CN113603721B - 一种合成saicar的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明一种合成SAICAR的方法，以5‑氨基‑1‑((2R,3R,4S,5R)‑3,4‑二羟基‑5‑(羟甲基)四氢呋喃‑2‑基)‑1H‑咪唑‑4‑甲酰胺为原料，依次经5‑氨基‑1‑((3aR,4R,6R,6aR)‑6‑(羟甲基)‑2,2‑二甲基四氢呋喃[3,4‑d][1,3]二氧‑4‑基)‑1H‑咪唑‑4‑甲酰胺、5‑氨基‑1‑((3aR,4R,6R,6aR)‑6‑(羟甲基)‑2,2‑二甲基四氢呋喃[3,4‑d][1,3]二氧‑4‑基)‑1H‑咪唑‑4‑羧酸、二苄基(5‑氨基‑1‑((3aR,4R,6R,6aR)‑6‑(羟甲基)‑2,2‑二甲基四氢呋喃[3,4‑d][1,3]二氧‑4‑基)‑1H‑咪唑‑4‑羰基)‑L‑天冬氨酸等的制备，制得成品纯度高达99.6%，杂质0.4%，非对映体过量（de）值为97.3%，收率16.9%。

Description

一种合成SAICAR的方法
技术领域
本发明涉及化工制药领域，具体涉及一种合成SAICAR的方法。
背景技术
5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸)，通常简称SAICAR，是嘌呤从头生物合成途径中极为重要的中间代谢产物，由5-氨基-1-(5-磷酸-D-核糖基)咪唑-4-羧酸经SAICAR合成酶转化而成。在生物体内，正常水平的SAICAR能维持细胞生理功能的必要状态，而高水平的SAICAR则可作为促进肿瘤生长和存活的肿瘤代谢物。此外，SAICAR作为无创性诊断标志物和具有治疗意义的化学模拟物有很好的生物学价值。因此，对SAICAR性质的研究和探索已成为生理学和药学领域的热点。
越来越多的研究聚焦于SAICAR的生物学效应，引发了对SAICAR的巨大需求。目前获得SAICAR有两种不同的策略，第一种正如SAICAR的发现过程一样，即在一定的酶催化作用下，以AICAR(腺苷类似物，AMPK激活剂)为原料通过生物合成或生物发酵技术等手段获得SAICAR。此外，从药物化学的角度来看，SAICAR也可以从简单的原料出发，通过化学方法合成，如20世纪60年代，Shaw及其同事成功合成了微量的SAICAR及其衍生物。然而，现有的SAICAR生物合成或化学合成方法均规模有限，且纯度不高，相关化合物完整的波普数据也一直未见报道。
因此，尽管通过生物技术或化学合成等策略能够获得SAICAR，但在大多数情况下，可通过商业渠道购买的SAICAR仅限于微克或毫克级，而且费用十分昂贵(大约2000-3000元/毫克)。目前，现有的制备SAICAR的方法的主要缺点源自于SAICAR的分子结构稳定性差、极性高，从而使合成条件复杂，操作繁琐，规模性生产难度极大。此外，起始原料是否经济易得和生产成本也是需要考虑的因素。这些不利因素均成为大规模、高纯度地合成SAICAR的关键瓶颈。
发明内容
本发明的目的在于提供一种合成SAICAR的方法。
本发明的目的是通过如下技术措施实现的：
一种合成SAICAR的方法，其特征在于，它是以5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺为起始原料，分别经过如下步骤制得：
(1)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备；
(2)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸的制备；
(3)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备；
(4)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备；
(5)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备；
(6)(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备。
进一步，所述5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备是取5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(AICAR)溶解于丙酮中形成丙酮溶液，然后加入质量分数为70～72％的HClO4，控制温度为20～25℃，搅拌3～5小时进行反应，反应结束，置于冰水浴中冷却，然后加入质量分数为25％～28％的氨水，加入结束后从冰水浴中取出，升温至20～25℃搅拌3～5小时，经旋转蒸发仪浓缩除去溶剂后进行柱层析，所述柱层析填料为200～300目粒径的硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为3～7％甲醇-二氯甲烷溶液，所述5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(AICAR)与甲醇-二氯甲烷溶液的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol：L，洗脱结束，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后置于真空干燥箱中，设置干燥温度为50～55℃，真空度为-0.06～-0.08MPa干燥6～10小时，取出得到白色固体的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺；所述5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与丙酮的质量体积比为1:58～61，所述丙酮、HClO4、氨水的体积比为235～245:1.8:4.0。
进一步，所述5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸的制备，是在氮气保护条件下，将上述制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺置于5～7mol/L的氢氧化钠溶液中，回流反应9～14小时，反应结束，用冰水浴冷却混合物，缓慢滴加浓盐酸调节混合物pH至4～5，然后置于旋转蒸发仪中，设置温度为35～40℃，蒸发掉溶剂得到残余物，再用乙醇提取残余物两次，合并两次提取液并浓缩得到灰白色浆液，即为5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸；所述乙醇为无水乙醇或含水乙醇均可。
进一步，所述5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与氢氧化钠溶液的质量体积比为1～1.41:10，单位为g：mL，所述氢氧化钠溶液与乙醇的体积比为1:2～4，所述乙醇优选为无水乙醇。
进一步，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备，是在氮气保护下，取上述制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸和二苄基L-天冬氨酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)置于烧瓶中，加入N,N-二异丙基乙胺的氯仿溶液，在温度为20～25℃搅拌反应1～2小时，用萃取剂进行萃取，然后用与萃取剂等体积的饱和NaHCO3溶液和氯化钠溶液依次洗涤、再经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪温度为35～40℃浓缩除去溶剂、最后经柱层析分离，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；所述5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸、二苄基L-天冬氨酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为9.5：14.5：17.8：39.4，所述N,N-二异丙基乙胺与氯仿的体积比为0.9～1.1：10，所述萃取剂是体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液或体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液，所述柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，所述柱层析洗脱液为体积分数为0～5％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸与洗脱液的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol：L。
进一步，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备，是在氮气保护下，于-5～0℃条件下，将上述制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸、焦磷酸四苄酯溶于无水四氢呋喃中，然后分3～5次加入NaH，随后在保温-2～0℃条件下搅拌30～50分钟，反应结束，在-2～0℃条件下逐滴滴加冷水淬灭反应，滴加速度为20～30滴/分钟，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液或体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷进行萃取，萃取液用饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠溶液进行洗涤，再经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，最后经柱层析分离，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；其中所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸、焦磷酸四苄酯、NaH的摩尔比为4.1：6.2：12.4，所述焦磷酸四苄酯与无水四氢呋喃溶液的摩尔体积比为0.9～1.1：10，单位为mol：L；所述淬灭反应的冷水与NaH的摩尔比为5～10:1，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与萃取液的质量体积比为1～1.22：80，单位为g:mL；所述柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，所述柱层析洗脱液为体积分数为0～4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与洗脱剂的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol:L。
进一步，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备，是在氮气保护下，于-2～0℃保温条件下向二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的四氢呋喃溶液中缓慢滴加浓度为12mol/L的盐酸，滴加速度为20～30滴/分钟，滴加结束，将反应物升温至20～25℃搅拌反应1～2小时，反应结束后，将反应物冷却至-2～0℃滴加1～3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8～9，然后用萃取剂进行萃取，再用饱和碳酸氢钠和氯化钠溶液进行洗涤，萃取液经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪浓缩除去溶剂、再经柱层析分离得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；其中所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的四氢呋喃溶液浓度为0.06～0.10mol/L，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与浓盐酸摩尔比为1：20～50，所述萃取剂是体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷或体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液，所述柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，所述柱层析洗脱液为体积分数为0～4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与洗脱剂的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol:L。
进一步，所述(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备，是在温度为-2～0℃条件下，向二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液中加入Pd(OH)2/C，然后经氢气置换后，再在氢气气氛下升温至20～25℃进行反应，反应结束后，以硅藻土过滤，再用甲醇洗涤滤饼，合并滤液与甲醇洗涤液并经旋转蒸发仪浓缩，即得(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液的浓度为0.05～0.10mol/L，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与Pd(OH)2/C的摩尔比为1:0.15～0.30。
为了大幅度降低制备成本，上述5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺按如下方法制得：
(1)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：
将肌苷(8.04g，30.0mmol)和4-(二甲氨基)吡啶(0.37g，3.0mmol，0.10当量)加入45mL干燥的吡啶中，在0℃逐滴加入醋酸酐(30.60g，300mmol，10当量)，随后反应混合物在0℃下搅拌1小时，升至室温搅拌5小时，LC-MS监测反应。反应完成后，用5mL冷的甲醇淬灭反应，浓缩所得粗品加入冷的体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(20mL)溶液搅拌均匀、过滤，滤饼用体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(5mL)、乙酸乙酯(5mL)洗涤，真空干燥得到白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯。
(2)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：
将步骤(1)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(7.30g，18.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.60g，27.9mmol，1.5当量)溶于二氯甲烷(70mL)中，在0℃下滴加2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.80g，22.4mmol，1.2当量)，并于0℃下搅拌2小时，反应完成后，滴加冷水(10mL)淬灭反应，用氯仿萃取，萃取液再用水和饱和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，并经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为20～30倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为7:3～9:1的乙酸乙酯/正己烷)，得白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；
(3)9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮的制备：
室温下向步骤(2)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(6.30g，13.0mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入的氨水溶液(28％，30mL)，并于室温下搅拌反应1小时，然后浓缩除去所有溶剂得到9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮；
(4)5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备：
将步骤(3)中制得的9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(3.56g，10.0mmol)在NaOH(0.2摩尔/升，100mL，2.0当量)溶液中回流1小时，反应完成后用稀盐酸(1～2mol/L)调节pH至8，用体积比为1：9的甲醇和二氯甲烷进行萃取，经旋转蒸发仪浓缩得粗品，经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为20～30倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为1:9～1:4的甲醇和氯仿溶液)得白色固体，即为5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺。
本发明具有如下的有益效果：
本发明涉及一种合成SAICAR的方法，所制备的成品纯度高，可高达99.6％以上，成品杂质少，可低于0.4％，光学纯度高，非对映体过量(de)值为97.3％，制备方法收率高，可高达16.9％，稳定性好，放置于-20℃环境中，至少可以保存24个月，本发明制备成本低，操作简单，可实现实验室规模化生产。
附图说明
图1：为实施例1制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯化合物高分辨液质图。
图2：为实施例1制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯化合物高分辨液质图。
图3：为实施例1制得的9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮化合物高分辨液质图。
图4：为实施例1制得的5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺化合物高分辨液质图。
图5：为实施例1制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺化合物高分辨液质图。
图6：为实施例1制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸化合物高分辨液质图。
图7：为实施例1制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸化合物高分辨液质图。
图8：为实施例1制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸化合物高分辨液质图。
图9：为实施例1制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸化合物高分辨液质图。
图10：为实施例1制得的(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸化合物高分辨液质图(正离子模式)。
图11：为实施例1制得的(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸化合物高分辨液质图(负离子模式)。
图12：为实施例1制得的9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮的核磁氢谱图。
图13：为实施例1制得的5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的核磁氢谱图。
图14：为实施例1制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的核磁氢谱图。
图15：为实施例1制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的核磁氢谱图。
图16：为实施例1制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的核磁氢谱图。
图17：为实施例1制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的核磁氢谱图。
图18：为实施例1制得的(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的核磁氢谱图。
图19：为实施例1制得的(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的核磁碳谱图。
图20：为实施例1制得的(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的核磁磷谱图。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例1
一种合成(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸是按如下步骤制得：
(1)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：
将肌苷(8.04g，30.0mmol)和4-(二甲氨基)吡啶(0.37g，3.0mmol，0.10当量)加入45mL干燥的吡啶中，在0℃逐滴加入醋酸酐(30.60g，300mmol，10当量)，随后反应混合物在0℃下搅拌1小时，升至室温搅拌5小时，LC-MS监测反应。反应完成后，用5mL冷的甲醇淬灭反应，浓缩所得粗品加入冷的体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(20mL)溶液搅拌均匀、过滤，滤饼用体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(5mL)、乙酸乙酯(5mL)洗涤，真空干燥得到白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；经称量后计算，此步骤的收率为98％。LC-MS监测结果为MS(ESI,m/z):395[M+H]+.HRMS(ESI,m/z):[M+H]+calcd for C16H19N4O8 +395.1197,found 395.1195。
(2)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：
将步骤(1)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(7.30g，18.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.60g，27.9mmol，1.5当量)溶于二氯甲烷(70mL)中，在0℃下滴加2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.80g，22.4mmol，1.2当量)，并于0℃下搅拌2小时，LC-MS监测反应。反应完成后，滴加冷水(10mL)淬灭反应，用氯仿萃取，萃取液再用水和饱和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，并经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为25倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为4:1的乙酸乙酯/正己烷)，得白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；经称量后计算，此步骤的收率为85％。LC-MS监测结果为MS(ESI,m/z):483[M+H]+.HRMS(ESI,m/z):[M+H]+calcd for C20H27N4O10 +483.1722,found 483.1720。
(3)9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮的制备：
室温下向步骤(2)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(6.30g，13.0mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入的氨水溶液(28％，30mL)，并于室温下搅拌反应1小时，然后浓缩除去所有溶剂得到9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮，经称量后计算，此步骤的收率为92％。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ8.48(s,1H),8.39(s,1H),5.87(d,J＝5.7Hz,1H),5.44(s,2H),4.48(t,J＝5.3Hz,1H),4.13(t,J＝4.2Hz,1H),3.96–3.93(m,1H),3.67–3.65(m,2H),3.58–3.54(m,1H),3.43–3.41(m,2H),3.23–3.20(m,4H).MS(ESI,m/z):357[M+H]+.HRMS(ESI,m/z):[M+H]+calcd for C14H21N4O7 +357.1405,found 357.1403。
(4)5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备：
将步骤(3)中制得的9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(3.56g，10.0mmol)在NaOH(0.2摩尔/升，100mL，2.0当量)溶液中回流1小时，反应完成后用稀盐酸(1.5mol/L)调节pH至8.0，用体积比为1：9的甲醇和二氯甲烷进行萃取，经旋转蒸发仪浓缩得粗品，经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为25倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为1:7的甲醇和氯仿溶液)得白色固体，即为5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺，经称量后计算，此步骤的收率为72％。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.31(s,1H),6.73(d,J＝60.8Hz,2H),5.93(s,2H),5.46(d,J＝6.4Hz,1H),5.37(d,J＝6.6Hz,1H),5.24(t,J＝4.9Hz,1H),5.16(d,J＝4.5Hz,1H),4.30–4.26(m,1H),4.06–4.03(m,1H),3.90(d,J＝2.9Hz,1H),3.63–3.54(m,2H).MS(ESI,m/z):259[M+H]+.HRMS(ESI,m/z):[M+H]+calcd for C9H15N4O5 +259.1037,found259.1041。
(5)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备
取步骤(4)中制得的5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(4.13g，16.0mmol)溶解于丙酮(240mL)中形成丙酮溶液，然后加入质量分数为70％的HClO4(1.8mL)，控制温度为25℃，搅拌4小时进行反应，反应结束，置于冰水浴中冷却，然后加入质量分数为26％的氨水(4.0mL)，加入结束后从冰水浴中取出，升温至25℃搅拌4小时，通过LC-MS监测反应，反应结束，经旋转蒸发仪浓缩除去溶剂后进行柱层析，所述柱层析填料为200～300目粒径的硅胶，硅胶质量为35倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为5％甲醇-二氯甲烷溶液，5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与甲醇-二氯甲烷溶液的摩尔体积比为1：80，单位为mol：L，洗脱结束，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后置于真空干燥箱中，设置干燥温度为55℃，真空度为-0.08MPa干燥8小时，取出得到白色固体的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺；经称量后计算，此步骤的收率为77％。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.37(s,1H),6.76(d,J＝54.3Hz,2H),5.94(s,2H),5.76(d,J＝3.5Hz,1H),5.28(t,J＝4.9Hz,1H),5.10–07(m,1H),4.88–4.85(m,1H),4.12–4.09(m,1H),3.56–3.48(m,2H),1.53(s,3H),1.32(s,3H).MS(ESI):m/z 299[M+H]+.HRMS(ESI)calcd for C12H19N4O5 +[M+H]+,299.1350,found 299.1355。
(6)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸的制备
在氮气保护条件下，将步骤(5)中制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(2.82g，9.5mmol)置于6mol/L的氢氧化钠(20mL)溶液中，回流反应12小时，反应结束，用冰水浴冷却混合物，缓慢滴加浓盐酸调节混合物pH至4.5，然后置于旋转蒸发仪中，设置温度为40℃，蒸发掉溶剂得到残余物，再用无水乙醇提取残余物两次，第一次80mL，第二次40mL，合并两次提取液并浓缩得到灰白色浆液，即为5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸。LC-MS监测结果为MS(ESI):m/z 300[M+H]+.HRMS(ESI)calcd for C12H18N3O6 +[M+H]+,300.1190,found 300.1190。
(7)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，取步骤(6)中制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸(9.5mmol)、以及二苄基L-天冬氨酸(14.5mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(17.8mmol)置于烧瓶中，加入体积比为1：10的N,N-二异丙基乙胺(39.4mmol)与氯仿的溶液(6.5mL)，在温度为25℃搅拌反应2小时，LC-MS监测，反应结束，用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液进行萃取，然后用等体积的饱和NaHCO3溶液和氯化钠溶液依次洗涤、再经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪温度为40℃浓缩除去溶剂、最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为3％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述洗脱液的体积为1000mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，步骤(6)、(7)的总收率为64％。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.43(s,1H),7.32(bs,10H),6.02(s,2H),5.80(d,J＝3.5Hz,1H),5.30(t,J＝4.9Hz,1H),5.11–5.07(m,5H),4.97–4.87(m,2H),4.14–4.11(m,1H),3.58–3.47(m,2H),3.04–2.92(m,2H),1.54(s,3H),1.32(s,3H).MS(ESI):m/z 595[M+H]+.HRMS(ESI)calcd for C30H35N4O9 +[M+H]+,595.2399,found595.2397。
(8)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，于-3℃条件下，取步骤(7)中制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸(2.44g，4.1mmol)、焦磷酸四苄酯(3.31g，6.2mmol)溶于60mL无水四氢呋喃中，然后分4次加入NaH(12.4mmol)，随后在保温-2℃条件下搅拌50分钟，反应结束，在-2℃条件下逐滴滴加冷水进行淬灭反应(冷水与NaH的摩尔比为8:1)，滴加速度为25滴/分钟，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液180mL进行萃取，萃取后用饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠溶液进行洗涤，再经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为35倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述洗脱液的体积为1000mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；经称量后计算，此步骤的收率为94％。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.89(d,J＝8.6Hz,1H),7.42(s,1H),7.35–7.30(m,20H),6.01(s,2H),5.85(d,J＝3.1Hz,1H),5.13–4.92(m,10H),4.87–4.84(m,1H),4.26–4.23(m,1H),4.07(t,J＝5.7Hz,2H),3.01–2.89(m,2H),1.53(s,3H),1.32(s,3H).MS(ESI):m/z 855[M+H]+.HRMS(ESI)calcd for C44H48N4O12P+[M+H]+,855.3001,found 855.3002。
(9)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，于-2℃保温条件下向0.08mol/L二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸(2.7mmol)的四氢呋喃溶液中缓慢滴加浓度为12mol/L的盐酸10mL，滴加速度为25滴/分钟，滴加结束，将反应物升温至25℃搅拌反应2小时，反应结束后，将反应物冷却至-2℃滴加2mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8.0，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷进行萃取，再用饱和碳酸氢钠和氯化钠溶液进行洗涤，萃取液经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪浓缩除去溶剂、最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为35倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述洗脱液的体积为1000mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，此步骤的收率为69％。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.87(d,J＝8.6Hz,1H),7.38–7.31(m,21H),5.90(s,2H),5.57–5.53(m,2H),5.40(s,1H),5.14–5.00(m,8H),4.97–4.92(m,1H),4.26–4.15(m,3H),4.06(s,2H),3.02–2.90(m,2H).MS(ESI):m/z 815[M+H]+.HRMS(ESI)calcd for C41H44N4O12P+[M+H]+,815.2688,found 815.2687。
(10)(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在温度为-2℃条件下，取浓度为0.06mol/L二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液38mL，加入0.49mmol Pd(OH)2/C，然后经氢气置换后，再在氢气气氛下升温至25℃进行反应，反应结束后，以硅藻土过滤，再用甲醇洗涤滤饼，合并滤液与甲醇洗涤液并经旋转蒸发仪浓缩，即得(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，此步骤的收率为96％，制得的产品非对映体过量(de)值为97.3％，该化合物可用反相色谱柱进一步精制(反相柱填料为C18，洗脱液为体积比为1:19的甲醇：水)。将制得的化合物进行核磁共振，结果为1H NMR(400MHz,DMSO)δ7.54(d,J＝8.6Hz,1H),7.36(s,1H),5.82(s,2H),5.50(d,J＝6.2Hz,1H),4.72–4.67(m,1H),4.26(t,J＝5.4Hz,1H),4.05–3.94(m,4H),2.83–2.71(m,2H).MS(ESI):m/z 455[M+H]+.HRMS(ESI)calcd for C13H20N4O12P+[M+H]+,455.0810,found455.0807；HRMS(ESI)calcd for C13H18N4O12P-[M-H]-,453.0664,found453.0664.(c,0.000281in H2O)。
将(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸以归一化法进行含量、杂质检测，结果表明，本品含量为99.6％，杂质0.4％，以肌苷为起始原料计，实施例1整个制备工艺产品收率为16.9％。
实施例2
一种合成(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸是按如下步骤制得：
(1)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：将肌苷(8.04g，30.0mmol)和4-(二甲氨基)吡啶(0.37g，3.0mmol，0.10当量)加入45mL干燥的吡啶中，在0℃逐滴加入醋酸酐(30.60g，300mmol，10当量)，随后反应混合物在0℃下搅拌1小时，升至室温搅拌5小时，LC-MS监测反应。反应完成后，用5mL冷的甲醇淬灭反应，浓缩所得粗品加入冷的体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(20mL)溶液搅拌均匀、过滤，滤饼用体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(5mL)、乙酸乙酯(5mL)洗涤，真空干燥得到白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；经称量后计算，此步骤的收率为96％。
(2)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：
将步骤(1)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(7.30g，18.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.60g，27.9mmol，1.5当量)溶于二氯甲烷(70mL)中，在0℃下滴加2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.80g，22.4mmol，1.2当量)，并于0℃下搅拌2小时，LC-MS监测反应。反应完成后，滴加冷水(10mL)淬灭反应，用氯仿萃取，萃取液再用水和饱和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，并经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为20倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为7：3的乙酸乙酯/正己烷)，得白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；经称量后计算，此步骤的收率为87％。
(3)9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮的制备：
室温下向步骤(2)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(6.30g，13.0mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入的氨水溶液(28％，30mL)，并于室温下搅拌反应1小时，然后浓缩除去所有溶剂得到9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮，经称量后计算，此步骤的收率为91％。
(4)5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备：
将步骤(3)中制得的9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(3.56g，10.0mmol)在NaOH(0.2摩尔/升，100mL，2.0当量)溶液中回流1小时，反应完成后用稀盐酸(1mol/L)调节pH至8.0，用体积比为1：9的甲醇和二氯甲烷进行萃取，经旋转蒸发仪浓缩得粗品，经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为20倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为1:9的甲醇和氯仿溶液)得白色固体，即为5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺，经称量后计算，此步骤的收率为72％。
(5)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备
取步骤(4)中制得的5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(4.13g，16.0mmol)溶解于丙酮(240mL)中形成丙酮溶液，然后加入质量分数为70％的HClO4(1.8mL)，控制温度为20℃，搅拌3小时进行反应，反应结束，置于冰水浴中冷却，然后加入质量分数为25％的氨水(4.0mL)，加入结束后从冰水浴中取出，升温至20℃搅拌3小时，通过LC-MS监测反应，反应结束，经旋转蒸发仪浓缩除去溶剂后进行柱层析，所述柱层析填料为200～300目粒径的硅胶，硅胶质量为30倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为3％甲醇-二氯甲烷溶液，5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与甲醇-二氯甲烷溶液的摩尔体积比为1：40，单位为mol：L，洗脱结束，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后置于真空干燥箱中，设置干燥温度为50℃，真空度为-0.06MPa干燥6小时，取出得到白色固体的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺；经称量后计算，此步骤的收率为78％。
(6)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸的制备
在氮气保护条件下，将步骤(5)中制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(2.82g，9.5mmol)置于5mol/L的氢氧化钠(20mL)溶液中，回流反应9小时，反应结束，用冰水浴冷却混合物，缓慢滴加浓盐酸调节混合物pH至4.0，然后置于旋转蒸发仪中，设置温度为35℃，蒸发掉溶剂得到残余物，再用无水乙醇提取残余物两次，第一次80mL，第二次40mL，合并两次提取液并浓缩得到灰白色浆液，即为5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸。
(7)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，取步骤(6)中制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸(9.5mmol)、以及二苄基L-天冬氨酸(14.5mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(17.8mmol)置于烧瓶中，加入体积比为0.9：10的N,N-二异丙基乙胺(39.4mmol)与氯仿的溶液(6.5mL)，在温度为20℃搅拌反应1小时，LC-MS监测，反应结束，用体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液进行萃取，然后用与体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液等体积的饱和NaHCO3溶液和氯化钠溶液依次洗涤、再经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪温度为35℃浓缩除去溶剂、最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为30倍待分离样品质量，洗脱液为甲醇溶液，所述洗脱液的体积为800mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，步骤(6)、(7)的总收率为62％。
(8)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，于-5℃条件下，取步骤(7)中制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸(2.44g，4.1mmol)、焦磷酸四苄酯(3.31g，6.2mmol)溶于60mL无水四氢呋喃中，然后分3次加入NaH(12.4mmol)，随后在保温-2℃条件下搅拌30分钟，反应结束，在-2℃条件下逐滴滴加冷水进行淬灭反应(冷水与NaH的摩尔比为5:1)，滴加速度为20滴/分钟，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液160mL进行萃取，萃取后用饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠溶液进行洗涤，再经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为30倍待分离样品质量，洗脱液为甲醇溶液，所述洗脱液的体积为800mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；经称量后计算，此步骤的收率为92％。
(9)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，于-2℃保温条件下向0.06mol/L二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸(2.7mmol)的四氢呋喃溶液中缓慢滴加浓度为12mol/L的盐酸11mL，滴加速度为20滴/分钟，滴加结束，将反应物升温至20℃搅拌反应1小时，反应结束后，将反应物冷却至-2℃滴加1mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8.0，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷进行萃取，再用饱和碳酸氢钠和氯化钠溶液进行洗涤，萃取液经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪浓缩除去溶剂、最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为30倍待分离样品质量，洗脱液为甲醇溶液，所述洗脱液的体积为800mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，此步骤的收率为66％。
(10)(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在温度为-2℃条件下，取浓度为0.05mol/L二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液31mL，加入0.49mmol Pd(OH)2/C，然后经氢气置换后，再在氢气气氛下升温至20℃进行反应，反应结束后，以硅藻土过滤，再用甲醇洗涤滤饼，合并滤液与甲醇洗涤液并经旋转蒸发仪浓缩，即得(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，此步骤的收率为95％，制得的产品非对映体过量(de)值为97.1％，该化合物可用反相色谱柱进一步精制(反相柱填料为C18，洗脱液为体积比为1:19的甲醇：水)。
将(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸以归一化法进行含量、杂质检测，结果表明，本品含量为99.8％，杂质0.2％，以肌苷为起始原料计，实施例2整个制备工艺产品收率为15.3％。
实施例3
一种合成(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸是按如下步骤制得：
(1)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：将肌苷(8.04g，30.0mmol)和4-(二甲氨基)吡啶(0.37g，3.0mmol，0.10当量)加入45mL干燥的吡啶中，在0℃逐滴加入醋酸酐(30.60g，300mmol，10当量)，随后反应混合物在0℃下搅拌1小时，升至室温搅拌5小时，LC-MS监测反应。反应完成后，用5mL冷的甲醇淬灭反应，浓缩所得粗品加入冷的体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(20mL)溶液搅拌均匀、过滤，滤饼用体积比为1：3的乙酸乙酯和正己烷(5mL)、乙酸乙酯(5mL)洗涤，真空干燥得到白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；经称量后计算，此步骤的收率为97％。
(2)(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯的制备：
将步骤(1)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(7.30g，18.5mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.60g，27.9mmol，1.5当量)溶于二氯甲烷(70mL)中，在0℃下滴加2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.80g，22.4mmol，1.2当量)，并于0℃下搅拌2小时，LC-MS监测反应。反应完成后，滴加冷水(10mL)淬灭反应，用氯仿萃取，萃取液再用水和饱和盐水洗涤、无水硫酸钠干燥，并经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为9:1的乙酸乙酯/正己烷)，得白色固体即为(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯；经称量后计算，此步骤的收率为84％。
(3)9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮的制备：
室温下向步骤(2)中制得的(2R,3R,4R,5R)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(1-(2-(2-甲氧基乙氧基)乙基)-6-氧代-1,6-二氢-9H-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(6.30g，13.0mmol)的甲醇(50mL)溶液中加入的氨水溶液(28％，30mL)，并于室温下搅拌反应1小时，然后浓缩除去所有溶剂得到9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮，经称量后计算，此步骤的收率为92％。
(4)5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备：
将步骤(3)中制得的9-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1-((2-甲氧基乙氧基)甲基)-1,9-二氢-6H-嘌呤-6-酮(3.56g，10.0mmol)在NaOH(0.2摩尔/升，100mL，2.0当量)溶液中回流1小时，反应完成后用稀盐酸(2mol/L)调节pH至8.0，用体积比为1：9的甲醇和二氯甲烷进行萃取，经旋转蒸发仪浓缩得粗品，经柱层析(柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30倍待分离样品质量，洗脱液为体积比为1:4的甲醇和氯仿溶液)得白色固体，即为5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺，经称量后计算，此步骤的收率为74％。
(5)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备
取步骤(4)中制得的5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(4.13g，16.0mmol)溶解于丙酮(240mL)中形成丙酮溶液，然后加入质量分数为72％的HClO4(1.8mL)，控制温度为25℃，搅拌5小时进行反应，反应结束，置于冰水浴中冷却，然后加入质量分数为28％的氨水(4.0mL)，加入结束后从冰水浴中取出，升温至25℃搅拌5小时，通过LC-MS监测反应，反应结束，经旋转蒸发仪浓缩除去溶剂后进行柱层析，所述柱层析填料为200～300目粒径的硅胶，硅胶质量为40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为7％甲醇-二氯甲烷溶液，5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与甲醇-二氯甲烷溶液的摩尔体积比为1：100，单位为mol：L，洗脱结束，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后置于真空干燥箱中，设置干燥温度为55℃，真空度为-0.08MPa干燥10小时，取出得到白色固体的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺；经称量后计算，此步骤的收率为78％。
(6)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸的制备
在氮气保护条件下，将步骤(5)中制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(2.82g，9.5mmol)置于7mol/L的氢氧化钠(20mL)溶液中，回流反应14小时，反应结束，用冰水浴冷却混合物，缓慢滴加浓盐酸调节混合物pH至5.0，然后置于旋转蒸发仪中，设置温度为40℃，蒸发掉溶剂得到残余物，再用无水乙醇提取残余物两次，第一次80mL，第二次40mL，合并两次提取液并浓缩得到灰白色浆液，即为5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸。
(7)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，取步骤(6)中制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸(9.5mmol)、以及二苄基L-天冬氨酸(14.5mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(17.8mmol)置于烧瓶中，加入体积比为1.1：10的N,N-二异丙基乙胺(39.4mmol)与氯仿的溶液(6.5mL)，在温度为25℃搅拌反应2小时，LC-MS监测，反应结束，用体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液进行萃取，然后用等体积的饱和NaHCO3溶液和氯化钠溶液依次洗涤、再经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪温度为40℃浓缩除去溶剂、最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为3％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述洗脱液的体积为600mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，步骤(6)、(7)的总收率为65％。
(8)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，于0℃条件下，取步骤(7)中制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸(2.44g，4.1mmol)、焦磷酸四苄酯(3.31g，6.2mmol)溶于60mL无水四氢呋喃中，然后分5次加入NaH(12.4mmol)，随后在保温0℃条件下搅拌50分钟，反应结束，在0℃条件下逐滴滴加冷水进行淬灭反应(冷水与NaH的摩尔比为10:1)，滴加速度为30滴/分钟，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液200mL进行萃取，萃取后用饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠溶液进行洗涤，再经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述洗脱液的体积为600mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；经称量后计算，此步骤的收率为93％。
(9)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在氮气保护下，于0℃保温条件下向0.10mol/L二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸(2.7mmol)的四氢呋喃溶液中缓慢滴加浓度为12mol/L的盐酸12mL，滴加速度为30滴/分钟，滴加结束，将反应物升温至25℃搅拌反应2小时，反应结束后，将反应物冷却至0℃滴加3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8.0，然后用体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液进行萃取，再用饱和碳酸氢钠和氯化钠溶液进行洗涤，萃取液经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪浓缩除去溶剂、最后经200～300目硅胶柱层析分离，硅胶质量为40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述洗脱液的体积为600mL，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，此步骤的收率为67％。
(10)(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备
在温度为0℃条件下，取浓度为0.07mol/L二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液44mL，加入0.49mmol Pd(OH)2/C，然后经氢气置换后，再在氢气气氛下升温至25℃进行反应，反应结束后，以硅藻土过滤，再用甲醇洗涤滤饼，合并滤液与甲醇洗涤液并经旋转蒸发仪浓缩，即得(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸。经称量后计算，此步骤的收率为95％，制得的产品非对映体过量(de)值为96.9％，该化合物可用反相色谱柱进一步精制(反相柱填料为C18，洗脱液为体积比为1:19的甲醇：水)。
将(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸以归一化法进行含量、杂质检测，结果表明，本品含量为99.7％，杂质0.3％，以肌苷为起始原料计，实施例1整个制备工艺产品收率为16.6％。
实验一：稳定性实验
实验目的：考察本发明(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸储存稳定性
实验方法：取实施例1、2、3制得的(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸，密闭后，置于-20℃中保存，分别于0月、3月、6月、9月、12月、18月、24月取样检测含量和杂质，考察含量和杂质变化情况，实验结果，见下表：
结论：由上表可知，本发明实施例1、2、3制得的产品在温度为-20℃条件下，放置24个月，其含量下降较小，杂质增量较少，产品依旧满足使用需求。

Claims (1)

1.一种合成SAICAR的方法，其特征在于，它是以5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺为起始原料，分别经过如下步骤制得：
(1)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺的制备：取5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(AICAR)溶解于丙酮中形成丙酮溶液，然后加入质量分数为70～72％的HClO4，控制温度为20～25℃，搅拌3～5小时进行反应，反应结束，置于冰水浴中冷却，然后加入质量分数为25％～28％的氨水，加入结束后从冰水浴中取出，升温至20～25℃搅拌3～5小时，经旋转蒸发仪浓缩除去溶剂后进行柱层析，所述柱层析填料为200～300目粒径的硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，洗脱液为体积分数为3～7％甲醇-二氯甲烷溶液，所述5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺(AICAR)与甲醇-二氯甲烷溶液的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol：L，洗脱结束，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后置于真空干燥箱中，设置干燥温度为50～55℃，真空度为-0.06～-0.08MPa干燥6～10小时，取出得到白色固体的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺；所述5-氨基-1-((2R,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与丙酮的质量体积比为1:58～61，所述丙酮、HClO4、氨水的体积比为235～245:1.8:4.0；
(2)5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸的制备：在氮气保护条件下，将上述制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺置于5～7mol/L的氢氧化钠溶液中，回流反应9～14小时，反应结束，用冰水浴冷却混合物，缓慢滴加浓盐酸调节混合物pH至4～5，然后置于旋转蒸发仪中，设置温度为35～40℃，蒸发掉溶剂得到残余物，再用乙醇提取残余物两次，合并两次提取液并浓缩得到灰白色浆液，即为5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸；所述乙醇为无水乙醇，所述5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-甲酰胺与氢氧化钠溶液的质量体积比为1～1.41:10，单位为g：mL，所述氢氧化钠溶液与乙醇的体积比为1:2～4；
(3)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备：在氮气保护下，取上述制得的5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸和二苄基L-天冬氨酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)置于烧瓶中，加入N,N-二异丙基乙胺的氯仿溶液，在温度为20～25℃搅拌反应1～2小时，用萃取剂进行萃取，然后用与萃取剂等体积的饱和NaHCO3溶液和氯化钠溶液依次洗涤、再经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪温度为35～40℃浓缩除去溶剂、最后经柱层析分离，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；所述5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸、二苄基L-天冬氨酸、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、N,N-二异丙基乙胺的摩尔比为9.5：14.5：17.8：39.4，所述N,N-二异丙基乙胺与氯仿的体积比为0.9～1.1：10，所述萃取剂是体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液或体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液，所述柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，所述柱层析洗脱液为体积分数为0～5％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羧酸与洗脱液的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol：L；
(4)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备：是在氮气保护下，于-5～0℃条件下，将上述制得的二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸、焦磷酸四苄酯溶于无水四氢呋喃中，然后分3～5次加入NaH，随后在保温-2～0℃条件下搅拌30～50分钟，反应结束，在-2～0℃条件下逐滴滴加冷水淬灭反应，滴加速度为20～30滴/分钟，然后用体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷溶液或体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷进行萃取，萃取液用饱和碳酸氢钠溶液和氯化钠溶液进行洗涤，再经无水硫酸钠干燥，旋转蒸发仪浓缩除去溶剂，最后经柱层析分离，收集洗脱液，经旋转蒸发仪浓缩后得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；其中所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸、焦磷酸四苄酯、NaH的摩尔比为4.1：6.2：12.4，所述焦磷酸四苄酯与无水四氢呋喃溶液的摩尔体积比为0.9～1.1：10，单位为mol：L；所述淬灭反应的冷水与NaH的摩尔比为5～10:1，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与萃取液的质量体积比为1～1.22：80，单位为g:mL；所述柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，所述柱层析洗脱液为体积分数为0～4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与洗脱剂的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol:L；
(5)二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备：在氮气保护下，于-2～0℃保温条件下向二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的四氢呋喃溶液中缓慢滴加浓度为12mol/L的盐酸，滴加速度为20～30滴/分钟，滴加结束，将反应物升温至20～25℃搅拌反应1～2小时，反应结束后，将反应物冷却至-2～0℃滴加1～3mol/L的氢氧化钠溶液调节pH至8～9，然后用萃取剂进行萃取，再用饱和碳酸氢钠和氯化钠溶液进行洗涤，萃取液经无水硫酸钠干燥、旋转蒸发仪浓缩除去溶剂、再经柱层析分离得到白色固体，即为二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；其中所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的四氢呋喃溶液浓度为0.06～0.10mol/L，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与浓盐酸摩尔比为1：20～50，所述萃取剂是体积比为1:4的异丙醇-二氯甲烷或体积比为1:9的甲醇-二氯甲烷溶液，所述柱层析填料为200～300目硅胶，硅胶质量为30～40倍待分离样品质量，所述柱层析洗脱液为体积分数为0～4％的甲醇-二氯甲烷溶液，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-6-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧-4-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与洗脱剂的摩尔体积比为1：40～100，单位为mol:L；
(6)(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的制备：是在温度为-2～0℃条件下，向二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液中加入Pd(OH)2/C，然后经氢气置换后，再在氢气气氛下升温至20～25℃进行反应，反应结束后，以硅藻土过滤，再用甲醇洗涤滤饼，合并滤液与甲醇洗涤液并经旋转蒸发仪浓缩，即得(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-3,4-二羟基-5-((膦酰氧基)甲基)四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸；所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸的甲醇溶液的浓度为0.05～0.10mol/L，所述二苄基(5-氨基-1-((3aR,4R,6R,6aR)-5-(((二(苄氧基)磷酰基)氧基)甲基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)-1H-咪唑-4-羰基)-L-天冬氨酸与Pd(OH)2/C的摩尔比为1:0.15～0.30。
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