TW201201838A

TW201201838A - Antibodies to human GDF8

Info

Publication number: TW201201838A
Application number: TW100118221A
Authority: TW
Inventors: Trevor Stitt; Esther Latres
Original assignee: Regeneron Pharma
Priority date: 2010-05-26
Filing date: 2011-05-25
Publication date: 2012-01-16
Also published as: MX2012013369A; BR112012029986B1; KR20130109981A; ES2647389T3; CY1119445T1; JP5896993B2; GT201200318A; US20110293630A1; RU2567805C2; NO2576618T3; IL223003A; JO3340B1; TWI602917B; MX357145B; US20190023777A1; EP2576618A1; US20140356369A1; ZA201208525B; WO2011150008A1; BR112012029986A2

Description

201201838 六、發明說明：【發明所屬之技術領城】本發明是有關對生長及分化因子-8 (GDF8)具有特異性的抗體及其抗原·結合片段。【先前技術】已知作為肌肉生長抑制素(myostatin)的生長及分化因子-8 (GDF8)是生長因子TGF-β超家族的成員。 GDF8是骨路肌質量的負向調節子，在發育中與成人骨骼肌中高度表現。 GDF8在物種間是局度守悝的，且鼠與人類gdF8 的胺基酸序列相同（人類GDF8核酸序列和胺基酸序列顯示於 SEQ ID NO : 338-339) (McPherron et al. 1977

Nature 387:83-90)。一些人類疾病與肌肉組織的喪失或損傷有關，例如肌肉萎縮症(muscular dystrophy)、肌肉萎縮(muscle atrophy)、肌肉消瘦症候群(muscle wasting syndrome)、肌肉減少症（sarcopenia)與惡病質（cachexia)，且GDF8 的抑制劑可應用於治療這些疾病或病症。在例如 US 6,096,506 ' US 7,320,789 ' US 7,807,159 ' WO 2007/047112 ' WO 2005/094446 ' US 2007/0087000、US 7,261，893 與 WO 2010/070094 中揭示抗-GDF8的抗體以及治療方法。 201201838 【發明内容】發明摘述本發明提供特異性結合人類生長及分化因子8 (GDF8)的人類或人類化抗體及人類或人類化抗體之抗原-結合片段。這些抗體的特徵在於以高親和性結合至 GDF8以及中和GDF8活性的能力。抗體可以是全長(例如IgGl或IgG4抗體）或可僅包含一抗原結合部分(例如Fab、F(ab’)2或scFv片段），且可被修飾成影響功能性，例如消除殘餘效應子功能(Reddy et al. (2000) J. Immunol. 164:1925-1933)。在一個具體例中，本發明抗體包含選自於由下列 SEQ ID NO所構成之群組中的重鏈可變區(HCVR)胺基酸序列：2、18、34、50、66、82、98、114、130、 146、162、178、194、210、226、242、258、274、290、 306、360與376或其實質相同的序列。在一個具體例中，本發明抗體包含選自於由下列 SEQ ID NO所構成之群組中的輕鏈可變區(LCVR)胺基酸序列：10、26、42、58、74、90、106、122、138、 154、170、186、202、218、234、250、266、282、298、 314、322、368與384或其實質相同的序列。在一個具體例中，本發明抗體包含有HCVR胺基酸序列以及LCVR胺基酸序列，其中HCVR/LCVR對序列是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組： 2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、 201201838 114Π22、130/138、146/154 ' 162/170、178/186、 194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、 274/282、290/298、306/314、114/322、360/368 以及 376/384。本發明亦載示一種人類或人類化抗體或抗體之抗原-結合片段，其包含一重鏈互補決定區3 (HCDR3)胺基酸序列以及一輕鏈CDR3胺基酸序列(LCDR3)，其中HCDR3胺基酸序列是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組：8、24、40、56、72、88、104、120、136、 152、168、184、200、216、232、248、264、280、296、 312、366及382或其實質相同的序列，而LCDR3胺基酸序列是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組： 16、32、48、64、80、96、112、128、144、160、176、 192、208、224、240、256、272、288、304、320、328、 374及390或其實質相同的序列。在另一個具體例中，抗體或其片段包含選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組的HCDR3/LCDR3胺基酸序列對：8/16、24/32、 40/48、56/64、72/80、88/96、104/112、120/128、136/144、 152/160、168/176、184/192、200/208、216/224、 232/240、248/256、264/272、280/288、296/304、 312/320、120/328、366/374 及 382/390。在一個相關具體例中，抗體或其片段進一步包含重鏈CDR1 (HCDR1)與CDR2 (HCDR2)胺基酸序列及輕鏈CDR1 (LCDR1)與CDR2 (LCDR2)胺基酸序列，其 201201838 中HCDR1胺基酸序列是選自於由下列SEQ ι〇 N〇所構成之群組：4、20、36、52、68、84、100、116、132、 148、164、180、196、212、228、244、260、276、292、 308、362及378或其實質相同的序列；HCDR2胺基酸序列是選自於由下列S E q〗D N 〇所構成之群組：6、 22、38、54、70、86、102、118、134、150、166、182、 198 、 214 、 230 、 246 、 262 、 278 、 294 、 310 、 364 及 380或其實質相同的序列；LCDR1胺基酸序列是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組·· 12、28、44、60、 76、92、108、124、140、156、172、188、204、220、 236、252、268、284、300、316、324、370 及 386 或其實質相同的序列；而LCDR2胺基酸序列是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組：14、30、46、62、78、 94、110、126、142、158、174、190、206、222、238、 254、270、286、302、318、326、372 及 388 或其實質相同的序列。在另一個具體例中，HCDiU、HCDR2 與HCDR3是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組：36/38/40、116/118/120、228/230/232、362/364/366 以及 378/380/382 ;而 LCDIU、LCDR2 與 LCDR3 是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組：44/46/48、 124/126/128 、 236/238/240 、 370/372/374 與 386/388/390。在又另一個具體例中，重鏈與輕鏈CDR 是選自於由下列SEQ ID NO所構成之群組： 36/38/40/44/46/48( 例如 21-E5) 、 201201838 116/118/120/124/126/128( 例如 8D12) 、 228/230/232/236/238/240( 例如 1A2) 、 362/364/366/370/372/374(例如 H4H1657N2)以及 378/380/382/386/388/390(例如 H4H1669P)。在一個相關具體例中，本發明包括特異性結合 GDF8的抗體或抗體之抗原_結合片段，其中抗體或片段包含重鏈與輕鏈可變區序列中所含有的重鏈與輕鏈 CDR區，其選自於由下列SEQIDNO所構成之群組： 2/10、18/26、34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、 114/122、130/138、146/154、162/170、178/186、 194/202、210/218、226/234、242/250、258/266、 274/282、290/298、306/314、114/322、360/368 以及 376/384。用於鑑定落在HCVR與LCVR胺基酸序列中的CDRs的方法及技術在該技藝中為已知的，且可用來鑑定本文中揭示之特定HCVR及/或LCVR胺基酸序列内之CDRs。可用於鑑定CDRs邊界的例示性習知技術包括，例如Kabat界定法、Chothia界定法以及AbM 界定法。在通常術語中，Kabat界定法是以序列變異性為基礎，Chothia界定法是以結構環區的位置為基礎，而AbM界定法是一種介於Kabat與Chothia法之間的折衷法。參見，例如 Kabat, “Sequences of Proteins of Immunological Interest，’’ National Institutes of Health Bethesda, Md. (1991); Al-Lazikani et al., J. Mol. Biol. 273:927-948 (1997);以及 Martin a/·, Proc. 201201838 知.86:9268-9272 (1989)。公開資料庫亦可用來鑑定抗體内的CDR序列。本發明亦提供編碼本發明抗體或抗原_結合片段之核酸分子。帶有本發明之抗體編碼核酸的重組型表現載體與3玄專載體引入的宿主細胞，以及藉由培養本發明之宿主細胞來製造本發明抗體之方法亦被本發明所涵括。在一個具體例中’本發明抗體包含由選自於下列 SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼的 HCVR : 1、17、33、49、65、81、97、113、129、145、 16卜 177、193、209、225、24卜 257、273、289、305、 359與375 ’或其具有至少95%同源性之實質相似序列。在一個具體例中，本發明抗體包含由選自於下列 SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼的 LCVR ·· 9、25、4卜 57、73、89、105、m、137、153、 169、185、201、217、233、249、265、281、297、313、 321、367與383 ’或其具有至少95%同源性之實質相似序列。在一個具體例中，本發明抗體包含HCVR胺基酸序列以及LCVR胺基酸序列，其中HCVR/LCVR對序列是由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核酸分子對所編碼：1/9、17/25、33/4卜 49/57、65/73、81/89、 97/105、113/12卜 129/137、145/153、161/169、177/185、 193/201、209/217、225/233、241/249、257/265、 201201838 273/281、289/297、305/313、113/321、359/367 與 375/383。本發明亦載示一種人類或人類化抗體或抗體片段，其包含由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼的HCDR3 : 7、23、39、55、71、 87、103、119、135、15卜 167、183、199、215、231、 247、263、279、295、311、. 365 及 381，或其具有至少95%同源性之實質上相似序列，以及由選自於下列 SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼的 LCDR3 : 15、31、47、63、79、95、111、127、143、 159、175、19卜 207、223、239、255、27卜 287、303、 319、327、373及389,或其具有至少95%同源性之實質上相似序列。在一個具體例中，HCDR3/LCDR3组是由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列對所編碼：7/15、23/31、39/47、55/63、71/79、87/95、 103/111 、 119/127 、 135/143 、 151/159 、 167/175 、 183/191、199/207、215/223、231/239、247/255、 263/271、279/287、295/303、311/319、119/327、365/373 及 381/389。在一個相關具體例中，抗體或抗體片段進一步包含 HCDR1 與 HCDR2，以及 LCDR1 與 LCDR2，其中 HCDR1是由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼：3、19、35、5卜67、83、99、115、 13卜 147、163、179、195、2U、227、243、259、275、 201201838 29卜307、361及377 ’或其具有至少95%同源性之實質相似序列’ HCDR2是由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼：5、21、37、53、69、 85、101、117、133、149、165、181、197、213、229、 245、261、277、293、309、363 及 379，或其具有至少95%同源性之實質相似序列，LCDR1是由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼： 11、27、43、59、75、91、107、123、139、155、171、 187、203、219、235、251、267、283、299、315、323、 369及385，或其具有至少95%同源性之實質相似序列，而LCDR2是由選自於下列SEQ ID NO所構成之群組的核苷酸序列所編碼：13、29、45、61、77、93、 109、125、14卜 157、173、189、205、22卜 237、253、 269、285、301、317、325、371 及 387，或其具有至少95%同源性之實質相似序列。在一個具體例中，該抗體或抗體片段包含由下列SEQ ID NO的核酸序列組所編碼的重鏈與輕鏈CDRs : 35/37/39/43/45/47、 115/117/119/123/125/127、227/229/231/235/237/239、 361/363/365/369/371/373 或 377/379/381/385/387/389。本發明亦載示一種特異性結合GDF8的單離抗體或抗體片段，其包含選自由下列所構成之群組的重鏈. 與輕鏈 CDRs : (a) HCDR1 ，含有式 Χ^ΧΙΧ'Χ^Χ'Χ^Χ'Χ8 (SEQ ID NO : 329)之胺基酸序列，其中 X1 為 Gly;X2 為 Phe;X3 為 Thr;X4 為 Phe;

S 201201838 X5 為 Ser ; X6 為 Ala 或 Ser ; X7 為 Phe 或 Tyr ; X8 為 Gly 或 Ala ； (b) HCDR2 ，含有式 χ^χΐχΐχ^χ^χ^χ^χ8 (SEQ ID NO : 330)之胺基酸序列，其中X1為lie ; X2為Gly或Ser ; X3為Tyr或 Gly ; X4 為 Ser 或 Asp ; X5 為 Gly ; X6 為 Gly ; X7 為 Ser 或 Asn ;而 X8 為 Ala 或 Glu ; (c) HCDR3，含有式 X 丨-x2-x3-x4-x5-x6-x7-x8-x9-x10-xu-x12-x13-x14 (SEQ ID NO : 331)之胺基酸序列，其中X1為Ser或 Ala ; X2 為 Thr 或 Lys ; X3 為 Asp 或 lie ; X4 為 Gly 或 Ser ; X5 為 Ala 或 His ; X6 為 Trp 或 Tyr ; X7 為 Lys 或 Asp ; X8 為 Met 或 lie ; X9 為 Ser 或 Leu ; X1G 為 Gly 或 Ser ; X11 為 Leu 或 Gly ; X12 為 Asp 或 Met ; X13 為 Val或Asp ; X14為Val或不存在；（d)LCDRl，含有式 xLxLx^XtxS-X^SEQIDNO : 332)之胺基酸序列，其中 X1 為 Gin; X2 為 Asp 或 Gly ; X3 為 lie ; X4 為 Ser ; X5 為 Asp 或 Asn ;而 X6 為 Tyr 或 Τι·ρ ; (e)LCDR2，含有式Χ^ΧΙΧ3 (SEQ ID NO : 333)之胺基酸序列，其中 XI 為 Thr 或 Ala ; X2 為 Thr 或 Ala ;而 X3 為 Ser ;以及⑴LCDR3 區，含有式 Χ^ΧΙΧ^Χ^Χ^Χ^Χ'ΧΙΧ9 (SEQ ID NO : 334)之胺基酸序列，其中X1為Gin ; X2 為 Lys 或 Gin ; X3 為 Ala 或 Tyr ; X4 為 Asp 或 Asn ; X5 為 Ser ; X6 為 Ala 或 Phe ; X7 為 Pro ; X8 為 Leu ;而 X9 為 Thr。本發明亦載示一種完整人類或人類化抗體或抗體

S 12 201201838 片段，當藉由表面電漿共振分析(例如BIACORE™)來測定時’其以約1 nM或更低的親和性（以解離常數「KD」表示）結合GDF8。在某些具體例中，本發明抗體展現出約700 pM或更低、約500 pM或更低、約320 pM或更低、約160 pM或更低、約1〇〇 pM或更低、約50 pM或更低、約10 PM或更低或約5 pM或更低的KD。 Ύ 一”〜丨八住几主八央貝或人

類化單株抗體（mAb)，其特異性結合並抑制人類 GDF8,且當藉由GDF8誘發螢光素酶分析來測定時展現出低於或等於約10nV[、約5nM或更低、約3nM 或更低、約2 nM或更低、約i nM或更低、約5〇〇 pM 或更低或約200PM或更低的IC5〇。如下面實驗節中所不，本發明的一些抗-GDF8抗體以遠高於GDF8 光素酶生物刀析中# 阻斷極相關蛋白質 ⑷在-個具體例中，本發明提供」= 體或抗體的抗原_結^段，魏 = 說相對於GDF8展頊ψ s , 舌性來 mm 少約1〇倍、至少約5〇仵、的二至少約200倍、至少約獅件、1口, 、、勺1〇〇〇倍或至少約1500倍高的％。。。至> 體。二糖化型態的抗姆8抗是有用的了；：1;Γ非所欲糖化位址的修，可能體會增加例如抗^=_鏈上的海藻糖部分的抗依賴性細胞毒性（ADCC)(參見 13 201201838

Shield et al. (2002) JBC 277:26733)。在其他應用中，糖化修飾可能是為了修飾補體依賴性毒性(CDC)而做出。本發明包括結合GDF8的特定抗原決定區且能夠阻斷GDF8生物活性的抗-GDF8抗體。在第一個具體例中，本發明抗體在從約1至約109、從約1至約54、從約1至約44、從約1至約34、從約1至約24以及從約1至約14胺基酸内結合成熟GDF8蛋白（SEQ ID NO : 340)的一個抗原決定區。在第二個具體例中，本發明抗體在從約35至約109、從約45至約1 〇9、從約 55至約109、從約65至約109、從約75至約109、從約85至約109、從約92至約109或從約95至約109 胺基酸内結合成熟GDF8蛋白（SEQ ID NO : 340)的一或多個抗原決定區。在第三個具體例中，該抗體或抗體的抗原-結合片段從約胺基酸殘基48至約72、從約 48至約69、從約48至約65、從約52至約72、從約 52至約65或從約56至約65結合於成熟人類GDF8 蛋白質的一個抗原決定區内。在一個相關具體例中，本發明提供一種抗體或其抗原-結合片段，其與另一種抗體競爭特異性結合 GDF8，該抗體或其抗原-結合片段包含SEQ ID NO : 36/38/40/44/46/48 、 116/118/120/124/126/128 、 228/230/232/236/238/240、362/364/366/370/372/374 或 378/380/382/386/388/390 的 201201838

HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3 胺基酸序列組合。在一個具體例中，本發明的抗體或抗原-結合片段與另一種抗體競爭特異性結合GDF8，該抗體或抗原-結合片段包含SEQ ID NO : 2/10、18/26、 34/42、50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、 146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、 226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、 306/314、114/322、360/368 或 376/384 的 HCVR/LCVR 胺基酸序列對。在又另一個相關具體例中，本發明提供辦識由另一種抗體所辨識之GDF8的抗原決定區之抗體或其抗原-結合片段，該抗體或其抗原-結合片段包含下列SEQ ID NO的HCDR/LCDR胺基酸序列組合·· 36/38/40/44/46/48、116/118/120Λ24/126/128、 228/230/232/236/238/240 > 362/364/366/370/372/374 ^ 378/380/382/386/388/390。在一個具體例中，本發明的抗體或抗原-結合片段辨識由另一種抗體所辨識之 GDF8的抗原決定區，其包含下列SEQ ID NO的 HCVR/LCVR 胺基酸序列對：2/10、18/26、34/42、 50/58、66/74、82/90、98/106、114/122、130/138、 146/154、162/170、178/186、194/202、210/218、 226/234、242/250、258/266、274/282、290/298、 306/314、114/322、360/368 或 376/384。本發明亦載示一種包含重組型人類或人類化抗人類GDF8抗體及可接受載劑的組成物。本發明更包括 15 201201838 載體及含有載體（具有編碼本發明人類抗-GDF8抗體之核酸分子）的宿主細胞，以及製造這些新穎抗體的方法，該方法包含在允許生產蛋白質且回收所產蛋白質的條件下令含有編碼本發明抗-GDF8抗體或抗體片段之核酸的宿主細胞生長。本發明亦載示使用本發明之抗體或其抗原結合部分抑制GDF8活性的方法。在一個具體例中，該方法包含將本發明之抗體或抗體片段投與罹患因為抑制 GDF8活性而能被改善之病症的人類個體。在較佳具體例中，以本發明抗體或抗體片段治療的人類個體需要改善葡萄糖恆定、降低脂肪質量、增加胰島素敏感性、改善腎臟功能及/或降低脂肪累積。本發明抗體或抗體片段可用於治療、預防或抑制特徵在於骨質流失 (bone loss)的疾病或病況（包括骨質疏鬆症、骨量減少 (osteopenia)、骨關節炎與骨折）、治療代謝症候群、對抗因為持續投與糖皮質素和類固醇激素所致的肌肉消痩，或與肌肉萎縮症、肌肉萎縮、肌肉消瘦症候群、肌肉減少症與惡病質相關的肌肉減少。其他目的以及優點將因為檢閱下面詳細說明而變得清楚。發明之詳細說明在說明本發明方法之前，要理解本發明不限於所述特定方法以及實驗條件，因為這些方法以及條件可 2〇12〇1838 能會改變。亦要理解本文中所用術語僅供說明特定具體例之用，而不是限制性的’因為本發明的範疇將僅會受到隨附申請專利範圍所限制。如本說明書及隨附申請專利範圍中所用，單數幵^ 式「一」、「一種」與「該」包括複數指示對象(referent)，除非内文另有清楚指明。因此’例如參照「方法」包括一或多種方法，及/或本文所述類型的步驟及/或習於技藝者在閱頃過本揭不内谷後將會變得清楚者。除非另有定義’所有此處使用的技術以及科學術語具有與本發明所屬技藝中具有通常技藝者普遍理解的相同意思。如本文所用，術語「約」，當使用在有關特定引用的數值時，表示該數值可自所引用的數值起改變達不超過1%。舉例而言，如本文所用，詞句「約 100」包括99與101以及其間的所有數值(例如，991、 99.2、99.3、99.4 等等）。儘管任何類似或等同於本文所述的方法以及材料可應用於實施或測試本發明，現將說明較佳的方法以及材料。定義「人類生長分化因子-8」、「GDF8」與「肌肉生長抑制素」交替使用來意指由SEQ ID NO : 338的核酸序列所編碼的蛋白質以及具有SEQIDNC^ 339(前肽）與340(成熟肽)的胺基酸序列的蛋白質。術語「抗體」，如本文所用，包括免疫球蛋白分子， 17 201201838 其含有4個多肽鏈，藉由雙硫鍵交互連結的2個重鏈以及2個輕(L)鏈，以及其集合體(例如IgM)。各個重鏈含有1個重鏈可變區域(此處縮寫為HCVR或VH) 以及1個重鍵怪定區域。重鍵怪定區域含有3個區， CH1、CH2以及CH3。各個輕鏈含有1個輕鏈可變區域 (此處縮寫為LCVR或VL)以及1個輕鏈恆定區域。輕鏈恆定區域含有1個區（CL1)。VH與VL區域可進一步分成具有超變異性的區域（命名為互補決定區域 (complementarity determining regions, CDRs))，散佈有較為守恆的區域(命名為骨架區域(FR))。各個¥}^與由3個CDRs以及4個FRs所構成，以下列順序從胺基端往羧基端排列：FIU、CDIU、FR2、CDR2、FR3、 CDR3、FR4。在本發明的不同具體例中，抗體（或其抗原結合部分）的FR可能與人類生殖細胞序列相同’或可以經天然或人工修飾。胺基酸一致序列可以依據並行分析兩個或多個CDRs來確定。術浯「抗體」’如本文所用，亦包括完整抗體分子的抗原-結合片段。如本文所用，術語抗體的「抗原結。4刀」、抗體的「抗原·結合片段」及類似者包括任何天然存在的、酵素上所得到的、合成的或經遺傳工程的多肽或糖蛋白，其特異性結合抗原而形成複合物抗體的抗原-結合片段可以使用任何適當的標準技術（諸如蛋白水解消化或涉及操作並表現編碼抗體可變與視情況恆定區之DNA的重組型遺傳工程技術）而 201201838 衍生自例如完整抗體分子。這樣的DNA是已知的及/ 或易於從例如商業來源、DNA圖書館（包括，例如噬函體抗體圖書館)獲得或可合成。DNA可以被定序且以化學的方式或使用分子生物技術來操作，例如以將一或多個可變及/或恆定區排入適當構型中，或引入會產生半胱胺酸殘基的密碼子、修飾、添加或刪除胺基酸等。抗原-結合片段的非限定實例包括：（i)Fab片段； (ii)F(ab’)2 片段；（iii)Fd 片段；（iv)Fv 片段；（v)單鏈 fv (scFv)分子；（vi)dAb片段；與(vii)由模擬抗體的超變異區域之胺基酸殘基所構成的最小辨認單元（例如單離的互補決定區域(CDR))。其他經工程化的分子（諸如雙鍵抗體、三鏈抗體、四鏈抗體以及微抗體涵如本文「抗原結合片段」的詞句卜 ^ 柷肢的抗原-結合片段典型含有至少丨個可變區。可變區可以是任何大小與胺基酸構成，且通常含有° 少1個鄰近1或多個骨架序列或在i或多個骨 L”DR。在帶有與Vl區締合之vh區的抗原“士人 =二VH以及vL區可相對另一者位在適：舉例而「可變區是二聚物且含有一聚物°另擇地’抗體的抗原·結合片段可i有早體vH4 vL區。 δ有在某些具體例中，抗體的抗原_結合片段可含夕1個共價連結至少1個值定區的可變區。可以在本 19 201201838 發明之抗體的抗原·結合片段中發現到的可變與恆定區的非限定例示性構型包括··⑴Vh_Ch1 ; (ϋ) ; (ill) Vh-Ch3 ； (iv) Vh-Ch1-Ch2 ； (v) Vh-ch1.Ch2-Ch3 ; (vi) VH-CH2-CH3 ; (vii) Vh-Cl ; (viii) Vl Ch1 ;㈣ Vl-Ch2 ;⑻ Vl-Ch3 ; (xi) Vl_Ch1_Ch2 ;⑽) VL-CH1_CH2_CH3 ; (Xiii) vl_Ch2_Ch3 ;以及㈣ VL-CL。在可變與恆定區的任一種構形中（包括上面列示的任一種例示性構型），可變與恆定區可以是彼此直接連結或藉由完整或部分樞紐或連接子區域而連結。樞紐區域是由至少2個（例如5、1〇、15、2〇、4〇、6〇或更多個)胺基_構成，它在單—多肽分子中的相鄰可麦和/或怪疋區間產生彈性或半彈性鍵聯。此外，本發明之抗體的抗原-結合片段可包含有上列可變與怪疋區構型的任一者彼此和/或與一或多個單體Vpj或 VL區以非共價締合(例如藉由雙硫鍵(等))所形成的同型二聚體或異型二聚體（或其他集合體）。就完整抗體分子而言，抗原_結合片段可以是單特異性或多特異性(例如雙特異性）。抗體的多特異性抗原-結合片段典型包含有至少2個不同可變區，其中各個可變區能夠特異性結合至個別抗原或相同抗原上的不同抗原決定區。任一種多特異性抗體形式，包括此處所揭示的例示性雙特異性抗體形式，可使用該技藝中可取得之慣用技術而改造成使用於本發明之抗體的抗原-結合片段中。

20 201201838 本發明抗體可透過補體依賴性細胞毒性（C D C)或抗體依賴性細胞媒介細胞毒性(ADCC)而作用。「補體依賴性細胞毒性」（CDC)意指藉由本發明抗體在補體存在下溶解抗原表現細胞。「抗體依賴性細胞媒介細胞毒性」（ADCC)意指細胞媒介的反應，其中表現Fc受體(FcRs)的非特異性細胞毒殺細胞（例如自然殺手(NK) 細胞、嗜中性球與巨噬細胞）會辨識結合在標的細胞上的抗體並因此造成標的細胞溶解。CDC與ADCC可以使用該技藝中熟知且可取得的分析來測定（參見，例如美國專利第5,500,362號與第5,821,337號，以及Clynes et al·, Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 95.652-656 (\99名。術語「特異性結合」或類似者意指抗體或其抗原_ 結合片段與抗原形成一個在生理條件下相對穩定的複合物。特異性結合的特徵可以是約lxl〇·6 Μ或更低的解離常數。用於決定2個分子是否特異性結合的方法在該技藝中為習知的並包括，例如，平衡透析、表面電漿共振以及類似者。舉例而言，「特異性結合」人類 GDF8的抗體，當使用在本發明的上下文時，包括結合人類GDF8或其部分(例如，含有SEQ ID NO : 340 的至少6個連續胺基酸之肽）的抗體，其中當以表面電聚共振分析來測定時’ KD低於約1 〇〇〇 nM，低於約500 nM，低於約300 nM，低於約200 nM，低於約100 nM，低於約90 nM ’低於約80 nM，低於約70 nM，低於約 60 nM ’低於約50 nM ’低於約40 nM，低於約30 nM， 21 201201838 低於約20 nM，低於約10 nM，低於約5 nM，低於約 4 nM ’低於約3 nM，低於約2 nM，低於約1 nM或低於約〇·5 nM (參見例如本文的實施例3)。但是，特異性結合人類GDF8的單離抗體可能具有與其他抗原（諸如來自於其他物種的GDF8分子）有交叉反應性。術語「高親和性」抗體意指當藉由表面電漿共振 (例如BIACORE™或溶液-親和性ELISA)來測量時，能夠以約1〇·8 Μ或更低、約ΙΟ·9 Μ或更低、約ΙΟ·〗0 Μ 或更低、約1CT11 Μ或更低，或約10_12 Μ的解離常數 (KD)結合GDF8的抗體。依據術語「低解離速率」或「Koff」表示當藉由表面電漿共振（例如BIACORE·™)來測量時，以 1x10 3s 1或更低，較佳地ΐχίοΎ1的速率常數自GDF8 解離的抗體。「中和」或「阻斷」抗體欲意指一種結合至GDF8 而抑制GDF8之生物活性的抗體。抑制GDF8的生物活性可藉由測定GDF8生物活性的一或多個指標來評估。GDF8生物活性的這些指標可以藉由該技藝中已知的數種標準活體外或活體内分析中的一或多者來評估。與對應的生殖細胞序列相較之下，本文所揭示的完整人類抗-GDF8抗體在骨架和/或重鏈以及輕鏈可變區的CDR區域處可包含有一或多個胺基酸置換、插入和/或刪除。此等突變可易於藉由將此處所揭示的胺

22 201201838 基酸序列與可得自於例如公開抗體序列資料庫的生殖細胞序列相比對而確認。本發明包括抗體及其抗原-結合片段，它們是自此處所揭示的任一胺基酸序列衍生而來，其中在一或多個骨架和/或CDR區域内的一或多個胺基酸回復突變成對應的生殖細胞殘基（等）或回復突變成對應生殖細胞殘基（等）的守恆性胺基酸置換 (天然或非天然）(這樣的序列改變於此意指為「生殖細胞回復突變」）。該技藝中具有通常知識者可容易地由此處所揭示的重鏈以及輕鏈可變區域序列製造出眾多抗體以及抗原-結合片段，它們包含有一或多個獨立的生殖細胞回復突變或其組合。在某些具體例中，所有在Vh和/或VL區中的骨架和/或CDR殘基突變回復成生殖細胞序列。在其他具體例中，僅有某些殘基突變回復成生殖細胞序列，例如僅僅在FR1的前8個胺基馱或FR4的最後8個胺基酸中被發現到有突變殘基，或僅僅在CDR1、CDR2或CDR3中發現到有突變殘基。再者’本發明的抗體在骨架和/或CDR區域内可含有2或多個生殖細胞回復突變的組合，亦即，其中某些單獨殘基突變回復成生殖細胞序列，而某些其他不同於生殖細胞序列的殘基仍保留著。在得到之後，含有一或多個生殖細胞回復突變的抗體以及抗原-鲈合片段可易於測試一或多個所欲特性，諸如増進的^ 合特異性、增高的結合親和性、增進或増高^拮抗= 促政生物特性（視情況）、降低的免疫原性等。以這^ 23 201201838 一般的方式所得到的抗體以及抗原_結合片段涵括在本發明中。一本發明亦包括抗-GDF8抗體，其包含有本文所揭示之具有一或多個守恆性置換的HCVR、LCVR和/或 CDR胺基酸序列任一者的變異體。舉例來說，相對於此處所揭示的任一 HCVR、LCVR和/或CDR胺基酸序列，本發明包括具有HCVr'LCVr*/或CDR胺基酸序列有例如1〇個或更少、8個或更少、6個或更少、4 個或更少個等守恆性胺基酸置換的抗-GDF8抗體。在一個具體例中，該抗體包含有一選自SEQ ID NO: 360 與376 (有8個或更少個守恆性胺基酸置換)之胺基酸序列的HCVR。在另一個具體例中，該抗體包含有一選自SEQ ID NO : 360與376 (有6個或更少個守恆性胺基酸置換)之胺基酸序列的HCVR。在另一個具體例中’該抗體包含有一選自SEQ ID NO : 360與376 (有 4個或更少個守恆性胺基酸置換）之胺基酸序列的 HCVR。在另一個具體例中，該抗體包含有一選自SEQ ID NO : 360與376 (有2個或更少個守恆性胺基酸置換)之胺基酸序列的HCVR。在一個具體例中，該抗體包含有一選自SEQ ID NO : 368與384 (有8個或更少個守恆性胺基酸置換)之胺基酸序列的LCVR。在另一個具體例中，該抗體包含有一選自SEQ ID NO : 368 與384 (有6個或更少個守恆性胺基酸置換)之胺基酸序列的LCVR。在另一個具體例中，該抗體包含有一 24 201201838 選自SEQ ID NO : 368與384 (有4個或更少個守恆性胺基酸置換)之胺基酸序列的LCVR。在另一個具體例中，該抗體包含有一選自SEQ ID NO : 368與384 (有 2個或更少個守恆性胺基酸置換）之胺基酸序列的 LCVR。在某些具體例中’本發明的抗體或抗體片段可接合至一個治療部分（「免疫接合物」），諸如細胞毒素、化學治療藥物以及免疫抑制劑或放射線同位素。如本文所用’就本發明而言，「單離的抗體」意指已被鑑定且自其天然環境的至少一組份中被分離及/ 或回收的抗體。舉例而言，已自生物、組織或細胞(抗體天然存在或天然被製造出）的至少一組份中被分離或移除的抗體是「單離的抗體」。單離的抗體亦包括在重組型細胞中原位的抗體，以及已進行至少一種純化或分離步驟的抗體。依據某些具體例，分離抗體可能實質上沒有其他細胞物質和/或化學品。如本文所用，術語「表面電漿共振」意指一種在生物偵測器矩陣中藉由偵測蛋白質濃度變化而容許分析即時交互作用的光學現象(例如使用BIAc〇reTM系統 (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala, Sweden and Piscataway，N J.))。如本文所用，術語「KD」’欲意指特定抗體_抗原交互作用的平衡解離常數。術語「抗原決定區」包括任何能夠特異性結合免 25 201201838 疫球蛋白或τ細胞受體的決定位，較佳地多肽決定位。在某些具體例中，抗原決定區決定位包括分子在化學上有活性的表面基團，諸如胺基酸、糖側鏈、填酸基圑或磺醯基，而在某些具體例中，可具有特定三維結構特性，及/或特定電荷特性。抗原決定區是一個被抗體所結合的抗原區域。在某些具體例中，抗體被認為會偏好在蛋白質及/或巨分子的複合混合物中辨識其標的抗原而特異性結合抗原。舉例而言，當KD 低於或等於1(Τ8 Μ，低於或等於ΙΟ·9 Μ，或低於或等於10_1() Μ時，抗體被認為特異性結合抗原。當至少約60%至75%的樣品表現出單一類型的多肽時，蛋白質或多肽為「實質純的」、「實質同源的」或「實質純化的」。多肽或蛋白質可能是單體或集合體。實質純的多肽或蛋白質典型地含有約50%、60%、 70%、80%或90% w/w的蛋白質樣品，通常約95%，且較佳地超過99%是純的。蛋白質純度或同源性可以藉由一些該技藝中已知的方式來表示，諸如蛋白質樣品的聚丙烯醯胺凝膠電泳，接著以該技藝中熟知的染料來對凝膠染色之後視觀單一多肽帶。為某些目的起見，可藉由使用HPLC或其他該技藝中已知用於純化的方式提供較高分辨率。如本文所用，術語「多肽類似物或變異體」意指含有至少25個胺基酸片段(實質與胺基酸序列的一部分相同）且具有下列特性的至少一者的多肽：（1)在適當

S 26 201201838 的結合條件下特異性結合GDF8，或(2)阻斷gDF8生物活性的能力。典型地，多肽類似物或變異體含有關於天然存在序列的守恆性胺基酸置換（或插入或刪除）。類似物典型地有至少20個胺基酸長，至少5〇、 60、7〇、80、90、100、150或200個胺基酸長或更長，且經常與天然存在的多肽一樣長。較佳的胺基酸置換為下列：（1)降低對蛋白水解的感受性、（2)降低對氧化的感受性、（3)改變結合親和性以形成蛋白質複合物、（4)改變結合親和性，以及賦予或修飾該等類似物其他生理化學或功能性特性。類似物可包括各種天然存在肽序列以外的突變序列。舉例而言’單一或多個胺基酸置換(較佳地守恆性胺基酸置換）可以在天然存在序列中做出（較佳地在形成分子間接觸之區域以外的多肽部分）。守恆性胺基酸置換實質上不會改變親代序列的結構特性（例如取代胺基酸應不會易於破壞出現在親代序列中的螺旋，或分裂載示母結構之其他類型的二級結構）。該技藝中已被辨別的多肽二級與三級結構實例描述於pr0teins, Structures and Molecular Principles (Creighton 1984 W. H. Freeman and Company, New York; Introduction to Protein Structure (Branden & Tooze, eds., 1991, Garland Publishing，NY);與 Thornton et at. 1991 Nature 354:105 。非肽類似物在醫藥產業中一般作為藥物，其具有 27 201201838 與模版肽類似的特性。這些類型的非肽化合物命名為「肽模擬物」或「擬肽(peptidomimetics)」（參見，例如 Fauchere (1986) J. Adv. Drug Res· 15:29; and Evans et al. (1987) J. Med. Chem. 30:1229)。以相同類型的 D-胺基酸(例如，以D-離胺酸代替L-離胺酸)有系統地置換共有序列的一或多個胺基酸也可用來產生更為穩定的肽。此外，含有一致序列或實質相同一致序列變異之有限的肽可藉由該技藝中已知的方法生成(Rizo et al· (1992) Ann. Rev. Biochem. 61:387)，例如藉由添加能夠形成分子内雙硫橋而將肽環化的内部半胱胺酸殘基。術語「序列同一性百分比」在核酸序列的背景中意指在兩個相同的序列中當就最大對應性來排列的殘基。序列同一性比對的長度可以超過一段至少約9個或更多核苷酸，通常至少約18個核苷酸，更長至少約 24個核苷酸，典型地至少約28個核苷酸，更典型地至少約32個核苷酸，以及較佳地至少約36、48或更多個核苷酸。在該技藝中有一些不同的演算法，其可用來測定核苷酸序列同一性。例如，多核苷酸序列可以使用FASTA、Gap或Bestfit來比對，這些是 Wisconsin Package Version 10.0, Genetics Computer Group (GCG)，Madison, Wis. FASTA 的程式，包括例如程式FASTA2與FASTA3 ’提供查詢序列與研究序列之間最佳重複區域的排列和序列同一性百分比(Pearson 28 201201838 (1990) Methods Enzymol. 183:63-98 and (2000) Methods Mol. Biol. 132:185-219)。除非另有指明，使用針對特定程式或演鼻法的内定參數。例如，核酸序列之間的序列同一性百分比可以如GCG第6.1版中使用FASTA以其内定參數(6個字大小且計分矩陣的 NOPAM因子）或使用GAP以其内定參數來測定。除非另有指明，核酸序列的指示對象涵括其互補序列。因此，具有特定序列之核酸分子的指示對象應狂解馮涵祜具互補股 ...... 藝中父替地使用術S吾「序列同一性百分比」、「序列相似性百分比」以及「序列同源性百分比」。在本件申請案中，這些術語就核酸序列來說具有相同意思。 &思指核酸或其片段時，「實質相似性」或「實質序列相似性」表示若藉由任何序列同一性的已知寅瞀 =諸如FAST、BLAST或Gap，如上所述）來測定時^ 备在有適當核苷酸插入或删除的情況下與另一 (或其互補股）最佳排列日夺，在至少約9〇〇/。，至，丨、约，至少約96%，至少約咖，至少約98%或；；、'•勺99%核苷酸鹼基中有核苷酸序列同一性。同當應用於多肽時，術語「實質同一」麵當兩値相最佳地制時(諸=昭= 法GAP或BESTFIT使用内定空位權重） =… 80%序列同-性，至少約9G%， ^ >約 98%或至少^州序列同—性。較佳地， 29 201201838 基位置因為守恒性胺基酸置換而有所差異。「守恆性胺基酸置換」是一種胺基酸殘基置換成另一種帶有類似化學性質（例如電荷或疏水性)之侧鏈(R基團）的胺基酸殘基。一般來說，守恆性胺基酸置換實質不會改變蛋白質的官能性質。在2或多個胺基酸序列彼此因為守恆性置換而有所不同的情況下，序列同一性百分比或相似性程度可以向上調整而校正置換的守恆性質。用來做這個調整的方法對於習於該技藝者來說是熟知的。參見，例如 Pearson (1994) Methods Mol. Biol. 24:307-331。帶有具類似化學性質的侧鏈之胺基酸的基團實例包括1)脂肪族侧鏈：甘胺酸、丙胺酸、绳胺酸、白胺酸與異白胺酸；2)脂肪族羥基側鏈：絲胺酸與蘇胺酸；3)含醯胺的側鏈：天門冬醯胺酸與麩醯胺酸； 4)芳族側鏈：苯丙胺酸、酪胺酸與色胺酸；5)鹼性側鏈：離胺酸、精胺酸與組胺酸；以及6)含硫側鏈為半胱胺酸與曱硫胺酸。較佳的守恆性胺基酸置換基團為：纈胺酸-白胺酸•異白胺酸、苯丙胺酸-酪胺酸、離胺酸-精胺酸、丙胺酸-纈胺酸、天門冬胺酸-麩胺酸，以及天門冬醯胺酸-麩醯胺酸。另擇地，守恆性置換可以是任何在 Gonnet et al. (1992) Science 256:1443-45 的PAM250對數-相似矩陣中具有正值的改變。「適度守恆」置換是任何在PAM250對數-相似矩陣中具有非負值的改變。有關多肽的序列相似性’其亦可意指為序列同一 S' 30 201201838 性，典型疋使用序列分析軟體來測量。蛋白質分析軟體使用分派給各種置換、删除以及其他修飾（包括守怪性胺基酸置換)的相似性的測量法來配射目似序列。例如’ GCG含有諸如「Gap」與「Bestfit，」的程式，它們可以與内定參數一起用來決定關係相近之多肽（諸如來自於不同物種之生物的同源性多肽）或野生型蛋白質與其突變蛋白質之間的序列同源性或序列同一性。參見，例如GCG第6.1版。多肽序列也可以使用採内定或建議參數的FASTA (—種在GCG第6.1版中的程式）來比對。FASTA (例如FASTA2與FASTA3)提供查詢以及研究序列之間最多重複區域的排列以及百分比序列同一性(Pearson (2000)上文）。當要將本發明的序列與含有大量來自不同生物之序列的資料庫比對時，另一個較佳的演算法是電腦程式BLAST，特別是 blastp或blastn，使用内定參數。參見，例如Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410 以及 Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-402。針對同源性來比較的多肽序列長度通常為至少約 16個胺基酸殘基，至少約20個殘基，至少約24個殘基，至少約28個殘基或至少約35個殘基。當搜尋含有大量來自不同生物之序列的資料庫時，較佳地是比對胺基酸序列。術語「有效量」是抗體或抗體的抗原-結合片段達到特定所述目的之濃度或數量。「有效量」的抗-GDF8 31 201201838 抗體或其抗體的抗原-結合片段可憑經驗來決定。此外冶療有效量」疋抗-GDF8抗體或其抗原-纟士入片段的濃度或數量，其能有效達到所述目的之a療效用。個數量亦可憑經驗來決定。 ’' 人類抗體的製備用於生成包括完整人類單株抗體之單株抗體的方法在該技藝中是已知的。任何此種已知方法可^於本發明的上下文内以製造出特異性結合G]DF8的人類抗體。、使用VELOCIMMUNEtm技術或任何其他用於生成單株抗體的已知方法，首先分離出帶有人類可變區域以及小鼠恆定區域之對GDF8具高親和性的嵌二二體。如同在下面實驗節中’鑑定抗體的特徵並所欲的特性，包括親和性、選擇性、抗原決定區等。' 小鼠恆定區域取代成所欲的人類恆定區域以生成本發明的完整人類抗體，例如野生型或經修飾的IgGi或

IgG4。儘管篩選出的恆定區域可能會依據特定用途：可變區域中的高親和性抗原-結合以及標的特異性特性而改變。八、一般而言，當藉由結合至抗原（固定於固相或在溶液相中）來測量時，本發明的抗體具有非常高的親和性’典型具有約10-】2至約10-9 Μ的KD。小^怪定^ 域是以所欲人類恆定區域來取代以產生本發明的完全 32 201201838 人類抗體’例如野生型IgGl (SEQ IDNO: 335)或IgG4 (SEQ ID NO : 336)，或經修飾的igGi或igG4 (例如 SEQ ID NO : 337)。儘管篩選出的恆定區域可能會依據特定用途、可變區域中的高親和性抗原-結合以及標的特異性特性而改變。生物等效性本發明的抗-GDF8抗體以及抗體片段涵括帶有由那些所述抗體變化而來，但仍保有結合人類GDF8能力之胺基酸序列的蛋白質。當與親代序列相較之下，此專變異抗體以及抗體片段包含有一或多個胺基酸加入、刪除或置換，但仍展現出基本上與所述抗體等效的生物活性。同樣地，當與所揭示的序列相較之下，本發明之抗-GDF8抗體編碼DNA序列涵括具有一或多個核苷酸加入、删除或置換，但仍編碼基本上與本發明之抗-GDF8抗體或抗體片段生物等效的抗_GDF8 抗體或抗體片段的序列。上面詳述此等變異胺基酸以及DNA序列的實例。舉例而言，若2個抗原_結合蛋白或抗體是藥學等效物或藥學代用品，當它們以相同莫耳劑量在類似實驗條件下投與的吸收速率或程度未顯示出明顯差異 (不論是單一劑量或多劑量），它們被視為生物等效的。若一些抗體在它們的吸收程度上相等但在它們的吸收速率上沒有，它們將會被視為等效物，因為此等 33 201201838 在吸收速率上的差對於在例如長輪广有目的並且在歸睛被反映，是必要的’並且上維持有效生體藥物濃度來說不在醫學上沒有差2所研究的特定藥物產品來說被視為就其=:具::中’若2個嶋合蛋白在臨床上它們是生二及效力而言並無有意義的差異，之間ί以:ί體：中’若患者在參考產品與生物產品險（包括I ❿沒冑翻料Μ反應的風原性上的樣切換的情況下，在免疫物等效的。低有效性)時，它們是生傕用U具’若2個抗原-結合蛋白就條件或、壷鉍“结Α說均疋藉由共同的機制或作用機制而作用達致此等機制已知的程度’它們是生物等效的。生物等效性可以藉由活體内或活體内方法證實。 ^勿等效性測量法包括，例如⑷在人類或其他哺乳動 t體内的活體㈣試，其中隨著時間函數測量抗體或八代謝物在血液、血聚、血清或其他生物液中的濃度； (b)已使用人·體内生物可彻性數據校正並且可合理預測的活體外測試；⑷在人類或其他哺乳動物體内的活體内職’其中隨著時間函數測f抗體(或其標的)之適當急性藥理學效用；以及(d)在已證實抗體的安全性、效力或生物可彻性或生物等效㈣充分控制 34 201201838 b床試驗中。本發明之抗-GDF8抗體的生物等效變異體可以藉由例如，製造各種殘基或序列置換，或刪除不是生物活性所必需的末端或内部殘基或序列而建構。舉例而 °對於生物活性來說不是必要的半胱胺酸殘基可以被刪除或取代為其他會在再復性之後防止形成不必要或不正確分子間雙硫橋的胺基酸。在其他上下文中，生物等效性抗體可包括抗_GDF8抗體變異體，其含有會修飾抗體之糖化特性的胺基酸改變（例如消除或移除糖化的突變）。抗原決定區拼圖以及相關技術為了篩選結合特定抗原決定區的抗體（例如那些會阻斷IgE結合其高親和性受體的抗體），可施行諸如在Harlow and Lane的「Antibodies」上文中所述的慣用交叉-阻斷分析。其他方法包括丙胺酸掃描突變體、肽墨點（Reineke (2004) Methods Mol Biol 248:443_63)，或肽切割分析。此外，可以採用諸如抗原決定區切除、抗原決定區抽出以及化學修飾抗原的方法(Tomer (2000) pr〇tein Science 9:487-496)。術語「抗原決定區」意指一個B和/或T細胞在抗原上反應的位址。Β細胞抗原決定區可以由連續胺基酸或透過蛋白質的三級摺疊並排的非連續胺基酸而形成。由連續胺基酸所形成的抗原決定區在暴露於變性溶劑時典型會維持著，而由三級摺疊所形成的抗原決 35 201201838 定區在以變性溶劑處理時會消失。抗原決定區在獨特的空間構形中典型包括至少3個，以及更常見至少5 個或8_ 10個胺基酸。修飾輔助的剖析（modification-assisted profiiing MAP)，亦已知為以抗原結構為基礎的抗體刳析 (ASAP) ’是—種將大量單株抗體(mAbs)針對相同抗原而依據各抗體對化學或酵素修飾之抗原表面的結合圖譜相似性來分類的方法(US 2004/0101920)。各個分類可以反映出清楚不同於另一分類所呈現之抗原決定區或與另一分類所呈現之抗原決定區部分重疊的獨特抗原決定區。這個技術提供快速過濾遺傳上相同的抗體’以使得特徵鑑定可以集中在遺傳上明顯不同的抗體。當應用於融合瘤篩選時，MAp有助於鑑定生產帶有所欲特質之mAbs的罕見融合瘤細胞株。MAP也可以用來將本發明的抗-GDF8抗體分成結合不同抗原決定區的抗體群。 ^本發明包括抗-GDF8抗體及抗體的抗原_結合片段，其結合人類GDF8的特異性抗原決定區（SEQ ID N〇 . 340)的特定抗原決定區且能夠阻斷gDF8的生物活性。在一個具體例中，抗體或其抗原_結合片段結合在含有胺基酸殘基1至1〇9 ; 1至54 ;丨至44 ; 1至 34 ’ 1至24 ;以及1至14的抗原決定區内。在另一個。體例中，抗體或其抗原_結合片段結合在含有胺基酸殘基 65 至 72 ; 35 至 109 ; 45 至 1〇9 ; 55 至 109 ; 65 36 201201838 至 109 ; 75 至 109 ; 85 至 109 ; 92 至 109 ;或 95 至 109 的抗原決定區内。在另一個具體例中，抗體或其抗原_ 結合片段結合在含有胺基酸殘基48至72 ; 48至69 ; 48至65 ; 52至72 ; 52至65 ;或56至65的抗原決定區内。在特定具體例中，抗體或其抗原-結合片段可結合在2個或更多個抗原決定區内。本發明亦包括抗體及其抗原-結合片段，其結合野生型成熟GDF8 (SEQ ID NO : 340)但不會結合具有要比SEQ ID NO : 340的完整胺基酸序列還要少的肽。舉例而言’本發明包括結合野生型成熟GDF8 (SEQ ID NO : 340)但不會結合由SEQ ID NO : 340的10至40 個連續胺基酸構成之肽的抗-GDF8抗體。在本發明的某些具體例中’抗-GDF8抗體結合含有SEQ ID NO : 340的野生型成熟人類GDF8,但不會結合一或多個具有選自於由下列胺基酸構成之群組的胺基酸序列的 GDF8 肽：SEQ ID NO: 340 的 1-14、1-18、7-42、48-65、 48-69、48-72、52-65、52-72、56-65、56-72、65-72、 73-90、75-105以及91-105。在某些具體例中，抗_GDF8 抗體不會結合任何前述GDF8肽。用以決定某抗體是否能夠結合特定GDF8肽的方法對習於該技藝者來說是已知的。其他例示性方法於本文實施例7中例示說明，其中GDF8肽連接於微球，抗體添加至接合有該肽的微球’且在洗滌步驟之後偵測接合抗體的微球。接合机體不存在表示抗體不會連結至要測試的特定 37 201201838 肽0 本發明亦包括單離的人類抗體或其抗原-結合片段，其特異性結合野生型成熟人類GDF8 (例如含有 SEQ ID NO : 340的蛋白質或多肽），但不會結合嵌合 GDF8建構物（其中GDF8的某些胺基酸以不相同但相關蛋白質（諸如TGFp-l)之對應胺基酸序列來取代）。在一個實例中，嵌合建構物是GDF8/TGFP-1嵌合體，其中成熟GDF8的胺基酸48-72經TGFp-l的對應胺基酸序列（例如TGFp-l的胺基酸49-76)取代。一個這樣的嵌合體實例是以SEQ ID NO : 352作為代表（參見本文中的實施例4與6)。因此，在某些具體例中，本發明之抗體特異性結合野生型成熟人類GDF8 (SEQ ID NO : 340) ’但不會結合至SEq id NO : 352的嵌合 GDF8/TGFp-l建構物，這表示該等抗體所結合的抗原決定區包括或涵括位在SEQ ID NO : 340之殘基48至 72内的胺基酸。阻斷生物分析，諸如本文實施例4中所提及者’亦可用來間接確認抗體是否結合野生型成熟人類GDF8 (SEQ ID NO : 340)但不會結合嵌合 GDF8/TGFp-l建構物，例如SEq ID no : 352的建構物。舉例而言’阻斷野生型成熟人類GDF8的生物活性但不會阻斷嵌合GDF8/TGFP-1的生物活性的抗體被視為會結合GDF8被嵌合建構物中對應的TGFp-l 序列所取代的部分。相同地’本發明亦包括單離的人類抗體或其抗原_ 38 201201838 結合片段，其在生物分析中阻斷野生型成熟GDF8-媒介的活性但不會阻斷嵌合GDF8建構物（例如 GDF8/TGFP-1嵌合物，其中成熟GDF8的胺基酸48-72 經TGFP-1的對應胺基酸序列(例如SEQ ID NO : 352) 取代）的活性。一個可在於本發明的這個態樣之上下文的例示性GDF8生物分析於本文實施例4中提出，儘管其他能夠測定GDF8細胞活性的類似生物分析是可思及的。本發明包括結合與本文中所述任一特定例示性抗體所結合的抗原決定區相同之抗—GDF8抗體。相同地，本發明亦包括與本文中所述任一特定例示性抗體交叉競爭結合GDF8或GDF8片段的抗-GDF8抗體。藉由使用該技藝中所熟知的慣用方法，吾人可易於決定抗體是否如同指示對象抗_GDF8抗體般結合至相同抗原決定區，或與參考抗_GDF8抗體競爭結合。舉例而言，為決定測試抗體是否如同本發明 -咖8抗體般結合至相同抗原決定區，料㈣^ 在飽和條件下結合GDF8蛋自質姐。接著，評 =體結合至GDF8分子的能力。若職抗體能夠在，考抗-GDF8抗體鮮結合之後結合至咖8 推斷測試抗體結合至參考抗_咖8抗體料的不同抗面，若_抗體無法在參考抗__ 几體乾和—之讀合至GDF8好可能結合至與本發明之參考抗-圓抗體 39 201201838 原決定區相同的抗原決定區。接而可以實行額外的慣用貫驗(例如肽突變以及結合分析）以確認觀察到測試抗體沒有結合事實上是因為結合至與參考抗體相同的抗原決定區或若空間阻斷（或另一種現象）是被觀察到沒有結合的原因。可以使用ELISA、RIA、Biacore、流動式細胞測量術或任何其他在該技藝中可供使用之定罝或定性抗體-結合分析來執行這類的實驗。依照本發明的某些具體例’當在競爭性結合分析中測量（參見’例如 Junghans et al.， Cancer Res. 1990:5〇:1495-l5〇2)時，2個抗體結合至相同（或重疊) 抗原決定區，若例如一個過量1-、5-、10·、20-或100-倍的抗體會抑制另一者結合達到至少50%，但較佳地 75%、90%或甚至是99%。另擇地，若基本上在抗原中所有會減低或消除一抗體結合的胺基酸突變也會減低或消除另一者結合，2個抗體被視為是結合至相同抗原決定區。若僅有一部分會減低或消除一抗體結合的胺基酸突變會減低或消除另一者結合，2個抗體被視為是具有「重疊的抗原決定區」。為決定抗體是否會與參考抗-GDF8抗體競爭結 a攸2個方面實施上述結合方法學：就第1個方面，容許參考抗體在飽和條件下結合GDF8分子’接而評估測試抗體結合GDF8分子。就第2個方面，容許測試抗體在飽和條件下結合GDF8分子，接而評估參考抗體結合至GDF8分子。若在2個方面中，僅有第一（飽 201201838 和）抗體能夠結合GDF8分子，那麼推斷測試抗體會與參考抗體競爭結合至GDF8。如同在該技藝中具有通常知識者所知悉的’與參考抗體競爭結合的抗體不必然會結合至與參考抗體相同的抗原決定區，但可能是因為結合重疊或相鄰抗原決定區而在空間上阻斷參考抗體的結合。物種選擇性以及物種交又反應性依據本發明的某些具體例，抗_GDF8抗體結合至人類GDF8而不會結合至其他物種的GDF8。另擇地，在某些具體例中，本發明的抗_GDF8抗體結合至人類 GDF8以及—或多個非人類物種的gdF8。舉例而言，本發明的抗_GDF8抗體可以結合至人類gDF8並且視情況結合或不結合小鼠、大鼠、天竺鼠 '倉鼠、沙鼠、豬、貓、狗、兔、山羊、綿羊、牛、馬、駱駝、馬來猴、狨猿、恆河猴或黑猩猩GDF8的一或多者。免疫接合物（immunoconjugates) 本發明涵括接合至一治療部分(「免疫接合物」)(諸如細胞毒素、化學治療藥物、免疫抑制劑或放射性同位素）的人類或人類化抗-GDF8單株抗體。細胞毒性劑包括任何對細胞有害的藥劑。用於形成免疫接合物的適當細胞毒性劑以及化學治療劑的實例在該技藝中是已知的，參見例如WO 05/103081。 201201838 多特異性抗體本發明的抗體可以是單特異性、雙特異性或多特異性。多特異性抗體可以是對一個標的多肽的不同抗原決定區具有特異性或者可能含有對超過一個標的多肽具有特異性的抗原-結合區。參見例如Tutt et al. (1999) J. Immunol. 147:60-69 ； Kufer et ah, 2004, Trends

Biotechnol· 22:238-244。本發明的抗_gdF8抗體或其部分可以連結至另一個功能性分子（例如另一個肽或蛋白質）或與該另一個功能性分子一起表現。舉例而 δ ’抗體或其片段在功能上可以連結（例如，藉由化學偶合、遺傳融合、非共價締合或其他）至一或多個其他分子實體，諸如另一個抗體或抗體片段，以產生帶有第二種結合特異性的雙特異性或多特異性抗體。舉例而言，本發明包括雙特異性抗體，其中免疫球蛋白的一臂對於人類GDF8或其片段具有特異性，而免疫球蛋白的另一臂對第二治療標的具有特異性或接合至— 個治療部分。可以使用於本發明的例示性雙特異性抗體形式涉及使用第一免疫球蛋$(Ig)CH3區以及第二Ig 區’其中第-與第二IgCH3區因為至少1個胺基酸而彼此不同，以及其中與缺乏該胺基酸差異的雙特異性抗體相較之下，至少丨個胺基酸差異會減低該雙特異性抗體結合至蛋白質A。在一個具體例中，該第一 k 42 201201838 CH3區結合蛋白質A而該第二Ig CH3區含有1個會減低或消除蛋白質A結合的突變，諸如H95R修飾(按照IMGT外顯子編號；按照EU編號為H435R)。該第二CH3可進一步包含有Y96F修飾(按照IMGT ;按照 EU為Y436F)。可以在第二CH3中發現到的更多修飾包括：在IgGl抗體的情況下，D16E、L18M、N44S、 K52N、V57M以及V82I (按照IMGT ;按照EU為 D356E、L358M、N384S、K392N、V397M 以及 V422I); 在IgG2抗體的情況下，N44S、K52N以及V82I (IMGT ;按照 EU 為 N384S、K392V 以及 V422I);以及在 IgG4 抗體的情況下，Q15R、N44S、K52N、V57M、 R69K、E79Q以及V82I (按照IMGT ;按照EU為 Q355R、N384S、K392V、V397M、R409K、E419Q 以及V422I)。上述雙特異性抗體形式方面的變異在本發明範圍中是可預想的。治療投藥以及配方本發明提供包含有本發明之抗體或其抗原-結合片段的治療組成物。依據本發明的治療組成物的投藥可進一步與適當載劑、賦形劑以及其他併入配方中以提供改善輸送、遞送、耐受性以及類似者的藥劑一起投藥。可以在對於藥學化學家來說為熟悉的處方書中找到大量適當的配方：Remington’s Pharmaceutical

Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA。這些 43 201201838 配方包括’例如粉末、糊劑、軟膏、凝膠、壤、油、脂質、含有囊泡的脂質（陽離子或陰離子）（諸如 LIPOFECTINTM)、DNA接合物、無水吸收糊劑、水中油與油中水乳劑、乳化卡波蠟(具有各種分子量的聚乙二醇）、半固體凝膠以及含有卡波蠟的半固體混合物。只要配方中的活性成分不會因為配製而不具活性，且配方與投藥途徑是生理學上可相容的且可耐受的，任一前述混合物在依據本發明的治療與療法中是適當的。亦參見 Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311 。劑量可以視要被投藥的個體的年齡與身材、標的疾病、病況、投藥途徑以及類似者來決定。當本發明的抗體用於在成人患者體内治療與GDF8有關的病況和疾病（例如肌肉萎縮症、肌肉萎縮、肌肉消瘦症候群、肌肉減少症與惡病質）時，通常以約〇.〇1至約2〇 mg/kg體重、約0.1至約10 mg/kg體重或約〇.〖至約5 mg/kg體重的單一劑量靜脈内投與本發明抗體是有益的。可以視病況的嚴重性調整治療頻率以及持續時間。在其他非經口投藥或經口投藥中，抗體可以一個與上述預定劑量對應的劑量來投與。當病況特別嚴重時’劑量可以根據病況增高至會造成明顯負作用的數量（若有需要的話）。已知有各種不同的遞送系統並且可用於投與本發 201201838 明的醫藥組成物，例如封裳在脂質體囊、能夠表現突變病毒的重板㈣雜吞作用(參見，例如〇/；?-44?Q άά^Ί\ ，J> Bio1· Chem. 262 ·4429-4432)。引入的方法包括，但不限肉内、腹膜内、靜脈内、皮下、g 、服途徑。組成物可以藉由任何習：二：膜上以及口藉由輸液或食團注射、藉由透過上^^與’例如口腔黏膜、直腸以及小腸黏膜#)吸收他具有生物活性的_—起投與。投身、性或局部的。疋王方Γ王醫藥組成物亦可在囊财投藥，特财在脂質體中（多見 Langer (1990) Science 249:1527-1533)。、本發明的醫藥組成物可以’例如使用標準注射針與注射器來皮下或靜脈㈣送。此外，關於皮下遞送，筆式遞送裝置很容易應用於遞送本發明的醫藥組成物。這樣的-種筆式遞送|置可以是重複使用或抛棄式。可重複使用的筆式遞送裝置通常使用含有醫藥組成=的可換式卡昆。一旦卡匣内的所有醫藥組成物被投藥且卡E是空的’空的卡匣可易於丟棄並且置換成含有醫藥組成物的新卡匣。那麼就可以重複使用筆式遞送裝置。就拋棄式筆式遞送裝置來說，沒有可換式卡H °更確切地來說，拋棄式筆式遞送裝置在裝置的 =為内預先填充醫藥組成物供選購。一旦貯器沒有醫藥組成物，整個襞置就被丟棄。 45 201201838 許多可重複使用的筆式以及自動注射遞送裝置在皮下遞送本發明之醫藥組成物方面有實用性。實例包括，但不限定於 AUTOPEN™ (Owen Mumford，Inc” Woodstock, UK) ' DISETRONIC™ pen (Disetronic Medical Systems，Burghdorf，Switzerland)、HUMALOG MIX 75/25™ pen > HUMALOG™ pen ' HUMALIN 70/30™ pen (Eli Lilly and Co., Indianapois, IN) ' NOVOPEN™ I、II 與 III (Novo Nordisk，Copenhagen， Denmark) ' NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark) ' BD™ pen (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ) > OPTIPEN™ > OPTIPEN PRO™ ' OPTIPEN STARLET™ 以及〇PTICLIKTM (sanofi-aventis，Frankfurt, Germany)，僅舉幾個為例。在皮下投遞本發明之醫藥組成物方面有實用性的拋棄式筆式遞送裝置的實例包括，但不限於SOLOSTAR™ pen (sanofi-aventis)、FLEXPEN™ (Novo Nordisk)以及 KWIKPEN™ (Eli Lilly) 、the SURECLICK™ Autoinjector (Amgen, Thousand Oaks, CA) ' PENLET™ (Haselmeier，Stuttgart，Germany)、EPIPEN (Dey，L.P.) 以及 HUMIRAtm Pen (Abbott Labs，Abbott Park IL)，僅舉幾個為例。在某些情況下，醫藥組成物可以控制釋放系統的方式投遞，例如使用泵或聚合材料。在另一個具體例中，控制釋放系統可以被置放在鄰近組成物之標的

S 46 201201838 處’因而僅需要全身性劑量的一部分。刑1於經口投藥的組成物實例包括固體或液體劑，力^丨疋錢劑（包括糖衣鍵以及經薄膜包覆的錠 i、^、、旱:貝粒、、散劑製劑、膠囊(包括軟膠囊)、糖知寿1:、、广于液等。這樣一個組成物是藉由公眾所劑了稀釋劍造且含有醫藥製備領域中所習用的載例為乳糖、殿粉、蔗糖、硬脂酸鎂及類似物/1的貫可注射的製劑可包括用於靜脈内、皮下 J肌肉内注射、點滴式灌注等的劑型的方法來製備。舉_言= 衣”丨可以藉由將上述抗體或其鹽溶解、懸浮或 ::=:用於注射的無菌水性介質或油性介質中ί 二備。作為用於注射的水性介f，有例如生理食 ^葡萄糖和其他可以與適當助溶劑（諸如醇，（例如 =醇）、多元醇(例如丙二醇、聚乙二醇）、非離子性介 f氧==聚山梨醇g| 8G、HCa5G(氫化萬麻油的 =稀⑼_)加成物))一起使用之辅助劑等的等供使用。作為油性介質，有例如芝麻油 =用1可以與諸如苯甲酸㈣1醇等的助溶劑: 在適Π可Γ用。由此所製備的注射劑較佳地填充有利地，上述用於經口或非經口使物被製備成適於活性成分i次投藥之單位劑量的= 47 201201838 $這種呈】單位劑量的劑型包括，例如旋齊卜丸劑、膠，：注射劑（安瓿）、栓劑等。所含的前述抗體數量 i-帛疋1單位劑量中每劑型約5至約5⑽特別是注射劑形式’偏好所述抗體含有約5至约i〇〇mg以及在其他劑型約10至約25〇mg。抗體的治療用途本發明的抗體尤其可應用於治療、預防和/或改善任何與GFD8活性相關的疾病或病症。更特別地，本卷明的抗體可應用於藉由因為阻斷GDF8活性來增加個體之肌肉強度/力量及/或肌肉質量及/或肌肉功能’ 或改相好代謝⑽類、脂質以及蛋白質處理）而改善的任何病況或疾病。可使用本發明抗_GDF8抗體來治，的例不性疾病、病症或病況包括，但不限於肌肉減 >症、惡病⑽發性或對於其他就來說是次發性， ==:”_或慢_塞性肺病）、肌肉消痩 ”肌肉萎縮症，例如因為不用、固定 ^治療或外科手術干預(例如體關節骨折貝:置 == 奐等)或者因為需要換氣所致或相二 ⑽癌症、肥胖症、糖尿病：： ί帕萎縮性脊輝側索硬化㈣λ 鬆症、骨關節炎、骨量減少、常糖尿病、肥胖症、營養異

S 呂萎鈿、忮性阻塞性肺病與厭食）。 48 201201838 本發明包括治療投藥攝生法，其含有將本發明抗 -G D F 8抗體組合至少一種額外的治療有效成分來投藥。此等額外治療有效成分的非限定實例包括其他 GDF8拮抗劑（例如GDF8的小分子抑制劑或其他 GDF8抗體或結合分子）、生長因子抑制劑、免疫抑制劑、消炎劑、代謝抑制劑、酵素抑制劑以及細胞毒性/ 細胞生長抑制劑。額外的治療有效成分（等）可以在本發明之抗-GDF8抗體投與之前、同時或之後投與。抗體的診斷用途本發明的抗-GDF8抗體也可以用來偵測和/或測量樣品中的GDF8，例如供診斷之用。舉例而言，抗 -GDF8抗體或其片段可以用來診斷特徵在於異常表現 GDF8 (例如過度表現、不足表現、缺乏表現等）的病況或疾病。有關GDF8的例示性珍斷分析可包含，例如令得自於一患者的樣品與本發明之抗-GDF8抗體接觸，其中抗-GDF8抗體標定有可偵測到的標記或報導分子。另擇地，未標定的抗-GDF8抗體可以組合本身可被偵測到標定之二次抗體一起使用於診斷應用。可偵測到的標記或報導分子可以是放射性同位素，諸如 3H、14C、32P、35S或1251 ;螢光或化學發光部分，諸如螢光素異氰酸鹽或玫瑰紅；或諸如鹼性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、辣根過氧化酶，或螢光素酶的酵素。可用來 <貞測或測量樣品中的GDF 8的特定例示性分析包 49 201201838 括酵素結合免疫吸附分析法(ELISA)、放射免疫測定法 (RIA)以及螢光-活化細胞選別（FACS)。依f本發明，可用於咖8診斷分析中的樣品包括任何得自於患者的組織或體液樣品，其在正常或病理狀態下含有可制數量的GDF8蛋白或其片段。— 般來說’測量GDF8在自健康患者(例如未羅患與異常 G D F 8位準或活性有關之疾病或錢的患者)所得到之特定樣品+的鱗以在開始時建立基線，或標準GDF8 位=GDF8的這個基線位準接而可以與得自於被懷疑帶有GDF8相關疾病或病況之個體的樣品中所的GDF8位準來比對。【實施方式】實施例實施例1·製造抗人類GDF8的人類抗體以該技藝中已知的任何方法（參見，例如出如 and Lane ’上文）來免疫小鼠。在—個具體例中，直接對VELOaMMUNE®小鼠（含有編碼人類砲重鍵及κ 輕鏈可變區域的DNA)投與GDF8抗原與佐劑以刺激免疫反應。適當的佐劑包括完全以及不完全佛氏佐劑、MPL+TDM佐劑系統⑸邑^^或Rmi(胞壁醯二肽）（參見〇，Hagan 2000 Vaccine AdjUvam，by Human

Press，Totawa，NJ)。藉由標準抗原_特異性免疫分析來監測抗體免疫反應。當達到所欲的免疫反應時，在一

S 50 201201838 個具體例中，收取表現抗體的B細胞並且與小鼠骨髓瘤細胞融合以保留其活力並形成融合瘤細胞株。筛選並挑選融合瘤細胞株而鑑定出會生產抗原-特異性抗體的細胞株。 ' 另擇地，抗原_特異性融合瘤細胞可以藉由流式細胞儀來分離。簡言之，在融合至骨髓瘤細胞之後，匯集的融合瘤細胞在HAT培養基中生長1〇天。接而收取細胞並且以2吨/ml經生物素標定的GDF8染色1 小繼而添加藻紅素·鍵徵親和素。經營光標定的細胞是藉由流式細胞儀來分選（以每孔單個細胞的方式分選至含有融合瘤生長培養基的96孔培養盤中），培養8-10小時’並且薛選條件培養基是否存在具功能性的所欲單株抗體。 >在另一個具體例中，經由直接分離脾臟細胞而產生抗-GDF8抗體。如同u s 2〇〇7/〇28〇945Αι中所述，抗原-特古異性抗體直接自經抗原免疫之b細胞分離出來而不W合至骨髓瘤細胞。由單離出的適當重組型細胞建立表現抗體的穩定重組型ch〇細胞株。基因應用分析

’針對各個抗體鏈鑑定基因利用率(gene 顯示依據本發明之選定抗體的基因利用貫施例2.基因應為了碼抗體可變區域的核酸的胺基酸序列，針 usage)。表丨顯； 51 201201838 率。抗體標識符號(HCVR/LCVR): 21-E5 (SEQ ID NO : 34/42) ； 21-B9 (SEQ ID NO ： 18/26) ； 21-E9 (SEQ ID NO ： 98/106) ； 21-A2 (SEQ ID NO ： 2/10) ； 22-D3 (SEQ ID NO ： 50/58) ； 22-E6 (SEQ ID NO ： 66/74) ； 22-G10 (SEQ ID NO ： 82/90) ； 1A2 (SEQ ID NO ： 226/234)； 20B12 (SEQ ID NO ： 274/282) ； 58C8 (SEQ ID NO ： 242/250) ； 19F2 (SEQ ID NO ： 258/266) ； 8D12-1 (SEQ ID NO ： 114/122) ； 4E3-7 (SEQ ID NO ： 194/202);； 9B11-12 (SEQ ID NO ： 162/170) ； 4B9 (SEQ ID NO ： 226/234) ； 1H4-5 (SEQ ID NO ： 210/218) ； 9B4-3 (SEQ ID NO ： 178/186) ； 3E2-1 (SEQ ID NO ： 290/298) ； 4G3-25 (SEQ ID NO ： 306/314) ； 4B6-6 (SEQ ID NO ： 130/138)； H4H1657N2 (SEQ ID NO ： 360/368) ； H4H1669P (SEQ ID NO ： 376/384) 〇 s 表1 抗艎重4 連可變區域輕鏈可變區域 VH D JH VK JK 21-E5 4-39 3-22 5 1-17 1 21-B9 4-39 3-22 5 1-17 1 21-E9 4-39 3-22 5 1-17 1 21-A2 3-23 1-7 4 3-15 4 22-D3 3-21 5-5 4 1-17 2 22-E6 4-39 3-22 5 1-17 1 22-G10 2-5 1-7 4 1-16 4 1A2 3-23 1-7 3 3-15 4 20B12 3-23 6-13 6 3-15 4 58C8 3-23 1-7 3 3-15 2 19F2 3-30 1-26 4 2-28 3 8D12-1 3-30 1-7 4 2-137* 5* 52 201201838 4E3-7 3-23 1-7 4 4 9B11-12 3-23 1-7 3 4 4B9 3-23 1-7 3 __3-15 4 1H4-5 3-30 6-13 6 ----- — 4 9B4-3 3-23 1-7 4 —ill5 4 3E2-1 4-34 4-4 4 ----- —~1ΐ9 4 3A4-3 3-21 5-5 4 —~ϋ7 1 4G3-25 3-30 3-3 4 5 4B6-6 3-30 1-7 4 2-137* 5* H4H1657N2 3-23 2-21 6 4 H4H1669P 3-33 3-9 6 4 使用於下列實施例的對照建構物下列實驗中包括不同對照建構物（抗-GDF8抗體以及其他GDF8拮抗物）以供比對之用。對照建構物定名如下：對照I:人類抗-GDF8抗體，帶有包含「My〇29」之對應區的胺基酸序歹彳（亦即SEQ ID n〇 : 16以及18) 的重鏈以及輕鏈可變區域，如US 7,261,893中所提及；對照II:人類抗-GDF8抗體，帶有包含「2 112 κ」之對應區的胺基酸序列的重鏈以及輕鏈可變區域（亦即 SEQ ID NO . 118 以及 120)，如 us 2006/0263354 中所提及；對照III:ACtRIIB-FC融合建構物，帶有SEQ ID NO : 391的胺基酸序列；以及對照lv :變異 ActRIIB-Fc融合建構物，與對照Ιπ相同，除了 seq ι〇 NO:391的位置64處的丙胺酸取代為精胺酸[R64]。（並非所有的對照建構物均使用於每—個實施例中）貫施例3 ·抗原結合親和性測定 53 201201838 藉由使用即時生物偵測器表面電漿共振分析 (BIACORETM 2000)的表面動力學，測定有關所選抗體之抗原結合的平衡解離常數(KD值）。在山羊抗_小鼠 IgG多株抗體表面或山羊抗-hFc多株抗體（jackson Immuno Research Lab)表面上（透過直接化學偲人$ BIACORE™晶片上以形成捕獲抗體表面）捕獲各選定抗體。將25 nM的人類GDF8同型二聚體、hGDF11 同型一聚體或hGDF5同型二聚體注射通過捕獲抗體 if i且在室溫下即時監測抗原-抗體結合與解離。進析以計算出抗原/抗體複合物解離的Kd、、、吊數(kd)、缔合速率常數(ka)以及半衰期（表

S

54 201201838 1H4-5 0.95 54 1.48 24 9B4-3 1.18 50 1.08 32 3E2-1 2.55 45 0.70 79 3A4-3 1.07 137 0.51 71 4G3-25 3.90 25 1.41 39 4B6-6 0.95 121 0.55 82 對照I 0.05 191 0.08 136 對照II 0.3 41 - - 前述實驗也可以將GDF8施用於候選抗體 H4H1669P或H4H1657N2的捕獲抗體表面來進行。初步數據顯示2種抗體的解離速率非常慢，暗示著KD 為1-2 pM或更小。亦在不含有BSA之修改工作緩衝液中如所述般來測定選定抗體對於抗原結合的KD值。表3 抗體 GDF8 GDF11 KD (nM) τ1/2(分） KD (nM) T1/2(分） lA2-mIgG 0.018 152 0.926 1 lA2-hIgG 0.006 340 0.640 6 8D12 0.016 840 NB 對照I 0.002 1301 0.001 105 對照II 0.071 62 1.580 7 進行額外的抗原結合實驗，其中在25°C與37°C下將GDF8以及GDF11施用於選定抗-GDF8抗體以及對照抗體的表面。藉由表面動力學使用即時生物偵測器表面電漿共振分析(BIACORE™ T100)來測定抗原結 55 201201838 合至選定抗體的平衡解離常數(KD值）。各選定抗體或對照抗體捕獲在山羊抗-hFc多株抗體(Jackson Immuno Research Lab Cat# 109-005-098)表面（透過直接化學偶合至BIACORE™ CM5偵測晶片上以形成捕獲抗體表面）。將不同濃度(2.5-0.625 11]^，2倍稀釋）的11〇〇?8 同型二聚體或hGDFll同型二聚體（或者在一些實驗中，活化素A)注射通過捕獲抗體表面，並且即時監測抗原•抗體結合與解離。進行動力學分析以計算抗原/ 抗體複合物解離的KD ’解離速率常數(kd)、締合速率常數(ka)以及半哀期。結果歸納於表4中β (nb=沒有觀察到結合）

S 表4 25°C 37°C 抑制劑測試抗原 Kd(M) T丨Λ (分） Kd(M) TY2 (分） H4H1669P GDF8 3.93E-11 131 5.84E-11 40 GDF11 NB NB NB NB H4H1657N2 GDF8 2.83E-11 202 3.79E-11 91 GDF11 NB NB NB 活化素A NB NB 夫測定 lA2-hIgGl GDF8 6.23E-11 4.62E-11 39 GDF11 NB NB NB NB 對照I (Myo29) GDF8 1.03E-11 273 2.44E-11 70 GDF11 活化素A 1.46E-11 NB 221 2.74E-11 56 NB 去泪il S* 對照III (ActRIIB-hFc [A64]) GDF8 3.07E-11 111 6.40E-12 104 GDF11 2.38E-11 132 9.92E-12 53 活化素A 8.50E-12 196 夫淨 •_J定對照IV (ActRIIB-hFc [R64]) GDF8 2.13E-11 238 未測定 GDF11 3.00E-12 231 活化素A 3.00E-12 439 56 201201838 同型陰性對照抗體 GDF8 NB NB NB NB GDF11 NB NB NB NB 活化素A NB NB 未測定如上所示’本發明抗體H4H1669P、H4H1657N2 以及lA2-hIgGl全對GDF8展現出強烈結合但不會結合GDF11。相對地，對照分子顯示會結合GDF8以及 GDF11。實施例4‘抗體阻斷Smad2/螢光素酶反應 GDF8誘發的螢光素酶分析使用經工程化的 A204細胞株（人類橫紋肌肉瘤細胞，ATCC，其含有會驅動螢光素酶表現的GDF8或GDF11反應性啟動子) 而發展一種生物分析來決定所選抗-GDF8抗體活體外中和GDF8媒介或GDF11媒介之細胞功能的能力。如下測定GDF8或GDF11抑制誘發螢光素酶活性：以 2 X104細胞/孔將細胞種至9 6孔培養盤的培養基中並在 37°C、5% C02下培育過夜。以三重複將抗體蛋白（自 25 nM起在細胞培養基中連續稀釋)添加至兩個培養盤的A204/Smad2細胞的孔中；將GDF8或GDF11 (0.8 nM)加入各孔中。在37〇C、5%C02下培育培養盤6小時。藉由加入 BRIGHT-GLO® Substrate (Promega)來測定螢光素酶活性並且測定IC5〇值（表5)。表5 抗體 IC5〇 (nM) GDF8Γ~~GDF11 57 201201838 21-E5 8.50 35 21-B9 0.62 1.2 21-E9 0.99 1.2 21-A2 9.70 >10 22-D3 >20 >25 22-E6 2.20 22.4 22-G10 10.50 >25 1A2 0.80 1400 20B12 >20 >25 58C8 1.80 >25 19F2 >20 >25 8D12-1 2.40 >25 4E3-7 10.40 >25 9B11-12 5.50 >1000 4B9 0.47 >25 3A4-3 3.10 >20 4G3-25 >25 >25 對照I 0.62 0.94 所選抗-GDF8抗體中和GDF8媒介或GDF11媒介細胞功能的能力更進一步如上所述使用不同濃度的 GDF8或GDF11來分析（表6)。（nd=未測定；NB=無結合）表6

S 抗體 IC5〇 (nM) GDF8 GDF11 0.5 nM 1 nM 0.4 nM 0.8 nM 1A2 0.196 0.363 〜600 -800 8D12 3.11 5.55 > 1000 > 1000 21-E5 2.34 2.98 6.9 10.5 H4H1657N2 0.78 nd NB nd H4H1669P 0.90 nd NB nd 對照I 0.172 0.398 0.255 0.459 58 201201838 對照II 1·6 4 1^ > 1000 > 1000 使用GDF8/TGFp-l嵌合建構物作為活化狀來重複上述生物分析。特別地，帶有胺基酸48_72經TGFP4 的對應胺基酸取代之絲GDF8構賴嵌合體使用於本實驗中（SEQ ID助：352，在此亦稱為「GDF8/TGFp[48-72]」）。這是由編碼帶有人類TGFp」序列（取代對應GDF8序列）之完整人類GDF8前驅物的表現建構物所製造。在藉著將GDF8/TGFp[48_72]建構物暫時轉染至CHO細胞中而產生的條件培養基中分析生物活性。藉由西方墨點法來分析表現以及處理。將條件培養基濃縮20倍，加熱至8〇°C5分鐘以使得結合的GDF8前導肽失活，並且在生物分析中以連續稀釋來評估活性。儘管未測定確切的嵌合蛋白濃度，在只驗中於濃辰度典型是落在pg/mi的範圍内。如上所數，含有會驅動螢光素酶表現之GDF反應性啟動子的細胞被加種到96孔培養盤中。將選定抗體 (自100 nM起算於細胞培養基中連續稀釋)加入預計會產生最大反應之某個數量的GDF8/TGFp[48-72]嵌合蛋白條件培養基。將這個混合物預培育45分鐘並且添加至報導細胞。測定螢光素酶活性並計算出大約的 IC5〇值(如下表7所示）(NB=無阻斷）。表7 抗體阻斷GDF8/TGFp[48-72]生物活性 59 201201838 抗體 lA2-hFc 0.357 8D12-mFc NB H2M1657N2 NB H1H1669P NB 對照I 0.402 GDF8/TGFp[48-72]彼合建構物在這個分析中能夠活化螢光素酶活性，而lA2-hFc以及對照I能夠阻斷這個建構物的生物活性。但是，抗體H2M1657N2與 H1H1669P無法阻斷GDF8/TGFp[48-72]嵌合建構物的生物活性。因為這2個抗體在本分析系統中顯示會阻斷野生型GDF8的生物活性（參見表8)，可推斷 H2M1657N2與H1H1669P最有可能藉由以不活化 GDF8的胺基酸48-72内的抗原決定區而表現其生物效用。實施例5.以免疫墨點法來處理由蛋白酶κ消化所產生的hGDF8片段西方墨點分析被用來測定經蛋白酶K蛋白水解消化之測試與對照mAbs人類GDF。在消化緩衝液中培育含有1 gg人類GDF8以及〇、1或6pg蛋白酶K的酵素反應物10或45分鐘。含有存在於反應混合物中之GDF8的20%等量物(2〇〇 ng)被加載至3個分開的 201201838 18% SES-PAGE非還原凝膠並電潰到PVDF膜上。以2 pg/ml的一級抗體繼而適當的二次抗體（接合至HRp) 培育各膜。顯示於第1A-C圖的是分別針對對照mAb I、1A2 mAb以及21-E9 mAb來進行偵測而得到的免疫反應性。結果顯示針對徑3與6的對照mAb (A)喪失GDF8反應性。明顯不同的是，抗體1A2對分子量約17-19 kD的較小GDF8片段仍保有免疫反應性（第 1B 圖）。在消化時間高至10分鐘、1小時或16小時，有〇或4 pg GDF8與0、24或96 pg蛋白酶κ存在的情況下重複個貫驗。結果（苐2A-B圖）顯示，在蛋白酶κ 不存在的情況下’對照以及1A2 mAb對全長成熟（未經消化的）GDF8有免疫反應性(參見第2A_B圖，徑2 及7)。在蛋白酶K存在的情況下，對照ImAb在所有時間點失去免疫反應性。明顯不同的是’ 1A2mAb對於經消化的人類GDF8片段仍維持著免疫反應性（第 2B圖’徑3-6與8)。這些結果指出，1A2 mAb對於 GDF8的較小片段(在蛋白酶κ存在下仍維持完整)有免疫反應性，而對照mAb對較小片段（i7_i9 kD)失去免疫反應性。使用經修改的西方墨點分析來進一步測定所選抗 -hGDF8抗體的hGDF8抗原決定區。修改為在hGDF8 特異性一級抗體與膜培育之前，各抗_hGDF8抗體預先與1000倍或50倍莫耳過量的hGDF8肽片段（1-14胺 201201838 基酸、17-42胺基酸、48-72胺基酸或75-105胺基酸) 培育。結果顯示，與肽片段48-72胺基酸在50倍莫耳過量的情況下預先培育能夠阻斷抗體8D12結合 hGDF8。實施例6.抗體結合GDF8嵌合體作出12種嵌合GDF8蛋白原（proprotein)。表8顯示成熟嵌合GDF8蛋白結構。嵌_合GDF8蛋白含有兩部分：一個部分具有GDF8序列經BMP2序列的各種置換，另一部分具有GDF8序列經TGFP1序列的各種置換。這些嵌合蛋白用來測試並定位抗體結合。表8

S 嵌合物名稱經置換的成熟GDF8片段成熟嵌合GDF8結構 SEQ ID NO: B1 1-15 BMP2.1-13.GDF8.16-109 347 T1 1-15 TGFbl.l-15.GDF8.16-109 348 B17 17-42 GDF8.1 -16.BMP2.15-42.GDF8.43-109 349 T17 17-42 GDF8.1-16,TGFpl.l7-43.GDF8.43-109 350 B48 48-72 GDF8.1-47.BMP2.48-77.GDF8.73-109 351 T48 48-72 GDF8.1 -47.TGFp 1.49-76.GDF8.73-109 352 B65 65-72 GDF8.1-64.BMP2.68-77GDF8.73-109 353 T65 65-72 GDF8.1-64.TGFpl.69-76.GDF8.73-109 354 B75 75-105 GDF8.1 -74.BMP2.80-110DGF8.106-109 355 T75 75-105 GDF8.1-74.TGFpl.79-108.GDF8.106-109 356 B91 91-105 GDF8.1 -90.BMP2.96-110.GDF8.106-109 357 62 201201838 T91 91-105 GDF8.1 -90.TGFP 1.95-10GDF8.106-109 358 將不同的嵌合GDF8蛋白原暫時轉染至經工程化的穩定CHO hFurin細胞株中。如上所述的類似西方墨點分析用來偵測不同抗-hGDF8抗體對各個嵌合GDF8 的結合。簡言之，將10 gg CHO上清液加載至 SDS-PAGE (非還原性或還原性）凝膠的各徑上並電潰到PVDF膜上。以2 pg/ml的抗-GDF8抗體培育膜繼而暴露於適當的二次抗體(接合至HRP)。如表9中所示’抗體8D12無法結合B48或T48。結果顯示，成熟GDF8的胺基酸48至72參予抗體8D12結合GDF8。表9 GDF8蛋白非還原性還原性對照I 8D12 對照II 1A2 4A7 8D2 野生型GDF8 + + + + + + B48 + - + + + • B65 + + + + + + B91 + + + + + + T48 + - + + + • T65 + + + + + + 實施例7.抗體結合hGDF8肽由成熟hGDF8(SEQIDNO: 340)製備14種肽(表 1 〇)。未經修飾的肽、N-端經生物素化的肽(N-term)或 C-端經生物素化的肽(C-term)用來測試並定位抗體結合。全長hGDF8、hGDFll與未經修飾的肽各自獨立地經胺偶合至MAP® Multi-Analyte COOH微球（或珠 63 201201838 粒）。各個經生物素化的肽結合至xMAP® Multi-Analyte LumAvidin微球。結合肽的珠粒懸浮液接而與等體積阻斷緩衝液(PBS，1 % BSA、0.05% Tween 20、0.05%疊氮化鈉）混合，然後被分配至96孔過濾培養盤(Millipore，MULTISCREEN® BV)中。接著將 2.5 pg/ml對照與測試抗-hGDF8抗體加入至結合肽的珠粒懸浮液中並在室溫下容許結合至珠粒過夜。然後，以 PBST (PBS+0.05% Tween 20)洗滌經抗體培育的珠粒2 次並在室溫下以接合藻紅素(PE)的抗-hFC抗體或接合藻紅素的抗-mFC抗體培育45分鐘。再次洗滌珠粒並針對不同肽的抗體結合訊號使用LUMINEX® 100TM或 200顶儀器來進行偵測。如表10中所示，抗_hGDF8抗體8D12能夠結合肽4、5、6、7、8與9。相反地，抗 -hGDF8抗體H4H1657N2未結合至任何肽。 S、表10

No. 肽修飾對照I 對照II 21-E5 1A2 8D12 1 1-14 未修飾 - - - 轉 N-term - - - 辦 C-term - - - . 2 1-18 未修飾 - - - N-term - - - 腎 C-term - ++ - +++ +/ 3 17-42 未修飾 - - - 轉 N-term - - 轉 C-term - - . 4 48-65 未修飾 - . +++ C-term - +++++ 5 48-69 未修飾 - - - . +++ C-term - - +++++ 64 201201838 6 48-72 未修飾 - + + + +++ N-term - - + C-term - - +++++ 7 52-65 未修飾 - - +++ C-term - - - - +++++ 8 52-72 未修飾 - - ++ C-term - - +++++ 9 56-65 C-term - - ++ 10 56-72 未修飾 - - - - C-term - - - + 11 65-72 未修飾 - - - N-term - - - C-term - - 12 73-90 未修飾 - +/- N-term +/- - + +/- C-term + - - - + 13 75-105 未修飾 - - - N-term - - - C-term - - - - 14 91-105 未修飾 - - - N-term - - - - - C-term - - 實施例8.人類抗-GDF8抗體對於GDF8結合至活化素 RIIB的影響成熟hGDF8首先經胺偶合至Luminex®珠粒。經 hGDF8包覆的Luminex⑧珠粒接而在室溫下與1.25 pg/ml的各種抗-hGDF8抗體培育2小時。接著，將人類活化素RIIB-mFc加入至珠粒-抗體混合物中並在室溫下培育又2小時。繼而洗滌珠粒並以接合R-藻紅素 (R-PE)的抗-mFc多株抗體染色且測量平均螢光強度 65 201201838 (MFI)。如表11中所示，儘管對照mAbl與抗體21-E5 都能夠阻斷hGDF8與h活化素RHB之間的結合，但對照mAb II僅能部份阻斷結合。抗體1A2不能阻斷 hGDF8結合其受體（活化素RHB)(表11，n=3)。表11 抗體 MFI 陰性對照 4,560 對照mAb I 58 對照mAb II 1,653 lA2-hIgG 4,037 21-E5-hIgG 275 實施例9.抗體8D12變異體抗體8D12變異體帶有經修飾的LCVR，其是藉由修倚8D12的LCVR的下列一或多個胺基酸而產生： A7S 或 T、A8P、9PL、S18P、V19A、M21I、K27Q、 F41Y、V42L、R44K、R55L 或 T、M56G 或 l、N58Y、 L59R、A75D、R79K、A105G、L109V 以及 L111I。有關hGDF8之抗體變異體的結合親和性(Kd)是使用上述即時生物偵測器表面電漿共振分析 (BIAcoreTM3000)在修改的工作緩衝液(不含BSA)中測定(表12)。表12

S 抗體 Kd (nlVH Ti/2(分） 8D12 0.071 139 8D12-v2 0.520 25 66 201201838 8D12-v3 ~~0.38046 抗體變異體與hGDF8肽之間的結合亦如上面實施例7中所述來測試。抗體變異體8D12-V2與8Dllv3 顯示強烈結合至C-端經生物素化的肽4、5、7與10。實施例10.抗_GDF8抗體對於骨骼肌質量的影響活體内測定所選抗-GDF8 mAbs對於誘發骨骼机肥大的效力。簡言之，20隻雄性CB17 SCID小鼠，約 9週大，依據體重平均分成4組。以3個漸增的劑量(2.5 mg/kg/劑量、5 mg/kg/劑量以及1 〇 mg/kg/劑量）注射選定 mAb (對照 I、1A2、21-E5、8D12、lA2-hIgG 或對照II)。人類IgG的Fc片段用作為陰性對照。在第i 週腹膜内投與抗體2次，之後3週每週1次。在第28 天，將小鼠安樂死並秤重，並取下且秤重脛骨前(TA) 肌、腓腸(GA)肌以及四頭(Quad)肌、心臟、脾臟與腎臟。將組織常規化以開始秤量體重，且計算相對於陰性對照的百分比變化（以重量計）。使用下列抗體重複6 次分別實驗：對照 I、1A2、21-E5、8012、lA2-hIgG 以及對照II (表13-18)。此外’亦以較高漸增劑量的對照I抗體(10 mg/kg/劑量、30 mg/kg/劑量以及5〇 mg/kg/ 劑ϊ)重複貫驗(表19)。結果以相對於陰性對照的百分比增加±標準偏差來表示。 67 201201838 表13 對照I 陰性對照劑量 2.5 mg/kg 5 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 7.66 ± 1.37 9.92 土 1.82 13.99 ± 1.21 0·00± 1·41 TA肌 13.84 ±2.23 16.99 ±2.16 13.68 ±0.96 0·00±2·71 GA肌 10.58 ± 1.67 11.31 ±2.44 12.90 + 3.0 0.00 土 3.36 Quad 肌 14.79 ± 1.55 15.99 ±2.72 20.84 土 2.09 0.00 土 1.84 心臟 2.05 ±3.04 2·96±2·96 7.55 ± 1.61 0·00±2·45 腎臟 3.53 ± 1.39 3.56 土 3.51 5.66 ±4.59 0.00 ±2.82 脾贜 39.82 ±6.78 45.26 ± 19.10 9.02 ±3.08 0.00 ± 5.47 表14 1A2 陰性對照劑量 2.5 mg/kg 5 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 6.08 ± 1.08 9.96 ± 1.32 9.92 ± 1.09 0.00 ± 1.76 ΤΑ肌 15.56 ± 1.54 18.24 ±4.49 20.69 ±3.13 0.00±4.47 GA肌 20.49 ± 1.84 21.36 ±2.79 24.36 ±3.46 0.00±3.59 Quad 肌 26.92 ±3.07 30.15 ±3.56 33.09 ±4.46 0.00 ±4.05 心贜 3.70 ±1.31 6.37 ±2.27 12.42 ±2.70 0.00 ±4.10 腎臟 1.28 ±2.89 2·89±3.30 5.31 土 3.29 0.00 + 4.39 脾贜 -8.07 ± 5.75 -10.00 ±4.68 9.68 土 9.19 0·00 ± 6.84 表15

S 21-E5 陰性對照劑量 2.5 mg/kg 5 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 4.16 ±0.87 4.14 ±2.82 5.21 ±1.58 0.00 ±1.15 TA肌 13.86 土 1.66 14.01+2.41 10.32 ±2.54 0.00 ±1.65 GA肌 7_70± 1.86 12.94+1.10 8.13±2·36 0·00±1.41 Quad 肌 8.64+1.31 13.57 土 1.79 8.46 ±3.22 0_00±1.94 心臟 -7.11 ± 1.00 -7.14 + 3.17 -5.51 土 1.58 0·00±2.23 腎臟 -6.8 ± 2.83 -3.2 土 3.57 -0.32 ± 2·07 0.00 + 3.93 脾臟 29.81 ±9.83 49.76 ±7.86 10.85 ±6.63 0.00 ± 5.76 68 201201838 表16 8D12抗體陰性對照劑量 2.5 mg/kg 5 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 10.06 ±0.86 12.76 ± 1.01 11.41 ± 1.35 0·00±0·66 TA肌 17.99 ± 1.53 21.30 ±2.06 22.11 ±3.20 0·00± 1.85 GA肌 21.14 土 1.19 23.10 ±0.99 23.40 ±3.72 0·00± 1.44 Quad 肌 26.74 ± 1.53 31.00± 1.61 28.80 土 2.72 0.00 ± 0.94 心臟 -1.61 土 2.06 3.63 + 1.93 3.42 ±2.52 0.00 ± 1.08 腎臟 -1.06 ±2.02 -4.26 ±2.25 -5.52 ±3.83 0.00 ±3.66 脾臟 4.33 ±6.34 -9.04 ± 2.64 -1.85±6_26 0.00 ±4.25 表17 lA2-hIgG 抗體陰性對照劑量 2.5 mg/kg 5 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 6.73 ± 1.51 3.84 ±2.32 7.45 土 2.91 0.00 ± 0.76 ΤΑ肌 15.62 ±2.4 12.09 ±1.81 10.91±3.33 0.00 ±2.80 GA肌 16.29 ±1.02 15.20 ±2.54 15.67 ±3.60 0.00 ±2.13 Quad 肌 19.39 ±2.92 20.03 ± 2.54 19.73 ±3.83 0.00 ±1.98 心臟 5.91 ±3.81 5.39 ±2.77 3.52 土 3.16 0·00±3·14 腎臟1 1.70 ±4.01 1.20 ± 1.73 1.39 土 3.70 0.00 ± 3.27 脾臟 -15.44 ±5.6 -30.08 ±6.63 -23.90 ±2.36 0.00± 11.32 表18 對照II 陰性對照劑量 2.5 mg/kg 5 mg/kg 5 mg/kg 體重 10.19+1.20 10.83 ± 1.58 0·00±1.17 ΤΑ肌 14.70 ±3.28 13.44 + 4.13 0.00 ±3.87 GA肌 19.44 ±2.08 14.35 ±3.36 0·00±1.80 Quad 肌 18.92 + 4.86 13.00 + 2.18 0.00 ± 2.03 心臟 2.78 ±5.09 2.71 ±6.72 0.00 土 0.69 腎贜 1.84 ±2.65 0.41 ± 3.04 0·00±2.12 脾臟 12.32 ±5.60 8.41 ±3.38 0.00 ±4.31 69 201201838 表19 對照I 陰性對照劑量 10 mg/kg 30 mg/kg 50 mg/kg 10 mg/kg 體重 9.20 ±0.73 13_62± 1.38 12.55 ±1.71 0·00± 1.18 TA肌 18.16± 1.51 25.58 ±3.14 23.03 ±2.00 0.00 土 3.81 GA肌 16.91 ±2.08 23.72 ±3.14 24.68 土 2.73 0.00 ±3.58 Quad 肌 20.77 ± 1.01 26.54 + 3.68 25.67 + 3.32 0.00土4.63 心臟 1.55 ±3.07 3.11 土 2.58 2.11 ±2.23 0.00 土 1.96 腎臟 3.09 ± 1.90 10.38 ±5.08 8.89 ±3.59 0.00 ± 1.35 脾臟 8.22 ±5.80 6.90 ±5.87 -0·74± 1_85 0.00±7.38 使用抗體H4H1657N2以及H4H1669P與對照投與給SCID小鼠來進行類似實驗。特別地，10週大雄性 SCID小鼠依據下列給藥時間表皮下投與10 mg/kg抗體：第1週2x以及第2與3週lx/週。總處理時間為 28天。關於這個實驗，5隻小鼠投與同型陰性對照抗體；5隻小鼠投與對照I (Myo29) ; 6隻小鼠投與 H4H1657N2 ;而6隻小鼠投與H4H1669P。結果歸納於表20中並且以相對於陰性對照的百分比增加±標準偏差來表示。表20

S 同型對照對照I H4H1657N2 H4H1669P 劑量 10 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 0.00 ± 1.97 14.52 + 2.68 10.28 ±0.95 10.70 ± 1.26 ΤΑ肌 0·00±4·10 17.47 ±3.09 25.53 ±3.96 .13.77 ±2.01 GA肌 0.00 ±1.97 19.46 ±2.92 21.69±1.67 13.39 ±1.30 Quad 肌 0.00 ±3.59 14.05 ±3.03 22.15 ±3.47 9.87 ±2.55 心臟 0.00 ± 2.49 9.42+1.63 5.40 土 2.28 12.70 ±2.67 白色脂肪組織 0.00 土 9.72 25.14 土 19 -8.05 ±7.53 4.22 ±6.19 70 201201838 使用抗體H4H1657N2以及H4H1669P與對照投與給C57小鼠來進行類似實驗。特別地，1〇週大雄性 C57小氣依據下列給藥時間表，皮下投與10 mg/kg抗體：每週2X連續2週。關於這個實驗，5隻小鼠投與同型陰性對照抗體；5隻小鼠投與對照I (Myo29) ; 5 隻小鼠投與H4H1657N2;而6隻小鼠投與H4H1669P。結果歸納於表21中並且以相對於陰性對照的百分比增加±標準偏差來表示。表21 同型對照對照I H4H1657N2 H4H1669P 劑量 10 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 10 mg/kg 體重 0.00 + 0.92 4.64 土 0.99 5.11+0.73 2.75 + 1.07 ΤΑ肌 0.00 + 4.26 8.92 + 1.56 14.92 + 3.09 7.62 + 2.90 GA肌 0.00 + 2.39 6.28 + 2.10 14.20+1.77 6.07 + 3.80 Quad 肌 Γ0.00 土 2.46 3.53 + 2.11 12.85 + 2.69 1.24+1.74 心臟 0.00 ± 2.28 -3.18 + 2.70 1.39 + 2.83 2.45 + 3.95 白色脂肪組織 0·00 ± 8.20 19.05 + 7.72 -5.23 + 8.34 -4.53 ± 10.28 接下來’在SCID小鼠中使用抗體H4H1657N2以及H4H1669P進行劑量反應實驗。特別地，依據下列給藥時間表對10週大雄性SCID小鼠皮下投與30 mg/kg對照抗體’以及2.5、10或30 mg/kg的 H4H1657N2與H4H1669P :在第1週每週2X而之後每週1X。結果知納於表22與23中並且以相對於陰性對照的百分比增加±標準偏差來表示。 201201838 表22 同型對照對照I H4H1657N2 劑量 30 mg/kg 30 mg/kg 2.5 mg/kg 10 mg/kg 30 mg/kg 小鼠數量(η) 5 5 5 5 5 體重 0·00±1.38 7.46 土 10.16 土 6.51 ± 0.91 10.12土 1.68 2.44 0.92 ΤΑ肌 0.00 ± 16.13 土 22.22 ± 19.79 ± 1.19 24.10 土 3.62 2.55 5.62 2.75 GA肌 0.00 ± 13.50 ± 21.94 土 21.84 土 2.94 25.01 ± 4.15 2.66 5.20 3.18 0.00 + 16.89 + 26.30 + 26.28 + 30.81 + Quad 肌 2.06 4.11 3.72 2.39 2.98 心臟 0.00 土 3.23 土 14.46 土 2.70 土 4.06 土 2.67 3.29 1.55 1.51 2.53 白色脂肪組織 0.00 土 5.08 土 -23.70 土 10.29 16.77 土 7.54 -15.44 + 11.43 13.91 9.02 表23 同型對照對照I H4H1669P 劑量 30 mg/kg 30 mg/kg 2.5 mg/kg 10 mg/kg 30 mg/kg 小鼠數量(η) 5 5 5 5 5 體重 0.00 13.77 + 2.87 土 5.72 土 4.88 土 ±1.47 1.99 1.66 0.56 1.11 ΤΑ肌 0.00 土 25_79 土 7.82 土 12.38 ± 11.86± 2.38 2.37 2.25 2.56 2.59 GA肌 0.00 ± 22.82 土 2.68 土 2.06 12.46 土 1.30 10.55 土 3.33 2.12 1.25 Quad 肌 0·00 土 25.69 土 4.10土 12.27 土 9.43 土 3.08 3.65 2.32 1.63 2.67 心臟 0.00 + 7.78 土 -0.01 ± 5.37 + 2.84 土 0.91 1.62 3.31 1.71 4.73 白色脂肪組織 0.00 土 12.60 ± 9.00 土 -8.30 + 3.71 -1.23 土 7.03 9.41 8.08 4.12 72 201201838 在一個不同的實驗中’依據下列給藥時間表，5 組的6隻1〇週大雄性SCID小鼠以1〇 mg/kg皮下投與同型陰性對照抗體，而以〇]、〇·75、25或1〇 mg/kg 皮下投與H4H1657N2 :在第i週每週2χ而之後每週 lx，總共處理28天。結果歸納於表24中，以相對於陰性對照的百分比增加±標準偏差來表示。

11.54 土 2.15 18.28 + 2.84 16.87 +

1.37 3.25± 1·21 -13.53 + 8.00

白色脂肪組織 2.85 3.08 ±2.66 -28.33 ± 4.51 如同這個實驗中所示，當投與小鼠一個範圍的劑量時，抗體Η4Η1657Ν2以及H4Hl669p在肌肉質量方面產生明顯增加。只施例11.抗-GDF8抗體對於葡萄糖恆定的影響針對本發明抗视？8抗體在膳食誘發肥胖症(m〇) 小咏核型中測試其對於葡萄糖值定以及胰島素敏感性 73 201201838 的影響。在這個實驗中’藉由自9週大時開始銀食

C57BL6小鼠高脂腾食(45% kcal脂質）7週而獲得DIO 小鼠。自第8週起，以30 mg/kg投與抗體1週2次，歷時又2週’並且在1週後(處理後21天）中止研究。本實驗中所使用的抗體為H4H1669P以及 H4H1657N2，還有同型陰性對照抗體與對照I (對應於 my〇29的抗-GDF8抗體）。在抗體處理之前以及之後進行胰島素耐受性試驗。在4小時禁食之後藉由腹膜内注射投與胰島素(2 IU/kg)並且測量葡萄糖位準。結果圖示於第3A圖（在抗體處理之前）以及第3B圖（在抗體處理之後）中。如同這個實驗中所證實的，因為投與抗_GDF8抗體而抑制肌肉生長抑制素會增進DIO小鼠體内的葡萄糖恆定。在抗-GDF8 抗體組(H4H1669P、H4H1657N2 或對照I)與同型對照抗體組之間注意到對胰島素食團有反應而在降低葡萄糖方面有明顯差異。實施例12.藉由投與H4H1657N2活體内阻斷肌肉萎縮使用C57小鼠來測定H4H1657N2在預防因為打石膏/固定以及地塞米松投藥而誘發的肌肉萎縮的活體内特性。在打石膏的例子中，3組的8隻C57小鼠被麻醉，且踝關節以9〇。角打石膏固定14天。第4組是未受干擾且用作為未固定對照。在固定的14天期間，投與小 201201838 鼠同型陰性對照抗體；對照i (Myo29);或 H4H1657N2°3組皮下注射30 mg/kg的抗體，每週2x，歷時2週，從固定時開始。結果歸納於表25中，以相對於陰性對照的百分比變化±標準偏差來表示。結果顯示在固定14天之後，接受H4H1657N2抗體處理的組別相對於同型對照組在骨骼肌流失方面顯示有明顯降低。未固定固定同型對照同型對照對照I H4H1657N2 TA肌 GA肌〇.〇0土1.74 -32.97 + 4.98 -23.36 + 5.80 -13.77 + 4.23 0.00+ 1.85 ------1 -24.34 土 4.95 -7.64 土 0.97 3.91 土 6.02 在地塞米松的例子中’ 2組的5隻C57小鼠被麻醉並且被皮下植入遞送1 Hg地塞米松/g/天的滲透泵。 2個額外的組別植入遞送食鹽水的滲透泵並啟用作為對^、。在14天處理的期間，;2組小鼠（1組食鹽水以及 1組地基米松)投與同型陰性對照抗體；而2組小鼠（1 組食鹽水以及1組地塞米松)投與H4H1657N2抗體。以30mg/kg’每週2x皮下注射抗體歷時2週。自泵植入之時開始抗體處理。結果歸納在表26中，以相對於陰性對照的百分比變化±標準偏差來表示。接受 H4H1657N2抗體的地塞米松組相對於接受同型對照的組別顯示，以H4H1657N2抗體處理能預防地塞米松治療誘發的肌肉重量流失。 75 201201838 (因為地塞米松而誘發的萎食鹽水處理縮）同型對照 0.00 + 2.73 H4H1657N2 14.63 + 1.35 米松處理同型^~— •17.78 ±2.11 GA 肌〇·〇0± 3.02 20.73 土 1.38 -18.97 + 2.11

Quad 肌丨〇.〇〇 ±3.91 | 20.46 土 2.40 -23.94 + 2.68 -5.08 ±2.07 -4.26 + 2.34 實施例13.H4H1657N2在活體内的特異性為了檢驗H4H1657N2在活體内的特異性，注射 C57BL6小氣藥物，並且從經處理小鼠所取得的血清被旱來進行以質5普法為基礎的配位子釣魚實驗（mass spectrometry based ligand "fishing" experiment)。簡言之，在14天期間内將藥物(H4H1657N2、對照IV或同型陰性對照）注射至C57BL6小鼠體内數次（第〇、3、7、 10天）。在第14天犧牲動物並將血清與與抗人類Fc 珠粒一起培育。洗滌珠粒且以SDS-PAGE加載缓衝液洗提連結的材料。洗出的材料被拿來進行 SDS-PAGE，而對應於5-20 kDa的分子量範圍割下凝膠片。使用標準還原、烷基化以及胰蛋白酶化條件來處理樣品以供用於質譜法。消化物在奈米C18管柱中被分離並且自動點潰在Bruker Anchor Target上。使用 LC-WARP (Bruker Daltonics)以自動化方式進行 MALDI-MS (MS/MS)分析(Bruker Ultraflextreme)。使用MASCOT (Matrix Science)來搜尋質譜，並且相對於

S 76 201201838 同型對照來評估結果。洗出的蛋白質列米於表27中。投與的抗逋: H4H1657N2 GDF8 洗提出的蛋白質(等）：鏈如表27中所示，依據這個實驗，僅有小鼠GDF8 被鑑定為H4H1657N2的結合夥伴。（小鼠與人類GDF8 的序列相同）。相對地，除了 GDF8以外’對照IV結合TGFp配位子家族的其他數個成員，包括’尤其是 GDF11。這個實驗確認H4H1657N2在活體内對於 GDF8的特異性。本發明就範圍來說並不受到此處所述的特定具體例囿限。更確切地說，除了此處所述者以外’本發明的各種修飾對於那些習於技藝者來說由前面描述以及圖式來說是清楚的。此等修飾意欲落在隨附申請專利範圍的範轉内。【圖式簡單說明】第1圖是人類GDF8以蛋白酶K限制蛋白水解的免疫墨點圖。凝膠是具有0.2 pg GDF8加载至各徑中以及2 eg/ml的抗體對照I (A)、1A2 (B)或21-E9 (〇 77 201201838 的非還原18% SDS-PAGE。徑1 :消化時間10分鐘， 1 pg GDF8，0 gg蛋白酶K ;徑2 :消化時間10分鐘， GDF8 1 pg，1 pg蛋白酶K ;徑3 :消化時間10分鐘， 1 pg GDF8，6 pg蛋白酶K ;徑4 :消化時間45分鐘， 1 pg GDF8，0 pg蛋白酶K ;徑5 :消化時間45分鐘， GDF8 1 pg，1 gg蛋白酶K ;徑6 :消化時間45分鐘， 1 pg GDF8，6 pg 蛋白酶 K。第2圖是人類GDF8以高劑量蛋白酶K限制蛋白水解的免疫墨點圖。凝膠是具有0.2 pg GDF8加載至各徑中以及2 pg/ml的抗體對照I (A)或1A2 (B)的非還原18% SDS-PAGE。徑1 :消化時間16小時，0 pg GDF8，96 pg蛋白酶K ;徑2 :消化時間16小時GDF8 4 pg，0 pg蛋白酶K ;徑3 :消化時間16小時，4 pg GDF8，24 pg蛋白酶K ;徑4 :消化時間16小時，4 pg GDF8，96 pg蛋白酶K ;徑5 :消化時間1小時，GDF8 4 pg，24 pg蛋白酶K ;徑6 :消化時間1小時，4 pg GDF8，96 pg蛋白酶K ;徑7 :消化時間10分鐘，GDF8 0 pg，0 pg蛋白酶K ;徑8 :消化時間10分鐘，4 pg GDF8，24 pg 蛋白酶 K。第3A與3B圖是說明於抗體處理之前（第3A圖）與之後（第3B圖），在接受胰島素耐受性試驗之小鼠個體體内隨著時間的起始葡萄糖濃度百分比。【主要元件符號說明】無

78 201201838 序列表 <110> STITT, Trevor LATRES, Esther <120>抗人類GDF8之抗體

<130> 6073A <140>待分派 <141>隨文申請 <150> 61/348,559 <151> 2010-05-26 <150> 61/372,882 <151> 2010-08-12 <160> 391 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 366 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 1 caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttaac acctatgcca taagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggaatg ggtctcaact attactggta gtggttataa cacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacactgtat 240 ctacagatga gcagcctgag agccgaggac acggccgtat tttactgtgc gaaagactct 300 cggtataact ggaattacgg aatttttgac tactggggcc agggaaccac ggtcaccgtc 360 tcctca 366 <210> 2 <211> 122 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 2

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr 20 25 30

Ala lie Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Thr lie Thr Gly Ser Gly Tyr Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 201201838 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Phe Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Asp Ser Arg Tyr Asn Trp Asn Tyr Gly lie Phe Asp Tyr Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 3 ggattcacct ttaacaccta tgcc 24 <210> 4 <211> 8 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 4

Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Ala 1 5 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 5 attactggta gtggttataa caca 24 <210> 6 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 6 lie Thr Gly Ser Gly Tyx Asn Thr 2 201201838 1 5 <210> 7 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 7 gcgaaagact ctcggtataa ctggaattac ggaatttttg actac 45 <210> 8 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 8

Ala Lys Asp Ser Arg Tyr Asn Trp Asn Tyr Gly lie Phe Asp Tyr 15 10 15 <210> 9 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 9 gacatccaga tgacccagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca tcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gtatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcaatgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag cataataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa acga 324 <210> 10 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 10

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30 3 201201838

Leu Ala Trp Tyr His Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Val Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Asn Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin His Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 11 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 11 cagagtgtta gcagcaac 18 <210> 12 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 12

Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5 <210> 13 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 13 ggtgtatcc 9 <210> 14 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 14 4 201201838

Gly Val Ser 1 <210> 15 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 15 cagcagcata ataactggcc gctcact 27 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 16

Gin Gin His Asn Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 17 <211> 375 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 17 caggtgcagc tggtgcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc aatagtaatt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggactacct attatagtgg gaccacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagagat 300 tattatgata gtagtggtta ttattacaac tggttcgatc cctggggcca gggaaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 18 <211> 125 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 18

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15 201201838

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Asn Ser 20 25 30

Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr Thr Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asn Trp Phe 100 105 110

Asp Pro Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 19 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 19 ggtggctcca tcagcaatag taattactac 30 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 20

Gly Gly Ser lie Ser Asn Ser Asn Tyr Tyr 15 10 <210> 21 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 21 acctattata gtgggaccac c 21 <210> 22 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 s 6 201201838 <220> <223>合成 <400> 22

Thr Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr 1 5 <210> 23 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 23 51 gcgagagatt attatgatag tagtggttat tattacaact ggttcgatcc c <210> 24 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 24

Ala Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asn Trp Phe Asp 15 10 15

Pro <210> 25 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 ctgtaggaga cagagtcacc 60 gctggtatca gcagaaacca 120 tgcaaagtgg ggtcccatca 180 cactcagcag cctgcagcct 240 acccgtggac gttcggccaa 300 324 <400> 25 gacatccagt tgacccagtc atcacttgcc gggcaagtca gggaaagccc ctaagcgcct aggttcagcg gcagtggatc gaagattttg caacttattt gggaccaagc tggagatcaa tccatcctcc ctgtctgcat ggacattaga aatgatttag gatctatgct gcatccagtt tgggacagaa ttcagtctca ctgtctacag catcatattt acga <210> 26 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> 201201838 <223>合成 <400> 26

Asp lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Leu Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His His lie Tyr Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 27 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 27 caggacatta gaaatgat <210> 28 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 28

Gin Asp lie Arg Asn Asp 1 5 <210> 29 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 29 gctgcatcc <210> 30 <211> 3 201201838 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 30 Ala Ala Ser 1 <210> 31 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 31 ctacagcatc atatttaccc gtggacg 27 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 32

Leu Gin His His lie Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 33 <211> 375 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 cctgtccctc 60 ctggatccgc 120 aagcgcctac 180 gaaccagttc 240 tgtgagagat 300 gggaaccacg 360 <400> 33 caagttcagc acctgcactg cagcccccag tacaacccgt tccctgaaac tactatgata gtcaccgtct tggtggagtc tctatggtgg ggaagggact ccctcaagag tgagctctgt gtagtggtca cctca gggcccagga ctccatcagc ggagtggatt tcgagtcacc gaccgccgca ttattacaac ctggtgaagc agtggtaatt gggactatct atgtccgtag gacacggctg tggttcgacc cttcggagac actactgggg attatagtgg acacgtccaa tttattactg cctggggcca

<210> 34 <211> 125 <212> PRT 201201838 <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 34

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Tyr Gly Gly Ser lie Ser Ser Gly 20 25 30

Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp 工le Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr Met Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly His Tyr Tyr Asn Trp Phe 100 105 110

Asp Pro Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 35 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 35 30 ggtggctcca tcagcagtgg taattactac <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 36

Gly Gly Ser He Ser Ser Gly Asn Tyr Tyr 15 10 <210> 37 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 10 201201838 <400> 37 atctattata gtggaagcgc c 21 <210> 38 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 38 lie Tyr Tyr Ser Gly Ser Ala 1 5 <210> 39 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 39 gtgagagatt actatgatag tagtggtcat tattacaact ggttcgaccc c 51 <210> 40 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 40

Val Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly His Tyr Tyr Asn Trp Phe Asp 15 10 15

Pro <210> 41 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 41 gccatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga catgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatactt acccgtggac gttcggccaa 300 11 201201838 gggaccaagg tggagatcaa acga 324 <210> 42 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 42

Ala lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr 工le Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg His Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Thr Tyr Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 43 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 43 caggacatta gacatgat 18 <210> 44 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 44

Gin Asp lie Arg His Asp 1 5

<210> 45 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列

S 12 201201838 <220> <223>合成 <400> 45 gctgcatcc 9 <210> 46 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 46 Ala Ala Ser 1 <210> 47 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 47 ctacagcata atacttaccc gtggacg 27 <210> 48 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 48

Leu Gin His Asn Thr Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 49 <211> 357 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 49 caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt agctatagca tgaactgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc attagtagta gtagtagtta catatactac 180 13 201201838 gcagactcag tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcactgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatcgt 300 ggatacacct ttggggttga ctactggggc cagggaacca cggtcaccgt ctcctca 357 <210> 50 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 50

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ser Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ser lie Ser Ser Ser Ser Ser Tyr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

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Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Thr Phe Gly Val Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 51 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 51 ggattcacct tcagtagcta tagc 24 <210> 52 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 52

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ser 1 5 <210〉 53 s 14 201201838 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 53 attagtagta gtagtagtta cata 24 <210> 54 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 54 lie Ser Ser Ser Ser Ser Tyr lie 1 5 <210> 55 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 55 36 gcgagagatc gtggatacac ctttggggtt gactac <210> 56 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 56

Ala Arg Asp Arg Gly Tyr Thr Phe Gly Val Asp Tyr 15 10 <210> 57 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 15 201201838 <400> 57 gccatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt acccgtacac ttttggccag 300 gggaccaagg tggagatcaa acga 324 <210> 58 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 58

Ala lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Tyr 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 59 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 59 cagggcatta gaaatgat 18 <210> 60 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 60

Gin Gly lie Arg Asn Asp 1 5 s 16 201201838 <210> 61 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 61 gctgcatcc 9 <210> 62 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 62 Ala Ala Ser 1 <210> 63 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 63 ctacagcata atagttaccc gtacact 27 <210> 64 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 64

Leu Gin His Asn Ser Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 65 <211> 375 <212> DNA <213 >人工序列 17 <220> 201201838 <223>合成 <400> 65 caggtgcagc tggtgcagtc gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcatc acttatagtt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggactatcc atcatagtgg gagcacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgacac tgagttctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagagac 300 tactatgata gtagtggtta ttattataac tggttcgacc cctggggcca gggaaccatg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 66 <211> 125 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 66

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie lie Thr Tyr 20 25 30

Ser Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp lie Gly Thr lie His His Ser Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Thr Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asn Trp Phe 100 105 110

Asp Pro Trp Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 67 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 67 ggtggctcca tcatcactta tagttactac 30 <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成

S 18 201201838 <400> 68

Gly Gly Ser lie lie Thr Tyr Ser Tyr Tyr 1 5 10 <210> 69 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 69 atccatcata gtgggagcac c 21 <210> 70 <211> Ί <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 70 lie His His Ser Gly Ser Thr 1 5 <210> 71 <211> 51 <212> DNA <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 71 gcgagagact actatgatag tagtggttat tattataact ggttcgaccc c 51 <210> 72 <211> 17 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 72

Ala Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asn Trp Phe Asp 15 10 15

Pro 19 201201838 <210> 73 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 73 gccatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca gggcattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgtctacag cataatagtt ccccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggagatcaa acga 324 <210> 74 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 74

Ala lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Ser Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 75 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 75 cagggcatta gaaatgat 18 <210> 76 <211> 6 <212> PRT <213 >人工序列 20 201201838 <220> <223>合成 <400> 76

Gin Gly lie Arg Asn Asp 1 5 <210> 77 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 77 gctgcatcc 9 <210> 78 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 78 Ala Ala Ser 1 <210> 79 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 79 ctacagcata atagttcccc gtggacg 27 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 80

Leu Gin His Asn Ser Ser Pro Trp Thr 1 5 21 201201838 <210> 81 <211> 369 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 81 caggtgcact tgaaggagtc tggtcctacg ctggtgaaac ccacacagac cctcacgctg 60 acctgcacct tctctgggtt ctcactcagc actagtggag tgggtgtggg ctggatccgt 120 cagcccccag gaaaggccct ggagtggctt gcactcattt attggaatga tgataagcgc 180 tacagcccat ctctgaagag caggctcacc atcaccaagg acacctccaa aaaccaggtg 240 gtccttacaa tgaccaacat ggaccctgtg gacacagcca catattactg tacacacacc 300 tcccgttata actggcacta cggcttcctt gactactggg gccagggaac cacggtcacc 360 gtctcctca 369 <210> 82 <211> 123 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 82

Gin Val His Leu Lys Glu Ser Gly Pro Thr Leu Val Lys Pro Thr Gin 15 10 15

Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser 20 25 30

Gly Val Gly Val Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu 35 40 45

Trp Leu Ala Leu lie Tyr Trp Asn Asp Asp Lys Arg Tyr Ser Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Leu Thr lie Thr Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gin Val 65 70 75 80

Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr 85 90 95

Cys Thr His Thr Ser Arg Tyr Asn Trp His Tyr Gly Phe Leu Asp Tyr 100 105 110

Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 83 gggttctcac tcagcactag tggagtgggt 30

S 22 201201838 <210> 84 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 84

Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser Gly Val Gly 15 10 <210> 85 <211> 21 <212> DNA <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 85 atttattgga atgatgataa g 21 <210> 86 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 86 lie Tyr Trp Asn Asp Asp Lys 1 5 <210> 87 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 87 acacacacct cccgttataa ctggcactac ggcttccttg actac 45 <210> 88 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 23 <220> 201201838 <223>合成 <400> 88

Thr His Thr Ser Arg Tyr Asn Trp His Tyr Gly Phe Leu Asp Tyr 15 10 15 <210> 89 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 89 gccatccaga tgacccagtc tccatcctca ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca gggcattagc aattatttag cctggtttca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagtccct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aagttcagcg gcagtggatc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttatta ctgccaacaa tataatagtt acccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggaaatcaa acga 324 <210> 90 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 90

Ala lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Tyx 20 25 30

Leu Ala Trp Phe Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 91 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 s 24 201201838 <400> 91 cagggcatta gcaattat <210> 92 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 92

Gin Gly lie Ser Asn Tyr 1 5 <210> 93 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 93 gctgcatcc <210> 94 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 94-Ala Ala Ser 1 <210> 95 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 95 caacaatdta atagttaccc gctcact <210> 96 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 201201838 <220> <223>合成 <400> 96

Gin Gin Tyr Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 97 <211> 375 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 97 gaggtgcagc tggtgcagtt gggcccagga ctggtgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcactg tctctggtgg ctccatcagc aatagtaatt actactgggg ctggatccgc 120 cagcccccag ggaaggggct ggagtggatt gggactacct attatagtgg gaccacctac 180 tacaacccgt ccctcaagag tcgagtcacc atatccgtag acacgtccaa gaaccagttc 240 tccctgaagc tgagctctgt gaccgccgca gacacggctg tgtattactg tgcgagagat 300 tattatgata gtagtggtta ttattacaac tggttcgatc cctggggcca gggaaccacg 360 gtcaccgtct cctca 375 <210> 98 <211> 125 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 98

Glu Val Gin Leu Val Gin Leu Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser lie Ser Asn Ser 20 25 30

Asn Tyr Tyr Trp Gly Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu 35 40 45

Trp 工le Gly Thr Thr Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser 50 55 60

Leu Lys Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe 65 70 75 80

Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr 85 90 95

Cys Ala Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyx Tyr Tyr Asn Trp Phe 100 105 110

Asp Pro Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125

<210> 99 <211> 30 <212> DNA

S 26 201201838 <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 99 ggtggctcca tcagcaatag taattactac 30 <210> 100 <211> 10 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 100

Gly Gly Ser lie Ser Asn Ser Asn Tyr Tyr 15 10 <210> 101 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 101 acctattata gtgggaccac c 21 <210> 102 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 102

Thr Tyr Tyr Ser Gly Thr Thr 1 5 <210> 103 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 103 gcgagagatt attatgatag tagtggttat tattacaact ggttcgatcc c 51 27 201201838 <210> 104 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 104

Ala Arg Asp Tyr Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Tyr Tyr Asn Trp Phe Asp 15 10 15

Pro <210> 105 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 105 gccatccaga tgacccagtc tccatcctcc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc 60 atcacttgcc gggcaagtca ggacattaga aatgatttag gctggtatca gcagaaacca 120 gggaaagccc ctaagcgcct gatctatgct gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcagtctca cactcagcag cctgcagcct 240 gaagattttg caacttattt ctgtctacag catcatattt acccgtggac gttcggccaa 300 gggaccaagg tggagatcaa acga 324 <210> 106 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 106

Ala lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Ser Leu Thr Leu Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His His lie Tyr Pro Trp 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105

S 28 201201838 <210> 107 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 107 caggacatta gaaatgat <210> 108 <211> 6 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 108

Gin Asp lie Arg Asn Asp 1 5 <210> 109 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 109 gctgcatcc <210> 110 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 110 Ala Ala Ser 1 <210> 111 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> 201201838 <223>合成 <400> 111 ctacagcatc atatttaccc gtggacg 27 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 112

Leu Gin His His lie Tyr Pro Trp Thr 1 5 <210> 113 <211> 355 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 113 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt cgctatggca ttcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggctgtt atatcttatg atggaagtga tgaatactat 180 gtagactccg tgaagggccg attcagcatc tcccgagaca attccaagaa cacgctttat 240 ctacaaatga acagtctgag gcctgcggac tcggctgttt attactgtgt gaaaggagat 300 ctggaacttg gttttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaa 355 <210> 114 <211> 118 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 114

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Glu Tyr Tyr Val Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Ser lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Val Lys Gly Asp Leu Glu Leu Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr S' 30 201201838 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 115 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 115 ggattcacct tcagtcgcta tggc 24 <210> 116 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 116

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly 1 5 <210> 117 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 117 atatcttatg atggaagtga tgaa 24 <210> 118 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 118 lie Ser Tyr Asp Gly Ser Asp Glu 1 5

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Val Lys Gly Asp Leu Glu Leu Gly Phe Asp Tyr 15 10 <210> 121 <211> 337 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 121 gatattgtga tgactcaggc tgcaccctct atacctgtca ttccaggaga gtcagtatcc 60 atgtcctgca ggtctagtaa gagtctcctg tacagtaatg gacatactta cgtgtattgg 120 tttgtgcaga ggccaggcca gtctcctcag ctcctgatat atcggatgtc caaccttgcc 180 tcaggagtcc cagacaggtt cagtggcagt gggtcaggaa ctgctttcac actgagaatc 240 agtagagtgg aggctgagga tgtgggtgtt tattactgta tgcaaaatct agaatttccg 300 ctcacgttcg gtgctgggac caagctggag ctgaaac 337 <210> 122 <211> 112 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 122

Asp lie Val Met Thr Gin Ala Ala Pro Ser lie Pro Val lie Pro Gly 15 10 15

Glu Ser Val Ser Met Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Ser 20 25 30

Asn Gly His Thr Tyr Val Tyr Trp Phe Val Gin Arg Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Arg Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Ala Phe Thr Leu Arg lie 65 70 75 80

S 32 201201838

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gin Asn 85 90 95

Leu Glu Phe Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 123 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 123 aagagtctcc tgtacagtaa tggacatact tac 33 <210> 124 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 124

Lys Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly His Thr Tyr 15 10 <210> 125 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 125 cggatgtcc 9 <210> 126 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 126 Arg Met Ser 1 <210> 127 <211> 27 33 201201838 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 127 atgcaaaatc tagaatttcc gctcacg 27 <210> 128 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 128

Met Gin Asn Leu Glu Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 129 <211> 355 <212> DNA <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 129 caggtgcagc tggtggaggc ggggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt caccttcagt cgctatggca ttcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggagtg ggtggctgtt atatcttatg atggaactga tgaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccatc tcccgagaca attccaagaa cacgctttat 240 ctacaaatga acagtctgag acctgcggac tcggctgtat attactgtgc gaaaggagat 300 ctggaacttg gttttgacta ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcaa 355 <210> 130 <211> 118 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 130

Gin Val Gin Leu Val Glu Ala Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Thr Asp Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr

S 34 201201838 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Pro Ala Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Gly Asp Leu Glu Leu Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 131 <211> 24 <212> DNA <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 131 ggattcacct tcagtcgcta tggc 24 <210> 132 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 132

Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Gly 1 5 <210> 133 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 133 atatcttatg atggaactga tgaa 24 <210> 134 <211> 8 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 134 lie Ser Tyr Asp Gly Thr Asp Glu 1 5 35 201201838 <210> 135 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 135 gcgaaaggag atctggaact tggttttgac tac 33 <210> 136 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 136

Ala Lys Gly Asp Leu Glu Leu Gly Phe Asp Tyr 10 gtgtctgcat ctgtgggaga cagagtcacc 60 atttggttag cctggtatca gcagagtcca 120 gcatcccgtt tgcaaagtgg ggtcccatca 180 ttcactctca ccatcaacgg tctgcagcct 240 gctaacagtt tcccgatcac cttcggccaa 300 322 1 5 <210> 137 <211> 322 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 137 gccatccggt tgacccagtc tccatcttcc atcacttgtc gggcgagtca ggatattagt gggaaagccc ctaaactcct gatcaatgtt aggttcagcg gcagtggatc tgggacagat gaagattttg taacttacta ttgtcaacag gggacacgac tggcgaccaa ac <210> 138 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 138

Ala lie Arg Leu Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser lie Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Ser Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

S 36 201201838

Asn Val Ala Ser Arg Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Asn Gly Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro lie 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Ala Thr Lys 100 105 <210> 139 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 139 caggatatta gtatttgg 18 <210 140 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 140

Gin Asp lie Ser lie Trp 1 5 <210> 141 <211> 9 <212> DNA <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 141 gttgcatcc 9 <210> 142 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 142 Val Ala Ser 1 37 201201838 <210> 143 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 143 caacaggcta acagtttccc gatcacc 27 <210> 144 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 144

Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro lie Thr 1 5 <210> 145 <211> 358 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 145 caggtgcagc tggtgcagtc tgggggaggc ctggtcaagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt catcttcaat acctatacca tgaattgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcatcc atcactagtc gtggtactta tatattctac 180 tcagactcac ttaagggccg attcaccatt tccagagaca acgccaataa ctcactgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agtcgaagac acggctgttt attactgttc gagagatcgt 300 ggatacacct ttggtcctga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcttcag 358 <210> 146 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 146

Lys Pro Gly Gly 15 Phe Asn Thr Tyr 30

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Gly Gly Leu Val 1 5 10

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe lie 20 25

Thr Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

S 38 201201838 35 40 45

Ser Ser lie Thr Ser Arg Gly Thr Tyr lie Phe Tyr Ser Asp Ser Leu 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr 工le Ser Arg Asp Asn Ala Asn Asn Ser Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ser Arg Asp Arg Gly Tyr Thr Phe Gly Pro Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 147 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 147 ggattcatct tcaataccta tacc 24 <210> 148 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 148

Gly Phe lie Phe Asn Thr Tyr Thr 1 5 <210> 149 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 149 atcactagtc gtggtactta tata 24 <210> 150 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 39 201201838 <400> 150 lie Thr Ser Arg Gly Thr Tyr lie 1 5 <210> 151 <211> 36 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 151 tcgagagatc gtggatacac ctttggtcct gactac 36 <210> 152 <211> 12 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 152

Ser Arg Asp Arg Gly Tyr Thr Phe Gly Pro Asp Tyr 15 10 <210> 153 <211> 322 <212> DNA <213:>人工序列 <220> <223>合成 <400> 153 gacatccaga atcacttgcc gggaaagccc aggttcagcg gaagattttg gggaccaagg <210> 154 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 154 Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15 tgacccagtc gggcaagtca ctaagggcct gcagtggatc caacttatca tggaaatcaa tccatcctcc ggacattaga gatctatgct tgggacagaa ctgtctacat gc ctgtctgcat aatgatttag gcatccagtt ttcactctca tatgattttc ctgtaggaga gctggtatca tgcaaagtgg caatcagcag atcctcggac cagagtcacc 60 gcagaaacca 120 ggtcccatca 180 cctgcagcct 240 gttcggccaa 300 s 40 201201838

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Arg Asn Asp 20 25 30

Leu Gly Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Gly Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr His Cys Leu His Tyr Asp Phe His Pro Arg 85 90 95

Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 155 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 155 caggacatta gaaatgat 18 <210> 156 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 156

Gin Asp lie Arg Asn Asp 1 5 <210> 157 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 157 gctgcatcc 9 <210> 158 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 41 201201838 <400> 158 Ala Ala Ser 1 <210> 159 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 159 ctacattatg attttcatcc tcggacg 27 <210> 160 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 160

Leu His Tyr Asp Phe His Pro Arg Thr 1 5 <210> 161 <211> 391 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 161 caggtgcaac tcctgtgcag ccaggcaagg gcagactccg ctgcaaatga ctatattacg ggccaaggga <210> 162 <211> 130 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 162 tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 cgtctggatt caccttcagt agctatgcca tgcactgggt ccgccaggct 120 ggctggagtg ggtggcagtt atatggtatg atggaactaa ttattactat 180 tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 acagcctgag agccgaggac acggctgtgt attactgtgc gagagatccc 300 atattttgac tggttattcc cccgactact actacggtat ggacgtctgg 360 ccacggtcac cgtctcctca g 391 42 201201838

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Trp Tyr Asp Gly Thr Asn Tyr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Asp Pro Leu Tyr Tyr Asp lie Leu Thr Gly Tyr Ser Pro Asp 100 105 110

Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val 115 120 125

Ser Ser 130 <210> 163 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 163 ggattcacct tcagtagcta tgcc 24 <210> 164 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 164

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 165 <211> 24 <212> DNA <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 165 atatggtatg atggaactaa ttat 24 <210> 166 43 201201838

<211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 166 工le Trp Tyr Asp Gly Thr Asn Tyr 1 5 <210> 167 <211> 69 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 167 gcgagagatc ccctatatta cgatattttg actggttatt cccccgacta ctactacggt 60 atggacgtc 69 <210> 168 <211> 23 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 168 Ala Arg Asp Pro Leu Tyr Tyr Asp 1 5 Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 20 lie Leu Thr Gly Tyr Ser Pro Asp 10 15 <210> 169 <211> 322 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 169 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gacttttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataagt ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa ac 322 <210> 170 44 201201838 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 170

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro 1 5

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 20

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro 35 40

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr 50 55

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr 65 70

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys 85

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys 100

Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 10 15

Ala Ser Gin Thr Phe Ser Ser Asn 25 30

Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 45

Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 60

Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 75 80

Gin Gin Tyr Asn Lys Trp Pro Leu 90 95

Glu lie Lys 105 <210> 171 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 171 18 cagactttta gcagcaac <210> 172 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 172

Gin Thr Phe Ser Ser Asn 1 5 <210> 173 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 45 201201838 <400> 173 ggtgcatcc 9 <210> 174 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 174 Gly Ala Ser 1 <210> 175 <211> 27 <212> DNA <213> AX序列 <220> <223>合成 <400> 175 cagcagtata ataagtggcc gctcact 27 <210> 176 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 176

Gin Gin Tyr Asn Lys Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 177 <211> 367 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 177 cctgagactc 60 ccgccaggct 120 tatatactac 180 cacgctgtat 240 gaaagattcc 300 ggtcaccgtc 360 367 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtccagc ctggggagtc tcctgtgcag cctctggatt cacctttagc agctatgcca tgaactgggt ccagggaagg ggctggagtg ggtctcaact atcagtggta gtggtggtta gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa ctgcaaatga acagcctgag agccgaagac acggccgtat atttctgtgc aggtataact ggaactacgg caattttgac tactggggcc agggaaccct tcctcag 46 201201838 <210> 178 <211> 122 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 178

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Glu 1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala Met Asn Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Thr lie Ser Gly Ser Gly Gly Tyr lie Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95

Ala Lys Asp Ser Arg Tyr Asn Trp Asn Tyr Gly Asn Phe Asp Tyr Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 179 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 179 24 ggattcacct ttagcagcta tgcc <210> 180 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> c223>合成 <400> 180

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 181 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 47 201201838 <220> <223>合成 <400> 181 atcagtggta gtggtggtta tata 24 <210> 182 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 182 工le Ser Gly Ser Gly Gly Tyr lie 1 5 <210> 183 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 183 gcgaaagatt ccaggtataa ctggaactac ggcaattttg actac 45 <210> 184 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 184

Ala Lys Asp Ser Arg Tyr Asn Trp Asn Tyr Gly Asn Phe Asp Tyr 15 10 15 <210> 185 <211> 322 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 185 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gaatgttagc agcaacttag cctggaacaa gcagaaacct 120

S 48 201201838 ggccaggctc ccagactcct catctatgct acatccacca gggccactgg tgtcccagcc 180 aggttcagtg ccagtgggtc tgggacagac ttcgctctca ccatcaacag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa ac 322 <210> 186 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 186

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asn Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Asn Lys Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Thr Ser Thr Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Ala 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ala Leu Thr lie Asn Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 187 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 187 cagaatgtta gcagcaac 18 <210> 188 <211> 6 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>合成 <400> 188

Gin Asn Val Ser Ser Asn 1 5 <210> 189 <211> 9 49 201201838 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 189 gctacatcc 9 <210> 190 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 190 Ala Thr Ser 1 <210> 191 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 191 cagcagtata ataactggcc tctcact 27 <210> 192 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 192

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 193 <211> 367 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 193 3 50 201201838 gaggtgcaac tgttggaatc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgtag cctctcgatt caccttcagc agcaatgcca tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggacgg ggctggagtg ggtctcagct attactggta gtggtagtag gacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacggtgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag aggcgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatcaa 300 gggggtacct ggaactacgg agattttgac tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc 360 tcctcag 367 <210> 194 <211> 122 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 194

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Arg Phe Thr Phe Ser Ser Asn 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Thr Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Thr Gly Ser Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Asp Gin Gly Gly Thr Trp Asn Tyr Gly Asp Phe Asp Tyr Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 195 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 195 cgattcacct tcagcagcaa tgcc 24 <210> 196 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 196

Arg Phe Thr Phe Ser Ser Asn Ala 51 201201838 1 5 <210> 197 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 197 attactggta gtggtagtag gaca 24 <210> 198 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 198 lie Thr Gly Ser Gly Ser Arg Thr 1 5 <210> 199 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 199 gcgaaagatc aagggggtac ctggaactac ggagattttg actac 45 <210> 200 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 200

Ala Lys Asp Gin Gly Gly Thr Trp Asn Tyr Gly Asp Phe Asp Tyr 15 10 15 <210> 201 <211> 322 <212> DNA <213>人工序列 52 201201838 <220> <223>合成 <400> 201 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tctcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagac ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa gc 322 <210> 202 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 202

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly Leu Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 203 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 203 cagagtgtta gcagcaac 18 <210> 204 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 53 201201838 <400> 204

Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5 <210> 205 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 205 ggtgcatcc 9 <210> 206 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 206 Gly Ala Ser 1 <210> 207 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 207 cagcagtata ataactggcc tctcact 27 <210> 208 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 208

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu Thr 1 5

<210> 209 <211> 373 <212> DNA 54 201201838 <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 209 caggtgcagc tggtggagtc tgggggagac gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtacag cctctggatt caccttcagt agttatggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaggg ggctggagtg ggtggcagtt atatcatttg atggaaaaaa taaatactat 180 gcagactccg tgaagggccg attcaccgtc tccagagaca attccaagaa cacgctgttt 240 ctgcaaatga acagcctgag agctgaggac acggctctat attactgtgc gaaaaggata 300 gcagcaactg gttactacta cttctacggt ttggacgtct ggggccaagg gaccacggtc 360 accgtctcct cag 373 <210> 210 <211> 124 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 210

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Arg Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Phe Asp Gly Lys Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Arg lie Ala Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp 100 105 110

Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 211 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 211 ggattcacct tcagtagtta tggc 24 <210> 212 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 s 55 201201838 <220> <223>合成 <400> 212

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly 1 5 <210> 213 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 213 atatcatttg atggaaaaaa taaa 24 <210> 214 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 214 lie Ser Phe Asp Gly Lys Asn Lys 1 5 <210> 215 <211> 51 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 215 gcgaaaagga tagcagcaac tggttactac tacttctacg gtttggacgt c 51 <210> 216 <211> 17 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 216

Ala Lys Arg lie Ala Ala Thr Gly Tyr Tyr Tyr Phe Tyr Gly Leu Asp 1 5 10 15

S 56 201201838

Val <210> 217 <211> 322 <212> DNA <213〉AX序列 <220> <223>合成 <400> 217 gaaataatga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagaggcacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagt agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccagtgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccgtcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa ac 322 <210> 218 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 218

Glu lie Met Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 1 5 10 15

Glu Arg Gly Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Ser Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Val Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 219 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 219 cagagtgtta gtagcaac 18 57 201201838 <210> 220 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 220

Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5 <210> 221 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 221 ggtgcatcc <210> 222 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 222 Gly Ala Ser 1 <210> 223 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 223 cagcagtata ataactggcc gctcact <210> 224 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 201201838 <400> 224

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 225 <211> 367 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 225 gaggttcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctctatc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtgtta gtggtactaa tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca agtccaagaa catgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagatctc 300 ctacataact ggaaatacgg gacttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttcag 367 <210> 226 <211> 122 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 226

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser lie Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Ser Val Ser Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Met Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Asp Leu Leu His Asn Trp Lys Tyr Gly Thr Phe Asp lie Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 227 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 59 <220> 201201838 <223>合成 <400> 227 ggattcacct ctatcaccta tgcc 24 <210> 228 <211> 8 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 228

Gly Phe Thr Ser lie Thr Tyr Ala 1 5 <210> 229 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 229 attagtgtta gtggtactaa taca 24 <210> 230 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 230 lie Ser Val Ser Gly Thr Asn Thr 1 5 <210> 231 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 231 gcgaaagatc tcctacataa ctggaaatac gggacttttg atatc 45 <210> 232 <211> 15 60 201201838 <212> PRT <213〉人工序列 <220> <223>合成 <400> 232

Ala Lys Asp Leu Leu His Asn Trp Lys Tyr Gly Thr Phe Asp lie 15 10 15 <210> 233 <211> 322 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 233 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 cfcctcctgca gggccagtca gagtgttgac agcaacttag tctggtacca acaaaaacct 120 ggccaggttc ccaggctcct; catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataagt ggccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa ac 322 <210> 234 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 234

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Asp Ser Asn 20 25 30

Leu Val Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Val Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Lys Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 235 <211> 18 <212> DNA <213:>人工序列 61 201201838 <220> <223>合成 <400> 235 cagagtgttg acagcaac 18 <210> <211> <212> <213> 236 6 PRT 人工序列 <220> <223> 合成 <400> 236

Gin Ser Val Asp Ser Asn 1 5 <210> <211> <212> <213> 237 9 DNA 人工序列 <220> <223> 合成 <400> 237 ggtgcatcc 9 <210> <211> <212> <213> 238 3 PRT 人工序列 <220> <223> 合成 <400> 238 Gly Ala Ser 1

S <210> <211> <212> <213> 239 27 DNA 人工序列 <220> <223> 合成 <400> 239 cagcagtata ataagtggcc gctcact 27 62 201201838 <210> 240 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 240

Gin Gin Tyr Asn Lys Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 241 <211> 367 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 241 gaggttcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc cgggggggtc cctgagactc 60 tcctgt.gcag cctctggatt cacctctatc acctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtgtta gtggtactaa tacatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca agtccaagaa catgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtgc gaaagatctc 300 ctacataact ggaaatacgg gacttttgat atctggggcc aagggacaat ggtcaccgtc 360 tcttcag 367 <210> 242 <211> 122 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 242

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Ser lie Thr Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Ser Val Ser Gly Thr Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Lys Ser Lys Asn Met Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Asp Leu Leu His Asn Trp Lys Tyr Gly Thr Phe Asp lie Trp 100 105 110

Gly Gin Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser 115 120 63 201201838 <210> 243 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 243 ggattcacct ctatcaccta tgcc 24 <210> 244 <211> 8 <212> PHT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 244

Gly Phe Thr Ser lie Thr Tyr Ala 1 5 <210> 245 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 245 attagtgtta gtggtactaa taca 24 <210> 246 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 246 lie Ser Val Ser Gly Thr Asn Thr 1 5 <210> 247 <211> 45 <212> DNA <213>人工序列 64 <220> 45 45201201838 <223>合成 <400> 247 gcgaaagatc tcctacataa ctggaaatac gggacttttg atatc <210> 248 <211> 15 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 248

Ala Lys Asp Leu Leu His Asn Trp Lys Tyr Gly Thr Phe Asp lie 1 5 10 15 <210> 249 <211> 325 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 249 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctgtgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggaacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccacggg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataacaact ggcccatgta cacttttggc 300 caggggacca agctggagat caaac 325 <210> 250 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 250

Glu 工le Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Asn Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr 工le Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Met 85 90 95

Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 65 201201838 100 105 <210> 251 <211> 18 <212>’ DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 251 cagagtgtta gcagcaac 18 <210> 252 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 252

Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5 <210> 253 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 253 ggtgcatcc 9 <210> 254 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 254 Gly Ala Ser 1 <210> 255 <211> 30 <212> DNA <213>人工序列 66 201201838 <220> <223>合成 <400> 255 cagcagtata acaactggcc catgtacact 30 <210> 256 <211> 10 <212> PRT <213 >人工序列 <220> <223>合成 <400> 256

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Met Tyr Thr 15 10 <210> 257 <211> 361 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 257 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgaag cctctggatt. caccttcagt agttctggca tgcactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctgcagtg ggtggctgtt atatcatatg atggaaataa taaattttat 180 gaagactccg tgaagggccg attgaccatt tccagagaca attccaacaa cactctgtgg 240 ctgcaaatga acagcctgag agttgaagac acggctgttt attactgtgc gaaatcagga 300 ggtagagtgg gagccgcctt tgcctactgg ggccagggaa ccctggtcac cgtctcctca 360 g 361 <210> 258 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 258

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Glu Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gin Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys Phe Tyr Glu Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Leu Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Asn Asn Thr Leu Trp 65 70 75 80 67 201201838

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ser Gly Gly Arg Val Gly Ala Ala Phe Ala Tyr Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 259 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 259 ggattcacct tcagtagttc tggc 24 <210> 260 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 260

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Ser Gly 1 5 <210> 261 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 261 atatcatatg atggaaataa taaa 24 <210> 262 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 262 lie Ser Tyr Asp Gly Asn Asn Lys 1 5

S 68 201201838 <210> 263 <211> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 263 gcgaaatcag gaggtagagt gggagccgcc tttgcctac 39 <210> 264 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 264

Ala Lys Ser Gly Gly Arg Val Gly Ala Ala Phe Ala Tyr 15 10 <210> 265 <211> 337 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 265 gatattgtga acactcagtc tccactctct ctgcccgtca cccctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg tatggtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccagggca ctctccacag ctcctgatct atttgggttc taatcggggc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaagatc 240 agcagagtgg aggctgaaga tgttggcatt tattactgca tgcaaactct acaaactcca 300 ttcactttcg gccctgggac caaaatgtat atcaaac 337 <210> 266 <211> 112 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 266

Asp lie Val Asn Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu Tyr Gly 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly His Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Leu lie Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Gly Ser Gly Val Pro 69 201201838 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly 工le Tyr Tyr Cys Met Gin Thr 85 90 95

Leu Gin Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Met Tyr lie Lys 100 105 110 <210> 267 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 267 33 cagagcctcc tgtatggtaa tggatacaac tat <210> 268 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 268

Gin Ser Leu Leu Tyr Gly Asn Gly Tyr Asn Tyr 15 10 <210> 269 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 269 ttgggttct 9 <210> 270 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 270 Leu Gly Ser 1 s 70 201201838 <210> 271 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 271 atgcaaactc tacaaactcc attcact 27 <210> 272 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 272

Met Gin Thr Leu Gin Thr Pro Phe Thr 1 5 <210> 273 <211> 376 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 273 gaggtgcagc tgttggagtc tgggggaggc ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag gctctggaat cacctttagc agctatgcca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta atggtggtac cacaaactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca actccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagaaaga 300 atccttacca gcagctggac gaggtacggt attatggacg tctggggcca agggaccacg 360 gtcaccgtct cctcag 376 <210> 274 <211> 125 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 274

Glu Val Gin Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Gly Ser Gly lie Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30

Ala Met Ser Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 71 201201838 35 40 45

Ser Ala lie Ser Gly Asn Gly Gly Thr Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Lys Glu Arg lie Leu Thr Ser Ser Trp Thr Arg Tyr Gly lie Met 100 105 110

Asp Val Trp Gly Gin Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 275 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 275 ggaatcacct ttagcagcta tgcc 24 <210> 276 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 276

Gly lie Thr Phe Ser Ser Tyr Ala 1 5 <210> 277 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 277 attagtggta atggtggtac caca 24 <210> 278 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成

S 72 201201838 <400> 278 工le Ser Gly Asn Gly Gly Thr Thr 1 5 <210> 279 <211> 54 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 279 gcgaaagaaa gaatccttac cagcagctgg acgaggtacg gtattatgga cgtc 54 <210> 280 <211> 18 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 280

Ala Lys Glu Arg lie Leu Thr Ser Ser Trp Thr Arg Tyr Gly lie Met 15 10 15

Asp Val <210> 281 <211> 322 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 281 gaaatagtga tgacgcagtc tccagccacc ctgtctatgt ctccagggga aagagccacc 60 ctctcctgca gggccagtca gagtgttagc agcaacttag cctggtacca gcagaaacct 120 ggccaggctc ccaggctcct catctatggt gcatccacca gggccactgg tatcccagcc 180 aggttcagtg gcagtgggtc tgggacagag ttcactctca ccatcagcag cctgcagtct 240 gaagattttg cagtttatta ctgtcagcag tataataact ggcctctcac tttcggcgga 300 gggaccaagt tagagatcaa ac 322 <210> 282 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 282 73 201201838

Glu lie Val Met Thr Gin Ser Pro Ala Thr Leu Ser Met Ser Pro Gly 15 10 15

Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gin Ser Val Ser Ser Asn 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gin Ala Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Gly Ala Ser Thr Arg Ala Thr Gly lie Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Ser 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 <210> 283 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 283 cagagtgtta gcagcaac 18 <210> 284 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 284

Gin Ser Val Ser Ser Asn 1 5 <210> 285 <211> 9 <212> DNA <213> AX序列 <220> <223>合成 <400> 285 ggtgcatcc 9 <210> 286 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 74 201201838 <220> <223>合成 <400> 286 Gly Ala Ser 1 <210> 287 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 287 cagcagtata ataactggcc tctcact 27 <210> 288 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 288

Gin Gin Tyr Asn Asn Trp Pro Leu Thr 1 5 <210> 289 <211> 358 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 289 caggtgcaac tacagcagtg gggcgcagga ctgttgaagc cttcggagac cctgtccctc 60 acctgcgctg tctatggtgg gtccttcagt ggttactact ggagctggat ccgccagccc 120 ccagggaagg ggctggagtg gattggggaa atcaatcata gtggaaacac caactacaac 180 ccgtccctca agagtcgagt caccatatca gtagacacgt ccaagaacca gttctccctg 240 aaactgaact ctgtgaccgc cgcggacacg gctgtgtatt actgtgcgag aagagaggct 300 acagtaactc catactttga ctactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcctcag 358 <210> 290 <211> 119 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 75 201201838 <400> 290

Gin Val Gin Leu Gin Gin Trp Gly Ala Gly Leu Leu Lys Pro Ser Glu 15 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Tyr Gly Gly Ser Phe Ser Gly Tyr 20 25 30

Tyr Trp Ser Trp lie Arg Gin Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Glu lie Asn His Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys 50 55 60

Ser Arg Val Thr lie Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gin Phe Ser Leu 65 70 75 80

Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala 85 90 95

Arg Arg Glu Ala Thr Val Thr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly 100 105 110

Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 291 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 291 ggtgggtcct tcagtggtta ctac 24 <210> 292 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 292

Gly Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Tyr 1 5 <210> 293 <211> 21 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 293 atcaatcata gtggaaacac c 21 <210> 294 76 201201838 <211> 7 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 294 lie Asn His Ser Gly Asn Thr 1 5 <210> 295 <211> 39 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 295 9 3 gcgagaagag aggctacagt aactccatac tttgactac <210> 296 <211> 13 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 296

Ala Arg Arg Glu Ala Thr Val Thr Pro Tyr Phe Asp Tyr 15 10 <210> 297 <211> 322 <212> DNA <213> AX序列 <220> <223>合成 <400> 297 0 0 0 0 2 0 2 8 4 0 2 6 112 3 3 gacatccagt tgacccagtc tccatccttc ctgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc atcacttgct gggccagtca gggcattagc agttatttag cctggtatca gcaaaaacca gggaaagccc ctaagctcct gatctatgct gcatccactt tgcaaagtgg ggtcccatca aggttcagcg gcagtggatc tgggacagaa ttcactctca caatcagcag cctgcagcct gaagattttg caacttatta ctgtcaacag cttaatagtt atccgctcac tttcggcgga gggaccaagg tggagatcaa ac

<210> 298 <211> 107 <212> PRT 77 201201838 <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 298

Asp lie Gin Leu Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Trp Ala Ser Gin Gly lie Ser Ser Tyr 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys 100 105 <210> 299 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 299 cagggcatta gcagttat 18 <210> 300 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 300

Gin Gly lie Ser Ser Tyr 1 5 <210> 301 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 301 gctgcatcc 9 s 78 201201838

<210> 302 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 302 Ala Ala Ser 1 <210> 303 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 303 caacagctta atagttatcc gctcact 27 <210> 304 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 304

Gin Gin Leu Asn Ser Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 305 <211> 355 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 305 caggtgcagc tggtggagtc tgggggaggc gtggtccagc ctgggaggtc cctgagactc 60 tcctgtgtag tctctggatt caacttcagt aggaatggca tacactgggt ccgccaggct 120 ccaggcaagg ggctggaatg ggtggcagtt atatcatatg atggaagaaa taaattttat 180 gtagagtccg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgtat 240 ctgcaaatga acagtctgag agttgaggac acggctgtat attactgtgc gaaatcctca 300 attggagggt tttttgaata ctggggccag ggaaccctgg tcaccgtctc ctcag 355 <210> 306 <211> 118 79 201201838 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 306

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Arg 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Val Ser Gly Phe Asn Phe Ser Arg Asn 20 25 30

Gly lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Lys Phe Tyr Val Glu Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Val Glu Asp Thr Ala Val Tyr lyr Cys 85 90 95

Ala Lys Ser Ser lie Gly Gly Phe Phe Glu Tyr Trp Gly Gin Gly Thr 100 105 110

Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 307 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 307 24 ggattcaact tcagtaggaa tggc <210> 308 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 308

Gly Phe Asn Phe Ser Arg Asn Gly 1 5 <210> 309 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 s 80 201201838 <400> 309 atatcatatg atggaagaaa taaa 24 <210> 310 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 310 lie Ser Tyr Asp Gly Arg Asn Lys 1 5 <210> 311 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 311 33 gcgaaatcct caattggagg gttttttgaa tac <210> 312 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 312

Ala Lys Ser Ser lie Gly Gly Phe Phe Glu Tyr 15 10 <210> 313 <211> 337 <212> DNA <213> AX序列 <220> <223>合成 <400> 313 gatattgtga tgactcagtc tccactctcc ctgcccgtca ctcctggaga gccggcctcc 60 atctcctgca ggtctagtca gagcctcctg catagtaatg gatacaacta tttggattgg 120 tacctgcaga agccaggaca gtctccacaa ctcatgatct atttgggttc tcatcgggcc 180 tccggggtcc ctgacaggtt cagtggcagt ggatcaggca cagattttac actgaaaatc 240 agcagagtgg aggctgagga tgttggagtc tattactgca ttcaagttca acaaactccg 300 atcaccttcg gccaagggac acggctggag attaaac 337

S 81 201201838 <210> 314 <211> 112 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 314

Asp lie Val Met Thr Gin Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 15 10 15

Glu Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Leu His Ser 20 25 30

Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gin Lys Pro Gly Gin Ser 35 40 45

Pro Gin Leu Met 工le Tyr Leu Gly Ser His Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys lie Gin Val 85 90 95

Gin Gin Thr Pro lie Thr Phe Gly Gin Gly Thr Arg Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 315 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 315 33 cagagcctcc tgcatagtaa tggatacaac tat <210> 316 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 316

Gin Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr 15 10 <210> 317 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 82 <220> 201201838 <223>合成 <400> 317 ttgggttct <210> 318 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 318 Leu Gly Ser 1 9 <210> 319 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 319 attcaagttc aacaaactcc gatcacc <210> 320 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 320 工le Gin Val Gin Gin Thr Pro lie Thr .1 5 7 2 <210> 321 <211> 337 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 321 gatattgtga tgactcagac tccactctcc tcacctgtca cccttggaca gccggcctcc atctcctgca ggtctagtca aagcctcgta cacagtgatg gaaacaccta cttgagttgg cttcagcaga ggccaggcca gcctccaaga ctcctaattt acaagatttc taaccggttc tctggggtcc cagacagatt cagtggcagt ggggcaggga cagatttcac actgaaaatc 0 2 8 4 6 112 83 201201838 agcagggtgg aagctgagga tgtcggggtt tatttctgca tgcaagctac acaatttccg 300 tacacttttg gccaggggac caagctggag atcaaag 337 <210> 322 <211> 112 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 322

Asp lie Val Met Thr Gin Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 15 10 15

Gin Pro Ala Ser lie Ser Cys Arg Ser Ser Gin Ser Leu Val His Ser 20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Ser Trp Leu Gin Gin Arg Pro Gly Gin Pro 35 40 45

Pro Arg Leu Leu lie Tyr Lys lie Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro 50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys lie 65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Phe Cys Met Gin Ala 85 90 95

Thr Gin Phe Pro Tyr Thr Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys 100 105 110 <210> 323 <211> 33 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 323 caaagcctcg tacacagtga tggaaacacc tac 33 <210> 324 <211> 11 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 324

Gin Ser Leu Val His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr 15 10 <210> 325 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 84 201201838 <220> <223>合成 <400> 325 aagatttct 9 <210> 326 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 326 Lys lie Ser 1 <210> 327 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 327 atgcaagcta cacaatttcc gtacact 27 <210> 328 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 328

Met Gin Ala Thr Gin Phe Pro Tyr Thr 1 5 <210> 329 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <220> <221>變異體 <222> (1)…（1) 85 201201838 <223> Xaa = Gly <220> <221>變異體 <222> (2) ... (2) <223> Xaa = Phe <220> <221>變異體 <222> (3)...(3) <223> Xaa = Thr <220> <221>變異體 <222> (4)...(4) <223> Xaa = Phe <220> <221>變異體 <222> (5) ... (5) <223> Xaa = Ser <220> <221>變異體 <222> (6)...(6) <223> Xaa = Ala 或 Ser <220> <221>變異體 <222> ⑺…（7) <223> Xaa = Phe或 Tyr <220> <221>麵體 <222> (8)...(8) <223> Xaa = Gly 或 Ala <400> 329

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 330 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成

S 86 <220> 201201838 <221> 變異體 <222> (1) ·. .(1) <223> Xaa = lie <220> <221> 變異體 <222> (2)... .⑵ <223> Xaa = Gly 或 Ser <220> <221> 變異體 <222> (3)… .(3) <223> Xaa = Tyr 或 Gly <220> <221> 變異體 <222> (4)… (4) <223> Xaa = Ser 或 Asp <220> <221> 變異體 <222> (5) · · _ (5) <223> Xaa = Gly <220> <221> 變異體 <222> (6)... (6) <223> Xaa = Gly <220> <221> 變異體 <222> (7)… .(7) <223> Xaa = Ser 或 Asn <220> <221> 變異體 <222> ⑻… .(8) <223> Xaa = Ala 或 Glu <400> 330 Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 331 <211> 13 <212> PRT <213> 人工序列 <220> 87 201201838 <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> 合成變異體 (1)…（1) Xaa = Ser 或 Ala 變異體 (2) ... (2) Xaa = Thr 或 Lys 變異體 (3) ... (3) Xaa = Asp 或 lie 變異體 (4)...(4) Xaa = Gly 或 Ser <220> <221> <222> <223> 變異體 (5)...(5) Xaa = Ala 或 His <220> <221> <222> <223> 變異體(6)...(6} Xaa = Trp 或 Tyr <220> <221> <222> <223> 變異體 ⑺…（7) Xaa = Lys 或 Asp <220> <221> <222> <223> 變異體 (8).,. (8) Xaa = Met 或 lie <220> <221> <222> <223> 變異體 (9)...(9) Xaa = Ser 或 Leu

S 88 <220> 201201838 <221>變異體 <222> (10)...(10) <223> Xaa = Gly 或 Ser <220> <221>變異體 <222> (11)...(11) <223> Xaa = Leu 或 Gly <220> <221>變異體 <222> (12)...(12) <223> Xaa = Asp 或 Met <220> <221>變異體 <222> (13)...(13) <223> Xaa = Val 或 Asp <220> <221>變異體 <222> (14)…（14) <223> Xaa = Val或不存在 <400> 331

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 15 10 <210> 332 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <220> <221>變異體 <222> (1)-.-(1) <223> Xaa = Gin <220> <221>變異體 <222> (2) . . . (2) <223> Xaa = Asp 或 Gly <220> <221>變異體 <222> (3) . . . (3) 89 201201838 <223> Xaa = lie <220> <221>變異體 <222> ⑷…（4) <223> Xaa = Ser <220> <221>變異體 <222> {5)...(5) <223> Xaa = Asp 或 Asn <220> <221>變異體 <222> (6)...(6) <223> Xaa = Tyr 或 Trp <400> 332

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 <210> 333 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <220> <221>變異體 <222>⑴…⑴ <223> Xaa = Thr 或 Ala <220> <221>變異體 <222> (2)...(2) <223> Xaa = Thr 或 Ala <220> <221>變異體 <222> (3)...(3) <223> Xaa = Ser <400> 333 Xaa Xaa Xaa 1

<210> 334 <211> 9 <212> PRT

S 90 201201838 <213>人工序列 <220> <223>合成 <220> <221>變異體 <222> (1)…（1) <223> Xaa = Gin <220> <221>變異體 <222> (2)…（2) <223> Xaa = Lys 或 Gin <220> <221>變異體 <222> (3)…（3) <223> Xaa = Ala 或 Tyr <220> <221>變異體 <222> (4)…（4) <223> Xaa = Asp 或 Asn <220> <221>變異體 <222> (5)...(5) <223> Xaa = Ser <220> <221>變異體 <222> (6)…（6) <223> Xaa = Ala 或 Phe <220> <221>變異體 <222> (7)…（7) <223> Xaa = Pro <220> <221>變異體 <222> (8)…⑻ <223> Xaa = Leu <220> <221>變異體 <222> (9)...(9) <223> Xaa = Thr 201201838

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 5 <400> 334 Xaa Xaa Xaa Xaa 1 <210> 335 <211> 330 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 335 Ala Ser Thr Lys 1 Ser Thr Ser Gly 20 Phe Pro Glu Pro 35 Gly Val His Thr 50 Leu Ser Ser Val 65 Tyr lie Cys Asn Lys Val Glu Pro 100 Pro Ala Pro Glu 115 Lys Pro Lys Asp 130 Val Val Val Asp 145 Tyr Val Asp Gly Glu Gin Tyr Asn 180 His Gin Asp Trp 195 Lys Ala Leu Pro 210 Gin Pro Arg Glu 225 Leu Thr Lys Asn Pro Ser Asp lie 260 Asn Tyr Lys Thr 275 Leu Tyr Ser Lys 290 Val Phe Ser Cys 305 Gin Lys Ser Leu

Gly Pro Ser Val Phe Pro 5 10

Gly Thr Ala Ala Leu Gly 25

Val Thr Val Ser Trp Asn 40

Phe Pro Ala Val Leu Gin 55

Val Thr Val Pro Ser Ser 70

Val Asn His Lys Pro Ser 85 90

Lys Ser Cys Asp Lys Thr 105

Leu Leu Gly Gly Pro Ser 120

Thr Leu Met 工le Ser Arg 135

Val Ser His Glu Asp Pro 150

Val Glu Val His Asn Ala 165 170

Ser Thr Tyr Arg Val Val 185

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 200

Ala Pro 工le Glu Lys Thr 215

Pro Gin Val Tyr Thr Leu 230

Gin Val Ser Leu Thr Cys 245 250

Ala Val Glu Trp Glu Ser 265

Thr Pro Pro Val Leu Asp 280

Leu Thr Val Asp Lys Ser 295

Ser Val Met His Glu Ala 310

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

Leu Ala Pro Ser Ser Lys 15

Cys Leu Val Lys Asp Tyr 30

Ser Gly Ala Leu Thr Ser 45

Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 60

Ser Leu Gly Thr Gin Thr 75 80

Asn Thr Lys Val Asp Lys 95

His Thr Cys Pro Pro Cys 110

Val Phe Leu Phe Pro Pro 125

Thr Pro Glu Val Thr Cys 140

Glu Val Lys Phe Asn Trp 155 160

Lys Thr Lys Pro Arg Glu 175

Ser Val Leu Thr Val Leu 190

Lys Cys Lys Val Ser Asn 205 lie Ser Lys Ala Lys Gly 220

Pro Pro Ser Arg Asp Glu 235 240

Leu Val Lys Gly Phe Tyr 255

Asn Gly Gin Pro Glu Asn 270

Ser Asp Gly Ser Phe Phe 285

Arg Trp Gin Gin Gly Asn 300

Leu His Asn His Tyr Thr 315 320 s 92 201201838 325 330 <210> 336 <211> 327 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 336

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 245 250 255 lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325 93 201201838 <210> 337 <211> 327 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 337

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 15 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 115 120 125

Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 130 135 140

Asp Val Ser Gin Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Phe 165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp 180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 195 200 205

Pro Ser Ser lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg 210 215 220

Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gin Glu Glu Met Thr Lys 225 230 235 240

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Glu Gly Asn Val Phe Ser 290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys 325

<210> 338 <211> 1128 <212> DNA

S 94 201201838 <213>智慧人 <400> 338 atgcaaaaac tgcaactctg tgtttatatt tacctgttta tgctgattgt tgctggtcca 60 gtggatctaa atgagaacag tgagcaaaaa gaaaatgtgg aaaaagaggg gctgtgtaat 120 gcatgtactt ggagacaaaa cactaaatct tcaagaatag aagccattaa gatacaaatc 180 ctcagtaaac ttcgtctgga aacagctcct aacatcagca aagatgttat aagacaactt 240 ttacccaaag ctcctccact ccgggaactg attgatcagt atgatgtcca gagggatgac 300 agcagcgatg gctctttgga agatgacgat tatcacgcta caacggaaac aatcattacc 360 atgcctacag agtctgattt tctaatgcaa gtggatggaa aacccaaatg ttgcttcttt 420 aaatttagct ctaaaataca atacaataaa gtagtaaagg cccaactatg gatatatttg 480 agacccgtcg agactcctac aacagtgttt gtgcaaatcc tgagactcat caaacctatg 540 aaagacggta caaggtatac tggaatccga tctctgaaac ttgacatgaa cccaggcact 600 ggtatttggc agagcattga tgtgaagaca gtgttgcaaa attggctcaa acaacctgaa 660 tccaacttag gcattgaaat aaaagcttta gatgagaatg gtcatgatct tgctgtaacc 720 ttcccaggac caggagaaga tgggctgaat ccgtttttag aggtcaaggt aacagacaca 780 ccaaaaagat ccagaaggga ttttggtctt gactgtgatg agcactcaac agaatcacga 840 tgctgtcgtt accctctaac tgtggatttt gaagcttttg gatgggattg gattatcgct 900 cctaaaagat ataaggccaa ttactgctct ggagagtgtg aatttgtatt tttacaaaaa 960 tatcctcata ctcatctggt acaccaagca aaccccagag gttcagcagg cccttgctgt 1020 actcccacaa agatgtctcc aattaatatg ctatatttta atggcaaaga acaaataata 1080 tatgggaaaa ttccagcgat ggtagtagac cgctgtgggt gctcatga 1128 <210> 339 <211> 375 <212> PRT <213>智慧人 <400> 339

Met Gin Lys Leu Gin Leu Cys Val Tyr lie Tyr Leu Phe Met Leu lie 15 10 15

Val Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asn Ser Glu Gin Lys Glu Asn 20 25 30

Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gin Asn Thr 35 40 45

Lys Ser Ser Arg lie Glu Ala I.le Lys lie Gin lie Leu Ser Lys Leu 50 55 60

Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn lie Ser Lys Asp Val lie Arg Gin Leu 65 70 75 80

Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu lie Asp Gin Tyr Asp Val 85 90 95

Gin Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His 100 105 110

Ala Thr Thr Glu Thr lie lie Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu 115 120 125

Met Gin Val Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser 130 135 140

Lys lie Gin Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gin Leu Trp lie Tyr Leu 145 150 155 160

Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gin lie Leu Arg Leu 165 170 175 工le Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly lie Arg Ser Leu 180 185 190

Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly Thr Gly lie Trp Gin Ser lie Asp Val 195 200 205

Lys Thr Val Leu Gin Asn Trp Leu Lys Gin Pro Glu Ser Asn Leu Gly 95 201201838 210 215 220 lie Glu lie Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr 225 230 235 240

Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys 245 250 255

Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp Cys 260 265 270

Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val 275 280 285

Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie lie Ala Pro Lys Arg Tyr 290 295 300

Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gin Lys 305 310 315 320

Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala 325 330 335

Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr 340 345 350

Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr Gly Lys lie Pro Ala Met Val 355 360 365

Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 370 375 <210> 340 <211> 109 <212> PRT <213>智慧人 <400> 340

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie 20 25 30 lie Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu 35 40 45

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr Gly 85 90 95

Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 341 <211> 1224 <212> DNA <213>智慧人 <400> 341 atggtgctcg cggccccgct gctgctgggc ttcctgctcc tcgccctgga gctgcggccc 60 cggggggagg cggccgaggg ccccgcggcg gcggcggcgg cggcggcggc ggcggcagcg 120 gcgggggtcg ggggggagcg ctccagccgg ccagccccgt ccgtggcgcc cgagccggac 180 ggctgccccg tgtgcgtttg gcggcagcac agccgcgagc tgcgcctaga gagcatcaag 240 tcgcagatct tgagcaaact gcggctcaag gaggcgccca acatcagccg cgaggtggtg 300 s 96 201201838 aagcagctgc tgcccaaggc gccgccgctg cagcagatcc tggacctaca cgacttccag 360 ggcgacgcgc tgcagcccga ggacttcctg gaggaggacg agtaccacgc caccaccgag 420 accgtcatta gcatggccca ggagacggac ccagcagtac agacagatgg cagccctctc 480 tgctgccatt ttcacttcag ccccaaggtg atgttcacaa aggtactgaa ggcccagctg 540 tgggtgtacc tacggcctgt accccgccca gccacagtct acctgcagat cttgcgacta 600 aaacccctaa ctggggaagg gaccgcaggg ggagggggcg gaggccggcg tcacatccgt 660 atccgctcac tgaagattga gctgcactca cgctcaggcc attggcagag catcgacttc 720 aagcaagtgc tacacagctg gttccgccag ccacagagca actggggcat cgagatcaac 780 gcctttgatc ccagtggcac agacctggct gtcacctccc tggggccggg agccgagggg 840 ctgcatccat tcatggagct tcgagtccta gagaacacaa aacgttcccg gcggaacctg 900 ggtctggact gcgacgagca ctcaagcgag tcccgctgct gccgatatcc cctcacagtg 960 gactttgagg ctttcggctg ggactggatc atcgcaccta agcgctacaa ggccaactac 1020 tgctccggcc agtgcgagta catgttcatg caaaaatatc cgcataccca tttggtgcag 1080 caggccaatc caagaggctc tgctgggccc tgttgtaccc ccaccaagat gtccccaatc 1140 aacatgctct acttcaatga caagcagcag attatctacg gcaagatccc tggcatggtg 1200 gtggatcgct gtggctgctc ttaa 1224 <210> 342 <211> 407 <212> PRT <213>智慧人 <400> 342

Met Val Leu Ala Ala Pro Leu Leu Leu Gly Phe Leu Leu Leu Ala Leu 15 10 15

Glu Leu Arg Pro Arg Gly Glu Ala Ala Glu Gly Pro Ala Ala Ala Ala 20 25 30

Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Val Gly Gly Glu Arg Ser 35 40 45

Ser Arg Pro Ala Pro Ser Val Ala Pro Glu Pro Asp Gly Cys Pro Val 50 55 60

Cys Val Trp Arg Gin His Ser Arg Glu Leu Arg Leu Glu Ser lie Lys 65 70 75 80

Ser Gin lie Leu Ser Lys Leu Arg Leu Lys Glu Ala Pro Asn lie Ser 85 90 95

Arg Glu Val Val Lys Gin Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Gin Gin 100 105 110 lie Leu Asp Leu His Asp Phe Gin Gly Asp Ala Leu Gin Pro Glu Asp 115 120 125

Phe Leu Glu Glu Asp Glu Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Val lie Ser 130 135 140

Met Ala Gin Glu Thr Asp Pro Ala Val Gin Thr Asp Gly Ser Pro Leu 145 150 155 160

Cys Cys His Phe His Phe Ser Pro Lys Val Met Phe Thr Lys Val Leu 165 170 175

Lys Ala Gin Leu Trp Val Tyr Leu Arg Pro Val Pro Arg Pro Ala Thr 180 185 190

Val Tyr Leu Gin lie Leu Arg Leu Lys Pro Leu Thr Gly Glu Gly Thr 195 200 205

Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg Arg His lie Arg lie Arg Ser Leu 210 215 220

Lys lie Glu Leu His Ser Arg Ser Gly His Trp Gin Ser lie Asp Phe 225 230 235 240

Lys Gin Val Leu His Ser Trp Phe Arg Gin Pro Gin Ser Asn Trp Gly 245 250 255 lie Glu lie Asn Ala Phe Asp Pro Ser Gly Thr Asp Leu Ala Val Thr 260 265 270 97 201201838

Sex Leu Gly Pro Gly Ala Glu Gly Leu His Pro Phe Met Glu Leu Arg 275 280 285

Val Leu Glu Asn Thr Lys Arg Ser Arg Arg Asn Leu Gly Leu Asp Cys 290 295 300

Asp Glu His Ser Ser Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val 305 310 315 320

Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie lie Ala Pro Lys Arg Tyr 325 330 335

Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gin Cys Glu Tyr Met Phe Met Gin Lys 340 345 350

Tyr Pro His Thr His Leu Val Gin Gin Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala 355 360 365

Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr 370 375 380

Phe Asn Asp Lys Gin Gin lie lie Tyr Gly Lys lie Pro Gly Met Val 385 390 395 400

Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 405 <210> 343 <211> 109 <212> PRT <213>智慧人 <400> 343

Asn Leu Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Ser Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie 20 25 30 工le Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gin Cys Glu 35 40 45

Tyr Met Phe Met Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val Gin Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Asp Lys Gin Gin lie lie Tyr Gly 85 90 95

Lys lie Pro Gly Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 344 <211> 1503 <212> DNA <213>智慧人 <400> 344 atgagactcc ccaaactcct cactttcttg ctttggtacc tggcttggct ggacctggaa 60 ttcatctgca ctgtgttggg tgcccctgac ttgggccaga gaccccaggg gaccaggcca 120 ggattggccaaagcagaggc caaggagagg ccccccctgg cccggaacgt cttcaggcca 180 gggggtcaca gctatggtgg gggggccacc aatgccaatg ccagggcaaa gggaggcacc 240 gggcagacag gaggcctgac acagcccaag aaggatgaac ccaaaaagct gccccccaga 300 ccgggcggcc ctgaacccaa gccaggacac cctccccaaa caaggcaggc tacagcccgg 360 actgtgaccc caaaaggaca gcttcccgga ggcaaggcac ccccaaaagc aggatctgtc 420 cccagctcct tcctgctgaa gaaggccagg gagcccgggc ccccacgaga gcccaaggag 480 s 98 201201838 ccgtttcgcc caccccccat cacaccccac gagtacatgc tctcgctgta caggacgctg 540 tccgatgctg acagaaaggg aggcaacagc agcgtgaagt tggaggctgg cctggccaac 600 accatcacca gctttattga caaagggcaa gatgaccgag gtcccgtggt caggaagcag 660 aggtacgtgt ttgacattag tgccctggag aaggatgggc tgctgggggc cgagctgcgg 720 atcttgcgga agaagccctc ggacacggcc aagccagcgg cccccggagg cgggcgggct 780 gcccagctga agctgtccag ctgccccagc ggccggcagc cggcctcctt gctggatgtg 840 cgctccgtgc caggcctgga cggatctggc tgggaggtgt tcgacatctg gaagctcttc 900 cgaaacttta agaactcggc ccagctgtgc ctggagctgg aggcctggga acggggcagg 960 gccgtggacc tccgtggcct gggcttcgac cgcgccgccc ggcaggtcca cgagaaggcc 1020 ctgttcctgg tgtttggccg caccaagaaa cgggacctgt tctttaatga gattaaggcc 1080 cgctctggcc aggacgataa gaccgtgtat gagtacctgt tcagccagcg gcgaaaacgg 1140 cgggccccac tggccactcg ccagggcaag cgacccagca agaaccttaa ggctcgctgc 1200 agtcggaagg cactgcatgt caacttcaag gacatgggct gggacgactg gatcatcgca 1260 ccccttgagt acgaggcttt ccactgcgag gggctgtgcg agttcccatt gcgctcccac 1320 ctggagccca cgaatcatgc agtcatccag accctgatga actccatgga ccccgagtcc 1380 acaccaccca cctgctgtgt gcccacgcgg ctgagtccca tcagcatcct cttcattgac 1440 tctgccaaca acgtggtgta taagcagtat gaggacatgg tcgtggagtc gtgtggctgc 1500 agg 1503 <210> 345 <211> 501 <212> PRT <213>智慧人 <400> 345

Met Arg Leu Pro Lys Leu Leu Thr Phe Leu Leu Trp Tyr Leu Ala Trp 15 10 15

Leu Asp Leu Glu Phe lie Cys Thr Val Leu Gly Ala Pro Asp Leu Gly 20 25 30

Gin Arg Pro Gin Gly Thr Arg Pro Gly Leu Ala Lys Ala Glu Ala Lys 35 40 45

Glu Arg Pro Pro Leu Ala Arg Asn Val Phe Arg Pro Gly Gly His Ser 50 55 60

Tyr Gly Gly Gly Ala Thr Asn Ala Asn Ala Arg Ala Lys Gly Gly Thr 65 70 75 80

Gly Gin Thr Gly Gly Leu Thr Gin Pro Lys Lys Asp Glu Pro Lys Lys 85 90 95

Leu Pro Pro Arg Pro Gly Gly Pro Glu Pro Lys Pro Gly His Pro Pro 100 105 110

Gin Thr Arg Gin Ala Thr Ala Arg Thr Val Thr Pro Lys Gly Gin Leu 115 120 125

Pro Gly Gly Lys Ala Pro Pro Lys Ala Gly Ser Val Pro Ser Ser Phe 130 135 140

Leu Leu Lys Lys Ala Arg Glu Pro Gly Pro Pro Arg Glu Pro Lys Glu 145 150 155 160

Pro Phe Arg Pro Pro Pro lie Thr Pro His Glu Tyr Met Leu Ser Leu 165 170 175

Tyr Arg Thr Leu Ser Asp Ala Asp Arg Lys Gly Gly Asn Ser Ser Val 180 185 190

Lys Leu Glu Ala Gly Leu Ala Asn Thr lie Thr Ser Phe lie Asp Lys 195 200 205

Gly Gin Asp Asp Arg Gly Pro Val Val Arg Lys Gin Arg Tyr Val Phe 210 215 220

Asp lie Ser Ala Leu Glu Lys Asp Gly Leu Leu Gly Ala Glu Leu Arg 225 230 235 240 lie Leu Arg Lys Lys Pro Ser Asp Thr Ala Lys Pro Ala Ala Pro Gly 245 250 255 99 201201838

Gly Gly Arg Ala Ala Gin Leu Lys Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gly Arg 260 265 270

Gin Pro Ala Ser Leu Leu Asp Val Arg Ser Val Pro Gly Leu Asp Gly 275 280 285

Ser Gly Trp Glu Val Phe Asp lie Trp Lys Leu Phe Arg Asn Phe Lys 290 295 300

Asn Ser Ala Gin Leu Cys Leu Glu Leu Glu Ala Trp Glu Arg Gly Arg 305 310 315 320

Ala Val Asp Leu Arg Gly Leu Gly Phe Asp Arg Ala Ala Arg Gin Val 325 330 335

His Glu Lys Ala Leu Phe Leu Val Phe Gly Arg Thr Lys Lys Arg Asp 340 345 350

Leu Phe Phe Asn Glu lie Lys Ala Arg Ser Gly Gin Asp Asp Lys Thr 355 360 365

Val Tyr Glu Tyx Leu Phe Ser Gin Arg Arg Lys Arg Arg Ala Pro Leu 370 375 380

Ala Thr Arg Gin Gly Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys Ala Arg Cys 385 390 395 400

Ser Arg Lys Ala Leu His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly Trp Asp Asp 405 410 415

Trp lie lie Ala Pro Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys Glu Gly Leu 420 425 430

Cys Glu Phe Pro Leu Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn His Ala Val 435 440 445 lie Gin Thr Leu Met Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr Pro Pro Thr 450 455 460

Cys Cys Val Pro Thr Arg Leu Ser Pro lie Ser lie Leu Phe lie Asp 465 470 475 480

Ser Ala Asn Asn Val Val Tyr Lys Gin Tyr Glu Asp Met Val Val Glu 485 490 495

Ser Cys Gly Cys Arg 500 <210> 346 <211> 120 <212> PRT <213>智慧人 <400> 346

Ala Pro Leu Ala Thr Arg Gin Gly 1 5

Ala Arg Cys Ser Arg Lys Ala Leu 20

Trp Asp Asp Trp lie lie Ala Pro 35 40

Glu Gly Leu Cys Glu Phe Pro Leu 50 55

His Ala Val lie Gin Thr Leu Met 65 70

Pro Pro Thr Cys Cys Val Pro Thr 85

Phe lie Asp Ser Ala Asn Asn Val 100

Val Val Glu Ser Cys Gly Cys Arg 115 120

Lys Arg Pro Ser Lys Asn Leu Lys 10 15

His Val Asn Phe Lys Asp Met Gly 25 30

Leu Glu Tyr Glu Ala Phe His Cys 45

Arg Ser His Leu Glu Pro Thr Asn 60

Asn Ser Met Asp Pro Glu Ser Thr 75 80

Arg Leu Ser Pro lie Ser lie Leu 90 95

Val Tyr Lys Gin Tyr Glu Asp Met 105 110 s 100 201201838 <210> 347 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 347

Gin Ala Lys His Lys Gin Arg Lys Arg Leu Lys Ser Ser Cys Arg Tyr 15 10 15

Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie lie Ala 20 25 30

Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val 35 40 45

Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala Asn Pro 50 55 60

Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro lie 65 70 75 80

Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr Gly Lys lie 85 90 95

Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 348 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 348

Ala Leu Asp Thr Asn Tyr Cys Phe Ser Ser Thr Glu Lys Asn Cys Cys 15 10 15

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr Gly 85 90 95

Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 349 <211> 111 <212> PRT <213>人工序列 101 201201838 <220> <223>合成 <400> 349

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Lys Arg His Pro Leu Tyr Val Asp Phe Ser Asp Val Gly Trp Asn Asp 20 25 30

Trp lie Val Ala Pro Pro Gly Tyr His Ala Phe Tyr Cys Ser Gly Glu 35 40 45

Cys Glu Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His 50 55 60

Gin Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys 65 70 75 80

Met Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie 85 90 95

Tyr Gly Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 110 <210> 350 <211> 110 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 350

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Val Arg Gin Leu Tyr 工le Asp Phe Arg Lys Asp Leu Gly Trp Lys. Trp 20 25 30 lie His Glu Pro Lys Gly Tyr His Ala Asn Phe Cys Ser Gly Glu Cys 35 40 45

Glu Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin 50 55 60

Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met 65 70 75 80

Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr 85 90 95

Gly Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 110 <210> 351 <211> 114 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 351

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

S 102 201201838

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie 20 25 30 lie Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Pro 35 40 45

Phe Pro Leu Ala Asp His Leu Asn Ser Thr Asn His Ala lie Val Gin 50 55 60

Thr Leu Val Asn Ser Val Asn Ser Lys lie Pro Lys Ala Cys Cys Thr 65 70 75 80

Pro Thr Lys Met Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu 85 90 95

Gin lie lie Tyr Gly Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly 100 105 110

Cys Ser <210> 352 <211> 112 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 352

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Tyr lie Trp Ser Leu Asp Thr Gin Tyr Ser Lys Val Leu Ala Leu Tyr 50 55 60

Asn Gin His Asn Pro Gly Ala Ser Ala Ala Pro Cys Cys Thr Pro Thr 65 70 75 80

Lys Met Ser Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie 85 90 95 lie Tyr Gly Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 110 <210> 353 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 353

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie 20 25 30 工le Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu 35 40 45 103 201201838

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Ser Val Asn Ser Lys lie Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr Gly 85 90 95

Lys lie Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 354 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 354

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Gly Ala Ser Ala Ala Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gin lie lie Tyr Gly 85 90 95

Lys He Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 355 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 355

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie 20 25 30 工le Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu 35 40 45

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Val Pro Thr Glu Leu Ser 65 70 75 80

Ala lie Ser Met Leu Tyr Leu Asp Glu Asn Glu Lys Val Val Leu Lys 85 90 95

S 104 201201838

Asn Tyr Gin Asp Met Val Val Glu Gly Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 356 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 356 Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu 1 5

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe 20 工le Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala 35 40

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro 50 55

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro 65 70

Pro Leu Pro lie Val Tyr Tyr Val 85

Leu Ser Asn Met 工le Val Arg Ser 100

His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 10 15

Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp lie 25 30

Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu 45

His Thr His Leu Val His Gin Ala 60

Cys Cys Val Pro Gin Ala Leu Glu 75 80

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Cys Gly Cys Ser 105 <210> 357 <211> 109 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 357

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp 工le 20 25 30 lie Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu 35 40 45

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Lys Val Val Leu Lys 85 90 95

Asn Tyr Gin Asp Met Val Val Glu Gly Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 358 <211> 108 105 201201838 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 358

Asp Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys 15 10 15

Phe Val Phe Leu Gin Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gin Ala 50 55 60

Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser 65 70 75 80

Pro lie Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Lys Pro Lys Val Glu Gin 85 90 95

Leu Ser Asn Met lie Val Arg Ser Cys Gly Cys Ser 100 105 <210> 359 <211> 360 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 359 gaggtgcagg tgttggagtc tgggggagac ttggtacagc ctggggggtc cctgagactc 60 tcctgtgcag cctctggatt cacctttagt gcctatgcca tgacctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggctggagtg ggtctcagct attagtggta gtggtggtag cgcatactac 180 gcagactccg tgaagggccg gttcaccatc tccagagaca attccaagaa cacggtatat 240 ctgcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtat attactgtgc gaaagatggg 300 gcctggaaaa tgtccggttt ggacgtctgg ggccaaggga ccacggtcat cgtctcctca 360 <210> 360 <211> 120 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 360

Glu Val Gin Val Leu Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Gin Pro Gly Gly 15 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ala Tyr 20 25 30

Ala Met Thr Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ser Ala lie Ser Gly Ser Gly Gly Ser Ala Tyr Tyr Ala Asp Ser Val s 106 60 201201838 50 55

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg 65 70

Leu Gin Met Asn Ser Leu Arg Ala 85

Ala Lys Asp Gly Ala Trp Lys Met 100

Gly Thr Thr Val lie Val Ser Ser 115 120

Asp Asn Ser Lys Asn Thr Val Tyr 75 80

Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 90 95

Ser Gly Leu Asp Val Trp Gly Gin 105 110 <210> 361 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 361 ggattcacct ttagtgccta tgcc 24 <210> 362 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 362

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Ala Lys Asp Gly Ala Trp Lys Met Ser Gly Leu Asp Val 15 10 <210> 367 <211> 321 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 367 gacatccaga tgacccagtc tccagcctcc ctgtctgcat ctgttggaga cagagtcacc 60 atcacttgtc gggcgagtca ggacattagc gattatttag cctggtatca gcagaaacca 120 gggaaaattc ctaggctcct gatctatact acatccactt tgcaatcagg ggtcccatct 180 cggttccgtg gcagtgggtc tgggacagat ttcactctca ccatcagcag cctgcagcct 240 gaagatgttg caacttatta ctgtcagaag tatgacagtg ccccgctcac tttcggcgga 300 gggaccaagg tggagatcaa a 321 <210> 368 <211> 107 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 368

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Asp lie Ser Asp Tyr 20 25 30 108 201201838

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys 工le Pro Arg Leu Leu lie 35 40 45

Tyr Thr Thr Ser Thr Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Arg Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Leu 85 90 95

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Gin Asp lie Ser Asp Tyr 1 5 <210> 371 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 371 actacatcc <210> 372 <211> 3 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 372 109 201201838

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Gin Lys Tyr Asp Ser Ala Pro Leu Thr 1 5 <210> 375 <211> 363 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 375 tgggggaggc gtggtccagc ctgggaagtc cctgcgactc 60 caccttcagt agttttggca tgcattgggt ccgccaggct 120 ggtggcagtt attgggtatg atggaggtaa tgaatactat 180 attcaccatc tccagagaca attccaagaa cacgctgaat 240 ageegaagae acggctgtgt attattgttc gactataagt 300 tatggacgtc tggggccgag ggaccacggt caccgtctcc 360 363 caggtgcagc tggtggagtc tcctgtgcag cgtctggatt ccaggcaagg ggctggagtg gccgactccg tgaagggccg ctgcaaatga gcagcctgag cattacgata ttttgagcgg tea <210> 376 <211> 121 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 376

Gin Val Gin Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gin Pro Gly Lys 15 10 15 s 110 201201838

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45

Ala Val lie Gly Tyr Asp Gly Gly Asn Glu Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr lie Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn 65 70 75 80

Leu Gin Met Ser Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ser Thr lie Ser His Tyr Asp lie Leu Ser Gly Met Asp Val Trp Gly 100 105 110

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Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly 1 5 <210> 379 <211> 24 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 379 attgggtatg atggaggtaa tgaa 24 <210> 380 <211> 8 <212> PRT <213>人工序列 111 201201838 <220> <223>合成 <400> 380 lie Gly Tyr Asp Gly Gly Asn Glu 1 5 <210> 381 <211> 42 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 381 tcgactataa gtcattacga tattttgagc ggtatggacg tc 42 <210> 382 <211> 14 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 382

Ser Thr lie Ser His Tyr Asp lie Leu Ser Gly Met Asp Val 15 10 <210> 383 <211> 324 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 383 gtgtctgcat ctgtaggaga cagagtcacc aactggttag cctggtatca gcagaaacca gcatccagtt tgcaaagtgg ggtcccatca ttcactctca ccatcaacag cctgcagcct gctaacagtt tcccgctcac tttcggcgga 0 2 8 4 0 2 6 112 3 3 gacatccaga tgacccagtc tccatcttcc atcacttgtc gggcgagtca gggtattagc gggaaagccc ctaagctcct gatctttgct cggttcagcg gcagtgcatc tgggacagat gaagattttg caacttacta ttgtcaacag gggaccaagg tggagatcaa acga <210> 384 <211> 108 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 112 201201838 <400> 384

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Ser Asn Trp 20 25 30

Leu Ala Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lie 35 40 45

Phe Ala Ala Ser Ser Leu Gin Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Ala Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lie Asn Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Leu 85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lie Lys Arg 100 105 <210> 385 <211> 18 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 385 cagggtatta gcaactgg 18 <210> 386 <211> 6 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 386

Gin Gly lie Ser Asn Trp 1 5 <210> 387 <211> 9 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 387 gctgcatcc 9

<210> 388 <211> 3 <212> PRT 113 201201838 <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 388 Ala Ala Ser 1 <210> 389 <211> 27 <212> DNA <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 389 27 caacaggcta acagtttccc gctcact <210> 390 <211> 9 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 390

Gin Gin Ala Asn Ser Phe Pro Leu Thr 1 5 <210> 391 <211> 340 <212> PRT <213>人工序列 <220> <223>合成 <400> 391

Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys lie Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu 1 5 . 10 15

Glu Arg Thr Asn Gin Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gin Asp 20 25 30

Lys Arg Leu -His Cys Tyr Ala Ser Trp Ala Asn Ser Ser Gly Thr lie 35 40 45

Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp 50 55 60

Arg Gin Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gin Val Tyr Phe Cys 65 70 75 80

Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu 85 90 95

Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Ser 114 201201838 100 105 110

Gly Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu 115 120 125

Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu 130 135 140

Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 145 150 155 160

His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu 165 170 175

Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr 180 185 190

Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn 195 200 205

Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro 210 215 220 lie Glu Lys Thr 工le Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin 225 230 235 240

Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gin Val 245 250 255

Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lie Ala Val 260 265 270

Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro 275 280 285

Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr 290 295 300

Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val 305 310 315 320

Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser Leu Ser Leu 325 330 335

Ser Pro Gly Lys 340 115

Claims

201201838 七、申請專利範圍： 1. -種單離人類抗體或其抗原·結合片段，其特異性與含SEQ ro NO . 340之野生型成熟人類GDF8 結合或阻斷其生物活性，但不與嵌合 GDF8/TCT|31建構物結合或阻斷其生物活性，該敗合GDF8/TGFP1建構物具有經TGFy之對應胺基酸序列所取代的成熟人類GDF8的胺基酸 48_72 。 2. 如申請專利範圍第1項的單離抗體或其抗原-結合片段，其中該嵌合GDF8/TGF01建構物包含SEQ ID NO : 352的胺基酸序列。 3. 如申請專利範圍第1或2項的單離抗體或其抗原-結合片段’其中該抗體或抗原-結合片段包含：（a) 重鏈 CDR (HCDIU、HCDR2 與 HCDR3)，其係來自具有選自由SEQ ID NO : 114、360以及376所構成之群組的胺基酸序列的重鏈可變區域；以及 (b)輕鏈 CDR (LCDR卜 LCDR2 與 LCDR3)，其係來自具有選自由SEQ ID NO : 122、368以及384 所構成之群組的胺基酸序列的輕鏈可變區域。 4. 如申請專利範圍第3項的單離抗體或其抗原-結合片段’其中該抗體或抗原-結合片段包含：（a) 201201838 HCDR1/HCDR2/HCDR3胺基酸序列，選自於由 SEQ ID NO : 116/118/120、362/364/366 與 376/380/382所構成之群組；以及⑼ LCDR1/LCDR2/LCDR3胺基酸序列，選自於由 SEQ ID NO : 124/126/128、370/372/374 與 386/388/390所構成之群組。 5.如申請專利範圍第4項的單離抗體或其抗原_結合片段，其中該抗體或抗原-結合片段包含選自於由 SEQ ID NO : 116/118/120/124/126/128、 362/364/366/370/372/374 與 376/380/382/386/388/390所構成之群組的重鏈及輕鏈CDR胺基酸序列。 6·如申請專利範圍第5項的單離抗體或其抗原_結合片段，其中該抗體或抗原-結合片段包含選自於由 SEQ ID NO : 114/122、360/368 與 376/384 所構成之群組的重鏈及輕鏈可變區胺基酸序列對 (HCVR/LCVR)。 7.如申請專利範圍第1至6項中任一項的單離抗體或其抗原-結合片段，其中該抗體或抗原_結合片段包含 HDCPU、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2 與LCDR3胺基酸序列，其中： (a) HCDR1 ’ 含有式 χΐ_χ2_χ3_χ4 χ5_χ6 χ7 χ8 的胺基酸序列（SEQ ID NO : 329)，其中χΐ為 Gly ; X2 為 Phe ; X3 為 Thr ; X4 為 Phe ; X5 為 Ser ; X6 為 Ala 或 Ser ; X7 為 Phe 或 Tyr ; X8 為 Gly 或 Ala ; (b) HCDR2 ’ 含有式 χΐ·χ2_χ3_χ4_χ5_χ6_χ7 χ8 的胺基酸序列(SEQIDNO:330)，其中χ1為Ile; X2 為 Gly 或 Ser ; X3 為 Tyr 或 Gly ; X4 為 Ser 或 Asp ; X5 為 Gly ; Χ6 為 Gly ; χ7 為％或 Asn ;而 X8 為 Ala 或 Glu ; (c) HCDR3，含有式 XLxLx'XVkW-XS-XWLx'xI X14的胺基酸序列（SEQ ID NO: 331)，其中χ1 為 Ser 或 Ala ; X2 為 Thr 或 Lys ; X3 為 Asp 或 lie ; X4 為 Gly 或 Ser ; X5 為 Ala 或 His ; X6 為 Trp 或 Tyr ; X7 為 Lys 或 Asp ; X8 為 Met 或 He ; X9 為 Ser 或 Leu ; X10 為 Gly 或 Ser ; X11 為 Leu 或 Gly ; X12 為 Asp 或 Met ; X丨3 為 Val或Asp ; χ14為Val或不存在； (d) LCDR1 ’ 含有式 χι_χ2_χ3_χ4_χ5_χ6 的胺基酸序列(SEQ ID NO : 332)，其中 X1 為 Gin ; X2 為 AsP 或 Gly ; X3 為 lie ; X4 為 Ser ; X5 為 Asp 或 Asn ’ 而 χ6 為 Tyr 或 Trp ; (e) LCDR2 ’含有式χι·χ2_χ3的胺基酸序列(SEq 201201838 ID NO : 333)，其中 X1 為 Thr 或 Ala ; X2 為 Thr或Ala ;而X3為Ser ;以及 (f) LCDR3，含有式 Χ^ΧΙΧΙΧ'Χ^ΧΙΧ'Χ^Χ9 的胺基酸序列(SEQIDNO : 334)，其中X1為 Gin ; X2 為 Lys 或 Gin ; X3 為 Ala 或 Tyr ; X4 為 Asp 或 Asn ; X5 為 Ser ; X6 為 Ala 或 Phe ; X7 為 Pro ; X8 為 Leu ;且 X9 為 Thr。 8. —種單離人類抗體或其抗原-結合片段，結合至如申請專利範圍第1至7項中任一項的單離抗體或其抗原-結合片段之野生型成熟人類GDF8 (SEQ ID NO : 340)上的相同抗原決定區。 9. 一種單離人類抗體或其抗原-結合片段，其與如申請專利範圍第1至7項中任一項的單離抗體或其抗原-結合片段競爭結合野生型成熟人類GDF8 (SEQ ID NO : 340)。 10. —種醫藥組成物，其包含如申請專利範圍第1至 9項中任一項的抗體或其抗原-結合片段及醫藥學上可接受的載劑或稀釋劑。 11. 如申請專利範圍第1至9項中任一項的單離抗體或抗原-結合片段，或如申請專利範圍第10項的 S 201201838 7 =、''成物，其係用於治療罹患、經診斷為罹患 =抑制GDF8活性而治療之疾病或病症或處於罹患風險下的病患。 12. 專利範圍第11項的單離抗體或其抗原-結 "片*又’其巾該可藉由抑制GDF8活性而治療之或病症是選自於由下列所構成之群組的疾病 Ϊ病症·肌肉減少症、惡病質以及因為不用或固定所致的肌肉萎縮症。用飞U 13. 第1至9項中任-項的單離抗體的罄、，、°〇片段，或如申請專利範圍第10項的醫樂組成物於製造醫藥品之用途，該醫藥品供 >口療罹患、診斷輕患可藉由抑制卿8活性而心療之疾病或病症或處於羅患風險下的病患。 A 第13項的用途，其中該可藉由抑活性而治療之疾病或病症是選自於由下列所構成之群組的疾病或病症··肌肉減少症、亞病質以及因為不用或固定所致的肌肉萎縮症/ -種在患者_抑制GDF8活㈣方需要的患者投與如申請專』圍第亥至員中任-項的單離抗體或其抗原_結合片 5 15, 201201838 段，或如申請專利範圍第1〇項的醫藥組成物。 16. 如申請專利範圍第】5項的方法，其中該患者罹患、經診斷為罹患選自於由下列所構成之群組的疾病或病症或處於罹患的風險下：肌肉減少症、惡病質以及因為不用或固定所致的肌肉萎縮症。