TW201029583A - A nutritional composition comprising probiotics and improving sleep patterns - Google Patents

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201029583 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係關於—種益生細菌菌株之用途，其用於在嬰兒 . &幼小兒童中改善睡眠模式成熟及減少夜晚失眠及/或在 . ㈣年齡之經歷睡眠變化之人類或動物中減少睡眠障礙及 改善睡眠品質。 【先前技術】 φ 在生命之任何階段都可觀察到睡眠障礙。此等障礙通常 以開始及維持睡眠之能力降低及較深、較具恢復性之睡眠 的比例降低為特徵。經歷彼等變化之個體的生活品質實質 - 上受到了損害。 嬰兒睡眠在生命之第一個月内通常會變化以遵循晝夜節 律，其中睡眠在晚上持續一段較長之連續時間，且類似 地，睡眠狀態自在出生時於REM(活動）與]^11£]^(安靜）睡眠 之間平等分布變為至8個月大時三分之一 REM及三分之二 φ NREM。若無法在嬰兒期成功地協調此等變化，則亦會對 兒童之睡眠模式產生持久影響。 嬰兒及兒童中最常見之睡眠障礙為與失眠（亦即難以在 • 就寢時間平靜下來或無法無間斷地睡一整夜）有關者。據 . 估計，此等障礙影響著15%至35%的年齡不到24個月之嬰 兒（France等人 ’「Infant Sleep Disturbance: Description 〇f a problem behaviour process」，Sleep Medicine Reviews， 第3卷，第4期，第265-280頁，1999)。嬰兒及兒童睡眠障 礙不可避免地會引起父母睡眠障礙與壓力，此會導致不當 144353.doc 201029583 的兒童-父母相互作用，繼而加重嬰兒及兒童症狀，從而 引起惡性循環。 許多涉及嬰兒睡眠障礙之文獻聚焦於心理因素，諸如母 親之產前與產後壓力及高度焦慮。例如，Field及同事研究 了孕婦在扭娠之第二個及第三個三月期（trimester)期間之 睡眠障礙、抑鬱、焦慮及憤怒與其新生嬰兒之睡眠模式之 間的關係。他們觀察到抑鬱母親所生之嬰兒亦會經歷睡眠 障礙，包括深度睡眠時間較少及不定型（紊亂）睡眠時間較 多（Field 等人，「sleep disturbances in depressed pregnant women and their newborns」， Infant Behavior and Development 30 (2007) 127-133) ° 此等及類似之觀察結果使兒科醫師當被嬰兒及兒童之父 母詢問有關嬰兒睡眠障礙之問題時集中於推薦行為管理技 術，諸如確立一貫的就寢時間慣例、逐漸使就寢時間移至 較早的時間或逐漸減少對於覺醒的注意力。該等措施可為 有效的，但常常難以為父母所用。 正常變老伴隨有睡眠品質、睡眠量及睡眠結構之變化。 具體而言，健康年長者開始及維持睡眠之能力似乎有可量 測之降低，並伴以較深、較具恢復性之NREM睡眠比例的 降低（Espiritu JR. Aging-related sleep changes, Clin Geriatr Med. 2008 24(1):1-14)。 急性及慢性壓力、焦慮及抑鬱通常導致任何年齡段之睡 眠模式變化及失眠症（Chorney DB，Detweiler MF，Morris TL, Kuhn BR, The interplay of sleep disturbance, anxiety, 144353.doc 201029583 and depression in children, J Pediatr Psych〇1 2〇〇8 33(4):339-48 ； LeBlanc M, Merette C, Savard J, Ivers H, Baillargeon L, Morin CM, Incidence and risk factors of * insomnia in a population-based sample. Sleep. 2009 . 32(8):1027-37) ° 偶爾及在極端情況下，可開立抗焦慮藥物（例如苯并二 氮呼）之藥方。然而，此等藥物之功效為可變的，難以確 • 立恰當之劑量且有害副作用之風險較高。在任何情況下， 特別對於嬰兒及幼小卩童而t，-般反對開立此類強效藥 物之藥方。 根據上述可得知，仍需要替代性方法以在生命的不同階 段減少睡眠障礙且改善睡眠模式。 【發明内容】 本發明者意外地發現，投與一種益生細菌菌株可在經歷 睡眠變化及/或失眠症之個體中改善睡眠品質且減少失眠 嚳 #生次數’且具體而言，可在嬰兒及幼小兒童中誘發較成 熟之睡眠模式。因此，在模擬由具有不良或不成熟之睡眠 时質之嬰兒及兒童以及由經歷睡眠變化之成人所經歷的睡 ' 眠變化之動物模型中’益生菌之投與藉由減少活動睡眠 ' (REM)之時間、增加安靜睡眠（NREM)之時間及減少覺醒發 生之次數來完全使睡眠模式正常化。 因此’本發明提供一種益生、細菌菌株之用途，其用於製 k用以在女兒及幼小兒童中誘發較成熟之睡眠模式及用於 在任何年齡段減少睡眠障礙及/或改善睡眠模式的藥物或 144353.doc 201029583 治療性營養組合物。「較成熟」在此處係指睡眠模式類似 於或接近於未經歷睡眠週期延遲成熟且因此未經歷睡眠障 礙之個體之睡眠模式。「較成熟之睡眠模式」的特徵在於 晚上持續較長之連續睡眠時間，此係與活動（REM)睡眠持 續時間之減少及安靜（NREM)睡眠持續時間之增加有關。 該REM及該NREM為睡眠模式成熟之良好指標。 本發明延伸出一種在嬰兒及幼小兒童中誘發較成熟之睡 眠模式及在任何年齡段減少睡眠障礙及/或改善睡眠模式 之方法，其包含向有需要之個體投與治療量之益生細菌菌 株。 BDNF(源於腦之神經營養因子）為一種可促進位於中樞 神經系統中或與中樞神經系統直接相連之神經元群體存活 的蛋白質。其為可影響神經元細胞及非神經元細胞增殖、 分化、存活及死亡之具有1 5種多肽生長因子之獨特家族中 的一員。BDNF及其他神經營養生長因子（例如NGF(神經生 長因子）、NT-3(神經營養蛋白-3)及NT-4(神經營養蛋白-4)) 對於神經系統之健康及良好狀態係必不可少的，且除了其 在細胞存活中之作用以外，還介導諸如學習、記憶、行為 之高級活動。已在動物模型中證實腦中之高BDNF含量可 增加自然睡眠及NRE1V[持續時間（Kushikata, Am J Physiol, 1999)，而阻斷BDNF之TrkB受體會擾亂睡眠模式（Faraguna 等人，J Neurosci，2008)。根據未公布之資料，本發明者 意識到一種益生細菌菌株、亦即長雙叉桿菌 (B/yVdoZmeierz’wm /ongwm)NCC3001(ATCC BAA-999，最初 144353.doc 201029583 由 Morinaga Mi丨k Industry Co. Ltd以名稱BB536提供）可增 加海馬回中BDNF表現。 壓力、焦慮及抑鬱已經證實與海馬區中之低BDNF含量 ，有關（Duman RS，Malberg J，Nakagawa S，D'Sa C. Neuronal plasticity and survival in mood disorders. Biol Psychiatry. 2000;48:732-73 9)。亦已對在正常變老期間BDNF及/或其受 體（TrkB.FL、TrkB.Tl及TrkB.T2)之表現有所降低作了描述 參 (Tapia-Arancibia L, Aliaga E, Silhol M, Arancibia S. Brain Res Rev. 2008，59(1):201-20)。在嬰兒中，許多生理學過 程在出生時並未完全成熟且僅在出生後頭幾個月或頭幾年 • 裏變得成熟。一些嬰兒及兒童之BDNF含量有可能會降 低。在該等情況下，BDNF含量低可能會導致睡眠紊亂， 及/或在嬰兒及兒童之特定情況下，導致無法發展成熟之 晝夜睡眠模式。在不希望受理論束縛之情況下，本發明者 咸信’可以此種方式解釋投與益生細菌菌株對睡眠障礙及 Φ 睡眠模式之有益影響。換言之，投與能夠增加海馬BDNF 表現之藥劑（諸如益生細菌菌株）因此可導致觀察到睡眠品 質之正常化及/或改善成熟睡眠模式之發展。 - 【實施方式】 • 在本說明書中，以下術語具有以下含義：_ 「嬰兒j意謂12個月以下之兒童； 「显生菌」意謂對宿主之健康或良好狀態具有有益影響之 微生物細胞製劑或微生物細胞組份。（Salminen s，

Ouwehand A. Benno γ·等人，「pr〇bi〇tics: h〇w should they 144353.doc 201029583 be definedj Trends Food Sci. Technol. 1999:10 107-10); 睡眠紊亂之嬰兒/幼小兒童」意謂會在夜裏覺醒且不能 在/又有父母察覺到其覺醒的情況下重回睡眠之嬰兒或幼小 兒童及7或不能自發睡眠之嬰兒或幼小兒童； 「幼小兒童」意謂一歲至三歲之間的兒童。 除非另有說明，否則所有百分比均以重量計。 益生細菌菌株可以藥物形式，例如以溶解於水中、等於 l〇el〇 Cfu之日劑量投與且以匙投與。或者，本發明之組合 物可為含量等於l〇e3與i〇el2 cfu/g(以乾重計）之間、更佳 為10e6與l〇e9 cfu/g之間的食品、營養組合物、營養藥 物、飲料、食品添加劑或動物食品。 例如，該組合物可為人乳強化劑、嬰兒配方、第二階段 配方（follow on f〇rmula)、成長乳粉、嬰兒縠類食品嬰兒 食品、優格（yogurt)、穀物棒、早餐穀類食品、甜點、冷 凍食rm、湯、動物食品、液體懸浮液、粉劑、錠劑、膠狀 物、糖果、營養組合物及/或補充劑，其目標在於為特定 病理病狀（或不希望有之生理病狀或生理病理病狀）提供幫 助，該等病狀諸如過敏症或不耐症、營養不良、炎症、危 重病、絞痛、外傷、感染、手術、注意力不足/過動症^ 抑鬱症、焦慮症、疲勞或壓力及其類似病狀，特別是在該 等特定病理病狀引起睡眠模式之紊亂時。 表述量荨於」包括細菌為活的、滅活的或死的或甚至 以諸如DNA或細胞壁物質之片段形式或以益生菌代謝物形 式存在的可能性。換言之，細菌數量係依據該數量之細菌 144353.doc 201029583 之群落形成能力來表述，其中認為所有細菌均為活細菌’ 而不管僅提供細菌代謝物或是細菌實際上為活的、滅活的 或死的、片段化的或任何或所有該等狀態之混合狀態。 ' 益生細菌菌株可為乳酸桿菌（lactobacillus)或雙叉桿菌 . (bifidobacterium)。較佳乳酸桿菌種之實例為鼠李糖乳酸 桿菌、副乾酷·乳酸桿菌 paracasez·)及羅伊氏乳酸桿菌

❶ rewieW)。尤其較佳之菌株為鼠李糖乳酸桿菌ATCC 53103、鼠李糖乳酸桿菌CGMCC 1.3724、羅伊氏乳酸桿菌 • ATCC 55730及羅伊氏乳酸桿菌DSM 17938。較佳雙叉桿菌 • 種之實例為乳雙叉桿菌、長雙叉桿 菌、短雙叉桿菌0reve)及嬰兒雙叉桿菌 。尤其較佳之菌株包括尤其由丹 麥Christian Hansen公司以商標Bbl2出售之乳雙叉桿菌 CNCM 1-3446、由日本Morinaga Milk Industry Co. Ltd.以 φ 商標BB536出售之長雙叉桿菌NCC3001(ATCC BAA-999)、 由Danisco以商標Bb-03出售之短雙叉桿菌菌株、由 Morinaga以商標Μ-16 V出售之短雙叉桿菌菌株、由lnstitut • Rosell(Lallemand)以商標R0070出售之短雙叉桿菌菌株及 . 由Procter & Gamble Co.以商標5. k/b«沿出售之嬰兒雙叉 桿菌菌株。益生菌可選自包含以下之列項：雙又桿菌屬、 乳酸桿菌屬、乳球菌屬（Lactococci)、腸球菌屬 (Enterococci)、鏈球菌屬（Streptococci)、丙酸桿菌屬 (Propionibacteria)、小球菌屬（Pediococci)、大腸桿菌屬 144353.doc 201029583 (Esc/zeric/zk co/ί)、德巴利酵母屬（Debaryomyces)、克魯 維酵母屬（Kluyveromyces)、酵母屬（Saccharoymces}、裂殖 酵母屬 （Schizosaccharomyces)、 接合酵母屬 (Zygosaccharomyces)、耶氏酵母屬（Yarrowia)、念珠菌屬 (Candida);以及以下之種：長雙叉桿菌、乳雙叉桿菌、動 物雙叉桿菌、短雙叉桿菌、嬰 兒雙叉桿菌、雙叉雙叉桿菌（万M/idwm)、青 春雙叉桿菌（万ad/o/escewih)、嗜酸乳酸桿菌 {Lactobacillus aczWop/nVws)、瑞士乳酸桿菌 /ze/vei/cws) ' 酷·蛋白乳酸桿菌（laciofeac^/ZMs case/)、副乾 酷乳酸桿菌、唾液乳酸桿菌（I<3cio&acz7/w«s ia/ivar/ws)、植 物乳酸桿菌（ZacioZ?<3ez·///^ 、醋酵乳酸桿菌 (Lactobacillus fermentum)、約氏乳敗桿儀（JLactobacilhis yo/msowz·/)、羅伊氏乳酸桿菌、加氏乳酸桿菌 gasser/)、鼠李糖乳酸桿菌、乳球菌亞種 {Lactococcus 以/?.)(諸如乳酸乳球菌（i^ciococcM·? /acib)、 乳脂乳球菌（ZaciococcM·? cremorb)、二丁酮乳球菌 (•LacioeoccM·? iiiaceij/aciz’·?））、摩腸球菌（五《ierococcws /aecz’wm)、糞腸球菌（五《ierococcws /aeca/b)、釀酒酵母 {Saccharomyces cerevisiae) 、 i\i ^ ^ {Saccharomyces 6ow/ar山·ζ·)、粟酒裂殖酵母（《Sd/zosacc/zaromyee·? pom6e)、 乳酸克魯_維酵母（幻wjveromyces /acik)、解脂耶氏酵母 (Tarrowia 或其混合物，較佳為選自由以下組成 之群：約氏乳酸桿菌（NCC5 33 ; CNCM 1-1225)、長雙叉桿 144353.doc -10- 201029583 菌（NCC490 ; CNCM 1-2170)、長雙叉桿菌（NCC2705 ; CNCM 1-2618)、長雙叉桿菌（NCC3001 ; ATCC BAA-999)、乳雙叉桿菌（NCC2818 ; CNCM 1-3446)、短雙又桿 * 菌（菌株A)、副乾酪乳酸桿菌（NCC2461 ; CNCM 1-2116)、 . 鼠李糖乳酸桿菌GG(ATCC53103)、鼠李糖乳酸桿菌 LPR(NCC4007 ； CGMCC 1.3724)、羅伊氏乳酸桿菌（ATCC 55730)、羅伊氏乳酸桿菌（DSM 17938)、屎腸球菌SF ^ 68(NCIMB10415)、布拉氏酵母及其混合物。 所選益生細菌菌株可根據此項技術中已知之任何適合方 法來培養且例如藉由冷凍乾燥或喷霧乾燥來製備以便添加 至本發明之藥物或營養組合物中。或者，細菌菌株可購自 諸如Christian Hansen及Morinaga之專門供應商且已以適合 於添加至營養組合物（諸如嬰兒配方）中之形式製備。 益生細菌適合之日劑量為10e3至10el2群落形成單位 (cfu)，更佳為 10e7至 10el 1 cfu。 φ 本發明尤其適用於在嬰兒中誘發較成熟之睡眠模式，並 因此改善其睡眠品質且減少失眠之發生。在一項實施例 中，本發明係關於在嬰兒或幼小動物中減少睡眠障礙及/ • 或改善睡眠模式。 . 若欲處理該年齡組，則治療性營養組合物較佳為嬰兒配 方或較大嬰兒配方（follow-up formula)或用於寵物或動物 之相應產品。 在一項實施例中，睡眠品質或模式之改善的特徵在於、 包含或限於減少覺醒狀態之發生次數及/或減少睡眠斷續 144353.doc -11 - 201029583 現象（sleep fragmentation)及/或增加覺醒狀態之持續時間 (較好、較少斷續之睡眠/覺醒模式的指標）。 在一項實施例中，睡眠品質之改善的特徵在於在較長的 夜晚不存在不願意之覺醒情況以及睡眠比較安靜。 在一項實施例中’睡眠品質之改善的特徵在於入睡能力 較佳。 在一項實施例中，經歷睡眠模式紊亂（諸 睡眠、噩夢或失眠症）之個體的睡眠品質有改善 現將藉由實例來描述根據本發明使用之嬰兒配方之一般 組成。該嬰兒配方可含有含量不超過4 〇、3 〇或2 〇 g/i〇〇 kca卜較佳為^至二』g/1〇〇 kcal之蛋白質源。咸信蛋白質 類型對於本發明並非關鍵，其限制條件為滿足對必需胺基 酸含罝之最低要求且確保令人滿意之生長，但超過重量 /〇之蛋白質源為乳清為較佳的。在一項實施例中，蛋白質 含量在30%與8〇%乳清蛋白之間。因此，可使用基於乳 清、赂蛋白及其混合物之蛋白質源以及基於大豆之 源。就乳清蛋白而言，蛋白暂、、塔i、* 質源可以酸乳清或甜乳清或其 混合物為基礎且可包括任何 球蛋白。 斤需比例之…蛋白及β-乳 與經水解蛋白質之混人物;:7解的’或為完整蛋白 心 例如對於咸信面臨患上牛乳 敏^之風險㈣兒而[可“要提供部分水解之^ ^解程度介於2。/。與20%之間)。若 : 需要且如此項技術中所知進行水解過程。例；，可： 144353.doc 201029583 多個步驟藉由以酵素方式水解乳清部分來製備乳清蛋白水 解產物。若用作起始物質之乳清部分實質上不含乳糖，則 發現蛋白質在水解過程中發生少得多的離胺酸阻斷。此使 . 得離胺酸阻斷程度能夠自總離胺酸之約15重量。/。降低至不 . 到離胺酸之約10重量％(例如離胺酸之約7重量％)，此極大 地改善了蛋白質源之營養品質。 嬰兒配方可含有碳水化合物源。可使用嬰兒配方中常見 • 之任何碳水化合物源，諸如乳糖、蔗糖、麥芽糊精、澱粉 及其混合物，但較佳之碳水化合物源為乳糖。碳水化合物 源較佳貢獻配方總能量的35%至65%。在本發明之一項較 佳貫施例中，碳水化合物包含稻米碳水化合物。在一項實 施例中，至少5%、至少1〇%、至少25%或至少5〇%、至少 70%、至少9〇%或約i〇〇%(w/w)之碳水化合物為稻米碳水化 合物。在本發明之情況下已顯示最小比例（總碳水化合物 之至少10% w/w)之稻米碳水化合物可為睡眠模式帶來實質 • 性益處。稻米碳水化合物之含量越高，改善之程度可越 大 了叙疋该效應與殿粉之存在（在稻米碳水化合物中）、 稻米碳水化合物之特殊性質及/或包含於稻米碳水化合物 中之其他化合物（澱粉除外）相關。包含稻米碳水化合物之 • 本發明之該營養組合物可尤其用於為兒童、幼小兒童或嬰 兒且尤其為具有睡眠模式障礙（例如由絞痛引起）之彼等兒 童、幼小兒童或嬰兒且更尤其為0與12個月之間的嬰兒設 計的嬰兒配方、較大嬰兒配方或食品之情況丁。 嬰兒配方可含有脂質源。脂質源可為適用於嬰兒配方之 144353.doc -13- 201029583 任何脂質或脂肪。較佳之脂肪源包括椋搁油、高油酸葵花 子油及高油酸紅花子油。亦可添加必需脂肪酸亞麻油酸及 α-次亞麻油酸，同樣可添加少量含有大量預形成之花生四 烯酸及二十二碳六烯酸的油，諸如魚油或微生物油。脂肪 含量較佳（諸如）總計貢獻配方總能量之30%至55%。脂肪 源的η-6與η-3脂肪酸之比率較佳為約5:1至約ΐ5:ι，例如約 8:1 至約 10:1。 本發明之嬰兒配方較佳另外含有量為〇 3 %至丨〇 %的至少 一種益菌助生質。益菌助生質為一種不可消化之食品成 伤其藉由選擇性刺激結賜中之一種或數種細菌的生長及/ 或活性來有益地影響宿主，且因此改善宿主健康。該等成 份在其在胃或小腸中不被分解及吸收之意義上而言係不可 消化的，且因此完好無損地轉運至結腸，在此處由有益細 菌選擇性地使該等成份醱酵。益菌助生質之實例包括某些 寡醣，諸如果寡醣（FOS)、牛乳寡醣（CM〇s)及半乳寡醣 (GOS)。可使用血菌助生質之組合，諸如與1 〇% 短鏈果券醣之組合（諸如以商標Raftil〇se⑧出售之產品）或與 10/〇菊糖之組合（諸如以商標RaftiHne⑧出售之產品）。在本 發明之情況下可使用之益菌助生質的其他實例包括自乳汁 或其他來源獲得之寡醣群，其視情況含有唾液酸、果糖、 海藻糖、半乳糖或甘露糖；較佳之益菌助生質為唾液酸寡 醣（SOS)、果寡醣（FOS)、半乳寡醣（G〇s)、異麥芽募醣 (IMO)、木寡醣（X〇s)、阿拉伯木寡醣（AX〇s)、甘露寡醣 (M0S)、大豆寡醣、葡萄糖基蔗糖（GS)、乳果寡醣（ls)、 144353.doc 14 201029583 唾液乳糖（SL)、海藻糖基乳糖（FL)、乳糖_N_新四糖 (LNNT)、乳果糖（la)、巴拉金糖寡醣（PAO)、麥芽寡醣、 其膠及/或水解產物、果膠、澱粉及/或其水解產物。 • 嬰兒配方亦可含有營養上有效量的在日常飲食中被視為 ' 必需的所有維生素及礦物質9已確立對某些維生素及礦物 質之最低要求。視情況存在於嬰兒配方中之礦物質、維生 素及其他營養物之實例包括維生素A、維生素B1、維生素 φ B2、維生素B6、維生素B12、維生素E、維生素κ、維生素 C、維生素D、葉酸、肌醇、菸酸、生物素、泛酸、膽 鹼、鈣、磷、碘、鐵、鎂、銅、鋅、錳、氯化物、鉀、 納、砸、絡、鉬、牛磺酸及L_肉鹼。礦物質通常係以鹽形 式添加。特定礦物質及其他維生素之存在及量應視預定嬰 兒群體而變化。 必要時’嬰兒配方可含有乳化劑及穩定劑，諸如大豆卵 鱗脂、檸檬酸單甘油酯與二甘油酯及其類似物。 # 嬰兒配方可視情況含有其他可具有有益效應之物質，諸 如纖維、乳鐵蛋白（lactoferrin)、核苷酸、核苷及其類似 物。 -最後’該配方可含有每公克嬰兒配方1〇e3至1〇el2 cfu、 -更佳為母公克配方1 〇e6至1 〇e9 cfu之益生細菌菌株。 上述嬰兒配方可以任何適合之方式來製備。舉例而言， 其可藉由將蛋白質、碳水化合物源及脂肪源以適當比例摻 合在一起來製備。若使用乳化劑，則可在此時包括乳化 劑。此時可添加維生素及礦物質，但通常係稍後進行添加 144353.doc 201029583 :::熱降解。可將任何親脂性維生素、乳化 物在播合之前溶解於脂肪源中。接著可將水、較佳為^ 订逆參透處理之水混人以形成液體混合物。 贼至―幫助該等成份之分散。可使用市售之= 态來形成液體混合物。接著例如分兩個階段將該液體混人 物均質化。 σ 接著可藉由例如在約5秒至約5分鐘内將液體混合物 加熱至約80〇C至約]<；η〇Γ +炫閉&以—山 、 C之範圍内的>m度來對液體混合物 進打熱處理以降低細菌負荷。此舉可藉由蒸汽注入、高壓 釜或藉由熱交換器（例如板式熱交換器）進行。 隨後，可例如藉由急驟冷卻使該液體混合物冷卻至約 60 C至約85 C °接著可例如分兩個階段再次將該液體混合 物均質化；第—階段在約10 MPa至約30 MPa下，且第二階 段在約2 MPa至約1G Mpa下。接著可將均f化混合物進— 步冷卻以添加任何熱敏性組份，諸如維生素及礦物質。此 ❹ 時適宜地調整均質化混合物之1?1^值及固體含量。 將均質化混合物轉移至適合乾燥裝置（諸如喷霧乾燥機 或冷凍乾燥機）中且轉變為粉末。粉末應具有不到約5重量 %之水分含量。在此階段可藉由乾式混合添加益生細菌菌 株。 在另項貫細*例中，組合物可為一種包括足以在個體中 達成所放應之量之益生細菌菌株的補充劑。此種投與形 式更適於兒童’但益生菌可以内部懸浮有益生細菌之油滴 形式投與嬰兒。該類產品之實例為含有由BioGaia AB， I44353.doc -16- 201029583

Sweden 出售之 L. reuteri DSM 17938 的 BioGaia益生菌滴 劑。 益生菌之日劑量較佳為10e3至1 Oe 12 cfu。對欲包括於補 ' 充劑中之益生菌之量應視該補充劑之投與方式而定作相應 . 選擇。舉例而言，若欲每天兩次投與該補充劑，則各補充 劑可含有5xl〇e2至5xl0ell cfu之益生菌。該補充劑可例如 呈錠劑、膠囊、片劑、栓劑、膠狀物或液體之形式。該補 φ 充劑可進一步含有保護性水膠體（諸如膠狀物、蛋白質、 改質澱粉）、黏合劑、成膜劑、囊封劑/材料、壁/殼材料、 基質化合物、包衣料、乳化劑、表面活性劑、增溶劑 (油、脂肪、蠟、卵磷脂等）、吸附劑、載劑、填充劑、辅 助化合物、分散劑、濕潤劑、加工助劑（溶劑）、助流劑、 味覺掩蔽劑、增重劑、膠凝劑及成膠劑。補充劑亦可含有 習知醫藥添加劑及佐劑、賦形劑及稀釋劑，包括（但不限 於）水、任何來源之明膠、植物膠、木質素磺酸鹽、滑 # 石、糖、澱粉、阿拉伯膠、植物油、聚伸烷二醇、芳香 劑、防腐劑、穩定劑、乳化劑、緩衝劑、潤滑劑、著色 劑、濕潤劑、填充劑及其類似物。 ' 另外’根據諸如USRDA之政府機構的建議，該補充劑可 - 含有適用於經口或腸内投藥之有機或無機載劑材料以及維 生素、礦物質、痕量元素及其他微量營養素。 在一項實施例中’本發明係關於在成人、大齡兒童（詳 吕之為3至12歲之間的兒童）、青少年或任何年齡段之人類 中減少睡眠障礙及/或改善睡眠模式。 144353.doc 17 201029583 在另一項實施例中，本發明係關於藉由使用益生菌來將 所描述之益處傳遞給寵物及其他動物（諸如貓、犬或馬）。 現將參考以下實例來進一步說明本發明：-實例1 以下提供根據本發明使用之嬰兒配方之組合物的一個實 例。該組合物僅係為了說明而給出。如下組合物之蛋白質 係來自乳清及酪蛋白（例如70%乳清及30%酪蛋白）。在另 一種選擇中，蛋白質僅來自乳清。 營養物 每 100 kcal 每公升 能量(kcal) 100 670 蛋白質(g) 1.83 12.3 脂肪(g) 5.3 35.7 亞麻油酸(g) 0.79 5.3 α-次亞麻油酸(mg) 101 675 乳糖(g) 11.2 74.7 益菌助生質(100%GOS)(g) 0.64 4.3 礦物質(g) 0.37 2.5 Na(mg) 23 150 K(mg) 89 590 Cl(mg) 64 430 Ca(mg) 62 410 P(mg) 31 210 Mg(mg) 7 50 Mn(pg) 8 50 Se(pg) 2 13 維生素A(pgRE) 105 700 維生素D(pg) 1.5 10 維生素E(mgTE) 0.8 5.4 維生素Kl(pg) 8 54 144353.doc • 18· 201029583 維生素C(mg) 10 67 維生素Bl(mg) 0.07 0.47 維生素B2(mg) 0.15 1.0 於酸(mg) 1 6.7 維生素B6(mg) 0.075 0.50 葉酸(Kg) 9 60 泛酸(mg) 0.45 3 維生素Β12(μ§) 0.3 2 生物素(pg) 2.2 15 膽驗(mg) 10 67 Fe(mg) 1.2 8 I〜g) 15 100 Cu(mg) 0.06 0.4 Zn(mg) 0.75 5 羅伊氏乳酸桿菌DSM17938 2.107 cili/g粉末 實例2 以下提供根據本發明使用之較大嬰兒配方之組合物的一 個實例。該組合物僅係為了說明而給出。如下組合物之蛋 白質係來自乳清及酪蛋白。在另一種選擇中，蛋白質僅來 自乳清。 較大嬰兒配方適於 6至12個月齡之嬰兒 營養物 每 100 kcal 每公升 能量(kcal) 100 630 蛋白質(g) 1.8 11.3 脂肪(g) 5.0 31.5 亞麻油酸(g) 0.75 4.7 α-次亞麻油酸(mg) 95 600 乳糖(g) 11.9 75 144353.doc -19- 201029583 益菌助生質(100%GOS)(g) 0.63 4.0 礦物質(g) 0.37 2.3 Na(mg) 25 158 K(mg) 80 504 Cl(mg) 65 410 Ca(mg) 60 378 P(mg) 33 208 Mg(mg) 7 44 Mn(pg) 5 32 Se(Hg) 3 19 維生素A(pgRE) 90 570 維生素D(pg) 1.5 9.5 維生素E(mgTE) 0.8 5.0 維生素Kl(pg) 8 50 維生素C(mg) 15 95 維生素Bl(mg) 0.1 0.6 維生素B2(mg) 0.1 0.6 终酸(mg) 0.5 3.2 維生素B6(mg) 0.06 0.4 葉酸(pg) 15 95 泛酸(mg) 0.8 5.0 維生素Β12(μ§) 0.2 1.3 生物素(pg) 2.0 12.6 膽驗(mg) 15 95 Fe(mg) 1.0 6.3 触） 15 95 Cu(mg) 0.06 0.4 Zn(mg) 0.9 5.7 BB536(=ATCC BAA-999，由Morinaga 寄存，源自 2.106cfli/g 粉末 Morinaga Milk Industry, Co., Ltd, Tokyo, Japan) 及/或 及/或 羅伊氏乳酸桿菌DSM 17938(源自Biogaia - BioGo：\2i 107 cfU/g粉末 AB, Sweden; 144353.doc -20- 201029583 實例3 以下提供根據本發明使用之較大嬰兒配方之組合物的一 個實例。該組合物僅係為了說明而給出。如下組合物之蛋 • 白質係來自乳清及酪蛋白（比率為50/50)。在另一種選擇 . 中，蛋白質僅來自乳清或70%(w/w)來自乳清。在如下實例 中，1 6%(w/w)之碳水化合物為稻米碳水化合物（在類似之 一個替代實例中，25%之碳水化合物為稻米碳水化合物）。 ^ 可向調配物中添加益菌助生質（例如GOS，0.5 g/100 kcal) ° 較大嬰兒配方適於 6至12個月齡之嬰兒 營養物 每 100 kcal 每公升 能量(kcal) 100 670 蛋白質(g) 2.2 14.6 脂肪⑻ 3.7 31.6 亞麻油酸(g) 0.76 5.1 α-次亞麻油酸(mg) 88 590 乳糖(g) 7.44 81.2 麥牙糊精(g) 2.1 14.2 澱粉(g) 2.59 17.3 益菌助生質(100%GOS)(g) 0.63 4.0 礦物質(g) 0.58 3.9 Na(mg) 39 158 K(mg) 113 760 Cl(mg) 73 490 Ca(mg) 105 700 P(mg) 66 440 144353.doc -21 - 201029583

Mg(mg) 11.4 76 維生素A(pgRE) 90 570 維生素Dbg) 1.5 9.5 維生素E(mgTE) 0.8 5.0 維生素Κ1(μ§) 8 50 維生素C(mg) 15 95 維生素Bl(mg) 0.1 0.6 維生素B2(mg) 0.1 0.6 於酸(mg) 0.5 3.2 維生素B6(mg) 0.06 0.4 葉酸(kg) 15 95 泛酸(mg) 0.8 5.0 維生素B12(pg) 0.2 1.3 生物素(pg) 2.0 12.6 膽驗(mg) 15 95 Fe(mg) 1.0 6.3 15 95 Cu(mg) 0.06 0.4 Zn(mg) 0.9 5.7 羅伊氏乳酸桿菌DSM 17938(源自Biogaia-BioGaiaAB, Sweden^ 及/或 鼠李糖乳酸桿菌CGMCC 1.3724 及/或 BB536(=ATCC BAA-999，由Morinaga 寄存，源 $ Morinaga Milk Industry, Co., Ltd, Tokyo, Japan) 107 cfij/g 粉末 及/或 106 cfb/g粉末 及/或 106 cfb/g粉末 實例4.益生菌對睡眠品質之影響 向懷孕大鼠施加之壓力會引起子代（亦即產前應激或PRS 動物）之睡眠品質變化，其類似具有紊亂睡眠模式之嬰兒 144353.doc -22- 201029583 與兒里及經歷不良睡眠品質及失眠症之成人所經歷的彼等 睡眠質變化。該等變化之特徵在於較淺之睡眠及覺醒發 生次數增多（亦即REM睡眠量增加，nrem之量減少及睡眠 ' 斷續現象增多（Dug〇vic，1999))。此模型已用於測試益生菌 - 之投與對睡眠品質的功效。 向PRS(亦即來自在妇娠期間經受束缚應激之母畜的子 代）及對照（亦即來自未受到干擾之母畜的子代）大鼠在深度 Φ 麻醉下植入慢性電極（chronic electrode)以用於額頂腦電圖 ( EG)眼電圖（E0G)及肌電圖（EMG)之多種波動記錄。所 有电極均連接至微型連接器上，且使用牙科用黏固劑固定 於顱骨。用多種波動記錄器（EEG_4414 A/K ; Nih〇n_ Khoden)記錄EEG、E〇G及EMG活動，其中輸出係與電腦 相連接以便對EEG作線上波譜分析。在植入電極之手術 後，將該等大鼠個別圈養在（直徑3〇 ，高 cm)中，且在2週内不受干擾。隨後在緊接著的“天内使該 • 料物適應於睡眠記錄程序。在此時藉ώ管飼法使其接受 安慰劑或兩種益生菌中之一者。在適應期結束時，自光照 階段起始時開始，記錄睡眠狀況，歷時24小時的時間。以 ' 30秒之分段（eP〇ch)對多種波動記錄作目測評分。彼等分段 • 被歸類為覺醒、NREM睡眠或REM睡眠。記錄該三種警覺 度狀態所耗費之時間量及各狀態發生之次數及持續時間。 研究以下各組： PRSr:接受i mL/天含有1〇9 cfu羅伊氏乳酸桿菌麵 17938(Bi〇Gaia益生菌滴劑，Bi〇Gaia AB，瑞典）之油滴劑的 144353.doc -23- 201029583 PRS動物。 PRSb :接受1 ml/天含有1010 cfu長雙叉桿菌NCC3001 (ATCC BAA-999，最初由 Morinaga Milk Industry Co. Ltd 提供），溶解於生理鹽水中之生理鹽水溶液的PRS動物。 PRSp :接受1 mL/天含有與羅伊氏乳酸桿菌產品相同之 油載劑但不含益生菌之滴劑的PRS動物。 對照組：接受1 mL/天含有與羅伊氏乳酸桿菌產品相同 之油載劑但不含益生菌之滴劑的對照動物。 結果展示於圖1及2中。正如所預期，相比於對照組，在 PRSp動物中安靜睡眠（NREM，圖1B)所耗費之時間量減少 且活動睡眠（REM，圖1C)所耗費之時間量增多，而在兩組 中覺醒狀態（圖1A)之持續時間類似。兩種益生菌之投與在 不影響覺醒狀態之持續時間的情況下使NREM及REM狀態 之持續時間正常化。相一致的是，在PRSp中覺醒（圖2 A)、 NREM(圖2B)及REM(圖2C)狀態在24小時内發生之次數多 於對照動物，此表明在PRSp組中睡眠斷續現象增多且覺醒 發生之次數較多。兩種益生菌使覺醒發生之次數及睡眠斷 續現象減少至對照組之程度。 總之，該資料表明益生菌之投與在動物模型中使睡眠模 式正常化且改善睡眠品質。由與安慰劑PRS組相比在益生 菌組中覺醒發生之次數減少且持續時間增加（資料未展示） 所表明，在益生菌組中較佳睡眠品質很可能使得在覺醒狀 態期間之警覺性得到改善。 144353.doc • 24·

Claims (1)

1. 201029583 七、甲*月專利範圍： 種ι生細菌菌株之用途，其 動物中、沾， 丹你用於製造用以在人類或 中減少睡眠障礙及/或改善睡眠品 _ 物或營養紐合物。 賢次睡眠模式之藥 動物=1之用途其中該等人類或動物為嬰兒、幼小 動物或幼小兒童。 J 3.

   如請求項1或2中任一項之用途 歷不良品質之睡眠及/或失眠症 其中該等人類或動物經 4. 5. 6.

   青长項1或2之用途，其中該營養組合物在該等人類或 動物中誘發成熟睡眠模式或減少失眠發生之次數。 如明求項1或2之用途，其中該益生細菌菌株為乳酸桿菌 (laCt〇bacillus)或雙又桿菌（bifidobacterium)。 如凊求項5之用途’其中該乳酸桿菌為鼠李糖乳酸桿菌 7/Μί μ⑽繼叫種、副乾酪乳酸桿菌 種或羅伊氏乳酸桿菌 {Lactobacillus reuterf)後。 7.如請求項5之用途，其中該雙又桿菌為乳雙叉桿菌 (Bifidobacterium lactis)煃、長雙又桿壤⑻fid〇bacteri_ longum)種、短雙又样菌（B^dobacterium breve)種或婴兒 雙又夫干風（Bifidobacterium inf antis)後。 8·如s青求項1或2之用途，其中益生細菌之日劑量為ι〇3至 1012群落形成單位（(^11)，更佳為1〇7至1〇11(^11。 9.如請求項5之用途，其中益生細菌之曰劑量為1〇3至 群落形成單位（cfu)，更佳為1 〇7至10n cfu。 144353.doc 201029583 :求項1或2之用途’其中該藥物或營養組合物中每公 樂物或组合物包含1〇3至1〇,2群落形成單位（咖）、更佳 二’ 1 〇至1 〇Π cfu之益生細菌。 u.=請求項5之用途，其中該藥物或營養组合物每公克華 或組合物包含形成單位（efu)，更佳為 至1〇U cfu之益生細菌。 如月求項1或2之用途’其中該治療性營養組合物中該益 生細丨菌菌株含量為每公克乾藥物或乾營養組合物包含Μ 至1012 efu，更佳為每公克乾藥物或乾營養組合物 1〇6至 l〇9cfu。 13. 如請求項5之用途’其中該治療性營養組合物中該益生 細，菌株含量為每公克乾藥物或乾營養組合物包含ι〇3至 10 Cfu ’更佳為每公克乾藥物或乾營養組合物包含1〇6 至 109cfu〇 14. 如請求項1或2之用途’其中該藥物為補充劑且該益生細 菌菌株係以每單位劑量103至1〇l2 cfu之量存在。 •如請求項5之用途，其中該藥物為補充劑子且該益生細菌 菌株係以每單位劑量1〇3至1〇12 cfu之量存在。 丨6.如請求項丨或2之用途’其中該藥物或營子養組合物係呈人 乳強化劑、嬰兒配方、第二階段配方(f〇u〇w 〇n f〇_la)、成長乳粉、嬰兒穀類食品、嬰兒食品、優格 (yogurt)、榖物棒、早餐縠類食品、甜點、冷凍食品、 湯、寵物食品、液體懸浮液、粉劑、旋劑'膠狀物、糖 果、營養組合物或營養補充劑之形式，其目標在於為誘 144353.doc 201029583 發睡眠障礙之特定病理病狀提供幫助，該等病狀諸如過 敏症或食物不耐症、營養不良、慢性炎症、危重病、外 傷、感染、手術、注意力不足/過動症、抑鬱症、焦慮 - 症、疲勞或壓力。 . 17.如請求項5之用途，其中該藥物或營養組合物係呈人乳 強化劑、嬰兒配方、第二階段配方、成長乳粉、嬰兒穀 類食品、嬰兒食品、優格、縠物棒、早餐穀類食品、甜 φ 點、冷凍食品、湯、寵物食品、液體懸浮液、粉劑、錠 劑、膠狀物、糖果、營養組合物或營養補充劑之形式， 其目標在於為誘發睡眠障礙之特定病理病狀提供幫助， 該等病狀諸如過敏症或食物不耐症、營養不良、慢性炎 症、危重病、外傷、感染、手術、注意力不足/過動症、 抑鬱症、焦慮症、疲勞或壓力。 18.如請求項1或2之用途，其中該藥物或營養組合物可誘發 較成熟之睡眠模式。 ❹I9·如請求項1或2之用途，其中該營養組合物包含碳水化合 物’且其中該等碳水化合物包含稻米碳水化合物，較佳 至少10%(w/w)之該等碳水化合物為稻米碳水化合物。 ’ 2〇*如求項5之用途’其中該營養組合物為初生嬰兒配方 - 或較大（follow-up)嬰兒配方。 21. 如靖求項6之用途，其中該營養組合物為初生嬰兒配方 或較大嬰兒配方。 22. 如請求項12之用途，其中該營養組合物為初生嬰兒配方 或較大嬰兒配方。 144353.doc 201029583 23. 如請求項13之用途，其中該營養組合物為初生嬰兒配方 或較大嬰兒配方。 24. 如請求項1 9之用途，其中該營養組合物為初生嬰兒配方 或較大嬰兒配方。 144353.doc