KR20230162793A - 쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도 - Google Patents

쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20230162793A
KR20230162793A KR1020237035586A KR20237035586A KR20230162793A KR 20230162793 A KR20230162793 A KR 20230162793A KR 1020237035586 A KR1020237035586 A KR 1020237035586A KR 20237035586 A KR20237035586 A KR 20237035586A KR 20230162793 A KR20230162793 A KR 20230162793A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
seq
antigen
amino acid
antibody
binding fragment
Prior art date
Application number
KR1020237035586A
Other languages
English (en)
Inventor
루페쉬 난준다
파르타 초우두리
펀 샤
Original Assignee
얀센 바이오테크 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 얀센 바이오테크 인코포레이티드 filed Critical 얀센 바이오테크 인코포레이티드
Publication of KR20230162793A publication Critical patent/KR20230162793A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2896—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against molecules with a "CD"-designation, not provided for elsewhere
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6893—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids related to diseases not provided for elsewhere
    • G01N33/6896—Neurological disorders, e.g. Alzheimer's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Abstract

인간화 항-PHF-타우 항체 및 이의 항원-결합 단편이 기재된다. 또한, 항체, 항체의 접합체, 및 융합 작제물을 인코딩하는 핵산, 항체를 포함하는 조성물, 항체를 생성하는 방법, 및 타우병증과 같은 병태를 치료 또는 예방하기 위해 항체를 사용하는 방법이 기재된다.

Description

쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도
본 출원은 인간화 항-PHF-타우 항체, 항체 접합체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 항체의 제조 방법, 상기 항체를 사용하여 타우병증(tauopathy)을 포함한 병태를 치료하는 방법, 및 상기 항체를 사용하여 타우병증과 같은 질환을 진단하는 방법이 또한 제공된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "065768.98US2 Sequence Listing"이고, 생성일이 2022년 3월 8일이며, 크기가 125 kb인 ASCII 포맷 서열 목록으로서 EFS-웹을 통해 전자적으로 제출된 서열 목록을 포함한다. EFS-웹을 통해 제출된 서열 목록은 본 명세서의 일부이며, 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
임상적으로 알츠하이머병(Alzheimer's Disease, AD)은 기억, 인지, 사고, 판단, 및 감정적 안정성의 점진적인 상실로 인하여 점진적으로 극심한 정신 황폐(mental deterioration) 및 궁극적으로 사망에까지 이르게 하는 것을 특징으로 하는 퇴행성 뇌 장애이다. AD는 노인의 진행성 정신 부전(치매)의 매우 보편적인 원인이며, 미국에서는 네 번째로 가장 보편적인 의학적 사망 원인을 나타내는 것으로 여겨진다. AD는 전세계적의 인종 집단에서 관찰되었고, 현재 및 미래의 공중 보건상의 주요 문제를 나타낸다.
AD를 가진 개체의 뇌에는 노인성(또는 아밀로이드) 플라크, 아밀로이드 혈관병증(혈관 내 아밀로이드 침착) 및 신경섬유 매듭(neurofibrillary tangle)으로 명명되는 특징적인 병변이 나타난다. 다수의 이들 병변, 특히 쌍 나선형 필라멘트의 신경섬유 매듭 및 아밀로이드 플라크가 일반적으로 AD를 가진 환자의 기억 및 인지 기능에 중요한 인간 뇌의 여러 영역에서 발견된다.
현재의 AD 치료 상황은 치매를 가진 환자에서 인지 증상을 치료하는 데 승인된 요법만을 포함한다. AD를 변형시키거나 그의 진행을 지연시키는 승인된 요법은 없다. 잠재적인 질환 변형제는 Aβ의 피로글루타메이트 형태인 Aβ(p3-42)를 인식하는 인간화 IgG1 단일클론 항체인 Eli Lilly의 도나네맙 및 Aβ 상에서 발견되는 입체배좌 에피토프에 대한 인간 IgG1 단일클론 항체인 아두카누맙을 포함하는 항-아밀로이드 항체이다. 이들 요법, 및 다음 10 년 내에 출시될 수 있는 대부분의 다른 잠재적인 질환 변형제는 Aβ(AD의 2가지 "홀마크" 병리학적 징후 중 하나인 아밀로이드 플라크의 주요 성분)를 표적화한다.
AD의 두 번째 특징적인 병리학적 징후인 신경섬유 매듭은 주로 과인산화된 타우 단백질의 응집체로 구성된다. 타우의 주요 생리학적 기능은 미세소관 중합 및 안정화이다. 미세소관에 대한 타우의 결합은 타우의 미세소관 결합 영역 내의 양전하와 미세소관 격자 상의 음전하 사이의 이온 상호작용에 의해 일어난다(문헌[Butner and Kirschner, J Cell Biol. 115(3):717-30, 1991]). 타우 단백질은 85개의 가능한 인산화 부위를 함유하며, 이들 부위 중 다수에서의 인산화는 타우의 주요 기능을 방해한다. 축삭 미세소관 격자에 결합된 타우는 저인산화 상태인 반면, AD에서 응집된 타우는 과인산화되어 생리학적으로 활성인 타우 풀(pool)과 구별되는 특유의 에피토프를 제공한다.
타우병증 전파 및 확산 가설이 기재되어 있으며, 이는 인간 뇌에서의 타우병증 진행의 브라크 병기(Braak stage) 및 전임상 타우 모델에서의 타우 응집체 주사 후의 타우병증 확산에 기초한다(문헌[Frost et al., J Biol Chem. 284:12845-52, 2009]; 문헌[Clavaguera et al., Nat Cell Biol. 11:909-13, 2009]).
타우 응집을 예방하거나 제거하는 치료제의 개발은 다년간 관심의 대상이었으며, 항응집 화합물 및 키나제 억제제를 포함하는 후보 약물이 임상 시험에 진입하였다(문헌[Brunden et al., Nat Rev Drug Discov. 8:783-93, 2009]). 유전자이식 마우스 모델에서 능동 및 수동 타우 면역 둘 모두의 유익한 치료 효과를 나타내는 여러 연구가 공개되었다(문헌[Chai et al., J Biol Chem. 286:34457-67, 2011]; 문헌[Boutajangout et al., J Neurochem. 118:658-67, 2011]; 문헌[Boutajangout et al., J Neurosci. 30:16559-66, 2010]; 문헌[Asuni et al., J Neurosci. 27:9115-29, 2007]). 포스포-지향 및 비-포스포-지향 항체 둘 모두에 의한 활성이 보고되어 있다(문헌[Schroeder et al., J Neuroimmune Pharmacol. 11(1):9-25, 2016]).
이러한 진전에도 불구하고, AD와 같은 타우병증, 및 다른 신경퇴행성 질환을 치료하기 위해 타우 응집 및 타우병증 진행을 예방하는 효과적인 치료제에 대한 필요성이 남아 있다.
본 출원은 쌍 나선형 필라멘트(PHF)-타우에 대해 높은 결합 친화도를 가지며 인산화된 타우에 대해 선택적인 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제공함으로써 이러한 필요성을 충족시킨다. 본 출원의 인간화 항체는 마우스 PHF-타우-특이적 항체의 인간 프레임워크 적응화(HFA)에 의해 생성되었다. 인산화된 타우에 대한 항체의 선택성은 정상적인 타우 기능을 방해하지 않으면서 병원성 타우에 대한 효능을 가능하게 하는 것으로 여겨진다. 본 출원은 또한 항체를 인코딩하는 핵산, 항체를 포함하는 조성물, 및 항체의 제조 및 사용 방법을 제공한다. HEK 세포 용해물로부터 또는 돌연변이체 타우 유전자이식 마우스로부터의 척수 용해물로부터 유래된 타우 시드(seed)를 사용하는 세포 검정에 의해 측정된 바와 같이, 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 타우 시드를 억제한다. 또한, 본 출원의 항-PHF-타우 항체의 가변 영역 및 마우스 Ig 불변 영역, 예컨대 마우스 IgG2a 불변 영역을 갖는 키메라 항체는 생체내 돌연변이체 타우 유전자이식 마우스 모델에서 시딩 활성을 차단하였다.
AD 뇌에서의 타우병증의 진행은 구별되는 특별한 확산 패턴을 따른다. 전임상 모델에서 세포외 포스포-타우 시드는 뉴런에서 타우병증을 유도할 수 있는 것으로 나타났다(문헌[Clavaguera et al., PNAS 110(23):9535-40, 2013]). 따라서, 타우병증은 하나의 뇌 영역에서 다음 뇌 영역으로 프리온-유사 방식으로 확산될 수 있는 것으로 여겨진다. 이러한 확산 과정은 근처 뉴런에 의해 흡수될 수 있는 타우 시드의 외재화를 수반하여 추가의 타우병증을 유도할 것이다. 이론에 의해 구애되고자 함이 없이, 본 출원의 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 포스포-타우 시드와 상호작용함으로써 뇌에서의 타우 응집 또는 타우병증의 확산을 예방하는 것으로 생각된다.
일반적인 일 태양에서, 본 출원은 PHF-타우에 결합하는 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어지거나 그 안에 있는 타우 단백질의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하며, 쌍 나선형 필라멘트(PHF)-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
특정 태양에 따르면, 본 출원은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어지거나 그 안에 있는 타우 단백질의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하며, 쌍 나선형 필라멘트(PHF)-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합하고, 여기서 타우 단백질의 에피토프는 타우 단백질의 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 중 하나 이상을 포함하지만, 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 전부를 포함하지는 않는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 7 또는 14, 8, 및 9의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며; 서열 번호 12 또는 18과 90% 이상 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13, 19, 23, 또는 59와 90% 이상 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 12 또는 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13, 19, 23, 또는 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(b) 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 19의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(c) 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호 15 또는 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄;
(b) 각각 독립적으로 서열 번호 16, 21, 24, 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 2개의 경쇄; 및
(c) 서열 번호 17 또는 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호 61 또는 62의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄; 및
(a) 각각 서열 번호 16 또는 24, 또는 21 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 커플링된 본 출원의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 접합체에 관한 것이다.
특정 태양에 따르면, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 1 nM 이상, 바람직하게는 1 내지 500 nM의 해리 상수 KD, 및 산성 pH, 바람직하게는 pH 5에서 10-4 초-1 이상, 바람직하게는 10-4 내지 10-1 초-1의 오프-속도 상수(off-rate constant) kd로 CD98, 바람직하게는 인간 CD98hc, 또는 TfR, 바람직하게는 인간 TfR1에 각각 결합한다.
다른 특정 태양에 따르면, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 2 x 10-2 내지 2 x 10-4 초-1, 바람직하게는 8 x 10-3 초-1의 오프-속도 상수 kd를 갖는다.
다른 특정 태양에 따르면, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 26, 27, 28 또는 33, 29, 30, 및 31의 아미노산 서열을 갖거나;
(b) 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 35, 36, 37, 38, 39, 및 40의 아미노산 서열을 갖는다.
다른 특정 태양에 따르면, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 링커를 통해 경쇄 가변 영역에 공유적으로 연결된 중쇄 가변 영역을 포함하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)이며, 바람직하게는, 링커는 서열번호 50 또는 51의 아미노산 서열을 갖고, 더욱 바람직하게는, scFv는 서열 번호 25, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 또는 서열 번호 41의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2개의 중쇄 중 하나만의 카르복시 말단에 링커를 통해 공유적으로 연결되며, 바람직하게는 링커는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, 본 출원의 접합체를 포함하는 융합 작제물에 관한 것이다.
특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2개의 중쇄 각각은, 야생형 CH3 도메인 폴리펩티드와 비교하여, 하나 이상의 이종이량체 돌연변이, 예컨대 변형된 이종이량체 CH3 도메인, 또는 하나 이상의 노브 및 홀(knob and hole) 돌연변이를 포함한다.
다른 특정 태양에 따르면, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, L351, F405, 및 Y407에서 아미노산 변형을 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, T366, K392, 및 T394에서 아미노산 변형을 포함하며, 여기서 위치 T350에서의 아미노산 변형은 T350V, T350I, T350L, 또는 T350M이고; 위치 L351에서의 아미노산 변형은 L351Y이고; 위치 F405에서의 아미노산 변형은 F405A, F405V, F405T, 또는 F405S이고; 위치 Y407에서의 아미노산 변형은 Y407V, Y407A, 또는 Y407I이고; 위치 T366에서의 아미노산 변형은 T366L, T366I, T366V, 또는 T366M이고, 위치 K392에서의 아미노산 변형은 K392F, K392L, 또는 K392M이고, 위치 T394에서의 아미노산 변형은 T394W이며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
다른 특정 태양에 따르면, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366W를 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함한다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 신생아 Fc 수용체(RcRn)에 대한 융합체의 결합을 향상시키는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하며, 바람직하게는 하나 이상의 돌연변이는 산성 pH에서 결합을 향상시키고, 더욱 바람직하게는 Fc는 M252Y/S254T/T256E(YTE) 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는 Fc는 위치 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329에서의 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 L234A, L235A, 및 P331S 중 1, 2, 또는 3개의 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 하기를 포함하는 융합 작제물에 관한 것이다:
(a) 서열 번호 42 내지 49로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄;
(b) 각각 독립적으로 서열 번호 16, 21, 24, 및 60으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄; 및
(c) 서열 번호 17 및 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 본 출원의 접합체, 또는 본 출원의 융합 작제물을 인코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 단리된 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 단리된 핵산 또는 본 출원의 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 본 출원의 접합체, 또는 본 출원의 융합 작제물을 생성하는 방법으로서, 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 제조하는 조건 하에 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 단계, 및 세포 또는 세포 배양물로부터 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 회수하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 본 출원의 접합체, 또는 본 출원의 융합 작제물, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 타우 시딩의 차단을 필요로 하는 대상체에서 타우 시딩을 차단하는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)의 유도를 필요로 하는 대상체에서 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)을 유도하는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 타우병증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 타우병증을 치료하는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산의 감소를 필요로 하는 대상체에서 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산을 감소시키는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
특정 태양에 따르면, 타우병증은 가족성 알츠하이머병, 산발성 알츠하이머병, 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 진행성 핵상 마비, 피질기저핵 변성, 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 농축체 단독 치매, 석회화를 동반하는 광범위 신경섬유 매듭, 은친화성 과립성 치매, 근위축성 측삭 경화증 파킨슨증-치매 복합군, 다운 증후군, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 할러포르텐-스파츠병, 봉입체 근염, 크로이츠펠트-야콥병, 다계통 위축증, C형 니만-픽병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 아급성 경화성 범뇌염, 근긴장성 이영양증, 신경섬유 매듭을 동반하는 비-괌 운동 신경세포병, 뇌염후 파킨슨증, 만성 외상성 뇌병증, 및 권투선수 치매(복싱병)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 특정 태양에 따르면, 약제학적 조성물은 정맥내 투여된다.
다른 특정 태양에 따르면, 약제학적 조성물은 대상체의 혈액-뇌 장벽(BBB)을 가로질러 전달된다.
다른 특정 태양에 따르면, 투여는 Fc-매개 이펙터 기능을 감소시키고/시키거나 신속한 망상적혈구 고갈을 유도하지 않는다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 대상체부터의 생물학적 샘플에서 PHF-타우의 존재를 검출하는 방법으로서, 생물학적 샘플을 본 출원의 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 대상체부터의 샘플에서 PHF-타우에 대한 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
특정 태양에 따르면, 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 간질액, 또는 뇌척수액 샘플이다.
본 출원의 실시 형태에 따른 본 발명의 다른 태양, 특징, 및 이점은 본 출원의 상세한 설명 및 그의 바람직한 실시 형태 및 첨부된 청구범위를 포함하는 하기의 개시내용으로부터 명백할 것이다.
전기의 요약뿐만 아니라 본 출원의 하기의 상세한 설명도 첨부 도면과 함께 읽을 경우에 더 잘 이해될 것이다. 본 출원은 도면에 나타낸 정확한 실시 형태로 제한되지 않음이 이해되어야 한다.
도 1은 PT1B995 및 PT1B585와 비교하여, 전장 타우 단백질에 대한, 인간화 변이체, PT1B1142의 ELISA 결합을 나타내는 그래프이다.
도 2는 PT1B995 및 PT1B585와 비교하여, 온도 범위에 걸쳐, 인간화 변이체, PT1B1142의 열 안정성 ELISA 신호를 나타내는 그래프이다.
도 3은 인간 전장 재조합 타우에 대한 모체 및 인간화 PT66 항체의 대표적인 SPR 결합 데이터를 나타내는 일련의 그래프이다. 센서그램은 2.2 nM, 6.7 nM, 20 nM, 및 60 nM에서의 단일-사이클 동역학 모드에서 타우 단백질의 단계적 주사를 나타낸다. 흑색 실선 오버레이는 1:1 랭뮤어 모델을 이용한 전반적 동역학 피팅을 나타낸다.
도 4는 전장 재조합 타우 단백질에 대한 PT1B1183 결합의 SPR 센서그램이다. 센서그램은 1.1 nM, 3.3 nM, 10 nM, 및 30 nM에서의 타우 단백질의 단일-사이클 동역학 모드에서 단계적 주사를 나타낸다. 각각의 타우 농도에 대한 회합 시간은 3 분이고 해리 시간은 120 분이다. 흑색 실선 오버레이는 1:1 랭뮤어 모델을 이용한 전반적 동역학 피팅을 나타낸다.
다양한 간행물, 논문, 및 특허가 배경기술에 그리고 본 명세서 전체에 걸쳐 인용되어 있거나 기재되어 있으며; 이들 참고문헌 각각은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행동, 재료, 장치, 물품 등에 대한 논의는 본 출원에 대한 문맥을 제공하는 목적을 위한 것이다. 그러한 논의는 이들 대상 중 임의의 것 또는 모든 것이 개시되거나 청구된 임의의 발명에 대하여 종래 기술의 일부를 형성하는 것을 인정하는 것은 아니다.
정의
달리 정의되지 않는 한, 본 명세서에 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 출원이 속하는 기술 분야의 당업자에게 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 그렇지 않으면, 본 명세서에 사용되는 소정의 용어는 본 명세서에 기재된 바와 같은 의미를 갖는다. 본 명세서 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태(부정 관사 및 정관사)는, 문맥이 명확하게 달리 지시하지 않으면, 복수의 지시 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치 값은 모든 경우에 용어 "약"에 의해 수식되는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 수치 값은 전형적으로 인용된 값의 ±10%를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v)의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v)를 포함한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 문맥이 명백히 달리 지시하지 않는 한, 수치 범위의 사용은 모든 가능한 하위범위, 그 범위 내의 모든 개별 수치 값, 예를 들어 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분율을 명시적으로 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 다수의 언급된 요소들 사이의 접속 용어 "및/또는"은 개별 선택지 및 조합된 선택지 둘 모두를 포함하는 것으로 이해된다. 예를 들어, 2개의 요소들이 "및/또는"에 의해 결합되는 경우, 제1 선택지는 제2 요소 없이 제1 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제2 선택지는 제1 요소 없이 제2 요소의 적용가능성을 지칭한다. 제3 선택지는 제1 요소와 제2 요소가 함께 적용가능함을 지칭한다. 이들 선택지 중 어느 것이든 하나는 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 본 명세서에 사용되는 바와 같이 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다. 이들 선택지 중 하나 초과의 동시 적용가능성 또한 이 의미 내에 속하는 것으로 이해되며, 이에 따라 용어 "및/또는"의 요건을 충족시킨다.
본 명세서 및 이어지는 청구범위 전체에 걸쳐, 문맥상 달리 필요로 하지 않는 한, 단어 "포함하다" 및 변형 형태, 예컨대 "포함한다" 및 "포함하는"은 언급된 정수 또는 단계 또는 정수들 또는 단계들의 군을 포함하지만, 임의의 다른 정수 또는 단계 또는 정수들 또는 단계들의 군을 배제하지 않음을 내포하는 것으로 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용될 때, 용어 "포함하는"은 용어 "함유하는" 또는 "구비하는"으로 치환될 수 있거나, 경우에 따라서는 본 명세서에 사용될 때 용어 "갖는"으로 치환될 수 있다.
본 명세서에서 사용될 때, "~로 이루어진"은 청구범위 요소에 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 또는 구성성분을 배제한다. 본 명세서에서 사용될 때, "~로 본질적으로 이루어진"은 청구범위의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 주지 않는 재료 또는 단계를 배제하지 않는다. 본 출원의 태양 또는 실시 형태와 관련하여 본 명세서에 사용되는 모든 경우에, 임의의 전술한 용어 "포함하는", "함유하는", "구비하는", 및 "갖는"은 본 개시내용의 범주를 변동시키기 위해 용어 "~로 이루어진" 또는 "~로 본질적으로 이루어진"으로 대체될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "단리된"은 생물학적 성분(예컨대, 핵산, 펩티드 또는 단백질)이, 그러한 성분이 천연 발생하는 유기체의 다른 생물학적 성분들, 즉 다른 염색체 및 염색체외 DNA 및 RNA, 및 단백질로부터 실질적으로 분리되거나, 따로 생성되거나, 또는 따로 정제되었음을 의미한다. 따라서, "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 표준 정제 방법에 의해 정제된 핵산 및 단백질을 포함한다. "단리된" 핵산, 펩티드 및 단백질은 조성물의 일부일 수 있고, 그러한 조성물이 핵산, 펩티드, 또는 단백질의 천연 환경의 일부가 아닌 경우 여전히 단리될 수 있다. 이 용어는 또한 숙주 세포에서의 재조합 발현에 의해 제조된 핵산, 펩티드 및 단백질뿐만 아니라 화학적으로 합성된 핵산도 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체" 또는 "면역글로불린"은 넓은 의미로 사용되며, 다중클론 항체, 뮤린(murine), 인간, 인간-적응화, 인간화 및 키메라 단일클론 항체를 비롯한 단일클론 항체 및 항체 단편을 포함하는 면역글로불린 또는 항체 분자를 포함한다.
일반적으로, 항체는 특정 항원에 대하여 결합 특이성을 나타내는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 항체 구조는 잘 알려져 있다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라, 5개의 주요 분류, 즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM으로 정해질 수 있다. IgA 및 IgG는 동종형(isotype) IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로 추가로 하위분류된다. 4개의 IgG 하위부류 각각은 이펙터 기능으로 알려진 상이한 생물학적 기능을 갖는다. 이들 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 수용체(FcγR)와의 상호작용을 통해 및/또는 C1q 결합 및 보체 결합에 의해 매개된다. FcγR에 대한 결합은 항체 의존성 세포 매개 세포용해 또는 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC)으로 이어질 수 있는 반면에, 한편 보체 인자에 대한 결합은 보체 매개 세포 용해 또는 보체-의존성 세포독성(CDC)으로 이어질 수 있다. 본 출원의 항체는 야생형 Fc 영역과 비교하여, 이들이 연장된 반감기, 감소되거나 증가된 ADCC 또는 CDC 및 침묵 Fc 이펙터 기능을 포함하지만 이로 제한되지 않는 변경된 특성을 갖도록 이들의 Fc 영역에 변이를 갖는 것들을 포함한다. 따라서, 본 출원의 항체는 5개의 주요 부류 또는 상응하는 하위-부류 중 임의의 것일 수 있다. 바람직하게는, 본 출원의 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4이다. 임의의 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 2개의 명확하게 구별되는 유형, 즉 카파 및 람다 중 하나로 정해질 수 있다. 따라서, 본 출원의 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 함유할 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 출원의 항체는 마우스 항체 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 더하여, 항체는 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 함유한다. 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 가변 영역은 "항원-결합 부위"가 개재된 "프레임워크" 영역으로 이루어진다. 항원-결합 부위는 하기와 같이 다양한 용어 및 넘버링 체계를 사용하여 정의된다:
(i) 카바트(Kabat): "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"은 서열 가변성에 기반한다(문헌[Wu and Kabat, J Exp Med. 132:211-50, 1970]). 일반적으로, 항원-결합 부위는 각각의 가변 영역 내에 3개의 CDR을 가짐(예를 들어, 중쇄 가변 영역(VH) 내의 HCDR1, HCDR2 및 HCDR3 및 경쇄 가변 영역(VL) 내의 LCDR1, LCDR2 및 LCDR3);
(ii) 초티아(Chothia): 용어 "초가변 영역", "HVR", 또는 "HV"는 초티아 및 레스크(Lesk)에 의해 정의되는 바와 같이 구조 면에서 초가변성인 항체 가변 도메인의 영역을 지칭한다(문헌[Chothia and Lesk, J Mol Biol. 196:901-17, 1987]). 일반적으로, 항원-결합 부위는 각각의 VH(H1, H2, H3) 및 VL(L1, L2, L3) 내에 3개의 초가변 영역을 갖는다. 넘버링 시스템뿐만 아니라 CDR 및 HV의 주석이 아히난단(Abhinandan) 및 마틴(Martin)에 의해 개정되었다(문헌[Abhinandan and Martin, Mol Immunol. 45:3832-9, 2008]);
(iii) IMGT: 항원-결합 부위를 형성하는 영역의 다른 정의가 T-세포 수용체 및 면역글로불린으로부터의 V 도메인의 비교에 기반하여 레프란크(Lefranc)에 의해 제안되었다(문헌[Lefranc et al., Dev Comp Immunol . 27:55-77, 2003]). IMGT(International ImMunoGeneTics) 데이터베이스는 이들 영역의 표준화된 넘버링 및 정의를 제공한다. CDR, HV 및 IMGT 기술 사이의 대응성은 문헌[Lefranc et al., 2003, 상동]에 기재되어 있음;
(iv) AbM: 카바트와 초티아 넘버링 체계 사이의 절충은 마틴(문헌[Martin ACR (2010) Antibody Engineering, eds Kontermann R, Dubel S (Springer-Verlag, Berlin), Vol 2, pp 33-51])에 의해 기재된 AbM 넘버링 규약이다;
(v) 항원-결합 부위는 또한 "특이성 결정 잔기 사용"(SDRU)에 기초하여 기술될 수 있으며(문헌[Almagro, Mol Recognit. 17:132-43, 2004]), 여기서 SDR은 항원 접촉에 직접 관여하는 면역글로불린의 아미노산 잔기를 지칭한다.
"프레임워크" 또는 "프레임워크 서열"은 항원-결합 부위 서열인 것으로 정의된 것들 외에 항체의 가변 영역 내에 남아 있는 서열이다. 항원-결합 부위의 정확한 정의는 상기와 같이 다양한 기술에 의해 결정될 수 있으므로, 정확한 프레임워크 서열은 항원-결합 부위의 정의에 따라 달라진다. 프레임워크 영역(FR)은 가변 도메인의 더 고도로 보존된 부분이다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR(각각 FR1, FR2, FR3 및 FR4)을 포함하며, 이들은 일반적으로 3개의 초가변 루프에 의해 연결된 베타-시트 구성을 채택한다. 각각의 사슬 내의 초가변 루프들은 FR에 의해 매우 근접하게 함께 유지되며, 이때 다른 사슬로부터의 초가변 루프들은 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다. 항체의 구조 분석은 상보성 결정 영역에 의해 형성된 결합 부위의 서열과 형상 사이의 관계를 규명하였다(문헌[Chothia et al., J. Mol . Biol. 227: 799-817, 1992]; 문헌[Tramontano et al., J. Mol . Biol. 215:175-182, 1990]). 높은 서열 가변성에도 불구하고, 6개의 루프 중 5개가 "표준 구조"라고 불리는 주쇄 입체구조의 작은 레퍼토리(repertoire)만을 채택한다. 이들 입체구조는 무엇보다 먼저 루프의 길이에 의해 결정되고, 둘째로, 팩킹(packing), 수소 결합 또는 통상적이지 않은 주쇄 입체구조를 추정하는 능력을 통해 입체구조를 결정하는, 루프 내의 그리고 프레임워크 영역 내의 소정의 위치에서의 주요 잔기의 존재에 의해 결정된다.
"항체"는 또한 중쇄 단독 항체(HcAb)로도 지칭되는 중쇄(VHH) 항체 상의 단일 가변 도메인일 수 있으며, 이는 경쇄가 없고 낙타과 또는 상어류에 의해 자연적으로 생성될 수 있다. HcAb의 항원 결합 부분은 VHH 단편으로 구성된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "조합 항체"는 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 재조합 숙주 세포에 의해 발현되는 항체(예를 들어, 키메라, 인간화, 또는 인간 항체, 또는 이의 항원-결합 단편)를 지칭한다. 재조합 항체를 생성하기 위한 "숙주 세포"의 예는 (1) 포유류 세포, 예를 들어, 중국 햄스터 난소(CHO), COS, 골수종 세포(YO 및 NSO 세포를 포함함), 베이비 햄스터 신장(BHK), Hela, 및 Vero 세포; (2) 곤충 세포, 예를 들어 sf9, sf21, 및 Tn5; (3) 식물 세포, 예를 들어 니코티아나(Nicotiana) 속에 속하는 식물(예를 들어, 니코티아나 타바쿰(Nicotiana tabacum)); (4) 효모 세포, 예를 들어, 사카로마이세스(Saccharomyces) 속(예를 들어, 사카로마이세스 세레비시아에(Saccharomyces cerevisiae)) 또는 아스페르길루스(Aspergillus) 속(예를 들어, 아스페르길루스 니게르(Aspergillus niger))에 속하는 것들; (5) 박테리아 세포, 예를 들어 에스케리키아, 콜라이(Escherichia, coli) 세포 또는 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) 세포 등을 포함한다.
항체의 "항원-결합 단편"은, 전형적으로 적어도 VH 영역의 하나 이상의 부분을 포함하는, 항원에 검출가능하게 결합할 수 있는 전장 항체의 부분을 포함하는 분자이다. 항원 결합성 단편은 항체의 1개, 2개, 3개, 또는 그 초과의 항원 결합성 부분을 포함하는 다가 분자, 및 VL 및 VH 영역, 또는 이들의 선택된 부분이 합성 링커에 의해 또는 재조합 방법에 의해 연결되어 기능적 항원 결합성 분자를 형성하는 단일 사슬 작제물을 포함한다. 항원-결합 단편은 또한 단일 단량체 가변 항체 도메인(VHH)으로 이루어진 항체 단편인, 나노바디로도 알려진 단일-도메인 항체(sdAb)일 수 있다. 항체의 일부 항원 결합성 단편은 더 큰 항체 분자의 실제 단편화 (예를 들어, 효소적 절단)에 의해 얻어질 수 있지만, 대부분은 전형적으로 재조합 기술에 의해 생성된다. 본 출원의 항체는 전장 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서 제조될 수 있다. 항원-결합 단편의 예는 Fab, Fab′, F(ab)2, F(ab′)2, F(ab)3, Fv(전형적으로 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인), 단일-사슬 Fv(scFv, 예를 들어, 문헌[Bird et al., Science 1988; 242:423-426]; 및 문헌[Huston et al. PNAS 1988; 85:5879-5883] 참조), dsFv, Fd(전형적으로 VH 및 CH1 도메인), 및 dAb(전형적으로 VH 도메인) 단편; VH, VL, VHH, 및 V-NAR 도메인; 단일 VH 및 단일 VL 사슬을 포함하는 1가 분자; 미니바디, 다이아바디, 트라이아바디, 테트라바디, 및 카파 바디(예를 들어, 문헌[Ill et al., Protein Eng 1997; 10:949-57] 참조); 낙타 IgG; IgNAR뿐만 아니라; 하나 이상의 단리된 CDR 또는 기능적 파라토프를 포함하며, 여기서 단리된 CDR 또는 항원-결합 잔기 또는 폴리펩티드는 함께 회합되거나 연결되어 기능적 항체 단편을 형성할 수 있다. 다양한 유형의 항체 단편이, 예를 들어, 문헌[Holliger and Hudson, Nat Biotechnol 2005; 23:1126-1136]; WO2005040219호, 및 공개된 미국 특허 출원 제20050238646호 및 제20020161201호에 기재되고 검토되어 있다. 항체 단편은 통상적인 재조합 또는 단백질 공학 기술을 사용하여 얻어질 수 있고, 단편은 온전한 항체와 동일한 방식으로 항원 결합 기능 또는 다른 기능에 대해 스크리닝될 수 있다.
항체 단편의 생산을 위한 다양한 기술이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 전장 항체의 단백질 가수분해를 통해 유도되었다(예를 들어, 문헌[Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods, 24:107-117 (1992)]; 및 문헌[Brennan et al., Science, 229:81 (1985)] 참조). 그러나, 이들 단편은 이제 재조합 숙주 세포에 의해 직접 생산될 수 있다. 대안적으로, Fab'-SH 단편은 E. 콜라이(E. coli)으로부터 직접 회수되고 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다(문헌[Carter et al., Bio/Technology, 10:163-167 (1992)]). 다른 접근법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 단리될 수 있다. 다른 실시 형태에서, 선택된 항체는 단일 사슬 Fv 단편(scFv)이다. WO 1993/16185호; 미국 특허 제5,571,894호; 및 미국 특허 제5,587,458호를 참조한다. 항체 단편은 또한, 예를 들어 미국 특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수 있다. 그러한 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이중특이적일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "항체 유도체"는 하나 이상의 아미노산이 화학적으로 변형되거나 치환된 전장 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 분자를 지칭한다. 항체 유도체에 사용될 수 있는 화학적 변형은, 예를 들어, 항체를 제2 분자에 연결하기 위한, 예를 들어, 알킬화, PEG화, 아실화, 에스테르 형성, 또는 아미드 형성 등을 포함한다. 예시적인 변형은 PEG화(예를 들어, 시스테인-PEG화), 비오티닐화, 방사성 표지화, 및 제2 제제(예컨대 세포독성제)와의 접합을 포함한다.
본 명세서에서 항체는 변경된 항원-결합 또는 생물학적 활성을 갖는"아미노산 서열 변이체"를 포함한다. 그러한 아미노산 변경의 예는 항원에 대한 향상된 친화도(예를 들어, "친화도 성숙" 항체), 및, 존재하는 경우, 예를 들어 변경된(증가되거나 감소된) 항체 의존성 세포성 세포독성(ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성(CDC)(예를 들어, WO 00/42072호(Presta, L.) 및 WO 99/51642호(Iduosogie et al) 참조); 및/또는 증가되거나 감소된 혈청 반감기(예를 들어, WO00/42072호(Presta, L.) 참조)를 갖는, 변경된 Fc 영역을 갖는 항체를 포함한다.
"다중특이성 분자"는, 적어도 하나의 다른 기능성 분자 (예를 들어, 다른 펩티드 또는 단백질, 예를 들어 다른 항체 또는 수용체에 대한 리간드)와 회합되거나 이에 연결됨으로써 적어도 2개의 상이한 결합 부위 또는 표적 분자에 결합하는 분자를 형성하는, 항체, 또는 이의 항원 결합성 단편을 포함한다. 예시적인 다중특이성 분자는 이중 특이적 항체 및 가용성 수용체 단편 또는 리간드에 연결된 항체를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는, 프레임워크 및 CDR 영역 둘 모두가 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 유래되는 (즉, 동일하거나 본질적으로 동일한) 가변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 이 항체가 불변 영역을 포함하는 경우, 불변 영역 또한 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열로부터 "유래"된다. 본 출원의 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역글로불린 서열에 의해 인코딩되지 않는 아미노산 잔기(예를 들어, 시험관 내에서의 랜덤 또는 부위 특이적 돌연변이유발에 의해 또는 생체 내에서의 체세포 돌연변이에 의해 도입되는 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유동물 종의 생식세포계열로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열 상으로 이식된 항체를 포함하도록 의도되지 않는다.
"인간화" 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 인간/비-인간 키메라 항체이다. 대부분, 인간화 항체는, 수령자의 초가변 영역으로부터의 잔기가 원하는 특이성, 친화도, 및 능력(capacity)을 갖는 비-인간 종 (공여자 항체), 예를 들어 마우스, 래트, 토끼, 또는 비-인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린 (수령자 항체)이다. 일부 경우, 인간 면역글로불린의 FR 잔기는 상응하는 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 개선하도록 이루어진다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 그리고 전형적으로는 2개의, 실질적으로 모든 가변 도메인을 포함할 것이며, 이때 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린의 것들에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 잔기는 인간 면역글로불린 서열의 것들이다. 인간화 항체는 면역글로불린 불변 영역(Fc), 전형적으로는 인간 면역글로불린의 것의 적어도 일부분을 또한 선택적으로 포함할 수 있다. 추가의 세부 사항에 대해서는, 예를 들어, 문헌[Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)]; 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; 및 문헌[Presta, curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)], WO 92/02190호, 미국 특허 출원 제20060073137호, 및 미국 특허 제6,750,325호, 제6,632,927호, 제6,639,055호, 제6,548,640호, 제6,407,213호, 제6,180,370호, 제6,054,297호, 제5,929,212호, 제5,895,205호, 제5,886,152호, 제5,877,293호, 제5,869,619호, 제5,821,337호, 제5,821,123호, 제5,770,196호, 제5,777,085호, 제5,766,886호, 제5,714,350호, 제5,693,762호, 제5,693,761호, 제5,530,101호, 제5,585,089호, 및 제5,225,539호를 참조한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "에피토프"는 면역글로불린, 항체, 또는 이의 항원-결합 단편이 특이적으로 결합하는 항원 상의 부위를 지칭한다. 에피토프는 연속 아미노산으로부터 또는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 불연속 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 대한 노출 시에 보유되는 반면, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매에 의한 처리 시에 상실된다. 에피토프는 전형적으로 특유의 공간 입체구조로 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산을 포함한다. 에피토프의 공간 입체구조를 결정하는 방법은, 예를 들어 X-선 결정구조해석 및 2차원 핵자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)]을 참조한다.
참조 항체와 "동일한 에피토프에 결합하는 항체"는 경쟁 검정에서 그의 항원에 대한 참조 항체의 결합을 50% 이상만큼 차단하는 항체를 지칭하고, 역으로 참조 항체는 경쟁 검정에서 그의 항원에 대한 항체의 결합을 50% 이상만큼 차단한다.
자연 표적 리간드에 대한 표적 분자의 결합을 "차단"하는 표적 항체의 능력은, 가용성 또는 세포-표면 회합된 표적 및 리간드 분자를 사용하는 검정에서, 항체가 리간드에 대한 표적 분자의 결합을 용량-의존적 방식으로 검출가능하게 감소시킬 수 있음을 의미하며, 여기서 표적 분자는 항체의 부재 하에 리간드에 검출가능하게 결합한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "타우" 또는 "타우 단백질"은 다수의 아이소형을 갖는 풍부한 중추 및 말초 신경계 단백질을 지칭한다. 인간 중추 신경계(CNS)에는, 대안적 스플라이싱으로 인해 크기가 352 내지 441개 아미노산 길이의 범위인 6개의 주요 타우 아이소형이 존재한다(문헌[Hanger et al., Trends Mol Med. 15:112-9, 2009]). 아이소형은, 0 내지 2개의 N-말단 삽입체 및 3 또는 4개의 직렬로 배열된 미세소관-결합 반복체의 조절된 포함에 의해 서로 상이하며, 0N3R(서열 번호 53), 1N3R(서열 번호 54), 2N3R(서열 번호 55), 0N4R(서열 번호 56), 1N4R(서열 번호 57), 및 2N4R(서열 번호 58)로 지칭된다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "대조군 타우"는 인산화 및 다른 번역후 변형이 없는 서열 번호 58의 타우 아이소형을 지칭한다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "타우"는 돌연변이, 예를 들어, 전장 야생형 타우의 점 돌연변이, 단편, 삽입, 결실, 및 스플라이스 변이체를 포함하는 단백질을 포함한다. 용어 "타우"는 또한, 타우 아미노산 서열의 번역후 변형을 포함한다. 번역후 변형은 인산화를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 어구 "타우 단백질의 인산화된 S433" 및 유사한 어구는 전장 야생형 타우 단백질의 소정 위치, 예를 들어, 위치 433에서의 세린에서 인산화된 아미노산을 지칭한다.
타우는 미세소관에 결합하며, 타우 인산화에 의해 조절될 수 있는 과정인, 세포를 통한 카고(cargo)의 수송을 조절한다. AD 및 관련 장애에서는, 타우의 비정상적인 인산화가 만연하며, 피브릴로의 타우의 응집(쌍 나선형 필라멘트(PHF)라고 명명됨)에 선행하고/하거나 이를 촉발하는 것으로 여겨진다. PHF의 주요 성분은 과인산화된 타우이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "쌍 나선형 필라멘트-타우" 또는 "PHF-타우"는 쌍 나선형 필라멘트 내의 타우 응집체를 지칭한다. PHF 구조 내의 2개의 주요 영역이 전자 현미경법, 퍼지 코트, 및 코어 필라멘트에서 명백하며; 퍼지 코트는 단백질분해에 민감하고 필라멘트의 외부에 위치되며, 필라멘트의 프로테아제-내성 코어는 PHF의 골격을 형성한다(문헌[Wischik et al. Proc Natl Acad Sci USA. 85:4884-8, 1988]).
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "PHF-타우에 결합하는 단리된 인간화 항체" 또는 "단리된 인간화 항-PHF-타우 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 인간화 항-PHF-타우 항체를 지칭하는 것으로 의도된다(예를 들어, 단리된 인간화 항-PHF-타우 항체에는 PHF-타우 이외의 항원과 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다). 그러나, 단리된 인간화 항-PHF-타우 항체는 다른 관련 항원, 예를 들어 다른 종(예컨대, PHF-타우 종 상동체)으로부터의 항원에 대한 교차-반응성을 가질 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "특이적으로 결합한다" 또는 "특이적 결합"은 본 출원의 항-PHF-타우 항체가 약 1x10-6 M 이하, 예를 들어, 약 1x10-7 M 이하, 약 1x10-8 M 이하, 약 1x10-9 M 이하, 약 1x10-10 M 이하, 약 1x10-11 M 이하, 약 1x10-12 M 이하, 또는 약 1x10-13 M 이하의 해리 상수(KD)로 사전결정된 표적에 결합하는 능력을 지칭한다. KD는 Kd 대 Ka의 비(즉, Kd/Ka)로부터 구해지고, 몰농도(M)로 표현된다. 항체에 대한 KD 값은 본 발명을 고려하여 당업계의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 항-PHF-타우 항체의 KD 값은 표면 플라즈몬 공명을 사용함으로써, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어 Biacore® 시스템, ProteOn 기기(BioRad), KinExA 기기(Sapidyne), 당업자에게 알려진 ELISA 또는 경쟁적 결합 검정을 사용함으로써 결정될 수 있다. 전형적으로, 항-PHF-타우 항체는, 예를 들어 ProteOn 기기(BioRad)를 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 측정될 때 비특이적 표적에 대한 그의 KD보다 적어도 10배 더 작은 KD로 사전결정된 표적(즉, PHF-타우)에 결합한다. 그러나, PHF-타우에 특이적으로 결합하는 항-PHF-타우 항체는 다른 관련 표적에 대한, 예를 들어, 다른 종(상동체), 예컨대 인간 또는 원숭이, 예를 들어 마카카 파시쿨라리스(Macaca fascicularis)(사이노몰거스, 사이노(cyno)), 판 트로글로디테스(Pan troglodytes)(침팬지, 침프(chimp)), 또는 칼리트릭스 자쿠스(Callithrix jacchus)(코먼 마모셋(common marmoset), 마모셋)로부터의 동일한 사전결정된 표적에 대한 교차-반응성을 가질 수 있다. 단일특이성 항체는 하나의 항원 또는 하나의 에피토프에 특이적으로 결합하지만, 이중특이성 항체는 2개의 별개의 항원 또는 2개의 별개의 에피토프에 특이적으로 결합한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "접합체"는 치료 펩티드 또는 단백질, 항체, 표지, 또는 신경학적 장애 약물을 포함하지만 이로 제한되지 않는 하나 이상의 이종 분자(들)에 공유적으로 연결된 항체 또는 단백질을 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "커플링된"은 둘 이상의 물체를 함께 결합하거나 연결하는 것을 지칭한다. 화학적 또는 생물학적 화합물을 언급할 때, '커플링된'은 둘 이상의 화학적 또는 생물학적 화합물 사이의 공유 연결을 지칭할 수 있다. 비제한적인 예를 들어, 본 출원의 항체는 관심 펩티드와 커플링되어 항체 커플링된 펩티드를 형성할 수 있다. 항체 커플링된 펩티드는 항체를 펩티드에 접합시키도록 설계된 특정 화학 반응을 통해 형성될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 본 출원의 항체는 링커를 통해 본 출원의 펩티드와 공유적으로 커플링될 수 있다. 링커는, 예를 들어, 먼저 항체 또는 펩티드에 공유적으로 연결되고, 이어서 펩티드 또는 항체에 공유적으로 연결될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "링커"는 2개의 상이한 개체를 공유적으로 연결하는 화학 링커 또는 단일 사슬 펩티드 링커를 지칭한다. 링커는 본 출원의 항체 또는 이의 단편, 혈액 뇌 장벽 셔틀, 융합 단백질, 및 접합체 중 임의의 2개를 연결하기 위해 사용될 수 있다. 링커는, 예를 들어, scFv 내의 VH 및 VL, 또는 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 제2 항체와 같은 제2 분자와 연결할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 1가 결합 독립체가 CD98, 바람직하게는 인간 CD98hc에 지향된 scFv를 포함하고, 치료 분자가 타우에 지향된 항체를 포함하는 경우, 링커는 scFv를 타우에 지향된 항체에 연결할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 1가 결합 독립체가 TfR, 바람직하게는 huTfR1에 지향된 scFv를 포함하고, 치료 분자가 CNS 표적, 예컨대 타우에 지향된 항체를 포함하는 경우, 링커는 scFv를 타우에 지향된 항체에 연결할 수 있다. 펩티드 결합에 의해 결합된 1 내지 25개의 아미노산, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산으로 구성된 단일 사슬 펩티드 링커가 사용될 수 있다. 소정 실시 형태에서, 아미노산은 20개의 자연 발생 아미노산으로부터 선택된다. 소정의 다른 실시 형태에서, 아미노산 중 하나 이상은 글리신, 알라닌, 프롤린, 아스파라긴, 글루타민, 및 라이신으로부터 선택된다. 화학 링커, 예컨대 탄화수소 링커, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 링커, 폴리프로필렌 글리콜(PPG) 링커, 다당류 링커, 폴리에스테르 링커, PEG 및 포매된 헤테로사이클로 이루어진 하이브리드 링커, 및 탄화수소 사슬이 또한 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "CD98" 또는 "CD98hc"는 분화 클러스터 98 중쇄(CD98hc)로 이루어진 내재성 막 단백질을 지칭하며, 이는 다이설파이드 결합에 의해 다수의 경쇄 중 임의의 것에 연결된다. LAT1 또는 LAT2와 회합되는 경우, 이종이량체 수송체 복합체는 필수 아미노산 교환기(obligatory amino acid exchanger)로서 거동한다. CD98hc는 약 80 kDa의 분자량을 갖는다. 바람직하게는, CD98hc는 인간 CD98hc(huCD98hc)이다. huCD98hc는 SLC3A2 유전자에 의해 인코딩된다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "트랜스페린 수용체" 또는 "TfR"은 수용체-매개 세포내이입(endocytosis)의 과정에 의한 세포 철 흡수에 필요한 세포 표면 수용체를 지칭한다. 트랜스페린에 대한 담체 단백질. TfR은 척추동물에서 철 흡수에 관여하며 세포내 철 농도에 반응하여 조절된다. 그것은 수용체-매개 세포내이입을 통해 트랜스페린-철 복합체를 내재화함으로써 철을 유입시킨다. 인간에서 2개의 트랜스페린 수용체, 트랜스페린 수용체 1 및 트랜스페린 수용체 2가 특성화되었다. 이들 수용체 둘 모두는 막관통 당단백질이다. TfR1은 보편적으로 발현되는 고친화도 수용체이다. TfR2는 TfR1보다 25 내지 30-배 더 낮은 친화도로 트랜스페린에 결합한다. TfR2의 발현은 소정 세포 유형으로 제한되며 세포내 철 농도에 의해 영향을 받지 않는다. 일 실시 형태에서, TfR은 예를 들어 문헌[Schneider et al. Nature 311: 675-678 (1984)]에서와 같은 아미노산 서열을 포함하는 인간 TfR이다. 그것은 각각 약 90,000 달톤의 겉보기 분자량의 2개의 서브유닛을 갖는 약 180,000 달톤의 분자량을 가질 수 있다. 바람직하게는, TfR은 인간 TfR1(huTfR1)이다.
아미노산 서열에 관련하여 사용될 경우, 어구 "서열 동일성" 또는 "퍼센트(%) 서열 동일성" 또는 "% 동일성" 또는 "와 동일한 %"는 아미노산 서열의 전체 길이를 구성하는 아미노산 잔기의 수에 비교하여 2개 이상의 정렬된 아미노산 서열의 동일한 아미노산의 매치("히트(hit)")의 수를 기재한다. 다른 측면에서는, 정렬을 사용하여, 2개 이상의 서열에 대하여, 서열들이 당업계에 알려진 바와 같은 서열 비교 알고리즘을 사용하여 측정된 바와 같은 최대 일치도에 대해 비교되고 정렬될 때, 또는 수작업으로 정렬되고 시각적으로 검사될 때, 동일한 아미노산 잔기의 백분율(예를 들어, 아미노산 서열의 전장 대비 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 97%, 98%, 99%, 또는 100% 동일성)이 결정될 수 있다. 따라서, 서열 동일성을 결정하기 위해 비교되는 서열들은 아미노산의 치환(들), 부가(들) 또는 결실(들)에 의해 상이할 수 있다. 단백질 서열들을 정렬하기에 적합한 프로그램은 당업자에게 알려져 있다. 단백질 서열의 서열 동일성 백분율은, 예를 들어, CLUSTALW, Clustal Omega, FASTA, 또는 BLAST와 같은 프로그램으로, 예를 들어 NCBI BLAST 알고리즘을 사용하여 결정할 수 있다(문헌[Altschul SF, et al (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389-3402]).
2개의 아미노산 서열과 관련하여 용어 "실질적으로 동일한"은, 예를 들어 디폴트 갭 중량을 이용한 프로그램 GAP 또는 BESTFIT에 의해 최적으로 정렬될 때, 서열들이 적어도 약 50% 서열 동일성을 공유한다는 것을 의미한다. 전형적으로, 실질적으로 동일한 서열은 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 98%, 또는 적어도 약 99%의 서열 동일성을 나타낼 것이다.
"폴리펩티드" 또는 "단백질"은 폴리펩티드를 형성하도록 펩티드 결합에 의해 연결된 적어도 2개의 아미노산 잔기를 포함하는 분자를 의미한다. 50개 미만의 아미노산의 작은 폴리펩티드는 "펩티드"로 지칭될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 동의어로서 "핵산 분자", "뉴클레오티드", 또는 "핵산"으로 지칭되는 용어 "폴리뉴클레오티드"는 임의의 폴리리보뉴클레오티드 또는 폴리데옥시리보뉴클레오티드를 지칭하며, 이는 비변형된 RNA 또는 DNA 또는 변형된 RNA 또는 DNA일 수 있다. "폴리뉴클레오티드"는, 제한 없이, 단일- 및 이중-가닥 DNA, 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 DNA, 단일- 및 이중-가닥 RNA, 및 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물인 RNA, 단일-가닥, 또는 더 전형적으로는 이중-가닥일 수 있는 DNA 및 RNA를 포함하거나 단일- 및 이중-가닥 영역의 혼합물을 포함하는 혼성(hybrid) 분자를 포함한다. 게다가, "폴리뉴클레오티드"는 RNA 또는 DNA 또는 RNA 및 DNA 둘 모두를 포함하는 삼중-가닥 영역을 지칭한다. 용어 폴리뉴클레오티드는 또한 하나 이상의 변형된 염기를 함유하는 DNA 또는 RNA, 및 안정성 또는 다른 이유로 골격이 변형된 DNA 또는 RNA를 포함한다. "변형된" 염기는, 예를 들어 트라이틸화(tritylated) 염기 및 통상이 아닌 염기, 예컨대 이노신을 포함한다. DNA 및 RNA에 대해 다양한 변형이 실행될 수 있으며; 따라서, "폴리뉴클레오티드"는 천연에서 전형적으로 발견되는 바와 같은 폴리뉴클레오티드의 화학적으로, 효소적으로, 또는 대사적으로 변형된 형태뿐만 아니라, 바이러스 및 세포에 특징적인 DNA 및 RNA의 화학적 형태도 포함한다. "폴리뉴클레오티드"는, 종종 올리고뉴클레오티드로 지칭되는 비교적 짧은 핵산 사슬을 또한 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "벡터"는 레플리콘이며, 그 안에는 세그먼트의 복제 또는 발현을 일으키도록 다른 핵산 세그먼트가 작동가능하게 삽입될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 본 출원의 핵산 분자를 포함하는 세포를 지칭한다. "숙주 세포"는 임의의 유형의 세포, 예를 들어 초대 세포, 배양 중인 세포, 또는 세포주로부터의 세포일 수 있다. 일 실시 형태에서, "숙주 세포"는 본 출원의 핵산 분자로 형질감염된 세포이다. 다른 실시 형태에서, "숙주 세포"는 그러한 형질감염된 세포의 자손 또는 잠재적 자손이다. 세포의 자손은, 예를 들어, 후속 세대에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향 또는 숙주 세포 게놈 내로의 핵산 분자의 통합으로 인해 모세포와 동일하거나 동일하지 않을 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "발현"은 유전자 산물의 생합성을 지칭한다. 이 용어는 RNA로의 유전자의 전사를 포함한다. 이 용어는 또한, 하나 이상의 폴리펩티드로의 RNA의 번역을 포함하고, 모든 천연 발생 전사후 및 번역후 변형을 추가로 포함한다. PHF-타우에 결합하는 발현된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 숙주 세포의 세포질 내에 있거나, 세포 배양물의 성장 배지와 같은 세포외 환경 내로 유입될 수 있거나, 또는 세포막에 고정될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "담체"는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 베시클, 미소구체, 리포좀 캡슐화, 또는 약제학적 제형에 사용하기 위한 당업계에 잘 알려진 다른 물질을 지칭한다. 담체, 부형제, 또는 희석제의 특성은 특정 응용을 위한 투여 경로에 좌우될 것임이 이해될 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "약제학적으로 허용가능한 담체"는 본 출원에 따른 조성물의 유효성 또는 본 출원에 따른 조성물의 생물학적 활성을 방해하지 않는 비-독성 재료를 지칭한다. 특정 실시 형태에 따르면, 본 개시내용을 고려하여, 항체 약제학적 조성물에 사용하기에 적합한 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체가 본 출원에 사용될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물, 바람직하게는 포유류를 지칭한다. 특정 실시 형태에 따르면, 대상체는 비-영장류(예를 들어, 낙타, 당나귀, 얼룩말, 소, 돼지, 말, 염소, 양, 고양이, 개, 래트, 토끼, 기니 피그, 또는 마우스) 또는 영장류(예를 들어, 원숭이, 침팬지, 또는 인간)를 포함하는 포유류이다. 특정 실시 형태에서, 대상체는 인간이다.
본 출원의 방법에 관련하여 용어 "투여하는"은, 본 출원의 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 접합체, 또는 이의 형태, 조성물, 또는 약제를 사용함으로써, 본 명세서에 기재된 바와 같은 증후군, 장애, 또는 질환을 치료적으로 또는 예방적으로, 예방, 치료, 또는 개선하기 위한 방법을 의미한다. 그러한 방법은 상기 항체, 이의 항원-결합 단편, 또는 접합체, 또는 이의 형태, 조성물, 또는 약제의 유효량을 요법의 과정 중의 상이한 시간에, 또는 조합 형태로 동시에 투여하는 단계를 포함한다. 본 출원의 방법은 모든 알려진 치료적 처리 계획을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
본 명세서에 사용되는 용어 "치료적 유효량"은 대상에서 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 도출하는 활성 성분 또는 성분의 양을 지칭한다. 치료적 유효량은 언급된 목적에 관하여 경험적으로 그리고 일상적인 방식으로 결정될 수 있다. 예를 들어, 최적의 투여량 범위의 확인을 돕기 위해 시험관내 검정이 선택적으로 사용될 수 있다. 특정 유효 용량의 선택은 치료 또는 예방될 질병, 수반되는 증상, 환자의 체중, 환자의 면역 상태 및 당업자에게 알려진 다른 인자를 포함한 몇몇 인자의 고려에 기초하여 당업자에 의해 (예를 들어, 임상 시험을 통해) 결정될 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 용량은 또한 투여 경로, 및 질환의 중증도에 좌우될 것이며, 전문의의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 유효 용량은 시험관내 또는 동물 모델 시험 시스템으로부터 유래하는 용량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 모두 타우병증과 관련된 하나 이상의 측정가능한 물리적 파라미터의 개선 또는 역전을 지칭하고자 하는 것이며, 이는 반드시 대상체에서 식별가능하지는 않지만, 대상체에서 식별가능할 수 있다. 용어 "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 또한, 퇴행을 야기하거나, 진행을 예방하거나, 적어도 질병, 장애 또는 질환의 진행을 둔화시키는 것을 지칭할 수 있다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 타우병증과 관련된, 경감, 발생 또는 발병의 예방, 또는 하나 이상의 증상의 지속기간의 감소를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환의 재발의 예방을 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 질병, 장애 또는 질환을 갖는 대상체의 생존율의 증가를 지칭한다. 특정 실시 형태에서, "치료하다", "치료하는", 및 "치료"는 대상체에서 질병, 장애 또는 질환의 제거를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "타우병증"은 뇌 내에 타우의 병리학적 응집을 수반하는 임의의 신경퇴행성 질병을 포함한다. 가족성 및 산발성 AD에 더하여, 다른 예시적인 타우병증은 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 진행성 핵상 마비, 피질기저핵 변성, 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 농축체 단독 치매, 석회화를 동반하는 광범위 신경섬유 매듭, 은친화성 과립성 치매, 근위축성 측삭 경화증 파킨슨증-치매 복합군, 다운 증후군, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 할러포르텐-스파츠병, 봉입체 근염, 크로이츠펠트-야콥병, 다계통 위축증, C형 니만-픽병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 아급성 경화성 범뇌염, 근긴장성 이영양증, 신경섬유 매듭을 동반하는 비-괌 운동 신경세포병, 뇌염후 파킨슨증, 및 만성 외상성 뇌병증, 예컨대 권투선수 치매(복싱병)이다(문헌[Morris et al., Neuron, 70:410-26, 2011]).
"혈액-뇌 장벽" 또는 "BBB"는, 뇌 모세관 내피 원형질막 내에서 밀착 연접에 의해 형성되어 뇌 내로의 분자의 수송을 제한하는 단단한 장벽을 생성하는, 말초 순환과 뇌 및 척수 사이의 생리학적 장벽을 지칭한다. BBB는 우레아(60 달톤)와 같은 심지어 매우 작은 분자의 뇌 내로의 수송을 제한할 수 있다. BBB의 예는 뇌 내의 BBB, 척수 내의 혈액-척수 장벽, 및 망막 내의 혈액-망막 장벽을 포함하며, 이들 모두는 CNS 내의 인접한 모세관 장벽(contiguous capillary barrier)이다. BBB는 또한 혈액-CSF 장벽(맥락총)을 포함하며, 여기서 장벽은 모세관 내피 세포보다는 상의 세포로 구성된다.
"혈액-뇌 장벽 수용체"(본 명세서에서 "R/BBB"로 약칭됨)는 BBB를 가로질러 분자를 수송할 수 있거나 외인성 투여 분자를 수송하기 위해 사용될 수 있는 뇌 내피 세포 상에서 발현되는 세포외 막-연결 수용체 단백질이다. R/BBB의 예는 CD98 성분, 트랜스페린 수용체(TfR), 인슐린 수용체, 인슐린-유사 성장 인자 수용체(IGF-R), 저밀도 지질단백질 수용체-관련 단백질 1(LRP1) 및 저밀도 지질단백질 수용체-관련 단백질 8(LRP8)을 제한 없이 포함하는 저밀도 지질단백질 수용체, 및 헤파린-결합 표피 성장 인자-유사 성장 인자(HB-EGF)를 포함하는 대형 중성 아미노산 수송체(LAT) 복합체를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 본 명세서에서 예시적인 R/BBB는 CD98hc 또는 트랜스페린 수용체(TfR)이다.
"중추 신경계" 또는 "CNS"는 신체 기능을 제어하는 신경 조직의 복합체를 지칭하며, 뇌 및 척수를 포함한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "신경학적 장애"는 CNS에 영향을 미치고/미치거나 CNS에 병인을 갖는 질환 또는 장애를 지칭한다. 예시적인 CNS 질환 또는 장애는 신경병증, 아밀로이드증, 암, 안구 질환 또는 장애, 바이러스 또는 미생물 감염, 염증, 허혈, 신경퇴행성 질환, 발작, 행동 장애, 및 리소좀 저장 질환을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 본 출원의 목적을 위해, CNS는 눈을 포함하는 것으로 이해될 것이며, 이는 정상적으로 혈액-망막 장벽에 의해 신체의 나머지로부터 격리된다. 신경학적 장애의 특이적 예는 신경퇴행성 질환(루이 소체 질환, 소아마비후 증후군, 샤이-드래거 증후군, 올리브뇌교소뇌 위축증, 파킨슨병, 다계통 위축증, 선상체흑질 변성증, 척수소뇌 실조증, 척수 근육 위축증을 포함하지만 이로 제한되지 않음), 타우병증(알츠하이머병 및 핵상마비를 포함하지만 이로 제한되지 않음), 프리온 질환(소 해면상 뇌병증, 스크래피, 크로이츠-펠트-야콥 증후군, 구루, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 만성 소모성 질환, 및 치명적 가족성 불면증을 포함하지만 이로 제한되지 않음), 연수 마비, 운동 뉴런 질환, 및 신경계 이종퇴행성 장애(카나반병, 헌팅턴병, 신경 세로이드-리포푸신증, 알렉산더병, 투렛 증후군, 멘케스 엉김털 증후군, 코케인 증후군, 할러포르텐-스파츠 증후군, 라포라 증후군, 레트 증후군, 간렌즈핵 변성, 레쉬-니한 증후군, 및 운베리히트-룬드보그 증후군을 포함하지만 이로 제한되지 않음), 치매(픽병 및 척수소뇌 실조증을 포함하지만 이로 제한되지 않음), 암(예를 들어, CNS 및/또는 뇌의 암, 신체 내의 다른 곳의 암으로부터 유발되는 뇌 전이를 포함함)을 포함하지만 이로 제한되지 않는다.
"신경학적 장애 약물"은 하나 이상의 신경학적 장애(들)의 효과를 치료 또는 개선하는 데 유용한 약물 또는 치료제이다. 본 출원의 신경학적 장애 약물은 소분자 화합물, 항체, 펩티드, 단백질, 하나 이상의 CNS 표적(들)의 천연 리간드, 하나 이상의 CNS 표적(들)의 천연 리간드의 변형된 버전, 압타머, 억제성 핵산(즉, 작은 억제성 RNA(siRNA) 및 짧은 헤어핀 RNA(shRNA)), 리보자임, 또는 전기의 것들 중 임의의 것의 활성 단편을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 본 출원의 예시적인 신경학적 장애 약물은 본 명세서에 기재되어 있고, 항체, 압타머, 단백질, 펩티드, 억제성 핵산, 및 소분자, 및 전기의 것들 중 임의의 것의 활성 단편을 포함하지만 이로 제한되지 않으며, 이는 그들 자체이거나 CNS 항원 또는 표적 분자, 비제한적인 예를 들어, 아밀로이드 전구체 단백질 또는 이의 부분, 아밀로이드 베타, 베타-세크레타제, 감마-세크레타제, 타우, 알파-시누클레인, 파킨, 헌팅틴, DR6, 프레세닐린, ApoE, 신경교종 또는 다른 CNS 암 마커, 및 뉴로트로핀을 특이적으로 인식하고/하거나 이에 작용한다(즉, 억제하거나, 활성화하거나, 검출함). 신경학적 장애 약물의 비제한적인 예 및 이들을 사용하여 치료할 수 있는 상응하는 장애는 하기와 같다: 뇌-유래 신경영양 인자(BDNF), 만성 뇌 손상(신경발생), 섬유아세포 성장 인자 2(FGF-2), 항-표피 성장 인자 수용체 뇌암, (EGFR)-항체, 교세포주 유래 신경 인자 파킨슨병, (GDNF), 뇌-유래 신경영양 인자(BDNF) 근위축성 측삭 경화증, 우울증, 뇌의 리소좀 효소 리소좀 저장 장애, 섬모 신경영양 인자(CNTF) 근위축성 측삭 경화증, 뉴레귤린-1 조현병, 항-HER2 항체(예를 들어. 트라스투주맙) HER2-양성 암으로부터의 뇌 전이.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "표적 항원" 또는 "뇌 표적"은, 항체 또는 소분자로 표적화될 수 있는, 뇌를 포함하는 CNS에서 발현되는 항원 및/또는 분자를 지칭한다. 그러한 항원 및/또는 분자의 예는 베타-세크레타아제 1(BACE1), 아밀로이드 베타(A베타), 표피 성장 인자 수용체(EGFR), 인간 표피 성장 인자 수용체 2(HER2), 타우, 아포지질단백질 E4(ApoE4), 알파-시누클레인, CD20, 헌팅틴, 프리온 단백질(PrP), 류신 풍부 반복 키나제 2(LRRK2), 파킨, 프레세닐린 1, 프레세닐린 2, 감마 세크레타제, 사멸 수용체 6(DR6), 아밀로이드 전구체 단백질(APP), p75 뉴로트로핀 수용체(p75NTR), 및 카스파제 6을 제한 없이 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표적 항원은 BACE1이다. 일부 바람직한 실시 형태에서, 표적 항원은 타우이다.
용어 "약제학적 제형"은, 그 안에 함유된 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적일 수 있게 하는 형태이며 제형이 투여될 대상체에게 허용불가능하게 독성인 추가의 성분을 함유하지 않는 제제를 지칭한다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제"는 개체에게 투여하는 데 사용하기에 적합한 임의의 물질을 의미한다. 예를 들어, 약제학적으로 허용가능한 담체는 멸균 수용액, 예컨대 포스페이트 완충 식염수(PBS) 또는 주사용수일 수 있다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, "약제학적으로 허용가능한 염"은 화합물, 예컨대 올리고머 화합물 또는 올리고뉴클레오티드의 생리학적 및 약제학적으로 허용가능한 염, 즉, 모 화합물의 원하는 생물학적 활성을 보유하며, 이에 바람직하지 않은 독성 효과를 부여하지 않는 염을 의미한다.
본 출원에 사용하기 위한 약제학적으로 허용가능한 산성/음이온성 염은 아세테이트, 벤젠설포네이트, 벤조에이트, 바이카르보네이트, 바이타르트레이트, 브로마이드, 칼슘 에데테이트, 캄실레이트, 카르보네이트, 클로라이드, 시트레이트, 다이하이드로클로라이드, 에데테이트, 에디실레이트, 에스톨레이트, 에실레이트, 푸마레이트, 글리셉테이트, 글루코네이트, 글루타메이트, 글리콜릴아르사닐레이트, 헥실레조시네이트, 하이드라바민, 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 하이드록시나프토에이트, 요오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 락토바이오네이트, 말레이트, 말레에이트, 만델레이트, 메실레이트, 메틸브로마이드, 메틸니트레이트, 메틸설페이트, 뮤케이트, 나프실레이트, 니트레이트, 파모에이트, 판토테네이트, 포스페이트/다이포스페이트, 폴리갈락투로네이트, 살리실레이트, 스테아레이트, 서브아세테이트, 석시네이트, 설페이트, 탄네이트, 타르트레이트, 테오클레이트, 토실레이트, 및 트라이에티오다이드를 포함하며 이로 제한되지 않는다. 유기 또는 무기 산은 또한 요오드화수소산, 과염소산, 황산, 인산, 프로피온산, 글리콜산, 메탄설폰산, 하이드록시에탄설폰산, 옥살산, 2-나프탈렌설폰산, p-톨루엔설폰산, 사이클로헥산설팜산, 사카린산 또는 트라이플루오로아세트산을 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 약제학적으로 허용되는 염기성/양이온성 염은 알루미늄, 2-아미노-2-하이드록시메틸-프로판-1,3-다이올(트리스(하이드록시메틸)아미노메탄, 트로메탄 또는 "TRIS"로도 알려져 있음), 암모니아, 벤자틴, t-부틸아민, 칼슘, 클로로프로카인, 콜린, 사이클로헥실아민, 다이에탄올아민, 에틸렌다이아민, 리튬, L-라이신, 마그네슘, 메글루민, N-메틸-D-글루카민, 피페리딘, 칼륨, 프로카인, 퀴닌, 나트륨, 트라이에탄올아민, 또는 아연을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에 사용되는 바와 같이, 대상체에 대한 2가지 이상의 요법의 투여와 관련하여 용어 "병용하여"는 하나 초과의 요법의 사용을 지칭한다. 용어 "병용하여"의 사용은 요법이 대상체에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 대상체에게 제2 요법을 투여하기 전에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 전에), 그와 동시에, 또는 그 후에(예를 들어, 5분, 15분, 30분, 45분, 1시간, 2시간, 4시간, 6시간, 12시간, 16시간, 24시간, 48시간, 72시간, 96시간, 1주, 2주, 3주, 4주, 5주, 6주, 8주, 또는 12주 후에) 제1 요법(예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물)이 투여될 수 있다.
인간화 항-PHF-타우 항체
일반적인 일 태양에서, 본 출원은 PHF-타우에 결합하는 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 그러한 항-PHF-타우 항체는 PHF-타우 상의 인산화된 에피토프에 결합하거나 또는 PHF-타우 상의 비-인산화된 에피토프에 결합하는 특성을 가질 수 있다. 항-PHF-타우 항체는 치료제로서, 그리고 생물학적 샘플 내의(예를 들어, 조직 또는 세포 내의) PHF- 타우를 검출하기 위한 연구 시약 또는 진단 시약으로서 유용할 수 있다.
특정 태양에 따르면, 본 출원은 타우 단백질의 C-말단 도메인 내의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하는 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖거나 그 안에 있는 타우 단백질의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하며, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 PHF-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합한다. 바람직하게는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어지거나 그 안에 있는 타우 단백질의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하며, 여기서 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 PHF-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 타우 단백질의 에피토프는 타우 단백질의 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 중 하나 이상을 포함하지만, 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 모두를 포함하지는 않는다.
인간화 항체는, 인간 항체(수용자 항체로 지칭됨)로부터 실질적으로 유래하는 가변 영역 프레임워크 잔기 및 마우스-항체(공여자 면역글로불린으로 지칭됨)로부터 실질적으로 유래하는 상보성 결정 영역을 갖는다. 문헌[Queen et al., Proc. Natl. Acad . Sci . USA. 86:10029-10033, 1989], WO 90/07861호, US5693762호, US5693761호, US5585089호, US5530101호, 및 Us5225539호를 참조한다. 존재하는 경우, 불변 영역(들)은 또한 인간 면역글로불린으로부터 실질적으로 또는 전체적으로 유래한다. 인간 가변 도메인은 통상, 프레임워크 서열이 CDR의 유래가 되는 뮤린 가변 영역 도메인과 높은 서열 동일성 정도를 나타내는 인간 항체로부터 선택된다. 중쇄 및 경쇄 가변 영역 프레임워크 잔기는 동일하거나 상이한 인간 항체 서열로부터 유래될 수 있다. 인간 항체 서열은 천연 발생 인간 항체의 서열일 수 있거나, 또는 몇몇 인간 항체의 컨센서스 서열일 수 있다. 국제 특허 출원 공개 WO 92/22653호를 참조한다. 인간 가변 영역 프레임워크 잔기로부터의 소정의 아미노산은 CDR 입체구조 및/또는 항원에 대한 결합에 미치는 그들의 가능한 영향에 기초하여 치환을 위해 선택된다. 그러한 가능한 영향의 조사는 모델링, 특정 위치에서의 아미노산의 특징 검사, 또는 특정 아미노산의 치환 또는 돌연변이생성의 효과의 경험적 관찰에 의해 행해진다.
예를 들어, 아미노산이 뮤린 가변 영역 프레임워크 잔기와 선택된 인간 가변 영역 프레임워크 잔기 사이에서 상이할 때, 인간 프레임워크 아미노산은 마우스 항체로부터의 동등한 프레임워크 아미노산에 의해 통상 치환되어야 하는데, 이는, 그러한 아미노산이 하기와 같을 것이 합리적으로 예상될 때 행해진다: (1) 항원에 직접 비공유적으로 결합하거나, (2) CDR 영역에 인접하거나, (3) CDR 영역과 달리 상호작용하거나(예를 들어, CDR 영역의 약 6 옹스트롬 이내에 존재함), 또는 (4) VL-VH 계면에 참여함.
치환에 대한 다른 후보는 그 위치에서의 인간 면역글로불린에 대해 통상적이지 않은 수용자 인간 프레임워크 아미노산이다. 이들 아미노산은 마우스 공여자 항체의 동등한 위치로부터의 또는 더 전형적인 인간 면역글로불린의 동등한 위치로부터의 아미노산으로 치환될 수 있다. 인간화 면역글로불린의 가변 영역 프레임워크는 인간 가변 영역 프레임워크 서열 또는 그러한 서열의 컨센서스와 적어도 85%의 서열 동일성을 통상 나타낸다. 예시적인 프레임워크 치환은, 예를 들어, 하기 실시예 1에 기재된 것들을 포함한다.
항체 인간화는 잘 알려진 방법, 예컨대 특이성 결정 잔기 재표면화(SDRR: specificity determining residues resurfacing)(US2010/0261620호), 재표면화(문헌[Padlan et al., Mol. Immunol. 28:489-98, 1991]), 수퍼 인간화(WO 04/006955호), 및 인간 스트링 함량 최적화(US7657380호)를 사용하여 수행할 수 있다. 이식 또는 인간화에 유용한 인간 프레임워크 서열은 당업자에 의해 관련 데이터베이스로부터 선택될 수 있다. 선택된 프레임워크는 문헌[Queen et al., 1989, Id]에 개시된 것들과 같은 기법에 의해 결합 친화도를 보존하거나 향상시키도록 추가로 변형될 수 있다. 특정 실시 형태에 따르면, 마우스 모 항체로부터의 항-PHF-타우 항체를 인간화하기 위한 방법은 하기 실시예 1에 기재된 것들을 포함한다.
본 출원의 항체는 다양한 기법에 의해, 예를 들어 하이브리도마 방법(문헌[Kohler and Milstein, Nature. 256:495-7, 1975])에 의해 생성될 수 있다. 수용자 항체(전형적으로 다른 포유동물 종, 예컨대 인간)로부터 유래된 경쇄 및 중쇄 불변 영역과 회합된 공여자 항체(전형적으로 뮤린)로부터 유래된 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 포함하는 키메라 단일클론 항체는 US4816567호에 개시된 방법으로 제조될 수 있다. 비-인간 공여자 면역글로불린(전형적으로 뮤린)으로부터 유래된 CDR을 갖고 분자의 나머지 면역글로불린-유래 부분이 하나 이상의 인간 면역글로불린으로부터 유래된 CDR-이식 단일클론 항체는 US5225539호에 개시된 것과 같은 당업자에게 알려져 있는 기법에 의해 제조될 수 있다. 임의의 비-인간 서열이 결여된 완전 인간 단일클론 항체는 문헌[Lonberg et al., Nature. 368:856-9, 1994]; 문헌[Fishwild et al., Nat Biotechnol. 14:845-51, 1996]; 및 문헌[Mendez et al., Nat Genet. 15:146-56, 1997]에 언급된 기법에 의해 인간 면역글로불린 유전자이식 마우스로부터 제조될 수 있다. 인간 단일클론 항체는 또한 파지 디스플레이 라이브러리로부터 제조되고 최적화될 수 있다(예를 들어, 문헌[Knappik et al., J Mol Biol. 296:57-86, 2000]; 문헌[Krebs et al., J Immunol Methods. 254:67-84, 2001]; 문헌[Shi et al., J Mol Biol. 397:385-96, 2010] 참조).
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 7 또는 14, 8, 및 9의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며; 상기 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 PHF-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합하고, 상기 중쇄 가변 영역 도메인 및 상기 경쇄 가변 영역 도메인 내의 프레임워크 영역은 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 12 또는 18과 80% 이상, 바람직하게는 85% 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 13, 19, 또는 23과 80% 이상, 바람직하게는 85% 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 12 또는 18과 80% 이상, 바람직하게는 85% 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13, 19, 또는 23과 80% 이상, 바람직하게는 85% 또는 90% 이상, 더욱 바람직하게는 95% 이상, 가장 바람직하게는 100% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 19의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a) 서열 번호 15 또는 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄;
(b) 각각 독립적으로 서열 번호 16, 21, 또는 24, 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 2개의 경쇄; 및
(c) 서열 번호 17 또는 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄.
다른 특정 태양에 따르면, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(b) 서열 번호 61 또는 62의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄; 및
(c) 각각 서열 번호 16 또는 24, 또는 21 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 15의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 15의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체는 서열 번호 61의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 중쇄, 및 서열 번호 16 또는 24의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체는 서열 번호 62의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 중쇄, 및 서열 번호 21 또는 60의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄를 포함한다.
일부 실시 형태에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 5×10-9 M 이하의 해리 상수(KD), 바람직하게는 1×10-9 M 이하 또는 1×10-10 M 이하의 KD로 PHF-타우에 결합하며, 여기서 KD는 표면 플라즈몬 공명 분석에 의해, 예컨대 Biacore 또는 ProteOn 시스템을 사용함으로써 측정된다.
PHF-타우에 결합하는 인간화 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 알려져 있고 본 명세서에 기재된 바와 같은 방법에 의해 특성화될 수 있다. PHF-타우에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 Biacore, ELISA, 및 FACS 분석을 포함하는 친화도 및 특이성 검정; 면역조직화학 분석; 타우 시딩을 억제함에 있어서 항체의 효능을 결정하기 위한 시험관내 세포 검정 및 생체내 주사 검정; 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 및 항체의 보체 의존성 세포독성(CDC) 활성의 존재를 검출하기 위한 세포 세포독성 검정 등을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 특정 실시 형태에 따르면, PHF-타우에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하기 위한 방법은 하기 실시예에 기재된 것들을 포함한다. PHF-타우에 결합하지만 대조군 타우에는 결합하지 않는 인간화 항체의 예시적인 마우스 모 항체는 항체 PT3이며, 이는 미국 특허 제9,371,376호에 기재되어 있고, 이의 내용은 전체적으로 본 명세서에 참고로 포함된다.
몇몇 잘 알려진 방법론이 본 출원의 항체의 결합 에피토프를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 개별 성분 둘 모두의 구조가 알려져 있는 경우에, 컴퓨터 모의실험(in silico) 단백질-단백질 도킹(docking)이 양립가능한 상호작용 부위를 확인하기 위해 수행될 수 있다. 항원 및 항체 복합체를 사용하여 수소-중수소(H/D) 교환을 수행하여, 항체에 의해 결합되는 항원 상의 영역을 맵핑할 수 있다. 항원의 세그먼트 및 점 돌연변이생성을 사용하여, 항체 결합에 중요한 아미노산의 위치를 찾을 수 있다. 항체-항원 복합체의 공결정(co-crystal) 구조를 사용하여, 에피토프 및 파라토프에 기여하는 잔기를 확인한다.
본 출원의 항체는 이중특이성 또는 다중특이성일 수 있다. 예시적인 이중특이성 항체는 PHF-타우 상의 2개의 별개의 에피토프에 결합할 수 있거나 PHF-타우와 아밀로이드 베타(A베타)에 결합할 수 있다. 다른 예시적인 이중특이성 항체는 PHF-타우 및 내인성 혈액-뇌 장벽 트랜스사이토시스(transcytosis) 수용체, 예컨대 인슐린 수용체, 트랜스페린 수용체, 인슐린-유사 성장 인자-1 수용체, 및 지질단백질 수용체에 결합할 수 있다. 예시적인 항체는 IgG1 유형의 것이다.
당업자에게 알려진 기법에 의한 Fc 변형을 통해 본 출원의 항체의 면역 이펙터 특성이 향상되거나 침묵될 수 있다. 예를 들어, Fc 이펙터 기능, 예컨대 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC), 식세포작용, 세포 표면 수용체(예를 들어, B 세포 수용체; BCR)의 하향 조절 등이, 이들 활성을 담당하는 Fc 내의 잔기를 변형함으로써 제공 및/또는 제어될 수 있다. 항체 반감기를 연장하는 Fc 도메인 내의 잔기를 돌연변이시킴으로써 약동학적 특성이 또한 향상될 수 있다(문헌[Strohl, Curr Opin Biotechnol. 20:685-91, 2009]).
항-PHF-타우 항체는 이펙터 기능을 갖지 않거나 최소한의 이펙터 기능을 갖지만, FcRn과 결합하는 그의 능력을 보유하며, 이의 결합은 항체가 연장된 생체내 반감기를 갖게 하는 1차 수단일 수 있다. 항체에 대한 FcγR 또는 보체(예를 들어, C1q)의 결합은 소위 Fc 부분 결합 부위에서 정의된 단백질-단백질 상호작용에 의해 야기된다. 그러한 Fc 부분 결합 부위는 당업계에 알려져 있다. 그러한 Fc 부분 결합 부위는, 예를 들어, 아미노산 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329(카바트의 EU 인덱스에 따른 넘버링)를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 항-PHF-타우 항체는 이펙터 기능을 제거하기 위해 하나 이상의 Fc 부분 결합 부위에 하나 이상의 치환을 함유한다. 예를 들어, 항-PHF-타우 항체는 하기 치환 중 하나 이상을 함유하는 Fc 영역을 함유할 수 있다: 잔기 233에서 글루타메이트 대신 프롤린으로의 치환, 잔기 234에서 페닐알라닌 대신 알라닌 또는 발린으로의 치환, 및 잔기 235에서 류신 대신 알라닌 또는 글루타메이트로의 치환(EU 넘버링, 문헌[Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. U.S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda, Md., NIH Publication no. 91-3242]). 바람직하게는, 관심 항체는 L234A, L235A, 및 P331S 중 1, 2, 또는 3개의 돌연변이를 함유한다(EU 넘버링, 카바트).
하위부류 IgG1, IgG2, 및 IgG3의 항체는 통상적으로 C1q 및 C3 결합을 포함하는 보체 활성화를 나타내는 반면, IgG4는 보체 시스템을 활성화하지 않고 C1q 및/또는 C3에 결합하지 않는다. 인간 IgG4 Fc 영역은 다른 IgG 아형과 대비하여 FcγR 및 보체 인자와 결합하는 능력을 감소시켰다. 바람직하게는, 본 출원의 항-PHF-타우 항체는 인간 IgG4 Fc 영역으로부터 유래된 Fc 영역을 포함한다. 더욱 바람직하게는, Fc 영역은 이펙터 기능을 제거하는 치환을 갖는 인간 IgG4 Fc 영역을 함유한다. 예를 들어, 잔기 297(EU 넘버링)에서 Asn 대신 Ala로 치환함으로써 IgG4 Fc 영역 내의 N-연결된 글리코실화 부위를 제거하는 것은 잔류 이펙터 활성이 제거됨을 보장하는 다른 방법이다.
추가로, 본 출원의 항체는 글리코실화, 이성질체화, 탈글리코실화, 또는 비-천연 발생 공유적 변형, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 모이어티의 첨가 및 지질화와 같은 과정에 의해 번역-후 변형될 수 있다. 그러한 변형은 생체내에서 또는 시험관내에서 일어날 수 있다. 예를 들어, 본 출원의 항체는 폴리에틸렌 글리콜에 접합되어(PEG화되어), 이들의 약동학적 프로파일을 개선할 수 있다. 접합은 당업자에게 알려져 있는 기법에 의해 수행될 수 있다. 치료 항체와 PEG의 접합은 기능을 방해하지 않으면서, 약력학을 향상시키는 것으로 나타났다(문헌[Knight et al., Platelets. 15:409-18, 2004]; 문헌[Leong et al., Cytokine . 16:106-19, 2001]; 문헌[Yang et al., Protein Eng. 16:761-70, 2003]).
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드에 관한 것이다. 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 단백질의 코딩 서열을 변화시킬(예를 들어, 대체, 결실, 삽입 등을 할) 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 따라서, 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않으면서 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열을 변경할 수 있음을 당업자는 이해할 것이다. 예시적인 단리된 폴리뉴클레오티드는 실시예에 기재된 면역글로불린 중쇄 및 경쇄(예를 들어, 서열 번호 15 내지 17, 20 내지 22, 24, 및 60 내지 62)를 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드, 및 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)(예를 들어, 서열 번호 12, 13, 18, 19, 23, 및 59)을 포함하는 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드이다. 주어진 발현 시스템에서의 유전자 코드의 축퇴성(degeneracy) 또는 코돈 선호도를 고려하여, 본 출원의 항체를 인코딩하는 다른 폴리뉴클레오티드가 또한 본 출원의 범주 내에 있다. 본 출원의 단리된 핵산은 잘 알려진 재조합 기법 또는 합성 기법을 사용하여 제조할 수 있다. 단일클론 항체를 암호화하는 DNA는 당업계에 공지된 방법을 사용하여 용이하게 단리되고 서열분석된다. 하이브리도마가 생성되는 경우, 그러한 세포는 그러한 DNA의 공급원으로서의 역할을 할 수 있다. 대안적으로, 코딩 서열과 번역 산물이 연결되어 있는 디스플레이 기법, 예컨대 파지 또는 리보솜 디스플레이 라이브러리가 사용될 수 있다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터에 관한 것이다. 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터, 또는 바이러스 벡터와 같은, 본 발명을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 벡터가 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 벡터는 재조합 발현 벡터, 예컨대 플라스미드이다. 벡터는 발현 벡터의 통상적인 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 요소, 종결자, 인핸서, 선택 마커, 및 복제 기점을 포함할 수 있다. 프로모터는 구성적, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 세포에 핵산을 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터가 당업계에 알려져 있으며, 세포에서의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생성을 위해 본 발명에 사용될 수 있다. 통상적인 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성을 사용하여 본 출원의 실시 형태에 따른 재조합 발현 벡터를 생성할 수 있다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 개시내용을 고려하여 당업자에게 알려진 임의의 숙주 세포가 본 출원의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 사용될 수 있다. 그러한 숙주 세포는 진핵 세포, 세균 세포, 식물 세포 또는 고세균(archeal) 세포일 수 있다. 예시적인 진핵 세포는 포유류, 곤충, 조류 또는 다른 동물 기원의 것일 수 있다. 포유류 진핵 세포는 불멸화 세포주, 예컨대 하이브리도마 또는 골수종 세포주, 예컨대 SP2/0(미국 버지니아주 머내서스 소재의 ATCC(American Type Culture Collection), CRL-1581), NS0(영국 윌트셔주 솔즈베리 소재의 ECACC(European Collection of Cell Cultures), ECACC No. 85110503), FO(ATCC CRL-1646) 및 Ag653(ATCC CRL-1580) 뮤린 세포주를 포함한다. 예시적인 인간 골수종 세포주는 U266(ATTC CRL-TIB-196)이다. 다른 유용한 세포주는, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 예컨대 CHO-K1 SV(Lonza Biologics), CHO-K1(ATCC CRL-61, Invitrogen), 또는 DG44로부터 유래된 것들을 포함한다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 방법으로서, 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생성하는 조건 하에 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포를 배양하는 단계, 및 세포 또는 세포 배양물로부터(예를 들어, 상청액으로부터) 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 회수하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 세포로부터 수집되고, 당업계에 알려진 통상적인 기법에 따라 정제될 수 있다.
항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 갖는 접합체 및 융합 작제물
혈액-뇌 장벽(BBB)은 유해한 물질이 뇌에 진입하는 것을 방지하고 뇌 항상성에 필수적이지만, 그것은 뇌에 약물을 효율적으로 전달함에 있어서 강력한 장애물을 제시한다. 수용체-매개 트랜스사이토시스(RMT)의 사용을 포함하여, 치료적 단일클론 항체(mAb)의 뇌 전달을 개선하기 위해 많은 접근법이 연구되어 왔다. RMT는 뇌 내피 세포를 통한 수송을 위해 BBB의 내강 측면 상에 풍부하게 발현되는 수용체를 이용한다. 뇌 내로의 치료용 mAb의 전달을 위해 임상적으로 실현가능한 플랫폼을 생성하기 위한 이전의 노력은 트랜스사이토시스의 효율을 증가시키기 위한 항체 조작에 집중되었으며, 결합의 원자가, pH 의존성, 및 친화도에 대한 관찰을 통해 소득이 있었다(문헌[Goulatis et al., 2017, Curr Opin Struct Biol 45: 109-115]에 검토됨). 그러나, 표적-매개 약물 처분(TMDD: target-mediated drug disposition)으로부터의 신속한 말초 클리어런스 및 급성 망상적혈구 고갈로부터의 안전성에 의해 비-인간 영장류(NHP) 및 클리닉에 대한 적용은 제한되어 왔다(문헌[Gadkar K, et al. Eur J Pharm Biopharm. 2016; 101: 53-61]).
일반적인 태양에서, 본 출원은 뇌 전달을 위해 최적화된 플랫폼에 커플링된 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 플랫폼은 CD98 또는 TfR 결합 분자, 특히, CD98 또는 TfR, 바람직하게는 인간 CD98 중쇄(huCD98hc) 또는 인간 TfR1(huTfR1)에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용한다. 본 발명자들은, 의외로, 최적 값이 전형적인 항체-표적 상호작용에서 예상할 수 있는 바와 같이 단순히 가장 빠른 온-속도 ka 값 및 가장 느린 오프-속도 kd 값이 아니라는 것을 발견하였다. 즉, 이 시스템의 경우, 상대적으로 높은 속도에서 CD98 또는 TfR과 "결합"하고 회합한 후에 CD98 또는 TfR로부터 더 느리게 해리되어 항체-표적 복합체의 최장 수명을 갖는 분자를 사용하기를 반드시 원하지는 않을 것이다. 대신에, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 의해 효율적으로 전달되기 위해서는 제제(예컨대, mAb)의 최적 뇌 PK 및 PD를 위해 너무 빠르지도 않고 너무 느리지도 않은 중성 오프-속도가 필요하다. 또한, 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합이 증가된 조작된 항체 불변 영역은 감소된 말초 클리어런스 및 뇌 농도의 향상을 유발하였음을 발견하였다.
Fc 감마 수용체(FcγR)에 대한 결합을 제거하고 이펙터 기능 매개 독성을 피하기 위해 추가의 Fc 돌연변이가 도입된다. 고친화도 항-타우 결합 mAb와 커플링될 경우, 이들 돌연변이는 미세교세포 흡수 및 표적 분해를 위해 신규한 비-FcγR 기전을 통해 항체 의존성 포식작용(ADP)을 유지하면서 주변부에서 이펙터 기능 매개 독성을 방지한다. 이 기전은 CD98 또는 TfR을 통한 내재화에 의존하며, 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 전통적인 FcγR 매개 ADP보다 표적 분해를 촉진함에 있어서 더 효율적이다.
바람직하게는, 본 출원의 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 pH-민감성이며, 예를 들어, 그것은 상이한 pH에서 CD98 또는 TFR에 대해 상이한 결합 친화도를 갖는다. 예를 들어, 본 출원의 항-CD98 또는 항-TfR 항체는 생리학적 pH(예를 들어, pH 7.4)와 같은 중성 pH에서 CD98 또는 TfR에 고친화도로 결합할 수 있지만, 엔도솜 구획 내로 내재화되면, 상대적으로 더 낮은 pH(pH 5 내지 6.0)와 같은 산성 pH에서 CD98 또는 TfR로부터 해리된다. 친화도는 2개의 모이어티, 예를 들어, 항체와 항원 사이의 결합의 강도의 척도이다. 친화도는 몇몇 방식으로 표현될 수 있다. 일 방식은 상호작용의 해리 상수(KD)의 관점이다. KD는 평형 투석을 포함하는 일상적인 방법에 의해, 또는 항원-항체 해리 및 회합의 속도, 각각 koff(kd 또는 kdis) 및 kon(또는 ka) 속도를 직접 측정하는 단계에 의해 측정될 수 있다(예를 들어, 문헌[Nature, 1993 361:186-87] 참조). koff/kon 의 비는 친화도에 관련되지 않은 모든 파라미터를 소거하며, 해리 상수 KD와 동일하다(일반적으로, 문헌[Davies et al., Annual Rev Biochem, 1990 59:439-473] 참조). 따라서, 더 작은 KD는 더 높은 친화도를 의미한다. 친화도의 다른 표현은 Ka이며, 이는 KD의 역수, 또는 kon/koff이다. 따라서, 더 높은 Ka는 더 높은 친화도를 의미한다. 예를 들어, 본 출원의 조성물 및/또는 방법에 사용하기 위한 CD98 또는 TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 생리학적 pH(예를 들어, pH 7.4)와 같은 중성 pH(예를 들어, pH 6.8 내지 7.8)에서 1 나노몰 농도(nM, 10-9 M) 이상의 KD로 CD98 또는 TfR에 결합하고, pH 5.0과 같은 산성 pH(예를 들어, pH 4.5 내지 6.5)에서 10-4 초-1 이상의 kdis로 CD98 또는 TfR로부터 해리되는 항체 또는 이의 단편일 수 있다.
따라서, 본 출원의 일반적인 태양은, 뇌로의 전달을 필요로 하는 대상체의 뇌로의 전달을 위한, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 커플링된 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이며, 여기서 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 1 nM 이상, 바람직하게는 1 nM 내지 500 nM의 해리 상수 KD 및 산성 pH, 바람직하게는 pH 5에서 10-4 초-1 이상, 바람직하게는 10-4 내지 10-1 초-1의 오프-속도 상수 kd로 CD98, 바람직하게는 CD98hc, 더욱 바람직하게는 인간 CD98hc, 또는 TfR, 바람직하게는 TfR1, 더욱 바람직하게는 인간 TfR1에 결합한다.
일부 실시 형태에서, 본 출원의 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 2 x 10-2 내지 2 x 10-4 초-1, 예컨대 2 x 10-2, 1 x 10-2, 9 x 10-3, 8 x 10-3, 7 x 10-3, 6 x 10-3, 5 x 10-3, 4 x 10-3, 3 x 10-3, 2 x 10-3, 1 x 10-3, 9 x 10-4, 8 x 10-4, 7 x 10-4, 6 x 10-4, 5 x 10-4, 4 x 10-4, 3 x 10-4, 2 x 10-4 초-1, 또는 그 사이의 임의의 값의 오프-속도 상수 kd를 갖는다.
일부 실시 형태에서, 인간 CD98 또는 TfR에 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 가요성 링커를 통해 경쇄 가변 영역(LV)에 공유적으로 연결된 중쇄 가변 영역(HV)을 포함하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)이다. scFv는 불변 영역의 제거 및 링커의 도입에도 불구하고 원래의 면역글로불린의 특이성을 보유할 수 있다. scFv에서, 도메인의 순서는 HV-링커- LV, 또는 LV-링커- HV일 수 있다. 링커는 상용성 길이 및 심각한 입체 간섭 없이 scFv의 가변 도메인을 가교화하는 입체배좌를 제공하도록 드 노보 설계되거나 알려진 단백질 구조로부터 유도돨 수 있다. 링커는 10 내지 약 25개 아미노산의 길이를 가질 수 있다. 바람직하게는, 링커는 도메인이 폴딩되고 온전한 항원-결합 부위를 형성하는 능력에 영향을 미치지 않으면서 가변 도메인의 카르복시 말단과 다른 도메인의 아미노 말단 사이에 약 3.5 nm(35 ㅕ)에 걸쳐 있는 펩티드 링커이다(전체적으로 본 명세서에 참고로 포함되는 문헌[Huston et al., Methods in Enzymology, vol. 203, pp. 46-88, 1991]). 단백질 폴딩 전체에 걸쳐 가변 도메인 내에 또는 그 사이에 펩티드가 삽입되는 것을 피하기 위해, 링커는 바람직하게는 친수성 서열을 포함한다(문헌[Argos, Journal of Molecular Biology, vol. 211, no. 4, pp. 943-958, 1990]). 예를 들어, 링커는 Gly 및 Ser 잔기를 포함할 수 있고/있거나 용해도를 향상시키기 위해 산재된 Glu, Thr, 및 Lys와 같은 하전된 잔기와 함께 포함할 수 있다. 일부 실시 형태에서, 링커는 서열 번호 50(GGGSGGSGGCPPCGGSGG) 또는 서열 번호 51(GTEGKSSGSGSESKST)의 아미노산 서열을 갖는다. 본 개시내용을 고려하여 임의의 다른 적합한 링커가 또한 사용될 수 있다.
일부 실시 형태에서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 26, 27, 28 또는 33, 29, 30, 및 31의 아미노산 서열을 갖거나;
(b) 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 35, 36, 37, 38, 39, 및 40의 아미노산 서열을 갖는다.
일부 실시 형태에서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 링커를 통해 경쇄 가변 영역에 공유적으로 연결된 중쇄 가변 영역을 포함하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)이며, 바람직하게는, 링커는 서열번호 50 또는 51의 아미노산 서열을 갖고, 더욱 바람직하게는, scFv는 서열 번호 25, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 또는 서열 번호 41의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
바람직한 실시 형태에서, CD98, 바람직하게는 CD98hc, 더욱 바람직하게는 인간 CD98hc에 결합하거나 TfR, 바람직하게는 TfR1, 더욱 바람직하게는 인간 TfR1에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 유리 시스테인을 함유하지 않는다.
항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편(예컨대, scFv 단편)은 본 개시내용을 고려하여 당업계에서 적합한 방법을 사용하여 생성될 수 있다. 예를 들어, 항체 단편의 생성을 위해 적합한 조건 하에 재조합 숙주 세포(예컨대, 박테리아, 효모, 또는 포유류 세포)를 성장시키는 단계 및 세포 배양물로부터 단편을 회수하는 단계에 의해 scFv 단편을 재조합적으로 생성할 수 있다. 예시적인 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은, 예를 들어, US 63/036,020호 및 US 63/035,961호에서 발견되며, 이들의 개시내용은 전체적으로 본 명세서에 포함된다.
본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 비경구로, 예를 들어 정맥내로, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결되거나 조합된 형태로 전달될 수 있다. 예를 들어, 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 비-공유적으로 부착될 수 있다. 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 또한 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 공유적으로 부착되어 접합체를 형성할 수 있다. 소정 실시 형태에서, 접합은 단백질 융합체의 작제에 의한 것이다(즉, 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 인코딩하는 2개의 유전자의 유전자 융합 및 단일 단백질로서의 발현에 의함). 본 개시내용을 고려하여 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 CD98 또는 TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 연결하기 위해 알려진 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 문헌[Wu et al., Nat Biotechnol., 23(9):1137-46, 2005]; 문헌[Trail et al., Cancer Immunol Immunother., 52(5):328-37, 2003]; 문헌[Saito et al., Adv Drug Deliv Rev., 55(2):199-215, 2003]; 문헌[Jones et al., Pharmaceutical Research, 24(9):1759-1771, 2007]을 참조한다.
일부 실시 형태에서, 뇌에 전달될 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편 및 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 비-펩티드 링커 또는 펩티드 링커를 통해 함께 공유적으로 연결될 수 있다(또는 접합됨). 비-펩티드 링커의 예는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 에틸렌 글리콜과 프로필렌 글리콜의 공중합체, 폴리옥시에틸화 폴리올, 폴리비닐 알코올, 다당류, 덱스트란, 폴리비닐 에테르, 생분해성 중합체, 중합된 지질, 키틴, 및 히알루론산, 또는 이들의 유도체, 또는 이들의 조합을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 펩티드 링커는 펩티드 결합 또는 이의 유도체에 의해 연결된 1 내지 50개의 아미노산으로 이루어진 펩티드 사슬일 수 있으며, 이의 N-말단 및 C-말단은 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 공유적으로 연결될 수 있다.
소정 실시 형태에서, 본 출원의 접합체는 PHF-타우에 결합하는 제1 항원 결합 영역 및 CD98 또는 TfR에 결합하는 제2 항원 결합 영역을 포함하는 다중-특이성 항체이다. 다중-특이성 항체를 제조하기 위한 기법은 상이한 특이성을 갖는 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 재조합 공동-발현(문헌[Milstein and Cuello, Nature 305: 537, 1983], WO 93/08829호, 및 문헌[Traunecker et al, EMBO J. 10: 3655, 1991] 참조), 및 "노브-인-홀" 조작(예를 들어, 미국 특허 제5,731,168호 참조)을 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 다중-특이성 항체는 또한 정전기 조향 효과(electrostatic steering effect)를 조작하는 단계(WO 2009/089004A1호); 2개 이상의 항체 또는 단편을 가교결합하는 단계(예를 들어, 미국 특허 제4,676,980호, 및 문헌[Brennan et al, Science, 229: 81, 1985] 참조); 류신 지퍼를 사용하는 단계(예를 들어, 문헌[Kostelny et al, J. Immunol., 148(5): 1547-1553,1992] 참조); "다이아바디" 기법을 사용하는 단계(예를 들어, 문헌[Hollinger et al, Proc. Natl. Acad . Sci . USA, 90:6444-6448, 1993] 참조); 단일-사슬 Fv(sFv) 이량체를 사용하는 단계(예를 들어, 문헌[Gruber et al, J. Immunol, 152:5368 (1994)] 참조); 및, 예를 들어, 문헌[Tutt et al. J. Immunol. 147: 60, 1991]에 기재된 바와 같은 삼중특이성 항체를 제조하는 단계에 의해 제조될 수 있다. 본 출원의 다중-특이성 항체는 또한, "Octopus 항체" 또는 "이중-가변 도메인 면역글로불린"(DVD)을 포함하는, 3개 이상의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 항체를 포함한다(예를 들어, US 2006/0025576A1호, 및 문헌[Wu et al. Nature Biotechnology, 25(11):1290-7, 2007] 참조). 본 출원의 다중-특이성 항체는 또한, CD98 또는 TfR뿐만 아니라 뇌 항원(예를 들어, 타우)에 결합하는 항원 결합 영역(예를 들어, US 2008/0069820호 참조)을 포함하는 "이중 작용 Fab" 또는 "DAF"를 포함한다. 일 실시 형태에서, 항체는 항체 단편이며, 그러한 다양한 단편이 본 명세서에 개시된다.
일 실시 형태에서, 본 출원의 다중-특이성 항체는 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 공유적으로 연결된(또는 융합된) 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 융합 작제물이다. 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄 및/또는 중쇄의 카르복시- 및/또는 아미노-말단에 직접 또는 링커를 통해 융합될 수 있다.
일 실시 형태에서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄의 카르복시-말단에 직접 또는 링커를 통해 융합된다.
다른 실시 형태에서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 경쇄의 아미노-말단에 직접 또는 링커를 통해 융합된다.
다른 실시 형태에서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄의 카르복시-말단에 직접 또는 링커를 통해 융합된다.
다른 실시 형태에서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 중쇄의 아미노-말단에 직접 또는 링커를 통해 융합된다.
바람직한 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은, PHF-타우에 결합하는 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2개의 중쇄 중 하나만의 카르복시 말단에, 링커를 통해 공유적으로 연결된 본 출원의 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 바람직하게는 항-huCD98hc scFv 단편 또는 항-huTfR1 scFv 단편을 포함한다. 바람직하게는, 링커는 서열 번호 52(GGAGGA)의 아미노산 서열을 갖는다.
2개의 중쇄(예를 들어, 하나는 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 융합을 갖고 하나는 이를 갖지 않음, 또는 하나는 항-CD98 또는 항-TfR 아암에 대한 Fc를 함유하고 하나는 항-PHF-타우 아암에 대한 Fc를 함유함) 사이의 이종이량체의 형성을 촉진하기 위해, 이종이량체 돌연변이가 2개의 중쇄의 Fc 내로 도입될 수 있다. 그러한 Fc 돌연변이의 예는 Zymework 돌연변이(예를 들어, US10,457,742호 참조) 및 "노브 인 홀" 돌연변이(예를 들어, 문헌[Ridgway et al., Protein Eng ., 9(7): 617-621, 1996] 참조)를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 다른 이종이량체 돌연변이가 또한 본 출원에 사용될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 본 명세서에 기재된 바와 같은 변형된 CH3은 2개의 중쇄 사이의 이종이량체의 형성을 촉진하기 위해 사용된다.
일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2개의 중쇄 각각은, 야생형 CH3 도메인 폴리펩티드와 비교하여, 하나 이상의 이종이량체 돌연변이, 예컨대 변형된 이종이량체 CH3 도메인, 또는 하나 이상의 노브 및 홀 돌연변이를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, L351, F405, 및 Y407에서 아미노산 변형을 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, T366, K392, 및 T394에서 아미노산 변형을 포함하며, 여기서 위치 T350에서의 아미노산 변형은 T350V, T350I, T350L, 또는 T350M이고; 위치 L351에서의 아미노산 변형은 L351Y이고; 위치 F405에서의 아미노산 변형은 F405A, F405V, F405T, 또는 F405S이고; 위치 Y407에서의 아미노산 변형은 Y407V, Y407A, 또는 Y407I이고; 위치 T366에서의 아미노산 변형은 T366L, T366I, T366V, 또는 T366M이고, 위치 K392에서의 아미노산 변형은 K392F, K392L, 또는 K392M이고, 위치 T394에서의 아미노산 변형은 T394W이며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다. 일부 실시 형태에서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V를 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T350V, T366L, K392L, 및 T394W를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T366에서 아미노산 변형을 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T366, L368, 및 Y407에서 아미노산 변형을 포함하며, 여기서 위치 T366에서의 아미노산 변형은 T366W 또는 T366S이고, 위치 L368에서의 아미노산 변형은 L368A이고, 위치 Y407에서의 아미노산 변형은 Y407V이다. 일부 실시 형태에서, 정제 중에 단백질 A 결합을 파괴하고 홀-홀 동종이량체를 제거하기 위해 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 H435R 및 Y436F 아미노산 변형을 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366W를 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, Y407V, H435R, 및 Y436F를 포함한다.
이종이량체 돌연변이에 더하여, 다른 돌연변이가 또한 도입될 수 있다. 일부 실시 형태에서, 융합 작제물 또는 이중특이성 항체의 Fc 영역은 ADCC/CDC를 변경(증가 또는 감소), 바람직하게는 제거하는 하나 이상의 돌연변이(예컨대 본 명세서에 기재된 AAS 돌연변이), 및/또는 융합 작제물 또는 이중특이성 항체의 FcRn에 대한 결합을 변경(증가 또는 감소), 바람직하게는 증가시키는 하나 이상의 돌연변이(예컨대, 본 명세서에 기재된 YTE 돌연변이)를 추가로 포함한다. 일부 실시 형태에서, 융합 작제물 또는 이중특이성 항체 내의 하나 이상의 시스테인 잔기는 다른 아미노산, 예컨대 세린으로 치환된다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 신생아 Fc 수용체(RcRn)에 대한 융합체의 결합을 향상시키는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하며, 바람직하게는 하나 이상의 돌연변이는 산성 pH에서 결합을 향상시키고, 더욱 바람직하게는 Fc는 M252Y/S254T/T256E(YTE) 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다. 일부 실시 형태에서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는 Fc는 위치 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329에서의 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 L234A, L235A, 및 P331S 중 1, 2, 또는 3개의 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
소정 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 하기를 포함한다:
(1) 서열 번호 42 내지 49로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄;
(2) 서열 번호 16, 21, 24, 및 60으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 각각 독립적으로 갖는 2개의 경쇄; 및
(3) 서열 번호 17 및 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열과 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄.
일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다. 일부 실시 형태에서, 본 출원의 융합 작제물은 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함한다.
본 출원의 접합체, 예컨대 다중-특이성 항체 또는 융합 작제물은 본 개시내용을 고려하여 당업계에 알려진 다수의 기술 중 임의의 것에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 그것은 재조합 숙주 세포로부터 발현될 수 있으며, 여기서 융합 작제물 또는 다중-특이성 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 발현 벡터(들)는 표준 기법에 의해 숙주 세포 내로 형질감염된다. 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 숙주 세포일 수 있다.
예시적인 시스템에서, 본 출원의 융합 작제물의 2개의 이종이량체 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 하나 이상의 재조합 발현 벡터는 형질감염 또는 전기천공에 의해 숙주 세포 내로 도입된다. 선택된 형질전환체 숙주 세포는 융합 작제물을 생성하기에 충분한 조건 하에 중쇄 및 경쇄의 발현을 허용하도록 배양되고, 배양 배지로부터 융합 작제물이 회수된다. 표준 분자 생물학 기술을 사용하여 재조합 발현 벡터를 제조하고, 숙주 세포를 형질감염시키고, 형질전환체에 대해 선택하고, 숙주 세포를 배양하고, 배양 배지로부터 단백질 작제물을 회수한다.
본 출원은 본 명세서에 기재된 실시 형태 중 임의의 것 또는 청구항 중 임의의 것에서 융합 작제물 또는 다중특이성 항체의 일부로서 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 아미노산 서열을 인코딩하는 단리된 핵산을 제공한다. 단리된 핵산은 벡터, 바람직하게는 발현 벡터의 부분일 수 있다.
다른 태양에서, 본 출원은 본 명세서에 개시된 벡터로 형질전환된 숙주 세포에 관한 것이다. 일 실시 형태에서, 숙주 세포는 원핵 세포, 예를 들어, E. 콜라이이다. 다른 실시 형태에서, 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어, 원생 세포(protist cell), 동물 세포, 식물 세포, 또는 진균 세포이다. 일 실시 형태에서, 숙주 세포는 CHO, COS, NS0, SP2, PER.C6을 포함하지만 이로 제한되지 않는 포유류 세포, 또는 진균 세포, 예컨대 사카로마이세스 세레비시아에, 또는 곤충 세포, 예컨대 Sf9이다.
약제학적 조성물 및 치료 방법
본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 본 출원의 이의 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물은 뇌 내에 타우의 병리학적 응집을 수반하는 신경퇴행성 질환, 또는 타우병증을 갖는 환자, 예컨대 AD를 앓고 있는 환자에서 증상을 치료하거나, 감소시키거나, 예방하기 위해 사용될 수 있다.
따라서, 다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 타우 시딩의 차단을 필요로 하는 대상체에서 타우 시딩을 차단하는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 본 명세서에 사용되는 바와 같이, "타우 시드"는 세포에 의해 내재화될 경우에, 또는 시험관내에서 단량체 타우에 노출될 경우에 세포내 타우 응집을 핵화시키거나 "시딩"할 수 있는 타우 응집체를 지칭한다. 타우 시딩 활성은 본 명세서에 기재된 바와 같이 세포 타우 응집 검정에서 평가될 수 있다(예를 들어, 전체적으로 참고로 포함된 미국 특허 제9,834,596호를 또한 참조함).
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 질환, 장애, 또는 병태, 예컨대 타우병증의 증상의 치료 또는 감소를 필요로 하는 대상체에서 질환, 장애, 또는 병태, 예컨대 타우병증의 증상을 치료 또는 감소시키는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산의 감소를 필요로 하는 대상체에서 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산을 감소시키는 방법으로서, 본 출원의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
본 출원의 실시 형태에 따르면, 약제학적 조성물은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물의 치료적 유효량을 포함한다. 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물과 관련하여 본 명세서에 사용되는 바와 같이, 치료적 유효량은 질환, 장애, 또는 병태의 치료를 유발하거나; 질환, 장애, 또는 병태의 진행을 예방하거나 둔화시키거나; 면역 질환, 장애, 또는 병태와 관련된 증상을 감소시키거나 완전히 완화하는, 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물의 양을 의미한다.
특정 실시 형태에 따르면, 치료적 유효량은 하기 효과 중 하나, 둘, 셋, 넷, 또는 그 이상을 달성하기에 충분한 요법의 양을 지칭한다: (i) 치료하고자 질환, 장애 또는 상태, 또는 이와 관련된 증상의 중증도를 감소 또는 개선함; (ii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 지속기간을 감소시킴; (iii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 진행을 예방함; (iv) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 퇴행을 야기함; (v) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 발생 또는 발병을 예방함; (vi) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상의 재발을 예방함; (vii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 입원을 감소시킴; (viii) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 입원 기간을 감소시킴; (ix) 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 갖는 대상체의 생존율을 증가시킴; (xi) 대상체에서 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 또는 이와 관련된 증상을 억제하거나 감소시킴; 및/또는 (xii) 다른 요법의 예방적 또는 치료적 효과(들)를 향상시키거나 개선함.
특정 실시 형태에 따라, 치료하고자 하는 질병, 장애, 또는 질환은 타우병증이다. 더 특정한 실시 형태에 따르면, 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환은 가족성 알츠하이머병, 산발성 알츠하이머병, 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 진행성 핵상 마비, 피질기저핵 변성, 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 농축체 단독 치매, 석회화를 동반하는 광범위 신경섬유 매듭, 은친화성 과립성 치매, 근위축성 측삭 경화증 파킨슨증-치매 복합군, 다운 증후군, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 할러포르텐-스파츠병, 봉입체 근염, 크로이츠펠트-야콥병, 다계통 위축증, C형 니만-픽병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 아급성 경화성 범뇌염, 근긴장성 이영양증, 신경섬유 매듭을 동반하는 비-괌 운동 신경세포병, 뇌염후 파킨슨증, 만성 외상성 뇌병증, 또는 권투선수 치매(복싱병)를 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
타우병증-관련 행동적 표현형은 인지 장애, 조기 인격 변조 및 탈억제, 감정둔마(apathy), 의지결여증(abulia), 무언증, 행위상실증, 보속증(perseveration), 상동성 운동/행동, 과잉구강증(hyperorality), 부조화, 순차적 임무의 계획 또는 체계화 불능, 이기심/무감각, 반사회적 특성, 공감 결여, 말더듬기(halting), 빈번한 착어증 오류를 동반하는 비문법적 담화(그러나 상대적으로 보존된 이해력), 손상된 이해력 및 단어 찾기 장애, 서서히 진행하는 보행 불안정성, 후방돌진, 동결, 자주 넘어짐, 비-레보도파 반응성 체간 강직(non-levodopa responsive axial rigidity), 핵상 주시 마비, 사각파 단수축, 느린 수직 단속성 안구운동(slow vertical saccade), 가성 연수 마비, 사지 실행증, 근육 긴장이상, 피질성 감각상실, 및 진전증을 포함하지만 이로 한정되지 않는다.
치료에 적합한 환자는 AD 또는 다른 타우병증의 위험이 있는 무증상 개체뿐만 아니라, 현재 증상을 나타내는 환자를 포함하지만 이로 한정되지 않는다. 치료에 적합한 환자는 공지된 AD의 유전자적 위험, 예를 들어, AD의 가족력 또는 게놈 내의 유전자적 위험 인자의 존재를 가진 개체를 포함한다. 예시적인 위험 인자는 아밀로이드 전구체 단백질(amyloid precursor protein; APP) 내의, 특히 위치 717 및 위치 670 및 671에서의 돌연변이(각각 하디(Hardy) 및 스웨디시(Swedish) 돌연변이)이다. 다른 위험 인자는 프레세닐린 유전자 PS1 및 PS2 내의 그리고 ApoE4 내의 돌연변이, 고콜레스테롤혈증 또는 죽상 동맥경화증의 가족력이다. 상기 위험 인자의 존재에 의해 현재 AD를 앓고 있는 개체를 특징적인 치매로부터 인식할 수 있다. 추가로, AD를 가진 개체를 확인하기 위한 다수의 진단 시험이 이용가능하다. 이들은 뇌척수액 타우 및 A베타 42 수준의 측정을 포함한다. 상승된 타우 및 감소된 A베타 42 수준은 AD의 존재를 의미한다. AD를 가진 개체는 또한 AD 및 관련 장애 협회(AD and Related Disorders Association) 기준에 의해 진단될 수 있다.
본 출원의 항-PHF-타우 항체는, 타우의 병리학적 응집을 수반하는 신경퇴행성 질환, 예컨대 AD 또는 다른 타우병증을 치료하거나 예방하기 위한 치료제 및 예방제 둘 모두로서 적합하다. 무증상 환자에서는, 임의의 연령(예를 들어, 약 10, 15, 20, 25, 30세)에서 치료를 시작할 수 있다. 그러나 통상적으로는, 환자가 약 40, 50, 60, 또는 70세에 도달할 때까지 치료를 시작하는 것이 필요하지 않다. 치료는 전형적으로 소정 기간에 걸쳐 다회 투여를 수반한다. 시간 경과에 따라 항체, 또는 치료제에 대한 활성화된 T-세포 또는 B-세포 반응을 검정함으로써 치료를 모니터링할 수 있다. 반응이 하락할 경우, 추가 투여(booster dosage)가 지시될 수 있다.
예방적 응용에서는, 질병의 생화학적, 조직학적, 및/또는 행동 증상, 질병의 전개 중에 나타나는 이의 합병증 및 중간 병리학적 표현형을 포함하여, 질병의 위험을 제거 또는 감소시키거나, 중증도를 경감시키거나, 개시를 지연시키기에 충분한 양으로 약제학적 조성물 또는 약제를 AD에 걸리기 쉽거나 달리 AD의 위험이 있는 환자에게 투여한다. 치료적 응용에서는, 질병의 증상 중 임의의 것(생화학적, 조직학적, 및/또는 행동)을 감소시키거나, 정지시키거나, 지연시키기에 충분한 양으로 조성물 또는 의약을 이러한 질병이 의심되거나 이러한 질병을 이미 앓고 있는 환자에게 투여한다. 치료제의 투여는 특징적인 알츠하이머 병리가 아직 전개되지 않은 환자에서 경도 인지 장애를 감소시키거나 제거할 수 있다.
치료적 유효량 또는 투여량은 다양한 인자, 예컨대 치료하고자 하는 질병, 장애 또는 질환, 투여 수단, 표적 부위, 대상체의 생리학적 상태(예를 들어, 연령, 체중, 건강을 포함함), 대상체가 인간인지 또는 동물인지의 여부, 투여되는 다른 약, 및 치료가 예방적인지 또는 치료적인지의 여부에 따라 변동될 수 있다. 치료 투여량은 안전성 및 효능(efficacy)을 최적화하기 위해 최적으로 적정된다.
일부 실시 형태에서, 본 출원은 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 혈액-뇌 장벽(BBB)을 가로질러 수송하는 방법으로서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편이 이에 커플링된 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 혈액-뇌 장벽을 가로질러 수송하도록 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 커플링된 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 혈액-뇌 장벽에 노출시키는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다. 바람직하게는, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물은 아미노산 수송을 방해하지 않는다. 항체는 아미노산 수송을 방해하지 않는 방식으로 CD98 또는 TfR에 특이적으로 결합한다. 일부 실시 형태에서, BBB는 포유류, 바람직하게는 영장류, 예컨대 인간, 더욱 바람직하게는 신경학적 장애를 갖는 인간에 존재한다. 일 실시 형태에서, 신경학적 장애는 알츠하이머병(AD), 뇌졸중, 치매, 근이영양증(MD), 다발성 경화증(MS), 근위축성 측삭 경화증(ALS), 낭성 섬유증, 안젤만 증후군, 리들 증후군, 파킨슨병, 픽병, 파제트병, 암, 및 외상성 뇌 손상으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
본 출원의 항체는 약제학적으로 허용가능한 담체 중에 활성 성분으로서 항체 또는 항체들, 접합체, 또는 융합 작제물의 치료적 유효량을 함유하는 약제학적 조성물로서 제조될 수 있다. 담체는 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것들, 예컨대 낙화생유, 대두유, 광유, 참기름 등을 포함하는, 물 및 오일과 같은 액체일 수 있다. 예를 들어, 0.4% 염수 및 0.3% 글리신이 사용될 수 있다. 이들 용액은 무균성이고 일반적으로 미립자 물질이 없다. 이들은 통상적인 잘 알려진 멸균 기법(예를 들어, 여과)에 의해 멸균될 수 있다. 조성물은 pH 조정제 및 완충제, 안정화제, 증점제, 윤활제, 및 착색제 등과 같은 생리학적 조건에 근접시키기 위해 필요한 바와 같은 약제학적으로 허용가능한 보조 물질을 함유할 수 있다. 그러한 약제학적 제형에서 본 출원의 항체의 농도는 광범위하게, 즉, 약 0.5 중량% 미만, 통상 약 1 중량% 이상으로부터 많게는 15 또는 20 중량%까지 변동될 수 있으며, 선택된 특정 투여 방식에 따라, 필요 용량, 유체 부피, 점도 등에 기초하여 주로 선택될 것이다.
본 출원의 항체의 치료적 용도를 위한 투여 방식은 제제를 숙주에게 전달하는 임의의 적합한 경로일 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 기재된 조성물은 비경구 투여, 예를 들어, 피내, 근육내, 복막내, 정맥내, 피하, 비강내, 또는 두개내 투여에 적합하도록 제형화될 수 있거나, 뇌 또는 척추의 뇌척수액 내로 투여될 수 있다.
치료는 단회 용량 스케줄로, 또는 다회 용량 스케줄로 주어질 수 있으며, 다회 용량 스케줄에서는 치료의 1차 과정이 1 내지 10회의 개별 용량을 사용한 후, 반응을 유지하고/하거나 강화하기 위해 필요한 후속 시간 간격에, 예를 들어, 제2 용량을 위해 1 내지 4개월에 다른 용량이 주어지며, 필요한 경우에는, 몇 개월 후에 후속 용량(들)이 주어질 수 있다. 적합한 치료 스케줄의 예는 (i) 0, 1개월 및 6개월, (ii) 0, 7일 및 1개월, (iii) 0 및 1개월, (iv) 0 및 6개월, 또는 질환의 증상을 감소시키거나 질환의 중증도를 감소시킬 것으로 예상되는 원하는 반응을 유도하는데 충분한 다른 스케줄을 포함한다.
본 출원의 항체는 저장을 위해 동결건조되고, 사용 전에 적합한 담체 중에 재구성될 수 있다. 이 기법은 항체 및 다른 단백질 제제에 효과적인 것으로 밝혀져 있으며, 당업계에 알려진 동결건조 및 재구성 기법이 사용될 수 있다.
특정 실시 형태에 따르면, 타우병증의 치료에 사용되는 조성물은 관련 신경퇴행성 질병의 치료에 효과적인 다른 제제와 병용하여 사용될 수 있다. AD의 경우, 본 출원의 항체는 아밀로이드-베타(A베타)의 침착을 감소시키거나 예방하는 제제와 조합되어 투여될 수 있다. PHF-타우와 A베타 병리는 상승적일 가능성이 있다. 그러므로, PHF-타우와 A베타 및 A베타-관련 병리 둘 모두의 제거를 동시에 목표로 하는 병용 요법이 각각을 개별적으로 목표로 하는 것보다 더 효과적일 수 있다. 파킨슨병 및 관련 신경퇴행성 질병의 경우, 알파-시누클레인 단백질의 응집된 형태를 제거하기 위한 면역 조절이 또한 신형 요법이다. 타우 및 알파-시누클레인 단백질 둘 모두의 제거를 동시에 목표로 하는 병용 요법은 각각의 단백질을 개별적으로 목표로 하는 것보다 더 효과적일 수 있다.
다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 생성하는 방법으로서, 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함하는 방법에 관한 것이다.
다른 실시 형태에서, 본 출원은 약제의 생산 또는 제조에 있어서, 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물의 용도에 관한 것이다. 일 실시 형태에서, 약제는 신경학적 질환 또는 장애의 치료를 위한 것이다. 추가의 실시 형태에서, 약제는, 신경학적 질환 또는 장애를 갖는 개체에게 약제의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, 신경학적 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 사용하기 위한 것이다.
본 출원의 다른 일반적인 태양은, 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)의 유도를 필요로 하는 대상체에서 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)을 유도하는 방법으로서, 본 출원의 실시 형태에 따른 항-CD98 또는 항-TfR 항체 결합 단편의 이의 항원-결합 단편에 커플링된, 바람직하게는 공유적으로 접합된 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 복합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하며, 여기서 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 이펙터 기능을 갖지 않는 방법에 관한 것이다. 예를 들어, 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 Fc 감마 수용체에 대한 결합을 감소시키거나 제거하는 돌연변이와 같은, ADCC 또는 CDC와 같은 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 하나 이상의 아미노산 변형을 포함할 수 있다. 그러한 돌연변이는 L234A, L235A, 및 P331S 중 1, 2, 또는 3개의 돌연변이와 같이, 위치 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329에 있을 수 있으며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따른다.
일부 실시 형태에서, 본 방법은 하나 이상의 추가의 치료제의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 소정 실시 형태에서, 추가의 치료제는 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물이 치료하기 위해 사용되는 것들과 동일하거나 상이한 신경학적 장애를 치료하기에 효과적인 치료제이다. 예시적인 추가의 치료제는 상기 기재된 다양한 신경학적 약물, 콜린에스테라제 억제제(예컨대 도네페질, 갈란타민, 로바스티그민, 및 타크린), NMDA 수용체 길항제(예컨대 메만틴), 아밀로이드 베타 펩티드 응집 억제제, 항산화제, γ-세크레타제 조절제, 신경 성장 인자(NGF) 모방체 또는 NGF 유전자 요법, PPARy 작용제, HMS-CoA 리덕타제 억제제(스타틴), 암파킨, 칼슘 채널 차단제, GABA 수용체 길항제, 글리코겐 신타제 키나제 억제제, 정맥내 면역글로불린, 무스카린 수용체 작용제, 니코틴 수용체 조절제, 능동 또는 수동 아밀로이드 베타 펩티드 면역화, 포스포다이에스테라제 억제제, 세로토닌 수용체 길항제, 및 항-아밀로이드 베타 펩티드 항체를 포함하지만 이로 제한되지 않는다. 소정 실시 형태에서, 하나 이상의 추가의 치료제는 신경학적 약물의 하나 이상의 부작용을 완화시키는 그의 능력에 대해 선택된다. 추가의 치료제는 동일하거나 별도의 제형 내에 투여되며, 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물과 함께 또는 별도로 투여될 수 있다. 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물은 추가의 치료제 및/또는 아쥬반트의 투여 전에, 동시에, 및/또는 후에 투여될 수 있다. 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물은 또한 방사선 요법, 행동 요법, 또는 당업계에 알려지고 치료 또는 예방될 신경학적 장애에 적절한 다른 요법과 같으나 이로 제한되지 않는 다른 중재 요법과 조합되어 사용될 수 있다.
다른 태양에서, 본 출원은 상기 기재된 장애의 치료 또는 예방에 유용한 재료를 함유하는 제조 물품(예컨대, 키트)에 관한 것이다. 제조 물품은 용기, 및 용기 상의 또는 이와 연계된 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기는, 예를 들어, 병, 바이알, 주사기, IV 용액 백 등을 포함한다. 용기는 다양한 재료, 예를 들어, 유리 또는 플라스틱으로 형성될 수 있다. 용기는 단독으로 또는 다른 조성물과 조합되어 병태를 치료 또는 예방하기에 효과적인 조성물을 보유하며, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 피하 주사 바늘에 의해 천공 가능한 스토퍼(stopper)를 갖는 정맥내 용액 백 또는 바이알일 수 있음). 조성물 내의 하나 이상의 활성제는 본 출원의 항체, 이의 항원 결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은, 조성물이 선택된 병태를 치료하기 위해 사용됨을 표시한다. 또한, 제조 물품은 (a) 본 출원의 항체, 이의 항원 결합 단편, 또는 접합체를 포함하는 조성물을 그 안에 함유하는 제1 용기; 및 (b) 추가의 세포독성 치료제 또는 그 밖의 치료제를 포함하는 조성물을 그 안에 함유하는 제2 용기를 포함할 수 있다. 본 출원의 이 실시 형태에서 제조 물품은 조성물이 특정 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있음을 표시하는 패키지 삽입물을 추가로 포함할 수 있다. 임의로, 제조 물품은 약제학적으로 허용가능한 완충제, 예컨대 주사용 정균수(BWFI), 인산염-완충 식염수, 링거 용액, 및 덱스트로스 용액을 포함하는 제2(또는 제3) 용기를 추가로 포함할 수 있다. 그것은 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 및 주사기를 포함하는, 상업적 관점 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 재료를 추가로 포함할 수 있다.
진단 방법 및 키트
본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체는 대상체에서 AD 또는 다른 타우병증을 진단하는 방법에 사용될 수 있다.
따라서, 다른 일반적인 태양에서, 본 출원은 본 출원의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 사용하여 대상체에서 PHF-타우의 존재를 검출하는 단계에 의해 대상체에서 PHF-타우의 존재를 검출하는 방법 및 대상체에서 타우병증을 진단하는 방법에 관한 것이다.
일 실시 형태에서, 본 출원의 인간화 항-PHF-타우 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물은 증상의 발병 전에 신경학적 장애를 검출하고/하거나 질환 또는 장애의 중증도 또는 지속기간을 평가하기 위해 사용된다. 항체, 항원 결합 단편, 이의 접합체, 또는 이의 융합 작제물은, 방사선촬영, 단층촬영, 또는 자기 공명 이미징(MRI)에 의한 이미징을 포함하는, 신경학적 장애의 검출 및/또는 이미징을 허용한다.
인산화된 타우는, 생물학적 샘플을 진단 항체 시약과 접촉시키고, 대상체로부터의 샘플 내의 인산화된 타우에 대한 진단 항체 시약의 결합을 검출함으로써, 대상체로부터의 생물학적 샘플(예를 들어, 혈액, 혈청, 혈장, 간질액, 또는 뇌척수액 샘플) 내에서 검출될 수 있다. 검출을 수행하기 위한 검정은 ELISA, 면역조직화학, 웨스턴 블롯, 또는 생체내 이미징과 같은 잘 알려진 방법을 포함한다.
진단 항체 또는 유사한 시약은 정맥내 주사에 의해 환자의 체내로 투여되거나, 숙주에게 제제를 전달하는 임의의 적합한 경로에 의해 뇌 내로 직접 투여될 수 있다. 항체의 투여량은 치료 방법에 대한 것과 동일한 범위 이내여야 한다. 전형적으로, 항체는 표지되지만, 일부 방법에서는 인산화된 타우에 대해 친화성을 갖는 1차 항체는 표지되지 않고, 2차 표지제(labeling agent)가 1차 항체에 결합하기 위해 사용된다. 표지의 선택은 검출 수단에 좌우된다. 예를 들어, 광학적 검출에는 형광 표지가 적합하다. 외과적 중재가 없는 단층촬영 검출을 위해서는 상자성 표지(paramagnetic label)의 사용이 적합하다. PET 또는 SPECT를 사용하여 방사성 표지가 또한 검출될 수 있다.
대상체로부터의 샘플에서, 또는 대상체에서, 표지된 PHF-타우, 타우 응집체, 및/또는 신경섬유 매듭의 수, 크기, 및/또는 강도를 상응하는 기저선 값과 대비함으로써 진단이 수행된다. 기저선 값은 건강한 개체의 집단 내의 평균 수준을 나타낼 수 있다. 기저선 값은 또한 동일한 대상체에서 결정된 이전 수준을 나타낼 수 있다.
전술된 진단 방법은 또한, 치료 전에, 치료 동안에, 또는 치료 후에 대상체에서 인산화된 타우의 존재를 검출함으로써 요법에 대한 대상체의 반응을 모니터링하는 데 사용될 수 있다. 기저선과 대비하여 값의 감소는 치료에 대한 양성 반응을 의미한다. 병리학적 타우가 뇌로부터 제거됨에 따라 생물학적 체액에서 값이 또한 일시적으로 증가할 수 있다.
본 출원은 추가로, 상기 기재된 진단 방법 및 모니터링 방법을 수행하기 위한 키트에 관한 것이다. 전형적으로, 그러한 키트는 본 출원의 항체와 같은 진단 시약 및 임의로 검출가능한 표지를 함유한다. 진단 항체 자체가 검출가능한 표지(예를 들어, 형광 분자, 비오틴 등)를 함유할 수 있으며, 이는 직접 검출가능하거나 2차 반응(예를 들어, 스트렙타비딘과의 반응)을 통해 검출가능하다. 대안적으로, 검출가능한 표지를 함유하는 2차 시약이 사용될 수 있으며, 2차 시약은 1차 항체에 대한 결합 특이성을 갖는다. 생물학적 샘플 내의 PHF-타우를 측정하기에 적합한 진단 키트에서, 키트의 항체는 미세역가 디시(microtiter dish)의 웰과 같은 고체상(solid phase)에 사전결합되어 공급될 수 있다.
실시 형태
본 출원은 또한 하기 비제한적인 실시 형태를 제공한다.
실시 형태 1은, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 갖거나 그 안에 있는 타우 단백질의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하며, 쌍 나선형 필라멘트(PHF)-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합하고, 여기서 타우 단백질의 에피토프는 타우 단백질의 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 중 하나 이상을 포함하지만, 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 전부를 포함하지는 않는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 2는, 실시 형태 1에 있어서, 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 7 또는 14, 8, 및 9의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며; 서열 번호 12 또는 18과 90% 이상 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 13, 19, 23, 또는 59와 90% 이상 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 2a는, 실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 7, 8, 및 9의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 2b는, 실시 형태 2에 있어서, 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 14, 8, 및 9의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 3은, 실시 형태 2에 있어서, 서열 번호 12 또는 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 13, 19, 23, 또는 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 4는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 3 중 어느 하나에 있어서,
(a) 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(b) 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 19의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
(c) 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
(d) 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 6a는, 실시 형태 6에 있어서, 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 4b는, 실시 형태 4에 있어서, 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 19의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 4c는, 실시 형태 4에 있어서, 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 4d는, 실시 형태 4에 있어서, 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서,
(a) 서열 번호 15 또는 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄;
(b) 각각 독립적으로 서열 번호 16, 21, 24, 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 2개의 경쇄; 및
(c) 서열 번호 17 또는 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5a는, 실시 형태 5에 있어서, 서열 번호 15의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5b는, 실시 형태 5에 있어서, 서열 번호 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5c는, 실시 형태 5에 있어서, 서열 번호 15의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5d는, 실시 형태 5에 있어서, 서열 번호 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 폴리펩티드 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5e는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 4 중 어느 하나에 있어서,
(a) 서열 번호 61 또는 62의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄; 및
(b) 서열 번호 16 또는 24, 또는 21 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5f는, 실시 형태 5e에 있어서, 서열 번호 61의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄, 및 서열 번호 16 또는 24의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 5g는, 실시 형태 5e에 있어서, 서열 번호 62의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄, 및 서열 번호 21 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
실시 형태 6은, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 커플링된, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 접합체이다.
실시 형태 7은, 실시 형태 6에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 1 nM 이상, 바람직하게는 1 내지 500 nM의 해리 상수 KD, 및 산성 pH, 바람직하게는 pH 5에서 10-4 초-1 이상, 바람직하게는 10-4 내지 10-1 초-1의 오프-속도 상수 kd로 CD98, 바람직하게는 인간 CD98hc, 또는 TfR, 바람직하게는 인간 TfR1에 각각 결합하는, 접합체이다.
실시 형태 8은, 실시 형태 6 또는 실시 형태 7에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 2 x 10-2 내지 2 x 10-4 초-1, 바람직하게는 8 x 10-3 초-1의 오프-속도 상수 kd를 갖는, 접합체이다.
실시 형태 9는, 실시 형태 6 내지 실시 형태 8 중 어느 하나에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
(a) 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 26, 27, 28 또는 33, 29, 30, 및 31의 아미노산 서열을 갖거나;
(b) 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 35, 36, 37, 38, 39, 및 401의 아미노산 서열을 갖는, 접합체이다.
실시 형태 9a는, 실시 형태 9에 있어서, 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 번호 26, 27, 및 28의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 접합체이다.
실시 형태 9b는, 실시 형태 9에 있어서, 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 번호 26, 27, 및 33의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 각각 서열 번호 29, 30, 및 31의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 접합체이다.
실시 형태 9c는, 실시 형태 9에 있어서, 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각 서열 번호 36, 36, 및 37의 아미노산 서열을 갖는 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 각각 서열 번호 38, 39, 및 40의 아미노산 서열을 갖는 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 접합체이다.
실시 형태 10은, 실시 형태 6 내지 실시 형태 9c 중 어느 하나에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 링커를 통해 경쇄 가변 영역에 공유적으로 연결된 중쇄 가변 영역을 포함하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)이며, 바람직하게는, 링커는 서열번호 50 또는 51의 아미노산 서열을 갖고, 더욱 바람직하게는, scFv는 서열 번호 25, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 또는 서열 번호 41의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 접합체이다.
실시 형태 10a는, 실시 형태 10에 있어서, 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 25의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv인, 접합체이다.
실시 형태 10b는, 실시 형태 10에 있어서, 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 32의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv인, 접합체이다.
실시 형태 10c는, 실시 형태 10에 있어서, 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 34의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv인, 접합체이다.
실시 형태 10d는, 실시 형태 10에 있어서, 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 서열 번호 41의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 scFv인, 접합체이다.
실시 형태 11은, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2개의 중쇄 중 하나만의 카르복시 말단에 링커를 통해 공유적으로 연결되며, 바람직하게는 링커는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, 실시 형태 6 내지 실시 형태 10 중 어느 하나의 접합체를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 12는, 실시 형태 11에 있어서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2개의 중쇄 각각은, 야생형 CH3 도메인 폴리펩티드와 비교하여, 하나 이상의 이종이량체 돌연변이, 예컨대 변형된 이종이량체 CH3 도메인, 또는 하나 이상의 노브 및 홀 돌연변이를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 13은, 실시 형태 12에 있어서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, L351, F405, 및 Y407에서 아미노산 변형을 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, T366, K392, 및 T394에서 아미노산 변형을 포함하며, 여기서 위치 T350에서의 아미노산 변형은 T350V, T350I, T350L, 또는 T350M이고; 위치 L351에서의 아미노산 변형은 L351Y이고; 위치 F405에서의 아미노산 변형은 F405A, F405V, F405T, 또는 F405S이고; 위치 Y407에서의 아미노산 변형은 Y407V, Y407A, 또는 Y407I이고; 위치 T366에서의 아미노산 변형은 T366L, T366I, T366V, 또는 T366M이고, 위치 K392에서의 아미노산 변형은 K392F, K392L, 또는 K392M이고, 위치 T394에서의 아미노산 변형은 T394W이며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따르는, 융합 작제물이다.
실시 형태 13a는, 실시 형태 13에 있어서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T350V, L351Y, F405A, 및 Y407V를 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T350V, T366L, K392L, 및 T394W를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 14는, 실시 형태 12에 있어서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366W를 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 14a는, 실시 형태 14에 있어서, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 H435R 및 Y436F를 추가로 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 15는, 실시 형태 11 내지 실시 형태 14a 중 어느 하나에 있어서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 신생아 Fc 수용체(RcRn)에 대한 융합체의 결합을 향상시키는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하며, 바람직하게는 하나 이상의 돌연변이는 산성 pH에서 결합을 향상시키고, 더욱 바람직하게는 Fc는 M252Y/S254T/T256E(YTE) 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따르는, 융합 작제물이다.
실시 형태 16은, 실시 형태 11 내지 실시 형태 15 중 어느 하나에 있어서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는 Fc는 위치 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329에서의 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 L234A, L235A, 및 P331S 중 1, 2, 또는 3개의 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따르는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17은,
(a) 서열 번호 42 내지 49로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 제1 중쇄;
(b) 서열 번호 16, 21, 24, 및 60으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 각각 독립적으로 갖는 2개의 경쇄; 및
(c) 서열 번호 17 및 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 동일성을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17a는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17b는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 42의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17c는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17d는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17e는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 44의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17f는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17g는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17h는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 16의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17i는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 46의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17j는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 47의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 24의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 17의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17k는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17l은, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 21의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17m은, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 43의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17n은, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 45의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17o는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 48의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 17p는, 실시 형태 17에 있어서, 서열 번호 49의 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄, 서열 번호 60의 아미노산 서열을 각각 갖는 2개의 경쇄, 및 서열 번호 22의 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물이다.
실시 형태 18은, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 실시 형태 6 내지 실시 형태 10d 중 어느 하나의 접합체, 또는 실시 형태 11 내지 실시 형태 17p 중 어느 하나의 융합 작제물을 인코딩하는, 단리된 핵산이다.
실시 형태 19는, 실시 형태 18의 단리된 핵산을 포함하는, 벡터이다.
실시 형태 20은, 실시 형태 18의 단리된 핵산 또는 실시 형태 19의 벡터를 포함하는, 숙주 세포이다.
실시 형태 21은, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 실시 형태 6 내지 실시 형태 10 중 어느 하나의 접합체, 또는 실시 형태 11 내지 실시 형태 17p 중 어느 하나의 융합 작제물을 생성하는 방법으로서, 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 제조하는 조건 하에 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 단계, 및 세포 또는 세포 배양물로부터 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 회수하는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 22는, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 실시 형태 6 내지 실시 형태 10d 중 어느 하나의 접합체, 또는 실시 형태 11 내지 실시 형태 17p 중 어느 하나의 융합 작제물, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물이다.
실시 형태 23은, 타우 시딩의 차단을 필요로 하는 대상체에서 타우 시딩을 차단하는 방법으로서, 실시 형태 22의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 24는, 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)의 유도를 필요로 하는 대상체에서 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)을 유도하는 방법으로서, 실시 형태 22의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 25는, 타우병증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 타우병증을 치료하는 방법으로서, 실시 형태 22의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 26은, 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산의 감소를 필요로 하는 대상체에서 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산을 감소시키는 방법으로서, 실시 형태 22의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 27은, 실시 형태 25 또는 실시 형태 26에 있어서, 타우병증은 가족성 알츠하이머병, 산발성 알츠하이머병, 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 진행성 핵상 마비, 피질기저핵 변성, 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 농축체 단독 치매, 석회화를 동반하는 광범위 신경섬유 매듭, 은친화성 과립성 치매, 근위축성 측삭 경화증 파킨슨증-치매 복합군, 다운 증후군, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 할러포르텐-스파츠병, 봉입체 근염, 크로이츠펠트-야콥병, 다계통 위축증, C형 니만-픽병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 아급성 경화성 범뇌염, 근긴장성 이영양증, 신경섬유 매듭을 동반하는 비-괌 운동 신경세포병, 뇌염후 파킨슨증, 만성 외상성 뇌병증, 및 권투선수 치매(복싱병)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법이다.
실시 형태 28은, 실시 형태 23 내지 실시 형태 27 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여되는, 방법이다.
실시 형태 29는, 실시 형태 23 내지 실시 형태 28 중 어느 하나에 있어서, 약제학적 조성물은 대상체의 혈액-뇌 장벽(BBB)을 가로질러 전달되는, 방법이다.
실시 형태 30은, 실시 형태 23 내지 실시 형태 29 중 어느 하나에 있어서, 투여는 Fc-매개 이펙터 기능을 감소시키고/시키거나 신속한 망상적혈구 고갈을 유도하지 않는, 방법이다.
실시 형태 31은, 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 PHF-타우의 존재를 검출하는 방법으로서, 생물학적 샘플을 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 대상체로부터의 샘플에서 PHF-타우에 대한 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 32는, 실시 형태 31에 있어서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 간질액, 또는 뇌척수액 샘플인, 방법이다.
실시 형태 33은, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 생성하는 방법으로서, 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 약제학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약제학적 조성물을 얻는 단계를 포함하는, 방법이다.
실시 형태 34는, 타우병증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 타우병증을 치료하는 데 사용하기 위한, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편 또는 실시 형태 22의 약제학적 조성물이다.
실시 형태 35는, 실시 형태 34에 있어서, 타우병증은 가족성 알츠하이머병, 산발성 알츠하이머병, 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 진행성 핵상 마비, 피질기저핵 변성, 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 농축체 단독 치매, 석회화를 동반하는 광범위 신경섬유 매듭, 은친화성 과립성 치매, 근위축성 측삭 경화증 파킨슨증-치매 복합군, 다운 증후군, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 할러포르텐-스파츠병, 봉입체 근염, 크로이츠펠트-야콥병, 다계통 위축증, C형 니만-픽병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 아급성 경화성 범뇌염, 근긴장성 이영양증, 신경섬유 매듭을 동반하는 비-괌 운동 신경세포병, 뇌염후 파킨슨증, 만성 외상성 뇌병증, 및 권투선수 치매(복싱병)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 용도이다.
실시 형태 36은, 타우병증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 타우병증을 치료하기 위한 약제의 제조를 위한, 실시 형태 1 내지 실시 형태 5g 중 어느 하나의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 실시 형태 6 내지 실시 형태 10d 중 어느 하나의 접합체, 또는 실시 형태 11 내지 실시 형태 17p 중 어느 하나의 융합 작제물의 용도이다.
실시예
본 출원의 하기 실시예는 본 발명의 성질을 추가로 예시하기 위한 것이다. 하기 실시예는 본 출원을 제한하지 않으며, 본 출원의 범주는 첨부된 청구범위에 의해 결정되어야 함이 이해되어야 한다.
실시예 1 - 항체 생성, 발현, 및 정제
항-타우 뮤린 mAb PT/66의 인간화: PT1B1142
PT/66(PT1B585)의 경쇄(LC) 및 중쇄(HC)의 V-영역을 Fab 포맷으로 인간화하였다. 약술하면, PT/66으로부터의 VL CDR(AbM 정의)을 인간 IGKV2-24*01 생식세포계열 상에 이식하였으며, 2개의 위치, F41L 및 S28P(카바트 넘버링 시스템에 따름)가 인간에서 마우스로의 역 돌연변이로서 확인되었다. PT/66으로부터의 VH CDR을 인간 IGHV1-18*01 생식세포계열 상에 이식하였으며, 1개의 위치, A40R이 인간에서 마우스로의 역 돌연변이로서 확인되었다. 추가로, VL 및 VH CDR을 상기 언급된 인간 생식계열 상에 이식하였으며, 인간에서 마우스로의 역 돌연변이는 없었다(PT1B995). 3개의 돌연변이 전부를 함유하는 1개의 Fab 변이체는 PT1B1142이고, 이의 전체 인간 IgG 버전은 PT1B1153이다. PT1B1153의 경쇄 내의 제2 프레임워크 영역을 변형시켜 다른 인간화 항체 PT1B1183을 얻었다. 전장 재조합 타우 단백질에 결합하는 PT1B1183의 SPR 센서그램은 도 4에 나타낸다.
재조합 타우에 대한 인간화 PT/66 Fab 변이체 PT1B1142의 결합
인간화 PT/66 변이체를 E. 콜라이에서 발현시킨 후, 재조합 전장 타우 단백질에 대한 결합 및 열안정성에 대해 스크리닝하였다. 약술하면, 각각 중쇄 및 경쇄의 분비를 위해 PelB 및 OmpA 리더 서열을 갖는 vDR001246 벡터(Antibody Design Labs, 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재) 내로 Fab-코딩 서열을 클로닝하였다. 플라스미드를 이용하여 E. 콜라이 세포(균주 MC1061)를 형질전환시키고, 100 μg/mL 카르베니실린으로 보충된 2xYT 미생물 성장 배지 중에 37℃ 에서 하룻밤 성장시켰다. 하룻밤 배양물을 사용하여 0.5 mL 발현 배양물을 접종하고 약 2.0의 OD600까지 37℃에서 성장시켰다. 1 mM IPTG의 첨가에 의해 단백질 발현을 유도하고, 배양물을 30℃에서 하룻밤 성장시켰다. 발현 후에, 세포를 10 분 동안 3,500 X g에서 원심분리에 의해 펠렛화하고, 상청액을 수집하고, ELISA 검정에서 직접 시험하였다. ELISA를 위해, 비오티닐화 전장 타우 단백질을 2-배 희석으로 0.039 μg/mL 내지 2.5 μg/mL 범위의 농도로 플레이트 상에 고정시킨 후, 실온에서 45 분 동안 인큐베이션하였다. 3% 우유로 보충된 1x PBS-Tween으로 플레이트를 차단하였다. 플레이트를 1x PBS-Tween으로 세척했다. 각 플레이트에 상청액을 첨가하고, 실온에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 1:5,000 희석된 염소 항Fab'2-호스래디쉬 퍼옥시다아제를 웰당 50 uL로 사용하여 결합된 Fab를 검출한 후, 화학발광 기질(Sigma cat. # 11582950001)로 검출하였다. PT/66으로부터 유래된 모든 시험된 Fab 분자는 전장 타우 단백질에 결합하였다. PT/66 및 PT1B995와 비교하여 PT1B1142에 대한 결합 곡선을 도 1에 나타낸다.
인간화 Fab 변이체의 열 안정성의 결정
열 처리 ELISA 검정에서 인간화 PT/66 변이체의 열 안정성을 결정하였다. 발현 및 ELISA 검정은 상기와 같이 실행되었다(결합). 그러나, 각각의 변이체의 발현 상청액은 4개의 분취액으로 분할하였다. 1개의 분취물은 RT에서 유지하였고, 다른 3개는 각각 60℃, 65℃, 및 70℃로 가열하고, 이어서 실온으로 냉각시켰다. 4개의 샘플 전부의 ELISA 결합 신호(삼중실험으로)를 얻었다. RT 신호에 대한 비로 표현된 승온에서의 결합 신호는 변이체의 열 안정성을 나타낸다(표 1 및 도 2).
[표 1]
항-타우 뮤린 mAb PT/66의 인간화: PT1B635 및 PT1B901
별도의 시도에서, 상이한 수용자 인간 프레임워크를 사용하여 PT/66을 인간화하였다. 약술하면, PT/66으로부터의 VL CDR을 인간 IGKV2D-40*01 생식세포계열 상에 이식하였고, VH CDR을 인간 IGHV1-18*01 생식세포계열 상에 이식하였다. 경쇄에는 역 돌연변이가 없었다. 그러나, VL 내의 2개의 위치, M70L 및 T72V(카바트 넘버링 시스템)는 인간에서 마우스로의 역 돌연변이로서 확인되었다. 인간화 변이체는 PT1B635로 명명된다. 또한, PT/66으로부터의 LC는 DG(CDR1 내의 위치 43 및 44) 모티프를 함유하였으며, 이는 이성질체화에 대한 위험을 나타낸다. 이러한 위험은 돌연변이 G44L을 함유하는 변이체를 제조함으로써 완화되었다. 이 변이체는 PT1B901이다. PT1B635 및 PT1B901을 SPR에 의해 재조합 타우 단백질에 대한 결합에 대해 시험하였다.
항체 발현 및 정제
연구 등급 재료는 PT1B635 및 PT1B901을 인코딩하는 정제된 플라스미드 DNA를 이용한 일시적 형질감염에 의해 ExpiCHO 세포에서 소규모(2 mL)로 발현되었다. 형질감염된 세포를 7 일 동안 37℃에서 인큐베이션한 후에 배양 상청액을 수확하였다. 수확된 상청액을 원심분리에 의해 청징화한 후에 여과하였다. MabSelectSuRe 단백질-A 친화도 크로마토그래피를 사용하여 세포 배양 상청액을 정제하고, 단량체 단백질을 함유하는 최종 용리액(트리스-아세테이트 완충액 중의)을 dPBS 7.2로 투석하였다. 정제된 단백질의 농도를 NanoDrop 분광광도계 상에서 280 nm에서의 흡광도에 의해 결정하고, 분석용 SE-HPLC에 의해 품질을 평가하였다. 최종 순도는 98% 초과였고 추적 연구에 사용되었다. 하기 인간화 항체를 발현시키고 정제하였다.
[표 1a]
실시예 2 - SPR에 의한 재조합 타우에 대한 항- 타우 항체의 결합 특성화
3 mM EDTA 및 0.05% Tween 20으로 보충된 HBS pH 7.4 완충액으로 25℃에서 Biacore T200을 사용하여 SPR에 의해 인간 전장 재조합 타우(2N4R)와 항-타우 항체의 상호작용을 연구하였다. 약술하면, 아민-커플링 화학에 대한 제조사의 설명서를 사용하여 항-마우스/항-인간 IgG Fcγ-단편 특이적 항체의 혼합물을 CM4 센서 칩의 표면에 커플링함으로써 바이오센서 표면을 제조하였다(4000 초과의 반응 단위(RU)). 커플링 완충액은 10 mM 소듐 아세테이트(pH 4.5)였다. 항-타우 항체를 전개 완충액에 희석하고 주입하여 항원 결합의 검출을 가능하게 하기에 충분한 포획을 얻었다. 항-타우 mAb의 포획 후에, 5-배 희석으로 0.12 nM 내지 75 nM 범위의 재조합적으로 발현된 타우 용액의 주입이 이어졌다. 각각 50 μL/분의 유량으로 3 분 및 60 분 동안 회합 및 해리를 모니터링하였다. 0.85% H3PO4로 센서 표면의 재생을 수행하였다. 결합 센서그램을 1:1 랭뮤어 결합 모델에 사용하여 피팅하여 온-속도, 오프-속도, 및 친화도를 얻었다. PT1B635 및 PT1B901은 모 mAb, PT/66, 또는 PT1B545와 유사한 강력한 친화도로 전장 타우 단백질에 결합하였다(하기 도 3 및 표 2).
[표 2]
실시예 3 - 면역고갈에 의한 기능적 시험
최대 백분율 억제 값이 AD 타우 시드 상의 에피토프의 밀도 또는 PT/66 에피토프를 함유하는 시드의 수와 관련되는지를 조사하기 위해, PT/66의 인간화 변이체를 면역고갈 검정에서 타우 시딩의 억제에 대해 시험할 것이다. 이 검정에서, 마우스 모 PT/66 항체는 90% 초과의 타우 시드를 고갈시키는 것으로 나타났다(US 63/166,439호를 참조하며, 이의 내용은 전체적으로 본 명세서에 포함됨). 주령 22 내지 23 주의 P301S 유전자이식 동물의 척수로부터, 또는 동결보존된 인간 AD 뇌 조직으로부터 면역고갈을 위한 타우 시드를 함유하는 균질물이 생성될 수 있다. 면역고갈 샘플의 생화학적 분석은, 세포 시딩 검정과 매우 잘 상관된 hTau60/hTau60 및/또는 PT/66/PT/66 자가-샌드위치 MSD 검정에 의해 실행될 것이다(예를 들어, US 63/166,439호 참조). 후자는 응집에 의해 근접할 때 신호를 생성하는 2개의 발색단 태깅된 K18 타우 단편을 발현하는 HEK 세포를 사용한다. 상이한 공급원으로부터 유래된 응집되고 인산화된 전장 타우의 시드로 세포를 처리할 경우, K18 응집체가 유도되며, 이는 형광-활성화 세포 분류(FACS)를 사용하여 형광 공명 에너지 전달(FRET)-양성 세포를 계수함으로써 정량화될 수 있다(문헌[Holmes et al., 2014, PNAS. 111(41): E4376-85]).
AD 타우 시드를 시험 항체와 함께 인큐베이션하고 단백질 G 비드를 이용하여 용액으로부터 제거할 것이다. 고갈된 상청액을 PT/66/PT/66 자가-샌드위치 MSD 검정을 사용하여 잔류 타우 시드에 대해 시험할 것이다. 이는 PT/66의 인간화 버전이 AD 타우 시드를 고갈시킴에 있어서 모 PT/66 mAb만큼 효율적인지 여부를 확인할 것이다.
실시예 4 - 융합 작제물
융합 작제물 설계
타우 Ab가 BBB를 침투할 수 있게 하여, 타우 Ab 단독에 비교하여 실질적으로 더 높은 뇌 농도를 생성하도록, CD98hc 또는 huTfR 및 인간화 항-PHF-타우 항체(타우 Ab)에 대한 항체의 항원 결합 단편(scFv)의 융합을 함유하는 융합 작제물을 개발하였다.
예를 들어, 융합 작제물은 짧은 가요성 링커를 사용하여 인간화 타우의 1개의 항체 중쇄의 C-말단에 첨부된 인간화 타우 Ab 및 CD98hc 또는 huTfR 결합 scFv를 함유한다. 융합 작제물은 트랜스사이토시스를 향상시키는 것으로 이전에 기재된 하기 특징에 대해 분석된다(문헌[Goulatis and Shusta 2017]에 검토됨): 원자가, 결합 친화도, pH 의존성 결합, 및 뇌 내피 세포에서의 신속한 내재화.
CD98hc 또는 huTfR에 대한 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 서열을 하기 포맷을 사용하여 단일 유전자 작제물에서 단일-사슬 가변 단편(scFv)으로서 융합시킨다:
Hc_GGGSGGSGGCPPCGGSGG(서열 번호 50)_Lc
또는 Hc_GTEGKSSGSGSESKST(서열 번호 51_Lc
이어서, CD98hc 또는 huTfR에 대한 scFv를 GGAGGA(서열 번호 52) 링커를 사용하여 인간화 타우 Ab의 1개의 중쇄(Hc)의 C-말단에 융합시킨다. CH3에서의 노브 및 홀 이종이량체화 돌연변이를 항체 Hc(Hc A 노브: T366W; Hc B 홀: T366S_L368A_Y407V)에 이용하여 융합 작제물을 생성하였다. 또한, CH3에서의 RF 이중 돌연변이(H435R_Y436F)는 Hc B에 이용되어 정제 중에 단백질 A 결합을 파괴하고 홀-홀 동종이량체를 제거한다. 융합 작제물은 동일한 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄 및 상이한 아미노산 서열을 갖는 2개의 중쇄를 함유한다. 2 개의 중쇄 중 1개만이 CD98 또는 TfR 항체의 scFv에 융합되고, 2개의 중쇄는 또한 2개의 중쇄 사이의 이종이량체화를 용이하게 하기 위해 이들의 불변 영역이 상이하다. 따라서, 본 출원의 실시 형태에 따른 각각의 융합 작제물은 하기 3개의 아미노산 서열과 연계된다: CD98 또는 TfR 항체의 항원 결합 단편에 융합된 제1 중쇄의 아미노산 서열, 경쇄의 아미노산 서열, 및 CD98 또는 TfR 항체의 항원 결합 단편에 융합되지 않은 제2 중쇄의 아미노산 서열.
융합체 발현, 정제, 및 특성화
융합 작제물은 CHO-Expi 세포에서 발현되고 단백질 A 친화도 크로마토그래피에 이어서 크기 배제 크로마토그래피 또는 이온-교환 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
제조된 융합 작제물의 예는 표 3에 제공된다:
[표 3]
결합 특징 및 면역고갈에 의한 기능적 시험은 상기 실시예 2 및 3에 기재된 것들과 유사한 방법을 사용하여 융합 작제물에 대해 결정된다.
내재화
인간 뇌 내피 세포(hCMECD3)를 콜라겐-코팅된 384-웰 세포 담체 울트라 플레이트(Perkin Elmer) 내에 10,000개 세포/웰로 플레이팅하고, 가습 인큐베이터 내에서 37℃에서 16 시간 동안 부착되게 한다. 이어서, 세포(50,000개 세포)를 200 ug/mL의 정제된 융합 작제물과 함께 인큐베이션하고, 37℃에서 1 시간 동안 인큐베이션되게 한다. 세포를 고정하고, 세척하고, 형광 표지된 2차 항체와 함께 1시간 동안 인큐베이션한다. 이어서, 세포를 다시 세척하고, 형광 표지된 액틴 염색제, 팔로이딘, 및 핵 염색제, Hoeschst 33342와 함께 인큐베이션한다. 세포를 다시 세척하고, ImageXpress Micro(Molecular Devices)를 사용하여 40x 대물렌즈로 이미징하였다. 내재화 작제물은 MetaXpress 6.0을 사용하는 팔로이딘과의 공동국소화에 기초하여 식별된다.
미세교세포에서 타우 응집체의 흡수를 촉진하는 융합 작제물의 가능성을 평가하기 위해, 유도 만능 줄기 세포(iPSC)로부터 유래된 인간 미세교세포를 플레이트당 7000개 세포의 희석으로 384 웰 Perkin Elmer 세포 담체 울트라 플레이트 상에 플레이팅하고, 글루타맥스+, 페니실린/스트렙토마이신, IL34(100 ng/ml), 및 GMCSF(10 ng/ml)를 갖는 어드밴스드 DMEM/F12 배지 중에 유지한다. 검정 당일에, 비오티닐화 타우 올리고머를 15-배 몰 과량으로 스트렙타비딘 Alexa Flour 488(AF488)과 복합체화되게 한다. 이어서, 표지된 타우 올리고머를 실온에서 30 분 동안 대략 2X 몰 과량으로 시험 작제물에 결합되게 한다. 이어서, Ab:타우 올리고머 복합체는 20 μl/웰로 미세교세포에 전달된다. 인큐베이션 후 2, 4, 및 8 시간에, 인산염 완충 식염수(PBS)로 세포를 2회 세척하고, 실온에서 15 분 동안 4% 파라포름알데히드의 존재 하에 고정한다. 고정 후에, 세포를 다시 한번 PBS에 2회 세척하고, 4℃에서 투과화 완충액(0.1% 사포닌+1% 어피 젤라틴) 중에 4 μg/ml의 농도로 LAMP1 1차 항체, 리소좀에 대한 마커와 함께 하룻밤 인큐베이션한다. 인큐베이션 후에, 세포를 PBS로 2회 세척하고, 4℃에서 1 시간 동안 투과화 완충액 중에 Alexa flour 647에 접합된 1 μg/ml 2차 항체로 염색한다. 인큐베이션 후에, 세포를 PBS로 2회 세척하고, PBS 중에 실온에서 10 분 동안 1 μg/ml의 Hoechst DNA 염색제로 대조 염색한다. 이어서, 세포를 PBS에 최종 1회 세척하고, 웰당 20 μl의 PBS에 재현탁시키고, Opera Phenix 공초점 고집적(high content) 현미경 상에서 이미징하였다. 획득된 이미지는 Harmony 및 ImageJ 분석 소프트웨어를 사용하여 분석한다. LAMP1 항체로 표지된, 포식 리소좀 구조 내의 타우 올리고머의 존재에 대해 조건당 대략 500개 세포를 채점한다. 포식소체 내로의 흡수에 대해 융합 작제물을 타우 Ab와 비교한다.
본 발명의 실시 형태가 상세히 그리고 이의 특이적 실시 형태를 참조하여 기재되어 있지만, 본 발명의 사상 및 범주로부터 이탈하지 않으면서 다양한 변화 및 변형이 그 안에서 이루어질 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다.
서열
PHF-타우 에피토프 서열 번호 1
SPQLATLADEVSASLAK
항-PHF-타우 항체
CDR은 밑줄로 표시함
PT/66 항-PHF-타우 단일클론 Ab
PT1B545 VH 서열 번호 2
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYWITWVKQRPGQGLEWIGDIHPGRGSTKSNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQFSSLTSEDSAVYYCARRWGFDYWGQGTTLTVSS
PT1B545 VL 서열 번호 3
DIVITQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGAGTKLELK
PT1B545 HCDR1 서열 번호 4
GYTFTSYWIT
PT1B545 HCDR2 서열 번호 5
DIHPGRGSTK
PT1B545 HCDR3 서열 번호 6
RWGFDY
PT1B545 LCDR1 서열 번호 7
RSSKSLLYKDGKTYLN
PT1B545 LCDR2 서열 번호 8
LMSTRAS
PT1B545 LCDR3 서열 번호 9
QQLVDYPLT
PT1B545 HC 서열 번호 10
QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYWITWVKQRPGQGLEWIGDIHPGRGSTKSNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQFSSLTSEDSAVYYCARRWGFDYWGQGTTLTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK
PT1B545 LC 서열 번호 11
DIVITQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC
PT1B901 인간화 Ab
PT1B901 VH 서열 번호 12
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSS
PT1B901 VL 서열 번호 13
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIK
PT1B901 HCDR1 서열 번호 4
GYTFTSYWIT
PT1B901 HCDR2 서열 번호 5
DIHPGRGSTK
PT1B901 HCDR3 서열 번호 6
RWGFDY
PT1B901 LCDR1 서열 번호 14
RSSKSLLYKDLKTYLN
PT1B901 LCDR2 서열 번호 8
LMSTRAS
PT1B901 LCDR3 서열 번호 9
QQLVDYPLT
PT1B901 HC1 서열 번호 15
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
PT1B901 LC1/2 서열 번호 16
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
PT1B901 HC2 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
PT1B901 HC 서열 번호 61
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
PT1B1153 인간화 Ab
PT1B1153 VH 서열 번호 18
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSS
PT1B1153 VL 서열 번호 19
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIK
PT1B1153 HCDR1 서열 번호 4
GYTFTSYWIT
PT1B1153 HCDR2 서열 번호 5
DIHPGRGSTK
PT1B1153 HCDR3 서열 번호 6
RWGFDY
PT1B1153 LCDR1 서열 번호 7
RSSKSLLYKDGKTYLN
PT1B1153 LCDR2 서열 번호 8
LMSTRAS
PT1B1153 LCDR3 서열 번호 9
QQLVDYPLT
PT1B1153 HC1 서열 번호 20
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
PT1B1153 LC1/2 서열 번호 21
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
PT1B1153 HC2 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
PT1B1153 HC 서열 번호 62
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
PT1B635 인간화 Ab
PT1B635 VH 서열 번호 12
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSS
PT1B635 VL 서열 번호 23
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIK
PT1B635 HCDR1 서열 번호 4
GYTFTSYWIT
PT1B635 HCDR2 서열 번호 5
DIHPGRGSTK
PT1B635 HCDR3 서열 번호 6
RWGFDY
PT1B635 LCDR1 서열 번호 7
RSSKSLLYKDGKTYLN
PT1B635 LCDR2 서열 번호 8
LMSTRAS
PT1B635 LCDR3 서열 번호 9
QQLVDYPLT
PT1B635 HC1 서열 번호 15
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
PT1B635 LC1/2 서열 번호 24
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
PT1B635 HC2 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
PT1B635 HC 서열 번호 61
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
항-CD98 및 항-TfR scFv 서열
CDR은 밑줄로 표시함; scFv 링커는 이탤릭체로 표시함
C98B72(항-CD98hc scFv) 서열 번호 25
>TPP000231088|C98B72|성숙_scFv| C98B72(항-CD98hc) scFv-HL [16-aa 변형된 조류 링커(16-aa modified Bird linker)]
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
C98B72 HCDR1 서열 번호 26
GFTFSSYGMH
C98B72 HCDR2 서열 번호 27
IISYDGSNKH
C98B72 HCDR3 서열 번호 28
APSSFYFDY
C98B72 LCDR1 서열 번호 29
KSSQSVLFSSNNKNYLA
C98B72 LCDR2 서열 번호 30
WASTRES
C98B72 LCDR3 서열 번호 31
QQYYSTPPT
C98B73(항-CD98hc scFv) 서열 번호 32
>TPP000231089|C98B73|성숙_scFv| C98B73(항-CD98hc) scFv-HL [16-aa 변형된 조류 링커]
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
C98B73 HCDR1 서열 번호 26
GFTFSSYGMH
C98B73 HCDR2 서열 번호 27
IISYDGSNKH
C98B73 HCDR3 서열 번호 33
APSHFYFDY
C98B73 LCDR1 서열 번호 29
KSSQSVLFSSNNKNYLA
C98B73 LCDR2 서열 번호 30
WASTRES
C98B73 LCDR3 서열 번호 31
QQYYSTPPT
TFRB321(항-TfR scFv) 서열 번호 34
>TPP000231087|TFRB321|성숙_scFv| TFRB321(항-TfR) spFv-HL [스테이플드 링커(stapled linker)]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGCGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGGGSGGSGGCPPCGGSGGSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGCGTKLTVL
TFRB321 HCDR1 서열 번호 35
GFTFSSYAMN
TFRB321 HCDR2 서열 번호 36
GISGSGGHTY
TFRB321 HCDR3 서열 번호 37
EGYDSSGYNPFDY
TFRB321 LCDR1 서열 번호 38
SGDKLGDKYAS
TFRB321 LCDR2 서열 번호 39
QDSKRPS
TFRB321 LCDR3 서열 번호 40
QAWDSSTVV
TFRB320(항-TfR scFv) 서열 번호 41
>TPP000231086|TFRB320|성숙_scFv| TFRB320(항-TfR) scFv-HL [16-aa 변형된 조류 링커]
EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
TFRB320 HCDR1 서열 번호 35
GFTFSSYAMN
TFRB320 HCDR2 서열 번호 36
GISGSGGHTY
TFRB320 HCDR3 서열 번호 37
EGYDSSGYNPFDY
TFRB320 LCDR1 서열 번호 38
SGDKLGDKYAS
TFRB320 LCDR2 서열 번호 39
QDSKRPS
TFRB320 LCDR3 서열 번호 40
QAWDSSTVV
항-타우-BBB 접합체
ScFV는 밑줄로 표시함; Hc_scFv 테더 링커(tether linker)는 이탤릭체로 표시함
BBBB1910
>BBBB1910|중_쇄_1| 서열 번호 43
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGCGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGGGSGGSGGCPPCGGSGGSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGCGTKLTVL
>BBBB1910|경_쇄_1/2| 서열 번호 60
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1910|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1909
>BBBB1909|중_쇄_1| 서열 번호 45
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
>BBBB1909|경_쇄_1/2| 서열 번호 60
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1909|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1626
>BBBB1626|중_쇄_1| 서열 번호 42
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGCGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGGGSGGSGGCPPCGGSGGSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGCGTKLTVL
>BBBB1626|경_쇄_1/2| 서열 번호 16
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1626|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1625
>BBBB1625|중_쇄_1| 서열 번호 42
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGCGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGGGSGGSGGCPPCGGSGGSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGCGTKLTVL
>BBBB1625|경_쇄_1/2| 서열 번호 24
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1625|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1624
>BBBB1624|중_쇄_1| 서열 번호 43
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGCGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGGGSGGSGGCPPCGGSGGSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGCGTKLTVL
>BBBB1624|경_쇄_1/2| 서열 번호 21
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1624|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1622
>BBBB1622|중_쇄_1| 서열 번호 44
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
>BBBB1622|경_쇄_1/2| 서열 번호 16
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1622|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1621
>BBBB1621|중_쇄_1| 서열 번호 44
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
>BBBB1621|경_쇄_1/2| 서열 번호 24
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1621|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1620
>BBBB1620|중_쇄_1| 서열 번호 45
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADSGFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVSGISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTSYELTQPPSVSVSPGQTASITCSGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIYQDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYCQAWDSSTVVFGGGTKLTVL
>BBBB1620|경_쇄_1/2| 서열 번호 21
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1620|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1548
>BBBB1548|중_쇄_1| 서열 번호 46
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1548|경_쇄_1/2| 서열 번호 16
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1548|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1546
>BBBB1546|중_쇄_1| 서열 번호 47
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1546|경_쇄_1/2| 서열 번호 16
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1546|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1545
>BBBB1545|중_쇄_1| 서열 번호 46
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1545|경_쇄_1/2| 서열 번호 24
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1545|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1543
>BBBB1543|중_쇄_1| 서열 번호 47
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1543|경_쇄_1/2| 서열 번호 24
DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1543|중_쇄_2| 서열 번호 17
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1508
>BBBB1508|중_쇄_1| 서열 번호 48
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1508|경_쇄_1/2| 서열 번호 21
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1508|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1506
>BBBB1506|중_쇄_1| 서열 번호 49
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1506|경_쇄_1/2| 서열 번호 21
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1506|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1505
>BBBB1505|중_쇄_1| 서열 번호 48
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1505|경_쇄_1/2| 서열 번호 60
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1505|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
BBBB1503
>BBBB1503|중_쇄_1| 서열 번호 49
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK
>BBBB1503|경_쇄_1/2| 서열 번호 60
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>BBBB1503|중_쇄_2| 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
>PT1B1183 VH 서열 번호 18
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWIT WVRQRPGQGLEWMG DIHPGRGSTK YAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR RWGFDY WGQGTLVTVSS
>PT1B1183 VL 서열 번호 59
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC RSSKSLLYKDGKTYLN WFQQRPGQSPRLLIY LMSTRAS GVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQLVDYPLT FGQGTKLEIK
>PT1B1183 HCDR1 서열 번호 4
GYTFTSYWIT
>PT1B1183 HCDR2 서열 번호 5
DIHPGRGSTK
>PT1B1183 HCDR3 서열 번호 6
RWGFDY
>PT1B1183 LCDR1 서열 번호 7
RSSKSLLYKDGKTYLN
>PT1B1183 LCDR2 서열 번호 8
LMSTRAS
>PT1B1183 LCDR3 서열 번호 9
QQLVDYPLT
>PT1B1183 HC1 서열 번호 20
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>PT1B1183 LC 서열 번호 60
DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>PT1B1183 HC2 서열 번호 22
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK
>PT1B1183 HC 서열 번호 62
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQUENCE LISTING <110> Janssen Biotech, Inc. <120> HUMANIZED ANTIBODIES AGAINST PAIRED HELICAL FILAMENT TAU AND USES THEREOF <130> 065768.11772/98US2 <160> 62 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala 1 5 10 15 Lys <210> 2 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 VH <400> 2 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Ser Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 3 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 VL <400> 3 Asp Ile Val Ile Thr Gln Asp Glu Leu Ser Asn Pro Val Thr Ser Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Lys Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 <210> 4 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 HCDR1 <400> 4 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Trp Ile Thr 1 5 10 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 HCDR2 <400> 5 Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys 1 5 10 <210> 6 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 HCDR3 <400> 6 Arg Trp Gly Phe Asp Tyr 1 5 <210> 7 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 LCDR1 <400> 7 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 LCDR2 <400> 8 Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 LCDR3 <400> 9 Gln Gln Leu Val Asp Tyr Pro Leu Thr 1 5 <210> 10 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 HC <400> 10 Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Ser Asn Glu Lys Phe 50 55 60 Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Gln Phe Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Val Cys Gly Asp Thr Thr Gly Ser Ser Val Thr Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Leu Thr Trp Asn Ser Gly Ser 145 150 155 160 Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu 165 170 175 Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Thr Ser Ser Thr Trp Pro Ser 180 185 190 Gln Ser Ile Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val 195 200 205 Asp Lys Lys Ile Glu Pro Arg Gly Pro Thr Ile Lys Pro Cys Pro Pro 210 215 220 Cys Lys Cys Pro Ala Pro Asn Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Ile 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Ile Lys Asp Val Leu Met Ile Ser Leu Ser Pro Ile 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Glu Asp Asp Pro Asp Val Gln 260 265 270 Ile Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln 275 280 285 Thr His Arg Glu Asp Tyr Asn Ser Thr Leu Arg Val Val Ser Ala Leu 290 295 300 Pro Ile Gln His Gln Asp Trp Met Ser Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Asn Asn Lys Asp Leu Pro Ala Pro Ile Glu Arg Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Pro Lys Gly Ser Val Arg Ala Pro Gln Val Tyr Val Leu Pro Pro Pro 340 345 350 Glu Glu Glu Met Thr Lys Lys Gln Val Thr Leu Thr Cys Met Val Thr 355 360 365 Asp Phe Met Pro Glu Asp Ile Tyr Val Glu Trp Thr Asn Asn Gly Lys 370 375 380 Thr Glu Leu Asn Tyr Lys Asn Thr Glu Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Tyr Phe Met Tyr Ser Lys Leu Arg Val Glu Lys Lys Asn Trp Val 405 410 415 Glu Arg Asn Ser Tyr Ser Cys Ser Val Val His Glu Gly Leu His Asn 420 425 430 His His Thr Thr Lys Ser Phe Ser Arg Thr Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 11 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B545 LC <400> 11 Asp Ile Val Ile Thr Gln Asp Glu Leu Ser Asn Pro Val Thr Ser Gly 1 5 10 15 Glu Ser Val Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Glu Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Lys Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 110 Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu 115 120 125 Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg 145 150 155 160 Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu 180 185 190 Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser 195 200 205 Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210 215 <210> 12 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B901 VH <400> 12 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 13 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B901 VL <400> 13 Asp Ile Val Ile Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Leu Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 14 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B901 LCDR1 <400> 14 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys Asp Leu Lys Thr Tyr Leu Asn 1 5 10 15 <210> 15 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B901 HC1 <400> 15 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 16 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B901 LC1/2 <400> 16 Asp Ile Val Ile Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Leu Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 17 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B901 HC2 <400> 17 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 18 <211> 115 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1153 VH <400> 18 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser 115 <210> 19 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1153 VL <400> 19 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 20 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1153 HC1 <400> 20 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 21 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1153 LC1/2 <400> 21 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Gln Gln Arg Pro Gly Gln Pro 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 22 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1153 HC2 <400> 22 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Ser Cys Ala Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Val Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 Arg Phe Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 23 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B635 VL <400> 23 Asp Ile Val Ile Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 24 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B635 LC1/2 <400> 24 Asp Ile Val Ile Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 25 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 scFv <400> 25 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Pro Ser Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly 115 120 125 Ser Glu Ser Lys Ser Thr Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser 130 135 140 Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser 145 150 155 160 Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr 165 170 175 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser 180 185 190 Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 195 200 205 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln 225 230 235 240 Gly Thr Lys Val Val Ile Lys 245 <210> 26 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 HCDR1 <400> 26 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His 1 5 10 <210> 27 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 HCDR2 <400> 27 Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His 1 5 10 <210> 28 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 HCDR3 <400> 28 Ala Pro Ser Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 29 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 LCDR1 <400> 29 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Ala <210> 30 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 LCDR2 <400> 30 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser 1 5 <210> 31 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B72 LCDR3 <400> 31 Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 32 <211> 247 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B73 scFv <400> 32 Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Pro Ser His Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110 Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly 115 120 125 Ser Glu Ser Lys Ser Thr Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser 130 135 140 Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser 145 150 155 160 Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr 165 170 175 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser 180 185 190 Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly 195 200 205 Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala 210 215 220 Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln 225 230 235 240 Gly Thr Lys Val Val Ile Lys 245 <210> 33 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C98B73 HCDR3 <400> 33 Ala Pro Ser His Phe Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 34 <211> 246 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 scFv <400> 34 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Cys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Ser Gly Gly 115 120 125 Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys Gly Gly Ser Gly Gly Ser Tyr Glu Leu 130 135 140 Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile 145 150 155 160 Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln 165 170 175 Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys 180 185 190 Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn 195 200 205 Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp 210 215 220 Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Cys Gly 225 230 235 240 Thr Lys Leu Thr Val Leu 245 <210> 35 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 HCDR1 <400> 35 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Asn 1 5 10 <210> 36 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 HCDR2 <400> 36 Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr 1 5 10 <210> 37 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 HCDR3 <400> 37 Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 38 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 LCDR1 <400> 38 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser 1 5 10 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 LCDR2 <400> 39 Gln Asp Ser Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB321 LCDR3 <400> 40 Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val 1 5 <210> 41 <211> 244 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TFRB320 scFv <400> 41 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser 115 120 125 Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Ser Tyr Glu Leu Thr Gln 130 135 140 Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser Ile Thr Cys 145 150 155 160 Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser Lys Arg Pro 180 185 190 Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly Asn Thr Ala 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr 210 215 220 Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys 225 230 235 240 Leu Thr Val Leu <210> 42 <211> 697 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1626 HC1 <400> 42 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 450 455 460 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Cys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe 545 550 555 560 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 565 570 575 Ser Gly Gly Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys Gly Gly Ser Gly Gly Ser 580 585 590 Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr 595 600 605 Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser 610 615 620 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln 625 630 635 640 Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn 645 650 655 Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp 660 665 670 Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val Phe 675 680 685 Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 690 695 <210> 43 <211> 697 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1624 HC1 <400> 43 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 450 455 460 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Cys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe 545 550 555 560 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly 565 570 575 Ser Gly Gly Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys Gly Gly Ser Gly Gly Ser 580 585 590 Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr 595 600 605 Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser 610 615 620 Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln 625 630 635 640 Asp Ser Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn 645 650 655 Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp 660 665 670 Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val Phe 675 680 685 Gly Cys Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 690 695 <210> 44 <211> 695 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1622 HC1 <400> 44 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 450 455 460 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe 545 550 555 560 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu 565 570 575 Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Ser Tyr Glu 580 585 590 Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser 595 600 605 Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr 610 615 620 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser 625 630 635 640 Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly 645 650 655 Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala 660 665 670 Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly 675 680 685 Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 690 695 <210> 45 <211> 695 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1620 HC1 <400> 45 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 450 455 460 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Asp Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Ala Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ser Gly Ile Ser Gly Ser Gly Gly His Thr Tyr Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Gly Tyr Asp Ser Ser Gly Tyr Asn Pro Phe 545 550 555 560 Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu 565 570 575 Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Ser Tyr Glu 580 585 590 Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln Thr Ala Ser 595 600 605 Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala Ser Trp Tyr 610 615 620 Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr Gln Asp Ser 625 630 635 640 Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser Asn Ser Gly 645 650 655 Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met Asp Glu Ala 660 665 670 Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val Phe Gly Gly 675 680 685 Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 690 695 <210> 46 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1548 HC1 <400> 46 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 450 455 460 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Ser Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 545 550 555 560 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser 565 570 575 Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Asp Ile Val Met Thr Gln Ser 580 585 590 Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 595 600 605 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 610 615 620 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 625 630 635 640 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 645 650 655 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu 660 665 670 Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 675 680 685 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys 690 695 <210> 47 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1546 HC1 <400> 47 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 450 455 460 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Ser His Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 545 550 555 560 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser 565 570 575 Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Asp Ile Val Met Thr Gln Ser 580 585 590 Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 595 600 605 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 610 615 620 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 625 630 635 640 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 645 650 655 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu 660 665 670 Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 675 680 685 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys 690 695 <210> 48 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1508 HC1 <400> 48 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 450 455 460 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Ser Ser Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 545 550 555 560 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser 565 570 575 Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Asp Ile Val Met Thr Gln Ser 580 585 590 Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 595 600 605 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 610 615 620 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 625 630 635 640 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 645 650 655 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu 660 665 670 Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 675 680 685 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys 690 695 <210> 49 <211> 698 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> BBBB1506 HC1 <400> 49 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Tyr Ile Thr Arg Glu Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Ser Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Ala 435 440 445 Gly Gly Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 450 455 460 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 465 470 475 480 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 485 490 495 Glu Trp Val Ala Ile Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys His Tyr Ala 500 505 510 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn 515 520 525 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val 530 535 540 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Pro Ser His Phe Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly 545 550 555 560 Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser 565 570 575 Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr Asp Ile Val Met Thr Gln Ser 580 585 590 Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys 595 600 605 Lys Ser Ser Gln Ser Val Leu Phe Ser Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu 610 615 620 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr 625 630 635 640 Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser 645 650 655 Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu 660 665 670 Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Tyr Ser Thr Pro Pro Thr 675 680 685 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Val Ile Lys 690 695 <210> 50 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 50 Gly Gly Gly Ser Gly Gly Ser Gly Gly Cys Pro Pro Cys Gly Gly Ser 1 5 10 15 Gly Gly <210> 51 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 51 Gly Thr Glu Gly Lys Ser Ser Gly Ser Gly Ser Glu Ser Lys Ser Thr 1 5 10 15 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Linker <400> 52 Gly Gly Ala Gly Gly Ala 1 5 <210> 53 <211> 352 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Ala Glu Glu Ala 35 40 45 Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val 50 55 60 Thr Gln Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp 65 70 75 80 Asp Lys Lys Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro 85 90 95 Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg 100 105 110 Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly 115 120 125 Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser 130 135 140 Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro 145 150 155 160 Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys 165 170 175 Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met 180 185 190 Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu 195 200 205 Lys His Gln Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val 210 215 220 Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His 225 230 235 240 His Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp 245 250 255 Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr 260 265 270 His Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr 275 280 285 Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val 290 295 300 Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser 305 310 315 320 Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu 325 330 335 Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 340 345 350 <210> 54 <211> 381 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45 Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser 50 55 60 Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly 65 70 75 80 Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala 85 90 95 Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys 100 105 110 Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala 115 120 125 Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala 130 135 140 Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro 145 150 155 160 Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr 165 170 175 Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg 180 185 190 Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser 195 200 205 Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu 210 215 220 Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln 225 230 235 240 Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser 245 250 255 Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro 260 265 270 Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp 275 280 285 Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro 290 295 300 Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu 305 310 315 320 Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser 325 330 335 Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser 340 345 350 Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu 355 360 365 Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 370 375 380 <210> 55 <211> 410 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45 Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser 50 55 60 Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val 65 70 75 80 Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu 85 90 95 Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro 100 105 110 Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro 145 150 155 160 Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro 165 170 175 Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly 180 185 190 Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser 195 200 205 Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys 210 215 220 Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys 225 230 235 240 Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val 245 250 255 Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly 260 265 270 Gly Lys Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr 275 280 285 Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln 305 310 315 320 Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly 325 330 335 Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys 340 345 350 Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val 355 360 365 Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly 370 375 380 Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu 385 390 395 400 Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 405 410 <210> 56 <211> 383 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Ala Glu Glu Ala 35 40 45 Gly Ile Gly Asp Thr Pro Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val 50 55 60 Thr Gln Ala Arg Met Val Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp 65 70 75 80 Asp Lys Lys Ala Lys Gly Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro 85 90 95 Arg Gly Ala Ala Pro Pro Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg 100 105 110 Ile Pro Ala Lys Thr Pro Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly 115 120 125 Glu Pro Pro Lys Ser Gly Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser 130 135 140 Pro Gly Thr Pro Gly Ser Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro 145 150 155 160 Pro Thr Arg Glu Pro Lys Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys 165 170 175 Ser Pro Ser Ser Ala Lys Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met 180 185 190 Pro Asp Leu Lys Asn Val Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu 195 200 205 Lys His Gln Pro Gly Gly Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu 210 215 220 Asp Leu Ser Asn Val Gln Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys 225 230 235 240 His Val Pro Gly Gly Gly Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp 245 250 255 Leu Ser Lys Val Thr Ser Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His 260 265 270 Lys Pro Gly Gly Gly Gln Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe 275 280 285 Lys Asp Arg Val Gln Ser Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His 290 295 300 Val Pro Gly Gly Gly Asn Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe 305 310 315 320 Arg Glu Asn Ala Lys Ala Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr 325 330 335 Lys Ser Pro Val Val Ser Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn 340 345 350 Val Ser Ser Thr Gly Ser Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala 355 360 365 Thr Leu Ala Asp Glu Val Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 370 375 380 <210> 57 <211> 441 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45 Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser 50 55 60 Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val 65 70 75 80 Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu 85 90 95 Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro 100 105 110 Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro 145 150 155 160 Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro 165 170 175 Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly 180 185 190 Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser 195 200 205 Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys 210 215 220 Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys 225 230 235 240 Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val 245 250 255 Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly 260 265 270 Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln 275 280 285 Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser 305 310 315 320 Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln 325 330 335 Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser 340 345 350 Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn 355 360 365 Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala 370 375 380 Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser 385 390 395 400 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 405 410 415 Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val 420 425 430 Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 435 440 <210> 58 <211> 441 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Met Ala Glu Pro Arg Gln Glu Phe Glu Val Met Glu Asp His Ala Gly 1 5 10 15 Thr Tyr Gly Leu Gly Asp Arg Lys Asp Gln Gly Gly Tyr Thr Met His 20 25 30 Gln Asp Gln Glu Gly Asp Thr Asp Ala Gly Leu Lys Glu Ser Pro Leu 35 40 45 Gln Thr Pro Thr Glu Asp Gly Ser Glu Glu Pro Gly Ser Glu Thr Ser 50 55 60 Asp Ala Lys Ser Thr Pro Thr Ala Glu Asp Val Thr Ala Pro Leu Val 65 70 75 80 Asp Glu Gly Ala Pro Gly Lys Gln Ala Ala Ala Gln Pro His Thr Glu 85 90 95 Ile Pro Glu Gly Thr Thr Ala Glu Glu Ala Gly Ile Gly Asp Thr Pro 100 105 110 Ser Leu Glu Asp Glu Ala Ala Gly His Val Thr Gln Ala Arg Met Val 115 120 125 Ser Lys Ser Lys Asp Gly Thr Gly Ser Asp Asp Lys Lys Ala Lys Gly 130 135 140 Ala Asp Gly Lys Thr Lys Ile Ala Thr Pro Arg Gly Ala Ala Pro Pro 145 150 155 160 Gly Gln Lys Gly Gln Ala Asn Ala Thr Arg Ile Pro Ala Lys Thr Pro 165 170 175 Pro Ala Pro Lys Thr Pro Pro Ser Ser Gly Glu Pro Pro Lys Ser Gly 180 185 190 Asp Arg Ser Gly Tyr Ser Ser Pro Gly Ser Pro Gly Thr Pro Gly Ser 195 200 205 Arg Ser Arg Thr Pro Ser Leu Pro Thr Pro Pro Thr Arg Glu Pro Lys 210 215 220 Lys Val Ala Val Val Arg Thr Pro Pro Lys Ser Pro Ser Ser Ala Lys 225 230 235 240 Ser Arg Leu Gln Thr Ala Pro Val Pro Met Pro Asp Leu Lys Asn Val 245 250 255 Lys Ser Lys Ile Gly Ser Thr Glu Asn Leu Lys His Gln Pro Gly Gly 260 265 270 Gly Lys Val Gln Ile Ile Asn Lys Lys Leu Asp Leu Ser Asn Val Gln 275 280 285 Ser Lys Cys Gly Ser Lys Asp Asn Ile Lys His Val Pro Gly Gly Gly 290 295 300 Ser Val Gln Ile Val Tyr Lys Pro Val Asp Leu Ser Lys Val Thr Ser 305 310 315 320 Lys Cys Gly Ser Leu Gly Asn Ile His His Lys Pro Gly Gly Gly Gln 325 330 335 Val Glu Val Lys Ser Glu Lys Leu Asp Phe Lys Asp Arg Val Gln Ser 340 345 350 Lys Ile Gly Ser Leu Asp Asn Ile Thr His Val Pro Gly Gly Gly Asn 355 360 365 Lys Lys Ile Glu Thr His Lys Leu Thr Phe Arg Glu Asn Ala Lys Ala 370 375 380 Lys Thr Asp His Gly Ala Glu Ile Val Tyr Lys Ser Pro Val Val Ser 385 390 395 400 Gly Asp Thr Ser Pro Arg His Leu Ser Asn Val Ser Ser Thr Gly Ser 405 410 415 Ile Asp Met Val Asp Ser Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ala Asp Glu Val 420 425 430 Ser Ala Ser Leu Ala Lys Gln Gly Leu 435 440 <210> 59 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1183 VL <400> 59 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 60 <211> 219 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1183 LC <400> 60 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Ser Pro Val Thr Leu Gly 1 5 10 15 Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu Tyr Lys 20 25 30 Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu 85 90 95 Val Asp Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 110 Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu 115 120 125 Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 130 135 140 Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln 145 150 155 160 Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser 165 170 175 Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 180 185 190 Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 195 200 205 Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 61 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PR1B901 & PT1B635 HC <400> 61 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 62 <211> 445 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> PT1B1153 & PT1B1183 HC <400> 62 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Trp Ile Thr Trp Val Arg Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Asp Ile His Pro Gly Arg Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gln Lys Leu 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Arg Trp Gly Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr 100 105 110 Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro 115 120 125 Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val 130 135 140 Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala 145 150 155 160 Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly 165 170 175 Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly 180 185 190 Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys 195 200 205 Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys 210 215 220 Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255 Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 270 Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys 275 280 285 Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300 Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys 325 330 335 Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350 Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365 Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln 370 375 380 Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly 385 390 395 400 Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln 405 410 415 Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445

Claims (33)

  1. 서열 번호 1의 아미노산 서열로 이루어지거나 그 안에 있는 타우 단백질의 에피토프에서 타우 단백질에 결합하며, 쌍 나선형 필라멘트(PHF)-타우, 바람직하게는 인간 PHF-타우에 결합하고, 여기서 타우 단백질의 에피토프는 타우 단백질의 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 중 하나 이상을 포함하지만, 인산화된 T427, 인산화된 S433, 및 인산화된 S435 전부를 포함하지는 않는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  2. 제1항에 있어서, 각각 서열 번호 4, 5, 및 6의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 중쇄 상보성 결정 영역(HCDR) HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3; 및 각각 서열 번호 7 또는 14, 8, 및 9의 폴리펩티드 서열을 갖는 면역글로불린 경쇄 상보성 결정 영역(LCDR) LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하며; 서열 번호 12 또는 18과 90% 이상 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 또는 서열 번호 13, 19, 23, 또는 59와 90% 이상 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  3. 제2항에 있어서, 서열 번호 12 또는 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13, 19, 23, 또는 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 13의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
    (b) 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 19의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역;
    (c) 서열 번호 12의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 23의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역; 또는
    (d) 서열 번호 18의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변 영역, 및 서열 번호 59의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 서열 번호 15 또는 20의 폴리펩티드 서열을 갖는 제1 중쇄;
    (b) 각각 독립적으로 서열 번호 16, 21, 24, 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 2개의 경쇄; 및
    (c) 서열 번호 17 또는 22의 폴리펩티드 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서,
    (a) 서열 번호 61 또는 62의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄; 및
    (b) 각각 서열 번호 16 또는 24, 또는 21 또는 60의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄를 포함하는, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  7. 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 커플링된, 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는, 접합체.
  8. 제7항에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 1 nM 이상, 바람직하게는 1 내지 500 nM의 해리 상수 KD, 및 산성 pH, 바람직하게는 pH 5에서 10-4 초-1 이상, 바람직하게는 10-4 내지 10-1 초-1의 오프-속도 상수(off-rate constant) kd로 각각 CD98, 바람직하게는 인간 CD98hc, 또는 TfR, 바람직하게는 인간 TfR1에 결합하는, 접합체.
  9. 제7항 또는 제8항에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 중성 pH에서 2 x 10-2 내지 2 x 10-4 초-1, 바람직하게는 8 x 10-3 초-1의 오프-속도 상수 kd를 갖는, 접합체.
  10. 제7항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서
    (a) 항-CD98 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 26, 27, 28 또는 33, 29, 30, 및 31의 아미노산 서열을 갖거나;
    (b) 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3은 각각 서열 번호 35, 36, 37, 38, 39, 및 40의 아미노산 서열을 갖는, 접합체.
  11. 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 링커를 통해 경쇄 가변 영역에 공유적으로 연결된 중쇄 가변 영역을 포함하는 단일-사슬 가변 단편(scFv)이며, 바람직하게는, 링커는 서열번호 55 또는 56의 아미노산 서열을 갖고, 더욱 바람직하게는, scFv는 서열 번호 25, 서열 번호 32, 서열 번호 34, 또는 서열 번호 41의 아미노산 서열에 대해 80% 이상, 예컨대 85%, 90%, 95% 이상, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는, 접합체.
  12. 항-CD98 또는 항-TfR 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 2개의 중쇄 중 하나만의 카르복시 말단에 링커를 통해 공유적으로 연결되며, 바람직하게는 링커는 서열 번호 52의 아미노산 서열을 갖는, 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항의 접합체를 포함하는, 융합 작제물.
  13. 제12항에 있어서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 2개의 중쇄 각각은, 야생형 CH3 도메인 폴리펩티드와 비교하여, 하나 이상의 이종이량체 돌연변이, 예컨대 변형된 이종이량체 CH3 도메인, 또는 하나 이상의 노브 및 홀(knob and hole) 돌연변이를 포함하는, 융합 작제물.
  14. 제13항에 있어서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, L351, F405, 및 Y407에서 아미노산 변형을 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 위치 T350, T366, K392, 및 T394에서 아미노산 변형을 포함하며, 여기서 위치 T350에서의 아미노산 변형은 T350V, T350I, T350L, 또는 T350M이고; 위치 L351에서의 아미노산 변형은 L351Y이고; 위치 F405에서의 아미노산 변형은 F405A, F405V, F405T, 또는 F405S이고; 위치 Y407에서의 아미노산 변형은 Y407V, Y407A, 또는 Y407I이고; 위치 T366에서의 아미노산 변형은 T366L, T366I, T366V, 또는 T366M이고, 위치 K392에서의 아미노산 변형은 K392F, K392L, 또는 K392M이고, 위치 T394에서의 아미노산 변형은 T394W이며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따르는, 융합 작제물.
  15. 제13항에 있어서, 제1 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366W를 포함하고, 제2 중쇄의 변형된 이종이량체 CH3 도메인은 돌연변이 T366S, L368A, 및 Y407V를 포함하는, 융합 작제물.
  16. 제12항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 신생아 Fc 수용체(RcRn)에 대한 융합체의 결합을 향상시키는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하며, 바람직하게는 하나 이상의 돌연변이는 산성 pH에서 결합을 향상시키고, 더욱 바람직하게는 Fc는 M252Y/S254T/T256E(YTE) 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따르는, 융합 작제물.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이펙터 기능을 감소시키거나 제거하는 Fc 도메인 내의 하나 이상의 돌연변이를 포함하고, 바람직하게는 Fc는 위치 L234, L235, D270, N297, E318, K320, K322, P331, 및 P329에서의 하나 이상의 아미노산 변형, 예컨대 L234A, L235A, 및 P331S 중 1, 2, 또는 3개의 돌연변이를 가지며, 여기서 아미노산 잔기의 넘버링은 카바트에 기재된 바와 같이 EU 인덱스에 따르는, 융합 작제물.
  18. (a) 서열 번호 42 내지 49로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 제1 중쇄;
    (b) 각각 독립적으로 서열 번호 16, 21, 24, 및 60으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 2개의 경쇄; 및
    (c) 서열 번호 17 및 22로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는 제2 중쇄를 포함하는, 융합 작제물.
  19. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항의 접합체, 또는 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항의 융합 작제물을 인코딩하는, 단리된 핵산.
  20. 제19항의 단리된 핵산을 포함하는, 벡터.
  21. 제19항의 단리된 핵산 또는 제20항의 벡터를 포함하는, 숙주 세포.
  22. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항의 접합체, 또는 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항의 융합 작제물을 생성하는 방법으로서, 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 제조하는 조건 하에 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하는 단계, 및 세포 또는 세포 배양물로부터 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 접합체, 또는 융합 작제물을 회수하는 단계를 포함하는, 방법.
  23. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 단리된 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 제7항 내지 제11항 중 어느 한 항의 접합체, 또는 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항의 융합 작제물, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
  24. 타우 시딩의 차단을 필요로 하는 대상체에서 타우 시딩을 차단하는 방법으로서, 제23항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  25. 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)의 유도를 필요로 하는 대상체에서 전염증성 사이토카인의 분비를 자극하지 않으면서 항체 의존성 식세포작용(ADP)을 유도하는 방법으로서, 제23항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  26. 타우병증의 치료를 필요로 하는 대상체에서 타우병증을 치료하는 방법으로서, 제23항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  27. 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산의 감소를 필요로 하는 대상체에서 병리학적 타우 응집 또는 타우병증의 확산을 감소시키는 방법으로서, 제23항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  28. 제27항에 있어서, 타우병증은 가족성 알츠하이머병(Alzheimer's disease), 산발성 알츠하이머병, 17번 염색체와 연관된 파킨슨증을 동반하는 전측두엽 치매(FTDP-17), 진행성 핵상 마비, 피질기저핵 변성, 픽병, 진행성 피질하 신경교증, 농축체 단독 치매, 석회화를 동반하는 광범위 신경섬유 매듭(neurofibrillary tangle), 은친화성 과립성 치매, 근위축성 측삭 경화증 파킨슨증-치매 복합군, 다운 증후군, 게르스트만-슈투로이슬러-샤잉커병, 할러포르텐-스파츠병, 봉입체 근염, 크로이츠펠트-야콥병, 다계통 위축증, C형 니만-픽병, 프리온 단백질 대뇌 아밀로이드 맥관병증, 아급성 경화성 범뇌염, 근긴장성 이영양증, 신경섬유 매듭을 동반하는 비-괌 운동 신경세포병, 뇌염후 파킨슨증, 만성 외상성 뇌병증, 및 권투선수 치매(복싱병)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.
  29. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여되는, 방법.
  30. 제24항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물은 대상체의 혈액-뇌 장벽(BBB)을 가로질러 전달되는, 방법.
  31. 제24항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 투여는 Fc-매개 이펙터 기능을 감소시키고/시키거나 신속한 망상적혈구 고갈을 유도하지 않는, 방법.
  32. 대상체로부터의 생물학적 샘플에서 PHF-타우의 존재를 검출하는 방법으로서, 생물학적 샘플을 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 대상체로부터의 샘플에서 PHF-타우에 대한 인간화 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 결합을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  33. 제32항에 있어서, 생물학적 샘플은 혈액, 혈청, 혈장, 간질액, 또는 뇌척수액 샘플인, 방법.
KR1020237035586A 2021-03-26 2022-03-25 쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도 KR20230162793A (ko)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US202163166524P 2021-03-26 2021-03-26
US63/166,524 2021-03-26
US202263269225P 2022-03-11 2022-03-11
US63/269,225 2022-03-11
PCT/IB2022/052763 WO2022201122A1 (en) 2021-03-26 2022-03-25 Humanized antibodies against paired helical filament tau and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20230162793A true KR20230162793A (ko) 2023-11-28

Family

ID=81326362

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020237035586A KR20230162793A (ko) 2021-03-26 2022-03-25 쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도

Country Status (10)

Country Link
EP (1) EP4314059A1 (ko)
JP (1) JP2024513172A (ko)
KR (1) KR20230162793A (ko)
AU (1) AU2022246275A1 (ko)
BR (1) BR112023019205A2 (ko)
CA (1) CA3214440A1 (ko)
IL (1) IL307168A (ko)
TW (1) TW202304990A (ko)
UY (1) UY39698A (ko)
WO (1) WO2022201122A1 (ko)

Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US6750325B1 (en) 1989-12-21 2004-06-15 Celltech R&D Limited CD3 specific recombinant antibody
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5165424A (en) 1990-08-09 1992-11-24 Silverman Harvey N Method and system for whitening teeth
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
LU91067I2 (fr) 1991-06-14 2004-04-02 Genentech Inc Trastuzumab et ses variantes et dérivés immuno chimiques y compris les immotoxines
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
ATE503496T1 (de) 1992-02-06 2011-04-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Biosynthetisches bindeprotein für tumormarker
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5697151A (en) 1995-08-07 1997-12-16 General Electric Company Method for repairing partitions of a turbine diaphragm
CA2288992C (en) 1997-04-30 2012-06-12 Enzon, Inc. Single-chain antigen-binding proteins capable of glycosylation, production and uses thereof
PT1068241E (pt) 1998-04-02 2007-11-19 Genentech Inc Variantes de anticorpos e respectivos fragmentos
EP2364997A3 (en) 1999-01-15 2012-07-04 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
LT2857516T (lt) 2000-04-11 2017-09-11 Genentech, Inc. Multivalentiniai antikūnai ir jų panaudojimas
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
IL166244A0 (en) 2001-07-12 2006-01-15 Jefferson Foote Super humanized antibodies
US7657380B2 (en) 2003-12-04 2010-02-02 Xencor, Inc. Methods of generating variant antibodies with increased host string content
JP2007534631A (ja) 2003-10-28 2007-11-29 ノボ　ノルディスク　アクティーゼルスカブ ラミニン−５γ２結合性ペプチド、その関連組成物およびその使用
EP2059533B1 (en) 2006-08-30 2012-11-14 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
CA2709847C (en) 2008-01-07 2018-07-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
US20100261620A1 (en) 2008-10-14 2010-10-14 Juan Carlos Almagro Methods of Humanizing and Affinity-Maturing Antibodies
CN109897103A (zh) 2011-11-04 2019-06-18 酵活有限公司 在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计
SI2794654T1 (sl) * 2011-12-20 2019-08-30 Janssen Biotech, Inc. Protitelesa proti PHF-tau njihove uporabe
KR102494798B1 (ko) 2012-07-03 2023-02-06 워싱턴 유니버시티 Tau에 대한 항체
US20210270847A1 (en) * 2018-08-17 2021-09-02 University Of Florida Research Foundation, Incorporated Protein and peptide biomarkers for traumatic injury to the central nervous system

Also Published As

Publication number Publication date
TW202304990A (zh) 2023-02-01
UY39698A (es) 2022-09-30
WO2022201122A1 (en) 2022-09-29
EP4314059A1 (en) 2024-02-07
JP2024513172A (ja) 2024-03-22
AU2022246275A1 (en) 2023-11-09
BR112023019205A2 (pt) 2023-10-24
CA3214440A1 (en) 2022-09-29
IL307168A (en) 2023-11-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
AU2008334637B2 (en) Antigen binding proteins
US8858943B2 (en) Antigen binding proteins
US20230174646A1 (en) Compositions and Methods For Blood-Brain Barrier Delivery
CN111320695B (zh) 治疗或预防认知障碍的人源化抗体、其生产方法及使用其用于治疗或预防认识障碍的剂
KR20230065382A (ko) 항-소틸린 항체 및 이들의 사용 방법
WO2016112078A2 (en) Anti-phf-tau antibodies and their uses
KR20220166308A (ko) 항-phf-타우 항체 및 이의 용도
US20230174669A1 (en) Anti-CD98 Antibodies And Uses Thereof
CA3214310A1 (en) Anti-tau antibodies and uses thereof
JP2022514290A (ja) 改変抗体ｆｃおよび使用方法
CA3025995C (en) Fusion proteins for ophthalmology with increased eye retention
KR20230162793A (ko) 쌍 나선형 필라멘트 타우에 대한 인간화 항체 및 이의 용도
CN117083298A (zh) 针对成对螺旋细丝tau的人源化抗体及其用途
US20220380446A1 (en) Antibodies for treating alpha-synucleinopathies
WO2023170295A1 (en) Multispecific antibodies and uses thereof
WO2023170290A1 (en) Multispecific antibodies and uses thereof
TW202400636A (zh) 多特異性抗體及其用途(一)
EA045151B1 (ru) Антитела анти-phf-тау и их применение
EA040482B1 (ru) Гуманизированное антитело для лечения или предотвращения когнитивных расстройств, способ его получения и агент для лечения или предотвращения когнитивных расстройств с его применением