CN107793458B - 一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法，包括粗品合成及粗品精制两大步骤，在粗品合成阶段，通过严格控制反应条件，有效地降低了副反应的发生及有关物质生产，保证了目标产物的高转化率。同时，由于反应的副产物大多溶于上述的反应体系，目标产物基本不溶于上述的反应体系，方便进行后处理，以提高产物的纯度。该方法工艺简单，产品收率高，纯度高，反应选择性高，生产不用任何特殊设备，适合工业化生产。

Description

一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法

技术领域

本发明涉及原料药物制备领域，具体涉及一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法。

背景技术

单磷酸阿糖腺苷，化学名称为：9-(β-D-阿拉伯呋喃糖)腺嘌呤5'-单磷酸酯，分子式：C₁₀H₁₄N₅O₇P·H₂O，分子量：365.26，化学结构式如下：

单磷酸阿糖腺苷属核苷酸抗病毒药，为阿糖腺苷(Ara-A)的第二代制剂，能选择性抑制病毒聚合酶和核苷酸还原酶活性，对DNA病毒有广泛的抑制作用，且其水溶性明显优于Ara-A，是目前治疗乙肝的一种有效、安全的抗病毒药物，特别是对慢性乙肝。

单磷酸阿糖腺苷为抗脱氧核糖核酸(DNA)病毒药，其药理作用是与病毒的脱氧核糖核酸聚合酶结合，使其活性降低而抑制DNA合成。单磷酸阿糖腺苷进入细胞后，经过磷酸化生成阿糖腺苷二磷酸(Ara-ADP)和阿糖腺苷三磷酸(Ara-ATP)。抗病毒活性主要由阿糖腺苷三磷酸(Ara-ATP)所引起，Ara-ATP与脱氧腺苷三磷酸(dATP)竞争地结合到病毒DNAP上，从而抑制了酶的活性及病毒DNA的合成，同时抑制病毒核苷酸还原酶的活性而抑制病毒DNA的合成，还能抑制病毒DNA末端脱氧核苷酰转移酶的活性，使Ara-A渗入到病毒的DNA中并连接在DNA链3′-OH位置的末端，抑制了病毒DNA的继续合成。

目前，单磷酸阿糖腺苷的合成方法，有很多文献和专利报道。其中合成路线主要有四条：一条酶化学法发酵制备，三条合成路线；(1)半合成法：由木糖腺苷或核糖腺苷通过2′-羟基转位；(2)CN1042939C专利半合法以8-羟基-N 6,3’,5’-三乙酰核糖腺苷为原料，再和单磷酰氯反应得成品；(3)全合成法：由D-阿拉伯糖为起始原料进行全合成。

以上半合成法的(1)路线反应步骤长，在8,2’-位环化要高温高压，中间体分离也有难度，H₂S开环也要高压和绝对无水，设备要求高，易腐蚀设备、污染大，易造成工作人员中毒。(2)法工艺简捷，收率为75％，适于工业化生产。(3)全合成法经工艺改进后，革去苯、汞，阿糖腺苷总收率可达32％，也是一条比较合理的工业化生产路线。

中国专利CN1560065 A中公开了单磷酸阿糖腺苷合成工艺，该方法是以单磷酸腺苷为原料，经保护后溴化，再经氨化、巯基化、氢化等反应，得到单磷酸阿糖腺苷。该方法工艺操作复杂，且巯基化、氢化容易产生副产物氨气，影响到产品的收率和最终产品的质量。

发明内容

本发明提供了一种工艺简单且成本低的单磷酸阿糖腺苷的制备方法，该方法选择性好，产物的收率高、纯度高。

一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法，包括粗品合成及粗品精制两大步骤，

粗品合成：

(1-1)将β-D-阿糖腺苷溶于磷酸三乙酯中，搅拌下将温度降至-10℃～-15℃，滴加三氯氧磷，滴加完毕后，保温搅拌反应，至反应结束；

(1-2)将反应液缓慢抽入预先装有水的反应罐中，控制温度，进行水解反应；

(1-3)降温至0℃，缓慢滴加NaOH水溶液，调节pH至1.5～2.0，加入二氯甲烷萃取，合并水相，水相加入活性炭搅拌脱色，滤除活性炭，控温15℃以下，用NaOH水溶液调节pH至2.0～2.5，降温至5～15℃，静置析晶，离心，用水洗涤滤出的结晶，得单磷酸阿糖腺苷湿粗品；

粗品精制：

(2-1)在反应釜中加入水和上述单磷酸阿糖腺苷湿粗品，搅拌下用氢氧化钠水溶液调节釜中pH至5～7，加入活性炭搅拌脱色后，经0.45μm板框过滤器压滤后再经0.22μm板框过滤器压入晶罐，滴加盐酸水溶液调节pH至2.0～2.5；

(2-2)将上述药液降温至5～15℃，静置析晶12h，离心，用水和乙醇洗涤晶体，真空干燥粉碎后得单磷酸阿糖腺苷。

步骤(1-1)中，β-D-阿糖腺苷和三氯氧磷的投料摩尔比1：1.00～1.78；

三氯氧磷在搅拌下滴入体系中，温度保持在温度0℃以下，3～5小时内滴加完毕。

步骤(1-1)中，三氯氧磷滴加完毕后，控制温度为-5～0℃，反应时间为90～150min。

步骤(1-2)中，水解反应控制温度不高于15℃且反应罐里的水预先冻至0～2℃。

步骤(1-3)中，采用质量分数为30～50％的NaOH水溶液调节pH，发明人意外地发现，当pH为1.5～2.0时加入二氯甲烷萃取，在该pH下，反应产物不会析出，便于操作，同时可确保后续产物的纯度及收率。

步骤(1-3)中，活性炭脱色的时间为20～40min。

步骤(2-1)中，采用质量分数为30～50％的NaOH水溶液和/或质量分数为5～15％的盐酸水溶液调节体系的pH。

步骤(2-2)中，真空干燥的条件为：温度45～55℃，真空度≥-0.085MPa，干燥时间为6～10小时，高温破坏研究表明，单磷酸阿糖腺苷化学结构较稳定，杂质变化不大。但由于其结构中带有一分子的结晶水，温度过高，则结晶水结构易破坏。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明制备方法，在粗品合成阶段，通过严格控制反应条件，有效地降低了副反应的发生及有关物质生产，保证了目标产物的高转化率。同时，由于反应的副产物大多溶于上述的反应体系，目标产物基本不溶于上述的反应体系，方便进行后处理，以提高产物的纯度。

本发明所得单磷酸阿糖腺苷产品中残留的有机溶剂含量低，均很大程度的低于《中国药典》2015年版二部对残留溶剂的规定中的限定量。

本发明制备方法操作工艺简单，成本低，生产不用任何特殊设备，产品的收率和纯度高，反应的选择性高(可达90.4％)，适合工业化生产。

具体实施方式

实施例1

单磷酸阿糖腺苷粗品的合成：

1、配制质量分数为40％的氢氧化钠水溶液：50L反应釜中加入纯化水37.5kg，搅拌下分次加入氢氧化钠15.0kg，搅拌溶解备用。

2、200L反应罐中加入β-D-阿糖腺苷10.0kg，磷酸三乙酯100.0kg，降温至-10℃。

3、搅拌下滴加三氯氧磷10.2kg，控制温度不高于0℃，3～5小时内滴加完毕；滴加完毕后，-5℃下搅拌反应90min，TLC检测反应达到终点，停止反应。

4、将反应液缓慢抽入500L反应罐中(装有预冻至0℃的纯化水150kg)，控制温度不高于15℃。

5、降温至0℃，滴加质量分数为40％的NaOH水溶液，调节pH至3.0，控制温度不高于15℃。

6、加入二氯甲烷67kg萃取3次，合并水相，水相加入活性炭0.5kg搅拌脱色30min，滤除活性炭，控温15℃以下，质量分数为40％的NaOH水溶液缓慢调节pH至2.0；

7、降温至5℃，静置析晶12h。

8、离心，用冷纯化水10kg(15℃左右)洗涤滤出的结晶，得单磷酸阿糖腺苷湿粗品。

单磷酸阿糖腺苷的精制

1、配制质量分数为40％的氢氧化钠水溶液：20L反应釜中加入纯化水12.5kg，搅拌下分次加入氢氧化钠5.0kg，搅拌溶解备用。

2、配制质量分数为10％的盐酸水溶液：20L反应釜中加入纯化水13kg，质量分数为36％的浓盐酸5kg，，搅拌混匀备用。

3、200L反应釜中加入纯化水150L和上述单磷酸阿糖腺苷湿粗品，搅拌下用质量分数为40％的氢氧化钠水溶液调节釜中pH为5。

4、加入活性炭500g，搅拌脱色30分钟，经0.45μm板框过滤器压滤后再经0.22μm板框过滤器压入500L结晶罐，滴加质量分数为10％的盐酸水溶液，温度控制15℃以下缓慢调节pH至2.0。

5、将上述药液降温至5℃，静置析晶12h。

6、离心，纯化水10kg(15℃左右)和无水乙醇30kg洗涤，真空干燥(45℃，真空度≥-0.085MPa，6小时)，粉碎，称重得类白色固体，即为单磷酸阿糖腺苷。

摩尔总收率为85.86％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为90.3％，纯度为99.8％。

实施例2

单磷酸阿糖腺苷粗品的合成：

1、配制质量分数为40％的氢氧化钠水溶液：50L反应釜中加入纯化水37.5kg，搅拌下分次加入氢氧化钠15.0kg，搅拌溶解备用。

2、200L反应罐中加入β-D-阿糖腺苷10.0kg，磷酸三乙酯100.0kg，降温至-13℃。

3、搅拌下滴加三氯氧磷10.2kg，控制温度不高于0℃，3～5小时内滴加完毕；滴加完毕后，-2.5℃下搅拌反应120min，TLC检测反应达到终点，停止反应。

4、将反应液缓慢抽入500L反应罐中(装有预冻至1.5℃的纯化水150kg)，控制温度不高于15℃。

5、降温至0℃，滴加质量分数为40％的NaOH水溶液，调节pH至2.0，控制温度不高于15℃。

6、加入二氯甲烷67kg萃取3次，合并水相，水相加入活性炭0.5kg搅拌脱色30min，滤除活性炭，控温15℃以下，质量分数为40％的NaOH水溶液缓慢调节pH至2.25；

7、降温至10℃，静置析晶12h。

8、离心，用冷纯化水10kg(15℃左右)洗涤滤出的结晶，得单磷酸阿糖腺苷湿粗品。

单磷酸阿糖腺苷的精制

1、配制质量分数为40％的氢氧化钠水溶液：20L反应釜中加入纯化水12.5kg，搅拌下分次加入氢氧化钠5.0kg，搅拌溶解备用。

2、配制质量分数为10％的盐酸水溶液：20L反应釜中加入纯化水13kg，质量分数为36％的浓盐酸5kg，，搅拌混匀备用。

3、200L反应釜中加入纯化水150L和上述单磷酸阿糖腺苷湿粗品，搅拌下用质量分数为40％的氢氧化钠水溶液调节釜中pH为6。

4、加入活性炭500g，搅拌脱色30分钟，经0.45μm板框过滤器压滤后再经0.22μm板框过滤器压入500L结晶罐，滴加质量分数为10％的盐酸水溶液，温度控制15℃以下缓慢调节pH至2.0。

5、将上述药液降温至10℃，静置析晶12h。

6、离心，纯化水10kg(15℃左右)和无水乙醇30kg洗涤，真空干燥(50℃，真空度≥-0.085MPa，8小时)，粉碎，称重得类白色固体，即为单磷酸阿糖腺苷。

摩尔总收率为86.70％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为90.2％，纯度为99.8％。

实施例3

单磷酸阿糖腺苷粗品的合成：

1、配制质量分数为40％的氢氧化钠水溶液：50L反应釜中加入纯化水37.5kg，搅拌下分次加入氢氧化钠15.0kg，搅拌溶解备用。

2、200L反应罐中加入β-D-阿糖腺苷10.0kg，磷酸三乙酯100.0kg，降温至-15℃。

3、搅拌下滴加三氯氧磷10.2kg，控制温度不高于0℃，3～5小时内滴加完毕；滴加完毕后，-0℃下搅拌反应150min，TLC检测反应达到终点，停止反应。搅拌下滴加三氯氧磷10.2kg，控制温度不高于0℃℃。

4、将反应液缓慢抽入500L反应罐中(装有预冻至2℃的纯化水150kg)，控制温度不高于15℃。

5、降温至0℃，滴加质量分数为40％的NaOH水溶液，调节pH至2.0，控制温度不高于15℃。

6、加入二氯甲烷67kg萃取3次，合并水相，水相加入活性炭0.5kg搅拌脱色30min，滤除活性炭，控温15℃以下，质量分数为40％的NaOH水溶液缓慢调节pH至2.5；

7、降温至15℃，静置析晶12h。

8、离心，用冷纯化水10kg(15℃左右)洗涤滤出的结晶，得单磷酸阿糖腺苷湿粗品。

单磷酸阿糖腺苷的精制

1、配制质量分数为40％的氢氧化钠水溶液：20L反应釜中加入纯化水12.5kg，搅拌下分次加入氢氧化钠5.0kg，搅拌溶解备用。

2、配制质量分数为10％的盐酸水溶液：20L反应釜中加入纯化水13kg，质量分数为36％的浓盐酸5kg，，搅拌混匀备用。

3、200L反应釜中加入纯化水150L和上述单磷酸阿糖腺苷湿粗品，搅拌下用质量分数为40％的氢氧化钠水溶液调节釜中pH为7。

4、加入活性炭500g，搅拌脱色30分钟，经0.45μm板框过滤器压滤后再经0.22μm板框过滤器压入500L结晶罐，滴加质量分数为10％的盐酸水溶液，温度控制15℃以下缓慢调节pH至2.5。

5、将上述药液降温至15℃，静置析晶12h。

6、离心，纯化水10kg(15℃左右)和无水乙醇30kg洗涤，真空干燥(55℃，真空度≥-0.085MPa，10小时)，粉碎，称重得类白色固体，即为单磷酸阿糖腺苷。

摩尔总收率为87.80％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为90.2％，纯度为99.9％。

对比例1

(1)取阿糖腺苷，溶于1000ml磷酸三乙酯中，氮气流保护，低温搅拌下滴加三氯氧磷60ml，5℃保温反应2.5小时；

(2)将反应液倒入1000ml水中，不停搅拌，加入10g活性炭脱色，滴加40％NaoH溶液调pH＝8.0，脱色30分钟，抽滤，滤液用1000ml二氯甲烷提取，有机相再用水洗；合并水相，滴加40％NaoH调节PH＝3.0，冷却过夜，析晶，过滤，烘干，得粗品。

(3)将150L纯化水和步骤(2)所得单磷酸阿糖腺苷湿粗品，加氢氧化钠水溶液调节pH为5，再加入活性炭500g，搅拌脱色20分钟，经压滤后，滤液中滴加质量分数为10％的盐酸水溶液，温度控制15℃以下缓慢调节pH至3.0。

(4)将上述药液降温至20℃，静置析晶10h，离心，纯化水和无水乙醇洗涤，真空干燥(65℃，真空度≥-0.085MPa，10小时)，粉碎，称重得类白色固体，即为单磷酸阿糖腺苷。

摩尔总收率为45.86％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为81.3％，纯度为88.1％。

对比例2

与实施例1相比，区别仅在于，单磷酸阿糖腺苷粗品的合成过程中，步骤5中，将调节pH至3.0再进行步骤6的操作，其他条件与实施例1相同。

摩尔总收率为46.06％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为85.3％，纯度为87.7％。

对比例3

与实施例1相比，区别仅在于，单磷酸阿糖腺苷粗品的合成过程中，步骤5中，将调节pH至6.0再进行步骤6的操作，其他条件与实施例1相同。

摩尔总收率为48.86％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为86.3％，纯度为85.8％。

对比例4

与实施例1相比，区别仅在于，单磷酸阿糖腺苷粗品的合成过程中，步骤6中，将调节pH至3.0再进行步骤7的降温析晶操作，其他条件与实施例1相同。

摩尔总收率为46.86％(以β-D-阿糖腺苷计)，选择性为85.3％，纯度为83.8％。

鉴别

HPLC鉴别

在含量测定项下记录的色谱图中，实施例1、2、3及对比例1～4七个供试品溶液主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致。

化学反应鉴别

试验方法：取样品适量(约相当于单磷酸阿糖腺苷20mg)，置试管中，加6mol/L盐酸溶液2ml溶解后，加间苯三酚10mg，振摇，置水浴中加热，呈紫红色。实施例1、2、3及对比例1～4均成正反应。

紫外鉴别

仪器：UV-1700紫外可见分光光度计(岛津公司)，BS110S型电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)

试验方法：取样品适量，加0.01mol/L盐酸溶液溶解并制成每1ml中含10μg样品的溶液，照分光光度法(中国药典2015版二部附录ⅣA)测定，实施例1、2、3及对比例1～4样品七个，结果如下表1：

表1紫外光谱测定结果

根据上述试验结果并参照国家食品药品监督管理局国家药品标准“WS1-(X-060)-2001Z”将实施例1、2、3及对比例1～4紫外吸收拟定为：在258nm的波长处有最大吸收，在230nm的波长处有最小吸收。

磷酸盐鉴别

试验方法：取样品约0.1g，置试管中，加无水碳酸钠1g，混匀，灼烧灰化，冷却后加水10ml振摇使溶解，过滤，滤液照磷酸盐鉴别法(中国药典2015版二部附录Ⅲ)进行检查。试验结果显示，实施例1、2、3三个样品均呈磷酸盐鉴别正反应，符合要求；对比例1～4未见检出，不符合要求。

结构鉴定

将实施例1所得产品进行结构鉴定，方法及结果如下：

理化性质经实验，单磷酸阿糖腺苷在水中微溶；在甲醇、乙醇、乙醚中几乎不溶。比旋光度[α]D20为+14.8°。

¹H-核磁共振氢谱分析单磷酸阿糖腺苷的¹H-NMR(D₂O/NaOH)δ：3.828 3～3.938 7(2H,m，14位-CH₂-)，3.864 0(1H,m，13位＝CH-)，4.0063(1H,t，J＝5.6Hz，12位＝CH-),4.2241(1H,t,J＝5.4Hz,11位＝CH-),6.1127(1H,d,J＝5.4Hz，10位＝CH-)，7.930 1(1H,s，3位＝CH-)，8.2751(1H,s,8位＝CH-)。

³¹P-核磁共振谱磷谱在δ:6.772处有特征峰，磷谱信息与样品结构相符。

¹³C核磁共振谱分析单磷酸阿糖腺苷的¹³C-NMR(DEPT 90°，135°)δ：63.873(1C，135°↓,14位-CH₂-),76.496(1C,↑,↓,12位＝CH-)；78.081(1C,↑,↓,11位＝CH-)，83.309,83.372(1C,↑,↓,13位＝CH-)，84.236,84.3600C,↑,↓,10位＝CH-)，117.495(1C,6位＝C-)，141.469(1C,↑,↓,8位＝CH-)，148.303(1C,5位＝C-)，151.988(1C,↑,↓,3位CH-)，154.893(1C,1位-C＝)。样品碳谱的碳原子数和碳的类型，与其化学结构式相符。

差示热分析、热失重分析在差热分析中，升温过程有吸热峰，峰值为212.2℃。样品还有一热失重过程，由失重量5.231 3％可推算出为1mol水分子，与分子式C₁₀H₁₄N₅0₇P·H₂0中理论值4.928％结晶水含量基本相符。

质谱分析单磷酸阿糖腺苷ESI-MS(m/z)中，准分子离子峰[M-1]⁺(不包含结晶水)为346.2，与其分子式中C₁₀H₁₄N₅0₇P相符。

综合上述分析结果，实施例1的样品的化学结构可以确证为单磷酸阿糖腺苷。

有关物质

有关物质按照《中国药典》2015年版二部附V D中的高效液相色谱法测定：

色谱条件与系统适应性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(含0.01mol/L四丁基氢氧化铵10％与0.1mol/L磷酸二氢钾)(15：85)为流动相，流速1.0ml/min，检测波长为259nm。单磷酸阿糖腺苷峰与其他杂峰的分离度应符合规定，理论塔板数按单磷酸阿糖腺苷峰计，应不得低于1500。

检测法：取实施例1、2、3及对比例1～4制备的单磷酸阿糖腺苷样品，分别加0.01mol/L盐酸溶解并稀释制成浓度约为200μg/mL的溶液，作为供试品溶液；再精密量取供试液1ml，置100ml量瓶中，加0.01mol/L盐酸稀释至刻度，摇匀，作为1％自身对照溶液。量取对照溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。调节峰高为满量程的20～25％，再精密量取供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至供试品溶液主成分峰保留时间的2.5倍。

结果如下：实施例1、2和3及对比例1～4制备的单磷酸阿糖腺苷样品中有关物质分别为0.15％、0.20％、0.17％、5.％、5.8％、5.7％、5.6％(单个杂质峰面积相对于对照溶液的主峰面积的百分比)；测定结果表明：单磷酸阿糖腺苷精制品溶液的色谱图中单个杂质峰面积小于对照溶液的主峰面积(1.0％)，符合要求，而对比例1～4，不符合要求。

稳定性重点考察项目的考察

一、取一批样品按照《中国药典》2015版第二部影响因素试验方法，进行稳定性重点考察项目的考察。此项试验是在比加速试验更激烈的条件下进行的。

(1)高温试验

取实施例1制备的单磷酸阿糖腺苷精制品作为供试品，置于适宜的密封洁净容器中，于温度为60℃的恒温干燥箱中放置10天，并分别于第5天与第10天取样，对性状、酸度、干燥失重、有关物质和含量等考察项目进行测定。试验结果见下表2：

表2高温试验结果

(2)高湿试验

取实施例1制备的单磷酸阿糖腺苷作为供试品，置于适宜的开口洁净容器中，在温度25℃分别于相对湿度90％±5％条件下放置10天，并分别于第5天与第10天取样，对性状、酸度、引湿性、有关物质和含量等考察项目进行测定。试验结果见下表3：

表3高湿度试验结果

(3)强光照射试验

取实施例1制备的单磷酸阿糖腺苷精制品作为供试品，置于洁净的培养皿，开盖，于照度为4500LX的光照箱内放置10天，于第5天和第10天取样，对性状、酸度、干燥失重、有关物质和含量等考察项目进行测定。试验结果见下表4：

表4强光照射试验结果

根据以上试验结果，可以看出实施例1所得产品在高温试验中，除了有关物质稍微增加，含量稍微减少外，其他指标基本无明显变化；在高湿度试验中，吸湿增重，其他指标均无明显变化；强光试验中，除了有关物质略有增加，含量下降外，其他指标基本无明显变化；以上试验表明：将本品宜放置于避光，密封保存。

二、取实施例1制备的单磷酸阿糖腺苷精制品，分成等量的三份样品，批号分别为：20151001、20151002和20151003，样品分别按照《中国药典》2015版第二部加速实验方法，于温度为40±2℃、相对湿度为75±5％的条件下放置6个月。在试验期间第1个月、2个月、3个月、6个月末各取样一次，按稳定性重点考察项目检测，结果见表5：

表5加速试验测定结果

将实施例2和3制备的单磷酸阿糖腺苷精制品按照上述“稳定性重点考察项目的考察”进行稳定性测试，测试结果与实施例1制备的单磷酸阿糖腺苷精制品的测试结果相似。

从上述加速试验结果可以看出，本发明单磷酸阿糖腺苷精制品在温度为40±2℃、相对湿度为75±5％的条件下放置6个月，有关物质的含量略微增加但变化不大，单磷酸阿糖腺苷含量略微下降但变化不大，其他质量指标基本几乎不变，说明本发明单磷酸阿糖腺苷精制品质量稳定。

Claims (3)

1.一种单磷酸阿糖腺苷的制备方法，其特征在于，包括粗品合成及粗品精制两大步骤，

粗品合成：

(1-1)将β-D-阿糖腺苷溶于磷酸三乙酯中，搅拌下将温度降至-10℃～-15℃，滴加三氯氧磷，滴加完毕后，保温搅拌反应，控制温度为-5～0℃，反应时间为90～150min；

(1-2)将反应液缓慢抽入预先装有水的反应罐中，控制温度，进行水解反应；

(1-3)降温至0℃，缓慢滴加NaOH水溶液，调节pH至2.0，加入二氯甲烷萃取，合并水相，水相加入活性炭搅拌脱色20～40min，滤除活性炭，控温15℃以下，用NaOH水溶液调节pH至2.0～2.5，降温至5～15℃，静置析晶10～12h，离心，用水洗涤滤出的结晶，得单磷酸阿糖腺苷湿粗品；

粗品精制：

(2-1)在反应釜中加入水和上述单磷酸阿糖腺苷湿粗品，搅拌下用氢氧化钠水溶液调节釜中pH至5～7，加入活性炭搅拌脱色后，经0.45μm板框过滤器压滤后再经0.22μm板框过滤器压入晶罐，滴加盐酸水溶液调节pH至2.0～2.5；

(2-2)将上述药液降温至5～15℃，静置析晶10～12h，离心，用水和乙醇洗涤晶体，真空干燥粉碎后得单磷酸阿糖腺苷。

2.根据权利要求1所述的单磷酸阿糖腺苷的制备方法，其特征在于，步骤(1-1)中，β-D-阿糖腺苷和三氯氧磷的投料摩尔比1：1.00～1.78。

3.根据权利要求1所述的单磷酸阿糖腺苷的制备方法，其特征在于，步骤(2-2)中，真空干燥的条件为：温度45～55℃，真空度≥-0.085MPa，干燥时间为6～10小时。