TR201903401T4 - Bir biyobelirteç olarak miRNA-124. - Google Patents

Abstract

Söz konusu en az bir miRNA, miR-124 olmak üzere en az bir miRNA?nın bir viral enfeksiyonun veya söz konusu viral enfeksiyonun terapötik bir tedavisinin etkinliğinin biyobelirteç olarak kullanımıdır.

Description

TARIFNAME BIR BIYOBELIRTEÇ OLARAK MlRNA-124 Mevcut açiklama, özellikle viral enfeksiyonlarla iliskili olarak biyobelirteçler alaniyla Daha özellikle, bulus, viral enfeksiyonlar için bir tanisal belirteç olarak faydali yeni bir biyobelirteçle ilgilidir. Daha özellikle ele alinan viral enfeksiyonlar, RNA uç birlestirmeyi gerektiren viral enfeksiyonlar ve özellikle HIV ve AIDS-iliskili durumlar gibi retroviral enfeksiyonlardir. Bulus ayrica, söz konusu enfeksiyonlarin ve özellikle HIV ve AIDS- iliskili durumlarin tedavileri için bir takip belirteçle de ilgilidir.

Yüksek ökaryotlarda, mesajci RNA'Iar dogrudan fonksiyonel formlarinda degil, hücresel translasyon düzenegi tarafindan okunabilir olmalari amaciyla birçok isleme olayi geçirmek zorunda olan ön-mesajci RNA'Iar olarak transkribe edilir. Uç birlestirme, istenmeyen dizilerin (intronlar) ortadan kaldirilmasina ve anlamli olanlarin (eksonlar) birlestirilmesine olanak saglayan islemdir. Oldukça koordine uç birlestirme, Splisozom denilen büyük bir komplekste meydana gelir. Bu fonksiyonel megakompleksin olusumu, proteinlerin ve ekson-intron sinirlarinin tanimlanmasini gerektiren RNA'nin dikkatlice organize edilmis bir toplanmasidir. Eksonlar, düzenli sekilde alternatif olarak uç birlestirilir, yani nihai olgun mRNA transkriptine ya dahil edilir veya bundan hariç tutulur.

Yakin dönemdeki bir kapsamli dizileme çalismasi, genlerin %90'indan fazlasinin alternatif uç birlestirmeye maruz kaldigini gözlemlemistir. Alternatif olarak uç birlestirilen mRNA'Iarin üretilmesi, ön-mRNA'nin kendisindeki pis-görevi yapan alanlara baglanan trans-hareket eden proteinlerin bir sistemi tarafindan düzenlenir. Bu tip proteinlere, belirli bir uç birlestirme alaninin kullanilmasini tesvik eden uç birlestirme aktivatörleri ve sirasiyla uç birlestirme güçlendirme alanlarina (intronik uç birlestirme güçlendiricileri, ISE ve eksonik uç birlestirme güçlendiricileri, ESE) ve uç birlestirme susturma alanlarina (intronik uç birlestirme susturuculari, ISS ve eksonik uç birlestirme susturuculari, ISS) baglanan belirli bir alanin kullanilmasini indirgeyen uç birlestirme baskilayicilari dahildir. Özellikle retroviral familyasindan virüsler, dünya genelindeki hastaliklarin ana nedenlerinin biridir. Retroviral familya içerisinde üç alt familya ayrilabilir: onkovirüsler, Onkovirüsler bu sekilde isimlendirilmistir çünkü kanserlerle ve malignan enfeksiyonlarla iliskilendirilebilirler. Örnegin, lökemojenik virüslerden (mesela kus lösemi virüsünden (ALV), Moloney virüsü olarak da adlandirilan murin lösemi virüsünden (MULV), kedigil lösemi virüsünden (FELV), HTLV1 ve HTLV2 gibi insan lösemi virüslerinden, maymun lösemi virüsü veya STLViden, bovin lösemi virüsü veya BLV'den, primat tip D onkovirüslerinden, meme tümörlerinin indükleyicileri olan tip B onkovirüslerinden veya (Rous sarkoma virüsü veya RSV gibi) hizli bir kansere neden olan onkovirüslerden bahsedilebilir.

Spumavirüsler, belirli bir hücre tipi veya belirli bir tür için oldukça düsük spesifiklik belli eder ve bunlar bazen immünosupresif fenomenle iliskilendirilir; bu, örnegin, maymun köpüklü virüsü (veya SFV) için olan durumdur.

HIV gibi Ientivirüsler, bu sekilde adlandirilmistir çünkü AIDS dahi olmak üzere çok siklikla immünosupresif fenomeni içeren yavas-ilerleyici patolojik durumlardan sorumludurlar.

Virüsler ve özellikle HIV gibi retrovirüslerin, enfekte bir bireyin hücreleri ve dokulari içerisinde yayilmak ve saçilmak amaciyla RNA uç birlestirmesine ve uç birlestirme regülasyonuna dayandigi bilinmektedir.

Son dönemlerde, HIV'nin, kilit viral proteinleri eksprese etmek için RNA uç birlestirmesi gerektiren bir retrovirüs olmasi gerçeginden, viral enfeksiyonlarla ve özellikle AIDS ile mücadele etmek için uç birlestirme inhibisyonuna dayanan yeni bir strateji gelistirmek virüs için bir genomik RNA görevi görmekle kalmayip ayrica 40 farkli mRNA da üreten 9 kb'lik bir primer transkript eksprese eder. HIV-1, uç birlestirilmis mRNA türleri olusturmak için dört adet çoklu alternatif 5' uç birlestirme alani ve sekiz adet çoklu alternatif 3' uç birlestirme alani kullanir. Bu üç birlestirilmis mRNA'lar iki sinifa ayrilabilir: çoklu olarak uç birlestirilen (2 kb) ve tekli olarak uç birlestirilen (4 kb) RNA'lar. HIV-1 alternatif uç birlestirmenin regülasyonu temel olarak, uç birlestirme sinyallerinin hücresel uç birlestirme mekanizmasi tarafindan taninmayi azaltan yetersiz uç birlestirme alanlarinin varligi nedeniyle meydana gelir. Viral uç birlestirme alanlarindaki uç birlestirme ayrica, ESE'Ierin, ESS'Ierin ve ISS'Ierin varligi tarafindan düzenlenir.

Bu baglamda, kuinolin türevleri, özellikle HlV-1 ve HIV-2 T hücresi-tropik laboratuvar suslarinin Periferik Kari Tek Çekirdekli Hücrelerinde (PBMC) ve ayrica nM konsantrasyonlari araligindaki farkli alt türlerin klinik izolatlarinda çogalmayi önledigi kanitlanmis olan 8-kloro-N-[4-(triflorometoksi)feniI]kuinolin-2-amin gelistirilmistir (WO En kapsamli kodlayici olmayan grup olan mikroRNA'Iar (miRNA), hedef mRNA transkriptlerinin Transle Edilmemis Bölgesine (UTR) baglanma yoluyla gen ekspresyonunu önleyen yaklasik 22 nt kodlayici olmayan RNA'Iarin bir sinifidir (Lai et temsil etmektedir. Öngörüler, her bir miRNA`nin 200'den fazla transkripti hedefleyebildigini ve tek bir miRNA'nin birden fazla miRNA tarafindan düzenlenebildigini öne sürmektedir (LINDOW, DNA Cell Biol., vol. 26(5), p. 339-351, 2007). miRNA'Iar endojen toka-sekilli transkriptlerden üretilir ve baz-eslesmesinin derecesine bagli olarak mRNA klevajina veya translasyonel baskilamaya yol açan sekilde hedef mRNA'Iarla baz eslesmeyle hareket eder. Iki islem olayi olgun miRNA olusumuna yol açar: ilk olarak, yeni olusan miRNA transkriptleri (pri-miRNA), çekirdekten alinan ve kisa (yaklasik 22 nükleotid uzunlugunda) olgun miRNAllar olusturmak için sitoplazmada yarilan 70 nükleotid öncülü (ön-miRNA) olarak islenir alabilir. Kalit arasi olduklarinda, ekspresyonlari, diger miRNA'IarIa bir küme olarak Kalit içi olduklarinda, yani, bir protein-kodlayan gen içerisinde (yani yalnizca intronlarda) konumlandirildiklarinda, siklikla konak-genleriyle ayni sarmaldan (Liu et miRNA'Iar son dönemde, viral enfeksiyonlarda konakla patojen arasindaki çaprasik çapraz-etkilesime dahil edilmistir ve viral patojenezinde temel bir rol oynadiklari virüsler, sag kalmalari ve çogalmalari için hücresel düzenegi kullanan zorunlu hücre içi parazitlerdir, böylece bu bagimlilik bunlari konak gen-düzenleyici mekanizmalara duyarli hale getirir. Hücresel miRNA, bir antiviral savunma mekanizmasinda yer alabilir, ancak, bazi durumlarda, viral pozitif düzenleyiciler de olabilirler. Diger yandan, virüslerin kendileri de hücresel islemlerin veya viral genlerin düzenlenmesi için miRNAilar üretebilir. HIV-1 enfeksiyonundan yer alan miRNA'lar, biyojenez kaynaklarina göre HIV-1-k0dlanmis veya konak-kodlanmis olarak tanimlanabilir; ayrica, fonksiyonlarina göre enfeksiyon baskilayicilari veya aktivatörleri olarak da tanimlanabilirler. Ayrica, dogrudan HIV-1 transkriptlerini mi hedefledikleri veya virüs yasam döngüsünde yer alan konak faktörleri hedefleyerek dolayli olarak HIV-1'i mi etkiledikleri veya hem HIV-1 RNA genomunu hem HIV-1 enfeksiyonu için elzem konak faktörleri mi hedeflediklerine göre de ayrilabilirler. Birçok veri, HIV-1 enfeksiyonunun miRNA yolaklarini küresel olarak, miRNA biyojenez pertürbasyonu nedeniyle ancak ayrica bireysel olarak miRNA ekspresyon profilleri modifikasyonuyla etkiledigini 686-693)). Ayrica, konak miRNA'Iarin HIV-1'i düzenledigi tarif edilmistir.

Belirli bir ilaç veya asinin gelistirilmesinin basarisi için kilit bir faktör, etkililiginin etkili ve hizli bir sekilde tayin edilmesi olasiligidir. Gerçekten de, çok yüksek bir dozajdan gelen istenmeyen etkilerin önlenmesi veya çok düsük bir dozaj nedeniyle bir etkililik eksikliginin önlenmesi amaciyla, belirli bir ilacin veya asinin terapötik penceresinde verilmesi önemlidir. Ayrica, uygun ilacin veya asinin uygun hastaya verildiginde ve bu hastanin, gerçekten de ilaç veya asiya cevap verdiginden emin olunmalidir. Bu nedenle, belirli bir hastayi ve belirli bir ilaç veya asiyi basitçe baglantilamak, faydali bir terapötik etkinin elde edilmesi için her zaman yeterli degildir. Bu nedenle, bir ilaç veya asinin etkililiginin tayin edilmesi için güvenilecek, spesifik biyobelirteçler gibi uygun araçlara sahip olmak kritiktir.

Bu nedenle, bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV (Insan Bagisiklik Yetmezligi Virüsü) enfeksiyonunun tayin edilmesinin yani sira bu tip durumlarin bir tedavisinin etkililiginin tayin edilmesi için yeni ve hassas bir araca ihtiyaç vardir.

Bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HlV enfeksiyonunun bir tedavisinin etkililiginin tayin edilmesi için yeni bir biyobelirtece ihtiyaç vardir.

Virüslerin ve özellikle HIV gibi ve daha özellikle HIV-1 ve HIV-2 gibi belirli retrovirüslerin inhibitörleri olan kuinolin türevlerinin etkililiginin tayin edilmesi için yeni ve hassas bir araca ihtiyaç vardir.

Bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesi veya tedavi edilmesi için bir hastanin kuinolin türevlerine duyarliliginin tayin edilmesi için yeni bir biyobelirtece ihtiyaç vardir.

Bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesi veya tedavi edilmesi için kuinolin türevlerinin terapötik etkililiginin tayin edilmesi için yeni bir biyobelirtece ihtiyaç vardir.

Ayrica, bir viral enfeksiyonun, özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için etkili ilaç adaylarinin veya asinin taranmasi için yeni bir biyobelirtece ihtiyaç vardir.

Mevcut bulus, bu ihtiyaçlari karsilama amacina sahiptir.

Amaçlarinin birine göre, bulus, bir viral enfeksiyonun veya söz konusu viral enfeksiyonun bir terapötik tedavisinin bir etkililiginin bir biyobelirteci olarak, söz konusu en az bir adet miRNAlnin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir in vitro veya ex vivo kullanimiyla ilgilidir.

Beklenmedik sekilde, bulusun sahipleri, asagidaki örneklerde ayrintili olarak açiklandigi üzere, bir HIV susuyla, özellikle bir ADA-M R5 HIV susuyla enfekte PBMC”Ierde, miR-124'ün ekspresyon seviyesinin enfekte-olmamis PBMC'Iere nazaran azalmis oldugunu gözlemlemistir.

Dahasi, bulusun sahipleri beklenmedik sekilde, formül (l) veya (II)'nin kuinolin türevleri gibi kuinolin türevleriyle ve özellikle 8-kl0ro-N-[4-(trifl0romet0ksi)fenil]kuinolin-2-amin ile, bir HIV susuyla, özellikle ADA-M R5 HIV ile enfekte periferik kan tek çekirdekli hücrelerinin (PBMC'Ier) bir tedavisinin, virüslerin yok edilmesiyle ve miR-124 ekspresyonunun çarpici bir artisiyla (kontrole nazaran 13-kat) sonuçlandigini ve ayrica asagida tarif edildigi sekilde seçilebilir. Dolayisiyla, söz konusu viral enfeksiyonun bir terapötik tedavisi kuinolin türevleriyle bir tedavi olabilir.

Dolayisiyla, miR-124 kendisini, bir viral enfeksiyonun, özellikle bir HIV enfeksiyonu gibi bir retroviral enfeksiyonun, özellikle bu tip bir enfeksiyondan muzdarip bireylerde izlenmesinin yani sira bir virüsle, özellikle HIV ile bir enfeksiyon gibi bir retrovirüsle enfekte bireylerin izlenmesi için ve bir antiviral ilaçla, özellikle asagida ayrintili olarak açiklandigi üzere formül (I) veya formül (II)'nin kuinolin türevleriyle ve özellikle 8-klor0- N-[4-(trifl0romet0ksi)fenil]kuin0lin-2-amin ile tedavi edilen bu tip bireylerin izlenmesi için kuvvetli bir araç, bir biyobelirteç olarak açiga çikarmistir.

Böylelikle, miR-124'ün ekspresyon seviyesinin izlenmesiyle, insan arastirma deneyleri üzerinde kalite kontrolünün takip edilmesi veya gerçeklestirilmesi veya hastanin uygun ilaç veya asi tedavilerini, yani, doz ve süre açisindan uygun ilaç veya asi tedavilerini almakta oldugunu teyit etmek için bir araç saglayarak bir ilaç rejimine veya asiya hasta uyumlulugunun izlenmesi mümkündür. miR-124 biyobelirteci ayrica, dozaj rejimlerinin optimize edilmesi için de kullanilabilir. Böylelikle, mIR-124 biyobelirteci, örnegin, hasta tedavisinin, klinik deneylerin ve hücre-esasli arastirmanin yönetilmesiyle baglantili olarak kullanilabilir.

Bir baska amacina göre, bulus, tercihen bir retrovirüsle ve daha tercihen Insan Bagisiklik Yetmezligi Virüsüyle (HIV) bir viral enfeksiyonun, bir biyobelirteci olarak, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir in vitro veya ex vi'vo kullanimiyla ilgilidir.

Amaçlarinin bir digerine göre, bulus, bir viral enfeksiyonun, özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya asi adayinin taranmasi için, söz konusu en az bir adet miRNAlnin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir biyobelirteç olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimi ile ilgilidir. Özellikle, söz konusu viral enfeksiyonun bir terapötik tedavisinin etkililigi, bir aday bilesigin bivoloiik etkisinin, özellikle bir aday bilesigin bir hücrenin veya bir proteinin fizyolojik aktivitesini degistirmek için farmakolojik potansiyelinin tayin edilmesiyle belirlenir.

Bu açidan, burada miR-124'ün ekspresyon seviyesinin, farmakolojik bir aktiviteye haiz oldugu bilinen çesitli bilesiklerin verilisine göre degistigi gösterilmistir. Böylelikle, bulusun sahipleri, miR-124'ün, aday bir bilesigin potansiyel farmakolojik aktivitesinin ilgili bir biyobelirtecinden olustugunu göstermistir. Özellikle, bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili farz edilen ilaç adayi veya asi adayi bir kuinolin türevi olabilir. Özellikle, bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili farz edilen ilaç adayi veya asi adayi, formül (I)`in bir kuinolin türevi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu olup, veya bir (01-03) alkil grubu; R1 ve Rz'nin bagimsiz olarak bir hidrojen atomu veya bir (C1-C3) alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; bir (Ci-Ca) floroalkoksi grubu; bir -NOz grubu; bir fenoksi grubu; ve bir (Ci-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (Ct-C4) alkil grubu ve bir (Ci- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R", bir hidrojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubudur.

Bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili farz edilen ilaç adayi veya asi adayi ayrica formül (ll)'nin bir kuinolin türevi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu olup, - n, 1 veya 2'dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (C1-C3) alkil grubu; bir -CN grubu; bir hidroksil grubu; bir -COOR1 grubu; bir (C1-Cg)floroalkil grubu; bir -N02 grubu; R1 ve R2'nin bir hidrojen atomu veya bir (C1-Cs)alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; ve bir (C1-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (C1-C4) alkil grubu ve bir (C1- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R", bir hidrojen atomu veya bir (C1-C4) alkil grubudur.

Bulus kapsaminda, “engelleme” terimi, belirli bir olayin, yani, bulus baglaminda, bir viral enfeksiyonun meydana gelme olasiliginin indirgenmesi anlamina gelme amaçlidir.

Amaçlarinin bir digerine göre, bulus, bir kuinolin türevinin veya bunun farmasötik olarak kabul edilen tuzlarindan birinin bir viral enfeksiyon, özellikle bir retroviral enfeksiyon ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonu üzerindeki bir aktivitesinin bir biyobelirteci olarak söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir in vitro veya ex vi'vo kullanimiyla ilgilidir.

Amaçlarinin bir baskasina göre, bulus, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin, formül (I)'in bir kuinolin türevinin: veya bunun farmasötik olarak kabul edilen bir tuzunun bir viral enfeksiyon ve özellikle bir retroviral enfeksiyon ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonu üzerindeki bir aktivitesinin bir biyobelirteci olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimiyla ilgili olup, e n, 1 veya ?dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (01-03) alkil grubu; R1 ve Rz'nin bagimsiz olarak bir hidrojen atomu veya bir (C1-Cs) alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; bir (Ci-Cs) floroalkoksi grubu; bir -N02 grubu; bir fenoksi grubu; ve bir (C1-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubu ve bir (C1- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R", bir hidrojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubudur.

Amaçlarinin bir baskasina göre, bulus, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin, formül (II)'nin bir kuinolin türevinin: veya bunun farmasötik olarak kabul edilen bir tuzunun bir viral enfeksiyon. özellikle bir retroviral enfeksiyon ve daha özellikle bir HlV enfeksiyonu üzerindeki bir aktivitesinin bir biyobelirteci olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimiyla ilgili olup, - n, 1 veya 2`dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (Ci-Ca) alkil grubu; bir -CN grubu; bir hidroksil grubu; bir -COORi grubu; bir (C1-Cs)floroalkil grubu; bir -N02 grubu; R1 ve Rg'nin bir hidrojen atomu veya bir (Ci-Cg)alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; ve bir (Ci-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubu ve bir (C1- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R", bir hidrojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubudur.

Belirli bir uygulamaya göre, kuinolin türevi 8-kl0r0-N-[4-(trifl0romet0ksi)fenil]kuinolin-2- amin veya 8-kl0r0-N-[4-(trifl0rometil)piridin-2-II]kuinolin-2-amin olabilir.

Böylelikle, amaçlarinin bir digerine göre, bulus, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu Sekilde en az bir adet miRNA'nin, asagidakilerden seçilen bir kuinolin türevinin bir aktivitesinin bir biyobelirteci olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimiyla Bulus kapsaminda, “viral enfeksiyon” ve “bir virüsle enfeksiyon” ifadeleri, bulusun bir biyobelirtecini eksprese etme egiliminde olan bir hücrede, bir dokuda, bir organda veya bir bireyde meydana gelebilen herhangi bir viral enfeksiyonu ve özellikle herhangi bir retroviral enfeksiyonu ifade etmektedir. Tercihen, bir retroviral viral enfeksiyon bir lentiviral enfeksiyon ve daha tercihen bir HIV enfeksiyonu olabilir. Bulus kapsamindaki bir birey, bulusun bir biyobelirtecini eksprese etme egiliminde olan bir memeli ve tercihen bir insan olabilir. Bulus kapsaminda, birey ve hasta degisimli olarak kullanilmaktadir.

Bulus kapsaminda, ”virüs" terimi herhangi bir virüsü, özellikle bir retrovirüsü ve tercihen bir HIV virüsü, daha tercihen HIV-1 veya HIV-2 gibi bir Ientivirüsü ifade etmektedir.

Amaçlarinin bir digerine göre, bulus, bir virüsle enfekte oldugu farz edilen bir hastadaki bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun tayin edilmesi için, en azindan asagidaki adimlari içeren bir in vitro veya ex vivo yöntemle ilgilidir: a- söz konusu hastadan önceden elde edilmis olan bir biyolojik numunede, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir varliginin veya bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesi; ve b- söz konusu varligin veya ekspresyon seviyesinin bir kontrol referansi degerine karsilastirilmasi olup, burada söz konusu miRNA'nin söz konusu kontrol referans degerine nazaran bir modüle varligi veya ekspresyon seviyesi bir viral enfeksiyonun göstergesidir.

Amaçlarinin bir digerine göre, bulus, söz konusu kuinolin türeviyle tedavi edilen bir hastadaki bir viral enfeksiyonun, özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için formül (I)'in bir kuinolin türevinin bir aktivitesinin tayin edilmesi için en azindan asagidaki adimlari içeren bir in vitro veya ex vivo yöntemle ilgilidir: a- söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin, söz konusu kuinolin türevinin verilmesinden önce söz konusu hastadan önceden elde edilen bir birinci biyolojik numunedeki ve söz konusu kuinolin türevi verildikten sonra söz konusu hastadan önceden elde edilen bir ikinci biyolojik numunedeki bir varliginin veya bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesi; ve b- söz konusu varligin veya ekspresyon seviyesinin tedaviden sonra elde edilen ikinci biyolojik numunede, tedaviden önce elde edilen ikinci biyolojik numuneye kiyasla modüle edilip edilmediginin belirlenmesi olup; burada söz konusu miRNA'nin bir modüle edilmis varligi veya ekspresyon seviyesi, söz konusu kuinolin türevinin bir aktivitesinin göstergesidir. edilen, ulasilan veya toplanan biyolojik dokunun veya sivi kökenli numunesi dahil olmak üzere, bir biyolojik süjeden elde edilen bir numuneyi ifade etmektedir. Bu tip numuneler, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, organlar, dokular, kesitler ve bir memeliden izole edilen hücreler olabilir. Emsal biyolojik numunelere, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, hücre lizati, bir hücre kültürü, bir hücre çizgisi. bir doku, oral doku, gastrointestinal doku, bir organ, bir organel, bir biyolojik sivi, bir kan numunesi, bir serum numunesi, bir idrar numunesi, bir deri numunesi ve benzerleri dahildir. Tercih edilen biyolojik numunelere, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, bir kan, bir plazma, bir serum, bir PBMC, bir doku biyopsisi, bir oral mukoza, bir tükürük, bir interstisyel sivi veya bir idrar numunesi ve benzerleri dahildir.

Bir uygulamada, bulus için uygun bir biyolojik numune, bir biyolojik doku numunesinden, bir tam kan numunesinden, bir sürüntü numunesinden, bir plazma numunesinden, bir serum numunesinden, bir tükürük numunesinden, bir vajinal sivi numunesinden, bir sperm numunesinden, bir farinjiyal sivi numunesinden, bir bronsiyal sivi numunesinden, bir fekal sivi numunesinden, bir beyin-omurilik sivisi numunesinden, bir lakrimal sivi numunesinden ve bir doku kültürü süzüntüsü numunesinden olusan bir gruptan seçilir.

Açiklama ayrica bir biyobelirteç içeren bir izole biyolojik numuneyle de ilgili olup, burada söz konusu biyolojik numune, bir doku numunesi, tam kan, sürüntü numunesi, plazma, serum, tükürük, vajinal sivi, sperm, farinjiyal sivi, bronsiyal sivi, fekal sivi, beyin-omurilik sivisi, lakrimal sivi ve doku kültürü süzüntüsünü içeren ve tercihen bunlardan olusan bir gruptan seçilir; burada söz konusu biyobelirteç bir miRNA biyobelirteci ve tercihen miR-124'tür.

Amaçlarinin bir digerine göre, bulus, bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya asi adayinin taranmasi için en azindan asagidaki adimlari içeren bir in vitro veya ex vivo yöntemle a- söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'yi eksprese edebilen en az bir adet izole hücrenin söz konusu adayla tedavi edilmesi olup, söz konusu hücre söz konusu en az bir adet miRNA'nin eksprese edilmesi için uygun kosullar altindadir, b- söz konusu en az bir adet miRNAhin bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi, c- söz konusu ölçülen varligin veya ekspresyon seviyesinin, söz konusu en az bir adet miRNA'nin tedavi edilmemis bir izole hücredeki bir ölçümüyle veya ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasi olup, burada söz konusu miRNA'nin bir modüle varligi veya ekspresyon seviyesi, bir aday bilesigin bir biyolojik etkisinin ve özellikle söz konusu ilaç adayinin veya asi adayinin bir viral enfeksiyon üzerindeki etkililiginin göstergesidir.

Bulus kapsaminda, “modülasyon” veya “modüle varlik veya ekspresyOn seviyesi” terimleri, bulusun bir biyobelirteoinin varliginin veya ekspresyon seviyesinin ya indüklendigi veya arttirildigi veya alternatif olarak baskilandigi veya azaltildigi anlamina gelme amaçlidir.

Böylelikle, burada yer alan deneysel sonuçlardan, miR-124'ün ve bilhassa miR-124'ün ekspresyon seviyesinin, bir hücrenin, faydali bir farmakolojik etkiyi hayata geçiren bir metabolik degisikligi dahil olmak üzere bir proteinin veya bir hücrenin fizyolojik degisikliginin göstergesi olan bir ilgili biyobelirteçten olustugu anlasilmaktadir.

Bu durumda, önceden belirtildigi üzere, açiklama ayrica, bir aday bilesigin biyolojik etkisinin, özellikle farmakolojik etkisinin tayin edilmesi için, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miRNA-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin in vitro veya ex vivo kullanimiyla da ilgilidir.

Bu açiklama ayrica, bir aday bilesigin bir proteinin veya bir hücrenin fizyolojik aktivitesini degistirme yetisinin tayin edilmesi için, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miRNA-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin in vitro veya ex vivo kullanimiyla da ilgilidir.

Bir proteinin veya bir hücrenin fizyolojik aktivitesinin degistirilmesi teknikte uzman bir kisi tarafindan, hücrenin bir metabolik parametresinin, elektrofizyolojik degisiklikleri kapsayan Ölçümü, hücre membrani geçirgenligi degisiklikleri, enzim aktivitesi degisiklikleri, protein ekspresyonu degisiklikleri, miRNA ekspresyonu degisiklikleri, gen ekspresyonu degisiklikleri, hücre içi pH degerleri vb. dahil olmak üzere bir hücrenin bir fizyolojik parametresinin ölçümündeki herhangi bir saptanabilir degisikligin tanimlanmasiyla kolayca belirlenebilir. kullanildigi sekliyle genellikle herhangi bir ölçüm biçimini ifade etmektedir ve bir ögenin var oldugunun veya olmadiginin belirlenmesini içerir. Bu terimler nicel ve/veya nitel belirlemelerin her ikisini içerir. Tayin bagil veya mutlak olabilir. “Varliginin tayin edilmesi” ifadesi, var olan bir seyin miktarinin belirlenmesinin yani sira bunun var veya yok olup olmadiginin belirlenmesini de içerebilir.

Tercih edilen bir uygulamaya göre, bir viral enfeksiyon tayin edilirken, söz konusu miRNA`nin bir kontrol referans degerine nazaran bir indirgenmis veya baskilanmis varliginin veya ekspresyon seviyesinin bir azalan seviyesinin bir gözlemlenmesi, bir viral enfeksiyonun göstergesi olabilir.

Tercih edilen bir uygulamaya göre, bir viral enfeksiyonun tedavisi için formül (I)'in bir kuinolin türevinin bir aktivitesi tayin edilirken veya bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayi veya asi adayi taranirken, söz konusu miRNA'nin bir kontrol referans degerine nazaran bir indüklenmis veya arttirilmis varliginin veya ekspresyonun bir artan seviyesinin bir gözlemlenmesi, formül (I)'in söz konusu kuinolin türevinin bir aktivitesinin veya söz konusu ilaç adayinin veya asi adayinin bir etkililiginin göstergesi olabilir.

Bulusun kullanimlari ve yöntemleri in vitro veya ex vivo gerçeklestirilir.

Amaçlarinin bir digerine göre, bulus, miR-124'e spesifik olarak melezlesebilen bir izole nükleik asit probunun, bir viral enfeksiyonun, özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun teshis edilmesi için veya bir viral enfeksiyonun, özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya asi adayinin bir aktivitesinin tayin edilmesi için miR-124'ün bir varliginin veya bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için bir tanisal ajan olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimi ile ilgilidir.

Burada kullanildigi sekliyle “prob" terimi genellikle, spesifik bir hedef miRNA biyobelirteci dizisine yönlendirilen bir yakalama ajanini ifade etmektedir. Dolayisiyla, bir prob kümesinin her bir probu ayri bir hedef miRNA biyobelirtecine sahiptir. Bir prob/hedef miRNA dubleksi, bir probun kendi hedef miRNA biyobelirtecine melezlenmesiyle olusturulan bir yapidir.

Bulus için uygun bir izole nükleik asit probu tercihen, SEQ ID NO: 6 ila SEQ ID NO: 87 arasindakilerden olusan gruptan seçilen bir nükleik asit dizisine dayanan bir nükleik asit probudur.

Avantajlarinin birine göre, bulus, bir virüsle, tercihen bir retrovirüsle ve daha tercihen bir HIV virüsüyle enfekte hastalarin takibi için faydali ve güvenilir bir biyobelirteç saglamaktadir.

Avantajlarinin birine göre, bulus, bir virüsle, tercihen bir retrovirüsle ve daha tercihen bir HIV virüsüyle enfekte olan ve bir formül (I)'in kuinolin türeviyle tedavi edilen hastalarin takibi için faydali ve güvenilir bir biyobelirteç saglamaktadir.

Avantajlarinin birine göre, bulus, bir hastanin yataginda kolayca kullanilabilen duyarli ve güvenli bir biyobelirteç saglamaktadir.

Kullanimlar ve yöntemler Bir uygulamaya göre, bulusa göre kullanim ve yöntemler, özellikle, bir hastadaki bir viral enfeksiyonun belirlenmesine ve özellikle bu enfeksiyonun takibine olanak saglar.

Bir uygulamaya göre, miR-124'ün bir varligi veya bir ekspresyonun seviyesi bir izole biyolojik numunenin içinde ölçülür ve daha sonra bir kontrol referans degeriyle karsilastirilir. miR-124”ün varliginin veya ekspresyon seviyesinin kontrol referans degerine nazaran bir modülasyonu, bir viral enfeksiyonun göstergesi olabilir. Özellikle, söz konusu miRNA'nin bir kontrol referans degerine nazaran bir indirgenmis veya baskilanmis varligi veya bir azalan ekspresyon seviyesi, bir viral enfeksiyonun göstergesi olabilir. Özellikle, söz konusu miRNA'nin bir kontrol referans degerine nazaran bir indirgenmis veya baskilanmis varligi veya bir azalan ekspresyon seviyesi, bir viral enfeksiyonun göstergesi olabilir.

Bir baska uygulamaya göre, bulusun kullanimlari ve yöntemleri, formül (I)'in söz konusu kuinolin türeviyle bir tedavinin bir etkililiginin tayin edilmesi için olabilir.

Bir baska uygulamaya göre, bulusun kullanimlari ve yöntemleri, formül (I),in kuinolin türevlerinin, bir viral enfeksiyonun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için bir terapötik ajan olarak bir terapötik etkililiginin tayin edilmesi için olabilir.

Bir uygulamaya göre, bulusun kullanimlari ve yöntemleri, formül (l)'in söz konusu kuinolin türeviyle bir tedaviye hasta uygunlugunun tayin edilmesi için olabilir. miR-124 biyobelirteci, bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun veya AlDS'in (Edinilmis Bagisiklik Yetersizligi Sendromu) hastanin tedavisi esnasinda formül (I)'in kuinolin türevleri aktivitesinin izlenmesi veya yönetilmesi için kullanilabilir.

Kuinolin türeviyle tedavi edilen bir hastada formül (I)`in bir kuinolin türevinin aktivitesinin tayin edilmesi veya izlenmesi için bir yöntem, miR-124lün izole bir numunedeki, tercihen izole PBMC'deki (Periferik Kan Tek Çekirdekli Hücre) bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesini ve ölçülen ekspresyon seviyesinin, miR-124'ün tedavi öncesinde hastadan alinan bir izole numunedeki bir ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasini içerebilir. miR-124 seviyesinin takip edilmesiyle, kuinolin türevinin aktivitesi zamanla izlenebilir.

Bir uygulamaya göre, bulusa göre bir kullanim veya bir yöntem, bir hastanin dozaj rejiminin optimize edilmesi için uygulanabilir. Hastalar, yas, saglik, genetik geçmis, diger komplikasyonlarin varligi, hastalik ilerleyisi ve diger ilaçlarin es-verilisi gibi faktörlere bagli olarak formül (l)'in belirli kuinolin türevlerine farkli cevap verebilir. Bir hastada bir kuinolin türevinin, doz miktari ve/veya doz programlamasi gibi, dozaj rejiminin tayin edilmesi ve optimize edilmesi için miR-124 biyobelirteçten faydalanmak yararli olabilir. Bu bakimdan, miR-124-esasli biyobelirteç de, zaman içinde bireysel hasta tedavi etkililiginin takip edilmesi ve ayarlanmasi için kullanilabilir. Biyobelirteç, bir ajanin dozunu gerektigi sekilde arttirarak veya azaltarak bir hastanin tedavisinde ayarlamalar yapmak için gereken bilgileri toplamak için kullanilabilir. Örnegin, bir kuinolin türevi almakta olan bir hasta, dozajin etkili hale gelip gelmedigini veya daha agresif bir tedavi planinin yerine getirilip gerekmedigini görmek için miR-124-esasli biyobelirteç kullanilarak test edilebilir. Verilen ilacin miktari, verilis zamani, verilis sikligi, verilis süresi daha sonra miR-124 biyobelirteç ölçümüne bagli olarak ayarlanabilir. miR-124 biyobelirteci ayrica, bireysel tedavi rejimleri esnasinda veya klinik denemeler esnasinda hasta uyumunu takip etmek için de kullanilabilir. Bu, denemeye dahil edilen hastalarin, ilaçlari talimat verildigi sekilde aliyor olduklarini temin etmek için ayarlanan araliklarda takip edilebilir. Ayrica, bir kuinolin türevi almakta olan bir hasta, hastanin, tedavi planinin dozaj rejimine uyup uymadigini belirlemek için miR-124 biyobelirteci kullanilarak test edilebilir. Biyobelirtecin, tedavi edilmemis bir kontrol numunesine kiyasla artan bir ekspresyon seviyesi, protokole uyumun göstergesidir.

Bulusun bir biyobelirteci, formül (I)'in kuinolin türevlerinin etkililiginin tayin edilmesi ve takip edilmesi için uygulanabilir. Dolayisiyla, miR-124'ün bir varligi veya ekspresyon seviyesi, daha önceden formül (I)'in bir kuinolin türeviyle tedavi edilen bir hastadan elde edilmis olan bir izole biyolojik numune içinde ölçülebilir. Daha sonra, miR-124'ün izole bir biyolojik numunede ölçülen varligi veya ekspresyon seviyesi bir kontrol referans degeriyle karsilastirilabilir. Ölçülen seviyenin kontrol referans degerine nazaran bir artisi gözlemlendiginde, ölçüm, formül (I)'in söz konusu kuinolin türevlerinin bir aktivitesinin göstergesidir.

Bir baska uygulamada, ölçülen seviyenin kontrol referans degerine nazaran bir artisi gözlemlendiginde, ölçüm, bir hastanin, formül (I),in söz konusu kuinolin türevleriyle bir tedaviye bir cevap verisinin göstergesi olabilir.

Bir baska uygulamada, ölçülen seviyenin kontrol referans degerine nazaran bir artisi gözlemlendiginde, ölçüm, formül (l)'in söz konusu kuinolin türevleriyle bir tedavinin bir etkililiginin göstergesi olabilir.

Bir baska uygulamada, ölçülen ekspresyon seviyesinin kontrol referans degerine nazaran bir artisi gözlemlendiginde, ölçüm, formül (I)'in söz konusu kuinolin türevlerinin, bir viral enfeksiyonun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için bir terapötik ajan olarak bir terapötik etkililiginin göstergesi olabilir.

Bir numuneden miR-124 bir kuinolin türeviyle bir tedaviden sonra, bir tedavi-edilmemis kontrol referans degerine kiyasla “arttiginda” veya “yukari-düzenlendiginde", bu artis, örnegin, karsilastirmali kontrol referans degerinin (yani, kuinolin türeviyle tedavi Özellikle, miR-124'ün ölçülen ekspresyon seviyesi, söz konusu kontrol referans degerine nazaran en az bir iki-kat, tercihen en az bir dört-kat, tercihen en az bir alti-kat, tercihen en az bir sekiz-kat ve daha tercihen en az bir on-kat artis olabilir.

Bulusun bir baska uygulamasina göre, bir viral enfeksiyon izlenirken veya bir viral enfeksiyonun, özellikle formül (I)'in bir kuinolin türeviyle tedavisinin bir etkililigi tayin edilirken, bir hasta bulusun bir yöntemi veya bir kullanimiyla, saatlik, günde iki kez, günlük, haftada iki kez, haftalik, ayda iki kez, aylik, yilda iki kez, yillik ve iki yilda birden olusan gruptan seçilen bir zaman araliginda test edilebilir. Bu zamanda toplanan numune hemen test edilebilir veya daha sonra test etmek için depolanabilir.

Bir baska uygulamaya göre, bulusa göre kullanim ve yöntemler, özellikle, potansiyel aktif ajanlarin bir ilaç adayi olarak taranmasina, tanimlanmasina veya degerlendirilmesine olanak saglayabilir. Özellikle, bulusa göre kullanim ve yöntemler, bir viral enfeksiyona yönelik etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayi veya bir asi gibi, potansiyel aktif ajanlarin taranmasi, tanimlanmasi veya degerlendirilmesi için özellikle avantajlidir.

Bulusun bir baska uygulamasina göre, bir miR-124 biyobelirteci, bir viral enfeksiyonun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya bir asi adayinin taranmasi için uygulanabilir. Böyle bir uygulamada, miR-124'ün bir varligi veya ekspresyon seviyesi, taranacak olan ilaçla veya asiyla önceden temas ettirilmis bir izole biyolojik numunede veya izole hücrede ölçülebilir. Daha sonra, elde edilen ölçüm bir referans kontrol degeriyle karsilastirilabilir.

Taranacak olan bilesikle, ilaçla veya asiyla önceden temas ettirilmis bir izole biyolojik numunede veya izole hücrede ölçülen seviyede, bir kontrol referans degerine nazaran bir artis gözlemlendiginde, bu durumda ölçüm, söz konusu adayin biyolojik bir etkiye sahip oldugunun ve özellikle bir hücrenin fizyolojik aktivitesinin degistirilmesi için etkili Özellikle, bir ilaç adayi veya asi adayi, bir viral enfeksiyonun ve özellikle bir retroviral enfeksiyonun ve daha özellikle bir HIV enfeksiyonunun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili olarak karakterize edilebilir.

Bir numuneden miR-124, bir ilaç adayi veya asi ile tedaviden sonra, bir tedavi- edilmemis kontrol referans degerine kiyasla “arttiginda” veya “yukari-düzenlendiginde”, bu artis, örnegin, karsilastirmali kontrol referans degerinin (yani, kuinolin türeviyle Özellikle, miR-124'ün ölçülen ekspresyon seviyesi, söz konusu kontrol referans degerine nazaran en az bir iki-kat, tercihen en az bir dört-kat, tercihen en az bir alti-kat, tercihen en az bir sekiz-kat ve daha tercihen en az bir on-kat artis olabilir.

Bulusun kullanimlari ve yöntemleri, miR-124'ün bir ekspresyon seviyesinin bir izole biyolojik numune içinde ölçülmesini içerebilir. miR-124 biyobelirtecin tayin edilmesi için herhangi bir uygun numune kullanabilir. Özellikle, bulus için uygun bir biyolojik numune, bir kan, bir plazma veya bir serum, bir tükürük, bir Interstisyel sivi veya bir idrar numunesi gibi bir biyolojik sivi; bir hücre kültürü, bir hücre çizgisi veya bir PBMC numunesi gibi bir hücre numunesi, bir oral doku, bir gastrointestinal doku, bir deri, bir oral mukoza numunesi gibi bir doku biyopsisi veya bir klinik denemeden birden fazla numune olabilir. Bu numune bir ham numune olabilir veya depolama, isleme veya ölçüm öncesinde çesitli derecelere saflastirilabilir.

Bulusun kullanimlari ve yöntemleri için biyolojik numunelerin toplanmasi, bulusun gerçeklestirilmesinden önce gerçeklestirilir ve bulusa göre bir kullanim veya bir yöntemin bir adimi degildir. miRNA tayini için numuneler istenen herhangi bir aralikta alinabilir. Örnegin, numuneler saatlik, günde iki kez, günlük, haftalik, aylik, iki ayda bir, yillik veya benzeri olarak alinabilir. Numune hemen test edilebilir veya daha sonra test etmek için depolanabilir.

Numuneler, test öncesinde saflastirilabilir. Bazi uygulamalarda, miR-124, test öncesinde geri kalan hücre içeriginden izole edilebilir. Ayrica, miR-124 molekülleri, istenirse, numunedeki mRNA'nin geri kalanindan ayrilabilir. Örnegin, miR-124 mRNA'dan, test öncesinde boyut farkliliklarina dayali olarak ayrilabilir. miR-124`ün test edilen bir biyolojik numunede ölçülen ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasi için kullanilacak kontrol referans degeri, bir kontrol numunesinden elde Kontrol numuneleri çesitli kaynaklardan alinabilir. Bazi uygulamalarda, kontrol numuneleri hastadan tedavi öncesinde veya hastaligin varligi öncesinde alinir (mesela bir arsivsel kan numunesi). Diger uygulamalarda, kontrol numuneleri, bir popülasyonun normal, hastalikli-olmayan elemanlarinin bir kümesinden alinir. Bir baska uygulamada, bir hücre tayini, örnegin, test bilesigiyle tedavi edilmemis veya 8-klor0-N-[4- (triflorometoksi)fenil]kuinolin-2-amin gibi bir referans bilesigiyle tedavi edilmis bir kontrol hücre kültürü üzerinde gerçeklestirilebilir.

Bir uygulamaya göre, bir hastadaki bir viral enfeksiyonun belirlenmesi veya izlenmesi için, bir kontrol referans degeri, bu durumdan muzdarip olmadigi bilinen bir bireyden veya bir birey grubundan elde edilen bir izole biyolojik numuneden elde edilebilir.

Bir baska uygulamaya göre, bir viral enfeksiyonun bir tedavisinin bir hastadaki bir etkililiginin belirlenmesi veya izlenmesi için, bir kontrol referans degeri, bu durumdan muzdarip olmadigi bilinen ve etkililigi belirlenecek veya izlenecek olan tedaviyi almayan bir bireyden veya bir birey grubundan elde edilen bir izole biyolojik numuneden elde edilebilir. Alternatif olarak, bir kontrol referans degeri, bir viral enfeksiyondan muzdarip ve etkililigi belirlenecek veya izlenecek olan tedaviyi almakta olan bir hastadan elde edilen bir izole biyolojik numuneden elde edilebilmekte olup, izole biyolojik numune hastadan, tedavinin verilmesinden önce alinir. miR-124 biyobelirtecinin bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için teknikte uzman kisiler için sayisiz yöntem mevcuttur. Örnegin, bir numunede miR-124'ün varliginin ve/veya ekspresyon seviyesinin tayin edilmesi için nükleik asit tayinleri veya dizilimleri kullanilabilir. miR-124iün dizisi, numunede miR-124 biyobelirtecinin ekspresyonunun veya varliginin saptanmasi için, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, Northern blot'lar ve PCR-esasli yöntemler (örnegin, Gerçek-Zamanli Ters Transkripsiyon-PCR veya qRT-PCR) gibi farkli nükleik asit tayinlerinde kullanilarak tamamlayici prob veya primer görevi gören bir karsilik gelen nükleotid hazirlamak için kullanilabilir. qRT-PCR gibi yöntemler, bir numunede miRNA'nin miktarinin dogru sekilde tayin edilmesi için kullanilabilir.

Bulusa göre sens ve anti-sens problar veya primerler, teknikte uzman kisilerce bilinen her islem, özellikle Sambrook et al. (Molecular Cloning: bir Laboratory Manual, 3rd ED., 2001, Cold Spring Harbour, N. Y.)'de tarif edilenler kullanilarak elde edilebilir.

RNA veya DNA'nin saptanmasi ve miktar tayiniyle ilgili yöntemler teknikte iyi bilinmektedir. Teknikte uzman kisi örnegin Wang et al. (1989, Proc Natl Acad Sci USA, Endocrinology, Vol. 25 : 169-193) tarafindan yayinlanan genel bir incelemeye basvurabilir.

Bir uygulamada, nükleik asitlerin saptanmasi ve miktar tayini için bir yöntem, nükleik asit konsantrasyonunun, söz konusu nükleik asitlere baglanan Iigandlarin, mesela boyalarin floresans yogunlugunu ölçülmesiyle tayin edildigi bir floresan-boya-esasli yöntem olabilir. Floresan boyalar, teknikte iyi bilinmektedir.

Alternatif olarak, söz konusu nükleik asidin miktari, spektrofotometri kullanilarak belirlenebilir.

Bir baska uygulamada, nükleik asitlerin saptanmasi ve miktar tayini için bir yöntem bir melezleme-esasli yöntem olabilir. Söz konusu melezleme-esasli yöntemlere PCR ve kantitatif-PCR (qRT-PCR veya q-PCR) teknikleri veya ters transkriptaz/polimeraz esasli teknikler dahil olabilir. Avantajli olarak, söz konusu yöntem bir dizileme adimi içerebilir veya bununla birlestirilebilir.

Bu yöntemler (i) bir hücresel mRNA'Iarin ekstraksiyonu adimini, (ii) bir ters transkriptaz kullanilarak mRNAlnin DNA'ya bir ters transkripsiyonu adimini ve (iii) önceki adimda elde edilen DNA'dan bir DNA güçlendirilmesi adimini içerebilir. Çogunlukla, ayni numuneden baslayarak, asagidaki nükleik asitler güçlendirilir: (a) hedef mRNA'nin bir ters transkripsiyon adimindan sonra elde edilen DNA ve (b) MRPL19, PUM1 ve GADPH genleri tarafindan kodlanan RNAllar gibi, hücreler tarafindan esas olarak ve sabit olarak eksprese edilen mRNA'larin ters transkripsiyonundan sonra elde edilen bir DNA veya birden fazla DNA (« referans genler »).

Güçlendirilmis DNA'nin miktari, elektroforezle ayrilmadan sonra ve DNA bantlarinin ölçümüyle belirlenebilir. Hedef mRNA(lar) ile ilgili sonuçlar, « referans » genler tarafindan kodlanan mRNA'lara kiyasla bagil birimler olarak ifade edilir. Bazi uygulamalarda, güçlendirilmis DNA'Iarin ayrilmasi adimi agaroz jel elektroforezinden sonra ve daha sonra, bu göç bantlarinda yer alan DNA'nin dansitometreyle miktar tayininden önce, DNA bantlarinin etidyum bromür ile renklendirilmesiyle gerçeklestirilir.

Diger uygulamalarda, bir lazer isini kullanilarak yayilan sinyalinin miktar tayininden önce, güçlendirilmis DNA'nin kapiler elektroforezle ayrildigi bir mikro-kanalli cihaz kullanilabilir. Bu tip bir cihaz, Caliper LifeSciences (Hopkinton, MA, ABD) firmasi tarafindan pazarlanan, örnegin « GX » serisinden bir LabChip® cihazi olabilir. qRT-PCR tarafindan elde edilen nicel sonuçlar bazen nitel verilerden daha bilgilendirici olabilir ve tayin standardizasyonunu ve kalite yönetimini basitlestirebilir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, qRT-PCR-esasli tayinler, hücre-esasli tayinler esnasinda miRNA seviyelerinin ölçülmesi için faydali olabilir. qRT-PCR yöntemi ayrica, hasta terapisinin izlenmesinde de faydali olabilir. Piyasada bulunan qRT-PCR esasli yöntemler {örnegin, TaqmanR ArrayT'V' ).

Bir numunede miRNA'nin ekspresyonunun veya varliginin belirlenmesi için herhangi bir uygun tayin platformu kullanilabilir. Örnegin, bir tayin bir ölçme çubugu, bir membran, bir çip, bir disk, bir test seridi, bir filtre, bir mikroküre, bir slayt, bir çok gözlü plaka veya bir optik fiber formunda olabilir. Bir tayin sistemi, üzerinde miRNA'ya karsilik gelen bir oligonükleotidin ekli oldugu bir kati destege sahip olabilir. Bu kati destek, örnegin, bir plastik, silikon, bir metal, bir reçine, cam, bir membran, bir partikül, bir çökelti, birjel, bir polimer, bir tabaka, bir küre, bir polisakkarit, bir kapiler, bir film bir plaka veya bir slayt içerebilir. Tayin bilesenleri, bir miRNA'nin saptanmasi için bir kit olarak birlikte hazirlanabilir ve paketlenebilir.

Bazi uygulamalarda, bir biyolojik numunede kuinolin türevinin veya ilaç adayi aktivitesinin test edilmesi için bir oligonükleotid dizilim hazirlanabilir veya satin alinabilir. Bir dizilim tipik olarak bir kati destek ve destekle temas eden en az bir oligonükleotid ihtiva etmekte olup, burada oligonükleotid, miR-124 biyobelirtecinin en azindan bir kismina karsilik gelir. Bazi uygulamalarda, miR-124 biyobelirtecinin kismi en az 5, 10, 15, 20 veya daha fazla baz içerir.

Bir uygulamaya göre, miR-124'ün varligi veya ekspresyonu, yine biyobelirteçler olarak kullanilan diger miRNA`Iarla kombinasyon halinde tayin edilebilir. Bu tip bir uygulamada, bir dizili, bir numunede, miRNA-124 dahil olmak üzere birden fazla miRNA'nin ekspresyonunun veya varliginin tayin edilmesi için kullanilabilir. Genel olarak, yöntem asagidaki adimlari içerir: a) numunenin bir prob kümesi içeren bir dizilimle, spesifik baglanmanin meydana gelmesi için yeterli kosullar altinda temas ettirilmesi; ve b) herhangi bir saptanabilir etiketin varliginin saptanmasi Için dizilimin incelenmesi, bu sayede numunedeki ilgili hedef miRNA'larin miktarinin degerlendirilmesi. Bir ekspresyon diziliminin kullanilmasi, belirli bir numune için bir miRNA ekspresyon profilinin elde edilmesine olanak saglar. miRNA'larin tayin edilmesi için tayinlerin veya dizilimlerin hazirlanmasinin yöntemleri teknikte iyi bilinmektedir ve burada daha ayrintili olarak anlatilmalarina gerek yoktur.

Nükleik asit dizilimleri, biyolojik numunelerde miRNA'Iarin varliginin veya farksal ekspresyonunun saptanmasi için kullanilabilir. (DNA veya RNA dizilimleri gibi) polinükleotid dizilimler tipik olarak, bir destek üzerinde önceden belirlenmis bir yapilandirmada düzenlenmis, çogunlukla farkli dizi polinükleotidlerinin (“yakalama ajanlari”) bölgelerini içerir. Dizilimler, (bazen “dizilim özellikleri” olarak anilan) bu bölgelerin dizilimin destegi üzerinde farkli önceden belirlenmis konumlara (“adresler”) sahip olmasi açisindan “adreslenebilir”. Dizilim üzerinde önceden belirlenmis belirli bir konumdaki (yani, bir “adres”) bölge (yani, dizilimin bir “özelligi veya “noktasi”), belirli bir miRNA hedefini saptayacaktir. Polinükleotid dizilimleri tipik olarak düzlemsel destekler üzerinde, ya önceden elde edilen polinükleotidlerin bir alana özgü biçimde destegin üzerine yerlestirilmesiyle veya polinükleotidlerin destek üzerinde alana özgü in situ senteziyle üretilir. miRNA ekspresyonunun saptanmasi için dizilimler, ya öncül ünitelerin (mesela nükleotid veya amino asit monomerleri) veya ön-sentezlenmis yakalama ajaninin yerlestirilmesiyle (örnegin, temas- veya püskürtme-esasli yöntemler veya fotolitografi) üretilebilir. Polinükleotid yakalama ajanlarinin destek üzerine yerlestirilmesinden sonra, destek tipik olarak islenir (örnegin, yikanir ve örnegin bloklanir) ve kullanim öncesinde depolanir. miRNA ekspresyonunun saptanmasi için bir dizilin en az iki, üç, dört veya bes adet farkli süje probuna sahiptir. Ancak, belirli uygulamalarda, bir süje dizilimi, miRNA'larin karsilik gelen bir sayisini saptayabilen en az 10, en az 20, en az 50, en az 100, en az içerebilir. Bazi uygulamalarda, süje dizilimleri, bir organizmanin tanimlanmis miRNA`Iarinin en azindan bir kismini veya tamamini saptamak için problar içerebilir veya birden fazla organizmadan ortolog problar içerebilir.

Bir nükleik asit dizilimi bir numuneyle veya miRNA analitleri ihtiva eden etiketli numuneyle, miRNA'nin numunede, gözlemlenmis bir baglanma örüntüsü sergilemek için dizilim üzerinde mevcut yakalama ajanlarinin birine veya daha fazlasina spesifik baglanmasini tesvik eden kosullari altinda temas ettirilebilir. Bu baglanma örüntüsü, dizilimin sorgulanmasi üzerine saptanabilir. Örnegin, numunedeki hedef miRNA'Iar (bir floresan bilesik gibi) uygun bir etiketle etiketlenebilir ve etiket daha sonra dizilimin numuneye maruziyetinden sonra dizilim üzerinde (floresans örüntüsünün gözlemlenmesiyle gibi) dogru sekilde gözlemlenebilir. Gözlemlenen baglanma örüntüsü, numunenin bir veya daha fazla miRNA bileseninin varliginin ve/veya konsantrasyonunun göstergesi olabilir. miRNA'Iarin etiketlenmesi, DNA ligazi kullanilmasi, terminal transferazi veya RNA omurgasinin etiketlenmesi vb. gibi teknikte iyi bilinen yöntemler kullanilarak gerçeklestirilebilir. Bazi uygulamalarda, miRNA'Iar floresan etiketle etiketlenebilir.

Emsal floresan boyalara, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, ksanten boyalari, fluoressein boyalari, rodamin boyalari, fluoressein izotiyosiyanat (FITC), 6 karboksifluoressein (FAM), 6 karboksi-, 6 karboksi 4', 5' dikloro 2', 7' dimetoksifluoressein (JOE veya J), N,N,N',N' tetrametil 6 karboksirodamin (TAMRA veya T), 6 karboksi X rodamin (ROX veya R), 5 karboksirodamin 6G (R6G5 veya G5), 6 karboksirodamin GG (R6G6 veya GG) ve rodamin 110; siyanin boyalari, örnegin Cy3, Cy5 ve Cy7 boyalari; Alexa boyalari, örnegin AIexa-flor-555; kumarin, Dietilaminokumarin, umbeliferon; benzimid boyalari, örnegin Hoechst 33258; fenantridin boyalari, örnegin Texas Red; etidyum boyalari; akridin boyalari; karbazol boyalari; fenoksazin boyalari; porfirin boyalari; polimetin boyalari, BODIPY boyalari, kuinolin boyalari, Piren, Fluoressein Klorotriazinil, R1 10, Eosin, JOE, RGG, Tetrametilrodamin, Lissamin, ROX, Naptho fluoressein ve benzerleri dahildir.

Bazi uygulamalarda, immünomodülatör aktivitesinin tayin edilmesi için bir oligonükleotid dizilim hazirlanabilir veya örnegin Affymetrix firmasindan satin alinabilir.

Dizilim bir kati destek ve destege temas eden birden fazla oligonükleotid ihtiva edebilir.

Oligonükleotidler, kati destek üzerinde, her biri miRNA dizilerinin, bir kuinolin türevinin veya bir ilaç adayinin bir hücrede veya bir hastada tedavi edilmesi üzerine farksal olarak eksprese edilebilen en azindan bir kismina karsilik gelen spesifik, adreslenebilir konumlarda mevcut olabilir. miRNA dizileri en az bir adet miR-124 dizisi içerir. miRNA'Iarin tayin edilmesi için bir dizilim kullanildiginda, tipik bir yöntem 1) yüzeye- bagli süje problarini ihtiva eden dizilimin elde edilmesi; 2) miRNA'Iarin bir popülasyonunun yüzeye-bagli problara, spesifik baglanmanin saglanmasi için yeterli kosullar altinda melezlenmesi; 3) melezlemede baglanmamis nükleik asitlerin yok edilmesi için melezleme-sonrasi yikamalar; ve 4) melezlenen miRNA'Iarin saptanmasi adimlarini ihtiva edebilir. Bu adimlarin her birinde kullanilan reaktifler ve bunlarin kullanim kosullari, belirli uygulamaya bagli olarak degisebilir.

Melezleme, istendigi sekilde sertlik açisindan degisebilen uygun melezleme kosullari altinda gerçeklestirilebilir. Tipik kosullar, bir numunedeki baglanma elemanlari arasindaki, yani, yüzeye-bagli süje problari ile tamamlayici miRNA'Iar arasindaki bir dizilim yüzeyi üzerinde prob/hedef komplekslerin üretilmesi için yeterlidir. Belirli uygulamalarda, sert melezleme kosullari kullanilabilir. Melezleme, tipik olarak sert melezleme kosullari altinda gerçeklestirilir. Teknikte iyi bilinen standart melezleme teknikleri (örnegin numunedeki hedef miRNA'Iarin dizilimdeki problara spesifik baglanmasini saglamak için yeterli kosullar altinda), bir numunenin bir nükleik asit dizilimine melezlenmesi için kullanilir. Sicaklik, tuz konsantrasyonu, polinükleotid konsantrasyonu, melezleme zamani, yikama kosullarinin sertligi ve benzerleri dahil olmak üzere uygun kosullarin seçilmesi, numunenin kaynagi, yakalama ajanlarinin kimligi, beklenen tamamlayicilik derecesi vb. dahil olmak üzere deney tasarimina bagli olacaktir ve teknikte normal uzmanliga sahip kisiler için rutin bir deney olarak belirlenebilir. Genel olarak, nükleik asit melezleme baglaminda bir ”sert melezleme” ve altinda farklidir. Melezleme yaklasik 12 ila yaklasik 24 saat arasindaki bir süre boyunca yapilabilir. Yikama kosullarinin sertligi, miRNA dizilerinin tamamlayici yakalama ajanlarina spesifik olarak melezlendigi dereceyi etkileyebilir. Teknikte normal uzmanliga sahip kisiler, benzer sertlik kosullarinin saglanmasi için alternatif ancak benzer melezleme ve yikama kosullarindan faydalanilabilecegini kolayca fark edecektir.

Bir Örnekleme olarak, bir uygulamada, miRNA ekspresyon profilleme deneyleri, Affymetrix Genechip miRNA Array 2.0 kullanilarak ve kullanim talimatinda tarif edilen protokoller izlenerek yürütülebilir.

Belirli bir uygulamada, söz konusu melezleme, GeneChip® Melezleme, Yikama ve Boyama Kiti (Affymetrix Ref. #900720) kullanilarak gerçeklestirilebilir. Avantajli olarak, söz konusu melezleme, üreticinin protokolleri izlenerek gerçeklestirilir. miRNA melezleme prosedüründen sonra, dizilim yüzeyine-bagli polinükleotidler tipik olarak baglanmamis nükleik asitlerin yok edilmesi için yikanir. Yikama, yukarida tarif edildigi üzere yikama kosullarinin tipik olarak sert oldugu herhangi bir elverisli yikama protokolü kullanilarak gerçeklestirilebilir. Örnegin, bir yikama adimi, Affymetrix firmasi gerçeklestirilebilir. Hedef miRNA'larin problara melezlenmesi daha sonra, dizilimin okunmasinin standart teknikleri kullanilarak saptanir. Ortaya çikan melezlenmis dizilimin okunmasi, örnegin, dizilimin aydinlatilmasiyla ve miRNA/prob baglanma komplekslerinin saptanmasi için dizilimin her bir unsurunda ortaya çikan floresanin konumunun ve yogunlugunun okunmasiyla basarilabilir.

MikroRNA'lar (miRNAllar), ayni kökenli hedef haberci RNAllarinin ekspresyonunda veya mRNA'nin protein ürününün translasyonunda bir azalmaya neden olmak için bir hücrenin sitoplazmasinin içinde hareket edebilen küçük, tek-sarmalli kodlayici olmayan RNA'Iardir. Olgun miRNA'Iar tipik olarak yaklasik 19-23 nükleotid uzunlugundadir. miRNA'Iarin, kendi hedef proteinlerinin üretiminin bu önleme yetisi, hücre-yazi belirlenmesi, apoptoz, farklilastirma ve onkojenez gibi, hücresel aktivitelerin birçok türünün düzenlenmesiyle sonuçlanir. miR-124 ilk olarak farede klonlanmistir. Insan miR-124 öncülü (veya miRN-124 veya miRNA-, embriyonik kök hücrelerinden klonlanmistir. Simdiye dek miR-124 öncüllerinin 9 haplotipi tanimlanmistir (Guo et al., PLoS ONE, 2009, hsa-miR-. miR-124 mikroRNA öncülü bir küçük, kodlayici olmayan RNA molekülüdür. Olgun ~21 nükleotidlik mikroRNA'Iar toka öncül dizilerinden Dicer enzimi tarafindan islenir. Olgun diziler miR-124-3' için SEO ID NO: 4, UAAGGCACGCGGUGAAUGCC ve miR-124-5' için SEQ ID NO: 5, CGUGUUCACAGCGGACCUUGAU'dur. miRNA-124 tercihen beyinde eksprese edilir ve SCP1 ekspresyonunun asagi regüle edilmesiyle nörojeneze katkida bulunabilir. miR124'ün fare nöronal hücrelerinde ekspresyonu, PTBP1'in mRNA'sinin dogrudan hedeflenmesi genelden nörona-spesifik alternatif uç birlestirmeye bir aktarimi indükler. miR-124, bu mRNA'Iarin sens-olmayan aracili bozunmasina yol açan PTPB1-bagimli ekson atlanmasini engelleyerek nörona- spesifik PTBP2 ve Gabbr1 mRNA'Iarinin bollugunu arttirir.

Omurgali sinir sistemi içerisindeki mitotik çikis noktasinda, hücreler çok-yetililigi kaybettiginde ve yasam boyunca sürecek stabil baglantilar gelistirmeye basladiginda, ATP-bagimli kromatin yeniden modelleme mekanizmalarinda bir aktarim meydana gelir. Bu geçise miR9* (miR9 kök-döngü öncülünün karsi kolundan islenen bir miRNA) ve miR-124 tarafindan BAF53A'nin baskilanmasi aracilik edebilir.

Deneysel otoimmün ansefalomiyelit (EAE), merkezi sinir sisteminin (CNS), CNS'deki yerlesik makrofajlarin veya mikroglinin aktivasyonuyla iliskili enflamasyonuyla ve periferik bagisiklik hücrelerinin CNS'ye infiltrasyonuyla karakterize multipl sklerozun bir kemirgen modelidir. miR-124iün mikrogli ve nöronlarda oldukça eksprese edildigi bulunmustur. miR-124'ün ekspresyonu bir EAE epizodu esnasinda aktive edilmis mikroglide ve kültürdeki aktive edilmis mikroglide indirgenir. miR-124'ün transfeksiyonu, kemik iligi-türevi makrofajlari deaktive eder ve miR-124'ün intravenöz verilisi indirger. miR-124'ün, makrofajlari CEBPA-PU.1 yolakg vasitasiyla deaktive ederek mikrogli uyusuklugunu tesvik ettigi bulunmustur.

Ayrica, miR-124'ün insan fibroblastlarinda ekspresyonunun, bunlarin nöronlara dönüsmesini indükledigi de kanitlanmistir. Nörojenik transkripsiyon faktörleri olan ASCL1 ve MYT1L'nin eklenmesi dönüsüm hizini ve dönüstürülmüs nöronlarin olgunlasmasini güçlendirirken, bu transkripsiyon faktörlerinin yukarida belirtilen mikroRNA olmadan ekspresyonu etkisizdir. miR-124iün bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için uygun bir izole nükleik asit probu, bir öncül veya bir olgun miR-124 gibi bir miR-124'e spesifik olarak melezlenebilen bir nükleik asit probudur. içerebilir. Önceden gösterildigi üzere, bu tip nükleik asit problari, teknikte bilinen herhangi bir yönteme göre hazirlanabilir.

Belirli bir prob ve belirli bir hedef için optimal melezleme sicakliginin öngörülmesi için yöntemler ve formüller iyi bilinmektedir.

Böylelikle, teknikte uzman bir kisi belirli bir hedef dizi üzerinde ve belirli melezleme kosullariyla, bir prob kümesine dayali olarak optimal melezleme sicakligini kolayca hesaplayabilir.

Avantajli olarak, söz konusu problarin optimal melezleme sicakligi 40°C ile 60°C arasinda ve daha özellikle 45°C ile 55°C arasinda ve tercihen yaklasik 48°C'dir.

Bulusun bir nükleik asit probunun bulusun bir biyobelirtecine melezlenmesi için faydali tamponlarin örnekleri olarak, bir melezleme tamponu olarak, 100mM MES, 1M [Na+], 20mM EDTA, %0,01 Tween-20 içeren bir tampondan, bir sert-olmayan yikama tamponu olarak 6X SSPE, %0,01 Tween-20 içeren bir tampondan ve bir sert yikama bahsedilebilir. miR-124'ün bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için uygun bir nükleik asit probu, örnegin, SEQ ID NO: 6 ila SEQ lD NO: 87'den olusan gruptan seçilen bir nükleik asit dizisine bagli bulunan bir nükleik asit probu olabilir. miR-124-1 öncülünün bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için uygun bir nükleik asit probu, örnegin, SEQ ID NO: 6 ila SEO ID NO: 34, SEÇ) ID NO 86 ve SEO ID NO 87`den olusan gruptan seçilen bir nükleik asit dizisine bagli bulunan bir nükleik asit probu olabilir. miR-124-2 öncülünün bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için uygun bir nükleik asit probu, örnegin, SEQ ID NO: 35 ila SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO 86 ve SEO ID NO 87'den olusan gruptan seçilen bir nükleik asit dizisine bagli bulunan bir nükleik asit probu olabilir. miR-124-3 öncülünün bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için uygun bir nükleik asit probu, örnegin, SEQ ID NO: 66 ila SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO 86 ve SEO ID NO 87'den olusan gruptan seçilen bir nükleik asit dizisine bagli bulunan bir nükleik asit probu olabilir.

Bir olgun miR-124'ün bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için uygun bir nükleik asit probu, örnegin, SEQ ID NO 86 ve SEQ ID NO 87'den olusan gruptan seçilen bir nükleik asit dizisine bagli bulunan bir nükleik asit probu olabilir.

Kuinolin türevleri enfeksiyonun tedavisi için etkili kuinolin türevleri olabilir. Özellikle, bulus için faydali kuinolin türevleri, asagidaki genel formül (l) tarafindan temsil edilebilen kuinolin türevleri: veya bunlarin farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu olup, - n, 1 veya 2'dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (01-03) alkil grubu; R1 ve R2`nin bagimsiz olarak bir hidrojen atomu veya bir (C1-C3) alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; bir (Ci-Cs) floroalkoksi grubu; bir -N02 grubu; bir fenoksi grubu; ve bir (C1-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (C1-C4) alkil grubu ve bir (Ci- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R", bir hidrojen atomu veya bir (C1-C4) alkil grubudur.

Bir uygulamaya göre, R' ve R”, tercihen bir hidrojen atomudur.

Bir baska uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, R'nin bagimsiz olarak bir halojen atomunu veya bir (C1-C3) alkil grubu; R1 ve Rz'nin bagimsiz olarak bir hidrojen atomu veya bir (C1-C3) alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; bir (C1-C3) floroalkoksi grubu; ve bir (C1-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil ettigi formül (I)'e ait olabilir.

Bir baska uygulamaya göre, R, bagimsiz olarak, bir flor veya bir klor atomunu veya metil veya etil grubu, bir -NH2 grubu, bir metoksi veya etoksi grubu ve bir (C1-Cs) floroalkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil eder.

Bir baska uygulamaya göre, n, tercihen 1`dir.

Tercih edilen bir uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, n'nin 1, R'nin bir (Cl-C3) floroalkoksi grubu ve R' ile R"'in her birinin bir hidrojen atomu oldugu formül (I)'e ait olabilir.

Tercih edilen bir uygulamaya göre, R, bir metoksi, bir etoksi veya en az bir flor atomuyla substitüe edilmis bir propoksi grubudur. Tercihen, R, bir mono, bi veya triflorometoksi grubudur.

Alternatif olarak, bulus için faydali kuinolin türevleri, formül (II)'nin bir kuinolin türeviyle temsil edilebilen kuinolin türevleri: veya bunlarin farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu olup, - n, 1 veya 2'dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (C1-C3) alkil grubu; bir -CN grubu; bir hidroksil grubu; bir -COOR1 grubu; bir (C1-Cg)flor0alkil grubu; bir -NOz grubu; R1 ve R2'nin bir hidrojen atomu veya bir (C1-Ca)alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; ve bir (C1-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (C1-C4) alkil grubu ve bir (C1- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R", bir hidrojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubudur.

Bir uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, R' ve R'"nin tercihen bir hidrojen atomu oldugu formül (II)'ye aittir.

Bir baska uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, R'nin, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (C1-C3) alkil grubu, bir (01-03) floroalkil grubu, bir hidroksil grubu, bir - CN grubu, bir -COOH grubu ve bir (C1- C3)alkoksi grubu arsindan seçilen bir grubu temsil ettigi formül (II)'ye ait olabilir.

Bir baska uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, R'nin, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu, bir -CN grubunu, bir (01-03) alkil grubunu, bir (01-03) floroalkil grubunu ve bir hidroksil grubunu temsil ettigi formül (ll)'ye ait olabilir. Bir baska uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, R'nin, bagimsiz olarak, bir (Ci-Ca) floroalkil grubunu temsil ettigi formül (II)'ye ait olabilir.

Bir baska uygulamaya göre, n, tercihen 1`dir.

Tercih edilen bir uygulamaya göre, bulus için uygun bir kuinolin türevi, n'nin 1, R'nin bir (Ci-Cs) floroalkil grubu ve R' ile R'"in her birinin bir hidrojen atomu oldugu formül (II)'ye ait olabilir.

Böylelikle, söz konusu uygulamaya göre, bir kuinolin türevi asagidaki formülle temsil edilebilir:F F Bir uygulamaya göre, bulus Için faydali bir kuinolin türevi veya bunun bir tuzu, asagidakilerden olusan bir gruptan seçilebilir:r"l`T/FO` ,lâ (fl-"%5" l'- "fiit-bis #It-n` _fj'\_` =U,L`\..J i# fjl l C 3 ci /ßîs F4." ç_{\\| F i) 7 H :i: V Bulusun bir kuinolin türevinin ve daha özellikle bulusa göre genel formül (I) veya (II)'ye sahip bir bilesigin farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu, bir alkali metalin, bir alkalin toprak metalinin veya bir amonyumun genel formül (l) veya (Il)'sine sahip, organik amonyum bazlariyla elde edilen tuzlari veya genel formül (I) veya (II)'ye sahip bir bilesigin ve organik veya inorganik asidin tuzlarini içeren bir tuz olabilir.

Bulus için daha özellikle uygun olan tuzlar, sodyum, potasyum, kalsiyum, magnezyum tuzlari, tetrametilamonyum veya tetraetilamonyum gibi dördüncül amonyum tuzlari ve amonyak ve metilamin, dimetilamin, trimetilamin, etilamin, trietilamin, etanolamin ve tris(2-hidroksietil)amin gibi farmasötik olarak kabul edilen organik amin ilaveli tuzlar olabilir.

Bulusun bir kuinolin türevinin ve daha özellikle genel formül (I) veya (II)'ye sahip bir bilesigin ve bulus için uygun inorganik asidin tuzlari, hidroklorik asit, hidrobromik asit, sülfürik asit, nitrik asit veya fosforik asitle elde edilebilir.

Bulusun bir kuinolin türevinin ve daha özellikle genel formül (I) veya (II)'ye sahip bir bilesigin ve bulus için uygun organik asidin tuzlari, formik asit, asetik asit, oksalik asit, sitrik asit, Iaktik asit, malik asit, süksinik asit, malonik asit, benzoik asit, maleik asit, fümarik asit, tartarik asit, metansülfonik asit, benzensülfonik asit veya p-tolüensülfonik asit gibi karboksilik asitlerle ve sülfonik asitlerle elde edilebilir.

Tercih edilen bir uygulamaya göre, bulus için faydali kuinolin türevi, asagidaki formülle temsil edilebilen 8-kl0ro-N-[4-(triflorometoksi)feniI]kuinolin-2-amin'dir: hazirlanabilir.

Tedavi, bir kuinolin türevinin oral veya parenteral verilisi olabilir. Uygun verilis modlari Herhangi bir verilis yolu kullanilabilir. Örnegin, bir kuinolin türevi oral, parenteral, intravenöz, transdermal, intramusküler, rektal, sublingual, mukozal, nazal veya diger araçlarla verilebilir. Ek olarak, bir kuinolin türevi, bir farmasötik bilesim ve/veya birim dozaj formu biçiminde verilebilir.

Uygun dozaj formlarina, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, kapsüller, (hizli çözünme ve gecikmeli salim tabletleri dahil olmak üzere) tabletler, toz, suruplar, parenteral verilis için oral süspansiyonlar ve solüsyonlar dahildir.

Burada saglanan örnekler yalnizca emsal amaçlidir ve teknikte uzman kisiler, spesifik bilesiklerin, materyallerin ve prosedürlerin sayisiz esdegerlerini fark edecek veya rutin deneylerden fazlasini kullanmadan tespit edebilecektir. Tüm bu tip esdegerler, bulusun kapsami dahilinde kabul edilmektedir ve ekli istemler tarafindan kapsanmaktadir. ÖRNEKLER miRNA'Iarin ekspresyonunun 8-kloro-N-[4-(triflorometoksi)fenIIJkuinoIin-Z-amin ile modülasyonu Materyaller & Yöntemler Kuinolin türevi, 8-kloro-N-[4-(triflorometoksi)fenil]kuinolin-2-amin tarafindan HIV-1 inhibisyonu baglaminda, tedavinin konak miRNA'larin ekspresyonunu modüle edip edemedigi çalisildi.

Bu amaçla, bes saglikli donörün periferik kan tek çekirdekli hücreleri (PBMC'Ier), bir FICOLL gradyani üzerinde santrifüjlemeyle izole edildi. Hücreler daha sonra 37°C'de, U/mL IL2 (Peprotech Ref ile hücre/mL`lik bir yogunluga gelistirildi. Üç gün sonra, hücreler havuzlandi ve %10 fötal sigir serumu (FCS), 1000 U/mL lL-2 ile tamamlanmis RPMI Glutamax vasati içinde 1x106 hücre/mL”Iik bir yogunluga yeniden süspanse edildi ve 1,2 mL/göz (durum basina 4 göz) olacak sekilde 12 gözlü plakalar (Falcon Ref 353043) dagitildi.

HIV-1 enfeksiyonu 1 ng Ada-M R5 HIV sus/göz ile gerçeklestirildi. Hücreler 6 gün süreyle fenil]kuinolin-2-amin solüsyonu ile veya %O,12 DMSO (negatif kontrol olarak Sigma Ref D4818) ile muamele Hücreler daha sonra durumlar olarak havuzlandi, santrifüjlendi ve peletler Qiagen (Qiagen Ref 217004) firmasindan miRNeasy kit ekstraksiyonu için 700 uL Qiazol lizis tamponu (Qiagen Ref 217004) içinde yeniden süspanse edildi. RNA'Iar üreticinin talimatlarina göre ekstrakte edildi. Ekstrakte edilen RNA”Iarin kalitesi ve miktari Agilent Bioanalyzer 2100 ve Nanodrop spektrofotometri ND-1000 kullanilarak kontrol edildi.

Ortalama RIN degeri 8,84 oldu (7,2 ila 9,7 arasinda). Numune basina 90 ng”lik bir toplam RNA miktari FIashTagTM Biotin HSR RNA Etiketleme Kiti (901911) kullanilarak etiketlendi ve gece boyunca Affymetrix Genechip miRNA Dizilimi 2.0.'a (901753) hibritlendi Dizilimler yikandi ve standart Affymetrix protokolü kullanilarak boyandi ve Affymetrix Tarayici kullanilarak tarandi. Kalite kontrolleri Affymetrix firmasindan Expression Console (sürüm 1.2) ölçü birimleri kullanilarak gerçeklestirildi.

Veriler Expression Console “RMA+DABG” normallestirme yöntemi kullanilarak normallestirildi ve bir miRNA, karsilik gelen DABG P-Degeri 0,05'ten az veya buna esitse eksprese edilmis olarak kabul edildi. Bir miRNA bir durumda, miRNA bu durumun donörlerinin PBMC'Ierinin en az %75'Inde eksprese edilmisse eksprese edilmis olarak kabul edildi. Kat-degisimi 1,5'tan büyük veya buna esitse ve T-Testi P- Degeri 0,05'ten az veya buna esitse iki kosul arasinda farksal olarak eksprese edilmis olarak kabul edilmis olan eksprese edilmis miRNA'Iar üzerinde bir eslestirilmis Student t-testi uygulandi.

Sonuçlar Enfekte olmus ve enfekte-olmamis hücreler arasinda miRNA ekspresyonunun karsilastirilmasi, HIV-1 enfeksiyonundan kaynaklanan çoklu modifikasyonu (yukari veya asagi-regülasyon) vurguladi. Özellikle, miRNA-124'ün HIV enfekte PBMC'lerde asagi-regüle edilmis oldugu gözlemlendi.

Bunun aksine, 8-kl0r0-N-[4-(triflorometoksi)fenil]kuinolin-2-amin tedavili veya tedavi edilmemis HIV enfekte PBMCIer arasindaki karsilastirma, ekspresyonu tedavi altinda güvenli olarak artmis (yaklasik 13 kat) olan yalnizca bir miRNA'yi, miR-124'ü vurguladi.

Dolayisiyla, miR-124, bulusa göre kuinolin türevlerinin, özellikle 8-klor0-N-[4- (triflorometoksi)fenil]kuinolin-2-aminin AlDS hastasinda anti-viral ilaçlar olarak etkililigini izlemek için ilgili bir biyobelirteç olarak onaylandi.

Kuinolin türevlerinin miR-124 3p ekspresyonu üzerindeki etki/iliginin degerlendirilmesi.

HIV-1 enfeksiyonu baglaminda mi-RNA ekspresyonunun bir tayini saglayan Örnek 1'e ek olarak, Örnek 2, HIV-1 yoklugunda miR-124 ekspresyonunun varyasyonunu tayin eder. Tarama yöntemi, kuinolin türevlerinin bir kümesinin ve Maraviroc, Efavirenz, Darunavir ve azidotimidin (AZT) gibi bilinen antiretroviral ilaçlarin degerlendirilmesi için test edildi.

Materyaller & Yöntemler Bir FICOLL TM gradyani kullanilarak PBMC ekstraksiyonu Bu amaçla, dört saglikli donörün Periferik kan tek çekirdekli hücreleri (PBMCiler), standart protokollere göre bir FICOLLTM gradyani üzerinde santrifüjlemeyle izole edildi.

Kisaca, 60-70 mL beyaz kan hücrelerinin bir tabakasi 175 cmz'lik bir siseye dökülür ve beyaz kan hücrelerinin bir tabakasinin yaklasik 5-kati bir seyrelti elde etmek amaciyla PBS kullanilarak hacim 300 mL'ye ayarlanir. 38 mL seyreltilmis Buffy daha sonra ortam sicakliginda 12 mL FICOLLTM (Histopack-1077) içeren 50 mL'Iik FalconT'V' tüplerine eklenir. Preparasyon 30 dakika süreyle 1600 rpm'de (:515 rcf) ortam sicakliginda santrifüjlenir. Lenfosit halkasi, FalconTM tüpünden bir transfer pipetiyle (Pastette®) geri alinir ve daha sonra 10 dakika süreyle 1200 rpm'de (= 290 rcf) ve ortam sicakliginda süzüntü berrak hale gelene kadar santrifüjleme kullanilarak PBS ile yikanir.

Hücreler daha sonra 37°C'de, %10 fötal sigir serumu (FCS) (Thermo Fischer Ref SV30160.03) ile tamamlanmis ve aktivasyon olmadan RPMI Glutamax vasati (Life süspanse edilir. Hücreler 48 saat süreyle 37°C'de %5 C02 altinda inkübe edilir.

Hücrelerin taranmis moleküller/e tedavisi Tarama için alti-gözlü plakalar kullanilir. %10 fötal sigir serumu ve 40 U/mL IL-2 içine taranmis moleküller eklenir. Göze % eklenir ve bir negatif kontrol olarak test edilir.

Her bir test edilen durum burada asagida tarif edildigi üzere kurulur ve nihai karsilik gelen hacim buna göre gözde ayarlanir: 1) Kuinolin türevleri : %100 DMSO içinde (8-klor0-N-[4- (triflorometoksi)fenil]kuinolin-2-amin ve 8-kloro-N-[4-(trifl0rometil)piridin-2-il]kuinolin- 2-amin - Sirasiyla bilesikler 1 ve 8) %100 DMSO içinde - (5 uM ve nihai hacim 0,4uL): C] « Bilesik 1 » (5 uNI) ci « Bilesik 8 » (5 HM) 2) Diger antiretroviral ilaçlar: Maraviroc, Efavii'enz, Darunavir, AZT (tümü için 10 HM - nihai hacim 0,8iJL).

Gözler, üç gün süreyle 37°Cide %5 CO2 altinda inkübe edilir. Vasat, standart protokollere göre degistirilir (Gün 3). Kisaca, plakalar 1200 rpm'de 5 dakika süreyle santrifüjlenir ve 3 mL süzüntü çikarilir. %10 fötal sigir serumu ve 40 UImL IL-2 ile tamamlanmis 3 mL RPMI daha sonra, bir negatif kontrol olarak %100 DMSO içinde 50 mM'de veya %100 DMSO'nun 0,6 uL”sinde taranan molekülün bir stok solüsyonunun eklenir. miRNA'Iarin ekstraksiyonu (Gün 6) Hücreler, 15 mL'Iik FalconT'V' tüpleri içerisinde geri kazanilir, 1200 rpm'de 5 dakika süreyle santrifüjlenir ve daha sonra 10 mL PBS içinde yikanir ve 1200 rpm'de 5 dakika süreyle yeniden santrifüjlenir. Hücreler daha sonra 1 mL PBS içinde yeniden süspanse edilir ve sayilir. 6x106 hücre geri kazanilir ve 1200 rpm'de 5 dakika süreyle santrifüjlenir. Hücre peleti Macherey Nagel Nucleospin® miRNA ekstraksiyon kitinden (Macherey Nagel Ref Spayk-içeri kontrolün (QIAGEN© firmasindan Ce_miR-39 - referans 219610, dizi 5' UCACCGGGUGUAAAUCAGCUUG 3') 2x108 kopya/uL'sinin 5 pL”si her bir numune için eklenir. miRNA ekstraksiyonu, RNA'Iar için 50 pL'Iik ve miRNA'Iar için 30 pL'Iik bir elüsyon hacmi kullanilarak Macherey Nagel Nucleospin® miRNA ekstraksiyon kitindeki protokol kullanilarak gerçeklestirilir ve -20°C”de depolanir. miRNA'Iarin ters transkripsiyonu (Gün 6) Ters transkripsiyon adimi 12 pL miRNA için miScript HiSpec tamponu kullanilarak QIAGEN© firmasindan miScript RT Il ters transkripsiyon (RT) kiti kullanilarak izlenir ve - °C'de depolanir. miRNA'Iarin kantitatif PCR'si (Gün 6) Kantitatif PCR adimi, QIAGEN© miScript SYBR® Green PCR kiti ve miScript Primer Tayinleri kullanilarak üreticinin protokolüne göre gerçeklestirilir. 384-gözlü plakalar için miScript reaksiyon karisimi bilesimi: Karisim iJL/reaksiyon 2X SYBR® Green karisimi 5 10X Evrensel Primer 1 10X Primer tayini 1 Toglam Karisim hacmi: 9 H20 icinde sablon cDNA (*) 1 Nihai hacim: 10 (*) miScript II RT kiti kullanilarak hazirlanan cDNA Reaksiyon, üç kopya halinde 384-gözlü bir plakada üreticinin protokolüne göre bir LightCycIer® 380 Roche Gerçek-Zamanli PCR sisteminde tekrarlanir. Döngü kosullari da üreticinin protokolüne göre kurulur: Ilk aktivasyon adim S-adim dönqü: 15 dakika 95°C Denatürasyon 15 s 94°C Tavlama 30 s 55°C Yayilma 30 s 70°C Adim üre Sicaklik Döngü sayisi 40 döngü qPCR'nin Bagil ve Mutlak miktar tayini Teknikte bilinen tekniklerdir ve asagida daha ayrintili olarak tarif edildigi sekilde gerçeklestirilebilir. 1) Bagil miktar tayini miR- için H20'da 1/10. veya referans/temel gen qPCR Hs_miR-26a ve Hs_miR-191) kullanilarak bir seyreltiden.

Analiz, miR-124'ün üç kopyasindan kesisme noktalarinin (Cp) degerlerinin ortalamasi ve miR-26a ve miR-191'im üç kopyasinin ortalamasinin ortalamasi kullanilarak etkililik düzeltimi (Z'MCp) olmadan bagil miktar tayini modelleri kullanilarak elde edilir. 2) Mutlak miktar tayini miR- için H20'da 1/10. bir seyreltiden. Kalibrasyon egrileri standart protokollere göre elde edilir. Analiz, miR-124 üç kopyasinin ortalamasinin, miR-39 üç kopyasinin ortalamasiyla normallestirilmesiyle ve hücrelerin sayisiyla daha da normallestirilmesiyle elde edilir.

Sonuçlar Sonuçlar, tüm moleküller için Bagil ve Mutlak miktar tayini arasinda iyi anlasma göstermektedir. DMSO kontrol numuneleri, 1'Iik bir kat-degisimine sahiptir ve bu da miR-124a ekspresyonunda hiç varyasyon olmadigi anlamina gelmektedir. Test edilen tüm kuinolin türevleri, miR-124`ün, miR-124'ün ekspresyonunun on-katlik bir artisina karsilik gelen bir modülasyonunu göstermektedir.

Buna nazaran, diger antiretroviral ilaçlar, miR-124”ün ekspresyonunun kayda deger modülasyonunu indüklemez.

Böylelikle, bu Örnek, miR-124'ün, bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya asi adayinin taranmasi için uygun bir biyobelirteç oldugunu göstermektedir. Bu ayrica. bulusun bir kuinolin türevinin aktivitesinin tayin edilmesi için de faydalidir.

Claims (1)

1. ISTEMLER . Bir viral enfeksiyonun veya söz konusu viral enfeksiyonun bir terapötik tedavisinin bir etkililiginin bir biyobelirteci olarak. söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir in vitro veya ex vivo kullanimidir. . Istem 1'e göre kullanim olup, özelligi söz konusu miR-124'ün bir izole biyolojik numune içine ekspresyonunun ölçülen bir seviyesinin bir kontrol referans degeri ile karsilastirilmasidir ve burada söz konusu kontrol referans degeriyle ilgili söz konusu ölçülen seviye bir viral enfeksiyonun veya söz konusu viral enfeksiyonun bir terapötik tedavisinin bir etkililiginin göstergesidir. . istem lie göre kullanim olup, özelligi söz konusu viral enfeksiyonun bir terapötik tedavisinin etkililiginin, bir proteinin veya bir hücrenin fizyolojik aktivitesini degistirmek için, bir aday bilesigin biyolojik etkisinin tayin edilmesiyle belirlenmesidir. . Bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya asi adayinin, özellikle bir kuinolin türevinin taranmasi için, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin bir biyobelirteç olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimidir. . Önceki istemler 3 veya 4'e göre kullanim olup, özelligi söz konusu miR-124”ün söz konusu aday varliginda izole bir biyolojik numunenin içine ekspresyonunun ölçülen bir seviyesinin bir kontrol referans degeri ile karsilastirilmasidir ve burada söz konusu kontrol referans degerine nazaran söz konusu ölçülen seviyenin bir modülasyonu söz konusu adayin biyolojik etkisinin, özellikle söz konusu ilaç adayinin veya asi adayinin, bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesindeki etkililiginin göstergesidir. . Istemler 2 veya 5'e göre kullanim olup, özelligi söz konusu biyolojik numunenin, bir biyolojik doku numunesinden, bir tam kan numunesinden, bir sürüntü numunesinden, bir plazma numunesinden, bir serum numunesinden, bir tükürük numunesinden, bir vajinal sivi numunesinden, bir sperm numunesinden, bir farinjiyal sivi numunesinden, bir bronsiyal sivi numunesinden, bir fekal sivi numunesinden, bir beyin-omurilik sivisi numunesinden, bir Iakrimal sivi numunesinden ve bir doku kültürü süzüntüsü numunesinden olusan bir gruptan seçilmesidir. . Istemler 3 ila 6”ya göre kullanim olup, özelligi söz konusu ilaç adayi veya asi adayinin formül (l)'in bir kuinolin türevi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu olmasidir, - n 1 veya ?dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (01-03) alkil grubu; R1 ve Rz'nin bagimsiz olarak bir hidrojen atomu veya bir (01-03) alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu; bir (C1-C3) floroalkoksi grubu; bir -NOz grubu; bir fenoksi grubu ve bir (C1-C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (01-04) alkil grubu ve bir (C1- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R" bir hidrojen atomu veya bir (Ci-C4) alkil grubudur. . Istemler 3 ila 6'ya göre kullanim olup, özelligi söz konusu ilaç adayi veya asi adayinin formül (II)`in bir kuinolin türevi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilen bir tuzu olmasidir, - n 1 veya 2'dir ve R, bagimsiz olarak, bir hidrojen atomunu, bir halojen atomunu veya bir (Ci-Ca) alkil grubu; bir -CN grubu; bir hidroksil grubu; bir - COOR1 grubu; bir (C1-C3)flor0alkil grubu; bir -N02 grubu; R1 ve R2`nin bir hidrojen atomu veya bir (Ci-Ca)alkil grubu oldugu bir -NR1R2 grubu ve bir (01- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir grubu temsil etmektedir, - R', bir hidrojen atomu, bir halojen atomu veya bir (C1'C4) alkil grubu ve bir (01- C4) alkoksi grubu arasindan seçilen bir gruptur, - R" bir hidrojen atomu veya bir (C1-C4) alkil grubudur. Söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin, bir kuinolin türevinin veya bunun farmasötik olarak kabul edilen tuzlarindan birinin bir viral enfeksiyon üzerindeki bir aktivitesinin bir biyobelirteci olarak bir in vitro veya ex vivo kullanimidir. Istem 9'a göre kullanim olup, özelligi söz konusu kuinolin türevinin istem ?ide tanimlandigi üzere formül (I)'e veya istem 8'de tanimlandigi üzere formül (Il)'ye ait olmasi veya bunun farmasötik olarak kabul edilen tuzlarindan biri, örnegin 8- kloro-N-[4-(trifl0r0metoksi)fenil]kuinolin-2-amin veya 8-kl0r0-N-[4- (triflorometil)piridin-2-il]kuinolin-2-amin olmasidir. Istemler 9 veya 10'un herhangi birine göre kullanim olup, özelligi bir izole biyolojik numune içine ölçülen ekspresyon seviyesinin bir kontrol referans degeriyle karsilastirilmasidir ve burada söz konusu kontrol referans degerine nazaran söz konusu ölçülen seviyenin bir artisi, söz konusu kuinolin türevinin bir aktivitesinin göstergesidir. Bir virüsle enfekte oldugu farz edilen bir hastadaki bir viral enfeksiyonun tayin edilmesi için, en azindan asagidaki adimlari içeren bir in vitro veya ex vi'vo yöntemdir: a- söz konusu hastadan önceden elde edilmis olan bir biyolojik numunede, söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA`nin bir varliginin veya bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve b- söz konusu varligin veya ekspresyon seviyesinin bir kontrol referansi degeri ile karsilastirilmasi, burada söz konusu miRNA'nin bir söz konusu kontrol referans degerine nazaran bir modüle varligi veya ekspresyon seviyesi bir viral enfeksiyonun göstergesidir. Istemler 9 veya 10'un herhangi birine göre bir kuinolin türevinin, söz konusu kuinolin türeviyle tedavi edilen bir hastadaki viral enfeksiyonun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için bir aktivitesinin tayin edilmesinin bir in vitro veya ex vivo yöntemi olup, özelligi en azindan asagidaki adimlari içermesidir: a- söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'nin, söz konusu kuinolin türevinin verilmesinden önce söz konusu hastadan önceden elde edilen bir birinci biyolojik numunedeki ve söz konusu kuinolin türevi verildikten sonra söz konusu hastadan önceden elde edilen bir ikinci biyolojik numunedeki bir varliginin veya bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesi ve b- söz konusu varligin veya ekspresyon seviyesinin tedaviden sonra elde edilen ikinci biyolojik numunede, tedaviden önce elde edilen ikinci biyolojik numuneye kiyasla modüle edilip edilmediginin belirlenmesi; burada söz konusu miRNA'nin bir modüle edilmis varligi veya ekspresyon seviyesi, söz konusu kuinolin türevinin bir aktivitesinin göstergesidir. Bir viral enfeksiyonun engellenmesinde ve/veya tedavi edilmesinde etkili oldugu farz edilen bir ilaç adayinin veya asi adayinin taranmasi için bir in vitro veya ex vivo yöntemi olup, özelligi en azindan asagidaki adimlari içermesidir: a- söz konusu en az bir adet miRNA'nin miR-124 oldugu sekilde en az bir adet miRNA'yi eksprese edebilen en az bir adet izole hücrenin söz konusu adayla tedavi edilmesi, söz konusu hücre en az bir adet miRNA'nin eksprese edilmesi için uygun kosullar altindadir, b- söz konusu en az bir adet miRNAlnin bir varliginin veya ekspresyon seviyesinin ölçülmesi, c- söz konusu ölçülen varligin veya ekspresyon seviyesinin, söz konusu en az bir adet miRNA'nin tedavi edilmemis bir izole hücredeki bir ölçümüyle veya ekspresyon seviyesiyle karsilastirilmasi, burada söz konusu miRNA'nin bir modüle varligi veya ekspresyon seviyesi, söz konusu ilaç adayinin veya asi adayinin bir viral enfeksiyon üzerindeki etkililiginin göstergesidir. miR-124'e spesifik olarak melezlesebilen bir izole nükleik asit probunun, bir viral enfeksiyonun teshis edilmesi için veya bir viral enfeksiyonun engellenmesi ve/veya tedavi edilmesi için bir ilaç adayinin veya asi adayinin bir aktivitesinin tayin edilmesi için miR-124'ün bir varliginin veya bir ekspresyon seviyesinin ölçülmesi için bir tanisal ajan olarak bir in vitro veya ex vi'vo kullanimidir. Istem 15'e göre kullanim olup, özelligi söz konusu nükleik asit probunun, SEQ dizisinden olusmasidir.