以改变(即，改善或减小)C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)，例如，如美国专利第6,194,551号、WO 99/51642以及Idusogie等,J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所述。

具有增加的半衰期和改善的对新生Fc受体(FcRn)(其负责母源IgG至胎儿的转移(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等,J.Immunol.24:249(1994)))的结合的抗体阐述于US2005/0014934A1(Hinton等)中。那些抗体包含其中具有一个或多个改善Fc区与FcRn的结合的取代的Fc区。所述Fc变体包括在以下Fc区残基中的一个或多个中具有取代那些：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如，Fc区残基434被取代(美国专利第7,371,826号)。

关于Fc区变体的其它实例还参见Duncan&Winter,Nature322:738-40(1988)；美国专利第5,648,260号；美国专利第5,624,821号；以及WO 94/29351。

在提及抗体时，本文所用“特异性结合”意指所述抗体以比对结构上不同抗原更大的亲和力结合至其靶标抗原。

已知典型免疫球蛋白结构单元包含四聚体。各四聚体是由两个相同多肽链对组成，每一对皆具有一个“轻”链(约25kDa)和一个“重”链(约50kDa至70kDa)。每一个链的N-端定义主要负责抗原识别的约100个至110个或更多个氨基酸的可变区。术语可变轻链(V_L)和可变重链(V_H)分别是指这些轻链和重链。

抗体以全长完整抗体或以通过经各种肽酶或化学物质消化产生的多个具有良好特征的片段存在。因此，举例来说，胃蛋白酶在铰链区中的二硫键下消化抗体以产生F(ab’)₂(Fab二聚体)，其自身是通过二硫键接合至V_H-CH₁的轻链。可在温和条件下还原F(ab’)₂以使铰链区中的二硫键断裂，从而将F(ab’)₂二聚体转化成Fab’单体。Fab’单体基本上是具有一部分铰链区的Fab片段(关于其它抗体片段的更详细说明参见Fundamental Immunology,W.E.Paul编，Raven Press,N.Y.(1993))。尽管各种抗体片段是依据完整抗体的消化来定义，但本领域技术人员应了解，多个抗体片段中的任一个可以化学方式或通过利用重组DNA方法来重新合成。因此，本文所用术语抗体还包括通过修饰整个抗体产生或重新合成的抗体片段或通过使用重组DNA方法获得的抗体和片段。

“抗体”在本发明范围内旨在包括单克隆抗体、多克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、双特异性抗体、猿猴化(simianized)抗体、人和人源化抗体、骆驼科动物抗体、双特异性抗体以及其功能部分或活性片段。结合至已知抗原的分子的活性片段的实例包括分离的轻链和重链、Fab、Fab/c、Fv、Fab’及F(ab’)₂片段，包括Fab免疫球蛋白表达文库的产物以及上文所提及抗体和片段中任一个的表位结合片段。

这些活性片段可通过多种技术自本发明抗体获得。举例来说，纯化的单克隆抗体可用酶(例如胃蛋白酶)裂解，且进行HPLC凝胶过滤。随后可收集含有Fab片段的适当部分并通过膜过滤等浓缩。关于分离抗体活性片段的一般技术的进一步说明(例如)参见Khaw,B.A.等J.Nucl.Med.23:1011-1019(1982)；Rousseaux等,Methods Enzymology,121:663-69,Academic Press,(1986)。

重组抗体可为常规全长抗体、从蛋白分解消化获知的活性抗体片段、独特活性抗体片段(如Fv或单链Fv(scFv))、结构域缺失的抗体等。Fv抗体的大小为约50KDa并且包含轻链和重链可变区。单链Fv(“scFv”)多肽是以共价方式连接的VH::VL异源二聚体，其可从包括直接接合或通过编码肽的连接子接合的编码VH和VL的序列的核酸表达。参见Huston等,(1988)Proc.Nat.Acad.Sci.USA,85:5879-5883。用于将天然聚集、但化学上分离的轻多肽链和重多肽链从抗体V区转化到scFv分子中的多种结构将折叠成实质上与抗原结合位点的结构类似的三维结构。例如，参见美国专利第5,091,513号、第5,132,405号以及第4,956,778号。

组合位点是指抗体分子参与抗原结合的部分。抗原结合位点是由重(“H”)链和轻(“L”)链的N-端可变(“V”)区的氨基酸残基形成。抗体可变区包含三个高度趋异性伸展段(divergent stretch)(称为“高度可变区”或“互补决定区”(CDR))，其插置在更保守的侧接伸展段(flankingstretch)(称为“框架区”(FR))之间。在抗体分子中，轻链(LCDR1、LCDR2以及LCDR3)的3个高度可变区与重链(HCDR1、HCDR2以及HCDR3)的3个高度可变区在三维空间中相对于彼此安置以形成抗原结合表面或袋状区(pocket)。因此，抗体组合位点代表构成抗体CDR的氨基酸以及构成结合位点袋状区的任何框架残基。

可使用本领域熟知方法来确定在构成组合位点的特定抗体中氨基酸残基的身份。举例来说，抗体CDR可识别为Kabat等最初定义的高度可变区(参见，“Sequences of Proteins of Immunological Interest，”E.Kabat等,U.S.Department of Health and Human Services；Johnson,G和Wu，TT(2001)Kabat Database and its applications:future directions.Nucleic Acids Research,29:205-206；http://immuno.bme.nwa.edu)。CDR的位置还可识别为Chothia和其他人最初所述的结构性环结构(参见Chothia和Lesk，J.Mol.Biol.196,901(1987)；Chothia等,Nature 342,877(1989)；以及Tramontano等,J.Mol.Biol.215,175(1990))。其它方法包括”AbM定义，”其是Kabat与Chothia间的折衷并且是使用Oxford Molecular AbM抗体建模软件(现为Accelrys)得到；或Macallum等的CDR“接触定义”(“Antibody-antigen interactions:contact analysis and binding site topography，”JMol Biol.，1996年10月11日；262(5):732-45)。以下图表基于各种已知定义识别CDR。

可仅自序列鉴别抗体中CDR的一般准则如下：

LCDR1：

开始-大致残基24。

之前的残基始终是Cys。

之后的残基始终是Trp。通常，TRP后跟随TYR-GLN，但还可跟随LEU-GLN、PHE-GLN或TYR-LEU。

长度是10个至17个残基。

LCDR2：

开始-L1末端后16个残基。

之前的序列通常是ILE-TYR，但还可以是VAL-TYR、ILE-LYS或ILE-PHE。

长度通常是7个残基。

LCDR3：

开始–通常L2末端后33个残基。

之前的残基是Cys。

之后的序列是PHE-GLY-X-GLY。

长度是7个至11个残基。

HCDR1：

开始–大致在残基26处(CYS后4个残基)[Chothia/AbM定义]，Kabat定义是在晚5个残基开始。

之前的序列是CYS-X-X-X。

之后的残基是TRP，其后通常跟随VAL，但还跟随ILE或ALA。

在AbM定义下长度是10至12个残基，而Chothia定义不包括最后4个残基。

HCDR2：

开始-CDR-H1末端后15个残基(Kabat/AbM定义)。

之前的序列通常是LEU-GLU-TRP-ILE-GLY(SEQ ID NO.1)，但可能存在多种变化。

之后的序列是LYS/ARG-LEU/ILE/VAL/PHE/THR/ALA-THR/SER/ILE/ALA。

在Kabat定义下长度是16个至19个残基(AbM定义是在早7个残基结束)。

HCDR3：

开始–在CDR-H2末端后33个残基(CYS后2个残基)。

之前的序列是CYS-X-X(通常是CYS-ALA-ARG)。

之后的序列是TRP-GLY-X-GLY。

长度是3个至25个残基。

可使用本领域熟知方法(如分子建模和X-射线结晶学)来确定特定抗体的氨基酸残基的身份，所述氨基酸残基在CDR外部，但因具有为组合位点的衬里的一部分的侧链而构成所述组合位点的一部分(即，其可供用于通过组合位点联接)。例如，参见Riechmann等,(1988)Nature,332:323-327。

嵌合抗体是抗体的一或多个区来自一个物种动物并且抗体的一或多个区来自不同物种动物的那些。优选嵌合抗体是包括来自灵长类免疫球蛋白的区的嵌合抗体。用于人临床使用的嵌合抗体通常理解为具有来自非人动物(例如啮齿类动物)的可变区与来自人的恒定区。相比之下，人源化抗体使用来自非人抗体的CDR，其中大多数或全部可变框架区和全部恒定区来自人免疫球蛋白。人嵌合抗体通常理解为具有来自啮齿类动物的可变区。典型人嵌合抗体具有人重链恒定区和人轻链恒定区，其中重链可变区和轻链可变区两者均来自啮齿类动物抗体。嵌合抗体可包括人恒定区的天然氨基酸序列和天然啮齿类动物可变区序列的一些变化。可通过本领域熟知方法来制备嵌合和人源化抗体，包括CDR接枝法(例如，参见美国专利第5,843,708号；第6,180,370号；第5,693,762号；第5,585,089号；第5,530,101号)、链改组(chain shuffling)策略(例如，参见美国专利第5,565,332号；Rader等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1998)95:8910-8915)、分子建模策略(美国专利第5,639,641号)等。

在双链抗体的情形下，本文所用“人源化抗体”是至少一个链被人源化的抗体。人源化抗体链具有一个或多个框架区是人来源的可变区。单链人源化抗体是所述链具有一个或多个框架区是人来源的可变区的抗体。人源化抗体链或其片段的可变区的非人部分来源于非人来源，尤其非人抗体，通常啮齿类动物来源的非人抗体。对人源化抗体的非人贡献通常是以以下形式提供：至少一个CDR区散布于来源于一种(或多种)人免疫球蛋白的框架区中。另外，可改变框架支撑残基以保持结合亲和力。人源化抗体可进一步包含恒定区(例如，在轻链的情形下至少一个恒定区或其部分，并且在重链的情形下优选3个恒定区)。人源化抗体的恒定区(如果存在)通常是人来源。

人源化抗体可进一步包含恒定区(例如，在轻链的情形下至少一个恒定区或其部分，并且在重链的情形下优选3个恒定区)。人源化抗体的恒定区(如果存在)通常是人来源。

人源化抗体可进一步是指具有一或多个框架区具有人或灵长类动物氨基酸的可变区的抗体。另外，可改变框架支撑残基以保持结合亲和力。获得“人源化抗体”的方法为本领域技术人员所熟知。(例如，参见Queen等,Proc.Natl Acad Sci USA,86:10029-10032(1989)；Hodgson等,Bio/Technoloy,9:421(1991))。

“人源化抗体”还可通过新颖遗传工程方法获得，所述方法使得能在例如像兔等大型动物中产生亲和力成熟人样多克隆抗体(http://www.rctech.com/bioventures/therapeutic.php)

术语“全人抗体”或“人”抗体意指来源于携带人抗体基因的基因转殖小鼠或人细胞的抗体。然而，对于人免疫系统来说，“全人”、“人”以及“人源化”抗体间的差异可忽略不计或不存在，且因此所述三种全部可具有相等疗效和安全性。

本文所用术语恒定区(CR)是指免疫球蛋白的恒定区基因。恒定区基因编码抗体分子的提供效应子功能的部分。对于嵌合人抗体和人源化抗体来说，非人(例如，鼠类)恒定区通常被人恒定区取代。受试嵌合或人源化抗体的恒定区通常来源于人免疫球蛋白。重链恒定区可选自以下5个同种型中的任一个：α、δ、ε、γ或μ。此外，各子类的重链(如重链的IgG子类的)负责不同效应子功能，并且因此通过选择期望重链恒定区可产生具有期望效应子功能的抗体。可在本发明范围内使用的恒定区是γ1(IgG1)，尤其γ1(IgG1)同种型、γ1N297G(IgG1N297G)、γ3(IgG3)且尤其γ4(IgG4)的Fc区。轻链恒定区可具有κ或λ型、优选κ型。在一个实施方案中，轻链恒定区是人κ恒定链(Heiter等(1980)Cell 22:197-207)并且重恒定链是人IgG4恒定链。

术语“单克隆抗体”还为本领域所公认并且是指在实验室中从单一克隆大量产生并且仅识别一种抗原的抗体。单克隆抗体通常通过将通常短命的抗体产生B细胞与快速生长细胞(如癌细胞，有时称为“永生”细胞)融合来制得。所得杂交细胞或融合瘤快速扩增，从而生成产生大量抗体的克隆。出于本发明的目的，“单克隆抗体”还应理解为包含由尚未达到完全单克隆性的母源克隆产生的抗体。

所用术语“杂交”是指常规杂交条件，优选是指使用5xSSPE、1％SDS、1xDenhardts溶液作为溶液和/或杂交温度介于35℃与70℃之间、优选65℃的杂交条件。杂交后，优选在介于35℃与70℃之间的温度下、优选在65℃下首先用2xSSC、1％SDS实施洗涤，并且随后用0.2xSSC实施洗涤(关于SSPE、SSC以及Denhardts溶液的定义参见以上引用的Sambrook等中)。特别优选的是如以上引用的(例如)Sambrook等所述的严格杂交条件。例如，如果杂交和洗涤如上文所指示发生于65℃下，则呈现尤其优选的严格杂交条件。非严格杂交条件(例如在45℃下实施杂交和洗涤)不太优选且在35℃下更不优选。

通过序列一致性来确定两个序列之间的“同源性”。如果有待比较的两个序列彼此的长度不同，则序列一致性优选涉及与较长序列的核苷酸残基一致的较短序列的核苷酸残基的百分比。常规上，可利用计算机程序(例如Bestfit程序(Wisconsin Sequence Analysis Package，Unix版本8，Genetics Computer Group,University Research Park,575Science Drive Madison,WI 53711))来测定序列一致性。Bestfit利用局部同源性算法(Smith和Waterman，Advances in Applied Mathematics 2(1981),482-489)来寻找两个序列之间具有最高序列一致性的区段。当使用Bestfit或另一序列对准程序来测定特定序列与本发明参照序列是否具有(例如)95％一致性时，优选调整参数以使得在参照序列的整个长度上计算一致性百分比并容许参照序列中核苷酸总数的至多5％具有同源性空缺。当使用Bestfit时，优选保留所谓的任选参数于其预先设定(“默认”)值下。给定序列与本发明上述序列之间的比较中出现的偏差可能由(例如)添加、缺失、取代、插入或重组引起。优选地，还可利用程序“fasta20u66”(版本2.0u66，1998年9月，William R.Pearson和University of Virginia；还参见W.R.Pearson(1990),Methodsin Enzymology 183,63-98随附实施例及http://workbench.sdsc.edu/)实施所述序列比较。出于此目的，可使用“默认”参数设定。

本发明抗体可为免疫球蛋白或抗体，其应理解为其每一结合位点相同(如果多价)，或者，在替代方案中，可为“双特异性”或“双功能抗体”。

“双特异性”或“双功能抗体”是具有两个不同重链/轻链对和两个不同结合位点的人工杂交抗体。双特异性抗体可由多种方法产生，包括杂交瘤的融合或Fab’片段的连接。例如，参见Songsivilai和Lachmann，Clin.Exp.Immunol.79:315-321(1990)；Kostelny等,J.Immunol.148,1547-1553(1992)。

术语“抗原”是指可在生物体，尤其动物、更尤其哺乳动物(包括人)中诱导免疫反应的实体或其片段。所述术语包括免疫原和负责抗原性或抗原决定簇的区。

本文所用术语“可溶性”意指部分或完全溶解于水溶液中。

本文所用术语“免疫原性”还是指针对免疫原性试剂引出或增强抗体、T-细胞以及其它反应性免疫细胞的产生且有助于人或动物中的免疫反应的物质。

当个体针对所施用用以减轻或缓解欲治疗病症的本发明免疫原性组合物产生足量抗体、T-细胞以及其它反应性免疫细胞时，发生免疫反应。

本文所用术语免疫原性是指抗原在施用给接受者时引出免疫反应(体液性或细胞性)的能力的量度。本发明涉及降低受试人嵌合或人源化抗体的免疫原性的方法。

免疫原性降低的人源化抗体是指相对于亲代抗体(例如，鼠类抗体)展示降低的免疫原性的人源化抗体。

实质上保持亲代抗体的结合性质的人源化抗体是指保持特异性结合用于产生所述人源化抗体的亲代抗体所识别抗原的能力的人源化抗体。优选地，人源化抗体应展示与亲代抗体相同或实质上相同的抗原结合亲和力和亲合力(avidity)。理想地，抗体的亲和力应不小于亲代抗体亲和力的10％，更佳地不小于约30％，且最优选地，亲和力应不小于亲代抗体的50％。用于测定抗原结合亲和力的方法为本领域所熟知并且包括半最大结合测定、竞争测定以及Scatchard分析。适宜抗原结合测定阐述于本申请中。

“回复突变(back mutation)”是在编码人源化抗体的核苷酸序列中引入的突变，所述突变所产生的氨基酸对应于亲代抗体(例如，供体抗体，例如，鼠类抗体)中的氨基酸。可在本发明抗体的人源化期间保留来自亲代抗体的某些框架残基，以实质上保持亲代抗体的结合性质，而同时使所得抗体的潜在免疫原性降至最低。在本发明的一个实施方案中，亲代抗体是源于小鼠。举例来说，回复突变将人框架残基变成亲代鼠类残基。可回复突变的框架残基的实例包括但不限于正规残基(canonical residue)、界面填充残基(interface packing residue)、邻近结合位点的罕见亲代残基、“游标区(Vernier Zone)”(其形成停靠CDR的平台)中的残基(Foote&Winter,1992,J.Mol.Biol.224,487-499)以及那些邻近CDR H3的残基。

本文所用“保守变化”是指与天然蛋白质相比，分别在突变体多肽的三级结构中产生最小变化或在突变体多肽的抗原决定子中产生最小变化的实质上为构象或抗原中性的改变。当提及本发明抗体和抗体片段时，保守变化意指不会使抗体无法结合至受试受体的氨基酸取代。本领域技术人员应能够预测在维持构象或抗原中性的高可能性的同时可进行哪些氨基酸取代。所述指导原则提供于(例如)Berzofsky,(1985)Science 229:932-940和Bowie等(1990)Science 247:1306-1310中。影响维持构象和抗原中性的可能性的考虑因素包括但不限于：(a)疏水性氨基酸的取代较不容易影响抗原性，因为疏水性残基比较可能位于蛋白质内部；(b)生理化学上类似的氨基酸的取代较不容易影响构象，因为取代后氨基酸在结构上拟似天然氨基酸；以及(c)改变进化上保守的序列可能对构象产生不利影响，因为所述保守表示所述氨基酸序列可能具有功能重要性。本领域技术人员使用熟知测定法即可得知蛋白质构象的改变，如(但不限于)微量补体固定法(microcomplementfixation method)(Wasserman等,(1961)J.Immunol.87:290-295；Levine等,(1967)Meth.Enzymol.11:928-936)和透过使用构象依赖性单克隆抗体的结合性研究(Lewis等,(1983)Biochem.22:948-954)。

本领域技术人员认识且了解术语“融合瘤”是指由产生抗体的细胞与永生细胞例如多发性骨髓瘤细胞融合产生的细胞。此杂交细胞能够产生抗体的连续供应。关于融合方法的更详细说明，参见上文对“单克隆抗体”的定义和下文实施例。

本文所用术语“载体”意指可在其中并入抗原肽或超分子构建体或可与其相关联的结构，从而将抗原肽或所述肽的一部分呈现或暴露于人或动物的免疫系统。在本发明的背景中，任一适宜用于动物或人疗法的粒子(例如像，囊泡、粒子或微粒体)皆可用作载体。

所述术语“载体”进一步包含递送方法，其中可通过递送机制将包含抗原肽的超分子抗原构建组合物运送至期望位点。所述递送系统的一个实例利用胶体金属，例如胶体金。

可用于本发明超分子抗原构建组合物的载体蛋白包括但不限于麦芽糖结合肽“MBP”；牛血清白蛋白“BSA”；钥孔虫戚血蓝蛋白(keyhole lympet hemocyanin)“KLH”；卵白蛋白；鞭毛蛋白；甲状腺球蛋白；任一物种的血清白蛋白；任一物种的γ球蛋白；同基因细胞(syngeneic cell)；具有Ia抗原的同源细胞；以及D-和/或L-氨基酸的聚合物。

此外，术语“治疗有效量”或“药学上有效量”是指当施用给人或动物时足以在所述人或动物中产生疗效的结合肽的量。本领域技术人员容易依照常规程序确定有效量。

“pTau PHF”、“PHF”以及“成对螺旋丝状体”在本文中同义使用且是指于电子显微镜上看到的以160nm周期缠绕成螺旋的丝状体对。宽度在10nm与22nm之间变化。PHF是阿兹海默氏症(AD)的神经纤维缠结以及神经纤维串连中的主要结构。还可在一些但非全部神经炎斑点相关良性轴突中看到PHF。PHF的主要组分是过度磷酸化形式的微管相关tau蛋白。PHF可部分地由二硫键连接的反向平行过度磷酸化tau蛋白组成。可截去PHF tau C-端20个氨基酸残基。PHF形成的潜在机制尚未确定，但tau过度磷酸化可使其脱离微管，从而增加神经元内部可形成PHF的可溶性tau汇集物。

在本发明范围内，经证实，经诱导对本发明抗原组合物反应的抗体具有极大的T-细胞依赖性。在这一方面，使用裸小鼠模型且对裸小鼠进行疫苗接种并测量抗体反应以在免疫裸小鼠中评估本发明抗原组合物诱导的Aβ-特异性抗体反应。裸小鼠携带Foxn1nu突变且因此因缺乏适当胸腺而T-细胞功能降低。

本文所用“药学上有效量”是指药物组合物中的活性成份适于治愈、或至少部分地遏制所治疗疾病、病症或病况或任何其相关并发症的症状的剂量。

本发明提供识别并结合至tau蛋白的主要病理磷酸化表位的结合肽。具体来说，本发明提供对抗tau蛋白上认为在tau病变(包括AD)中造成突触毒性和神经毒性的线性和构象、简单和复杂磷酸化表位的特异性抗体。

因此，在一个实施方案中，本发明涉及嵌合或人源化抗体或其功能片段，所述抗体识别并特异性结合至哺乳动物，尤其人Tau蛋白或其片段上的磷酸化表位，尤其病理tau蛋白构象异构物，但在一个实施方案中不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述结合肽或抗体具有高结合亲和力以及至少10nM，尤其至少8nM，尤其至少5nM，尤其至少2nM，尤其至少1nM，尤其至少500pM，尤其至少400pM，尤其至少300pM，尤其至少200pM，尤其至少100pM，尤其至少50pM的解离常数。

本文所用“可溶性Tau”蛋白是指由完全溶解的Tau蛋白/肽单体或Tau样肽/蛋白、或经修饰或经截短Tau肽/蛋白或Tau肽/蛋白单体的其它衍生物以及Tau蛋白寡聚物二者组成的蛋白。“可溶性Tau”尤其不包括神经纤维缠结(NFT)。

本文所用“不溶性Tau”分别是指形成寡聚或聚合结构的Tau肽或蛋白、或Tau样肽/蛋白、或经修饰或经截短Tau肽/蛋白或Tau肽/蛋白的其它衍生物的多个聚集单体，其在体外在水性介质中且在体内在哺乳动物或人身体中、更具体来说在脑中均不溶，但尤其是指在哺乳动物或人身体中、更具体来说在脑中不溶的Tau或经修饰或经截短Tau肽/蛋白或其衍生物的多个聚集单体。”不溶性Tau”尤其包括神经纤维缠结(NFT)。

本文所用“单体Tau”或“Tau单体”是指完全溶解的Tau蛋白而在水性介质中无聚集复合物。

“聚集Tau”、“寡聚Tau”以及“Tau寡聚物”分别是指形成寡聚或聚合结构的Tau肽或蛋白、或Tau样肽/蛋白、或经修饰或经截短Tau肽/蛋白或Tau肽/蛋白的其它衍生物的多个聚集单体，其在体外在水性介质中和在体内在哺乳动物或人身体中、更具体来说在脑中均不溶或可溶，但尤其是指在哺乳动物或人身体中、更具体来说在脑中不溶或可溶的Tau或经修饰或经截短Tau肽/蛋白或其衍生物的多个聚集单体。

“调节抗体”是指如本文在不同实施方案中所述的抗体或其功能性片段，其可向上调控(例如，活化或刺激)、向下调控(例如，抑制(inhibit或suppress))或者改变含有增加的可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白含量的动物，尤其哺乳动物或人的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中可溶性和/或不溶性Tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白的功能性质、生物活性或含量。调节抗体或其功能片段可作用以直接或间接调节tau蛋白或编码所述tau蛋白的多肽。在某些实施方案中，调节抗体或其功能片段降低含有增加的可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白含量的动物，尤其哺乳动物或人的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中可溶性及不溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白的含量。

在一个实施方案中，本发明提供药物组合物，其包含治疗有效量的本文所阐述并要求保护的任一实施方案的嵌合抗体或人源化抗体、或包含编码所述结合肽或抗体的核酸序列的多核苷酸、或其组合与药学上可接受的载体。

适宜的药物载体、稀释剂和/或赋形剂为本领域所熟知并且包括(例如)磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(如油/水乳液)、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。

本文所用术语“治疗”、“预防(prevent,preventing以及prevention”)是指通过施用预防剂或治疗剂来预防受试者病症的一种或多种症状的复发或发作。

构建人源化抗体

通过参照本文所包括的特定实施方案的以下详细说明可更容易地了解本发明。尽管已参照本发明某些实施方案的具体细节阐述本发明，但不欲将所述细节视为对本发明的范围的限制。

可设计不同HCVR和LCVR区，其包含可从嵌入天然或经修饰来源于人或灵长类的框架区中的供体抗体(例如，鼠类抗体)获得的非人CDR。所述修饰可尤其关于框架区内的一个或多个氨基酸残基与各别子组中在此位置更常见的非人残基，尤其鼠类残基或具有与各别子组中在此位置更常见者类似性质的残基的交换。

对框架区框架序列的修饰用于固定CDR于其正确空间定向以便与抗原相互作用，且框架残基有时甚至会参与抗原结合。在本发明的一个实施方案中，采取措施以进一步适配所选人框架序列以使其与啮齿类动物框架的序列最类似以最大化在重新成形抗体中保持亲和力的可能性。

因此，可取代人框架区中的鼠类残基。具体来说，可分别取代重链可变(HCVR)区的人框架区中47位或94位或二者以及轻链可变(LCVR)区的人框架区中45位和/或87位和/或50位和/或53位的鼠类残基。

适宜药物载体、稀释剂和/或赋形剂为本领域所熟知并且包括(例如)磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(例如油/水乳液)、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。

可使用已知技术在生理上可接受的制剂中制备本发明的嵌合抗体或人源化抗体及其活性片段且其可包含药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。举例来说，将本发明和如本文所述的抗体与药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂组合以形成治疗组合物。适宜药物载体、稀释剂和/或赋形剂为本领域所熟知且包括(例如)磷酸盐缓冲盐水溶液、水、乳液(例如油/水乳液)、各种类型的润湿剂、无菌溶液等。

本发明的药物组合物的配制可根据本领域技术人员已知的标准方法达成。

本发明组合物可以适宜药学上有效的剂量以固体、液体或气溶胶形式施用给受试者。固体组合物的实例包括丸剂、乳霜以及可植入剂量单元。丸剂可经口施用。治疗性乳霜可表面施用。可植入剂量单元可于(例如)肿瘤部位局部施用，或可(例如)经皮下植入用于治疗性组合物的全身性释放。液体组合物的实例包括适于肌内、皮下、静脉内、动脉内注射的制剂以及用于表面和眼内施用的制剂。气溶胶制剂的实例包括用于施用至肺的吸入器制剂。

组合物可通过标准施用途径施用。一般来说，组合物可通过局部、经口、直肠、鼻、皮内、腹膜内或胃肠外(例如，静脉内、皮下或肌内)途径施用。

另外，可将组合物并入持续释放的基质(例如生物可降解聚合物)中，在期望递送处(例如肿瘤部位)的附近植入所述聚合物。所述方法包括施用单次剂量、以预定时间间隔施用重复剂量以及在预定时段内持续施用。

本文所用持续释放的基质是由可通过酶促或酸/碱水解或通过溶解降解的材料(一般为聚合物)制得的基质。在将基质插入机体后，酶和体液对基质起作用。期望通过如以下等生物相容性材料来选择持续释放的基质：脂质体、聚丙交酯(聚乳酸)、聚乙交酯(乙醇酸聚合物)、聚丙交酯共乙交酯(乳酸与乙醇酸的共聚物)、聚酸酐、聚(原酸)酯、多肽、透明质酸、胶原、硫酸软骨素、羧酸、脂肪酸、磷脂、多糖、核酸、聚氨基酸、氨基酸(例如苯丙氨酸、酪氨酸、异亮胺酸)、多核苷酸、聚乙烯丙烯、聚乙烯基吡咯烷酮以及聚硅氧烷。优选的生物可降解基质是聚丙交酯、聚乙交酯或聚丙交酯共乙交酯(乳酸与乙醇酸的共聚物)中一种的基质。

本领域技术人员已熟知，组合物的剂量应取决于不同因素，例如所治疗病况、所用具体组合物以及其它临床因素，例如像患者的体重、体型、性别以及一般健康状况、机体表面积、欲施用的具体化合物或组合物、同时施用的其它药物以及施用途径。

本发明组合物可与其它包含生物活性物质或化合物(例如像，已知用于tau病变和/或类淀粉变性症的药疗法、与类淀粉蛋白或类淀粉蛋白样蛋白(例如参与阿兹海默氏症的β类淀粉蛋白)相关的一组疾病和病症的化合物)的组合物组合施用。

另一生物活性物质或化合物可通过与本发明治疗性疫苗相同或相似的机制或通过不相关的作用机制或通过多种相关和/或不相关的作用机制来施加其生物效应。

通常，另一生物活性化合物可包括中子透射增强剂、精神治疗性药物、乙酰胆碱酯酶抑制剂、钙通道封闭剂、生物胺、苯二氮平安定剂(benzodiazepine tranquillizer)，乙酰胆碱合成、储存或释放增强剂，乙酰胆碱突触后受体激动剂、单胺氧化酶-A或-B抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸盐谷氨酸盐受体拮抗剂、非类固醇消炎药物、抗氧化剂以及血清素能受体拮抗剂。

具体来说，生物活性剂或化合物可包含至少一种选自由下列组成的组的化合物：抵抗氧化应激的化合物；抗细胞凋亡化合物；金属螯合剂；DNA修复抑制剂，例如哌仑西平(pirenzepin)和代谢物；3-氨基-1-丙磺酸(3APS)；1,3-丙二磺酸盐(1,3PDS)；分泌酶活化剂；[β]-和7-分泌酶抑制剂；tau蛋白；神经递质、β折叠结构破坏剂；消炎分子；“非典型抗精神病剂”，例如氯氮平(clozapine)、齐拉西酮(ziprasidone)、利培酮(risperidone)、阿立哌唑(aripiprazole)或奥氮平(olanzapine)；或胆碱酯酶抑制剂(ChEI)，例如他克林(tacrine)、利斯的明(rivastigmine)、多奈哌齐(donepezil)和/或加兰他敏(galantamine)；以及其它药物和营养添加剂，例如维生素B 12、半胱氨酸、乙酰胆碱前体、卵磷脂、胆碱、银杏提取物(Ginkgo biloba)、乙酰基-L-肉碱、艾地苯醌(idebenone)、丙戊茶碱(propentofylline)或黄嘌呤衍生物；以及本发明结合肽(包括抗体，尤其单克隆抗体以及其活性片段)和任选地药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂以及疾病治疗说明书。

在再一实施方案中，本发明组合物可包含烟碱酸(niacin)或美金刚(memantine)以及本发明的嵌合抗体或人源化抗体(包括抗体，尤其单克隆抗体以及其活性片段)和任选地药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。

在本发明的再一实施方案中，提供组合物，其包含“非典型抗精神病剂”，例如氯氮平、齐拉西酮、利培酮、阿立哌唑或奥氮平，所述药剂用于治疗正性和负性精神病症状，包括幻觉、妄想、思维障碍(表现为显著的不连贯、思维出轨(derailment)、言语岔开)和古怪或错乱性行为、以及兴趣缺失、冷漠感情、情感淡漠以及社交退缩；以及本发明的嵌合抗体或人源化抗体或其活性片段、和任选地药学上可接受的载体和/或稀释剂和/或赋形剂。

除了本发明的嵌合抗体或人源化抗体外，可适用于组合物中的其它化合物还为公开于(例如)WO 2004/058258(尤其参见第16页和第17页)中的那些，包括治疗性药物靶标(第36页至第39页)、链烷磺酸和烷醇磺酸(第39页至第51页)、胆碱酯酶抑制剂(第51页至第56页)、NMDA受体拮抗剂(第56页至第58页)、雌激素(第58页至第59页)、非类固醇消炎药物(第60页至第61页)、抗氧化剂(第61页至第62页)、过氧化物酶体增生剂活化受体(PPAR)激动剂(第63页至第67页)、胆固醇降低剂(第68页至第75页)；类淀粉抑制剂(第75页至第77页)、类淀粉形成抑制剂(第77页至第78页)、金属螯合剂(第78页至第79页)、抗精神病剂和抗抑郁剂(第80页至第82页)、营养添加剂(第83页至第89页)和提高脑中生物活性物质的可用性的化合物(参见第89页至第93页)以及前药(第93页和第94页)，所述文献以引用方式并入本文中，但尤其为上文所述页面所提及的化合物。

蛋白性药物活性物质可以介于1ng/剂量与30mg/剂量之间的量存在。通常，施用方案应在介于0.1μg与10mg本发明抗体的范围内，尤其在1.0μg至1.0mg的范围内且更尤其在介于1.0μg与100μg的范围内，其中所有属于所述范围内的个别数字还为本发明的一部分。如果经由连续输注进行施用，则更恰当剂量可在介于0.01μg与10mg单位/公斤体重/小时的范围内，其中所有属于所述范围内的个别数字还为本发明的一部分。

施用将通常为胃肠外(例如静脉内或皮下)。用于胃肠外施用的制剂包括无菌水性或非水性溶液、悬浮液以及乳液。非水性溶剂包括但不限于丙二醇、聚乙二醇、植物油(例如橄榄油)以及可注射有机酯(例如油酸乙酯)。水性溶剂可选自由下列组成的组：水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。胃肠外媒介物包括氯化钠溶液、林格氏右旋糖(Ringer’s dextrose)、右旋糖以及氯化钠、乳酸林格氏液或固定油。静脉内媒介物包括流体和营养补充剂、电解质补充剂(例如基于林格氏右旋糖的那些)及其它。还可存在防腐剂，例如抗微生物剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。

药物组合物可进一步包含尤其人来源的蛋白性载体，例如血清白蛋白或免疫球蛋白。在本发明药物组合物中可存在其它生物活性剂，这取决于其期望用途。

当结合靶标位于脑中时，本发明的某些实施方案提供本发明的嵌合抗体或人源化抗体(包括其活性片段)以通过血脑障壁。某些神经退化性疾病与血脑障壁的渗透性增加相关，使得可容易地将本发明结合肽(包括抗体或其活性片段)引入脑中。当血脑障壁仍完好时，存在若干本领域已知的方法用于穿过其运送分子，包括但不限于物理方法、基于脂质的方法以及基于受体和通道的方法。

穿过血脑障壁运送本发明的嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段的物理方法包括但不限于完全绕开血脑障壁或通过在血脑障壁中生成开口。绕开方法包括但不限于直接注射至脑(例如，参见Papanastassiou等,Gene Therapy 9:398-406(2002))和在脑中植入递送装置(例如，参见Gill等,Nature Med.9:589-595(2003)；和GliadelWafers(TM),Guildford Pharmaceutical)。在障壁中生成开口的方法包括但不限于超声波处理(例如，参见美国专利公布第2002/0038086号)、渗透压(例如，通过施用高渗甘露醇(Neuwelt,E.A.,Implication of theBlood-Brain Barrier and its Manipulation，第1卷和第2卷，Plenum Press,N.Y.(1989))、通过(例如)缓激肽或透化剂A-7的透化(例如，参见美国专利第5,112,596号、第5,268,164号、第5,506,206号以及第5,686,416号)以及用含有编码结合肽或抗原结合片段的基因的载体转染跨越血脑障壁的神经元(例如，参见美国专利公布第2003/0083299号)。

穿过血脑障壁运送本发明的嵌合抗体或人源化抗体(包括抗体，尤其单克隆抗体、或其活性片段)的基于脂质的方法包括但不限于将本发明的嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段囊封于偶联至其活性片段并结合至血脑障壁的血管内皮上的受体的脂质体中(例如，参见美国专利申请公布第20020025313号)和将本发明结合肽(包括抗体，尤其单克隆抗体、或其活性片段)涂覆于低密度脂蛋白粒子(例如，参见美国专利申请公布第20040204354号)或脂蛋白E(例如，参见美国专利申请公布第20040131692号)中。

穿过血脑障壁运送本发明的嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段的基于受体和通道的方法包括但不限于使用糖皮质激素封闭剂来增加血脑障壁的渗透性(例如，参见美国专利申请公布第2002/0065259号、第2003/0162695号以及第2005/0124533号)；活化钾通道(例如，参见美国专利申请公布第2005/0089473号)，抑制ABC药物运送蛋白(例如，参见美国专利申请公布第2003/0073713号)；用运铁蛋白涂覆抗体并调节一种或多种运铁蛋白受体的活性(例如，参见美国专利申请公布第2003/0129186号)以及将所述抗体阳离子化(例如，参见美国专利第5,004,697号)。

另外，本发明抗体可经工程改造以利用通过各种开发性BBB受体(即，运铁蛋白受体、胰岛素受体、低密度脂蛋白受体相关蛋白8、葡萄糖运送蛋白1(Glut1)等)穿过血脑障壁(BBB)的受体介导的运送(RMT)(例如，参见WO9502421)。举例来说，可使本发明抗体具有多特异性以靶向tau和BBB受体。多特异性抗体的非限制性实例包括双特异性抗体，其中所述抗体的一个臂是本发明的抗体片段且所述抗体的另一个臂靶向介导穿过BBB运送的BBB受体。举例来说，BBB受体可包括运铁蛋白受体(TfR)、胰岛素受体、胰岛素样生长因子受体(IGF受体)、低密度脂蛋白受体相关蛋白8(LRP8)、低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)、葡萄糖运送蛋白1(Glut1)以及肝素结合表皮生长因子样生长因子(HB-EGF)。

可在长时间段内对受试者单次或反复施用本发明的嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段、或本发明药物组合物。施用持续时间可介于1周与至多12个月之间或更久。在此时间期间，结合肽、抗体或药物组合物可每周1次、每2周1次、每3周1次、每4周1次等或以更高或更低频率施用，这取决于欲治疗个体的需要。

在又一实施方案中，本发明提供用于检测和诊断tau-蛋白相关疾病、病症或病况的方法和试剂盒，所述疾病、病症或病况包括神经退化性疾病或病症，例如tau病变，包括神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症，包括但不限于阿兹海默氏症、库贾氏病、拳击手型痴呆、唐氏综合征、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、包涵体肌炎及朊病毒蛋白大脑类淀粉蛋白血管病、外伤性脑损伤，且进一步包括不显示独特类淀粉蛋白病理学的疾病或病症，包括但不限于关岛型肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症/帕金森氏病-痴呆复合症、非关岛型运动神经元病伴随神经纤维缠结、嗜银颗粒性痴呆、皮质基底核退化、弥漫性神经纤维缠结伴随钙化、因第17对染色体异常导致的额颞叶痴呆伴随帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病、多系统萎缩、C型尼曼-匹克二氏病、苍白球脑桥黑质退化、匹克症、进行性皮质下胶质增生、进行性核上麻痹、亚急性硬化性泛脑炎、单纯缠结型痴呆、脑炎后帕金森氏病、肌强直性营养不良。病理异常可由神经纤维病变的形成(tau病变的主要脑病理学)引起或与其相关。

此外，本发明提供用于以下的方法和试剂盒：诊断tau-蛋白相关疾病、病症或病况的倾向，所述疾病、病症或病况包括神经退化性疾病或病症，例如tau病变，包括神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症；或监测患者的最小残留疾病或预测患者对利用本发明的嵌合抗体或人源化抗体或本发明且如本文所述的组合物治疗的反应性。这些方法包括常用于检测或量化生物试样中或在原位条件下检测或量化物质的已知免疫方法。

诊断有需要的个体，尤其哺乳动物、更具体来说人tau-蛋白相关疾病或病况(包括神经退化性疾病或病症，例如tau病变，包括神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症)或tau-蛋白相关疾病或病况的倾向可通过在样品中或原位检测本发明结合肽，尤其抗体，尤其单克隆抗体或其活性片段与tau蛋白的表位的免疫特异性结合来达成，其包括使所述样品或怀疑含有tau蛋白的特定身体部分或身体区域与结合所述tau蛋白的表位的抗体接触，使所述抗体与所述tau蛋白结合以形成免疫复合物，检测所述免疫复合物的形成以及将所述免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中tau蛋白的存在或不存在相关联，任选地比较所述免疫复合物的量与正常对照值，其中所述免疫复合物的量比正常对照值增加时表示所述个体患有tau蛋白相关疾病或病况或具有发生风险。

在利用本发明结合肽(包括抗体，尤其单克隆抗体以及其活性片段)或本发明组合物治疗后监测个体，尤其哺乳动物、更具体来说人的最小残留疾病可通过在样品中或原位检测本发明结合肽，尤其抗体，尤其单克隆抗体或其活性片段与所述tau蛋白的表位的免疫特异性结合来达成，其包括使所述样品或怀疑含有tau蛋白的特定身体部分或身体区域与结合所述tau蛋白的表位的本发明结合肽(包括抗体，尤其单克隆抗体及其活性片段)接触，使本发明结合肽(包括抗体，尤其单克隆抗体及其活性片段)与所述tau蛋白结合以形成免疫复合物，检测所述免疫复合物的形成以及将所述免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中tau蛋白的存在或不存在相关联，任选地比较所述免疫复合物的量与正常对照值，其中所述免疫复合物的量比正常对照值增加时表示所述个体可能仍患有最小残留疾病。

预测个体，尤其哺乳动物、更具体来说人对利用本发明嵌合抗体或人源化抗体、或本发明组合物治疗的反应性可通过在样品中或原位检测结合肽，尤其单克隆抗体或其活性片段与所述tau蛋白的表位的免疫特异性结合来达成，其包括使所述样品或怀疑含有tau蛋白的特定身体部分或身体区域与结合所述tau蛋白的表位的本发明结合肽(包括抗体，尤其单克隆抗体及其活性片段)接触，使本发明嵌合抗体或人源化抗体或其活性片段与tau蛋白结合以形成免疫复合物，检测所述免疫复合物的形成以及将所述免疫复合物的存在或不存在与所述样品或特定身体部分或区域中tau蛋白的存在或不存在的相关联，任选地比较治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，其中所述免疫复合物的量减少说明所述患者具有对所述治疗有反应的高可能性。

可用于诊断tau蛋白相关疾病或病况、用于诊断tau蛋白相关疾病或病况(包括神经退化性疾病或病症，例如tau病变，包括神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症)的倾向、或用于监测患者的最小残留疾病或用于预测患者对利用本发明嵌合抗体或人源化抗体或其活性片段、或本发明且如本文所述的组合物治疗的反应性的生物样品是例如自生物体获得的流体(例如血清、血浆、唾液、胃分泌物、粘液、脑脊髓液、淋巴液等)或组织或细胞样品，例如神经、脑、心脏或血管组织。在测定试样中存在或不存在tau蛋白时，可使用本领域技术人员已知的任一免疫测定法，例如利用间接检测方法使用二级试剂进行检测的测定、ELISA测定以及免疫沉淀和凝集测定。此等测定的详细说明示于(例如)Harlow和Lane，Antibodies:A Laboratory Manual(Cold SpringHarbor Laboratory,New York 1988555-612；颁与Maertens和Stuyver、Zrein等的WO96/13590(1998)以及WO96/29605。

对于原位诊断，可通过本领域已知方法(例如，静脉内、皮下、鼻内、腹膜内、大脑内、动脉内注射)将本发明嵌合抗体或人源化抗体(包括抗体或其活性片段)施用给欲诊断的生物体，以使得本发明抗体与类淀粉蛋白上的表位区之间可发生特异性结合。常规上，结合肽/抗原复合物可方便地通过附接至本发明嵌合抗体或人源化抗体、或其功能片段的标记或任一其它本领域已知检测方法来检测。

用于诊断应用或用于诊断tau蛋白相关疾病或病况(包括神经退化性疾病或病症，例如tau病变，包括神经退化性疾病或病症的异源性组，包括显示tau病理学与类淀粉蛋白病理学共存的疾病或病症)的倾向、或用于监测患者的最小残留疾病或用于预测患者对利用本发明嵌合抗体或人源化抗体(包括抗体或其活性片段)或本发明且如本文所述的组合物治疗的反应性等应用的免疫测定法通常依赖于经标记抗原、结合肽或二级试剂进行检测。这些蛋白或试剂可用通常为本领域技术人员已知的化合物进行标记，所述化合物包括酶、放射性同位素以及荧光、发光和发色物质，包括但不限于有色粒子，如胶体金和乳胶珠粒。其中，放射性标记可用于几乎所有类型的测定和多数变化形式。当必须避免放射性时或当需要快速获得结果时，酶偶联标记尤其有用。荧光染料的应用尽管需要昂贵的设备，但可提供极灵敏的检测方法。用于所述测定中的结合肽是本文所公开、要求保护的那些，包括抗体，尤其单克隆抗体、多克隆抗体以及经亲和力纯化的多克隆抗体。

或者，可通过与经标记的对免疫球蛋白具有亲和力的物质(如蛋白A或G或第二抗体)反应来间接标记本发明嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段。本发明的嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段可与第二物质偶联并且用对偶联至所述抗体的所述第二物质具有亲和力的经标记第三物质检测。举例来说，本发明的嵌合抗体或人源化抗体、或其活性片段可偶联至生物素并且使用经标记抗生物素蛋白(avidin)或抗生蛋白链菌素(streptavidin)来检测结合肽/生物素偶联物。类似地，结合肽可偶联至半抗原并且使用经标记抗半抗原结合肽来检测结合肽/半抗原偶联物。

本领域技术人员应了解这些和其它可用于本发明中的适宜标记。这些标记与结合肽或其片段的结合可使用本领域技术人员通常已知的标准技术达成。典型技术由Kennedy,J.H.,等,1976(Clin.Chim.Acta70:1-31)和Schurs,A.H.W.M.等1977(Clin.Chim Acta 57:1-40)阐述。下文所提及的偶合技术是戊二醛法、高碘酸盐法、二马来酰亚胺法以及其它方法，所有这些方法皆以引用方式并入本文中。

现行免疫测定利用双抗体法来检测分析物的存在，其中所述抗体通过与已用可检测标记进行标记的第二抗体的反应性来间接地标记。第二抗体优选为结合获得单克隆抗体的动物的抗体。换句话说，如果单克隆抗体是小鼠抗体，则标记的第二抗体是抗小鼠抗体。对于欲在本文所述的测定中使用的抗体来说，此标记优选为经抗体涂覆的珠粒，尤其磁性珠粒。对于欲在本文所述免疫测定中使用的抗体来说，标记优选为可检测分子，如放射性、荧光或电化学发光物质。

替代性双抗体系统因其被适配用于快速确定分析物的存在而经常称为快速形式系统(fast format system)，其还可在本发明范围内使用。所述系统需要在抗体与分析物之间具有高亲和力。根据本发明的一个实施方案，使用每一抗体皆对淀粉样蛋白具有特异性的一对抗体来确定tau蛋白的存在。所述抗体对中的一个在本文中称为“检测抗体”并且所述抗体对中的另一个在本文中称为“捕获抗体”。本发明单克隆抗体可用作捕获抗体或检测抗体。本发明单克隆抗体还可在单一测定中同时用作捕获与检测抗体二者。因此，本发明的一个实施方案使用双抗体夹心法(double-antibody sandwich method)来检测生物流体样品中的tau蛋白。在此方法中，将分析物(tau蛋白)夹持于检测抗体与捕获抗体之间，捕获抗体可逆地固定至固体载体上。检测抗体将含有可检测标记，以鉴别抗体-分析物夹心的存在和因此分析物的存在。

例示性固相物质包括但不限于微量滴定板、聚苯乙烯试管、磁性、塑料或玻璃珠粒以及载玻片，其为放射免疫分析和酶免疫分析领域内所熟知。将抗体偶合至固相的方法还为本领域技术人员所熟知。最近，已使用多种多孔材料(如尼龙(nylon)、硝基纤维素、乙酸纤维素、玻璃纤维以及其它多孔聚合物)作为固体载体。

本发明还涉及用于检测生物样品中tau蛋白的诊断试剂盒，其包含如上文所定义的组合物。此外，本发明涉及后一诊断试剂盒，其除如上文所定义的组合物外还包含如上文所定义的检测试剂。术语“诊断试剂盒”一般来说是指本领域已知的任一诊断试剂盒。更特定来说，后一术语是指如Zrein等(1998)中所述的诊断试剂盒。

本发明的再一目的是提供用于检测和诊断tau蛋白相关疾病和病况的新颖免疫探针和测试试剂盒，其包含本发明结合肽。对于免疫探针来说，将结合肽直接或间接地附接至适宜报道分子，例如酶或放射性核素。所述测试试剂盒包括容纳一种或多种本发明结合肽的容器和结合肽使用说明书，以用于以下目的：结合至tau抗原以形成免疫复合物并检测所述免疫复合物的形成，以使得所述免疫复合物的存在或不存在与所述tau抗原的存在或不存在相关联。

实施例

实施例1.通过ELISA检测hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1与T4肽的结合

1.1.方法

1.1.1磷酸化Tau结合分析

使用ELISA分析来测试抗体与pTau的结合。用10μg/mL来源于Tau的肽Tau401至418(位置409丝氨酸磷酸化(T4.5)或未磷酸化(T4.6))涂覆Nunc MaxiSorp 96孔板(Nunc,Denmark)。在4℃下使涂层在磷酸盐缓冲盐水(PBS；Sigma-Aldrich,Switzerland)中过夜。用0.05％Tween20/PBS充分洗涤板并且然后在37℃下用于0.05％Tween20/PBS中的1％牛血清白蛋白(BSA；Sigma-Aldrich)封闭1小时。然后以8种两倍稀释液(以0.5μg/mL开始)添加欲测试的含有抗体的上清液，并在37℃下孵育2小时。然后如先前所述洗涤板，并在37℃下经2小时添加以于0.05％Tween20/PBS中1/2,000稀释的碱性磷酸酶(AP)偶联山羊抗-人IgG(Jackson ImmunoResearch Laboratories,England)。在洗涤后，用对-硝基苯磷酸氢二钠六水合物(pNPP；Sigma-Aldrich,Switzerland)磷酸酶底物溶液孵育板，并在孵育1小时后使用微板读数器(Tecan，Switzerland)在405nm下读数。结果以光学密度(O.D.)表示。

1.2.结果

在肽T4.5和T4.6上使用直接ELISA测试人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1与pTau靶标的结合。两种抗体均展示对靶标的高结合(图1)。未观察到与相应非磷酸化Tau肽(T4.6)的结合。这证实抗体hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1与靶标的高结合。

实施例2.使用hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1通过TAUPIR对20个月龄基因转殖tau病变(biGT)小鼠脑中pTau进行染色

2.1.方法

2.1.1抗-Tau抗体与来自Tau基因转殖动物的脑切片上的Tau缠结的结合(TAUPIR)

使用老龄(>18个月龄)双基因转殖biGT(GSK-3β基因转殖小鼠与TPLH小鼠杂交，含有具有P301L突变的人Tau的最长同型异构体(441aa))tau病变小鼠的脑切片。在PBS中将脑切片洗涤5min，然后在环境温度下在1.5％存于PBS:MeOH(1:1)中的H₂O₂中孵育15min以封闭内源性过氧化酶活性。在PBST(PBS/0.1％TritonX100)中将切片洗涤3次后，在室温下在PBST+10％FCS(胎牛血清)封闭液中其孵育30min。然后在4℃下用含有欲测试抗体的未经稀释的上清液将切片孵育过夜。接着在PBST中将切片洗涤3次，然后在室温下用存于PBST/10％FCS中的HRP-偶联抗-人IgG4(Invitrogen)二级抗体孵育1小时。在检测前，用PBST将切片洗涤3次并在50mM Tris/HCl(pH 7.6)中孵育5min。通过以下方式来实施检测：在二氨基联苯胺(DAB：1片存于10ml 50mM Tris.HCl+3μl 30％H2O2中；MPBiomedicals,USA)中将切片孵育3min。通过在PBST中将切片洗涤3次来终止反应。然后将切片转移至硅烷化玻璃板上并在50℃温热板上风干2小时。用Mayers苏木素(Fluka Chemie,Switzerland)孵育1min进行对比染色，随后在流动自来水中实施洗涤步骤4min。通过使切片在50％乙醇浴、70％乙醇浴、90％乙醇浴中并在100％乙醇浴中(2次)、然后在二甲苯中(2次)中通过进行脱水1min。最后，在盖玻片下用DePeX(BDH ChemicalsLtd.,England)实施封固。

2.2.结果

通过TAUPIR染色来评估人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1和hACI-36-3A8-Ab1与基因转殖tau病变(biGT)小鼠脑中pTau的结合。抗体hACI-36-2B6-Ab1(图2A和图2B)以及hACI-36-3A8-Ab1(图3A和图3B)展示与存于tau病变小鼠脑中的Tau缠结和神经纤维串连的结合。

实施例3.结合研究II：通过Biacore/SPR检测抗体亲和力

3.1方法

3.1.1SPR结合分析

为评估hACI-36-2B6-Ab1与肽T4.5间的结合相互作用，将抗体hACI-36-2B6-Ab1固定至传感器芯片上，并且然后注入T4.5作为分析物。

在Biacore T100仪器(GE Healthcare)上实施SPR实验。固定用试剂(EDC、NHS以及乙醇胺)和传感器芯片CM7(羧甲基葡聚糖)是购自GE Healthcare。流动缓冲液是PBS(Dulbecco’s PBS，Sigma)。为正确定向抗体用于结合至肽T4.5，经由蛋白G将抗体偶联至传感器表面。为此，用10mM乙酸钠(pH 4.0)(GE Healthcare)将重组蛋白G(Sigma)自存于水中的储备液(2mg/mL)稀释至50μg/mL。然后将此蛋白溶液偶联至使用EDC/NHS预先活化的CM7传感器芯片的流动槽(fc)2。偶联后，使乙醇胺流经所述表面并得到在fc1上9860RU和在fc2上9492RU的最终固定量。然后用10mM磷酸盐缓冲液(pH 7.4)将hACI-36-2B6-Ab1稀释至100μg/mL并以2μL/min注射85s，得到8340RU的固定量。为确保在注射肽T4.5前获得平坦基线，使PBS流经传感器表面约2h并且然后系统用PBS灌注2次。使用流动缓冲液利用两倍连续稀释液来分析5个浓度的肽T4.5(50nM→800nM)。使用单循环动力学法从最低浓度开始进行注射并以50μL/min的速率流经fc 1与2二者。每一浓度的肽的缔合时间和解离时间均实施90s。从fc 2减去fc 1的反应以校正仪器噪音、本体折射变化和与羧甲基葡聚糖表面的非特异性结合。使用Biacore T100评估软件使用用于数值积分和总体分析的算法来实施动力学分析。将所有数据同时拟合至1:1同源(Langmuir)模型以进行曲线拟合。

所用肽

3.2结果

使用SPR实时监测tau肽与人源化抗体hACI-36-2B6-Ab1的结合。可使用抗体结合的结合阶段和解离阶段的分析来测定缔合速率常数(k_a)、解离速率常数(k_d)以及解离常数K_D。实施肽T4.5与经固定抗体hACI-36-2B6-Ab1的结合的动力学分析，其展示0.54×10⁵M^-1s^-1的快速缔合速率常数和36.0×10^-4s^-1的解离速率常数(下表)。

实施例4.表位作图

4.1方法

4.1.1表位作图测定

通过ELISA使用不同磷酸化和非磷酸化肽文库来实施抗-磷酸化Tau人源化单克隆抗体的表位作图。扫描期望表位的肽文库的氨基酸序列显示于表5A中。另外，生成如表5B中所显示的结合至抗体的肽序列的每一残基经丙氨酸(Ala)取代的肽文库。每一文库由存于肽疫苗中的跨越磷酸化和非磷酸化序列的短生物素化肽组成。肽文库是购自ANAWA Trading SA。根据制造商(Mimotopes)说明书实施表位作图。简单来说，在4℃下用含0.1％BSA的磷酸盐缓冲盐水(PBS)封闭经抗生蛋白链菌素涂覆的板(NUNC)，过夜。在用PBS-0.05％Tween 20洗涤后，在室温下用来自每一文库的不同肽(在含有0.1％BSA、0.1％叠氮化钠的PBS中稀释至10μM最终浓度)涂覆板，持续1小时。在洗涤后，在室温下用含有2％BSA和0.1％叠氮化钠的PBS中的不同稀释度的欲测试抗体将板孵育1小时。再次洗涤板并在室温下用以1/2000稀释的AP-偶联山羊抗-人IgG(Jackson目录号109-055-098，批号95531)孵育30min至1小时。在最终洗涤后，用对-硝基苯磷酸氢二钠六水合物(pNPP；Sigma-Aldrich,Buchs,Switzerland)磷酸酶底物溶液孵育板，并在孵育2小时后使用ELISA读数板在405nm下读数。如果光学密度(O.D.)超过背景O.D至少2倍，则结合视为阳性。

4.2结果

使用ELISA测定hACI-36-2B6-Ab1结合至表5A和5B中所显示肽的表位。针对包含人Tau的最长同型异构体(ΤAU441)的氨基酸残基404至411(其中S409磷酸化(pS409))且优先结合至Tau氨基酸残基H407、pS409、N410以及V411的区对抗体hACI-36-2B6-Ab1的表位进行作图。

寄存：

根据布达佩斯条约(Budapest Treaty)的条款，将以下细菌质粒(转化的大肠杆菌)以瑞士AC Immune SA(PSE-EPFL Building B,1015Lausanne,Switzerland)和“德国微生物及细胞保存中心(DeutscheSammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH,DSMZ)”(Braunschweig,Inhoffenstrasse 7B,38124Braunschweig)的名义寄存：

菌株名称	寄存号	寄存日期
			大肠杆菌2B6A10C11-H	DSM 25743	2012年3月6日
大肠杆菌2B6A10C11-L	DSM 25744	2012年3月6日
			大肠杆菌3A8A12G7-H	DSM 25745	2012年3月6日
大肠杆菌3A8A12G7-L	DSM 25746	2012年3月6日

表6.重链可变区(HCVR)的经修饰氨基酸序列

表7：重链和轻链的全长氨基酸序列

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美国专利第5,268,164号

美国专利第5,506,206号

美国专利第5,686,416号

美国专利第5,004,697号

Claims

1.一种嵌合抗体或其功能片段、或人源化抗体或其功能片段，所述抗体识别并特异性结合至如SEQ ID NO:19中显示的人Tau蛋白上或其片段上的磷酸化表位，但不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位，其中所述表位包含Tau aa 404至411且需要位置409的Ser磷酸化(pS409)。

2.如权利要求1所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段，其优先结合至Tau氨基酸残基H407、pS409、N410以及V411。

3.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列、CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％一致的氨基酸序列。

4.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列或与其至少81％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列或与其至少71％、至少75％、至少8％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列或与其至少82％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少50％、至少68％、至少70％、至少80％，尤其至少85％，尤其至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％，尤其至少95％，尤其至少96％，尤其至少97％，尤其至少98％，尤其至少99％或100％一致的氨基酸序列。

5.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列或与其至少85％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列或与其至少75％一致的氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少20％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列或与其至少85％一致的氨基酸序列，CDR2，其具有SEQID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少70％一致的氨基酸序列。

6.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少90％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少90％一致的氨基酸序列。

7.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:3中所显示氨基酸序列或与其至少95％一致的氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4或SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列或与其至少95％一致的氨基酸序列。

8.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列；和/或第二结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:4中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列。

9.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其包含第一结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:1中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:2中所显示氨基酸序列，以及CDR3，其具有SEQID NO:3中所显示氨基酸序列；和/或第二结合结构域，其含有依次整合至来源于人或灵长类的框架区中的CDR1，其具有SEQ ID NO:10中所显示氨基酸序列，CDR2，其具有SEQ ID NO:5中所显示氨基酸序列以及CDR3，其具有SEQ ID NO:6中所显示氨基酸序列。

10.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其中所述抗体或抗体片段包含

11.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其中所述抗体或抗体片段包含

12.如权利要求1或权利要求2所述的人源化抗体或其功能片段，其中所述抗体或抗体片段包含

a.第一结合结构域，尤其重链可变区(HCVR)的结合结构域，其含有SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21中所显示氨基酸序列；和/或第二结合结构域，尤其轻链可变区(LCVR)的结合结构域，其含有SEQ ID NO:8中所显示氨基酸序列；或

13.如前述权利要求中任一项所述的人源化抗体或其功能片段，其中所述抗体或抗体片段包含重链恒定区和轻链恒定区，尤其如SEQID NO:14至17中显示的重链恒定区和如SEQ ID NO:18中显示的轻链恒定区。

14.如权利要求13所述的人源化抗体或其功能片段，其包含在铰链区中具有突变，尤其在铰链区中具有防止Fab臂交换且由此产生双特异性抗体的突变的重链恒定区。

15.如权利要求14所述的人源化抗体或其功能片段，其中所述重链铰链区包含在位置228Ser交换成为Pro(S228P)。

16.如前述权利要求中任一项所述的人源化抗体或其功能片段，其包含在C-端处具有突变的重链恒定区。

17.如权利要求16所述的人源化抗体或其功能片段，其中所述重链包含C-端赖氨酸的缺失(des-K)。

18.如前述权利要求中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段，其中所述抗体具有IgG1、IgG1N297G、IgG2、IgG3或IgG4同种型。

19.如前述权利要求中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段，其中所述抗体或片段的K_D介于0.1nM与80nM之间，尤其介于0.1nM与70nM之间，尤其介于0.1nM与67nM之间。

20.一种多核苷酸，其编码如前述权利要求中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段。

21.如权利要求20所述的多核苷酸，其包含选自由下列组成的组的核酸分子：

e.包含与SEQ ID NO:11中所显示序列具有至少98％序列一致性的核苷酸序列和/或与SEQ ID NO:12中所显示序列具有至少98％序列一致性的核苷酸序列的核酸分子；或

f.包含其互补股与a)至e)中任一个的核酸分子杂交的核苷酸序列的核酸分子；

g.包含因遗传密码简并而偏离a)至f)中任一个中所定义的核苷酸序列的核苷酸序列的核酸分子。

22.如权利要求20或21所述的多核苷酸，其包含含有如SEQ IDNO:11中显示的核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:12中显示的核苷酸序列的核酸分子。

23.如权利要求20或权利要求21所述的多核苷酸，其包含含有如SEQ ID NO:11中显示的核苷酸序列和/或如SEQ ID NO:13中显示的核苷酸序列的核酸分子。

24.如权利要求20所述的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的重链可变区(HCVR)和SEQ IDNO:14至17的重链恒定区的核苷酸序列。

25.如权利要求20或权利要求21所述的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO:8的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区的核苷酸序列。

26.如权利要求20或权利要求21所述的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO:9的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区的核苷酸序列。

27.如权利要求20所述的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的重链可变区(HCVR)和SEQ IDNO:14至17的重链恒定区以及SEQ ID NO:8的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区的核苷酸序列。

28.如权利要求20所述的多核苷酸，其包含编码SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:21的重链可变区(HCVR)和SEQ IDNO:14至17的重链恒定区以及SEQ ID NO:9的轻链可变区(LCVR)和SEQ ID NO:18的轻链恒定区的核苷酸序列。

29.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段，所述抗体或片段特异性识别并结合至人Tau蛋白上的磷酸化表位，所述人Tau蛋白为聚集的微管相关且过度磷酸化的tau蛋白，诸如成对螺旋丝状体(PHF)中存在的tau蛋白；但不结合至相应未磷酸化表位和/或非相关表位。

30.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段，其用于检测神经纤维缠结、神经纤维串连以及失养性轴突。

31.一种药物组合物，其包含如权利要求1至19、29或30中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段，与药学上可接受的载体或赋形剂。

32.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于哺乳动物或人中，在含有增加含量的可溶性tau蛋白和/或可溶性磷酸化tau蛋白的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中，降低总可溶性tau蛋白，尤其可溶性磷酸化tau蛋白的含量。

33.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于哺乳动物或人中，在含有增加含量的过度磷酸化tau蛋白的成对螺旋丝状体(pTau PHF)的脑中，尤其脑皮质和/或海马回中，降低所述pTau成对螺旋丝状体(pTau PHF)含量。

34.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于疗法。

35.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于改善或缓解与tau-蛋白相关疾病、病症或病况相关的症状，例如像，包括推理、情境判断、记忆能力、学习、空间导航在内的认知功能损害或丧失。

36.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于预防或治疗tau病变，一组tau-蛋白相关疾病和病症，或用于缓解与tau病变相关的症状。

37.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于保持或增加患有tau病变的哺乳动物的认知记忆能力。

38.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于预防或治疗由神经纤维病变的形成引起或与其相关的疾病和病症。

39.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于预防或治疗神经退化性疾病或病症。

40.如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段或如权利要求31所述的组合物，其用于预防或治疗阿兹海默氏症、库贾氏病、拳击手型痴呆、唐氏综合征、杰茨曼-斯脱司勒-史茵克氏病、包涵体肌炎及朊病毒蛋白大脑类淀粉蛋白血管病、外伤性脑损伤，且进一步用于预防或治疗不显示独特类淀粉蛋白病理学的疾病或病症，包括但不限于关岛型肌肉萎缩性脊髓侧索硬化症/帕金森氏病-痴呆复合症、非关岛型运动神经元病伴随神经纤维缠结、嗜银颗粒性痴呆、皮质基底核退化、弥漫性神经纤维缠结伴随钙化、因第17对染色体异常导致的额颞叶痴呆伴随帕金森氏病、哈勒沃登-施帕茨病、多系统萎缩、C型尼曼-匹克二氏病、苍白球脑桥黑质退化、匹克症、进行性皮质下胶质增生、进行性核上麻痹、亚急性硬化性泛脑炎、单纯缠结型痴呆、脑炎后帕金森氏病、肌强直性营养不良。

41.一种调节哺乳动物或人尤其脑中，尤其脑皮质和/或海马回中可溶性和/或不溶性Tau含量的方法，其包括向所述哺乳动物或人施用如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段、或如权利要求20至28中任一项所述的多核苷酸、或如权利要求31所述的药物组合物、或其组合。

42.一种减慢或终止哺乳动物或人的tau-蛋白相关疾病、病症或病况的进程的方法，其包括向患有所述疾病或病况的所述哺乳动物或人施用如权利要求11至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段、或如权利要求20至28中任一项所述的多核苷酸、或如权利要求31所述的药物组合物、或其组合。

43.一种改善或缓解哺乳动物或人的与tau-蛋白相关疾病、病症或病况相关的症状的方法，所述症状例如像包括推理、情境判断、记忆能力、学习、空间导航等的认知功能损害或丧失，所述方法包括向患有所述疾病或病况的所述哺乳动物或人施用如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段、或如权利要求20至28中任一项所述的多核苷酸、或如权利要求31所述的药物组合物、或其组合。

44.一种诊断患者的tau-蛋白相关疾病、病症或病况的方法，其包括在样品中或原位检测如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段与所述tau蛋白的表位的免疫特异性结合，其包括以下步骤：

a.使所述样品或怀疑含有所述tau蛋白的特定身体部分或身体区域与如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体或与其功能片段接触，其中所述抗体或其片段会结合所述tau蛋白的表位；

b.使所述抗体或其功能片段与所述tau蛋白结合形成免疫复合物；

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

45.一种诊断患者tau-蛋白相关疾病、病症或病况的倾向的方法，其包括在样品中或原位检测如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段与所述tau蛋白的表位的免疫特异性结合，其包括以下步骤：

a.使所述样品或怀疑含有所述tau抗原的特定身体部分或身体区域与如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段接触，所述抗体或其片段会结合所述tau蛋白的表位；

b.使所述抗体或其功能片段与所述tau抗原结合形成免疫复合物；

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

e.比较所述免疫复合物的量与正常对照值；

其中所述聚集体的量比正常对照值增加时表示所述患者患有tau-蛋白相关疾病或病况或具有发生其的风险。

46.一种在用如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段治疗后监测患者的最小残留疾病的方法，其中所述方法包括：

a.使所述样品或怀疑含有所述tau抗原的特定身体部分或身体区域与如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段接触，所述抗体或其片段会结合至所述tau蛋白的表位；

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

e.比较所述免疫复合物的量与正常对照值，

47.一种预测用如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体、或其功能片段治疗的患者的反应性的方法，其包括

c.检测所述免疫复合物的形成；以及

e.比较所述治疗开始之前和之后所述免疫复合物的量，

其中所述聚集体的量减少时表示所述患者对所述治疗具有高度反应可能性。

48.一种用于检测和诊断tau-蛋白相关疾病、病症或病况的测试试剂盒，其包含如权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段。

49.一种载体，其包含如权利要求20至28中任一项所述的多核苷酸，其中所述多核苷酸是以操作方式连接。

50.一种宿主细胞，其包含如权利要求49所述的载体。

51.如权利要求50所述的宿主细胞，其产生根据权利要求1至19中任一项所述的嵌合或人源化抗体或其功能片段。

52.如权利要求50或51所述的宿主细胞，其为哺乳动物细胞。

53.如权利要求50或51所述的宿主细胞，其为中国仓鼠卵巢细胞。

54.如权利要求51所述的宿主细胞，其为2012年3月6日以DSM 25743寄存的大肠杆菌2B6A10C11-H。

55.如权利要求51所述的宿主细胞，其为2012年3月6日以DSM 25744寄存的大肠杆菌2B6A10C11-L。

56.如权利要求51所述的宿主细胞，其为2012年3月6日以DSM 25745寄存的大肠杆菌3A8A12G7-H。

57.如权利要求51所述的宿主细胞，其为2012年3月6日以DSM 25746寄存的大肠杆菌3A8A12G7-L。

58.一种产生如前述权利要求中任一项所述的人源化抗体或其功能片段的方法，其包括在适于所述抗体或片段表达的条件下培养如权利要求50至57所述的宿主细胞，以及回收所述抗体或片段。

59.如权利要求1至15以及18中任一项所述的人源化抗体或其功能片段，其包含重链恒定区，其中所述重链恒定区在其C-末端处包含赖氨酸。

60.如权利要求1至12中任一项所述的人源化抗体或其功能片段，其包含重链，其中所述重链包含SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:30或SEQ ID NO:31的氨基酸序列。

61.如权利要求60所述的人源化抗体或其功能片段，其进一步包含轻链恒定区，其中所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:18的氨基酸序列。

62.如权利要求1至12或60中任一项所述的人源化抗体或其功能片段，其进一步包含轻链，其中所述轻链包含SEQ ID NO:22或SEQ ID NO:23的氨基酸序列。