TW202304990A - 針對成對螺旋絲ｔａｕ之人源化抗體及其用途 - Google Patents

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帕塔 喬杜里
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Abstract

描述人源化抗PHF-tau抗體及其抗原結合片段。亦描述編碼該等抗體之核酸、該等抗體之接合物及融合構築體、包含該等抗體之組成物、產生該等抗體之方法、及使用該等抗體治療或預防諸如tau蛋白病之病況的方法。

Description

針對成對螺旋絲TAU之人源化抗體及其用途
本申請案係關於人源化抗PHF-tau抗體、抗體接合物、編碼該等抗體之核酸及表現載體、含有該等載體之重組細胞、及包含該等抗體之組成物。亦提供製作該等抗體之方法、使用該等抗體治療包括tau蛋白病之病況的方法、及使用該等抗體診斷諸如tau蛋白病之疾病的方法。 電子提交序列表之參照
本申請案含有序列表，該序列表已以ASCII格式序列表經由EFS-Web電子提交，檔案名稱為「065768.98US2 Sequence Listing」，創建日期為2022年3月8日，檔案大小為125 kb。經由EFS-Web提交之序列表係本說明書之一部分，其全文以引用方式併入本文中。
阿茲海默症(AD)是一種在臨床上藉由下列表徵的退化性腦部病症：逐漸喪失記憶、認知、推理、判斷及情緒穩定性，其逐漸導致極度心智衰退(profound mental deterioration)而最終死亡。AD是老年人類之進行性心智減退(progressive mental failure)（失智症）之極常見的原因，且據信代表美國第四位最常見的醫學上的死因。AD已在全世界族群中觀測到且代表目前及未來的主要公共健康問題。
患有AD的個體之腦部展現出特有病變，該等病變稱為老年（或類澱粉）斑塊、類澱粉血管病變（血管中的類澱粉沉積）、及神經纖維纏結。大量此等病變，特別是成對螺旋絲之類澱粉斑塊及神經纖維纏結，通常發現於患有AD之患者中之人類腦部對記憶及認知功能相當重要的若干區域。
當前AD治療情形僅包括經核准治療患有失智症之患者之認知症狀的療法。不存在改變或減慢AD進展之經核准療法。潛在的疾病調節劑係抗類澱粉抗體，包括Eli Lilly的多納單抗(Donanemab)，一種識別Aβ(p3-42)（一種Aβ的焦麩胺酸形式）之人源化IgG1單株抗體；及阿杜坎單抗(aducanumab)，一種針對Aβ上發現的構型表位之人類IgG1單株抗體。該等療法及接下來的十年中可能推出之大部分其他潛在疾病調節劑靶向Aβ（類澱粉斑塊之主要組分，類澱粉斑塊是AD之兩種「標誌性(hallmark)」病理徵象之一）。
神經纖維纏結（AD之第二標誌性病理徵象）主要係由過度磷酸化(hyper-phosphorylated) tau蛋白之聚集物所構成。tau之主要生理功能係微管聚合及穩定。tau與微管之結合係藉由介於tau之微管結合區中之正電荷與微管晶格(lattice)上之負電荷之間的離子交互作用而發生(Butner and Kirschner, J Cell Biol. 115(3):717-30, 1991)。tau蛋白含有85個可能的磷酸化位點，並且許多這些位點處之磷酸化干擾tau之主要功能。結合至軸突微管網格之tau處於低磷酸化狀態，而AD中聚集的tau是超磷酸化的，其提供不同於生理活性的taut池之獨特表位。
tau蛋白病(tauopathy)傳播及蔓延假說已得到描述，且是基於人腦中tau蛋白病進展之Braak階段及臨床前tau模型中tau聚集物注射後之tau蛋白病蔓延(Frost et al., J Biol Chem. 284:12845-52, 2009; Clavaguera et al., Nat Cell Biol. 11:909-13, 2009)。
開發預防或清除tau聚集之治療劑多年來一直受到關注，且候選藥物（包括抗聚集化合物及激酶抑制劑）已進入臨床測試(Brunden et al., Nat Rev Drug Discov. 8:783-93, 2009)。已公開多個研究，該等研究顯示轉基因小鼠模型中主動及被動tau免疫兩者之有益的治療效應(Chai et al., J Biol Chem.286:34457-67, 2011; Boutajangout et al., J Neurochem.118:658-67, 2011; Boutajangout et al., J Neurosci.30:16559-66, 2010; Asuni et al., J Neurosci.27:9115-29, 2007)。已報導在磷酸化定向抗體及非磷酸化定向抗體兩者之情況下的活性(Schroeder et al., J Neuroimmune Pharmacol. 11(1):9-25, 2016)。
儘管有所進展，但仍需要預防tau聚集及tau蛋白病進展之有效治療劑，以治療諸如AD之tau蛋白病及其他神經退化性疾病。
本申請案藉由提供人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段來滿足此需要，該等抗體或其抗原結合片段對成對螺旋絲(PHF)-tau具有高結合親和力，且對磷酸化tau具有選擇性。本申請案之人源化抗體藉由小鼠PHF-tau特異性抗體之人類架構調適(human framework adaptation, HFA)來生成。認為該等抗體對磷酸化tau之選擇性實現針對致病性tau之功效而不干擾正常tau功能。本申請案亦提供編碼該等抗體之核酸、包含該等抗體之組成物、及製作及使用該等抗體之方法。本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段抑制tau種子(seed)，如藉由使用衍生自HEK細胞溶解產物或來自突變tau轉基因小鼠之脊髓溶解產物之tau種子進行之細胞檢定所測量。另外，具有本申請案之抗PHF-tau抗體之可變區及小鼠Ig恆定區（諸如小鼠IgG2a恆定區）的嵌合抗體阻斷體內突變tau轉基因小鼠模型中之播種(seeding)活性。
AD腦中tau蛋白病之進展遵循不同的特殊蔓延模式。在臨床前模型中已顯示細胞外磷酸化tau種子可以誘導神經元中之tau蛋白病（Clavaguera等人，PNAS 110(23):9535-40, 2013）。因此，據信tau蛋白病可以類普里昂蛋白之方式從一個腦部區域蔓延至下一個腦部區域。此蔓延過程將涉及可被附近神經元吸收且進一步誘導tau蛋白病之tau種子之外化。雖然不希望受到理論約束，但是認為本申請案之抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段藉由與磷酸化tau種子交互作用來預防腦中之tau聚集或tau蛋白病蔓延。
在一個一般態樣中，本申請案係關於一種結合PHF-tau之單離人源化抗體或其抗原結合片段。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種單離人源化抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段在由SEQ ID NO: 1之胺基酸序列所組成或在該胺基酸序列內之tau蛋白的表位處結合至該tau蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合成對螺旋絲(PHF)-tau，較佳係人類PHF-tau。
根據一具體態樣，本申請案係關於一種單離人源化抗體或其抗原結合片段，該抗體或其抗原結合片段在由SEQ ID NO: 1之胺基酸序列所組成或在該胺基酸序列內之tau蛋白的表位處結合至該tau蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合成對螺旋絲(PHF)-tau，較佳係人類PHF-tau，其中該tau蛋白之表位包含tau蛋白之磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435中之一或多者，但不包含所有的磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO: 4、5、及6之多肽序列的免疫球蛋白重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2、及HCDR3；及分別具有SEQ ID NO: 7或14、8、及9之多肽序列的免疫球蛋白輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2、及LCDR3；其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO: 12或18至少90%同一之多肽序列的重鏈可變區、及具有與SEQ ID NO: 13、19、23、或59至少90%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 12或18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 13、19、23、或59之多肽序列的輕鏈可變區。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含： (a)  具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 13之多肽序列的輕鏈可變區； (b) 具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 19之多肽序列的輕鏈可變區； (c)  具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 23之多肽序列的輕鏈可變區；或 (d) 具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 59之多肽序列的輕鏈可變區。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含： (a)  具有SEQ ID NO: 15或20之多肽序列的第一重鏈； (e)  各自獨立地具有SEQ ID NO: 16、21、24、或60之多肽序列的兩個輕鏈；及 (c)  具有SEQ ID NO: 17或22之多肽序列的第二重鏈。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含： (a)  具有SEQ ID NO: 61或62之多肽序列的重鏈；及 (a)  分別具有SEQ ID NO: 16或24、或21或60之多肽序列的輕鏈。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種接合物，其包含偶合至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之本申請案之單離人源化抗體或其抗原結合片段。
根據一具體態樣，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段分別結合至CD98、較佳係人類CD98hc、或TfR、較佳係人類TfR1，在中性pH下之解離常數K D為至少1 nM、較佳係1至500 nM，且在酸性pH下、較佳係pH 5之解離速率(off-rate)常數k d為至少10 -4sec -1、較佳係10 -4至10 -1sec -1。
根據另一具體態樣，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段在中性pH下具有之解離速率常數k d為2 × 10 -2至2 × 10 -4sec -1、較佳係8 × 10 -3sec -1。
根據另一具體態樣，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段包含：包含HCDR1、HCDR2、及HCDR3之重鏈可變區，及包含LCDR1、LCDR2、及LCDR3之輕鏈可變區，其中： (a)  該抗CD98抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 26、27、28或33、29、30、及31之胺基酸序列；或 (b) 該抗TfR抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 35、36、37、38、39、及40之胺基酸序列。
根據另一具體態樣，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段係單鏈可變片段(scFv)，其包含經由連接子共價連接至輕鏈可變區之該重鏈可變區，較佳地，該連接子具有SEQ ID NO: 50或51之胺基酸序列，更佳地，該scFv包含具有與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、或SEQ ID NO: 41之胺基酸序列至少80%、諸如至少85%、90%、95%、或100%序列同一性之胺基酸序列。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種融合構築體，其包含本申請案之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段經由連接子共價連接至單離人源化抗體或其抗原結合片段的兩個重鏈中僅一者之羧基端，較佳地其中該連接子具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
根據一具體態樣，相較於野生型CH3域多肽，該單離人源化抗體或其抗原結合片段之兩個重鏈之各者包含一或多個異二聚突變，諸如經修飾之異二聚CH3域、或一或多個鈕(knob)及孔(hole)突變。
根據另一具體態樣，第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、L351、F405、及Y407處之胺基酸修飾，且第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、T366、K392、及T394處之胺基酸修飾，其中位置T350處之胺基酸修飾係T350V、T350I、T350L、或T350M；位置L351處之胺基酸修飾係L351Y；位置F405處之胺基酸修飾係F405A、F405V、F405T、或F405S；位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、或Y407I；位置T366處之胺基酸修飾係T366L、T366I、T366V、或T366M，位置K392處之胺基酸修飾係K392F、K392L、或K392M，及位置T394處之胺基酸修飾係T394W，且其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
根據另一具體態樣，第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T366W，且第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T366S、L368A、及Y407V。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變增強融合至新生Fc受體(RcRn)之結合，較佳地該一或多個突變增強在酸性pH之結合，更佳地Fc具有M252Y/S254T/T256E (YTE)突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變降低或消除效應功能，較佳地該Fc在位置L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331、及P329處具有一或多個胺基酸修飾，諸如L234A、L235A、及P331S中之一、二、或三個突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種融合構築體，其包含： (a)  具有選自由SEQ ID NO: 42至49所組成之群組之胺基酸序列的第一重鏈； (b) 各自獨立地具有選自由SEQ ID NO: 16、21、24、及60所組成之群組之胺基酸序列的兩個輕鏈；及 (c)  具有選自由SEQ ID NO: 17及22所組成之群組之胺基酸序列的第二重鏈。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種單離核酸，其編碼本申請案之單離人源化抗體或其抗原結合片段、本申請案之接合物、或本申請案之融合構築體。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種載體，其包含本申請案之單離核酸。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種宿主細胞，其包含本申請案之單離核酸或本申請案之載體。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種產生本發明之人源化抗體或其抗原結合片段、本申請案之接合物、或本申請案之融合構築體的方法，其包含在多個條件下培養包含編碼該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體之核酸的細胞，以產生該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體；及自該細胞或細胞培養物回收該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種醫藥組成物，其包含本申請案之單離人源化抗體或其抗原結合片段、本申請案之接合物、或本申請案之融合構築體、及醫藥上可接受之載劑。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種阻斷有需要之對象之tau播種的方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種誘導抗體依賴性吞噬作用(antibody dependent phagocytosis, ADP)而不刺激有需要之對象分泌促發炎細胞介素之方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種治療有需要之對象之tau蛋白病的方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種減少有需要之對象之病理性tau聚集或tau蛋白病蔓延的方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。
根據一具體態樣，該tau蛋白病係選自由下列所組成之群組：家族性阿茲海默症、偶發性阿茲海默症、連鎖於染色體17之額顳葉失智症伴隨巴金森氏症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺症、皮質基底核退化症、匹克氏病(Pick’s disease)、進行性皮質下膠質增生(progressive subcortical gliosis)、僅纏結失智症(tangle only dementia)、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、嗜銀顆粒性失智症、肌萎縮性脊髓側索硬化症/巴金森氏症-失智複合症、唐氏症、吉斯曼-史特斯勤-先克病、哈勒沃登-施帕茨病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮症、C型尼曼-匹克氏病、普里昂蛋白大腦類澱粉血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島運動神經元病伴隨神經纖維纏結、腦炎後巴金森氏症、慢性創傷性腦病變、及拳擊手型失智症（拳擊疾病）。
根據另一具體態樣，醫藥組成物係靜脈內投予。
根據另一具體態樣，醫藥組成物係跨對象之血腦障壁(BBB)遞送。
根據另一具體態樣，投予降低Fc媒介之效應功能及/或不誘導快速網狀紅血球耗乏。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種偵測來自對象之生物樣本中PHF-tau之存在的方法，其包含：使該生物樣本與本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段接觸；及偵測該人源化抗體或期抗原結合片段與來自該對象之該樣本中PHF-tau的結合。
根據一具體態樣，生物樣本係血液、血清、血漿、組織間隙流體、或腦脊髓液樣本。
根據本申請案之實施例之本發明的其他態樣、特徵、及優點，自下文揭露（包括本申請案之實施方式及其較佳實施例、以及所附之申請專利範圍）中將係顯而易見的。
各篇公開案、論文、及專利已於先前技術及整份說明書中引用或描述；此等參考文獻之各者全文係以引用方式併入本文中。在本說明書中所包括之對於文件、行動、材料、裝置、物品、或其類似者的論述，目的在於提供關於本申請案的脈絡。此等論述並非承認，任一或所有此等情事形成了關於任何所揭示或請求之發明的先前技術部分。 定義
除非另有定義，否則本文中所使用之所有技術及科學用語，均與本申請案所屬技術領域中具有通常知識者所通常了解之意義相同。在其他方面，在本文中所使用的某些用語具有如本說明書所定之意義。必須注意的是，本文及附加之申請專利範圍中所使用之單數形式「一(a/an)」及「該(the)」皆包括複數指稱，除非上下文另有明確說明。
除非另有說明，在本文中描述之任何數值（諸如濃度或濃度範圍）應理解為在所有情況下皆受到用語「約(about)」之修飾。因此，數值一般包括記載值之± 10%。例如，1 mg/mL之濃度包括0.9 mg/mL至1.1 mg/mL。同樣地，1%至10% (w/v)之濃度範圍包括0.9% (w/v)至11% (w/v)。如本文中所使用，明示使用之數值範圍包括所有可能的子範圍、在該範圍內之所有個別數值，包括在該等範圍內之整數及數值之分數，除非上下文以其他方式清楚指示。
如本文中所使用，多個所述元件之間的連接用語「及/或(and/or)」係理解為涵蓋個別及組合選項兩者。例如，其中兩個元件係藉由「及/或」連接時，第一選項係指第一元件在沒有第二元件的情況下之適用性。第二選項係指第二元件在沒有第一元件的情況下之適用性。第三選項係指第一元件及第二元件一起之適用性。這些選項之任一者應理解為落入該含義內，並因此滿足如本文中所使用之用語「及/或」之要求。該等選項之多於一者的並行適用性亦應理解為落入該含義內，並因此滿足用語「及/或」之要求。
在本說明書全文及申請專利範圍中，除非上下文另有需要，否則用詞「包含(comprise)」及變化諸如「包含(comprises)」及「包含(comprising)」亦將理解為暗示包括所述整數或步驟或整數或步驟之群組，但不排除任何其他整數或步驟或整數或步驟之群組。當在本文中使用時，用語「包含(comprising)」可以用語「含有(containing)」或「包括(including)」取代，或者有時當在本文中使用時以用語「具有(having)」替代。
當在本文中使用時，「由…所組成(consisting of)」排除申請專利範圍要件中未指明之任何元件、步驟、或成分。當在本文中使用時，「基本上由…組成(consisting essentially of)」不排除不實質上影響申請專利範圍之基本及新穎特性之材料或步驟。前述用語「包含(comprising)」、「含有(containing)」、「包括(including)」及「具有(having)」中之任一者無論何時在本申請案之態樣或實施例之上下文中使用時，可以用語「由…組成」或「基本上由…組成」置換以改變本揭露之範圍。
如本文中所使用，用語「單離(isolated)」意指生物組分（諸如核酸、肽、或蛋白質）已經與該組分所天然出現於內之生物體中的其他生物組分（即其他染色體及染色體外DNA和RNA、及蛋白質）實質上分離、與該等其他生物組分分開生產、或自該等其他生物組分純化出來。已「單離(isolated)」之核酸、肽、及蛋白質因此包括藉由標準純化方法純化之核酸及蛋白質。「單離(isolated)」核酸、肽、及蛋白質可係組成物之一部分且仍係單離的，只要該組成物並非該核酸、肽、或蛋白質之原生環境的一部分。該用語亦包含藉由在宿主細胞中重組表現所製備之核酸、肽及蛋白質以及化學合成之核酸。
如本文中所使用，用語「抗體(antibody)」或「免疫球蛋白(immunoglobulin)」以廣泛含義使用且包括免疫球蛋白或抗體分子，包括多株抗體、單株抗體，包括鼠類、人類、人類調適(human-adapted)、人源化及嵌合單株抗體、及抗體片段。
大致上，抗體是對特定抗原展現出結合特異性之蛋白質或肽鏈。抗體結構係熟知的。免疫球蛋白可分為五大類，即IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，取決於重鏈恆定域(constant domain)胺基酸序列。IgA及IgG係進一步被細分為同型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。四種IgG亞型各具有不同的生物功能稱為效應功能。這些效應功能通常經由與Fc受體(FcγR)交互作用及/或藉由結合C1q及固定補體所媒介。結合至FcγR可導致抗體依賴性細胞媒介性細胞溶解或抗體依賴性細胞毒性(ADCC)，而結合至補體因子可導致補體媒介性細胞溶解或補體依賴性細胞毒性(CDC)。本申請案之抗體包括在其Fc區內具有變化的抗體，使得其與野生型Fc區相比具有改變的性質，該等改變的性質包括但不限於延長的半衰期、減小或增加的ADCC或CDC、及靜默的Fc效應(effector)功能。因此，本申請案之抗體可係五大類或對應子類中之任一者。較佳地，本申請案之抗體係IgG1、IgG2、IgG3、或IgG4。任何脊椎動物物種的抗體輕鏈可分派為兩種截然不同類型（即κ及λ）中之一者，視其等恆定域的胺基酸序列而定。因此，本申請案之抗體可含有κ或λ輕鏈恆定域。根據具體實施例，本申請案之抗體包括來自小鼠抗體或人類抗體之重鏈及/或輕鏈恆定區。
除了重鏈及輕鏈恆定域之外，抗體還含有輕鏈及重鏈可變區。免疫球蛋白輕鏈或重鏈可變區係由被「抗原結合部位(antigen binding site)」中斷的「架構(framework)」區所組成。抗原結合部位係使用如下各種用語及編號方案定義： (i)        Kabat：「互補決定區(Complementarity Determining Region)」或「CDR」是基於序列可變性（Wu及Kabat, J Exp Med. 132:211-50, 1970）。通常而言，抗原結合位點在各可變區內具有三個CDR（例如重鏈可變區(VH)中之HCDR1、HCDR2、及HCDR3及輕鏈可變區(VL)中之LCDR1、LCDR2、及LCDR3）； (ii)       Chothia：用語「高度變異區(hypervariable region)」、「HVR」、或「HV」係指抗體可變域中如Chothia及Lesk所定義在結構上係高度變異之區域（Chothia及Lesk, J Mol Biol.196:901-17, 1987）。通常而言，抗原結合部位在各VH（H1、H2、H3）及VL（L1、L2、L3）中具有三個高度變異區。編號系統以及CDR及HV之注釋已由Abhinandan及Martin修訂（Abhinandan及Martin, Mol Immunol. 45:3832-9, 2008）； (iii)      IMGT：形成抗原結合位點之區域的另一定義已由Lefranc提出(Lefranc et al., Dev Comp Immunol.27:55-77, 2003)，其係基於來自免疫球蛋白及T細胞受體之V域的比較。國際免疫遺傳學(International ImMunoGeneTics, IMGT)資料庫提供了標準化編號及該等區域之定義。CDR、HV、及IMGT描繪之間的對應性係描述於Lefranc et al., 2003，同上； (iv)      AbM：Kabat與Chothia編號方案之間之折衷方案是由Martin（Martin ACR (2010) Antibody Engineering，Kontermann R, Dubel S編輯(Springer-Verlag, Berlin)，第2卷，第33至51頁）所描述之AbM編號常規； (v)       抗原結合位點亦可基於「特異性決定殘基用途」(Specificity Determining Residue Usage, SDRU) (Almagro, Mol Recognit.17:132-43, 2004)來描繪，其中SDR係指直接涉及抗原接觸之免疫球蛋白的胺基酸殘基。
「架構(framwork)」或「架構序列(framwork sequence)」係抗體之可變區內被定義為抗原結合位點以外的其餘序列。因為抗原結合位點之確切定義可藉由如上文所描述之各種描繪來判定，確切架構序列取決於抗原結合位點之定義。架構區(FR)是可變域之更加高度保留的部分。天然重鏈及輕鏈之可變域各包含四個由三個高度變異環連接之FR（分別是FR1、FR2、FR3、及FR4），其通常採用β褶板組態。各鏈中之高度變異迴圈(hypervariable loop)藉由FR緊密鄰接在一起且具有來自另一鏈之高度變異環，促成抗體之抗原結合位點形成。抗體之結構分析揭露序列與由互補決定區所形成之結合位點的形狀之間的關係(Chothia et al., J. Mol. Biol. 227: 799-817, 1992; Tramontano et al., J. Mol. Biol. 215:175-182, 1990)。儘管其存在高序列可變性，但六個環中之五者僅採用一小組主鏈構形，稱為「正則結構(canonical structure)」。該等構形首先藉由環之長度且其次藉由關鍵殘基在該等環及架構區中某些位置處之存在來決定，該等關鍵殘基透過其堆積、氫鍵、或承擔不常見主鏈構形之能力來決定構形。
「抗體」亦可係重鏈上之單一可變域(VHH)抗體，亦稱為僅重鏈抗體(HcAb)，其不含輕鏈且可藉由駱駝或鯊魚自然形成。HcAb之抗原結合部分包含VHH片段。
如本文中所使用，用語「重組抗體(recombinant antibody)」係指由包含編碼該抗體之核酸的重組宿主細胞表現的抗體（例如嵌合、人源化、或人類抗體或其抗原結合片段）。用於生產重組抗體之「宿主細胞」的實例包括：(1)哺乳動物細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)、COS、骨髓瘤細胞（包括YO及NSO細胞）、嬰兒倉鼠腎臟(BHK)、Hela及Vero細胞；(2)昆蟲細胞，例如sf9、sf21、及Tn5；(3)植物細胞，例如屬於煙草( Nicotiana)屬之植物（例如煙草( Nicotiana tabacum)；(4)酵母細胞，例如屬於酵母屬（例如啤酒酵母菌( Saccharomyces cerevisiae)）或麴菌屬（例如黑麴菌( Aspergillus niger)）者；(5)細菌細胞，例如大腸桿菌( Escherichia, coli)細胞或枯草桿菌( Bacillus subtilis)細胞等。
抗體之「抗原結合片段」係包含能夠與抗原可偵測地結合之全長抗體之部分的分子，一般而言包含至少VH區之一或多個部分。抗原結合片段包括多價分子（包含抗體之一、二、三、或更多個抗原結合部分）及單鏈構築體，其中VL區及VH區（或其所選部分）係藉由合成連接子或藉由重組方法連接，以形成功能性、抗原結合分子。抗原結合片段亦可係單域抗體(sdAb)（亦稱為奈米抗體(nanobody)），其係由單一單體可變抗體域(VHH)所組成之抗體片段。雖然抗體之一些抗原結合片段可藉由較大抗體分子（例如酶切割）之實際碎斷而獲得，但大多數一般係藉由重組技術產生。本申請案之抗體可製備為全長抗體或其抗原結合片段。抗原結合片段之實例包括Fab、Fab'、F(ab) 2、F(ab') 2、F(ab) 3、Fv（一般為抗體之單臂的VL域及VH域）、單鏈Fv（scFv，請參見例如Bird et al., Science 1988; 242:423-426；及Huston等人PNAS 1988；85:5879-5883）、dsFv、Fd（一般為VH域及CH1域）、及dAb（一般為VH域）片段；VH域、VL域、VHH域、及V-NAR域；包含單一VH及單一VL鏈之單價分子；微抗體(minibody)、雙鏈抗體(diabody)、三鏈抗體(triabody)、四鏈抗體(tetrabody)、及κ抗體(kappa body)（請參見例如，Ill et al., Protein Eng 1997; 10:949-57）；駱駝IgG；IgNAR；以及一或多種單離CDR或功能性互補位(paratope)，其中該單離CDR或抗原結合殘基或多肽可締合或連接在一起以便形成功能性抗體片段。各種類型的抗體片段已描述或綜述於例如Holliger and Hudson, Nat Biotechnol 2005; 23:1126-1136；WO2005040219、及已公開之美國專利申請案20050238646及20020161201。抗體片段可使用習知重組或蛋白質工程改造技術獲得，且該等片段可以與完整抗體相同之方式針對抗原結合或其他功能進行篩選。
已針對抗體片段之生產開發出各種技術。傳統上，這些片段係經由全長抗體之蛋白水解消化得到（請參見例如Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods, 24:107-117 (1992)；及Brennan et al., Science, 229:81 (1985)）。然而，這些片段現在可直接由重組宿主細胞生產。替代地，Fab'-SH片段可直接自大腸桿菌( E. coli)回收並經化學偶合，以形成F(ab')2片段(Carter et al., Bio/Technology, 10:163-167 (1992))。根據另一方法，F(ab')2片段可直接自重組宿主細胞培養物中單離出來。在其他實施例中，選用之抗體係單鏈Fv片段(scFv)。參見WO 1993/16185；美國專利第5,571,894號；及美國專利第5,587,458號。例如，抗體片段亦可係「線性抗體(linear antibody)」，例如美國專利第5,641,870號中所述。此類線性抗體片段可係單特異性或雙特異性的。
如本文中所使用，用語「抗體衍生物(antibody derivative)」係指包含全長抗體或其抗原結合片段之分子，其中一或多個胺基酸經化學修飾或取代。可用於抗體衍生物之化學修飾包括例如烷化、聚乙二醇化(PEGylation)、醯化、酯形成或醯胺形成、或類似者，例如用於將抗體連接至第二分子。例示性修飾包括聚乙二醇化（例如，半胱胺酸聚乙二醇化）、生物素化、放射性標示、及與第二劑（諸如細胞毒性劑）之接合。
本文中之抗體包括抗原結合或生物活性經改變之「胺基酸序列變體」。此類胺基酸改變之實例包括對於抗原之親和力增強的抗體（例如，「親和力成熟」抗體）及Fc區（如果存在）經改變（例如，抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)經改變（增加或減少）（請參見例如，Presta, L.之WO 00/42072及Iduosogie等人之WO 99/51642）；及/或血清半衰期經增加或減少（請參見例如，Presta, L.之WO00/42072））之抗體。
「多特異性分子」包含一種抗體、或其抗原結合片段，其係與至少一個其他功能性分子（例如，另一個肽或蛋白質，諸如另一個抗體或受體之配體）締合或連接，藉以形成與至少兩種不同結合位點或目標分子結合之分子。例示性多特異性分子包括雙特異性抗體及連接至可溶受體片段或配體之抗體。
如本文中所使用，用語「人類抗體(human antibody)」意欲包括具有可變區之抗體，其中架構及CDR區兩者皆衍生自（亦即，同一或基本上同一於）人類生殖系免疫球蛋白序列。此外，若抗體含有恆定區，則該恆定區亦「衍生自」人類生殖系免疫球蛋白序列。本申請案之人類抗體可包括非由人類生殖系免疫球蛋白序列所編碼的胺基酸殘基（例如，藉由體外(in vitro)隨機或位點專一性誘變所誘導的突變或藉由體內(in vivo)體細胞突變）。然而，如本文中所使用，用語「人類抗體」並不意欲包括其中衍生自另一哺乳動物物種諸如小鼠之生殖系之CDR序列已移植至人類架構序列上之抗體。
「人源化」抗體係含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的人類/非人類嵌合抗體。在大多數情況下，人源化抗體係人類免疫球蛋白（接受者抗體(recipient antibody)），其中來自該接受者之高度變異區的殘基係經來自具有所欲特異性、親和力、及能力之非人類物種（供體抗體）（諸如小鼠、大鼠、兔、或非人類靈長類動物）之高度變異區的殘基置換。在一些情況下，人類免疫球蛋白之FR殘基經對應的非人類殘基置換。此外，人源化抗體可包含在接受者抗體或供體抗體中未發現之殘基。進行此等修飾以進一步改善抗體性能。一般而言，人源化抗體將包含實質上所有至少一個（及典型地兩個）可變域，其中所有或實質上所有高度變異迴圈對應非人類免疫球蛋白之高度變異環，並且所有或實質上所有FR殘基係人類免疫球蛋白序列之FR殘基。人源化抗體亦可任選地包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，一般為人類免疫球蛋白之恆定區。對於進一步細節，參見例如Jones et al., Nature 321:522-525 (1986)；Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)；及Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)、WO 92/02190、美國專利申請案20060073137、及美國專利第6,750,325號、第6,632,927號、第6,639,055號、第6,548,640號、第6,407,213號、第6,180,370號、第6,054,297號、第5,929,212號、第5,895,205號、第5,886,152號、第5,877,293號、第5,869,619號、第5,821,337號、第5,821,123號、第5,770,196號、第5,777,085號、第5,766,886號、第5,714,350號、第5,693,762號、第5,693,761號、第5,530,101號、第5,585,089號、及第5,225,539號。
如本文中所使用，用語「表位(epitope)」係指免疫球蛋白、抗體、或其抗原結合片段特異性結合之抗原上之位點。表位可由鄰接胺基酸(contiguous amino acid)或藉由蛋白質之三級折疊所並置之非鄰接胺基酸形成。由鄰接胺基酸形成之表位一般在暴露於變性溶劑時保留，而由三級折疊形成之表位一般在用變性溶劑處理時損失。表位一般包括呈獨特空間構象之至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、或15個胺基酸。判定表位之空間構象之方法包括例如x射線結晶學及2維核磁共振。參見例如Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology，第66卷，G. E. Morris編(1996)。
作為參考抗體之「結合至相同表位之抗體」係指在競爭檢定中阻斷參考抗體與其抗原之結合達50%或更多的抗體，且相反地，參考抗體在競爭檢定中阻斷抗體與其抗原之結合達50%或更多。
目標抗體「阻斷」目標分子與天然目標配體之結合的能力，意指該抗體（在使用可溶或細胞-表面相關目標及配體分子之檢定中）可以劑量依賴性方式可偵測地降低目標分子與配體之結合，其中目標分子於該抗體不存在下會可偵測地結合至配體。
如本文中所使用，用語「tau」或「tau蛋白(tau protein)」係指具有多種異構體之豐富的中樞神經及周邊神經系統蛋白。在人類中樞神經系統(CNS)中，由於選擇性剪接而存在大小範圍在長度為352至441個胺基酸之六種主要的tau異構體(Hanger et al., Trends Mol Med.15:112-9, 2009)。該等異構體藉由調控地包括0至2個N端插入、及3或4個串聯排列之微管結合重複而彼此不同，且稱為0N3R (SEQ ID NO: 53)、1N3R (SEQ ID NO: 54)、2N3R (SEQ ID NO: 55)、0N4R (SEQ ID NO: 56)、1N4R (SEQ ID NO: 57)、及2N4R (SEQ ID NO: 58)。如本文中所使用，用語「對照tau (control tau)」係指沒有磷酸化及其他轉譯後修飾的SEQ ID NO：58之tau異構體。如本文中所使用，用語「tau」包括包含突變之蛋白質，該等突變例如全長野生型tau之點突變、片段、插入、缺失、及剪接變體。用語「tau」亦涵蓋tau胺基酸序列之轉譯後修飾。轉譯後修飾包括但不限於磷酸化。如本文中所使用，片語「tau蛋白之磷酸化S433」及類似片語係指在全長野生型tau蛋白之某一位置處之磷酸化胺基酸，例如在位置433之絲胺酸。
tau結合微管且調控貨物(cargo)穿過細胞之運輸，其係可以藉由tau磷酸化而調節之過程。在AD及相關病症中，tau之異常磷酸化是普遍的且認為先於及/或觸發tau聚集成原纖維，其稱為成對螺旋絲(PHF)。PHF之主要組分是超磷酸化tau。如本文中所使用，用語「成對螺旋絲-tau (paired helical filament-tau)」或「PHF-tau」係指呈成對螺旋絲之形式的tau聚集物。PHF結構中之兩個主要區域在電子顯微鏡下係明顯的，即毛被(fuzzy coat)及核心絲(core filament)；毛被對蛋白水解敏感且位於絲之外，且絲之耐蛋白酶的核心形成PHF之主鏈(Wischik et al. Proc Natl Acad Sci USA.85:4884-8, 1988)。
如本文中所使用，「結合PHF-tau之單離人源化抗體(isolated humanized antibody that binds PHF-tau)」或「單離人源化抗PHF-tau抗體(isolated humanized anti-PHF-tau antibody)」意欲指實質上不含其他具有不同抗原特異性之抗體的人源化抗PHF-tau抗體（例如，單離人源化抗PHF-tau抗體實質上不含特異性結合PHF-tau以外之抗原的抗體）。然而，單離人源化抗PHF-tau抗體可以與其他相關抗原例如來自其他物種之抗原（諸如PHF-tau物種同源物）具有交叉反應性。
如本文中所使用，用語「特異性結合(specifically binds)」或「特異結合(specific binding)」係指本申請案之抗PHF-tau抗體以約1×10 -6M或更緊，例如，約1×10 -7M或更小、約1×10 -8M或更小、約1×10 -9M或更小、約1×10 -10M或更小、約1×10 -11M或更小、約1×10 -12M或更小、或約1×10 -13M或更小之解離常數(K D)結合至預定目標的能力。KD係獲自Kd對Ka之比率（即Kd/Ka），且以莫耳濃度(M)表示。抗體之KD值可使用本揭露所屬技術領域中之方法判定。例如，抗PHF-tau抗體之KD值可以藉由使用表面電漿共振判定，諸如藉由使用生物感測器系統，例如Biacore®系統、ProteOn儀器(BioRad)、KinExA儀器(Sapidyne)、ELISA、或所屬技術領域中具有通常知識者已知之競爭性結合檢定。一般而言，抗PHF-tau抗體以K D結合至預定目標（即PHF-tau），該K D較其對非特異性目標之K D小至少十倍，如藉由使用例如ProteOn儀器(BioRad)之表面電漿子共振所測量。然而，特異性結合至PHF-tau之抗PHF-tau抗體可對其他相關靶標具有交叉反應性，例如對來自其他物種（同源物），例如人類或猴子之相同預定目標，例如雄性成年短尾猿猴( Macaca fascicularis)（食蟹獼猴(cynomolgus, cyno)）、黑猩猩( Pan troglodytes)（黑猩猩(chimpanzee, chimp)）、或狨( Callithrix jacchus)（狨(common marmoset, marmoset)）。當單特異性抗體特異性結合一種抗原或一種表位時，雙特異性抗體特異性結合二種不同的抗原或二種不同的表位。
如本文中所使用，「接合物(conjugate)」係指共價連接至一或多個異源分子（包括但不限於治療性肽或蛋白質、抗體、標示、或神經病症藥物）之抗體或蛋白質。
如本文中所使用，用語「偶合(coupled)」係指將二或更多個物件接合或連接在一起。當用於化學或生物化合物時，偶合可指二或更多個化學或生物化合物之間的共價連接。舉非限制性實例來說，本申請案之抗體可與受關注的肽偶合以形成抗體偶合肽。可透過特定化學反應來形成抗體偶合肽，其經設計以使抗體共軛至肽。在某些實施例中，本申請案之抗體可透過連接子與本申請案之肽共價偶合。連接子可例如先共價連接至抗體或肽，接著再共價連接至肽或抗體。
如本文中所使用，「連接子(linker)」係指共價連接兩個不同實體之化學連接子或單鏈肽連接子。連接子可用以連接本申請案之抗體或其片段、血腦障壁穿梭、融合蛋白、及接合物中之任兩者。連接子可將例如scFv中之VH及VL、或人源化抗體或其抗原結合片段與第二分子（諸如第二抗體）連接。在一些實施例中，若單價結合實體包含針對CD98之scFv、較佳係人類CD98hc，且治療分子包含針對Tau之抗體，則連接子可將scFv連接至針對Tau之抗體。在一些實施例中，若單價結合實體包含針對TfR之scFv、較佳係huTfR1，且治療分子包含針對CNS標靶（諸如Tau）之抗體，則連接子可將scFv連接至針對Tau之抗體。可使用包含由肽鍵連接之1至25個胺基酸（諸如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、或25個胺基酸）的單鏈肽連接子。在某些實施例中，胺基酸係選自二十個天然存在的胺基酸。在某些其他實施例中，胺基酸之一或多者係選自甘胺酸、丙胺酸、脯胺酸、天冬醯胺酸、麩醯胺酸、及離胺酸。亦可使用化學連接子，諸如烴連接子、聚乙二醇(PEG)連接子、聚丙二醇(PPG)連接子、多醣連接子、聚酯連接子、由PEG及嵌入式雜環所組成之混成連接子、及烴鏈。
如本文中所使用，用語「CD98」或「CD98hc」係指由分化98重鏈簇(CD98hc)所組成之膜主體蛋白(integral membrane protein)，其藉由雙硫鍵連接至多個輕鏈中之任一者。當與LAT1或LAT2相關聯時，異二聚體轉運蛋白複合物充當必需胺基酸交換劑。CD98hc之分子量為約80 kDa。較佳地，CD98hc係人類CD98hc (huCD98hc)。huCD98hc係由SLC3A2基因編碼。
如本文中所使用，用語「轉鐵蛋白受體」或「TfR」係指藉由受體媒介之轉鐵蛋白的內吞載體蛋白之程序吸收細胞鐵所必需的細胞表面受體。TfR涉及脊椎動物鐵吸收，並回應於細胞內鐵濃度而調節。透過受體媒介之內吞將轉鐵蛋白-鐵複合物內化來導入鐵。已表徵人類中之兩種轉鐵蛋白受體，轉鐵蛋白受體1、及轉鐵蛋白受體2。此兩種受體均為跨膜醣蛋白。TfR1係一種高親和力的普遍表現受體。TfR2以低於TfR1之25至30倍的親和力結合至轉鐵蛋白。TfR2之表現僅限於某些細胞類型且不受細胞內鐵濃度影響。在一個實施例中，TfR係人類TfR，其包含例如於Schneider et al. Nature 311: 675-678 (1984)中之胺基酸序列。其可具有約180,000道耳頓之分子量，並具有兩個子單元其各自之表觀分子量為約90,000道耳頓。較佳地，TfR係人類TfR1 (huTfR1)。
當用於指稱胺基酸序列時，用語「序列同一性(sequence identity)」、或「)序列同一性百分比(%) (percent (%) sequence identity)」、或「同一性% (% identity)」、或「與…%同一(% identical to)」描述相較於構成胺基酸序列總長度的胺基酸殘基數目，二或更多個經比對胺基酸序列之同一胺基酸的匹配（「命中(hit)」）數目。換言之，使用比對，針對二或更多個序列，當比較該等序列並對其進行比對以獲得最大對應性（如使用所屬技術領域中已知的序列比較演算法所測得）時，或者當手動比對且目視檢查時，可判定胺基酸殘基相同之百分比（例如，在胺基酸序列之全長上有90%、91%、92%、93%、94%、95%、97%、98%、99%、或100%同一性）。判定序列同一性所比較的序列可能因胺基酸的（多個）取代、（多個）添加、或（多個）缺失而不同。用於比對蛋白質序列之合適程式係所屬技術領域中具有通常知識者所習知。例如，蛋白質序列的序列同一性百分比可用諸如CLUSTALW、Clustal Omega、FASTA、或BLAST之程式，例如使用NCBI BLAST演算法判定(Altschul SF, et al (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389-3402)。
在兩個胺基酸序列之上下文中，用語「實質上同一(substantially identical)」意指序列當最佳比對時（諸如藉由程式GAP或BESTFIT使用預設間隙權重）共享至少約50百分比序列同一性。一般而言，實質上同一之序列將展現至少約60、至少約70、至少約80、至少約90、至少約95、至少約98、或至少約99百分比序列同一性。
「多肽(polypeptide)」或「蛋白質(protein)」意指包含至少二個以肽鍵連接之胺基酸殘基以形成多肽的分子。少於50個胺基酸的小型多肽可稱為「肽(peptide)」。
如本文中所使用，用語「多核苷酸(polynucleotide)」同義地稱為「核酸分子(nucleic acid molecule)」、「核苷酸(nucleotide)」、或「核酸(nucleic acid)」，係指任何多核糖核苷酸或多去氧核糖核苷酸，其可為未經修飾之RNA或DNA、或經修飾之RNA或DNA。「多核苷酸(polynucleotide)」包括但不限於單股及雙股DNA、為單股及雙股區之混合物的DNA、單股及雙股RNA、及為單股及雙股區之混合物的RNA、包含可為單股或（更典型地）雙股或單股及雙股區之混合物的DNA及RNA之混成分子。此外，「多核苷酸(polynucleotide)」係指包含RNA或DNA或RNA及DNA兩者的三股區。用語多核苷酸亦包括含有一或多個經修飾鹼基之DNA或RNA及具有為了穩定性或其他理由經修飾之主鏈的DNA或RNA。「經修飾(modified)」鹼基包括例如三苯甲基化(tritylated)鹼基及不常見鹼基諸如肌苷(inosine)。可對DNA及RNA進行各種修飾；因此，「多核苷酸(polynucleotide)」包含典型在自然界所發現之經化學、酶、或代謝修飾之多核苷酸形式，以及病毒和細胞所特有之DNA及RNA的化學形式。「多核苷酸(polynucleotide)」亦包含相對短之核酸鏈，其通常稱為寡核苷酸。
如本文中所使用，用語「載體(vector)」是一種複製子(replicon)，可將另一個核酸區段可操作地插入其中，從而使該區段複製或表現。
如本文中所使用，用語「宿主細胞(host cell)」係指包含本申請案之核酸分子之細胞。「宿主細胞(host cell)」可為任何類型的細胞，例如初代細胞、培養中之細胞、或來自細胞系之細胞。在一個實施例中，「宿主細胞」係用本申請案之核酸分子轉染之細胞。在另一實施例中，「宿主細胞」係此一轉染細胞之子代或潛在子代。細胞的後代可能因為例如發生在後繼世代或核酸分子整合至宿主細胞基因體時可能發生的突變或環境影響，而與親代細胞同一或不同一。
如本文中所使用，用語「表現(expression)」係指基因產物之生物合成。該用語涵蓋將基因轉錄成RNA。該用語亦涵蓋將RNA轉譯成一或多種多肽，並且進一步涵蓋所有天然發生之轉錄後及轉譯後修飾。結合PHF-tau之經表現人源化抗體或其抗原結合片段可以在宿主細胞之細胞質之內、進入細胞外環境（諸如細胞培養物之生長培養基）、或錨定至細胞膜。
本文中所使用之用語「載劑(carrier)」係指任何賦形劑、稀釋劑、填充料、鹽、緩衝劑、穩定劑、助溶劑、油、脂質、含脂質囊泡、微球、脂質體包封、或其他所屬技術領域中已知用於醫藥配方之材料。將理解載劑、賦形劑或稀釋劑之特徵將取決於特定應用之投予途徑而定。如本文中所使用，用語「醫藥上可接受之載劑(pharmaceutically acceptable carrier)」係指不干擾根據本申請案之組成物的有效性或根據本申請案之組成物的生物活性之非毒性材料。根據鑒於本揭露之具體實施例，任何適合用於抗體醫藥組成物之醫藥上可接受之載劑皆可用於本申請案。
如本文中所使用，用語「對象(subject)」係指動物，且較佳地是哺乳動物。根據具體實施例，對象是哺乳動物，包括非靈長類動物（例如，駱駝、驢、斑馬、奶牛、豬、馬、山羊、羊、貓、狗、大鼠、兔、天竺鼠、或小鼠）或靈長類動物（例如，猴子、黑猩猩、或人類）。在具體實施例中，對象係人類。
與本申請案之方法有關的用語「投予(administering)」，意指藉由使用本申請案之抗體、其抗原結合片段、或其接合物、或其形式、組成物、或藥劑來治療性地或疾病預防性地預防、治療、或改善如本文所述之症候群、病症、或疾病的方法。此類方法包括在療程期間的不同時間投予有效量的該抗體、其抗原結合片段、或接合物、或其形式、組成物、或藥劑，或者以組合形式並行投予有效量的該抗體、其抗原結合片段、或接合物、或其形式、組成物、或藥劑。本申請案之方法應被理解為包括所有已知的治療性治療方案。
如本文中所使用，用語「治療有效量(therapeutically effective amount)」係指活性成分或組分在對象中引起所欲生物或醫學反應之量。治療有效量可以憑經驗且以常規方式參考所述目的來判定。例如，可任選地採用體外檢定以協助鑑別最佳劑量範圍。具體有效劑量之選擇可以（例如經由臨床試驗）由所屬技術領域中具有通常知識者基於若干因素之考慮來判定，該等因素包括待治療或預防之疾病、所涉及之症狀、患者身體質量、患者免疫狀態、及具有通常知識者已知之其他因素。配方中所採用之精確劑量亦會取決於投予途徑、及疾病嚴重性，並且應根據執業醫師之判斷及各患者之情況來決定。有效劑量可從衍生自體外或動物模型測試系統之劑量反應曲線外插而來。
如本文中所使用，用語「治療(treat、treating、及treatment)」皆意欲指改善或逆轉至少一個與tau蛋白病有關的可測量物理參數，該物理參數未必可在對象中覺察，但可以是可在對象中覺察的。用語「治療」亦可指造成疾病、病症、或病況消退、預防疾病、病症、或病況進展、或至少延緩疾病、病症、或病況之進展。在一具體實施例中，「治療」係指減輕一或多個與tau蛋白病相關之症狀、預防一或多個與tau蛋白病相關之症狀的發展或開始、或減少一或多個與tau蛋白病相關之症狀的期間。在一具體實施例中，「治療」係指預防疾病、病症、或病況之復發。在一具體實施例中，「治療」係指增加具有疾病、病症、或病況之對象的存活。在一具體實施例中，「治療」係指排除對象之疾病、病症、或病況。
如本文中所使用，「tau蛋白病(tauopathy)」涵蓋涉及tau在腦內之病理性聚集的任何神經退化性疾病。除了家族性及偶發性AD之外，其他例示性tau蛋白病係連鎖於染色體17之額顳葉失智症伴隨巴金森氏症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺症、皮質基底核退化症、匹克氏病、進行性皮質下膠質增生、僅纏結失智症、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、嗜銀顆粒性失智症、肌萎縮性脊髓側索硬化症/巴金森氏症-失智複合症、唐氏症、吉斯曼-史特斯勤-先克病、哈勒沃登-施帕茨病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮症、C型尼曼-匹克氏病、普里昂蛋白大腦類澱粉血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島運動神經元病伴隨神經纖維纏結、腦炎後巴金森氏症、及慢性創傷性腦病變，諸如拳擊手型失智症（拳擊疾病）(Morris et al., Neuron,70:410-26, 2011)。
「血腦障壁」或「BBB」係指周邊循環與腦及脊髓之間的生理障壁，由腦微血管內皮細胞膜內之緊密接合點形成，產生限制分子轉運進入腦中之緊密障壁。BBB可限制甚至非常小的分子，諸如尿素（60道耳頓），進入腦中之轉運。BBB之實例包括腦中之BBB、脊髓內之血液脊髓障壁、及視網膜內之血液-視網膜障壁，其等所有均係在CNS內之連續微血管障壁。BBB亦涵蓋血液-CSF障壁（脈絡叢），其中障壁包含室管膜細胞而非微血管內皮細胞。
「血腦障壁受體」（本文中縮寫為「R/BBB」）係一種在腦內皮細胞上表現的細胞外膜連接受體蛋白，其能夠跨BBB轉運分子或用於轉運外源性投予之分子。R/BBB之實例包括但不限於大中性胺基酸轉運蛋白(LAT)複合物，包括CD98組分、轉鐵蛋白受體(TfR)、胰島素受體、胰島素樣生長因子受體(IGF-R)、低密度脂蛋白受體，包括但不限於低密度脂蛋白受體相關蛋白1 (LRP1)及低密度脂蛋白受體相關蛋白8 (LRP8)、及肝素結合表皮生長因子樣生長因子(HB-EGF)。本文中之例示性R/BBB係CD98hc或轉鐵蛋白受體(TfR)。
「中樞神經系統(central nervous system)」或「CNS」係指控制身體功能之神經組織之複合物，且包括腦及脊髓。
如本文中所使用，「神經病症」係指影響CNS及/或在CNS中具有病因之疾病或病症。例示性CNS疾病或病症包括但不限於神經病變、類澱粉變性、癌症、眼部疾病或病症、病毒或微生物感染、發炎、缺血、神經退化性疾病、癲癇、行為障礙、及溶體儲積症。為了本申請案之目的，CNS將理解為包括眼睛，其正常係由血視網膜障壁而與身體其他地方隔離。神經病症之具體實例包括但不限於神經退化性疾病（包括但不限於路易氏體病、脊髓灰質炎後症候群、Shy-Draeger症候群、橄欖體橋腦小腦萎縮、巴金森氏症、多系統萎縮、紋狀體與黑質體退化症、脊髓小腦性失調症、脊髓性肌萎縮）、tau蛋白病（包括但不限於阿茲海默症及核上神經麻痺症）、普里昂疾病（包括但不限於牛海綿狀腦病、羊搔癢症、庫賈氏症候群、庫魯病、吉斯曼-史特斯勤-先克病、慢性消耗病、及致死性家族性失眠症）、延髓性麻痺、運動神經元疾病、及神經系統異退化性病症（包括但不限於Canavan病、亨丁頓舞蹈症、神經元蠟樣脂褐質儲積症、亞歷山大氏病、妥瑞氏症候群、Menkes氏捲髮症候群、柯凱因氏症候群、Halervorden-Spatz氏症候群、拉弗拉病、雷特氏症候群、肝豆狀核變性、Lesch-Nyhan氏症候群、及Unverricht-Lundborg氏症候群）、失智症（包括但不限於匹克症及脊髓小腦性失調症）、癌症（例如，CNS及/或腦部之癌症，包括身體其他地方之癌症所致的腦部轉移）。
「神經病症藥物」係可用於治療或改善一或多種神經病症之效應的藥物或治療劑。本申請案之神經病症藥物包括但不限於小分子化合物、抗體、肽、蛋白質、一或多種CNS目標之天然配體、一或多種CNS目標之天然配體的經修飾版本、適體(aptamer)、抑制性核酸（即，小型抑制性RNA (siRNA)及短髮夾RNA (shRNA)）、核酶(ribozyme)、或任何前述者之活性片段。本申請案之例示性神經病症藥物係描述於本文中且包括但不限於：抗體、適體、蛋白質、肽、抑制性核酸及小分子、及本身係CNS抗原或目標分子或特異性辨識且/或作用於（即，抑制、活化、或偵測）CNS抗原或目標分子的任何前述者之活性片段，諸如但不限於類澱粉蛋白前驅蛋白或其部分、β類澱粉蛋白、β-分泌酶、γ-分泌酶、tau、α-突觸核蛋白、parkin、亨丁頓蛋白、DR6、早老素、ApoE、神經膠質瘤或其他CNS癌症標記、及神經營養因子。神經病症藥物及其等可用於治療之對應病症的非限制性實例：腦部衍生神經營養因子(BDNF)、慢性腦部傷害（神經生成）、纖維母細胞生長因子2 (FGF-2)、抗表皮生長因子受體腦部癌症、(EGFR)-抗體、神經膠細胞系衍生神經因子巴金森氏症、(GDNF)、腦部衍生神經營養因子(BDNF)肌萎縮性脊髓側索硬化症(Amyotrophic lateral sclerosis)、憂鬰、腦部之溶體酶溶體儲積症、睫狀神經營養因子(CNTF)肌萎縮性脊髓側索硬化症、神經調節蛋白-1思覺失調症、抗HER2抗體（例如，曲妥珠單抗(trastuzumab)）自HER2陽性癌症之腦部轉移。
如本文中所使用，「目標抗原(target antige)」或「腦部目標(brain target)」係指表現於CNS（包括腦部）中之抗原及/或分子，其可用抗體或小分子加以靶向。此類抗原及/或分子之實例包括但不限於：β-分泌酶1 (BACE1)、β類澱粉蛋白(Aβ)、表皮生長因子受體(EGFR)、人類表皮生長因子受體2 (HER2)、Tau、載脂蛋白E4 (ApoE4)、α-突觸核蛋白、CD20、亨丁頓蛋白、普里昂蛋白(PrP)、富白胺酸重複激酶2 (LRRK2)、parkin、早老素1、早老素2、γ分泌酶、死亡受體6 (DR6)、類澱粉蛋白前驅蛋白(APP)、p75神經營養因子受體(p75NTR)、及凋亡蛋白酶6。在一些實施例中，目標抗原係BACE1。在一些較佳實施例中，目標抗原係Tau。
用語「醫藥配方(pharmaceutical composition)」係指一種製劑，其呈允許其中所含有的活性成分的生物活性有效之形式，且該製劑不含有對該配方所投予之對象具有不可接受之毒性的額外組分。
如本文中所使用，「醫藥上可接受之載劑或稀釋劑(pharmaceutically acceptable carrier or diluent)」意指適合於向個體投予之任何物質。例如，醫藥上可接受之載劑可係無菌水溶液，諸如磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)或注射用水(water-for-injection)。
如本文中所使用，「醫藥上可接受之鹽(pharmaceutically acceptable salts)」意指化合物的生理及醫藥上可接受之鹽，諸如寡聚化合物或寡核苷酸，即保留親本化合物的所欲生物活性且不會對其產生非所欲之毒理作用的鹽。
用於本申請案中之醫藥上可接受之酸性/陰離子性鹽包括但不限於：乙酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、碳酸氫鹽、酒石酸氫鹽、溴化物、依地酸鈣(calcium edetate)、樟腦磺酸鹽(camsylate)、碳酸鹽、氯化物、檸檬酸鹽、二氫氯化物、依地酸鹽(edetate)、乙二磺酸鹽(edisylate)、丙酸酯十二烷硫酸鹽(estolate)、乙磺酸鹽(esylate)、反丁烯二酸鹽、葡庚糖酸鹽(glyceptate)、葡萄糖酸鹽(gluconate)、麩胺酸鹽(glutamate)、羥乙醯胺基苯砷酸鹽(glycollylarsanilate)、己基間苯二酚鹽(hexylresorcinate)、海巴明(hydrabamine)、氫溴酸鹽、氫氯酸鹽、羥基萘甲酸鹽(hydroxynaphthoate)、碘化物、2-羥乙磺酸鹽(isethionate)、乳酸鹽、乳糖酸鹽、蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、苯乙醇酸鹽、甲磺酸鹽、甲基溴化物、甲基硝酸鹽、甲基硫酸鹽、黏酸鹽(mucate)、萘磺酸鹽(napsylate)、硝酸鹽、巴摩酸鹽(pamoate)、泛酸鹽、磷酸鹽/二磷酸鹽、聚半乳糖醛酸鹽、水楊酸鹽、硬脂酸鹽、次乙酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、單寧酸鹽、酒石酸鹽、茶氯酸鹽(teoclate)、甲苯磺酸鹽以及三碘化物。有機或無機酸亦包括但不限於：氫碘酸、過氯酸、硫酸、磷酸、丙酸、乙醇酸、甲磺酸、羥乙基磺酸、草酸、2-萘磺酸、對甲苯磺酸、環己磺醯胺酸、醣酸或三氟乙酸。醫藥上可接受之鹼性/陽離子性鹽包括且不限於鋁、2-胺基-2-羥甲基-丙烷-1,3-二醇（亦稱為參(羥基甲基)胺基甲烷、托美滇(tromethane)或「TRIS」）、氨、苯札辛(benzathine)、三級丁胺、鈣、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽鹼、環己胺、二乙醇胺、乙二胺、鋰、L-離胺酸、鎂、美古明(meglumine)、N-甲基-D-還原葡糖胺、哌啶、鉀、普魯卡因(procaine)、奎寧、鈉、三乙醇胺、或鋅。
本文中所使用之在向對象投予二或更多種療法上下文中之用語「組合(in combination)」係指使用超過一種療法。用語「組合」之使用並不限制向對象投予療法之順序。例如，第一療法（例如本文描述之組成物）可在向對象投予第二療法之前（例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週以前）、之同時或之後（例如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、16小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1週、2週、3週、4週、5週、6週、8週或12週之後）投予。 人源化抗 PHF-tau 抗體
在一個一般態樣中，本申請案係關於結合PHF-tau之單離人源化抗體或其抗原結合片段。此等抗PHF-tau抗體可以具有結合PHF-tau上之磷酸化表位或結合至PHF-tau上之非磷酸化表位的性質。抗PHF-tau抗體可以用作治療劑，且用作偵測生物樣本（例如組織或細胞）中之PHF-tau的研究或診斷試劑。
根據一具體態樣，本申請案係關於一種單離人源化抗體或其抗原結合片段，其在tau蛋白之C-末端結構域中之表位處結合至該tau蛋白。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段在具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列或在該胺基酸序列內之tau蛋白的表位處結合至該tau蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合PHF-tau，較佳係人類PHF-tau。較佳地，單離人源化抗體或其抗原結合片段在由SEQ ID NO: 1之胺基酸序列所組成或在該胺基酸序列內之tau蛋白的表位處結合至該tau蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合PHF-tau，較佳係人類PHF-tau。
在一些實施例中，tau蛋白之表位包含tau蛋白之磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435中之一或多者，但不包含所有的磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435。
人源化抗體具有實質上來自人類抗體（稱為受體抗體）之可變區架構殘基及實質上來自小鼠抗體（稱為供體免疫球蛋白）之互補決定區。參見Queen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA.86:10029-10033, 1989、WO 90/07861、US5693762、US5693761、US5585089、US5530101、及US5225539。恆定區若存在時，亦可實質上或整體來自人類免疫球蛋白。人類可變域通常係選自其架構序列展現出與CDR所衍生自之鼠類可變區結構域之高度序列同一性的人類抗體。重鏈及輕鏈可變區架構殘基可衍生自相同或不同的人類抗體序列。人類抗體序列可以是天然發生之人類抗體之序列，或可以是數種人類抗體之共有序列。參見WO 92/22653。基於其對CDR構形及/或與抗原結合的可能影響，選擇來自人類可變區架構殘基之某些胺基酸以供取代。研究此等可能的影響係藉由建模、檢查具體位置處之胺基酸之特徵、或憑經驗觀測具體胺基酸之取代或誘變之效果來進行。
例如，當鼠類可變區架構殘基與所選人類可變區架構殘基之間的胺基酸有所不同時，在合理地預期胺基酸：(1)直接非共價結合抗原，(2)與CDR區相鄰，(3)以其他方式與CDR區相互作用（例如，在CDR區之約6埃內），或(4)參與VL-VH界面之情況下，人類架構胺基酸通常應藉由來自小鼠抗體之等效架構胺基酸取代。
用於取代之其他候選物是在該位置處對於人類免疫球蛋白而言與眾不同的受體人類架構胺基酸。該等胺基酸可經來自小鼠供體抗體之等效位置或來自更典型人類免疫球蛋白之等效位置的胺基酸取代。人源化免疫球蛋白之可變區架構通常展示與人類可變區架構序列至少85%序列同一性或是此等序列所共有。例示性架構取代包括例如描述於以下實例1中者。
抗體人源化可使用熟知方法來達成，諸如特異性決定殘基表面再修飾(SDRR) (US2010/0261620)、表面再修飾(Padlan et al., Mol. Immunol. 28:489-98, 1991)、超人類化(WO 04/006955)、及人類序列含量(human string content)最佳化(US7657380)。實用於移植或人源化之人類架構序列可由所屬技術領域中具有通常知識者選自相關資料庫。所選架構可藉由諸如Queen et al., 1989，同上中揭示之技術經進一步修飾，以保留或增強結合親和力。根據具體實施例，用於使來自小鼠親本抗體之抗PHF-tau抗體人源化之方法包括以下實例1中所述者。
本發明之抗體可藉由各種技術產生，例如藉由融合瘤方法（Kohler及Milstein, Nature. 256:495-7, 1975）。含有衍生自供體抗體（一般是鼠類）之輕鏈及重鏈可變區連同衍生自受體抗體（一般是另一種哺乳動物物種，諸如人類）之輕鏈及重鏈恆定區的嵌合單株抗體可藉由US4816567所揭示之方法製備。具有衍生自非人類供體免疫球蛋白（一般是鼠類）之CDR且分子之其餘免疫球蛋白衍生部分係衍生自一種或多種人類免疫球蛋白的CDR移植單株抗體可藉由所屬技術領域中具有通常知識者已知之技術製備，諸如US5225539中所揭示者。缺乏任何非人類序列之完全人類單株抗體可藉由以下所提及之技術由人類免疫球蛋白轉基因小鼠製備：Lonberg et al., Nature. 368:856-9, 1994；Fishwild et al., Nat Biotechnol. 14:845-51, 1996；及Mendez et al., Nat Genet. 15:146-56, 1997。人類單株抗體亦可由噬菌體展示庫製備並最佳化（參見例如Knappik et al., J Mol Biol. 296:57-86, 2000；Krebs et al., J Immunol Methods. 254:67-84, 2001；Shi et al., J Mol Biol. 397:385-96, 2010）。
在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含分別具有SEQ ID NO: 4、5、及6之多肽序列的免疫球蛋白重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2、及HCDR3；及分別具有SEQ ID NO: 7或14、8、及9之多肽序列的免疫球蛋白輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2、及LCDR3；其中該抗體或其抗原結合片段結合PHF-tau，較佳地人類PHF-tau，且其中重鏈可變區結構域及輕鏈可變區結構域中之架構區包含來自人類免疫球蛋白之胺基酸序列。
在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO: 12或18至少80%、較佳地至少85%或90%、更佳地至少95%、及最佳地100%同一之多肽序列的重鏈可變區，或具有與SEQ ID NO: 13、19、或23至少80%、較佳地至少85%或90%、更佳地至少95%、及最佳地100%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO: 12或18至少80%、較佳地至少85%或90%、更佳地至少95%、及最佳地100%同一之多肽序列的重鏈可變區，及具有與SEQ ID NO: 13、19、或23至少80%、較佳地至少85%或90%、更佳地至少95%、及最佳地100%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 13之多肽序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO:19之多肽序列的輕鏈可變區。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 23之多肽序列的輕鏈可變區。
在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含： (a)  具有SEQ ID NO: 15或20之多肽序列的第一重鏈； (b) 各自獨立地具有SEQ ID NO: 16、21、或24、或60之多肽序列的兩個輕鏈；及 (c)  具有SEQ ID NO: 17或22之多肽序列的第二重鏈。
根據另一具體態樣，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含： (b) 具有SEQ ID NO: 61或62之多肽序列的重鏈；及 (c)  分別具有SEQ ID NO: 16或24、或21或60之多肽序列的輕鏈。
在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 15之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 16之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之多肽序列的第二重鏈。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 20之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 21之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之多肽序列的第二重鏈。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 15之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 24之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之多肽序列的第二重鏈。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有SEQ ID NO: 20之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 60之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之多肽序列的第二重鏈。
在一些實施例中，單離人源化抗體包含各自具有SEQ ID NO: 61之多肽序列的兩個重鏈及各自具有SEQ ID NO: 16或24之多肽序列的兩個輕鏈。在一些實施例中，單離人源化抗體包含各自具有SEQ ID NO: 62之多肽序列的兩個重鏈及各自具有SEQ ID NO: 21或60之多肽序列的兩個輕鏈。
在一些實施例中，單離單株抗體或其抗原結合片段，其中該抗體或抗原結合片段以5×10 −9M或更低之解離常數(KD)結合至PHF-tau，較佳係1×10 −9M或更低或1×10 −10M或更低之KD，其中該KD係藉由表面電漿子共振分析、諸如藉由使用Biacore或ProteOn系統來測量。
結合PHF-tau之人源化抗體及其抗原結合片段之功能性活性可以藉由所屬技術領域中已知及如本文所述之方法表徵。用於表徵結合PHF-tau之抗體及其抗原結合片段之方法包括但不限於親和力及特異性檢定，包括Biacore、ELISA、及FACS分析；免疫組織化學分析；判定抗體抑制tau播種之功效的體外細胞檢定及體內注射檢定；偵測抗體之抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性(ADCC)、及補體依賴性細胞毒性(CDC)活性之存在的細胞毒性檢定；等。根據具體實施例，用於表徵結合PHF-tau之抗體及其抗原結合片段之方法包括以下實例中所述者。結合PHF-tau但不結合對照tau之人源化抗體之例示性小鼠親本抗體係抗體PT3，其描述於美國專利第9,371,376號中，其內容以全文引用方式併入本文中。
可採用若干眾所周知的方法以判定本申請案之抗體之結合表位。例如，當兩種個別組分之結構已知時，可以進行電腦蛋白質-蛋白質對接(protein-protein docking)以鑒別相容性相互作用位點。氫-氘(H/D)交換可用抗原及抗體複合物進行，以映射(map)抗原上由抗體結合之區域。抗原之區段及點誘變可用於定位對於抗體結合而言重要的胺基酸。抗體-抗原複合物之共晶結構係用於鑒別形成表位及互補位之殘基。
本申請案之抗體可係雙特異性的或多特異性的。例示性雙特異性抗體可以結合PHF-tau上之兩個不同表位或者可以結合PHF-tau及β類澱粉蛋白(Aβ)。另一例示性雙特異性抗體可以結合PHF-tau及內源性血腦障壁胞吞轉送受體，諸如胰島素受體、轉鐵蛋白受體、類胰島素生長因子-1受體、及脂蛋白受體。例示性抗體是IgG1型。
本申請案之抗體之免疫效應性質可透過以所屬技術領域中具有通常知識者已知之技術所進行的Fc修飾來增強或靜默(silenced)。舉例而言，Fc效應功能（諸如C1q結合、補體依賴性細胞毒性(CDC)、抗體依賴性細胞媒介之細胞毒性(ADCC)、吞噬作用、向下調控細胞表面受體（例如B細胞受體；BCR）等）可藉由修飾Fc中負責這些活性之殘基來提供及/或控制。藥物動力學(pharmacokinetic)性質亦可藉由使Fc域中之殘基突變來增強，此延長抗體半衰期(Strohl, Curr Opin Biotechnol. 20:685-91, 2009)。
抗PHF-tau抗體可不具有或具有最小效應功能，但保留其結合FcRn之能力，與FcRn之結合可為抗體藉以具有延長體內半衰期之主要手段。FcγR或補體（例如C1q）與抗體之結合係由所謂的Fc部分結合位點處界定的蛋白質-蛋白質交互作用引起。此類Fc部分結合位點係所屬技術領域中已知的。此類Fc部分結合位點包括例如胺基酸L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331、及P329（編號根據Kabat之EU指數）。在一些實施例中，抗PHF-tau抗體在一或多個Fc部分結合位點中含有一或多個取代以消除效應功能。例如，抗PHF-tau抗體可含有Fc區，該Fc區含有一或多個下列取代：以脯胺酸取代殘基233處之麩胺酸、以丙胺酸或纈胺酸取代殘基234處之苯丙胺酸、及以丙胺酸或麩胺酸取代殘基235處之白胺酸（EU編號，Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，U.S. Dept. of Health and Human Services, Bethesda, Md., NIH Publication no. 91-3242）。較佳地，所關注之抗體含有L234A、L235A、及P331S（EU編號，Kabat）之一、二、或三個突變。
亞型IgG1、IgG2、及IgG3之抗體通常顯示包括C1q及C3結合之補體活化，而IgG4不活化補體系統且不結合C1q及/或C3。人類IgG4 Fc區相較於其他IgG亞型具有減少之結合FcγR及補體因子的能力。較佳地，本申請案之抗PHF-tau抗體包含衍生自人類IgG4 Fc區之Fc區。更佳地，Fc區含有具有消除效應功能之取代的人類IgG4 Fc區。例如，藉由以Ala取代殘基297處（EU編號）之Asn移除IgG4 Fc區中之N-連結的醣化位點係另一種確保消除殘基效應活性之方法。
另外，本申請案之抗體可藉由下列過程而經轉譯後修飾：諸如醣基化、異構化、去醣基化、或非天然發生之共價修飾（諸如添加聚乙二醇部分及脂質化）。此類修飾可在體內或體外發生。例如，本申請案之抗體可與聚乙二醇共軛（聚乙二醇化(PEGylated)）以改善其藥物動力學概況。共軛可藉由所屬領域中具有通常知識者已知之技術進行。治療性抗體與PEG之共軛已顯示增強藥效動力學而不干擾功能(Knight et al., Platelets.15:409-18, 2004；Leong et al., Cytokine.16:106-19, 2001；Yang et al., Protein Eng.16:761-70, 2003)。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種編碼本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段的單離多核苷酸。所屬技術領域中具有通常知識者將瞭解的是，可以改變（例如，置換、刪除、插入等）蛋白質之編碼序列而不改變該蛋白質之胺基酸序列。因此，所屬技術領域中具有通常知識者將理解的是，可以改變編碼本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段之核酸序列而不改變該等蛋白質之胺基酸序列。例示性單離多核苷酸係編碼包含實例中所述之免疫球蛋白重鏈及輕鏈（例如SEQ ID NO: 15至17、20至22、24、及60至62）之多肽的多核苷酸及編碼包含重鏈可變區(VH)及輕鏈可變區(VL)（例如SEQ ID NO: 12、13、18、19、23、及59）之多肽的多核苷酸。考慮到一給定表現系統中基因密碼之簡併性或密碼子偏好，其他編碼本申請案之抗體之多核苷酸亦在本申請案之範疇內。本申請案之單離核酸可使用熟知重組或合成技術製成。編碼單株抗體之DNA使用所屬技術領域中已知之方法容易地單離及定序。當生產融合瘤時，該等細胞可做為該等DNA的來源。替代地，可使用其中編碼序列與轉譯產物相連結的顯示技術，諸如噬菌體或核糖體顯示庫。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種載體，其包含編碼本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段的單離多核苷酸。鑒於本揭露，可使用所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何載體，諸如質體、黏質體、噬菌體載體、或病毒載體。在一些實施例中，載體是重組表現載體，諸如質體。該載體可包括建立表現載體之習知功能的任何元件，例如啟動子、核糖體結合元件、終止子、增強子、篩選標記、及複製起點。啟動子可以是組成型、誘導型、或阻抑型啟動子。許多能夠將核酸遞送至細胞之表現載體是所屬技術領域中已知的，且可在本文中用於在細胞中生產抗體或其抗原結合片段。習知選殖技術或人工基因合成可以用於生成根據本申請案之實施例的重組表現載體。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種宿主細胞，其包含編碼本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段的單離多核苷酸。鑒於本揭露，所屬技術領域中具有通常知識者已知之任何宿主細胞可以用於重組表現本申請案之抗體或其抗原結合片段。此類宿主細胞可以是真核細胞、細菌細胞、植物細胞、或古菌(archeal)細胞。例示性真核細胞可以是哺乳動物、昆蟲、鳥類、或其他動物來源。哺乳動物真核細胞包括永生化細胞系(immortalized cell line)，諸如融合瘤或骨髓瘤細胞系，諸如SP2/0 (American Type Culture Collection (ATCC), Manassas, Va., CRL-1581)、NS0 (European Collection of Cell Cultures (ECACC), Salisbury, Wiltshire, UK, ECACC No. 85110503)、FO (ATCC CRL-1646)、及Ag653 (ATCC CRL-1580)鼠類細胞系。例示性人類骨髓瘤細胞系為U266 (ATTC CRL-TIB-196)。其他實用之細胞系包括衍生自中國倉鼠卵巢(CHO)細胞者，諸如CHO-K1 SV (Lonza Biologics)、CHO-K1 (ATCC CRL-61, Invitrogen)、或DG44。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種產生本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段的方法，其包含在多個條件下培養包含編碼該人源化抗體或其抗原結合片段之多核苷酸的細胞，以產生本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段；及自該細胞或細胞培養物（例如，自上清液）回收該抗體或其抗原結合片段。經表現抗體或其抗原結合片段可自細胞收穫且根據所屬技術領域中已知之習知技術純化。 與抗 CD98 或抗 TfR 抗體或其抗原結合片段之接合物及融合構築體
雖然血腦屏障(BBB)防止有害物質進入腦並且對腦內恆定(brain homeostasis)至關重要，但其對於有效地將藥物遞送至腦呈現了巨大障礙。已研究了許多方法來改善治療性單株抗體(mAb)之腦部遞送，包括使用受體媒介之胞吞轉送(RMT)。RMT利用BBB管腔側上大量表現的受體以用於透過腦內皮細胞進行轉運。先前為了將治療性mAb遞送至腦中而產生臨床上可行平台的努力一直集中在抗體工程改造上以增加胞吞轉送的效率，透過觀察結合價、pH依賴性及親和力獲得了增益（回顧於Goulatis et al., 2017, Curr Opin Struct Biol45: 109-115)。然而，轉譯成非人類靈長類動物(NHP)且臨床已受限於標靶媒介之藥物處置(TMDD)之快速周邊清除及急性網狀紅血球耗乏之安全性(Gadkar K, et al. Eur J Pharm Biopharm. 2016; 101: 53-61)。
在一般態樣中，本申請案係關於偶合至最佳化平台之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段以用於腦遞送。平台利用CD98或TfR結合分子，尤其是結合至CD98或TfR之抗體或其抗原結合片段，較佳係人類CD98重鏈(huCD98hc)或人類TfR1 (huTfR1)。本發明人出乎意料地發現，最佳值不僅僅係在典型抗體-目標交互作用中可能預期的最快結合速率k a值及最慢解離速率k d值。亦即，對於此系統，不必然會想要使用以相對高速率與CD98或TfR「結合」及締合、然後更慢地自CD98或TfR解離的分子以具有最長之抗體-目標複合體壽命。相反地，為了藉由抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段有效遞送藥劑（諸如mAb）之最佳腦PK及PD，需要既不會太快也不會太慢的中性解離速率。亦發現，與新生Fc受體(FcRn)之結合增加的經工程改造之抗體恆定區導致周邊清除降低及腦部濃度增強。
引入額外Fc突變以消除與Fcγ受體(FcγR)之結合且避免效應功能媒介之毒性。當與高親和力抗Tau結合mAb偶合時，此等突變透過微膠質細胞攝取及目標降解之新穎非FcγR機制防止周邊效應功能媒介的毒性，同時維持抗體依賴性吞噬作用(ADP)。此機制取決於透過CD98或TfR的內化，且在不刺激促發炎細胞介素分泌的情況下，比傳統FcγR媒介之ADP更有效促進目標降解。
較佳地，本申請案之抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段係pH敏感，例如其在不同pH具有與CD98或TfR之不同結合親和力。例如，本申請案之抗CD98或抗TfR抗體可在中性pH（諸如生理pH 7.4）下以高親和力結合至CD98或TfR，但在內化至內體室(endosomal compartment)後，在酸性pH、諸如相對較低的pH (pH 5-6.0)下自CD98或TfR解離。親和力係兩個部分（例如抗體及抗原）之間結合強度的量度。親和力可以數種方式表示。一種方式係根據交互作用的解離常數(K D)。K D可藉由常規方法測量，包括平衡透析或藉由直接測量抗原-抗體解離及締合之速率，分別為k off(kd或k dis)及k on(或ka)速率（參見例如 Nature,1993 361:186-87）。k off/k on之比率消除與親和力無關的所有參數，且等於解離常數K D（通常參見Davies et al., Annual Rev Biochem,1990 59:439-473)。因此，愈小的K D意指愈高的親和力。親和力之另一表現係K a，其為K D之倒數、或k on/k off。因此，愈高的K a意指愈高的親和力。例如，用於本申請案之組成物及/或方法之CD98或TfR抗體或其抗原結合片段可係在中性pH（例如，pH 6.8至7.8）下，諸如生理pH（例如，pH 7.4），以1奈米莫耳(nM, 10 −9M)或更多之K D結合至CD98或TfR，並在酸性pH（例如pH 4.5至6.5）下，諸如pH 5.0，以10 -4sec -1或更多之k dis自CD98或TfR解離之抗體或其片段。
因此，本申請案之一般態樣係關於偶合至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段以用於遞送至有需要之對象的腦，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段結合至CD98、較佳係CD98hc、更佳係人類CD98hc、或TfR、較佳係TfR1、更佳係人類TfR1，在中性pH下之解離常數K D為至少1 nM、較佳係1 nM至500 nM，且在酸性pH下、較佳係pH 5之解離速率常數k d為至少10 -4sec -1、較佳係10 -4至10 -1sec -1。
在一些實施例中，本申請案之抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段在中性pH下具有之解離速率常數k d為2 × 10 -2至2 × 10 -4sec -1，諸如2 × 10 -2、1 × 10 -2、9 × 10 -3、8 × 10 -3、7 × 10 -3、6 × 10 -3、5 × 10 -3、4 × 10 -3、3 × 10 -3、2 × 10 -3、1 × 10 -3、9 × 10 -4、8 × 10 -4、7 × 10 -4、6 × 10 -4、5 × 10 -4、4 × 10 -4、3 × 10 -4、2 × 10 -4sec -1、或在其間之任何值。
在一些實施例中，結合至人類CD98或TfR之抗體或其抗原結合片段係包含經由可撓性連接子共價連接至輕鏈可變區(L V)之重鏈可變區(H V)之單鏈可變片段(scFv)。儘管移除恆定區及引入連接子，scFv可保持原始免疫球蛋白之特異性。在scFv中，域之順序可係H V-連接子- L V、或L V-連接子-H V。接頭可從頭( de novo)設計或衍生自已知的蛋白質結構，以在橋接scFv之可變結構域時提供可相容的長度及構形，而沒有嚴重的空間干擾。連接子可具有10至約25個胺基酸長度。較佳地，連接子係在可變域之羧基端與其他域之胺基末端之間跨距約3.5 nm (35 Å)之肽連接子，而不影響域摺疊且形成完整抗原結合位點的能力（Huston et al., Methods in Enzymology, vol. 203, pp. 46–88, 1991，其以全文引用之方式併入本文中）。連接子較佳地包含親水性序列，以避免在整個蛋白質摺疊之可變域內或在可變域之間嵌入肽(Argos, Journal of Molecular Biology, vol. 211, no. 4, pp. 943–958, 1990)。例如，連接子可包含Gly及Ser殘基及/或與帶電殘基諸如Glu、Thr、及Lys一起散佈以增強溶解度。在一些實施例中，連接子具有SEQ ID NO: 50 (GGGSGGSGGCPPCGGSGG)或SEQ ID NO: 51 (GTEGKSSGSGSESKST)之胺基酸序列。鑑於本揭露，亦可使用任何其他合適的連接子。
在一些實施例中，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段包含：包含HCDR1、HCDR2、及HCDR3之重鏈可變區，及包含LCDR1、LCDR2、及LCDR3之輕鏈可變區，其中： (a)  該抗CD98抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 26、27、28或33、29、30、及31之胺基酸序列；或 (b) 該抗TfR抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 35、36、37、38、39、及40之胺基酸序列。
在一些實施例中，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段係單鏈可變片段(scFv)，其包含經由連接子共價連接至輕鏈可變區之重鏈可變區，較佳地，該連接子具有SEQ ID NO: 50或51之胺基酸序列，更佳地，該scFv包含具有與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、或SEQ ID NO: 41之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
在一較佳實施例中，結合至CD98、較佳係CD98hc、更佳係人類CD98hc或結合至TfR、較佳係TfR1、更佳係人類TfR1之抗體或其抗原結合片段，不含游離半胱胺酸。
抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段（諸如scFv片段）鑑於本揭露可使用所屬技術領域中合適的方法來產生。例如，可藉由在合適於產生抗體片段的條件下生長重組宿主細胞（例如細菌、酵母、或哺乳動物細胞）並從細胞培養物中回收片段來重組產生scFv片段。例示性抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段發現於例如US 63/036,020及US 63/035,961中，其等之揭露以全文引用方式併入本文中。
本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段可以組合形式或連接至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段、非經腸（例如靜脈內）遞送。例如，人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段可非共價附接至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段。人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段亦可共價附接至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段以形成接合物。在某些實施例中，接合係藉由蛋白質融合之構築（亦即，藉由編碼人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段及抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之兩個基因的基因融合並表現為單一蛋白質）。鑒於本揭露，已知方法可用於將人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段連接至CD98或TfR抗體或其抗原結合片段。參見例如Wu et al., Nat Biotechnol., 23(9):1137-46, 2005；Trail et al., Cancer Immunol Immunother., 52(5):328-37, 2003；Saito et al., Adv Drug Deliv Rev., 55(2):199-215, 2003；Jones et al., Pharmaceutical Research, 24(9):1759-1771, 2007。
在一些實施例中，待遞送至腦部及抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段可經由非肽連接子或肽連接子共價連接（或共軛）在一起。非肽連接子之實例包括但不限於聚乙二醇、聚丙二醇、乙二醇及丙二醇之共聚物、聚氧乙基化多元醇、聚乙烯醇、多醣、右旋糖酐、聚乙烯醚、生物可降解聚合物、聚合脂質、幾丁質、及玻尿酸、或其衍生物、或其組合。肽連接子可係由藉由肽鍵連接之1至50個胺基酸所組成之肽鏈或其衍生物，其N端及C端可共價連接至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段。
在某些實施例中，本申請案之接合物係多特異性抗體，其包含結合PHF-tau之第一抗原結合區及結合CD98或TfR之第二抗原結合區。用於製造多特異性抗體之技術包括但不限於具有不同特異性之兩種免疫球蛋白重鏈-輕鏈地重組共表現（參見Milstein及Cuello, Nature305: 537, 1983）、WO 93/08829、及Traunecker et al, EMBO J. 10: 3655, 1991）、及「鈕入孔(knob-in-hole)」工程改造（參見例如美國專利第5,731,168號）。多特異性抗體亦可藉由下列製成：工程改造靜電轉向效應(electrostatic steering effect) (WO 2009/089004A1)；交聯二或更多個抗體或片段（參見例如美國專利第4,676,980號、及Brennan et al, Science, 229: 81, 1985）；使用白胺酸拉鏈（參見例如Kostelny et al, J. Immunol., 148(5): 1547-1553,1992)）；使用「雙鏈抗體(diabody)」技術（參見例如Hollinger et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448, 1993)）；使用單鏈Fv (sFv)二聚體（參見例如Gruber et al, J. Immunol, 152:5368 (1994)）；及製備三特異性抗體，如於例如Tutt et al. J. Immunol. 147: 60, 1991中所述。本申請案之多特異性抗體亦涵蓋具有三或更多個功能抗原結合位點之抗體，包括「章魚抗體(Octopus antibody)」或「雙可變域免疫球蛋白(dual-variable domain immunoglobulin)」(DVD)（參見例如US 2006/0025576A1、及Wu et al. Nature Biotechnology, 25(11):1290-7, 2007）。本申請案之多特異性抗體亦涵蓋「雙重作用Fab (Dual Acting Fab)」或「DAF」，其包含結合至CD98或TfR之抗原結合區以及腦抗原（例如，Tau）（參見例如US 2008/0069820）。在一個實施例中，抗體係抗體片段，各種此類片段揭示於本文中。
在一個實施例中，本申請案之多特異性抗體係融合構築體，其包含共價連接（或融合）至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段。抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段可直接或經由連接子融合至人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之輕鏈及/或重鏈之羧基及/或胺基端。
在一個實施例中，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段直接或經由連接子融合至人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之輕鏈之羧基端。
在另一個實施例中，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段直接或經由連接子融合至人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之輕鏈之胺基端。
在另一個實施例中，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段直接或經由連接子融合至人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之重鏈之羧基端。
在另一個實施例中，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段直接或經由連接子融合至人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之重鏈之胺基端。
在一較佳實施例中，本申請案之融合構築體包含本申請案之抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段、較佳係抗huCD98hc scFv片段或抗huTfR1 scFv片段，其經由連接子共價連接至結合至PHF-tau之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段的兩個重鏈中僅一者之羧基端。較佳地，連接子具有SEQ ID NO: 52 (GGAGGA)之胺基酸序列。
為了促進在兩個重鏈（例如，一個具有抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之融合且一個不具有融合，或者一個含有抗CD98或抗TfR臂之Fc且一個含有抗PHF-tau臂之Fc）之間形成異二聚體，可將異二聚突變引入至兩個重鏈之Fc中。此類Fc突變之實例包括但不限於Zymework突變（參見例如US10,457,742）及「鈕入孔(knob in hole)」突變（參見例如Ridgway et al., Protein Eng., 9(7): 617-621, 1996）。其他異二聚體突變亦可用於本申請案中。在一些實施例中，如本文所述之經修飾之CH3用於促進在兩個重鏈之間形成異二聚體。
在一些實施例中，相較於野生型CH3域多肽，該單離人源化抗體或其抗原結合片段之兩個重鏈之各者包含一或多個異二聚突變，諸如經修飾之異二聚CH3域、或一或多個鈕及孔突變。在一些實施例中，第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、L351、F405、及Y407處之胺基酸修飾，且第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、T366、K392、及T394處之胺基酸修飾，其中位置T350處之胺基酸修飾係T350V、T350I、T350L、或T350M；位置L351處之胺基酸修飾係L351Y；位置F405處之胺基酸修飾係F405A、F405V、F405T、或F405S；位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、或Y407I；位置T366處之胺基酸修飾係T366L、T366I、T366V、或T366M，位置K392處之胺基酸修飾係K392F、K392L、或K392M，及位置T394處之胺基酸修飾係T394W，且其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。在一些實施例中，第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T350V、L351Y、F405A、及Y407V，且第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T350V、T366L、K392L、及T394W。在一些實施例中，第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T366處之胺基酸修飾，且第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T366、L368、及Y407處之胺基酸修飾，其中位置T366處之胺基酸修飾係T366W或T366S，位置L368處之胺基酸修飾係L368A，及位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V。在一些實施例中，第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域進一步包含H435R及Y436F胺基酸修飾以破壞蛋白質A結合且在純化期間移除孔-孔同二聚體。在一些實施例中，第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T366W，且第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T366S、L368A、Y407V、H435R、及Y436F。
除了異二聚突變之外，亦可引入其他突變。在一些實施例中，融合構築體或雙特異性抗體之Fc區進一步包含一或多個改變（增加或減少）、較佳地消除ADCC/CDC（諸如本文中所述之AAS突變）之突變，及/或一或多個改變（增加或減少）、較佳地增加融合構築體或雙特異性抗體與FcRn（諸如本文中所述之YTE突變）之結合之突變。在一些實施例中，融合構築體或雙特異性抗體中之一或多個半胱胺酸殘基經其他胺基酸取代，諸如絲胺酸。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變增強融合至新生Fc受體(RcRn)之結合，較佳地該一或多個突變增強在酸性pH之結合，更佳地Fc具有M252Y/S254T/T256E (YTE)突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。在一些實施例中，單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變降低或消除效應功能，較佳地該Fc在位置L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331、及P329處具有一或多個胺基酸修飾，諸如L234A、L235A、及P331S中之一、二、或三個突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
在某些實施例中，本申請案之融合構築體包含： (1) 具有與選自由SEQ ID NO: 42至49所組成之群組之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，同一之胺基酸序列的第一重鏈； (2) 各自獨立地具有與選自由SEQ ID NO: 16、21、24、及60所組成之群組之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，同一之胺基酸序列的二個輕鏈；及 (3) 具有與選自由SEQ ID NO: 17及22所組成之群組之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，同一之胺基酸序列的第二重鏈。
在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。在一些實施例中，本申請案之融合構築體包含具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的第一重鏈、具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
本申請案之接合物，諸如多特異性抗體或融合構築體可鑑於本揭露而藉由任何所屬技術領域中已知之數種技術生產。例如，其可表現自重組宿主細胞，其中藉由標準技術將編碼融合構築體或多特異性抗體之重鏈及輕鏈的（多個）表現載體轉染至宿主細胞中。宿主細胞可係原核或真核宿主細胞。
在一例示性系統中，藉由轉染或電穿孔將編碼本申請案之融合構築體的異二聚體兩個重鏈及輕鏈之一或多個重組表現載體引入宿主細胞中。培養所選之轉化體(transformant)宿主細胞，以允許重鏈及輕鏈在足以生產融合構築體之條件下表現，並自培養基中回收融合構築體。使用標準分子生物學技術製備重組表現載體，轉染宿主細胞，選擇轉化體，培養宿主細胞，並自培養基中回收蛋白質構築體。
本申請案提供一種單離核酸，其編碼抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段之胺基酸序列作為本文中所述之實施例中任一者或申請專利範圍中任一項所述之融合構築體或多特異性抗體之一部分。單離核酸可係載體之一部分，較佳係表現載體。
在另一態樣中，本申請案關於一種宿主細胞，其經本文所揭示之載體轉化。在一實施例中，宿主細胞係原核細胞，例如大腸桿菌。在另一實施例中，宿主細胞係真核細胞，例如原生生物細胞、動物細胞、植物細胞、或真菌細胞。在一實施例中，宿主細胞係哺乳動物細胞，包括但不限於CHO、COS、NS0、SP2、PER.C6、或真菌細胞（諸如釀酒酵母菌）、或昆蟲細胞（諸如Sf9）。 醫藥組成物及治療方法
本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其片段、其接合物、或其融合構築體可用於治療、減少、或預防患有神經退化性疾病或tau蛋白病之患者（諸如罹患AD之患者）之症狀，該神經退化性疾病涉及tau在腦內之病理性聚集。
因此，在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種醫藥組成物，其包含本申請案之單離人源化抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體、及醫藥上可接受之載劑。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種阻斷有需要之對象之tau播種的方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。如本文中所使用，「tau種子(tau seed)」係指當被細胞內化或在體外暴露於單體tau時，能夠成核或「播種(seeding)」細胞內tau聚集之tau聚集物。可在如本文所述之細胞tau聚集檢定中評估tau播種活性（亦參見例如美國專利第9,834,596號，其以全文引用方式併入本文中）。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種治療或減少有需要之對象之疾病、病症、或病況（諸如tau蛋白病）之症狀的方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種減少有需要之對象之病理性tau聚集或tau蛋白病蔓延的方法，其包含向該對象投予本申請案之醫藥組成物。
根據本申請案之實施例，醫藥組成物包含治療有效量的人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體。如本文中所使用，關於人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體，治療有效量意指人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體導致治療疾病、病症、或病況的量；預防或減緩疾病、病症、或病況的進展；或者減少或完全緩解與免疫疾病、病症、或病況相關之症狀。
根據具體實施例，治療有效量係指足以達成一、二、三、四、或更多個下列效應之療法之量：(i)減少或改善待治療之疾病、病症、或病況或與其相關之症狀的嚴重性；(ii)減少待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀的持續時間；(iii)預防待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀的進展；(iv)引起待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀的回歸；(v)預防待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀的發展或發作；(vi)預防待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀的復發；(vii)減少患有待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀之對象的住院；(viii)減少患有待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀之對象的住院長度；(ix)增加患有待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀之對象的存活率；(xi)抑制或減少對象之待治療之疾病、病症、或病況、或與其相關之症狀；及/或(xii)增強或改善另一療法的（多種）疾病預防或治療效應。
根據具體實施例，待治療之疾病、病症、或病況是tau蛋白病。根據更具體實施例，待治療之疾病、病症、或病況包括但不限於家族性阿茲海默症、偶發性阿茲海默症、連鎖於染色體17之額顳葉失智症伴隨巴金森氏症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺症、皮質基底核退化症、匹克氏病、進行性皮質下膠質增生、僅纏結失智症、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、嗜銀顆粒性失智症、肌萎縮性脊髓側索硬化症/巴金森氏症-失智複合症、唐氏症、吉斯曼-史特斯勤-先克病、哈勒沃登-施帕茨病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮症、C型尼曼-匹克氏病、普里昂蛋白大腦類澱粉血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島運動神經元病伴隨神經纖維纏結、腦炎後巴金森氏症、慢性創傷性腦病變、或拳擊手型失智症（拳擊疾病）。
tau蛋白病相關之行為表型包括但不限於認知障礙、早期人格改變及抑制解除、冷漠、意志缺失、緘默症、失用症、持續言語(perseveration)、刻板動作/行為、口部過度活動(hyperorality)、紊亂(disorganization)、不能計劃或組織順序的任務、自私/麻木、反社會型特質、缺乏同理心、猶豫不決、失語法型言語伴隨頻繁的言語錯亂但相對保留理解力、受損理解力及詞彙提取不足、緩慢進行性步態不穩、後退步態(retropulsion)、僵硬、頻繁跌倒、非左旋多巴反應性軸向僵直(non-levodopa responsive axial rigidity)、核上性凝視麻痺症、方形波痙攣(square wave jerk)、緩慢垂直掃視運動、假性延髓麻痺症(pseudobulbar palsy)、肢體失用症(limb apraxia)、緊張不足、皮質性感覺喪失(cortical sensory loss)、及震顫。
適於治療之患者包括但不限於處於AD或其他tau蛋白病風險之無症狀個體、以及目前展示出症狀之患者。適於治療之患者包括具有已知AD遺傳風險之個體，諸如AD家族病史或在基因組中存在遺傳風險因子。例示性風險因子是類澱粉前驅蛋白(APP)中之突變，尤其是在位置717以及位置670及671處（分別是Hardy及Swedish突變）。其他風險因子是早老素基因PS1及PS2中以及ApoE4中之突變、高膽固醇血症或動脈粥樣硬化之家族病史。目前罹患AD之個體可以藉由以上所述之風險因子之存在自特徵性失智症識別。另外，許多診斷測試可用於鑒別患有AD之個體。此等包括測量腦脊髓液tau及Abeta 42含量。升高的tau及降低的Abeta 42含量表示存在AD。罹患AD之個體亦可藉由AD及相關病症協會(AD and Related Disorders Association)標準來診斷。
本申請案之抗PHF-tau適合作為用於治療或預防涉及tau之病理性聚集之神經退化性疾病（諸如AD或其他tau蛋白病）的治療劑及預防劑兩者。在無症狀患者中，治療可在任何年齡（例如，約10、15、20、25、30歲）開始。然而，通常，直到患者達到約40、50、60、或70歲才有必要開始治療。治療一般在一個時間段內需要多個劑量。治療可藉由隨時間推移檢定抗體、或經活化T細胞或B細胞對治療劑之反應來監測。若反應降低，可以指示追加劑量。
在預防性應用中，向易患AD或以其他方式處於AD風險之患者投予醫藥組成物或藥劑，其量足以消除或減少該風險、減輕嚴重性、或延遲疾病之發作，包括疾病之生化、組織學及/或行為症狀、其併發症及在疾病發展期間存在之中間病理表型。在治療性應用中，向易患、或已經罹患此一疾病之患者投予組成物或藥劑，其量足以減少、阻止、或延遲該疾病之任何症狀（生化、組織學、及/或行為）。治療劑之投予可以減少或消除尚未發展特徵性阿茲海默氏病理之患者之輕度認知障礙。
治療有效量或劑量可根據各種因子變化，諸如所欲治療之疾病、病症或病況、投予手段、標靶部位、對象之生理狀態（包括例如年齡、體重、健康）、對象係人類抑或動物、其他投予藥物、及治療係疾病預防性抑或治療性。最佳化滴定治療劑量以最佳化安全性及功效。
在一些實施例中，本申請案係關於一種跨血腦障壁(BBB)轉運人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之方法，其包含將偶合至人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段暴露於血腦障壁，使得抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段跨血腦障壁轉運與其偶合之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段。較佳地，抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段、其接合物或其融合構築體不干擾胺基酸轉運。抗體以其不干擾胺基酸轉運的方式特異性結合至CD98或TfR。在一些實施例中，BBB係在哺乳動物中，較佳係靈長類動物，諸如人類，更佳地係患有神經病症之人類。在一個實施例中，神經病症係選自由以下組成之群：阿茲海默症(AD)、中風、失智症、肌肉萎縮症(MD)、多發性硬化症(MS)、肌萎縮性脊髓側索硬化症(ALS)、囊腫纖維化、天使症候群(Angelman's syndrome)、利德爾症候群(Liddle's syndrome)、巴金森氏症(Parkinson's disease)、匹克氏病(Pick's disease)、佩吉特氏病(Paget's disease)、癌症、及創傷性腦損傷。
本申請案之抗體可製備成醫藥組成物，其在醫藥上可接受之載劑中含有治療有效量的抗體或抗體、接合物、或融合構築體作為活性成分。該載劑可以是液體，諸如水及油，包括來自石油、動物、蔬菜或合成來源者，諸如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油、及類似者。舉例而言，可使用0.4%鹽水及0.3%甘胺酸。這些溶液係無菌且通常不含顆粒物質。彼等可藉由習知、熟知的滅菌技術（例如過濾）來滅菌。該等組成物可含有如用以接近生理條件所需之醫藥上可接受的輔助物質，諸如pH調整及緩衝劑、穩定、增稠、潤滑、及著色劑等。在此類醫藥配方中本申請案之抗體之濃度可有廣泛變化，即從以重量計小於約0.5%，通常在或至少約1%至多達15或20%，並且將主要基於所需劑量、流體體積、黏度等，根據所選擇之具體投予模式來選擇。
針對本申請案之抗體之治療性用途的投予模式可以是將該藥劑遞送至宿主的任何合適途徑。例如，本文所述之組成物可經調配以適用於腸胃外投予，例如皮內、肌內、腹膜內、靜脈內、皮下、鼻內、或顱內投予，或者可將其投予至腦部或脊髓之腦脊髓液中。
治療可以單一劑量排程、或呈多劑量排程給予，其中治療的主要療程可以是1至10個單獨劑量，接著其他劑量以維持及或強化反應所需的後續時間間隔給予，例如第二劑量在1至4個月，且需要時於數個月後給予（多個）後續劑量。合適治療療程之實例包括：(i) 0、1個月、及6個月，(ii) 0、7天、及1個月，(iii) 0及1個月，(iv) 0及6個月，或其他足以引出所欲回應、預期降低疾病症狀或降低疾病的嚴重性之療程。
本申請案之抗體可凍乾貯存並在使用前於合適的載劑中重構。此技術已顯示對於抗體及其他蛋白質製劑有效並且可使用所屬技術領域中已知之凍乾及重構技術。
根據具體實施例，用於治療tau蛋白病之組成物可以與其他有效治療相關神經退化性疾病之藥劑組合使用。在AD之情況下，本申請案之抗體可與減少或預防β類澱粉蛋白(amyloid-beta, Aβ)之沉積的藥劑組合投予。PHF-tau及Aβ病理可能是協同的。因此，同時靶向PHF-tau及Aβ兩者之清除、及Aβ相關病理之組合療法可比個別靶向各者更有效。在巴金森氏症及相關神經退化性疾病之情況下，清除α-突觸核蛋白之聚集形式的免疫調節亦是新出現的療法。同時靶向tau及α-突觸核蛋白兩者之清除的組合療法可比個別靶向任一蛋白更有效。
在另一個一般態樣中，本申請案係關於一種產生包含本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物之方法，該方法包含將人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
在另一實施例中，本申請案係關於本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體用於製造或製備藥物之用途。在一個實施例中，藥物係用於治療神經疾病或病症。在進一步實施例中，藥物係用於治療神經疾病或病症之方法，該方法包含向患有神經疾病或病症之個體投予有效量之藥物。
本申請案之另一個一般態樣係關於一種誘導抗體依賴性吞噬作用(ADP)而不刺激有需要之對象分泌促發炎細胞介素之方法，其包含向該對象投予包含偶合至、較佳地共價接合至根據本申請案之實施例之抗CD98或抗TfR抗體結合片段之其抗原結合片段之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段之複合物，其中該人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段不具有效應功能。
例如，人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段可包含降低或消除效應功能（諸如ADCC或CDC）之一或多個胺基酸修飾，諸如降低或除去與Fcγ受體之結合的突變。此類突變可在位置L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331、及P329處，諸如L234A、L235A、及P331S中之一、二、或三個突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU索引。
在一些實施例中，該方法進一步包含向該對象投予有效量之至少一種額外治療劑。在某些實施例中，額外治療劑係一種有效治療與人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體相同或不同神經病症的治療劑，其被用來治療該相同或不同神經病症。例示性額外治療劑包括但不限於：上文所述之各種神經藥物、膽汁酯酶抑制劑（諸如多奈派齊(donepezil)、加蘭他敏(galantamine)、雷斯替明及他克林(tacrine)）、NMDA受體拮抗劑（諸如美金剛(memantine)）、β類澱粉肽聚集抑制劑、抗氧化劑、γ-分泌酶調節劑、神經生長因子(NGF)模擬物或NGF基因療法、PPARy促效劑、HMS-CoA還原酶抑制劑（斯他汀類）、安帕金(ampakine)、鈣通道阻斷劑、GABA受體拮抗劑、肝醣合成酶激酶抑制劑、靜脈注射免疫球蛋白、蕈毒鹼受體促效劑、菸鹼型受體調節劑、主動或被動β類澱粉肽免疫、磷酸二酯酶抑制劑、血清素受體拮抗劑、及抗β類澱粉肽抗體。在某些實施例中，至少一種額外治療劑因其減輕神經藥物之一或多種副作用之能力而經選擇。額外治療劑可在相同或分離的配方中投予且與人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體一起或分開投予。本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體可在投予額外治療劑及/或佐劑之前、同時、及/或之後投予。本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體亦可與其他介入療法組合使用，諸如但不限於所屬技術領域中已知的放射治療、行為治療、或其他療法，並且適合於待治療或預防之神經病症。
在另一態樣中，本申請案係關於含有適用於治療或預防上述病症之材料的製造物品（諸如套組）。製造物品包含容器及標籤或於容器上或與容器相關聯之封裝插入物。合適的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器裝有組成物，該組成物本身或與另一種有效治療或預防該病況的組成物組合，並且可具有無菌出入口（例如容器可係靜脈內溶液袋或具有可被皮下注射針刺穿之塞子的小瓶）。組成物中之至少一種活性劑係本申請案之抗體、其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體。標籤或包裝插入物指示組成物用於治療所選擇之病況。此外，製造物品可包括(a)含有組成物之第一容器，其中該組成物包含本申請案之抗體、其抗原結合片段、或接合物；(b)含有組成物之第二容器，其中該組成物包含進一步的細胞毒性劑或其他治療劑。本申請案之該實施例中之製造物品可進一步包括包裝插入物，其指示該組成物可用於治療具體病況。可選地，製造物品可進一步包含第二（或第三）容器，其包含醫藥上可接受之緩衝劑，諸如注射用抑菌水(bacteriostatic water for injection, BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)、及右旋糖溶液。其可進一步包括商業及使用者觀點所欲之其他材料，包括其他緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針頭、及注射器。 診斷方法及套組
本申請案之人源化抗PHF-tau抗體可用於診斷對象之AD或其他tau蛋白病之方法。
因此，在另一個一般態樣中，本申請案係關於偵測對象中PHF-tau之存在的方法、及藉由使用本申請案之人源化抗體或其抗原結合片段偵測對象中PHF-tau之存在來診斷該對象之tau蛋白病的方法。
本申請案之人源化抗PHF-tau抗體或其抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體係用於在症狀發作前偵測神經病症及/或評估疾病或病症的嚴重程度或持續時間。抗體、抗原結合片段、其接合物、或其融合構築體允許神經病症之偵測及/或成像，包括藉由放射線攝影術、斷層掃瞄、或磁振造影(magnetic resonance imaging, MRI)來偵測及/或成像。
可藉由使生物樣本與診斷抗體試劑接觸並偵測該診斷抗體試劑與來自對象之生物樣本（例如，血液、血清、血漿、組織間隙液、或腦脊髓液樣本）中之磷酸化tau之結合來偵測來自該對象之生物樣本中之磷酸化tau。用於進行偵測之檢定包括熟知方法，諸如ELISA、免疫組織化學、西方墨點、或體內成像。
診斷抗體或類似試劑可藉由靜脈內注射到患者體內、或由將藥劑遞送至宿主之任何合適途徑直接注射到腦中來投予。抗體之劑量應在與治療方法之範圍相同的範圍內。一般而言，抗體經標記，但是在一些方法中，對磷酸化tau具有親和力之一級抗體未經標記，且使用二級標記試劑以結合至該一級抗體。標記之選擇取決於偵測手段。例如，螢光標記適用於光學偵測。順磁標記之使用適用於在無手術干預之情況下的斷層攝影偵測。放射性標記亦可使用PET或SPECT偵測。
藉由將來自對象之樣本中或對象之標記的PHF-tau、tau聚集物、及/或神經纖維纏結之數目、大小、及/或強度與對應的基線質比較來執行診斷。基線值可表示健康個體群中之平均水平。基線值亦可表示在相同對象中所判定之先前水平。
以上所述之診斷方法亦可用於藉由在治療之前、期間、或之後偵測磷酸化tau在對象中之存在來監測對象對療法之反應。值相對於基線之降低示意對治療之正向反應。當病理性tau自腦部清除時，值亦可在生物流體中暫時增加。
本申請案進一步關於一種套組，其用於執行以上所述之診斷及監測方法。一般而言，此等套組含有診斷試劑（諸如本申請案之抗體）、及可選地可偵測標記。診斷抗體本身可含有可偵測標記（例如，螢光分子、生物素等），其係可直接偵測的或經由二級反應（例如，與鏈黴親和素之反應）而為可偵測的。替代地，可使用含有可偵測標記之第二試劑，其中該第二試劑對一級抗體具有結合特異性。在適用於測量生物樣本中之PHF-tau之診斷套組中，該套組之抗體可以預結合至固定相之形式供應，固定相諸如微量滴定盤之孔。 實施例
本申請案亦提供以下非限制性實施例。
實施例1係一種單離人源化抗體或其抗原結合片段，其在具有SEQ ID NO: 1之胺基酸序列或在該胺基酸序列內之tau蛋白的表位處結合至該tau蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合成對螺旋絲(PHF)-tau，較佳係人類PHF-tau，其中該tau蛋白之表位包含tau蛋白之磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435中之一或多者，但不包含所有的磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435。
實施例2係如實施例1之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO: 4、5、及6之多肽序列的免疫球蛋白重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2、及HCDR3；及分別具有SEQ ID NO: 7或14、8、及9之多肽序列的免疫球蛋白輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2、及LCDR3；其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO: 12或18至少90%同一之多肽序列的重鏈可變區、或具有與SEQ ID NO: 13、19、23、或59至少90%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例2a係如實施例2所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO: 4、5、及6之多肽序列的免疫球蛋白重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2、及HCDR3；及分別具有SEQ ID NO: 7、8、及9之多肽序列的免疫球蛋白輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
實施例2b係如實施例2所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO: 4、5、及6之多肽序列的免疫球蛋白重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2、及HCDR3；及分別具有SEQ ID NO: 14、8、及9之多肽序列的免疫球蛋白輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
實施例3係如實施例2所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 12或18之多肽序列的重鏈可變區、或具有SEQ ID NO: 13、19、23、或59之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例4係如實施例1至3中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)  具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 13之多肽序列的輕鏈可變區； (b) 具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 19之多肽序列的輕鏈可變區； (c)  具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 23之多肽序列的輕鏈可變區；或 (d) 具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 59之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例6a係如實施例6所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO:13之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例4b係如實施例4所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO:19之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例4c係如實施例4所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 23之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例4d係如實施例4所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 59之多肽序列的輕鏈可變區。
實施例5係如實施例1至4中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)  具有SEQ ID NO: 15或20之多肽序列的第一重鏈； (b) 各自獨立地具有SEQ ID NO: 16、21、24、或60之多肽序列的兩個輕鏈；及 (c)  具有SEQ ID NO: 17或22之多肽序列的第二重鏈。
實施例5a係如實施例5所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 15之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 16之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之多肽序列的第二重鏈。
實施例5b係如實施例5所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 20之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 21之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之多肽序列的第二重鏈。
實施例5c係如實施例5所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 15之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 24之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之多肽序列的第二重鏈。
實施例5d係如實施例5所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 20之多肽序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 60之多肽序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO:22之多肽序列的第二重鏈。
實施例5e係如實施例1至4中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)  具有SEQ ID NO: 61或62之多肽序列的重鏈；及 (b) 具有SEQ ID NO: 16或24、或21或60之多肽序列的輕鏈。
實施例5f係如實施5e所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 61之多肽序列的重鏈、及具有SEQ ID NO: 16或24之多肽序列的輕鏈。
實施例5g係如實施5e所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 62之多肽序列的重鏈、及具有SEQ ID NO: 21或60之多肽序列的輕鏈。
實施例6係一種接合物，其包含如實施例1至5g中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，該單離人源化抗體或其抗原結合片段偶合至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段。
實施例7係如實施例6所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段分別結合至CD98、較佳係人類CD98hc、或TfR、較佳係人類TfR1，在中性pH下之解離常數K D為至少1 nM、較佳係1至500 nM，且在酸性pH下、較佳係pH 5之解離速率常數k d為至少10 -4sec -1、較佳係10 -4至10 -1sec -1。
實施例8係如實施例6或7所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段在中性pH下具有之解離速率常數k d為2 × 10 -2至2 × 10 -4sec -1、較佳係8 × 10 -3sec- -1。
實施例9係如實施例6至8中任一者所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段包含：包含HCDR1、HCDR2、及HCDR3之重鏈可變區，及包含LCDR1、LCDR2、及LCDR3之輕鏈可變區，其中： (a)  該抗CD98抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 26、27、28或33、29、30、及31之胺基酸序列；或 (b) 該抗TfR抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2、及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 35、36、37、38、39、及401之胺基酸序列。
實施例9a係如實施例9所述之接合物，其中該抗CD98抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 26、27、及28之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2、及HCDR3，該輕鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 29、30、及31之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
實施例9b係如實施例9所述之接合物，其中該抗CD98抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 26、27、及33之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2、及HCDR3，該輕鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 29、30、及31之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
實施例9c係如實施例9所述之接合物，其中該抗TfR抗體或其抗原結合片段包含重鏈可變區及輕鏈可變區，該重鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 36、36、及37之胺基酸序列的HCDR1、HCDR2、及HCDR3，該輕鏈可變區包含分別具有SEQ ID NO: 38、39、及40之胺基酸序列的LCDR1、LCDR2、及LCDR3。
實施例10係實施例6至9c中任一者所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段係單鏈可變片段(scFv)，其包含經由連接子共價連接至輕鏈可變區之重鏈可變區，較佳地，該連接子具有SEQ ID NO: 50或51之胺基酸序列，更佳地，該scFv包含具有與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、或SEQ ID NO: 41之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
實施例10a係如實施例10所述之接合物，其中該抗CD98抗體或其抗原結合片段係scFv，其包含具有與SEQ ID NO: 25之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
實施例10b係如實施例10所述之接合物，其中該抗CD98抗體或其抗原結合片段係scFv，其包含具有與SEQ ID NO: 32之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
實施例10c係如實施例10所述之接合物，其中該抗TfR抗體或其抗原結合片段係scFv，其包含具有與SEQ ID NO: 34之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
實施例10d係如實施例10所述之接合物，其中該抗TfR抗體或其抗原結合片段係scFv，其包含具有與SEQ ID NO: 41之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
實施例11係包含如實施例6至10中任一者所述之接合物之融合構築體，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段經由連接子共價連接至該單離人源化抗體或其抗原結合片段的兩個重鏈中僅一者之羧基端，較佳地其中該連接子具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
實施例12係如實施例11所述之融合構築體，其中，相較於野生型CH3域多肽，該單離人源化抗體或其抗原結合片段之兩個重鏈之各者包含一或多個異二聚突變，諸如經修飾之異二聚CH3域、或一或多個鈕及孔突變。
實施例13係如實施例12所述之融合構築體，其中該第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、L351、F405、及Y407處之胺基酸修飾，且該第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、T366、K392、及T394處之胺基酸修飾，其中位置T350處之胺基酸修飾係T350V、T350I、T350L、或T350M；位置L351處之胺基酸修飾係L351Y；位置F405處之胺基酸修飾係F405A、F405V、F405T、或F405S；位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、或Y407I；位置T366處之胺基酸修飾係T366L、T366I、T366V、或T366M，位置K392處之胺基酸修飾係K392F、K392L、或K392M，及位置T394處之胺基酸修飾係T394W，且其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
實施例13a係如實施例13所述之融合構築體，其中該第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T350V、L351Y、F405A、及Y407V，且該第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T350V、T366L、K392L、及T394W。
實施例14係如實施例12所述之融合構築體，其中該第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T366W，且該第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含突變T366S、L368A、及Y407V。
實施例14a係如實施例14所述之融合構築體，其中該第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域進一步包含突變H435R及Y436F。
實施例15係如實施例11至14a中任一者所述之融合構築體，其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變增強融合至新生Fc受體(RcRn)之結合，較佳地該一或多個突變增強其中在酸性pH之結合，更佳地該Fc具有M252Y/S254T/T256E (YTE)突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
實施例16係如實施例11至15中任一者所述之融合構築體，其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變降低或消除效應功能，較佳地該Fc在位置L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331、及P329處具有一或多個胺基酸修飾，諸如L234A、L235A、及P331S中之一、二、或三個突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
實施例17係一種融合構築體，其包含： (a)  具有與選自由SEQ ID NO: 42至49所組成之群組之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性的第一重鏈； (b) 各自獨立地具有與選自由SEQ ID NO: 16、21、24、及60所組成之群組之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性的二個輕鏈；及 (c)  具有與選自由SEQ ID NO: 17及22所組成之群組之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性的第二重鏈。
實施例17a係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17b係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 42之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17c係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17d係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17e係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 44之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17f係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17g係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17h係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 16之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17i係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 46之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17j係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 47之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 24之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 17之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17k係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17l係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17m係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 43之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17n係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 45之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17o係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 48之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例17p係如實施例17所述之融合構築體，其包含具有SEQ ID NO: 49之胺基酸序列的第一重鏈、各自具有SEQ ID NO: 60之胺基酸序列的兩個輕鏈、及具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的第二重鏈。
實施例18係一種單離核酸，其編碼如實施例1至5g中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段、如實施例6至10d中任一者所述之接合物、或實施例11至17p中任一者之融合構築體。
實施例19係一種載體，其包含如實施例18所述之單離核酸。
實施例20係一種宿主細胞，其包含如實施例18所述之核酸或如實施例19所述之載體。
實施例21係一種產生如實施例1至5g中任一者所述之人源化抗體或其抗原結合片段、如實施例6至10中任一者所述之接合物、或如實施例11至17p中任一者所述之融合構築體的方法，其包含在多個條件下培養包含編碼該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體之核酸的細胞，以產生該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體；及自該細胞或細胞培養物回收該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體。
實施例22係一種醫藥組成物，其包含如實施例1至5g中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段、如實施例6至10d中任一者之接合物、或實施例11至17p中任一者之融合構築體、及醫藥上可接受之載劑。
實施例23係一種阻斷有需要之對象之tau播種的方法，其包含向該對象投予如實施例22所述之醫藥組成物。
實施例24係一種誘導抗體依賴性吞噬作用(ADP)而不刺激有需要之對象分泌促發炎細胞介素之方法，其包含向該對象投予如實施例22所述之醫藥組成物。
實施例25係一種治療有需要之對象之tau蛋白病的方法，其包含向該對象投予如實施例22所述之醫藥組成物。
實施例26係一種減少有需要之對象之病理性tau聚集或tau蛋白病蔓延的方法，其包含向該對象投予如實施例22所述之醫藥組成物。
實施例27係如實施例25或26之方法，其中該tau蛋白病係選自由以下所組成之群組：家族性阿茲海默症、偶發性阿茲海默症、連鎖於染色體17之額顳葉失智症伴隨巴金森氏症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺症、皮質基底核退化症、匹克氏病、進行性皮質下膠質增生、僅纏結失智症、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、嗜銀顆粒性失智症、肌萎縮性脊髓側索硬化症/巴金森氏症-失智複合症、唐氏症、吉斯曼-史特斯勤-先克病、哈勒沃登-施帕茨病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮症、C型尼曼-匹克氏病、普里昂蛋白大腦類澱粉血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島運動神經元病伴隨神經纖維纏結、腦炎後巴金森氏症、慢性創傷性腦病變、及拳擊手型失智症（拳擊疾病）。
實施例28係如實施例23至27中任一者所述之方法，其中該醫藥組成物係靜脈內投予。
實施例29係如實施例23至28中任一者所述之方法，其中該醫藥組成物係跨對象之血腦障壁(BBB)遞送。
實施例30係如實施例23至29中任一者所述之方法，其中該投予降低Fc媒介之效應功能及/或不誘導快速網狀紅血球耗乏。
實施例31係一種偵測來自對象之生物樣本中PHF-tau之存在的方法，其包含：使該生物樣本與如實施例1至5g中任一者所述之人源化抗體或其抗原結合片段接觸；及偵測該人源化抗體或其抗原結合片段與來自該對象之該樣本中PHF-tau的結合。
實施例32係如實施例31所述之方法，其中該生物樣本係血液、血清、血漿、組織間隙液、或腦脊髓液樣本。
實施例33係一種產生包含實施例1至5g中任一者所述之人源化抗體或其抗原結合片段的醫藥組成物之方法，該方法包含將該人源化抗體或其抗原結合片段與醫藥上可接受之載劑組合以獲得該醫藥組成物。
實施例34係如實施例1至5g中任一者之所述人源化抗體或其抗原結合片段或如實施例22之所述醫藥組成物，其用於治療有需要之對象之tau蛋白病。
實施例35係如實施例34之用途，其中該tau蛋白病係選自由以下所組成之群組：家族性阿茲海默症、偶發性阿茲海默症、連鎖於染色體17之額顳葉失智症伴隨巴金森氏症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺症、皮質基底核退化症、匹克氏病、進行性皮質下膠質增生、僅纏結失智症、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、嗜銀顆粒性失智症、肌萎縮性脊髓側索硬化症/巴金森氏症-失智複合症、唐氏症、吉斯曼-史特斯勤-先克病、哈勒沃登-施帕茨病、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮症、C型尼曼-匹克氏病、普里昂蛋白大腦類澱粉血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島運動神經元病伴隨神經纖維纏結、腦炎後巴金森氏症、慢性創傷性腦病變、及拳擊手型失智症（拳擊疾病）。
實施例36係如實施例1至5g中任一者所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段、如實施例6至10d中任一者所述之接合物、或如實施例11至17p中任一者所述之融合構築體，用於製造用於治療有需要之對象之tau蛋白病的藥物。 實例
本申請案之下列實例是要進一步說明本發明的本質。應了解的是，下列實例不會對本申請案造成限制，且本申請案之範圍係由隨附之申請專利範圍決定。 實例 1- 抗體產生、表現及純化 抗 Tau 鼠 mAb PT/66 之人源化： PT1B1142
PT/66 (PT1B585)之輕鏈(LC)及重鏈(HC)之V區以Fab格式人源化。簡言之，將來自PT/66之V LCDR（AbM定義）移植至人類IGKV2-24*01生殖系上，並識別兩個位置（F41L及S28P）（根據Kabat編號系統）以進行人類至小鼠小鼠回復突變。將來自PT/66之V HCDR移植至人類IGHV1-18*01生殖系上，並識別一個位置(A40R)以進行人類至小鼠回復突變。另外，將V L及V HCDR移植至上文所提及之人類生殖系而無人類至小鼠回復突變(PT1B995)。含有所有三個突變之一種Fab變體係PT1B1142且其全人類IgG版本係PT1B1153。PT1B1153之輕鏈中之第2架構區經修飾以獲得另一個人源化抗體PT1B1183。PT1B1183與全長重組Tau蛋白結合之SPR感測圖示於圖4中。 人源化 PT/66 Fab 變體 PT1B1142 與重組 Tau 之結合
人源化PT/66變體在大腸桿菌中表現，然後篩選與重組全長Tau蛋白之結合及熱穩定性。簡言之，將Fab編碼序列選殖至具有分別用於分泌重鏈及輕鏈的PelB及OmpA前導序列之vDR001246載體(Antibody Design Labs, San Diego, CA)。將大腸桿菌細胞（菌株MC1061）用質體轉化，並於補充有100 µg/mL卡本西林(Carbenicillin)之2xYT微生物生長培養基中在37℃下生長整夜。隔夜培養物用於接種0.5 mL表現培養物並在37℃下生長直至OD600 ~ 2.0。蛋白質表現係藉由添加1 mM IPTG誘導，且使培養物在30℃下生長整夜。在表現之後，將細胞以3,500 × g離心10分鐘而沉澱，並收集上清液且在ELISA檢定中直接測試。對於ELISA，將生物素標記之全長Tau蛋白固定在盤上，在2倍稀釋液中之濃度範圍為0.039 µg/mL至2.5 µg/mL，接著在室溫下培養45分鐘。用補充有3%乳汁之1x PBS-Tween阻斷盤。將盤用1x PBS-Tween洗滌。將上清液添加至各盤中並在室溫下培養45分鐘。使用GoatAnitFab’2-辣根過氧化酶以每孔50uL、1:5,000稀釋來偵測結合的Fab，然後用化學發光受質(Sigma cat.# 11582950001)偵測。衍生自PT/66之所有測試的Fab分子結合全長Tau蛋白。與PT/66及PT1B995比較之PT1B1142之結合曲線示於圖1中。 人源化 Fab 變體之熱穩定性的判定
在熱處理ELISA檢定中判定人源化PT/66變體之熱穩定性。如上（結合）進行表現及ELISA檢定。然而，將各變體之表現上清液分成四(4)個等分試樣。將一個等分試樣保持在室溫下，且另外三個分別加熱至60℃、65℃、及70℃，然後冷卻至室溫。獲得所有四個樣本之ELISA結合信號（一式三份）。在高溫下之結合信號，表示為與RT信號之比率，表示變體之熱穩定性（表1及圖2）。 表 1.在高溫下之結合信號，表示為與RT信號之比率，表示變體之熱穩定性。
所保留之結合百分比
蛋白質 AA 名稱 RT 平均 60 ℃ 65 ℃ 70 ℃
PT1B1141 3681333 98 107 84
PT1B1142 5251067 102 103 77
PT1B995 3761333 94 99 71
PT1B585 (PT/66) 586800 62 11 6
抗 Tau 鼠 mAb PT/66 之人源化： PT1B635 及 PT1B901
在單獨的嘗試中，使用不同受體人類框架進行PT/66人源化。簡言之，將來自PT/66之V LCDR移植至人類IGKV2D-40*01生殖系上並將V HCDR移植至人類IGHV1-18*01生殖系上。輕鏈中沒有回復突變。然而，識別V L中的兩個位置，M70L及T72V（Kabat編號系統）以進行人類至小鼠回復突變。將人源化變體命名為PT1B635。此外，來自PT/66之LC含有DG（CDR1中之位置43至44）模體，其存在異構化之風險。藉由製作含有突變G44L之變體來減輕此風險。此變體係PT1B901。藉由SPR測試PT1B635及PT1B901與重組tau蛋白之結合。 抗體表現及純化
藉由用編碼PT1B635及PT1B901之純化質體DNA瞬時轉染，在ExpiCHO細胞中以小規模(2 mL)表現研究級材料。在收穫培養物上清液之前，在37℃下將轉染的細胞培養七天。藉由離心來澄清收獲之上清液，並接著過濾。使用MabSelectSuRe蛋白質A親和力層析純化細胞培養物上清液並將含有單體蛋白質之最終洗提液（於Tris-乙酸鹽緩衝劑中）透析至dPBS 7.2中。藉由在NanoDrop分光光度計上280 nm處之吸光度判定純化蛋白質的濃度，並藉由分析型SE-HPLC評估品質。最終純度＞98%且用於後續研究。表現且純化以下人源化抗體。 表 1a.人源化抗Tau抗體及其序列。
PT1B901 PT1B1153 (PT1B1142) PT1B635 PT1B1183
HCDR1-3 SEQ ID NO: 4、5 & 6 SEQ ID NO: 4、 5 & 6 SEQ ID NO: 4、 5 & 6 SEQ ID NO: 4、 5 & 6
LCDR1-3 SEQ ID NO: 14、 8 & 9 SEQ ID NO: 7、 8 & 9 SEQ ID NO: 7、 8 & 9 SEQ ID NO: 7、 8 & 9
VH & VL SEQ ID NO: 12 & 13 SEQ ID NO: 18 & 19 SEQ ID NO: 12 & 23 SEQ ID NO: 18 & 59
HC & LC SEQ ID NO: 61 & 16 SEQ ID NO: 62 & 21 SEQ ID NO: 61 & 24 SEQ ID NO: 62 & 60
HC1、LC & HC2 SEQ ID NO: 15、 16 & 17 SEQ ID NO: 20、 21 & 22 SEQ ID NO: 15、 24 & 17 SEQ ID NO: 20、 60 & 22
實例 2- 藉由 SPR 之抗 tau 抗體與重組 tau 之結合特性
在25℃下使用Biacore T200，用補充有3 mM EDTA及0.05% Tween 20之HBS pH 7.4緩衝劑，藉由SPR研究抗tau抗體與人類全長重組tau (2N4R)之交互作用。簡言之，使用胺偶合化學之製造商說明書，藉由將抗小鼠/抗人類IgG Fcγ片段特異性抗體之混合物偶合至CM4感測器晶片之表面來製備生物感測器表面（＞4000個個應單元(RU)）。偶合緩衝液是10 mM乙酸鈉pH 4.5。將抗tau抗體於運行緩衝劑中稀釋並注射，以獲得足夠的捕獲以偵測抗原結合。在捕獲抗tau mAb之後，注射經重組表現之tau溶液，在5倍稀釋中之範圍為0.12至75 nM。在50 µL/min流速下分別監測締合及解離達3分鐘及60分鐘。用0.85% H 3PO 4執行感測器表面之再生。結合感測圖係使用1:1朗繆爾結合模型執行擬合以獲得結合速率、解離速率、及親和力。PT1B635及PT1B901以與親本mAbs，PT/66或PT1B545，相似的緊密親和力結合至全長tau蛋白（圖3及下表2）。 表 2.人源化PT66抗體與重組Tau之SPR結合動力學及親和力
mAb 描述 k on(1/Ms) k off(1/s) K D(pM)
PT/66 小鼠親本 4.5E+05 ＜1.42E-05* ＜31
PT1B545 接受者親本 5.1E+05 ＜1.42E-05* ＜28
PT1B635 人源化 3.7E+05 ＜1.42E-05* ＜41
PT1B901 人源化 3.0E+05 2.0E-05 59
PT1B1183 人源化 1.99E+06 1.19E-05** ＜6.18
k off基於1小時限制*或2時限制**，並假設5%解離。對應的親和力報導為「比…更緊密(tighter than)」。 實例 3- 藉由免疫耗乏之功能測試
為研究最大抑制百分比值是與AD tau種子之表位密度相關還是與含有PT/66表位之數目相關，將在免疫耗乏檢定中測試PT/66之人源化變體對tau播種的抑制。在此檢定中，小鼠親本PT/66抗體已顯示耗竭＞90%的tau種子（參見US 63/166,439，其內容以全文併入本文中）。用於免疫耗乏之含有tau種子之均質物可由來自22週大至23週大的P301S轉基因動物之脊髓或由經凍存之人類AD腦組織生成。免疫耗竭樣本之生化分析將藉由hTau60/hTau60及/或PT/66/PT/66自夾層MSD檢定(self-sandwich MSD assay)來進行，其與細胞播種檢定密切相關（參見例如US 63/166,439）。細胞播種檢定使用表現兩種經發色團標記之K18 tau片段的HEK細胞，該等片段當藉由聚集而相鄰時生成信號。當用衍生自不同來源之聚集且磷酸化的全尺寸tau之種子處理細胞時，K18聚集物經誘導，其可藉由使用螢光活化細胞分選(FACS)計數螢光共振能量轉移(FRET)陽性細胞來量化(Holmes et al., 2014, PNAS.111(41): E4376-85)。
AD tau種子將與測試抗體一起培養並自具有蛋白G珠粒之溶液中移除。使用PT/66/PT/66自夾層MSD檢定來測試耗竭之上清液之殘餘tau種子。此將確認PT/66之人源化版本在耗竭AD tau種子方面是否如親本PT/66 mAb一樣有效。 實例 4– 融合構築體融合構築體設計
開發含有針對抗CD98hc或huTfR之抗體及人源化抗PHF-Tau抗體(Tau Ab)之抗原結合片段(scFv)的融合之融合構築體，以使Tau Ab穿透BBB，相較於單獨的Tau Ab，導致實質上較高的腦濃度。
例如，使用短、可撓性連接子，將含有人源化Tau Ab及CD98hc或huTfR結合scFv之融合構築體附加至人源化Tau的一個抗體重鏈之C端。針對先前已描述增強胞吞轉送之特性對融合構築體進行分析（回顧於：Goulatis及Shusta 2017）：valency, binding affinity, pH dependent binding, and rapid internalization in brain endothelial cells。
針對CD98hc或huTfR之抗體之重鏈及輕鏈可變序列係使用以下格式作為單鏈可變片段(scFv)融合於單一基因構築體中： Hc_GGGSGGSGGCPPCGGSGG(SEQ ID NO: 50)_Lc 或Hc_GTEGKSSGSGSESKST(SEQ ID NO: 51_Lc
然後使用GGAGGA (SEQ ID NO: 52)連接子將針對CD98hc或huTfR之scFv融合至人源化Tau Ab的一個重鏈(Hc)之C端。將CH3中的鈕及孔異二聚化突變用於抗體Hc（Hc A鈕：T366W；Hc B孔：T366S_L368A_Y407V）以產生融合構築體。此外，將CH3中的RF雙突變(H435R_Y436F)用於Hc B上以破壞蛋白質A結合並在純化期間移除孔-孔二聚體。融合構築體含有兩個具有同一胺基酸序列之輕鏈及兩個具有不同胺基酸序列之重鏈。僅兩個重鏈中之一者融合至CD98或TfR抗體之scFv，並且兩個重鏈亦不同於其恆定區，以促進兩個重鏈之間的異二聚化。因此，根據本申請案之實施例之各融合構築體與三個胺基酸序列相關：融合至CD98或TfR抗體之抗原結合片段之第一重鏈之胺基酸序列、輕鏈之胺基酸序列、及未融合至CD98或TfR抗體之抗原結合片段之第二重鏈之胺基酸序列。 融合表現、純化、及表徵
融合構築體在CHO-Expi細胞中表現並使用蛋白質A親和力層析法純化，接著進行粒徑篩析層析或離子交換層析。
所製成之融合構築體之實例提供於表3中： 表 3.Tau-BBB分子
名稱 抗Tau mAb BBB scFv HC1、LC &HC2序列
BBBB1910 PT1B1183 TFRB321（抗TfR） SEQ ID NO: 43、60 & 22
BBBB1909 PT1B1183 TFRB320（抗TfR） SEQ ID NO: 45、60 & 22
BBBB1626 PT1B901 TFRB321（抗TfR） SEQ ID NO: 42、16 & 17
BBBB1625 PT1B635 TFRB321（抗TfR） SEQ ID NO: 42、24 & 17
BBBB1624 PT1B1153 TFRB321（抗TfR） SEQ ID NO: 43、21 & 22
BBBB1622 PT1B901 TFRB320（抗TfR） SEQ ID NO: 44、16 & 17
BBBB1621 PT1B635 TFRB320（抗TfR） SEQ ID NO: 44、24 & 17
BBBB1620 PT1B1153 TFRB320（抗TfR） SEQ ID NO: 45、21 & 22
BBBB1548 PT1B901 C98B72（抗CD98hc） SEQ ID NO: 46、16 & 17
BBBB1546 PT1B901 C98B73（抗CD98hc） SEQ ID NO: 47、16 & 17
BBBB1545 PT1B635 C98B72（抗CD98hc） SEQ ID NO: 46、24 & 17
BBBB1543 PT1B635 C98B73（抗CD98hc） SEQ ID NO: 47、24 & 17
BBBB1508 PT1B1153 C98B72（抗CD98hc） SEQ ID NO: 48、21 & 22
BBBB1506 PT1B1153 C98B73（抗CD98hc） SEQ ID NO: 49、21 & 22
BBBB1505 PT1B1183 C98B72（抗CD98hc） SEQ ID NO: 48、60 & 22
BBBB1503 PT1B1183 C98B73（抗CD98hc） SEQ ID NO: 49、60 & 22
使用類似於上述實施例2及3中之方法來判定融合構築體藉由免疫耗乏進行之的結合特性及功能測試。 內化
將人腦內皮細胞(hCMECD3)以10,000個細胞/孔接種在經膠原蛋白塗覆之384孔Cell Carrier Ultra盤(Perkin Elmer)中，並使其在37℃下在加濕培養箱中附接16小時。然後將細胞（50,000個細胞）與200 ug/mL純化的融合構築體一起培養且使其在37℃下培養一小時。將細胞固定、洗滌、並與螢光標記之二次抗體一起培養一小時。然後再次洗滌細胞並與螢光標記之肌動蛋白染色劑Phalloidin、及核染色劑Hoeschst 33342一起培養。將細胞再次洗滌並使用具有40x物鏡之ImageXpress Micro (Molecular Devices)成像。使用MetaXpress 6.0基於與鬼筆環肽(Phalloidin)共定位(colocalization)的情況下識別內化構築體。
為了評估融合構築體促進小神經膠質細胞吸收Tau聚集物的潛力，將衍生自誘導的富潛能幹細胞(iPSC)之人類小神經膠質細胞以每盤7000個細胞之稀釋度接種至384孔Perkin Elmer Cell Carrier Ultra盤上，並保持在具有Glutamax+、青黴素/鏈黴素、IL34 (100 ng/ml)、及GMCSF (10 ng/ml)之高級DMEM/F12培養基中。在檢定當天，允許生物素標記之tau寡聚物與鏈黴親和素Alexa Flour 488 (AF488)以15倍莫耳過量複合。然後允許標記的tau寡聚物在室溫下以大約2X莫耳過量結合測試構築體30分鐘。然後將Ab:tau寡聚物複合物以20 µl/孔遞送至小神經膠質細胞。在培養後2、4、及8小時，將細胞用磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)洗滌兩次，並在室溫下在4%聚甲醛存在下固定15分鐘。在固定之後，將細胞再次於PBS中洗滌兩次，並在4℃下以4 µg/ml於滲透緩衝劑（0.1%皂素+1%魚皮膚明膠）中之濃度與LAMP1初級抗體（溶酶體標記物）一起培養過夜。培養後，將細胞用PBS洗滌兩次，並在4℃下用共軛至Alexa粉647之1 µg/ml二次抗體在滲透緩衝劑中染色1小時。培養後，將細胞用PBS洗滌兩次，在室溫下於PBS中用Hoechst DNA染色劑以1 µg/ml複染10分鐘。然後將細胞在PBS中洗滌最後一次，再懸浮於每孔20 µl的PBS中，並在Opera Phenix共焦高含量顯微鏡上成像。使用Harmony及ImageJ分析軟體分析獲得之影像。每個條件大約500個細胞被評分為在吞噬溶酶體結構內存在Tau寡聚物，標記有LAMP1抗體。將融合構築體與Tau Ab比較以吸收至吞噬體中。
本發明之實施例已參照其特定實施例詳加說明，對於所屬技術領域中具有通常知識者而言將係顯而易見的是，可在不悖離本發明之精神及範疇下進行各種變更及修改。 序列表 PHF-Tau 表位 SEQ ID NO: 1SPQLATLADEVSASLAK 抗 PHF-Tau 抗體CDR以底線標示 PT/66 抗 PHF-Tau 單株 Ab PT1B545 VH SEQ ID NO: 2QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKAS GYTFTSYWITWVKQRPGQGLEWIG DIHPGRGSTKSNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQFSSLTSEDSAVYYCAR RWGFDYWGQGTTLTVSS PT1B545 VL SEQ ID NO: 3DIVITQDELSNPVTSGESVSISC RSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIY LMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYC QQLVDYPLTFGAGTKLELK PT1B545 HCDR1 SEQ ID NO: 4GYTFTSYWIT PT1B545 HCDR2 SEQ ID NO: 5DIHPGRGSTK PT1B545 HCDR3 SEQ ID NO: 6RWGFDY PT1B545 LCDR1 SEQ ID NO: 7RSSKSLLYKDGKTYLN PT1B545 LCDR2 SEQ ID NO: 8LMSTRAS PT1B545 LCDR3 SEQ ID NO: 9QQLVDYPLT PT1B545 HC SEQ ID NO: 10QVQLQQPGAELVKPGASVKMSCKASGYTFTSYWITWVKQRPGQGLEWIGDIHPGRGSTKSNEKFKSKATLTVDTSSSTAYMQFSSLTSEDSAVYYCARRWGFDYWGQGTTLTVSSAKTTAPSVYPLAPVCGDTTGSSVTLGCLVKGYFPEPVTLTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVTSSTWPSQSITCNVAHPASSTKVDKKIEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK PT1B545 LC SEQ ID NO: 11DIVITQDELSNPVTSGESVSISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQRPGQSPQLLIYLMSTRASGVSDRFSGSGSGTDFTLEISRVKAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGAGTKLELKRADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC PT1B901 人源化 Ab PT1B901 VH SEQ ID NO: 12QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMG DIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR RWGFDYWGQGTLVTVSS PT1B901 VL SEQ ID NO: 13DIVITQTPLSLPVTPGEPASISC RSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIY LMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQLVDYPLTFGQGTKLEIK PT1B901 HCDR1 SEQ ID NO: 4GYTFTSYWIT PT1B901 HCDR2 SEQ ID NO: 5DIHPGRGSTK PT1B901 HCDR3 SEQ ID NO: 6RWGFDY PT1B901 LCDR1 SEQ ID NO: 14RSSKSLLYKDLKTYLN PT1B901 LCDR2 SEQ ID NO: 8LMSTRAS PT1B901 LCDR3 SEQ ID NO: 9QQLVDYPLT PT1B901 HC1 SEQ ID NO: 15QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK PT1B901 LC1/2 SEQ ID NO: 16DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDLKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC PT1B901 HC2 SEQ ID NO: 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C98B73 HCDR3 SEQ ID NO: 33APSHFYFDY C98B73 LCDR1 SEQ ID NO: 29KSSQSVLFSSNNKNYLA C98B73 LCDR2 SEQ ID NO: 30WASTRES C98B73 LCDR3 SEQ ID NO: 31QQYYSTPPT TFRB321 （抗 TfR scFv ） SEQ ID NO: 34＞TPP000231087|TFRB321|成熟_scFv| TFRB321 (抗TfR) spFv-HL [裝訂連接子] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADS GFTFSSYAMNWVRQAPGCGLEWVS GISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR EGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSS GGGSGGSGGCPPCGGSGGSYELTQPPSVSVSPGQTASITC SGDKLGDKYASWYQQKPGQSPVLVIY QDSKRPSGIPERFSGSNSGNTATLTISGTQAMDEADYYC QAWDSSTVVFGCGTKLTVL TFRB321 HCDR1 SEQ ID NO: 35GFTFSSYAMN TFRB321 HCDR2 SEQ ID NO: 36GISGSGGHTY TFRB321 HCDR3 SEQ ID NO: 37EGYDSSGYNPFDY TFRB321 LCDR1 SEQ ID NO: 38SGDKLGDKYAS TFRB321 LCDR2 SEQ ID NO: 39QDSKRPS TFRB321 LCDR3 SEQ ID NO: 40QAWDSSTVV TFRB320 （抗 TfR scFv ） SEQ ID NO: 41＞TPP000231086|TFRB320|成熟_scFv| TFRB320 (抗TfR) scFv-HL [16-aa經修飾之Bird連接子] EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCADS GFTFSSYAMNWVRQAPGKGLEWVS GISGSGGHTYYADSVKGRFTVSRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR EGYDSSGYNPFDYWGQGTQVTVSS 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SEQ ID NO: 47QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQAPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTLTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK GGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK＞BBBB1543|輕_鏈_1/2| SEQ ID NO: 24DIVITQTPLSLPVTPGEPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFLQKPGQSPQLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞BBBB1543|重_鏈_2| SEQ ID NO: 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QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK＞BBBB1508|輕_鏈_1/2| SEQ ID NO: 21DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞BBBB1508|重_鏈_2| SEQ ID NO: 22QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK BBBB1506＞BBBB1506|重_鏈_1| SEQ ID NO: 49QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK GGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK＞BBBB1506|輕_鏈_1/2| SEQ ID NO: 21DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWLQQRPGQPPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞BBBB1506|重_鏈_2| SEQ ID NO: 22QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK BBBB1505＞BBBB1505|重_鏈_1| SEQ ID NO: 48QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK GGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSSFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK＞BBBB1505|輕_鏈_1/2| SEQ ID NO: 60DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞BBBB1505|重_鏈_2| SEQ ID NO: 22QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK BBBB1503＞BBBB1503|重_鏈_1| SEQ ID NO: 49QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK GGAGGA QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVAIISYDGSNKHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAPSHFYFDYWGQGTLVTVSSGTEGKSSGSGSESKSTDIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVLFSSNNKNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYYSTPPTFGQGTKVVIK＞BBBB1503|輕_鏈_1/2| SEQ ID NO: 60DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞BBBB1503|重_鏈_2| SEQ ID NO: 22QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK ＞PT1B1183 VH SEQ ID NO: 18QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKAS GYTFTSYWIT WVRQRPGQGLEWMG DIHPGRGSTK YAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCAR RWGFDY WGQGTLVTVSS ＞PT1B1183 VL SEQ ID NO: 59DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISC RSSKSLLYKDGKTYLN WFQQRPGQSPRLLIY LMSTRAS GVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QQLVDYPLT FGQGTKLEIK ＞PT1B1183 HCDR1 SEQ ID NO: 4GYTFTSYWIT ＞PT1B1183 HCDR2 SEQ ID NO: 5DIHPGRGSTK ＞PT1B1183 HCDR3 SEQ ID NO: 6RWGFDY ＞PT1B1183 LCDR1 SEQ ID NO: 7RSSKSLLYKDGKTYLN ＞PT1B1183 LCDR2 SEQ ID NO: 8LMSTRAS ＞PT1B1183 LCDR3 SEQ ID NO: 9QQLVDYPLT ＞PT1B1183 HC1 SEQ ID NO: 20QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK ＞PT1B1183 LC SEQ ID NO: 60DIVMTQTPLSSPVTLGQPASISCRSSKSLLYKDGKTYLNWFQQRPGQSPRLLIYLMSTRASGVPDRFSGSGAGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQQLVDYPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC ＞PT1B1183 HC2 SEQ ID NO: 22QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLYITREPEVTCVVVSVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNRFTQKSLSLSPGK ＞PT1B1183 HC SEQ ID NO: 62QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYWITWVRQRPGQGLEWMGDIHPGRGSTKYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARRWGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
無
前述發明內容以及本申請案之下文實施方式在結合附圖閱讀時可更有利理解。應理解的是，本申請案並不受限於圖式中所示確切實施例。 〔圖 1 〕係顯示相較於PT1B995及PT1B585，PT1B1142（人源化變體）與全長Tau蛋白之ELISA結合的圖。 〔圖 2 〕係顯示相較於PT1B995及PT1B585，PT1B1142（人源化變體）在一定溫度範圍內之熱穩定性ELISA信號的圖。 〔圖 3 〕係一系列顯示親本及人源化PT66抗體與人類全長重組tau之代表性SPR結合數據的圖。感測圖表示以2.2 nM、6.7 nM、20 nM、及60 nM之單循環動力學模式逐步注射tau蛋白。實體黑色覆蓋表示用1:1朗繆爾模型(Langmuir model)執行之global kinetics擬合。 〔圖 4 〕係PT1B1183與全長重組Tau蛋白結合之SPR感測圖。感測圖表示以1.1 nM、3.3 nM、10 nM、及30 nM之單循環動力學模式逐步注射tau蛋白。各Tau濃度之締合時間係3分鐘，及解離時間係120分鐘。實體黑色覆蓋表示用1:1朗繆爾模型執行之global kinetics擬合。
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Claims (33)

  1. 一種單離人源化抗體或其抗原結合片段，其在由SEQ ID NO: 1之胺基酸序列組成或在該胺基酸序列內之tau蛋白的表位處結合至該tau蛋白，其中該抗體或其抗原結合片段結合成對螺旋絲(PHF)-tau，較佳係人類PHF-tau，其中該tau蛋白之表位包含該tau蛋白之磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435中之一或多者，但不包含所有的磷酸化T427、磷酸化S433、及磷酸化S435。
  2. 如請求項1所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含分別具有SEQ ID NO: 4、5及6之多肽序列的免疫球蛋白重鏈互補決定區(HCDR) HCDR1、HCDR2、及HCDR3；及分別具有SEQ ID NO: 7或14、8及9之多肽序列的免疫球蛋白輕鏈互補決定區(LCDR) LCDR1、LCDR2、及LCDR3；其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含具有與SEQ ID NO: 12或18至少90%同一之多肽序列的重鏈可變區、或具有與SEQ ID NO: 13、19、23或59至少90%同一之多肽序列的輕鏈可變區。
  3. 如請求項2所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含具有SEQ ID NO: 12或18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 13、19、23或59之多肽序列的輕鏈可變區。
  4. 如請求項1至3中任一項所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)  具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 13之多肽序列的輕鏈可變區； (b) 具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 19之多肽序列的輕鏈可變區； (c)  具有SEQ ID NO: 12之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 23之多肽序列的輕鏈可變區；或 (d) 具有SEQ ID NO: 18之多肽序列的重鏈可變區、及具有SEQ ID NO: 59之多肽序列的輕鏈可變區。
  5. 如請求項1至4中任一項所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)  具有SEQ ID NO: 15或20之多肽序列的第一重鏈； (b) 各自獨立地具有SEQ ID NO: 16、21、24或60之多肽序列的兩個輕鏈；及 (c)  具有SEQ ID NO: 17或22之多肽序列的第二重鏈。
  6. 如請求項1至4中任一項所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段，其包含： (a)  具有SEQ ID NO: 61或62之多肽序列的重鏈；及 (b) 分別具有SEQ ID NO: 16或24、或21或60之多肽序列的輕鏈。
  7. 一種包含如請求項1至6中任一項所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段之接合物，該單離人源化抗體或其抗原結合片段偶合至抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段。
  8. 如請求項7所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段分別結合至CD98、較佳係人類CD98hc、或TfR、較佳係人類TfR1，在中性pH下之解離常數K D為至少1 nM、較佳係1至500 nM，且在酸性pH下、較佳係pH 5之解離速率(off-rate)常數k d為至少10 -4sec -1、較佳係10 -4至10 -1sec -1。
  9. 如請求項7或8所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段在中性pH下具有之解離速率常數k d為2 × 10 -2至2 × 10 -4sec -1，較佳係8 × 10 -3sec -1。
  10. 如請求項7至9中任一項所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段包含：包含HCDR1、HCDR2及HCDR3之重鏈可變區，及包含LCDR1、LCDR2及LCDR3之輕鏈可變區，其中： (a)  該抗CD98抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 26、27、28或33、29、30及31之胺基酸序列；或 (b) 該抗TfR抗體或其抗原結合片段之該HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別具有SEQ ID NO: 35、36、37、38、39及40之胺基酸序列。
  11. 如請求項7至10中任一項所述之接合物，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段係單鏈可變片段(scFv)，其包含經由連接子共價連接至該輕鏈可變區之該重鏈可變區，較佳地，該連接子具有SEQ ID NO: 55或56之胺基酸序列，更佳地，該scFv包含具有與SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 32、SEQ ID NO: 34、或SEQ ID NO: 41之胺基酸序列至少80%，諸如至少85%、90%、95%、或100%，序列同一性之胺基酸序列。
  12. 一種包含如請求項7至11中任一項所述之接合物之融合構築體，其中該抗CD98或抗TfR抗體或其抗原結合片段經由連接子共價連接至該單離人源化抗體或其抗原結合片段的兩個重鏈中僅一者之羧基端，較佳地其中該連接子具有SEQ ID NO: 52之胺基酸序列。
  13. 如請求項12所述之融合構築體，其中，相較於野生型CH3域多肽，該單離人源化抗體或其抗原結合片段之該兩個重鏈之各者包含一或多個異二聚突變，諸如經修飾之異二聚CH3域、或一或多個鈕(knob)及孔(hole)突變。
  14. 如請求項13所述之融合構築體，其中該第一重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、L351、F405、及Y407處之胺基酸修飾，且該第二重鏈之經修飾之異二聚CH3域包含位置T350、T366、K392、及T394處之胺基酸修飾，其中位置T350處之胺基酸修飾係T350V、T350I、T350L、或T350M；位置L351處之胺基酸修飾係L351Y；位置F405處之胺基酸修飾係F405A、F405V、F405T、或F405S；位置Y407處之胺基酸修飾係Y407V、Y407A、或Y407I；位置T366處之胺基酸修飾係T366L、T366I、T366V、或T366M，位置K392處之胺基酸修飾係K392F、K392L、或K392M，及位置T394處之胺基酸修飾係T394W，且其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
  15. 如請求項13所述之融合構築體，其中該第一重鏈之該經修飾之異二聚CH3域包含突變T366W，且該第二重鏈之該經修飾之異二聚CH3域包含突變T366S、L368A、及Y407V。
  16. 如請求項12至15中任一項所述之融合構築體，其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變增強融合至新生Fc受體(RcRn)之結合，較佳地該一或多個突變增強在酸性pH之結合，更佳地該Fc具有M252Y/S254T/T256E (YTE)突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
  17. 如請求項12至16中任一項所述之融合構築體，其中該單離人源化抗體或其抗原結合片段包含該Fc域中之一或多個突變，該Fc域中之該一或多個突變降低或消除效應子(effector)功能，較佳地該Fc在位置L234、L235、D270、N297、E318、K320、K322、P331、及P329處具有一或多個胺基酸修飾，諸如L234A、L235A、及P331S中之一、二、或三個突變，其中胺基酸殘基之編號係根據如Kabat中所闡述之EU指數。
  18. 一種融合構築體，其包含： (a)    具有選自由SEQ ID NO: 42至49所組成之群組之胺基酸序列的第一重鏈； (b)   各自獨立地具有選自由SEQ ID NO: 16、21、24及60所組成之群組之胺基酸序列的兩個輕鏈；及 (c)    具有選自由SEQ ID NO: 17及22所組成之群組之胺基酸序列的第二重鏈。
  19. 一種單離核酸，其編碼如請求項1至6中任一項所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段、如請求項7至11中任一項所述之接合物、或如請求項12至18中任一項所述之融合構築體。
  20. 一種載體，其包含如請求項19所述之單離核酸。
  21. 一種宿主細胞，其包含如請求項19所述之單離核酸或如請求項20所述之載體。
  22. 一種產生如請求項1至6中任一項所述之人源化抗體或其抗原結合片段、如請求項7至11中任一項所述之接合物、或如請求項12至18中任一項所述之融合構築體之方法，其包含：在條件下培養包含編碼該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體之核酸的細胞，以產生該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體；及自該細胞或細胞培養物回收該人源化抗體或其抗原結合片段、該接合物、或該融合構築體。
  23. 一種醫藥組成物，其包含如請求項1至6中任一項所述之單離人源化抗體或其抗原結合片段、如請求項7至11中任一項所述之接合物、或如請求項12至18中任一項所述之融合構築體、及醫藥上可接受之載劑。
  24. 一種阻斷有需要之對象之tau播種(seeding)的方法，其包含向該對象投予如請求項23所述之醫藥組成物。
  25. 一種誘導抗體依賴性吞噬作用(ADP)而不刺激有需要之對象分泌促發炎細胞介素之方法，其包含向該對象投予如請求項23所述之醫藥組成物。
  26. 一種治療有需要之對象之tau蛋白病的方法，其包含向該對象投予如請求項23所述之醫藥組成物。
  27. 一種減少有需要之對象之病理性tau聚集或tau蛋白病蔓延的方法，其包含向該對象投予如請求項23所述之醫藥組成物。
  28. 如請求項27所述之方法，其中該tau蛋白病係選自由以下所組成之群組：家族性阿茲海默症、偶發性阿茲海默症、連鎖於染色體17之額顳葉失智症伴隨巴金森氏症(FTDP-17)、進行性核上性麻痺症、皮質基底核退化症、匹克氏病(Pick’s disease)、進行性皮質下膠質增生(progressive subcortical gliosis)、僅纏結失智症(tangle only dementia)、彌漫性神經纖維纏結伴隨鈣化、嗜銀顆粒性失智症、肌萎縮性脊髓側索硬化症/巴金森氏症-失智複合症、唐氏症、吉斯曼-史特斯勤-先克病(Gerstmann-Sträussler-Scheinker disease)、哈勒沃登-施帕茨病(Hallervorden-Spatz disease)、包涵體肌炎、庫賈氏病、多系統萎縮症、C型尼曼-匹克氏病、普里昂蛋白大腦類澱粉血管病變、亞急性硬化性泛腦炎、肌強直性營養不良、非關島運動神經元病伴隨神經纖維纏結、腦炎後巴金森氏症、慢性創傷性腦病變、及拳擊手型失智症（拳擊疾病）。
  29. 如請求項23至27中任一項所述之方法，其中該醫藥組成物係靜脈內投予。
  30. 如請求項24至29中任一項所述之方法，其中該醫藥組成物係跨該對象之血腦障壁(BBB)遞送。
  31. 如請求項24至30中任一項所述之方法，其中該投予降低Fc媒介之效應子功能及/或不誘導快速網狀紅血球耗乏。
  32. 一種偵測來自對象之生物樣本中PHF-tau之存在的方法，其包含：使該生物樣本與如請求項1至6中任一項所述之人源化抗體或其抗原結合片段接觸；及偵測該人源化抗體或其抗原結合片段與來自該對象之該樣本中PHF-tau的結合。
  33. 如請求項32所述之方法，其中該生物樣本係血液、血清、血漿、組織間隙液、或腦脊髓液樣本。
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Family Cites Families (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6750325B1 (en) 1989-12-21 2004-06-15 Celltech R&D Limited CD3 specific recombinant antibody
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5165424A (en) 1990-08-09 1992-11-24 Silverman Harvey N Method and system for whitening teeth
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5869619A (en) 1991-12-13 1999-02-09 Xoma Corporation Modified antibody variable domains
ATE419355T1 (de) 1992-02-06 2009-01-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Marker für krebs und biosynthetisches bindeprotein dafür
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5641870A (en) 1995-04-20 1997-06-24 Genentech, Inc. Low pH hydrophobic interaction chromatography for antibody purification
US5697151A (en) 1995-08-07 1997-12-16 General Electric Company Method for repairing partitions of a turbine diaphragm
CA2288994C (en) 1997-04-30 2011-07-05 Enzon, Inc. Polyalkylene oxide-modified single chain polypeptides
DE69937291T2 (de) 1998-04-02 2008-07-10 Genentech, Inc., South San Francisco Antikörpervarianten und fragmente davon
EP2386574A3 (en) 1999-01-15 2012-06-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
CN1671416B (zh) 2001-07-12 2013-01-02 杰斐逊·富特 超人源化抗体
WO2005040219A1 (en) 2003-10-28 2005-05-06 Novo Nordisk A/S Laminin-5 gamma2-binding peptides, related compositions, and use thereof
CA2548817A1 (en) 2003-12-04 2005-06-23 Xencor, Inc. Methods of generating variant proteins with increased host string content and compositions thereof
DK2059533T3 (da) 2006-08-30 2013-02-25 Genentech Inc Multispecifikke antistoffer
CA2709847C (en) 2008-01-07 2018-07-10 Amgen Inc. Method for making antibody fc-heterodimeric molecules using electrostatic steering effects
WO2010045340A1 (en) 2008-10-14 2010-04-22 Centocor Ortho Biotech Inc. Methods of humanizing and affinity-maturing antibodies
WO2013063702A1 (en) 2011-11-04 2013-05-10 Zymeworks Inc. Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain
SI2794654T1 (sl) * 2011-12-20 2019-08-30 Janssen Biotech, Inc. Protitelesa proti PHF-tau njihove uporabe
KR102494798B1 (ko) 2012-07-03 2023-02-06 워싱턴 유니버시티 Tau에 대한 항체
WO2020037311A1 (en) * 2018-08-17 2020-02-20 University Of Florida Research Foundation, Inc. Protein and peptide biomarkers for traumatic injury to the central nervous system

Also Published As

Publication number Publication date
EP4314059A1 (en) 2024-02-07
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