TR201816253T4 - Faktör VIII terapisi almakta olan bireylerde faktör VIII'e karşı immünojenisiteyi azaltmanın yöntemleri. - Google Patents

Faktör VIII terapisi almakta olan bireylerde faktör VIII'e karşı immünojenisiteyi azaltmanın yöntemleri. Download PDF

Info

Publication number
TR201816253T4
TR201816253T4 TR2018/16253T TR201816253T TR201816253T4 TR 201816253 T4 TR201816253 T4 TR 201816253T4 TR 2018/16253 T TR2018/16253 T TR 2018/16253T TR 201816253 T TR201816253 T TR 201816253T TR 201816253 T4 TR201816253 T4 TR 201816253T4
Authority
TR
Turkey
Prior art keywords
fviii
subject
chimeric polypeptide
polypeptide
factor viii
Prior art date
Application number
TR2018/16253T
Other languages
English (en)
Inventor
Jiang Haiyan
Liu Tongyao
krishnamoorthy Sriram
Josephson Neil
Glenn Pierce
Original Assignee
Bioverativ Therapeutics Inc
Puget Sound Blood Center
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Bioverativ Therapeutics Inc, Puget Sound Blood Center filed Critical Bioverativ Therapeutics Inc
Publication of TR201816253T4 publication Critical patent/TR201816253T4/tr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/36—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • A61K38/37—Factors VIII
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0008—Antigens related to auto-immune diseases; Preparations to induce self-tolerance
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6811—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a protein or peptide, e.g. transferrin or bleomycin
    • A61K47/6815—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/02—Stomatological preparations, e.g. drugs for caries, aphtae, periodontitis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/745—Blood coagulation or fibrinolysis factors
    • C07K14/755—Factors VIII, e.g. factor VIII C (AHF), factor VIII Ag (VWF)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6056—Antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

Mevcut açıklama, anti-FVIII antikorlarını ve/veya hücre-aracılı immüniteyi içeren inhibitör FVIII immün yanıtlarını geliştirmeye yönelik risk altında olan süjelere FVIII'i ve Fc'yi içeren kimerik ve hibrit Faktör VIII (FVIII) polipeptitlerini uygulamanın yöntemlerini sağlar. Uygulama, koagülasyonu teşvik etmek ve FVIII'e immün toleransı indüklemek için yeterlidir. Kimerik polipeptit, tam-boy FVIII'i veya bir silinme, örneğin, B alanının bir tam veya parsiyel silinmesini, içeren bir FVIII polipeptidini içerebilir.

Description

TARIFNAME FAKTÖR VIII TERAPISI ALMAKTA OLAN BIREYLERDE FAKTÖR VIII'E KARSI IMMÜNOJENISITEYI AZALTMANIN YÖNTEMLERI Bulusun Sahasi Mevcut açiklama genel olarak, hemostatik bozukluklar için terapötikler alani ile ilgilidir.
Teknigin Alt Yapisi Hemofili A, Faktör VIII (FVIII) geninde, bir FVIII aktivitesi eksikligi ile sonuçlanan, mutasyonlardan ve/veya silinmelerden kaynaklanan bir X'e bagli kanama bozuklugudur (Peyvandi, F. et al., Haemophilia l2:82-89 (2006). Hastalik, travmadan sonra spontan hemoraj ve asiri kanama ile karakterize edilir.
Zamanla, siklikla erken çocukluk döneminde baslayan kaslarin ve eklemlerin içine tekrarli kanama hemofilik artropati ve geri-dönüsümsüz eklem hasari ile sonuçlanir. Bu hasar progresiftir ve eklemlerin siddetli bir sekilde sinirli mobilitesine, kas atrofisine ve kronik agriya yol açabilir (Rodriguez-Merchan, E.C., Semin. Thromb. Hemost. 29:87-96 (2003)).
A2 alani Faktör VIII nwlekülünün prokoagülan aktivitesi için gereklidir. Çalismalar, domuz FVIII'inin insan FVIII'ine kiyasla alti-kat daha büyük prokoagülan aktiviteye sahip (1991)) ve koagülan aktivitede insan ve domuz FVIII'i arasindaki farkliligin insan ve domuz A2 alanlarindaki bir veya birden fazla rezidü arasinda amino asit dizisindeki bir farkliliga dayandiginin görüldügünü (Lollar, P., et al., J.
Hemofili A'nin tedavisi, spontan kanamayi önlemek için FVIII aktivitesinin normal düzeylerin %l'i ila %5'ine restorasyonunu hedef alan replasman terapisi iledir, örnegin, (Mannucci, P.M.
Plazma-kaynakli FVIII (pdFVIII) ve rekombinant insan FVIII'i (rFVIII) ürünlerinden kanama epizodlarinin tedavisi (talep- edildiginde alinan terapi) ve önlenmesi (profilaksi terapisi) için yararlanilir. rFVIII, plazma ürünlerinin HIV ve hepatit virüsleri ile yaygin kontaminasyonunu takiben kan-kaynakli patojen bulasmaya yönelik riski azaltmak için ve FVIII ürününün bir yeterli tedarikini güvenceye almak için gelistirilmistir. Bununla birlikte, güncel FVIII ürünleri ile hemostatik koruma, yaklasik olarak 8-12 saatlik bir kisa yari ömür (tu2) nedeniyle geçici olarak sinirlandirilir, bu FVIII düzeylerini çogu spontan kanama epizodlarina karsi koruyucu olarak belirlenmis bir düzey olan %1'in üstünde idame ettirmek amaciyla çogu hasta için haftada üç kere veya iki günde bir profilaktik enjeksiyonlar gereklidir. Manco-Johnson et al., Çok sayida çalisma, yüksek dozlarda bile, talep-edildiginde alinan terapinin artropatiyi önlemede etkili olmadigini göstermistir. Aledort L. et al., J Intern Med. 236z391-399 (1994); Petrini P. et al., Am J Pediatr HemAtol Oncol. 13:280- 287 (1991). Profilaktik terapinin yararlari, çok sayida klinik çalismada gösterilmistir. Aznar J. et al., Haemophilia 752 (2008), Van Den Berg H. et al., Haemophilia 9 (Suppl. 1):27-31 (2003), Van Den Berg H. et al., Haematologica ilk eklem kanamasindan sonra primer profilaksiye baslatilmis olan çocuklarin talep-edildiginde tedavi edilen çocuklara kiyasla anlamli olarak daha az kanamaya ve daha az eklem hasarina sahip oldugunu belirlemistir.
Talep-edildiginde alinan terapiye kiyasla, profilaktik terapi ayrica, engelliligi, hastaneye yatis oranini ve okuldan veya isten kaybedilen zamani da azaltir; Aznar J. et al., kalitesini de iyilestirir. Coppola A. ve ar., Blood Transfus. 6(2): 4-11 (2008). Bununla birlikte, profilaktik terapi siklikla, çocuklarda santral venöz erisini cihazi kullanimini ve bunlarin beraberin gelen enfeksiyon, sepsis ve tromboz risklerini gerektirir. Buna ek olarak, yararlarina ragmen, profilaksinin kabulü ve profilaksiye uyum, kismen zahmetinden ve invazivliginden dolayi, yas ile azalir. Geraghty S. et al., sahip olan bir rFVIII ürünü potansiyel olarak yararli olacaktir. Lillicrap D., Current Opinion in HemAtology 17:393- 397 (2010).
Azaltilmis mortaliye, eklem. hasarinin önlenmesi ve iyilestirilmis yasam kalitesi, pdFVIII'in ve rFVIII'in gelistirilmesinden dolayi önemli basarilar olmustur. Kanamadan uzatilmis süreli koruma, hemofili A hastalarinin tedavisine bir baska kilit ilerlemeyi temsil edecektir. Bununla birlikte, günümüze kadar, uzatilmis hemostatik korumaya olanak saglayan herhangi bir ürün gelistirilmemistir. Bundan dolayi, FVIII eksikliginden kaynaklanan hemofiliyi tedavi etmenin güncel terapilere kiyasla daha çok tolere edilebilen, daha uzun süre etki eden ve daha etkili olan iyilestirilmis yöntemlerine yönelik bir ihtiyaç hala vardir.
Buna ek olarak, önceden tedavi edilmemis hastalarin %l5-30'u, FVIII ürünleri ile transfüzyondan sonra nötralize etme anti- FVIII antikorlari (inhibitörler) gelistirir. Bu tarz immün yanitlardan kaçinmak için çesitli teknikler düsünülmüstür. Bu teknikler, yüksek-doz toleransli protokolleri, anti-FVIII antikorunu taklit eden peptit sahtelerinin kullanimini, insan/domuz FVIII hibrit molekülleri ile immün tanimaya ugramadan geçmeyi, FVIII-reaktif CD4 T-hücrelerini antiklonotipik antikorlar ile nötralize etmeyi, evrensel CD4 epitoplari kullanmayi ve CTLA-4-Ig'sinin veya anti-CD4OL'nin birlikte-stimülasyonunu bloke etmeyi içerir. Bakiniz, Örnegin, Toleransi indüklemek amaciyla FVIII'in immün hücreleri tarafindan sunumu da çalisilmistir. Örnegin, Lei et al., B hücrelerinde bir Ig omurgasi üzerinde FVIII alanlarinin sunulmasinin antikorlari önledigini veya azalttigini bulmustur. Id. Buna ek olarak, Qadura et al., immatür dentritik hücreler kullanilarak FVIII'in tolerojenik sunumunun immünojenisiteyi azaltabildigini bulmustur. Journal of birlikte, bu tarz yöntemler maliyetlidir, (örnegin, FVIII ile kombinasyon halinde baska terapötiklerin birlikte- uygulanmasini veya görece basit proteinlerin yerine bütün halindeki hücrelerin uygulanmasini gerektirme ile) karmasiktir, büyük olasilikla istenmeyen yan-etkiler ile faktörü-FC kimerik polipeptitler ile tedavi edilen hastalarin inhibitör antikorlar gelistirmeye yönelik azalmis riske sahip oldugunu açiklar. Bu dogrultuda, FVIII eksikliginden kaynaklanan hemofiliyi tedavi etmenin inhibitör yanitlar gelistiren hastalarda. etkili. olan basit yöntemlerine yönelik bir ihtiyaç hala vardir.
KISA AÇIKLAMA Bulus istemlerde tanimlandigi sekildedir. Mevcut açiklama, immün toleransi iyilestiren Faktör VIII'i (FVIII'i) uygulamanin yöntemlerini saglar. Yöntemler, bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidi (rFVIIIFc) bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süjeye uygulamayi içerir. Bazi uygulamalarda, FVIII kismindan olusan bir polipeptidin bir es-deger dozu uygulandiginda, süje bir inhibitör immün yanit gelistirecektir. Bazi uygulamalarda, süje bir inhibitör immün yanit veya bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmistir.
Bir FVIII kismi ve bir PC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasi, bir kanama rahatsizligini tedavi etmek için ve FVIII'e immün toleransi indüklemek için yeterli olabilir. Uygulama, profilaktik olabilir. Bazi uygulamalarda, uygulama spontan kanamanin insidansini azaltir veya kanamayi Immün yanit, inhibitör anti-FVIII antikorlari içerebilir.
Antikor titresi, en az 0,6 Bethesda Birimi'dir (BU), en az 1,0 BU'dur veya en az 5,0 BU'dur. Immün yanit ayrica, bir hücre- aracili immün yanit, örnegin, bir sitokinin salimini, da içerebilir. Sitokin, örnegin, IL-lZ, IL-4 veya TNF-d, olabilir. Immün yanit ayrica, klinik semptomlar, örnegin, arttirilmis kanama egilimi, yüksek FVIII tüketimi, FVIII terapisine yanit olmamasi, FVIII terapisinin azaltilmis etkinligi ve/veya FVIII'in kisaltilmis yari-ömrü, ile de sonuçlanabilir.
Bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk. altinda olan süjeler, bir FVIII geninde bir mutasyon, silinme veya yeniden-dizilim› olanlari içerir. Bazi uygulamalarda, süjeler bir FVIII proteini üretmez. Bazi uygulamalarda, süjeler siddetli hemofiliye sahiptir. Bazi uygulamalarda, süje, FVIII'e veya bir baska terapötik proteine bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya (örnegin, bir ebeveyne, kuzene, halaya, amcaya, büyük ebeveynlere veya toruna) sahiptir. Bazi uygulamalarda, süje FVIII uygulandiginda immün fonksiyonunu arttiran bir terapiyi es-zamanli olarak almaktadir veya önceden almistir. Bazi uygulamalarda, süje FVIII ile kombinasyon halinde interferon terapisi veya anti- Viral terapi almaktadir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje, bir arttirilmis sitokin düzeyi, örnegin, arttirilmis TNF-d veya arttirilmis lLlO, ile iliskili bir genetik polimorfizme sahiptir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje, bir TNF-d-308G>A polimorfizmine veya ILlOG mikrosatelitinin alel l34'üne sahiptir.
Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje FVIII'e önceden maruz birakilmamistir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje FVIII'e maruz birakilmistir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje, 150'den daha az, SO'den daha az veya 20'den daha az FVIII maruziyet gününe sahip olmustur.
Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje FVIII'e veya bir baska terapötik proteine önceden bir immün yanit gelistirmemistir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje FVIII'e (pdFVIII'e veya rFVIIl'e) veya bir baska terapötik proteine önceden bir immün yanit gelistirmistir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje bir FVIII ürününe, örnegin, ADVATE®, RECOMBINATE®, KOGENATE FS®, HELIXATE FS®, XYNTHAp/REFACTO AB®, HEMOFIL-NW, MONARC-MQ, MONOCLATE-P®, HUMATE-P®, ALPHANATE®, KOATE-DVI® veya HYATE:C®'ye, Önceden bir immün yanit gelistirmistir. Bazi uygulamalarda, FVIII ürünleri, bir tam boy FVIII'dir, bir matür FVIII'dir veya bir B-alani silinmis FVIII'dir.
Burada saglanan FVIII'i uygulamanin yöntemleri, immün toleransi indükleyebilir. Bazi uygulamalarda, uygulama, uygulama öncesindeki sayiya, titreye veya düzeye kiyasla süjedeki anti-FVIII antikorlarinin sayisini, süjedeki anti- FVIII antikorlarinin titresini ve/Veya süjedeki bir sitokin (örnegin, IL-12, IL-4 veya TNF) düzeyini azaltir. Bazi uygulamalarda, uygulama, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden kaynaklanan sayiya, titreye veya düzeye kiyasla süjedeki anti-FVIII antikorlarinin sayisini, süjedeki anti-FVIII antikorlarinin titresini ve/veya süjedeki bir sitokin (örnegin, IL-12, IL-4 veya TNF) düzeyini azaltir. Bazi uygulamalarda, uygulama, bir FVIII polipeptidinden olusan polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan sayiya, titreye veya düzeye kiyasla süjedeki anti-FVIII antikorlarinin sayisini, süjedeki anti- FVIII antikorlarinin titresini ve/veya süjedeki bir sitokin (örnegin, IL-lZ, IL-4 veya TNF) düzeyini azaltir.
Yöntemler, bir FVIII kismini ve bir FC kismini içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasini içerir. FVIII kismi, insan FVIII'i, tam-boy FVIII veya B alaninin bir tam veya parsiyel Silinmesini içeren FVIII olabilir. FVIII kismi, bir biyolojik olarak aktif polipeptit, örnegin, koagülasyon aktivitesi olan bir FVIII polipeptidi, olabilir. FVIII kismi, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine; SEQ ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 özdes, %95 özdes veya özdes olabilir.
FVIII kismi ayrica, bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin l ila 1457 arasindaki amino asitlerine; SEQ ID NO: 6'nin 1 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 özdes, %95 özdes veya özdes de olabilir. Fc kismi, TABLO 2'de gösterilen Fc amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1458 ila 1684 arasindaki amino asitlerine veya SEQ ID NO: 6'nin 2352 ila 2578 arasindaki amino asitlerine) özdes olabilir.
Kimerik polipeptit, kimerik polipeptit ile iliskili olarak bir ikinci polipeptit içeren bir hibridin bir formu halinde olabilir. Ikinci polipeptit, esas olarak bir Fc'den olusabilir veya bir Fc'den olusabilir.
Bazi uygulamalarda, yöntemler bir kimerik polipeptidin bir özel dozda uygulanmasini içerir. Doz, örnegin, 10-100 IU/kg Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit bir kanama rahatsizligi olan bir süjeye uygulanir. Kanama rahatsizligi, örnegin, bir kanama koagülasyon bozuklugu, HemArtroz, kas kanamasi, oral kanama, hemoraj, kaslarin içine hemoraj, oral hemoraj, travma, travma kapitis, gastrointestinal kanama, intrakraniyal hemoraj, intra-abdominal hemoraj, intratorakik hemoraj, kemik kirilmasi, santral sinir sistemi kanamasi, retrofarinjiyal bosluk içine kanama, retroperitoneal bosluk içine kanama veya illiopsoas kilif içine kanama, olabilir. Süjenin, cerrahi profilaksi, peri-operatif yönetini veya cerrahi için tedaviye ihtiyaci olabilir. Bazi uygulamalarda, kanama koagülasyon bozuklugu, hemofili A'dir.
Mevcut açiklama ayrica, pihtilasma faktörüne bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süjeye bir pihtilasma faktörünü uygulamanin, süjeye bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemini de saglar. Bir süjede bir pihtilasma faktörüne immün toleransi indüklemenin bir yöntemi de saglanir, burada süje bir fetüstür, yöntem fetüsün annesine bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptit içeren bir polipeptidi uygulamayi içerir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulamasi, spontan kanamanin insidansini azaltir veya kanamayi önler.
Mevcut açiklama ayrica, buna ihtiyaci olan bir süjede FVIII'e immün toleransi indüklemenin, süjeye bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemini de saglar. Süje, bir inhibitör Faktör VIII immün yaniti gelistirmistir.
FVIII'e bir inhibitörün gelistirilmesini önlemenin veya inhibe etmenin yöntemi de saglanir, yöntem immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeye FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik Mevcut açiklama ayrica, buna ihtiyaci olan bir süjede bir pihtilasma faktörüne immün toleransi indüklemenin, süjeye bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemini de saglar. Süje, bir inhibitör pihtilasma faktörü immün yaniti gelistirmistir.
Bir pihtilasma faktörüne bir inhibitörün gelistirilmesini önlemenin veya inhibe etmenin buna ihtiyaci olan bir süjeye bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren yöntemi de saglanir.
Bazi uygulamalarda, süje bir insandir ve FVIII'i uygulamanin yöntemi, söz konusu süjede bir kanama rahatsizligini tedavi etmek için bir yöntemdir. Bazi uygulamalarda, kanama rahatsizligi, bir kan koagülasyon bozuklugundan kaynaklanir.
Bazi uygulamalarda, kan koagülasyon bozuklugu hemofilidir veya von Willebrand hastaligidir. Bazi uygulamalarda, kan koagülasyon bozuklugu hemofili A'dir. Bazi uygulamalarda, süje profilaktik veya talep-edildiginde alinan tedavi gerektiren bir rahatsizliga, örnegin, bir kanama epizoduna, sahiptir.
Bazi uygulamalarda, süje, bir kanama bozuklugundan muzdarip olan veya bu tarz tedaviye ihtiyaci olmasi beklenen bir hastadir.
Mevcut açiklama ayrica asagidakileri içeren bir kit de saglar: (a) bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi veya bir FcRn baglama partneri kismi içeren bir kimerik polipeptit ve bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici içeren bir farmasötik bilesim ve (b) bilesimi pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeye uygulamak için talimatlar.
Kimerik polipeptit, bir FVIII kismi içerir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit, bir FVIII monomer dimer hibrididir. Bazi uygulamalarda, talimatlar ilaveten, pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeyi tanimlamak, için en az bir adim içerir. Bazi uygulamalarda, immün toleransa ihtiyaci olan süjeleri tanimlamak için adim, asagidakilerden olusan gruptan birini veya birden fazlasini içerir: (a) pihtilasma faktörü geninde bir mutasyona veya silinmeye sahip olan bir süjeyi tanimlama; (b) pihtilasma faktörü geninde bir yeniden-dizilime sahip olan bir süjeyi tanimlama; (c) pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahip olan bir süjeyi tanimlama; (d) interferon terapisi almakta olan bir süjeyi tanimlama; (e) anti-viral terapi almakta olan bir süjeyi tanimlama; (f) pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile ilgili olan bir gende bir genetik mutasyona sahip olan bir süjeyi tanimlama ve (g) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin kombinasyonlari. Bazi uygulamalarda, pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki bir gendeki genetik. mutasyon asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden fazla mutasyonu içerir: (a) arttirilmis TNF-d ile iliskili bir genetik polimorfizm; (b) arttirilmis IL-lO ile iliskili olan bir genetik polimorfizm; (c) azaltilmis CTLA-4 ile iliskili bir genetik polimorfizm; (d) DRlS veya DQB0602 MHC Sinif II moleküllerinde bir mutasyon ve (e) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin bir kombinasyonu.
Bazi uygulamalarda, mevcut açiklamanin yöntemleri ilaveten, uygulamadan sonra bir inhibitör immün yanitin düzeyini ölçmeyi içerir. Bazi uygulamalarda, mevcut açiklamanin yöntemleri ilaveten, uygulamadan. sonra inhibitör` immün. yanitin. düzeyini uygulamadan önceki inhibitör immün yanitin düzeyi ile karsilastirmayi içerir. Bazi uygulamalarda, inhibitör immün yanit FVIII'e karsi antikorlarin gelistirilmesidir. Bazi uygulamalarda, inhibitör immün yanit sitokin salimidir. ÇIZIMLERIN/SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI SEKIL l, rFVIIIFc monomerinin bir sematik temsilini gösterir.
SEKIL 2A ve 2B, rFVIIIFc'nin (islenmis veya tek Zincirli) indirgememe ve indirgeme SBS-PAGE analizini gösterir.
SEKIL 2c, LC/UV' ve LC/MS ile analiz edilmis rFVIIIFC yapisini gösterir.
SEKILLER 3A, 3B ve 3C, rFVIIIFc'nin biyokimyasal karakterizasyonunu gösterir. SEKIL 3A, fosfolipit vezikül konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak Faktör X'un (FX'un) aktivasyonunu gösterir. SEKIL 3B, FX konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak FX'un aktivasyonunu gösterir. SEKIL 3C, aktive edilmis FIX (FIXa) konsantrasyonunun bir fonksiyonu olarak FX'un aktivasyonunu gösterir.
SEKIL 4, aktive edilmis Protein C tarafindan klevaji takiben FX'un aktivasyonunu gösterir.
SEKILLER 5A, 5B, SC ve 5D, zamana karsi gözlemlenen grup ortalama FVIII aktivitesi (±SE) profillerini gösterir.
Profiller zamana karsi bilesik ile gruplandirilmis doz, düzey ile ayrilir. SEKIL 5A, bir 25 IU/kg'lik doz ile bir bir evreli analize karsilik gelir. SEKIL 5B, bir 65 SEKIL 5C, bir 25 IU/kg'lik doz ile bir kromojenik analize karsilik gelir. SEKIL 5D, bir 65 IU/kg'lik doz ile bir kromojenik analize karsilik gelir.
SEKILLER 6A ve 6B, zamana karsi doz düzeyi ve bilesik ile gruplandirilmis, zamana karsi gözlemlenen grup ortalama FVIII aktivitesi (±SE) profillerini gösterir. SEKIL 6A, bir bir evreli analize karsilik gelir. SEKIL 6B, bir kromojenik analize karsilik gelir.
SEKILLER 7A, 7B ve 7C, hemofili A (HemA) fare kuyruk veni transeksiyon modelinde tek zincirli FVIIIFc'nin (SC rFVIIIFc'nin) in vivo etkinligini gösterir. SEKIL 7A, FVIII dozu ve koruma arasindaki iliskiyi gösterir. Tek zincirli rFVIIIFc dozlari kareler olarak gösterilir ve islenmis rFVIIIFc dozlari daireler olarak gösterilir.
SEKIL 7B, 4,6 ug/kg, 1,38 ug/kg ve 0,46 ug/kg rFVIIIFc veya SC rFVIIIFc uygulanmasindan sonra kuyruk veni trakseksiyonunu takiben sag kalimin yüzdesini gösterir.
SEKIL 7C, sirasiyla 4,6 ug/kg (siyah daire veya ters çevrilmis üçgen), 1,38 ug/kg (üçgen veya karo) ve 0,46 ug/kg (kare ve gri daire) rFVIIIFC veya SC rFVIIIFc uygulanmasindan sonra, kuyruk veni transeksiyonunu takiben kanama olmayanlarin yüzdesini gösterir.
SEKIL 8, 25 IU/kg'lik (düsük doz Kohort A) veya 65 sonra ADVATE®'ye kiyasla rFVIIIFc'nin güvenligini ve PK'sini degerlendirmek için bir doz-eskalasyon, sirali tasarim olan faz 1/2a çalismanin çalisma tasarimini gösterir.
SEKIL. 9, bir-evreli (aPTT) ve kromojenik, analizler ile rFVIII Aktivitesi'nin korelasyonunu gösterir. Sonuçlar, ADVATE® (O) 've rFVIIIFc GI) enjeksiyonunu takiben FVIII aktivitesini (IU/mL) ölçer.
SEKILLER lOA ve lOB, düsük-doz ve yüksek-doz kohortlari için grup ortalama plazma FVIII aktivitesi farmakokinetik profillerini gösterir. Bir tek intravenöz rFVIIIFc veya ADVATE® enjeksiyonundan sonra zamana karsi plazma FVIII aktiviteleri (bir evreli aPTT analizi) grafigi 25 IU/kg (düsük-doz kohortu, n=6) (SEKIL lOA) için ve 65 IU/kg (yüksek-doz kohortu, n=lO [ADVATE®]; n=9 [rFVIIIFc]) (SEKIL 108) için gösterilir. Sunulan sonuçlar, grup ortalamasi ± ortalamanin standart hatasi (SEM) seklindedir.
SEKILLER llA ve llB, ADVATE® veya rFVIIIFc enjeksiyonundan sonra Cl üzerinde VWF antijen düzeylerinin etkisini ve FVIII aktivitesinin tuz'sini gösterir. VWF antijen düzeyleri ve ADVATE®'nin (R?=O,5415 ve p=0,0012) ve rFVIIIFc'nin GÜ=O,5492 ve p=0,00l6) agirlik-ayarli Cl'si (SEKIL llA) ve ADVATEG-“nin (R2=O,7923 ve p<0,000l) ve arasindaki korelasyon gösterilir. her bir nokta bir münferit süjeyi temsil eder.
SEKILLER 12A ve lZB, ADVATEC3 veya rFVIIIFc enjeksiyonundan sonra münferit süjeler için ex vivo tam kan ROTEM® sonuçlarini gösterir. Kan örnekleri, belirtilen zaman noktalarinda 25 IU/kg ADVATE® ve rFVIIIFc (SEKIL lZA) ve 65 IU/kg ADVATE® ve rFVIIIFc (SEKIL 12B) dozlarinda tedaviden önce ve sonra süjelerden alinmistir. Pihtilasma zamani, bir ROTEM® aygiti üzerinde CaH' ile baslatilan NATEM ile belirlenmistir. Sunulan sonuçlar, her bir münferit örnek için üç kopya halindeki kanal okumalarindan ortalama ± ortalamanin standart hatasi (SEM) seklindedir.
SEKILLER l3A ve l3B, bir trombin üretim analizinde (TGA) rFVIIIFc'nin ve SC rFVIIIFc'nin aktivitesini karsilastirir. SEKIL 13A, rFVIIIFc, SC rFVIIIFc, tam olarak islenmis rFVIIIFc ve WHO standardi FVIII için endojen trombin potansiyelini (ETP) karsilastirmistir.
SEKIL l3B, rFVIIIFc, SC rFVIIIFc, tam olarak islenmis rFVIIIFc ve WHO standardi FVIII için pik trombini karsilastirir.
SEKIL l4, rFVIIIFc monomerinin bir sematik temsilidir. rFVIIIFc, araya giren baglayici dizi olmadan, insan B- alani silinmis FVIII'in insan IgGl'inden Fc ile bir rekombinant füzyonudur.
SEKILLER ISA, 15B, l5C ve lSD, 125 IU/kg'lik bir kuyruk veni enjeksiyonunu takiben HemA farelerinde (SEKIL lSA), C57BL/6 farelerinde (SEKIL 15B), FcRn KO farelerinde (SEKIL l5C) ve insan FcRn transgenik Tg32B farelerinde (SEKIL 15D) rFVIIIFc'yi ve rFVIII'i karsilastiran farmakokinetik (PK) profilleri gösterir. Sonuçlar, her bir zaman noktasinda her bir tedavi için 4 fareden Ortalama ± SD'dir. PK parametresi tahminleri TABLO 12'de özetlenir.
SEKIL l6, bir HemA faresi kuyruk pensi kanama modelinde rFVIIIFc'nin ve rFVIII'in akut aktivitesini karsilastirir.
Erkek HemA fareleri, 24 IU/kg, 72 IU/kg veya 216 IU/kg rFVIIIFc'nin veya rFVIII'in bir kuyruk veni enjeksiyonunu almistir, bunu dozlamdan 5 dakika sonra bir 10 mm'lik kuyruk pensi izlemistir. Sunulan sonuçlar, her bir tedavi grubunda 20 fareden kuyruk pensini takip eden 30 dakika boyunca münferit ve medyan kan kaybidir. Tüm diger tedavilere kiyasla Vehikül için P<0,05 ve 72 veya 216 HemA farelerine kiyasla C57Bl/6 fareleri için P>0,05.
SEKILLER 17A ve l7B, kuyruk veni transeksiyon (TVT) kanama modelinde rFVIlI'e kiyasla rFVIIIFc'nin profilaktik10 etkinligini gösterir. Erkek HemA fareleri, vehikül, rFVIII veya rFVIIIFc tedavisini takiben 24 saat ve rFVIIIFc tedavisini takiben 48 saat TVT iJ±2 yaralanmistir. SEKIL l7A, TVT'yi takiben sag kalimi gösterir. TVT'den 24 saat önce rFVIII'e kiyasla 12 IU/kg rFVIIIFc almis hayvanlardan sag kalim egrilerinin Log-Derece testi ile P<0,00l. SEKIL 17B, TVT'yi takip eden 24 saat içinde yeniden-kanama olanlari gösterir. TVT'den 24 saat önce rFVIII'e kiyasla 12 IU/kg rFVIIIFc almis hayvanlardan yeniden-kanama olmayanlarin egrilerinin Log-Derece testi ile P=0,002.
SEKILLER l8A ve 18B, hemofili A köpeklerinde rFVIIIFc'nin ve rFVIII'in tam kan pihtilasma zamanini (WBCT) gösterir.
Köpeklerdeki normal WBCT araligi, genis kesikli çizgiler ile gösterilir. Küçük kesikli çizgilerin (20 dakika) üstündeki alan, plazma FVIII aktivitesinin normalin SEKIL 18A, rFVIIIFc uygulamasindan sonra WBCT'yi gösterir.
SEKIL 18B, bir çapraz çalismada rFVIIIFc uygulamasinin takip ettigi rFVIII uygulanmasindan sonra WBCT'yi gösterir.
SEKILLER l9A. ve 19B, bir i.v. dozdan sonra Hemofili A köpeklerinde rFVIII'e kiyasla rFVIIIFc için farmakokinetik (PK) verilerini sunar. SEKIL l9A, ELISA ile ölçülen plazma antijen konsantrasyonunu gösterir. SEKIL 19B, kromojenik analiz ile ölçülen plazma FVIII aktivitesini gösterir. rFVIIIFc için N = 4 ve rFVIII için N = 2.
SEKIL 20, HemA farelerinde FVIII Immünojenisitesini degerlendirmek için bir çalismanin tasarimini gösterir. rFVIIIFc; kimerik insan FVIII-mürin FC; BDD-FVIII (XYNTHA®); tam-boy rFVIIl (ADVATE®) ve vehikül kontrol ile intravenöz (i.v.) dozlam, gün O'da, gün 7'de, gün l4'te, gün 21'de ve gün 35'te gerçeklesmistir. Kan örnekleri bir toplanmistir. çalismaya göre HemA farelerinde yürütülen immünojenisite deneylerinde anti-FVIII toplam antikor sayimlarini gösterir. SEKIL 21A, 50 IU/kg rFVIIIFC; kimerik insan FVIII-mürin FC; BDD-FVIII (XYNTHA©) veya tam-boy rFVIII (ADVATE®) ile tekrarli i.v. dozlamdan sonra toplam anti- FVIII antikoru ölçümlerine karsilik gelir. SEKIL 21B, lOO (XYNTHA®) veya tam-boy rFVIII (ADVATE®) ile tekrarli i.v. dozlamdan sonra toplam anti-FVIII antikoru ölçümlerine karsilik gelir. SEKIL 21C, 250 IU/kg rFVIIIFc; kimerik insan FVIII-mürin FC; BDD-FVIII (XYNTHA®) rFVIII (ADVATE®) ile tekrarli i.v. dozlamdan sonra toplam anti-FVIII antikoru ölçümlerine karsilik gelir.
SEKILLER 22A, 22B, 22C ve 22D, rFVIIIFc'nin; kimerik insan FVIII-mürin Fc'nin; BDD-FVIII'in (XYNTHA®); tam-boy rFVIII'in (ADVATEG) 50 lU/kg'lik, lOO IU/kg'lik ve 250 zamanlarda anti-FVIII antikoru ölçümlerini gösterir. SEKIL 22A, gün l4'te toplanan örneklere karsilik gelen verileri gösterir. SEKIL 22B, gün Zl'de toplanan örneklere karsilik gelen verileri gösterir. SEKIL 22C, gün 28'de toplanan örneklere karsilik gelen verileri gösterir. SEKIL 22D, gün 42'de toplanan örneklere karsilik gelen verileri gösterir.
SEKIl. 23, FVIIl'e toplami ve nötralize etme antikorlari SEKIL 24, rFVIIIFc'nin (insan Fc'si ile rFVIII) 50 anti-hFc antikoru gelistirilmesini gösterir.
SEKIL 25, piyasada satilan FVIII'e kiyasla rFVIIIFC'ye splenik lenfosit yanitini ölçmek için bir çalismada HemA farelerinden splenositlerin izolasyonu ve analizi için deneysel prosedürleri gösteren bir diyagramdir.
SEKIL 26, FACS (flüoresans-aktive edilmis hücre ayirma) kullanilarak intraselüler sitokin boyama için prosedürü gösteren bir diyagramdir. Prosedür, biri CD4 lenfosit belirteci için ve diger dört renk IL2, IL-4, IL-lO ve TNF- d sitokinler için olmak üzere bes renk kullanir.
SEKILLER 27A ve 27B, temsili FACS nokta grafigini gösterir. SEKIL 27A, izotip kontrolün intraselüler sitokin boyamasina karsilik gelir. SEKIL 27, CD4 ve TNF-d belirteçlerini içeren çift pozitif hücrenin intraselüler sitokin boyamasina karsilik gelir.
SEKIL 28, CD4 ve interlökin-Z (IL-2) için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHA®'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 29, CD4 ve TNF-d için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHA®'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 IU/kg'lik ve 250 IU/kg'lik dozlarda uygulanmistir.
SEKIL 30, CD4 ve interlökin-4 (IL-4) için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif' hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHA®'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 31, CD4 ve interlökin-lO (IL-10) için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHAQ'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 32, CD4 ve dentritik hücre belirteci PD-Ll (CD274) için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFC'ye, XYNTHAQ'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 33, CD4 ve dentritik hücre belirteci CD8O için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden. elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHAQ'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 34, CD4 ve Treg belirteci Foxp3 için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHAQ'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 35, CD4 ve Th inhibitör molekül Tim3 için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde Çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHA®'ya (Xyn) ve ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri SO SEKIL 36, CD4 ve Th inhibitör molekül CD için kontrolün (vehikülün) üstünde intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Çift pozitif hücrelerin yüzdeleri, FVIII tedavilerinin tümünden ve vehikülden elde edilen FACS nokta grafiklerinden belirlenmistir. FVIII ile tedavi edilmis farelerde çift pozitif hücrelerin yüzdesi, vehikül ile tedavi edilmis grup ile karsilastirma ile elde edilmistir. Örnekler, bir insan Fc'si (hFc) veya fare Fc'si (mFc) ile rFVIIIFc'ye, XYNTHA®'ya (Xyn) ve10 ADVATE®'ye (Adv) karsilik gelir. FVIII tedavileri 50 SEKIL 37, Örnek 13'te sunulan immünojenisite Çalismasinin tasarimini gösteren bir diyagramdir. FVIII (rFVIIIFc, XYNTHAQ, ADVATE®) ve vehikül kontrol HemA farelerine gün O'da, gün 7'de, gün l4'te, gün Zl'de, gün 35'te ve gün 53'te uygulanmistir. Kan, gün O'da, gün l4'te, gün Zl'de, gün 28'de ve gün 42'de alinmistir. Dalaklar gün 56'da toplanmistir. FVIII, 50 IU/kg'lik, 100 IU/kg'lik ve 250 SEKIL 38, Örnek 13'te fare splenositlerinin analizi ve T- hücresi yaniti profillemesi için kullanilan metodolojiyi gösterir.
SEKIL 39, gün 42'de toplanan kan örneklerinde toplam anti- FVIII antikoru düzeylerini gösterir. rFVIIIFc, BDD-rFVIII (XYNTHAs) ve fl-rFVIII (ADVATE®), 50 IU/kg'lik, 100 SEKIL 4OA, 40B ve 40C, FVIII'in (rFVIIIFC, BDD-rFVIII (XYNTHAG) veya fl-rFVIII'in (ADVATE®)) farkli dozlari ile tedavi edilmis HemA farelerinden splenik CD4+ T- hücrelerinin intraselüler sitokin boyamasini gösterir. Her bir sekil, IL-2 için (sol panel) ve TNF-d için (sag panel) sonuçlari gösterir. SEKIL 4OA, FVIII'in 50 IU/kg'lik dozlarinin enjekte edildigi HemA farelerine (N=4) karsilik gelir. SEKIL 4OB, FVIII'in lOO IU/kg'lik dozlarinin enjekte edildigi HemA› farelerine (N=lO) karsilik gelir.
SEKIL 4OC, FVIII'in 250 IU/kg'lik dozlarinin enjekte edildigi HemA farelerine (N=4) karsilik gelir.
SEKIL 41, rFVIIIFC'in, BDD-rFVIII'in (XYNTHA9) 'veya fl- rFVlIIin (ADVATE®) 100 lU/kg'lik dozlari ile tedavi edilmis HemA farelerinden izole edilmis CD4/CD25/Foxp3 üçlü pozitif splenositler için intraselüler sitokin boyamayi gösterir.
SEKILLER 42A-H, 100 IU/kg ile tedavi edilmis HemA farelerinde immün tolerans ile ilgili sitokinler için gerçek zamanli PCR'i gösterir. SEKIL 42A, TGF-ß için sonuçlari gösterir, SEKIL 42B, interlökin-lO için sonuçlari gösterir, SEKIL 42C, IL-35'in IL-12a alt-birimi için sonuçlari gösterir ve SEKIL 42D, IL-35'in EBI-3 alt- birimi için sonuçlari gösterir. SEKIL 42E, Foxp3 için sonuçlari gösterir. SEKIL 42F, IL2ra/CD25 için sonuçlari gösterir. SEKIL 42G, CTLA4 için sonuçlari gösterir. SEKIL 42H, IDO-l için sonuçlari gösterir.
SEKIL 43, 100 IU/kg ile tedavi edilmis farelerde PD-Ll-PD- l yoluna dahil edilen hücrelerin FACS analizini gösterir.
Splenositler, yüzey CDllc ve PD-Ll (SEKIL 43A) veya CD4 ve PD-l (SEKIL 43B) için boyanmistir. Çubuklar, vehiküle kiyasla yüzdesi temsil eder (*vehiküle kiyasla p<0,05; +tedavi1er arasinda p<0,05; T-testi).
SEKIL 44, HemA Farelerinde rFVIIIFc, XYNTHA® ve ADVATE® için bir immünojenisite karsilastirma çalismasinin tasarimini gösteren bir diyagramdir. FVIII dozlari HemA farelerine gün 0'da, gün 7'de, gün 14'te, gün 21'de ve gün 'te uygulanmistir. Kan, gün 0'da, gün l4'te, gün 21'de, gün 28'de ve gün 42'de alinmistir. FVIII, 50 IU/kg'lik, 100 IU/kg'lik ve 250 lU/kg'lik dozlarda uygulanmistir.
SEKIL 45, rFVIIIFC'nin; BDD-FVIII'in (XYNTHA(@); tam-boy rFVIII'in (ADVATE®) 50 IU/kg'lik dozlarinin uygulanmasindan 14, 21, 28 ve 42 gün sonra anti-FVIII antikoru ölçümlerini ayni zamanda gün 42'de inhibitör antikorlarin düzeylerini gösterir.
SEKIL 46, rFVIIIFC'nin; BDD-FVIII'in (XYNTHA®); tam-boy rFVIII'in (ADVATE®) 100 IU/kg'lik dozlarinin uygulanmasindan 14, 21, 28 ve 42 gün sonra anti-FVIII antikoru Ölçümlerini ayni zamanda gün 42'de inhibitör antikorlarin düzeylerini gösterir.
SEKIL 47, rFVIlIFc'nin; BDD-FVIII'in (XYNTHA®); tam-boy rFVIII'in (ADVATE®) 250 IU/kg'lik dozlarinin uygulanmasindan 14, 21, 28 ve 42 gün sonra anti-FVIII antikoru ölçümlerini ayni zamanda gün 42'de inhibitör antikorlarin düzeylerini gösterir.
SEKIL 48, rFVIII'in ve rFVIIIFc'nin uygulanmasindan sonra FVIII nötralize etme antikor titreleri ve toplam baglama antikor düzeyleri arasindaki korelasyonu gösterir.
SEKIL 49, SEKIL 44'te gösterilen HemA farelerinde rFVIIIFc, XYNTHA® ve ADVATE® için immünojenisite karsilastirma Çalismasinin T-hücresi yaniti profilleme bilesenini gösteren bir diyagramdir. Ilave FVIII dozlari HemA farelerine gün 53'te uygulanmistir ve dalak gün 56'da toplanmistir.
SEKIL 50 (sag panel), rFVIIIFc'nin, BDD-rFVIII'in (XYNTHA®) veya fl-rFVIII'in (ADVATE®) lOO IU/kg'Lik dozlari ile tedavi edilmis HemA farelerinden izole edilmis CD4/CD25/Foxp3 üçlü pozitif splenositler için intraselüler sitokin boyamayi gösterir. SEKIL 50 (sol panel), regülatör T-hücrelerinin etki mekanizmasini gösteren bir diyagramdir.
SEKIL 51, bir rFVIIIFc immün tolerizasyon çalismasinin tasarimini gösteren bir diyagramdir. rFVIIIFc'nin 50 7'de, gün 21'de ve gün 35'te uygulanmistir. Kan, gün O'da, gün l4'te, gün 21'de, gün 28'de ve gün 42'de akabinde bir 1 haftalik dinlenme periyodunda alinmistir. Akabinde farelere gün 49'da (yeniden-yükleme gün 0), gün 56'da (yeniden-yükleme gün 7), gün 63'te (yeniden-yükleme gün 14) ve gün 70'te (yeniden-yükleme gün 21) rFVIIIFc'nin 250 (yeniden-yükleme gün 14), gün 70'te (yeniden-yükleme gün 21) ve gün 77'deki (yeniden-yükleme gün 28) yeniden yükleme sirasinda alinmistir.
SEKIL 52, rFVIIIFc'nin 250 Iu/kg'lik dozlari ile yeniden- yüklemeden sonra gün 14'te, 21'de ve 28'de toplam anti- FVIII antikoru ölçümlerini gösterir. HemA. farelerine 50 edilmistir. Sonuçlar, rFVIIIFc'nin HemA farelerinde immün toleransi indükledigini gösterir.
SEKIL 53, IgG'nin ve rFVIIIFc'nin FcRn tarafindan geri- dönüsümünü gösteren bir diyagramdir.
SEKIL 54, bir karaciger sinüzoidini çevreleyen hücre tiplerini ve hücresel yapiyi gösteren bir diyagramdir.
SEKIL 55, makrofajin ve Kupffer'in FVIII'in veya rFVIIIFc'nin i.v. enjeksiyonundan önce CLODROSOME® (ENCAPSOME® kontrol olarak uygulanir) ile tüketildigi bir klirens analizinin tasarimini gösteren bir diyagramdir. Üç nakavt fare modeli kullanilmistir: HemA, DKO ve FcRn-KO.
Kan örnekleri belirtilen zaman noktalarinda (her bir zaman noktasi için 4 örnek) toplanmistir.
SEKIL 56, Iba-l, bir spesifik makrofaj belirteci, için bir antikor ile HemA fare karacigeri kesitinin bir temsili boyamasini gösterir. Paneller A.\K3 A', HemA farelerinin kontrol ENCAPSOME® tedavisini gösterir. Paneller B ve B', HemA farelerinin CLODROSOME® tedavisini gösterir. Paneller A' ve B', boyanmis KUpffer hücrelerini, toplam doku alanini ve bos alanlari vurgulayan kantifikasyon maskelerini gösterir.
SEKIL 57, CLODROSOME® veya ENCAPSOME® ile tedaviden sonra F4/8O için bir etiketlenmis antikor ile pozitif bir sekilde boyanmis alanlarin bir immünohistokimyasal (IHC) kantitatif analizini ve F4/8O için ayni etiketlenmis antikor ile boyanmis kan hücrelerinde dolasimdaki monositik hücreleri tanimlayan bir flüoresans-aktive edilmis hücre ayirici (FACS) analizini gösterir.
SEKIL 58, ENCAPSOME® veya CLODROSOME® ile tedavi edilmis HemA farelerinin karacigerinde, dalaginda ve akcigerinde makrofaj belirteci epidermal büyüme faktörü modülü içeren- müsin-benzeri reseptör l'in (Emrl) (F4/80) ekspresyonunun RT-PCR analizini gösterir.
SEKIL 59, kontrol HemA farelerinde ve makrofaj/Kupffer hücresi tüketilmis HemA farelerinde rFVIII'in ve rFVIIIFc'nin klirensini gösterir.
SEKIL 60, kontrol DKO farelerinde (FVIII'den ve VWF'den yoksun olan farelerde) ve makrofaj/Kupffer hücresi tüketilmis DKO farelerinde rFVIII'in ve rFVIIIFc'nin klirensini gösterir.
SEKIL 61, kontrol FcRn-KO farelerinde (FcRn geri-dönüsüm reseptöründen yoksun olan farelerde) ve Hßkrofaj/Kupffer hücresi tüketilmis FcRn-KO farelerinde rFVlII'in ve rFVIIIFc'nin klirensini gösterir.
SEKIL 62, gestasyon günü l6'da gösterilen FVIII etken maddesi veya Kontrol (tedavi edilmemis) ile immünize edilmis annelerden dogmus farelerin Bethesda titrelerini gösterir. Panel A, gebe farelere ve bunlardan dogan yavrulara tedavinin zamanlamalarini ve rFVIIIFc veya XYNTHA® (BDD-FVIII) dozunu gösteren deneysel tasarimi gösterir. Paneller B ve C, tedavi kohortuna göre gruplandirilmis (Panel B) veya münferit anneler ile gruplandirilmis (Panel C), rFVIIIFc ile tedavi edilmis, XYNTHA® ile tedavi edilmis veya Kontrol (tedavi edilmemis) farelerden dogal yavrulardan rFVIIIFc için Bethesda titrelerini gösterir.
SEKIL 63, gestasyon günü lS-l7'de gösterilen FVIII etken maddesi veya kontrol (tedavi edilmemis) ile immünize edilmis annelerden dogmus farelerin Bethesda titrelerini gösterir. Panel A, gebe farelere ve bunlardan dogan yavrulara tedavinin zamanlamalarini ve rFVIIIFc veya XYNTHA® (BDD-FVIII) dozunu gösteren deneysel tasarimi gösterir. Paneller B ve C, tedavi kohortuna göre gruplandirilmis (Panel B) veya münferit anneler ile gruplandirilmis (Panel. C), rFVIIIFC ile tedavi. edilmis, XYNTHA® ile tedavi edilmis veya Kontrol (tedavi edilmemis) farelerden dogal yavrulardan rFVIIIFc için Bethesda titrelerini gösterir.
SEKIL 64A ve 64B, CDllc ve MHC Sinif II ile birlikte bu iki antijen için 100 IU/kg rFVIIIFc, B-alani silinmis FVIII (BDD-FVIII; XYNTHA®) veya tam boy FVIII (fl-FVIII; ADVATE®) ile tedavi edilmis farelerden spleositleri boyama ile belirlenmis, sirasiyla, CD80'in ve CD274'ün dentritik hücre yüzeyi ekspresyonunu gösterir. Sonuçlar, splenositler ± SBM yüzdesini gösterir (n=7-9; *vehiküle kiyasla p<.
SEKILLER 64C ve 64D, GAPDH düzeylerine normalize edilmis splenositlerden gerçek zamanli PCR ile belirlenmis, sirasiyla, CD274'ün ve IDOl'in mRNA ekspresyon düzeylerini gösterir. Çubuklar, bagil ekspresyon düzeyleri (Zücü ± SEM'i temsil eder (n=4-9; *vehiküle kiyasla p<0,05; TrFVIIIFc'ye kiyasla p<0,05; T-testi).
SEKIL 65, test edilen üç grup, yani, vehikül, 50 IU/kg ve 250 IU/kg rFVIIIFc ile tedavi edilmis HemA farelerinin splenositleri, arasinda bir gerçek zamanli PCR diziliminde genlerinin tümünün ekspresyon profillerini gösteren. bir isi haritasini gösterir. Örneklerin her birinden CDNA, tolerans ve anerji ile iliskili moleküllere odaklanmis genlerden olusan bir gerçek zamanli PCR dizilimi kullanilarak münferit genlerin ekspresyonunu izlemek için kullanilmistir.
SEKIL 66, 50 IU/kg rFVIIIFc ile tedavi edilmis HemA farelerinin splenositleri tarafindan yukari veya asagi yönde regüle edilmis olarak tanimlanmis aday genlerin bir ekspresyon profilini ve 250 IU/kg rFVIIIFc ile tedavi edilmis grup ile karsilastirmayi gösterir. Sonuçlar, vehikül grup üzerinde genlerin ekspresyonundaki degisimi gösterir. Regülasyonda kat degisimi için kesim-degeri, 2 olarak alinmistir, yani, 2'nin üstünde kat degisiminin yukari yönde regülasyon oldugu ve 0,5'in altinda kat degisiminin asagi yönde regülasyon oldugu düsünülmüstür.
Burada gösterilen 50 IU/kg grubuna ait olan aday genlerin tümü anlamli sekilde regüle edilmistir (vehiküle ayni SEKIL 67, rFVIIIFc'nin 50 IU/kg'lik veya 250 IU/kg'lik iki haftalik enjeksiyonunu alan HemA fareleri arasinda bir T- hücresi proliferasyon profili karsilastirmasini gösterir. Çubuklar, 250 IU/kg'lik ve 50 IU/kg'lik gruplardan T- hücreleri + SEM'de (*p<0,05, T-testi, n=3-5) kontrole kiyasla CFSE'nin MFI'sinda düsüsü temsil eder.
SEKIL 68A-D, , 50 IU/kg rFVIIIFc'nin (SEKIL 68B), 250 IU/kg rFVIIIFc-N297A'nin (SEKIL 68C) veya 50 IU/kg rFVIIIFc-N297A'nin (SEKIL 68D) iki haftalik enjeksiyonunu alan HemA farelerinden T- hücrelerinin IFNy salgilama profillerini gösterir. Çubuklar, IFNy salgilamanin vehikül üstündeki kati ± SEM'i temsil eder (*p<0,05, T-testi; n=3-5).
DETAYLI AÇIKLAMA Mevcut açiklama, güncel olarak bilinen FVIII ürünleri ile mümkün olana kiyasla daha uzun bir dozlam araligi ve/veya daha büyük AUC kullanilarak Hemofili A'yi Faktör VIII (FVIII) (islenmis, tek Zincirli veya bunlarin bir kombinasyonu) ile tedavi etmenin bir yöntemini saglar. Mevcut açiklama ayrica, FVIII'e karsi immün toleransin indüklenmesine yönelik yöntemlerini de saglar. Mevcut açiklama ayrica, iyilestirilmis FVIII kimerik polipeptitlerini ve üretim yöntemlerini de Bu açidan, mevcut açiklama genel olarak, buna ihtiyaci olan bir süjede bir pihtilasma faktörüne immün toleransi indüklemenin süjeye bir pihtilasma faktörü kismi ve bir Fc kismi içeren bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemini saglar. Ayrica bir pihtilasma faktörüne bir inhibitörün gelistirilmesini önlemenin veya inhibe etmenin pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeye bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemi de saglanir, burada kimerik polipeptit bir pihtilasma faktörü kismi ve bir Fc kismi içerir.
Hemofili A'nin tedavisi, spontan kanamayi önlemek için FVIII aktivitesinin normal düzeylerin %1'i ila %5'ine restorasyonunu hedef alan replasman terapisi iledir (burada bütünüyle referans olarak eklenen, Mannucci, P.M. et al., N. Engl. J. alinan tedavi ile tedavi etmek için veya profilaktik olarak tedavi etme ile kanama epizodlarinin gerçeklesmesini önlemek için mevcut plazma-kaynakli ve rekombinant FVIII ürünleri vardir. Bu ürünlerin yari-ömrüne dayanarak (10-12 saat) (White rejimleri sik, yaygin olarak profilaksi için haftada iki ila üç kere ve talep-edildiginde alinan tedavi için günde bir ila üç kere, intravenöz uygulama gerektirir (Manco-Johnson, M.J., uygulama agrilidir ve zahmetlidir. Güncel olarak mevcut FVIII ürünleri ile iliskili bir baska majör zorluk, FVIII terapisi almakta olan hastalarda nötralize etme anti-FVIII antikorlarinin gelistirilmesidir. Inhibitör FVIII immün yanitlari, anti-Faktör VIII antikorlarini ve/veya hücre- aracili immün yanitlari içerebilir.
Mevcut açiklama, FVIII'i buna ihtiyaci olan, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir insan süjeye (örnegin, insan hastaya) uygulamanin bir yöntemini saglar. Yöntem, bir FVIII kismi ve bir Fc kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasini içerir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, uygulamadan önceki sayiya kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin sayisini azaltir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit bir inhibitör FVIII immün yaniti olan bir süjeye uygulanir ve uygulama inhibitör immün yaniti azaltabilir.
Inhibitör FVIII immün yaniti, bir inhibitör antikor immün yaniti ve/Veya bir hücre-aracili immün yanit olabilir. Burada saglanan yöntemlere göre bir kimerik polipeptidin uygulanmasi, inhibitör immün yaniti azaltabilir veya nötralize edebilir.
Böylelikle, bazi uygulamalarda, anti-FVIII antikorlari, bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede azaltilir veya elimine edilir. Azalma, örnegin, bir %lO'luk, %ZO'lik, %30'luk, düsüs, olabilir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, uygulamadan önceki titreye kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin titresini azaltir. Bazi uygulamalarda, anti-FVIII antikorlarinin titresi, bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede azaltilir. Bu dogrultuda, bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasi, inhibitörleri 3'ten daha az, Z'den daha az, l'den daha az veya 0,6'dan daha az Bethesda Birimi'ne (BU) azaltabilir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, uygulamadan önceki düzeye kiyasla süjedeki bir sitokin düzeyini azaltir. Bazi uygulamalarda, sitokin düzeyleri bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede azaltilir. sitokin, örnegin, lL-12, IL-4 ve/Veya TNF-d, olabilir. Azalma, örnegin, bir Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit, önceden bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmis olan bir süjeye uygulanir.
Burada saglanan yöntemlere göre, bir kimerik polipeptidin bu tarz süjelere uygulanmasi, önceki yanita kiyasla bir azaltilmis immün yanit ile sonuçlanabilir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptidin uygulanmasindan sonra üretilmis olana kiyasla mevcut yöntemlere göre bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede daha az anti-FVIII antikoru üretilir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden sonra süjedeki sayiya kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin sayisini azaltir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden sonra süjedeki titreye kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin titresini azaltir. Bazi uygulamalarda, anti-FVIII antikorlarinin titresi, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptidin uygulanmasindan sonra üretilmis olana kiyasla bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede daha düsüktür. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden sonra süjedeki düzeye kiyasla süjedeki bir sitokin düzeyini azaltir. Bazi uygulamalarda, sitokin (örnegin, (e.g., IL-12, olusan bir polipeptidin uygulanmasindan sonraki düzeylere kiyasla bir FVIII kismi ve bir PC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede daha düsüktür.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, pihtilasma faktörü kismindan olusan bir polipeptidin veya pihtilasma faktörü kismini içeren ancak Fc kismini içermeyen bir polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan sayiya kiyasla süjedeki anti-pihtilasma faktörü antikorlarinin sayisini azaltir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit, önceden bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmemis olan bir süjeye uygulanir. Burada saglanan yöntemlere göre bir kimerik polipeptidin bu tarz süjelere uygulanmasi, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptidin uygulanmasindan kaynaklanacak olana kiyasla bir daha düsük immün yanit ile sonuçlanabilir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptidin uygulanmasi ile üretilecek olana kiyasla mevcut yöntemlere göre bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede daha az anti- FVIII antikoru üretilir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, pihtilasma faktörü kismindan olusan bir polipeptidin veya pihtilasma faktörü kismini içeren ancak Fc kismini içermeyen bir polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan titreye kiyasla süjedeki anti-pihtilasma faktörü antikorlarinin titresini azaltir. Bazi uygulamalarda, anti- FVIII antikorlarinin titresi, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptidin uygulanmasi ile üretilecek olana kiyasla bir FVIII kismi ve bir Fc kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede daha düsüktür. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin uygulanmasi, pihtilasma faktörü kismindan olusan bir polipeptidin veya pihtilasma faktörü kismini içeren ancak Fc kismini içermeyen bir polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan düzeye kiyasla süjedeki bir sitokin (örnegin, IL-12, IL-4 ve/veya TNF-d) düzeyini azaltir. Bazi uygulamalarda, sitokin (örnegin, lL-lZ, IL-4 ve/veya TNF-d) düzeyleri, bunlarin bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptidin uygulanmasindan sonra olacagina kiyasla bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik polipeptidin uygulanmasindan sonra bir süjede daha düsüktür.
Mevcut açiklamanin yöntemleri ilaveten, kimerik polipeptidin uygulanmasindan önce, süjenin asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden fazla karakteristige sahip oldugunu tanimlamayi içerebilir: (a) pihtilasma faktörünü sifreleyen gende bir mutasyona veya silinmeye sahiptir; (b) pihtilasma faktörünü sifreleyen gende bir yeniden-dizilime sahiptir; (c) pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahiptir; (d) interferon terapisi almaktadir; (e) anti-viral terapi almaktadir; (f) pihtilasma. faktörünü sifreleyen gen disindaki, bir` inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile ilgili olan bir gende bir genetik mutasyona sahiptir ve (g) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin kombinasyonuna sahiptir. Bazi uygulamalarda, suje pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki bir gende asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden, fazla. mutasyonu içeren bir genetik mutasyona sahiptir: (i) arttirilmis TNF-g ile iliskili bir genetik polimorfizm; (ii) arttirilmis IL-lO ile iliskili olan bir genetik polimorfizm; (iii) azaltilmis CTLA-4 ile iliskili bir genetik polimorfizm; (iv) DRlS veya DQB0602 MHC Sinif II moleküllerinde bir mutasyon ve (v) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin bir kombinasyonu. Bazi uygulamalarda, arttirilmis TNF-d ile iliskili polimorfizm, 308G>A'dir. Bazi uygulamalarda, arttirilmis IL 10 ile iliskili polimorfizm, lLlOG mikrosatelitinin alel l34'üdür.
Mevcut açiklama ayrica, FVIII'i buna ihtiyaci olan bir insan süjeye (örnegin, insan hastaya) uygulamanin, süjeye bir kimerik FVIII polipeptidinin, örnegin, bir kimerik FVIII-Fc polipeptidinin veya bu tarz bir' polipeptidin bir hibridinin bir terapötik dozunu, FVIII-olmayan kismi bulunmayan, örnegin, FC kismi bulunmayan, söz konusu FVlIl'in (söz konusu FVIII kismindan olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu için gerekli olan dozlam araligina kiyasla en az yaklasik bir buçuk kat daha uzun olan bir dozlani araliginda uygulamayi içeren, bir yöntemini de saglar. Mevcut açiklama ayrica, buna ihtiyaci olan bir insan süjede FVIII uygulamasinin dozlam araligini arttirmanin kimerik FVIII polipeptidini uygulamayi içeren bir yöntemine de yöneliktir.
Dozlam araligi, FVIII-olmayan kismi bulunmayan, örnegin, FC kismi bulunmayan, söz konusu FVIII'in (söz konusu FVIII kismindan olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu için gerekli olan dozlam araligina kiyasla en az yaklasik bir buçuk ila alti kat daha uzun, bir buçuk ila bes kat daha uzun, bir buçuk ila dört kat daha uzun, bir buçuk ila üç kat daha uzun veya bir buçuk ila iki kat daha uzun olabilir. Dozlam araligi, FVIII-olmayan kismi bulunmayan, örnegin, FC kismi bulunmayan, söz konusu FVIII'in (söz konusu FVIII kismindan olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu için gerekli olan dozlam araligina kiyasla en az yaklasik bir buçuk, iki, iki buçuk, üç, üç buçuk, dört, dört buçuk, bes, bes buçuk veya alti kat daha uzun olabilir. Dozlam araligi, yaklasik her üç, dört, bes, alti, yedi, sekiz, dokuz, on, on bir, on iki, on üç veya on dört gunde veya daha uzun sürede bir olabilir.
Dozlam araligi, en az yaklasik bir buçuk ila 5, bir buçuk, 2, 3, 4 veya 5 gün veya daha uzun olabilir.
Mevcut açiklama ayrica, FVIII'i buna ihtiyaci olan bir insan süjeye uygulamanin, FVIII-olmayan kismi bulunmayan, örnegin, Fc kismi bulunmayan, söz konusu FVIII'in (söz konusu FVIII kismindan olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu ile elde edilen AUC'ye kiyasla en az yaklasik bir arti dörtte bir (1,25) kat daha büyük olan bir zamana karsi plazma konsantrasyonu egrisi altinda kalan alan (AUC) elde etmek için, bir kimerik FVIII polipeptidinin, Örnegin, bir kimerik FVIII-Fc polipeptidinin veya bu tarz bir polipeptidin bir hibridinin, bir terapötik dozunu süjeye uygulamayi içeren, bir yöntemini de saglar. Mevcut açiklama böylelikle, buna ihtiyaci olan bir insan hastada FVIII aktivitesinin AUC'sini arttirmanin veya uzatmanin kimerik FVIII polipeptidini uygulamayi içeren bir yöntemini içerir.
Mevcut açiklama ayrica, FVIII'i buna ihtiyaci olan bir süjeye uygulamanin, bir FVIII ve bir PC içeren bir polipeptidin veya bu tarz bir polipeptidin bir hibridinin bir terapötik dozunu yaklasik her üç, dört, bes, alti, yedi, sekiz, dokuz, on, on bir, on iki, on üç veya on dört günde veya daha uzun sürede bir olan bir dozlam araliginda süjeye uygulamayi içeren, bir yöntemini de açiklar.
Burada açiklanan yöntemler, profilaktik tedaviye veya talep- edildiginde alinan tedaviye ihtiyaci olan. bir süje üzerinde tatbik edilebilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "uygulama", burada açiklanan bir farmasötik olarak kabul edilebilir FVIII polipeptidini bir süjeye bir farmasötik olarak kabul edilebilir yol vasitasiyla verme anlamina gelir. Uygulamanin tercih edilen yollari, intravenöz, örnegin, intravenöz enjeksiyon ve intravenöz infüzyon, olabilir. Uygulamanin ilave yollari, örnegin, subkütan, intramüsküler, oral, nazal ve pulmoner uygulamayi, içerir. Kimerik polipeptitler ve hibrit proteinler, en az bir eksipiyan içeren bir farmasötik bilesimin parçasi olarak uygulanabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "zamana karsi plazma konsantrasyonu egrisi altinda kalan alan (AUC)", farmakolojideki teknigin terimi ile aynidir ve uygulamayi takiben FVIII'in emiliminin hizini ve boyutunu temel alir.
AUC, belirtilmis bir zaman periyodu, örnegin, 12, 18, 24, 36, 48 veya 72 saat, boyunca veya egrinin egimine göre uyarlama kullanilarak sonsuzluk için belirlenir. Burada aksi ifade edilmedikçe, AUC sonsuzluk için belirlenir. AUC'nin belirlenmesi, bir tek süjede veya bunlar için ortalamanin hesaplandigi süjelerin bir popülasyonunda gerçeklestirilebilir.
Burada kullanildigi sekliyle, FVIII'in bir "B alani", teknikte bilinen, iç amino asit dizisi özdesligi ve trombin ile proteolitik klevaj yerleri ile tanimlanan, B alani, örnegin, tam boy insan FVIII'inin Ser741-Arg1648 arasindaki rezidüleri, ile aynidir. Baska insan FVIII alanlari asagidaki amino asit rezidüleri ile tanimlanir: A1, Alal-Arg372 arasindaki rezidüler; A2, Ser373-Arg740 arasindaki rezidüler; A3, arasindaki rezidüler; C2, Ser2173-Tyr2332 arasindaki rezidüleri içerir. Kalan dizi, Glul649-Argl689 arasindaki rezidüler, genel olarak, FVIII hafif zincir aktivasyon peptidi olarak ifade edilir. Domuz, fare ve kanin FVIII'i için B alanlarini içeren alanlarin tümü için sinirlarin lokasyonlari da teknikte bilinir. Bir uygulamada, FVIII'in B alani silinir ("B alani silinmis FVIII" veya "BDD FVIII").
Bir BDD FVIII'in bir örnegi, Tablo 2A(i)'deki dizinin FVIII arasindaki amino asitleri) ile ayni diziye sahip olan REFACTO®'dur (rekombinant BDD FVIII'dir). Bir baska uygulamada, B alani silinmis FVIII, SEQ ID NO: 2'nin Arjinin rezidüsü 773'üne karsilik gelen, B alani silinmis FVIII'in rezidüsü 754'teki veya SEQ ID NO: 6'nin Arjinin rezidüsü l667'sine karsilik gelen, tam-boy FVIII'in rezidüsü l648'teki Arjinine karsilik gelen bir aynen intraselüler isleme yeri içerir.
Herhangi bir SEQ ID Numarasi'ni ifade etmeden burada kullanilan dizi rezidüsü numaralari, aksi gösterilmedikçe, sinyal peptidi dizisi (19 amino asit) içermeyen FVIII dizisine karsilik gelir. Örnegin, tam-boy FVIII'in S743/Ql638'i, 19 amino asitlik sinyal peptidi dizisinden dolayi SEQ ID NO: 6'nin S762/Ql657'sine karsilik gelir.10 Bir "B alani silinmis FVIII", her biri burada atif yapilan, Numarali ABD Patentleri'nde açiklanan tam veya parsiyel silinmelere sahip olabilir. Bazi uygulamalarda, bir` B alani silinmis FVIII dizisi, 6,316,226 Numarali ABD Patenti'nin kolon 4, satir 4 ila kolon 5, satir 28 arasinda ve 1-5 arasindaki örneklerinde (ayrica US 6,346,513'te) açiklanan silinmelerin herhangi birini içerir. Bazi uygulamalarda, bir B alani silinmis FVIII', 5,789,203 Numarali ABD Patenti'nin kolon 2, 26-51 arasindaki satirlarinda ve 5-8 arasindaki 6,228,620'de) açiklanan bir silinmeye sahiptir.
Bazi uygulamalarda, bir B alani silinmis FVIII, 5,972,885 Numarali ABD Patenti'nin kolon 1, satir 25 ila kolon 2, satir arasindaki satirlarinda ve örnek 1'inde; 5,543,502 Numarali ABD Patenti'nin kolon 2, 17-46 arasindaki satirlarinda; 2, 55-68 arasindaki satirlarinda, sekil 2'sinde ve örnek Numarali ABD Patenti'nin kolon 2, satir 1 ila kolon 3, satir 19 arasinda, kolon 3, satir 40 ila kolon 4, satir 67 arasinda, kolon 7, satir 43 ila kolon 8, satir 26 arasinda ve kolon 11, Numarali ABD Patenti'nin kolon 4, 25-53 arasindaki satirlarinda tarif edilen bir silinmeye sahiptir. Bazi uygulamalarda, bir B alani silinmis FVIII, B alaninin çogunun bir silinmesine sahiptir, ancak WO 91/09122'de açiklandigi üzere, B alaninin primer translasyon ürününün iki polipeptit zincirine in Vivo proteolitik islenmesi için elzem olan amino- ucu dizilerini (yani, intraselüler isleme yerini) hala içerir.
Bazi uygulamalarda, bir B alani silinmis FVIII, 747-1638 arasindaki amino asitlerin bir silinmesi, yani, B alaninin neredeyse bir tam silinmesi, ile yapilir. Hoeben R.C. et al., silinmis FVIII ayrica, faktör VIII'in 771-1666 arasindaki amino asitlerinin 'veya 868-1562 arasindaki amino asitlerinin bir Silinmesini de içerebilir. Meulien P. et al., Protein Eng. alani silinmeleri, burada atif yapilan, örnegin, asagidakileri basvurusu)), , asitlerin silinmesi. Yukaridaki silinmelerin her biri, herhangi bir FVIII dizisi içinde yapilabilir.
Bir uygulamada, kimerik polipeptit içindeki B alani silinmis FVIII kismi, bir metal bagi ile baglanmis (veya birlestirilmis) iki zincire islenir, birinci zincir bir agir zincir (Al-AZ-parsiyel B) içerir ve bir ikinci zincir bir hafif zincir (A3-C1-C2) içerir. Bir baska uygulamada, B alani silinmis FVIII kismi, bir tek Zincirli FVIII'dir. Tek Zincirli FVIII, B alani silinmis FVIII'in rezidüsu 754'teki (SEQ ID NO: 2'nin rezidüsü 773'teki) veya tam-boy FVIII'in rezidüsü Arjinine karsilik gelen bir aynen intraselüler isleme yeri içerebilir.
Agir zincir ve hafif zincir arasindaki metal bagi, teknikte bilinen herhangi bir metal olabilir. Örnegin, metal, bir iki- degerlikli metal iyonu olabilir. Agir zinciri ve hafif zinciri birlestirmek için kullanilabilen metaller, bunlarla sinirli kalmamak kaydiyla, Ca”"yi, Mn%“yi veya Cuß'yi, içerir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit içindeki FVIII kismi, FVIII'in A1 alanini içerir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit içindeki FVIII kismi, FVIII'in A2 alanini içerir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit içindeki FVIII kismi, FVIII'in A3 alanini içerir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit içindeki FVIII kismi, FVIII'in Cl alanini içerir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit içindeki FVIII kismi, FVIII'in C2 alanini içerir.
Burada kullanildigi sekliyle, "kimerik polipeptit", içinde farkli kaynaklardan en az iki polipeptit (veya alt-dizi veya peptit) içeren bir polipeptit anlamina gelir. Kimerik polipeptitler, örnegin, farkli kaynaklardan, örnegin, farkli genlerden, farkli cDNA'lardan veya farkli hayvanlardan veya diger türlerden iki, üç, dört, bes, alti, yedi veya daha fazla polipeptit, içerebilir. Kimerik polipeptitler, örnegin, farkli alt-dizileri baglayan bir veya birden fazla baglayici, içerebilir. Böylelikle, alt-diziler dogrudan baglanabilir veya bunlar dolayli olarak, baglayicilar vasitasiyla veya her ikisi ile, bir tek kimerik polipeptit içinde baglanabilir. Kimerik polipeptitler, örnegin, ilave peptitler, örnegin, sinyal dizileri ve proteinin saflastirilmasina veya saptanmasina yardimci olan diziler, örnegin, 6His ve FLAG, içerebilir. Buna ek olarak, kimerik polipeptitler N- ve/veya C-uçlarina amino asit veya peptit ilavelerine sahip olabilir.
Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit bir pihtilasma faktörü kismi (örnegin, bir FVIII kismi) ve pihtilasma faktörü-olmayan kisim. (örnegin, bir FVIII-olmayan kisim) içerir. Emsal pihtilasma faktörü-olmayan kisimlar (örnegin, FVIII-olmayan kisimlar), örnegin, FC'yi, içerir. Emsal kimerik FVIII-FC polipeptitleri, örnegin, bunlarin sinyal dizilerini içeren veya bunlarin sinyal dizilerini içermeyen, SEO ID NO.'lari: 2'yi veya 6'yi (TABLO 2) ve SEO ID NO: 4'ün kimerik FC polipeptidini (TABLO 2), içerir.
Burada kullanildigi sekliyle, bir kimerik polipeptide uygulandiginda "kisim" terimi, bu tarz kimerik polipeptidin bilesenlerinin veya kisimlarinin birini (örnegin, bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren. bir kimerik polipeptidi" veya ifadeyle, "kisim" terimi, kimerik polipeptit içindeki farkli bilesenlerin kaynagini göstermek için kullanilir` ancak FVIII proteininin bir fragmanini veya bir FC bölgesinin bir fragmanini göstermek için kullanilmaz.
Kimerik polipeptit, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2A(i)'de gösterilen FVIII ve FC amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin özdes olan veya bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2A(i)'de gösterilen FVIII ve Fc amino asit dizisine (SEO ID NO: 2'nin 1 ila 1684 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdes olan bir dizi içerebilir, burada dizi FVIII aktivitesine sahiptir. FVIII aktivitesi, aktive edilmis Parsiyel Tromboplastin Zamani (aPPT) analizi, kromojenik analiz veya bilinen baska yöntemler ile Ölçülebilir. Kimerik polipeptit, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2A(i)'de gösterilen FVIII ve FC amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 20 ila 1684 arasindaki amino asitlerine) özdes olan veya bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2A(i)'de gösterilen FVIII ve FC amino asit dizisine (SEO ID NO: 2'nin 1 ila 1684 arasindaki amino asitlerine) özdes olan bir dizi içerebilir.
Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, bir FVIII A3 alani içerir.
Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, insan FVIII'ini içerir. Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, B alaninin bir tam veya parsiyel silinmesine sahiptir. Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine ve SEQ ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdestir. Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEO ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine ve SEO ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) özdestir. FVIII kismi, bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1 ila 1457 arasindaki amino asitlerine veya SEO ID NO: 6'nin 1 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdestir. Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1 ila 1457 arasindaki amino asitlerine veya SEQ 1D NO: 6'nin 1 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) özdestir. Bazi uygulamalarda, FVIII kismi, koagülasyon aktivitesine sahiptir.
Bazi uygulamalarda, FC kismi, TABLO 2'de gösterilen FC amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1458 ila 1684 arasindaki amino amino asitlerine) özdestir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptit kimerik polipeptit ile iliskili olarak bir ikinci polipeptit içeren bir hibrit formundadir, burada ikinci polipeptit esas olarak Fc kismindan veya FcRn baglama partnerinden olusur veya FC kismindan veya FcRn baglama partnerinden olusur.
Bazi uygulamalarda, bir FVIII kismi içeren bir kimerik polipeptit, FVIII-olmayan kismi bulunmayan ayni FVIII kismindan olusan bir polipeptide kiyasla bir arttirilmis yari- ömre (tu2) sahiptir. Bir arttirilmis tim'si olan bir kimerik FVIII polipeptidi burada bir uzun-süre etkili FVIII olarak ifade edilebilir. Uzun-süre etkili kimerik FVIII polipeptitleri, örnegin, (örnegin, bir hibrit, örnegin, bir FVIIIFC monomer dimer hibridi, formundaki kimerik FVIII polipeptitlerini içeren; bakiniz Örnek 1, Sekil 1 ve Tablo 2A kaynastirilmis FVIII'i ve albümine kaynastirilmis FVIII'i, Burada kullanildigi sekliyle, "kültür", "kültürlemek" veya veren in vitro kosullar altinda inkübe etme veya hücreleri bir canli halde idame ettirme anlamina gelir. Burada kullanildigi sekliyle, "kültürlenmis hücreler", in vitro çogaltilmis hücreler anlamina gelir.
Burada kullanildigi sekliyle, mevcut basvuru boyunca "FVIII" olarak kisaltilmis olan "Faktör VIII", aksi ifade edilmedikçe, koagülasyonda bunun normal rolünde fonksiyonel FVIII polipeptidi anlamina gelir. Böylelikle, FVIII terimi fonksiyonel olan varyant polipeptitleri içerir. FVIII proteinleri, insan, domuz, kanin ve mürinr FVIII proteinleri olabilir. Teknigin Arka-Plani bölümünde tarif edildigi üzere, tam boy polipeptit ve polinükleotid dizileri, çok sayida fonksiyonel fragmanin, mutantin ve modifiye edilmis versiyonun oldugu gibi, bilinir. Insan FVIII'i dizilerinin Örnekleri, SEQ gösterilir. FVIII polipeptitleri, örnegin, tam-boy FVIII'i, N- ucundaki Met çikarilmis tam-boy FVIII'i, (sinyal dizisi bulunmayan) matür FVIII'i, N-ucunda bir ilave Met olan matür FVIII'i ve/veya B alaninin bir tam 'veya parsiyel silinmesi olan FVIII'i, içerir. FVIII varyantlari B alani silinmeleri, parsiyel veya tam silinmeleri, içerir.
Yukarida ve asagida tartisildigi üzere, çok fazla sayida fonksiyonel FVIII varyanti bilinir. Buna ek olarak, FVIII içinde yüzlerde fonksiyonel-olmayan mutasyon hemofili hastalarinda tanimlanmistir ve bu mutasyonlarin FVIII fonksiyonu üzerindeki etkisinin sübstitüsyonun dogasina kiyasla daha çok bunlarin FVIII'in 3-boyutlu yapisi içinde nerede bulundugundan kaynaklandigi belirlenmistir (Cutler et ve diger türlerden FVIII arasindaki karsilastirmalar, burada atif yapilan, fonksiyon için büyük olasilikla gerekli olan korunmus rezidüleri tanimlamistir (Cameron et al., Thromb.
Insan FVIII geni izole edilmistir ve memeli hücrelerinde eksprese edilmistir (Toole, J. J. et al., Nature 312z342-347 ve amino asit dizisi cDNA'dan ortaya çikarilmistir. Capon et al., 4,965,199 Numarali ABD Patenti, memeli konak hücrelerinde FVIII üretmek için bir rekombinant DNA yöntemini ve insan FVIII'inin saflastirilmasini açiklar. CHO (Çin hamsteri over) hücrelerinde ve BHKC'de (bebek hamster böbrek hücrelerinde) Insan FVIII'i ekspresyonu bildirilmistir. Insan FVIII'i, B alaninin parçasini veya tümünü silmek için modifiye edilmistir ( ve insan FVIII'i B alaninin insan faktör V'i B alani ile degistirilmesi gerçeklestirilmistir (burada atif yapilan, 5,004,803 Numarali ABD Patenti). Insan FVIII'ini sifreleyen CDNA dizisi ve tahmin edilen amino asit dizisi sirasiyla, burada atif yapilan, 1'inde ve 2'sinde gösterilir. ,859,204 Numarali ABD Patenti, Lollar, J. S., FVIII'in azaltilmis antijenisiteye ve azaltilmis immünoreaktiviteye sahip olan fonksiyonel mutantlarini bildirir. 6,376,463 Numarali ABD Patenti, Lollar, J. 8. de, FVIII'in azaltilmis immünoreaktiviteye sahip olan mutantlarini bildirir.
FVIII'in A2 alanindaki fonksiyonel mutasyonlari bildirir.
B-alani silinmelerini içeren çok sayida fonksiyonel FVIII molekülü asagidaki patentlerde, her ikisi de Baxter'e tahsis edilmis US 7,041,635'te; Chiron'a tahsis edilmis US Transgene S.A.'ya tahsis edilmis US 5,112,950'de; Genetics Domuz FVIIl'i dizisi yayinlanir (Toole, J. J. et al., Proc. cDNA kütüphanesinden FVIII dizilerinin PCR amplifikasyonundan elde edilen tam domuz cDNA dizisi bildirilmistir (Healey, J. birimlerin ve spesifik amino asit dizilerinin sübstitüsyonlarina sahip olan hibrit insan/domuz FVIII'i Lollar ve Runge tarafindan 5,364,771 Numarali ABD Patenti'nde ve WO 92/20093'te açiklanmistir. Daha yakin tarihli olarak, domuz FVIII'inhq A1 ve A2 alanlarinin nükleotid ve karsilik gelen amino asit dizileri ve karsilik gelen insan alanlari için sübstüte edilmis domuz Al ve/veya A2 alanlari içeren bir Numarali ABD Patenti, Lollar, J. 8. de, domuz cDNA'sini ve ortaya çikarilmis amino asit dizilerini açiklar. Emory'ye tahsis edilmis 6,458,563 Numarali ABD Patenti, bir B-alani silinmis domuz FVIII'ini açiklar.
FVIII (veya bir kimerik polipeptidin FVIII kismi), bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine; SEQ ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdes olabilir, burada söz konusu FVIII kismi, FVIII aktivitesine sahiptir. FVIII (veya bir kimerik polipeptidin FVIII kismi), bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine ve SEO ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) özdes olabilir.
FVIII (veya bir kimerik polipeptidin FVIII kismi), bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEO ID NO: 2'nin 1 ila 1457 arasindaki amino asitlerine 've SEO :HD NO: 6'nin 1, ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdes olabilir, burada söz konusu FVIII kismi, FVIII aktivitesine sahiptir. FVIII (veya bir kimerik polipeptidin FVIII kismi), bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1 ila 1457 arasindaki amino asitlerine ve SEO ID NO: 6'nin 1 2351 arasindaki amino asitlerine) özdes olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "es-deger doz", FVIII aktivitesinin, söz konusu polipeptidin moleküler agirligindan bagimsiz olarak, Uluslararasi Birimler cinsinden ifade edilen ile ayni doz anlamina gelir. FVIII aktivitesinin bir Uluslararasi Birimi (IU) yaklasik olarak, FVIII'in normal insan plazmasinin bir mili litresi içindeki miktarina karsilik gelir. FVIII aktivitesini ölçmek için, Avrupa Farmakopesi kromojenik. substrat analizini ve bir bir evreli pihtilasma analizini içeren, bir kaç analiz mevcuttur.
Burada kullanildigi sekliyle, "FC", aksi ifade edilmedikçe, fonksiyonel neonatal Fc reseptörü (FcRn) baglama partnerleri anlamina gelir. Bir FcRn baglama partneri, FcRn baglama partnerinin FcRn reseptörü tarafindan bunu takip eden aktif tasinmasi ile FcRn reseptörü tarafindan spesifik olarak baglanabilen herhangi bir moleküldür. Böylelikle, FC terimi kristallografisine göre tarif edilmistir (Burmeister~ et al., ve CH3 alanlarinin birlesme yeri yakinindadir. Fc-FcRn temaslarinin tümü, bir tek Ig agir zinciri içindedir. FcRn baglama partnerleri, örnegin, tüm IgG'yi, IgG'nin Fc fragmanini ve IgG'nin, FcRn'nin tam baglama bölgesini içeren, diger fragmanlarini, içerir. Majör temas yerleri, CH2 alaninin amino asit rezidülerini içerir.
Immünoglobülinlerin veya immünoglobülin fragmanlarinin veya bölgelerinin amino asit numaralandirmasina. yapilan atiflarin tümü, Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Bethesda; MD.'ye göredir. FcRn reseptörü, insanlari içeren bir kaç memeli türünden izole edilmistir. Insan FcRn, siçan FcRn ve fare FcRn dizileri bilinir (Story et al., J. Exp. Med. 180: 2377 (1994). Bir Fc, immünoglobülinin mentese bölgesi ile birlikte veya immünoglobülinin mentese bölgesi olmadan bir immünoglobülinin CH2 ve CH3 alanlarini içerebilir. Emsal Fc Bir FC (veya bir kimerik polipeptidin FC kismi), bir veya birden fazla mutasyon ve mutasyonlarin kombinasyonlarini içerebilir. Örnegin, bir FC (veya bir kimerik polipeptidin FC kismi), arttirilmis yari-ömür saglayan mutasyonlar, Örnegin, kombinasyonlarini, Vaccaro et al., Nat. Biotechnol. 23:1283 Yayini'nin 1-2 sayfalarinda, [0012] paragrafinda ve Örnekleri ABD Basvuru Yayini'nin sayfa 2'sinde, [0014] ila [0021] arasindaki paragraflarinda açiklanan mutantlari, içerebilir.
FC (veya bir kimerik polipeptidin FC kismi) ayrica, örnegin, asagidaki mutasyonlari, da içerebilir: IgG'nin FC bölgesi FCRn tarafindan baglanacak olan modifiye edilmis IgG veya FC fragmanlarini veya bunlarin kisimlarini üretmek için iyi bilinen prosedürlere, örnegin, yere yönlendirilmis mutajeneze ve benzerlerine, göre modifiye edilebilir. Bu tarz modifikasyonlar, örnegin, FcRn temas yerlerinden çikarilan modifikasyonlari ayni zamanda FcRn'yi baglamayi koruyan veya hatta güçlendiren temas yerleri içindeki modifikasyonlari, içerir. Örnegin, insan IgGl Fc'si (Fcyl) içinde asagidaki tek amino asit rezidüleri, FcRn için FC baglama afinitesinin anlamli kaybi olmadan sübstüte edilebilir: P238A, 8239A, numarasinda alanin ile sübstüte edilmis dogal-tip prolini temsil eder. Alanine ek olarak, diger amino asitler yukarida belirtilen pozisyonlarda dogal-tip amino asitler için sübstüte edilebilir.
Mutasyonlar, natif Fc'den ayri yüzden fazla FcRn baglama partneri vererek tek basina FC içine uygulanabilir. Ilave olarak, bu münferit mutasyonlarin ikisinin, üçünün veya daha fazlasinin kombinasyonlari, yüzlerce daha fazla FcRn baglama partneri vererek birlikte uygulanabilir. Bu mutasyonlarin bazilari, FcRn baglama partnerine yeni islevsellik saglayabilir. Örnegin, bir uygulama, bir hayli korunmus N- glikosilasyon yerini çikararak, N297A'yi katar. Bu mutasyonun etkisi, FcRn için afiniteden taviz vermeden, immünojenisiteyi azaltmak, böylece FcRn baglama partnerinin dolasimdaki yari- ömrünü arttirmaktir ve FcRn baglama partnerini FcyRI'i, FcyRIIA'yi, FcyRIIB'yi ve FcyRIIIA'yi baglayamayan hale getirmektir (Routledge et al., 1995, Transplantation 60:847, Ilave olarak, en az üç insan Fc gama reseptörünün, alt mentese bölgesi içinde, genellikle 234-237 arasindaki amino asitlerde, dolayi, yeni islevselligin ve potansiyel azaltilmis immünojenisitenin bir baska örnegi, örnegin, insan IgGl'inin 233-236 arasindaki "ELLG" amino asitlerini (bir amino asit silinmesi ile) IgG2'den karsilik gelen "PVA" dizisine degistirme ile oldugu gibi, bu bölgenin mutasyonlarindan ortaya çikabilir. Bu tarz mutasyonlar uygulandiginda, çesitli efektör fonksiyonlara aracilik eden FcyRI'in, FcyRII'nin ve FcyRIII'ün IgGl'i baglamayacagi gösterilmistir (Ward ve10 Ghetie, Therapeutic Immunology 2:77 (1995) ve Armour et al., mutasyonlardan kaynaklanan yeni islevselligin bir ilave örnegi olarak, FcRn için afinite bazi durumlarda dogal-tip için afinitenin ötesine arttirilabilir. Bu arttirilmis afinite, bir arttirilmis "birlesme" hizini, bir azaltilmis "ayrilma" hizini veya hem bir arttirilmis "birlesme" hizini hem de bir azaltilmis "ayrilma" hizini, yansitabilir. FcRn için bir arttirilmis afinite sagladigina inanilan mutasyonlar, örnegin, Pc kismi (bir kimerik polipeptidin Fc kismi), TABLO 2'de gösterilen Fc amino asit dizisine (SEQ 1D NO: 2'nin 1458 ila 1684 arasindaki amino asitlerine veya SEQ ID NO: 6'nin 2352 ila 2578 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdes olabilir. Fc kismi (bir kimerik polipeptidin Fc kismi), TABLO 2'de gösterilen Fc amino asit dizisine (SEQ ID NO: Z'nin 1458 ila 1684 arasindaki amino asitlerine ve SEQ ID NO: 6'nin 2352 ila 2578 arasindaki amino asitlerine) özdes olabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "hibrit" polipeptitler ve proteinler, bir kimerik polipeptidin bir ikinci polipeptit ile bir kombinasyonu anlamina gelir. Bir hibrit içinde kimerik polipeptit ve ikinci polipeptit birbiri ile protein-protein etkilesimleri, örnegin, yük-yük etkilesimleri veya hidrofobik etkilesimler, vasitasiyla iliskilendirilebilir. Bir hibrit içinde kimerik polipeptit. ve ikinci polipeptit, birbiri ile disülfit veya baska kovalent bag (baglar) vasitasiyla 7,348,004 Numarali ABD Patentleri. Ikinci polipeptit, ayni kimerik polipeptidin bir ikinci kopyasi olabilir veya bu bir özdes-olmayan kimerik polipeptit olabilir. Bakiniz, örnegin, Bir uygulamada, ikinci polipeptit bir Fc içeren bir polipeptittir. Bir baska uygulamada, kimerik polipeptit, bir kimerik FVIII-Fc polipeptididir ve ikinci polipeptit esas olarak Fc'den, örnegin, araya giren baglayici dizi olmadan, insan IgGl'in dimerik Fc alanina kaynastirilmis rekombinant B- alani silinmis insan FVIII'inin (BDD-rFVIII) bir tek molekülünden olusan bir rFVIIIFc rekombinant füzyon proteini olan, Örnek 1'in hibrit polipeptidinden, olusur. Bu hibrit polipeptit burada, FVIIIFC monomerik Fc füzyon proteini, FVIIIFc monomer hibridi, monomerik FVIIIIFC hibridi ve FVIIIFC monomer-dimeri, olarak ifade edilir. Bakiniz, Örnek 1, Sekil 1 ve TABLO 2A. Örnekler, bu hibrit polipeptit için preklinik ve klinik veriler saglar.
Bir hibrit içindeki ikinci polipeptit, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2A(ii)'de gösterilen bir amino asit dizisine (SEO ID NO: 4'ün 21 ila 247 arasindaki amino asitlerine) en az TABLO 2A(ii)'de gösterilen bir amino asit dizisine (SEO ID NO: 4'ün 1 ila 247 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdes olan bir dizi içerebilir veya esas olarak bu diziden olusabilir. Ikinci polipeptit, bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2A(ii)'de gösterilen bir amino asit dizisine (SEO ID NO: 4'ün 21 ila 247 arasindaki amino asitlerine) Özdes olan veya bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2A(ii)'de gösterilen bir amino asit dizisine (SEO ID NO: 4'ün 1 ila 247 arasindaki amino asitlerine) özdes olan bir dizi içerebilir veya esas olarak bu diziden olusabilir.
SEKIL 1, bir B alani silinmis FVIII-Fc kimerik polipeptidinin yapisini ve bunun bir Fc polipeptidi olan bir ikinci polipeptit ile iliskisini gösteren bir semadir. Bu hibridi elde etmek için, insan rekombinant B-alani silinmis FVIII'in kodlayan dizisi, FVIII-spesifik primerler kullanilarak insan karacigeri poli A. RNA'sindan (Clontech) ters transkripsiyon- polimeraz zincir reaksiyonu (RT-PCR) ile elde edilmistir.
FVIII dizisi, FVIII için natif sinyal dizisi içerir. B-alani silinmesi, toplamda 2682 bp'lik bir silinme için serin 743 (8743; 2287 bp) ila glutamin araligindadir. Sonrasinda, insan rekombinant Fc'sini kodlayan dizi, Fc spesifik primerler kullanilarak bir insan lökosit CDNA kütüphanesinden (Clontech) RT-PCR. ile elde edilmistir.
Primerler, B-alani silinmis FVIII dizisinin araya giren baglayici olmadan FC dizisinin N-ucuna dogrudan kaynastirildigi sekilde tasarlanmistir. FVIIIFC DNA dizisi, CMV promotörü kontrolü altinda memeli ikili ekspresyon vektörü pBUDCE içine klonlanmistir. Fare Igk sinyal dizisini içeren bir ikinci özdes Fc dizisi, RT-PCR ile elde edilmistir ve ekspresyon vektörü pBUDCE4.1 içine ikinci promotörün, EFld, downstream kismina klonlanmistir. rFVIIIFc ekspresyon vektörü, Lipofectamine 2000 transfeksiyon reaktifi (Invitrogen) kullanilarak insan embriyonik böbrek 293 hücrelerine (HEK293H; Invitrogen) transfekte edilmistir.
Kararli klonal hücre hatlari, Zeocin (Invitrogen) ile seleksiyon ile üretilmistir. Bir klonal hücre hatti, 3C4-22, in vivo karakterizasyon için FVIIIFC üretmek için kullanilmistir. Rekombinant FVIIIFC Biogen Idec'te (Cambridge, MA) üretilmistir ve saflastirilmistir (McCue et al., 2009).
Yukarida tarif edilen transfeksiyon stratejisinin üç ürün, yani, monomerik rFVIIIFc hibritleri, dimerik rFVIIIFc hibritleri ve dimerik Fc, üretmesi beklenmistir. Bununla birlikte, esas olarak bu hücrelerden sartli vasat içinde saptanmis dimerik rFVIIIFc yoktur. Daha ziyade, sartli vasat, Pc ve monomerik rFVIIIFc içermistir. Dimerik rFVIIIFc'nin boyutunun çok büyük olmasi ve hücreden etkili salgilanmasinin önlenmis olmasi olasidir. Bu sonuç; bu, monomerin saflastirilmasini üç proteinin tümünün de bulunmasina kiyasla daha az karmasik hale getirdiginden, yararli olmustur. Bu çalismalarda kullanilan materyal, yaklasik olarak 9000 IU/mg olan bir spesifik aktiviteye sahiptir.
Burada kullanildigi sekliyle, "dozlam araligi", bir süjeye uygulanmakta olan çoklu dozlar arasinda geçen zamanin miktari anlamina gelir. Dozlani araliginin karsilastirilmasi, bir tek süjede veya süjelerin bir popülasyonunda gerçeklestirilebilir ve akabinde popülasyonda elde edilen ortalama hesaplanabilir.
Bir kimerik FVIII polipeptidi, örnegin, mevcut açiklamanin bir kimerik FVIII-Fc polipeptidi (bir FVIII içeren bir polipeptidi veya bir hibridi) uygulandiginda dozlam araligi, FVIII-olmayan kismi bulunmayan, örnegin, Fc kismi bulunmayan, söz konusu FVIII'in (söz konusu, FVIII'den olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu için gerekli olan dozlam araligina kiyasla en az yaklasik bir buçuk kat daha uzun olabilir. Dozlam araligi, FVIII-olmayan kismi bulunmayan, örnegin, FC kismi bulunmayan, söz konusu FVIII'in (söz konusu FVIII'den olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu için gerekli olan dozlam araligina kiyasla en az yaklasik bir buçuk ila alti kat daha uzun, bir buçuk ila bes kat daha uzun, bir buçuk ila dört kat daha uzun, bir buçuk ila üç kat daha uzun veya bir buçuk ila iki kat daha uzun olabilir.
Dozlam araligi, FVIII-olmayan kismi olmayan, örnegin, Fc kismi olmayan, söz konusu FVIII'in (söz konusu FVIII'den olusan bir polipeptidin) bir es-deger dozu için gerekli olan dozlam araligina kiyasla en az yaklasik bir buçuk, iki, iki buçuk, üç, üç buçuk, dört, dört buçuk, bes, bes buçuk veya alti kat daha uzun olabilir. Dozlam. araligi, yaklasik her üç, dört, bes, alti, yedi, sekiz, dokuz, on, on bir, on iki, on üç veya on dört günde veya daha uzun sürede bir olabilir. Dozlam araligi, en az yaklasik bir buçuk ila 5, bir buçuk, 2, 3, 4 veya 5 gün veya daha uzun olabilir. Talep-edildiginde alinan tedavi için, söz konusu kimerik polipeptidin veya hibridin sürede bir keredir. bir keredir veya haftada üç keredir veya haftada en fazla üç keredir. Bir baska uygulamada, etkili doz 65 IU/kg'dir ve dozlam araligi, haftada bir keredir veya her 6-7 günde bir keredir. Dozlar, gerektigi sürece (örnegin, en az 10, 20, 28, veya 10 yil), tekrarli bir sekilde uygulanabilir.
Belirli uygulamalarda, talep-edildiginde alinan tedavisi için edildiginde alinan tedavi, bir kerelik dozlam. veya tekrarli dozlam olabilir. Tekrarli dozlam için, dozlam araligi, her 12- 36-48 saatte bir veya her 48-72 saatte bir olabilir. Bu dogrultuda, "tekrar dozlam" terimi, bir zaman periyodu boyunca birden fazla dozun uygulanmasini ifade eder. Bir "tekrarli dozlam" rejimi altinda uygulanan dozlar, "tekrarli dozlar" olarak ifade edilir. Bazi uygulamalarda, tekrarli dozlarin her biri, bir digerinden en az yaklasik 12 saat, en az yaklasik 24 saat, en az yaklasik iki gün, en az yaklasik üç gün, en az yaklasik dört gün, en az yaklasik bes gün, en az yaklasik alti gün, en az yaklasik yedi gün, en az yaklasik sekiz gün, en az yaklasik dokuz gün, en az yaklasik on gün, en az yaklasik 11 gün, en az yaklasik. 12 gün, en az yaklasik 13 gün, en az yaklasik 14 gün veya en az yaklasik 15 gün ile ayrilir. Bazi uygulamalarda, tekrarli dozlar, en az yaklasik iki doz, en az yaklasik bes doz, en az yaklasik 10 doz, en az yaklasik 20 doz, en az yaklasik 25 doz, en az yaklasik 30 doz, en az yaklasik 35 doz, en az yaklasik 40 doz, en az yaklasik 45 doz, en az yaklasik 50 doz, en az yaklasik 55 doz, en az yaklasik 60 doz, en az yaklasik 65 doz veya en az yaklasik 70 doz içerir. Tekrarli dozlar, yaklasik. iki doz ila yaklasik 100 doz, yaklasik bes doz ila yaklasik 80 doz, yaklasik 10 doz ila yaklasik 70 doz, yaklasik 10 doz ila yaklasik 60 doz, yaklasik doz ila yaklasik 50 doz, yaklasik 15 doz ila yaklasik 40 doz, yaklasik 15 doz ila yaklasik 30 doz, yaklasik 20 doz ila yaklasik 30 doz veya yaklasik 20 doz ila yaklasik 40 doz içerir. Tekrarli dozlar, yaklasik iki doz, yaklasik bes doz, yaklasik 80 doz, yaklasik 90 doz veya yaklasik 100 doz içerir.
Bazi uygulamalarda, tekrarli dozlardan sonra, süjeye ilaveten pihtilasma faktörünü içeren ancak bir FC kismi içermeyen bir pihtilasma faktörü proteini içeren bir farmasötik bilesim uygulanir. Bu pihtilasma faktörü, bir tam boy veya matür pihtilasma faktörü olabilir. Bazi uygulamalarda, bu tarz pihtilasma faktörü, ADVATE®, RECOMBINATE®, KOGENATE FS®, HELIXATE FS®, XYNTHA®/REFACTO AB®, HEMOFIL-M®, MONARC-M®, MONOCLATE-P®, HUMATE-P®, ALPHANATE®, KOATE-DVI® VE HYATE:C® olabilir. birbiri ile degistirilebilir bir sekilde kullanilir. "Uzun- süre etkili pihtilasma faktörleri" veya "uzun süre etki eden pihtilasma faktörleri" (örnegin, uzun-süre etkili FVII, uzun etkili FVIII ve uzun-süre etkili FIX) pihtilasma faktörleridir, örnegin, bir referans pihtilasma faktörüne, Örnegin, FVII'ye, FVIII'e veya FIX'a kiyasla, bir arttirilmis (burada ayrica tim, tip beta, eliminasyon yari-ömrü ve HL olarak da ifade edilen) yari-ömre sahip olan FVII'dir, FVIII'dir veya FIX'dur. "Daha uzun" FVIII aktivitesi, teknikte bilinen herhangi bir yöntem, Örnegin, bir PTT analizi, kromojenik› analiz, ROTEM, TGA ve vb., ile ölçülebilir. Bir uygulamada, "daha. uzun" FVIII aktivitesi, 'Tuzbeta (aktivite) ile gösterilebilir. Bir baska uygulamada, "daha uzun" FVIII aktivitesi, plazma içinde bulunan FVIII antijeninin düzeyi ile, örnegin, Tu2beta (antijen) ile, gösterilebilir. Diger uygulamalarda, uzun-süre etkili veya uzun süre etki eden FVIII polipeptidi bir dogal-tip FVIII polipeptidine, REFACTO®'ya veya ADVATE®'ye kiyasla bir koagülasyon kaskadinda daha uzun çalisir, örnegin, daha uzun bir periyot boyunca aktiftir.
Bir uzun-süre etkili pihtilasma faktörünün, örnegin, bir uzun- süre etkili FVIII'in, arttirismis yari-ömrü, bir veya birden fazla pihtilasmama faktörü polipeptidine, mesela, örnegin, Fc'ye, füzyondan kaynaklanabilir. Arttirilmis yari-ömür, bir veya birden fazla modifikasyondan, mesela, örnegin, pegilasyondan, kaynaklanabilir. Emsal uzun-süre etkili pihtilasma faktörü (örnegin, uzun-süre etkili FVIII polipeptitleri), örnegin, kimerik pihtilasma faktörlerini (örnegin, FC içeren kimerik FVIII polipeptitlerini) ve albümin içeren kimerik pihtilasma faktörlerini (örnegin, albümin içeren kimerik FVIII polipeptitlerini), içerir. Ilave emsal uzun-süre etkili pihtilasma faktörleri (örnegin, uzun-süre etkili FVIII polipeptitleri), örnegin, pegile edilmis pihtilasma faktörlerini (örnegin, pegile edilmis FVIII'i), Örnegin, bir uzun-süre etkili kimerik pihtilasma faktörü (örnegin, bir uzun-süre etkili kimerik FVIII polipeptidi) durumunda, "referans" polipeptit, esas olarak kimerik polipeptidin pihtilasma faktörü kismindan olusan bir polipeptittir. Örnegin, bir uzun-süre etkili FVIII durumunda, referans polipeptit, kimerik polipeptidin FVIII kismidir, örnegin, FC kismi olmayan veya albümin kismi olmayan ayni FVIII kismidir. Benzer sekilde, bir modifiye edilmis FVIII durumunda referans polipeptit, modifikasyonu olmayan ayni FVIII'dir, örnegin, pegilasyonu olmayan bir FVIII'dir.
Bazi uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir süjeye uygulandiginda asagidaki özelliklerin birini veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede yaklasik l4-4l,3 saat olan bir ortalama söz konusu süjede yaklasik 1,22-5,l9 mL/saat/kg veya daha az olan bir klirens (CL) (aktivite); söz konusu süjede yaklasik 11-26,4 saat olan bir timbeta (aktivite); söz konusu süjede her bir IU/kg için yaklasik l,38- (aktivite; gözlemlenen); söz konusu süjede yaklasik 37,7-79,4 mL/kg olan bir Vss (aktivite) ve söz konusu süjede her bir IU/kg için yaklasik l9,2-8l,7 Bazi uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birini veya birden fazlasina sahiptir: her bir lU/kg için 1,38 lU/dL'nin üstünde olan bir inkremental geri-kazanim (K degeri) (aktivite; gözlemlenen); her bir IU/kg için en az yaklasik 1,5, en az yaklasik 1,85 veya en az yaklasik 2,46 IU/dL olan bir inkremental geri- kazanim (K degeri) (aktivite; gözlemlenen). söz konusu hasta popülasyonunda yaklasik 2,33 ± (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda yaklasik 1,8-; söz konusu hasta popülasyonunda modifikasyonu olmayan söz konusu FVIII'i içeren bir polipeptidin klirensinin yaklasik %65'i olan bir ortalama klirens (CL) (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda en az yaklasik 26,3 ± 8,33 saat olan bir ortalama kalma süresi (MRT) (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda en az yaklasik 25,9 - 26,5 saat olan bir ortalama MRT (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda modifikasyonu olmayan söz konusu FVIII'i içeren bir polipeptidin ortalama MRT'sine kiyasla yaklasik 1,5 kat daha uzun olan bir ortalama MRT (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda yaklasik 18,3 ± 5,79 saat olan bir ortalama tuzbeta (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda yaklasik 18 - 18,4 saat olan bir ortalama tinbeta (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda modifikasyonu olmayan söz konusu FVIII'i içeren bir polipeptidin ortalama tlmbeta'sina kiyasla yaklasik 1,5 kat daha uzun olan bir ortalama timbeta (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda her bir IU/kg için yaklasik 2,01 ± 0,44 IU/dli olan bir inkremental geri- kazanim (K degeri) (aktivite; gözlemlenen): söz konusu hasta popülasyonunda her bir IU/kg için yaklasik 1,85 - 2,46 IU/dL olan bir inkremental geri- kazanim (K degeri) (aktivite; gözlemlenen): söz konusu hasta popülasyonunda modifikasyonu olmayan söz konusu FVIII'i içeren bir polipeptidin ortalama inkremental geri-kazaniminin yaklasik %90'1 olan bir inkremental geri-kazanim (K degeri) (aktivite; gözlemlenen): söz konusu hasta popülasyonunda yaklasik 55,1 ± 12,3 mL/kg olan bir ortalama Vß (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda yaklasik 45,3 - 56,1 mL/kg olan bir ortalama Vss (aktivite); söz konusu hasta popülasyonunda her bir IU/kg için yaklasik 49,9 ± 18,2 IU*sa/dL olan bir AUC/doz; söz konusu hasta popülasyonunda her bir IU/kg için yaklasik 44,8 - 57,6 IU*sa/dL olan bir AUC/doz.
Diger uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birini veya birden fazlasina sahiptir: kimerik polipeptit uygulanan söz konusu süjede bir OMMÄOBS, bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulandiginda bir süjedeki CmMG_OBS ile karsilastirilabilirdir; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 60,5 IU/dL, yaklasik 60,5 ± 1 IU/dL, yaklasik 60,5 ± 2 IU/dL, yaklasik 60,5 ± 3 IU/dL, yaklasik lU/dL, yaklasik 60,5 ± 7 IU/dL, yaklasik 60,5 ± 8 IU/dL, yaklasik 60,5 ± 9 IU/dL veya yaklasik 60,5 ± 10 IU/dL olan bir Cmaw_OBS; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 53,1 - 69 IU/dL olan bir Cmmß_OBS; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 119 IU/dL, yaklasik 119 ± 1 IU/dL, yaklasik ± 18 IU/dL olan bir Cmnß_OBS; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 103 - 136 IU/dL olan bir Cmmw_OBS; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 76,5 IU/dL, yaklasik 76,5 ± 1 yaklasik 76,5 ± 4 IU/dL, yaklasik 76,5 ± 5 IU/dL, yaklasik yaklasik 76,5 ± 15 IU/dL olan bir CmM$_OBS; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile Ölçüldügü üzere yaklasik 64,9 - 90,1 IU/dL olan bir Cmaks_OBS; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 182 IU/dL, yaklasik 182 ± 2 yaklasik 182 ± 8 IU/dL, yaklasik 182 ± 10 IU/dL, yaklasik lU/dL olan bir Cmmß_OBS veya söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile veya yaklasik 146 ± 10 IU/dL olan bir Cmmß_OBS.10 Belirli uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birine veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulanan bir süjedeki tip betaya (aktivite) kiyasla en az olan bir tip beta (aktivite); söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz tuz beta (aktivite); söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz ölçüldügü üzere yaklasik 14,3 - 24,5 saat olan bir beta (aktivite); söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz (aktivite); söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz ölçüldügü üzere yaklasik 13,8 - 20,1 saat olan bir beta (aktivite); söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz (aktivite) veya söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 14,3 - 27,5 saat olan bir tuz beta (aktivite).
Belirli uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birine veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulanan bir süjedeki klirense kiyasla 0,51, 0,52, 0,53, daha düsük olan bir klirens (CL) (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik. 1,68 mL/saat/kg, 1,68 ± 0,1 mL/saat/kg, (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 1,31 - 2,15 mL/saat/kg olan bir klirens (CL) (aktivite): söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldugü üzere yaklasik 2,32 mL/saat/kg, 2,32 ± 0,1 mL/saat/kg, (aktivite);söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik› 1,64 - 3,29 mL/saat/kg olan bir klirens (CL) (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 1,49 mL/saat/kg, 1,49 ± 0,1 mL/saat/kg' veya 1,49 ± 0,7 mL/saat/kg olan bir klirens (CL) (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 1,16 - 1,92 mL/saat/kg olan bir klirens (CL) (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 1,52 mL/saat/kg, 1,52 ± 0,1 mL/saat/kg' veya 1,52 ± 0,7 mL/saat/kg olan bir klirens (CL) (aktivite) veya söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 1,05-2,20 mL/saat/kg olan bir klirens (CL) (aktivite).
Bazi uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birine veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede, bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile Ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulanan bir süjedeki MRT'ye kiyasla en az 1,46, 1,47, 1,93 kat daha yüksek olan bir MRT; söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 27 saat, 27 :E 1 saat, 27 ± 2 olan bir MRT (aktivite); söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 20,6 - 35,3 saat olan bir MRT (aktivite); söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 23,9 - 28,5 saat olan bir MRT (aktivite); söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 19,8 - 28,9 saat olan loir MRT (aktivite) veya söz konusu süjede bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 20,5 - 39,6 saat olan bir MRT (aktivite).
Diger uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birine veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulanan bir süjedeki Inkremental Geri-Kazanim ile karsilastirilabilir olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her` bir IU/kg için yaklasik 2,44 IU/dL, her` bir yaklasik 2,44 ± 0,2 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik bir IU/kg için yaklasik 2,44 ± 0,6 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 2,44 ± 0,7 IU/dL, her bir lU/kg için yaklasik 2,44 ± 0,8 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik her bir IU/kg için yaklasik 2,44 ± 1,2 IU/dL olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2,12 - 2,81 IU/dL olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1,83 IU/dL, her` bir yaklasik 1,83 ± 0,2 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik bir IU/kg için yaklasik 1,83 ± 0,6 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1,83 ± 0,7 IU/dL, her bir lU/kg için yaklasik 1,83 ± 0,8 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1,59 - 2,10 IU/dL olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldugü üzere her bir IU/kg için yaklasik 3,09 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 3,09 ± 0,1 IU/dL, her bir10 yaklasik 3,09 ± 0,3 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik bir IU/kg için yaklasik 3,09 ± 0,7 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 3,09 ± 0,8 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 3,09 ± 0,9 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik her bir IU/kg için yaklasik 3,09 ± 1,3 IU/dL olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2,80 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 2,80 ± 0,1 IU/dL, her bir yaklasik 2,80 ± 0,3 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik bir IU/kg için yaklasik 2,80 ± 0,7 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 2,80 ± 0,8 IU/dL, her bir lU/kg için yaklasik 2,80 ± 0,9 IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik olan bir inkremental geri-kazanim; söz konusu süjede, yaklasik 25 lU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2,61-3,66 söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile Ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2,24-3,50 Daha baska uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda asagidaki özelliklerin birine veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulanan bir süjedeki Vw (aktivite) ile karsilastirilabilir olan bir Vw (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügu üzere yaklasik 39,3 - ; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 55,2 - ; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere yaklasik 30,4-42,3 mL/kg olan bir VSS (aktivite); söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile 43,4 ± 16 mL/kg olan bir Vss (aktivite) veya söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile Ölçüldügü üzere yaklasik 38,2-49,2 mL/kg olan bir VSS (aktivite).
Daha baska uygulamalarda, uzun-süre etkili FVIII bir hasta popülasyonuna uygulandiginda, asagidaki özelliklerin birine veya birden fazlasina sahiptir: söz konusu süjede, bir bir evreli (aPTT) analiz veya bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügünde tam-boy, matür FVIII'den olusan bir polipeptidin ayni miktari uygulanan bir süjedeki AUCnw'ye kiyasla en az 1,45 1,46, olan bir AUCnw; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1440 ± 316 sa*IU/dL olan bir AUCINF; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1160 - 1880 sa*IU/dL olan bir AUCnw; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1480 sa*IU/dL, her bir lU/kg için yaklasik 1480 ± lOO sa*lU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1480 ± 200 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1480 ± 300 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1480 ± 700 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1480 ± 800 sa*IU/dL, her bir için yaklasik 1480 ± 1000 sa*IU/dL olan bir AUCnw; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2910 ± 1320 sa*IU/dL olan bir AUCmF; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1980 - 3970 sa*1U/dL olan bir AUCwF; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir bir evreli (aPTT) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2800 sa*lU/dL, her bir lU/kg için yaklasik 2800 ± lOO sa*1U/dL, her bir IU/kg için yaklasik. 2800 ± 200 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 2800 ± 300 sa*1U/dL, her bir IU/kg için yaklasik sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 2800 ± 700 sa*IU/dL,10 her bir IU/kg için yaklasik 2800 ± 800 sa*IU/dL, her bir için yaklasik 2800 ± 1000 sa*IU/dL olan bir AUCmF; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1660 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1660 ± 100 sa*IU/dL, her bir için yaklasik› 1660 ± 300 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1660 ± 400 sa*IU/dL, her bir lU/kg için yaklasik sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1660 ± 800 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 1660 ± 900 sa*IU/dL veya her bir IU/kg için yaklasik 1660 ± 1000 sa*IU/dL olan bir AÜCINF; söz konusu süjede, yaklasik 25 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 1300 - 2120 sa*IU/dL olan bir AUCnw; söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 4280 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 4280 ± 100 sa*IU/dL, her bir lU/kg için yaklasik 4280 ± 200 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasikr 4280 ± 300 sa*IU/dlu her bir IU/kg için yaklasik 4280 ± 400 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 4280 ± 800 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 4280 ± 900 sa*IU/dL, her bir için yaklasik 4280 ± 1100 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik 4280 ± 1200 sa*IU/dL, her bir IU/kg için yaklasik sa*IU/dL 'veya her bir IU/kg için yaklasik 4280 1600 sa*IU/dL olan bir AUCnw veya söz konusu süjede, yaklasik 65 IU/kg kimerik polipeptit uygulandiginda, bir iki evreli (kromojenik) analiz ile ölçüldügü üzere her bir IU/kg için yaklasik 2960 - 6190 sa*IU/dL olan bir AUCmF.
Burada kullanildigi sekliyle, "talep-edildiginde alinan tedavi", kisa bir zaman süreci içinde gerçeklesmesi amaçlanan ve var olan bir rahatsizliga, örnegin, bir kanama epizoduna veya bir algilanmis ihtiyaca, örnegin, planlanmis cerrahiye, yanit olarak yapilan tedavi anlamina gelir. "Talep-edildiginde alinan tedavi" ve "epizodik tedavi" terimleri birbiri ile degistirilebilir bir sekilde kullanilir. Talep-edildiginde alinan (epizodik) tedavi gerektirebilen rahatsizliklar, örnegin, bir kanama epizodunu, HemArtrozu, kas kanamasini, oral kanamayi, hemoraji, kaslarin içine hemoraji, oral hemoraji, travmayi, travma kapitisi, gastrointestinal kanamayi, intrakraniyal hemoraji, intra-abdominal hemoraji, intratorakik hemoraji, kemik kirilmasini, santral sinir sistemi kanamasini, retrofarinjiyal bosluk içine kanamayi, retroperitoneal bosluk içine kanamayi veya illiopsoas kilif içine kanamayi, içerir. Süjenin, cerrahi profilaksi, peri- operatif yönetim veya cerrahi için tedaviye ihtiyaci olabilir.
Bu tarz cerrahiler, örnegin, minör cerrahiyi, majör cerrahiyi, dis Çekilmesini, tonsilektomiyi, kasik herniotomisini, sinovektomiyi, tüm diz replasmanini, kraniyotomiyi, osteosentezi, travma cerrahisini, intrakraniyal cerrahiyi, intra-abdominal cerrahiyi, intratorakik cerrahiyi veya eklem replasmani cerrahisini, içerir.
Bir uygulamada, talep-edildiginde alinan (epizodik) tedavi, bir tek dozda kanamalarin (örnegin, spontan kanamalarin) fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, fazlasini, lOO'ünü, %90-95'ini veya %95-lOO'ünü çözer. Bir baska uygulamada, kanama epizodlarinin %80'inden fazlasi (%8l'inden fazlasi, %82'sinden fazlasi, %83'ünden fazlasi, %84'ünden fazlasi, %85'inden fazlasi, %86'sindan fazlasi, %87'sinden fazlasi, %88'inden fazlasi, %89'undan fazlasi, %90'indan fazlasi, %91'inden fazlasi, %92'sinden fazlasi, %93'ünden fazlasi, %94'ünden fazlasi, %95'inden fazlasi, %96'sindan fazlasi, %97'sinden fazlasi, %98'inden fazlasi veya %lOO'ü) hekimler tarafindan mükemmel veya iyi olarak derecelendirilir.
Diger uygulamalarda, kanama epizodlarinin %5'inden fazlasi, (%6'sindan fazlasi, %7'sinden fazlasi, %8'inden fazlasi, veya %5-20'si, %5-15'i, %S-lO'u, %lO-ZO'si veya %lO-lS'i talep-edildiginde alinan (epizodik) tedaviden sonra hekimler tarafindan vasat olarak derecelendirilir. degistirilebilir bir sekilde kullanilir ve kovalent olarak baglanmis amino asit rezidülerinden olusan bir polimerik bilesigi ifade eder. bir sekilde kullanilir ve kovalent olarak baglanmis nükleotid rezidülerinden olusan bir polimerik bilesigi ifade eder.
Polinükleotidler, DNA, cDNA, RNA, tek sarmalli veya çift sarmalli, vektörler, plazmidler, faj veya virüsler olabilir.
Polinükleotidler, örnegin, TABLO 2'nin polipeptitlerini sifreleyen TABLO 1'de olanlari, içerir (bakiniz, TABLO l).
Polinükleotidler ayrica, Örnegin, TABLO l'in polinükleotidlerinin fragmanlarini, örnegin, TABLO 2'nin polipeptitlerinin fragmanlarini, örnegin, FVIll'i, Fc'yi, sinyal dizisini, 6His'i ve TABLO 2'nin polipeptidilerinin diger fragmanlarini, sifreleyenleri, de içerir.
Burada kullanildigi sekliyle, "profilaktik tedavi", bir süjenin plazmasinda FVIII aktivitesinin düzeyini arttirmak için bir FVIII polipeptidini bir süjeye çoklu dozlar halinde bir zaman süreci boyunca uygulama anlamina gelir. Arttirilmis düzey spontan kanamanin insidansini azaltmak için veya örnegin, bir beklenmedik yaralanma olayinda, kanamayi önlemek için yeterli olabilir. Profilaktik tedavi sirasinda, süjede plazma proteini düzeyi bu süje için baseline düzeyinin altina veya siddetli hemofiliyi karakterize eden FVIII düzeyinin altina ( Bir uygulamada, profilaksi rejimi, örnegin, her bir hasta için PK 'verilerinii belirleme ve FVIII aktivitesininr %l-3'lük Ibir dip düzeyini idame ettiren bir dozlam araliginda mevcut bulusun FVIII'ini uygulama ile, münferit hastaya "uygun hale getirilir". Ayarlamalar, bir süje yaklasik iki-aylik bir periyot boyunca. 22 spontan kanama epizodu olarak. tanimlanan kabul edilemez kanama epizodlarina sahip oldugunda, yapilabilir. Bu durumda, ayarlama %3-5'lik dip düzeylerini hedef alacaktir. Bir baska uygulamada, profilaktik tedavi kanamanin önlenmesi ve kontrolü, kanamanin sürdürülmüs kontrolü, kanamadan sürdürülmüs koruma ve/veya sürdürülmüs yarar ile sonuçlanir. Profilaksi, örnegin, sürdürülmüs koruma son ölçülen zaman noktasina arttirilmis bir AUC (AUC-LAST) ve azaltilmis klirens ile gösterilebilir, bu kisa-süre etkili FVIII'ye kiyasla arttirilmis nihai tl/2 ile sonuçlanir.
Profilaksi kisa-süre etkili FVIII'ye kiyasla daha iyi Gmkw daha iyi Tmmw ve/veya daha büyük ortalama kalma süresi ile gösterilebilir. Bazi uygulamalarda, profilaksi enjeksiyondan (örnegin, son enjeksiyondan) sonra yaklasik 24, 36, 48, 72 veya 96 saat) içinde spontan kanama epizodlari ile sonuçlanmaz. Belirli uygulamalarda, profilaksi haftada bir kere (Örnegin, 65 IU/kg'da) dozlam ile bir yillik olarak hesaplanmis kanama epizodlarinda %30'dan daha büyük (Örnegin, 90'dan daha büyük, örnegin, %50'den daha büyük) ortalama düsüs ile sonuçlanir.
Burada kullanildigi sekliyle, "süje", bir insan birey anlamina gelir. Süje, güncel olarak bir kanama bozuklugundan muzdarip olan veya bu tarz bir tedaviye ihtiyaci olmasi beklenen bir hasta olabilir. Bazi uygulamalarda, süje daha önceden hiç pihtilasma faktörü ile tedavi edilmemistir (yani, süje bir önceden tedavi edilmemis süjedir veya önceden tedavi edilmemis hastadir). Bazi uygulamalarda, süje, bir fetüstür ve yöntemler kimerik polipeptidi fetüsün annesine uygulamayi içerir ve süjeye uygulama anneden plasentaya gerçeklesir. Bazi uygulamalarda, süje bir çocuktur veya bir eriskindir. Bazi uygulamalarda, süje, bir yasin altinda olan, iki yasin altinda olan, üç yasin altinda olan, dört yasin altinda olan, bes yasin altinda olan, alti yasin altinda olan, yedi yasin altinda› olan, sekiz yasin altinda› olan, dokuz yasin altinda olan, on yasin altinda olan, on bir yasin altinda olan veya on iki yasin altinda olan bir çocuktur. Bazi uygulamalarda, çocuk bir yasindan küçüktür. Bazi uygulamalarda, çocuk veya eriskin süje, bir kanama bozuklugu gelistirir, burada kanama bozuklugunun semptomlarinin baslamasi, bir yasindan sonradir.
Bazi uygulamalarda, kimerik› polipeptidin süjeye uygulanmasi, pihtilasma faktörüne karsi bir hümoral immün yanittan, bir hücre-aracili immün yanittan veya hem bir humoral immün yanittan hem de bir hücre-aracili immün yanittan seçilen bir immün yanitin gelistirilmesini önlemek, inhibe etmek veya azaltmak için yeterlidir.
Burada tarif edilen bazi uygulamalarda, süje, bir inhibitör FVIII immün yanit gelistirmeye yönelik risk altindadir. Bir süje, örnegin, süje önceden bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirdiginden veya güncel olarak bir inhibitör FVIII immun yanitina sahip oldugundan, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olabilir. Bazi uygulamalarda, süje bir plazma-kaynakli FVIII ürünü ile tedaviden sonra bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmistir. Bazi uygulamalarda, süje bir rekombinant FVIII ürünü ile tedaviden sonra bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmistir. Bazi uygulamalarda, süje bir tam-boy FVIII proteini ile tedaviden sonra bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmistir. Bazi uygulamalarda, süje, bir silinme, örnegin, B alaninin bir tam veya parsiyel Silinmesini, içeren FVIII proteini ile tedaviden sonra bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmistir.
Bazi uygulamalarda, süje ADVATEQ, RECOMBINATEQ, KOGENATE FS& HELIXATE FS®, XYNTHA®/REFACTO AB®, HEMOFIL-Np, MONARC-M®, MONOCLATE-P®, HUMATE-P®, ALPHANATE®, KOATE-DVI® ve HYATE:C®'den10 olusan gruptan seçilen bir FVIII ürünü ile tedaviden sonra bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmistir.
Bazi uygulamalarda, bir pihtilasma faktörü, örnegin, FVIII, ile tedaviden sonra immün yanit, pihtilasma faktörüne inhibitör antikorlarin üretilmesi içerir. Bazi uygulamalarda, inhibitör antikor konsantrasyonu, en az 0,6 Bethesda Birimi'dir (BU). Bazi uygulamalarda, inhibitör antikor konsantrasyonu, en az 5 BU'dur. Bazi uygulamalarda, inhibitör antikor konsantrasyonu, en az 0,5, en az 0,6, en az 0,7, en az veya en az 10,0 BU'dur.
Bazi uygulamalarda, bir pihtilasma faktörü, örnegin, FVIII, ile tedaviden sonra immün yanit, bir hücre-aracili immün yaniti içerir. Bazi uygulamalarda, immün yanit bir hücre- aracili immün yaniti içerir. Hücre-aracili immün yanit, IL- 12'den, IL-4'ten ve TNF-d'dan olusan gruptan seçilen bir Bazi uygulamalarda, bir pihtilasma faktörü, Örnegin, FVIII, ile tedaviden sonra immün yanit, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir klinik semptomu içerir: arttirilmis kanama egilimi, yüksek pihtilasma faktörü tüketimi, pihtilasma faktörü terapisine yanitin. olmamasi, pihtilasma faktörü terapisinin azaltilmis etkinligi ve pihtilasma faktörünün kisaltilmis yari-ömrü. Bazi uygulamalarda, süje pihtilasma faktörü geninde bir` mutasyona veya silinmeye sahiptir. Bazi uygulamalarda, süje pihtilasma faktörü geninde bir yeniden- dizilime sahiptir. Bazi uygulamalarda, süjeler siddetli hemofiliye sahiptir. Bazi uygulamalarda, süje pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahiptir. Bazi uygulamalarda, süje interferon terapisi almaktadir. Bazi uygulamalarda, süje antiviral terapi almaktadir.
Bazi uygulamalarda, risk altindaki süje FVIII disindaki bir terapötik proteine önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmistir.
Buna ek olarak, süje ayrica, süjenin bir inhibitör immün yanit gelistirecek olmasi olasiligini arttiran çok sayida çevresel veya genetik faktörün bir sonucu olarak bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda da olabilir.
Bir süjenin bir inhibitör immün yanit gelistirecek olmasi olasiligini arttiran faktörler bilinir. Bakiniz, örnegin, burada ifade edilen, Kasper, C. "Diagnosis and Management of lnhibitors to Factors VIII and IX - An Introductory Discussion for Physicians," Treatment of Hemophilia 34 (2004). Örnegin, inhibitörler hafif veya orta derecedeki hemofiliye kiyasla siddetli hemofilide daha yaygin bir sekilde ortaya çikar (örnegin, %l'den daha az olan FVIII baseline düzeyi). Bakiniz, Avrupa Ilaç Ajansi, FVIII Ürünleri. ve Inhibitörü Gelistirme konusundaki Uzman Toplanti Raporu (Report of Expert Meeting on FVIII Products and Inhibitor Development, European Medicines Genetik faktörlerin bir süjenin bir inhibitör immün yanit gelistirecek olmasi olasiligini arttirabilecegi gerçeginin bir sonucu olarak, FVIII'e veya bir baska terapötik proteine bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan en az bir aile üyesi (örnegin, bir kardesi, ebeveyni, çocugu, büyük ebeveyni, halasi, amcasi veya kuzeni) olan bir süje, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olabilir.
Inhibitörler, FVIII'in ekspresyonunu önleyen genetik mutasyonlari, örnegin, FVIII geninde büyük genetik silinmeleri, prematüre durdurma kodonlarina neden olan yolcu- olmayan (anlamsiz) mutasyonlari ve büyük inversiyonlari, olan hastalarda yaygindir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje bir FVIII geninde bir mutasyon, silinme veya yeniden-dizilim içerir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje FVIII'de FVIII'in T hücrelerini baglamasini önleyen bir mutasyon içerir. Inhibitörlerin FVIII genlerinin büyük yeniden-dizilimleri ile bir birlesmesi gözlemlenmistir.
Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir FVIII-Fc füzyon proteini, bir FVIII geninde bir büyük yeniden-dizilim, örnegin, bir intron 22 inversiyonu veya bir intron l inversiyonu, tasiyan bir süjeye uygulanir. Bazi uygulamalarda, FVIII-Fc, FVIII'de iki büyük yeniden-dizilim tasiyan bir süjeye uygulanir.
Inhibitörlerin bos mutasyonlar ile bir birlesmesi de Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir FVIII-Fc füzyon proteini, bir bos mutasyonu olan bir süjeye uygulanir.
Inhibitörler ayrica, yalnizca bir kaç durumda ekzojen pihtilasma faktörleri ile tedaviden sonra daha yaygin bir sekilde de ortaya çikar. Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, ZOO'den, l75'ten, l50'den, lZS'ten, lOO'den, 75'ten, 50'den, 25'den, 20'den, 15'ten, lO'dan veya 5'ten daha az olan maruziyet günlerine sahip olmustur. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje önceden FVIII ile tedaviye maruz birakilmistir.
Bazi uygulamalarda, süje bir fetüstür. Immün tolerans, bir FVIII kisnu_ ve bir FC kismi içeren. bir kimerik. polipeptidi fetüsün annesine uygulama ile bir fetüste indüklenebilir.
Inhibitörler ayrica, siyahi Afrikali nesilde daha yaygin bir sekilde de ortaya çikar. Bakiniz, örnegin, Kasper, C.
- An Introductory Discussion for Physicians," Treatment of Hemophilia 34 (2004). Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, siyahi Afrikali nesildendir.
FVIII disindaki genlerdeki genetik mutasyonlar ayrica, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile de iliskilendirilmistir. Örnegin, Hap2 içinde, TNF'nin arttirilmis konstitütif ve indüklenebilen transkripsiyon düzeyleri ile iliskilendirilen TNF-d -308G>A polimorfizmi, bir inhibitör` immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile iliskilendirilmistir. Bakiniz, bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, arttirilmis TNF-d ile iliskilendirilmis bir genetik polimorfizme sahiptir. Bazi uygulamalarda, polimorfizm, TNF-d -308G>A polimorfizmidir.
Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, bir ILlO geninde bir polimorfizme, örnegin, ILlO'un arttirilmis salgilanmasi ile iliskili bir polimorfizme, sahiptir. Bazi uygulamalarda, FVIII-Fc, ILlO geninin tesvik bölgesinde ILlOG mikrosatelitininr alel l34'ünü tasiyan bir süjeye uygulanir.
Bakiniz, Astermark et al., Hemostatis, Thrombosis, and Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, azaltismis CTLA-4 (Sitotoksik T-Lenfosit Antijeni 4) ekspresyonu ile iliskili bir genetik polimorfizme sahiptir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, DR15 (HLA-DRlS) veya DQBO602 MHC (Majör10 histokompatibilite kompleksi) Sinif II moleküllerinde bir mutasyona sahiptir. Hemofilisi olan süjelerde bir inhibitör immün yanitin, gelistirilmesi ile iliskilendirilmis diger` MHC Sinif II moleküller, A3'tür, B7'dir, C7'dir, DQAOlOZ'dir, C2'dir, DQAOlO3'tür, DQBO603'tür ve DRl3'tür (bakiniz, Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje, önceden pihtilasma faktörüne, Örnegin, FVIII'e, maruz birakilmamistir. Bazi uygulamalarda, bir pihtilasma faktörüne, örnegin, FVIII'e, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje, FVIII'e maruz birakilmistir. Bazi uygulamalarda, bir pihtilasma faktörüne, örnegin, FVIII'e, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan süje, 150'den daha az, 50'den daha az veya 20'den daha az FVIII maruziyet gününe sahip olmustur. Bazi uygulamalarda, süje en az 1, 2, 3, günlük pihtilasma faktörü maruziyetine sahip olmustur. Bazi pihtilasma faktörü maruziyetine sahip olmustur. Bazi 140 veya 150 günlük pihtilasma faktörü maruziyetine sahip olmustur.
Bazi uygulamalarda, inhibitör immün yanit, bir inhibitör FVIII immün yanitidir. Bazi uygulamalarda, inhibitör FVIII immün yaniti asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir FVIII ürününe yanitta gelismistir: ADVATE®, RECOMBINATE., KOGENATE PSG, HELIXATE FS®, XYNTHAG/REFACTO AB®, HEMOFIL-M®, MONARC-MG, MONOCLATE-P®, HUMATE-P®, ALPHANÄTE®, KOATE-DVI® ve HYATE:C®.
Bazi uygulamalarda, inhibitör immün yanit, bir rekombinant FVIII ürününe yanitta gelistirilmis bir inhibitör FVIII immün yanitidir.
Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, bir immünostimülatör terapi almaktadir veya yakin tarihlerde almistir. Örnegin, inhibitörler ayrica interferon ile tedavi almakta olan HCV pozitif hemofili A hastalarinda ayni zamanda anti-retroviral terapi ile iliskili bir immün rekonstitüsyon enflamatuvar sendroma sahip olan HIV pozitif hemofili A hastalarinda da bildirilmistir. Bakiniz, Avrupa Ilaç Ajansi, FVIII Ürünleri ve Inhibitörü Gelistirme konusundaki Uzman Toplanti Raporu (Report of Expert Meeting on FVIII Products and Inhibitor Development, European Medicines Agency) (28 Subat 2006 - 2 Mart 2006). Böylelikle, bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, interferon terapisi almaktadir. Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje, bir anti-retroviral terapi almaktadir ve bir immün rekonstitüsyon enflamatuvar sendroma sahiptir.
Bir inhibitör FVIII immün yaniti, FVIII tedavisine klinik yanitlara göre belirlenebilir. FVIII inhibitörlerinin klinik gösterimleri bilinir ve örnegin, Kasper, C. "Diagnosis and Management of Inhibitors to Factors VIII and IX - An Hemophilia. 34 (2004), kaynaginda tarif edilir. Örnegin, bir inhibitörün varligi, hemorajlari kontrol etmeyi zorlastirir, böylece FVIII'e immün yanitlarin sinyali bir arttirilmis kanama egilimi, yüksek FVIII tüketimi, FVIII terapisine yanitin olmamasi, FVIII terapisinin azaltilmis etkinligi ve/veya FVIII'in kisaltilmis yari-ömrü ile verilir.
Inhibitör FVIII immün yanitlar ayrica, laboratuvar testleri, örnegin, Bethesda testi veya Bethesda testinin Nijmegan modifikasyonu, kullanilarak da belirlenebilir. En az 0,6 Bethesda Birimi (BU) olan bir düzey, bir yüksek titre10 inhibitör varligini gösterebilir. En az 5 BU'luk bir seviye, yüksek titreli inhibitör varligini gösterebilir. Bolus FVIII infüzyonunun in vivo geri-kazaniminin ve yari-ömrünün ölçümleri de kullanilabilir.
Bazi uygulamalarda, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik risk altinda olan bir süje önceden, en az 0,5, en az en az 8,0, en az 9,0 veya en az 10,0 BU olan bir pik titresi olan bir inhibitör immün yanita sahip olmustur.
Burada saglanan bazi uygulamalarda, yöntemler bir süjenin bir inhibitör FVIII immün yaniti gelistirmeye yönelik risk altinda olup olmadigini belirlemeyi ve süje risk altinda oldugunda bir FVIII kismi ve bir FC kismi içeren bir kimerik. polipeptidi süjeye uygulamayi içerir. Böylelikle, bazi uygulamalarda, yöntemler süjenin FVIII'de bir mutasyona, silinmeye veya yeniden-dizilime sahip olup olmadigini belirlemeyi ve eger sahipse bir kimerik polipeptidi uygulamayi içerir. Bazi uygulamalarda, yöntemler süjenin FVIII proteini üretip üretmedigini belirlemeyi ve eger üretmiyorsa bir kimerik polipeptidi uygulamayi içerir. Bazi uygulamalarda, yöntemler süjenin hafif, orta veya siddetli derecede hemofiliye sahip olup olmadigini belirlemeyi ve süjeler siddetli hemofiliye sahip oldugunda bir kimerik. polipeptidi uygulamayi içerir.
Bazi uygulamalarda, yöntemler süjenin, örnegin, bir immün yanitin klinik gösterimlerini degerlendirme, anti-FVIII antikoru düzeylerini, titrelerini veya aktivitelerini ölçme veya (Örnegin, sitokinlerin düzeylerini ölçme ile) hücre- aracili immün yaniti ölçme ile, bir inhibitör FVIII immün yanitina sahip olup olmadigini belirmeyi ve süje bu indikatörlerin en az birine sahip oldugunda bir kimerik Burada kullanildigi sekliyle, "terapötik doz", burada tarif edildigi üzere bir terapötik amaci basaran bir doz anlamina gelir. FVIII'in gerekli olan dozajinin hesaplanmasi, ortalama olarak, Vücut agirliginin her bir kg'i için 1 IU FVIII'in plazma FVIII aktivitesini yaklasik olarak 2 IU/dL arttirdigina yönelik ampirik bulguya dayanir. Gerekli olan dozaj, asagidaki formül kullanilarak belirlenir: Gerekli olan üniteler = Vücut agirligi (kg) x arzu edilen FVIII artisi (IU/dL veya normalin Mevcut açiklamanin yöntemlerinde kullanilabilen terapötik dozlar, yaklasik 10-100 IU/kg'dir, daha spesifik olarak, 10- Mevcut açiklamanin yöntemlerinde kullanilabilen ilave terapötik dozlar, yaklasik 10 ila yaklasik 150 IU/kg'dir, daha Burada kullanildigi sekliyle, "varyant", orijinal polinükleotidden veya polipeptitten farkli olan, ancak bunun elzem özelliklerini, örnegin, FVIII koagülan aktivitesini veya Fc (FcRn baglama) aktivitesini, muhafaza eden bir polinükleotidi veya polipeptidi ifade eder. Genel olarak, varyantlar orijinal polinükleotide veya polipeptide toplamdan yakindan benzer ve çogu bölgede, Özdestir. Varyantlar, örnegin, orijinal polipeptitlerin polipeptit ve polinükleotid fragmanlarini, silinmelerini, içeri yerlestirmelerini ve modifiye edilmis versiyonlarini, içerir.
Varyant polinükleotidler, örnegin, SEQ II) NO: l'deki, 3'teki veya 5'teki nükleotid. kodlayan diziye (münferit olarak veya hep birlikte, FVIII kismina, FC kismina) veya bunun komplementer sarmalina, bilinen mutant ve rekombinant FVIII'in veya Fc'nin nükleotid kodlayan dizisine, örnegin, burada alinti yapilan yayinlarda ve patentlerde açiklananlara veya bunlarin komplementer sarmalina, SEQ ID NO: 2'nin, 4'ün veya 6'nin polipeptidini sifreleyen bir nükleotid dizisine (münferit olarak veya hep birlikte, FVIII kismina, FC kismina) ve/veya bu nükleotid asit moleküllerinin herhangi birinin polinükleotid fragmanlarina (örnegin, burada tarif edilen özdes olan bir nükleotid dizisi içerebilir veya alternatif olarak bunlar olusabilir. Sert hibridizasyon, kosullari veya daha düsük sertlikteki kosullar altinda bu nükleik asit moleküllerine hibridize olan polinükleotidler ayrica, bunlar fonksiyonel oldugu sürece bu polinükleotidler tarafindan sifrelenen polipeptitlerin oldugu gibi, varyantlar olarak da dahil edilir.
Varyant polipeptitler, örnegin, SEQ ID NO: 2'de, 4'te veya 6'da gösterilen polipeptit dizisine (münferit olarak veya hep birlikte, FVIII kismina, Fc kismina) ve/Veya bu polipeptitlerin herhangi birinin polipeptit fragmanlarina (örnegin, burada. tarif edilen fragmanlara), en az %85, %90, içerebilir veya alternatif olarak bundan olusabilir.
Bir referans nükleotid. dizisine en az, Örnegin, %95 "Özdes" olan bir nükleotid dizisine sahip olan bir nükleik asit ile, nükleotid dizisinin referans nükleotid dizisinin her bir 100 nükleotidi için en fazla bes nokta mutasyonu içerebilmesi disinda, nükleik asidin nükleotid dizisinin, referans diziye özdes olmasi amaçlanir. Bir baska ifadeyle, bir referans nükleotid dizisine en az %95 özdes olan bir nükleotid dizisine sahip olan bir nükleik asit elde etmek için, referans dizi içinde nükleotidlerin en fazla %5'i silinebilir veya bir baska nükleotid ile sübstüte edilebilir veya referans dizi içindeki toplam nükleotidlerin en fazla %5'i olan bir sayidaki nükleotid referans dizi içine yerlestirilebilir. Sorgu dizisi, örnegin, SEQ ID NO: 1 veya 3, ORF (açik okuma çerçevesi) veya burada tarif edildigi sekilde belirtilen herhangi bir fragman içinde gösterilen tüm dizi, olabilir.
Bir pratiksel konu olarak, herhangi bir özel nükleik asit molekülünün veya polipeptidin mevcut açiklamanin bir nükleotid veya %99 özdes olup olmadigi geleneksel olarak, bilinen bilgisayar programlari kullanilarak belirlenebilir. Bir uygulamada, ayni zamanda bir global dizi hizalamasi olarak da ifade edilen, bir sorgu dizisi (referans veya orijinal dizi) ve bir söz konusu dizi arasindaki en iyi toplam eslesmeyi belirlemek için bir yöntem, Brutlag et al.'larinin., Comp. bilgisayar programi kullanilarak belirlenebilir. Bir dizi hizalamasinda, sorgu ve söz konusu dizilerin her ikisi de DNA dizisidir. Bir RNA dizisi, U'lari T'lere çevirme ile karsilastirilabilir. Söz konusu global dizi hizalamasinin sonucu, özdeslik yüzdesi cinsindendir. Bir baska uygulamada, özdeslik yüzdesini hesaplamak için DNA dizilerinin bir FASTDB hizalamasinda kullanilan parametreler asagidakilerdir: Matriks=Üniter, k-degiskenler grubu=4, Yanlis-Eslesme Kaybi=l, Birlesme Kaybi=30, Randomizasyon Grup Uzunlugu=0, Kesim-Degeri Skoru:1, Bosluk Kaybi:5, Bosluk Boyut Kaybi:0,05, Pencere Boyutu=hangisi daha kisa ise, 500 veya söz konusu. nükleotid dizisinin uzunlugu.
Iç silinmelerden dolayi degil ancak 5' veya 3' silinmelerinden dolayi söz konusu dizi sorgu dizisine kiyasla daha kisa oldugunda, sonuçlara bir manuel düzeltmenin yapilmasi gerekir.
Bunun nedeni, özdeslik yüzdesini hesaplarken FASTDB programinin söz konusu dizisinin 5' ve 3' kirpilmalarini hesaba katmamasidir. Sorgu dizisine kiyasla 5' veya 3' uçlarinda kirpilmis söz konusu diziler için, Özdeslik yüzdesi, sorgu dizisinin toplam bazlarinin bir yüzdesi olarak, söz konusu dizinin 5' ve 3' ucunda olan, eslestirilmemis/hizalanmamis, sorgu dizisi bazlarinin sayisini hesaplama ile düzeltilir. Bir nükleotidin eslestirilmis/hizalanmis olup olmadigi FASTDB dizi hizalamasinin sonuçlari ile belirlenir. Akabinde, bu yüzde, bir nihai özdeslik yüzdesi skoruna varmak için, belirtilen parametreler kullanilarak yukarida FASTDB programi ile hesaplanan özdeslik yüzdesinden çikartilir. Bu düzeltmis skor, mevcut bulusun amaçlari için kullanilan seydir. Söz konusu dizinin, FASTDB hizalamasi ile gösterildigi üzere, yalnizca sorgu dizisi ile eslestirilmemis/hizalanmamis, 5' ve 3' bazlari disinda kalan bazlari özdeslik yüzdesi skorunu manüel olarak ayarlama amaçlari için hesaplanir. Örnegin, bir 90 bazlik söz konusu dizi, özdeslik yüzdesini belirlemek için bir 100 bazlik sorgu dizisine hizalanir.
Silinmeler söz konusu dizinin 5' ucunda gerçeklesir ve böylelikle, FASTDB hizalamasi 5' ucundaki ilk 10 bazin bir eslestirilmesini/hizalanmasini göstermez. 10 eslesmemis baz, dizinin %lO'unu (5' ve 3' uçlarinda eslesmemis bazlarin sayisi/sorgu dizisindeki bazlarin toplam sayisi) temsil eder, böylece %10, FASTDB programi ile hesaplanan özdeslik yüzdesi skorundan çikartilir. Kalan 90 baz mükemmel bir sekilde eslestirildiginde, nihai özdeslik yüzdesi %90 olacaktir. Bir baska Örnekte, bir 90 bazlik söz konusu dizi bir 100 bazlik sorgu dizisi ile karsilastirilir. Bu sefer, Silinmeler, böylece söz konusu dizinin 5' veya 3' ucunda, sorgu ile eslestirilmemiS/hizalanmamis bazlarin bulunmadigi sekildeki iç silinmelerdir. Bu durumda, FASTDB ile hesaplanan özdeslik yüzdesi manüel olarak düzeltilmez. Yine, söz konusu dizinin, yalnizca sorgu dizisi ile eslestirilmemis/hizalanmamis, 5' ve 3' bazlari manüel olarak düzeltilir. Mevcut açiklamanin amaçlari için baska manüel düzeltme yapilmaz.
Mevcut açiklamanin bir sorgu amino asit dizisine en az, örnegin, %95 "özdes" olan bir amino asit dizisine sahip olan bir polipeptit ile, söz konusu polipeptit dizisinin sorgu amino asit dizisinin her bir 100 amino asidi için en fazla bes amino asit degisimi içerebilmesi disinda, söz konusu polipeptidin amino asit dizisinin sorgu dizisine özdes olmasi amaçlanir. Bir baska ifadeyle, bir sorgu amino asit dizisine en az %95 özdes olan bir amino asit dizisine sahip olan bir polipeptit elde etmek için, söz konusu dizi içindeki amino asit rezidülerinin en fazla %5'i, içeri yerlestirilebilir, silinebilir, (indel'ler)) veya bir baska amino asit ile sübstüte edilebilir. Referans dizinin bu degisimleri, referans amino asit dizisinin amino veya karboksi uç pozisyonlarinda veya referans dizi içinde münferit olarak rezidüler` arasina serpistirilmis veya referans dizi içindeki bir veya birden fazla bitisik grup içinde, bu uç pozisyonlari arasindaki herhangi bir yerde gerçeklesebilir.
Bir pratiksel konu olarak, herhangi bir özel polipeptidin, örnegin, SEQ ID NO: 2'nin amino asit dizilerine (münferit olarak veya hep birlikte, FVIII kismina, Fc kismina) veya SEQ olmadigi geleneksel olarak, bilinen bilgisayar programlari kullanilarak belirlenebilir. Bir uygulamada, ayni zamanda bir global dizi hizalamasi olarak da ifade edilen, bir sorgu dizisi (referans veya orijinal dizi) ve bir söz konusu dizi arasindaki en iyi toplam eslesmeyi belirlemek için bir yöntem, burada atif yapilan, Brutlag et al.'larinin, Comp. App. bilgisayar programi kullanilarak belirlenebilir. Bir dizi hizalamasinda, sorgu ve söz konusu dizilerin her ikisi de nükleotid dizisidir veya her ikisi de amino asit dizisidir.
Söz konusu global dizi hizalamasinin sonucu, özdeslik yüzdesi cinsindendir. Bir baska uygulamada, bir FASTDB amino asit hizalanmasinda kullanilan parametreler asagidakilerdir: Matriks=PAM, k-degiskenler grubu=2, Yanlis-Eslesme Kaybi=l, Birlesme Kaybi=20, Randomizasyon Grup Uzunlugu=0, Kesim-Degeri Skoru=1, Pencere Boyutu=dizi uzunlugu, Bosluk Kaybi=5, Bosluk Boyut Kaybi=0,05, Pencere Boyutu=hangisi daha kisa ise, 500 veya söz konusu amino asit dizisinin uzunlugu.
Iç silinmelerden dolayi degil ancak N- veya C-ucu silinmelerinden dolayi söz konusu dizi sorgu dizisine kiyasla daha kisa oldugunda, sonuçlara bir manüel düzeltmenin yapilmasi gerekir. Bunun nedeni, global özdeslik yüzdesini hesaplarken FASTDB programinin söz konusu dizisinin N- ve C- ucu kirpilmalarini hesaba katmamasidir. Sorgu dizisine kiyasla N- ve C- uçlarinda kirpilmis söz konusu diziler için, özdeslik yüzdesi, sorgu dizisinin toplam bazlarinin bir yüzdesi olarak, söz konusu dizinin N- veya C-uçlari olan, bir karsilik gelen söz konusu rezidü ile eslestirilmemis/hizalanmamis, sorgu dizisi rezidülerinin sayisini hesaplama ile düzeltilir. Bir rezidünün eslestirilmis/hizalanmis olup olmadigi FASTDB dizi hizalamasinin sonuçlari ile belirlenir. Akabinde, bu yüzde, bir nihai özdeslik yüzdesi skoruna varmak için, belirtilen parametreler kullanilarak yukarida FASTDB programi ile hesaplanan özdeslik yüzdesinden çikartilir. Bu nihai Özdeslik yüzdesi skor, mevcut bulusun amaçlari için kullanilan seydir.
Söz konusu dizinin, yalnizca sorgu dizisi ile eslestirilmemis/hizalanmamis, N- ve C-uçlari rezidüleri özdeslik yüzdesi skorunu manüel olarak ayarlama amaçlari için göz önünde bulundurulur. Yani, yalnizca söz konusu dizinin en uzak N- ve C-uçlari rezidüleri disinda kalan sorgu rezidüsü pozisyonlari. Örnegin, bir 90 amino asit rezidüluk söz konusu dizi, özdeslik yüzdesini belirlemek için bir 100 rezidülük sorgu dizisine hizalanir. Silinmeler söz konusu dizinin N-ucunda gerçeklesir böylelikle FASTDB hizalamasi N-ucunda ilk 10 rezidünün bir eslestirilmesini/hizalanmasini göstermez. 10 eslesmemis rezidü, dizinin %10'unu (N- ve C-uçlarinda eslesmemis rezidülerin sayisi/sorgu dizisindeki rezidülerin toplam sayisi) temsil eder, böylece %10, FASTDB programi ile hesaplanan özdeslik yüzdesi skorundan çikartilir. Kalan 90 rezidü mükemmel bir sekilde eslestirildiginde, nihai özdeslik yüzdesi %90 olacaktir. Bir baska örnekte, bir 90 rezidülük söz konusu dizi bir 100 rezidülük sorgu dizisi ile karsilastirilir. Bu sefer, silinmeler, böylece söz konusu dizinin N- veya C-uçlarinda, sorgu ile eslestirilmemiS/hizalanmamis rezidülerin bulunmadigi sekildeki iç silinmelerdir. Bu durumda, FASTDB ile hesaplanan özdeslik yüzdesi manüel olarak düzeltilmez. Yine, FASTDB hizalamasinda gösterildigi üzere, söz konusu dizinin, yalnizca sorgu dizisi ile eslestirilmemis/hizalanmamis, kalan N- ve C-ucu uçlari rezidü pozisyonlari manüel olarak düzeltilir. Mevcut açiklamanin amaçlari için baska manüel düzeltme yapilmaz.
Polinükleotid varyantlari, kodlayan bölgeler, kodlamayan bölgeler veya her ikisi içindeki degisimleri içerebilir. Bir uygulamada, polinükleotid varyantlari sessiz sübstitüsyonlar, eklenmeler veya silinmeler üreten ancak sifrelenmis polipeptidin özelliklerini veya aktivitelerini degistirmeyen degisimler içerir. Bir baska uygulamada, nükleotid varyantlari genetik kodun dejenere olmasindan kaynaklanan sessiz sübstitüsyonlar ile üretilir. Diger uygulamalarda, içinde herhangi bir kombinasyonda 5-10, 1-5 veya 1-2 amino asidin sübstüte edildigi, silindigi veya eklendigi varyantlar.
Polinükleotid varyantlari, çesitli nedenler için, örnegin, bir özel konak için kodon ekspresyonunu optimize etmek (insan mRNA'sindaki kodonlari digerleri, örnegin, bir bakteriyel konak, örnegin, E. coli, için degistirmek) amaciyla, üretilebilir.
Dogal olusumlu varyantlar, "allelik varyantlar" olarak adlandirilir ve bir organizmanin bir kromozomu üzerinde verilen bir lokusu isgal eden bir genin bir kaç alternatif formunun birini ifade eder (Genes II, Lewin, B., ed., John Wiley & Sons, New York (1985)). Bu allelik varyantlar polinükleotid ve/veya polipeptit düzeyinde degisiklik gösterebilir ve mevcut açiklamaya dahil edilir. Alternatif olarak, dogal olusumlu olmayan varyantlar mutajenez teknikleri ile veya dogrudan sentez ile üretilebilir.
Protein mühendisliginin ve rekombinant DNA teknolojisinin bilinen yöntemleri kullanilarak, varyantlar polipeptitlerin karakteristiklerini iyilestirmek veya degistirmek için üretilebilir. Örnegin, bir veya birden fazla amino asit biyolojik fonksiyonun kayda deger kaybi olmadan salgilanmis proteinin N-ucundan veya C-ucundan silinebilir. Ron et al., J. amino asit rezidüsünün silinmesinden sonra bile heparin baglama aktivitesine sahip olan varyant KGF proteinlerini bildirmistir. Benzer sekilde, interferon gama bu proteinin karboksi ucundan 8-10 amino asit rezidüsünün silinmesinden sonra en fazla on kat daha yüksek aktivite göstermistir Dahasi, bol miktarda bulgu, varyantlarin siklikla dogal olusumlu proteininkine benzer bir biyolojik aktiviteyi muhafaza ettigini gösterir. Örnegin, Gayle ve is arkadaslari la'sinin kapsamli mutasyonel analizini yürütmüstür. Bunlar molekülün tüm uzunlugu boyunca her bir varyant için ortalama 2,5 amino asit degisimi olan 3.500'ün üzerinde münferit IL-la mutanti üretmek için rastgele mutajenez kullanmistir. Çoklu mutasyonlar her olasi amino asit pozisyonunda incelenmistir.
Arastirmacilar, "molekülün [çJOgunun [baglama veya biyolojik aktivite] üzerinde çok az etki ile degistirilebilecegini" bulmustur (Bakiniz, Özet). Aslinda, incelenen 3.500'ün üzerinde nükleotid dizisinden yalnizca 23 essiz amino asit dizisi aktivite açisindan dogal-tipten anlamli bir sekilde farklilik gösteren bir protein üretmistir.
Yukarida ifade edildigi üzere, polipeptit varyantlari, Örnegin, modifiye edilmis polipeptitleri, içerir.
Modifikasyonlar, örnegin, asetilasyonu, açilasyonu, ADP- ribosilasyonu, amidaSyonu, flavinin kovalent eklenmesini, bir hem kisminin kovalent eklenmesini, bir nükleotidin veya nükleotid türevinin kovalent eklenmesini, bir lipidin veya lipit türevinin kovalent eklenmesini, fosfotidilinositolün kovalent eklenmesini, çapraz-baglamayi, siklizasyonu, disülfit bag olusturulmasini, demetilasyonu, kovalent çapraz-baglarin olusturulmasini, sistein olusturulmasini, piroglutamat olusturulmasini, formilasyonu, gama-karboksilasyonu, glikosilasyonu, GPI ankraj olusturulmasini, hidroksilasyonu, iyodinasyonu, metilasyonu, miristoilasyonu, oksidasyonu, pegilasyonu (burada bütünüyle referans olarak eklenmis olan, fosforilasyonu, prenilasyonu, rasemizasyonu, selenoilasyonu, sülfatasyonu, amino asitlerin proteinlere transfer-RNA aracili eklenmesini, örnegin, arjinilasyonu ve ubikuitinasyonu, içerir. Bazi uygulamalarda, FVIII uygun herhangi bir lokasyonda modifiye edilir, örnegin, pegile edilir. Bazi uygulamalarda, FVIII, FVIII'in yüzeyinde açikta olan bir amino asidinde, bir mühendislik uygulanmis sistein olabilen, bir yüzeyde açikta olan sisteinde, pegile edilir. Id. Bazi uygulamalarda, modifiye edilmis FVIII, örnegin, pegile edilmis FVIII'dir, bir uzun-süre etkili FVIII'dir.
Burada kullanildigi sekliyle, "kararli halde dagilim hacmi (Vss)", bunun içine bir ilacin dagildigi görünür bosluk (hacim) olan, farmakolojide kullanilan terim ile ayni anlama sahiptir. Vss = ilacin Vücut içindeki miktari/kararli haldeki plazma konsantrasyonu.
Bir aralik için burada kullanildigi sekliyle, "yaklasik", araligin her iki ucunu da modifiye eder. Böylelikle, "yaklasik -20", yaklasik 10 ila yaklasik 20" anlamina gelir.
Burada kullanilan kimerik polipeptit, islenmis FVIII veya tek Zincirli FVIII veya bunlarin bir kombinasyonunu içerebilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "islenmis FVIII", FVIII'in Arjinin veya Arjinin 754'ten (B- alani silinmis FVIII için), yani, intraselüler isleme yerinden, yarilmis oldugu anlamina gelir. Intraselüler isleme yerindeki klevajdan dolayi, islenmis FVIII, iki polipeptit zinciri içerir, birinci zincir bir agir zincirdir ve ikinci zincir bir hafif zincirdir. Örnegin, islenmis FVIII-Fc füzyon proteini (yani, Fc'ye kaynastirilmis Agir zincir ve Hafif zincir), bir indirgemeni SBS-PAGE üzerinde sirasiyla yaklasik olarak 90 kDa'da ve 130 kDa'da ve bir indirgeme SBS-PAGE üzerinde sirasiyla yaklasik 90 kDa'da ve 105 kDa'da yürümüstür. Bundan dolayi, bir uygulamada, kimerik polipeptit içindeki FVIII kisminin en az yaklasik %50'si, yaklasik %60'i, yaklasik %97'si, yaklasik %98'i, yaklasik %99'u veya yaklasik Bir baska uygulamada, kimerik polipeptit içindeki FVIII kisminin yaklasik %SO'si, yaklasik %60'i, yaklasik %70'i, yaklasik %98'i, yaklasik %99'u veya yaklasik %lOO'ü islenmis10 FVIII'dir. Bir özel uygulamada, islenmis FVIII'i içeren kimerik polipeptit, tek Zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptitten saflastirilir (veya izole edilir) ve kimerik polipeptit içindeki FVIII kisminin en az yaklasik %90'1, Burada kullanildigi sekliyle, "Tek Zincirli FVIII" veya "SC FVIII" terimleri, FVIII'in Arjinin yerinden (tam-boy FVIII için rezidü 1648'de, yani, SEQ ID NO: 6'nin rezidüsü 1667'de veya B-alani silinmis FVIII için rezidüe 754'te, yani, SEQ ID NO: 2'nin rezidüsü 773'te) yarilmamis oldugu anlamina gelir.
Bundan dolayi, burada kullanilan kimerik polipeptit içindeki tek Zincirli FVIII, bir tek Zincirli içerir. Bir uygulamada, tek Zincirli FVIII, bir aynen intraselüler isleme yeri içerir.
Tek Zincirli FVIII-Fc füzyon proteini, bir indirgememe SDS- PAGE üzerinde yaklasik olarak 220 kDa'da ve bir indirgeme SDS- PAGE üzerinde yaklasik olarak 195 kDa'da yürüyebilir.
Bir uygulamada, tek Zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptit islenmis FVIII'i içeren kimerik polipeptitten saflastirilir (veya izole edilir) ve burada kullanilan kimerik polipeptidin FVIII kisminin en az yaklasik %30'u, yaklasik %40'1, yaklasik FVIII'dir. Bir baska uygulamada, kimerik polipeptidin FVIII kisminin en az yaklasik %1'i, yaklasik %5'i, yaklasik %lO'u, yaklasik %15'i, yaklasik %20'si veya yaklasik %25'i tek Zincirli FVIII'dir. Diger uygulamalarda, burada kullanilan kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %l'i-yaklasik yaklasik %40'i tek Zincirli FVIII'dir.10 Bir Özel uygulamada, burada kullanilan kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %l'i, yaklasik %5'i, yaklasik %10'u, yaklasik %15'i, yaklasik %20'si veya yaklasik %25'i tek Zincirli FVIII'dir. Diger uygulamalarda, burada kullanilan kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %30'u, yaklasik yaklasik %100'ü tek Zincirli FVIII'dir. Bazi uygulamalarda, kimerik polipeptidin tek Zincirli FVIII'inin islenmis FVIII'ine orani, (a) yaklasik %25 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %75 islenmis FVIII'dir; (b) yaklasik %20 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %80 islenmis FVIII'dir; (c) yaklasik %15 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %85 islenmis FVIII'dir; (d) yaklasik %10 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %90 islenmis FVIII'dir; (e) yaklasik %5 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik ve yaklasik %99 islenmis FVIII'dir veya (g) yaklasik %100 islenmis FVIII'dir.
Diger uygulamalarda, kimerik polipeptidin tek Zincirli FVIII'inin islenmis FVIII'ine orani, (a) yaklasik %30 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %70 islenmis FVIII'dir; (b) yaklasik %40 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %60 islenmis FVIII'dir; (c) yaklasik %50 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik FVIII'dir ve yaklasik %40 islenmis FVIII'dir; (e) yaklasik %70 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %30 islenmis FVIII'dir; (f) yaklasik %80 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %20 islenmis FVIII'dir; (g) yaklasik %90 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik FVIII'dir ve yaklasik %5 islenmis FVIII'dir; (i) yaklasik %99 tek Zincirli FVIII'dir ve yaklasik %1 islenmis FVIII'dir veya (j) yaklasik %100 tek Zincirli FVIII'dir.10 Burada kullanilan kimerik polipeptit içindeki FVIII kismi, FVIII aktivitesine sahiptir. FVIII aktivitesi, teknikte bilinen herhangi bir yöntem ile ölçülebilir. Örnegin, bu yöntemlerin biri bir kromojenik analiz olabilir. Kromojenik analiz mekanizmasi, aktive edilmis FVIII'in, aktive edilmis Faktör IX, fosfolipitler ve kalsiyum iyonlari varliginda, Faktör X'un Faktör Xa'ya dönüstürülmesini hizlandirdigi kan koagülasyon kaskadinin prensiplerine dayanir. Faktör Xa aktivitesi, Faktör Xa'ya spesifik bir p-nitroanilid (pNA) substratinin hidrolizi ile degerlendirilir. 405 nm'de ölçülen p-nitroanilinin saliminin ilk hizi, Faktör Xa aktivitesi ile ve böylelikle örnek içindeki FVIII aktivitesi ile dogrudan orantilidir.
Kromojenik analiz, Uluslararasi Tromboz ve Hemostaz Toplulugu (ISTH) Bilimsel ve Standardizasyon Komitesi (SSC) FVIII ve Faktör IX Alt-komitesi tarafindan tavsiye edilir. 1994'ten bu yana, kromojenik analiz ayrica, FVIII konsantre potensinin tayini için Avrupa Farmakopesi'nin, de referans yöntemi olmustur. Böylelikle, bir uygulamada, tek zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptit, FVIII aktivitesi bir kromojenik analiz ile in vitro ölçüldügünde, islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (Örnegin, esas olarak iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den. olusan. veya iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerikr polipeptit, burada söz konusu islenmis FVIII iki FC kisminin birine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir FVIII aktivitesine sahiptir.
Bir baska uygulamada, bu açiklamanin tek zincirli FVIII'ini içeren kimerik polipeptit islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (örnegin, esas olarak iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit, burada islenmis FVIII iki Fc kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir Faktör Xa üretim hizina sahiptir.
Faktör X'un Faktör Xa'yi aktive etmesi için, aktive edilmis Faktör IX (Faktör IXa), Caüy membran fosfolipitleri ve bir FVIII kofaktörü varliginda, Faktör Xa'yi olusturmak için Faktör X içindeki bir arjinin-izolösin bagini hidrolize eder.
Böylelikle, FVIII'in Faktör IX ile etkilesimi koagülasyon yolunda kritiktir. Belirli uygulamalarda, tek Zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptit, islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit, burada islenmis FVIII iki Fc kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir hizda Faktör IXa ile etkilesime girebilir.
Buna ek olarak, FVIII dolasimda inaktif iken von Willebrand Faktörü'ne baglanir. FVIII, VwF'ye baglanmadiginda çabucak parçalanir ve trombin etkisi ile vWF'den salinir. Bazi uygulamalarda, tek Zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptit, von Willebrand Faktörü'nü islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (Örnegin, esas olarak iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit, burada islenmis FVIII iki Fc kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir düzeyde baglar.
FVIII, kalsiyuni ve fosfolipitler varliginda, aktive edilmis protein C tarafindan inaktive edilebilir. Aktive edilmis protein C, FVIII agir zincirini Al alanindaki Arjinin 336'dan sonra yarar, bu bir Faktör X substrat etkilesim yerini bozar ve A2 alanindaki Arjinin 562'den sonra yarar, bu A2 alaninin ayrilmasini hizlandirir ayni zamanda Faktör IXa ile bir etkilesim yerini bozar. Bu klevaj ayrica, A2 alanini (43 kDa) esit iki parçaya da böler ve AZ-N (18 kDa) ve AZ-C (25 kDa)10 alanlarini üretir. Böylelikle, aktive edilmis protein C, agir zincirdeki çok sayida klevaj yerini katalizleyebilir. Bir uygulamada, tek Zincirli FVIII'i içeren kimerik, polipeptit, aktive edilmis Protein C 'tarafindan islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (örnegin, esas olarak iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit, burada islenmis FVIII iki FC kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir düzeyde inaktive edilir.
Diger uygulamalarda, tek zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptit, islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit, burada islenmis FVIII iki FC kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir in Vivo FVIII aktivitesine sahiptir. Bir özel uygulamada, tek zincirli FVIII'i içeren kimerik polipeptit, bir HemA fare kuyruk veni transeksiyon modelinde, bir HemA faresini islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptit (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik. polipeptit, burada islenmis FVIII iki Fc kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir düzeyde koruyabilir.
Burada kullanildigi sekliyle, "karsilastirilabilir" terimi, kimerik polipeptit kullanilmasindan kaynaklanan bir karsilastirilmis hizin veya düzeyin referans hiza veya düzeye esit oldugu, büyük ölçüde esit oldugu veya benzer oldugu anlamina gelir. Burada kullanildigi sekliyle, "benzer" terimi, bir karsilastirilmis hizin veya düzeyin referans hizdan veya düzeyden (örnegin, esas olarak iki FC kismindan› ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit tarafindan FXa üretim hizindan, burada söz konusu islenmis FVIII iki FC kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) en fazla %lû'luk veya en fazla %15'lik bir farkliliga sahiptir. “Büyük oranda benzer” terimi, karsilastirilmis bir oran veya seviyenin, referans oran veya seviyeden %0.01, %O.5 veya %1'den fazla olmayan bir farka sahip oldugu anlamina gelir.
Mevcut açiklama ilaveten, FVIII aktivitesine sahip olan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesim içerir, burada kimerik polipeptidin en az yaklasik› %30'u, yaklasik. %40'1, yaklasik kisim içerir. Bir baska uygulamada, bilesim içindeki kimerik polipeptidin yaklasik %30'u, yaklasik %40'i, yaklasik %50'si, yaklasik %97'si, yaklasik %98'i veya yaklasik %99'u tek zincirli FVIII'dir. Diger uygulamalarda, ikinci kisim, bir Fc'dir. Daha baska uygulamalarda, kimerik polipeptit bir baska yari-ömrü uzatan kisim, örnegin, albümin, içerir.
Daha baska uygulamalarda, mevcut açiklamanin bilesimi, islenmis FVIII'i içeren bir kimerik polipeptidin ve tek zincirli FVIII'i içeren bir kimerik polipeptidin bir kombinasyonunu içerir, (a) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %30'u tek zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %70'i islenmis FVIII'dir; (b) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %40'i tek zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %60'i islenmis FVIII'dir; (C) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %SO'si tek zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik FVIII kisminin yaklasik %60'i tek zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %40'1 islenmis10 FVIII'dir; (e) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %70'i tek Zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %30'u islenmis FVIII'dir; (f) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %80'i tek Zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %ZO'si islenmis FVIII'dir; (g) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %90'i tek Zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik FVIII kisminin yaklasik %95'i tek Zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %5'i islenmis FVIII'dir; (i) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %99'u tek Zincirli FVIII'dir ve kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %l'i islenmis FVIII'dir veya (j) burada kimerik polipeptidin FVIII kisminin yaklasik %100'ü tek Zincirli FVIII'dir.
Belirli uygulamalarda, mevcut açiklamanin bilesimi, bir kromojenik analiz ile in vitro ölçüldügünde, islenmis FVIII'i içeren bilesim (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den› olusan› veya iki FC kismindan› ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesim, burada söz konusu islenmis FVIII, iki FC kisminin birine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir FVIII aktivitesine sahiptir.
Diger uygulamalarda, açiklamanin bilesimi, islenmis FVIII'i içeren bilesim (ön., esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesim, burada söz konusu islenmis FVIII, iki FC kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir Faktör Xa üretim hizina sahiptir. Daha baska uygulamalarda, tek Zincirli FVIII'i içeren bilesim Faktör IXa ile islenmis FVIII'i içeren bir bilesim (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesim, burada söz konusu islenmis FVIII, iki FC kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir hizda etkilesime girebilir.
Ilave uygulamalarda, mevcut bilesimin kimerik polipeptidi içindeki tek Zincirli FVIII, aktive edilmis Protein C tarafindan bir bilesimin (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesimin, burada söz konusu islenmis FVIII, iki Fc kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) bir kimerik polipeptidi içindeki islenmis FVIII ile karsilastirilabilir bir düzeyde inaktive edilir. Bir özel uygulamada, tek Zincirli FVIII'i içeren bilesim, islenmis FVIII'i içeren bilesim (örnegin, esas olarak iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki Fc kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesim, burada söz konusu islenmis FVIII, iki Fc kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir in vivo FVIII aktivitesine sahiptir. Bazi uygulamalarda, mevcut açiklamanin tek Zincirli FVIII'ini içeren bilesinu bir HemA fare kuyruk veni transeksiyon modelinde, bir HemA faresini islenmis FVIII'i içeren bir bilesim (örnegin, esas olarak iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan veya iki FC kismindan ve islenmis FVIII'den olusan bir kimerik polipeptit içeren bir bilesim, burada söz konusu islenmis FVIII iki FC kisminin bir Fc'sine kaynastirilir) ile karsilastirilabilir bir düzeyde koruyabilir.
Mevcut açiklama ilaveten, burada açiklanan bilesimleri kullanarak bir insan süjede bir kanama rahatsizligini tedavi etmek için bir yöntem saglar. Bir emsal yöntem, buna ihtiyaci olan süjeye FVIII aktivitesine sahip olan bir kimerik polipeptit içeren bir farmasötik› bilesimin/formülasyonun bir terapötik olarak etkili miktarini uygulamayi içerir, burada kimerik polipeptidin en az yaklasik %30'u, yaklasik %40'1, yaklasik %SO'si, yaklasik %60'i, yaklasik %70'i, yaklasik yaklasik %99'u, tek zincirli FVIII olan bir FVIII kismi ve bir ikinci kisim içerir.
Kanama rahatsizligi, bir kan koagülasyon bozuklugundan kaynaklanabilir. Bir kan koagülasyon bozuklugu ayrica, bir koagülopati olarak. da ifade edilebilir. Bir örnekte, mevcut açiklamanin bir farmasötik bilesimi ile tedavi edilebilen kan koagülasyon bozuklugu, hemofilidir veya von Willebrand hastaligidir (VWD). Bir baska örnekte, mevcut açiklamanin bir farmasötik bilesimi ile tedavi edilebilen kan koagülasyon bozuklugu, hemofili A'dir.
Bazi uygulamalarda, kanama rahatsizligi ile iliskili kanama tipi, HemArtroz, kas kanamasi, oral kanama, hemoraj, kaslarin içine hemoraj, oral hemoraj, travma, travma kapitis, gastrointestinal kanama, intrakraniyal hemoraj, intra- abdominal hemoraj, intratorakik hemoraj, kemik kirilmasi, santral sinir sistemi kanamasi, retrofarinjiyal bosluk içine kanama, retroperitoneal bosluk içine kanama veya illiopsoas kilif içine kanama arasindan seçilir.
Diger uygulamalarda, kanama bozuklugundan muzdarip olan süjenin, örnegin, cerrahi profilaksiyi veya peri-operatif yönetimi, içeren, cerrahi için tedaviye ihtiyaci olabilir. Bir örnekte, cerrahi minör cerrahi ve majör cerrahi arasindan seçilir. Emsal cerrahi prosedürleri, dis çekilmesini, tonsilektomiyi, kasik herniotomisini, sinovektomiyi, kraniyotomiyi, osteosentezi, travma cerrahisini, intrakraniyal cerrahiyi, intra-abdominal cerrahiyi, intratorakik cerrahiyi, ekleni replasmani cerrahisini (Örnegin, tüni diz replasmanini, kalça replasmanini ve benzerlerini), kalp cerrahisini ve sezaryen ameliyatini içerir.
Bir baska örnekte, süje es-zamanli olarak FIX ile tedavi edilir. Mevcut açiklamanin bilesikleri FIXa'yi aktive edebildiginden, bunlar FIXa'nin süjeye uygulanmasindan önce FIXa polipeptidini pre-aktive etmek için kullanilabilir.
Burada açiklanan yöntemler, profilaktik tedaviye veya talep- edildiginde alinan tedaviye ihtiyaci olan. bir süje üzerinde tatbik edilebilir.
En az %30 tek zincirli FVIII içeren farmasötik. bilesimler, örnegin, topikal (örnegin, transdermal veya oküler), oral, bukkal, nazal, vajinal, rektal veya parenteral uygulamayi, içeren herhangi bir uygun uygulama yolu için formüle edilebilir.
Burada kullanildigi sekliyle, parenteral terimi, subkütan, intradermal, intravasküler (örnegin, intravenöz), intramüsküler, spinal, intrakraniyal, intratekal, intraoküler, perioküler, intraorbital, intrasinoviyal ve intraperitoneal enjeksiyonu ayni zamanda herhangi bir benzer enjeksiyon veya infüzyon teknigini içerir. Bilesim, ayrica, örnegin, bir süspansiyon, emülsiyon, sürdürülmüs salim formülasyonu, krem, jel veya toz, da olabilir. Bilesim, geleneksel baglayicilar ve tasiyicilar, örnegin, trigliseritler, ile bir süpozituvar olarak formüle edilebilir.
Bir örnekte, farmasötik formülasyon, bir sivi formülasyondur, örnegin, bir tamponlu, izotonik, sulu çözeltidir. Bir baska Örnekte, farmasötik bilesim fizyolojik olarak veya fizyolojik olana yakin olan bir pH'a sahiptir. Diger örneklerde, sulu formulasyon, bir fizyolojik olan veya fizyolojik olana yakin olan ozmolariteye ve saliniteye sahiptir. Bu sodyum klorür ve/veya sodyum asetat içerebilir. Bazi örneklerde, mevcut açiklamanin bilesimi liyofilize edilir. Bazi uygulamalarda, farmasötik bilesim, bir immün hücre içermez. Bazi uygulamalarda, farmasötik bilesim, bir hücre içermez.
Mevcut açiklama ayrica (a) bir pihtilasma faktörü kismi ve bir PC kismi içeren bir kimerik polipeptit ve bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici içeren bir farmasötik bilesim ve (b) bilesimi pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeye uygulamak için talimatlar içeren bir kit de saglar. Kit içindeki kimerik polipeptit, bir FVIII kismi içerir. Diger uygulamalarda, kit içindeki kimerik polipeptit, bir FVIII monomer dimer hibrididir. Bazi uygulamalarda, talimatlar ilaveten, pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeyi tanimlamak için en az bir adim içerir. Bazi uygulamalarda, immün toleransa ihtiyaci olan süjeleri tanimlamak için adim, asagidakilerden olusan gruptan birini veya birden fazlasini içerir: l.(i) pihtilasma faktörü geninde bir mutasyona veya silinmeye sahip olan bir süjeyi tanimlama; 2.(ii) pihtilasma faktörü geninde bir yeniden-dizilime sahip olan bir süjeyi tanimlama; 3. (iii) pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahip olan bir süjeyi tanimlama; 4. (iv) interferon terapisi almakta olan bir süjeyi tanimlama; .(V) anti-Viral terapi almakta olan bir süjeyi tanimlama; 6. (Vi) pihtilasma faktörünü sifreleyen. gen disindaki, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile ilgili olan bir gende bir genetik mutasyona sahip olan bir süjeyi tanimlama ve 7.(vii) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin kombinasyonlari.
Bazi uygulamalarda, pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki bir gendeki genetik mutasyon asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden fazla mutasyonu içerir: l.(i) arttirilmis TNF-d ile iliskili bir genetik polimorfizm; 2.(ii) arttirilmis IL-lO ile iliskili olan bir genetik polimorfizm; 3. (iii) azaltilmis CTLA-4 ile iliskili bir genetik polimorfizm; 4.(iv) DR15 veya DQBO602 MHC Sinif II nmleküllerinde bir mutasyon ve .(V) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin bir kombinasyonu.
Farmasötiklerin veya biyolojik ürünlerin üretimini, kullanimini veya satisini düzenleyen bir devlet kurumu tarafindan kurallari belirlenmis formdaki bir bildiri opsiyonel olarak kitin kabina (kaplarina) ilistirilebilir, bu bildiri, beseri uygulama için üretimin, kullanimin veya satisin kurum tarafindan onayini yansitir.
AÇIKLAMANIN UYGULAMALARI El. Buna. ihtiyaci olan bir süjede bir pihtilasma faktörüne immün toleransi indüklemenin süjeye bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemi olup, burada kimerik polipeptit bir pihtilasma faktörü kismi ve bir Fc kismi içerir.
E2. Bir pihtilasma faktörüne bir inhibitörün gelistirilmesini Önlemenin veya inhibe etmenin pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeye bir kimerik polipeptidi uygulamayi içeren bir yöntemi olup, burada kimerik polipeptit bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi içerir.
E3. Uygulama El'e veya E2'ye göre yöntem olup, burada süje, pihtilasma faktöründen olusan bir polipeptidin bir es-deger dozu uygulandiginda, pihtilasma faktörüne karsi bir inhibitör immün yanit gelistirecektir.
E4. El ila. E3 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje pihtilasma faktörüne karsi bir inhibitör immün yanit gelistirmistir.
ES. El ila E4 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje daha önceden hiç pihtilasma faktörü ile tedavi edilmemistir.
E6. El ila ES arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada pihtilasma faktörü kismi, Faktör VIII'i E7. El ila ES arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje bir fetustür ve yöntem ilaveten kimerik polipeptidi fetüsün annesine uygulamayi içerir ve süjeye uygulama anneden plasentaya gerçeklesir.
E8. Uygulama E7'ye göre yöntem olup, burada pihtilasma faktörü kismi, Faktör VIII'i içerir.
E9. El ila E6 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje bir çocuktur veya bir eriskindir.
E10. Uygulama E9'a göre yönteni olup, burada süje bir yasin altinda olan, iki yasin altinda olan, üç yasin altinda olan, dört yasin altinda olan, bes yasin altinda olan, alti yasin altinda olan, yedi yasin altinda olan, sekiz yasin altinda olan, dokuz yasin altinda olan, on yasin altinda olan, on bir yasin altinda olan veya on iki yasin altinda olan bir çocuktur.
E11. Uygulama 10'a göre yöntem olup, burada çocuk bir yasin altindadir.
E12. Uygulama 11'e göre yöntem olup, burada çocuk veya eriskin bir kanama bozuklugu gelistirir, burada kanama bozuklugunun semptomlarinin baslamasi, bir yasindan sonradir.
E13. El ila E12 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulanma pihtilasma faktörüne karsi bir hümoral immün yanittan, bir hücre-aracili immün yanittan veya hem bir hümoral immün yanittan hem de bir hücre-aracili immün yanittan seçilen bir immün yanitin gelistirilmesini önlemek, inhibe etmek veya azaltmak için yeterlidir.
E14. El ila E13 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada bilesim tekrarli dozlar halinde uygulanir.
E15. Uygulama E14'e göre yöntem olup, burada tekrarli dozlarin her biri bir digerinden en az yaklasik 12 saat, en az yaklasik 24 saat, en az yaklasik iki gün, en az yaklasik üç gün, en az yaklasik dört gün, en az yaklasik bes gün, en az yaklasik alti gün, en az yaklasik yedi gün, en az yaklasik sekiz gün, en az yaklasik dokuz gün, en az yaklasik on gün, en az yaklasik 11 gün, en az yaklasik 12 gün, en az yaklasik 13 gün, en az yaklasik 14 gün veya en az yaklasik 15 gün ile ayrilir.
E16. Uygulama E14'e veya E15'e göre yöntem olup, burada tekrarli dozlar, en az yaklasik iki doz, en az yaklasik bes doz, en az yaklasik. 10 doz, en az yaklasik 20 doz, en az yaklasik 25 doz, en az yaklasik 30 doz, en az yaklasik 35 doz, en az yaklasik 40 doz, en az yaklasik 45 doz, en az yaklasik 50 doz, en az yaklasik 55 doz, en az yaklasik 60 doz, en az yaklasik 65 doz veya en az yaklasik 70 doz içerir.
E17. Uygulama E16'ya göre yöntem olup, burada tekrarli dozlar, yaklasik iki doz ila yaklasik 100 doz, yaklasik bes doz ila yaklasik 80 doz, yaklasik 10 doz ila yaklasik 70 doz, yaklasik doz ila yaklasik 60 doz, yaklasik 10 doz ila yaklasik 50 doz, yaklasik 15 doz ila yaklasik 40 doz, yaklasik 15 doz ila yaklasik, 30 doz, yaklasik. 20 doz ila yaklasik 30 doz veya yaklasik 20 doz ila yaklasik 40 doz içerir.
E18. Uygulama E16'ya veya E17'ye göre yöntem olup, tekrarli dozlar, yaklasik iki doz, yaklasik bes doz, yaklasik 10 doz, yaklasik 90 doz veya yaklasik 100 doz içerir.
E19. E14 ila E18 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süjeye ilaveten, tekrarli dozlardan sonra, pihtilasma faktörünü içeren ancak bir FC kismi içermeyen bir pihtilasma faktörü proteini içeren bir farmasötik bilesim uygulanir.
E20. Uygulama 19'a göre yöntem olup, burada pihtilasma faktörü proteini tam boy veya matür pihtilasma faktörüdür.
E21. Uygulama 19'a göre yöntem olup, burada pihtilasma faktörü proteini bir FC kismi disinda bir veya birden fazla yari-Ömrü uzatan kisim içerir.
E22. El ila E21 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama bir veya birden fazla kanama epizodunu tedavi eder.
E23. El ila E22 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama bir veya birden fazla kanama epizodunu önler.
E24. El ila E23 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama bir veya birden fazla kanama epizodunun bir epizodik tedavisidir.
E25. El ila E23 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süjenin cerrahi profilaksiye, peri- operatif yönetime veya cerrahi için tedaviye ihtiyaci duyar.
E26. Uygulama. E25'e göre yöntem. olup, burada cerrahi minör cerrahidir, majör cerrahidir, dis çekilmesidir, tonsilektomidir, kasik herniotomidir, sinovektomidir, tüm diz replasmanidir, kraniyotomidir, osteosentezdir, travma cerrahisidir, intrakraniyal cerrahidir, intra-abdominal cerrahidir, intratorakik cerrahidir veya eklem replasmani cerrahisidir.
E27. E13 ila E26 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada immün yanit, pihtilasma faktörüne inhibitör antikorlarin üretilmesini içerir.
E28. Uygulama E27'ye göre yöntem olup, burada antikor konsantrasyonu en az 0,6 Bethesda Birimi'dir (BU).
E29. Uygulama E28'e göre yöntem olup, burada antikor E30. E13 ila E26 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada immün yanit bir hücre-aracili immün yaniti E31. Uygulama E30'a göre yöntem olup, burada hücre-aracili immün yanit, IL-12'den, IL-4'ten ve TNF-d'dan olusan gruptan seçilen bir sitokinin salimini içerir.
E32. E13 ila E31 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada immün yanit, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir klinik semptomu içerir: arttirilmis kanama egilimi, yüksek pihtilasma faktörü tüketimi, pihtilasma faktörü terapisine yanitin olmamasi, pihtilasma faktörü terapisinin azaltilmis etkinligi ve pihtilasma faktörünün kisaltilmis yari-ömrü.
E33. El ila E32 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje pihtilasma faktörü geninde bir mutasyona veya silinmeye sahiptir.
E34. El ila E32 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje pihtilasma faktörü geninde bir yeniden-dizilime sahiptir.
E35. El ila E34 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süjeler siddetli hemofiliye sahiptir.
E36. El ila E34 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yönteni olup, burada süje pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahiptir.
E37. El ila E36 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje interferon terapisi almaktadir.
E38. El ila E37 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje anti-viral terapi almaktadir.
E39. El ila E38 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje, arttirilmis TNF-a ile iliskili bir E40. Uygulama E39'a göre yöntem olup, burada polimorfizm, TNF- g 308G>A'dir.
E41. El ila E40 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje, arttirilmis IL-lO ile iliskili bir E42. Uygulama E4l'e göre yöntem olup, burada polimorfizm ILlOG mikrosatelitinin mikrosatelitinin alel l34'üdür.
E43. El ila E42 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje, azaltilmis CTLA-4 ekspresyonu ile iliskili bir genetik polimorfizme sahiptir.
E44. El ila E43 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje, DR15 veya DQBO602 MHC Sinif II moleküllerinde bir mutasyona sahiptir.
E45. El ila E44 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje lSO'den daha az olan pihtilasma faktörü maruziyet gününe (ED) sahip olmustur.
E46. Uygulama E45'e göre yöntem olup, burada süje 50'den daha az ED'ye sahip olmustur.
E47. Uygulama E46'ya göre yöntem olup, burada süje 20'den daha az ED'ye sahip olmustur.
E48. E3 ila E47 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada inhibitör FVIII immün yaniti, bir tam boy veya matür FVIII pihtilasma faktörüne yanitta gelismistir.
E49. E3 ila E48 arasindaki uygulamalar göre yöntem olup, inhibitör yaniti, rekombinant FVIII ürününe yanit olarak gelisen bir inhibitör FVIII yanitidir.
E50. El ila E49 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, uygulamadan önceki sayiya kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin sayisini azaltir.
E51. El yöntem kiyasla ila E50 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre olup, burada uygulama, uygulamadan Önceki titreye süjedeki FVIII'e antikorlarin titresini azaltir.
E52. El ila E51 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, uygulamadan önceki düzeye kiyasla süjedeki bir sitokinin düzeyini azaltir.
E53. El ila E52 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden sonra süjedeki sayiya kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin sayisini azaltir.
E54. El ila E53 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden sonra süjedeki titreye kiyasla süjedeki FVIII'e antikorlarin titresini azaltir.
E55. El ila E54 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, bir FVIII polipeptidinden olusan bir polipeptit ile bir önceki tedaviden sonra süjedeki düzeye kiyasla süjedeki bir sitokinin düzeyini azaltir.
E56. El ila E55 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, pihtilasma faktörü kismindan olusan polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan sayiya kiyasla süjedeki anti-pihtilasma faktörü antikorlarinin sayisini azaltir.
E57. El ila E56 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, pihtilasma faktörü kismindan olusan polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan titreye kiyasla süjedeki anti-pihtilasma faktörü antikorlarinin titresini azaltir.
E58. El ila E57 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada uygulama, pihtilasma faktörü kismindan olusan polipeptidin süjeye uygulanmasindan kaynaklanacak olan düzeye kiyasla süjedeki bir sitokinin düzeyini azaltir.
E59. Uygulama E52'ye, E55'e veya E58'e göre yöntem olup, burada sitokin IL-lZ'den, IL-4'ten ve TNF-d'dan olusan gruptan seçilir.
E60. El ila E59 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, ilaveten kimerik polipeptidin uygulanmasindan önce, süjenin asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden fazla karakteristige sahip oldugunu tanimlamayi içerir: 1. (a) pihtilasma faktörünü sifreleyen gende bir mutasyona veya silinmeye sahiptir; 2. (b) pihtilasma faktörünü sifreleyen gende bir yeniden- dizilime sahiptir; 3. (c) pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahiptir; 4. (d) interferon terapisi almaktadir; . (e) anti-Viral terapi almaktadir; 6. (f) pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile ilgili olan bir gende bir genetik mutasyona sahiptir ve 7. (g) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin kombinasyonuna sahiptir.
E61. Uygulama E60'a göre yöntem olup, burada pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki bir gendeki genetik mutasyon asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya 6.(i) arttirilmis TNF-d ile iliskili bir genetik polimorfizm; 7.(ii) arttirilmis IL-lO ile iliskili olan bir genetik polimorfizm; 8. (iii) azaltilmis CTLA-4 ile iliskili bir genetik polimorfizm; 9.(iv) DRlS veya DQBO602 MHC Sinif II nwleküllerinde bir mutasyon ve lO. (V) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin bir kombinasyonu.
E62. Uygulama E6l'e göre yöntem olup, burada arttirilmis TNF-d ile iliskili polimorfizm, 308G>A'dir.
E63. Uygulama E6l'e göre yöntem olup, burada arttirilmis IL 10 ile iliskili polimorfizm, ILlOG mikrosatelitinin alel 134'üdür.
E64. Uygulama E6'nin ve E8 ila E62 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada FVIII kismi, FVIII A3 alanini içerir.
E65. Uygulama E6'nin. ve E8 ila E63 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yönteni olup, buradai FVIII kismi, insan FVIII'ini içerir.
E66. Uygulama E6'nin ve E8 ila E64 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada FVIII kismi, B alaninin bir tam veya parsiyel silinmesine sahiptir.
E67. Uygulama E6'nin ve E8 ila E66 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada FVIII kismi bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine; SEQ ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdestir.
E68. Uygulama E6'nin ve E8 ila E66 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada FVIII kismi bir sinyal dizisi olmadan TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEO ID NO: 2'nin 20 ila 1457 arasindaki amino asitlerine; SEQ ID NO: 6'nin 20 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) özdestir.
E69. Uygulama E6'nin ve E8 ila E66 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada FVIII kismi bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen bir FVIII amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1 ila 1457 arasindaki amino asitlerine; SEQ ID NO: 6'nin 1 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) en az %90 veya %95 özdestir.
E70. Uygulama E6'nin. ve E8 ila E66 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem. olup, burada FVIII kismi, bir sinyal dizisi ile birlikte TABLO 2'de gösterilen FVIII amino asit dizisine (SEO ID NO: 2'nin 1 ila 1457 arasindaki amino asitlerine veya SEQ ID NO: 6'nin 1 ila 2351 arasindaki amino asitlerine) özdestir.
E71. Uygulama. E6'nin. ve E8 ila E70 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada FVIII kismi koagülasyon aktivitesine sahiptir.
E72. El ila E71 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada Fc kismi, TABLO 2'de gösterilen Fc amino asit dizisine (SEQ ID NO: 2'nin 1458 ila 1684 arasindaki amino asitlerine veya SEQ ID NO: 6'nin 2352 ila 2578 arasindaki amino asitlerine) özdestir.
E73. El ila E72 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada kimerik polipeptit, kimerik polipeptit ile iliskili olarak bir ikinci polipeptit içeren bir hibrit formundadir, burada ikinci polipeptit, esas olarak Fc kismindan veya FcRn baglama partnerinden olusur veya Fc kismindan veya FcRn baglama partnerinden olusur.
E74. El ila E73 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada kimerik polipeptit 10-100 IU/kg araliginin her bir dozunda uygulanir. veya 100 IU/kg'dir.
E77. El ila E76 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, burada süje bir kanama koagülasyon bozuklugundan, HemArtrozdan, kas kanamasindan, oral kanamadan, hemorajdan, kaslarin içine hemorajdan, oral hemorajdan, travmadan, travma kapitisten, gastrointestinal kanamadan, intrakraniyal hemorajdan, intra-abdominal hemorajdan, intratorakik hemorajdan, kemik kirilmasindan, santral sinir sistemi kanamasindan, retrofarinjiyal bosluk içine kanamadan, retroperitoneal bosluk. içine kanamadan 'veya illiopsoas kilif içine kanamadan olusan gruptan seçilen bir kanama rahatsizligina sahiptir.
E78. Uygulama E77'ye göre yönteni olup, burada kanama koagülasyon bozuklugu, hemofili A'dir.
E85. Bir kit olup, (a) bir pihtilasma faktörü kismi ve bir FC kismi veya bir FcRn baglama partneri kismi içeren bir kimerik polipeptit ve bir farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici içeren bir farmasötik bilesim ve (b) bilesimi pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeye uygulamak için talimatlari içerir.
E86. Uygulama E85'e göre kit olup, burada kimerik polipeptit bir FVIII kismi içerir.
E87. Uygulama E86'ya göre kit olup, burada kimerik polipeptit bir FVIII monomer dimer hibrididir.
E88. E85 ila E87 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre kit olup, burada talimatlar ilaveten, pihtilasma faktörüne immün toleransa ihtiyaci olan bir süjeyi tanimlamak için en az bir adim içerir.
E89. Uygulama E88'e göre kit olup, burada immün toleransa ihtiyaci olan süjeleri tanimlamak. için adim asagidakilerden olusan grubun birini veya birden fazlasini içerir: (a) pihtilasma faktörü geninde bir mutasyona veya silinmeye sahip olan bir süjeyi tanimlama; (b) pihtilasma faktörü geninde bir yeniden-dizilime sahip olan bir süjeyi tanimlama; (c) pihtilasma faktörüne karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahip olan bir süjeyi tanimlama; (d) interferon terapisi almakta olan bir süjeyi tanimlama; (e) anti-viral terapi almakta olan bir süjeyi tanimlama; (f) pihtilasma faktörünü sifreleyen gen disindaki, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile ilgili olan bir gende bir genetik mutasyona sahip olan bir süjeyi tanimlama ve (g) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin kombinasyonlari.
E90. Uygulama E89`a göre kit olup, burada pihtilasma faktörunü sifreleyen gen disindaki bir gendeki genetik mutasyon asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden fazla mutasyonu içerir: (i) arttirilmis TNF-d ile iliskili bir genetik polimorfizm; (ii) arttirilmis IL-lO ile iliskili olan bir genetik polimorfizm; (iii) azaltilmis CTLA-4 ile iliskili bir genetik polimorfizm; (iv) DR15 veya DQBOGOZ MHC Sinif II moleküllerinde bir mutasyon ve (v) bunlarin ikisinin veya daha fazlasinin bir kombinasyonu.
E91. El ila E78 arasindaki uygulamalarin herhangi birine göre yöntem olup, ilaveten uygulamadan sonra bir inhibitör immün yanitin düzeyini ölçmeyi içerir.
E92. Uygulama E91'e göre yöntem olup, burada ilaveten uygulamadan sonraki inhibitör immün yanitin düzeyini uygulamadan önceki inhibitör immün yanitin düzeyi ile karsilastirmayi içerir.
E93. Uygulamalar E9l'e veya E92'ye göre yöntem olup, burada inhibitör immün yanit FVIII'e karsi antikorlarin gelistirilmesidir.
E94. E9l'e veya E92'ye göre yöntem olup, burada inhibitör Simdi detayli bir sekilde tarif edilmis olan mevcut bulusa sahip olma ile, mevcut bulus, yalnizca açiklama amaçlari için bununla birlikte dahil edilen ve bulusun sinirlayicisi olmasi amaçlanmayan asagidaki örneklere atfen daha açik bir sekilde anlasilacaktir. Örnekler rFVIIIFc'nin klonlanmasi, ekspresyonu ve saflastirilmasi Tüm moleküler biyoloji prosedürleri standart teknikler izlenerek gerçeklestirilmistir. Insan FVIII'inin, bunun natif sinyal dizisi dahil, kodlayan dizi (Genbank. erisim. numarasi NM_OOOl32), insan karacigeri poliA RNA'sindan ters transkripsiyon-polimeraz zincir reaksiyonlari (RT-PCR) ile elde edilmistir. FVIII'in büyük boyutundan dolayi, kodlayan dizi ayri RT-PCR reaksiyonlarindan bir kaç bölümde elde edilmistir ve bir seri PCR reaksiyonu, restriksiyon sindirimi ile, tam boy FVIII'in B alanindan 2682 bp'yi elimine eden, bir E alani silinmis (BDD) FVIII kodlayan bölgeyi içeren bir ara klonlama vektörüne ligasyon yoluyla birlestirilmistir. Insan lökosit CDNA kütüphanesinden PCR ile elde edilmistir ve nihai ekspresyon kaseti BDD FVIII dizisinin araya giren baglayici olmadan Fc dizisinin (IgGl dizisinin D221'inden baslayarak mentese, CHZ ve CH3 alanlarinin, EU numaralandirmasi) N-ucuna dogrudan kaynastirildigi bir sekilde yapilmistir. Tek basina Fc zincirinin ekspresyonu için, fare IgK (kappa) hafif zincir sinyal dizisi sentetik oligonükleotidler ile olusturulmustur ve bu protein ürününün salgilanmasina olanak saglamak için PCR kullanilarak Fc kodlayan diziye eklenmistir. FVIIIFc ve FC zinciri kodlayan diziler bir ikili pBudCE4.l ekspresyon vektörüne (Invitrogen, Carlsbad, CA) klonlanmistir.
HEK 293H hücreleri (Invitrogen, Carlsbad, CA), Lipofectamine transfeksiyon reaktifi (Invitrogen, Carlsbad, CA)) kullanilarak pSYN-FVIII-013 plazmidi ile transfekte edilmistir ve bir kararli hücre hatti zeosin ile seçilmistir. Hücreler serumsuz süspansiyon kültürü içinde büyütülmüstür ve rFVIIIFc proteini, bir FVIII-spesifik afinite saflastirma adimini (2009)), akabinde anyon degisim kolonlarinin ve bir hidrofobik etkilesim kolonunun bir kombinasyonunu, içeren bir dört kolonlu saflastirma prosesi kullanilarak berraklastirilmis hasat vasatlarindan saflastirilmistir. rFVIIIFc'nin Karakterizasyonu (a) Biyokimyasal Karakterizasyon Islenmis rekombinant FVIII-Fc (rFVIIIFc), iki polipeptit zinciri olarak sentezlenmistir, bir zincir, 1664 amino asitlik bir toplam› zincir uzunlugu için, lgGl'in (D221'den G456'ya uzanan 226 amino aside, EU numaralandirmasi) Fc alanina (mentese, CH2 ve CH3 bölgeleri) kaynastirilmis BDD-FVIII'den basina ayni Fc bölgesinden (226 amino asit) olusur. FVIIIFc/Fc ikili ekspresyon plazmidi ile transfekte edilmis hücrelerin üç ürünü (FVIIIFc dimerini, FVIIIFC monomerini ve Fc dimerini) salgilamasinin beklenmis olmasina ragmen, yalnizca FCIIIFc monomeri ve F0 dimeri sartli vasatlarda saptanmistir.
Saflastirilmis FVIIIFC, indirgememe ve indirgeme SBS-PAGE analizi ile analiz edilmistir (SEKIL 2A ve 2B). Indirgenmemis SBS-PAGE için, bantlarin yaklasik olarak 90 kDa'da ve ve hafif zincir-dimerik Fc füzyonunun (LCFcZ) tahmin edilen moleküler agirliklari ile tutarlidir (SEKIL 2A, sütun 3). Bir üçüncü bant da yaklasik olarak 220 kDa'da saptanmistir, bu tek zincirli FVIIIFc (SC FVIIIFC; HC+LCFc2) için tahmin edilen moleküler agirlik ile tutarlidir, burada pozisyon 754'teki arjinin rezidüsü (tam boy dizi açisindan 1648) salgilama sirasinda yarilmamistir. Indirgenmis SBS-PAGE analizi için, majör bantlarin yaklasik olarak 25 kDa'da, 90 kDa'da, 105 kDa'da ve 195 kDa'da göç ettigi görülmüstür, bu tek zincirli Fc, HC, LCFc ve SC FVIIIFC için tahmin edilen moleküler agirliklar ile tutarlidir (SEKILJ 2B, sütun 3). Insan. PC5'i, proprotein konvertaz subtlisin/keksin (PCSK) tipi proteazlarin bir üyesi, ile birlikte-transfeksiyon rFVIIIFc ürününün tam islenmesi ile sonuçlanmistir (SEKIL 2A, 2B, sütun 2).
SDS-PAGE'den sonra rFVIIIFc'nin bir kaç serisinin dansitometri analizi, beklenen bantlarin %98'den daha fazla olan safligini göstermistir. Boyut dislama kromatografisi (SEC) de, mevcut agregasyonun derecesini degerlendirmek için kullanilmistir ve tüm serilerin %O,5 veya daha az olan agregat düzeylerine sahip oldugu bulunmustur. rFVIIIFc yapisi ilaveten, trombin klevaji, indirgeme ve LC/UV ve LC/MS ile analiz ile analiz edilmistir. (Pozisyonlar l689'a karsilik gelir) üç arjinin rezidüsünde klevajlar ile) trombin. ile üretilmis dört FVIII fragmani UV' absorbansi ile saptanabilir (SEKIL 2C), bu proteinin asagidaki segmentlerine karsilik. gelir: Fc (pik 1), hafif-zincir-Fc (pik 2); agir zincirden A1 alani (pik 3) ve agir zincirden A2 alani (pik 4). 14 amino asitlik B alani baglayicisi ve ~ 6 kDa'luk a3-ilgili peptitler bunlarin küçük boyutundan dolayi UV absorbansi ile saptanmaz.
Birlikte-transfekte edilmis isleme enzimleri olmadan üretilmis rFVIIlFc polipeptidi, % göstermistir, bu R754 ve E755 (tam boy FVIII açisindan Rl648/E1649) arasindaki bir tek peptit bagi ile islenmis rFVIIIFc'den farklilik gösterir. Bu izoformu saflastirilmistir ve yukarida tarif edilen biyokimyasal analizlerin tümünde karakterize edilmistir ve bunun asagida gösterildigi üzere rFVIIlFc ile karsilastirilabilir oldugu bulunmustur.
Saflastirilmis tek Zincirli FVIIlFc'nin aktivitesinin, bir kromojenik analizde ayni zamanda asagida tarif edilen çesitli fonksiyonel analizler ile rFVIIIFc'ye benzer oldugu bulunmustur. (b) Kromojenik ve Bir-Evreli aPTT Analizleri ile FVIII Aktivitesinin Ölçülmesi FVIII aktivitesi, bir FVIII kromojenik analizi ile ölçülmüstür. rFVIIIFc'nin dört ayri serisinden elde edilen ortalama spesifik aktivitenin kromojenik analiz ile 9762 ± 449 Tek Zincirli FVIllzFc'nin FVIII aktivitesi ayrica, kromojenik analiz ile de ölçülmüstür ve tamamen islenmis rFVlIIFc veya (yaklasikr %25 tek zincirli rFVIIIFc içeren) rFVIIIFc DS ile karsilastirilmistir. TABLO 3A'da gösterildigi üzere, tek Zincirli rFVIIIFc, tamamen islenmis FVIIIFc'nin veya rFVIIIFc DS'nin, her ikisi de von Willebrand Faktörü (VWF) varliginda ve yoklugunda, kromojenik analiz ile FVIII aktivitesine kiyasla FVIII aktivitesinde anlamli farklilik göstermemistir.
TABLO 3B, bir-evreli aktive edilmis parsiyel tromboplastin zamani (aPTT) analizi ile ölçüldügü üzere, SCrFVIIIFc'nin tam aktivitesinin VWF yoklugunda gözlemlendigini gösterir.
TABLO 3A; Kromojenik Analiz ile FVIII Aktivitesi Matriks Örnek rFVIIIFCDS (%25 NP) (RECD-l9l89-O9-Ol3) Tek Zincirli rFVIIIFc 013'ten saflastirilmis) tüketilmis plazma Tamamen islenmis rFVIIIFc (bir mühendislik uygulanmis hücre hattindan saflaStirilmis) rFVIIIFCDS (%25 NP) FVIII ve (RECD-l9l89-O9-Ol3) VWF Tek Zincirli rFVIIIFc tüketilmis (RECD 19189-09- plazma 013'ten saflastirilmis) Tamamen islenmis rFVIIIFc (bir mühendislik uygulanmis hücre hattindan saflastirilmis) *CV=varyasyon kat sayisi Kromojenik CV* Spesifik %'si Aktivite 9066 2,49 8194 2,72 9577 8,34 10801 8,92 9498 4,70 9569 4,54 TABLO 3B: Bir aPTT analizi ile FVIII Aktivitesi Matriks Örnek Koagülasyon CV Spesifik Aktivite rFVIIIFcDS (%25 NP) 8210 Tek Zincirli 3108 6,57 rFVIIIFc (RECD saflastirilmis) tüketilmis plazma Tamamen islenmis 8683 3,57 rFVIIIFc (bir mühendislik uygulanmis hücre hattindan saflastirilmis) rFVIIIFcDS (%25 NP) 15621 Tek Zincirli 13572 2,41 rFVIIIFc (RECD FVIII ve l9189-O9-Ol3'ten vWF saflastirilmis) tüketilmis Tamamen islenmis 15170 10,42 rFVIIIFc (bir mühendislik uygulanmis hücre hattindan saflastirilmis) (c) xase Kompleksi'ndéki Aktivite FVIII aktivitesi ayrica, aktive edilmis FIX'u ve trombin ile aktive edilmis REFACTO®'yu veya rFVIIIFc proteinini kalsiyum varliginda bir fosfolipit yüzey üzerinde inhibe etme ve bundan FXa üretim hizlarinin belirlendigi bir kromojenik veya florojenik sübstratin klevaji ile ölçüldügü üzere FX'un FXa'ya dönüstürülmesini izleme ile Xase kompleksi baglaminda da ölçülmüstür. Bu analiz ayrica, her bir münferit bilesen ile etkilesimleri incelemek amaciyla digerlerini sabit tutarken analizin bir bilesenini degistirme ile modifiye edilmistir.
FXa üretim hizi, rFVIIIFc DS, rBDD FVIII ve tek Zincirli rFVIIIFc (SEKIL 3A) için sentetik fosfolipit veziküller (%25 fosfotadil serin/%75 fosfotadil kolin) kullanilarak çesitlilik gösteren fosfolipit konsantrasyonlarinin bir fonksiyonu olarak belirlenmistir. Her iki proteinin, yaklasik olarak 156 uM fosfolipitte pik aktivitesi ile bir benzer aktivite profiline sahip oldugu bulunmustur.
FXa üretim hizi akabinde, çesitlilik gösteren FX konsantrasyonlarinin bir fonksiyonu olarak belirlenmistir ve KM ve Vmaks degerleri hesaplanmistir (SEKIL BB). rFVIIIFc DS, rBDD FVIII ve tek zincirli rFVIIIFc için aktivite profillerinin benzer KM ve Vmüs ile benzer oldugu bulunmustur (TABLO 4). Son olarak, FXa üretim hizi çesitlilik gösteren FIX konsantrasyonlarinin bir fonksiyonu olarak belirlenmistir (SEKIL 3C). Aktivite profillerinin benzer Kd ve Vhws ile benzer oldugu görülmüstür (TABLO 5). Benzer sonuçlar, bir fosfolipit kaynagi olarak plateletler kullanilarak elde edilmistir (yayimlanmamis veriler, Haziran 2009).
TABLO 4. Fosfolipitler üzerinde FVIII Proteinleri için FXa Üretim Parametreleri Lipit Kaynagi Molekül Km (nM) Vhmß (nM/dk) Lipit Kaynagi Molekül Km (nM) Vhmw (nM/dk) rBDD FVIII 51.0 ± 8.7 73.5 NP rFVIIIFC 53.2 ± 7.5 56.0 TABLO 5. FVIII Proteinleri ile FIXa Etkilesimleri Lipit Kaynagi Molekül Km (nM) Vmms (HM/dk) (d) APC tarafindan Inaktivasyon Aktif oldugunda, FVIII aktive edilmis protein C (APC) tarafindan klevaj ile ayni zamanda A2 alaninin ayrilmasi ile inaktive edilir. rFVIIIFc'nin ve rBDD FVIII'in her ikisi de trombin ile aktive edilmistir, akabinde farkli süreler boyunca APC ile inkübe edilmistir ve bir FXa üretim analizinde aktivite belirlenmistir (SEKIL 4). Trombin aktivasyonu yoklugunda, çok az FXa üretimi saptanmistir` ve bu, trombin sindirimi ile anlamli bir sekilde arttirilmistiri 90 dakika boyunca APC ile tedavi, FXa üretim hizlarinda, aktive edilmemis örneklere benzeyen, bir anlamli düsüse yol açmistir ve bu sonuçlar rFVIIIFc DS, rBDD FVIII ve tek Zincirli rFVIIIFc için benzerdir. (e) VWF için Afinite von Willebrand faktörü (VWF) ile FVIII etkilesimleri, rFVIIIFc'nin ve rBDD FVIII'in vWF'ye dogru baglamasinin kinetiklerini belirlemek için, yüzey Plazmon rezonans (SPR) teknolojisini temel alan, gerçek-zamanli biyo-moleküler etkilesim analizi (BIAcore) ile ölçülmüstür (TABLO 6). Kg'nin (birlesme-hizi) ve Kd'nin (ayrilma-hizi) kinetik hiz parametreleri ve afinite KD (Ka/Ka) özdes kosullar altinda her bir FVIII etkilesimi için belirlenmistir. Hem rFVIIIFc'nin hem nM olan, bir düsük nM'lik baglama afinitesine (KD) sahip oldugu bulunmustur. Proteinler, afinitede bir iki katlik farklilik ile sonuçlanan birlesme-hizinda bir iki katlik farklilik ile, benzer ayrilma hizlarina sahip olmustur.
TABLO 6. FVIII Proteinlerinin vWF'yi Biacore Baglama Analizi Kinetik hiz Ayrilma- parametreleri hizi/Birlesme- Analit Ligand N Birlesme- Ayrilma- KD(M) TABLO 6'da gösterildigi üzere, rFVIIlFC DS'nin veya tek zincirli rFVIIIFc'nin VWF ile afinitesinin, tek basina BDD FVIII'inkine kiyasla yaklasik olarak iki kat daha büyük olan, düsük nM'lik aralik içinde oldugu bulunmustur. Fizyolojik konsantrasyonlarda, bu, serbest FVIII'e kiyasla VWF ile kompleks olusturmus rFVlIIFc'nin (islenmis veya tek zincirli) yüzdesinde bir hafif-derecede azalma ile sonuçlanacaktir, bununla birlikte, in Vivo çalismalar, rFVIIIFc'nin yari- ömrünün bu hafif bir sekilde daha düsük olan afiniteye ragmen tam boy veya BDD FVIII'e kiyasla anlamli olarak uzatilmis oldugunu göstermistir ve bundan dolayi bunun molekülün yari- ömründen taviz vermedigi görülür. Serbest rFVIIIFc, FcRn yolu yoluyla daha etkili bir sekilde geri-dönüstürülebilir ve böylelikle yari-ömrün bir daha fazla uzatilmasina katki saglayabilir. rFVIIIFc Faz I/IIa Klinik Çalisma Bir Faz I/lIa, açik-etiketli, çapraz, doz-eskalasyon, çok- merkezli ve insanda ilk kez yapilan çalisma, ( endojen FVIII [FVIII] olarak tanimlanan) siddetli hemofili A'si olan süjelerde bir tek rFVIIIFc dozunun güvenligini, tolerabilitesini ve farmakokinetiklerini degerlendirmek için tasarlanmistir. Önceden tedavi edilmis toplamda yaklasik olarak 12 hasta kaydedilmistir ve 25 veya 65 IU/kg'da rFVIIIFc ile dozlanmistir. (Advate®'nin [rFVIII], referans komparatör ajaninin, birinci dozundan önceki 28 gün içinde planlanmis) taramadan ve birinci enjeksiyondan önce FVIII tedavisi olmadan geçen minimum 4-günden (96 saatten) sonra, yaklasik olarak 6 süje bir tek 25 lU/kg Advate® dozu almistir, bunu bir 3-günlük (72 saatlik) farmakokinetik (PK) profili izlemistir sonra bir 7-günlük (168 saatlik) PK profillemesi için bir 25 IU/kg'lik tek, açik-etiketli rFVIIIFc dozuna geçmistir ve bunu almistir.
Ilk 3 süje sirali olarak dozlanmistir. 25 IU/kg rFVIIIFc ile dozlanmis ilk üç (3) süje için, her bir süje rFVlIIFc'nin enjeksiyonundan sonra l4-günlük (336 saatlik) bir inhibitör degerlendirmesi geçirmistir. (Yalnizca ilk üç süje için) sonraki süjenin dozlanmasi, inhibitör testleri tamamlandiginda, gerçeklesmistir. 3. süjenin 14 günlük inhibitör degerlendirmesinin tamamlanmasindan sonra, 25 grubu içinde en az 1 günlük ara ile sirali olarak kayda baslamistir.
Son süje 25 IU/kg rFVIIIFc dozunu aldiktan bir hafta sonra, yaklasik olarak 6 essiz süje 65 IU/kg'lik kohort için geri- çagrilmistir. 65 lU/kg'lik kohort içindeki her bir süje bir tek 65 IU/kg Advate® dozu almistir, bunu bir 4-günlük (96 saatlik) PK profillemesi izlemistir akabinde ve bir lO-günlük (240 saatlik) profilleme için bir 65 IU/kg'lik tek, açik- etiketli rFVIIIFc dozuna geçmistir ve bunu almistir. Bir kanama epidozu herhangi bir kohort içinde rFVIIIFc'nin birinci enjeksiyonundan önce gerçeklestiginde, süjelerin› çalisma- Öncesi FVIII ürünü. tedavi için kullanilmistir* ve PK _profili için rFVIIIFc'nin birinci enjeksiyonunu alinmadan önce en az 4 günlük bir araligin geçmesi gerekmistir.
Tüm, süjeler 25 IU/kg veya 65 IU/kg rFVIIIFc uygulamasindan sonra güvenlik için bir l4-günlük (336 saatlik) ve 28 günlük güvenlik degerlendirmesi periyodu için takip edilecektir. Tüm süjelerden, gösterilen zaman noktalarinda FVIII aktivitesinin analizi için kan örneklerinin yaninda dozlam-öncesinde ve sonrasinda farmakokinetik örnek alimi da yapilmistir.
Faz I/Ila klinik çalisma için farmakokinetik veriler, FVIIIFC için asagidaki sonuçlari göstermistir. FVIIIFC, ADVATE®'ye (tam boy rFVlII'e) kiyasla, sistemik maruziyette (AUCmF) yaklasik eliminasyon yari-ömründe ve MRT'de yaklasik %50-70'lik artisa sahiptir. Buna ek olarak, FVIIIFC, ADVATE9'ye kiyasla arttirilmis C168, TBLPl, TBLP3 ve TBLP5 degerleri göstermistir. Ölçülmüs PK parametreleri asagidakilerdir: ÄUCmF Sifirdan sonsuza konsantrasyon-zaman egrisi altinda kalan alan Beta HL Eliminasyon fazi yari-ömrü; ayrica tlQß olarak da ifade edilir Cl68 Dozdan yaklasik olarak 168 saat sonra baseline üzerinde tahmin edilen FVIIIFC aktivitesi Cl Klirens MRT Ortalama kalma süresi TBLPl FVIIIFC aktivitesi baseline üzerinde yaklasik olarak 1 IU/dl'ye düstügünde dozdan sonra model-tahminli zaman TBLP3 FVIIIFC aktivitesi baseline üzerinde yaklasik olarak 3 lU/dl'ye düstügünde dozdan sonra model-tahminli zaman TBLPS FVIIIFC aktivitesi baseline üzerinde yaklasik olarak 5 IU/dl'ye düstügünde dozdan sonra model-tahminli zaman rFVIIIFc'nin Farmakokinetikleri (PK) Bir rekombinant B-alani-silinmis faktör VIII-FC (rFVIIIFc) füzyon proteini, FVIII'in yari-ömrünü uzatmak için bir yaklasim olarak olusturulmustur. rFVIlIFc'nin farmakokinetikleri (PK), hemofili A farelerinde rFVIII ile karsilastirilmistir. Nihai yari-ömür rFVlII'e kiyasla rFVIIIFc için iki kat daha uzundur. Yari-ömrün uzamasi için altta yatan mekanizmanin rFVIIlFc'nin FcRn tarafindan korunmasindan kaynaklandigini konfirme etmek için, PK, FcRn nakavt ve insan FcRn transgenik farelerinde degerlendirilmistir.
Bir tek intravenöz ( doz uygulanmistir ve plazma konsantrasyonu bir kromojenik aktivite analizi kullanilarak ölçülmüstür. Cmaß, her iki fare susundar rFVIIIFc ve rFVIII (XYNTHA®) arasinda benzerdir. Bununla birlikte, rFVIIIFc için yari-ömür FcRn nakavt farelerde rFVIII'inki ile karsilastirilabilir iken, rFVIIIFc için yari-ömür hFcRn transgenik farelerinde rFVIII için olana kiyasla yaklasik olarak iki kat daha uzun olacak sekilde uzatilmistir. Bu sonuçlar, FcRn'nin rFVIII'e kiyasla rFVIIIFc'nin uzatilmis yari-ömrüne aracilik ettigini veya bundan sorumlu oldugunu konfirme etmistir. Tam kanda rotasyon tromboelastometri (ROTENW) ile ölçülen hemostazin hemofili farelerinin kanama modellerinde ayni zamanda klinik uygulamalarda koagülasyon faktörlerinin etkinligi ile korele oldugu gösterildiginden, ROTENß'i kullanarak hemofili A farelerinde rFVIIIFc'nin ex vivo etkinligini degerlendirmeyi arastirdik.
Hemofili A farelerine bir tek intravenöz 50 IU/kg rFVIIIFc, XYNTHA® (FVIII) veya ADVATE® (FVIII) dozu uygulanmistir. Dozdan dakika sonra, pihti olusumu pihtilasma zamani (CT), pihti olusumu zamani (CFT) ve d-açisi açisindan benzerdir. Bununla birlikte, rFVIIIFc dozdan 72 ve 96 saat sonra anlamli bir sekilde iyilestirilmis CT göstermistir ve CFT ve d-açisi da, rFVIIIFc'nin uzatilmis PK'si ile tutarli olarak, hem XYNTHAß'ya (FVIII) hem de ADVATE®'ye (FVIII) kiyasla 96 sa'te iyilestirilmistir. Bu sonuçlar, rFVIIIFc'nin bir arttirilmis yari-ömür ile sonuçlanan bir tanimlanmis etki mekanizmasina ve kanamadan uzatilmis koruma saglama potansiyeline sahip oldugunu göstermistir. rFVIIIFc Faz I/IIa Klinik Çalisma Sonuçlari Bu Örnek, 25 ve 65 IU/kg FVIII ürünleri ile tedavi edilmis 16 hastadan FVIII aktivitesi için nihai analiz sonuçlarini sunar.
Bakiniz, Örnekler 3. rFVIIIFc, araya giren baglayici dizi olmadan, insan IgGl'inin dimerik FC alanina kaynastirilmis rekombinant B-alani silinmis insan FVIII'inin (BDD-rFVIII) bir tek molekülünden olusturulan bir rekombinant füzyon proteinidir. Bu protein yapisi ayrica burada, rFVIIIFC heterodimerik hibrit protein, FVIIIFC monomerik FC füzyon proteini, FVIIIFC monomer hibridi, monomerik FVIIIIFC hibridi ve FVIIIFC monomer-dimeri olarak da ifade edilir. Bakiniz, Örnek 1, SEKIL 1 ve TABLO 2A. rFVIIIFc ile preklinik çalismalar, piyasada satilan rFVIII ürünlerine kiyasla rFVIII aktivitesinin yari-ömrünün bir yaklasik olarak 2-katlik uzatilmasini göstermistir. Bu çalisma için bilimsel zemin, siddetli hemofili A süjelerinde bir dondurulmus sivi formülasyon içinde bir tek rFVIIIFc dozunun güvenligini ve tolerabilitesini degerlendirmektir ve PK hakkinda veriler saglamaktir. Bu çalisma için, degerlendirilebilen 16 süje PK degerlendirmesi için mevcuttur. (n=6) ve 65 (n=lO) IU/Vücut agirliginin kg'i olan bir nominal dozda hem rFVIIIFc'nin hem de ADVATEQ'nin iki dozunun tek uygulamasi yaklasik olarak 10 dakika boyunca intravenöz olarak infüze edilmistir. Plazma PK degerlendirmeleri için kan örnekleri infüzyondan önce ayni zamanda dozlamdan 10 gün sonraya kadar alinmistir. Hem ADVATE® hem de rFVIIIFc için FVIII aktivitesinin PK'si bu çalismada bir modele-bagimli yöntem kullanilarak karakterize edilmistir.
Amaçlar Bu çalismanin primer amaci, 12 yas ve üstünde siddetli hemofili A'si olan önceden tedavi edilmis hastalarda (PTP'ler) rFVIIIFC'nin iki dozunun (25 ve 65 IU/kg) tek uygulamasinin güvenligini ve tolerabilitesini degerlendirmektir. Sekonder amaç, bir-evreli pihtilasma analizlerinde ve kromojenik analizlerde ADVATE®'ye kiyasla rFVIIIFc'nin 25 veya 65 farmakodinamik (PD) aktivitesi ile belirlenenr farmakokinetik (PK) parametreleri belirlemektir. Çalisma Tasarimi (bakiniz, Örnek 3) Kan örnekleri, (ADVATE® dozlamindan önceki 28 gün içinde) tarama vizitinde; enjeksiyon-öncesi (ADVATE® enjeksiyonu) Gün 0'da ve enjeksiyondan 10 ve 30 dakika ve 1, 3, 6 ve 9 saat sonra; ADVATE® enjeksiyonundan 24 saat sonra Gün 1'de; ADVATE® enjeksiyonundan 48 saat sonra Gün 2'de; ADVATE® enjeksiyonundan 72 saat sonra Gün 3'te ve ADVATE®'nin yüksek dozunun (yalnizca Kohort B) enjeksiyonundan 96 saat sonra Gün 4'te FVIII aktivitesi PK degerlendirmeleri için toplanmistir.
Kan örnekleri, rFVIIIFc enjeksiyonu gününde rFVIIIFc uygulanmasindan hemen önce, rFVIIIFc enjeksiyonundan 10 ve 30 dakika ve 1, 3, 6 ve 9 saat sonra; rFVIIIFc enjeksiyonundan 24 saat sonra Gün 1'de, rFVIIIFc enjeksiyonundan 48, 72, 96 ve 120 saat sonra Gün 2 ila Gün 5 arasinda; rFVIIIFc enjeksiyonundan 168 saat sonra Gün 7'de; rFVIIIFC'nin yüksek dozunun (yalnizca Kohort B) enjeksiyonundan 192, 216 ve 240 saat sonra Günler 8'de, 9'da ve 10'da FVIII PK degerlendirmeleri için toplanmistir. FVIII aktivitesi ayrica rFVIIIFc enjeksiyonundan 672 saat sonra nihai çalisma vizitinde de (rFVIIIFc enjeksiyonundan 28 gün sonra da) ölçülmüstür.
Farmakokinetik Modelleme Kisaltmalar TBLPl FVIII aktivitesi baseline üzerinde yaklasik olarak 1 IU/dl'ye düstügünde dozdan sonra model- tahminli zaman TBLP3 FVIII aktivitesi baseline üzerinde yaklasik olarak 3 IU/dl'ye düstügünde dozdan sonra model-tahminli zaman Hesaplamalar KV_M = Cmmm_M/Gerçek Doz (IU/kg) KV_OB = Cmam_OB/Gerçek Doz (IU/kg) burada mL cinsinden plazma hacmi = (23,7 x cm cinsinden Ht) + (9,0 x kg cinsinden Wt) - 1709. lVR_OB = 100 x Cmmß_OB x Plazma Hacmi (dL) / IU cinsinden Toplam Doz; burada mL cinsiden plazma hacmi = (23,7 x cm cinsinden Ht) + (9,0 x kg cinsinden Wt) - 1709.
Sonuçlar (a) Tek-Doz Farmakokinetikleri (Bir-Evreli Analiz) Gözlemlenen FVIII aktivitesi, ADVATE®'nin veya rFVIIIFc'nin kisar IV infüzyonundan sonra, sirasiylar 25 ve 65 IU/kg doz (±SD) model-tahminli meß degerleri ile, keskin bir sekilde artmistir. ADVATE® ve rFVIIIFc ile tedavi edilmis hastalarin tümü FVIII aktivitesinde doz ile iliskili artislara sahiptir.
Hem Cmüs'ta hem de AUCnw'de gözlemlenen artis degerlendirilen doz araligi boyunca doz ile hafif-derecede daha az orantilidir.
Infüzyonun bitmesinden sonra, gözlemlenen FVIII aktivitesi düsüsü, baseline düzeyine ulasilana kadar, mono-üssel düsüs karakteristikleri göstermistir. FVIII aktivitesindeki düsüs hizi, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için, ADVATEEiçin ve 18,4 ± 6,99 saat olan ortalama (±SD) model-tahminli eliminasyon yari-ömrü degerleri ile ADVATE® için olana kiyasla rFVIIIFc için daha yavastir. Eliminasyon yari-ömrü degerlerinin her iki FVIII ürünü için degerlendirilen doz araligi boyunca dozdan bagimsiz oldugu görülmüstür.
(AUCnw ile degerlendirildigi üzere) toplam sistemik FVIII maruziyeti sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz düzeylerinde ADVATE®'ye kiyasla rFVIIIFC uygulamasini takiben ~%48 ve %61 daha fazladir. Ortalama (±SD) model-tahminli AUCmF degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için ADVATEâiçin 974 ± 2910 ± 1320 sa*IU/dL'dir.
Eliminasyon yari-ömrüne benzer bir sekilde, MRT ADVATE9'ye kiyasla rFVIIIFc için uzatilmistir. Ortalama (±SD) model- tahminli MRT degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari iki FVIII ürünü için degerlendirilen doz araligi boyunca dozdan bagimsiz oldugu görülmüstür.
Buna ek olarak, CL ve V için primer PK parametresi degerleri belirlenmistir. rFVIIIFc için CL degerleri ayrica, es-deger dozlarda ADVATE® için gözlemlenenlerin ~%66'sina tekabül etmistir. Ortalama (±SD) model-tahminli CL degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için ADVATE®için 2,70 ± olan ortalama (±SD) model-tahminli V degerleri ile, ADVATE®ve rFVIIIFc arasinda karsilastirabilir olmustur. Ortalama CL ve V degerlerindeki hafif-derecede artislar, artan ADVATE® ve rFVIIIFc dozu ile bildirilmistir; bununla birlikte, sinirli doz düzeyleri ile birlikte 65 IU/kg dozda standart sapmalardaki artis, bu parametrelerin doza bagimliginin bir degerlendirmesini karistirmistir. Örnegin, rFVIIIFc tedavi grubu için CV %'si geometrik ortalama CL degeri, %23,0'dan (25 lU/kg) %48,6'ya (65 IU/kg) artmistir.
Primer PK parametrelerine ek olarak, sekonder PK parametreleri (örnegin, K-degerleri, IVR, vb.) FVIII etki süresini degerlendirmek için belirlenmistir. PK farkinin bulgusu ayrica, es-deger* dozlarda..ADVATE®'ye kiyasla. artmis TBLPl ve TBLP3 degerleri gösteren rFVIIIFc ile de gözlemlenmistir.
ADVATE® ve rFVIIIFc için IVR ve K-degerlerinin karsilastirilabilir oldugu görülmüstür. TBLPl ve TBLP3 degerlerinde hafif-derecedeki bir artis artan ADVATE(E ve rFVIIIFC dozu ile gözlemlenmistir. Aksine, ortalama IVR ve K- degerlerindeki hafif-derecedeki düsüsler artan ADVATE® ve rFVIIIFc dozu ile bildirilmistir. Önceden gösterildigi üzere, bu parametrelerin doza bagimliliginin bir degerlendirmesi sinirli doz düzeyleri tarafindan karistirilmistir.
Ortalama (±SD) gözlemlenen TBLPl, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz ve 5,16 ± gözlemlenen TBLP3, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için ADVATE® için her (Baseline ve model içinde rezidüel ilaç çikartilmis) gözlemlenen Qmks degerleri kullanilarak hesaplanmis ortalama kullanilarak belirlenen degerlere kiyasla daha büyüktür; bu bir-kompartimanli model kullanilarak gözlemlenen pik aktivitesinin hafif-derecede eksik-tahmini ile tutarlidir.
Ortalama (±SD) gözlemlenen K-degerleri, sirasiyla 25 ve 65 gözlemlenen IVR degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz (b) Tek-Doz Farmakokinetikleri (Kromojenik Analiz) Gözlemlenen FVIII aktivitesi, ADVATE®'nin veya rFVIIIFc'nin kisa IV infüzyonündan sonra, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz (±SD) model-tahminli Cmaß degerleri ile, keskin bir sekilde artmistir.
ADVATE®VG rFVIIIFc ile tedavi edilmis hastalarin. tümü FVIII aktivitesinde doz ile iliskili artislara sahiptir. Hem Cmnß'ta hem de ÄUCnw'de gözlemlenen artis degerlendirilen doz araligi boyunca doz ile hafif-derecede daha az orantilidir.
Infüzyonun bitmesinden sonra, gözlemlenen FVIII aktivitesi düsüsü, baseline düzeyine ulasilana kadar, mono-üssel düsüs karakteristikleri göstermistir. FVIII aktivitesindeki düsüs hizi, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için, ADVATE® için ve 19,0 ± 7,94 saat olan ortalama (±SD) model-tahminli eliminasyon yari-ömrü degerleri ile ADVATE® için olana kiyasla rFVIIlFC için daha yavastir. Eliminasyon yari-Ömrü degerlerinin her iki FVIII ürünü için degerlendirilen doz araligi boyunca dozdan bagimsiz oldugu görü1müstür.
(AUCnw ile degerlendirildigi üzere) toplam sistemik FVIII maruziyeti sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz düzeylerinde ADVATE®'ye kiyasla rFVIIIFc uygulamasini takiben ~%53 ve %84 daha fazladir. Ortalama (±SD) model-tahminli AUCmF degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için ADVATE® için 1080 ± 4280 ± 1860 sa*IU/dL'dir.
Eliminasyon yari-ömrüne benzer bir sekilde, MRT ADVATE®'ye kiyasla rFVIIIFc için uzatilmistir. Ortalama (±SD) model- tahminli MRT degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari degerlerinin her iki FVIII ürünü için degerlendirilen doz araligi boyunca dozdan bagimsiz oldugu görülmüstür.
Buna ek olarak, CL ve V için primer PK parametresi degerleri belirlenmistir. rFVIIIFc için CL degerleri ayrica, es-deger dozlarda ADVATE® için gözlemlenenlerin ~%58-66'sina tekabül etmistir. Ortalama (±SD) model-tahminli CL degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için ADVATE® için 2,39 ± olan ortalama (±SD) model-tahminli V degerleri ile, ADVATE® ve rFVIIIFc arasinda karsilastirabilir olmustur. Ortalama CL ve V degerlerindeki artislar, artan ADVATE® ve rFVIIIFc dozu ile bildirilmistir; bununla birlikte, sinirli doz düzeyleri ile birlikte 65 IU/kg dozda standart sapmadaki artis, bu parametrelerin doza bagimliginin bir degerlendirmesini karistirmistir.
Primer PK parametrelerine ek olarak, sekonder PK parametreleri (örnegin, K-degerleri, IVR, Vb.) FVIII etki süresini degerlendirmek için belirlenmistir. PK farkinin bulgusu ayrica, es-deger` dozlarda ADVATE®'ye kiyasla artmis TBLPl ve TBLP3 degerleri gösteren rFVIIIFc ile de gözlemlenmistir.
ADVATE® ve rFVIIIFc için IVR ve K-degerlerinin karsilastirilabilir oldugu görülmüstür.
TBLPl ve TBLP3 degerlerinde hafif-derecede artis artan ADVATE® ve rFVIIIFc dozu ile gözlemlenmistir. Aksine, ortalama IVR ve K-degerlerindeki hafif-derecedeki düsüsler artan ADVATE® ve rFVIIIFc dozu ile bildirilmistir. Önceden gösterildigi üzere, bu parametrelerin doza bagimliliginin bir degerlendirmesi sinirli doz düzeyleri tarafindan karistirilmistir.
Ortalama (±SD) gözlemlenen TBLPl, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz ve 5,66 ± gözlemlenen TBLP3, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz gruplari için ADVATE® için her (Baseline ve model içinde rezidüel ilaç çikartilmis) gözlemlenen Gmks degerleri kullanilarak hesaplanmis ortalama kullanilarak belirlenen degerlere kiyasla daha büyüktür; bu bir-kompartimanli model kullanilarak gözlemlenen pik aktivitesinin hafif-derecede eksik-tahmini ile tutarlidir.
Ortalama (±SD) gözlemlenen K-degerleri, sirasiyla 25 ve 65 gözlemlenen IVR degerleri, sirasiyla 25 ve 65 IU/kg doz Sonuçlar ADVATE® ve rFVIIIFc ile tedavi edilmis hastalarin tümü, degerlendirilen doz araligi boyunca Cmüs'ta ve AUCnw'de karsilastirilabilir doz ile iliskili artislara sahiptir.
ADVATE® ve rFVIlIFc aktivitesinin pik plazma düzeyleri genel olarak, infüzyonun bitmesinden sonra birinci saat içinde gözlemlenmistir ve dozlamdan sonra bir kaç gün boyunca saptanabilir olarak kalmistir. Infüzyonun bitmesinden sonra, baseline düzeltilmis FVIII aktivitesindeki düsüs, her iki ürün için de baseline'a ulasilana kadar, mono-üssel düsüs göstermistir. Eliminasyon yari-ömrü ve MRT için parametrenin her iki FVIII ürünü için degerlendirilen doz araligi boyunca dozdan bagimsiz oldugu. görülmüstür. Ortalama, CL ve V degerlerindeki hafif-derecedeki artislar, artan ADVATE® ve rFVIIlFc dozu ile bildirilmistir; bununla birlikte, sinirli doz düzeyleri ile birlikte 65 IU/kg dozda standart sapmadaki artis, bu parametrelerin doza bagimliginin bir degerlendirmesini karistirmistir. rFVIIIFc ve ADVATEO aktivitesi PK karsilastirmasi, karsilastirilabilir dozlarda ADVATE®'ye kiyasla rFVIIIFc için sistemik maruziyette yaklasik bir %48-6l'lik (Bir Evreli Analiz) veya %53-84'lük artis, klirense yaklasik %30-40'lik düsüs ve hem eliminasyon yari-ömründe hem de MRT'de bir yaklasik %50-80'lik artis ortaya çikarmistir. PK farkinin bulgusu ayrica, es-deger dozlarda ADVATE®`ye kiyasla artmis TBLPl ve TBLP3 degerleri gösteren rFVIIIFc ile de gözlemlenmistir. ADVATEgve rFVIIIFc için IVR ve K-degerlerinin karsilastirilabilir oldugu görülmüstür.
Kromojenik Analiz'den elde edilen PK parametreleri, Kromojenik Analiz'in maruziyet parametrelerinin (örnegin, Cmmßi AUCnw, Vb.) daha yüksek bir tahminini üretmesi disinda, genel olarak Bir-Evreli Analiz'inkiler ile uyumludur.
PK'da gözlemlenen iyilestirmeler ile, rFVIIIFc Hemofili A'si olan bireyler için daha az sik enjeksiyonlara olanak saglayarak, kanamadan uzatilmis koruma saglayabilir. rFVIIIFc A-LONG Faz 3 Klinik Çalisma rFVIIIFc'nin insanda ilk kez yapilan çalismasindan (Örnek 3) interim PK analizine göre, A-LONG çalismasi tasarlanmistir. A- LONG, ( siddetli hemofili A'si olan önceden tedavi edilmis süjelerde kanamanin önlenmesinde ve tedavisinde rekombinant FVIII Fc füzyonunun (FVIllzFc) güvenliginin, farmakokinetiklerinin ve etkinliginin bir açik etiketli, global, çok-merkezli Faz 3 degerlendirmesidir.
A-LONG çalismasinin primer amaçlari, i) profilaksi, haftalik, talep-edildiginde alinan ve cerrahi tedavi rejimleri olarak uygulanan rFVIIIFc'nin güvenligini ve tolerabilitesini degerlendirmektir ve (ii) uygun hale getirilmis profilaksi, talep-edildiginde alinan ve cerrahi tedavi rejimleri olarak uygulanan rFVIIIFc'nin etkinligini degerlendirmektir. A-LONG çalismasinin sekonder amaci, (i) rFVIIIFc'nin PK profilini karakterize etmektir ve rFVIIIFc'nin PK'sini güncel olarak pazarlanan ürün, ADVATE®, ile karsilastirmaktir, (ii) rFVIIIIFc ile münferit yanitlari degerlendirmektir, (iii) bir profilaksi rejiminde kanamayi yeterli bir sekilde önlemek, bir cerrahi kosulda homeostazi idame ettirmek veya bir talep-edildiginde alinan, haftalik tedavide veya profilaksi kosulunda kanama epizodlarini tedavi etmek için gerekli olan doz araligini ve planlamalari karakterize etmektir ve (iv) rFVIIIFc tüketimini (örnegin, her bir süje için toplam yillik olarak hesaplanmis rFVIIIFc tüketimini) degerlendirmektir. 165 süje üç rejimin birine kaydedilmistir: bir uygun hale getirilmis profilaksi rejimi (Kol 1), bir haftalik dozlam rejimi (Kol 2) ve bir talep-edildiginde alinan rejim (Kol 3).
Buna ek olarak, rFVIIIFc bir perioperatif yönetim alt-grubunda degerlendirilmistir.
Kilit dahil edilme kriterleri: (i) erkek, (ii) 212 yas ve en az 40 kg, (iii)

Claims (15)

    ISTEMLER
  1. l.Bir insan süjede bir inhibitör faktör VIII immün yanitini azaltmada kullanim için bir faktör VIII kismi ve FC kismi içeren bir kimerik polipeptit olup, özelligi süjenin faktör VIII'e karsi bir inhibitör immün yanit gelistirmesidir.
  2. . Istem I'e göre kullanim› için kimerik polipeptit olup, özelligi faktör VIII kisminin, islenmis faktör VIII veya tek Zincirli faktör VIII veya bunlarin bir kombinasyonunu içermesidir.
  3. .Istem l'e veya Z'ye göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi inhibitör faktör VIII immün yanitin, faktör VIII'e inhibitör antikorlarin üretilmesini, bir hücre-aracili immün yaniti veya arttirilmis kanama egiliminden, yüksek faktör VIII tüketiminden, faktör VIII terapisine yanit olmamasindan, faktör VIII terapisinin azaltilmis etkinliginden, faktör` VIII'in kisaltilmis yari-ömründen olusan gruptan seçilen bir klinik semptomu içermesidir.
  4. .Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi inhibitör faktör VIII immün yanitin, inhibitör anti-faktör VIII antikorlarinin üretilmesini içermesidir.
  5. . Istem 4'e göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi anti-faktör `VIII antikorlarinin. konsantrasyonu, en az 0,6 Bethesda Birimi (BU) olmasidir.
  6. .Istem 4'e veya 5'e göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi anti-faktör VIII antikorlarinin konsantrasyonun en az 1,0 BU olmasidir.
  7. .Istemler 1 ila 6'ten herhangi birine göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi süjenin bir fetüs olmasidir.
  8. . Istem 7'ye göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi kimerik polipeptitin fetüsün annesine uygulanacak olmasidir.
  9. .Istemler 1 ila 3'ten herhangi birine göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi inhibitör faktör FVIII immün yanitin asagidakilerden olusan gruptan seçilmesidir: a) IL-lZ'nin salimi; b) IL-4'ün salimi; ve c) TNF-d'nin salimi.
  10. Istemler l ila 9'dan herhangi birine göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi (a) süjedeki anti-faktör VIII antikorlarinin sayisini kimerik polipeptidin uygulanmasindan önceki sayiya kiyasla azaltir; (b) süjedeki anti-faktör VIII antikorlarinin titresini kimerik polipeptidin uygulanmasindan önceki titreye kiyasla azaltir; ve/Veya (c) süjedeki bir sitokinin düzeyini kimerik polipeptidin uygulanmasindan önceki düzeye kiyasla azaltir.
  11. Istemler 1 ila lO'dan herhangi birine göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi süjenin asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir veya birden fazla karakteristige sahip oldugu tanimlanmasidir: (a) faktör VIII'i sifreleyen gende bir mutasyona veya silinmeye sahiptir; (b) faktör VIII'i sifreleyen gende bir yeniden- dizilime sahiptir; (c) faktör VIII'e karsi önceden bir inhibitör immün yanit gelistirmis olan bir akrabaya sahiptir; (d) interferon terapisi almaktadir; (e) anti-Viral terapi almaktadir; ve (f) faktör VIII'i sifreleyen gen disindaki, bir inhibitör immün yanit gelistirmeye yönelik bir arttirilmis risk ile ilgili olan bir gende bir genetik mutasyona sahiptir.
  12. Istem 11'e göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi faktör VIII'i sifreleyen gen disindaki bir gendeki genetik mutasyonun, asagidakilerden olusan gruptan seçilen bir mutasyonu içermesidir: a) arttirilmis TNF-d ile iliskili olan bir genetik polimorfizm; ve b) arttirilmis IL-lO ile iliskili olan bir genetik polimorfizm.
  13. Istemler 1 ila 12'den herhangi birine göre kullanim kimerik polipeptit olup, özelligi faktör VIII kisminin, B alaninin bir tam 'veya parsiyel silinmesine sahip olan insan FVIII olmasidir.
  14. Istemler 1 ila 13'ten herhangi birine göre kullanim kimerik polipeptit olup, özelligi faktör VIII kismi ve F0 kismi içeren bir birinci polipeptidin. ve bir FC kismindan olusan bir ikinci polipeptit içeren bir monomer dimer hibrit olmasidir.
  15. 15. Istemler 1 ila l4'ten herhangi birine göre kullanim için kimerik polipeptit olup, özelligi bir kanama epizodunu azaltmak, bir kanama rahatsizligini tedavi etmek veya her ikisi için uygun olmasidir.
TR2018/16253T 2012-01-12 2013-01-12 Faktör VIII terapisi almakta olan bireylerde faktör VIII'e karşı immünojenisiteyi azaltmanın yöntemleri. TR201816253T4 (tr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261586103P 2012-01-12 2012-01-12
US201261668961P 2012-07-06 2012-07-06

Publications (1)

Publication Number Publication Date
TR201816253T4 true TR201816253T4 (tr) 2018-11-21

Family

ID=48781969

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
TR2018/16253T TR201816253T4 (tr) 2012-01-12 2013-01-12 Faktör VIII terapisi almakta olan bireylerde faktör VIII'e karşı immünojenisiteyi azaltmanın yöntemleri.

Country Status (22)

Country Link
US (3) US10221455B2 (tr)
EP (3) EP3453402B1 (tr)
JP (4) JP6234378B2 (tr)
CN (2) CN108465106B (tr)
AU (2) AU2016210768B2 (tr)
BR (1) BR112014017111A8 (tr)
CA (1) CA2863329C (tr)
CY (1) CY1121157T1 (tr)
DK (1) DK2802668T3 (tr)
EA (2) EA038705B1 (tr)
ES (2) ES2899848T3 (tr)
HR (1) HRP20181714T1 (tr)
HU (1) HUE041595T2 (tr)
IL (1) IL233565B (tr)
LT (1) LT2802668T (tr)
NZ (1) NZ627078A (tr)
PL (2) PL2802668T3 (tr)
PT (2) PT3453402T (tr)
RS (1) RS57936B1 (tr)
SI (1) SI2802668T1 (tr)
TR (1) TR201816253T4 (tr)
WO (1) WO2013106789A1 (tr)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2899848T3 (es) 2012-01-12 2022-03-15 Bioverativ Therapeutics Inc Reducción de la inmunogenicidad contra el factor VIII en individuos sometidos a una terapia con factor VIII
EP2914293A4 (en) * 2012-10-30 2016-04-20 Biogen Ma Inc METHOD OF USE OF FVIII POLYPEPTIDE
US10588949B2 (en) 2013-03-15 2020-03-17 Bioverativ Therapeutics Inc. Factor IX polypeptide formulations
SI3068869T1 (sl) 2013-11-15 2020-11-30 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Sestavki za supresijo tvorbe inhibitorja proti faktorju VIII pri pacientih s hemofilijo A
JP6488376B2 (ja) * 2014-06-12 2019-03-20 ユニヴァーシティ オブ ハワイＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｏｆ Ｈａｗａｉｉ 免疫原性を低減するかまたは予防するためのヒト化コブラ毒因子を含む医薬組成物、薬剤および組み合わせ医薬
SG10202106307UA (en) * 2015-11-13 2021-07-29 Takeda Pharmaceuticals Co Viral vectors encoding recombinant fviii variants with increased expression for gene therapy of hemophilia a
TW202229555A (zh) * 2015-11-13 2022-08-01 日商武田藥品工業股份有限公司 用於ａ型血友病基因治療之編碼表現增加之重組ｆｖｉｉｉ變異體之病毒載體
RU2647769C2 (ru) * 2015-12-30 2018-03-19 Закрытое Акционерное Общество "Биокад" Химерный улучшенный рекомбинантный фактор VIII
WO2017139787A1 (en) * 2016-02-12 2017-08-17 Bloodworks Therapeutic induction of tolerance using recombinant cell surface antigens
US20170252417A1 (en) * 2016-03-07 2017-09-07 Massachusetts Institute Of Technology Protein-chaperoned t-cell vaccines
CN107759694B (zh) 2016-08-19 2023-01-13 安源医药科技（上海）有限公司 双特异性抗体及其制备方法与用途
CN106279437B (zh) * 2016-08-19 2017-10-31 安源医药科技（上海）有限公司 高糖基化人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
US20190381149A1 (en) 2016-12-02 2019-12-19 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of treating hemophilic arthropathy using chimeric clotting factors
EP3548063A1 (en) * 2016-12-02 2019-10-09 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of inducing immune tolerance to clotting factors
US20210163986A1 (en) 2017-08-09 2021-06-03 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof
SG11202010767SA (en) 2018-05-18 2020-11-27 Bioverativ Therapeutics Inc Methods of treating hemophilia a
EP3833766A1 (en) 2018-08-09 2021-06-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Nucleic acid molecules and uses thereof for non-viral gene therapy
CN110950964B (zh) 2018-09-26 2021-06-18 安源医药科技（上海）有限公司 突变型单链人凝血因子viii融合蛋白及其制备方法与用途
TW202039546A (zh) 2019-01-16 2020-11-01 美商巴克斯歐塔公司 用於a型血友病基因治療之編碼表現增加之重組fviii變異體的病毒載體
US20220323519A1 (en) 2019-04-17 2022-10-13 Codiak Biosciences, Inc. Compositions of exosomes and aav
BR112021025426A2 (pt) 2019-06-19 2022-06-21 Bioverativ Therapeutics Inc Fator recombinante viii-fc para tratamento de hemofilia e baixa densidade mineral óssea
EP4016078A1 (en) * 2020-12-18 2022-06-22 Rheinische Friedrich-Wilhelms-Universität Bonn Method useful in tolerance induction therapy and kits therefore

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4757006A (en) 1983-10-28 1988-07-12 Genetics Institute, Inc. Human factor VIII:C gene and recombinant methods for production
US4965199A (en) 1984-04-20 1990-10-23 Genentech, Inc. Preparation of functional human factor VIII in mammalian cells using methotrexate based selection
ES8801674A1 (es) 1985-04-12 1988-02-16 Genetics Inst Un procedimiento para la preparacion de una proteina que presenta actividad procoagulante.
KR910006424B1 (ko) 1985-08-21 1991-08-24 인코텍스 비.브이 편성브리프(brief) 제조방법
DE3785102T2 (de) 1986-01-03 1993-07-22 Genetics Inst Verfahren zur herstellung von faktor-viii:c-typ-proteinen.
US5595886A (en) 1986-01-27 1997-01-21 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US4695199A (en) 1986-06-02 1987-09-22 Chevron Research Company Elastomeric bearing pad and seal for a removable bottom founded structure
US5610278A (en) 1986-06-24 1997-03-11 Novo Nordisk A/S Process for producing a coagulation active complex of factor VIII fragments
US4912040A (en) 1986-11-14 1990-03-27 Genetics Institute, Inc. Eucaryotic expression system
CA1331157C (en) 1987-04-06 1994-08-02 Randal J. Kaufman Method for producing factor viii:c-type proteins
US6060447A (en) 1987-05-19 2000-05-09 Chiron Corporation Protein complexes having Factor VIII:C activity and production thereof
US6346513B1 (en) 1987-06-12 2002-02-12 Baxter Trading Gmbh Proteins with factor VIII activity: process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
IE69026B1 (en) 1987-06-12 1996-08-07 Immuno Ag Novel proteins with factor VIII activity process for their preparation using genetically-engineered cells and pharmaceutical compositions containing them
DE3720246A1 (de) 1987-06-19 1988-12-29 Behringwerke Ag Faktor viii:c-aehnliches molekuel mit koagulationsaktivitaet
FR2619314B1 (fr) 1987-08-11 1990-06-15 Transgene Sa Analogue du facteur viii, procede de preparation et composition pharmaceutique le contenant
US4994371A (en) 1987-08-28 1991-02-19 Davie Earl W DNA preparation of Christmas factor and use of DNA sequences
US5004803A (en) 1988-11-14 1991-04-02 Genetics Institute, Inc. Production of procoagulant proteins
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
US5364771A (en) 1992-04-07 1994-11-15 Emory University Hybrid human/porcine factor VIII
US5859204A (en) 1992-04-07 1999-01-12 Emory University Modified factor VIII
US6376463B1 (en) 1992-04-07 2002-04-23 Emory University Modified factor VIII
US5563045A (en) 1992-11-13 1996-10-08 Genetics Institute, Inc. Chimeric procoagulant proteins
SE504074C2 (sv) 1993-07-05 1996-11-04 Pharmacia Ab Proteinberedning för subkutan, intramuskulär eller intradermal administrering
SE9503380D0 (sv) 1995-09-29 1995-09-29 Pharmacia Ab Protein derivatives
US6458563B1 (en) 1996-06-26 2002-10-01 Emory University Modified factor VIII
CA2225189C (en) 1997-03-06 2010-05-25 Queen's University At Kingston Canine factor viii gene, protein and methods of use
AU4314801A (en) 2000-02-11 2001-08-20 Lexigen Pharm Corp Enhancing the circulating half-life of antibody-based fusion proteins
JP2004509978A (ja) * 2000-06-05 2004-04-02 ユニバーシティ　オブ　テネシー　コーポレイション 免疫抑制因子のエンドサイトーシスによる提示のための組成物及び方法
US20040096456A1 (en) * 2000-12-01 2004-05-20 Conti-Fine Bianca M Method to treat hemophilia
US7485314B2 (en) 2002-05-06 2009-02-03 Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center Induction of antigen specific immunologic tolerance
US20040110929A1 (en) * 2002-07-12 2004-06-10 Bjorn Soren E. TF binding compound
US7041635B2 (en) 2003-01-28 2006-05-09 In2Gen Co., Ltd. Factor VIII polypeptide
TWI353991B (en) 2003-05-06 2011-12-11 Syntonix Pharmaceuticals Inc Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
US7348004B2 (en) 2003-05-06 2008-03-25 Syntonix Pharmaceuticals, Inc. Immunoglobulin chimeric monomer-dimer hybrids
EP3552627A1 (en) * 2003-05-06 2019-10-16 Bioverativ Therapeutics Inc. Clotting factor-fc chimeric proteins to treat hemophilia
US7211559B2 (en) 2003-10-31 2007-05-01 University Of Maryland, Baltimore Factor VIII compositions and methods
US8367805B2 (en) 2004-11-12 2013-02-05 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
US7871624B2 (en) * 2006-06-27 2011-01-18 Saint Louis University Chimeral polypeptide composition for cross-placenta delivery
GB0714361D0 (en) * 2007-07-24 2007-09-05 3M Innovative Properties Co Cation conductive membranes comprising polysulfonic acid polymers and metal salts having an F-containing anion
GB0723712D0 (en) 2007-12-04 2008-01-16 Apitope Technology Bristol Ltd Peptides
AU2009256093A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 Bayer Healthcare Llc FVIII muteins for treatment of von Willebrand disease
DE202008009492U1 (de) * 2008-07-15 2009-11-26 Tallinn University Of Technology Halbleitermaterial und dessen Verwendung als Absorptionsmaterial für Solarzellen
WO2010006635A1 (en) * 2008-07-16 2010-01-21 Paion Deutschland Gmbh Treatment of inflammatory bowel disease
EP2184070A1 (en) 2008-11-07 2010-05-12 Hla-G Technologies HLA-G proteins and pharmaceutical uses thereof
CN102427823A (zh) 2009-03-24 2012-04-25 拜耳医药保健有限公司 因子viii变体及使用方法
US9221075B2 (en) * 2009-11-09 2015-12-29 Ethicon, Inc. Surgical needle coatings and methods
PL2499165T3 (pl) 2009-11-13 2017-04-28 Grifols Therapeutics Inc. Preparaty zawierające czynnik von willenbranda (vwf) oraz sposoby, zestawy i zastosowania z nim powiązane
RS56957B1 (sr) 2009-12-06 2018-05-31 Bioverativ Therapeutics Inc Himerni i hibridni polipeptidi faktora viii-fc, i postupci za njihovu upotrebu
MX356527B (es) * 2010-07-09 2018-06-01 Bioverativ Therapeutics Inc Polipeptidos de factor ix y metodos para usarlos.
US9611310B2 (en) 2010-07-09 2017-04-04 Bioverativ Therapeutics Inc. Systems for factor VIII processing and methods thereof
ES2899848T3 (es) 2012-01-12 2022-03-15 Bioverativ Therapeutics Inc Reducción de la inmunogenicidad contra el factor VIII en individuos sometidos a una terapia con factor VIII
US20150252345A1 (en) 2012-09-25 2015-09-10 Biogen Idec Ma Inc. Methods of Using FIX Polypeptides
EP2908847B1 (en) * 2012-10-18 2022-03-30 Bioverativ Therapeutics Inc. Methods of using a fixed dose of a clotting factor
EP2914293A4 (en) 2012-10-30 2016-04-20 Biogen Ma Inc METHOD OF USE OF FVIII POLYPEPTIDE

Also Published As

Publication number Publication date
ES2899848T3 (es) 2022-03-15
JP2017149784A (ja) 2017-08-31
JP2021020950A (ja) 2021-02-18
JP6234378B2 (ja) 2017-11-22
CY1121157T1 (el) 2020-05-29
RS57936B1 (sr) 2019-01-31
CN108465106B (zh) 2022-05-27
PT2802668T (pt) 2018-12-04
AU2018267631A1 (en) 2018-12-13
PL3453402T3 (pl) 2022-03-21
CA2863329A1 (en) 2013-07-18
CN108465106A (zh) 2018-08-31
EP3453402A1 (en) 2019-03-13
JP6462044B2 (ja) 2019-01-30
IL233565A0 (en) 2014-08-31
EA029560B1 (ru) 2018-04-30
CA2863329C (en) 2023-01-03
CN104254614A (zh) 2014-12-31
EP2802668A1 (en) 2014-11-19
ES2700583T3 (es) 2019-02-18
LT2802668T (lt) 2018-11-26
JP2015504898A (ja) 2015-02-16
DK2802668T3 (en) 2018-11-19
AU2018267631B2 (en) 2021-07-22
BR112014017111A8 (pt) 2018-05-15
EP2802668B1 (en) 2018-08-01
SI2802668T1 (sl) 2019-01-31
AU2016210768A1 (en) 2016-08-25
EA038705B1 (ru) 2021-10-07
JP2019077690A (ja) 2019-05-23
US11286528B2 (en) 2022-03-29
AU2013204237A8 (en) 2016-09-15
US20190241960A1 (en) 2019-08-08
EP3453402B1 (en) 2021-07-21
NZ627078A (en) 2016-07-29
EA201491211A1 (ru) 2015-05-29
HRP20181714T1 (hr) 2018-12-28
PL2802668T3 (pl) 2019-03-29
US20140370035A1 (en) 2014-12-18
EP3970737A1 (en) 2022-03-23
BR112014017111A2 (pt) 2017-06-13
US20230002828A1 (en) 2023-01-05
WO2013106789A1 (en) 2013-07-18
US10221455B2 (en) 2019-03-05
HUE041595T2 (hu) 2019-05-28
JP6868605B2 (ja) 2021-05-12
EA201790221A1 (ru) 2017-10-31
EP2802668A4 (en) 2015-08-26
AU2013204237B2 (en) 2016-09-01
PT3453402T (pt) 2021-10-26
AU2013204237A1 (en) 2013-08-01
IL233565B (en) 2021-06-30
AU2016210768B2 (en) 2018-12-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TR201816253T4 (tr) Faktör VIII terapisi almakta olan bireylerde faktör VIII&#39;e karşı immünojenisiteyi azaltmanın yöntemleri.
JP7273487B2 (ja) 第ｖｉｉｉ因子キメラおよびハイブリッドポリペプチドならびにその使用法
JP2020530436A (ja) トランケート型ｖｗｆによるｆｖｉｉｉの免疫原性の調節
AU2013204237B8 (en) Methods of reducing immunogenicity against Factor VIII in individuals undergoing Factor Vlll therapy