TW200304380A - Combination therapies for treating methylthioadenosine phosphorylase deficient cells - Google Patents

Combination therapies for treating methylthioadenosine phosphorylase deficient cells Download PDF

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Theodore James Boritzki
Pei-Pei Kung
Richard Charles Ogden
Donald James Skalitzky
Raymond Zehnder Luke
Ann Kuhn Leslie
Jialun Meng Jerry
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Description

200304380 玖、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明係有關用於治療哺乳動物與缺少甲硫腺铝磷酸化 酶（“MTAP”）有關之細胞增生性病變之組合療法。該組合療 法藉由投與肌甞酸重新合成作用之抑制劑及投與抗毒性劑 來選擇性殺死缺少MTAP之細胞。更特定言之，本發明係有 關包含選自甘胺醯胺核糖核苷酸甲醯基轉化酶（“GARFT”)· 之抑制劑、胺基咪唑羧醯亞胺核糖核甞酸甲醯基轉化酶 (“AICARFT”)之抑制劑、或兩者中之肌:y：酸重新合成作用之 抑制劑，與選自MTAP受質、甲硫腺甞（“MTA”)之前體、MTA 前體之類似物或MTAP受質之前藥中之抗毒性劑之組合療 法。 【先前技術】 甲硫腺甞磷酸化酶（“MTAP”）為一種涉及多元胺與嘌呤之 代謝作用之酵素。雖然MTAP存在於所有健康細胞中，但已 知某些癌症與缺少MTAP之影響有關。參見例如：Fitchen 等人之“Methylthioadenosine phosphorylase deficiency in human leukemias and solid tumors” Cancer Res·，46: 5409-5412，（1986); Nobori等人之“Methylthioadenosine phosphrylase deficiency in human non-small cell lung cancers，” Cancer Res.， 53: 1098-1101 (1993)。 如圖1所示，腺苷5’-三磷酸（“ATP”）之產生依賴腺嘌呤核 甞酸（“AMP”)之回收或合成。健康者之MTAP-感受態細胞中 ，主要透過兩種途徑產生AMP : (1)肌苷酸中間物之重新合 200304380 成（“IMP” ；亦即重新合成途徑），或（2)透過MTAP所媒介之 回收途徑。反之，缺少ΜΤΑΡ之細胞中，AMP之產生主要依 賴重新合成途徑，而MTAP回收途徑則關閉。因此，當重新 合成途徑亦關閉時，則期望可選擇性殺死缺少MTAP之細胞 。某些癌症之缺少MTAP之性質因此即可提供一個機會，藉 由防止MTAP-感受態細胞中毒來設計可選擇性殺死缺少 MTAP之細胞之療法。 已有數項試驗嘗試藉由抑制重新合成途徑，選擇性針對 哺乳動物中缺少MTAP之目標癌症。其中一種嘗試為使用抑 制劑L-亞硝基羥基丙胺酸，係得自丙胺菌素鏈黴菌 (Streptomycesalanosinicus)之抗生素之L-異構物，其藉由抑 制腺甞酸基琥珀酸合成酶來阻斷IMP轉化成AMP。參見例如 ·· Batova等人之 “Use of Alanosine as a Methylthioadenosine Phosphorylase-Selective Therapy for T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia In vitro”，Cancer Research 59: 1492-1497 (1999); WO 99/20791 ;美國專利案No. 5,840,505。L-亞硝基羥基丙 胺酸在早期之抗腫瘤臨床試驗中失敗。然而彼等早期試驗 並無法判別或區分罹患缺少MTAP之癌症患者。進一步臨床 試驗亦已開始。 AMP重新合成作用之其他抑制劑已經發現且探討其抗腫 瘤活性。採用IMP合成作用抑制劑二去氮雜四氫葉酸鹽 (“洛美其索（lometrexol)”或“DDATHF”）探討阻斷AMP重新 合成途徑之早期步驟，亦即阻斷IMP重新合成。初期臨床試 驗中，投與洛美其索會造成嚴重之遲滯毒性。Alati等人主 200304380 張洛美其索之嚴重毒性來自人體血漿中葉酸鹽濃度低於小 白鼠所致（Alati 等人之 “Augmentation of the Therapeutic Activity of Lometrexol [6-R] t510-Dideazatetrahydrofolate] by Oral Folic Acid，，，Cancer Res· 56: 2331_2335 (1996))。類似之 毒性問題亦出現在LY309887，其係一種甚至比洛美其索更 強效之IMP合成抑制劑。Worzalla等人之“Antitumor Therapeutic Index of LY309887 is Improved With Increased Folic Acid Supplementation in Mice Maintained on a Folate Deficient Diet，，，Proc. AACR 37: 0197-016X (1996)。 洛美其索與LY309887主要依賴膜葉酸鹽結合性蛋白質 (“mFBP”)運送至細胞中。如上述，投與洛美其索與LY309887 會在哺乳動物（例如：人類，相較於小白鼠）體内造成顯著高 毒性，而循環之葉酸鹽濃度則相對較低。因此認為此等抑 制劑所不期望之毒性（特別當哺乳動物之循環葉酸鹽濃度 較低時）係與其對mFBP之高親和性有關，當缺少葉酸鹽時 ，mFBP 即不受調節。參見 Antony之“The Biological Chemistry of Folate Receptors，” Blood，79: 2807-2820 (1992);亦參見 Pizzorno等人之 “5，10-Dideazatetrahydrofolic Acid (DDATHF) Transport in CCRF-CEM and MA104 Cell Lines，” J· Biol. Chemistry，268: 1017-1023 (1993)。此等毒性問題導致後來 GARFT之抑制劑臨床試驗需補充葉酸鹽。 由於MTAP為產生AMP之回收途徑（且因此產生ATP)，因 此共同投與MTAP之受質，例如：甲硫腺甞（“MTA”）與AMP 重新合成之抑制劑，應可克服抑制劑出現在MTAP-感受態 200304380
(亦即健康）細胞但不出現在缺少MTAP (亦即癌症）細胞中之 毒性。藉由ΜΤΑ與L-亞硝基羥基丙胺酸之組合可深入探討 此理論。參見 Batova 等人之 “Use of Alanosine as a Methylthioadenosine Phosphorylase-Selective Therapy for T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia In vitro”，Cancer Research 59: 1492-1497 (1999); Batova 等人之 “Frequent Deletion in the Methylthioadenosine Phosphorylase Gene in T-cell Acute Lymphoblastic Leukemia: Strategies for Enzyme-Targeted Therapy/5 Blood, 88: 3083-3090 (1996); WO 99/20791 ;美國專利案No. 5,840,505 ;歐洲專利公告案No. 0974362A1。如上述，當IMP重新合成後，L-亞硝基羥基丙 胺酸會抑制IMP轉化成AMP。
上述L-亞硝基羥基丙胺酸之研究主張阻斷AMP重新合成 途徑之早期步驟，亦即阻斷IMP之重新合成，將不僅抑制 AMP合成，而且抑制鳥嘌呤核甞酸合成，因此會阻止MTA選 擇性救回MTAP-感受態細胞。Hori等人之“Methylthioadenosine Phosphorylase cDNA Transfection Alters Sensitivity to Depletion of Purine and Methionine in A549 Lung Cancer Cells”，Cancer Research，56，5656 (1996) 〇 此假說係來自在 活體外同時投與MTA與洛美其索或胺甲蝶呤之實驗。洛美 其索為一種甘胺醯胺核糖核甞酸甲醯基轉化酶（“GARFT”） 之抑制劑，而胺甲蝶呤原來為二氫葉酸鹽還原酶抑制劑， 亦可抑制GARFT與胺基咪唑羧醯亞胺核糖核甞酸甲醯基轉 化酶（“AICARFT”）。洛美其索與胺甲蝶玲兩種藥物與MTA 200304380 同時投藥時，在醫療所需之抑制劑濃度下不會完全恢復細 胞生長。參見 Hori等人之 Cancer Res·，56，5656 (1996)。 現在需要一種可治療因缺少MTAP而造成影響之細胞增 生性病變之有效組合療法。 【發明内容】 本發明係有關選擇性殺死哺乳動物體内缺少甲硫腺苷磷 酸化酶（MTAP)之細胞之方法，其係投與醫療有效量之甘胺 醯胺核糖核苷酸甲醯基轉化酶（“GARFT”）與/或胺基咪唑羧 醯亞胺核糖核苷酸甲醯基轉化酶（“AICARFT”）之抑制劑。及 投與抗毒性劑，其用量應可有效提高抑制劑之最高耐受劑 量，其中抗毒性劑係在投與抑制劑期間或之後投與。較佳 為該抗毒性劑係選自：MTAP受質及MTAP受質之前藥、或 其組合組成之群中。 一項具體實施例中，抗毒性劑為如式X之MTA之類似物， 其中R41、R42、R43、R44與R45如下文中之定義：
或者，抗毒性劑為如式XI之MTA之前藥，其中Rm與Rn如 下文中之定義：
-10 - 200304380 本發明較佳具體實施例中，組合療法包括GARFT與/或 AICARFT中一或多種抑制劑，其係包含麩胺酸部份之5-硫 雜或5 -締基喊淀酮基化合物之衍生物。 此具體實施例中，包含麩胺酸部份之5-硫雜或5-硒基嘧啶 酮基化合物如式I，其中A、Z、Ri、R2、與R3如下文中之定 義：
較佳者，組合療法包括如式VII之GARFT抑制劑，及其互 變異構物與立體異構物，其中L、Μ、T、R2〇與R21如下文中 定義： 〇〇2^20
(VII). 最佳者，GARFT抑制劑為如下化學結構式之化合物··
200304380 肌嘗酸重新合成作用之抑制劑為 且較佳為*式IV定羲之含麩胺酸 ，其中n、D、M、Ar、n , 另一項具體實施例中， GARFT之專一性抑制劑， 或酉旨部份之GARFT抑制劑 如下文中定義： h2n
20 (IV). 或者，本發明包括使用AICARFT之專—性抑制劑之组合 療法’較佳為如式νπι所定義之含錢胺酸或S旨部份I AICARFT#^#] , W>Rl>R2^R3^T^t^^ .
(VIII). 此外，下文中亦說明其他AICARFT之專一性抑制劑。 此組合療法係投藥給有此需要之哺乳動物。較佳者，該 哺乳動物為人類，該抗毒性劑係非經腸式或經口投與哺乳 動物。另-項較佳具體實施例中，抗毒性劑係在各抑制劑 Μ里投藥期間或之後投與。另一項具體實施例中，抗毒性 劑係採用多重大丸劑或幫浦劑量或緩釋調配物投與哺乳動 物。最佳具體實施例中，採用該方法治療選自下列各物組 成之群中之細胞增生性病變：肺癌、白血病、神經膠質瘤 、膀胱上皮瘤癌、結腸癌、乳癌、攝護腺癌、胰癌、皮膚 -12- 200304380 癌、頭與頸部癌。 Δ二戈者，本發明係有關-種組合療法，其中GARFT與/或 性葉㈣蛋白質（mFBP)沒有高 钗佳者，该抑制劑主要藉由還原之葉酸鹽 二蛋白質運运至細胞中。另_項較佳具體實施例中，抑 制剑為如式vii〈garft之抑制劑。更佳者，抑制劑為如下 化學結構式之化合物：
【實施方式】 【實施方式與其較佳具體實施例】 圖1中說明甲硫腺甞磷酸化酶（“MTAP”）與哺乳動物之健 康細胞代謝作用中腺嘌呤之回收作用之關係。如圖中所示 ’產生腺嘌呤核甞酸（“AMP”）之途徑有二：經由曱硫腺嘗 (“MTA”）與其前體回收腺嘌呤，及經由產生肌苷酸（“IMp”) 而重新合成AMP。理論上，腫瘤細胞由於極需要合成核酸 並在回收途徑酵素中進行基因改變，因此經由重新合成途 徑製造嘌呤。特定言之，缺少MTAP之細胞無法裂BMTA形 成腺嘌呤，因此無法經由MTAP所媒介之腺嘌呤回收作用產 生AMP。缺少MTAP之細胞特別依賴嘌呤之重新合成作用， 因而重新合成作用特別容易瓦解。因此，缺少MTAP之細胞 依賴經由肌智:酸（“IMP”)之產生來產生AMP。圖2中，IMP則 -13- 200304380 由回收6-羥基嘌呤或重新合成IMP兩條途徑之一產生。單由 回收6-羥基嘌呤並不足以充分提供IMP。 本文所使用“IMP之重新合成作用”指由5-磷酸核糖-1-焦 磷酸（“PRPP”）之起點產生IMP之過程，如圖2所示。該起點 為由PRPP經由麩醯胺PRPP醯胺基轉化酶形成5’_磷酸-0-〇-核糖胺（步騾1)，然後經GAR合成酶轉化成甘胺醯胺核糖核 苷酸（“GAR”)（步驟2)。GAR隨後再經由GAR甲醯基轉化酶 (“GARFT”）甲醯化，形成N-甲醯基甘胺醯胺核糖核甞酸 (“FGAR”)（步驟3)。繼續使用FGAR醯胺基轉化酶合成N·甲 醯基甘胺脒核糖核苷酸（“FGAM”)（步騾4)，然後連續經由 AIR合成酶形成5-胺基咪唑羧醯亞胺核糖核苷酸（“AIR”)（步 驟5)，經AIR羧化酶形成5-胺基-4-羧基胺基咪唑核糖核苷酸 (步騾6)，經SAICAR合成酶形成N-琥珀醯-5-胺基咪唑-4-羧 醯胺核糖核苷酸（“SAICAR”)（步驟7)，經腺苷酸琥珀酸裂解 酶（亦稱為SAICAR裂解酶）形成5-胺基咪唑-4-羧醯胺核糖核 苷酸（“AICAR”)(步驟8)，及經AICAR轉甲醯基酶（“AICARFT”) 形成N-甲醯基胺基咪唑-4-羧醯胺核糖核苷酸（“FAICAR”)(步 驟9)。最後，由FAICAR之脫水與封環作用（步驟10)產生IMP ，其繼續形成AMP或鳥嘌呤核甞單磷酸（“GMP”）。因此細胞 中IMP濃度下降會引起GMP途徑與AMP途徑中庫存量下降。 I. IMP重新合成作用之抑制劑 本文所使用之“抑制劑”一詞在多種不同文法型式上（例 如：“抑制”、“抑制作用”、“抑制性”等等）包括可瓦解與/或 消除涉及目標產物之合成作用之目標酵素活性之製劑，典 200304380 型指分子或化合物。例如：“IMp重新合成作用之抑制劑，， 包括可瓦解與/或消除ΪΜΡ重新合成作用中至少一種目標酵 素活性之製劑，如下文中圖2所示。IMP重新合成作用之抑 制劑可具有多重酵素性目標。當抑制劑具有多重酵素性目 標時，該抑制劑最好主要透過抑制IMP重新合成途徑上一個 或多個目標進行作用。特定言之，本發明抑制劑較佳為抑 制酵素甘胺醯胺核糖核苷酸甲醯基轉化酶（“GaRFT，，）與/或· 胺基咪唑羧醯亞胺核糖核铝酸甲醯基轉化酶（“aicarft，，> 。本發明抑制劑亦包括對IMP重新合成途徑上唯__個目標 酵素具有相對專一性或選擇性之專一性抑制劑，例如： GARFT之專一性抑制劑。 在一項具體實施例中，IMP重新合成作用之抑制劑包括 GARFT、AICARFT或二者之抑制劑，其係含麩胺酸部份基 團之5-硫雜或5-涵基嘧淀酮基化合物之衍生物。作為garft 與/或AICARFT抑制劑之5-硫雜或5-晒基喃淀酮基化合物、 其中間物與其製造方法揭示於美國專利案N〇s· 5,739，141 ; 6,207,670 ; 5,945,427與5,726,312，其揭示内容已以引用之 方式併入本文中。 另一項具體實施例中，IMP重新合成作用之抑制劑為式z 化合物：
(I) -15- 200304380 其中： A代表硫或石西； z代表：a)非環狀間隔基，其利用1至10個原子分隔A與醯 胺基之幾基態碳，該等原子分別獨立選自：碳、氧、硫、 氮Λ粦該間隔基為未取代或經一或多個合適取代基取代 b)晨)元基、雜環燒基、芳基或雜芳基二價基團，該二價 基團為未取代或經一個或多個合適取代基取代；c)至少一 · 個孩非環狀間隔基與至少一該二價基團之組合，其中當該 非裱狀間隔基直接鍵結A時，該非環狀間隔基利用丨至約1〇 個原子分隔A與其中一個二價基團，此外，當該非環狀間隔 基直接鍵結醯胺基之羰基態碳時，該非環狀間隔基利用1至 約10個原子分隔醯胺基之羰基態碳與其中一個二價基團； 1與汉2獨立代表氫、匕至^烷基或一容易水解之基團； 及 R3代表氫或(^至(：6烷基或環烷基，其係未取代或經一或 多個闺基、羥基或胺基取代。 式I之一項具體實施例中，部份Z*Q_X_Ar代表，其中： Q代表代表c^c：5缔基或C2 -c5伸烯基或伸炔基，其係 未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代：c^至 C6烷基、C2至C6缔基、（^至(：6烷氧基、（^至(：6烷氧基（Ci 至C6)fe基、C2至c0炔基、醯基、鹵基、胺基、羥基、硝 基、氫硫基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基環； X代表亞甲基、單環狀環烷基、雜環烷基、芳基或雜 芳基環、硫、氧或胺基，其係未取代或經一或多個獨立 -16- 200304380 選自下列之取代基取代··匕至(：6烷基、〇2至(：6埽基、Q 至C6坑乳基、Cl至氧基（Cl至C6)燒基、C2至C6決基 、醯基、_基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷基、 雜環烷基、芳基或雜芳基環；及
Ar代表單環狀或雙環狀環烷基、雜環烷基、芳基或雜 芳基環，其中Ar可以與X之單環狀環烷基、雜環烷基、 芳基或雜芳基環稠合，該Ar係未取代或經一或多個獨立 選自下列之取代基取代：6至(：6烷基、<：2至(：6烯基、Q 至C6燒氧基、（^至（：6烷氧基（(^至仏）烷基、C2至C6炔基 、醯基、_基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷基、 雜環烷基、芳基或雜芳基環。 ”燒基”一詞指鏈中含有1至約12個碳原子，較佳為1至約6 個碳原子之直鏈或分支鏈、飽和或部份不飽和烷基。烷基 貫例包括··甲基（Me，其亦可在結構上以/表示）、乙基（Et) 、正丙基、異丙基、丁基、異丁基、第二丁基、第三丁基 (tBu)、戊基、異戊基、第三戊基、己基、異己基等等。 ”雜燒基’’一詞指含有2至約12個碳原子，較佳為2至約6個 碳原子’其中一個雜原子係選自S、Ο與N之直鏈或分支鏈 、飽和或部份不飽和烷基。雜烷基實例包括··烷基醚、第 二-與第三烷基胺、烷基硫化物等等。 ’’締基’’一詞指含有2至約12個碳原子，較佳為2至約6個碳 原子之直鏈或分支鏈烯基。晞基實例包括··丙希基、丁 -2-烯基、丁_3_晞基、2_甲基丙_2_晞基、己_2_晞基、乙晞基 、戊晞基等等。 -17- 200304380 "块基"一詞指含有2至約12個碳原子，較佳為2至約6個碳 原子之直鏈或分支鏈炔基。炔基實例包括：丙_2_炔基、丁 -2-块基、丁-3-块基、2_甲基丁 _2·块基、己_2_块基、乙块基 、丙玦基、戊決基等等。 ”芳基”㈤-詞指每個環含有3至約12個環原子，較佳為3 至約8個環原子之單環狀或稠合或螺形多環狀芳香系碳環 (環結構中之環原子均為碳）。芳基實例包括下列部份：
等等 “雜芳基”(雜Ar)-詞指每個環含有3至約⑵固環原子，較 佳為3至約8個環原子之單環狀或稠合或螺形多環狀芳香系 碳環（環結構中之環原子選自碳原子與氮、氧與硫雜原子、 。雜芳基實例包括下列部份： -18 - 200304380
等 等
Ν Ν Ν.、
Ν ΖΓ Ν ?哀烷基”一同指每個環含有3至12個環原子，較佳為^至 、勺8個環原子之飽和或邵份飽和、單環狀或稠合或螺形多環 狀碳環。環烷基實例包括下列部份：
瓜 π 土,00 CO
[> .0,0
〇成，CO 00,〇〇
,00Ο Α〇
等等 ‘‘雜裱烷基”一詞指每個環含有3至約12個選自碳原子及 、〇與S中雜原子之環原子，較佳為3至約8個環原子之單 狀或稠合或螺形多環狀，飽和或部份飽和之環結構。 烷基實例包括· · 200304380 〇
〇
〇
〇 〇
_素’’-言司*V » ^ ^ V '表氣、氟、溴或碘。“ _ S，，一詞代表氯基 =基溴基或碘基。“胺基，，指-NH2基團。“氫硫基，，指_SH 基團。“醯基，，扣、 土才曰如式 _C(0)H、4(0)0Η、-C(0)Rt、_C(0)0Rt 之任何讀^酸、 备、酯、酮，其中Rt為任何烷基、晞基、炔 土 雜烷基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基。醯基實 例包括(但不限於)：甲越、苯甲越、二甲基酮、㈣、二酮 過氧化物、6酸、苯甲酸、乙酸乙酿、過氧酸、酸奸等 等0 ‘‘燒氧基”指-〇Ra基團，其中Ra為烷基。烷氧基實例包括 ••曱氧基、乙氧基與丙氧基。“低碳數烷氧基，，指烷氧基中 燒基部份含有1至4個碳原子。 可水解之基團”指可利用相關技藝已知之方式，於酸或 鹼性水性介質中水解成其游離羧酸型之任何基團。可水解 之基團實例為可水解成游離麩胺酸或麩胺酸鹽之麩胺酸二 燒基二醋。較佳之可水解酿基包括Ci-C6燒基、幾燒基、燒 -20- 200304380 芳基與芳烷基。 依據相關技藝所採用之慣例，本文中結構式所採用之 係和錢基®或取代基之連接點至核心或骨架結構之鍵择 。若化學結構式中包括對掌性碳時，除非另有說明特定: 向，否則均包括兩種立體異構型。此外，本發明之專—性 抑制劑可能出現單-立體異構物、消旋物、與/或對映異構 物與/或非對映異構物之混合物。所有此等單—立體異構物 、消旋物及其混合物均包括在本發明範圍内。本文中所示 化學式可能出現互變異構現象。雖然結構式僅出示其中一 種可能Λ互變異構物型，但咸了解，本發明包括所有互變 異構物型。 &取代一列指該指定基團或邵份帶有一或多個取代基 。未取代’’ 一詞指該指定基團未帶有取代基。“取代基，，或“ 合適取代基” 一詞指由習此相關技藝之人士採用如：例行試 驗法認可或選用之任何合適取代基。除非另有說明，否則 合適取代基實例包括：燒基、雜燒基、_燒基、_芳基、 鹵環烷基、自雜環烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳 基、-Ν02、-NH2、-N-ORc、-(CH2)Z-CN，其中 Ζ為 0-4， 卣基、-OH、-0-Ra-0-Rb、-ORb、-CO_Re、-0-C0_Rc、-CO-ORc 、-0-C0-0Rc、-0-C0-0-C0-Re、-0-0Re、酮基（ = 0)、 硫酮基（=S)、_S02-Re、-SO-Rc、_NRdRe、-CO-NRdRe、 -0-C0-NRdRe、-NRc-CO-NRdRe、-NRe-CO-Re、-NRe-C02-0Re 、-CO-NRe-CO-Rd、-〇-S02-Re、-0-S0-Re、-0-S-R。、-S-CO-Rc 、ΚΟ-Οίν -S〇2-CO-ORc、-0-S03、-NRc-SRd、-NRc-SO-Rd •21- 200304380
-NKS-Rd、-〇- 卜Rd、-0-CS-Rc、_0_CS0_Rc -SO-NRdRe、_s_NRdRe、 、-NRe_S02-Rd、-CO-SRc 、-CSO-Rc、-CS02_Rc、-NRc-Cf -NRe-CS-Rd、-SH、-S-Rb及 、-0-CS02_Rc、_S02-NRdRe、 -NRd_CS02_Rd、-NRc-CSO-Rd、 -P〇2_ORc，其中Ra係選自下列各物組成之群中：烷基、雜 烷基、晞基與炔基；Rb係選自下列各物組成之群中··烷基 、雜烷基、鹵烷基、晞基、炔基、鹵基、_c〇_Re、_c〇_〇Re 、_0_C0-0_Rc、-〇_CO-Rc、
_NRc_CO-Rd、-CO-NRdRe、_OH 芳基、雜方基、雜ί哀％基與環燒基；、Rd與Re分別獨 乂選自下列各物組成之群中：氫、經基、鹵基、烷基、雜 烷基、_ 烷基、烯基、炔基、-C〇Rf、-C〇〇Rf、_〇 c〇 〇 Rf 、-〇-CO-Rf、-OH、芳基、雜芳基、環烷基與雜環烷基，或 Rd與Re環化形成雜芳基或雜環烷基；且Rf係選自下列各物 組成之群中·氣、燒基與雜燒基；且上述取代基中所出現 之任何烷基、雜烷基、烯基、芳基、環烷基、雜環烷基或 雜芳基部份可再經一或多個其他獨立選自下列各物組成之 群中之取代基取代：-N02、-NH2、-(CH2)Z_CN，其中Z為0-4 ’鹵基、齒烷基、卣芳基、-OH、酮基（=0)、_N-OH、NRc-ORc 、-NRdRe、-CO-NRdRe、-CO-ORe、-CO-Re、-NRe-CO-NRdRe 、-C-CO-ORe、-NRc-CO-Rd、-0-C0-0-Rc、-0-C0-NRdRe、 -SH、-〇-Rb、-〇-Ra-〇-Rb、-S_Rb、未取代之烷基、未取代 之芳基、未取代之環烷基、未取代之雜環烷基及未取代之 雜芳基，其中Ra、Rb、Re、1^與Re如上述定義。 式I之另一項具體實施例中，抑制劑為如式II之化合物： -22- 200304380 ο η2ν
α—(基圈)一傅)_ Ο CO2R2 C〇2R*j (II) 其中： A代表硫或硒； ， (基團）代表非環狀間隔基，其利用1至5個原子分隔A與 (銥）’孩等原子獨立選自··碳、氧、硫、氮與磷，該間隔基籲 為未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代：C1至 C6坡基、C2至C6埽基、仏至匕烷氧基、匕至匕烷氧基（(：1至 C6)燒基、C2至C6炔基、醯基、鹵基、胺基、羥基、硝基、 氣硫基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基環； (環）代表環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基環，其係未取 代或經一或多個選自下列之取代基取代：Ci至c6烷基、c2 至C6晞基、（^至^烷氧基、（^至^烷氧基（(^至仏）烷基、C2 至C6炔基、醯基、鹵基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環 · 烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基環； 1^與112獨立代表··氫、（^至(：6烷基或一容易水解之基團 - ;及 R3代表氫或(^至（：6烷基或環烷基，其係未取代或經一或 多個_基、羥基或胺基取代。 較佳之式II化合物如下化學結構式： -23- 200304380
(化合物1 : Ν-[5·(2[(2,6-二胺基“4(3H)_氧代嘧啶-5-基）硫]乙 基）嘧吩並-2_基]-L-麩胺酸）；及
(化合物2 : N-[5-(3-[(2,6-二胺基-4(3H)·氧代嘧啶-5·基）硫] 丙基）-4·甲基-嘧吩並-2-基]-L-麩胺酸）。 式I之另一項具體實施例中，抑制劑為式III化合物：
其中： η為0至5之整數； Α代表硫或石西； X代表二價基團亞甲基、單環狀環烷基、雜環烷基、芳基 或雜芳基環、氧、硫或胺基；
Ar代表芳香系二價基團，其中A可與該X環稠合形成雙環 «24- 200304380 系；及
Ri與R2獨立代表氫或Cl_c6烷基。 另-項具體實施例中，；[MP重新合成作用抑制劑包括含有 麩胺酸或酯部份基團iGARFT抑制劑。含有麩胺酸或酯部 份基團之GARFT抑制劑，其中間物與其製造方法已揭示於 美國專利案 Nos· 5,723，607 ; 5,641，771 ; 5,639,749 ; 5,639,747 ;5,61G，319 ·，5,641，774 ; 5,625，G61 與 5,594，139 ;其揭示内 谷已以引用之方式完全併入本文中。特定言之，含有麩胺 酸或酯部份基團之GARFT抑制劑包括如式1¥化合物：
η代表0至2之整數； D代表硫、π、氧、ΝΗ或硒，但其限制條件為當福〇 時，D不為CH2，且當時，D不為CH2或丽； Μ代表硫、氧或二價基圈Ci_C3燒、晞、Μ〕块或胺 ，其中Μ為未取代或經一或多個合適取代基取代；
Ar代表二價基團環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基環系 ’其係未取代或經-或多個獨立選自下列之取代基取代·· Cl至C6圪基C2至C6烯基、（^至(：6烷氧基、（^至(：6烷氧基（Ci 至C6)烷基、C2至C6炔基、醯基、鹵基、胺基、羥基、硝基 、氫硫基、環烷基、雜環垸基、芳基或雜芳基環；及土 -25- 200304380 R2〇與Rn獨立代表氫或為 形成容易水解之酿基。 一部份可與所附接之co2共同 在式IV之一項具體實施例中 抑制劑為如式V化合物：
〆△「 u .co2R2 H^\ -
N \o2r^ (V) 其中： _ A代表硫或碼； U代表CH2、石危、氧或簡；
Ar代表一價基團環燒基、雜環燒基、芳基或雜芳基環系 、未取代或經_或多個獨立選自下列之取代基取代 :' Μ㈣基、WC6燒氧基、ClK6燒氧基 (CjC6):k基、Cjc6炔基、酿基、商基、胺基、經基、硝 基、氫硫基、環燒基、雜環境基、芳基或雜芳基環；及 3 20/、21獨此代表氫或為_部份可與所附接之c〇2共同 形成容易水解之酯基。 式1V〈另—預具體實施例中，抑制劑為如式VI化合物··
GO2R21
C〇2^20 (VI) -26- 200304380 其中： D代表氧、硫或硒； M，代表硫、氧或二價基團CVC3烷、c2-C3婦、C2-C3玦、 或胺，該M，為未取代或經一個或多個合適取代基取代； Y代表Ο、S或NH ; B代表氫或_基； C代表氫或鹵基或未取代或經烷基取代；及 R2〇與尺”獨立代表氫或為一部份可與所附接之c〇2共同 形成容易水解之酯基。 一種較佳之式VI GARFT抑制劑為如下化學結構式化合
[5,4-1)][1，4]嘍畊-6_基）-(汉)-乙基]_3_甲基_2_ 氧代-4,6,7,8_ 四氫 _3h (化合物3 : 4-[2-(2-胺基_ -L·麩胺酸）。 -嘧啶並 噻吩並基-5_胺基·
如式Vii之CiAKFT寻一性抑制劑： 用抑制劑為
-27- 200304380 其中L代表硫、叫或碼； Μ代表硫、氧或二價基 ，其中Μ為未取代或I 3 70、C2-C3婦、C2-C3炔或胺 T代表CVC6燒基適取代基取代； E代表氫、CVC3燒基、c2_C3^C2-C6炔基；-C(〇)E ’其中 基、或NRR並击 3 土 C2-C3炔基、〇Cl-C3烷氧 丞：¾ JNK10RU，其中r盥 上 膝:a r 〇 ” 11獨乂代表氫、CVC3燒基、C2_C3 烯基、C2-C3炔基；或NRl R 甘丄 3 0 u，其中Rio與Ru分別獨立代表 風广_、C2_C3缔基、C2_c3块基；幾基；硝基；、 〜、中〜為虱、Cl-C6燒基、c2<：6埽基、C2铺基、氛基 ;SOCCVCs)烷基；及 R2〇與R21分別獨立為氫或居一却 L X马 #份可與所附接之co2共 同形成容易水解之酯基。 如式vn之GARFT抑㈣及其互變異構物與立體異構物 對mFBP之結合親和性特別⑯。此等抑制劑之mFBp解離常 數比洛美其索尚至少35倍，揭示於美國專利案N〇s. 5，64 6,141與5，608,082中，其揭示内容已以引用之方式完全 併入本文中。 較佳式VII之GARFT抑制劑為如下化學結構式化合物：
(化合物4 ·· 4-[2·(2-胺基-4-氧代_4,6,7,8_四氫_3H-嘧啶並 [5,4-b][l，4]嘧畊-6-基）-(R)_乙基]-3_甲基_2_嘍吩並基-5-胺基 -28- 200304380
(化合物5:4-[2-(2-胺基-4-氧代-4,6,7,8_四氫-311-嘧啶並 [5,4-b][l，4]嘧畊_6-基）-(S)-乙基]-3_甲基_2-嘧吩並基-5-胺 基麵胺酸），及
(化合物6 ·· N-(5-[2-(2-胺基-4(3H)-氧代-5,6,7,8-四氫吡啶並 [2,3_d]嘧啶-6-基）_(R)-乙基]-4-甲基噻吩並_2_基）-L-麩胺酸）。 對mFBP之結合親和性有限之更佳式νπ之GARFT抑制劑 為如下化學結構式化合物：
(化合物7: N-(5例2_胺基·4(3Η)_氧代_5,6,7,8•四氣峨啶 [2’3♦密#基)·⑻·乙基]_4_甲基4吩並基)心楚胺酸) 另-項具體實施例中，重新合成作用之抑制劑包括: 具有麵胺酸或自旨部份基團之AICARFT專—性抑制劑。具; -29- 200304380 麩胺酸或酯部份基團之AICARFT抑制劑、其中間物及其製 法揭示於美國專利案Nos· 5,739，141 ; 6,207,670 ; 5,945,427 與5,726,312中，其揭示内容已以引用之方式完全併入本文 中。特定言之，具有麩胺酸或酯部份之AICARFT抑制劑包 括如式VIII化合物：
其中： A代表硫或硒； W代表未取代之伸苯基或伸噻吩基二價基團； 1^與尺2獨立代表氫、（^至0：6烷基或其他容易水解之基團 •，及 R3代表氫或Ci-Q烷基或環烷基，其係未取代或經一或多 個鹵素、羥基或胺基取代。 其他適用於本發明之AICARFT抑制劑已揭示於國際公告 案No. WO 13688，其揭示内容已以引用之方式完全併入本 文中。特定言之，其所揭示之AICARFT抑制劑為如式IX化 合物： 〇
-30- 200304380 其中： R3〇代表氫或CN ; R31代表苯基或嘧吩基，其係未取代或經苯基、苯氧基、 口塞吩基、四唑基或4-嗎啉基取代；及 R32為經-S02NR33R34或-NR33S02R34取代之苯基，其係未 取代或經(^-(：4烷基、Ci-C4烷氧基或鹵基取代，其中R33gH 或匸广。4烷基，且燒基，其係未取代或經雜燒基 、芳基、雜芳基、啕哚基取代，或為
其中η為1至4之整數，R35為羥基、CrC*烷氧基或利用胺官 能基連接之麩胺酸或麩胺酸酯部份。 適用於本發明方法之較佳AICARFT抑制劑包括如下化學 結構式化合物： 200304380
-32- 200304380
-33- 200304380
-34- 200304380
-35- 200304380 適用於本發明方法之IMP重新合成作用抑制劑包括其任 何醫藥上可接受之鹽、前藥、溶合物或醫藥活性代謝物。 本文所使用“前藥”一詞係指可在生理條件下轉化或經溶劑 分解後轉化成特定化合物之化合物或指此等化合物之醫藥 上可接受之鹽。“活性代謝物，，為某特定化合物或其鹽透過 體内代謝作用產生之醫藥活性產物。化合物之前藥與活性 代謝物可採用相關技藝已知之技術進行例行鑑別。參見例 如：Bertolini 等人之 J. Med· Chem. (1997)，40:2011-2016; Shan等人之 J. Pharm. Sci· (1997)，86 (7):765-767; Bagshawe 之Drug Dev. Res. (1995)，34:220-230; Bodor之 Advances in Drug Res. (1984)，13:224-331; Bundgaard 之 Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); Larsen 之 Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard_Larsen等人編輯，Harwood Academic Publishers， 1991); Dear 等人之 J· Chromatogr. B (2000)，748:281-293; Spraul 等人之 J. Pharmaceutical & Biomedical Analysis (1992)，10 (8):601-605 ;及Prox等人之 Xenobiol· (1992)，3 (2): 103-112。“醫藥上可接受之鹽，，係指保留某特定化合物之 游離酸及鹼之生物有效性且並非生物等方面所不期望者之 鹽。醫藥上可接受之鹽之實例包括硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫 酸氫鹽、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、磷酸鹽、一氫磷酸鹽、 二氫磷酸鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、破 化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲 酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、 -36- 200304380 丙一酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、富馬酸鹽、 馬來馭鹽、丁块_丨，4·二酸鹽、己炔_1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽 氯笨甲酸鹽、曱基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯 甲酸鹽、甲氧苯甲酸鹽、酞酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽 、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、擰檬酸鹽、乳 酸孤杈基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙 磺酸鹽、莕磺酸鹽、莕磺酸鹽及扁桃酸鹽。，，溶合物，， 係才曰走化合物之醫藥上可接受之溶合物型，其仍保留此等 化合物之生物有效性。溶合物實例包括本發明化合物與水 異丙醇、乙醇、甲醇、DMS〇、乙酸乙酯、乙酸或乙醇胺 之組合。 、若化合物、鹽或溶合物為固體時，習此相關技藝之人士 咸了解，本發明適用之抑制劑化合物、鹽及溶合物可能出 現不同結晶型，其均包括在本發明抑制劑及其所指定化學 式之範圍中。根據本發明抑制劑化合物及其醫藥上可接受 <前藥、冑、溶合物或醫藥活性代謝物可製成方便之劑型 如.膠囊、錠劑或注射製劑。亦可使用固態或液態醫藥 上可接受之載劑。固態載劑包括殿粉、乳糖、硫_二水 合物、石膏粉、廉糖、滑石、明膠、洋菜、果膠、金合歡 膠、硬脂酸鎂與硬脂酸。相關技藝已知之液態載劑中特別 包括糖漿、花生油、橄欖油、生理食鹽水溶液及水。 如上述，適用於本發明之耐重新合成作用抑制劑最好可 抑制GARFT與/ilAICARFT’且在ΙΜρ重新合成途徑中，對 GARFT與/或AICARFT之相對親和性高於對其他酵素之親 -37- 200304380 和性。更佳者，適用於本發明之抑制劑係針對GARFT或 AICARFT，其對GARFT或AICARFT之相對親和性較高。 較佳具體實施例中，適用於本發明方法之抑制劑對膜葉 酸鹽結合性蛋白質（“mFBP”）沒有高度親和性，其對mFBP之 解離常數比洛美其索高至少約35倍。對mFBP之解離常數可 採用如下文說明之競爭性結合分析法，使用mFBP測定。因 此，適用於本發明方法之抑制劑主要利用有別於涉及mFBP 之另一種機轉，例如：經由還原之葉酸鹽運輸蛋白質，運 送至細胞中。還原之葉酸鹽運輸蛋白質優於還原之葉酸鹽 ，但會運送許多種葉酸衍生物。 A. IMP重新合成作用抑制劑之抑制常數測定法 IMP重新合成作用抑制劑之抑制常數測定法可依美國專 利案No. 5,646,141或國際公告案No· WO 13688 (其揭示内容 已以引用之方式完全併入本文中）所揭示之分析法分析。特 定言之，抑制作用常數測定法可修改Young等人之 Biochemistry 23 (1984) 3979-3986 或 Black 等人之 Anal. Biochem· 90 (1978) 397-401 (其揭示内容已以引用之方式併 入本文中）之分析法測定。一般而言，反應混合物之設計為 含有人體酵素之催化性功能部位及其受質（亦即GARFT與 GAR，或AICARFT與AICAR)、要測試之抑制劑及任何必要 之受質（亦即N1G-甲醯基-5,8-二去氮雜葉酸鹽）。添加酵素啟 動反應後，於25°C及298 nm下追蹤吸光度上升情形。 抑制作用常數（Ki)可由穩定態之催化速率隨抑制劑與受 質濃度之變化來決定。隨後再分析所觀察到之抑制型態， -38- 200304380 分析其與目標酵素之任何受質（例如：n1g-甲醯基h4葉酸鹽 或其類似物，甲醯基-5,8-二去氮雜葉酸鹽（“FDDF”），為 GARFT與AICARFT抑制劑之受質）之競爭性。然後分別由催 化速率與受質濃度之相關性決定N1G-甲醯基H4葉酸鹽或 FDDF之米契爾常數（Michaelis constant) Km。將Km與Ki兩種 測定值依非線性法代入米契爾公式中，或若適當時，代入 分析競爭性抑制作用之米契爾公式中。然後分析抑制緊密~ 結合作用所得之數據，採用非線性法，將數據代入Morrison 述於Biochem Biophys Acta 185 (1969)，269-286中之緊密結 合作用公式中，決定Ki。 B. 人類膜葉酸鹽結合性蛋白質之解離當數測定法 本發明較佳抑制劑對人類膜葉酸鹽結合性蛋白質（mFBP) 之解離常數（1^)可採用揭示於美國專利案]^〇.5,646，141(其 揭示内容已以引用之方式完全併入本文中）之以培養之KB 細胞（人類鼻咽癌瘤細胞）製成之mFBP，於競爭性結合分析 法中測定。 人類膜葉酸鹽結合性蛋白質可依相關技藝已知之方式， 由KB細胞製得。取KB細胞洗滌，以超音波溶解細胞，離心 ，形成集結之細胞塊。細胞塊再懸浮於酸性緩衝液中 (KH2P04-K0H與2-氫硫基乙醇），再離心一次，以排除内因 性結合之葉酸鹽。離心塊再懸浮，以牛血清白蛋白（BSA) 為標準物，採用Bradford法定量蛋白質含量。 使試驗抑制劑與3H-葉酸競爭結合mFBP，以決定解離常 數。反應混合物之設計一般為在酸性緩衝液中（kh2po4- -39- 200304380 KOH與2-氫硫基乙醇）包含mFBP、3H-葉酸及不同濃度之試 驗抑制劑。該競爭反應典型在25°C下進行。由於結合之3H-葉酸釋出緩慢，因此試驗抑制劑可在添加已結合之3H-葉酸 之前先結合，之後使反應達平衡。所有反應混合物應經硝 基纖維素過滤，以單離出含有已結合之3H-葉酸之細胞膜。 所捕捉之mFBP經洗滌後，以閃爍計數器測定。依上述非線 性化法，將數據代入，測定Ki。以3H-葉酸直接滴定mFBP ，可得到3H-葉酸之mFBP Kd，用於計算競爭者Kd。然後依 非線性化法，將數據代入緊密結合性Kc公式中，使用mFBP Kd計算競爭者Kd。下表1出示採用上述分析法所得數種 GARFT抑制劑之Kd值。 表1· GARFT抑制劑 對 mFBPiKd (nM) 洛美其索 0.019 化合物2 136 化合物3 0.0042 化合物4 1.0 化合物5 0.71 化合物7 290 II. 抗喜性劑 為了降低IMP抑制劑對非癌性MTAP-感受態細胞之毒性 ，由抗毒性劑併用抑制劑，以提供腺嘌呤或AMP。抗毒性 劑包含MTAP受質（例如：甲硫腺苷或“MTA”）、MTA之前體 、MTA前體之類似物、MTAP受質之前藥或其組合。本文所 200304380 使用之“MTAP受質”指MTA或MTA之合成類似物，其可提供 受質供ΜΤΑΡ裂解，以產生腺嘌呤或AMP。ΜΤΑ係由如下化 學結構式代表：
(化合物AA)。 MTA可依據如··揭示於Kikugawa等人之J. Med· Chem. 15, 387 (1972)與 Robins等人之 Can· J· Chem· 69，1468 (1991)之 已知方法製備。另一種合成MTA之方法示於以下實例2(A)。 本文/斤採用“MTA之類似物’’指物理結構上與MTA有關， 可提供裂解位置給MTAP之任何化合物。可製備合成類似物 ，以提供MTAP之裂解受質，進而產生腺嘌呤或AMP。 在一項具體實施例中，本發明之抗毒性劑為如式X之MTA 之類似物：
其中 R41係選自下列組成之群： (a) -Rg，其中Rg代表Ci-C5烷基、C2-C5伸烯基或C2-C5伸炔 基，其係未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代 :CjC6烷氧基、CjC6烷氧基（CjC6)烷基、C2SC6炔基 、酸基、函基、胺基、#i基、硝基、氫硫基、環燒基、雜 200304380 %燒基、芳基或雜芳基； (b) -Rg(Y)RhRi，其中Rg如上述定義，γ代表〇、NH、S或 亞甲基；且仏與&獨立代表（i) Η ; (ii) Cl-C9烷基、或c2-c6 晞基或炔基，其係未取代或經一或多個獨立選自下列之取 代基取代·· C^C6烷氧基；C^C6烷氧基（Cjc6)烷基；c2 至C6炔基；醯基；鹵基；胺基；羥基；硝基；氫硫基卜NCOORo ;-CONH2 ; C(0)N(R〇)2 ; C(0)R。或 C(0)〇R。，其中 R。係選自 下列組成之群：Η、CrG烷基、（：2-〇：6雜環烷基、環烷基、 雜芳基、芳基與胺基，其係未取代或經下列取代：（^_(:6烷 基、至6-貝雜燒基、雜環奴基、環燒基、boc·胺燒 基；環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基；或（丨⑴單環狀或雙 環狀環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基，其係未取代或經 一或多個獨立選自下列之取代基取代：心至^烷基、〇2至 C6晞基、c^c6烷氧基、c^c6烷氧基（Cjc6)烷基、c2 至C6決基、醯基、鹵基、胺基、經基、硝基、氫硫基、環 烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基、-C00R。、_NC0R。（其中R。 如上述定義）、2至6員雜烷基、（^至(：6烷基-環烷基、（^至（：6 fe基-雜環燒基、（^至(：6烷基-芳基或Clsc6烷基-芳基； (e) C(0)NRjRk，其中心與心獨立代表⑴H;或Cl·。 燒基、胺基、CVC6齒燒基、crC6胺燒基、CVC6 boc-胺烷 基、<^-(：6環燒基、c2_C6烯基、c2-C6#晞基、（：2-(：6伸炔基 ，其中Rj與Rk可視需要與其所附接之氮共同結合形成含2 至5個碳原子之雜環烷基或雜芳基環，其中c(〇)NRjRk基團 係未取代或再經一或多個獨立選自下列之取代基取代·· -42- 200304380 -C(0)R。、-C(0)0R。（其中R。如上述定義）、匕至^烷基、q 至C6烯基、（^至匕烷氧基、（^至(：6烷氧基（(^至匕)烷基、c2 至C0炔基、醯基、鹵基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環 说基、雜壤坑基、芳基或雜芳基；或 (d) C(0)0Rh，其中Rh如上述定義； R42與R44獨立代表Η或OH;且 R43與R45獨立代表Η、ΟΗ、胺基或鹵基； 其中上述任何環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基部份可再 經一或多個獨立選自下列組成之群中之其他取代基取代： 硝基、胺基、_(CH2)Z-CN (其中ζ為〇·4)、鹵基、鹵烷基、鹵 芳基、羥基、酮基、C^C6烷基、CdC6晞基、C2至(：6块 基、雜燒基、未取代之環烷基、未取代之雜環烷基、未取 代之芳基或未取代之雜芳基； 及其鹽或溶合物。 另一項具體實施例中，本發明抗毒性劑為如式XII之MTA 之類似物··
其中R46代表（i) Η ; (ii) CVC9烷基或c2-c6烯基或炔基，其 係未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代·· q至 C6燒氧基；CdC6烷氧基（c^C6)烷基；C2至C6炔基；醯基 ;自基；胺基；羥基；硝基；氫硫基；環烷基、雜環烷基 -43- 200304380 、芳基或雜芳基；或（iii)單環狀或雙環狀環烷基、雜環烷基 、芳基或雜芳基，其係未取代或經一或多個獨立選自下列 之取代基取代：（^至(：6烷基、c2至c6烯基、（^至^烷氧基 、（^至(：6烷氧基（(^至(：6)烷基、c2至c6炔基、醯基、鹵基、 胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷基、雜環烷基、芳基或 雜芳基； 且其中R41、R42、R43、尺44與R45如上述定義。 MTA類似物可依文獻上之方法製備。腺苷之5,-硫代類似 物可由5’ -亂-5、去氧腺嘗製備（Kikugawa等人之几1^(1· Chem. 15，387 (1972)與 M· J. Robins 等人之 Can. J· Chem. 69, 1468 (1991))’ 包括 5、去氧 5’-甲硫腺嘗（Kikugawa等人）、5’-去氧5’-乙硫腺嘗（Kikugawa等人）、5’·去氧5’ -苯硫腺嘗 (Kikugawa等人與M· J· Robins等人）、5，_去氧5，-羥基乙硫腺 苷（Kikugawa等人）、5’-異丁硫基5，·去氧腺苷（Craig與Moffatt 之 Nucleosides Nucleotides 5, 399 (1986))、3·腺苷 _5’_基硫烷 基丙酸（Hildesheim 等人之 Biochimie (1972)，54，431)、S-第三丁基-5，-硫 _腺苷（Kuhn等人之 Chem. Ber. (1965)，98, 1699)、S-丁基-5’·硫腺苷（Hildesheim等人）、S-(2-胺基-乙 基）-5’-硫腺苷（Hildesheim等人）、S_吡啶·2·基-5’-硫腺誓 (Nakagawa等人之Tetrahedron Letter (1975)，17，1409，另一 種合成法）、S-苯甲基-5’-硫腺站（Kikugawa等人）、S-苯乙基 -5’-硫腺嘗（Anderson 等人之 J· Med. Chem. (1981)，24, 1271.)、S-甲基丁基-5、硫腺苷（Vedel 之 Μ· Biochem. Biophysical Res. Comm· (1981) 99(4)，1316-25)，MTA之其他 200304380 較佳5’腺苷類似物亦可經由文獻中之方法製備，包括5，-環 己胺基-5*-去氧腺菩（Murayama，A·等人之J· 〇rg. Chem· (1971)，36，3029)、5’_嗎淋-4-基-5·-去氧腺替（Vuilhorgne，Μ· 等人之 Hetercycles (1978)，11，495·)、5’-二甲基胺基 _5去 氧腺茫（Morr，M.等人之 J· Chem· Res. Miniprint (1981)，4, 1153.)、05’-甲基-腺苷（8111油，0：.〇.等人之1.]^(1.〇16111· (1995)，38(12)，2259·)、Ο5’-苯甲基-腺苷（Chan，L.等人之 Tetrahedron (1990)，46(1)，151.)及 1·(6·胺基-嘌呤-9-基）-(β-D-核糖-1，5,6·三去氧·吱喃庚糖駿酸乙酯（Montgomery等 人之 J· Heterocycl· Chem· (1974)，11，211·)。5’_去氧腺芬可 自Sigma-Aldrich公司取得商品，且可依Robins等人（1991)所 揭示之方法製備。 腺苷-5’-羧醯胺衍生物可由2’，3’-〇-亞異丙基腺苷-5’-羧 酸（Harmon 等人之 Chem· Ind.(倫敦）1141 (1969); Harper 與 Hampton 之 J. Org. Chem. 35，1688 (1970); Singh 之
Tetrahedron Lett. 33，2307 (1992))，採用 S.Wnuk於J. Med. Chem· 39, 4162 (1996)中說明之變化方法製備：
此外，腺苷-5’-羧酸鈉鹽（Prasad等人之J. Med. Chem. 19, 1180 (1976))可由腺荅-5’·羧酸（R· E. Hannon 等人之 Chem· Ind·(倫敦）1141 (1969); Harper 與 Hampton iJ.Org.Chem· 35，1688 (1970); Singh之Tetrahedron Lett· 33，2307 (1992)) -45- 200304380 與NaOH製備：
式X之其他MTA類似物為如下化學結構式化合物：
。後四種化合物可採用文獻中之方法 製備（Montgomery 等人之 J· Med. Chem. 17，1197 (1974); Gavagnin 與 Sodano 之 Nucleosides & Nucleotides 8，1319 (1989); Allart 等人之Nucleosides & Nucleotides 18，857 (1999)) 0 較佳抗毒性劑為其Km低於MTA之150倍（330 μΜ)之MTAP 受質或可產生此等MTAP受質之前藥。更佳抗毒性劑為其 Km低於MTA之50倍（110 μΜ)之MTAP受質或其前藥。 其他較佳抗毒性劑包括其Kcat/Km比例高於0.05 s+pM-1 -46- 200304380 之MTAP受質或其前藥。更佳抗毒性劑為其Kcat/Km比例高 於0.01 s + μΜ·1之MTAP受質或其前藥。
下列實例2(B)、2(D)、2(E)、2(F)與2(G)提供合成MTAP 受質之反應圖。 健康細胞中，MTA之天然前體會受到MTAP之作用而轉化 成MTA。本文所採用之“前體”指該化合物可經由活體内一 種或多種生化反應形成目標化合物。因此，“MTA之前體” 指於活體内形成MTA時出現之中間物。例如：MTA之前體 包括S-腺苷甲硫胺酸（“SAMe”）或去羧基化S-腺苷甲硫胺酸 (“dcSAMe”或“dSAM”）。SAMe與dcSAMe分別由下列化合物 BB與CC代表： h2n 〈2h (化合物BB)
〇 r \ mh2 货 HO OH
h2n (化合物CC) 此外，可製備MTA前體之合成類似物。本文所採用“MTA 前體之類似物”指該化合物之物理性結構與MTA前體，例如 :SAMe或dcSAMe相關，且其於活體内作為形成MTAP受質 之中間物。 MTAP受質之前藥亦適用於本發明中作為抗毒性劑。前藥 -47- 200304380 之設計可改善MTAP受質之生理化學性或醫藥特性。例如： ΜΤΑΡ受質之前藥可增加官能基，以提高其溶解性與/或生 體可用率。比ΜΤΑ更容易溶解之ΜΤΑΡ受質之前藥揭示於例 如：J. Org· Chem. (1994) 49(3): 544-555，其揭示内容已以 引用之方式完全併入本文中。 本發明中，ΜΤΑΡ受質之較佳前藥包括MTA或MTA類似物 之胺甲酸鹽、酯、磷酸鹽及二胺基酸酯。其他前藥可由習 此相關技藝之人士製備。例如：5、去氧5，-甲硫腺苷之2’，3’-二乙酸鹽衍生物（J. R. Sufrin等人之J. Med. Chem. 32，997 (1989))_、5、去氧5’_乙硫腺苷與5’-異丁硫基5’-去氧腺苷可 依J· Org· Chem· 59, 544 (1994)中所說明之方法製備：
亦參見例如：Bertolini等人之J. Med. Chem. (1997)，40:2011-2016; Shan等人之 J· Pharm. Sci. (1997)，86 (7): 765-767; Bagshawe 之 Drug Dev. Res. (1995)，34:220-230; Bodor 之 Advances in Drug Res. (1984)，13:224-331; Bundgaard之 Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); Larsen之 Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen 等人編輯，Harwood Academic Publishers， 1991); Dear等人之 J. Chromatogr. B (2000)，748:281-293; Spraul 等人之 J. Pharmaceutical & Biomedical Analysis (1992)，10 (8):601-605;及Prox 等人之Xenobiol· (1992)，3 -48- 200304380 (2):103-112 。 在一項具體實施例中，本發明抗毒性劑為如式幻之mtap 受質之前藥：
(XI)
其中
Rm與Rn獨互選自下列各物組成之群· H ;其磷酸鹽或納 鹽 ’ c(o)n(r〇)2 ; C(〇)R。；或 c(〇)〇R。，其中 R。係選自下列 組成^群· Η、Cl_C6烷基、C2_C6雜環烷基、環烷基、雜芳 基、方基及，基，其係未取代或經C1-C6烷基、CA雜烷基 =c6ima基、環燒基、…胺燒基取代； 及其鹽與溶合物。
Rm與Rn分別獨立代表·
-49 200304380 MTAP受質之其他前藥可依下列實例2(c)所示合成。 IIL缺少MTAP之細_歡佘法 本發明方法適用於含有缺少MTAp之細胞之哺乳動物，較 佳為含有缺少MTAP基因產物之原發性腫瘤細胞之哺乳動 物。本文所採用“缺少MTAP之細胞，，一詞係指無法產生功能 性MTAP酵素之細胞，該酵素係透過嘌呤合成作用之回收途 徑產生腺嘌呤時所必要者。一般而言，適用於本發明之缺 少MTAP之細胞中，編碼MTAp之所有或部份基因出現同種 接合子刪除，或MTAP蛋白質已去活化。此等細胞可能因包 括基因改變（例如：基因刪除或突變）之細胞變化，或因轉錄 作用瓦解（例如：基因發動子之無聲化），與/或蛋白質去活 化或降解而成為缺少MTAp之細胞。“缺少MTAp之細胞，，亦 包括缺少編碼MTAP之基因之對偶質變異物或同系物之細 胞，或缺少可充分回收嘌呤之適量功能性MTAp蛋白質之細 胞。在哺乳動物體内檢測缺少]^1^1>之細胞之方法及分析法 說明如下。 本發明係有關治療缺之細胞增生性病變。與缺少 MTAP有關之細胞增生性病變實例包括（(但不限於）乳癌、胰 癌、頭與頸部癌、胰癌、結腸癌、攝護腺癌、黑色素瘤或 皮膚癌、急性淋巴母細胞性白血病、神經膠質瘤、骨肉瘤 、非小細胞肺癌與膀胱上皮腫瘤（例如··膀胱癌）。應依臨床 症狀分析癌細胞樣本中缺少MTAp之程度。分析缺少ΜτΑρ 之程度之分析法包括彼等分析基因狀態、轉錄作用及蛋白 質濃度或功能性之方法。美國專利案Ν〇· 5,84〇,5〇5 ;美國專 -50- 200304380 利案No. 5,942,393與國際公告案No. WO 99/20791提供檢測 缺少MTAP之腫瘤細胞之方法，其揭示内容已以引用之方式 完全併入本文中。 人類MTAP基因之聚核苷酸序列已寄存在美國菌種培養 物收集處（American Type Culture Collection，Rockville，MD) ，寄存編號ATCC NM_002451。MTAP基因位於p21區之9號 染色體。已知MTAP同種接合子刪除性亦應與編碼pl6腫瘤 抑制子與干擾素-α之基因之同種接合子刪除性呈相關性。 ρ 16腫瘤抑制子與干擾素-α基因之同種接合子刪除性檢測 法可成為另一種鑑定缺少MTAP之細胞之方法。 下表2出示人類原發性癌樣本中MTAP缺少程度之比例， 包括彼等依據pl6刪除比例所推算之比例。 表2 :人類原發性癌樣本中MTAP缺少程度 非小細胞肺癌 30-45% 骨肉瘤 30-40% 白血病（T -細胞A L L) 30-40% 神經膠質瘤 30-45% 乳癌 0-15% 攝護腺癌 0-20% 胰癌 50% 黑色素瘤 10-20% 膀胱癌 25-40% 頭與頸部癌 〜30% 200304380 為了鑑別缺少MTAP之細胞-增生性病變之患者，可採用 相關技藝已知多種方法。此等方法包括（但不限於）ΜΤΑΡ 基因之同種接合子刪除性之雜化分析法（參見例如： Sambrook，J·，Fritsh，E.F.與 Maniatis，Τ.之 Molecular Cloning: A Laboratory Manual·第二版，Cold Spring Harbor Laboratory， Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)，及 Ausubel等人編輯之 Current Protocols in Molecular Biology，John Wiley & Sons (1992))。例如：可採用南方分 析法（Southern analysis)分析編碼 MTAP 之 DNA 或 cDNA，其 中自細胞或組織樣本中萃取所有DNA，與有標記之探針（亦 即互補之核酸分子）雜化，並檢測該探針。該標記物可為放 射性同位素、螢光化合物、酵素或酵素輔因子。編碼MTAP 之核酸亦可採用習此相關技藝之人士已知之PCR法、凝膠 電泳法、管柱層析法及免疫組織化學法檢測與/或定量。 其他鑑別缺少MTAP之病變患者之方法涉及檢測未轉錄 之聚核苷酸，例如··自細胞或組織樣本中萃取RN A，然後 使所萃取之RNA與針對目標MTAP RNA之有標記專一性探 針（亦即互補之核酸分子）雜化，並檢測該探針（亦即北方墨 點法）。該標記物可為放射性同位素、螢光化合物、酵素或 酵素輔因子。MTAP蛋白質亦可使用抗體篩選法檢測，如： 西方墨點法。另一種鑑別缺少MTAP之病變患者之方法為於 細胞或組織樣本中篩選MTAP酵素活性。 一種分析缺少MTAP之細胞之方法包括分析編碼MTAP之 基因之同種接合子刪除性或分析是否缺少mRN A與/或 -52· 200304380 MTAP蛋白質之方法。參見美國專利案No. 5,942,393，其揭 示内容已以引用之方式完全併入本文中。由於編碼MTAP之 基因之同種接合子刪除性之鑑定法涉及檢測可能存在之任 何低量MTAP，因此可能需要擴增，以提高敏感度。編碼 MTAP之基因檢測法因此涉及於聚合酶連鎖反應（PCR)，如 :錨定（anchor)PCR或RACEPCR，或於黏接連鎖反應（LCR) 中使用探針/引子（參見例如：美國專利案Nos. 4,683，195 ; 4,683,202 ; Landegran等人之（1988) Science 241:1077-1080 •，及 Nakazawa 等人之（1994) Proc· Mail· Acad· Sci. USA 91:360-364,其揭示内容已分別以引用之方式完全併入本文 中）。可能需要使用PCR與/或LCR作為初步擴增法，與用於 檢測MTAP基因之刪除性之任何技術組合。另一種擴增任何 已存在之編碼MTAP之聚核甞酸之擴增法包括自持性序列 複製（Guatelli，JC·等人之（1990) Proc· Natl· Acad· Sci· USA 87:1874-1878)、轉錄擴增系統（Kwoh，D.Y·等人之（1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:1173-1177)、Q-β複製酶 (Lizardi，Ρ·Μ·等人之（1988) Bio_Technology 6:1197)或任何 其他核酸擴增法，然後採用習此相關技藝之人士已知之技 術檢測擴增之分子。 較佳者，缺少MTAP之細胞樣本係得自哺乳動物宿主腫瘤 組織部份之活組織檢體或手術檢體。更佳者，細胞樣本中 不含健康細胞，以免因污染樣本而呈偽陽性。 IV. IMP重新合成作用之抑制劑輿抗喜性劑之投藥法 一旦鑑定出需要治療之哺乳動物具有缺少MTAP之細胞 -53- 200304380 時，即以醫療有效劑量之IMP重新合成作用之抑制劑與可有 效提高此等抑制劑之最高可耐受量之用量之抗毒性劑治療 哺乳動物。本發明範圍内亦可同時投與一種以上之抑制劑 。雖然本發明實例中以嚆齒類個體為例說明（實例4與5)，但 本發明之組合療法最終仍可應用在人類患者。亦可變通採 用下文所說明技術分析其他哺乳動物之毒性。 本發明方法適用於所有哺乳動物，不受循環之葉酸鹽濃 度影響。參見Alati等人之 “Augmentation of the Therapeutic
Activity of Lometrexol [6-R]t，10-Dideazatetrahydrofolate] by Oral Folic Acid，，，Cancer Res· 56: 2331-2335 (1996)，因此本 發明之優點為不需要補充葉酸。 抑制劑與抗毒性劑之組合之醫療效力與毒性可採用標準 臨床前程序及臨床程序，於細胞培養物、實驗動物或人類 患者中測定。化合物之醫療有效劑量包括含有有效量活性 化合物之醫藥單位劑型。 IMP重新合成作用抑制劑之“醫療有效量，，指該用量足以 抑制嘌呤重新合成途徑，並產生有利效果。參照此等標準 ’熟諳腫瘤技藝之人士很容易決定本發明所使用之IMP抑制 劑之醫療有效量。 本發明中，抗毒性劑之投藥劑量可有效降低抑制劑之毒 性。活體外細胞培養物實驗中，由檢測之IC5〇(亦即需要抑 制細胞生長或誘發細胞死亡達50%時所需濃度）提高即可判 斷毒性下降。哺乳動物中，可檢測最高耐受劑提高來判斷 毒性下降。本發明所使用適用於本發明之抗毒性劑之劑量 -54- 200304380 包g至V可有效提尚最高耐受劑量之用量，，之抑制劑。本 文所採用“最高耐受劑量，，意指相對於已認可之臨床前及臨 床標準，認為可耐受之最高劑量。毒性試驗之設計可決定 抑制劑之最高耐受劑量（“mtd，，）。實驗動物研究中，mtd 可採用LD5〇界定或利用其他統計上適用之標準，以例如： 使體重下降不超過2〇%且沒有中毒死亡時之用量來界定（參 見下又中實例4)。臨床實驗中，MTD之決定法為低於三分 之一患者出現劑量限制性毒性時之劑量，其可進一步由適 當臨床標準疋義（例如··第4級血小板減少症或第3級貧血） 。參見國家癌症研究所之癌症療法評估計畫中一般毒性標 準，及 Mani、Sridhar與 Ratain之 Mark J.，New Phase I Trial Methodology，Seminars in Oncology，ν〇ΐ· 24, 253-261 (1997) ，其揭示内容已以引用之方式完全併入本文中。 毒性效應與醫療效應之間之劑量比例稱為醫療指數。醫 療扣數之表示法為最高耐受劑量與最低醫療有效劑量之比 例。本發明中’以可提高醫療指數之組合療法較佳。 當人體使用抑制劑與抗毒性劑時，由細胞培養分析法與 動物試驗得到之數據即可用於調配一系列劑量及投藥計書 。此等抑制劑化合物之劑量所產生之循環血漿濃度最好在 一定範圍内，包括抑制劑之醫療有效量之範園内，但應低 於會造成劑量限制性毒性時之用量。因此，任何抗毒性劑 之劑量所產生之循環血漿濃度最好在包括可使造成劑量限 制性毒性時之抑制劑用量有效提高時之用量範圍内。該劑 量可隨所使用之劑型及所採用之投藥途徑而異。本發明方 -55- 200304380 估算醫療有冷可/制劑化合物中’可先由細胞培養物數據 ‘、"血漿濃度，如下文中實例3所示。此等资料可 用於更準確決定適用於人體之劑量。可採用例如：質碰儀 測疋血漿中濃度。用於哺乳動物宿主之抑制劑或抗毒性劑
之初劑量實例包括每平方公尺體表面積至多敉之用量J 1克較佳’以每平方公尺動物體表面積使用约毫克或以 下更佳。 本發明k供《柷毒性劑係於投與抑制劑期間或之後投藥 ，因此該藥劑可持續至抑制劑之活性期，保持細胞之充分 ，活及生物ff〈活力。抗毒性劑可利用任何合適方法投 藥，包括（但不限於）在投與抑制劑之各劑量期間或之後，利 :f！之大丸藥或幫浦投藥法投藥，或利用緩釋調配 物投藥丨一方面，抗毒性劑之投藥可使該藥劑之藥效與 抑制劑並存-段時間。存在活體内之抑制劑可由習此相關 *之人士使用醫藥動力學指標決定，例如··直接測定血 漿或_中所含之抑制劑。另一方面，抗毒性劑之投藥可 使該藥劑之效力持續至抑制劑活性實質上已停止為止，其 係採用藥效學指標測定，例如··血聚中口票吟核嘗濃度。如 下實例4所7F ’當投與最後—劑抑制劑之後，再投與抗毒性 4天時，可犍间小白鼠體内抑制劑化合物之MTD。實例 3(D)進纟澄實，當柷毒性劑之投藥延長至抑制劑化合物 投藥結束之後時，可最大幅降低細胞培養物樣本之細胞毒 性。 藥劑可依任何臨床 参 本發明之IΜ P抑制劑與抗毒性劑兩種 -56 - 200304380 上可接受之方式分別獨立投藥給有此需要之哺乳動物，例 如··人類患者。臨床上可接受之投藥法包括局部投藥，例 如：呈油膏或乳霜；經口投藥，包括呈漱口水；經直腸投 藥’例如：呈栓劑；非經腸式或經輸液投藥；或經陰道内 鼻内、支氣管内、耳内或眼内輸液連續投藥。本發明藥 劑最好經口或非經腸式投藥。 本發明較佳具體實施例以下文所示實例說明。咸了解， 該等實例並未限制附錄之申請專利範圍所界定之本發明範 圍。貫例全文採用標準縮寫，如：“μ 1”指微升，“hr”指小時 及“mg”指毫克。 實例1 化合物6與7之合成法
[2,3-d]嘧啶-6-基）-(R)-乙基]_4_甲基嘧吩並_2_基）丄_麩胺酸 化合物6
-2-基）-L-麩:胺酸 200304380 實例1 (A) ··化合物6與7之合成途徑 其中一種方法係採用下列製法合成化合物6與7。 步·驟1 : 5-溴-4-甲基噻吩-2-羧酸
此化合物係依據 M. Nemec述於 Collection Czec—. Chem. Commun·，vol· 39 (1974)，3527之方法製備。 步驟2 ·· 6_乙炔基-2-(特戊醯基胺基）_4(3Η)-氧代吡啶並 [2,3-d]嘧啶
此化合物係依據E· C. Taylor與G· S· K. Wong述於J· 〇rg Chem·，vol· 54 (1989), 3618中之方法製備。 步驟3 : Ν-(5-溴-4-甲基喧吩並-2-基）楚胺酸二乙酯
在含5-溴-4-甲基ρ塞吩-2·幾酸（3.32 g，15 mmol)、1-羥基 苯並三唑（2.24 8，16.6 111111〇1)、1^麩胺酸二乙酯鹽酸鹽（3.98 g，16.6 mmol)與二異丙基乙胺（2.9 ml，2.15 g，16.6 mmol) 之二甲基甲醯胺（DMF)(40 ml)攪拌溶液中添加1-(3-二甲胺 基丙基）-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽（3.18 g，16.6 mmol)。所 得溶液於氬蒙氣及周溫下攪拌18小時，倒至鹽水（300 ml) -58- 200304380 中，以水（100 ml)稀釋，以醚（3 X 120 ml)萃取。合併之有機 萃液經水（150 ml)洗滌，以MgS04脫水，及真空濃縮，產生 褐色膠質狀物，經急驟層析法純化。以己烷：EtOAc (2:1) 溶離，產生橙色油狀產物（5.05 g，產率83%)。分析顯示， 產物為N-(5 -溪-4-甲基ρ塞吩並-2-基）麵胺酸二乙酉旨。NMR (CDC13) δ·· 7·22 (1H，S)，6·86 (1H，d，J=7.5 Hz)，4.69 (1H， ddd，J=4.8, 7.5, 9·4 Hz)，4.23 (2H，q，J=7.1 Hz)，4.12 (2H，q， J=7.1 Hz)，2.55-2.39 (2H，m)，2·35-2·22 (1H，m)，2·19 (3H，s)， 2·17-2·04 (1H，m)5 1.29 (3H，t，J=7.1 Hz)，1.23 (3H，t，J=7.1 Hz)。分析（Ci5H2〇N05SBr) C，H，N，S，Br。 步騾4 : N-(5-[(2-[特戊醯基胺基]-4(3H)·氧代吡啶並[2,3-d] 嘧啶-6-基）乙炔基]-4-甲基嘧吩並-2-基）麩胺酸二乙酯：
於氬蒙氣下，在含Ν-(5-溴-4-甲基嘧吩並-2-基）麩胺酸二 乙酯（4·21 g，1〇·4 mmol)之乙腈（55 ml)攪拌溶液中添加雙 (二本基膦）把氟化物（702 mg，1 ·〇 mmol)、破化亞銅（200 mg ，1.1 mmol)、二乙胺（ι·5 ml，1·〇9 g，10·8 mmol)與 6 -乙決 基-2-(特戊醯基胺基）-4(3H)-氧代吡啶並[2,3-d]嘧啶（5.68 g ，21 mmol)。所得懸浮液於回流下加熱6小時。冷卻至室溫 後’粗反應混合物過濾，沉澱以乙腈（5〇 ml)與乙酸乙酿 (EtOAc) (2 X 50 ml)洗務。合併之滤液真空濃縮，產生褐色 樹脂，經急驟層析法純化。以CH2C12: CH3OH (49:1)溶離， -59- 200304380
產生橙色固體產物（4·16 g，產率67%)。分析顯示，產物為 N-(5-[(2-[特戊醯基胺基]_4(3Η)_氧代吡啶並[2,3-d]嘧啶_6_ 基）乙決基]-4-甲基π塞吩並-2-基）魏胺酸二乙酯。NMR (CDC13) δ: 8·95 (1H，d，J=2.2 Ηζ)，8·59 (1H，d，J=2.2 Hz)， 7·33 (1H，s)，7.03 (1H，d，J=7.4 Hz)，4.73 (1H，ddd，J=4.8, 7·4, 9·5 Hz)，4·24 (2H，q，J=7.1 Hz)，4·13 (2H，q，J=7.1 Hz), 2.55-2.41 (2H，m)，2·38 (3H，s)，2.35-2.24 (1H，m)，2.19-2.05 (1H，m)，1.34 (9H，S)，1.30 (3H，t，J=7.1 Hz)，1.24 (3H，t， J=7.1 Hz)。分析（C29H33N507 S.0.75H2O) C，H，N，S。 步驟5 · Ν-(5·[(2-[特戊醯基胺基]_4(3H)_氧代峨淀並[2,3，d] 嘧淀-6-基）乙基]-4-甲基p塞吩並-2-基）麵胺酸二乙酯
取含N-(5_[(2-[特戊醯基胺基]-4(3H)-氧代吡啶並[2,3-d] 嘧啶-6-基）乙基]-4-甲基噻吩並-2-基）越胺酸二乙酯（959 mg ，1.6 111111〇1)與10%?^碳（1.58，150%重量當量）之三氟乙酸 (30 ml)懸浮液於50 psi H2下振盪22小時。粗反應混合物經 CHUCh稀釋，經寅式鹽墊過濾（矽藻土）及真空濃縮。所得殘 質溶於 CH2Cl2(120ml)中，以飽和 NaHCO3(2xl00ml)洗滌 ，經Na2S04脫水及真空濃縮，產生褐色膠質狀物，經急驟 層析法純化，以CH2C12·· CH3OH (49:1)溶離，產生黃色固體 產物（772 mg，產率80%)。分析顯示，產物為n_(5-[(2-[特戊 醯基胺基]-4(3H)-氧代吡啶並[2,3-d]嘧啶-6-基）乙基]-4-甲 200304380 基嘧吩並_2_基）麩胺酸二乙酯。NMR (CDC13) δ: 8.60 (1H，d， J=2.2 Hz)，8,49 (1H，寬），8·32 (1H，d，J=2.2 Hz)，7·22 (1H， s)，6·78 (1H，d，J=7.5 Hz)，4.72 (1H，ddd，J=4.8, 7.5, 9·5 Hz)， 4.23 (2H，q，J=7.1 Hz)，4.11 (2H，q，J=7.1 Hz)，3.12-3.00 (4H， m)，2.52-2.41 (2H，m)，2·37·2·22 (1H，m)，2.16-2.04 (1H，m)， 2.02 (3H，s)，1.33 (9H，s)，1.29 (3H，t，J=7.1 Hz)，1·23 (3H，t， J=7.1 Hz)。分析（C29H37N507 S.0.5H2O) C，H，N，S。 步騾6: Ν·(5-[(2-[特戊醯基胺基]氧代-5,6,7,8-四氫吡 啶並[2,3-d]嘧啶-6-基乙基]-4-甲基嘧吩並-2-基）麩胺酸二 乙酯
取含N-(5-[(2-[特戊醯基胺基]-4(3H)-氧代吡啶並[2,3-d] 嘧啶-6-基）乙基]-4-甲基嘧吩並-2-基）麩胺酸二乙酯（32·2 g ，59 mmol)、10% Pt/碳（25.12 g，78%重量當量）、10% Pd/ 碳（10.05 g，30%重量當量）與pt〇2 (ίο g，3〇%重量當量）之 三氟乙酸（170 ml)懸浮液於900 psi Η:下振盪330小時。粗 反應混合物經CH2C1：2稀釋’經寅式鹽墊過滤及真空濃縮。 所得殘質溶於CH2C12 (600 ml)中，以飽和NaHC〇3 (2 x 4〇〇 ml) 洗務’經Na2S〇4脫水’真空濃縮’產生褐色樹脂，經急驟 層析法純化。以CHAl2·· CH3〇H(24:l)溶離，先產生未反應 之受質（1〇·33 g’產率32%)，然後產生黃色固體產物，為非 對映異構物之混合物（4.06 g，產率11%)。分析顯示，產物 -61 - 200304380 為N-(5-[(2-[特戊醯基胺基]—々pH)-氧代-5,6,7,8-四氫吡啶並 _[2,3-d]嘧啶-6•基）乙基]_4_甲基嘧吩並_2_基）麩胺酸二乙酯 。NMR (CDC13) δ: 7·24 (1H，s)，6·75 (1H，d，J=7.6 Hz)，5.57 (1H，寬），4.72 (1H，ddd，J=4.8, 7.6，12·6 Hz)，4.22 (2H，q， Hz)，4.11 (2H，q，J=7.1 Hz)，3.43-3.36 (1H，m)， 3·〇6_2·98 (1H，m)，2.89-2.68 (3H，m)，2.52-2.40 (3H，m)， 2.37-2.23 (1H，m)，2.15 (3H，s)，2·14_2·03 (1H，m)，1.94-1.83 (1H, m)5 1.73-1.63 (2H5 m)9 1.32 (9H?s)5 1.29 (3H, t5 J=7.1 Hz)，1·23 (3H，t，J=7.1 Hz)。分析（C29H41N507 S.0.5H2〇) C，H，N，S。 此非對映異構物混合物再經對掌相HPLC純化。使用己烷 :乙醇：二乙胺（70:30··0·15)，於40°c溫度下，依1.0 ml/分 叙之流速溶離Chiralpak管柱，產生分離之非對映異構物黃 色固體（分別為1·〇7 g與1.34 g)。由混合物所得之光譜可以 區分各非對映異構物之1H NMR光譜。 步驟7 : Ν_(5-[2_(2-胺基_4(3Η)_氧代-5,6,7,8·四氫吡啶並 _[2,3-(1]喊啶-6-(1^)-基）乙基]-4-甲基4吩並-2-基）麵胺酸（化 合物6): 取含較晚溶離出之非對映異構物特戊醯基胺基] -4(3Η)_氧代_5,6,7,8-四氫吡啶並[2,3-d]嘧啶-6_基）乙基]-4-甲基魂吩並-2-基）麩胺酸二乙酯（1.31 g，2.2 mmol)之2N NaOH (40 mi)懸浮液於周溫下攪拌12〇小時後，過濾排除任 何殘留粒狀物質。濾液經6N HC1調整至pH 5.5。過濾收集所 形成之沉澱，以水（2 X 10 ml)與醚（2 X 10 ml)洗滌，產生黃 -62 - 200304380 色固體產物（794 mg，產率79%)。分析顯示，產物為 1^(5_[2_(2_胺基-4(311)_氧代 _5,6,7,8-四氫吡啶並[2,3-(1]嘧啶 ·6·基）乙基]_4_甲基P塞吩並1基）麵胺酸· Nmr (DMSO-d6)5: 12.35 (2H，寬），9.83 (1H，寬），8.41 (1H，d，J=7.7 Hz)，7.57 (1H，s)，6·43 (1H，br s)，6·20 (2H，br s)，4.34-4.26 (1H，m)， 3.29-3.19 (2H，m)，2.83-2.74 (3H，m)，2.32 (2H，t，J=7.3 Hz)， 2·12 (3H，s)，2.08-2.00 (1H，m)，1·92]·81 (2H，m)，1.68-1.49 (3H，m)。分析（c2〇H25N506 S.0.8H2O) C，H，N，S。 步驟8 : N-(5-[2_(2-胺基-4(3H)-氧代_5,6,7,8-四氫吡啶並 -[2,3-d]嘧啶-6-(S)-基）乙基]·4-甲基嘍吩並_2·基）麩胺酸（化 合物7): 取含較早溶離出之非對映異構物特戊醯基胺基] _4(3Η)·氧代·5,6,7,8-四氫吡啶並[2,3_d]嘧啶_6_基）乙基]-4-甲基嘧吩並-2-基）麩胺酸二乙酯（1.02 g，1.7 mmol)之2N NaOH (35 ml)懸浮液於周溫下攪拌12〇小時後，過濾排除任 何殘留粒狀物質。濾液經6N HC1調整至pH 5.5。過濾收集所 开/成之〉儿殿’以水（2 X 1 〇 ml)與醚（2 X 10 ml)洗條，產生黃 色固體產物（531 mg，產率68%)。分析顯示，產物為N-(5-[2-(2-胺基-4(3H)-氧代·5,6,7,8-四氫吡啶並[2,3-d]嘧啶-6-基）乙 基]-4-甲基噻吩並-2-基）麵胺酸。NMR (DMSO_d6) δ: 12.52 (2Η，寬），9.69 (1Η，寬），8·36 (1Η，d，J=7.7 Ηζ)，7·56 (1Η， s)，6·26 (1H，br s)，5.93 (2H，bi: s)，4.32-4.25 (1H，m)， 3.24-3.16 (2H，m)，2·81-2·73 (3H，m)，2·31 (2H，t，J=7.2 Hz)， 2.12 (3H，s)，2·07_1·98 (1H，m)，1.91-1.79 (2H，m)，1.65-1.48 -63 - 200304380 (3H，m)。分析(C2〇H25N506 S.0.7H2O) C，H，N，S。 步驟8 :化合物6與7之結晶學 依據 Kan，C.C·等人述於 J· Protein Chem. 11:467-473, (1992)中之方法，純化三功能性人類GARS-AIRS-GART酵素 之0人11丁功能部位（殘基808-1010)0純化後，0八101於含25 111^1 Tris pH 7.0與1 mM DTT之緩衝液中濃縮至20 mg/mL。以懸 滴式蒸氣擴散法進行結晶，混合蛋白質及儲存液（38-44%· MPD，0·1 M Hepes，pH 7.2-7.6)，比例 1:1，於 13°C 下平衡 。典型地在3天内長出結晶，經測量為0.2 X 0.25 X 0.3 mm。 採用San Diego多線型系統兩盤式區段檢測器（San Diego Multiwire Systems 2-panel area detector)與 Rigaku AFC-6R單 色光Cu Κα X-射線光源與角度穩定器，於4°C下收集GART 、GAR 1與抑制劑之三元錯合晶體之X-射線繞射數據（表3) 。空間群經測得為P3221，晶格常數如下所示。化合物6與7 二者錯合物之結晶構造採用MERLOT (Fitzgerald，P.M.D. MERLOT, an Integrated Package of Computer Programs for the Determination of Crystal Structures by Molecular Replacement. J· Appl· Crystallogr. 21··273-278 (1988))之分子置換法解析 。該搜尋模式係由來自大腸桿菌E. coli GART三元錯合結構 之殘基1-209組成（蛋白質數據銀行（Protein Data Bank)登錄 號1 cde)。於三向立體平移函數中（Crowther，R.A·，等人之A method of Positioning a Known Molecule in an Unknown Crystal Structure· Acta Crystallogr· 23:544-548 (1967))，採用 交又旋轉函數（cross rotation function)之最高♦ (Crowther， -64- 200304380 R.A. The Fast Rotation Function. In The Molecular Replacement Method，1972)搜尋Harker向量。所有五次搜尋中最高峰（亦 即由一個分子到五種對稱相關分子之各分子）即產生一組 可在該模式中定位之向量。採用又？!^011(6〇1叩61^，八.1\ X-PLOR Version 3.1: A System for X-ray Crystallography and NMR. New Haven，CT (1992))初次精算後，即可得到受質 GAR 1與抑制劑之密度。以手動操作模式建構2FQ-Fe與 電子密度圖譜，然後再進一步使用XPLOR精算（表3)。 表3·化合物6與7之X-射線數據與精算結果综合說明 6 7 解析度（埃） 10-2.3 10-3.2 晶格（a，埃） 77.17 76.77 晶格（a,埃） 102.67 101.45 Rmerge (%Υ 6.51 12.75 總反射數 59522 25756 單獨反射數 16606 6858 R因數（％)b 17.8 17.1 溶劑編號 65 62
Rmerge: 100X ΣΗΣΜΑΡΙ/ΣΗΣπίχμ，其中 I(h)i為第 i次測定 之反射值h，I(h)i為η次測定反射值h之平均強度。 1)11因數：乙呢。|一|?(；|丨/1圯。|。 e距理想值之平均偏差。 200304380 實例1(B):化合物7之另一種合成法 化合物7可依據下列反應圖，採用另一種途徑合成。 步驟1 n-BuLi/己燒
3-甲基墓吩
’ N，N，N，N-四甲基己二胺， MTBE，-10至20°C 2)C02(氣體) 該合成法始於自商品取得之3-甲基嘧吩（英國La Porte Performance Chemicals)之5 位置上進行位置選擇性經化反 應。於氬蒙氣下，合併4.4 L MTBE與800 mL N，N，N，N_四甲 基乙二胺（“TMEDA”），冷卻至-10°C。以30-45分鐘時間添加 2.10 L之2·5 M n_BuLi，使之平衡（10-20分鐘）。亦於氬蒙氣 下，在另一個燒瓶中合併500 mL 3-甲基嘍吩與4.4 L MTBE ，冷卻至-10°C。然後添加n-BuLi_TMEDA至含3·甲基嘧吩 /MTBE溶液中，同時於低於20°C下攪拌。混合物回升室溫 後（2小時），溶液冷卻至-10°C，通入C02。以C02沖刷後， 反應混合物經14 L水中止反應，分離有機相，以NaOH萃 取。水性萃液經HC1酸化至pH 2。過濾收集沉澱產物1(B2) ，以水洗滌2次，於60-65°C下真空乾燥。所得物質為所需 產物4-甲基-2-噻吩羧酸1(B2)與位置選擇性異構物3-甲基 -2-嘍吩羧酸之約90/10混合物（541 g; 3.81 mol; 1(B2)之產 率 66%) 〇 步驟2
-66- 200304380 取含1(B2)之產物混合物經含溴之乙酸溶液（195 mL溴含 於2.8 L乙酸中）溴化，以1.5小時時間加至1(B2)之攪拌溶液 中。30分鐘後，於室溫下，在激烈攪拌下，以19L水中止反 應，中止反應期間，所需產物5-溴-4-甲基-2-嘧吩羧酸1(B3) 沉澱析出，經真空過濾收集，以水洗滌2次，於65-70°C下 真空乾燥。由質子NMR判斷所得產物為單一異構物（692 g ;3· 13 mol ;產率82%)。不期望之1(B2)之異構物似乎僅部 份溴化，而未反應之物質與不要之異構物則留在溶液中。 步驟3
乙醇 h2so4 回流，18小時
酸1(B3)與乙醇及1.8當量濃硫酸進行費雪酯化反應 (Fisher esterification)，經過萃取後，產生乙酯1(B4)之油狀 物。取690 g 1(B3)(含於 7.4 L EtOH)與 270 mL H2S04 合併， 反應於硫酸鈣乾燥管下回流18小時。冷卻至室溫後，以碳 酸氫鈉調整溶液至pH 8，所得漿物真空濃縮排除乙醇。加 水，混合物經4 LMTBE萃取2次。真空排除溶劑，產生726 g 5-溴-4-甲基噻吩-2-羧酸乙酯1(B4)之油狀物（2.92 mol ;產率 93%) 0
步驟4 200304380 於氬蒙氣下，取溴嘧吩酯1(B4)與3-丁炔-1-醇（2當量）、三 乙胺與CH3CN，於觸媒量肆（三苯基膦）鈀與碘化亞銅（I)之存 在下合併，升溫至78-82°C 18小時。混合物冷卻至約50°C， 以水稀釋，真空濃縮排除CH3CN。反應混合物再經4 L乙酸 乙酯與4 L水稀釋，水相再經2 L乙酸乙酯萃取。合併之有機 萃液洗滌後（2·5 L 0·5 M HC1水溶液與4 L水）。與乙酸乙酯及 ΜΤΒΕ共沸蒸餾排除過量水，產生炔ι(Β5)之深色油狀物（1.7 kg ;產率 85%)。 步驟5
取炔1(B5)氫化1〇天，完全形成醇UB6)。取丨56 “炔UB5) 溶於5 L乙醇中，加至氮蒙氣下之19 [氫化器中，然後添加 Pd/C漿物（含1〇〇 g i〇% Pd/C之350 mL乙醇）。氫化器經氮氣 加壓至50psi，於攪拌下排氣，共進行3次循環，然後在^ 天内，於100 psi下進行再加壓3次循環。當氫氣吸收減慢後 ，反應混合物經1英吋寅式鹽墊過濾後，再與含丨〇() g新鮮 10% Pd/C之乙醇一起加至氫化器中。依上述重複添加過程4 次，每次再添加觸媒之間間隔15-2天。當任何不飽和物質 完全消耗後，反應經寅式鹽墊過濾，真空乾燥，產生5_(4_ 經丁基）_3_甲基噻吩_2_羧酸乙酯1(B6) (1.55 kg ; 6 4〇 m〇1 ; 產率96%)。 -68- 200304380 步驟6
乙酯1(B6)皂化產生醇-酸1(B7)，與苯甲基溴進行苯甲基 化反應，產生醇-酯1(B8)。添加306 g LiOH水溶液至含乙酉旨 1(B6)之溶液（1.55 kg乙酯l(B6)/6.5 L THF)中，混合物加溫 至45°C 19小時。反應混合物冷卻至32°C，以3 L ΜΤΒΕ稀釋 。分層後，有機相經萃取（2 X 500 mL 1 M NaOH)，合併水 相，以1.5 L ΜΤΒΕ洗滌2次。水相經HC1酸化至pH 1，以2 L 二氯甲烷萃取3次。真空排除溶劑，依序與2 L二氯甲烷及2 # L ΜΤΒΕ共沸蒸餾排除水，產生醇-酸1(B7)。取1.21 kg醇-酸1(B7)與苯曱基溴（1當量）溶於DMF (8 L)中，添加1.18 kg K2C03 (1.5當量）。反應冷卻至15°C後，回升至室溫一夜， . 加水與ΜΤΒΕ。分層後，水相再加至50 L萃取瓶中，殘留之 無機鹽經ΜΤΒΕ洗滌3次，合併所有有機相供萃取水相。有 機萃液經碳酸氫鈉水溶液與水洗滌後，真空蒸發，產生苯 甲酯 1(B8)(1.61 kg ; 5.28 mol ;產率 93%)。 -69- 200304380 步驟8
取醇1(B8)經4當量吡啶鏘二鉻酸鹽氧化，產生酸1(B9)。 以每次500克之份量添加5.5 kg吡啶鏘二鉻酸鹽至含8 L DMF之燒瓶中，使溶液回升至18°C。取醇1(B8)(1.11 kg)溶 於1.5 LDMF中，滴加至反應溫度23-24°C之吡啶鏘二鉻酸鹽 溶液中。使反應回升至室溫一夜後，加至含18 L水、8 L MTBE與0.5 L二氯甲烷之50升萃取瓶中，以中止反應。分層 後，水相經4 L MTBE萃取2次。固體鹽與4 L水合併，所得 漿物經MTBE萃取。合併之MTBE萃液經0.4MHC1與水操作 ，以碳酸氫鋼水溶液回萃取產物。以MTBE洗滌水相後，以 HC1調至pH 3-4，以MTBE萃取產物。MTBE萃液經水操作， 洗滌及真空乾燥後，產生產物1(B9)(816 g ; 2.56 mol ;產率 70%) ° 步驟9
1) TiCI4, CH2CI2l0oC 2) DIPEA, 0 °C
OCH.Ph N v X i VCH2P^NHC02CH2Ph^ 1(B12) 步驟10
OCH2Ph 1(B10)
3) 胺甲基N-甲氧基甲 基O-苯甲基酯，-70°C
4) TiCl4, -70 至0°C -70- 200304380 由酸1(B9)轉化成混合特戊醯基酸酐1(B10)，其立即與鋰 化之苯甲基号吨淀酮對掌性輔劑反應，產生酸基吟唆淀酉同 1(B11)。添加三乙胺（214mL)至羧酸1(B9)溶液中（423 g含於 3.2LMTBE)，反應冷卻至_16°C。添加特戊醯氯，攪拌反應 後’使之回升至室溫。漿物經寅式鹽墊545過濾，以3.2 L MTBE潤洗後，冷卻至_7〇°C。 在另一個燒瓶中，滴加2.5 Μ正丁基鋰之己烷溶液至_ (S)-4-苯甲基-2-吟峻啶酮溶液（246.8 g含於3.2 L四氫咬喃） 中，攪拌冷卻至-70°C 1小時。添加鋰化之呤唑啶酮至混合 酸酐中，1小時後，添加2 L 2 Μ硫酸氫鉀水溶液中止反應。 分層後，有機相經碳酸氫鈉水溶液、水及鹽水洗滌後，真 空乾燥排除溶劑及水。 使驢基噚唑啶酮1(Βη)之鈦烯醇鹽與胺甲酸N—甲氧基甲 基0-苯甲基酯進行非對映異構性選擇性烷化反應，引進第 一個永久對掌性中心，產生CBZ保護之胺1(Β12)。以醯基今 口坐咳:酮1(Β11)溶液（884 g含於3.1 L二氯甲烷中）開始，於3-7°C 下，在1·25小時内滴加1 μ四氯化鈦之二氯甲烷（ι·〇5當量） 各液，再授拌1小時。滴加亨尼氏鹼（HunigS base) (1 · 1當量） ，混合物攪拌1小時。溶液冷卻至八後，添加含胺甲酸 N-甲氧基甲基〇_苯甲基酯溶液（1·25當量）(453 g含於496 二氯甲烷中）。胺甲酸N-甲氧基甲基〇_苯甲基酯係依文獻中 已知方法，以兩個步驟製得（Tetrahedr〇n，44: 56〇5_5614 (1998))。30分鐘後，以ι·5小時時間添加2.31乙含} M四氯化 鈦之二氯甲烷溶液（1.25當量），繼續反應丨小時。反應置於4〇c -71 - 200304380 低溫室内16小時後’反應加至含水與氯化銨之溶液（1 kg NH4C1含於8L水中）之50升年取瓶中中止反應。隨後以二氯 甲燒潤洗燒瓶，分層，有機相經氯化銨水溶液洗滌。真空 排除二氯甲烷’所得產物固化一夜後，於3·8 l甲醇中形成 漿物。過濾收集產物，再於甲醇中形成漿物2次，然後真空 乾燥，產生胺甲酸酯1(B12) (714 g)。 胺甲酸N-甲氧基甲基〇-苯甲基酯之製法
、A nh2 N32C03, H2〇
60:C，〇·5 小時 胺甲酸苯甲酉旨23°C，3小時 甲醇 對甲苯磺酸(觸媒量) 一甲 fe 23°C，16小時 胺甲酸N-甲氧 甲基0-苯甲基酯 步驟11
〇CH2Ph H2〇（1.36Eq) 0-3 °C 3hr
2MLiBH4) THF
^NHC02CH2Ph° 1(B13) 還原性排除對掌性辅劑，產生醇1(613)。滴加2M氫硼化 鋰之THF (1.44當量）溶液至受質1(B12)溶液（714 g含於2 〇乙 THF與27.2 mL水中）中。反應攪拌2.5小時後，滴加3.0 [ 3 M HC1水溶液。在反應中添加4]L二氯甲烷，分層，有機相經2 L飽和奴酸氫鈉溶液洗滌。真空排除有機溶劑，產生含有裂 解之對掌性輔劑之產物1(B13)(716 g)。（對掌性輔劑未在操 作過程中排除’而繼續帶到接續兩個反應中）。 -72- 200304380 步騾12
Z橫醯 氣，· Et3N CH2CI2, °C
卿1)么二TfF二乙酿 NHC02CH2Ph KB14) 2) Nal，回流
以甲磺醯氣處理醇1(B13)，產生甲磺酸酯1(B14)，其再與 丙二酸二乙酯鈉於觸媒量碘化鈉之存在下反應，產生極粗 之丙二酸酯1(B15)。以醇1(B13)溶液（432 g含於2.60 L二氯 甲烷中）開始，添加三乙胺，反應冷卻至-10.3°C後，滴加86 mL甲磺醯氯。約2.25小時後，添加1 L M HC1水溶液中止反 應。分離有機層，以碳酸氫鈉水溶液洗滌，真空乾燥排除 溶劑與水，產生甲磺酸酯1(Β14)之油狀物（661 g)。在含此 甲磺酸酯1(B14)之溶液（580 g含於3.83 L THF中）中添加丙 二酸二乙酯之鈉鹽溶液（含340 mL丙二酸二乙酯之2L THF 溶液，含於已添加50 g氫化鋼之燒瓶中）。添加氫化鈉（0.27 當量），反應於62°C下加熱至反應完成為止。反應加至8 L MTBL·與4 L·飽和碳酸氫鈉水溶液之混合物中，中止反應。 分層後，有機相經3 L飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌，真空蒸發 ，產生丙二酸酯1(B 15)(968 g)，經矽石層析法純化，以己 烷/二氯甲烷（75/25)溶離。 -73- 200304380
自胺上排除1(B15)之羰基苯氧基，然後環化加至乙酯基 上，產生吡啶酮環系。同時苯甲基酯脫離苯甲基，產生羧 酸1(B16)。經層析法純化後，於室溫下，以3〇% HBr之乙酸· 溶液（86.5 g含於213 mL中；4當量）處理162.8 g丙二酸酯 1(B 15)。15小時後，反應倒至萃取瓶中，添加碳酸氫鈉/碳 酸钾緩衝至pH 8-9。分層後，水相經2 L MTBE洗滌。水相 再經1 ·5 L—氟甲燒稀釋’調至pH 1，有機相經水與氯化鋼 水落液洗丨條。經播水硫fei鐵脫水後’取含内酿胺1 (B16)之 二氯甲燒么液真空濃縮至約200 mL。所得漿物於室溫下靜 置一夜。過滤收集固體，真空乾燥一夜，產生產物1(B16) (67.lg) 0 步騾15
thf,周溫
200304380 由内醯胺1(Β16)(53·5 g含於ι·6〇 L THF中，加熱至45°C後 ，再冷卻至 35 C )與勞森試劑（Lawesson，s reagent)(7i q g ; 1.12當量）反應約21 ·5小時，產生硫代内醯胺i(B17)。反應於 8 L二氯甲烷中稀釋後，以4 l水與0.4 L飽和氯化鈉水溶液 中止反應。分層，有機相以4 L水及〇 4L飽和氯化鈉水溶液 洗滌，再真空蒸發，產生硫代内醯胺1(B17)(約56 g)。此時 不再進行純化，極粗產物硫代内醯胺丨（317)(及所有勞森試-劑副產物）經無溶劑之胍，於110°C真空下處理。呈溶融態 環化，產生嘧啶酮酸1(B18)。粗產物溶於700 ml水中，以HC1 酸化混合物至pH 5-6。過濾收集沉澱固體。酸1(B18)之純化 法為以丙酮洗條形成漿物，過滤收集後，於5〇。〇下乾燥， 產生粗產物（45.34 g)，其純度足以進行下一個反應。 步驟17
由45.3 g酸1(B18)與麩胺酸二-第三丁酯使用偶合劑：2· 氯-4,6-二甲氧基-H5-三畊（L1當量）反應，產生二乙酉旨 1(B19)。添加偶合劑至室溫下，含酸1(B18)之溶液（5'〇mL 三乙胺與698 mL DMF)中。反應於氬氣套下攪拌15小時。 添加麩胺酸二-第三丁酯鹽酸鹽（1.1當量），續攪摔24小時。 -75- 200304380 過滤固體後’滤液真空濃縮’產生黃色油狀物。此由狀物 溶於二氯甲燒中，以碳酸氫鈉水溶液、水與鹽水洗蘇’真 空乾燥。此物質經矽石（750 g)層析法小心純化，以二氯甲 烷/甲醇（40:10)溶離，產生二-第三丁酯1(B19)。 步驟18
1) TFA(50 eq.), CH2CI2 0oC 2) 操作’ 3) TFA(25eq.), CH2Cl2, 0 °C 4) 操作
最後依下列方法脫除二-第三丁酯1(B19)之保護基，產生 化合物7。取純化之二-第三丁酯1(B 19)之溶液，於0°C下， 經預先冷卻之三氟乙酸（50當量）處理10-16小時。於0-3°C下 真呈排除所有溶劑。粗產物再溶於碳酸氫納水溶液中，以 二氣甲烷洗滌，水相經HC1酸化後，過濾收集得到固體。所 得固體依上述經三氟乙酸（25當量）處理第2次，依相同方式 單離’產生化合物7之白色固體。連續兩次與水再形成漿物 ，以便排除所需化合物中之殘留三氟乙酸。所得產物之非 對映異構性純度為99.8%，總純度>96%。 實例2 抗毒性劑之合成法 實例2(A) ··甲硫腺甞（“mTA，，)（化合物AA)之合成法 -76- 200304380 下文所述反應圖1適用於製備ΜΤΑ (化合物AA)。
1，芬畜始«+Α- ‘ Wt:2_ hof^iL· $ 甲碌腺芬(ΜΤΑ) Mol Wt :297 33 ， 步驟1 :氯腺苷之合成法
在2升三頸燒瓶上加裝機械攪拌器與溫度計，依序添加 400 mL乙腈與腺苷（i〇〇g，〇·374 ηιο1)。所得漿物使用冰/丙 酮冷卻至-8°C。以5分鐘時間，在反應中添加亞硫醯氯（82 mL ，1.124 mol)。然後以40分鐘時間，在反應中滴加吡淀（69〇8 mL，0.749 mol)(滴加過程中放熱）。離開冰浴，使溫度上升 至室溫，同時攪拌18小時。產物開始自溶液中沉殿析出。 再過18小時後，在反應中滴加水（600 mL)(滴加過程中放熱） 。於35°C下真空蒸餾排除乙腈。然後在反應中添加甲醇（35〇 mL)。反應激烈攪拌，在其中滴加濃縮NH4〇H(225 mL)。控 制滴加過程，使溫度保持在4〇。<：以下。滴加後之溶液pH為9 。所得溶液攪拌1.5小時，使之冷卻至室溫。15小時後，於 35 C下真空蒸餾排除200 mL甲醇。所得透明黃色溶液冷卻 -77- 200304380 至0C 1小時’過濾。所得無色固體經冷甲醇（100 mL)洗滌。-於40 C下真空乾燥丨8小時。反應產生氯腺苷之無色結晶固一 體（98.9 g ’ 92.7%)。NMR1!!顯示，產生含有水之小波峰之 極純淨所需產物。1H NMR (DMSO-d6): 8·35 (1H), 8·17 (1H), 7.32 (2Η)，5·94 (d，J = 5·7 Ηζ，1Η)，5·61 (d，J=6 Ηζ，1Η)，5·47 (d，J=5.1 Hz, 1H)，4·76 (dd，J=5.7 & 5·4 Hz，1H)，4·23 (dd， J=5.1 Hz & 3.9 Hz，1H)，4·10 (m，1H)，3·35 _ 3.98 (m，2H)。 步騾2 :甲硫腺苷之合成法
在3升三頸燒瓶上加裝機械攪拌器與溫度計，依序添加 DMF (486 mL)與氯腺苷（97.16 g，0.341 mol)。在所得漿物 中添加NaSCH3 (52.54 g，0.75 mol)，添加過程會放熱。反 應使用機械攪拌器攪拌丨8小時。在反應中添加飽和鹽水 (1500 mL)，以濃HC1 (約40mL)調至pH 7。添加期間使用pH 探針追蹤pH。所得漿物冷卻至〇t：，使用機械攪拌器攪拌i 小時，過濾。無色殘質與水（500 mL)研磨1小時，過滤，於 40 C下真$乾燥18小時。產生甲硫腺苷之無色固體（94 44 g ’传自乳腺甘產率為93.3% ;得自起始物之產率為％ 5¾)。 所得 MTA之純度為 99%。4 NMR (DMSO-d6): 8.36 C1H) 8·16 (1H)，7.30 (2H)，5.90 (d，J=6.0 Hz，1H)，5.51(d，J==6 Hz 1H)，5.33 (d，J = 5·1 Hz, 1H)，4.76 (dd，J = 6.0 & 5 4 Hz 1H) -78- 200304380 4·15 (dd，J= 4·8 Hz & 3.9 Ηζ，1Η)，4·04 (m，1H)，2.75-2.91 (m，2H)與 2·52 (s，3H)。 實例2(B) : MTA之類似物之合成法 5’-腺苷類似物之製法說明於反應圖:
以腺甞Α為起始物，於5,位置上轉化成適當之活化官能基 X (有或沒有其他保護基P1、P2、p3、p4)。於5,位置上形成 醚時，此基團可為（但不限於）金屬醇鹽。為了引進硫醚、胺 或簡單還原反應，X官能基可為脫離基，如：氯離子、溴離 子、三氟甲磺酸根、甲苯磺酸根等等。此外，χ基團可為醛 ’可經由還原性胺化反應或經由威特晞烴化反應（Wittig olefination)而引進胺。轉化成中間物，具有所需5，取代基時 ，（若可行時）可脫除保護基，形成C型之5,腺苷類似物，可 進一步轉型。 反應圖111出*中間物B (X=〇H)轉化成5,叛酸酿衍生物之 一般方法：
-79- 200304380 由化合物B之5’羥基氧化成中間物F。此化合物可再轉化 成羧酸鹽G或羧酸酯（Y=0)或羧醯胺（Y=N)衍生物Η。 實例 2(B)(1) : (23,38,411，51〇-5-(6-胺基-911_嘌呤-9_基）_>1-乙 基-3,4-二羥基甲基四氫呋喃-2-羧醯胺
標題化合物係由2’，3’-0-亞異丙基腺苷-5’-羧酸（R. Ε. Harmon 等人之 Chem. Ind·(倫敦）1141 (1969); Ρ· J. Harper 與 A. Hampton之 J. Org. Chem. 35，1688 (1970); A. Κ· Singh之 Tetrahedron Lett· 33，2307 (1992))與 N-乙基甲胺修改 S. F· Wnuk等人（J· Med· Chem· 39, 4162 (1996))之方法製備，如下： IN < KO H/KM ] IN <
ED C /D M F (1) (2) (85% )
<T
IN
J < •bCCo,
Rk OH 使用試劑l-[3_(二甲胺基）丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸 200304380 鹽與4-硝基苯酚與兩種起始物偶合，使用TFA水溶液脫除保 護基（依上述說明），經矽膠管柱層析法純化後（以9:2 CH2C12: MeOH溶離），得到 336 mg (57%)產物 之白色 固體 ’ mp: 86-90°C ; ^-NMR (DMSO-d6) δ 0.90-1.14 (m，6H)， 2·76 (s，1H)，2.90 (s，1H)，3.21-3.35 (m，2H)，4·18 (br s，1H)， 4·37 (br s，2H)，4.69-4.74 (dd，1H，J=3.0，2.3 Hz)，5.59 (br S，1H)，5.94-5.96 (d，1H，J=5.2 Hz), 7.29 (br s，2H)，8.06 (s， 1H)，8.50-8.52 (d，1H，J=7.5 Hz)。LRMS (m/z) 323 (M+H) + 與 345 (M+Na)+。分析（C13H18N604-2.3 TFA) C，H，N。 實例2(B)(2) : 2-(6_胺基-嘌呤-9-基）-5-(4-氟-苯甲氧甲基-四 氫-呋喃-3,4_二醇
中間物2(B)(2a) : N-苯甲醯基-N-{9-[6-(‘氟-苯甲氧甲基） -2,2-二甲基_四氫_吱喃並-[3,4_(1][1，3]二氧代-4-基]-911-嗓呤 -81 - 200304380 -6-基卜苯醯胺。在含起始試劑2(B)(2a)(400mg，0.78mmol) 與 ηΒι^Ν+Γ (15mg，0·04 mmol)之 16 ml THF溶液中添加 NaH (47 mg，1 · 16 mmol，60%含於礦物油中）。30分鐘後’滴加 4-氟苯甲基溴（0.12 ml，0.94 mmol)。所得混合物於室溫下 攪拌一夜。混合物經乂6〇11中止反應，以11〇入()中和至？117.0 及添加合成矽酸鎂載體（florisil) (2.0 g)後，真空濃縮。殘質 經CH2C12處理，過濾，以CH2C12徹底洗滌。濾液經10°/〇 NaHS03 (30 ml)、鹽水（30 ml)萃取。有機層脫水（Na2S04)， 然後真空濃縮。殘質經Dionex系統純化（25%-95°/〇 MeCN : H20 w 0.1% HOAc緩衝液），收集所需溶離份，產生中間物 2(B)(2b) (114mg，0.18 mmo卜產率 23%)之白色固體。TLC: Rf=0.2 (己烷·· EtOAc/2:l)。4 NMR (400 MHz，氯仿-D) δ ppm 1.31 (d，J=10.11 Hz，3H) 1.55 (d，J=7.07 Hz，3 Η) 4·36 (dd，J=l 1.62, 5·56 Hz，1H) 4·49 (m，2 H) 5.04 (m，J=6.32, 3.54 Hz， 1H) 5.39 (dd，J=6.44, 2·40 Hz，2H) 5·48 (m，J=1.26 Hz, 2 H) 5.99 (d，J=2.27 Hz，1H) 6.84 (m，2 H) 7.08 (m，J=7.58, 7_58 Hz，3 H) 7.35 (m，5 H) 7.49 (t，J=7A5 Hz，1H) 7·87 (m，3 H) 8.42 (s，lH)。C34H3〇FN506iMS (MW:623)，m/e 624 (MH+)。 中間物2(B)(2c) : 9-[6-(4-氟-苯甲氧甲基-2,2-二甲基-四氫 -呋喃並-[3,4_d][l，3]二氧代-4-基）-9H-嘌呤-6-基胺。在含 2(B)(2b)(110 mg，0.18 mmol)之 2 ml MeOH溶液中添加濃 NH4OH (2 ml)。所得混合物於室溫及N2下攪拌一夜。反應 混合物真空濃縮。殘質經Dionex系統純化（5%-95% MeCN : H20 w 0.1% HOAc)，收集所需溶離份，產生中間物2(B)(2c) -82- 200304380 (47 mg，0.11 mmo卜產率 63%)之白色固體。TLC: Rf=〇 3 _ (CH2C12: Et〇Ac/2:l)。iNMR (400 MHz，氯仿 _D) δ ppm l31 - (s，3H) 1.58 (s，3 Η) 3·74 (m，1H) 3.91 (d，】=12·88 Hz，1H) 4.48 (s，1H) 4.75 (s，2 H) 5.05 (d，J=5.81 Hz，1H) 5·14 (t， J=5.31 Hz，1H) 5.77 (d, J=5.05 Hz，1H) 6.16 (s，lH) 6·66 (s，. 1H) 6·95 (m，J=8.59, 8·59 Hz，2 Η) 7·27 (m，J=8.21，5.43 Hz， ·-2 H) 7.71 (s，1H) 8·30 (s，1H)。C2〇H22FN504之 MS (MW: 415)， · m/e 416 (MH+)。 · 標題化合物2(B)(2)之製法如下。取2(B)(2c) (45 mg，0.11 mmol)含於1.5 ml HOAc與1·5 ml H20中之反應混合物於70°C 下加熱8小時。混合物真空濃縮。殘質經Dionex系統純化 (5%·95% MeCN : H20 w 0.1% HOAc)，收集所需溶離份，產 生 2(B)(2) (35 mg，0·1 mmol，產率 85%)之白色固體。TLC: Rf= 0.1 (CH2C12: MeOH/9:l)。4 NMR (400 MHz，MeOD) δ ppm 3.66 (dd，J=12.63, 2.53 Hz，1H) 3·80 (m，1H) 4.09 (q，J=2.53 Hz，1H) 4.24 (dd，J=5.05,2.53 Hz，1H) 4.66 (dd，J=6.44, 5.18 #
Hz，1H) 4.75 (m，2 H) 5.87 (d，J=6.32 Hz，1H) 6.96 (m，2 H) 7.32 (dd，J=8.59, 5·56 Hz，2 H) 8.17 (d，J=9.85 Hz，2H)。 C17H18FN504之 HRMS (MW: 375.35)，m/e 376.1417 (MH+) 0 C17H18FN504.1.1H20之 EA計算值：C 51·67, H 5.15, N 17.72。 實測值：C 51.76, H 4.96, N 17.33。 實例 2(B)(3) : (23,311，411，511)-2-(6_胺基-嘌呤_9-基）-5-(第三 丁基胺基-甲基）-四氫-呋喃-3，4-二醇 •83- 200304380
Η 2(B)(3a) 2(B)(3) 添加第二 丁基胺（1 5 mL，15 mmol)至 2(B)(3a)(286 mg， l.Ommol)中’混合物使用 smithsynthesizer合成儀（15〇。〇，1 小時）為混合物進行微波處理。所得混合物減壓濃縮減少體-積。粗混合物經逆向HPLC純化（Dionex系統；1〇〇->50% MeCN : H20) ’產生Cel (120 mg，產率37%)之白色泡沫狀 物。1H NMR (400 MHz，CD3OD) δ ppm 1·24 (d，J=8.8 Hz，9 H) 1.82 (s，1H) 3.42 (m，1H) 3.69(s，1H) 4.18 (m，1H) 4.33 (m， 1H) 4.41 (br. s.? 1H) 5.71 (s? 1H) 5.76 (br. s.? 1H)5.92 (d, J=5.1 Hz，1H) 7·31 (s，1H) 7.54 (m，1H) 8·11 (s，1H) 8.15 (s， 1H)。C14H22N603之 LCMS計算值（MW: 322)，m/e 323 (MH+) 。分析 Ci4H22N603 · 1.4CH3COOH · 2.0H2O計算值 C: 45.60, H: 7.20, NM8.99。實測值 C: 45.47, H: 7.45, N: 18.62。 實例 2(B)(4) ·· (23,311，411，511)-2-(6-胺基-嗓呤_9_基）-5_苯胺基 甲基·四氫-呋喃-3,4_二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(4)。4 NMR (400 MHz, CD3〇D) δ ppm 1.80 (s, 1H) 3.39 (m, J=4.0 Hz，2 H) 4.18 (m，J=4.0 Hz，1H) 4.24 (m, 1H) 4.73 (m，1H) -84- 200304380 5.86 (d，J=5.8 Hz，1H) 6.53 (t，J=7.2 Hz，1H) 6.63 (m，J=7.6 Hz，2 Η) 7·01 (m，2 H) 8.08 (s，1H) 8.15 (s，1H)。C16H19N603 之HRMS計算值（M+H)=343.1519，實測值 MS=343.1516。 實例2(B)(5) : 2-(6-胺基嗓呤-9-基）·5·二甲胺基甲基·四氫-呋喃_3,4-二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(5)。咕 NMR (400 MHz，CD3OD) δ ppm 2.72 (s，3 Η) 2·88 (s，3H) 3.77 (s，1H) 4.25 (m，J=5.8 Hz，1H) 4.36 (m，2 Η) 4.46 (m，1H) 4.52 (s，1H) 5.89 (s，1H) 6·05 (d，J=5.6 Hz，1H) 7.66 (s，1H) 8.26 (s，1H) 8.28 (s，1H)。C12H19N6〇3之 HRMS計算值（M+H) = 295.1519，實測值 MS=295.1501。 實例 2(B)(6) : (23,311，411，51〇-2_(6-胺基-嘌呤-9-基）-5-[(2-吡 淀-2-基-乙胺基）甲基]-四氩-咬喃-3,二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(6)。咕 NMR (300 MHz，CD3OD) δ ppm 1.94 (m，2 H) 2.77 (m，1H) 3.17 (t，J=6.8 Hz，3 H) 3.36 (m，4 H) 3.73 (m，1H) 4·43 (d， J=9.2 Hz，1H) 6.05 (d，J=5.7 Hz，1H) 7.36 (dd，J=14.3, 7.9 Hz， 2 H) 7.80 (m，1H) 8.07 (d，J=3.6 Hz，1H) 8.27 (d，J=8.1 Hz， -85 - 200304380 1Η) 8·55 (m，1H)。C17H21N703之 HRMS 計算值（M+H)= 372.1784，實測值 MS=372.1799。 實例 2(B)(7) : (28,311，411，51〇-2-(6_胺基-嘌呤-9-基）-5-[(4_氟· 苯甲胺基）甲基]•四氫·呋喃·3,4-二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(7)。咕 NMR (300 MHz, CD3〇D) δ ppm 2.00 (s? 2 H) 3.38 (m? 2H) 4.13 (s，2 H) 4.23 (d，J=3.8 Hz，2 H) 4.41 (m，2 H) 4.66 (s， 1H) 5.89 (s, 1H) 6.03 (d, J=4.9 Hz, 1H) 7.19 (m5 2 H) 7.51 (m5 2 H) 8.05 (d，J=2.6 Hz，1H) 8.25(s，1H)。C17H19FN603之HRMS 計算值（M+H)=375· 1581，實測值MS=375· 1582。 實例 2(B)(8) ·· (28,311，411，51〇-2-(6-胺基-嘌呤-9-基）_5-[(2-羥 基-乙胺基）甲基]-四氯-咬喃-3，4 -二if·
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(8)。4 NMR (400 MHz，CD3OD) δ ppm 1.78 (s，2 H) 2.69 (t，J=5.4 Hz，1H) 2.81 (t，J=5.3 Hz，2 H) 3.24 (s，2 H) 3.57 (m，2 H) 4.11 (br· s·，1H) 4.18 (m，J=4.8 Hz，1H) 4.70 (m，J=5.2 Hz，2 H) 5.38 (s, 1H) 5.86 (d, J=5.3 Hz, 1H) 8.11 (s, 1H) 8.16 (s, 1H)。C12H18N604 之 HRMS計算值（Μ+Η)=311·1468，實測值 -86- 200304380 MS=311.1480 0 實例2(B)(9) : 2-(6-胺基-嘌呤_9-基）-5-嗎啉·基·甲基四氫-呋喃-3,4-二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(9)。咕 NMR (400 MHz，CD3OD) δ ppm 1·72 (d，J=5.6 Hz，2 Η)2·37 (m，2 H) 2_57 (m，2 H) 2.93 (m，2 H) 3.08 (m，1H) 3·45 (m， J=4.8, 4·8 Hz，2H) 3.61 (m，2 H) 3.99 (m，2 H) 4.07 (t，J=5.7 Hz，1H) 4.46 (m，1H) 5.75 (d，J=4.3Hz，1H) 7.97 (s，1H) 8.07 (s，1H)。C14H2〇N604 之 HRMS計算值（m+H) = 337.1624，實測 值 MS=337.1626。分析 C14H2〇N6〇4 · 1.5CH3COOH計算值 C: 46.50, Η: 6·29, N: 19.14。實測值c: 46.42, H: 6.85, N: 19.10。 實例2(B)(10) ·· 2-(6-胺基-嘌呤-9_基）-5_吡咯啶基-甲基·四氫 -呋喃-3,4-二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(Β)(1〇)。ιΗ NMR (400 MHz，CD3〇D) δ ppm 1·82 (m，2 Η) 2·93 (m，J=6.44, 6.44 Hz, 4 H) 3.13 (m, 2 H) 3.20 (m, 2 H) 3.24 (s5 1H) 3.33 (m，J= 13·0,9·2 Hz，2 H) 4.20 (m，2 H) 4.71 (t，J=4.8 Hz，1H) 5.90 (d5 J=4.8 Hz, 1H) 8.12 (s51H) 8.15 (s, 1H) 〇 C14H20N6O3 -87 - 200304380 之HRMS計算值（Μ+Η)=321·1675，實測值MS=321.1662。分 析 C14H2〇N603 · l.〇CH3COOH ·0·6 CH2C12計算值 C: 41.07, Η: 6.48, Ν: 17·31。實測值C: 41.11，Η:5·86, Ν: 17.61。 實例2(Β)(11) : 2-(6-胺基-嘌呤-9-基）-5-環戊胺基-甲基-四氫 -吱喃-3,4-二醇
修改實例2(B)(3)之方法，製備與單離化合物2(B)(11)。咕 NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm 0.07 (m5 6 H) 0.30 (m5 2H) 0.45 (m, 4 H) 1.87 (m? 2 H) 1.96 (m5 2 H) 2.19 (s, 1H) 2.70 (m，1H) 2.78 (t，J=4.7 Hz，1H) 4.40 (d，J=5.1 Hz，1H) 6.61 (s， 1H) 6.65 (s，1H)。C15H22N603之 LCMS計算值（M+H)=335，實 測值 MS=335。分析 C14H22N603 · 2.2 CH3COOH · 0.8 C6H12 計 算值 C: 51.84, H: 8.05, N: 14.99。實測值 C: 51.89, Η··8·46, N: 15.02 〇 實例 2(B)(12) : (23,311，411，5化)-2-(6-胺基-嗓呤-9-基）-5-(笨氧 甲基）_四氫-呋喃·3,4·二醇
中間物2斤）（12&):(28,311，411，511)_9_[2,2-二甲基-6-(苯氧甲 基）四氫呋喃並[3,4-d][l，3]間二氧雜環戊晞-4-基]-9Η-嘌呤 -88 - 200304380 -6_胺依序添加三苯基膦（641 mg，2.44 mmol)與苯酚（3 11 mg ，3.30 mmol)至含 2’,3’-亞異丙基腺苷（500 mg，1.63 mmol) 之THF(15mL)攪拌溶液中。反應混合物置於冰浴上，添加 偶氮二羧酸二異丙酯（0.5 mL ; 2.44 mmol)。離開冰浴，混 合物於室溫下攪拌12小時。蒸發溶劑，產生黃褐色油狀殘 質。殘質經矽膠層析法純化（以80~>100%EtOAc之己烷溶液 溶離），產生化合物2(B)( 12a)之白色泡沫狀物（152.8 mg; 0,4 mmol ;產率 40〇/〇)。4 NMR (400 MHz，CDC13) δ ppm 1.43 (s， 3 Η) 1·67 (s，3 Η) 4.14 (dd，J=10.2, 4·7 Hz，1H) 4.27 (m，1H) 4.70 (m，1H) 5.18 (dd，J=6.1，2.8 Hz，1H) 5.46 (dd，J=6.2, 2.1 Hz，1H) 6.24 (d，J=2.3 Hz，1H) 6.37 (m，1H) 6.80 (d，J=8.1 Hz，1H) 6.95 (t，J=7.5 Hz，lH) 7.26 (m，1H) 7.48 (m，2 H) 7.68 (m，1H) 7.99 (s，1H) 8.37 (s，1H)。 添加乙酸（20 mL，80% H20溶液）至化合物2(B)(12a)(153 mg ’ 0·4 mmol)中。所得溶液加熱至i〇〇°c 6小時。反應混合 物蒸發’經矽膠層析法純化（以28% MeOH、2% H20之CH2C12 溶液溶離），產生化合物2(B)(12)之白色泡沫狀物（75.5 mg ;0.22 mmol ;產率 4〇〇/。）； iH NMR (3〇〇 MHz，CD3〇d) δ ppm 4.13 (dd，J=l〇.7, 3.4 Ηζ，1Η) 4·23 (d，J=3.2 Ηζ，1Η) 4.29 (m， 1H) 4.40 (t，J=4.9 Hz，1H) 4·63 (t，J=4.7 Hz，1H) 6.00 (d， J=4.5 Hz，1H) 6.85 (dd，J=12.7, 7.6 Hz，3 H) 7.18(m，2 H) 8.10 (s，1H) 8.22 (s，1H)。分析 c16H17N504 · 0·25Η2Ο · 2CH3COOH 計算值C: 53.00, H: 5.31，N: 17· 17。實測值C: 52.82, H: 5.52, N: 17.29。 89- 200304380 實例 2(B)(13) : (2S，3R，4R，5R)-2-(6-胺基-9H_ 嘌呤 _9_ 基卜夂[( 吡啶-3-基氧）甲基]四氫呋喃_3,4·二醇。
修改實例2(B)(12)之方法，改用3-羥基吡啶替代笨酚試劑-，製備與單離化合物2(B)(13a)。iNMRGOOMHz，CDC13) § ppm 1.39 (s，3 Η) 1.62 (s，3 Η) 4.17 (dd，J=10.1，5.6 Hz，1H) 4.28 (m，1H) 4.64 (m，1H) 5·18 (dd，J=6.3, 3·3 Ηζ，1Η) 5·48 (dd，J=6.3, 2·0 Hz，1H) 6·16 (d，J=2.0 Hz，1H) 6·27 (s，2 H) 7.05 (ddd，J=8,4, 3.0, 1.3 Hz，1H) 7.13 (m，1H) 7.89 (s，1H) 8.19 (m，2 H) 8.31 (s，1H)。 使用實例2(B)(12)所述之方法，由中間物2(B)(13a)製備及 單離化合物2(B)(13)。化合物2(B)(13): 4 NMR (400 MHz， CD3OD) δ ppm 4·30 (m，3 Η) 4·45 (t，J=4.9 Hz, 1H) 4.70 (t， J=4.8 Hz，1H)5.97 (d，J=4.6 Hz，1H) 7.23 (dd，J=8.5, 4.7 Hz， 1H) 7.36 (ddd，J=8.5, 2.8, 1.3 Hz，lH) 8.02 (d，J=4.3 Hz，1H) 8·08 (s，1H) 8.17 (s，2 H)。分析(：15Η16Ν604 ·1·25Η20· 〇.25CH3COOH計算值 c: 48.75, Η: 5.15, N: 22.01。實測值 C: 48.32, Η·· 5.12, N: 22.35。 實例 2(B)(U) : (28,311，411，51〇_2-(6-胺基-9£[_嘌呤-9-基）-5-[( 吡咬>2-基氧）甲基]四氫呋喃·3,4•二醇。 200304380
修改實例2(B)( 12)之方法，改用2-羥基吡啶替代苯酚氧劑 ，製備與單離化合物2(B)(14a)。中間物2(B)(14a): 4 (400 MHz，CDC13) δ ppm 1·37 (s，3 Η) 1.60 (s，3 Η) 4·46 ⑽， J=11.6, 5.3 Hz5 1H) 4.54 (m, 1H) 4.68 (m? 1H) 5.09 (dd； J=6.2, 2.9 Hz，1H) 5.44 (dd，J=6.2, 2.2 Hz，1H) 6.17 (d，J=2.〇 Hz，1H) 6.41 (s，2 H) 6.52 (d，J=8.3 Hz，1H) 6.80 (dd，J=6.3, 5·1 Hz，lH) 7.47 (m，1H) 7.94 (s，1H) 8.04 (dd，J=5.1，1·〇 Hz， 1H) 8.32 (s，1H)。 依實例2(B)(12)所述方法，由中間物2(B)(14a)製備及單離 化合物 2(B)(14)。化合物 2(B)(14): 4 NMR (400 MHz， CD3OD) δ ppm 4.41 (q，J=4.2 Hz，1H) 4.48 (t，J=4.9 Hz，1H) 4·54 (m，1Η)4·61 (m，1H) 4·76 (t，J=4.9 Hz，1H) 6·08 (d，J=4.6 Hz，1H) 6·83 (d，J=8.3 Hz，1H) 6.95 (dd，J=6.7, 5.4 Hz，1H) 7·68 (m，1H) 8.12 (dd，J=5.1，1·3 Hz，1H) 8.19(s，1H) 8.31 (S，1H)。分析 C15H16N604 · 0.75H2O · 0.5CH3CO〇H計算值 c: 49.55, H: 5.07, N: 21.67。實測值C: 49.85, H: 5.04, N: 21.74。 實例 2(B)(15) : (2S，3R，4R，5R)-2-(6-胺基-9H_ 嘌呤.9-基） 5·[(4·甲氧苯氧基）甲基]四氫呋喃-3,4-二醇
2(B)(15a) 2(B)(15) -91- 200304380 修改實例2(B)(12)之方法，改用4-甲氧苯酚替代苯酚試劑 ，製備與單離化合物2(B)(15a)。中間物2(B)(15a): 4 NMR (400 MHz, CDC13) δ ppm 1.39 (s, 3 H) 1.63 (s, 3 H) 3.72 (s, 3 H) 4.06 (dd，J=10.2, 4.7 Hz，1H) 4.18 (m，1Η)4·65 (m，1H) 5.12 (dd，J=6.2, 2·7 Hz，1H) 5.41 (dd，J=6.1，2.3 Hz，1H) 6.21 (m，3H) 6.73 (m，3 H) 7.97 (s，1H) 8.34 (s，1H)。 依實例2(B)(12)所述方法，由中間物2(B)(15a)製備及單離 化合物 2(B)(15)。化合物 2(B)(15)。4 NMR (400 MHz， DMSO_d6) δ ppm 3.68 (s，3 Η) 4·11 (m，1H) 4.18 (m，2 Η) 4.30 (q，J=4.6 Hz，1H) 4.67 (m，1H) 5·38 (d，J=5.3 Hz，1H) 5.58 (d， J=5.8 Hz，1H) 5·94 (d，J=5.1 Hz，1H) 6.87 (m，4 Η) 7·30 (s，2 H) 8.14 (s，1H) 8·33 (s，1H)。分析 C17H19N505 · 0.5H2O計算 值 C: 53.40, H: 5.27, N: 18.32 6 實測值 C: 53·49, H: 5.33, N: 18.02。 實例 2(B)(16): (28,311，411，51〇-；^-苯甲醯基_^[_{9-[2,2-二甲基 -6-((E)-苯乙烯基）-四氫呋喃並[3,4-d][l，3]間二氧雜環戊烯 -4-基]-9H-嘌呤-6-基卜苯甲醯胺
依 Montgomery 等人說明於 J· Heterocycl. Chem. 11，211 (1974)之方法製備與單離化合物2(B)(16a)。中間物 -92- 200304380 2(B)(16a): 4 NMR (300 MHz，氯仿-D) δ ppm 1.33 (s，3 Η) 1.59 (s，3 Η) 4·81 (dd，J=7.6, 3·1 Hz，1H) 4.98 (m，1H) 5.44 (m，1H) 5.63 (dd，J=11.5, 9·6 Hz，1H) 6.07 (d，J=1.9 Hz，1H) 6.12 (d，J=2.3 Hz，1H) 6.19 (dd，J=15.9, 7.6 Hz，1H) 6.59 (m， 1H) 7.31 (m，10 H) 7.78 (m，4 H) 8.13 (m，1H) 8.63 (s，1H)。 依 Montgomery 等人說明於 J· Heterocycl. Chem. 11，211 (1974)之方法製備與單離化合物2(B)(16)。4 NMR (400 MHz，DMSO-d6) δ ppm 1·95 (m，2 Η) 2.59 (m，1H) 2.66 (dd， J=9.4, 5·6 Hz，1H) 3.84 (m，1H) 4.07 (q，J=4.7 Hz，1H) 4·71 (q，J=5.6 Hz，1H) 5.18 (d，J=5.1Hz，1H) 5.42 (d，J=6.1 Hz， 1H) 5.86 (d，J=5.6 Hz，1H) 7.21 (m，5 H) 8.14 (s，lH) 8.34 (s， 1H)。分析 C17H19N503 MH20計算值C: 56.82，H: 5.89，N: 19.49。實測值C: 56.89, H: 5·70, N: 19.56。 實例2(B)(17)· {[5-(6·胺基_p票吟-9-基）-3,4_二楚基-四氯咬 喃-2·羰基]-胺基卜乙酸甲酯 NH〇
2(Β)(17) 修改實例2(B)(1)之方法，改添加甘胺酸甲酯*HC1 (249 mg ，1.98 mmol)與 Et3N (0.5 ml，3.3 mmol)替代 N-乙基甲基胺 ，製備化合物 2(B)(17)。2(B)(17): 4 NMR (300 MHz， DMSO-d6) δ ppm 1.20 (t, J=7.16 Hz, 2 H) 4.03 (m9 3 H) 4.17 -93- 200304380 (d，J=4.52 Hz，1H) 4.42 (d，J=0.94 Ηζ，1Η) 4·61 (m，J=7.82, 4.62 Hz, 2 H) 6.02 (d5 J=7.91 Hz, 2 H) 7.78 (s? 2 H) 8.28 (s5 1H) 8.45 (s，1H) 9.54 (s，1H)。C13H16N606之LCMS計算值 (M+H)=353，實測值MS = 353。C13H16N6O6*0.6TFA之EA計算 值 C: 40.54, H: 3.98, N: 19.98。實測值 C: 40.98, H: 4.40, N: 19.38。 實例2(B)(18): {[5·(6·胺基-p票吟-9 -基）·3,4·二經基-四氯-咬 喃-2-羰基]-胺基卜3-苯基-丙酸甲酯
修改實例2(B)(1)之方法，改添加H_Phe_OMe*HCl (418 mg ，1.98 mmol)與 Et3N (0.5 ml，3.3 mmol)替代 N-乙基甲基胺 ，製備化合物 2(B)(18)。2(B)(18): 4 NMR (300 MHz， φ DMSO-d6) δ ppm 3.38 (m，3 Η) 3·63 (m，3 Η) 4.25 (s，1H) 4.48 (m，1H) 4.88 (m，1H) 5.56 (d，J=6.78 Hz，1H) 5.76 (d， J=4.14 Hz，1H) 5.89 (m，J=8.29 Hz，1H) 7.23 (m，5 Η) 7·51 (s， 2 H) 8.13 (m，1H) 8.30 (m，1H) 9.55 (d，J=8.67 Hz，1H)。 C20H22N6O6之 LCMS 計算值（M+H)=443，實測值 MS=443。 C20H22N6O6*0.55TFA之 EA計算值 C: 50.26, H: 4.51，N: 16.67 。實測值C: 50.56, 4.94, N: 16.14。 實例2(B)( 19) : 5-(6-胺基-嘌呤-9·基）-3，4_二羥基-四氫-呋喃 _ -94- 200304380 -2-羧酸（2-羥基-乙基）_醯胺
OH 2(B)(19) 修改實例2(B)(1)之方法，改添加乙醇胺（0.12 mL，1.92 mmol)替代N-乙基甲基胺，製備化合物2(B)(19)。2(6)(19):11 NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.23 (m, 2H) 3.41 (m, 3H) 4.10 (m, J=4.14 Hz, 1H) 4.29 (d, J=1.32 Hz? 1H) 4.57 (m, J=2.83 Hz，1H) 5.52 (m，1H) 5.71 (m，1H) 5.92 (d，J=7.72 Hz， 1H) 7.48 (s，2H) 8.18 (s，1H) 8.37 (s，1H) 8.92 (m，J=5.84 Hz， 1H)。C12H16N605之 LCMS計算值（M+H)=325，實測值 MS=325 。C12H16N6O5*3.3TFA*1.0 CH2C12之 EA計算值 C·· 29.97，H·· 2.73, N: 10.70。實測值C: 29.41，H: 2.93, N: 11.02。 實例2(C) : MTAP受質之前藥合成法 反應圖IV出示由上述反應圖π之中間物c轉化成對稱性 取代之前藥D或不對稱性取代之前藥E與E，之方法：
保遵基Rm與Rn可包括（但不限於）酿、碳酸g旨、胺甲酸酉旨 、醚、磷酸酯與磺酸酯。引進前藥部份後，化合物可進一 步修飾。 -95- 200304380 特定言之，反應圖V出示5,腺甞類似物之不對稱取代之前 藥製法，其係以上述反應圖Π衍生之適當5,取代之腺苷類似 物0^起始物（亦即R=Me，Y=S，5，-去氧5，-甲硫腺菩；MTA):
二醇C經1，1，_羰基-二咪唑（(：1)1)或相關試劑處理，可轉化成 環狀碳酸酯Vb，產生中間物vb。環狀碳酸酯經親核物處理 如·胺、醇或硫醇而開環。該反應不為位置專一性，因 此產生兩種異構物¥〇與¥(：，之混合物，其可迅速互相轉化。 此混合物未經純化，但經醯化劑處理，封住殘留之游離羥 基，以分離兩種異構性終產物，¥(1與¥(1，。醯化劑包括（但 不限於）：羧酸、胺基酸、羧酸酐、二碳酸二烷基酯酸（或焦 蚊酸酉曰）、胺甲醯氣、異氰酸酯，等等。用於打開環狀碳酸 酯之親核物或隨後使用之醯化劑可包含完整或受遮蔽之溶 解基團。若必要時，各產物Vd4Vd，可再轉型釋出所需之溶 解基團。 或者，反應圖VI出示5,腺芸類似物之對稱性取代之前藥 製法： 200304380 R、
VBb 以上述反應圖II所衍生之類似物〇為起始物（兩種起始物 之醇類均使用相同酿化基封端）。醯化劑包括（但不限於）： 羧酸、胺基酸、羧酸酐、二碳酸二烷基酯酸（或焦碳酸酯） 、胺甲㈣、異氰酸自旨’等等’其可包含完整或受遮蔽之 溶解基團（R)。若必要時，化合物VIa可再轉型成Vlb，以釋 出所需之溶解基團（R*)。 實例 2(C)⑴與 2(0(1，）：（23,38,4]1，511)_5_(6_胺基_9沁嘌呤 -9-基）-4-[(2,2-二甲基丙醯基）氧]_2-[(甲基硫烷基）甲基]四 氫呋喃-3-基-1，4’-聯哌啶-1，-羧酸酯）及（2R，3R，4S，5S)_2_(6_ 胺基-9H-嘌呤-9-基）-4-[(2,2_二甲基丙醯基）氧]_5-[(甲基硫 燒基）甲基]四氫呋喃-3-基-1，4，-聯哌啶_；[，_羧酸酯）
如
nh2 2(C)da) 2(C)(la) : (3&11，411，68,6&8)-4-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-6-[(甲 基硫烷基）甲基]四氫呋喃[3,4_d][ L3]間二氧雜環戊_2_酮 於 0°C 下，在含5，_ 去氧 _5，·甲硫腺 ^Γ(13·4 g，45.1 mmol) 之DMF (250 mL)溶液中，一次添加全量込丨、羰基二咪唑 (8·50 g ’ 52·4 mmol)。1小時後，由hplC判定反應已完全，
真空排除DMF。所得粗產物殘質溶於chc13與最少量i_Pr〇H -97- 200304380 中。有機層以4% AcOH水溶液洗滌，然後真空濃縮。與庚 烷共沸排除過量乙酸，產生2(C)(la)之白色粉末，其純度足 使之不需進一步純化即可進行下一個反應（15.1 g，100%) 。4 NMR (DMSO-d6) δ: 8·34 (1H，s)，8.18 (1H，s)，7.44 (2H， Br)，6·49 (1Η，d，J= 2.3 Ηζ)，6·05 (1Η，dd，J=7.7與 2·4 Ηζ)， 5.48 (1H，dd，J=7.7與 3.4 Hz)，4.56 (1H，dt，J=3.4與 7.7 Hz)， 2.78-2.71 (2H，m)，2.03 (3H，s)。HPLC Rt=2.616分鐘。LRMS (m/z) 324 (M+H)+。
2(C)(lb) : (23,33,411，51〇_5-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）_4-羥基 -2-[(甲基硫烷基）甲基]四氫呋喃-3-基1，4’-聯哌啶-Γ-羧酸酯）與 2(C)(lb’）：（2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基）-4-羥基 -5-[(甲基硫烷基）甲基]四氫呋喃-3-基1，4’-聯哌啶羧酸酯） 於室溫下（rt)，在含 2(C)(la) (3·18 g，9·83 mmol)之 DMF (40 mL)溶液添加4-旅淀並喊淀（6.06 g，36·0 mmol)。於室溫下 1.5小時後，由HPLC判斷反應已完成，反應混合物分成四份 。每一份分別經逆相管柱純化（Biotage Flash 40i System， Flash40M卡管，C-18，10%MeOH/H2O至 100%MeOH梯度） ，產生化合物2(C)(lb)與2(C)(lb’），比例2.2:1。各位置選擇 性異構物由於容易異構化，因此未單離。 -98- 200304380
nh2 2(C)(1)
2(C)(1*) 於 0°C 下，在含 2(C)(lb)與 2(C)(lb’）（750 mg，1.53 mmol) 之CH2C12 (45 mL)溶液中添加三甲基乙酸酐（1.0 mL，4.9 mmol)與4-二甲基胺基吡啶（30 mg，0.25 mmol)，反應混合 物回升至室溫。20小時後，添加DMF與i-Pr〇H之1 : 1混合 物（3 mL)，真空排除CH2C12。所得溶液經半製備性HPLC純 化，於30分鐘内使用20%A/80%B至40%A/60%B之線性梯度 溶離，產生化合物2(C)(1)與2(C)(1’）之白色粉末（分別為387 mg，44%與 142 mg，16%)。2(C)(1): 4 NMR (CDC13) δ: 8.37 (1Η，s)，8·07 (1Η，s)，6·16 (1Η，d，J=5.8 Ηζ)，5.88 (1Η，t， J=5.6Hz)，5·59 (2H，s)，5·53 (1H，s)，4.47 (1H，q，J=4.5 Hz)， 4·22 (2H，m)，3·00 (2H，d，J = 4.9 Hz)，2·92·2·69 (2H，m)， 2.56-2.38 (5H，m)，2.17 (3H，s)，1.88-1.83 (2H，m)，1.77-1.70 (2H，m)，1.65-1.39 (6H，m)，1.14與 1·15 (9H，2s)。HPLC Rt= 3.318分鐘。！^1^13(111/2) 576 (]^+11)+。分析（(：271141>17〇58-0.25 H20) C，H，N，S。2(C)(r): (474 mg，76%)。巾 NMR (CDC13) δ·· 8.38 (1H，s)，8.08 (1H，s)，6·20 (1H，d，J=5.6 Hz)，5.87-5.80 (1H，m)，5.60 (1H，dd，J=5.8與 4.5 Hz)，5·54 (2H，s)，4·38 (1H， q，J=5.1 Hz)，4·15-4·11 (2H，m)，2.98 (2H，d，J=5.0 Hz)， 2.83-2.67 (2H，m)，2.50-2.32 (5H，m)，2.16 (3H，s)，1.82-1.72 -99- 200304380 (2H，m)，1·61-1·52 (4H，m)，1.48-1.30 (4H，m)，1·26與 1·24 (9Η，2s)，HPLC Rt=3.512分鐘。LRMS (m/z) 576 (Μ+Η)+。 分析（C27H41N7O5S-0.20 H20) C，H，N，S。 實例 2(C)(2)與 2(C)(2，）：（2S，3S，4R，5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤 -9-基）_4-(異丁醯氧基）-2-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-基1，4匕 聯哌啶-Γ_羧酸酯與（211，311，43,58)-2-(6-胺基-911-嘌呤_9-基） -4-(異丁醯氧基）-5-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-基1，4’-聯哌 啶羧酸酯
2(C)(1b) 2(C)(1b·)
於室溫下，在含醇2(C)(lb)與 2(C)(lb’）（202 mg’ 0·411 mmol)之CH2C12 (4 mL)溶液中添加異丁酸（95.0 mg，1.08 mmol)、1，3-二環己基碳化二亞胺（244 mg，1.19 mmol)與4-二甲胺基吡啶（3.2 mg，0.026 mmol)。24小時後’反應完成 ，添加DMF與i-PrOH之1 ·· 1混合物（1 mL)。真空排除CH2C12 ，留下DMF/i-PrOH溶液，經半製備性HPLC純化，於30分鐘 内使用20%A/80%B至40%A/60%B之線性梯度溶離’產生化 合物2(C)(2)與2(C)(2，）之白色粉末（分別為83·9 mg ’ 36%與 22.0 mg, 10%)°2(C)(2): lE NMR (CDC13) δ: 8.38 (1H, s)5 8.08 (lH，s)，6.18 (1H，d，J=6.0 Hz)，5·93 (1H，t，J=4.5 Hz)，5.58 (2H，s)，5.53 (1H，t，J =4·1 Hz)，4·46 (1H，q，J=4.9 Hz)，4.20 -100- 200304380 (2H，m)，3.00 (2H，d，J=5.1 Hz)，2.90-2.68 (2H，m)，2·60-2·38 (6H，m)，2.17 (3H，s)，1.87-1.83 (2H，m)，1·64-1·40 (8H，m)， 1.19-1.10 (6H，m)。HPLC Rt=3.322分鐘。LRMS (m/z) 562 (M+H)+。分析（C26H39N705S) C，H，N，S。2(C)(2’)： 4 NMR (CDC13) δ: 8·38 (1H，s)，8.08 (1H，s)，6·21 (1H，d，J=5.6 Hz)， 5·85 (1H，t，J=5.3 Hz)，5.63-5.56 (3H，m)，4.40 (1H，q，J=4.7 Hz)，4.18-4.04 (2H，m)，2.97 (2H，d，J=5.2 Hz)，2·85-2·55 (3H，m)，2.51-2.31 (5H，m)，2.16 (3H，s)，1.84-1.80 (2H，m)， 1.62-1.52 (4H，m)，1.48-1.31 (4H，m)，1·27_1·16 (6H，m)。 HPLC Rt=3.432 分鐘。LRMS (m/z) 562 (M+H)+。分析 (C26H39N7O5S-0.40 H20) C，H，N，S。 實例 2(C)(3)與 2(C)(3’）：（2S，3S，4R，5R)_5-(6•胺基-9H-嘌呤 -9-基）-4_({(2R)-2-[(第三丁氧羰基）胺基]丙醯基}氧）_2_[(甲 硫基）甲基]四氫呋喃-3-基1，4’-聯哌啶-I1-羧酸酯， 與（211，311，43,53)-2-(6-胺基_9^嘌呤-9-基）_4-({(211)-2-[(第 三丁氧羰基）胺基]丙醯基}氧）-5-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃 -3-基1，4’-聯哌啶羧酸酯。
於室溫下，在含醇2(C)(lb)與 2(C)(lb，）（329 mg，0.668 mmol)之CH2C12 (6·5 mL)溶液中添加N-(第三丁氧羰基）_L- -101 - 200304380 丙胺酸（329 mg，1.74 mmol)、1，3·二環己基碳化二亞胺（400 mg，1.94 mmol)與 4-二甲胺基叶1：咬（10 mg，0.082 mmol)。0.5 小時後，反應完成，過濾沉澱，添加DMFA-PrOH之1 : 1混 合物（2 mL)至濾液中。真空排除CH2C12，留下DMF/i_PrOH 溶液，經半製備性HPLC純化，於30分鐘内使用15%A/85%B 至35%A/65%B之線性梯度溶離，產生化合物2(C)(3)與 2(C)(3’）之白色粉末（分別為 134 mg，，30% 與36.9 1^，80/(〇 。2(C)(3):咕 NMR (CDC13) δ: 8·37 (1H，s), 8·01 (1H，s)，6.15 (1Η，d，J=5.3 Ηζ)，6.09-6.02 (1Η，m)，5.63-5.52 (3Η，m)，4.44 (1H，q，J=5.1 Ηζ)，4·38-4·26 (1H，m)，4.25-4.12 (2H，m), 2·99 (2H，d，J=5.2 Hz)，2·93-2·67 (2H，m)，2.54-2.36 (5H，m)，2.15 (3H，s)，1.90-1.80 (2H，m)，1·64-1·54 (4H，m), 1.51-1.25 (16H，m)。HPLC Rt=3.513 分鐘。LRMS (m/z) 663 (M+H)+。 分析(C30H46N8O7S) C，H，N，S。2(C)(3，)：咕 NMR (CDC13) δ: 8.37 (1H，s)，8.05 (lH，s)，6.17 (1H，d，J=5.4 Hz)，5.90 (1H，t， J=5.4 Hz)，5·70 (1H，t，J=4.8 Hz)，5·55 (2H，s)，4.41 (2H，q， J=4.9 Hz)，4·16-4·01 (2H，m)，2.97 (2H，d，J=5.1 Hz)， 2.86-2.64 (2H, m)5 2.53-2.30 (5H5 m)5 2.15 (3H? s)5 1.85-1.72 (2H，m)，1·61_1·51 (4H，m)，1.50-1.38 (16H，m)。HPLC Rt= 3.642分鐘。LRMS (m/z) 663 (M+H)+。分析（c30H46N8O7S) C， H，N，S。 實例 2(C)(4)與 2(C)(4，）：（2S，3S，4R，5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤 -9-基）-4-(苯甲酸氧基）-2-[(甲硫基）甲基]四氫决喃_3_基1，4’· 聯哌啶-1，-羧酸酯與（211，311，43,58)-2-(6-胺基_911-嘌呤-9-基） -102- 200304380 -4-(苯甲醯氧基）-5-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-基1，4’-聯哌 淀-1 ’ -棱版酉旨
於室溫下，在含醇 2(C)(lb)與 2(C)(lb’）（559 mg，1.14 mmol)之CH2C12 (1 mL)溶液中添加苯甲酸（250 mg，2·05 mmol)、1，3-二環己基碳化二亞胺（4 69 mg，2· 2 7 mmol)與 4-二甲胺基峨淀（17 mg，0.14 mmol)。45分鐘後，反應完成， 過濾沉澱，添加DMF/i-PrOH之3:1混合物（4mL)至濾液中。 真空排除CH2C12，留下DMF/i-PrOH溶液，經半製備性HPLC 純化，於30分鐘内使用20%A/80%B至25%A/75%B之線性梯 度溶離，產生化合物2(C)(4)與2(C)(4’）之白色粉末（分別為 264 mg，39%與 32.8 mg，5%)。2(C)(4):咕 NMR (CDC13) δ: 8·39 (1Η，s)，8·13 (1Η，s)，8·01 (2Η，m)，7·59 (1Η，t，J=7.5 Hz)，7·44 (2H，t，J=7.5 Hz)，6·37 (1H，d，J=5.3 Hz)，6.13 (1H， t，J=5.6 Hz)，5·67 (1H，t，J=5.1 Hz)，5.58 (2H，s)，4·54 (1H，q， J=4.7 Hz)，4·19-3·98 (2H，m)，3.06-3.03 (2H，m)，2.77-2.62 (2H，m)，2.52-2.27 (5H，m)，2.20 (3H，s)，1.82-1.71 (2H，m)， 1.63-1.48 (4H，m)，1.48-1.24 (4H，m)。HPLC Rt=3.483 分鐘。 LRMS (m/z) 596 (M+H)+。分析（C29H37N705S) C，H，N，S。 2(C)(4f): !H NMR (CDC13) δ: 8.40 (1H? s)? 8.11 (1H? s)5 -103- 200304380 8.03-8.06 (2H，m)，7·63 (1H，t，J=7.6 Ηζ)，7·49 (2H，t，J=7.9 Hz)，6.28 (1H，d，J=5.6 Hz)，6·05-5·98 (1H，m)，5.90-5.84 (1H，m)，5.54 (2H，s)，4.61 (1H，q，J=4.5 Hz)，4.13-3.88 (2H， m)，3.05 (2H，d，J=5.1 Ηζ)，2·68-2·53 (2H，m)，2·43-2·23 (5H， m)，2·19 (3H，s)，1·75·1·62 (2H，m)，1.58-1.47 (4H，m)， 1.48-1.25 (4H，m)。HPLC Rt=3.640分鐘。LRMS (m/z) 596 (M+H)+。分析（C29H37N7O5S-0.25 H20) C，H，N，S。 實例 2(C)(5)與 2(C)(5，）··（211，311，43,53)-2-(6-胺基_911-嘌呤 -9-基）-4-[({[2-(二甲胺基）乙基]胺基}羰基）氧]-5-[(甲硫基） 甲基]四氫呋喃-3-基特戊酸酯與（2S，3S，4R，5R)-5-(61^* -9H-嘌呤-9_基）_4-[({[2_(二甲基胺基）乙基]胺基}羰基）氧] -2-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-基特戊酸酯。
2(C)(5)(a)與 2(C)(5)(a，）：（28,38,411，511)-5-(6-胺基-911-嘌呤 -9-基）-4-經基-2-[(甲硫基）甲基]四氫吱喃-3-基2-(二甲基 胺基）乙基胺甲酸酯與（211，311，48,58)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）_4_羥基-5-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-基2·(二甲基胺基） 乙基胺甲酸酯。 於室溫下，在含2(C)(la)(1.90 g，5.88 mmol)之 DMF (5 mL) 各液中添加N，N_二甲基乙二胺（803 mg，9· 11 mmol)。於室 -104- 200304380 溫下20分鐘後，反應經HPLC判斷已完成。反應混合物直接 加至逆相管柱上（Biotage Flash 40i System，Flash 40M卡管， C_18, 10% Me0H/H20至100% MeOH梯度），分別產生標題化 合物 2(C)(5a)與 2(C)(5a’），比例 1.9:1。如同中間物2(C)(lb) 與2(C)(lb’），各位置選擇性異構物由於容易異構化，因此 未單離。
取醇 2(C)(5a)與 2(C)(5a，）(748 mg，1.82 mmol)依實例 2(C)(1)與2(C)(1’）之方法醯化及純化，產生標題化合物 2(C)(5)與2(C)(5’）之白色粉末（分別為243 mg，27%與128 mg ，14%)。化合物 2(C)(5): 4 NMR (CDC13) δ: 8.37 (1H，s)，8.05 (1Η，s)，6·16 (1Η，d，J=5.7 Ηζ)，5·87 (1Η，t，J=5.7 Ηζ)，5.67 (2H，s)，5.55 (1H，t，J=4.7 Hz)，5.51-5.44 (1H，m)，4.43 (1H， q，J=4.7 Hz)，3.31-3.21 (2H，m)，2·99-2·96 (2H，m)，2.41 (2H， q，J=4.4 Hz)，2·24 (6H，s)，2.17 (3H，s)，1·15 (9H，s)。 HPLC Rt=3.024 分鐘。LRMS (m/z) 496 (M+H)+。分析 (C21H33N705S) C，H，N，S。化合物 2(C)(5，）·· ^ NMR (CDC13) δ: 8.39 (1H，s)，8.07 (1H，s)，6.16 (1H，d，J=5.7 Hz)，5.86 (1H， t，J=5.8 Hz)，5.63-5.55 (3H，m)，5.42 (1H，t，J=5.1 Hz)，4.38 (1H，q，J=4.9 Hz)，3·19 (2H，q，J=5.7 Hz)，2·97 (2H，d，J=5.1 -105- 200304380
Hz)，2.37-2.33 (2H，m)，2.18 (6H，s)，2.16 (3H，s)，1·25 (9H， s)。HPLC Rt=3.291 分鐘。LRMS (m/z) 496 (M+H)+。分析 (C21H33N705S) C，H，N，S。 實例 2(C)(6)與 2(C)(6，）：（211，311，43,53)-2-(6-胺基-911-嘌呤冬 基）-4-[({[2·(二T基胺基）乙基]胺基}羰基）氧]-5-[(f硫基） 甲基]四氫呋喃-3-基苯甲酸酯與（2S,3S，4R，5R)-5-(6-—! -9H_嘌呤·9-基）-4_[({[2-(二甲基胺基）乙基]胺基}羰基）氧]· -2-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-基苯甲酸酯
2(〇)(5a) HN、
=0 2(C)(6)
nh2 HN、 2(C)(6*) 2(C)(5a·) 取醇 2(C)(5a)與 2(C)(5a’）（l.〇4 g，2.52 mmol)依實例 2(C) (4)與2(C)(4’）之方法Si化及純化，產生標題化合物2(c)(6) 與2((1：)(6’）之白色粉末（分別為 473 11^，36%與22〇11^，17%) 。化合物 2(C)(6): ^NMMCDCh) δ: 8.39 (1H，s)，8.11 (1H， s)，7·92 (2H，d，J=7.5 Ηζ)，7·56 (1H，t，J=7.5 Ηζ)，7·40 (2H，t， J =7.5 Hz)，6.35 (1H，d，J= 5·7 Hz)，6·18 (1H，t，J=5.6 Hz)， 5·70-5·61 (3H，m)，5·57·5·49 (1H，m)，4.52 (1H，q，J=4.7 Hz)， 3·23-3·16 (2H，m)，3.05-3.02 (2H，m)，2.34 (2H，q，J=5.8 Hz)， 2.19 (3H, s)，2.18 (6H，s)°HPLC Rt=3.090 分鐘。LRMS (m/z) 516 (M+H)+。分析（C23H29N705S) C，H，N，S。化合物 2(C)(6，）: !H NMR (CDC13)5: 8.40 (1H, s)? 8.11-8.08 (3H, m)? 7.62 (1H5 -106- 200304380 t，J=7.3 Ηζ)，7·48 (2H，t，J=7.5 Hz)，6.28 (1H，d，J=5.9 Hz)， 5·99 (1H，t，J=5.8 Hz)，5.87 (1H，t，J=4.1 Ηζ)，5·68 (2H，s)， 5·45 (1H，t，J=4.7 Hz)，4·57 (1H，q，J=4.3 Hz)，3.13 (2H，q， J=5.5 Hz)，3·06 (2H，d，J=5.3 Hz)，2.32-2.23 (2H，m)，2.19 (3H，s)，2·12 (6H，s)。HPLC Rt=3.348分鐘。LRMS (m/z) 516 (M+H)+ 0 分析（C23H29N705S) C，H，N，S。 實例 2(C)(7) : (2尺，311，48,53)-2-(6-胺基-911-嘌呤_9-基）-4-{[ (1-甲基旅淀-4-基）羰基]氧}-5_[(甲基硫燒基）甲基]四氫吱 喃-3-基1-甲基哌啶-4-羧酸酯
於室溫下，在含5’-去氧-5’-甲硫腺甞（MTA)(2.12 g，7.13 mmol)之CH2C12 (100 mL)不均相混合物中添加ι，3-二環己基 碳化二亞胺（4.85 g，23.5 mmol)與4-二甲基胺基吡啶（174 mg ，1·43 mmol)。16小時後，過濾排除沉澱，濾液經MeOH稀 釋，真空排除CH2C12。所得甲醇溶液經半製備性HPLC純化 ，於30分鐘内使用5%A/95%B至12%A/88%B之線性梯度溶離 ’產生 B⑴之白色粉末（207 mg，5.3%)。4 NMR (CDC13) δ: 8.37 (1Η，s)，8·03 (1Η，s)，6·14 (1Η，d，J=5.7 Ηζ)，5.98 (1Η，t， J=5.6 Hz)，5.65 (1H，t，J=5.6 Hz)，5·64 (2H，s)，4·39 (1H，q， J=4.7Hz)，2.98(2H，d，J=5.0Hz)，2.86-2.82 (2H，m)，2.78-2.72 (2H，m)，2.39-2.21 (2H，m)，2.29 (3H，s)，2·24 (3H，s)， -107- 200304380 2.16 (3H，s)，2.05-1.66 (12H，m)。HPLC Rt=2.637分鐘。LRMS (m/z) 548 (M+H)+。分析（C25H37N7O5S-0.20 H20) C，H，N，S。 實例2(C)(8)與 2(C)(9) ·· (211，311，43,53)_4-(乙醯基氧）-2_(6-胺 基-9H-嘌呤-9-基）-5-[(乙基硫烷基）甲基]四氫呋喃_3_基乙 酸酯與（211，311，43,53)-4-(乙醯基氧）-2-(6-胺基_911-嘌呤_9- 基）-5-[(異丁基硫烷基）甲基]四氫呋喃-3-基乙酸酯 下列5、去氧5’-烷硫腺甞之2，，3，-二乙酸酯衍生物係依據· M· J. Robins等人說明於J. Org. Chem. 59，544 (1994)中之方 法製備。
nh2 2<C购 2(c)(8): lU NMR (DMSO-d6) δ: 1.14 (t, 3H, J=7.4 Hz)5 2.04 (s，3H)，2.15 (s，3Η)，2·54 (q，2H，J=7.4 Hz)，2.95-3.10 (m， 2H)，4.31 (dd，1H，J=6.4, 6.0 Hz)，5.60 (dd，1H，J=5.3, 4.3 Hz)，6.12-6.18 (m，1H)，6.20-6.25 (m，1H)，7.44 (s，2H)，8.22 (s，1H)，8·44 (s，1H)°LRMS (m/z) 395 (M+H)+。分析（(：161121川058-1.0 H20) C，H，N，S 0 2(c)(9):咕 NMR (DMSO-d6)5:0.82 (t， 6H，J=7.0 Hz)，1.62-1.75 (m，1H)，2.00 (s，3H)，2.11 (s，3H)， 2.32-2.46 (m，2H)，2.93-3.07 (m，2H)，4.25-4.35 (m，lH)，5.56 -108- 200304380 (t，1H，J=4.4 Ηζ)，6·15-6·27 (m，2H)，7.41 (s，2H)，8·17 (s， 1H)，8.40 (s，lH)。LRMS (m/z) 423 (M+H)+。分析((：181125乂053-0.5 H20) C，H，N，S。 實例 2(C)(10) ·· (2S，3S,4R，5R)-5-(6-胺基9H_嘌呤_9-基）-4- 疊氮基_2·[(甲硫基）甲基]四氫呋喃_3-醇。
中間物2(C)(10b): (211，33,48,53)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基） • 4-{[第三丁基（二甲基）矽烷基]氧}-5-[(甲硫基）甲基]四氫 呋喃_3_基碳酸氫鹽。於0°C下，在含2(C)(10a)(依據Gavagnin 與 Sodano述於Nucleosides & Nucleotides，8，1319 (1989)中 之方法製備）（1.82 g，4.42 mmol)、p比淀（3 mL)與 DMAP (1.78 g，14.6 mmol)之CH2C12 (150 mL)溶液中滴加三氟甲磺酸酐 (1.42 g，8.46 mmol)。1小時後，反應混合物倒至冷的1N
NaHS04中，分佈在CHC13之間。有機層濃縮，所得殘質溶 於HMPA (20 mL)中，以 NaOAc (2.99 g，36.5 mmol)處理， 溫至40°C 1小時後，於室溫下攪拌16小時。反應混合物倒 至H20中，分佈在CHC13之間。有機層真空濃縮，所得殘質 經逆相層析法純化（Biotage Fash 40, 018) ’以5-60%乙腈之 H20溶液線性梯度溶離，產生2(C)(10b)之白色固體（〇·437 g ，22%)。LRMS (m/z) 454 (M+H)+。 -109- 200304380 中間物2(C)(10c) : 9_{(211，311，43,53)-3-疊氮基-4_{[第三丁 基（二甲基）矽烷基]氧卜5-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-2-基}
-9H-口票呤-6-胺。取含 2(C)(l〇b)(0.437 g，0.964 mmol)之MeOH (30 mL)經NH3 (氣體）飽和。20分鐘後已完全排除乙酸根， 之後真空排除溶劑與試劑，產生游離醇之黃色固體。此粗 產物溶於0°C下之CH2Cl2(30mL)中，添加吡啶（0.685g，8.65 mmol)與DMAP (0.391 g，3.20 mmol)後，滴加三氟甲續酸肝 (0.395 g，2.35 mmol)。於〇°C下3小時後，反應混合物倒至 冷的lNNaHSCU中，分佈在CHC13之間。有機層濃縮。所得 三氟甲磺酸酯粗產物溶於DMF(40mL)中，以NaN3(〇.627 g ，9.65 mmol)處理。於室溫下16小時後，真空排除DMF，殘 質部份溶於CHC13中，以水洗滌。有機層濃縮，產生中間物 2(C)(l〇c)之黃色油狀物。此物質未再進一步純化即使用。 LRMS (m/z) 436 (M+H)+。 標題化合物2(C)(10)之製法如下。於〇°C下，在含2(C)(10c) 之THF (20 mL)溶液中滴加TBAF (1M之THF，1.5 mL，1.5 mmol)。於室溫下30分鐘後，添加AcOH (0.5 mL)與CH2C12 (50 mL)，反應混合物經已先經過矽酮處理之濾紙過濾 (Whatman IPS)，真空濃縮。所得殘質經逆向半製備性HPLC ，使用水與乙腈（各含0.1 % v/v乙酸）為移動相純化，產生標 題化合物2(C)(10)之白色粉末（103 mg，18%)。4 NMR (DMSO-d6) δ: 8·37 (1H，s)，8·17 (1H，s)，7.38 (2H，s)，6.16 (1Η，s)，6·02 (1Η，d, J=5.8 Ηζ)，4·88 (1Η，t，J=5.7 Ηζ)，4.59 (1H，t，J=4.5 Hz)，4·06 (1H，q，J=5.8 Hz)，2·91 (1H，dd， -110- 200304380 J=13.9與 5·7 Hz)，2.79 (1H，dd，J=16.4與 7·0 Ηζ)，2·05 (3H，s) 。LRMS (m/z) 323 (M+H)+。分析（CuHwNsC^S-OJ H20) C，H， 一 N，S。 實例 2(C)(11) : (28,38,4尺，51〇-4-胺基-5-(6_胺基-911-嘌呤-9- 基）-2_[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3_醇。
於 A 溫下’在含 2(C)(10)(0.480 g’ 1.49 mmol)之 ρ比淀（40 mL)溶液中添加PPh3 (0.586 g，2.24 mmol)。24小時後，加水 (5mL)，反應再攪拌60小時。真空排除溶劑，所得殘質溶於 水中，以EhO洗滌。水層經真空濃縮，所得殘質經逆相層 析法純化（Biotage Flash 40M，C_18)，以 5-10% 乙腈之 H20溶 液線性梯度溶離純化，產生2(C)( 11)之白色粉末（176 mg， 40%)。咕 NMR (DMSO-d6) δ: 8·35 (1H，s)，8·14 (1H，s)，7.27 參 (2Η，s)，5.72 (1Η，d，J=7.8 Ηζ)，4·19-4·15 (1Η，m)，4.10-4.02 (2H，m)，2.88 (1H，dd，J=13.9與 6·8 Hz)，2·79 (1H，dd，J=13.6 、 與 6.6 Hz)，2.06 (3H，s)。LRMS (m/z) 297 (M+H)+。分析 · (CuHaN^S-iMO H2〇) C，H，N，S 0 實例 2(C)(12) : (28,3以，411，511)-5-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-4-氯-2_[(甲硫基）甲基]四氫呋喃_3·醇。 -111 - 200304380
中間物2(C)(12b): (211，33,43,53)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9_基） -5-[(甲硫基）甲基]-4-(四氩_2H_吡喃-2·基氧）四氫呋喃_3-醇' 。在含MTA [J· A. Montgomery 等人之 J. Med· Chem. 17, 1197 (1974); Gavagnin與 Sodano之 Nucleosides & Nucleotides 8, 1319 (1989)](0·480 g，1.61 mmol)之DMF (36 mL)溶液中添 加二氫p比喃（8 mL)與對甲苯績酸（0.450 g，2.37 mmol)。於 室溫下45分鐘後，添加飽和NaHC03水溶液（200 mL)，水溶 液經EtOAc萃取。有機層濃縮，殘質經丙酮/CH2C12層析（以 2 : 1溶離產物），產生2(C)(12b)之白色固體（0.413g，67%) 。LRMS (m/z) 382 (M+H)+。 中間物2(C)(12c): 9-[(211，311，411，58)-3-氯-5-[(甲硫基）甲基] -4-(四氫-2H-吡喃_2_基氧）四氫呋喃-2-基]_9H-嘌呤-6-胺於0°C 下，取含2(C)(12b)(0.361 g，0.946 mmol)、吡啶（0.684g，8.65 mmol)與 DMAP (0.381 g，3.12 mmol)之 CH2C12 (40 mL)溶液 ，滴加三氟甲磺酸酐（0.395 g，2.35 mmol)處理。於0°C下2 小時後，反應混合物倒至冷的lNNaHS04中，以CHC13萃取 ，有機層濃縮。所得殘質溶於DMF (60 mL)中，以四丁基銨 化氣水合物（0.526 g，1.89 mmol)處理。於室溫下16小時後 ，真空排除DMF，所得殘質經丙酮/CH2C12層析（以1:1溶離 -112- 200304380 產物），產生 2(C)(12c)之白色固體（0.270g，71%)。LRMS (m/z) 400 (M+H)+。
標題化合物2(C)(12)之製法如下。取含2(C)(12c)(0.226 g ，0.565 mmol)之 MeOH (20 mL)溶液經 IN HC1 水溶液（20 mL) 處理。於室溫下1小時後，反應混合物倒至H20中，以NaHC03 中和，以CHC13萃取與濃縮。所得殘質經逆相層析法純化 (Biotage Flash 40M，C-18)，以乙腈/H20 (1:4)溶離純化，產 生標題化合物之白色粉末（126 mg，71%)。4 NMR (DMSO_d6) δ: 8·41 (1H，s)，8·17 (1H，s)，7·39 (2H，s)，6.16 (1Η，d，J=7.3 Ηζ)，6·11 (1Η，d，J=5.1 Ηζ)，5.40-5.37 (1Η，m)， 4.39 (1H，q，J=2.8 Hz)，4·15 (1H，dt，J=6.6與 2.8 Hz)，2.91 (1H，dd，J=13.9與 6.3 Hz)，2·83 (1H，dd，J=13.9與 6.8 Hz)， 2·07 (3H，s)。LRMS (m/z) 316 (M+H)+。 實例2(D) : MTAP受質之嘌呤類似物合成法 下列實例說明製備嘌呤環之6,位置之MTA類似物。 反應圖VII出示製備5,腺:y：類似物之其他前藥之方法。前 藥之嘌呤環6’位置上氮經取代。由VIIa開始，化合物於所有 開放位置上醯化（2 ’與3 ’醇及腺嘌呤環之N6)，產生中間物 Vllb。醯化基團包括（但不限於）··羧酸、胺基酸、羧酸酐， 等等，其中包含完整或受遮蔽之溶解基團（R)。化合物vnb 典型地不單離’㈤a即置彡水解條件下（亦即如011或相關 試劑），以排除酯，產生VII。必要時，VII可或不再進一步 處理，以釋出所需溶解基團。 -113- 200304380
反應圖VII
實例 2(D)(1):沁(9-{(211，311，43,53)_3,4-二羥基-5-[(甲硫基） 甲基]四氫呋喃-2-基卜9H-嘌呤-6-基）苯甲醯胺。
於室溫下，在含MTA (1.12 g，3.78 mmol)之吡啶（47 mL) 溶液中添加苯甲醯氯（1.6 mL，13.8 mmol)。1小時後，再添 加苯甲酿氣（0.4 mL，3.45 mmol)。反應再攪拌1小時後，真 空排除吡啶。所得泡沫狀物溶於EtOH (35 mL)與THF (30 mL)中，以2NNaOH(26mL)處理。1小時後，反應加冰（100 mL)與pH=7磷酸鹽緩衝液（50 mL)稀釋，以IN HC1中和。水 溶液經CHC13萃取及濃縮，所得固體與CHC13/Et20研磨，產 生標題化合物之白色固體（1·32 g，3.28 mmol)。咕NMR (DMSO-d6) δ: 11.23 (1H，s)，8.78 (1H，s)，8.73 (1H，s)，8·05 (2Η，d，J=7.2 Ηζ)，7·66 (1Η，t，J=7.2 Ηζ)，7.56 (2Η，t，J=8.1 Hz)，6.05 (1H，d，J=5.8 Hz)，5.62 (1H，d，J=6.0 Hz)，5.41 (1H， d，J=4.9 Hz)，4·83 (1H，q，J=5.3 Hz)，4.19 (1H，q，J=3.8 Hz)， 4.17-4.06 (1H，m)，2·92 (1H，dd，J=13.9與 5.8 Hz)，2.82 (1H， dd，J=13.9與 6·8 Hz)，2.07 (3H，s)。LRMS (m/z) 402 (M+H)+ -114- 200304380 。分析（C18H19N504S) C，H，N，S。 實例 2(D)(2) : 5-[(9-{(211，311，48,58)-3,4-二羥基-5-[(甲硫基）一 甲基]四氫呋喃-2-基}-9士嘌呤·6-基）胺基]-5-氧代戊酸。
於室溫下’在含ΜΤΑ (1.07 g，3.60 mmol)之峨淀（45 mL) · 溶液中添加乙基戊二醯氯（2.3 mL，14.6 mmol)。16小時後鲁 ，真空排除吡啶，所得泡沫狀物再溶於EtOH (35 mL)與THF (50 mL)中，以2N NaOH (40 mL)處理。於〇°C下1小時後，反 應加pH=7磷酸鹽緩衝液（50mL)稀釋，以1NHC1中和。水溶 液經CHCh萃取及濃縮，所得固體經半製備性HPLC純化， 產生標題化合物之白色固體（154 mg，10%)。士 NMR (DMSO-d6) δ: 10.72 (1H，s)，8·69 (1H, s)，8.67 (1H，s)，6.01 (1H， d，J=5.8 Ηζ)，5·62-5·56 (1Η，m)，5.41-5.37 (1Η，m)，4.82-4.75 (1Η， m)，4.20-4.14 (1H，m)，4.10-4.03 (1H，m)，2.91 (1H，dd，J=13.9與， 5.8 Hz)，2·82 (1H, dd，J=13.9與6.8 Hz)，2.61 (2H, t，J=7.2 Hz)，
2.30 (2H，t，J=7.4 Hz)，2.06 (3H, s)，1.87-1.77 (2H，m)。LRMS $ (m/z) 412 (M+H)+。分析(C16H21N506S) C，H，N，S。 實例2(0)(3):6-[(9-{(211，311，48,58)-3,4-二經基-5-[(甲硫基） 甲基]四氫呋喃-2-基}-9仏嘌呤-6-基）胺基]-6-氧代己酸。
-115- 200304380 類似上述實例，使用己二醯基氯與MTA製備標題化合物 2(D)(3)。4 NMR (DMSO-d6) δ·· 12.02 (1Η，br s)，10.70 (1Η， s)，8·69 (1H，s)，8·67 (1H，s)，6·01 (1H，d，J=5.8 Hz)， 5·63-5·55 (1H，m)，5·43-5·36 (1H，m)，4.79 (1H，t，J=5.5 Hz)， 4.21-4.14 (1H，m)，4.11-4.03 (lH，m)，2.91 (1H，dd，J=13.9與 6·0 Hz)，2.80 (1H，dd，J=14.3與 6·0 Hz)，2·57 (2H，t，J=6.6 Hz)，2·25 (2H，t，J=6.8 Hz)，2.06 (3H，s)，1·67-1·49 (4H，m) ° LRMS (m/z) 426 (M+H)+。分析（C17H23N5O6S-0.4 H20) C，H， N，S。 實例2(E) : MTAP受質之其他腺站類似物之合成法 反應圖VIII與IX出示製備糖環5,位置之腺苷類似物之一 般方法，其中2’位置已經過修飾。反應圖νιπ中，該順序始 自2’位置已經過修飾之適當中間物（vnia)。5，位置轉化成脫 離基（vnib; x=ci)，隨後被硫醇基置換，產生所需產*vnic 。起始二醇Villa之立體化學性沒有指定，其可為其中一種 非對映異構物。
反應圖VIII
或者，反應圖IX說明之順序中，5,位置已經過適當硫醇 取代。選擇性保護3’位置，產生所需醇起始物IXa。醇 轉化成脫離基（IXb ; X=三氟甲磺酸，然後再被親 核物置換（包括（但不限於）疊氮化物、硫醇、胺、醇等等） -116- 200304380 。脫除3’保護基後，得到終產物。依中間物之立體化學性 質而定，可能同時得到兩種產物，亦即IXc或IXc’。
反應圖IX
實例 2(E)(1) : (23,311，411，51〇_5_(6_胺基-911-嘌呤-9-基）-4-(甲 硫基）·2_[(甲硫基）甲基]四氫呋喃-3-醇。
由8-甲基_2’-硫腺誓（化〇1^118等人之1.八11161\0^111.8〇〇·· 1996，46，11341·; Fraser 等人之 J· Heterocycl. Chem. 1993，5, 1277·; Montgomery，Τ·之 J. Heterocycl. Chem. 1979，16，353·; Ryan等人之J. Org. Chem. 1971，36, 2646.)製備標題化合物 。在含 S-甲基-2’-硫腺茹（0.365g，1.23 mmol)之 DMF (10 mL) 與 CCl4(2mL)溶液中添加 PPh3 (0.322g，1.23 mmol)。於室溫 下0.5小時後，以i-PiOH(lOmL)中止反應，混合物真空濃縮 。所得油狀物再溶於DMF (10 mL)中，以NaSMe (0.222 g， 3.17 mmol)處理。於室溫下16小時後，反應混合物真空濃縮 ，所得粗產物殘質經半製備性HPLC純化，於30分鐘内使用 -117- 200304380 10%A/90%B至30%A/70%B之線性梯度溶離，產生標題化合 物之白色粉末（72.4 mg，18%)。4 NMR (DMSO-d6) δ: 8.43 (1Η，s)，8·17 (1Η，s)，7·35 (2Η，s)，6.12 (1Η，d，J=8.6 Ηζ)， 5.89 (1H，bs)，4.35-4.24 (2H，m)，4·08 (1H，t，J=6.6 Hz)，2.90 (1H，dd，J=13.9與 7.1 Hz)，2.82 (1H，dd，J=13.6與 6.8 Hz)， 2.08 (3H，s)，1·79 (3H，s)。分析（C12H17N502S2) C，H，N，S。 實例 2(E)(2) ·· (23,3以，4化，5&)-5-(6-胺基-911-嘌呤_9-基）-4-(乙 硫基）-2-[(甲硫基）甲基]四氫呋喃_3-醇。
類似S-甲基-2’-硫腺苷之製法（參見上述文獻），製備^乙 基_2’_硫腺誓’並依上述實例之製法轉化成標題化合物。 NMR _SO-d6) δ·· 8·44 (1H，s)，8·16 (1H，s)，7·34 (2H，s)， 6.07(lH，d，J=8.8Hz)，5.83(lH，s)，4.39-4.36 (lH，m)，4.28-4.26 (1Η，m)，4.08 (1Η，t，J=6.8 Ηζ)，2·92 (1Η，dd，J=13.9與 7·3 Hz)，2·83 (1H，dd，J=13.6與 6.8 Hz)，2.21 (2H，q，J=7.3 Hz)，2.07 (3H，s)，0.92 (3H，t，J=7.3 Hz)。LRMS (m/z) 342 (M+H)+。分析（C13H19N5O2S2-0.2 己烷），C，H，N，S。 實例2(F) ·· MTAP受質之硫醇類似物合成法 下列實例採用實例2(A)中反應圖1之製法，使用氯腺甞 ，及改用適當硫醇鹽試劑替代NaSCH3製備。若製備此等硫 醇所使用之硫醇鹽無法自商品取得時，該陰離子可使用第 三丁醇鉀於原位產生。 -118- 200304380 實例 2(F)(1) : (28,33,4尺，51〇-2_(6-胺基-9^1-嘌呤_9_基）-5-{[ (4-氯苯甲基）硫]甲基}四氫呋喃_3,4·二醇
!H-NMR (DMSO-d6) δ: 8.35 (1H? s)5 8.15 (lH?s)? 7.33-7.23 : (6H，m)，5.89 (1H，d，J=5.2 Hz)，5·53 (1H，d，J=5.8 Hz)，5.33 · (1H，d，J=5.2 Hz)，4.77-4.72 (1H，m)，4.20-4.15 (1H，m)， · 4.02-3.98 (1H，m)，3·73 (2H，s)，2·86-2·67 (2H，m)。LRMS (m/z) 408 (M+H)+。分析（C17H18C1N503S) C，H，N，S。 實例 2(F)(2) : (2S,3S，4R，5R)-2-(6·胺基-9H_嘌呤-9-基）-5-{[(3-羥丙基）硫]甲基}四氫呋喃-3,4二醇。
iH-NMR (DMSO-d6) δ: 8.35 (1H，s)，8·15 (1H，s)，7·29 (2H， · s)，5.89 (1H d，J=5.8 Hz)，5·49 (1H，s，J=6.2 Hz)，5·32 (1H，s， J=4.9 Hz)，4.78-4.73 (1H，m)，4.47-4.43 (1H，m)，4.17-4.12 (1H，m)，4.03-3.98 (1H，m)，3.43-3.37 (2H，m)，2·94-2·76(1Η， . m)，2.57-2.52 (2H，m)，1·67·1·58 (2H，m)。LRMS (m/z) 442 (M+H)+。分析（C13H19N5O4S_0.3H2O, 0.1 MeOH) C，H，N，S。 實例 2(F)(3) : (23,33,411，51〇-2-(6-胺基-911-嘌呤_9-基）-5-[( 嘧啶_2-基硫）甲基]四氫吱喃-3,4-二醇。 -119- 200304380
iH-NMR (DMSO-d6) δ: 8.64 (2H，d，J=4.9 Hz)，8.37 (1H，s)， 8.15 (1H，s)，7.30 (2H，s)，7·23 (1H，t，J=4.9 Hz)，5.90 (1H，d， J=6.2 Hz)，5.51 (1H，d，J=6.2 Hz)，5·39 (1H，d，J=4.7 Hz)， 4.89-4.83 (1H，m)，4·23-4·19 (1H，s)，4.15-4.10 (1H，s)， 3·64-3·45 (1H，m)。LRMS (m/z) 362 (M+H).。*；^(C14H15N703S- 0.75 H20, 0.25 MeOH) C，H，N, S。 實例 2(F)(4) : (28,33,411，51〇-2-(6-胺基-911-嘌呤_9-基）-5-{[(2_甲基丁基）硫]甲基}四氩呋喃_3,4-二醇
W-NMR (DMSO-d6) δ: 8·35 (1H，s)，8·15 (1H，s)，7·29 (2H， φ s)，5.88 (1Η，d，J=4.7 Ηζ)，5·49 (1Η，d，J=6.2 Ηζ)，5·29 (1Η， d，J=4.5 Ηζ)，4·77 (br s，1Η)，4.15 (br s，lH)，4·01 (brs，1Η)， k % 2·91-2·81 (2H，m)，2.38-2.31 (lH，m)，1.48 (brs，1H)，1.32(br s，1H)，1.10 (bi* s，1H)，0·87·0·77 (6H，m)。LRMS (m/z) 354 (M+H)+。分析（C15H23N5〇3S-0.5 H20) C，H，N，S。 實例2(卩)（5):(28,38,411，511)_2-(6-胺基-911_嘌呤-9-基）-5-{[(4-甲氧冬甲基）硫]甲基}四氫吱喃_3,4_二醇。 -120- 200304380
iH-NMR (DMSO-d6) δ: 8·35 (1H，s)，8.14 (1H，s)，7·31 (2H， s)，7.13 (2H，d，J=8.4 Hz)，6·81 (2H，d，J=8.4 Hz)，5.89 (1H， d5 J=5.2 Hz)，5.51 (1H，d，J=6.0 Hz)，5.31 (1H，d，J=5.0 Hz)，4.77-4.71 (1H，m)，4.20-4.15 (1H，m)，4.04-3.98 (1H，m)， 3·72 (3H，s)，3·68 (2H，s)，2.85-2.61 (2H，m)。LRMS (m/z) 404 (M+H)+。分析（C18H21N5O4S-0.5 H20) C，H，N，S。 實例 2(F)(6) : (28,38,411，511)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）_5-[( 喳啉-2-基硫）甲基]四氫呋喃-3,4-二醇。
'H-NMR (DMSO-d6) δ: 8.31 (1H? s)? 8.09-8.06 (2Η5 m)5 7.83-7.77 (2Η，m)，7·65-7·59 (1Η，m)，7·44-7·42 (1Η，m)，7.31 (1H，d，J=8.6 Hz)，7·21 (2H，s)，5·82 (1H，d，J=6.4 Hz)，5·42 (1H，d，J=6.2 Hz)，5.28 (1H，d，J=4.9 Hz)，4·88·4·82 (1H，m)， 4.17-4.08 (2H，m)，3·79-3 52 (2H，m)。LRMS (m/z) 411 (M+H)4"。分析（C19H18N603S) C，H，N，S。 實例 2(F)(7) : (2尺，311，48,58)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-5-{[ (3-甲基苯基）硫]甲基}四氫咬喃·3，ζμ二醇
-121 - 200304380 ^ NMR(DMSO-d6) δ: 8.34 (1H，s)，8.14 (1H，s)，7.30 (2H，s)， 7.18-7.11 (3H，m)，6.98 (1H，d，J=7.1 Hz)，5·88 (1H，d，J=5.8 Hz)，5.51 (1H，d，J=6.3 Hz)，5.36 (lH，d，J= 5·1 Hz)，4.81 (1H， q，J=5.8 Hz)，4.18 (1H，q，J=3.8 Hz)，3·98 (1H，q，J=3.8 Hz)， 3.39 (1H，dd，J=13.9與 6.1 Hz)，3.28 (1H，dd，J=13.9與 6.06 Hz), 2.34 (3H, s)。LRMS (m/z) 374 (M+H)+。分析 (C17H19N5O3S-0.5 H20) C，H，N，S。 實例 2(F)(8) ·· (2尺，311，43,53)_2-(6_胺基_911-嘌呤-9-基）-5-{[ (4-甲基苯基）硫]甲基}四氫呋喃-3,4-二醇
4 NMR (DMSO-d6) δ: 8.34 (1H，s)，8·14 (1H，s)，7·30 (2H， s)，7.25 (2Η, d，J=8.3 Hz), 7·11 (1Η，d，J=8.3 Ηζ)，5·87 (1Η， d，J=5.8 Hz)，5·50 (1H，d，J=6.3 Ηζ)，5·35 (1H，d，J=4.8 Hz)， 4.80 (1H，q，J=6.1 Hz)，4.16 (1H，q，J=3.3 Hz)，3·96 (1H，m)， 3.36 (1H，dd，J=13.9與 6.06 Hz)，3·23 (1H，dd，J=13.9與 7.06 Hz)，2.25 (3H，s)。LRMS (m/z) 374 (M+H)+。分析（(：171119仏033-0.70 H20) C, H，N，S。 實例 2(F)(9) : (211，311，43,58)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-5-{[ (2-甲氧苯基）硫]甲基}四氩呋喃_3,4-二醇
-122- 200304380 lU NMR (DMSO-d6) δ: 8.35 (1H, s)? 8.14 (1H? s)5 7.29 (2H5 s)，7.27 (1H，d，J=7.8 Hz)，7.17 (1H，t，J=7.6 Hz)，6.97 (d，1H， J=8.1 Hz)，6·96 (t，1H，J=7.3 Ηζ)，5·87 (1H，d，J=6.1 Hz)，5.50 (1H，d，J=6.1 Hz)，5·36 (1H，d，J=4.8 Hz)，4.81 (1H，q，J=5.3 Hz)，4·18 (1H，q，J=3.3 Hz)，4.00-3.95 (1H，m)，3·79 (s，3H)， 3.37-3.30 (lH，m)，3·22·3·15 (1H，m)。 LRMS (m/z) 390 (M+H)+。分析（C17H19N504S-0.50 H20) C，H，N，S。 實例 2(F)(10) : (211，311，43,58)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-5_{[ (3-甲氧苯基）硫]甲基}四氫呋喃_3,4-二醇
!H NMR (DMSO-d6) δ: 8.34 (1Η, s), 8.14 (1H, s)? 7.30 (2H, s)，7.19 (1H，t，J=7.8 Hz)，6.90-6.89 (2H，m)，6·74 (d，1H， J=8.1 Hz)，5·88 (1H，d，J=5.8 Hz)，5·52 (1H，d，J=6.1 Hz)， 5·38 (1H，d，J=5.1 Hz)，4.80 (1H，q，J=5.6 Hz)，4·19 (1H，q， J=3.8 Hz)，4.01-3.97 (1H，m)，3.70 (s，3H)，3.43 (1H，dd， J=13.9 與 5.8 Hz)，3·29 (1H，dd，J=14.2 與 7.1 Hz)。LRMS (m/z) 390 (M+H)+。分析（C17H19N504S-0.50 H20) C，Η, N，S。 實例 2(F)(11) ·· (211，311，48,58)-2-(6-胺基_911_嘌呤9-基）-5-{[ (4·甲氧苯基）硫]甲基}四氫呋喃-3,4-二醇
-123- 200304380 4 NMR (DMSO-d6) δ: 8·33(1Η，s)，8·14 (1H，s)，7·31 (2H，d， J=8.8 Hz)，7.29 (2H，s)，6.87 (2H，d，J=8.8 Hz)，5.86 (1H，d， J=6.1 Hz)，5.48 (1H，d，J=6.1 Hz)，5.33 (1H，d，J=4.8 Hz)， 4.80 (1H，q，J=5.3 Hz)，4.14 (1H，q，J=4.8 Hz)，3·94-3·90 (1H， m)，3.72 (s，3H)，3·27 (1H，dd，J=13.9與 6·1 Hz)，3·10 (1H，dd， J=13.9與7·1 Hz)。LRMS (m/z) 390 (M+H)+。分析（(：1711191^5〇43-〇·5 H2〇) C，H，N，S。 實例 2(F)(12) ·· (211，311，48,58)_2-(6-胺基_911-嘌呤-9-基）-5-{[ (2·甲基苯甲基）硫]甲基}四氫呋喃_3,4_二醇
4 NMR (DMSO-d6) δ: 8·35(1Η，s)，8·14 (1H，s)，7·30 (2H，s)， 7.14-7.02 (4Η，m)，5.89 (1Η，d，J=5.5 Ηζ)，5·51 (1Η，d，J=6.0 Hz)，5·32 (1H，d，J=5.3 Hz)，4·76 (1H，q，J=4.3 Hz)，4.17 (1H， q，J=4.7 Hz)，4·05·4·00 (1H，m)，3.73 (s，2H)，2·87 (1H，dd， J=13.8與 5·8 Hz)，2·73 (1H，dd，J=13.9與 7·0 Hz), 2.28 (s，3H) ° LRMS (m/z) 388 (M+H)+。分析（c18H21N503S- 0.40 H20) C， H，N，S。 實例 2(F)(13) : (211，311，48,58)-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-5-{[ (3-甲基苯甲基）硫]甲基丨四氫呋喃·3,4_二醇
-124- 200304380 咕 NMR (DMSO_d6) δ: 8.34 (1H，s)，8.13 (1H，s)，7·30 (2H， s)，7·15 (1H，t，J=7.4 Hz)，7.04-7.00 (3H，m)，5·88 (1H，d， J=5.5 Hz)，5.51 (1H，d，J= 5·8 Hz)，5.31(1H，d，J=5.3 Hz)， 4.73 (1H，q，J=5.3 Hz)，4·17 (1H, q，J=4.7 Hz)，4.04-3.98 (lH，m)，3·69 (s，2H)，2·83 (1H，dd，J=13.9與 5.8 Hz)，2.68 (1H，dd，J=13.8與 7.0 Hz)，2·25 (s，3H)。LRMS (m/z) 388 (M+H)。分析（C18H21N503S-0.50 H20) C，H，N，S。 實例 2(F)(14) : (211，311，43,53)-2-(6_胺基_911-嘌呤-9_基）-5-({ [3-(三氟甲基）苯基]硫}甲基）四氫吱喃_3,4 —二醇
!H NMR (DMSO-d6) δ: 8.33 (1Η, s)5 8.14 (1H, s), 7.66-7.59 (2H，m)，7.51-7.47 (2H，m)，7.31 (2H，s)，5.90 (1H，d，J=5.7 Hz)，5·56 (1H，d，J=6.0 Hz)，5.42 (1H，d，J=4.5 Hz)，4.84-4.77 (1H，m)，4.25-4.18 (1H，m)，4·05_3·99 (1H，m)，3·53 (1H，dd， 】=13.8與5.8 1^)，3.44(111，（^，】=14.3與7.5 1^)。1^]^3(111/2) 428 (M+H)。分析（C17H16F3N503S) C，H，N，S。 實例 2(F)(15) : (211，311，48,53)_2-(6-胺基_911_嘌呤_9-基）_5-({ [4-(三氟甲基）苯基]硫}甲基）四氫呋喃-3,4-二醇
咕 NMR (DMSO-d6) δ: 8.36 (1H，s)，8·15 (1H，s)，7·60 (2H，d， -125- 200304380 J=8.3 Hz)，7.51 (2H，d，J=8.3 Hz)，7.31 (2H，s)，5.90 (1H，d， J=5.8 Hz)，5.57 (1H，d，J=5.8 Hz)，5.41 (1H，d，J=5.1 Hz)， 4·83 (1H，q，J=5.3 Hz)，4.25-4.19 (1H，m)，4.08-4.00 (1H，m)， 3·54 (1H，dd，J=13.8與 5.5 Hz)，3.44 (1H，dd，J=13.6與 7·0 Hz) 。LRMS (m/z) 428 (M+H)。分析（C17H16F3N5O3S-0.50 H20) C， H，N，S。 實例 2(F)(16) : (211，311，43,53)-2-(6-胺基-911_嘌呤-9-基）-5-{[ (2-吡啶乙基）硫]甲基}四氩呋喃-3，4-二醇
NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 2.57 (t5 2H? J= 6.0 Hz) 2.87 (m，2H) 3.49 (q，2H，J=6.0 Hz) 4.01 (m，J=3.58 Hz，1H) 4.13 (m，1H) 5·32 (s，1H) 5.50 (s，1H) 5.87 (d，J=5.65 Hz，1H) 7.20 (m，2 H) 7.36 (s，2 H) 7.68 (td，J=7.68, 1.79 Hz，lH) 8.15 (s，1H) 8·36 (s，1H) 8.46 (d，J=4.14 Hz，1H)。分析 C17H-20N6O3S · 1H20計算值 C: 50.24, Η: 5·46, N: 20.68, S: 7.89。 實測值C: 50.18, H: 5.29, N: 20.60, S: 7.80。 實例 2(F)(17) ·· (23,311，4尺，51〇-2-(6-胺基-911-嘌呤-9-基）-5-[( 口比淀-4-基硫）甲基]四氫吱喃-3，4-二醇
lR NMR (400 MHz5 DMSO-d6) δ ppm: 3.37 (dd5 J=14.3? 7.5 -126- 200304380
Hz5 1H) 3.48 (m，1H) 4.00 (s，1H) 4.17 (d，J=3.54 Hz，1H) 4.76 (d，J=5.6 Hz，1H) 5.38 (d，J=4.8 Hz，1H) 5.51 (d，J=6.1 Hz，1H) 5.84 (d，J=5.6 Hz，1H) 7·23 (m，4 Η) 8·08 (s，lH) 8.26 (m，3 H)。分析 C15H16N603S ·0·5 H20 計算值 C: 48.77, H: 4.64, Ν:22·75, S: 8.68。實測值C: 48.81 H: 4.57, N: 22.71，S: 8.74 ° 實例 2(F)(18) : (2尺，311，48,53)-2-(6-胺基-911_嘌呤-9-基）_5-{[ (2-羥基乙基）硫]甲基}四氫呋喃-3,4-二醇
lU NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.14 (m5 5 Η) 1.48 (m5 1H) 1·61 (m，2 Η) 1.84 (m，2 Η) 2·65 (m，1H) 2.79 (dd， J=14.0, 7·0 Hz，1H) 2.91 (dd，J=12.0, 4.0 Hz，1H) 3.96 (m， 1H) 4.14 (m，1H) 4.77 (q，J=5.6 Hz，1H) 5.28 (d，J=5.1 Hz， 1H) 5.47 (d，J=6.1 Hz，1H) 5.86 (d，J=5.8 Hz，1H) 7.28 (s， 1H) 8.13 (s，1H) 8·34 (s，lH)。分析 C16H23N503S ·0·75Η2Ο計 算值 C: 50.71，Η: 6.52, N: 18.48, S: 8.46。實測值 C: 51.02, Η: 6.29, Ν: 18.55, S: 8·37 ° 實例 2(F)(19) : (211，311，43,53)-2-(6_胺基-911-嘌呤-9-基）-5-[( 吡啶-2-基硫）甲基]四氩呋喃-3,4-二醇
lH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.16 (d? J=4.8 Hz? 1H) -127- 200304380 3.48 (dd，J=13.8, 7·0 Hz，1H) 3.61 (dd，J=12.0, 6.0 Hz，1H) 4·07 (m，1H) 4.17 (m, 1H) 4.84 (q，J=6.0 Hz，1H) 5·36 (d， J=4.8 Hz，1H) 5.50 (d，J=6.3 Hz, 1H) 5.88 (d，J=6.3 Hz，lH) 7·10 (dd，J=6.7, 4.9 Hz，1H) 7·30 (s，1H) 7·61 (td，J=7.7, 1.8 Hz，1H) 8·14 (s，lH) 8·35 (s，ih) 8.42 (d，J=4.0 Hz，1H)。分 析 C15H16N603S · 0.25HC1 · ι·〇η20 · 0.5CH3OH 計算值 C: 46.13, Η: 5.06, N: 20.83, S: 7·95。實測值 C: 46.18 Η: 5.16, N: 20.75 S: 7.93。 實例 2(F)(20) : (2S，3R，4R，5R)-乙基-3_({[5-(6-胺基 _9H-嘌呤 -9-基）-3,4-二羥基四氫呋喃基]甲基}硫）丙酸酯
H NMR (300 MHz, CD3OD) δ ppm 1.20 (t5 J=4.0 Hz? 3 H) 2.55 (m，2 H) 2.78 (m，2 Η) 2·97 (m，2 H) 4.07 (q，J=4.0 Hz，2 H) 4.20 (d? J=4.9 Hz, 1H) 4.32 (d5 J=4.9 Hz, 1H) 4.79 (d5 J=4.9 Hz，1H) 5.99 (d，J=4.9 Hz，1H) 8.21 (s，1H) 8.31 (s，1H)。 分析 C15H21N505S · 〇.2CH3COOH · 0.5HC1計算值 C: 44.71，H: 5·43, N: 16·93, S: 7·75。實測值 c: 44 49 H: 5 6〇, N: 16 60，s: 8.16。 實例 2(F)(21) : (2S，3R，4R，5R)-2-(6-胺基-9H_ 嘌呤 _9-基）-5-{[ (2-吱喃甲基）硫]甲基丨四氫呋喃-3,4二醇
-128· 200304380 lB NMR (400 MHz? DMSO-d6) δ ppm 2.75 (dd? J= 13.9, 7.1 Hz, 1H) 2.89 (m，1H) 3.16 (d，J=4.8 Hz，1H) 3.76 (s，2 H) 3.97 (m，1H) 4.12 (m，1H) 4·73 (q，J=5.7 Hz，1H) 5·30 (d，J=5.3 Hz, 1H) 5.49 (d? J=6.1 Hz, 1H) 5.87 (d? J=5.8 Hz, 1H) 6.18 (d, J=3.0 Hz? 1H) 6.34 (dd, J=3.0? 1.8 Hz, 1H) 7.29 (s, 2H) 7.55 (d，J=2.0 Hz，1H) 8.13 (s，1H) 8.33 (s，1H)。分析 ChHnNsCUS • 0·5Η2Ο計算值 C: 48.38, H: 4.87, N: 18.81，S: 8.61。實測值 C: 48.25, Η: 4.72, N: 18.53, S: 8.69 ° 實例 2(F)(22) ·· (23,311，411，511)-2-(6-胺基-911-嘌呤_9-基）-5-(1H-咪唑-2-基硫烷基甲基）-四氫-吱喃-3，4-二醇
!H NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.26 (m? 2H) 3.69 (s5 1H) 4.07 (m，J=4.04 Hz，1H) 4·18 (m，1H) 5.86 (d，J=5.56 Hz，1H) 6.91 (s，2H) 8.10 (d，J=7.33 Hz，2H)。C13H15N703S之 MS (MW: · 349), m/e 350 (MH+)。分析 C13H15N703S · 1·0Η2Ο ·0·35 己烷 計算值C: 45.62，Η: 5.55，Ν: 24.65。實測值C: 45.84，Η: ^ 5·20，Ν: 24.27 0 · 實例 2(F)(23) : (23,311，411，51〇-2-(6-胺基-嘌呤-9-基）_5-(噻唑 -2-基硫烷基甲基）-四氫-吱喃-3，4-二醇
-129- 200304380 lU NMR (400 MHz, MeOD) δ ppm 3.66 (m5 2 H) 4.29 (m, 1H) 4·35 (m，1H) 5.95 (d，J=5.05 Hz, 1H) 7.41 (d，J=3.28 Hz， 1H) 7.61 (d，J=3.54 Hz，1H) 8.16 (s，1H) 8.21 (s，1H)。 C13H14N603S2之HRMS (MW: 366.425)，m/e 367·0647 (MH+) 。分析 C13H14N6O3S2.0.4H2O 計算值 C: 41.79，H: 3.99，N: 22.49。實測值C:41.96, H: 4.03, N: 22.10。 實例 2(F)(24) : (28,311，411，51〇-2-(6_胺基-嘌呤-9-基）-5-(4-氟」 苯甲基硫烷基甲基）·四氫-呋喃-3,4_二醇
lH NMR (400 MHz5 MeOD) δ ppm 2.67 (m, 1H) 3.63 (m, 2 H) 4.08 (m，1H) 4.24 (m，J=5.18, 5.18 Hz，1H) 4.66 (m，J=4.93, 4·93 Hz，1H) 5.90 (d，J=4.55 Hz，1H) 6.85 (t，J=8.72 Hz，2H) 7.13 (m，2H) 7.88 (s，1H) 8.09 (s，1H) 8.19 (s，1H)。 C17H18FN503S 之 MS (MW: 391)，m/e 392 (MH+)。分析 C17H19FN503S · 0.6MeOH計算值 C: 51.47, Η: 5.01，N: 17.06。 實測值 C: 51.56, Η: 5·50，Ν: 17.21。 實例 2(F)(25) : (28,311，411，511)-2-(6_胺基-嘌呤-9-基）-5十塞吩 -2-基甲基硫烷基甲基）-四氫-吱喃-3，4-二醇
lH NMR (400 MHz? CD3OD) δ ppm 1.08 (t5 J=7.1 Hz9 1H) 2.74 -130- 200304380 (dd，J=14.3, 6.2 Ηζ，1Η) 2·83 (m，1Η) 3·51 (q，J=7.1 Hz，1H) 3.88 (q? J=14.4 Hz, 2 H) 4.10 (qj=5.3 Hz, 1H) 4.23 (t, J=5.2 Hz，1H) 4.66 (t，J=5.1 Hz，1H) 5.89 (d，J=4.8 Hz，lH) 6.75 (m， 2 Η) 7·14 (dd，J=4.7, 1·6 Hz，1H) 8·09 (s，1H) 8·19 (s，1H)。 C15H17N503S之 HRMS (MW: 379.46)，m/e 380.086 (MH+)。分 · 析C15H17N503S · 0·4Η2Ο · 0.4HOAc計算值C: 46.21，Η: 4.76, N: 17·05。實測值C: 46· 19, Η:4·51，Ν: 16.92。 · 實例 2(F)(26) : (28,311，4尺，51〇-2-(6_胺基-嘌呤-9-基）-5-環戊 _ 基硫烷基甲基-四氫-呋喃-3，4-二醇
lR NMR (400 MHz5 DMSO-d6) δ ppm 1.41 (m5 2H) 1.47 (m? 2H) 1.63 (m，2H) 1.89 (m，2H) 2.82 (dd，J=13.8, 7.0 Hz，1H) 2·93 (m，1H) 3.13 (m，1H) 4.02 (m，1H) 4·15 (m，1H) 4.77 (q， J=5.7 Hz，1H) 5·32 (d，J=5.1 Hz，1H) 5.50 (d，J=6.3 Hz，1H)春 5·89 (d，J=5.8 Hz，1H) 7·30 (s，2H) 8·15 (s，1H) 8·36 (s，1H) 。C15H21N503S 之 MS (MW: 351)，m/e 352 (MH+)。分析 、 C15H21N503S · 0.3H2O計算值 C: 50.49, Η: 6.10, Ν:19·63。實 - 測值 C: 50.46, Η: 6.17, Ν: 19.50。 實例 2(F)(27) : (28,311，411，511)-2-(6-胺基-嘌呤-9-基）-5-(3-苯 基-丙基硫虎基甲基）-四氫吱喃-3，4-二醇
-131- 200304380 lH NMR (400 MHz, CD3〇D) δ ppm 1.74 (m5 2H) 2.44 (m, 2 H) 2.52 (m9 2H) 2.83 (m? 4H) 4.09 (q, J=5.5 Hz, 1H) 4.23 (t, J=5.1 Hz，1H) 4.69 (t，J=5.2 Hz，1H) 5.89 (d，J=5.1 Hz，1H) 7.01 (m，3H) 7.11 (t，J=7.3 Hz，2H) 8.10 (s，1H) 8.21 (s，1H) 。C19H23N503S之HRMS (MW: 401.15)，m/e 402.1617 (MH+) 。分析 C19H23N5O3S.0.1CH3COOH計算值 C: 56.59, H: 5.78, N: 17.19。實測值C: 56.50, Η: 5·76, N: 17·22。 實例 2(F)(28) : (2尺，3匕48,58)-2_(6-胺基_嘌呤-9-基）_5_{[(2-甲基苯基）硫]甲基}四氫呋喃-3,4_二醇
4 NMR (DMSO-d6) δ: 8.16 (1H，s)，7.95 (1H，s)，7·15 (1H，d， J=6.82 Ηζ)，7·11 (2H，s) 7.01-6.88 (3H，m)，5·70 (1H，d，J=6.1 Hz)，5·34 (1H，d，J=6.1 Hz)，5·20 (1H，d，J=5.1 Hz)，4·64 (1H， q，J=5.8 Hz)，4.02 (1H，q，J=4.8 Hz)，3.83-3.78 (1H，m)，3.20 (1H，dd，J=13.6與 6·1 Hz)，3.08 (1H，dd，J=i3.6與 7·3 Hz)， 2·08 (3H，s)。LRMS (m/z) 374 (M+H)+。 實例2(G) : MTAP受質之組合集合庫 腺苷5 ’位置之硫醇衍生物之組合集合庫製法如下：
-132- 200304380 在含硫醇之DMF溶液（1.5當量）中添加含烷基硫醇之DMF 溶液（1.0當量）後，添加第三丁醇鉀之THF溶液（1.5當量）。 混合物加熱至55°C 12小時。排除溶劑，殘質於DMSO中重 新組成。經HPLC純化，產生純化產物（產率3 - 68〇/〇)，如下 表9所示。 表9 :腺甞環5’位置之硫醇衍生物之集合庫化合物
實例 編號 名稱 結構式 MW m/z [MW + 11 MTA JO MTA一50 2(G)(1) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基）. -5-({[2-(l，4,5,6-四氫 p密淀-2-基)苯基] 硫}甲基]四氫呋·· 喃-3,4-二醇 /L— μu HO OH u 441.51 443 8 23 2(G)(2) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-螺呤-9-基）. -5-({[2-(l，4,5,6-四氫 ~密淀-2-基)苯基]硫} ^ 甲基]四氫-呋喃-3,4-二醇 /V y==\ N 〇' ◊0 374.42 375 3 5 2(G)(3) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H·嘌呤冬 基)-5·{[(2-胺基苯 :基)硫]甲基}四氩 4 喃-3,4-二醇 〇' 416.42 417 46 45 -133- 200304380 2(G)(4) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二經基四氫 呋喃-2-基]甲基} 硫)-5-乙基p密淀 -4(3H)-酮 rg—N 〇 Ο 〇 405.44 406 38 49 2(G)(5) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)_ -5-{[(5-氯-1H-苯並 5咪唑-2-基)硫]甲基} 四氩呋喃-3,4-二醇 0、 "ο 433.88 434/436 5 2 2(G)(6) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·{[(1-甲基-1H-四 、唑基)硫]甲基}' -氫呋喃-3,4-二醇 365.38 366 46 47 2(G)(7) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[5-(丙基硫)-1Η-苯並咪唑-2-基]硫} 】甲基)四氫呋喃-3,4」 二醇 /Λ 473.58 475 3 0 2(G)(8) (2R53R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 、-5-[(响淀-2-基硫)甲 2基j四氫呋喃-3,4-二醇 ^ν.Ν 0 '0 361.38 362 54 59 2(G)(9) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-胺基-1，3,4-0塞 ，二唑-2-基)硫]甲基}, 四氫呋喃-3,4-二醇 C 〇' ,0 382.43 383 34 47 2(0)(10) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{((4-胺基苯基)硫） 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 0 '0 374.42 375 20 19 2(0)(11) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-氯-1，3-苯並 ^塞唑冬基)硫]甲基} 丨四氫呋喃-3,4-二醇 o' ’。 450.93 451/453 22 25
-134- 200304380 2(0)(12) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤·9-基) -5-[(1,3-苯並噻唑-2-:基硫)甲基]四氫呋喃 -3,4-二醇 〇、 416.48 417 24 25 2(0)(13) (N-{4-({{(2S,3S,4R, 5R)-5-(6-胺基-9H-嘌 吟-9-基)-3,4-二岁呈基 四氫呋喃基]甲 基}硫)苯基]乙醯胺 0~n 416.46 417 19 17 2(0)(14) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·{[(4-^基苯基)硫] 甲：四氫呋喃·3,4· 二醇 nCVn Qt)-s^^n^n 0 ’Q 375.41 376 16 51 2(0)(15) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） _5-[(2·茶基硫)甲基] 四氫呋喃-3,4-二醇 νΟ~ν o' "ο 409.47 410 29 25 2(0)(16) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-甲氧苯甲基). 硫]甲基}四氫呋喃‘ -3,4-二醇 厂 N\=>~N 0 "ο 403.46 404 59 60 2(G)(17) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-溴苯基)硫]甲, 基}四氫呋喃-3,4-二醇 ο "ο 438.30 438/440 21 17 2(0)(18) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(l-莕基硫)甲基] 四氫呋喃-3,4-二醇 / 409.47 410 5 4 2(0)(19) (2R，3R，4S，5S)-2-(6· 胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·{[(4·氯苯基)硫]甲, 基}四氫呋喃-3,4-二醇 0 0 393.85 394/396 19 17
-135- 200304380 2(0)(20) 4-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3，4-二羥基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 苯甲酸甲酯 ° Ό~ν 0、' "ο 417.44 418 7 5 2(0)(21) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·{[(4-第三丁基苯 基)硫]甲基}四氫呋， 喃-3,4-二醇 0^ν ο% "ο 415.52 417 12 9 2(0)(22) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,6·二甲基苯 1基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 Γ\_ ν y—ν 387.46 388 3 15 2(0)(23) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘻吟-9-基） •5-{[(4-氟苯基)硫]甲 丨基}四氫呋喃-3,4- | 彳二醇 0 '0 377.40 378 21 31 2(0)(24) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,5-二甲氧基 苯基)硫]甲基}四氫 呋喃-3,4-二醇 /〇 o' "o 419.46 420 4 23 2(0)(25) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3,4-二甲氧基 苯基)硫]甲基}四氫 呋喃-3,4-二醇 \ 419.46 420 5 30 2(0)(26) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·{[(2·乙基苯基)硫] 甲：έ}四氫呋喃·3,4_ 二醇 r\ 、 NV=(N 387.46 388 6 7 2(0)(27) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤_9-基） -5-{[(2-羥基苯基)硫] 甲墓}四氫呋喃-3,4_ 二醇 〇 o' ，0 375.41 376 7 23
-136- 200304380 2(0)(28) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,5-二曱基苯 ^基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 厂V \ Ν λ>—N X 。 ' 〇 "〇 387.46 388 6 4 2(0)(29) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） i -5-{[(3-溴苯基)硫] 甲基}四氫呋喃_3,4_ 二醇 Γ\_ 、 ΝΜ Ν 0 "ο 438.30 438/440 21 19 2(G)(30) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） ,-5-({[5-(丙-2-炔-1-基 硫)-1，3,4-嘧二唑-2-:基]硫}甲基)四氫呋 喃-3,4-二醇 0 437.53 439 11 12 2(0)(31) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺ί-9Η-嘌呤-9-基） 羥基-4-甲基 Γ4Η-1，2,4·三唑冬基） :硫]甲基}四氫呋喃’ -3.4-二醇 380.39 381 46 50 2(0)(32) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） ,-5-{[(5,7-二甲基 +2,4]三唑並[l，5-a] 密咬-2-基)硫]甲基} > 四氫呋喃-3,4-二醇 0 "ο 429,46 430 6 7 2(0)(33) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[4·(三氟甲基)嘧 啶-2-基]硫}甲基)四 :氩呋喃-3,4-二醇） 0~ν F Χρ 〇 "〇 429.38 430 28 36 2(0)(34) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-第三丁基-2-1甲基苯基)硫]甲基} 四氫呋喃-3,4·二醇 厂V» ν y—ν 429.54 431 2 3 2(G)(35) (2R，3R，4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） •5-{[(4-異丙基苯基） 硫]甲基}四氫呋喃 3,4-二醇 厂V- 0 0 401.49 402 15 11 -137- 200304380 2(0)(36) 4-胺基-2-({[ (2S，3S，4R，5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -3,4-二羥基四氫呋 喃-2-基]甲基}硫)嘧 啶-5-羧酸乙酯 N 》~\ 0 0 448.46 449 35 40 2(0)(37) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基·9Η-嗜吟-9-基） -5-{[(2-甲基-3-吱喃 基)硫]甲基}四氫呋f 喃-3,4-二醇 /Γ\_ W~N 363.40 364 10 26 2(0)(38) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{((2,2,2-三氟乙 :基)硫)甲基}四氫呋1 喃-3,4-二醇 厂V 〇 ^rC 365.34 366 30 32 2(0)(39) [2-({[(2S,3S,4R,5R)-5-(6-胺基-9H-嘌呤 -9-基)-3,4-二羥基四 氫呋喃-2-基]甲基} ! 硫)乙基]胺甲酸第三 丁酯 1 计N χΆ"; 426.50 427 7 8 2(0)(40) 7-({[(2S,3S,4R,5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-i)-3,4-二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） -4-甲基-2H-色晞 -2-酮 6 441.47 442 6 10 2(0)(41) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基) -5-({[3-氯-5-(三氟甲 基)吡啶-2-基]硫} 甲基)四氫呋喃-3,4-5 二醇 Cl o' 462.84 463/465 7 7 2(0)(42) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(喹啉-2-基硫） 1基ί四氫呋喃-3,4-二醇 o' 410.46 411 38 47 2(0)(43) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基·9Η-嗓吟-9-基)-3,4-二經基四氮 呋喃基]甲基}硫） -4,6-二甲基菸基腈 1 乂 ^ 1' 。…。 N 413.46 414 5 7 -138- 200304380 2(0)(44) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基）. 「5-[(晞丙基硫)甲基], 四氫呋喃-3,4-二醇 厂V- 〇 323.38 324 77 82 2(0)(45) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤冬基） 丨-5-[(異丙基硫)甲基] 四氫呋喃-3,4-二醇 nCVn 0 0 325.39 326 53 57 2(0)(46) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基 -5-{[(4-甲基-1H·苯 #咪嗤-2-基)硫]甲基}, '四氫呋喃-3,4-二醇 Ό "〇 413.46 414 42 45 2(0)(47) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-;胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(1Η-咪唑並 [4,5-c]p比淀-2-基為充） ^甲基]四氫呋喃-3,4-f 二醇 厂V- Ν Ν 0、 Φ〇 400.42 401 49 50 2(0)(48) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-甲基-1H-苯 並咪唑-2-基)硫]甲基}, 四氫呋喃-3,4-二醇 ry, 0 "ο 413.46 414 3 5 2(0)(49) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-丨[(4-羥基-1H-吡唑 並[3,4-d]嘧啶-6-基） 硫]甲基}四氫呋喃， •3,4-二醇 0 N0~N 。、 ’0 417.41 418 52 46 2(G)(50) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 喳唑啉-4(3H)·酮 6 427.44 428 9 37 2(0)(51) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘵呤:9_基） •5-{[(5-胺基-1H-苯 並咪唑-2-基)硫]甲基}, 四氫呋喃-3,4-二醇^ 0"N 0 0 414.45 415 16 36 200304380 2(0)(52) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-甲基-1，3,4-噻 二唑-2-基)硫]甲基} 四氫吱喃-3,4-二醇 乂:ks^]rN:N 0、 381.44 382 19 23 2(0)(53) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[( 1 Η-1，2,4-三峻 -3-基硫)甲基]四氫呋 喃_3,4_二醇 〇% "ο 350.36 351 58 57 2(0)(54) ({[(2S，3S，4R，5R)-5-( 6-胺基-9H-嗓吟-9-基)-3,4-二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 乙酸甲酯 厂V- ο 0 0 355.37 356 36 44 2(0)(55) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-胺基-1，3,5-三 .畊-2-基)硫]甲基}四, 氫呋喃-3,4-二醇 n / 、 0 0 377.39 378 43 47 2(0)(56) 2-({[(2S,3S,4R,5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-i)-3,4-二經基四氩 呋喃-2-基]甲基}硫） -N-甲基乙醯胺 〇 0 0 354.39 355 6 10 2(0)(57) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5_{[(4_羥基丁基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 。分N 0 0 355.42 356 31 45 2(0)(58) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-吡啶-4-基乙 基)硫]甲基丨四氫呋 喃-3,4-二醇 0 0 388.45 389 38 47 2(0)(59) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3-胺基p比淀-2-)基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 1 厂V N XV—N N 〇' "〇 375.41 376 18 47
-140- 200304380 2(G)(60) ^-({[(28,38,4^5^-5 •(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 菸醯胺 N y—Ν X。…。 403.42 404 4 8 2(G)(61) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-吡呼-2-基乙 基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 /Γ~Ν 〇、' % 389.44 390 15 20 2(G)(62) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-甲基四氫呋 喃-3-基)硫]甲基}四 ?氫呋喃-3,4_二醇> Γ\ ν y—N 367.43 368 6 7 2(0)(63) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基). -5-({[5·(羥基甲基） -1-甲基-1Η-咪唑-2-’基]硫}甲基)四氫呋> 喃-3,4-二醇 0"n 393.43 394 5 5 2(G)(64) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） •5-{[(4-羥基-7H-峨 咯並[2,3-d]嘧啶-2-1基)硫]甲基}四氫呋> 喃-3,4-二醇 r.— Ν 〇 /卜 0、 ^0 416.42 417 48 48 2(6)(65) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-觀基-4-異丙 基-4H-1，2,4-三唑-3-、基)硫]甲基}四氫咬> 喃-3,4·二醇 厂V ν y—ν 。尽 〇、、'〇 . 408.44 409 5 4 2(G)(66) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[({5-[(二甲基胺 基)甲基]_4_甲基-4H-1，2,4-三唑-3-基}硫） 甲灰]四氩呋喃-3,4' 二_ 421.48 422 6 6 2(0)(67) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4,5-二甲基 Γ4Η-1，2,4-三唑-3·基） 1硫]甲基}四氩呋喃* -3,4-二醇 | 厂V V^N 378.42 379 45 47 200304380 2(G)(68) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基) -5-[(第二-丁基硫)甲 基]四氫呋喃-3，4-二醇 A—N Ο、 339.42 340 42 45 2(6)(69) (2R，3R，4S，5S)-2-(6· 胺基-9H·嘌呤-9-基） _5-[(吡畊-2-基硫)甲 基ί四氫呋喃-3,4-二醇 。々 〜o 361.38 362 31 40 2(G)(70) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 「5_{[(2_溴苯基)硫]甲, 基}四氫吱喃-3,4-二醇 >T~N 、 Nw^N Br 〇' ’〇 438.30 438/440 6 3 2(G)(71) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） _5·{[(2·甲基丁基)硫] 1甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 r\ 。V^"N ' o o 353.45 354 77 73 2(0)(72) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3-胺基苯基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 厂V N N /~\ o o 374.42 375 33 38 2(3)(73) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嗓吟-9-基） _5-{[(2·氯苯甲基)硫] 甲i}四氫呋喃·3,4· 二醇 nCVn 407.88 408/410 30 21 2(G)(74) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[3-(三氟甲基)苯 甲基]硫}甲基)四氫 呋喃-3,4-二醇 賞 441.43 442 23 22 2(0)(75) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5- {[(3 -¾基丙基)硫]丨 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 r\ N V~N 〇 Υλ 〇 /~、 O o 341.39 342 32 39 200304380 2(0)(76) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,4-二氯苯甲 基)硫]甲基}四氫呋. 喃-3,4-二醇 0~n cr 442.33 442/444/ 446 14 11 2(0)(77) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[l-(2-羥基乙基） 丁基]硫}甲基)四氩. 呋喃-3,4-二醇 383.47 384 3 6 2(0)(78) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H·嘌呤-9-基） -5-{[(6-羥基己基)硫] 甲基}四氩呋喃-3,4-二醇 厂V n y—n 0 〇 383.47 384 52 51 2(3)(79) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-曱基·1，3-噻 ，17坐-2-基)硫]甲基}四> ’氫吱 4-3,4-二‘ ο·-ν 380.45 381 38 45 2(0)(80) (2R，3R,4S，5S)-2-(6-胺基-9H-4呤冬基） -5-{[(4-乙基苯基)硫] 1甲；έ}四氫呋喃_3,4_ 二醇 0 0 387.46 388 13 15 2(0)(81) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[2-(1Η』引哚-3-基)乙基]硫}甲基)四 氫呋喃-3,4-二醇 厂V- N N 426.50 427 18 18 2(0)(82) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·({[2-(三氟甲基)苯 基]硫}甲基)四氫呋· 喃-3,4-二醇 厂V V^N F 427.41 428 1 1 2(G)(83) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基) -5-{[(2,4-二甲氧基 <苯甲基)硫]甲基}四| 氫吱4-3,4-二醇 /"V -〇 〇 )^Λ ir賞 0 \ 433.49 434 5 8 -143- 200304380 2(0)(84) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嗓吟-9-基） -5-{[(2-胺基-4,5-二 1甲基苯基)硫]甲基} 四氫吱喃-3,4-二醇 N 〇' "〇 402.48 403 4 5 2(0)(85) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[([1，3]嘧唑並 [5,4-b]吡啶-2-基硫） )甲基]四氫呋喃-3,4-二醇 /r\_ n y—n 0、 ’0 417.47 418 10 2 2(0)(86) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-甲氧基-1，3-苯並嘧唑-2-基)硫]甲 :基}四氫吱喃-3,4-二醇 0~n o "o 446.51 448 31 33 2(0)(87) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(2-嘧吩基硫） 1甲基]四氫呋喃-3,4-二醇 s Nw^N 0 365.44 366 36 33 2(0)(88) ({[(2S，3S，4R，5R)-5-( < 6-胺基-9H-嘌呤-9- · 基)-3,4-二羥基四氫 1吱喃-2-基]甲基}硫） 乙酸乙酯 r\_ n y—n 一。 0 0 0 369.40 370 25 33 2(0)(89) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9- 二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 菸基腈 >r—N k 。…。 N 385.41 386 3 5 2(0)(90) 3-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-1)-3,4-二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 苯甲酸 厂V n y—n 飞 。、’。 403.42 404 3 8 2(0)(91) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-硝苯基)硫] τ甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 0~n (^s^]rN:N •N;0 o' ·。 〇 404,41 405 5 5
-144- 200304380 2(0)(92) 3-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） ! 丙酸甲酯 /"V 0 〇 )=( 0、 "〇 369.40 370 27 36 2(0)(93) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(1-苯並p塞吩-3-基甲基)硫]甲基}四「 氫呋喃-3,4-二醇 厂V ν y—ν 〇r有； 429.52 431 18 17 2(0)(94) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[3-(2-苯基乙基） 吡畊-2_基]硫}甲基） 四氫呋喃-3,4-二醇 465.54 467 5 5 2(0)(95) 4-({[(2S,3S,4R,5R)-5 -(6-胺基-9H-嗓吟-9-盖)_3,4_二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 苯甲酸 ° 0~ν / ~\ 0 0 403.42 404 7 7 2(0)(96) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） < -5-{[(2-氯苯基)硫], 甲基}四氩呋喃-3,4-二醇 (^s^yN:N Cl o' 393.85 394/396 5 6 2(0)(97) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嗓吟-9-基） _5-{[(2,5·二氯苯基） 硫]甲基}四氩呋喃 -3,4-二醇 c. NC^N Cl o' 428.30 428/430/ 432 5 6 2(0)(98) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3-氯苯基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 厂V o' '0 1 393.85 394/396 20 18
-145- 200304380 2(0)(99) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[3-(三氟甲基)苯 基]硫}甲基)四氫呋 喃-3,4-二醇 Ο"" 〇' "ο 427.41 428 17 18 2(G)(100) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5·{[(3-甲基吡畊-2-基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 375.41 376 7 10 2(0)(101) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嗓吟-9-基） -5-{[(3-羥基苯基)硫] 甲；έ}四氫呋喃_3,4· 二醇 N^yN o% "o 375.41 376 36 38 2(G)(102) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,6-二氯苯基） 硫]甲基}四氫呋喃 •3,4-二醇 厂V n y—n Cl 0 "o 428.30 428/430/ 432 2 3 2(G)(103) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[2-硝基-4-(三氟 i甲基)苯基]硫}甲基) 四氫呋喃-3,4-二醇 厂V- n y—n -N、〇 °% O 一 472.40 473 3 4 2(0)(104) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） -N-苯基乙醯胺 厂V nh^n 賞 416.46 417 5 15 2(0)(105) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 硝基吡啶-2-:基)硫]甲基}四氫呋1 喃-3,4-二醇 , ^ Ο /〇 405.39 406 17 21 2(G)(106) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嗓吟-9-基) -5-[(1Η-吲哚-3-基 :硫)甲基]四氫呋喃： -3,4-二醇 Α賞 398.45 399 6 3 200304380 2(0)(107) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫 呋喃-2-基]甲 苯甲酸甲酯 厂V 0 \ 417.44 418 4 2 2(G)(108) (2E)-3-[4<{[(2S3S,4R^R) -5-(6-胺基-9H-嗓吟 -9-基)-3,4-二羥基四 氫呋喃-2-基]甲基} 硫)苯基]丙締酸； 〇 N^V-r s 429.46 430 8 19 2(G)(109) 3-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-i)-3,4-二經基四氫 呋喃基]甲基}硫） 苯甲酸甲酯 厂V- Nw^N 0 417.44 418 8 8 2(G)(110) (2E)-3-[4-({[(2S，3S， 4R，5R)-5-(6-胺基 -9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫呋喃-2· 1 基]甲基}硫)苯基]丙 烯酸甲酯 、。^ 0、 "ο 443.48 444 15 9 2(0)(111) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[5-(3-甲氧基苯· 基)-4-甲基-4H-1，2,4-「三唑基]硫}甲基） 四氩呋喃-3,4·二醇 / J-L。兑 470.51 472 8 4 2(0)(112) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H·嘌呤-9-基） -5-({[4-(2-呋喃基)嘧 淀-2-基]硫}甲基)四1 氫呋喃-3,4-二$ nCVn 427.44 428 17 10 2(G)(113) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(l-甲基-1H-苯 並咪唆-2-基)硫]甲基}, 四氫吱喃-3,4-二醇 1 o' '0 413.46 414 48 43 2(0)(114) i I I N-[2-({[(2S，3S，4R， 5R)-5-(6-胺基-9H-嗓 呤-9-基)-3,4-二羥基 四氫呋喃-2-基]甲 基}硫)乙基]乙醯胺 1 \ 0 0 368.42 369 29 11 -147- 200304380 2(0)(115) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[4-(甲基硫)苯基 ]硫}甲基)四氫呋喃 -3,4-二醇 厂V 0 0 405.50 407 12 15 2(G)(116) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基) -5-({[2-(三氟甲氧基) 苯基]硫}甲基)四氫 呋喃-3,4-二醇 N y—Ν X。…。 443.40 444 3 7 2(0)(117) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） •5-{[(2-氟苯基)硫]-甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 F Chiral V-o r^N % η2ΛΝ 377.41 378 25 28 2(G)(118) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-甲氧基-1H-苯並咪唑-2-基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 η2ν 429.47 430 2.5 2.5 2(0)(119) (2R,3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 丨-5-[(1Η-苯並咪唑-2-基硫)甲基]四氫呋喃 -3,4-二醇 h3n 399.44 400 12 26 2(G)(120) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(l-甲基-1H-咪 唑-2-基)硫]甲基}四 I氫呋喃-3,4-二醇 I H3C. H9 Ϊ"Λ HOI··亡广入Ν’ H：N 1 363.41 364 1 3
-148- 200304380 2(G)(121) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） [(壬基硫)甲基]四 氫呋喃-3,4-二醇 ch3 % H,N 409.56 411 63.5 54.5 2(G)(122) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-i) -5-[(l，3-苯並啰唑-2-基硫)甲基]四氫呋喃1 -3,4-二醇 H〇 h〇<,,CT"s^n h2n 400.43 401 30.5 37 2(G)(123) <5R)-5-[({[(2S，3S，4R， 5R)-5-(6-胺基-9H-嗜 呤-9-基)-3,4-二羥基; 四氫呋喃-2-基]甲 基}硫)甲基]咪唑啶 -2,4-二嗣 HO 0 Chiral Y0 --N 0 h2n 395.41 396 23 22 2(G)(124) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 「5-{[(4-氯苯甲基)硫] 甲產}四氫呋喃_3,4_ 二醇 Η,Ν 407.89 408/410 47 51 2(0)(125) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(庚基硫)甲基]四 i氫呋喃-3,4-二醇 ch3 HO / H〇,,,0^s^ h2n 381.51 383 101 62.5 2(G)(126) i (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 1-5-[(己基硫)甲基]四， 氩吱喃-3,4·二ίΐ | , ] ! ! CK ,/ N Γ v j h2n 367.48 368 72 67.5
-149- 200304380 2(0)(127) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-氟苯甲基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 ^ 1 H0,,^s U H2N 391.44 392 56 58.5 2(G)(128) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） 「5-{[(3,4-二氯苯基）丨 ^硫]甲基}四氫呋喃 -3,4-二醇 ¥ η2ν 428.31 428/430/ 432 11 10.5 2(G)(129) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤冬基） -5-[(癸基硫)甲基]四 氫呋喃-3,4-二醇 ch3 / J Η〇,,,0^5 % η2ν 423.59 425 46 41.5 2(G)(130) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-1胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{([2,4-二氯苯基） ,硫]甲基}四氫呋喃> -3,4-二醇 今η。1 % η2ν 428.31 428/430/ 432 -2 4.5 2(0)(131) | j j (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） ,-5-{[(3,5-二氯苯基） 硫]甲基}四氫呋喃 -3,4-二醇 CI 女Α, η2ν 428.31 428/430/ 432 11.5 11 2(0)(132) I I 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-P票吟-9-基)-3,4->一姓基四風 呋喃-2-基]甲基} 1 硫)-1Η-咪唑-4-羧酸t 乙酯 | 1 Γ\ Η?Ν 421.45 422 0 1.5
150- 200304380 2(G)(133) ({[(2S，3S，4R，5R)-5-( 6·胺基-9H-嗜吟-9-，基)-3,4-二經基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫） 乙酸丁酯 0^0 H? T TV Η：Ν 397.47 398 22.5 31.5 2(0)(134) (2R,3R,4S,5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(7H-嗓呤-6-基 ’硫)_基]四氫吱喃 -3,4_ 二醇 % ΗΓΝ 401.42 402 2(0)(135) (2R，3R,4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-U(5-甲基-1H-苯 並味吨-2-基)石充]甲基} 四氩吱喃-3,4-二醇 ch3、 η% jr0 人 Ν Η：Ν 413.47 414 2(0)(136) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嗓吟-9-基） -5·({[2-( 丁基胺基)乙 基]硫}甲基)四氫呋 喃-3,4-二醇 I ^CH3 Η? Γ ΗΟ η2ν 382.51 384 18 37.5 2(0)(137) (2R,3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(菜基甲基)硫*] 甲i}四氫呋喃-3,4-二醇 ΗΟ ηοι··Ό^^ Η2ΛΝ 415.53 417 3.5 2 2(G)(138) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-苯基-1，3-噻 唑-2-基)硫]甲基}四 I氫呋4-3,4-二醇 I 9 Η# 442.53 444 9 12.5
-151- 200304380 2(G)(139) 3-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫 、夫喃-2-基]甲基}硫） 丙酸丁酯 H：N 411.49 412 26.5 30 2(0)(140) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫 呋喃冬基]甲基}硫） 丙酸乙酯 广ch3 HO 丫 CH3 rV H：N 383.44 384 3 7.5 2(0)(141) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） _5-{[(2-羥基丙基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 HO CH3 H0,,,O^s> Η,Ν 341.40 342 10 27 2(0)(142) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-[(辛基硫)甲基]四 氫呋喃-3,4-二醇 / H? J N N，i;> h2n 395.54 397 1.5 58 2(0)(143) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,3-二羥基丙 i基)硫]甲基}四氫呋 I 喃-3,4-二醇 OH % H〇y H〇u./^Y^S h2n 357.40 358 12 3 2(0)(143) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-氯-6-氟苯甲 基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 i I 1 1 ho,,*P^s7u rV h2n 425.88 426/428 I 3 10.5
-152- 200304380 2(0)(144) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） r5-{[(2-羥基小甲基 丙基)硫]甲基}四氫 呋喃-3,4-二醇 HO CH3 s Y 入 CH3 H2N 355.43 356 18 7.5 2(0)(145) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9_基） -5-{[(3,4-二氯苯甲 基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 NH- (¾ ci^O^s^z5"，°h 442.34 443 3.5 16 2(0)(146) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嗓呤-9-基） -5-{[(2-異丙基苯基） 硫j甲基}四氩呋喃： 丨 -3,4-二醇 NH, (¾ οςΛ,ΟΗ ch3 401.50 403 28 2 2(0)(147) I I :(2R，3R，4S，5S)-2-(6-, 胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3·氟苯基)硫]甲 I基}四氮咬喃-3,4-丨二醇 nh2 (¾ ^ c 1 >**OH prl F 377.41 378 18.5 25.5 2(0)(148) I I I (2R，3R，4S，5S)-2-(6- | 胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3,5-二甲基苯 基)硫]甲基}四氮呋 喃-3,4-二醇 ! ! NH, A …。H y -〇h ch3 387.47 388 2 15 2(G)(149)! I , i (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2,4-二甲基苯 基)硫]甲基}四氫呋 喃-3,4-二醇 I ； NH, $ ,cXXCH3 - 387.47 388 35.5 2.5
-153- 200304380 2(0)(150) NH, (2R，3R，4S，5S)-2-(6-〗胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(3,4-二甲基苯 基)硫]甲基}四氫呋丨 喃-3,4-二醇 CH3 ^Λ^,,，0Η In 387.47 388 2 33.5 2(0)(151) NH, (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(2-3-二氣苯基） 硫]甲基}四氫呋喃 -3,4-二醇 ςχ斗 Cl 428.31 429 13.5 2 2(6)(152) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[3-(甲基硫） -1，2,4-噻二唑-5-基] 硫}甲基)四氫呋喃 -3,4-二醇 η/ΛΤ" NH, A ^λ5,,,〇η OH 413.51 415 19.5 17 2(0)(153) NH, (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(6-氯-1，3-苯並 崎唑-2-基)硫]甲基} 四氫呋喃-3,4-二醇 Cl 434.87 435/437 10 22.5 2(0)(154) NH, (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4,6-二甲基嘧 啶-2-基)硫]甲基}四 氫呋喃-3,4-二‘ H3C N ch3 389.45 390 39 26 2(0)(155) ί I nh5 (2R，3R，4S，5S)-2-(6· 胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-羥基-5·甲基 嘧啶-2-基)硫]甲基} 四氫呋喃-3,4·二醇 j I I I i As、 H3c"yN j OH OH 391.42 392 22.5 39
-154- 200304380 2(0)(156) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5_{[(1-苯基乙基)硫] 甲i}四氫呋喃_3,4· 二醇 NH, A ch3 387.47 388 6 33 2(0)(157) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-({[2-(羥基甲基)苯 基]硫}甲基)四氫呋 喃_3,4_二醇 NH, (¾ 。八 八 ς 丄少·,0Η Out, 389.45 390 32.5 15.5 2(0)(158) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-羥基-5,6-二 甲基嘧啶-2-基)硫] 甲基}四氫呋喃-3,4-二醇 I NH, (¾ H〇 N h3c-YN °H ch3 405.45 406 7 43.5 2(0)(159) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嘌呤-9-基)-3,4-二羥基四氫1 呋喃冬基]甲基}硫） 丨 乙醯胺 NH, (¾ o^nh2 '0H 340.37 341 7.5 .28 2(G)(160) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9·基） -5-{[(l-苯甲基-1H-味唆-2-基)硫]甲基} 四氩呋喃-3,4-二醇 nh2 。人 〇H cci 439.51 441 12 17 2(G)(161) ! :2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 •(6-胺基-9H-嘌呤-9-，基)-3,4-二羥基四氩 呋喃-2-基]甲基}硫） 1 -N-甲基苯醯胺 ： 1 NH, 。r % 416.47 417 14.5 28
-155- 200304380 2(G)(162) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基) -5-{[(4-羥基-6-丙基 嘧啶-2-基)硫]甲基} 四氫吃喃-3,4-二醇 NH. Οϊ WsJ^"〇H ch3 419.48 420 29 39.5 2(G)(163) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(5-氯-1，3-苯並 呤唑-2-基)硫]甲基} 四氫呋喃-3,4-二醇 NH, A 434.87 436 12 26.5 2(0)(164) 2-({[(2S，3S，4R，5R)-5 -(6-胺基-9H-嗓吟-9-基)-3,4-二羥基四氫 呋喃-2-基]甲基}硫) -1-甲基-1H-咪唑-5-羧酸甲酯 <v^ Vn bH h3c 0 421.45 422 13.5 29 2(0)(165) (2R，3R，4S，5S)-2-(6-胺基-9H-嘌呤-9-基） -5-{[(4-第三丁基 -6-羥基嘧啶-2-基） 硫]甲基}四氫呋喃 -3,4-二醇 NH, A 〇h x4-CH3 H=C^h3 433.50 435 25 33.5 生化與生物分析法 採用酵素分析法針對特定受質測定MTAP活性。於大腸桿 菌（E· coli ) BL21 DE3細胞之含N-末端六組胺酸標記之人類 MTAP。蛋白質經Ni2+親和性層析法純化至均質性。使用為 了追縱反應產物腺苷而設計之偶合分光光度測定法測定酵 素活性（Savarese，T.M·，Crabtree，G.W·與 Parks，R.E. Jr·之 (1980) Biochem. Pharmacol. 30，189-199)。取不同濃度之指 定5，_去氧甲硫腺苷（MTA)或受質於分析緩衝液（40 mM磷酸 -156- 200304380 鉀緩衝液、1 mM與DTT 0.8單位/ml黃嘌呤氧化酶偶合酵素） 中，於37°C下培養5分鐘。添加MTAP開始反應。所使用之 確實酵素濃度隨各試驗受質變化，其範圍在2 nM至500 nM 。測定各試驗受質隨酵素濃度變化之活性，以確定所使用 之酵素濃度適當。在305 nm下連續追蹤吸光度10分鐘 (ΔΕ=15,500 M·1)，以檢測活性。由線性迴歸法計算初速率 。將初速率數據代入Henri-Michaelis-Menton公式中，決定 kcat與Km值，有些實例化合物之數值示於下表10中。 採用上述分析法，以2 nM MTAP酵素測定集合庫化合物 (10與50 uM)。所得之初速率係以相對於以MTA為受質時所 測得初速率之百分比表示。每個分析板均使用10與50 μΜ濃 度之ΜΤΑ對照組與集合庫化合物同時進行試驗。相較於10 與50 μΜ之ΜΤΑ之相對初速率示於上表9。 表10 :所選定實例之Kcat與Km值。 實例編號 結構式 kcat(/s) Km(uM) 2(F)(17) N， f %對掌性 ho' oh 0.23 0.88 2(B)(16) A f nh2對物 HO、〇H 4.6 1.3 2(F)(8) γΝ對掌性 ho' "oh 1.44 1.5 -157- 200304380 2(F)(15) ff 對掌性 HO OH v 0.2^ ) 1.7 已知物* P對掌性 IS "^心 HO 〇H 2.9 1.8 2(F)(7) 掌性 hc:〇s^-n:n H3C ho' "oh 2.4 2 2(F)(10) 1對掌性 N V*NH2 叫 As-ir:N HO OH 1.4 2.2 MTA 化合物AA) nh2 nm Η3%λ°/人 ho' 3.967 2.233 2(F)(27) 對掌性 2.16 2.8 已知物 r\^iT hXT^ H3C ho、"oh 5.5 2.8 |已知物 r^j, f Μ· HO、〇H 1.5 3
-158- 200304380 1已知物 N—Λ η2Ν^^ν ΗΟ’ 〇Η 對拿1 生 1 2.3 丨 3.1 2(F)(26) ρΝ ΝΗ2ι對掌性 HO 〇Η 1.5 ;3.2 1已知物 h3c、s rN 對掌性 0.76 3.3 已知物 HO 性 5.4 3.3 2(F)(23) N對掌性 nL>-nh2 C乂 HO、’OH 2.49 3.4 2(F)(18) n 〜叫對掌性 HO、 〇H 1.57 3.5 2(F)(5) 9H3 XU-^N?YNH2 ho' "oh N^N 3.8 3.7 已知物 H3C'S /=N 對掌性 "〇：tr 0.004 3.9
-159- 200304380 2(F)(1) 3.3 3.9 2(F)(13) ywCH3 對掌性 VrV HO OH ^ 1.82 4 2(F)(20) 〇 N4對掌必 ho' oh L 1.54 4.3 2(F)(21) Ν-νΓ N5^0 HO OH 6.15 4.45 已知物 πν對掌性 rfsf HO OH 2.5 4.65 2(F)(14) 4.2 5 已知物 對掌性 N V-NK, HO OH 2.14 5 2(F)(19) 广 N kAs^〇^N^QN HO 〇H 3.44 5.2
-160- 200304380 2(F)(24) f nh2對掌々 生 2.24 5.4 2(F)(28) π V對掌性 NwrNH2 ch3 ho' 'oh 0.175 5.6 已知物 0 # NH2對掌小 h3c 八 HO 〇H i 4.115 5.95 2(F)(25) 4對掌性 Ny=^NH^ S^s HO OH 4.6 6 已知物 H3C^-n/^YNH2 HO OH 4.8 6 2(FX6) or At 3.16 6.9 2(F)(3) 4.1 7 2(F)(11) 厂t對掌性 NwrNH^ h3c'°O-s^^n^n ho' "oh 0.8 7
-161 - 200304380 2(B)(4) ho" 5h L 2.02 8.5 2(F)(22) /TH _/NH=對掌相 HO S)H 3.8 9 2(B)(15) 對掌性 H〇' oh 0.54 10 2(F)(12) 對掌性 W^CH3 Vr%- HO OH ^ 0.79 10 2(F)(16) 广 N N NH.tm HO 〇H t 1.01 10.2 2(B)(12) HO 〇H 1.11 12 2(F)(9) 對掌性 r/ V-NHL .0 HO、 "oh h3c 0.13 13 已知物 CH, / Nf^對掌性 HO OH 0.85 17
-162- 200304380 2(E)(2) ho^^s^(^nyVNH2 ho' "oh n^n 3.1 21 已知物 fN NH2對掌士 h〇^s^〇^n^/Jn ho" oh t 1.46 25 2(B)(14) rN r.N NH2^i n=^N ho' 6h 3.82 29 2(0(11) h3c、s /=n 對掌性 Yntr HO NH2 ^ 0.67 30 2(B)(13) γ叫對掌性 HO、OH 0.126 33 已知抑 H3C、S /= N 對掌性 -Yrtr HO OH ^ 0.006 106 2(B)(7) F 對掌担 HO 〇H 0.089 145 已知物 pN 叫對掌性 H3c、〇、cyQ^N HO 6h 0.006 250
-163- 200304380 2(B)(1) ο γ 叫雜 HO、〇H t 0.8 300 已知物 Ν ΝΗ2對掌七 ho' oh t 0.141 390 2(B)(11) f N NHj對掌担 HO、〇H 0.3 600 2(B)(8) pN NH^對掌七 HO 〜 HO 〇H L 0.029 758 2(B)(19) O fN NH2對掌七 HO、〇H 3 1000 2(B)(6) .r Wk^Tn wN 〆 HO 〇H 生 0.018 1300 2(C)(10) H3C、s n 對掌性 ^rNtiNH2 HO 办、^ / 0.04 3600
*過去文獻中曾發表之化合物以“已知物，，表示。 -164- 200304380 實例3 活體外研究 實例3(A) ··化合物7在併用及不併用甲硫腺苷作為抗毒性 劑下，於活體外對MTAP-感受態細胞及缺少MTAP之細胞之 生長抑制效應 於活體外使用化合物7與MTA之組合療法測定對缺少 MTAP之細胞及MTAP-感受態細胞兩者之效應。化合物7為 GARFT抑制劑，其Ki為0·5 nM，對mFBP之Kd為290 nM (其 結合性比洛美其索低約1400倍；Bartlett等人之proc AACR 4〇 (I99.9))，且可依上述實例1所述方法合成。 使用5MTAP-感受態及缺少3MTAP之人類肺、結腸、胰、 肌肉、白血病與黑色素瘤細胞株分析化合物7在使用或不使 用MTA下之生長抑制效果，如表4所示。所有細胞株均構自 美國菌種培養物收集處（American Type Culture Collection) 。各細胞株之生長條件與培養基需求說明於表5中。所有培 養物均維持在37°C，5%空氣_C〇2大氣下之潮濕培養箱中。 表4 ·· 細胞株 — MTAP感受態？ 1----- 來源 NCI-H460 是 人類’大細胞肺癌瘤 SK-MES-1 是 人類’肺鱗狀細胞癌瘤 HCT-8 是 A類’回盲曼身腸直腸腺癌瘤 HCT-116 A2058 是 ——---- 人類，結腸直腸癌瘤 是 人類，黑色素痼 PANC-1 BxPC-3 不是 人類，胰上皮癌瘤 不是 人類，胰腺癌瘤 HT-1080 不是 人類，纖維肉瘤 -165- 200304380 將細胞塗覆在96孔微滴定板第2-12行上，第2行定為媒劑 對照組。在第1行中添加同體積培養基。第1行定為培養基 對照組。培養4小時後，以化合物7，併用或不併用非生長 抑制性濃度之MTA處理細胞，進行四重覆孔。細胞與化合 物7培養72小時或168小時，如下表5所示，亦即使細胞連續 曝露在化合物7與/或MTA下約2.5-3倍之細胞倍增時間。添 加MTT (4,5-二曱基嘧唑-2·基）-2,5-二苯基四唑鏘溴化物 (Sigma，St. Louis，MO)至各孔之終濃度為 0.25-1 mg/ml，分 析板培養4小時。排除各孔中液體。添加DMSO至各孔中， 於黑暗中緩慢渦轉混合7-20分鐘。採用分光光度測定法， 於Molecular Devices 力微分析板讀數機上，於540 nm定量甲臜產物。 表5 : 細胞株 培養基* 視需要選用之補充物 塗覆密度 (細胞數/孔） 培養時間 (小時） NCI-H460 MEM1 無 1500 72 SK-MES-1 MEM1 5%非必需胺基酸， 5%丙酮酸鈉 1500 168 HCT-8 Iscove’s1 5%非必需胺基酸， 5%丙酮酸鈉 900 72 HCT-116 Iscove’s1 5%非必需胺基酸， 5%丙酮酸鈉 1000 168 A2058 Iscove’s1 5%非必需胺基酸， 5%丙酮酸鈉 2000 72 PANC-1 DMEM2 無 1000 168 BxPC-3 RPMI-16402 無 1500 168 HT-1080 Iscove’s1 5%非必需胺基酸， 5%丙酮酸鈉 1000 72 -166- 1 補充10%經透析之馬血清濃縮液（dHS)，可自Gibco Life 2
Technologies，Gaitherburg, MD取得商品。 200304380 **MEM與 Iscove’s培養基為來自 Gibco Life Technologies之 商品。 ***DMEM與RPMI_1640培養基為來自 Mediatech，Washington， D. C.之商品。 化合物7併用及不併用MTA對SK-MES-1細胞之影響示於 圖3。圖3顯示，化合物7作為單一製劑時，可完全抑制細胞 生長，其背景值為約5%。然而，添加10 μΜ MTA至化合物7 之IC5G濃度之約60倍時，會大幅降低誘發生長抑制作用之效 果，使細胞數量在化合物7之最高測試濃度下增加至對照組 之約75%。 在化合物7對所有9種細胞株之生長抑制效果方面，圖4顯 示，MTA會降低化合物7在5 MTAP-感受態人類肺、結腸與黑 色素瘤細胞株中之抑制生長活性（使化合物7之IC5〇由3倍移 到50倍以上），但對缺少3 MTAP-人類細胞株沒有影響。 實例3(B):化合物7在併用及不併用甲硫腺苷或dcSAMe作為 抗毒性劑下，於活體外對MTAP-轉感染及偽-轉感染BXPC-3 、PANC-1及HT-1080細胞之細胞毒性 化合物7併用MTA或dcSAMe之組合療法之細胞毒性效應 係採用缺少MTAP或經帶有MTAP之編碼基因之質體轉感染 而變成MTAP-感受態細胞之細胞株之同基因對，亦即 BXPC-3、PANC-1 及HT-1080進行分析。 轉感染法 使用下列正向與反向引子，自胎盤cDNA集合庫進行 -167- 200304380 MTAP cDNA之編碼區之PCR擴增法·· 正向引子 GCAGACATGGCCTCTGGCACC (SEQ ID: 2)，反 向引子 AGCCATGCTACTTTAATGTCTTGG (SEQ ID: 3)。所 擴增之產物選殖至pCR_2.1-TOPO (Invitrogen公司， Carlsbad，CA)中，分析序列（SEQ ID: 1)。次選殖MTAP cDNA 至反轉錄病毒載體pCLNCX中供生產重組反轉錄病毒。 反轉錄病毒之生產法為使用磷酸#5所媒介之轉感染法， 依據供應商提供之方法，使pCLNCX/MTAP載體轉感染至 PT67親兩性之反轉錄病毒套裝細胞株（Clontech，Palo Alto, USA)中_。於轉感染後48小時，自轉感染之套裝細胞株中收 集上澄液，經0.45 μηι濾器過濾後，感染目標細胞。 目標細胞株之轉導法及表現MTAP之純系細胞株之單離 法係於10公分培養皿中，塗覆低密度之目標細胞進行生長 24小時。反轉錄病毒上澄液經含8 pg/ml聚亞甲基溴 (polybrene)之新鮮培養基稀釋1 : 2。排除目標細胞中之培養 基，換成已製備之反轉錄病毒上澄液並培養細胞24小時。 然後排除反轉錄病毒上澄液，換成新鮮培養基，再培養24 小時。然後收集感染之目標細胞，再依一系列密度範圍塗 覆在10公分培養皿上含400 ug/ml遣傳黴素之培養基中，以 選拔轉導之細胞。2-3週後，挑出單獨之菌落，呈個別之純 系細胞株擴增。採用Advantage One Step RT-PCR套組 (Clontech, Palo Alto, USA)，依據製造商之指示進行RT-PCR 分析法，測定個別純系細胞株中MTAP cDNA之表現。 細胞毒性 200304380 使用於補充10%透析之馬血清、5%非必需胺基酸與5%丙 酮酸鈉之Iscove’s培養基中培養之BxPC-3，PANC-1與 HT-1080細胞收集細胞毒性數據。 取中對數期細胞經胰蛋白酶處理，置入60毫米組織培養 皿中，每盤密度為200或250個細胞。使各細胞株之細胞附 著4小時後，以化合物7，併用或不併用MTA或dcSAMe，依 5倍系列稀釋液處理6或24小時。圖5a與圖5b中所示數據之 細胞僅曝露到藥物（群）6小時。圖6中所示數據之細胞則曝 露到化合物7達24小時，並於菌落生長期間連續曝露在MTA 下（亦即24小時及之後）。培養細胞至對照組培養皿中出現可 見之菌落為止，如下表6所示。細胞隨後經PBS洗滌後，使 用含1% w/v結晶紫之25%甲醇固定及染色（Sigma，St. Louis， MO)。以去離子水洗滌培養皿2-3次後，計算菌落數。每種 藥物濃度使用三重覆之培養皿。 表6 : 細胞株 培養基 培養時間（天） BxPC-3 Iscove’s培養基1 13-14 HT-1080 Iscovefs培養基1 6-7 PANC-1 Iscove、培養基1 14 -169- 1 1 scove’s培養基中補充10%已透析之馬血清、5%非必需胺基 酸、5%丙酮酸鈉與1%單硫代甘油。 化合物7併用或不併用dcSAMe或MTA之併行藥物處理6 小時後之細胞毒性示於圖5a與圖5b中。圖5a顯示，在1 ·5 μΜ 200304380 化合物7併用50 μΜΜΤΑ或dcSAMe時，可使MTAP-感受態細 胞存活率提高至100%。反之，如圖5b所示，相同濃度之ΜΤΑ 與dcSAMe並不會使缺少MTAP之細胞之細胞存活率提高 (MTA)或所提高之細胞存活率仍低於MTAP感受態細胞所觀 察到之存活率（dcSAMe)。 · 圖6出示化合物7中添加MTA後選擇性降低細胞毒性之結 - 果。曝露到化合物7達24小時並同時曝露到MTA這段24小時 及之後連續曝露結果，使其對MTAP-感受態細胞株之效力 _ 相對於其缺少MTAP之對等細胞由>10倍變為>35倍。 實例3(C):化合物1與3併用及不併用甲硫腺苷作為抗毒性 劑，於活體外對MTAP-感受態細胞之生長抑制效應 使用化合物1或化合物3併用MTA之組合療法，於活體外 對MTAP-感受態細胞NCI-H460細胞測定生長抑制效應。化 合物1為AICARFT之專一性抑制劑，其Ki達微莫耳濃度且對 mFBP之Kd為83 nM。化合物3為GARFT抑制劑，Ki為2.8 nM 且對 mFBP 之 Kd 為 0.0042 nM (Bartlett 等人之 Proc AACR 40 Φ (1999))。化合物1與3之化學結構式分別如下，其可依美國 專利案Nos· 5,739，141與5,639,747中說明之方法合成，其揭 示内容已以引用之方式完全併入本文中：
-170- 200304380
使用MTAP-感受態人類肺癌瘤細胞株分析分別併用及不 併用ΜΤΑ之化合物1與化合物3之生長抑制作用。使 NCI-H460細胞生長，塗覆及經不同濃度之化合物1或化合物 3併用ΜΤΑ，依上述實例3(A)之相同方式處理。 在化合物1對ΜΤΑΡ-感受態細胞株之生長抑制效應方面 ，圖7顯示，當曝露到化合物1與ΜΤΑ時，化合物1在ΜΤΑΡ-感受態人類肺細胞株中之生長抑制活性下降3倍。同樣地， 當曝露到化合物3與ΜΤΑ時，化合物3在ΜΤΑΡ-感受態細胞 株中之生長抑制活性下降5倍以上。 實例3(D):化合物7於投藥期間及投藥後併用ΜΤΑ時，於活 體外對ΜΤΑΡ-感受態細胞之細胞毒性 使用ΜΤΑΡ-感受態NCI-H460細胞收集化合物7與ΜΤΑ組 合療法之細胞毒性數據。依上述實例3(B)所述方法培養、 生長及染色NCI-H460細胞，但培養時間長達8天。 如圖8所示，延長ΜΤΑ之曝露時間會使接受細胞毒性濃度 之化合物7處理之菌落存活數增加。特定言之，延長投與 ΜΤΑ之時間達至少48小時時，亦即繼曝露到化合物7後至少 1天時，可完全保護細胞免於化合物7所誘發之細胞毒性。 實例4 化合物7於活體内缺少ΜΤΑΡ之異種移植模式中併用及不併 -171 - 200304380 用甲硫腺苷作為抗毒性劑之效應 為了評估組合療法對已知人類缺少MTAP之腫瘤之活體 内影響，使缺少MTAP之細胞株引進小白鼠體内，產生異種 移植之缺少MTAP之腫瘤。使帶有由缺少MTAP之BxPC-3細 胞株所產生皮下腫瘤片段之108 BALB/c/nu/nu雌性小白鼠 置於籠内，每籠3隻，可自由飲水及攝食。進行藥物處理前 14天，即開始餵食缺少葉酸鹽之粒狀飼料（#Td84052, Harlan Teklad，Madison，Wl)，並連續餵食整個實驗期，依腫瘤體 積隨機分成8個處理組，其餘12隻分配至第7組中，自植入 腫瘤後第21天開始，每天對小白鼠投與化合物7共4天，一 天投與2次MTA或媒劑共8天，其劑量示於下表7中。兩種化
合物之媒劑均為0.75%碳酸氫鈉水溶液（7.5% NaHC03溶液 (Cellgro #25-035-4, Mediatech，Herndon，VA)，經注射用無菌 水（Butler，Columbus，OH)稀釋 1:10)，並調整其 pH 至 7.0-7.4 。溶液經0.22微米聚碳酸酯濾紙過濾除菌（Cameo 25GAS， Micron Separations Inc·，Westboro, ΜΑ)。在每天同一時刻每 天記錄代表毒性之腫瘤體積及動物體重減輕程度，共14天 ，然後在其餘實驗期間，於週一、週三及週五時記錄。 -172- 200304380 表7 : 組別 化合物7 (mg/kg) MTA (mg/kg) 1 0 0 2 0 50 3 20 0 4 10 0 5 5 0 6 2.5 0 7 40 50 8 20 50 9 10 50 試驗動物因不同劑量化合物7與MTA所誘發體重減輕程
度之圖解示於圖9中。單獨接受2.5 mg/kg化合物7處理之小 白鼠體重減輕程度類似接受40 mg/kg化合物7加50 mg/kg MTA處理之小白鼠體重減輕程度，顯示其毒性下降16倍。
BxPC-3異種移植物實驗進一步顯示，MTA可在不會負面 影響化合物7之抗腫瘤活性下降低化合物7之毒性。如圖10 及下表8所示，依據腫瘤生長至體積達1000 mm3時平均所需 時間，化合物7之抗腫瘤數據沒有顯著差異（單獨使用20 mg/kg化合物7時需約35.2天，而使用20 mg/kg化合物7+MTA 時需35.3天）。 •173- 200304380 表8 ··每天投與4次化合物7共4天，併用及不併用每天投與2 次50mg/kgMTA共8天時，對抗人類胰臟BxPC-3腫瘤之活性 處理 na 達到1000 mm3時所需時間(天) p-值b 平均值 SD 中間值 化合物7 (mg/kg) 媒劑 對照組 20 5 2.5 媒劑對照組 12 20.8 4.9 20.4 20 mg/kg化合物7 9 35.2 6.6 36.4 0.290 0.329 - 10 mg/kg化合物7 11 34.0 6.0 33.4 5 mg/kg化合物7 12 32.1 6.4 32.4 2.5 mg/kg化合物7 10 32.3 5.9 32.4 <0.0001 50 mg/kg MTA 11 22.6 6.8 21.4 20 mg/kg化合物 7+MTA 12 35.3 3.4 34.9 0.957 0.135 0.170 0.462 10 mg/kg化合物 7+MTA 12 37.7 4.9 37.9 a可分析之腫瘤數 b以Excel計算之雙向p-值 因此，當對接受缺少葉酸鹽飼料處理之帶nu/nu腫瘤之小 白鼠每天投與化合物7共4天之同時，亦每天添加2次MTA共 8天時，可使化合物7之醫療效果提高16倍。 實例5 於活體内延長MTA之投藥療程對化合物7 之最高耐受劑量之影響 -174- 200304380 進行一系列實驗來分析活體内之MTA投藥療程對降低毒 性劑所誘發毒性之效果。分置BALB/c/nu/nu雌性小白鼠， 每籠3隻，可自由飲水與攝食。開始藥物處理前至少14天， 即開始餵食缺少葉酸鹽之粒狀飼料（#Td84〇52, Harlan Teklad，Madison，WI)，並連續餵食整個實驗期。依表丨⑽ 不計畫’對小白鼠每天投與化合物7共4天，及每天投與MTA 或媒劑2次。至少在每天同一時刻每天記錄代表毒性測定值-之動物體重減輕程度，共18天。表U综合說明多次實驗之 數據’亦即每個療程至少有2次實驗。此等數據顯示，合併 投與MTA時，可提高化合物7之最高耐受劑量。為了產生此 效果’ MTA必需在開始進行化合物7處理時即投藥，並持續 至化合物7處理結束以後。此外，由於化合物7之活性至少 持續至最後一劑之後數天，因此MTA必需繼續在此活性期 間投藥，亦即投與細胞毒性劑最後一劑後至少2天，才會產 生效果。 表11 : 化合物7(天） MTA(天） 化合物7最高耐受劑量提高倍數 1-4 1-8 4 1：4 1-6 4 1-4 1-5 盔 1-4 5-7 無 1-4 3-8 無 【圖式簡單說明】 圖1為說明產生及回收腺嘌呤核甞酸（AMP)之細胞内代謝 -175- 200304380 途徑之圖解。 圖2為說明肌甞酸（IMP)重新合成途徑之圖解。 圖3為說明經不同濃度化合物7單獨處理或併用化合物7 與10 μΜ MTA之組合療法處理之MTAP-感受態SK-MES-1非 小細胞肺癌細胞之生長受抑制之圖解（依本文中實例3(A)之 說明進行）。 圖4為說明於活體外使用化合物7與ΜΤΑ處理ΜΤΑΡ-感受 態細胞時，相較於缺少ΜΤΑΡ之細胞，使化合物7之抑制生 長效力選擇性逆轉之程度列表（依本文中實例3(A)之說明進 行）。 圖5a為說明經ΜΤΑΡ基因轉感染之BxPC-3細胞經不同濃 度化合物7單獨處理或併用50 μΜ MTA或50 μΜ dcSAMe處 理時之活體外細胞毒性之圖解（依本文中實例3(B)之說明進 行）。 圖5b為說明缺少ΜΤΑΡ之BxPC-3經不同濃度化合物7併用 50 μΜ MTA或50 μΜ dcSAMe處理時之活體外細胞毒性之圖 解（依本文中實例3(B)之說明進行）。 圖6為說明MTA於ΜΤΑΡ-感受態細胞及缺少ΜΤΑΡ之細胞 株之同基因對中選擇性降低化合物7之細胞毒性之列表。 圖7出示使用化合物1或化合物3併用ΜΤΑ之組合療法於 ΜΤΑΡ-感受態NCI-H460細胞中降低生長抑制作用之列表 (依本文中實例3(C)之說明進行）。 圖8為細胞曝露在ΜΤΑ下不同時間期後，使化合物7之細 胞毒性降低之圖解。 -176- 200304380 圖9為說明小白鼠接受MTA之劑量處理後，使化合物7所 謗發體重減輕程度下降之圖解。 圖10為說明化合物7併用及不併用ΜΤΑ投藥給帶有 BxPC-3異種移植腫瘤之小白鼠時之抗腫瘤活性之圖解。 -177- 200304380 序列表 <110> Pfizer Inc.
Bloom, Laura A.
Boritzki, Theodore J.
Ogden, Richard Skalitzky, Donald Kung, Pei-Pei Zehnder, Luke Kuhn, Leslie Meng, Jerry Jialun <120>用於治療缺少甲硫腺甞磷酸化酶之細胞之組合療法 <130〉pcl9080A (AG110-01) <140 092104399 <141> 2003-03-03 <150> 1. 2002-03-04 US 60/361,645 <151> 2. 2003-02-09 US 60/432,275 <160>3 <170>專利版3.1 <210〉1 <211〉870 <212〉DNA <213>人工序列 <220>
<223〉選殖之 MTAPcDNA <400> 1 gcagacatgg ggcctggatg ggcaagccat gcaaggcatg cctctggcac atccagaaat ctgatgcctt gaaggcagca caccaccacc tttagaagga aattttgggg caccatcatg gccgtgaaga agaactgaaa aagataaala ccttcaaavjg ttggaataat aatatgtgga atgttgattg tcaactacca tggtggaaca tactccattt cgtcctcctt ggcgaacatc 200304380
tgggctttga aggaagaggg ctgtacacat gtcatagtga ccacagcttg tggctccttg BOO agggaggaga ttcagcccgg cgatattgtc attattgatc agttcattga caggaccact 360 atgagacctc agtccttcta tgatggaagt cattcttgtg ccagaggagt gtgccatatt 420 ccaatggctg agccgttttg ccccaaaacg agagaggttc ttatagagac tgctaagaag 480 ctaggactcc ggtgccactc aaaggggaca atggtcacaa tcgagggacc tcgttttagc 540 tcccgggcag aaagcttcat gttccgcacc tggggggcgg atgttatcaa catgaccaca 600 gttccagagg tggttcttgc taaggaggct ggaatttgtt acgcaagtat cgccatggcg 660 acagattatg actgctggaa ggagcacgag gaagcagttt cggtggaccg ggtcttaaag 720 accctgaaag aaaacgctaa taaagccaaa agcttactgc tcactaccat acctcagata 780 gggtccacag aatggtcaga aaccctccat aacctgaaga atatggccca gttttctgtt 840 ttattaccaa gacattaaag tagcatggct 870
<210> 2 <211> 21 <212> DNA <2工3> 人工序列正向引子 <400> 2 gcagacatgg cctctggcac c 21 <210> 3 <211> 24
<212> DNA <213>人工序列反向引子 <400〉 3 agccatgcta ctttaatgtc ttgg 24

Claims (1)

  1. 200304380 拾、申請專利範園： 1. 一種用於選擇性殺死哺乳動物之缺少MTAP之細胞之醫 藥組合物，其包含： (a)醫療有效量之甘胺醯胺核糖核甞酸甲酸基轉化酶、 胺基咪唑羧醯亞胺核糖核苷酸甲醯基轉化酶或兩者 之抑制劑；及 (b)抗毒性劑，其用量可有效提高抑制劑之最高耐受劑 量； 其中抗毒性劑係在投與抑制劑期間或之後投與。 2. —種用於選擇性殺死哺乳動物之缺少MTAP之細胞之醫 藥組合物，其包含： (c) 醫療有效量之甘胺醯胺核糖核：y：酸甲醯基轉化酶 (“GARFT”）、胺基咪唑羧醯亞胺核糖核甞酸甲醯基轉化 酶（“AICARFT”）或兩者之抑制劑；及 (d) 抗毒性劑，其用量可有效提高抑制劑之最高耐受劑 量； 其中該抑制劑對膜結合性葉酸鹽蛋白質沒有冑親和性。 3· -種用於選擇性殺死哺乳動物之缺MTAp之細胞之醫 藥組合物，其包含： ⑷
    醫療有效量之甘胺醯脖访蚀 I肢敗妝核搪核苷酸甲醯基轉化酶 (“GARFT”)之抑制劑，該抑制劑如下式：
    200304380 (b)抗毒性劑，其用量可有效提高抑制劑之最高耐受劑 量； 其中抗毒性劑係在投與抑制劑期間或之後投與。 4·根據申請專利範圍第1、2或3項之醫藥組合物，其中抗毒 性劑為MTAP受質或MTAP受質之前藥。 5 ·根據申凊專利範圍第1、2或3項之醫藥組合物，其中抗毒 性劑如式X :
    (X) IUi係選自下列組成之群： (a) -Rg，其中Rg代表Cl-C5烷基、c2-C5伸埽基或伸炔基 ，其係未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代 :CdC6燒氧基、CdC6燒氧基（CdC6)燒基、c2至c6 炔基、醯基、1¾基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷 基、雜環獍基、芳基或雜芳基； (b) -Rg(Y)RhRi，其中Rg如上述定義，γ代表〇、NH、s 或亞甲基；且化與^獨立代表⑴H ; (ii) Ci_C9烷基、或 C2_C0烯基或炔:基’其係未取代或經一或多個獨立選自下 列之取代基取代：^至^烷氧基；（^至^烷氧基（Cisc6) 烷基；C2至C6炔基；醯基；鹵基；胺基；羥基；硝基； 氫硫基；·NCOOR。； -CONH2 ; C(〇)N(R0)2 ; C(0)R。或 C(0)0R。’其中R。係選自下列組成之群：η、燒基 200304380 、c2-c6雜環烷基、環烷基、雜芳基、芳基與胺基，其係 未取代或經下列取代：Ci-C^烷基、2-至6-員雜烷基、雜 環烷基、環烷基、CrC^boc-胺烷基；環烷基、雜環烷基 、芳基或雜芳基；或（iii)單環狀或雙環狀環烷基、雜環 烷基、芳基或雜芳基，其係未取代或經一或多個獨立選 自下列之取代基取代：（^至^烷基、（：2至(：6烯基、（^至 C6烷氧基、（^至(：6烷氧基（(^至(：6)烷基、C2iC6炔基、醯_ 基、鹵基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷基、雜環 烷基、芳基、雜芳基、_COOR。、-NCOR。（其中R。如上述 足義）2至6貝雜}元基、Ci至C6燒基_J募燒基、Ci至C6燒 基-雜環燒基、（^至^燒基-芳基或（^至^垸基-芳基； (c) C(0)NRjRk，其中Rj與Rk獨立代表⑴H;或⑼Ci-C6 烷基、胺基、cvc6鹵烷基、CVC^烷基、Cl_c6 boc胺 燒基、cvc6環燒基、c2-c6晞基、c2-cw缔基、C2_C6# 炔基，其中Rj與Rk可視需要與其所附接之氮共同結合形 成含2至5個碳原子之雜環烷基或雜芳基環，其中 (:⑴州心心基團係未取代或再經一或多個獨立選自下列 之取代基取代：-C(0)R。、_C(0)0R。（其中R。如上述定義） :G至⑽基、C2k6稀基、CjC说氧基、qc成 氧基（CjC6)燒基、C2J_C6块基、驢基、齒基、胺基、 幾基、硝基、氫硫基、環燒基、雜環燒基、芳基或雜芳 基；或 ” (d) C(0)0Rh，其中Rh如上述定義； 反42與R44獨立代表Η或〇H ;且 200304380 R43與R45獨立代表Η、OH、胺基或鹵基； 其中上述任何環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基部份可 再經一或多個獨立選自下列組成之群中之其他取代基 取代：硝基、胺基、-(CHA-CN (其中z為〇_4)、由基、_ 烷基、鹵芳基、輕基、酮基、CjC6烷基、c2至c6晞基 、C2至C6炔基、雜烷基、未取代之環烷基、未取代之雜 環烷基、未取代之芳基或未取代之雜芳基； 及其鹽或溶合物。 6 ·根據申請專利範圍第4項之醫藥組合物，其中抗毒性劑如 式XI :
    Rm與Rni蜀立選自下列組成之群：Η ;其磷酸鹽或鈉鹽 ;C(0)N(R〇)2 ; C(0)R。；或 C(0)0R。，其中 R。係選自下 列組成之群：H、Cl_C：6烷基、CrC6雜環烷基、環烷基、 雜芳基、芳基及胺基，其係未取代或經Cl_c6烷基、Crq 雜坑基、CVC6雜環烷基、環烷基、boc-胺烷基取 代，及 其溶合物或鹽。 7.根據申請專利範圍第1或2項之醫藥組合物，其中抑制劑 -4- 200304380 為式i化合物：
    其中： A代表硫或石西； Z代表：a)非環狀間隔基，其利用1至10個原子分隔A與 醯胺基之羰基態碳，該等原子獨立選自：碳、氧、硫、 氮與磷，該間隔基為未取代或經一或多個選自下列組成 之群之取代基取代：烷基、雜烷基、鹵烷基、画芳基、 鹵環烷基、画雜環烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜 芳基、-N02、-NH2、-N-ORc、-(CH2)Z-CN，其中 z為 0-4 ，鹵基、-OH、-0-Ra-0-Rb、-ORb、-CO-Rc、-0-C0-Rc 、-CO-ORc、_0-C0-0Rc、-0-C0-0-C0-Rc、-0_0RC、酮 基（=0)、硫酮基（=S)、-S02-Re、-SO-Re、-NRdRe、-CO-NRdRe 、-0-C0-NRdRe、-NRe-CO-NRdRe、-NRe-CO-Re、 -NRe-C02_0Re、-CO_NRc_ CO-Rd、-0-S02-Rc、-0-S0-Rc 、-0-S-Rc、-S-CO-Rc、-SO-CO_ORc、-S02_C0-0Rc、-0-S03 、-NRc-SRd、-NRc-SO-Rd、-NRc-S02-Rd、-CO-SRc、 -CO-SO-Rc、-C0-S02-Rc、-CS-Rc、-CSO-Rc、-CS02-Rc 、-NRc_CS-Rd、-O-CS-Rc、-0-CS0-Rc、-0-CS02-Rc、 -S02-NRdRe、-SO-NRdRe、-S-NRdRe、-NRd-CS02-Rd、 200304380 -NRc-CSO-Rd ' -NRc-CS-Rd ^ -SH ' -S-Rb^-P〇2.〇rc , ^ 中Ra係選自下列組成之群：燒基、雜烷基、烯基與玦基 ’ Rb係選自下列組成之群：燒基、雜燒基、_貌基、缔 基、炔基、自基、-CO-Re、-CO-ORe、-0-C0-0-Rc、-0-C0-R 、-NRc-CO_Rd、-CO-NRdRe、_〇H、芳基、雜芳基、雜環 燒基與環烷基；Re、Rd與Re分別獨立選自下列組成之群 :氫、羥基、鹵基、烷基、雜烷基、鹵烷基、缔基、決-基、-CORf、-COORf、-O-CO-O-Rf、-0-C0-Rf、-OH、芳 基、雜芳基、環烷基與雜環烷基，或1與!^環化形成雜 芳基或雜環燒基；且Rf係選自下列組成之群：氫、貌基 與雜烷基；且上述取代基中所出現之任何烷基、雜烷基 、埽基、芳基、環烷基、雜環烷基或雜芳基部份可再經 一或多個獨立選自下列組成之群之其他取代基取代·· •N〇2、-NH2、-(CH2)Z-CN，其中 z為 0-4，鹵基、鹵烷基 、鹵芳基、_〇H、酮基（=〇)、-N-OH、NRc-ORc、-NRdRe 、-CO-NRdRe、-CO-〇Re、-CO-Re、-NRe-CO-NRdRe、 -C-CO-〇Rc、_NRc-CO-Rd、-〇_c〇-〇-Rc、-〇_CO-NRdRe、 一SH、-〇-Rb、_〇-Ra-〇_Rb、-S-Rb、未取代之烷基、未取 代之芳基、未取代之環坑基、未取代之雜環燒基及未取 代之雜芳基，其中Ra、Rb、Rc、1與&如上述定義；b) 裱烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基二價基團，該二價基 围為未取代或經一或多個選自約項所述之取代基取代； 或C)至少一個遠非環狀間隔基與至少一個該二價基團之 組合，其中當該非環狀間隔基直接鍵結A時，該非環狀 -6 - 一個二價基團 間隔基利用1至約10個原子分隔A與其 ，此外，當該非環狀間隔基直接鍵結醯胺基之羰基態碳 時，該非環狀間隔基利用1至約10個原子分隔醯胺 基態碳與其中一個二價基團； Ri與R2獨立代表氫、（^至匚6燒基或—容易水解之基圈 R3代表氫或(^至(：6燒基或環烷基，其係未取代或經一 或多個_基、羥基或胺基取代。 根據申請專利範圍第1或2項之醫藥組合物，其中抑制劑 為式II化合物：
    其中： A代表硫或硒； (基團）代表非環狀間隔基，其利用1至5個原子分隔a 與（環），該等原子獨立選自：碳、氧、硫、氮與磷，該 間隔基為未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基 取代·· C^c6烷基、c2至c6晞基、c^c6烷氧基、匕至 C6燒氧基（(^至（：6)烷基、c2sc6炔基、醯基、鹵基、胺 基、羥基、硝基、氫硫基、環烷基、雜環烷基、芳基或 雜芳基環； (環）代表至少一個環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基 200304380 環，其係未取代或經一或多個選自下列之取代基取代： C^C：6烷基、C2至C6晞基、CdC6烷氧基、Cjc6燒氧 基（Ci至C6)燒基、C2至C6块基、驢基、鹵基、胺基、與 基、硝基、氫硫基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳夷 環； 心與以2獨立代表：氫、匕至匕烷基或一容易水解之基 團；及 R3代表氫或(^至匕烷基或環烷基，其係未取代或經— 或多個||基、羥基或胺基取代。 9·根據申請專利範圍第卜2或3項之醫藥組合物，其中抑制 劑為甘胺醯胺核糖核芬酸甲醯基轉化酶之專一性 劑。 P制 10·根據申請專利範圍第9項之醫藥組合物，其中抑制劑為弋
    (VII) 其中L代表硫、ch2或硒； Μ代表硫、氧或二價甚圆 胺 1只卷團cvc3烷、C2_CJ希 南環埝 取代基取代1基、雜境基、函燒基、函芳基、 200304380 基、ii雜環烷基、芳基、環烷基、雜環烷基、雜芳基、 -N02、-NH2、-N-ORc、-(CH2)Z-CN，其中 z為 0-4，鹵基 — 、-OH、-0-Ra-0_Rb、-ORb、-CO-Rc、-0-C0-Rc、-CO-ORc 、-0-C0-0Re、-0-C0-0-C0-Re、-0-0Rc、酮基（=0)、硫 酉同基（=S)、-S〇2-Rc、_SO-Rc、_NRdRe、-CO-NRdRe、 e -0-C0-NRdRe、-NRc-CO-NRdRe、-NRc-CO-Re、-NRc-C02_ n ORe、-CO-NRc-CO_Rd、-0-S02-Rc、-0_S0-Rc、-0_S-Re 、-S-CO-Rc、-SO-CO-ORc、-S02-C0-0Rc、-0-S03、_NRcrSRd · 、-NRc-SO-Rd、-NRc_S02-Rd、-CO_SRc、-CO-SO-Rc、 _C0-S02-Rc、-CS_Rc、-CSO-Rc、-CS02-Rc、-NRc-CS-Rd 、-0-CS，Rc、-0-CS0-Rc、-0_CS02-Rc、-S02_NRdRe、 -SO-NRdRe、_S-NRdRe、-NRd-CS02-Rd、-NRc-CSO-Rd、 _NRc-CS_Rd、-SH、-S-Rb及-P02_0Re，其中 Ra係選自下列 組成之群··烷基、雜烷基、烯基與炔基；Rb係選自下列 組成之群中：烷基、雜烷基、函烷基、晞基、炔基、鹵 基、-CO-Rc、-CO-ORe、_〇-CO-0-Rc、-0-C0-Re、-NRc-CO-Rd -φ 、-CO_NRdRe、_OH、芳基、雜芳基、雜環烷基與環烷基 ;Re、1^與Re分別獨立選自下列組成之群：氫、羥基、 鹵基、烷基、雜烷基、鹵烷基、晞基、炔基、-CORf、-COORf ^ 、-O-CO-O-Rf、-0_C0-Rf、·ΟΗ、芳基、雜芳基、環烷 基與雜環烷基，或Rd與1^環化形成雜芳基或雜環烷基； 且Rf係選自下列組成之群：氫、烷基與雜烷基；且上述 取代基中所出現之任何烷基、雜烷基、晞基、芳基、環 烷基、雜環烷基或雜芳基部份可再經一或多個獨立選自 ~ -9- 200304380 下列組成之群之其他取代基取代：-N〇2、-NH2、 -(CH2)Z-CN，其中z為0-4，鹵基、鹵虎基、鹵芳基、-〇H 、酮基（=0)、-N-OH、NRe-ORe、-NRdRe、-CO-NRdRe、 -CO-ORc、-CO-Rc、_NRc_CO_NRdRe、-C-CO-ORc、 -NRc-CO_Rd、-0-C0_0-Rc、-0-C0-NRdRe、-SH、-0-Rb 、-0-Ra-0-Rb、-S-Rb、未取代之烷基、未取代之芳基、 未取代之環燒基、未取代之雜環燒基及未取代之雜芳基 ，其中Ra、Rb、Rc、Rd與Re如上述定義； T 代表 CVC6 烷基；C2-C6 烯基；C2-C6 炔基；-C(〇)E， 其中E代表氫、CVC3烷基、C2-C3烯基、c2-C3炔基、 CKCVCd燒氧基、或NR10Rii，其中R10與Ru獨立代表氫 、Crq烷基、C2-C3晞基、C2-C3炔基；羥基；硝基；Sr12 ’其中R12為氫、CVC6烷基、C2-C6缔基、c2-c6炔基、氰 基；或CKCVC3)烷基；及 R2〇與分別獨立為氫或為一部份可與所附接之C〇2 共同形成容易水解之酯基。 11. 12. 根據申請:專利範圍第1〇項之醫藥組合物，其中該抑制劑 對膜結合性葉酸鹽蛋白質沒有高親和性。 根據申請專利範園第1或2項之醫藥組合物，其中抑制劑 如下化學結構式：
    10- 200304380 13. 根據t請專利範圍第⑷項之醫藥組合物，其中抗毒性 劑係在投與抑制劑之各劑量期間或之後投與。几母 14. 根據申請專利範圍第卜2或3項之醫藥組合物，其中抑制 劑主要利用還原之葉酸鹽載體蛋白質運送至細胞中。 15•根據申請專利範圍第2項之醫藥組合物，其中 式 XII :
    Rw係選自下列組成之群： (a) Rg ’其中Rg代表CVC：5烷基、CVC5伸埽基或伸炔基 ，其係未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代 :C^c6烷氧基、Clic6烷氧基（CjC6)烷基、C^C6 块基、醯基、由基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷 基、雜環烷基、芳基或雜芳基； (b) -Rg(:Y)RhRi ’其中Rg如上述定義，γ代表〇、nh、s 或亞甲基；且以與心獨立代表⑴H; (ii)代表Ci_C9烷基、 或CyC：6晞基或炔基，其係未取代或經一或多個獨立選自 下列之取代基取代：（^至^烷氧基；^至^烷氧基（(：1至 C6)燒基；C2至C6炔基；醯基；鹵基；胺基；羥基；硝基 ’氫硫基；-NCOOR。； -CONH2 ; (3(0)>1(11。)2 ; C(0)R。； 或C(0)0R。，其中R。係選自下列組成之群·· Η、Cl-C6烷 基、C2_C0雜環烷基、環烷基、雜芳基、芳基與胺基，其 200304380 係未取代或經下列取代：CrC6烷基、2-至6-員雜烷基、 雜環烷基、環烷基、Ci-Ceboc-胺烷基；環烷基、雜環燒 基、芳基或雜芳基；或（iii)單環狀或雙環狀環烷基、雜 環fe基、芳基或雜芳基，其係未取代或經一或多}獨五一 選自下列之取代基取代：（^至匕烷基、〇2至（：6烯基、Ci 至CVfe氧基、CdC6燒氧基（C^C：6)燒基、〇2至(1：6決基、 醯基、齒基、胺基、羥基、硝基、氫硫基、環烷基、雜 環烷基、芳基、雜芳基、-COOR。、-NCOR。（其中R。如上 述定義）、2至6員雜烷基、（^至^烷基-環烷基、（^至(：6 烷基-雜環烷基、^至^烷基-芳基或(^至（：6烷基_芳基； (c) C(0)NRjRk，其中Rj與Rk獨立代表⑴η ;或⑴）Ci-C6 燒基、胺基、CVCj烷基、CVC6胺烷基、CiA boc-胺 燒基、（^-(^環燒基、Ci-C^晞基、c2_c6伸缔基、c2-C6伸 块基，其中Rj與Rk可視需要與其所附接之氮共同結合形 成含2至5個碳原子之雜環烷基或雜芳基環，其中 C(0)NRjRk基團係未取代或再經一或多個獨立選自下列 之取代基取代：-C(0)R。、-C(0)0R。（其中R。如上述定義） 、C^C6烷基、C2SC6締基、（^至(：6烷氧基、〇^至(：6烷 氧基（(^至（：6)烷基、C2至C6炔基、醯基、鹵基、胺基、 羥基、硝基、氫硫基、環烷基、雜環烷基、芳基或雜 芳基；或 (d) C(0)0Rh，其中Rh如上述定義； R42與R44獨立代表Η或OH;且 R43與R45獨立代表Η、〇Η、胺基或鹵基； -12- 200304380 其中上述任何環烷基、雜環烷基、芳基、雜芳基部份可 再經一個或多個獨立選自下列組成之群之其他取代基 取代：硝基、胺基、-(CH2)Z-CN (其中z為0-4)、鹵基、鹵 烷基、鹵芳基、羥基、酮基、心至〇：6烷基、〇2至〇：6烯基 、C2至C6玦基、雜燒基、未取代之環垸基、未取代之雜 環烷基、未取代之芳基或未取代之雜芳基； 且R46代表（i) H; (ii) CVC9烷基或C2-C6^基或炔基，· 其係未取代或經一或多個獨立選自下列之取代基取代 :c^c6烷氧基；c^c6烷氧基（CjC6)烷基； 炔基；醯基；_基；胺基；羥基；硝基；氫硫基；環烷 基、雜環烷基、芳基或雜芳基；或（iii)單環狀或雙環狀 環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基，其係未取代或經一 或多個分別獨立選自下列之取代基取代：^至匕烷^、 C2至C6晞基、Cl至C6烷氧基、^至〇6烷氧基（(^至^)烷基 、CrC6炔基、醯基、鹵基、胺基、羥基、硝基、氫硫美 、環烷基、雜環烷基、芳基或雜芳基； 爲土 及其鹽:或溶合物。 •13-
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