TR201910720T4 - Anti-phf-tau antikorları ve bunların kullanımları. - Google Patents
Anti-phf-tau antikorları ve bunların kullanımları. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201910720T4 TR201910720T4 TR2019/10720T TR201910720T TR201910720T4 TR 201910720 T4 TR201910720 T4 TR 201910720T4 TR 2019/10720 T TR2019/10720 T TR 2019/10720T TR 201910720 T TR201910720 T TR 201910720T TR 201910720 T4 TR201910720 T4 TR 201910720T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- tau
- antibody
- phf
- antibodies
- seq
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 47
- 102100040243 Microtubule-associated protein tau Human genes 0.000 claims description 83
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 22
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 claims description 13
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 claims description 13
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 12
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 11
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 11
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 11
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 11
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 11
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 claims description 9
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 8
- 101710115937 Microtubule-associated protein tau Proteins 0.000 claims description 5
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 4
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 claims description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 claims description 2
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 claims description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 108010026424 tau Proteins Proteins 0.000 description 80
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 60
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 47
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 46
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 46
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 34
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 20
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 18
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 17
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 17
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 16
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 13
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 13
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 11
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 11
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 9
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 9
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 8
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 6
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 230000004044 response Effects 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 6
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- 210000002682 neurofibrillary tangle Anatomy 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 1-[(2r,4s,5r)-4-[tert-butyl(dimethyl)silyl]oxy-5-(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]-5-methylpyrimidine-2,4-dione Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O[Si](C)(C)C(C)(C)C)C1 QAPSNMNOIOSXSQ-YNEHKIRRSA-N 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 4
- 229920001307 poly(hydroxymethylethylene hydroxymethyl formal) Polymers 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 4
- 201000011240 Frontotemporal dementia Diseases 0.000 description 3
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 3
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- 102000013498 tau Proteins Human genes 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100027831 14-3-3 protein theta Human genes 0.000 description 2
- HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoethan-1-ol Chemical compound NCCO HZAXFHJVJLSVMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000037259 Amyloid Plaque Diseases 0.000 description 2
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 2
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 2
- 101710137189 Amyloid-beta A4 protein Proteins 0.000 description 2
- 101710151993 Amyloid-beta precursor protein Proteins 0.000 description 2
- 102100022704 Amyloid-beta precursor protein Human genes 0.000 description 2
- 206010003062 Apraxia Diseases 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 2
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 2
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 2
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 108010064539 amyloid beta-protein (1-42) Proteins 0.000 description 2
- DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N amyloid-beta polypeptide 42 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)[C@@H](C)CC)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O)C(C)C)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DZHSAHHDTRWUTF-SIQRNXPUSA-N 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 2
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 230000009920 chelation Effects 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 2
- 230000009137 competitive binding Effects 0.000 description 2
- 230000004540 complement-dependent cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 description 2
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 2
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 2
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 2
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 2
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010050013 Abulia Diseases 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102100024092 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Human genes 0.000 description 1
- 101710117290 Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 206010059245 Angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 1
- 206010002942 Apathy Diseases 0.000 description 1
- 108010060159 Apolipoprotein E4 Proteins 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 1
- 108091008875 B cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 208000014644 Brain disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 208000005145 Cerebral amyloid angiopathy Diseases 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 208000004051 Chronic Traumatic Encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 101000746263 Conus leopardus Conotoxin Lp5.1 Proteins 0.000 description 1
- 208000010859 Creutzfeldt-Jakob disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 206010013142 Disinhibition Diseases 0.000 description 1
- 201000010374 Down Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241001269524 Dura Species 0.000 description 1
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000854943 Enterobacteria phage T4 Valyl-tRNA ligase modifier Proteins 0.000 description 1
- 241000672609 Escherichia coli BL21 Species 0.000 description 1
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 208000003736 Gerstmann-Straussler-Scheinker Disease Diseases 0.000 description 1
- 206010072075 Gerstmann-Straussler-Scheinker syndrome Diseases 0.000 description 1
- 206010018341 Gliosis Diseases 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000599951 Homo sapiens Insulin-like growth factor I Proteins 0.000 description 1
- 101000617536 Homo sapiens Presenilin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000617546 Homo sapiens Presenilin-2 Proteins 0.000 description 1
- 208000035150 Hypercholesterolemia Diseases 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102000003746 Insulin Receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 102000011965 Lipoprotein Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010061306 Lipoprotein Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000026072 Motor neurone disease Diseases 0.000 description 1
- 208000001089 Multiple system atrophy Diseases 0.000 description 1
- 206010028347 Muscle twitching Diseases 0.000 description 1
- 206010028403 Mutism Diseases 0.000 description 1
- 208000010577 Niemann-Pick disease type C Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 206010056332 Panencephalitis Diseases 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 208000027089 Parkinsonian disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034010 Parkinsonism Diseases 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 206010034703 Perseveration Diseases 0.000 description 1
- 206010034719 Personality change Diseases 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 208000000609 Pick Disease of the Brain Diseases 0.000 description 1
- 101000612288 Pinus strobus Putative oxygen-evolving enhancer protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 208000036757 Postencephalitic parkinsonism Diseases 0.000 description 1
- 108010050254 Presenilins Proteins 0.000 description 1
- 102000029797 Prion Human genes 0.000 description 1
- 108091000054 Prion Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010040030 Sensory loss Diseases 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- 235000003434 Sesamum indicum Nutrition 0.000 description 1
- 206010042008 Stereotypy Diseases 0.000 description 1
- 208000003028 Stuttering Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000034799 Tauopathies Diseases 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 description 1
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 1
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 1
- 208000007930 Type C Niemann-Pick Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 208000013968 amyotrophic lateral sclerosis-parkinsonism-dementia complex Diseases 0.000 description 1
- 230000002744 anti-aggregatory effect Effects 0.000 description 1
- 208000027697 autoimmune lymphoproliferative syndrome due to CTLA4 haploinsuffiency Diseases 0.000 description 1
- 108010030694 avidin-horseradish peroxidase complex Proteins 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 208000013404 behavioral symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N bis-tris Chemical compound OCCN(CCO)C(CO)(CO)CO OWMVSZAMULFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000003920 cognitive function Effects 0.000 description 1
- 230000001427 coherent effect Effects 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 230000022811 deglycosylation Effects 0.000 description 1
- 208000017004 dementia pugilistica Diseases 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 229910052805 deuterium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000006806 disease prevention Effects 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 238000001378 electrochemiluminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N ethylene glycol bis(2-aminoethyl)tetraacetic acid Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCOCCOCCN(CC(O)=O)CC(O)=O DEFVIWRASFVYLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 210000005153 frontal cortex Anatomy 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 230000007387 gliosis Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 description 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000005802 health problem Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000008102 immune modulation Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 238000000126 in silico method Methods 0.000 description 1
- 238000010874 in vitro model Methods 0.000 description 1
- 201000008319 inclusion body myositis Diseases 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000011221 initial treatment Methods 0.000 description 1
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012004 kinetic exclusion assay Methods 0.000 description 1
- 230000029226 lipidation Effects 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 230000001050 lubricating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000504 luminescence detection Methods 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- 230000006386 memory function Effects 0.000 description 1
- 230000003340 mental effect Effects 0.000 description 1
- 208000027061 mild cognitive impairment Diseases 0.000 description 1
- 239000002480 mineral oil Substances 0.000 description 1
- 235000010446 mineral oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000003032 molecular docking Methods 0.000 description 1
- 208000005264 motor neuron disease Diseases 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003274 myotonic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000626 neurodegenerative effect Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000003002 pH adjusting agent Substances 0.000 description 1
- 208000021090 palsy Diseases 0.000 description 1
- 208000002593 pantothenate kinase-associated neurodegeneration Diseases 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 208000000170 postencephalitic Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002250 progressing effect Effects 0.000 description 1
- 208000037821 progressive disease Diseases 0.000 description 1
- 201000002212 progressive supranuclear palsy Diseases 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000012514 protein characterization Methods 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 238000010403 protein-protein docking Methods 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 201000000196 pseudobulbar palsy Diseases 0.000 description 1
- 208000020016 psychiatric disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- 239000012146 running buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003118 sandwich ELISA Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 238000002603 single-photon emission computed tomography Methods 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000002739 subcortical effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011285 therapeutic regimen Methods 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- 239000002562 thickening agent Substances 0.000 description 1
- 230000031998 transcytosis Effects 0.000 description 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 1
- 238000005199 ultracentrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Neurology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Management, Administration, Business Operations System, And Electronic Commerce (AREA)
Abstract
Mevcut buluş, anti-PHF-tau antikorları ve bunların yapılması ve kullanılmasına yönelik yöntemler ile ilgilidir.
Description
TARIFNAME
ANTI-PHF-TAU ANTIKORLARI VE BUNLARIN KULLANIMLARI
Bulusun Alani
Mevcut bulus, anti-PHF-tau antikorlari ve bunlarin yapilmasi ve
kullanilmasina yönelik yöntemler ile ilgilidir.
Bulusun Arka Plani
Alzheimer Hastaligi (AD), klinik olarak progresif hafiza, bilis,
muhakeme, karar verme gücü ve duygusal denge kaybi ile
karakterize edilen ve kademeli olarak temel bir zihinsel
bozulmaya ve nihayetinde ölüme yol açan dejeneratif bir beyin
bozuklugudur. AD, yasli insanlarda progresif mental
yetmezliginin (demans) çok yaygin bir nedenidir' ve ABD'deki
ölümlerin en yaygin dördüncü tibbi nedeni oldugu kabul edilir.
AD, dünya çapinda etnik gruplarda gözlemlenmistir ve mevcut veya
gelecekte önemli bir genel saglik problemi teskil eder.
AD'li kisilerin beyinleri, senil (veya amiloid) plaklari,
amiloid anjiyopati (kan damarlarinda amiloid depozitleri) ve
nörofibriler yumaklar olarak adlandirilan karakteristik
lezyonlar sergiler. Çok sayida lezyon, özellikle ikili sarmal
filamanlarin amiloid plaklar ve nörofibriler yumaklar, AD'li
hastalarda genellikle insan beyninin hafiza ve bilis fonksiyonu
için önemli birkaç bölgesinde bulunur.
AD'de ve baska birkaç nörodejeneratif hastalikta nörofibriler
dejenerasyonun temel protein bileseni, mikrotübül ile iliskili
protein tau'nun asiri fosforile bir formudur. Tau agregasyonunu
önleyen veya temizleyen terapötik maddelerin gelistirilmesi,
yillardir ilgi konusu olmustur; ancak anti-agregasyon
bilesikleri dahil aday ilaçlar, klinik teste yeni girmistir
WO 93/08302 sayili yayin, mikrotübül ile iliskili protein tau'ya
karsi yönlendirilmis monoklonal antikorlari tarif eder. WO
95/17429 sayili yayin, PHF-tau için spesifik monoklonal
antikorlari tarif' eder. WO 96/04309 sayili yayin, fosforile
edilmis tau'nun belirli bir alt sinifi veya formunun bir epitopu
sayili yayin, patolojik tau proteinlerin immünolojik olarak
hedeflenmesini tarif eder. Brion ve dig. (1993) Journal of
antikorlar RT97 ve 8D8'in, Alzheimer hastaliginda ikili sarmal
filaman-I'da farkli modifiye edilmis epitoplari tanidigini
bildirir. Hasegawa ve digi (1993) Journal of Neurochemistry
monoklonal antikorlarinin karakterizasyonunu tarif eder. Goedert
antikorlarin Alzheimer hastaliginin ikili sarmal filamanlarina
epitop haritalanmasini tarif eder. Condamines ve dig. (1995)
Neuroscience Letters 192(2):81-84 yayini, Alzheimer hastaliginda
nörofibriler dejenerasyonun haritalanmasi için yeni bir
immünolojik testi tarif eder. Hasegawa ve dig. (1996) FEBS
Letters 384z25-30, tau proteinine karsi bir fosforilasyon
bagimli monoklonal antikor olan mAb AP422'nin karakterizasyonunu
8124 yayini, benzersiz Alzheimer hastaligi ikili sarmal filaman
spesifik epitoplarin, spesifik alanlarda çifte forforilizasyonu
içerdigini bildirir. Jicha ve dig. (1997) Journal of
ikili sarmal filamanlarini taniyan bir konformasyon ve
fosforilasyon bagimli antikoru tarif eder. Singer ve dig. (2006)
Biochemical and Biophysical Research Communications 346(3):819-
828 yayini, Alzheimer hastaliginda PHF-tau spesifik markörler
olarak komsu fosforilasyon alanlarini tarif eder. Porzig ve dig.
(2007) Biochemical and Biophysical Research Communications
bölgelere karsi yönlendirilmis mAb'ler AT8 ve Tau5'in
haritalanmasini tarif eder. Mercken ve dig. (1992) Acta
Neuropathol. 84(3):265-272 yayin, Alzheimer Tau için seçici
spesifiklige sahip Hwnoklonal antikorlarin, fosfataza duyarli
sayili yayin, izole edilmis monoklonal ile iliskili protein tau
ps422 antikorunun beyin hastaliklarinin tedavisi için
kullanimini tarif eder.
Yakin zamanda, transgenik tau fare modellerinde tau için aktif
ve pasif immünizasyonun terapötik potansiyele sahip olabilecegi
yönünde preklinik kanit elde edilmistir (Chai, ve dig. J Biol
bir taupati transmisyonu ve yayilmasi hipotezi açiklanmistir ve
insan beyninde taupatinin Braak evrelerine ve preklinik tau
modellerinde tau agregat enjeksiyonlarindan sonra taupati
nedenle, AD ve diger nörodejeneratif hastaliklarin tedavi
edilmesi amaciyla tau agregasyonunu ve taupati progresyonu
önlemek için terapötik maddelere ihtiyaç duyulur.
Sekillerin Kisa Açiklamasi
Sekil 1, çesitli anti-tau antikorlari ile isaretli AT8'in
rekabetini gösterir. Sekil 2, çesitli anti-tau antikorlari ile
isaretli PTl'in rekabetini gösterir. Sekil 3, çesitli anti-tau
antikorlari ile isaretli PT3'ün rekabetini gösterir. Sekil 4,
çesitli anti-tau antikorlari ile isaretli ATIOO'ün rekabetini
gösterir. Sekil 5, çesitli anti-tau antikorlari ile isaretli
HT7'nin rekabetini gösterir. Sekil 6 (A) Sekilde gösterildigi
gibi salin, fare IgGl, PT3 veya AT8 ile tedavi edilmis 5 aylik
disi P301L transgenik hayvanlarin veya tedavi edilmemis
transgenik olmayan hayvanlardan (B6) beyinsapi homojenatlarinda
fosforile tau'nun analizi (fraksiyon Pl). ELISA, yakalama
antikorlari ve ardindan biyotinlenmis HT7 ve avidin HRP olarak
AT8 (sol panel) veya ATlOO (sag panel) kullanilarak
gerçeklestirilmistir. ELISA sinyalleri, transgenik olmayan bir
hayvandan (B6) alinan örneklerin bir ortalamasi olarak göreli
bir miktarda AD beyin homojenati (ng/ml) olarak grafige dökülür.
Veriler, ortalama +/- S.D. ile birlikte tek tek grafige
dökülmüstür. PT3 ve IgGl ile tedavi edilmis hayvanlar arasindaki
farkliliklarin p degerleri belirtilmistir. (B) ATlOO
kullanilarak IgGl veya PT3 ile tedavi edilen hayvanlardan
beyinsapi homojenatlari fraksiyon Pl'in Western blotu. IgGl
(IgGl-l ila IgGl-lO) ile tedavi edilmis lO hayvanin ve PT3 (PT3-
l, PT3-2, PT3-7 ila PT3-lO ile tedavi edilmis 7 hayvanin
homojenatlarindan elde edilen sinyal. Aktin, bir yükleme
kontrolü olarak kullanilmistir.
Sekil 7 Sekilde gösterildigi gibi PT3 veya izotip kontrolü (IgG)
ile tedavi edilmis 5 aylik disi P301L transgenik farelerinden
türetilen korteks homejenatlarinda sarkozil çözünür toplam tau
(pT4 çözünür), çözünemez toplam tau (pT4 çözünemez) ve çözünemez
fosforile tau (AT8 çözünemez) seviyeleri. Seviyeler, ortalama
+/- S.D. ile birlikte tek tek grafige dökülmüs ELISA ile elde
edilen bir sinyal ölçümü olarak gösterilmistir. lm enjeksiyon
halinde örnek, bir tau agregati ile enjekte edilmis bir P301L
fare beyninden türetilmis bir pozitif kontrol örnegidir.
Bulusun Özeti
Bulus, SEQ ID NO: 37'nin bir VH'si veya SEQ ID NO:38'in bir
VL'sini veya bunlarin insanlastirilmis bir versiyonunu içeren
PHF-tau'yu baglayan bir izole edilmis antikor saglar ve burada
söz konusu insanlastirilmis versiyon, ProteOn ile belirlendigi
üzere 10_10 M'den az veya lO_10 M'ye esit bir ayrisma sabiti (KD)
ile PHF-tau'ya yönelik afiniteye sahiptir.
Bulusun baska bir görünümü, bulusun antikorlarini veya
fragmanlarini kodlayan polinükleotitlerdir.
Mevcut bulusun baska bir görünümü, bulusun polinükleotitlerini
içeren bir vektördür.
Mevcut bulusun baska bir görünümü, bulusun vektörünü içeren bir
konakçi hücredir.
Mevcut. bulusun baska bir görünümü, bulusun konak hücresinin
kültürlenmesini ve konak hücre ile üretilen antikorun geri
kazanilmasini içeren PHF-tau'yu baglayan bir antikorun
yapilmasina yönelik bir yöntemdir.
Mevcut bulus ayrica, bulusun antikorunu ve farmasötik olarak
kabul edilebilir bir tasiyiciyi içeren bir farmasötik bilesim
Mevcut bulus ayrica, beyinde patolojik agregasyon içeren bir
nörodejeneratif hastaligin tedavi edilmesi veya önlemesi veya
semptomlarinin azaltilmasinda kullanilmaya yönelik bulusun
antikorunu saglar.
Bulusun Ayrintili Açiklamasi
Burada kullanilan sekliyle “antikorlar” terimi genis anlamda
kullanilir ve poliklonal antikorlar dahil immünoglobülin veya
antikor moleküllerini, murin, insan, insana uyarlanmis,
insanlastirilmis ve kimerik monoklonal antikorlari ve antikor
fragmanlarini içeren monoklonal antikorlari içerir.
Genel olarak antikorlar, spesifik bir antijende baglanma
spesifikligi sergileyen proteinler veya peptit zincirleridir.
Antikor yapilari iyi bilinmektedir. Immünoglobülinler, agir
zincir sabit domen amino asit sekansina bagli olarak IgA, IgD,
lgA ve IgG ayrica IgAl, IgA2, IgGl, IgG2, IgG3 ve IgG4 izotipleri
olarak alt siniflara ayrilabilir. Herhangi bir omurgali türünün
antikor hafif zincirleri, sabit domenlerinin amino asit
sekanslarina bagli olarak. kappa &Q ve lambda (A) seklinde
adlandirilan açikça farkli iki türden birine ayrilabilir.
içerir. Antikor fragmanlarinin örnekleri, Fab, Fab', F(ab')2 ve
FV fragmanlari, CDR, antijen baglanma alani, agir veya hafif
zincir degisken bölgesi, diakorlar, tek Zincirli antikor
molekülleri ve en az iki intakt antikordan ve fragmanlarindan
olusturulan multispesifik antikorlari içerir.
Bir' immünoglobulin hafif veya agir zincir* degisken bölgesi,
asagidaki gibi çesitli terimler kullanilarak tanimlanir: (i)
Tamamlayicilik Belirleyici Bölgeler (CDR'ler), sekans
Genel olarak antijen baglayici alan, her bir degisken bölgede üç
CDR'ye (agir zincir degisken bölgesinde (VH) HCDRl, HCDR2 ile
HCDR3 ve hafif zincir degisken bölgesinde (VL) LCDRl, LCDR2 ile
LCDR3) sahiptir (Kabat ve dig., Sequences of Proteins of
National Institutes of Health, Bethesda, Md., 1991). (ii) “Asiri
degisken bölge”, “HVR” veya “HV”, Chothia ve Lesk (Chothia ve
yapi bakimindan asiri degisken olan bir antikor degisken
domeninin bölgelerini ifade eder. Genel olarak antijen baglayici
alan, her bir VH (Hl, H2, H3) ve VL'de (L1, L2, L3) üç asiri
degisken bölgeye sahiptir. Chothia ve Lesk, “kanonik yapilar"
olarak yapisal açidan korunmus HV'leri ifade eder. CDR ve
HV'lerin numaralandirma sistemi ve ayni zamanda açiklamalari,
yakin zamanda Abhinandan ve Martin (Abhinandan ve Martin Abi
Antijen baglayici alani olusturan bölgelerin farkli bir tanimi,i
immünoglobülinler ve T hücresi reseptörlerine ait V domenlerinin
karsilastirilmasina dayanarak Lefranc (Lefranc, ve dig. Dev Comp
lmMunoGeneTics (IMGT) veritabani (http:_//www_imgt_org), bu
bölgelerin standart bir numaralandirilmasini ve tanimini saglar.
CDR'ler, HV'ler ve IMGT tarifleri arasindaki uyusma yukarida yer
alan Lefranc ve dig., referansli belgede tarif edilmistir. (iv)
Antijen baglayici alan, ayrica Spesifiklik Belirleyici Kalinti
Kullanimi (SDRU) baz alinarak. tanimlanabilir (Almagro LI Rbl
Kalintilar (SDR), antijen temasina dogrudan katilan bir
immünoglobülinin amino asit kalintilarini ifade eder.
sekanslari olarak tanimlananlarin disindaki bir antikorun
degisken bölgesinde kalan sekanslardir. Bir antijen baglayici
alanin tam tanimi, yukarida tarif edildigi gibi çesitli
tanimlamalar ile belirlenebildigi için tam çerçeve sekansi,
antijen baglayici alanin tanimina baglidir.
Burada kullanildigi sekliyle “monoklonal antikor” (mAb) terimi,
büyük ölçüde homojen antikorlarin bir popülasyonundan elde
edilen bir antikor (bir antikor fragmani) anlamina gelir.
Monoklonal antikorlar oldukça spesifik olup, tek bir antijen
determinantina karsi yönlendirilmistir.
Burada kullanilan sekliyle “epitop” terimi, bir antikorun
spesifik olarak baglandigi bir antijenin bir kismi anlamina
gelir. Epitoplar genel olarak amino asitler, fosforile amino
asitler veya polisakkarit yan zincirleri gibi parçalarin
kimyasal olarak aktif (örnegin polar, polar olmayan veya
hidrofobik) yüzey gruplamalarindan olusur ve spesifik üç boyutlu
yapisal özelliklere ve spesifik yük özelliklerine sahip
olabilir. Bir epitop, yapi bakimindan lineer veya sürekli
olmayan bir epitop, örnegin amino asitlerin lineer bir
serisinden ziyade bir antijenin bitisik olmayan amino asitleri
arasindaki uzamsal bir iliski ile olusturulan konformasyonel bir
epitop olabilir. Bir konformasyonel epitop, bir antijenin
katlanmasindan ortaya çikan epitoplari içerir ve burada
antijenin lineer sekansinin farkli kisimlarindan amino asitler,
3 boyutlu uzamda yakin proksimitededir.
Tau, iyi bilinen birden çok izoforma sahip, bol miktarda bulunan
merkezi ve periferik sinir sistemi proteinidir . Insan
MSS'sinde, alternatif uç birlesmesi (splicing) nedeniyle 352 ila
441 arasinda degisen büyüklükte alti ana tau izoformu bulunur
0-2 N terminal eklentisi ve 3 veya 4 ikili düzenlenmis mikrotübül
baglayici tekrarin düzenlenmis katilimi bakimindan birbirleri
arasinda farklilik gösterir ve ON3R (SEQ ID NO: 1), lN3R (SEQ ID
ve olarak ifade edilir. Burada kullanildigi
sekliyle “kontrol tau" terimi, fosforilasyondan ve diger
translasyon sonrasi modifikasyonlardan yoksun SEQ ID NO:6'nin
tau izoformunu ifade eder.
Tau, mikrotübülleri baglar ve tau fosforilasyonu. ile module
edilebilen bir proses olan hücreler yoluyla kargo tasinmasini
düzenler. AD ve ilgili bozukluklarda, tau'nun anormal
forforilasyonu yaygindir ve ikili sarmal filamanlar (PHF) olarak
adlandirilan tau'nun fibrillere agregasyonundan önce geldigi
ve/Veya bunu tetikledigi düsünülür. PHF'nin ana bileseni, asiri
fosforile edilmis tau'dur. Burada kullanildigi sekliyle “ikili
sarmal filaman-tau” veya “PHP-tau” terimi, ikili sarmal
filamanlarda iyi bilinen tau agregatlari olarak ifade edilir.
Elektron ndkroskopisinde, PHF yapisindaki bulanik kaplama ve
çekirdek filamanlar olmak üzere iki temel bölge, nettir; bulanik
kaplama, proteolize karsi duyarlidir ve filamanlarin disinda
bulunur ve proteaza dirençli filaman çekirdekleri PHF'lerin
omurgasini olusturur (Wischik, ve dig. Proc Natl AcadSci USA
Burada kullanildigi sekliyle “PHF-tau'yu baglayan antikorlar”,
western blot'ta degerlendirildigi üzere PHF-tau'yu baglayan
antikorlari ifade eder. Tipik olarak PHF-tau'ya baglanan
antikor, %5 (W/V) yagsiz kuru süt (NFDM) TBS-T, %0,05 Tween-
'de bloklamadan 1 saat sonra yaklasik 500 ng PHF-tau'luk
Coomassie boyasindan sonra analiz edilebilir. PHP-tau'yu
baglayan antikorlar istege bagli olarak antijen yükleme
kosulunun altinda test edilen western blot ile Ölçüldügü üzere
kontrol tau'yu (SEQ ID No:6) baglamaz; burada kontrol tau ve
PHF-tau'nun her ikisi, PHF-tau epitoplarini tercih etmeyen tau
antikorlari ile esit bir sekilde saptanir (örn. HT7 antikoru,
(ThermoScientific, Rockford, IL) (Mercken, ve dig. J Neurochem
Burada, iyi bilinen konvansiyonel bir veya üç harfli amino asit
kodlari kullanilmistir.
Maddenin bilesimieri
Mevcut bulus, anti-PHF-tau antikorlari ve bu antikorlarin
kullanimlari ile ilgilidir. Bu anti-PHF-tau antikorlari, PHF-
tau üzerinde bir fosforile edilmis epitopu baglama veya PHF-tau
üzerinde fosforile edilmemis bir epitopa baglanma özelliklerine
sahip olabilir. Anti-PHF-tau antikorlari, biyolojik örneklerde,
örnegin dokularda veya hücrelerde PHF-tau'nun saptanmasi için
terapötik maddeler olarak veya arastirma veya teshis reaktifleri
olarak yararli olabilir.
Açiklamanin bir uygulamasi, SEQ ID NO:35 veya 37'nin bir agir
zincir degisken bölgesinin (VH) bir antijen baglayici alanini
veya SEQ ID NO:36 veya 38'in bir hafif zincir degisken bölgesinin
(VL) bir antijen baglayici alanini içeren PHF-tau'yu baglayan
izole edilmis bir antikordur. Tablo 1, Kabat veya Chothia'ya
göre tanimlanan örnek antikorlarin antijen baglayici alan
kalintilarini ve ayni zamanda örnek agir ve hafif zincir degisken
bölgeleri gösterir.
Açiklamanin baska bir uygulamasinda, antikorlarin VH'sinin
antijen baglayici alani, sirasiyla SEQ ID No:7, 8 ve 9 veya 13,
14 ve 15'in agir zincir tamamlayicilik belirleyici bölgeleri
(CDR'ler) l (HCDRl), 2 (HCDRZ) ve 3'ü (HCDR3) içerir ve
antikorlarin VL'sinin antijen baglayici alani, sirasiyla SEQ ID
(LCDRl), 2 (LCDRZ) ve 3'ü (LCDR3) içerir.
Açiklamanin baska bir uygulamasi, SEQ ID NO:35 veya 37'nin bir
agir zincir degisken bölgesinin (VH) bir antijen baglayici
alanini ve SEQ ID NO:36 veya 38'in bir hafif zincir degisken
bölgesinin (VL) bir antijen baglayici alanini içeren PHF-tau'yu
baglayan izole edilmis bir antikordur.
Açiklamanin baska bir uygulamasinda, antikorlarin VH'sinin
antijen baglayici alani, sirasiyla SEQ ID NO:13, 14 ve 15'in
agir zincir tamamlayicilik belirleyici bölgeleri (CDR'ler) 1
(HCDRl), 2 (HCDRZ) ve 3'ü (HCDR3) içerir ve antikorlarin VL'sinin
antijen baglayici alani, sirasiyla SEQ ID NO:16, 17 ve 18'in
hafif zincir CDR'leri l (LCDRl), 2 (LCDR2) ve 3'ü (LCDR3) içerir.
Sekans adi SEQ ID Sekans
PTl HCDRl, Kabat 7 SSWMG
PTl HCDRZ, Kabat 8 DILPGSGGTNYNERFKG
PTl HCDR3, Kabat 9 SYYDYDRFAN
PTl LCDRl, Kabat 10 RSSESLLHSNGNTYLY
PTl LCDR2, Kabat 11 RMSNLAS
PTl LCDR3, Kabat 12 MQYLEYPLT
PT3 HCDRl, Kabat 13 SYAMS
PT3 HCDRZ, Kabat 14 SISKGGNTYYPNSVKG
PT3 LCDRl, Kabat 16 KASQDINRYLN
PT3 LCDR2, Kabat 17 RANRLLD
PT3 LCDR3, Kabat 18 LQYDEFPLT
PTl HCDRl, Chothia 19 GYTFSSS
PTl HCDRZ, Chothia 20 LPGSGG
PTl HCDR3, Chothia 21 SYYDYDRFA
PTl LCDRl, Chothia 22 SESLLHSNGNTY
PTl LCDR2, Chothia 23 RMS
PTl LCDR3, Chothia 24 YLEYPL
PT3 HCDRl, Chothia 25 GFTFSSY
PT3 HCDRZ, Chothia 26 SKGGN
PT3 HCDR3, Chothia 27 GWGDYGWFA
PT3 LCDRl, Chothia 28 SQDINRY
PT3 LCDR2, Chothia 29 RAN
PT3 LCDR3, Chothia 30 YDEFPL
QVQLQQSGTELMKPGASVKISCKATGYTFSS
SWMGWVKQRPGHGLEWIGDILPGSGGTNYNE
RFKGKASFTAETSSNTAYMQLSSLTSEDSAV
DIVMTQAAPSVPVTPGESVSISCRSSESLLH
PT1 VL 36
SNGNTYLYWFLQRPGQSPQLLIYRMSNLASG
VPDRFSGSGSGTAFTLRISRVEAEDVGVYYC
EVKLVESGGDLVKPGGSLKLSCAASGFTFSS
PT3 VH 37
YAMSWVRQNPEKRLEWVASISKGGNTYYPNS
VKGRFTISRDNARNILYLQMSSLRSEDTALY
DIKMTQSPSSMYASLGERVTITCKASQDINR
PT3 VL 38
YLNWFQQKPGKSPKTLIYRANRLLDGVPSRF
SGSGSGQDYSLTISSLDYEDMGIYYCLQYDE
hhT mi-InhhmTIT i-\T TI`
Örnekler bölümünde gösterilen uygulamalar, bir agir zincirden
bir adet bir hafif zincirden bir adet olmak üzere ikili degisken
bölgeler içermesine ragmen yetkili bir kisi, alternatif
uygulamalarin tekli agir veya hafif zincir degisken bölgeleri
içerebilecegini kabul edecektir. Tekli degisken bölge, örnegin
PHF-tau'yu baglayabilen iki domenli bir spesifik antijen
baglayici fragmani olusturabilen degisken domenlerin taranmasi
için kullanilabilir. Tarama, örnegin PCT Yayin No. WO92/01047'de
açiklanan hiyerarsik ikili kombinatoryal yaklasiminin
kullanildigi faj gösterimi tarama yöntemleri ile
gerçeklestirilebilir. Bu yaklasimda bir H veya L zinciri klonunu
içeren bir tekli koloni, diger zinciri (L veya H) kodlayan
klonlardan olusan bütün bir kütüphaneyi enfekte etmek için
kullanilir ve ortaya çikan iki Zincirli spesifik antijen
baglayici domen, tarif edildigi gibi faj gösterimi tekniklerine
göre seçilir.
Açiklamanin baska bir uygulamasi, SEQ ID NO:35'in bir agir zincir
degisken bölgesinin (VH) bir antijen baglayici alanini ve SEQ ID
NO: 36'nin bir hafif zincir degisken bölgesinin (VL) bir antijen
baglayici alanini içeren PHF-tau'yu baglayan izole edilmis bir
antikordur.
Açiklamanin baskar bir uygulamasi, SEQ ID `NO:37'ninr bir agir
zincir degisken bölgesinin (VH) bir antijen baglayici alanini ve
SEQ ID NO: 38'in bir hafif zincir degisken bölgesinin (VL) bir
antijen baglayici alanini içeren PHF-tau'yu baglayan izole
edilmis bir antikordur.
Açiklamanin baska bir uygulamasi, sirasiyla SEQ ID No:7, 8 ve
9'un agir zincir tamamlayicilik belirleyici bölgeleri (CDR'ler)
l (HCDRl), 2 (HCDRZ) ve 3'ü (HCDR3) ve Sirasiyla SEQ ID NO:10,
11 ve 12'nin hafif zincir CDR'leri 1 (LCDRl), 2 (LCDRZ) ve 3'ü
(LCDR3) içerir.
Açiklamanin baska bir uygulamasi, sirasiyla SEQ 1D NO:13, 14 ve
'in agir zincir tamamlayicilik belirleyici bölgeleri (CDR'ler)
1 (HCDRl), 2 (HCDRZ) ve 3'ü (HCDR3) ve sirasiyla SEQ ID NO:16,
17 ve 18'in hafif zincir CDR'leri 1 (LCDRl), 2 (LCDRZ) ve 3'ü
(LCDR3) içerir.
Önceki uygulamalarin herhangi birinde, PHF-tau'yu baglayan izole
edilmis antikor, insanlastirilmis olabilir.
Mevcut bulusun antikorlari, çesitli teknikler, örnegin hibridom
yöntemi ile üretilebilir (Kohler ve Milstein Nature 256z495-7,
1975). Bir akseptör antikordan (tipik olarak baska bir memeli
türü, örnegin insan) türetilen hafif ve agir zincir sabit
bölgeleri ile baglantili bir donör antikordan (tipik olarak
murin) türetilen bir hafif ve agir zincir degisken bölgesini
içeren kimerik mAb'ler, U.S. Pat. No. 4,816,567 yayininda
açiklanan yöntem ile hazirlanabilir. Bir insan olmayan donörün
immünoglobülininden (tipik olarak murin) türetilen CDR'lere ve
bir veya daha fazla insan immünoglobülinlerinden türetilen
molekülün kalan immünoglobülin türevli kisimlarini içeren CDR
ile asilanmis mAb'ler, U.S. Pat. No. 5,225,539 yayininda
açiklanan teknik gibi teknikte yetkin kisilerce bilinen
teknikler ile hazirlanabilir. Herhangi bir insan olmayan
sekanslari içermeyen tamamen insan mAb'ler, referans olarak
verilen yayinlarda yer alan teknikler yoluyla insan
immünoglobülin transgenik farelerden hazirlanabilir (Lonberg, ve
Insan mAb'ler de hazirlanabilir ve faj gösterim
kütüphanelerinden optimize edilebilir (Knappik, ve dig. J Nbl
Antikor insanlastirma, spesifiklik belirleyici kalintilarin
yeniden yüzeyleme (Padlan ve dig; Mbl. Immunol. 28:489-98,
insan dikis içerigi optimizasyonu (U.S. Pat. No. 7,657,380) gibi
iyi bilinen yöntemler kullanilarak gerçeklestirilebilir.
Asilama/insanlastirma için yararli insan çerçeve sekanslari,
teknikte yetkin kisilerce ilgili veritabanlarindan seçilebilir.
Seçilen çerçeveler, Queen ve dig. (Queen, ve dig. Proc Natl Acad
yayinlarinda açiklanan teknikler gibi tekniklerle baglanma
afinitesini korumak veya arttirmak için daha fazla Inodifiye
edilebilir.
Immünizasyon veya antikorlarin faj gösterim kütüphanelerinden
izole edilmesi için› bir antijen› olarak kullanilarak PHF-tau
hazirlamasi, uygun herhangi bir teknik kullanilarak
gerçeklestirilebilir. Örnek bir yöntemde PHF-tau, iyi bilinen
protokoller kullanilarak AD'si sahip hastalarin beyinlerinden
örnegin Greenberg ve Davies (Greenberg ve Davies Proc Natl Acad
edilir. PHF-tau, bir Alzheimer hastasinin postmortem
korteksinden izole edilebilir. Izole edilmis PHF-tau, safligi ve
PHF-tau ile tepkimeye girdigi bilinen antikorlar ile asiri
fosforilasyon durumu ile karakterize edilir. Tipik bir PHF-tau
preparasyonda, western blot'ta yaklasik 60, 64, 68 ve 72 kDa'da
göçen asiri fosforile bantlar (Spillantini ve Goedert Trends
spesifik olarak baglayan, defosforile PHF-tau'yu baglamayan bir
AT8 antikoru ile saptanir.
Mevcut bulusun antikorlari, SEQ ID NO:6'nin kontrol tau'sunu
baglamama özelliklerine sahip olabilir. Bu antikorlar, yukarida
tarif edilen yöntemler kullanilarak ve antikorlarin western
blot'larda ve ardindan yukarida tarif edildigi gibi Coomassie
boyasinda kontrol tau'ya baglanmamalari bakimindan test
edilmesiyle olusturulmustur. Kontrol tau, rekombinant olarak
eksprese edilebilir ve standart yöntemler kullanilarak
saflastirilabilir. PHP-tau'yu baglayan, ancak kontrol tau'yu
baglamayan örnek antikorlar, PTl ve PT3 antikorlaridir. Bulusun
antikorlari ayrica, örnegin kontrol ve AD ve beyin dilimleri
üzerinde immünohistokimya kullanilarak spesifikligi bakimindan
degerlendirilebilir.
bir ayrisma sabiti (KD) ILE PHF-TAU'YA YÖNELIK AFINITELERE SAHIP OLABILIR.
PHF-tau için belirli bir molekülünün afinitesi, herhangi bir
uygun yöntem kullanilarak deneysel olarak belirlenebilir. Bu
yöntemlerde, Biacore, ProteOn veya KinExA cihazi, ELISA veya
teknik alanda yetkili kisilerce bilinen rekabetçi baglanma
analizleri kullanilabilir.
Açiklamanin baska bir görünümü, SEQ ID NO:35'in bir agir zincir
degisken bölgesinin (VH) bir antijen baglayici alanini ve SEQ ID
NO:36'nin bir hafif zincir degisken bölgesinin (VL) bir antijen
baglayici alanini veya SEQ ID NO:37'nin bir agir zincir degisken
bölgesinin (VH) bir antijen baglayici alanini ve SEQ ID NO:38'in
bir hafif zincir degisken bölgesinin (VL) bir antijen baglayici
alanini içeren bir Hmnoklonal antikor ile PHF-tau baglanmasi
bakimindan rekabet eden bir izole edilmis antikor veya
fragmanidir.
PHF-tau'ya baglanmada rekabet, iyi bilinen yöntemler
kullanilarak in vitro analiz edilebilir. Örnegin, isaretli
olmayan bir antikorun varliginda MSD Sulfo-TagTM NHS-ester
isaretli antikorun PHF-tau'ya baglanmasi, immünolojik test ve
ardindan elektrokimyasal isildama saptamasi kullanilarak
degerlendirilebilir.
Rekabetçi baglanmaya ek olarak iyi bilinen birkaç metodoloji,
bulusun antikorlarinin baglanma epitopunu belirlemek için
kullanilabilir. Örnegin, her iki münferit bilesenin yapisi
bilindiginde, in silico protein-protein yerlestirmesi,
etkilesimin uyumlu bölgelerini tanimlamak için gerçeklestirilir.
Antikorun baglandigi antijendeki bölgeleri haritalamak için
antijen ve antikor kompleksi ile hidrojen-döteryum (H/D)
degisimi gerçeklestirilebilir. Antijenin segment ve nokta
mutajenezi, antikor baglanmasi için önemli olan amino asitlerin
konumunu belirlemek için kullanilabilir. Antikor-antijen
kompleksinin kokristal yapisi, epitop ve paratopa katkida
bulanan kalintilari tanimlamak için kullanilir.
Bulusun antikorlari, IgG, IgD, IgA. veya IgM izotiplerinin
monoklonal antikorlari olabilir. Bulusun antikorlari, bispesifik
veya multispesifik olabilir. Örnek niteligindeki bir bispesifik
antikor, PHF-tau üzerindeki iki farkli epitopa baglanabilir veya
PHF-tau ve amiloid betayi (Aß) baglayabilir. Baska bir örnek
niteligindeki bispesifik antikor, PHF-tau ve bir endojen kan-
beyin bariyer transitoz reseptörü, örnegin insülin reseptörü,
transferrin reseptörü, insülin benzeri büyüme faktörü-1
reseptörü ve lipoprotein reseptörünü baglayabilir. Örnek
niteliginde bir antikor, IgGl tipindedir.
Bulusun antikorlarinin immün efektör özellikleri, teknikte uzman
kisilerce bilinen teknikler ile FC modifikasyonlari yoluyla
güçlendirilebilir veya susturulabilir. Örnegin FC efektör
fonksiyonlari, örnegin Clq baglanmasi, tamamlayiciya bagimli
sitotoksisite (CDC), FC reseptör baglanmasi, antikora bagli
hücre aracili sitotoksisite (ADCC), fagositoz, hücre yüzeyi
reseptörlerinin asagi regülasyonu (örnegin B hücresi reseptörü;
BCR) ve benzerleri, bu aktivitelerden sorumlu Fc'de kalintilarin
modifiye edilmesiyle saglanabilir ve/veya kontrol edilebilir.
Farmakokinetik özellikler, antikor yari ömrünü uzatan Fc
domeninde kalintilarin mutasyona ugratilmasiyla arttirilabilir
Ek olarak bulusun antikorlari, glikozilasyon, izomerizasyon,
deglikozilasyon veya dogal olarak olusmayan kovalent
modifikasyon, örnegin polietilen glikol parçasi (pegilasyon) ve
lipidasyon ilavesi gibi prosesler yoluyla translasyon sonrasinda
modifiye edilebilir. Bu modifikasyonlar, in vivo veya in vitro
olarak gerçeklestirilebilir. Örnegin bulusun antikorlari,
farmakokinetik profilleri gelistirmek için polietilen glikola
(PEGlenmis) konjüge edilebilir. Konjügasyon, teknikte yetkin
kisilerce bilinen teknikler yoluyla gerçeklestirilebilir.
Terapötik antikorlarin PEG ile konjügasyonu, fonksiyonuna
müdahale etmeden farmakodinamikleri arttirdigi görülmüstür
2003).
Bulusun baska bir uygulamasi, bulusun antikorlarini veya
tamamlayicisini veya fragmanlarini kodlayan bir izole edilmis
polinükleotittir. Açiklamanin örnek izole edilmis
polinükleotitleri, sirasiyla SEQ ID No:7, 8 ve 9 veya 13, 14 ve
'te gösterilen bir immünoglobülin agir zincir CDR'ler HCDRl,
HCDRZ ve HCDR3'ü içeren polipeptitleri veya sirasiyla SEQ ID
immünoglobülin hafif zincir CDR'ler` LCDRl, LCDR2 ve LCDRB'ü
içeren polipeptitleri kodlayan polipeptitler ve antikor degisken
bölgeleri kodlayan SEQ ID NO:31-34'te gösterilen bir sekansa
sahip polinükleotitlerdir. Belirli bir sentezleme sistemindeki
genetik kod. veya kodon tercihlerinin dejenereligi göz önüne
alindiginda, bulusun antikorlarini kodlayan diger
polinükleotitler de bulusun kapsami dahilindedir- Mevcut bulusun
izole edilmis nükleik asitleri, iyi bilinen rekombinant veya
sentetik teknikler kullanilarak olusturulabilir. Monoklonal
antikorlari kodlayan DNA, kolaylikla izole edilir ve teknikte
bilinen yöntemler kullanilarak sekanslanabilir. Bir hibridom
üretildiginde bu hücreler, bu DNA'nin bir kaynagi görevi
görebilir, Alternatif olarak, kodlama sekans ve translasyon
ürününün baglandigi gösterini tekniklerinin, örnegin. faj veya
ribozomal gösterim kütüphanelerinin kullanilmasiyla, baglayici
ve nükleik asitin seçimi basitlestirilmistir. Faj seçiminden
sonra, fajdan antikor kodlayici bölgeleri izole edilebilir ve
insan antikorlari veya istenen herhangi bir baska antijen
baglayici fragman dahil bütün antikorlari olusturmak için
kullanilabilir ve memeli hücreler, böcek hücreleri, bitki
hücreleri, maya ve bakteri dahil istenen herhangi bir konakta
eksprese edilebilir.
Mevcut bulusun bir baska uygulamasi, mevcut bulusa ait en az bir
polinükleotit içeren bir vektördür. Söz konusu vektörler,
plazmit vektörler, viral vektörler, transpozon bazli vektörler
veya bulusun polinükleotitlerin herhangi bir yolla belirli bir
organizma veya genetik arka plana dahil edilmesine yönelik uygun
baska herhangi bir vektör olabilir.
Mevcut bulusun bir baska uygulamasi, bulusun
polinükleotitlerinden herhangi birini içeren bir konakçi
hücredir. Bu tür konakçi hücreler, ökaryotik hücreler, bakteri
hücreleri, bitki hücreleri veya arkeal hücreler olabilir. Örnek
ökaryotik hücreler, memeli, böcek, kus veya diger hayvan kökenli
olabilir. Memeli ökaryotik hücreleri arasinda ölümsüzlestirilmis
hücre hatlari örnegin SPZ/O (Amerikan Tipi Kültür Koleksiyonu
(ATCC), Manassas, VA, CRL-158l), NSO (Avrupa Hücre Kültürleri
Koleksiyonu (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, ECACC No.
gibi hibridom veya miyelom hücre
hatlari ve Ag murin hücre hatlari bulunur.
Örnek bir insan miyelom hücre hatti, U266'dir (ATTC CRL-TIB-
196). Diger yararli hücre hatlari arasinda CHO-KlSV (Lonza
Biologies), CHO-Kl (ATCC CRL-6l, Invitrogen) veya DG44 gibi Çin
Hamster Yumurtaligi (CHO) hücrelerinden türetilenler bulunur.
Mevcut bulusun baska bir uygulamasi, bulusun bir konak
hücresinin kültürlenmesini ve konak hücre ile üretilen antikorun
geri kazanilmasini içeren PHF-tau'yu baglayan bir antikorun
yapilmasina yönelik bir yöntemdir. Antikorlarin olusturulmasina
ve bunlarin saflastirilmasina yönelik yöntemler, teknikte iyi
Tedavi yöntemleri
Fab, (Fab')2, scFv fragmanlari veya bulusun antikorlarinin
antijen baglayici alanlarini içeren antikorlar dahil bulusun
anti-PHF-tau antikorlari veya fragmanlari, beyinde tau'nun
patolojik agregasyonunu içeren. bir nörodejeneratif hastaliga
sahip hastalarda, örnegin AD veya herhangi bir baska taupatiden
muzdarip hastalarda semptomlarin tedavi edilmesi, azaltilmasi
veya önlenmesi için kullanilabilir. Herhangi bir özel teoriye
bagli kalmaksizin, bulusun antikorlari, beyinde patolojik tau
agregasyonu ve böylece PHF-tau miktarini azaltarak yararli
etkisini ortaya çikarabilir. Bulusun antikorlari, herhangi bir
siniflandirmaya ait olan bir hayvan hastayi tedavi etmek için
kullanilabilir. Bu tür hayvan örnekleri arasinda insanlar,
kemirgenler, köpekler, kediler ve çiftlik hayvanlari gibi
memeliler bulunur. Örnegin, bulusun antikorlari, AD tedavisine
yönelik bir ilacin hazirlanmasinda faydalidir; burada ilaç,
burada tanimlanan dozajlarda uygulama için hazirlanir.
Bulusun baska bir uygulamasi, ihtiyaç duyan hastalarda tau
agregasyonunu azaltmaya yönelik, tau agregasyonunu azaltmak için
yeterli bir sürede hastaya terapötik olarak etkili bir miktarda
bulusun izole edilmis antikorunun uygulanmasini içeren bir
yöntemde kullanilmaya yönelik bir bulus antikorudur.
Bulusun. baska. bir uygulamasi, bir hastada. tau agregasyonunu
içeren bir nörodejeneratif hastaligin semptomlarinin tedavi
edilmesine veya azaltilmasina yönelik, nörodejeneratif
hastaligin semptomlarinin tedavi edilmesi veya azaltilmasi için
yeterli bir sürede hastaya terapötik olarak etkili bir miktarda
bulusun izole edilmis antikorunun uygulanmasini içeren bir
yöntemde kullanilmaya yönelik bir bulus antikorudur.
Yukaridaki uygulamalarin herhangi birinde, tau agregasyonunu
içeren nörodejeneratif hastalik, bir taupatidir.
Açiklamanin uygulamalarindan herhangi birinde, izole edilmis
antikor, SEQ ID NO:35'in bir VH'sinin bir antijen baglayici
alanini ve SEQ ID NO:36'nin bir VL'sinin bir antijen baglayici
alanini içeren PHF-tau'yu baglayan bir antikoru içerir.
Yukaridaki uygulamalarindan herhangi birinde, izole edilmis
antikor, SEQ ID NO:37'nin bir VH'sinin bir antijen baglayici
alanini ve SEQ ID NO:38'in bir VL'sinin bir antijen baglayici
alanini içeren PHF-tau'yu baglayan bir antikoru içerir.
Burada kullanildigi sekliyle bir “taupati”, beyinde tau'nun
patolojik agregasyonunu içeren herhangi bir nörodejeneratif
hastaligi kapsar. Ailesel ve sporadik AD'ye ek olarak diger örnek
taupatiler, kromozom l7'ye (FTDP-17) bagli parkinsonizm ile
frontotemporal demans, progresif supranükleer palsi,
kartikobazal dejenerasyon, Pick hastaligi, progresif subkortikal
gliozis, sadece yumakli demans, kalsifikasyonlu diffüz
nörofibriler yumaklar, argirofilik grain demans, amiyotrofik
lateral skleroz parkinsonizm demans kompleksi, Down sendromu,
Gerstmann-Straussler-Scheinker hastaligi, Hallervorden-Spatz
hastaligi, inklüzyon cisimcik miyoziti, Creutzfeld-Jakob
hastaligi, multipl sistem atropisi, Niemann-Pick hastaligi tip
C, prion protein serebral amiloid anjiyopati, subakut skleroz
panensefalit, miyotonik distropi, nörofibriler yumaklar ile
guanamian olmayan motor nöron hastaligi, postensefalitik
parkinsonizm ve kronik travmatik ensefalopati, örnegin
pugulistik demanstir (boks hastaligi). (Morris, ve dig. Neuron
Bir taupati ile ilgili davranissal fenotipi, bilissel
bozulmalari, erken evre kisilik degisimi ve disinhibisyon,
apati, abulya, mutizm, apraksi, perseverasyon, stereotipik
haraketler/davranislar, asiri orallik, daginiklik, ardisik
görevleri planlayamama veya organize etmeme,
bencillik/duyarsizlik, antisosyal karakter, empati eksikligi,
kekeleme, sik parafazik hatalarla birlikte göreli olarak
korunmus anlam ile birlikte gramatik olmayan konusma, bozulmus
anlam ve kelime bulma eksiklikleri, yavas bir sekilde ilerleyen
yürüme dengesizligi, retropülsiyonlar, donma, sik sik düsme,
levodapa olmayan duyarli eksensel katilik, supranükleer bakis
palsisi, kare dalgali siçramalar, yavas dikey segirmeler,
psödobulber palsi, uzuv apraksisi, distoni, kortikal duyu kaybi
ve tremoru içerir.
Tedaviye yatkin hastalar, AD veya baska taupati riskinde
semptomatik olmayan bireyleri ve ayni zamanda mevcut durumda
semptomlari gösteren hastalari içerir. Tedaviye yatkin hastalar,
ailede bir AD geçmisi veya genomda genetik risk faktörlerinin
varligi gibi bilinen bir AD genetik riskine sahip bireyleri
içerir. Örnek risk faktörleri, amiloid öncü proteininde (APP),
özellikle 717. pozisyonda ve 670 ve 671. pozisyonlardaki
mutasyonlardir (sirasiyla Hardy ve Swedish mutasyonlari). Diger
risk faktörleri, presenilin genlerindeki mutasyonlar, PSl ve PS2
ve ApoE4, ailede hiperkolesterolemi veya ateroskleroz
geçmisidir. AD'den halihazirda muzdarip durumdaki bireyler,
ayrica yukarida tarif edilen risk faktörlerinin varligi ile
karakteristik demanstan taninabilir. Ayrica AD'si olan
bireylerin saptanmasi için bir dizi tanisal test de mevcuttur.
Bu testler serebrospinal sivi tau ve Aß42 düzeylerinin
ölçülmesini içerir. Artmis tau ve azalmis Aß42 düzeyleri, AD'nin
varligini isaret eder. AD'den muzdarip bireyler ayrica AD and
Related Disorders Association kriterleri ile teshis edilebilir.
Uygulama/Farmasötik Bilesimler
Bulusun anti-PHF-tau antikorlari, patalojik tau agregasyonu,
örnegin AD veya diger taupatileri içeren nörodejeneratif
hastaliklarin tedavi edilmesi veya önlenmesi için hem terapötik
heni de profilaktik ajanlar olarak uygundur. Tedavi, semptom
göstermeyen hastalarda her yasta (Örnegin yaklasik 10, 15, 20,
, 30) baslatilabilir. Ancak bir hastanin, genellikle yaklasik
40, 50, 60 veya 70 yasina gelene kadar tedaviye baslamamasi
gerekmez. Tedavi tipik olarak bir zaman periyodu boyunca çoklu
dozajlarin verilmesini gerektirir. Tedavi, antikorun veya aktive
edilmis T hücresi veya B hücresinin zaman içinde terapötik ajana
verdigi yanitlarin analiz edilmesiyle izlenebilir. Yanitta düsüs
olursa, bir destek dozaji gerekir.
Profilaktik uygulamalarda bir AD'ye yatkin olan veya bu
hastaliklar bakimindan riskte olan bir hastaya, farmasötik
bilesimler veya ilaçlar, hastaligin biyokimyasal, histolojik
ve/veya davranissal semptomlari, komplikasyonlari ve hastaligin
gelisimi esnasinda görülen ara patolojik fenotipler de dahil
olmak üzere hastalik riskini elimine etme veya azaltmada,
hastaligin siddetini azaltmada. ya da hastaligin baslangicini
geciktirmede yeterli bir miktar veya siklikta verilir. Terapötik
uygulamalarda, bilesimler veya ilaçlar, bir hastaliga sahip
oldugundan süphelenilen veya halihazirda muzdarip olan bir
hastaya, hastaligin semptomlarinin (biyokimyasal, histolojik
ve/veya davranissal) herhangi birini azaltmak, durdurmak veya
ertelemek için yeterli bir Haktarda uygulanir. Bir terapötik
madde uygulamasi, karakteristik Alzheimer patolojisi
gelistirmemis hastalarda hafif bilissel bozulmayi azaltabilir ve
ortadan kaldirabilir. Terapötik veya profilaktik tedaviyi
gerçeklestirmek için yeterli bir miktar, terapötik veya
profilaktik olarak etkili bir doz olarak tanimlanir. Bilesimler
veya ilaçlar, hem profilaktik hem de terapötik rejimlerde
yeterli bir immün yanitina ulasilana kadar genellikle birkaç
dozaj olarak verilir.
Bulusun anti-PHF-tau antikorlari veya fragmanlari, ilgili
nörodejeneratif hastaliklarin tedavisi için etkili diger ajanlar
ile kombinasyon halinde uygulanabilir. AD söz konusu oldugunda
bulusun antikorlari, amiloid-beta (Aß) birikmesini azaltan veya
önleyen ajanlar ile kombinasyon halinde uygulanabilir. PHF-tau
ve Aß patolojilerinin sinerjistik olmasi mümkündür. Dolayisiyla,
ayni anda hem PHF-tau ve AB'nin hem Aß ile ilgili patolojilerin
klirensini hedefleyen kombinasyon terapisi, her birinin tek tek
hedeflenmesinden daha etkili olabilir.
Parkinson Hastaligi ve ilgili nörodejeneratif hastaliklar söz
konusu oldugunda, d-sinüklein proteinin agrega formlarini
temizlemek için immün modülasyonu da gelismekte olan bir
terapidir.
Hem tau hem. d-sinüklein. proteinlerinin klirensini ayni anda
hedefleyen bir kombinasyon terapisi, proteinlerden birinin
hedeflenmesi daha etkili olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, bir taupatinin semptomlarinin
tedavisinde veya iyilestirilmesinde antikorun “terapötik olarak
etkili miktari”, standart arastirma teknikleri ile
belirlenebilir. Örnegin antikorun dozaji, ajanin teknik alanda
iyi bilinen ilgili hayvan modellerine uygulanmasiyla
belirlenebilir.
Ayrica, optimum dozaj araliklarinin belirlenmesine yardimci
olmak için tercihe göre in vitro testler kullanilabilir. Belirli
bir etkin dozun seçimi, çesitli faktörlerin göz önüne alinmasina
dayanarak, teknikte uzman kisilerce (örnegin, klinik denemeler
yoluyla) belirlenebilir. Bu faktörler, tedavi edilecek, veya
önlenecek hastaliklari, ilgili semptomlari, hastanin Vücut
kütlesini, hastanin bagisiklik durumunu ve teknikte uzman
kisilerce bilinen diger faktörleri içerir. Formülasyonda
kullanilacak kesin doz, ayni zamanda, uygulama yoluna ve
hastaligin siddetine bagli olacaktir ve uygulayicinin karari ve
her bir hastanin durumuna göre kararlastirilmalidir. Etkin
dozlar, in vitro veya hayvan modeli test sistemlerinden
türetilen doz-yanit egrilerinden ekstrapole edilebilir.
Bulusun antikorlarinin terapötik kullanimina yönelik uygulama
sekli, ajani konaga ileten uygun herhangi bir yol olabilir. Bu
antikorlarin farmasötik bilesimleri, parenteral uygulama,
örnegin intradermal, intramüsküler, intraperitoneal,
intravenöz, subkütanöz, intranazal veya intrakraniyal uygulama
için yararlidir veya beyin veya omurgadaki serebrospinal
sivisina uygulanabilir.
Mevcut bulusun antikorlari, farmasötik olarak kabul edilebilir
bir tasiyici içinde aktif bilesen olarak antikorun etkili bir
miktarini içeren farmasötik bilesimler olarak hazirlanabilir.
adjuvan, eksipiyan veya araci ifade eder. Bu tür farmasötik
araçlar, yer fistigi yagi, soya fasulyesi yagi, madeni yag, susam
yagi ve benzerleri gibi petrol, hayvansal, bitkisel veya
sentetik kökenli olanlar dahil olmak üzere su ve yaglar gibi
sivilar olabilir. Örnegin %O,4 salin ve %0,3 glisin
kullanilabilir. Bu çözeltiler sterildir ve genellikle parçacikli
madde içermez. Konvansiyonel, iyi bilinen sterilizasyon
teknikleriyle (örnegin filtrasyon) sterilize edilebilirler.
Bilesimler, pH ayarlama ve tamponlama maddeleri, stabilize
edici, kalinlastirici, yaglayici ve renklendirici maddeler Vb.
gibi fizyolojik kosullara benzesim için gerekli olan farmasötik
olarak kabul edilebilir yardimci maddeleri içerebilir. Bu tür
farmasötik formülasyondaki mevcut bulusun antikorlarinin
konsantrasyonu genis ölçüde, yani, agirlikça yaklasik %O,5'ten
az, genellikle %1 veya en az yaklasik %1 ila %15 veya %20
arasinda degisebilir ve seçilen uygulama tarzina göre, gerekli
doz, sivi hacimleri, viskoziteler ve benzerlerine dayali olarak
seçilecektir.
Tedavi, tek dozlu bir programda. veya tedavinin bir primer
sürecinin 1-10 ayri doz ve ardindan yanitin muhafaza edilmesi
ve/veya güçlendirilmesi için gerekli müteakip zaman
intervallerinde, örnegin bir ikinci doz ve gerekli olmasi
halinde birkaç ay sonra bir müteakip doz/dozlar için 1-4 ayda
verilen diger dozlar ile gerçeklestirilebildigi bir çoklu doz
programi olarak verilebilir. Uygun tedavi programlarinin
örnekleri asagidakileri içerir: (i) 0, 1 ay ve 6 ay, (ii) 0, 7
ay ve 1 ay, (iii) O ve 1 ay, (iv) 0 ve 6 ay veya hastalik
semptomlarini azaltmasi veya hastaligin siddetini azaltmasi
beklenen istenen yanitlari ortaya çikmak için yeterli diger
programlar.
Bu nedenle, intramüsküler enjeksiyon için mevcut bulusun
farmasötik bir bilesimi, 1 ml steril tamponlu su ve yaklasik 1
ng ila yaklasik 100 mg arasinda, yaklasik 50 ng ila yaklasik 30
mg veya yaklasik 5 mg ila yaklasik 25 mg mevcut bulus antikorunu
içerecek sekilde hazirlanabilir. Benzer sekilde, intravenöz
infüzyon için mevcut bulusun bir farmasötik bilesimi, yaklasik
250 ml steril Ringer çözeltisi ve yaklasik 1 mg ila yaklasik 30
mg veya tercihen 5 mg ila yaklasik 25 mg'lik mevcut bulusun bir
antikorunu ihtiva edecek sekilde olusturulabilir. Parenteral
olarak uygulanabilen bilesimlerin hazirlanmasi için gerçek
yöntemler iyi bilinir ve örnegin "Remington's Pharmaceutical
Science", 15. baski, Mack Publishing Company, Easton, PA
yayininda daha detayli sekilde tarif edilmistir.
Bu bulusun antikorlari, depolama için liyofilize edilebilir ve
kullanimdan önce uygun bir tasiyicida rekonstitüe edilebilir. Bu
teknigin, antikor veya baska protein preparasyonlari ile etkili
oldugu gösterilmis ve teknikte bilinen liyofilizasyonun ve
rekonstitüsyon tekniklerinin kullanilabilecegi gösterilmistir.
Teshis yöntemleri ve kitleri
Bulusun antikorlari, bir denekte AD veya baska bir taupatinin
teshis edilmesine yönelik yöntemlerde kullanilabilir. Bu yöntem,
mevcut bulusun bir antikoru veya bir fragmani gibi bir teshis
ayiraci kullanilarak denekte PHF-tau varliginin saptanmasini
PHF-tau, biyolojik örnegin teshis antikor ayiraci ile temas
ettirilmesiyle ve teshis antikor ayiracinin denekten alinan
örnekte PHF-tau'nun baglanmasinin saptanmasiyla bir denekten
alinan bir biyolojik örnekte (örn. kan, idrar, serebral spinal
sivi) saptanabilir. Saptamanin gerçeklestirilmesine yönelik
testler, ELISA, immünohistokimya, western blot veya in vivo
görüntüleme gibi iyi bilinen yöntemleri içerir. Örnek teshis
antikorlari, PTl ve PT3 antikorlaridir ve IgGl,K tipindedir.
Teshis antikorlari veya benzer ayiraçlar, yukarida örnek olarak
gösterildigi gibi ajanin konaga verildigi uygun herhangi bir
yolla hastanin vücuduna veya dogrudan beyne intravenöz
enjeksiyonu yoluyla uygulanabilir. Antikorun dozajinin, tedavi
yöntemlerine yönelik olanlar ile ayni araliklarda olmasi
gerekir. Tipik olarak, antikor isaretlenir, ancak bazi
yöntemlerde, PHF-tau için afiniteye sahip olan primer antikor
isaretli degildir ve primer antikoru baglanmak için bir sekonder
isaretleme ajani kullanilir. Isaret seçimi, saptama araçlarina
baglidir. Örnegin optik saptama için bir flüoresans isareti
uygundur. Paramanyetik isaretlerin kullanimi, cerrahi müdahale
olmaksizin tomografik. saptama. için uygundur. Radyoaktif
isaretler, PET veya SPECT kullanilarak da saptanabilir.
Teshis, denekten alinan bir örnekte veya denekte isaretli PHF-
tau, tau agregatlari ve/veya nörofibriler` yumaklarin sayisi,
boyutu ve/veya yogunlugunun karsilik gelen referans degerleri
ile karsilastirilmasiyla. gerçeklestiriliru Referans degerler,
hasta olmayan bir popülasyondaki ortalama seviyeleri temsil
edilebilir. Referans degerler, ayni denekte belirlenen önceki
Yukarida tarif edilen teshis yöntemleri, tedaviden önce, tedavi
sirasinda veya tedavi sonrasinda bir denekte PHF-tau varliginin
saptanmasiyla bir denegin terapiye verdigi yanitinin izlenmesi
için da kullanilabilir. Referansa degere göre degerlerdeki
düsüs, tedaviye pozitif bir yanitin verildigini belirtir.
Patolojik tau beyinden temizlenirken, degerler ayrica, biyolojik
sivilarda geçici olarak artabilir.
Burada yukarida tarif edilen teshis ve izleme yöntemlerinin
gerçeklestirilmesine yönelik bir kit açiklanmistir. Tipik olarak
bu kitler, bir teshis ayiraci, Örnegin açiklamanin antikorlarini
ve istege bagli olarak bir saptanabilir isareti içerir. Teshis
antikorunun kendisi, dogrudan saptanabilir veya ikincil bir
tepkime (örn. streptavidin ile tepkime) vasitasiyla saptanabilen
saptanabilir isareti (örn. floresan molekülü, biyotin, vb.)
içerebilir. Alternatif olarak, saptanabilir isareti içeren bir
ikinci ayiraç kullanilabilir ve burada ikinci ayiraç, primer
antikora yönelik baglanma spesifikligine sahiptir. Bir biyolojik
örnekte PHF-tau'nun ölçülmesi için uygun bir teshis kitinde,
kitin antikorlari, bir kati faza, örnegin bir mikrotitre kabin
kuyucuklarina önceden baglanmis sekilde temin edilebilir.
Ikili sarmal filaman-tau'nun (PHF-tau) saflastirilmasi
PHF-tau,, Greenberg ve Davies'e ait modifiye edilmis yöntem
ile kismen saflastirilmistir. Kisacasi, histolojik olarak teyit
edilmis Alzheimer hastasindan elde edilen postmortem doku kismen
saflastirilmistir. Tipik olarak 5 mg frontal korteks, 1000
rpm'de bir cam/Teflon Potter doku homojenlestirici (IKA Works,
Tampon H (10 mM Tris, 800 mM NaCl, l mM EGTA ve %10 sukroz/ pH
7,4) içinde homojenlestirilmistir. Homojenlestirilmis malzeme,
edilmistir. Pellet atilmistir ve üst faz, %1 (w/V) N-
lauroilsarkosin ve %1 (v/v) 2-merkaptoetanol'lük bir nihai
konsantrasyona ayarlanmistir ve 37°C'de 2 saat süreyle inkübe
edilmistir. Ardindan üst faz, bir Beckman 6OTi rotor cihazinda
Pellet, PBS içinde dikkatli bir sekilde yikanmis ve PES içinde
süspanse edilmistir. Üst faz, tarif edildigi gibi bir ikinci
defa santrifüj edilmistir ve nihai pellet çözünmüs, alikotlanmis
ve -80°C'de dondurulmustur. PHF-tau preperasyonlarinin kalitesi,
anti-tau antikorlari AT8 ve HT7 (ThermoScientific, Rockford, IL)
ile bir %12 SBS-PAGE ve western blot üzerinde
degerlendirilmistir. AT8, 8202/T205'te fosforile edilmis PHF-
tau'yu saptar, ancak fosforile edilmemis PHF-tau'yu veya yabani
tip tau'yu baglamaz. HT7, Tau amino asitleri 159-163'te (SEQ ID
NO: 6) fosforile edilmemis bir epitopa baglanir ve hem tau hem
PHF-tau'yu tanir. Iyi kalitede bir PHF-tau preparasyonu, AT8
gibi asiri fosforile edilmis PHF-tau ile tepkimeye giren bir
antikor ile saptanan bir Western blot'ta yaklasik 60, 64, 66 ve
72 kDa'lik moleküler agirliga sahip 4 banttan olusur.
Karsilastirilabilir kalite ve safliga sahip ayri iki PHF-tau
preparasyonu, ayni beyin örneginden olusturulur. Preperasyon 1,
immünizasyon için kullanilmistir.
PHF-tau'ya karsi monoklonal antikorlarin olusturulmasi
Anti-PHF-tau antikorlari, normal Balb/c farelerinde standart
hibridom teknolojisi kullanilarak olusturulmustur (Kohler 've
kuyucuklu plakalarda ekilmistir ve asagida tarif edildigi gibi
25ng/kuyucuk kaplanmis PHF-tau üzerinde bir dogrudan ELISA'da 10
gün boyunca taranmistir. Pozitif hücreler, E. Coli BL21
hücrelerinde eksprese edilen ve sivi muamelesi ve amonyum sülfat
çökeltmesi ile saflastirilmis kontrol tau (SEQ ID No:6) ile
kaplanmis 10 ng/kuyucuk üzerinde çapraz tepkime bakimindan test
edilmistir ve hemen alt klonlanmistir ve pozitif klonlar, sivi
nitrojen içinde dondurulmustur. Tüm hibridomlar, %10 fetal
buzagi serumu (Hyclone, Avrupa), Hibridom Füzyonu Klonlama
Takviyesi (2%) (Roche, Brussels, Belçika) % HT (Sigma, ABD), 1
mM sodyum piruvat, 2 mM L-glutamin ve penisilin (100 U/ml) ve
Streptomisin (50 mg/ml) ile takviye edilmis Dulbecco'nun
Modified Eagle ortaminda büyütülmüstür.
Antikor degisken bölgeleri, fare IgGl/IgG2/ K arka planina
seçilmis hibridom hücrelerinden klonlanmistir ve rutin yöntemler
kullanilarak eksprese edilmis ve saflastirilmistir.
Antikor seçimi için dogrudan ELISA
ng/kuyucuk PHF-tau, 50 ul/kuyucuk kaplayici tamponda (10 mM
Tris, lO mM NaCl ve 10 mM NaN3, pH 8,5) NUNC Maxisorp (Life
Technologies) düz tabanli yüksek düzeyde baglayici 96 kuyucuklu
mikro titre plakalarinda 4°C'de gece boyunca kaplanmistir.
Ertesi gün plakalar, oda sicakliginda 60 dk boyunca PBS içinde
75 ul/kuyucuk %0,l kazein ile bloke edilmistir. Daha sonra 50 ul
hibridom üst fazi eklenmistir ve 37 °C'de 1 saat boyunca inkübe
edilmistir. Yikamadan sonra bagli monoklonal antikorlar, 37°C'de
1 saat. boyunca yabanturpu. peroksidaz ile konjüge edilmis 50
ul/kuyucuk Koyun anti-fare IgG ile saptanmistir (Amersham-
Pharmacia Biotech). Her iki ayiraç, %0,1 Kazein/PBS içinde
seyreltilmistir. Plakalar yikanmistir ve 100 mM sitrik asit ve
lOO mM disodyum hidrojen fosfat (pH 4,3) içinde 50 ul'lik bir
çözeltisi, substrat olarak eklenmistir. Tepkimenin, oda
sicakliginda bir plaka karistiricisinda en fazla 15 dakika
boyunca ilerlemesine izin verilmistir ve daha sonra renk
gelisimi, 2 N stoq, 50 ul/kuyucuk ile durdurulmustur ve
plakalar, 450 nm'de bir mikro titre plaka okuyucusunda
okunmustur (Thermomax, Molecular Devices).
Monoklonal antikorlarin spesifikligi
Hibridom taramasindan elde edilen seçilmis antikorlar,
rekombinant olarak eksprese edilmis kontrol tau (SEQ ID No:6)
ile çapraz tepkimeleri bakimindan test edilmistir. 500 ng PHF-
tau ve 200 ng kontrol tau, bir NuPAGE® Novex® Bis-Tris %4-12 jel
üzerine yüklenmistir ve üreticinin talimatlarina uygun olarak
bir iBlot sisteminin (Invitrogen) kullanilmasiyla bir
nitroselüloz membran üzerinde blotlanmistir. Membranlar, yagli
olmayan kuru süt (NFDM) (%5 w/v; Biorad) içeren Tris Tamponlu
8,5) ile 1 saat boyunca bloke edilmistir ve TBS-T içinde üç kez
yikanmistir. Primer kontrol antikorlari HT7, AT8, ATlOO ile
inkübasyon (1 ug/ml) (ThermoScientific, Rockford, IL) ve NFDM
içeren TBS-T içinde seyreltilmis BT2 (%5 w/V), 4°C'de gece
boyunca gerçeklestirilmistir. Hibridom taramasindan seçilen PTl,
PT2, PT3, PT4 ve PT5 nmnoklonal antikorlari, %10 FCS içeren
kültür üst fazina eklenmistir. Primer antikorlari, West Dura®
ile arttirilmis kemilüminesans (Pierce, Thermoscientific)
araciligiyla HRPO (TBS-T içinde 1:20000, Amersham Biosciences)
ile konjüge edilmis Koyun anti-fare Ig kullanilarak
saptanmistir. Sinyaller, Lumi görüntüleme sistemi (Roche
Diagnostic) araciligiyla yakalanmistir. PTl ve PT3, PHF-tau ile
tepkimeye girmis ve western blotlarda kontrol tau ile tepkimeye
girmez. PT2, her iki protein ile tepkimeye girebilir. HT7 ve
AT8'in baglanma profilleri, yukarida tarif edildigi gibidir.
ATlOO, fosforile Ser212/Thr214'e baglanir ve PHP-tau'ya
baglanir; ancak yabani tip tau'ya baglanmaz. BT2, Sl99/S202'yi
içeren fosforile edilmemis bir epitopu tanir ve dolayisiyla
yabani tip tau'yu tanir, ancak PHF-tau'yu tanimaz.
Rekabetçi epitop baglanmasi
Monoklonal antikorlar PTl, PT2, PT3, PT4, PT5, AT8
(ThermoScientific, Rockford, IL), ATlOO (ThermoScientific,
Rockford, IL) ve HT7 (MNlOOO) (Thermo Scientific, Rockford, IL),
PHP-tau'ya veya fosforile tau peptitlerine yönelik rekabetçi
baglanma bakimindan degerlendirilmistir. Antikorlar, üreticinin
talimatlarina uygun olarak MSD® SULFO-TAG NHS Ester (Meso Scale
Discovery) kullanilarak isaretlenmistir.
Isaretli PTl, PT3, ATiOO ve HT7 ile rekabet için, 5 üL (50
pg/mL)/kuyucuk zenginlestirilmis PHF-Tau proteinler (yukarida
tarif edildigi gibi saflastirilmis), oda sicakliginda (08) 2
saat boyunca MSD HighBind plakasi (Meso Scale Discovery,
Gaithersburg, MD) üzerinde kaplanmistir. AT8 ile rekabet için,
kontrol tau'da SZOZ/TZOS'e karsilik gelen kalintilarda fosforile
edilmis kontrol tau'nun
karsilik gelen 25 pL 0,1 mg/kuyucuk sentetik biyotinlenmis ve
pegile edilmis peptit RSGYSSPG(pS)PG(pT)PGSRSR-OH (New England
Peptide, LLC., Gardner, MA) (SEQ ID NO:39), Streptavidin ile
yüklenmis plakalar (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD)
üzerinde kaplanmistir. Kaplamadan sonra kuyucuklar, 2 saat
süreyle oda sicakliginda 150 uL %5 MSD Blocker A tamponu ile
bloke edilmistir ve 0,1 M HEPES tamponu, pH 7,4 ile üç kez
yikanmistir. 25 uL'lik bir tekli anti-tau antikoru karisimi (10
nM veya 50 nM) ve çesitli isaretlenmemis rekabetçi antikorlarin
seri seyreltmeleri (l nM ila 2 uM), her bir kuyucuga eklenmistir.
Plakalar, hafifçe çalkalanarak 2 saat boyunca inkübe edilmistir
ve yukarida belirtildigi gibi 3 kez yikanmistir. 150 pL/kuyucuk
seyreltilmis MSD Okuma Tamponu T eklenmistir ve plakalar, bir
SECTOR Imager 6000'de (Meso Scale Discovery, Gaithersburg, MD)
okunmustur.
Anti-Tau mAb'ler HT7, ATIOO ve AT8'in örtüsmeyen epitoplari,
yukarida tarif edilmistir. Yayinlanan verilere bagli olarak bu
antikorlar, Tau proteinlerine veya peptitlere baglanmasinda
birbirleriyle rekabet etmesi beklenmez.
Gerçeklestirilen rekabet testlerine bagli olarak antikorlarin
hiç biri, baglanma bakimindan birbiriyle rekabet etmistir ve bu,
bunlarin farkli epitoplara baglandigini gösterir. Her bir
deneyde yalnizca kendi kendine inhibisyon gözlenmistir. Sekil 1-
, sirasiyla isaretli AT8, PTl, PT3, ATlOO ve HT7 ile rekabet
testlerinin sonuçlarini gösterir.
Anti-PHP tau antikorlari, in vivoPHF-tau birikimini azaltir
salin, PT3 (500 pg/fare) veya AT8 (hibridom ECACC'den depozit
edilmistir, depozit numarasi 9110086) ile 5 ay boyunca haftada
bir tedavi edilmistir. Fareler anestezi edilmistir, soguk PBS
serpilmistir ve beyinler, buz üzerinde disekte edilmistir. Her
bir fare için, bir beyin yarim küresi, 10 hacim H tamponunda
homojenize edilmistir ve ardindan 4°C'de 20 dakika boyunca
21.000g'de santrifügasyon gerçeklestirilmistir. Ortaya çikan üst
faz, 60 dakika boyunca 100.000g'de daha fazla santrifüj
edilmistir. Santrifügasyondan sonra pellet (fraksiyon Pl)
2011 yayininda tarif edildigi gibi Western ve ELISA analizleri
için liziz tamponu ile yeniden süspanse edilmistir. Korteks
örnekleri için fraksiyon P1, %1 (w/V) N-lauroilsarkozin ile daha
fazla muamele edilmistir ve pellette PHF-tau'yu daha fazla
zenginlestirmek için ultrasantrifügasyona ugratilmistir. Erkek
P301L farelerinin, düsük transgen ekspresyonuna sahip oldugu
görülmüstür ve analizlere dahil edilmemistir.
Fosforile tau, yakalama antikorlari olarak AT8 ve ATlOO
antikorlarinin kullanildigi sandviç ELISA. ile beyinsapi
homojenatlarinda (fraksiyon Pl) ölçülmüstür ve temel olarak Chai
gibi bir western blot'ta biyotinlenmis HT7 ve avidin HRP (Sekil
6A ve 6B) ve ardindan ATlOO (Sekil 6C) ile bir saptama
gerçeklestirilmistir. Kisacasi Pl pelleti, liziz tamponu ile
yeniden süspanse edilmistir (Cell Signaling). P1 pelleti
örnekleri, AT8 veya ATlOO (Thermo Scientific) ile önceden
kaplanmis kuyucuklarda ve biyotin ile isaretlenmis HT-7
antikorunda inkübe edilmistir. Daha sonra örnekler, tampon ile
kez yikanmistir ve ardindan bir saat boyunca avidin-HRP ile
inkübasyon gerçeklestirilmistir. Bunun ardindan örnekler, tek
adimli TMB substrati (Thermo Scientific) ve ardindan 2N HzSO4 ile
dakika boyunca inkübe edilmistir. Son olarak tepkime, 450
nm'de okunmustur ve beyinde AT8 veya AT 100 ile tepkimeye giren
tau miktari, insan AD beyin homojenatlarindan türetilmis
standart bir egri kullanilarak. belirlenmistir ve transgenik
olmayan bir hayvandan (B6) alinan örneklerin bir ortalamasi ile
ayni ELISA sinyalini saglayan göreli bir miktarda AD beyin
homojenati (ng/ml) olarak grafige dökülmüstür.
Fosforile tau'da istatistiksel olarak önemli bir düsüs veya
böyle bir egilim, fosforilasyonun saptanmasi için ATlOO
kontrolün uygulandigi hayvanlara kiyasla PT3 ile tedavi edilmis
P30lL transgenik hayvanlarda görülmüstür.
ELISA ile elde edilen verilerin teyit edilmesi için IgGl veya
PT3 ile tedavi edilen hayvanlardan alinan beyinsapi
homojenatlari (fraksiyon Pl), ATlOO antikoru kullanilarak PHF-
tau'nun saptanmasiyla western blot'ta analiz edilmistir.
Filtreler, bir yükleme kontrolü olarak anti-aktin antikoru
kullanilarak blotlanmistir (Sekil 6B). Western blotlarinda, IgGl
ile tedavi edilmis hayvanlara kiyasla AT 100 antikoru ile
saptanan azalmis PHF-tau miktari görülmüstür.
Korteks analizi için sarkozil ile çözünebilir (çözünür tau'yu
temsil eder) ve sarkozil ile çözünemeyen (PHF-tau'yu temsil
eder) korteks fraksiyonlari, yakalama için bir pan-tau antikoru
(PT4) veya fosfo-tau antikorunun (AT8) ve daha sonra bir biyotin-
pan-tau antikoru (hTaulO) ve ardindan HRP-avidin'in kullanildigi
sandviç ELISA ile analiz edilmistir. PT3 ile tedavi edilen
hayvanlarda, izotip kontrolü IgGl ile tedavi edilen hayvanlara
kiyasla benzer seviyelerde toplam tau görülmüstür. Düsük PHF-
tau seviyelerine dogru bir egilim, N-lauroilsarkozin ile
çözünemeyen fraksiyonlarda izotip kontrolüne kiyasla PT3 ile
tedavi edilen hayvanlarda oldukça açiktir (ELISA, PT4 ile
Anti-PHF-tau antikorlarinin karakterizasyonu
Afinite tayini
Monoklonal antikorlar PTl ve PT3'ün rekombinant insan
çözülebilir tau veya PHF-tau ile etkilesimleri, ProteOn ile
incelenmistir. Tüm etkilesimler, 3 mM EDTA ile takviye edilmis
PBS pH 7,4 ve yürütme veya sistem tamponu olarak %0,005 Tween-
kullanilarak 25°C'de incelenmistir. Biri rekombinant olarak
eksprese edilmis kontrol tau için, digeri ise PHF-tau ile
etkilesim. için olmak üzere iki farkli deney formati
kullanilmistir. Bu deneylerde, bir fare anti-tau antikoru olan
HT7 (Pierce, cat #MN1000), bir pozitif kontrol olarak
kullanilmistir.
Rekombinant olarak eksprese edilmis kontrol tau ile etkilesimin
incelenmesi için, üreticinin amine kenetleme kimyasina (~5000
yanit birimi (RU)) yönelik talimatlarina uygun olarak bir anti-
insan veya anti-fare IgG Fcy fragmani spesifik antikorun (Ab)
bir GLC (ProteOn) sensör çipinin yüzeyine kenetlenmesiyle bir
biyosensör yüzey hazirlanmistir. Kenetleme tamponu, 10 mM sodyum
asetat, pH 4,5 seklindeydi. Anti-PHF-tau antikorlari, yürütme
tamponunda seyreltilmis ve 60-130 RU'luk bir yakalama elde etmek
üzere enjekte edilmistir. Anti-PHF-Tau mAb'lerin yakalanmasinin
ardindan çözelti (5 kat seyreltmelerde 0,1 ila 75 nM) içinde
rekombinant olarak eksprese edilmis kontrol tau (Tau-441, Sigma
catalog# T0576-50ug) enjeksiyonu gerçeklestirilmistir.
Birlesme, 2 dakika boyunca izlenmistir` (40 uL/dk'da enjekte
edilmis 80 uL) Ayrisma, 10 dakika boyunca izlenmistir. Sensör
yüzeyinin rejenerasyonu, %0,85 H3PO4 veya %O,85 H3PO4 ve ardindan
50 mM NaOH ile elde edilmistir. Veriler, bir 121 baglanma modeli
kullanilarak uydurulmustur. Veriler, bir lzl baglanma nwdeli
kullanilarak uydurulmustur.
mAb Antijen kon (M`1S_1) koff (S`1) *KD (pM)
PTl Kontrol Tau **
PT3 Kontrol Tau ***
06 E-OS
PHF-tau için bu, bariz instrinsik afinitedir; burada KD degeri,
bir bivalent baglanma modeli kullanilarak bir uyumdan türetilmis
kffl/kon-l orani olarak elde edilmistir.
** Anlamli düzeyde baglanma yok ***5 deneyden 4'ünde baglanma
PHF-ta ile etkilesimin incelenmesi için bir biyosensör yüzeyi,
yakalama ayiraci olarak HT7'nin kullanilmasiyla PHF-tau'nun
yakalanip kenetlenmesiyle hazirlanmistir. Daha önce tarif
edildigi gibi PHF-tau'nun ilave preparasyonu, sivimsilara giren
çözünemeyen malzeme miktarini sinirlamak için ProteOn
gereklidir. Yukarida tarif edildigi gibi PHF-taü, 5000g, 5°C, 10
dk'da 2 kez santrifügasyon yoluyla hazirlanmistir ve ikinci
santrifügasyondan elde edilen üst faz, yürütme tamponunda 1/20
veya 1/40 oraninda seyreltilmistir. Çipin hazirlanmasi için HT7,
üreticinin amin kenetleme kimyasina (~3000 yanit birimi (RU))
yönelik talimatlarina uygun. olarak. bir GLC (ProteOn) sensör
çipinin yüzeyine kovalent olarak immobilize edilmistir.
Kenetleme tamponu, lO mM sodyum asetat, pH 4,5 seklindeydi. HT7
immobilizasyonundan sonra PHF-tau enjekte edilmistir ve HT7 ile
yakalanmistir (~. Yakalamadan sonra PHF-tau, üreticinin
amin kenetleme kimyasina yönelik talimatlari kullanilarak çipin
aktivasyonu ile sensör çipine kovalent olarak immobilize
edilmistir. Kalan reaktif alanlar, son olarak etanolamin
enjeksiyonu yoluyla bloke edilmistir. PHF-tau ile modifiye
edilmis yüzeyin ve referans yüzeyin (antijen içermez)
preparasyonu ve stabilizasyonundan sonra, anti-PHF-tau
antikorlari, yürütme tamponunda seyreltilmis ve çözelti (5 kat
seyreltme içinde 0, içinde enjekte edilmistir. Birlesme,
3 dakika boyunca izlenmistir (40 uL/dk'da enjekte edilmis Ayrisma, 10 veya 15 dakika boyunca izlenmistir. Sensör
yüzeyinin rejenerasyonu, lO mM Gly pH 2 ile elde edilmistir.
Veriler, bir bivalent baglanma modeli kullanilarak uydurulmustur
ve burada bariz intrinsik afinite, koff-l/kon-l orani olarak
bildirilmistir.
ProteOn deneylerine dayanarak PTl, 322 pM afinite ile PHF-tau'yu
baglamistir ve test edilen kosullar altinda kontrol tau'ya
baglanma göstermemistir (Tablo 2). PT3, 18 ±2 pM afiniteyle
PHF-tau'yu baglanmistir ve test edilen kosullar altinda 5
ölçümden 4'ünde kontrol tau'ya baglanma göstermemistir. 5
ProteOn ölçümünden birinde, kullanilan en yüksek kontrol tau
konsantrasyonu baz alinarak 75 nM'den yüksek afiniteyi tahmin
etmek için kullanilabilen zayif bir baglanma görülmüstür.
Claims (12)
1. SEQ ID NO: 37'nin bir VH'sini ve SEQ ID NO:38'in bir VL'sini içeren PHF-tau'yu baglayan bir izole edilmis antikor veya insanlastirilmis bir versiyonu olup, özelligi; söz konusu insanlastirilmis versiyonun, ProteOn ile belirlendigi üzere 10'10 M'den düsük veya 10'10 M'ye esit bir ayrisma sabiti (KD) ile PHF-tau'ya yönelik afiniteye sahip olmasidir.
2. Istem l'e göre izole edilmis antikoru olup, özelligi; antikorun, IgG izotipinde olmasi ve istege bagli olarak antikorun, (a) IgGl izotipi, (b) IgG2 izotipi, (c) IgG3 izotipi veya
3. Istem 1 veya istem Z'ye göre izole edilmis antikor olup, özelligi; antikorun, bir antikor fragmani, örnegin bir Fab, Fab', F(ab')2 veya FV fragmani olmasidir.
4. Istem l-3'ten herhangi birine göre izole edilmis antikor olup, Özelligi; antikorun insanlastirilmis olmasidir.
5. Izole edilmis bir polinükleotit olup, özelligi; istem l-4'ten herhangi birine göre izole edilmis antikoru kodlamasidir.
6. Bir vektör olup, özelligi; istem 5'e göre olan bir polinükleotiti içermesidir.
7. Bir konakçi hücre olup, özelligi; istem 6'ya göre vektörü içermesidir.
8. PHF-tau'yu baglayan bir antikorun yapilmasina yönelik bir yöntem olup, özelligi; Istem 7'ye göre konak hücresinin kültürlenmesini ve konak hücre ile üretilen antikorun geri kazanilmasini içermesidir.
9. Farmasötik bir bilesim olup, özelligi; istem l-4'ten herhangi birine göre antikor ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici içermesidir.
10. Istem 1-4'ten herhangi birine göre izole edilmis antikor olup, özelligi; terapide kullanilmaya yönelik olmasidir.
11. Istem 1-4'ten herhangi birine göre izole edilmis antikor olup, özelligi; beyinde patolojik agregasyon içeren bir nörodejeneratif hastaligin tedavi edilmesi, önlemesi veya semptomlarinin azaltilmasinda kullanilmaya yönelik olmasidir.
12. Istem 11'e göre kullanima yönelik izole edilmis antikor olup, özelligi; nörodejeneratif hastaligin,
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201161577817P | 2011-12-20 | 2011-12-20 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| TR201910720T4 true TR201910720T4 (tr) | 2019-08-21 |
Family
ID=48669693
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| TR2019/10720T TR201910720T4 (tr) | 2011-12-20 | 2012-12-19 | Anti-phf-tau antikorları ve bunların kullanımları. |
Country Status (34)
| Country | Link |
|---|---|
| US (4) | US9371376B2 (tr) |
| EP (2) | EP2794654B1 (tr) |
| JP (4) | JP6306513B2 (tr) |
| KR (1) | KR101991681B1 (tr) |
| CN (2) | CN107226863B (tr) |
| AU (2) | AU2012359039B2 (tr) |
| BR (1) | BR112014015323B1 (tr) |
| CA (2) | CA2859665C (tr) |
| CO (1) | CO6980627A2 (tr) |
| CY (1) | CY1121862T1 (tr) |
| DK (1) | DK2794654T3 (tr) |
| EA (1) | EA027975B1 (tr) |
| EC (1) | ECSP14005975A (tr) |
| ES (1) | ES2738007T3 (tr) |
| GT (1) | GT201400127A (tr) |
| HK (2) | HK1203520A1 (tr) |
| HR (1) | HRP20191342T1 (tr) |
| HU (1) | HUE045656T2 (tr) |
| IL (3) | IL233051B (tr) |
| LT (1) | LT2794654T (tr) |
| MX (1) | MX350311B (tr) |
| MY (2) | MY186066A (tr) |
| NI (1) | NI201400061A (tr) |
| NZ (1) | NZ626269A (tr) |
| PH (1) | PH12014501427B1 (tr) |
| PL (1) | PL2794654T3 (tr) |
| PT (1) | PT2794654T (tr) |
| RS (1) | RS59024B1 (tr) |
| SG (1) | SG11201403106SA (tr) |
| SI (1) | SI2794654T1 (tr) |
| TR (1) | TR201910720T4 (tr) |
| UA (1) | UA114902C2 (tr) |
| WO (1) | WO2013096380A2 (tr) |
| ZA (1) | ZA201405317B (tr) |
Families Citing this family (32)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ626269A (en) * | 2011-12-20 | 2016-06-24 | Janssen Biotech Inc | Anti-phf-tau antibodies and their uses |
| KR102494798B1 (ko) | 2012-07-03 | 2023-02-06 | 워싱턴 유니버시티 | Tau에 대한 항체 |
| WO2014028777A2 (en) | 2012-08-16 | 2014-02-20 | Ipierian, Inc. | Methods of treating a tauopathy |
| US8980270B2 (en) | 2013-01-18 | 2015-03-17 | Ipierian, Inc. | Methods of treating a tauopathy |
| CN105939722A (zh) | 2014-02-14 | 2016-09-14 | 伊皮埃里安股份有限公司 | Tau肽，抗Tau抗体，及其使用方法 |
| JP2017521063A (ja) * | 2014-06-26 | 2017-08-03 | ヤンセン ファッシンズ アンド プリベンション ベーフェーＪａｎｓｓｅｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ＆ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ Ｂ．Ｖ． | 微小管結合タンパク質タウに特異的に結合する抗体及び抗原結合断片 |
| ZA201608812B (en) * | 2014-06-26 | 2019-08-28 | Janssen Vaccines & Prevention Bv | Antibodies and antigen-binding fragments that specifically bind to microtubule-associated protein tau |
| TWI664190B (zh) | 2014-06-27 | 2019-07-01 | 美商Ｃ２Ｎ醫療診斷有限責任公司 | 人類化抗－ｔａｕ抗體 |
| WO2016112078A2 (en) * | 2015-01-08 | 2016-07-14 | Janssen Biotech, Inc. | Anti-phf-tau antibodies and their uses |
| AR103713A1 (es) | 2015-02-26 | 2017-05-31 | Lilly Co Eli | Anticuerpos contra tau y sus usos |
| TWI827405B (zh) | 2015-06-05 | 2023-12-21 | 美商建南德克公司 | 抗-ｔａｕ抗體及使用方法 |
| CA2991451A1 (en) * | 2015-07-06 | 2017-01-12 | Ucb Biopharma Sprl | Tau-binding antibodies |
| CN107849105B (zh) | 2015-07-06 | 2021-09-17 | Ucb生物制药有限责任公司 | Tau结合抗体 |
| EP3448875A4 (en) * | 2016-04-29 | 2020-04-08 | Voyager Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS FOR TREATING A DISEASE |
| JP6949102B2 (ja) | 2016-08-09 | 2021-10-13 | イーライ リリー アンド カンパニー | 併用療法 |
| JP7193457B2 (ja) | 2016-12-07 | 2022-12-20 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 抗ｔａｕ抗体及び使用方法 |
| CA3045294A1 (en) | 2016-12-07 | 2018-06-14 | Genentech, Inc. | Anti-tau antibodies and methods of use |
| MA47499A (fr) | 2017-02-17 | 2019-12-25 | Denali Therapeutics Inc | Anticorps anti-tau et leurs procédés d'utilisation |
| JOP20180014A1 (ar) | 2017-02-27 | 2019-01-30 | Teijin Pharma Ltd | جسم مضاد متوافق مع البشر لعلاج أو الوقاية من الاضطرابات الإدراكية، وعملية لإنتاجه، وعامل لعلاج أو الوقاية من الاضطرابات الإدراكية باستخدامه |
| JOP20180021A1 (ar) * | 2017-03-16 | 2019-01-30 | Janssen Biotech Inc | الأجسام المضادة لتكتلات خيوط بروتين تاو (tau) الحلزونية المزدوجة واستخداماتها |
| JOP20200074A1 (ar) | 2017-10-16 | 2020-04-30 | Eisai R&D Man Co Ltd | أجسام مضادة ضد tau واستخداماتها |
| BR112020018193A2 (pt) * | 2018-03-05 | 2021-02-02 | Janssen Pharmaceutica Nv | ensaios para detectar neurodegeneração |
| SG11202008579UA (en) * | 2018-03-05 | 2020-10-29 | Janssen Pharmaceutica Nv | Anti-phf-tau antibodies and uses thereof |
| CA3095443A1 (en) * | 2018-03-28 | 2019-10-03 | Axon Neuroscience Se | Antibody-based methods of detecting and treating alzheimer's disease |
| JP2021530552A (ja) | 2018-07-31 | 2021-11-11 | イーライ リリー アンド カンパニー | 併用療法 |
| KR20230020394A (ko) | 2020-04-15 | 2023-02-10 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | Tau 결합 화합물 |
| US20230265175A1 (en) | 2020-06-25 | 2023-08-24 | Merck Sharp & Dohme Llc | High affinity antibodies targeting tau phosphorylated at serine 413 |
| CN117043183A (zh) | 2020-12-16 | 2023-11-10 | 沃雅戈治疗公司 | Tau结合化合物 |
| BR112023019546A2 (pt) | 2021-03-26 | 2023-10-31 | Janssen Biotech Inc | Anticorpos anti-tau e usos dos mesmos |
| KR20230162793A (ko) * | 2021-03-26 | 2023-11-28 | 얀센 바이오테크 인코포레이티드 | 쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도 |
| WO2023250388A1 (en) | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Voyager Therapeutics, Inc. | Tau binding compounds |
| WO2024059739A1 (en) | 2022-09-15 | 2024-03-21 | Voyager Therapeutics, Inc. | Tau binding compounds |
Family Cites Families (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
| US5225539A (en) | 1986-03-27 | 1993-07-06 | Medical Research Council | Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies |
| GB9015198D0 (en) | 1990-07-10 | 1990-08-29 | Brien Caroline J O | Binding substance |
| ATE154642T1 (de) * | 1991-10-25 | 1997-07-15 | Innogenetics Nv | Monoklonale antikörper gegen das mikrotubulusassoziierte protein tau. |
| CA2178212C (en) | 1993-12-21 | 2011-06-14 | Marc Vandermeeren | Monoclonal antibodies specific for phf-tau, hybridomas secreting them, antigen recognition by these antibodies and their applications |
| EP0772634B1 (en) * | 1994-07-29 | 2003-03-12 | Innogenetics N.V. | Monoclonal antibodies specific for an epitope of a particular subclass or form of phosphorylated tau, hybridomas secreting them, antigen recognition of these antibodies and their applications |
| MXPA05000511A (es) | 2001-07-12 | 2005-09-30 | Jefferson Foote | Anticuepros super humanizados. |
| EP2221315A1 (en) | 2003-12-04 | 2010-08-25 | Xencor, Inc. | Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof |
| US20070048785A1 (en) * | 2004-06-09 | 2007-03-01 | Lin Laura L | Anti-IL-13 antibodies and complexes |
| EP1790664A1 (en) * | 2005-11-24 | 2007-05-30 | Ganymed Pharmaceuticals AG | Monoclonal antibodies against claudin-18 for treatment of cancer |
| US20070280935A1 (en) * | 2006-04-07 | 2007-12-06 | Bernd Bohrmann | Antibody that recognizes phosphorylated peptides |
| WO2008019326A2 (en) | 2006-08-04 | 2008-02-14 | Novartis Ag | Ephb3-specific antibody and uses thereof |
| JP2010235447A (ja) | 2007-07-30 | 2010-10-21 | Igaku Seibutsugaku Kenkyusho:Kk | 炎症性サイトカインの抑制剤 |
| EP2347038A4 (en) | 2008-10-14 | 2013-06-12 | Janssen Biotech Inc | METHOD FOR HUMANIZATION AND AFFINITY TREATMENT OF ANTIBODIES |
| US9968574B2 (en) | 2009-05-15 | 2018-05-15 | The University Of Kentucky Research Foundation | Treatment of MCI and Alzheimer's disease |
| US8609097B2 (en) * | 2009-06-10 | 2013-12-17 | Hoffmann-La Roche Inc. | Use of an anti-Tau pS422 antibody for the treatment of brain diseases |
| EP2440234A4 (en) * | 2009-06-10 | 2013-11-06 | Univ New York | IMMUNOLOGICAL TARGETING OF PATHOLOGICAL TAU PROTEINS |
| US8912355B2 (en) | 2009-09-29 | 2014-12-16 | University Of Ottawa Heart Institute | Linoleic phospholipids and uses thereof for inhibiting inflammatory and neurodegenerative processes |
| US8580714B2 (en) | 2009-10-14 | 2013-11-12 | Janssen Biotech, Inc. | Methods of affinity maturing antibodies |
| JP6371526B2 (ja) | 2010-10-07 | 2018-08-08 | エーシー イミューン エス．エー． | タウを認識するリン酸化部位特異的抗体 |
| NZ609984A (en) * | 2010-10-11 | 2015-05-29 | Biogen Idec Internat Neuroscience Gmbh | Human anti-tau antibodies |
| NZ626269A (en) * | 2011-12-20 | 2016-06-24 | Janssen Biotech Inc | Anti-phf-tau antibodies and their uses |
-
2012
- 2012-12-19 NZ NZ626269A patent/NZ626269A/en unknown
- 2012-12-19 KR KR1020147019911A patent/KR101991681B1/ko active IP Right Grant
- 2012-12-19 RS RS20190932A patent/RS59024B1/sr unknown
- 2012-12-19 MY MYPI2017000364A patent/MY186066A/en unknown
- 2012-12-19 EP EP12859920.6A patent/EP2794654B1/en active Active
- 2012-12-19 CN CN201710472573.8A patent/CN107226863B/zh active Active
- 2012-12-19 BR BR112014015323-0A patent/BR112014015323B1/pt active IP Right Grant
- 2012-12-19 PL PL12859920T patent/PL2794654T3/pl unknown
- 2012-12-19 MX MX2014007476A patent/MX350311B/es active IP Right Grant
- 2012-12-19 CA CA2859665A patent/CA2859665C/en active Active
- 2012-12-19 CN CN201280062971.8A patent/CN104024274B/zh active Active
- 2012-12-19 SG SG11201403106SA patent/SG11201403106SA/en unknown
- 2012-12-19 HU HUE12859920A patent/HUE045656T2/hu unknown
- 2012-12-19 CA CA3234629A patent/CA3234629A1/en active Pending
- 2012-12-19 TR TR2019/10720T patent/TR201910720T4/tr unknown
- 2012-12-19 WO PCT/US2012/070486 patent/WO2013096380A2/en active Application Filing
- 2012-12-19 UA UAA201408042A patent/UA114902C2/uk unknown
- 2012-12-19 PT PT12859920T patent/PT2794654T/pt unknown
- 2012-12-19 US US14/363,888 patent/US9371376B2/en active Active
- 2012-12-19 LT LT12859920T patent/LT2794654T/lt unknown
- 2012-12-19 AU AU2012359039A patent/AU2012359039B2/en active Active
- 2012-12-19 DK DK12859920.6T patent/DK2794654T3/da active
- 2012-12-19 SI SI201231610T patent/SI2794654T1/sl unknown
- 2012-12-19 MY MYPI2014701643A patent/MY178142A/en unknown
- 2012-12-19 JP JP2014548811A patent/JP6306513B2/ja active Active
- 2012-12-19 ES ES12859920T patent/ES2738007T3/es active Active
- 2012-12-19 EA EA201491224A patent/EA027975B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2012-12-19 EP EP19173615.6A patent/EP3578567A1/en active Pending
-
2014
- 2014-06-10 IL IL233051A patent/IL233051B/en active IP Right Grant
- 2014-06-19 NI NI201400061A patent/NI201400061A/es unknown
- 2014-06-20 EC ECIEPI20145975A patent/ECSP14005975A/es unknown
- 2014-06-20 GT GT201400127A patent/GT201400127A/es unknown
- 2014-06-20 CO CO14134449A patent/CO6980627A2/es unknown
- 2014-06-20 PH PH12014501427A patent/PH12014501427B1/en unknown
- 2014-07-18 ZA ZA2014/05317A patent/ZA201405317B/en unknown
-
2015
- 2015-04-24 HK HK15103967.6A patent/HK1203520A1/xx unknown
-
2016
- 2016-04-26 US US15/138,635 patent/US9745371B2/en active Active
-
2017
- 2017-07-11 US US15/646,865 patent/US10000559B2/en active Active
- 2017-11-20 AU AU2017264975A patent/AU2017264975B2/en active Active
- 2017-12-21 JP JP2017245019A patent/JP6695317B2/ja active Active
-
2018
- 2018-03-07 HK HK18103213.5A patent/HK1244490A1/zh unknown
- 2018-05-21 US US15/984,772 patent/US10196440B2/en active Active
- 2018-11-14 IL IL263021A patent/IL263021B/en active IP Right Grant
-
2019
- 2019-06-10 JP JP2019108147A patent/JP6987809B2/ja active Active
- 2019-07-25 HR HRP20191342 patent/HRP20191342T1/hr unknown
- 2019-08-06 CY CY20191100834T patent/CY1121862T1/el unknown
-
2020
- 2020-02-10 JP JP2020020482A patent/JP6987904B2/ja active Active
-
2021
- 2021-03-03 IL IL281250A patent/IL281250A/en unknown
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US10196440B2 (en) | Anti-PHG-tau antibodies and their uses | |
| US10301379B2 (en) | Antibodies and antigen-binding fragments that specifically bind to microtubule-associated protein tau | |
| US11472869B2 (en) | Antibodies and antigen-binding fragments that specifically bind to microtubule-associated protein tau | |
| NZ720141B2 (en) | Anti-phf-tau antibodies and their uses | |
| BR122021014868B1 (pt) | Anticorpos anti-phf-tau, polinucleotídeo isolado que codifica uma vh ou vl de anticorpo, vetor e método de produção de um anticorpo |