TW201200152A - Novel antibody formulation - Google Patents

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201200152 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於一種含針對表皮生長因子受體之抗體 (抗-EGFR抗體）的醫藥調配物、製備該調配物之方法、及 該調配物之用途。 【發明内容】 於第一態樣中，本發明係關於一種醫藥調配物，其包 含： 1至200 mg/ml之IgG類抗-EGFR抗體； 1至100 mM之緩衝劑； 0.001至1 w/v%之界面活性劑； 1至500 mM之至少一種安定劑； 其pH範圍為4.0至7.0。 根據本發明之調配物之提供形式可為液體形式、凍乾形 式或自凍乾形式復水所得之液體形式。 除非於下文中另外定義，否則文中所用之術語通常係如 相關技術中所用。 如文中所用，術語「IgG-類抗-EGFR抗體」包括屬於免 疫球蛋白G(IgG)類免疫球蛋白之抗體，其靶向人類表皮生 長因子受體（EGFR)，又稱HER-1或ErbB-l(Ullrich等人， Nature 309，418-425(1984) ; SwissProt寄存編號 P00533 ; 二級寄存編號：000688、000732、P06268、Q14225、 Q68GS5 ' Q92795、Q9BZS2、Q9GZX1、Q9H2C9、 Q9H3C9、Q9UMD7、Q9UMD8、Q9UMG5)、及其天然存 152420.doc 201200152 在之同功異型物及變體。 適用於根據本發明之調配物的IgG類抗-EGFR抗體實例 包括西妥昔單抗（cetuximab)/IMC-C225(Erbitux® ’闡述於 Goldstein等人，Clin Cancer Res 1，1311-1318(1995)中）、 盤尼圖單抗（panitumumab)/ABX-EGF(Vectibix®，闡述於 Yang等人，Cancer Res 59，1236-1243(1999)，Yang等人， Critical Reviews in Oncology/Hematology 38，17-23(2001) 中）、尼妥珠單抗（nimotuzumab)/h-R3(TheraCim®，闡述於 Mateo 等人，Immunotechnology 3, 71-81(1997); Crombet-Ramos 等人，Int J Cancer 101, 567-575(2002), Boland & Bebb，Expert Opin Biol Ther 9，1199-1206(2009)中）、馬茲 替尼（matuzumab)/EMD 72000(闡述於 Bier 等人，Cancer Immunol Immunother 46, 167-173(1998), Kim, Curr Opin Mol 1116犷6，96-103(2004)中）、及紮魯妥木單抗（231111；111111111^1))/2卩8 (闡述於Bleeker等人，J Immunol 173，4699-4707(2004), Lammerts van Bueren，PNAS 105，6109-6114(2008)中）。 適用於根據本發明之調配物之較佳IgG類抗-EGFR抗體 闡述於WO 2006/082515及WO 2008/017963中，其全文係 以引用的方式併入文中，且該等抗體包括具如下特徵之抗 體：其等係嵌合抗體，且對大鼠單株抗體ICR62具結合特 異性，且其等效應子功能可藉由改變糖基化而增強。 較佳抗體之特徵為：其等包含至少一個（亦即一個、兩 個、三個、四個、五個、或六個）大鼠ICR62抗體中之互補 決定區（CDR) '或其之至少含有該CDR之特異性決定殘基 152420.doc 201200152 之變體或截斷形式，並包含衍生自異源性多肽之序列。 「特異性決定殘基」意指彼等直接參與與抗原之相互作用 之殘基。明確言之，較佳抗體包含：（a)自由如下組成之群 中選出之重鏈CDR1序列：SEQ ID NO:l、SEQ ID NO:2、 SEQ ID ΝΟ·3、SEQ ID ΝΟ··4、SEQ ID ΝΟ··5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:ll、SEQ ID NO:12、及 SEQ ID NO:13 ; (b)自由如下組成之群中選出之重鏈CDR2序列： SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17 ' SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:20、 SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24 ' SEQ ID NO:25 ' SEQ ID NO:26 > SEQ ID NO:27 ' SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:29、及 SEQ ID NO:30 ;及（c) 重鏈CDR3序列SEQ ID NO:31。較佳之抗體另外包含：（a) 自由SEQ ID NO:32及SEQ ID NO:33組成之群中選出之輕 鏈CDR1序列；（b)輕鏈CDR2序列SEQ ID NO:34 ;及（c)輕 鏈 CDR3序列 SEQ ID NO:3 5。 更佳之抗體之特徵為：其等包含至少三個大鼠ICR62抗 體中之CDR、或其等之至少含有該等CDR之特異性決定殘 基的變體或截斷形式。 最佳抗體包含： a) 於重鏈可變域中，包含SEQ ID ΝΟ:1之CDR1、SEQ ID NO:16之 CDR2、及 SEQ ID NO:31 之 CDR3，及

b) 於輕鏈可變域中，包含SEQ ID NO:33之CDR1、SEQ ID 152420.doc 201200152 NO:34之 CDR2、及 SEQ ID NO:35之 CDR3 〇 其他較佳抗體包含：如SEQ ID NO:36之大鼠ICR62抗體 中之重鏈可變域、或其變體；及非齧齒類多肽。此外，較 佳抗體可包含如SEQ ID NO:3 7之大鼠ICR62抗體中之輕鏈 可變域、或其變體；及非齧齒類多肽。 更佳抗體包含如SEQ ID NO:38之重鏈可變域、及如SEQ IDNO:39之輕鏈可變域。 較佳抗體為靈長類化抗體，或更佳人類化抗體。 「人類化」抗體係指包含如下部份之嵌合抗體：源自非 人類高變區（HVR)之胺基酸殘基、及源自人類框架區（FR) 之胺基酸殘基。人類化抗體大體上通常包含兩個可變域， 其中所有或大體上所有之HVR(例如互補決定區（cdr))對 應於非人類抗體之HVR，且所有或大體上所有之FR對應於 人類抗體之FR。人類化抗體視需要可包含源自人類抗體之 抗體恒定區中之至少一部份。「人類化形式」之抗體（例如 非人類抗體）係指經人類化之抗體。人類化可藉由相關技 術中已知之多種方法實現，其包括但不限於將整個非人 類可變域移植至人類恒定區來產生嵌合抗體；（b)僅將非人 ;(例如供體抗體）CDR_移植至人類（例如受體抗體）框架區 及恒定區，且可保留或不保留關鍵框架殘基（例如彼等對 於保持良好之抗原結合親和力或抗體功能而言重要之殘 基），（C)僅將非人類特異性決定區（SDR4CDR ;對於抗體_ 抗原相互作用而言非常重要之殘基）移植至人類框架區及 隍定區，或（d)移植整個非人類可變域，但藉由置換表面殘 152420.doc 201200152 基而以類人類部份將其等「覆蓋」。 適用於根據本發明之調配物之抗體較佳包含人類Fc區。 更佳地，人類重鏈恒定區為如SEQ ID NO:40所示之Ig ^， 亦即抗體屬於人類IgGl亞類。 較佳抗體經糖基工程化處理而在Fc區中具有改變之寡糖 結構。 明確言之，較佳抗體之Fc區中之非岩藻糖基化寡糖之比 例較未經糖基工程化處理之抗體提高。非岩藻糖基化寡糖 之比例較佳為至少20% ’更佳至少50、至少70%，最佳至 少75°/〇。非岩藻糖基化寡糖可為雜化型或複合型。 較佳抗體之Fc區中之平分型寡糖之比例亦提高。平分型 券糖於抗體Fc區中之百分比較佳為所有寡糖之至少5〇0/〇， 更佳至少60%、至少70%、至少80%、或至少90%，且最佳 至少 90-95%。 特佳抗體之Fc區中之平分型非岩藻糖基化寡糖之比例提 高。該平分型非岩藻糖基化寡糖可為雜化型或複合型。明 確言之，較佳抗體為抗體Fc區中，至少15%，更佳至少 20%，更佳至少25%，更佳至少30〇/。，更佳至少35%之寡糖 為平分型非岩藻糖基化寡糖。 如文中所用’術語「糖基工程化」包括對天然存在或重 組之蛋白質、多肽、或其片段操作之任何糖基化模式。糠 基工程化處理包秸對細胞之糖基化機轉進行代謝上之工程 處理’包括基因操作寡糖合成途徑，以改變於該等細胞中 所表現之糖蛋白的糖基化。更進一步，糖基工程化處理包 152420.doc 201200152 括突變及細胞環境對糖基化之影響。特^言之，糖夷 化處理可使細胞中之糖基轉移酶活性改變，諸如使^糖胺 轉移扭及/或石·藻糖轉移酶活性改變。 非岩藻糖基化及/或平分型之相對含量為不含岩藻糖及/ 或具有平分型㈣Ac殘基之碳水化合物結構相對於藉由 mALDI-t〇f MS’於經N_糖㈣以理之蛋白質樣本令所 識別之所有糖結構的百分比。 較佳抗體之特徵亦為：其等經糖基工程化處理而具有增 強之效應子功能及/或增加之卜受體結合親和力。如文中 所用’術語「效應子功能」係指歸因於抗體Fc區(天然序 列Fc區或胺基酸序列變體以區）的生物學活性。 增強之效應子功能較佳為下列一或多個：增強Fc所介導 之細胞毒性作用（包括增強抗體依賴性細胞毒性作用 (ADCC))、增強抗體依賴性細胞呑噬作用（ADcp)、增強細 胞激素分泌、增強免疫-複合物介導呈現抗原之細胞攝入 抗原、增強與天然殺手（NK)細胞之結合、增強與巨嗔細胞 之結合、增強與單核細胞之結合、增強與多形核細胞之結 合、促進直接信號轉導所誘發之細胞凋亡、增強結合標靶 之抗體的交聯、增強樹突狀細胞成熟、或增強丁細胞激發 作用。增強結合FC受體之親和力較佳為增強與卜活化受體 之結合力’最佳為增強與FqRina之結合力。

適用於根據本發明之調配物的最佳IgG_類抗_EGFR抗體 之特徵為.其包含如SEQ ID NO:38之重鏈可變域、及如 SEQ ID NO:39之輕鏈可變域，經人類化，且包含如SEQ 152420.doc 201200152

ID NO:40所示之人類重鏈恒定區Igy-l。將該抗體稱為 「hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb」。hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb可經如上所述之糖基工程化處理或未經糖基工程化處 理，而使Fc區中之非岩藻糖基化寡糖的比例較未經糖基工 程化處理之抗體提高。 適用於根據本發明之調配物的抗體較佳藉由重組方法製 得，例如藉由彼等闡述於WO 2006/082515及WO 2008/017963 中之方法。於相關技術中已熟知該等方法，且包括於原核 或真核細胞中表現蛋白質，隨後分離出抗體多肽，並通常 純化至醫藥上可接受純度。就蛋白質表現而言，藉由標準 方法將編碼輕鏈及重鏈或其片段之核酸插入適宜表現載體 中。於適宜宿主細胞中進行表現，適宜宿主細胞包括經培 養之細胞，較佳為經培養之哺乳動物細胞，諸如CHO細 月包、HEK 293細月包、HEK293-EBNA細胞、BHK細胞、NS0 細胞、SP2/0細胞、YO骨髓瘤細胞、P3X63小鼠骨髓瘤細 胞、PER細胞、PER.C6細胞或融合瘤細胞、大腸桿菌（E. coli)細胞、酵母細胞、昆蟲細胞及植物細胞、及轉殖基因 動物、轉殖基因植物或經培養之植物或動物組織所含之細 胞。較佳宿主細胞為CHO細胞。用於表現抗體之宿主細胞 可經操作以改變糖基轉移酶活性水平，諸如改變葡糖胺轉 移酶及/或岩藻糖轉移酶活性，進而製得糖基化模式改變 的抗體。宿主細胞較佳經操作而使得具有β(1,4)-Ν-乙醯基 葡糖胺轉移酶III(GnTIII)活性之一種或多種多肽的表現量 增加，並視需要使具有甘露糖普酶II(Manll)活性之一種或 152420.doc 201200152 多種多肽的表現量增加。具有GnTIII活性之多肽可為融合 多肽，其包含：GnTIII之催化域、及異源性高爾基體駐留 多肽之高爾基體定位域（較佳為甘露糖苷酶II之高爾基體定 位域）。可用於適用於本發明之IgG類抗-EGFR抗體的糖基 工程化處理方法闡述於如下文獻中，其全文係以引用的方 式併入文中：WO 2006/082515 ; WO 2008/017963 ;美國 專利案第 6,602,684號；EP 1071700 ; WO 1999/54342 ;美 國專利申請公開案第2004/0241817號；EP 1587921 ; WO 2004/065540 ; Umafia等人，Nature Biotechnol 17，176-180 (1999);及 Ferrara 等人，Biotechn Bioeng 93，851-861 (2006)。 藉由標準技術，自細胞（上清液或溶胞後之細胞）回收抗 體，標準技術為例如蛋白質A親和層析術、尺寸排除層析 法、及相關技術中已熟知之其他方法，例如闡述於WO 2006/0825 15及 WO 2008/017963 中之方法。 根據本發明之調配物中所使用之抗體之濃度為約1至約 200 mg/ml，較佳約1至約1〇〇 mg/ml，更佳約10至約75 mg/ml，且最佳約20至約50 mg/ml。 如文中所用，術語「缓衝劑」係指可使醫藥製劑之pH穩 定的醫藥上可接受賦形劑。適宜緩衝劑已於相關技術中已 知，且可參見文獻。例如可使用檸檬酸鹽、乙酸鹽、組胺 酸鹽、琥珀酸鹽、蘋果酸鹽、磷酸鹽或乳酸鹽、及/或其 對應之游離酸或鹼、及多種鹽及/或其酸及鹼之混合物。 較佳之醫藥上可接受缓衝液包括但不限於組胺酸緩衝液、 152420.doc • 10· 201200152 檸檬酸鹽緩衝液、琥拍酸鹽緩衝液、乙酸鹽緩衝液及磷酸 鹽緩衝液。較佳緩衝液為乙酸鹽緩衝液，最佳為乙酸納緩 衝液。其他較佳緩衝液為組胺酸緩衝液，亦即含有組胺酸 (通常為L-組胺酸）作為缓衝劑之缓衝液。最佳為[_組胺酸/ HC1緩衝液’其包含L-組胺酸或L-組胺酸與^組胺酸鹽酸 鹽之混合物，並利用鹽酸達成pH調節。除非另外指出，否 則當術語「L-組胺酸」於文中用於闡述緩衝劑時，其係指 L-組胺酸/HC1緩衝液。L-組胺酸/HC1緩衝液之製法可為： 將適量L-組胺酸及L-組胺酸鹽酸鹽溶解於水中，或將適量 L-組胺酸溶解於水中，並藉由添加鹽酸而使？11調節至所需 數值。上述緩衝液之使用濃度通常為：約1 mM至約1〇〇 mM，較佳約1〇 mM至約50 mM，更佳約15至3〇 mM，且最 佳為20 mM。無論使用何種緩衝液，均可利用相關技術中 已知之酸或驗’例如鹽酸、乙酸、磷酸、硫酸及檸檬酸、 氫氧化鈉及氫氧化鉀，將pH值調節至處於如下範圍：約 4.0至約7.0，較佳約5.〇至約6 〇，且最佳約5 5。 如文中所用，術語「界面活性劑」係指醫藥上可接受之 表面活性劑。較佳使用非離子型界面活性劑。醫藥上可接 受之界面活性劑實例包括但不限於聚氧乙烯_山梨糖醇酐 脂肪酸酯（Tween)、聚氧乙烯烷基醚（Brij)、烷基苯基聚氧 乙稀謎（Triton X)、聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物 (Poloxamer ' Pluronic)、及十二烷基硫酸鈉（SDS)。較佳之 聚氧乙烯-山梨糖醇酐脂肪酸酯為聚山梨醇酯2〇(聚氧乙烯 山梨糖醇酐單月桂酸酯，商品名Tween 2〇TM)及聚山梨醇酯 152420.doc 201200152 80(聚氧乙烯山梨糖醇酐單油酸酯，商品名Tween 80ΤΜ)。 較佳之聚乙烯-聚丙烯共聚物為市售物Pluronic® F68或 Poloxamer 188™。較佳之聚氧乙烯烧基醚為市售物 Brij™。較佳之烷基苯基聚氧乙烯醚為市售物Triton X，最佳 為對第三辛基苯氧基聚乙氧基乙醇（市售物Triton X-100™)。 當使用聚山梨醇酯20(Tween 20™)及聚山梨醇酯80(Tween 80™)時，其等使用濃度範圍通常為約0.001至約1%，較佳 約0.01至約0.1%，且更佳約0.02%至約0.05%。於本發明調 配物中，界面活性劑之濃度係以百分比闡述，表示為重量/ 體積（w/v)。 如文中所用，術語「安定劑」係指保護活性醫藥成份及/ 或調配物在製造、貯存及使用期間免遭化學及/或物理降 解的醫藥上可接受賦形劑。安定劑包括但不限於醣類、胺 基酸、多元醇（例如甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、葡聚 糖、甘油、阿拉伯膠醇、丙二醇、聚乙二醇）、環糊精（例 如輕丙基- β-ί哀糊精、續丁基乙基- β- 壤糊精、β - ί哀糊精）、 聚乙二醇（例如 PEG 3000、PEG 3350、PEG 4000、PEG 6000)、白蛋白（例如人類血清白蛋白（HSA)、牛血清白蛋 白（BSA))、鹽類（例如氯化鈉、氯化鎂、氣化鈣）、螯合劑 (例如如下文所定義之EDTA)。如上所述，安定劑於調配物 中之存在量可為約1至約500 mM，較佳約10至約300 mM， 且更佳約120 mM至約3 00 mM。調配物中可存在一種以上 選自相同或不同群組之安定劑。 如文中所用，術語「醣類」包括單糖及寡糖。單糖為不 152420.doc •12· 201200152 可由酸水解之單體碳水化合物’包括單糖及其衍生物，例 如胺基糖。醣類通常係呈D構型。單糖實例包括葡萄糖、 果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖、核糖、去氧核糖、神經 胺（糖）酸。募糖為由經糖苷鍵鍵結一個以上單體糖單元組 成，且可為支鏈或直鏈之碳水化合物，寡糖中之單體糖單 元可為相同或不同。取決於單體糖單元之數量，寡糖為雙 糖、三糖、四糖、五糖，等醣類。不同於多醣，單糖及寡 糖為水溶性。寡糖實例包括蔗糖、海藤糖、乳糖、麥芽糖 及棉子糖。較佳醣類為蔗糖及海藻糖（亦即a，a_D_海藻 糖）’最佳為蔗糖。海藻糖可呈海藻糖二水合物獲得。醣 類於調配物令之存在量可為約1〇〇至約5〇〇 mM，較佳約 200至約3 00 mM，最佳約240 mM。 如文中所用，術語「胺基酸」係指具有位於羧基位上 之胺基部份基團的醫藥上可接受有機分子。胺基酸實例包 括但不限於精胺酸、甘胺酸、鳥胺酸、離胺酸、組胺酸、 麩胺酸、天冬胺酸、異白胺酸、白胺酸、丙胺酸、苯丙胺 酸、酪胺酸、色胺酸、甲硫胺酸、絲胺酸、脯胺酸。所用 之胺基&L較佳各呈L·型。諸如精胺酸、組胺酸、或離胺酸 之鹼性胺基&較佳係呈其無機鹽形式使用（宜呈鹽酸鹽形 式，亦即呈胺基酸鹽酸鹽形式）。較佳之胺基酸為精胺酸 鹽酸鹽及甲硫胺酸。f硫胺酸之使用濃度較佳為約1〇至約 25 mM，最佳約10 mM。精胺酸鹽酸鹽之使用濃度較佳為 約100至約200 mM，最佳之濃度為約155 mM。 安疋劑之子組為;東乾保護劑。術語「凍乾保護劑」係指 J52420.doc • J3- 201200152 在;東乾製程中及隨後之貯存及復水期間保護不穩定活彳生成 份（例如蛋白質）抵抗不安定條件的醫藥上可接受賦形劑。 凍乾保護劑包括但不限於由以下組成之群：聽類、多元醇 (諸如例如糖醇）及胺基酸。較佳之凍乾保護劑可自如下组 成之群中選出：_類（諸如蔗糖、海藻糖、乳糖、葡萄 糖、甘露糖、麥芽糖、半乳糖、果糖、山梨糖、棉子糖、 神經胺（糖）酸）、胺基糖（諸如葡萄糖胺、半乳糖胺、N—甲 基葡萄糖胺（「葡甲胺」））、多元醇（諸如甘露糖醇及山梨 糖醇）、及胺基酸（諸如精胺酸及甘胺酸）或其混合物。凍乾 保護劑之使用量通常為約10至500 mM，較佳約1〇至約3〇〇 mM，且更佳約1〇〇至約3〇〇 mM。 -安定劑之子組為抗氧化劑。術語「抗氧化劑」係指防 止醫藥活性成份氧化之醫藥上可接受賦形劑。抗氧化劑包 括但不限於抗壞血酸、谷胱甘肽、半耽胺酸、甲硫胺酸、 檸檬酸、EDTA。抗氧化劑之使用量可為約〇〇ι至約1〇〇 mM，較佳約5至約50mM，且更佳約5至約25mM。 根據本發明之調配物亦可包含—種或多種滲透劑。術語 「滲透劑」係指用於調節調配物之㈣性的㈣上可接受 賦形劑。調配物可為低滲性、等渗性或高渗性。等渗性通 常係與溶液之滲透壓有關，通常係相對於人類血清之渗透 壓（約250-3 50 m〇smol/kg)。根據本發明之調配物可為低渗 、等渗性或高滲性’但較佳為等渗性。等滲性調配物可 為液體或自固體形式_自錢形式）復水所得之液體， 且係指渗透性與所比較之一些其他溶液（諸如生理鹽溶液 152420.doc 201200152 及血清）相同之湓 。適宜滲透劑包括但不限於氯化鈉、 + 及胺基酸或聰類群組中之任一組分，特定 δ之葡萄糖。滲透劑 通承用里為約5 mM至約500 mM。 於安定劑及滲透劑 中存在一組化合物，其可依兩種方 式發揮作用，亦 八了同時為安定劑及滲透劑。其實例可 在醣類、胺基酸、之-f Λ ^ 疋醇、環糊精、聚乙二醇及鹽類之群 組中找出。可回& ’為女定劑及滲透劑的糖之實例為海藻 糖。 '、 、調配物亦可含有佐劑，諸如防腐劑、濕潤劑、乳化劑及 ▲劑可同時藉由滅菌製程及藉由包含多種抗細菌劑及 柷/、菌劑(例如對羥基苯曱酸酯、氯丁醇 '苯酚、山梨酸 等)來防止微生物存在。防腐劑之用量通常為約請i至約2 防腐釗包括但不限於乙醇、苯甲醇、苯酚、甲苯 酚對氯-甲苯盼、對經基苯甲酸甲g旨或丙醋、氯化节二 甲烴鐘* 於第一態樣中，本發明係關於一種醫藥調配物，其包 含： ’、 1至200 mg/ml之IgG類抗_EGFR抗體； 1至100 mM之緩衝劑； 0.001至1 w/v%之界面活性劑； 1至500 mM之至少一種安定劑； 其pH範圍為4.0至7.0。 於一項較佳實施例中，含於根據本發明之調配物中之 IgG-類抗-EGFR抗體的濃度為1至1〇〇 mg/ml，較佳⑺至乃 152420.doc 201200152 mg/m卜最佳2〇至50 mg/ml。以濃度為25 mg/mw特佳。 於另一較佳實施例令，含於根據本發明之調配物中之緩 衝劑為組胺酸緩衝液，較佳為組胺酸/HC1緩衝液、或乙 酸鹽缓衝液，較佳為乙酸鈉緩衝液。以L•組胺酸/HC1缓衝 液（亦即以L-組胺酸作為緩衝劑）為特佳。 緩衝劑之濃度較佳為1〇至5〇 mM，更佳15至30 mM，最 佳 20 mM 〇 緩衝劑較佳使得pH為5.0至6·0，更佳5.5±0.3。 於一項較佳實施例中，含於根據本發明之調配物中之界 面活性劑為聚山梨醇酯’較佳為聚山梨醇酯2〇或聚山梨醇 酯80，最佳為聚山梨醇酯80。 界面活性劑之濃度較佳為0.01至0.1%，更佳〇.〇2至〇.〇5 w/v% ’ 最佳 0 02至 0 03〇/〇。 於另一項較佳實施例中，根據本發明之調配物中所含之 至種女疋劑係自鹽群組中選出，較佳為氯化鈉、膽 類’較佳海藻糖二水合物或蔗糖、及胺基酸，較佳為精胺 酸鹽酸鹽。 該至少一種安定劑之濃度較佳為i 2〇至3 〇〇 mM。 於一項較佳實施例中，根據本發明之調配物包含自由鹽 類、聽類及胺基酸所組成之群中選出之第一安定劑、及作 為第二安定劑之甲硫胺酸。 於一項較佳實施例中’第一安定劑之濃度為120至300 mM，且第二安定劑甲硫胺酸之濃度為5至25 mM。 於一項特佳實施例中’根據本發明之調配物包含作為第 152420.doc -16· 201200152 一安定劑之醣類（較佳為海藻糖二水合物或蔗糖，最佳為 蔗糖）、及作為第二安定劑之曱硫胺酸。糖濃度較佳為約 240 mM，且曱硫胺酸濃度較佳為約10 mM。 於另一項較佳實施例中，根據本發明之調配物中所含之 IgG-類抗-EGFR抗體為人類化抗體，且其包含： a) 於重鏈可變域中，包含如SEQ ID ΝΟ:1之CDR1、如SEQ IDNO:16iCDR2&WSEQIDNO:31iCDR3，& b) 於輕鏈可變域中，包含如SEQ ID NO :33之CDR1、如 SEQ ID NO:34之 CDR2及如 SEQ ID NO:3 5之 CDR3。 於一項特佳實施例中，根據本發明之調配物中所含之 IgG-類抗-EGFR抗體為 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb。 於某些實施例中，根據本發明之調配物中所含之IgG-類 抗-EGFR抗體經糖基工程化處理，使得其Fc區中之非岩藻 糖基化寡糖比例較未經糖基工程化處理之抗體提高，較佳 增加至少20%、至少50%或至少70%。 於一項較佳實施例中，根據本發明之調配物包含： 10至50mg/ml之IgG類抗-EGFR抗體； 15至30 mM之緩衝劑，其係選自L-組胺酸及乙酸鈉； 0.02至0.05 w/v%之界面活性劑，其係選自聚山梨醇酯20及 聚山梨醇酯80 ; 120至3 00 mM之至少一種安定劑，其係選自海藻糖二水合 物、蔗糖、精胺酸鹽酸鹽及氯化鈉； 視需要存在之作為第二安定劑之5至25 mM之甲硫胺酸； 其 pH為 5.5±0.3。 152420.doc -17- 201200152 於一項特佳實施例令，根據本發明之調配物包含： 10至 50 mg/ml之hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb ; 15至30 mM L-組胺酸； 0.02至0.05 w/v%聚山梨醇酯80 ; 120至300 mM之至少一種安定劑，其係選自海藻糖二水合 物、蔗糖、及精胺酸鹽酸鹽； 視需要存在之作為第二安定劑之5至25 mM之甲硫胺酸； 其 pH為 5·5±0.3。 於另一項較佳實施例中，根據本發明之調配物包含： 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體（較佳 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb)、20 mM L-組胺酸、240 mM海藻糖二水合 物、0,02至0.03 w/v%聚山梨醇酯80，其pH為5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體（較佳 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb)、20 m.M L-組胺酸、155 mM精胺酸鹽酸 鹽、0.02 w/v%聚山梨醇酯80，其pH為5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體（較佳 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb)、20 mM L-組胺酸、240 mM海藻糖二水合 物、0.02至0.03 w/v%聚山梨醇酯80、10 mM曱硫胺酸，其 pH為 5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體（較佳 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb)、20 mM L-組胺酸、240 mM蔗糖、0.02至 152420.doc • 18 · 201200152 0.03 w/v%聚山梨醇酯80，其pH為5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體（較佳 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb)、20 mM L'组胺酸、240 mM嚴糖、0.02至 0.03 w/v%聚山梨醇酯80、10 mM甲硫胺酸，其pH為5.5。 於一項特佳實施例中，根據本發明之調配物包含： 20 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體（較佳 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb); 20 mM L-組胺酸； 0.02至0.03 w/v%聚山梨醇酯80 ; 240 mM之第一安定劑，其中該第一安定劑為醣類，其係 選自海藻糖二水合物及蔗糖，較佳為蔗糖； 作為第二安定劑之10 mM甲硫胺酸； 其 pH為 5·5±0·3。 於某些實施例中，根據本發明之調配物不包含氯化鈉。 於某些實施例中，調配物不包含二價陽離子。於某些實施 例中，調配物不包含乳糖酸。於某些實施例中，調配物不 包含多元醇。於某些實施例中，調配物不包含葡聚糖。 根據本發明之調配物可呈液體形式，或呈凍乾形式或呈 自凍乾形式復水所得之液體形式。於某些實施例中，調配 物係呈液體形式。 如文中所用，與根據本發明之調配物有關之術語「液 體」係指於大氣壓及溫度為至少約2至約8°C下，呈液體之 調配物。 152420.doc -19- 201200152 乾如=所用’與根據本發明之調配物有關之術語「床 配^ 由相M技術中已熟知之冷凌乾燥方法製得之調 直1=劑（例如水）之移除方法為··凌乾，且隨後使冰於 ，、…Μ更殘留水解吸附。凍乾物之殘留 /，.，、度通书為約〇 j至5 w/w〇/〇， /、存在形式為粉劑或物理 『生貧穩疋之餅狀物。凍乾物 特徵為.在添加復水介質之 後可快速溶解。 ，如文中所用，與根據本發明之調配物有關之術語「復水 ’」係&呈;東乾形式’並藉由添加復水介質而再溶解之 調配物。適宜復水介質包括但不限於注射用水(wfi)、I 菌注射用水（B WFI) '氯化納溶液（例如〇 9 ㈣）、葡 萄糖溶液(例如5%葡萄糖）、含界面活性劑之溶液(例如 0.01%聚山梨醇醋20)、經阳緩衝之溶液（例如經填酸鹽緩 衝之溶液）。 」艮據本發明之調配物的生理耐受性良好，可很容易製 知可精確配衣j_就儲存期間、重複冷康融化循環期間 及機械壓力下就降解產物及凝集物而言為安定的。其在冰 箱溫度（2-8。〇下，可在—年以上之時期内保持安定。 本發明另外包括-種製備根據本發明之調配物之方法。 «亥方法包括· α 3有預期之緩衝液組分之透析過遽緩衝液 交換IgG-類抗-EGFR抗體之緩衝液，以需要時，藉由透 析過濾、來濃縮抗體，隨後添加賦形劑（例如海藤糖二水合 物n精胺sit '氯化納 '甲硫胺酸）儲備溶液至抗體 溶液中，隨後添加界面活性劑儲備溶液至抗體/賦形劑溶 152420.doc -20- 201200152 液中ϋ最，、利用緩衝溶液將抗體漢度調節至所需最終濃 度’藉此亦使賦形劑及界面活性劑達到最終濃度。 或者亦可將呈固體之賦形劑添加至包含IgG-類 ^ R抗體之起始溶液中。若1gG_類抗-EGFR抗體係呈 固體形式’例如康乾物’則根據本發明之調配物之製法可 為^首先將抗體溶解於視需要含有一種或多種賦形劑之水 或緩衝冷液令’隨後添加其他賦形劑錯備溶液或固體。亦 可直接將IgG-類抗_EGFR抗體溶解於包含所有其他賦形劑 / 谷液中存在於根據本發明之調配物中之一種或多種賦 形劑可在製備IgG.類抗_EGFR抗體之製程期間或於製程結 束時添加’例如藉由在製得抗體之後，進行最終之純化步 驟時’將IgG·類抗_EGFR抗體直接溶解於包含調配物之一 種、一種以上、或較佳所有賦形劑的溶液中。若包含抗體 «㈣之溶液未達到所gpH ’則藉由添加酸或驗，較佳 利用存在於緩衝液系、统中之酸或驗來調節pH。隨後進行無 菌過濾。 本發明另外包括一種以根據本發明之調配物於製備適用 於治療其中表現EGFR，特定言之其中EGFR較相同細胞類 型之正常組織異常表現（例如過度表現）之疾病，特定言之 細胞增生疾病的醫藥物上之用途。該等疾病包括不同類型 之癌症，諸如膀胱、腦、頭部及頸部、胰臟、肺、乳房、 卵巢、結腸、前列腺、皮膚、及腎臟之癌症。測定egfr 表現里之方法可為.相關技術中已知之方法，及彼等闡述 於WO 2006/0825 15及WO 2008/017963中之方法（例如免疫$ 152420.doc 201200152 組織化學分析法、免疫螢光分析法、免疫酶分析法、 EUSA、流式細胞儀、放射免疫分析法、西方式墨點分析 法、配體結合法、激酶活性法等）。 可藉由相㈣術中已知之多種方法投與本發明組合物。 如熟習此項技術者咸瞭解，投與途徑及/或方式將視所需 結果而變化。 為了藉由某些投與途徑投與本發明組合物，可能兩要將 組合物稀料稀釋财。醫藥上可接受之稀釋劑包括生理 食鹽水、葡萄糖、林洛氏溶液（Ringer)及水性緩衝液。 根據本發明之調配物之較佳投與途徑為：經靜脈内 經皮下（s.c.) '《任何其他非經腸投與方式，諸如 彼等醫藥技術中已知者。 如^所用，短語「非經腸投與」及「經非經腸方式投 :、」思指除了經腸及經外部投與之投與方式，㉟常係藉由 注射’且包括但不限於經靜脈内、經肌内 ' 經動脈内、經 勒内、經英膜内、經眼寫Θ、經心 Λ h γ # 經皮内、經腹膜 <氣官、經皮下、經表皮下、經關節内、經笑膜内、 經蛛網膜下、經脊柱内、經 、 久'，二胸骨内注射及輸 >王0 組合物應無g ’且其流動程度應可使組合物可藉由 益或輸注系統遞送。除了水外 ’ 理令踏卜 水外_可為等滲之緩衝生 艮皿水洛液、乙醇、多元醇 離聚Γ -辟β、 甘/由、丙二醇 '及液 〜聚乙一知等）、及其適宜混合物。 可藉由相關技術中已知之方法製 衣仔根據本發明之調配 152420.doc •22- 201200152 物，例如超過濾-透析過濾、透析、添加及混合、凍乾、 復水及其組合。根據本發明之調配物之製法實例可參見下 文。 該等實例更詳細地解釋了本發明，但不應視作其等限制 本發明之範圍。文中所引用之所有專利案及科學文獻的揭 示内容係以引用的方式全部併入文中。 【實施方式】 實例 基於下文所提供之實驗結果，採用下文所述之常用製備 及分析方法，發展出根據本發明之IgG-類抗-EGFR抗體調 配物。 實例1 :製備調配物之組分 藉由自製備重組蛋白質所大體已知之技術製得IgG-類 抗-EGFR抗體hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb。製備該抗體之 技術闡述於WO 2006/082515及WO 2008/017963中。簡言 之，將如WO 2006/082515及WO 2008/017963中所述製得 之經遺傳學工程加工之中國倉鼠卵巢細胞株（CHO)擴大培 養於獲自母細胞儲備物之細胞培養基中。自經調節之細胞 培養基純化出hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb，方法為：於 MabSelect SuRe™管柱（GE)上進行蛋白質A親和層析術， 隨後於Capto S™管柱（GE)上進行陽離子交換層析術，且最 終於Capto QTM管柱（GE)上進行陰離子交換層析步驟。利 用Viresolve® Pro薄膜（Millipore)，藉由奈米過濾去除病 毒，並濃縮抗體及藉由透析過濾轉移至所需緩衝液中。爲 152420.doc -23- 201200152 了製備根據該等貫例之調配物’提供含於pH為約6·〇之20 mM組胺酸緩衝液（L-組胺酸/HC1緩衝液）中之濃度為約2〇 mg/ml之 hu-ICR62 IgGl 抗-EGFR mAb抗體。 根據本發明之調配物中之賦形劑在操作中廣泛使用，且 為熟習此項技術者所知。因此不需要在此處進行詳細解 釋。 根據本發明之液態藥品調配物之發展方法如下。 實例2:製備液態調配物 為了製備液態調配物’以含有預期之緩衝液組分之透析 過濾緩衝液交換hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb之緩衝液， 且當需要時’藉由透析過濾，將抗體濃縮至濃度為約5〇至 80 mg/ml。在完成透析過濾操作之後，添加賦形劑（例如 海藻糖、氯化鈉、甲硫胺酸）儲備溶液至抗體溶液中。隨 後以50至200-倍儲備溶液添加界面活性劑。最後，利用緩 衝液使蛋白質濃度調節至hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb抗 體最终濃度為約25 mg/ml或約50 mg/ml。 所有調配物均通過0.22 μιη低蛋白質結合力濾器進行無 菌過濾’並無菌地填充至無菌6 ml小玻璃瓶中，並以塗覆 ETFE(乙烯與四氟乙烯之共聚物）之橡皮塞及鋁鉗口蓋密 封。填充體積為約2.4 ml。將該等調配物貯藏於不同ICH 氣候條件（5°C、25°C及40°C )下以不同時間，並藉由振盡 (於5 C及25°C下，依頻率200 min·1振盪1週）、及凍融加壓 法對其加壓。藉由下列分析方法’在應用加壓試驗之前及 之後分析樣本： 152420.doc •24· 201200152 1) UV分光光度測定法； 2) 尺寸排除層析法（SEC); 3) 離子交換層析法（IEC); 4) 測定溶液之混濁度； 5) 觀察可見顆粒。 於波長範圍為240 nm至400 nm之Perkin Elmer λ3 5 UV分 光光度計上測定UV分光度，以測定蛋白質濃度。利用對 應調配物緩衝液將純蛋白質樣本稀釋至約0.5 mg/ml。根據 公式1，計算出蛋白質濃度。 公式1 .蛋白質濃度= (^280nm ~ 為 20/777? )x dil. factor cm2 Xdcn, ε mg 於280 nm下之UV光吸光度經於320 nm下之光散射校 正，並乘以稀釋倍數，稀釋倍數係自經稱量所得之質量、 及純樣本與稀釋緩衝液之密度確定。將該數值除以比色孤 路徑長度d及吸光係數ε。 使用尺寸排除層析法（SEC)檢測調配物中之可溶性高分 子重量物（凝集物）及低分子重量水解產物（LMW)。於具有 Waters W2487雙重吸光度檢測器，且配備TosoHaas TSK Gel G3000SWXL管柱之 Waters Alliance 2695 HPLC儀器上 進行該方法。採用200 mM磷酸鈉（pH 7.0)作為移動相，藉 由等度溶離曲線，分離完整單體 '凝集物及水解產物，並 於波長2 8 0 nm下進行檢測。 進行離子交換層析術（IEC)，以檢測改變調配物中之hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb之靜電荷的化學降解產物。該方 152420.doc -25- 201200152 法採用配備UV檢測器（檢測波長280nm)及Dionex ProPac WCX-10管柱（4 mmx250 mm)之適宜HPLC裝置。分別使用 含10 mM磷酸鈉緩衝液（pH 6.0)之水溶液、及10 mM磷酸鈉 緩衝液（pH 6.0)+750 mM NaCl作為移動相A及B，其流速為 1 ·0 mL/min 〇 為了測定混濁度，於室溫下，利用HACH 2100AN濁度 計，測定以FTU(混濁度單位）表示之乳光度。 利用Seidenader V90-T肉眼觀察裝置，分析樣本中之可 見顆粒。 關於調配物A至L之安定性測試之結果出示於下表1中。 結果顯示，爲了獲得最大抗體安定性且使抗體調配物不 含顆粒，使用L-組胺酸/HC1緩衝液優於使用乙酸鈉缓衝 液，但以諸如海藻糖二水合物及蔗糖之醣類為最佳安定 劑，且聚山梨醇自旨8 0為最佳界面活性劑。 152420.doc 26- 201200152

。OCNI® 鮏蒜彐鉍0/0(Ν0·0 , €^o寸 i , (e.s Hd)綦齧 o w 日 o(N,qvsρ^ιχιο«-^ΙΟω)Ι Ζ9Ή0Ι-口q IS/SUI ς(Ν: .荽togw 錄碱犁矽你^^^w^togw^f'镰鋇^ilboa-^t·起々盔命4鳒举：i 可見顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 含有許多顆粒 含有許多顆粒 不含顆粒 !不含顆粒 !不含顆粒 含有許多顆粒 l . 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 混濁度 (FIU) C\ 00 OS 00 〇〇 00 Ό On 00 〇〇 & 10.0 10.2 10.0 oo a； Os 10.7 11.8 13.8 離子交換HPLC 鹼1±制〇/〇) cn CN CN 卜 m un m 卜 m in (N 主峰(％) 60.2 59.5 58.1 59.1 64.5 On 57.8 53.3 43.3 35.2 28.7 -g § 酸性制％) 35.6 36.3 36.7 36.6 36.2 32.1 35.6 37.2 41.4 52.0 59.5 66.1 -§ Ή a Ή 尺寸排除HPLC LMW(%) 〇 1—^ Η τ—^ * * rn 3 r—H 12.6 17.6 r—Η 單體(％) 98.6 98.4 98.2 98.1 98.2 97.9 97.7 97.6 97.5 95.0 93.0 91.8 95.7 82.1 74.4 66.8 HMW(%) 卜 CC 卜 (N <N m Η (N Η oi Η m s 12.1 蛋白質濃度 (mg/ml) 25.6 25.7 25.6 25.6 25.5 25.3 25.4 "8 Ή Ή Ή 25.4 -B Ή Ή 貯藏時間 起始 (5個循ί裒） 32週 51週 74週 Os 32週 51週 74週 32週 51週 74週 貯藏條件 1 振盪，5°C 振盪，25〇C 冷淥/融化 2-8〇C P (N 40°C s 152420.doc -27- 201200152 。OZIS鮏雜-3鉍。/csd,龚伞-^Mt娥礎 IMS 0 寸<N, (rs Hd)E#^toIAIS 0fNI,qvspi:.JOH-^IOt>flI spciuIiq I 日/bo日 gCN:K-D-v^-0f14c一荽rog 驟魈趄^g 荽»0«1骤 可見顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不麵粒 不含顆粒 含有許多顆粒 含有許多顆粒 含有許多顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不德粒 含有許多顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 含有許多顆粒 混濁度 (FTU) Η 卜 CN oi m cn 〇〇 Η VO 離子交換HPLC 檢14蜂 (%) Os Η (N p 寸 1-^ (N rn 00 Η Ή Ή fg 60.0 59.7 58.7 58.9 59.0 62.8 58.5 56.9 52.7 41.3 32.3 25.5 Ή Ή -Β -g 酸性峰 (%) 36.1 36.6 37.0 1 37.1 36.9 37.0 39.0 43.0 55.9 64.0 71.0 •Β Ή 尺寸排除HPLC LMW(%) Ο 1—^ 1—Η 〇 1—Η (N Η 10.5 Sg 98.8 98.7 98.6 98.8 ι98.6 98.5 98.4 98.4 98.4 95.8 94.6 93.7 97.4 87.0 80.6 74.6 lg CN (Ν rn (N ΓΠ 卜 〇〇 ΙΟ Η 1 < m vd 蛋白質濃度 (mg/ml) 25.6 25.7 25.8 26.2 25.8 25.6 25.4 Ή Ή § 25.7 Ή 貯藏時間 起始 (5個循3¾) g 32週 51週 74週 32週 51週 74週 32週 51週 74週 貯藏條件 1 振盪，5°C 振盪，25°C 冷;;束/融化 2-8〇C 25〇C 1 152420.doc -28- 201200152 。orslls歡蘇 T 鉍％s.o ,额毽剷檠 wslnn , (Γ5 Hd)綦潜toPMS 0<N,qvs ΉΡΗΟΗ-^ίοΰοΙ<Ν9Ή3Ι-ι^ί IS/60slr)(N: i--§^lf14c，荽舄夥餿^^u^togw

可見顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大艘上不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 含有許多顆粒 含有許多顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 混濁度 (FTU) P 寸 CO 卜 in (N 〇d 00 00 3 10.0 CN 〇6 3 v£) 00 10.1 13.4 離子交換HPLC 除I1 生峰 (%). $ r—( 〇\ — p (N ΓΛ <N Ή Ή Ή Ή fg 60.4 59.7 58.9 59.1 59.7 62.9 59.8 58.3 53.9 43.7 35.5 28.7 g Ή g Ή 酸性峰 (%) 35.8 36.2 36.2 36.7 35.9 cn m 35.0 36.7 41.0 52.0 59.3 66.3 Ή Ή Ή Ή 尺寸排除肌C LMW (%) 〇 r—i »—Η r—^ 1—( 1—( T—Η <Τί Ο Η rn in 13.1 22.3 0斗色 98.8 98.7 _I 98.6 98.7 98.6 98.4 98.3 98.2 98.2 95.7 93.9 93.0 96.6 82.9 66.0 議芝 <N CN CO CN cn 'sO yn 卜 00 ON Ο) ρ rn 11.7 蛋白質濃度 I (mg/ml) 25.7 25.9 25.9 25.9 25.3 25.6 25.5 Ή Ή Ή •B 25.2 Ή Ή a J I 貯藏時間 I ί____ 起始 1»·Η (5個循環） 32週 51週 74週 Os 32週 51週 74週 i 32週 51週 1_ 74週 貯藏條件 I 振盪，5〇C 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 40°C s I52420.doc -29- 201200152 。08溫鮏漶Φ鉍o/osd,綦^喊1^日0寸1二「5 ffid)^甾 ¥ΤΊ IAI 日 OZ ,qvsρίίΐίο3-^ιο60Ι<Ν9ΉυΙ-口 q Ιε/GOlu 53 :^^噠璁砘，荽齧释緵^^a#h3g 踩

可見顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 混濁度 (FTU) Ό 00 〇〇 00 <N cK 〇\ 00 § cK 〇 10.0 ai CO cK 10.7 cK oo r-H Η 卜 離子交換HPLC 驗14峰 (%) cn P oo CN (N 3 in rn v〇 rn OS rn Ή Ή Ή $g 59.8 59.5 58.4 59.1 58.9 61.9 58.0 56.0 (N κη oo 30.0 22.6 Ή Ή -a Ή 酸性峰 (%) 36.3 36.6 36.9 36.8 36.9 34.7 37.4 39.7 43.3 58.1 65.5 73.5 Ή Ή Ή 尺寸排除HPLC LMW (%) 〇 )1 )1 Η 1 Η <Ν CTs H 12.9 18.7 21.9 Sg 98.7 98.5 1 1 98.4 98.4 98.4 98.1 98.0 98.0 98.0 94.9 93.2 92.4 95.7 81.3 72.2 64.6 1? cn in in OO Ο) Ο) OO CN oi 3 (N οο 3 CO 蛋白質濃度 (mg/ml) 25.5 25.4 25.4 25.4 25.0 25.3 25.4 •Β § 25.24 Ή 貯藏時間 起始 (5個循環） 32週 51週 74週 ON 32週 51週 74週 η 32週 51週 74週 貯藏條件 1 振盪，5°C 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 152420.doc -30- 201200152 。OS 鮏蘇eisd,#奪娥瘐 i 0寸3, (rsHd)^铤奧·Ί 1AIS 03 ,qv 日 efeoa-^IOooI sp^uI-3q IUI/fcJDUI ς(Ν:卜丢嘀鹿棘.荽togwn'^嫦 a 荽tog^

可見顆粒 不含賴粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 含有許多顆粒 混濁度 (FTU) Os (N OS Η 〇 rS m rn CN cn ON cn οο rn ro rn <r^ 〇〇 離子交換HPLC 綠14峰 (%) 〇 — Η OS CO p σ\ CO os cn 00 oi 3 os Ή -B Ή fg 60.0 59.2 58.7 59.2 58.8 61.6 57.6 56.0 52.0 37.7 29.1 22.2 Ή -B Ή 酸性峰 (%) 36.4 36.9 37.3 Η m 37.4 35.4 38.4 40.1 44.1 59.5 67.5 74.9 Ή Ή Ή 尺寸排除HPLC LMW (%) 〇 τ-Η Ο 1-H i—l 1—< fN ON vn cn 11.7 17.2 22.9 Sg 98.9 98.7 98.7 98.8 98.6 98.5 98.5 98.5 98.5 95.7 93.9 93.2 97.2 84.9 76.6 65.5 lg r-^ (N 04 CN cn rn 3 <Ν vd 11.6 蛋白質濃度 (mg/ml) 25.7 25.6 25.6 25.7 25.6 25.6 25.6 B Ή Ή 25.8 Ή Ή 貯藏時間 起始 T—^ (5個循環） n 32週 51週 74週 OS 32週 51週 74週 η 32週 51週 74週 貯藏條件 1 振盪，5°c 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 40°C s 152420.doc -31 - 201200152 。osisis 蘇 φδ4%(Ν0.0 ,额饈剷键鍥檠 ςς! , (Γιη Kd)韶逄戚-q ss 〇Ζ ,qvse(JH03-^IODOI sliuI-3M I 日/OOUI s: i--s確奧Λ-龚togwl'^^dt^togw

可見顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 含有許多顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 含有許多顆粒 混濁度 (FTU) 00 VO 寸· 00 ττ (N 〇6 00 〇6 cn 〇〇 η 離子交換HPLC 驗f生峰 (%) P 寸· 卜 P 寸· yn CO in oo rn Ή Β $g 59.9 59.4 58.5. 58.8 59.2 61.5 58.3 56.4 52.6 38.4 29.9 23.4 § Ή Ή S复性峰 (%) 36.5 36.6 36.8 37.2 36.8 35.3 37.2 39.3 42.9 57.9 66.2 72.9 "Β Ή 尺寸排除HPLC LMW (%) 〇 T—Η CO in 〇〇 1—Η rn 22.9 Sg 98.8 98.7 98.6 98.7 98.5 98.4 98.3 98.3 98.3 95.4 1 93.8 93.0 96.2 82.6 73.3 65.5 Sg (N <N rn 寸· \q 卜 卜 rn m· ι—Η 蛋白質濃度 (mg/ml) 25.3 25.6 25.6 25.6 25.0 25.3 25.4 Ή 25.2 Ή 貯藏時間 起始 1-H (5個循it) η 32週 51週 74週 ON. 32週 51週 74週 η 32週 51週 74週 貯藏條件 1 振盪，5〇C 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 40°C 152420.doc -32- 201200152 。08遛鮏菇-3鉍 ％£0·0 ,#Φ·^Μ 窭娥礎 ws 0 寸<N, (rs ffid)翹绪·0-ΤΊ JAts oiNvqvsp^doa-^IoSIS'iluIiq im/Sui 〇ς:卜寻噶崩砘一荽tog 骤魈疼嫦o^tog 踩 可見顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不細粒 ^ 5 ψ—t 卜 m· p p rn OO rn •ο 離子交換HPLC 驗|·生峰 (%) m cK CN cK m cr； in σ< cn cn Ή Sg r-H m 56.0 55.6 56.0 55.1 54.0 55.1 40.3 *Β 酸性蜂 (%) 34.7 34.8 35.3 34.9 35.6 36.5 35.6 52.5 Ή 尺寸排除肌C LMW (%) r—H 1—Η 1—Η (Ν (Ν <η r-； 10.0 Sg 98.3 98.3 98.2 98.3 oo ON 97.9 97.7 97.4 86.7 lg VO 卜 OO Ο) 〇〇 ON m 蛋白質濃度 (mg/ml) 58.7 58.6 58.5 58.4 58.3 Β Ή Ή 貯藏時間 起始 (5個循環） 16週 29週 16週 29週 16週 貯藏條件 1 振盪，5°C 振盪，25〇C 冷凍/融化 2-8〇C 25〇C 40°C •33· 152420.doc 201200152 。謐绪^®-1/Με 〇ι v 08餵鮏寐 rps4%s.〇 ,荽^-^Mt娥瘐 IAIS 0寸Z , (rs Hd)韶粜 ¥ΤΊ ΙΑΙε ON . qvspiJPHoa-^IOofiI SKoIiq IS/SIU 〇s :卜-&噠漤砘，荽^骤镄^硪11荽»〇0踩

可見顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 混濁度 (FTU) 〇〇 rn (N (N p CTs cn (N ON 離子交換HPLC 驗峰 (%) CN cS ON oo Os OO Ch ©6 (N cK ΓΛ cK Ο) 1—^ •B fg 56.2 i_ 56.2 55.8 56.3 55.2 54.5 47.6 41.3 g曼性峰 (%) 34.6 35.0 35.3 34.8 35.6 36.2 44.6 51.6 尺寸排除肌C LMW (%) r™H CN (N 卜 Sg 98.3 98.3 98.4 98.4 98.1 -1 98.1 丨 97.8 97.5 茭 lg vq v〇 in 卜 卜 卜 〇〇 (N 蛋白質濃度 (mg/ml) 58.4 60.4 60.0 60.2 58.4 Ή Ή S Ή 貯藏時間 起始 (5個循環） 16週 29週 16週 29週 16週 貯藏條件 1 振盪，5〇C 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 40°C -34- 152420.doc 201200152 。齧^^®-IMS 01 , 08 溜鮏竑-3鉍。/csd,龚4Π·^Μ 奪娥礎 ws 0 寸 Z： , (rs ffid)窩鍥-0-Tq ΡΜε oCSIvqvs Ή.ίο3-^Ξ&ί)Ι 2Ή3Ι-^ί Is/&os ς<Ν: 1.-¾^^棘一荽齧呢5赵舞1赛^骤 可見顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 Ή 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 混濁度 (FTU) 3 ΓΛ Ή VO cn $ 〇 rn 3 in rn CN rn m <r； v〇 rn 00 <ri 離子交換HPLC 斷生峰 (%) 〇 rn cn rn tn <r； Ή oi Ό Ή 3 〇\ (N vo rn rn fg 47.9 47.2 46.6 47.1 Ή 45.0 27.7 47.4 41.5 12.8 46.2 35.67 46.5 32.1 46.3 26.3 酸性岭 (%) [49^ 49.5 49.9 49.4 51.6 69.0 48.9 54.9 1 j 84.6 50.2 61.0 B 50.2 65.0 50.1 70.6 丨尺寸排除HPLC LMW (%) 1—Η 1—^ <N (N d Ή (N (N rn (Ν (N CN 00 Sg 98.5 98.5 98.5 98.5 Ή 98.5 98.3 98.5 98.4 93.9 98.5 98.3 89.3 98.5 98.2 98.5 98.0 lg rn rn rn rn § rn 〇 rn ΓΟ cn rn ΟΊ rn (N rn (Ν 蛋白質濃度 (mg/ml) 24.1 24.2 24.3 24.1 "Β Ή Ή "S Ή Ή Ή 貯藏時間 起始 (5個循環） $ 寸 寸 12週 12週 12週 24週 24週 24週 36週 36週 55週 55週 貯藏條件 1 振盪，5t P 刻 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 40°C 2-8〇C 25〇C 2-8〇C P eN 40°C 2-8〇C 25〇C 2-8〇C 1 25°c 152420.doc -35- 201200152 。韶鍥^&-1ΛΙε 01 , 000餵鮏雜彐鉍 ％<N0.0 ,t'^IAiuI 〇 寸(Ν, (ς·ς ffidiig绪mlTl IAIS oCNI'qvs Ή[ΧΗ93-^Ιο&ΰΙ2>ΙυΙ-3Μ Is/toom ς<Ν: i-^^^衅 <^ragw餿赵唬 f^togw 可見顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 混濁度 (FTU) cn 卜 cn p 寸 rn 00 … 〇 00 〇\ «τί Η ^T) Ο 離子交換HPLC 檢f生峰 (%) in v〇 η m 3 Os ΓΛ 卜 CN VO Β Ό (Τ； rn tg 47.8 47.1 46.6 48.6 45.3 27.4 47.0 41.6 12.1 46.2 35.8 46.2 32.2 46.3 26.2 酸性峰 (%) 49.2 49.4 49.9 49.3 51.3 69.2 49.1 54.7 85.2 50.2 60.8 50.2 64.8 50.2 71.2 尺寸排除HPLC LMW (%) 1—Η <N Ο 04 CN CN 卜 CN Γ^ϊ 3 (N 寸 〇 CN 〇〇 Sg 98.5 98.5 98.6 98.5 Ή 98.5 ,98.3 98.5 98.5 93.6 98.5 98.3 89.1 98.5 98.2 98.5 98.0 1? cn rn C^J 〇 CS (N cn CN CO CN 蛋白質濃度 (mg/ml) 1 24.3 24.2 24.2 24.1 Ή a Ή •B "Β -g Ή 貯藏時間 起始 τ-Η (5個循環、） f 寸 寸 12週 12週 12週 24週 24週 24週 36週 36週 55週 55週 貯藏條件 1 振盪，5〇C 振盪，25°C 冷凉/融化 2-8。。 25〇C 40°C 2-8〇C _1 25〇C 40°C 2-8〇C 25〇C 40°C 2-8〇C Ρ 2-8〇C Ρ m (Ν 152420.doc •36- 201200152

。08餵鮏漆彐鉍％CNod,荽命^4窭擴礎1^日0寸2,(5.1〇 Hd)韹鍥涅-Ί PMS ofs, q<日 ΉΑο3-^1ϋ§Ι 2ΉυΙ-ηβΙδ/ω)δ S3: -#toswt-^嫦：H^TOSW

可見顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 Ή 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 混濁度 (FTU) rn <ri Ό ro oo cn m ΓΛ (N in ΓΛ OO ΓΛ ΓΛ 3 OO <r： 離子交換HPLC 謝生峰 (%) (N ΓΟ ΓΛ <ri Ή 3 m CO oo ro OO cr； VO ΓΛ m tg 47.5 47.1 46.5 47.0 44.8 27.4 47.0 41.3 卜 1—Η 46.2 35.2 a 46.6 30.8 46.2 25.0 酸ί生峰 I (%) 49.4 49.4 50.0 49.6 -Β 51.8 69.1 49.3 54.9 85.4 50.2 61.5 g i 50.0 66.2 50.2 71.8 尺寸排除HPLC LMW (%) 1—^ fN CN (N O -a <Ν r-； <N cn (Ν cn cK <N 卜 CN ON Sg 98.5 98.5 98.5 98.5 98.5 98.2 98.5 98.4 92.9 98.5 98.2 88.6 98.5 98.0 98.5 97.7 lg Γη cn cn β <rj cn rn 寸· 寸 rn rn rn yr) 蛋白質濃度 (mg/ml) 24.2 24.2 24.2 23.9 _1 Ή B "B Ή •B •B Ή •B 貯藏時間 起始 (5個循環） 寸 寸 12週 12週 12週 24週 24週 24週 36週 36週 丨55週 55週 貯藏條件 1 振盪，5〇C 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C _1 25〇C 40°C 2-8〇C 25〇C 40°C 2-8〇C 25〇C 40°C 2-8〇C 25〇C 2-8〇C 25°C s 152420.doc ·37· 201200152 。ooolsil 蘇 φ^%ίΝο·ο ,窭雄PMS 〇 寸(Ν,(Γς ffid)^^¥Tl lAts o(N,qvs 'adow-^IODOI<Ν9ΉυΙ-3Η I 日/bos sfN:卜岑嘀瑞妹，荽齧骤魈赵缚^荽tosw

可見顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 大體上不含顆粒 g 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 大體上不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 不含顆粒 混濁度 (FTU) cn 00 <r； y^i ro v〇 cn Ή v〇 rn oo cn 00 rn OS rn p — IT) rn rn On cn nS 離子交換HPLC 谢生峰 (%) fN rn v〇 cn Ή Ό ro m to oo ΟΊ oo cn OS oi Ό rn cn cn CO cn tg 47.2 47.0 46.4 47.0 Ή 44.9 27.3 46.9 41.4 H 46.4 35.1 Ή 46.4 30.8 46.0 25.0 酸性峰 (%) 49.6 49.5 I 50.0 49.5 Ή 51.5 69.5 49.3 54.8 86.0 50.0 1 61.6 65.9 50.5 71.8 尺寸排除HPLC LMW (%) CN CN (N -a (N CN rn 00 (N <N 卜 CN Ο) 觀7 98.5 98.5 98.5 98.5 ή 98.5 98.2 98.5 98.4 92.7 98.5 98.2 88.1 98.5 98.0 98.5 97.8 rn rn CO Ή rn rn rn 2 H cn rn cn 蛋白質濃度 (mg/ml) 24.2 24.1 24.2 24.4 Ή Ή -B Ή -B Ή § Ή Ή Ή 貯藏時間 起始 1-H (5個循環〇 f 寸 寸 12週 12週 12週 24週 24週 24週 36週 36週 55週 55週 貯藏條件 1 振盪，5〇C 振盪，25〇C 冷凉/融化 2-8〇C 25〇C 40°C 2-8〇C 25〇C 40°C 2-8〇C P CN 40°C 2-8〇C P m (N 2-8〇C Ρ iTi (N 152420.doc -38· 201200152 序列表 <110> 瑞士商赫半孟拉羅股份公司 <120> 新穎抗體調配物 <130> 26494 <140> 099146170 <141> 2010-12-27 <150> 09180840.2 <151> 2009-12-29 <160> 40 <170> Patentln version 3.5 <210> 1 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR1 Kabat <400> 1 Asp Tyi ' Lys lie His 1 5 <210> 2 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR1 Kabat <400> 2 Asp Tyr Ala lie Ser 1 5 <210> 3 <211> 5 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR1 Kabat <400> 3 Asp Tyr Tyr Met His 1 5 <210> 4 <211> 5 152420-序列表.doc

S 201200152 <212> PRT <213〉 人工序列 <220> <223> 重鐽 CDR1 Kabat <400> 4

Asp Tyr Lys lie Ser 1 5 <210> 5 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR1 Chothia <400> 5

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 1 5 <210〉 6 <211〉 7 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR1 Chothia <400> 6

Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr 1 5 <210> 7 <211> 7 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR1 Chothia <400> 7

Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 1 5 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213〉 人工序列 152420-序列表.doc 201200152 <220> <223> 重鏈CDR1 AbM <400> 8 Gly Phe ：Thr Phe Thr Asp Tyr Lys lie His 1 5 10 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 AbM <400> 9 Gly Phe ：Thr Phe Thr Asp Tyr Ala lie Ser 1 5 10 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 AbM <400> 10 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His 1 5 10 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈CDR1 AbM <400> 11 Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Tyr Met His 1 5 10 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列 <220> s 152420-序列表.doc 201200152 <223> 重鏈 CDR1 AbM <400> 12 Gly Tyr Ser Phe Thr Asp Tyr 1 5

Lys lie His 10 <210> 13 <211> 10 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR1 AbM <400> 13 Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 1 5

Lys lie Ser 10 <210> 14 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 Kabat <400> 14 Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly 1 5

Tyr Ser Thr Tyr Asn Glu Lys Phe Lys 10 15

Ser > > > > 0 12 3 1i Ti Ti 2 2 2 2 15 17 PRT 人工序列 <220> <223> <400> Gly lie 1 重鏈 CDR2 Kabat 15 Asn Pro Asn Ser Gly 5

Tyr Ser Thr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 10 15

Gly 152420-序列表,doc 201200152 <210> <211> <212> <213> 16 1*7 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 Kabat <400> 16

Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 1 5 10 15 Gly <210> <211> <212> <213> 17 17 PRT 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR2 Kabat <400> 17

Trp lie Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 1 5 10 15 Gly <210> <211> <212> <213> 18 17 PRT 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR2 Kabat <400> 18

Trp lie Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 1 5 10 15 Gly <210> <211> <212> <213> 19 17 PRT 人工序列 s 152420-序列表.doc 201200152 <220> <223> 重鏈 CDR2 Kabat <400> 19

Trp lie Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Asn Glu Lys Phe Gin 1 5 10 15

Gly <210> 20 <211> 17 <212> PRT <213〉 人工序列 <220> <223> 重鍵CDR2 Kabat <400> 20 Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Asn Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 1 5 10 15 Gly <210> 21 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR2 Kabat <400> 21

Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ala Thr Tyr Ala Gin Lys Phe Gin 15 10 15

Gly <210> 22 <211> 17 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 Kabat -6- 152420·序列表.doc 201200152 <400> 22

Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ser Pro Ser Phe Gin 1 5 10 15 Gly <210> <211> <212> <213> 23 8 PRT 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR2 Chothia <400> 23

Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> 24 8 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 Chothia <400> 24

Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Asn 1 5 <210> <211> <212> <213> 25 8 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 Chothia <400> 25

Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ala Thr 1 5 <210> <211> <212> <213> <220> 26 10 PRT 人工序列

152420-序列表.doc -7- S 201200152 <223> 重鏈 CDR2 AbM <400> 26

Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 27 10 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 AbM <400> 27

Gly lie Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 28 10 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 AbM <400> 28

Trp lie Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 29 10 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 AbM <400> 29

Tyr Phe Asa Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Asn

1 5 10 <210> <211> <212> <213> 30 10 PRT 人工序列 <220> <223> 重鏈 CDR2 AbM 152420·序列表.doc 201200152 <400> 30

Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ala Thr 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 31 11 PRT 人工序列 <220> <223> 重鍵 CDR3 Kabat Chothia AbM <400> 31

Leu Ser Pro Gly Gly Tyr Tyr Val Met Asp Ala 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 32 11 PRT 人工序列 <220> <223> 輕鏈 CDR1 Kabat <400> 32

Lys Ala Ser Gin Asn lie Asn Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> <211> <212> <213> 33 11 PRT 人工序列 <220> <223> 輕鏈 CDR1 Kabat <400> 33

Arg Ala Ser Gin Gly lie Asn Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> <211> 34 7 <212> <213> PRT 人工序列 <220> <223> 輕鏈 CDR2 Kabat <400> 34 152420-序列表.doc -9- s 201200152

Asn Thr Asn Asn Leu Gin Thr 1 5 <210> 35 <211> 8 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223〉輕鍵 CDR3 Kabat <400> 35

Leu Gin His Asn Ser Phe Pro Thr 1 5 <210> 36

<211> 120 <212> PRT <213> 溝氣（Rattus norvegicus) <220>

<221> MISC—FEATURE <223> ICR62 VH <400> 36

Gin Val Asn Leu Leu Gin Ser Gly Ala Ala Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15

Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Gly Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Lys lie His Trp Val Lys Gin Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp lie 35 40 45

Gly Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Asn Glu Lys Phe 50 55 60

Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Thr Asp Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Thr Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95

Thr Arg Leu Ser Pro Gly Gly Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gin 100 105 110 -ΙΟ Ι 52420· 序列表.doc 201200152

Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 115 120 > > > > 0 12 3 111 1 2 2 2 2 37 108

PRT 溝SL (Rattus norvegicus) <220>

<221> MISC-FEATURE <223> ICR62 VL <400> 37

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Phe Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Asn Cys Lys Ala Ser Gin Asn lie Asn Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Leu Gly Glu Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gin Thr Gly lie Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Leu Gin His Asn Ser Phe Pro Thr 85 90 95

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr 100 105 <210> 38 <211> 120 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> I-HHD VH構築體 <400> 38

Gin Val Gin Leu Val Gin Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 15 10 15 152420·序列表.doc • 11 s 201200152

Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr 20 25 30

Lys lie His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45

Gly Tyr Phe Asn Pro Asn Ser Gly Tyr Ser Thr Tyr Ala Gin Lys Phe 50 55 60

Gin Gly Arg Val Thr lie Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80

Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95

Ala Arg Leu Ser Pro Gly Gly Tyr Tyr Val Met Asp Ala Trp Gly Gin 100 105 110

Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 39 <211> 108 <212> PRT <213> 人工序列 <220> <223> I-KC VL構築體 <400> 39

Asp lie Gin Met Thr Gin Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 15

Asp Arg Val Thr lie Thr Cys Arg Ala Ser Gin Gly lie Asn Asn Tyr 20 25 30

Leu Asn Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu lie 35 40 45

Tyr Asn Thr Asn Asn Leu Gin Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr lie Ser Ser Leu Gin Pro 65 70 75 80 •12- 152420-序列表.doc 201200152

Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gin His Asn Ser Phe Pro Thr 85 90 95

Phe Gly Gin Gly Thr Lys Leu Glu lie Lys Arg Thr 100 105 <210> 40 <211> 328 <212> PRT <213> 人類 <220> <221> MISC_FEATURE <223> Igy-iT CH 區 <400> 40

Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr 15 10 15

Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro 20 25 30

Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val 35 40 45

His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser 50 55 60

Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lie 65 70 75 80

Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Ala 85 90 95

Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala 100 105 110

Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro 115 120 125

Lys Asp Thr Leu Met lie Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val 130 135 140

Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val 145 150 155 160 152420-序列表.doc -13- s 201200152

Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin 165 170 175

Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin 180 185 190

Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala 195 200 205

Leu Pro Ala Pro lie Glu Lys Thr lie Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro 210 215 220

Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr 225 230 235 240

Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser 245 250 255

Asp lie Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr 260 265 270

Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr 275 280 285

Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn Val Phe 290 295 300

Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys 305 310 315 320

Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 325 14- 152420-序列表.doc

Claims (1)

1. 201200152 七、申請專利範圍： 1· 一種醫藥調配物，其包含： 1至200 mg/ml之IgG類抗-EGFR抗體； 1至100 mM之緩衝劑； 0.001至1 w/v%之界面活性劑； 1至500 mM之至少一種安定劑； 其pH範圍為4.0至7.0。 2·如請求項1之調配物，其中該IgG-類抗-EGFR抗體之濃度 範圍為1至100 mg/ml。 3. 如請求項1或2之調配物，其中該緩衝劑為組胺酸緩衝液 或乙酸鹽緩衝液。 4. 如請求項1或2之調配物，其中該緩衝劑之濃度為10至50 mM。 5. 如請求項1或2之調配物，其中該緩衝劑使得pH為5.0至 6.0 〇 6. 如請求項1或2之調配物，其中該界面活性劑為聚山梨醇 酉旨。 7. 如請求項1或2之調配物，其中該界面活性劑之濃度為 〇·〇 1 至 0.1 w/v%。 8. 如請求項1或2之調配物，其中至少一種安定劑係自由鹽 類、醣類、及胺基酸所組成之群中選出。 9. 如請求項1或2之調配物，其中該至少一種安定劑之濃度 為 120至 300 mM。 10. 如請求項1或2之調配物，其包含選自鹽類、醣類及胺基 152420.doc -1 - 201200152 酸群組之第一安定劑、及作為第二安定劑之曱硫胺酸。 11. 如請求項10之調配物，其中該第一安定劑之濃度為120 至3 00 mM，且該第二安定劑甲硫胺酸之濃度為5至25 mM 〇 12. 如請求項1或2之調配物，其包含： 10至50mg/ml之IgG類抗-EGFR抗體； 15至30 mM之緩衝劑，其係選自L-組胺酸及乙酸鈉； 0.02至0.05 w/v°/〇之界面活性劑，其係選自聚山梨醇酯 20及聚山梨醇酯80 ; 120至3 00 mM之至少一種安定劑，其係選自海藻糖二 水合物、蔗糖、精胺酸鹽酸鹽及氣化鈉； 視需要存在之作為第二安定劑之5至25 mM之曱硫胺 酸； 其 pH為 5·5±0·3。 13. 如請求項1或2之調配物，其包含： 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體、20 mM L-組胺 酸、240 mM海藻糖二水合物、0.02至0.03 w/v%聚山梨 醇酯80，其pH為5.5 ; 或 10至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體、20 mM L-組胺 酸、155 mM精胺酸鹽酸鹽、0.02 w/v%聚山梨醇酯80， 其pH為5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體、20 mM L_ 組胺 152420.doc -2- 201200152 酸、240 mM海藻糖二水合物、0.02至0.03 w/v%聚山梨 醇酯80、10 mM甲硫胺酸，其pH為5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體、20 mM L-組胺 酸、240 mM蔗糖、0.02至0.03 w/v%聚山梨醇酯80，其 pH為 5.5 ; 或 10 至 50 mg/ml IgG-類抗-EGFR抗體、20 mM L-組胺 酸、240 mM蔗糖、0.02至0.03 w/v%聚山梨醇酯80、10 mM甲硫胺酸，其pH為5.5。 14. 如請求項1或2之調配物，其包含： 20至 50 mg/ml之 hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb ; 20 mM L-組胺酸； 0.02至0.03 w/v%聚山梨醇酯80 ; 240 mM之第一安定劑，其中該第一安定劑為選自海藻 糖二水合物及蔗糖之it類； 作為第二安定劑之1 0 mM之曱硫胺酸； 其 pH為 5.5士0.3。 15. 如請求項1或2之調配物，其中該IgG-類抗-EGFR抗體為 人類化抗體，且其包含 a) 於重鏈可變域中，包含如SEQ ID ΝΟ:1之CDR1、如 SEQIDNO:16iCDR2&WSEQIDNO:31iCDR3，& b) 於輕鏈可變域中，包含如SEQ ID ΝΟ··33之CDR1、 如 SEQ ID ΝΟ:34 之 CDR2、及如 SEQ ID ΝΟ:3 5 之 CDR3。 152420.doc 201200152 16·如請求項1或2之調配物’其中該IgG-類抗-EGFR抗體為 hu-ICR62 IgGl抗-EGFR mAb。 17.如請求項1或2之調配物，其中該IgG-類抗-EGFR抗體經 糖基工程處理，而使其Fcg中之非岩藻糖基化寡糖之比 例較未經糖基工程處理之抗體提高。 1 8.如請求項丨或2之調配物，其係呈液體形式、凍乾形式、 或呈自凍乾形式經復水後之液體形式。 19·種以如凊求項1至丨8中任一項之調配物於製備適用於 治療癌症之醫㈣K料。 152420.doc 201200152 四、指定代表圖： (一) 本案指定代表圖為：（無） (二) 本代表圖之元件符號簡單說明： 五、本案若有化學式時，請揭示最能顯示發明特徵的化學式： (無） 152420.doc