TR201809041T4 - Safra asidinin 11-hidroksil-6-sübstitüe-türevleri ve bunun farnesoid X reseptör modülatörleri olarak amino asit konjugatları. - Google Patents

Abstract

Mevcut buluş, formülün (I) bir bileşiğini veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvatı veya amino asit konjugatını sağlar, burada R1, bir hidroksi grubudur ve R2, R3, R4, R5 ve R6 burada açıklanan gibidir. Mevcut buluş, genellikle selektif FXR agonistleriyle ve bunları yapma ve kullanma yöntemleriyle ilgilidir.

Description

TARIFNAME SAFRA ASIDININ 11-HIDROKSIL-6-SÜBSTITÜE-TÜREVLERI VE BUNUN FARNESOID x RESEPTÖR MODÜLATÖRLERI OLARAK AMINO AsiT KONJUGATLARI BULUSUN ALTYAPISI FXR, steroid, retinoid ve tiroid hormonlarina yönelik reseptörleri içeren Iigand ile aktive edilen transkripsiyon faktörlerinin nükleer reseptör ailesinin bir üyesidir (D.J. karaciger, ince bagirsak, böbrek ve böbreküstü bezinde en fazla sekilde ifade edildigini Endocrinnol. ile bir heterodimer olarak DNA'ya baglanir. Siçan FXR, farnesol ve jüvenil hormonu gibi farnesoidlerin mikromolar konsantrasyonlari yoluyla aktive edilir (BM. Forman, et al., belirsiz birakarak, fare ve insan FXR'sini aktive etmede basarisizdir. Birçok dogal olarak olusan safra asitleri (örnegin, kenodeoksikolik asit (CDCA), deoksikolik asit (DCA), Iitokolik asit (LCA) ve bunlarin taurin ve glisin konjugatlari), FXR Iigandlari olarak görev yapar ve CDCA'nin 6.alfa.-etil türevinin yaptigi gibi fizyolojik konsantrasyonlarda (WO-A-OO/37077) FXR'ye baglanir ve bunu aktive eder (obetikolik Safra asitleri, onlarin besinsel Iipidleri ve vitaminlerinin çözünme ve absorpsiyonda önemli rollere sahip olduklari ince bagirsagin duodenumunda salgilanan ve karacigerde olusturulan kolestrol metabolitleridir. Safra asitlerinin birçogu (%~95), akabinde ince bagirsakta yeniden absorbe edilir ve enterohepatik dolasim sistemi araciligiyla karacigere geri döner. Kolestrolün, karacigerde safra asitlerine dönüsmesi, geri besleme düzenlemesi altinda gerçeklesir: safra asitleri, safra asidi biyosentezindeki hiz sinirlayici basamagi katalize eden enzimi kodlayan sitokrom P450 7a'nin (CYP7a) transkripsiyonunu azaltarak regüle eder. FXR'nin safra asitleri ile CYP7a ifadesinin represyonunda yer aldigi belirtilir (D.W. Russell, hücre 97:539-542 (1999)). Ince bagirsaktaki safra asitleri, yüksek afiniteye sahip safra asitlerini baglayan ve bunlarin selüler alim ve trafiginde bulunabilen intestinal safra asidi baglanma proteininin (IBABP) ifadesini indükler. Safra asitlerinin, insan, siçan ve fare IBABP gen promotörlerinde muhafaza edilen bir IR-1 tipi yanit elemanina baglanan FXR'nin aktivasyonu yoluyla lBABP ifadesi üzerinde bunlarin etkilerine aracilik ettigi gösterilir.

Bu nedenle FXR, safra asidi ve kolestrol homeostazisinde bulunan hedef genlerin stimülasyonunda (lBABP) ve represyonunda (CYP7a) yer alir. Dolayisiyla, ilaç gelistirme için uygun FXR modülatörlerine ihtiyaç vardir. Mevcut bulus, bu ihtiyaçtan bahseder.

BULUSUN KISA AÇIKLAMASI Bulus, bilesikleri ve bu bilesikleri hazirlamanin yöntemlerini saglar. Özellikle, bulus formülün bir bilesigini (l): veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini saglar, burada R1, R2, R3, R4, R5 ve R6, burada açiklandigi gibidir. Bulusun bilesikleri, hastaliklarin ve durumlarin tedavisinde ve önlenmesinde kullanislidir.

Bulus ayrica, bulusun bir bilesigini veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici veya eksipiyani içeren farmasötik bir bilesimi saglar.

Bulus ayrica, bulusun bir bilesiginin veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarinin ihtiyaci olan bir özneye uygulanmasini içeren bir hastalik ve durumun tedavisinde veya önlenmesinde kullanima yönelik yukaridaki bilesikleri saglar. Bir açida hastalik veya durum, FXR- aracilidir.

Bulus ayrica, bir hastalik veya durumun (örnegin, FXR ile aracili bir hastalik veya durum) tedavisi veya önlenmesine yönelik bir ilaç maddesinin üretimine yönelik bir bilesim saglar, burada ilaç maddesi, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içerir.

Bulus ayrica, bir hastalik veya durumun (örnegin, FXR aracili bir hastalik veya durum) tedavisi veya önlenmesine yönelik bir yöntemde kullanima yönelik bir bilesim saglar, burada bilesim, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içerir.

Aksi belirtilmedikçe, burada kullanilan tüm teknik ve bilimsel terimler, bu bulusun ilgili oldugu teknikte siradan uzman olan bir kisi tarafinda yaygin olarak anlasilan sekilde ayni anlamlara sahiptir. Bu tarifnamede tekil formlar ayrica, içerik açikça aksini söylemedikçe çogul kullanimlari da içerir. Burada açiklananlara benzer veya es yöntemlerin ve materyallerin bulusun uygulamasinda veya test edilmesinde kullanilabilmesine ragmen, uygun yöntemler ve materyaller asagida açiklanir.

Uyusmazlik olmasi halinde, tanimlari içeren mevcut tarifname kontrol edecektir. Ayrica, materyaller, yöntemler ve örnekler yalnizca açiklayicidir ve sinirlayici olmayi Bulusun diger özellikleri ve avantajlari, asagidaki detayli açiklama ve istemlerden anlasilir olacaktir.

SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI Sekil 1, bulusun bir bilesiginin aktivitesini ve HEK293T hücrelerinde transaktivasyon analizindeki bir karsilastirma bilesigini gösteren bir grafiktir.

Sekil 2, fizyolojik seviyede (A) TGR5 ifade eden insan enteroendokrin hücrelerinde ve TGR5 (B) asiri ifade eden insan Çin hamsteri yumurtalik (CHO) hücrelerinde bulusun bir bilesiginin TGR5 aktivitesi yoklugunu gösteren bir seri grafiktir.

Sekil 3, OSToi (A), OSTß (B), BSEP (C), MRP2 (D), CYP, FGF-19 (G) ve UGTZB4 (H) ifadesinin regüle edilmesinde bulusun bir bilesiginin ve diger karsilastirma bilesiklerinin aktivitesini gösteren bir seri grafiktir.

Sekil 4, lipid metabolizma (A), SREBP-1C (B), APOCII (C) ve PPARV (D)'de yer alan PLTP'nin regüle edilmesinde bulusun bir bilesiginin ve diger karsilastirma bilesiklerinin aktivitesini gösteren bir seri grafiktir.

Sekil 5, PEPCK geni üzerinde bulusun bir bilesiginin ve diger karsilastirma bilesiklerinin regülasyonunu gösteren bir grafiktir.

Sekil 6, 4 saat bulusun bir bilesiginin gösterilen konsantrasyonlari ile muamele edilen HepG2 hücrelerindeki ATP ölçümünü gösteren bir grafiktir.

Sekil 7, id ve iv uygulama (A) için Bilesik 100'ün koleretik etkisini. id ve iv uygulama (B) için Bilesik 100'ün salgilanmasini ve zamanla (C) Bilesik 100'ün plazma konsantrasyonunu gösteren bir seri grafiktir.

BULUSUN DETAYLI AÇIKLAMASI Bulusun Bilesikleri Mevcut bulus, formülün (l) bir bilesigi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugati ile ilgilidir, burada: R1, hidroksil; R2, hidrojen, hidroksil, alkil veya halojen, burada söz konusu alkil, bir veya daha fazla Ra ile sübstitüe degildir veya sübstitüedir; R3, hidrojen, hidroksil, alkil veya halojen, burada söz konusu alkil, bir veya daha fazla Rb ile sübstitüe degildir veya sübstitüedir; R4, alkil, alkenil, alkinil veya halojen, burada söz konusu alkil, bir veya daha fazla R0 ile sübstitüe degildir veya sübstitüedir; Ra, Rb ve Rclnin her biri, bagimsiz olarak halojen veya hidroksil; veya baglandiklari karbon atomu ile birlikte R5 ve R6, bir karbonil olusturur.

Bir açida mevcut bulus, formülün (Il) bir bilesigi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugati ile ilgilidir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (III) bir bilesigi: (111), veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugati ile ilgilidir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (IV) bir bilesigi: veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugati ile ilgilidir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, bilesiktir (örnegin, natif bilesik veya tuz olmayan, solvatlanmamis ve konjuge olmayan formlardaki bilesik).

Bir açida mevcut bulus, formülün (i, ii, iii veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, farmasötik olarak kabul edilebilir tuzdur.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, amino asit konjugatidir. Bir açida, amino asit konjugati bir glisin konjugatidir. Bir açida, amino asit konjugati bir taurin konjugatidir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R2 veya R3'ten biri, hidroksil veya halojendir ve kalan R2 veya R3, hidrojen veya sübstitüe olmayan alkildir.

Bir açida, R2 veya R3'ten biri hidroksildir ve kalan R2 veya R3 hidrojendir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R5 veya Reidan biri hidroksildir ve kalan R5 veya R6 hidrojendir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R2, hidroksil veya halojendir. Bir açida R2 hidroksildir. Diger bir açida, R2 halojendir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R3, hidrojen veya sübstitüe olmayan alkildir. Bir açida, R3 hidrojendir. Diger bir açida R3 metildir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R2 hidroksildir ve R3 hidrojendir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R5 hidroksildir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R6 hidrojendir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R2 ve R5'ten her biri hidroksildir ve R3 ve Rs'dan her biri hidrojendir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R4, alkildir. Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada R4, sübstitüe olmayan alkildir. Bir açida R4, metil, etil, propil veya bütildir. Bir açida, R4, metil veya etildir. Bir açida, R4 metildir. Bir açida, R4 etildir.

Bir açida mevcut bulus, bilesik veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugati ile ilgilidir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik bir FXR agonistidir. Bir açida bulusun bilesigi, oldukça güçlü bir FXR agonistidir. Örnegin bulusun bilesigi, CDCA için 15 uM ile karsilastirildiginda, 1 uM'nin altinda, 0.8 uM'nin altinda, 0.6 uM'nin altinda, 0.4 uM'nin altinda veya 0.2 uM'nin altinda (örnegin, bir AlphaScreen analizi ile ölçülen sekilde) olan bir konsantrasyonda FXR'yi aktive eder. Örnegin bulusun bilesigi, 0.2 uM'nin altinda (örnegin, bir AlphaScreen analizi ile ölçülen sekilde) olan bir konsantrasyonda FXR'yi aktive eder. Örnegin bulusun bilesigi, CDCA için 8.9 uM ile karsilastirildiginda, 1 uM'nin altinda, 0.8 uM'nin altinda, 0.6 uM'nin altinda, 0.4 uMinin altinda veya 0.2 uM'nin altinda (örnegin, bir AlphaSoreen analizi ile ölçülen sekilde) olan bir EC50 ile FXR'yi aktive eder. Örnegin bulusun bilesigi, olan bir E050 ile FXR`yi aktive eder.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, diger nükleer reseptörlere karsi aktif degildir. Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, TGRS'yi aktive etmez (örnegin, bir HTR- FRET TGR5 analizi ile ölçülen sekilde, burada TGR5 bir fizyolojik seviyede ifade edilir veya asiri ifade edilir).

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik apoptozisi indükler.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, insan HepG2 karaciger hücreleri üzerinde sitotoksik etki göstermez (örnegin, bir LDH salinimi analizi veya bir intraselüler ATP analiz ile ölçülen sekilde).

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, CYP2D6 ve CYP2E1'den seçilen bir veya daha fazla CYP450 izoformu inhibe etmez. Örnegin bulusun bilesikleri, CPY450 inhibisyon analizi ile ölçülen sekilde 10 uM'den daha büyük bir IC5o'ye sahiptir.

Bir açida mevcut bulus, formülün (I, II, III veya IV) bir bilesigi ile ilgilidir, burada bilesik, insan ERG potasyum kanalini inhibe etmez.

Bir açida mevcut bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin sentezlenmesinin bir yöntemi ile Bir açida mevcut bulus, bulusun bir veya daha fazla bilesigini veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içeren bir kit ile ilgilidir. Bir açida kit ayrica, farmasötik olarak kabul edilebilir bir içerik maddesini içerir.

Bir açida mevcut bulus, bulusun bir bilesigi ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyani içeren farmasötik bir bilesim ile ilgilidir.

Mevcut bulus ile çözülecek teknik bir sorun, metabolik ve kronik karaciger hastaliklarinin tedavisine yönelik etkili bir hedefi temsil eden nükleer hormon farnesoid X reseptörünün (FXR) agonistleri olan yeni bilesiklerin tanimlanmasidir. Dogal safra asitlerinin sadece birçok nükleer hormon reseptörünü modüle etmedigi, ancak ayrica G proteini ile birlesen reseptör (GPCR) TGRS'in agonistleri oldugu iyi bilinir. Selektivite, bir nükleer hormon reseptörünü modüle etmeye yönelen ilaç bilesikleri için bir sorun olabilir. Bu nedenle mevcut bulusun bir amaci, bir spesifik FXR agonist olan bir bilesigi, örnegin diger nükleer reseptörlere karsi aktivite göstermeyen bir bilesik veya safra asidi GPCR TGR5'i aktive etmeyen bir bilesik saglamaktir. Bir ilaç bilesigi gelistirmedeki diger sorunlar, uygun olmayan bir farmakokinetik profili, toksisite (örnegin, karaciger) ve istenmeyen ilaç-ilaç etkilesimleri gibi güvenlik sorunlarini içerir. Dolayisiyla, mevcut bulusun baska amaçlari, daha önce bahsedilen teknik sorunlardan muzdarip olmayan bilesikleri, yani, uygun bir farmakokinetik profile sahip bir bilesik, hücreler üzerinde sitotoksik bir etki kullanmayan bir bilesik, sitokrom P450 enzimlerini inhibe etmeyen bir bilesik ve/veya hERG'yi inhibe etmeyen bir bilesik saglamaktir.

Buraya refere eden patent ve bilimsel literatür, teknikte uzman kisilerce bulunabilir olan bilgiyi olusturur. Tutarsizliklarin olmasi halinde, mevcut tarifname geçerli olacaktir.

Mevcut bulusun amaçlari için, asagidaki tanimlamalar kullanilabilir (aksi açikça belirtilmedikçe).

Basindan sonuna kadar kullanilan genel kimyasal terimler, alisilmis anlamlarina sahiptir. Örnegin alkil terimi, dallanmis veya dallanmamis doymus bir hidrokarbon grubuna refere eder. "n-alkil" terimi, dallanmamis bir alkil grubuna refere eder. "CX- Cy alkil" terimi, kapsamli bir sekilde dallanmis veya dallanmamis hidrokarbon grubundaki x ile y arasindaki karbon atomlarina sahip bir alkil grubuna refere eder. Örnekleme yoluyla, ancak sinirlama olmadan, "Ci-Ca alkil" terimi, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 veya 8 karbon atomlarina sahip düz bir zincir veya dallanmis hidrokarbon kismina refere eder. "ci-Ce", 1, 2, 3, 4, 5 veya 6 karbon atomlarina sahip düz bir zincir veya dallanmis hidrokarbon kisma refere eder. "01-04 alkil", metil, etil, n-propil, izopropil, n- bütil, izobütil, sec-bütil ve tert-bütil içeren 1, 2, 3 veya 4 karbon atomlarina sahip düz bir zincir veya dallanmis hidrokarbon kisma refere eder. “C1"C4 n-alkil" terimi, metil, etil, n- propil ve n-bütil içeren 1, 2, 3 veya 4 karbon atomuna sahip olan düz zincir hidrokarbon kisimlarina refere eder. "Ca-Ce sikloalkil" terimi, siklopropil, siklobütil, siklopentil ve siklohekzile refere eder. "Cs-Cysikloalkil" terimi ayrica, sikloheptili içerir. "C3- C8 sikloalkil" terimi ayrica, siklooktili içerir. Sikloalkilalkil, örnegin, sinirlama olmadan, siklopropilmetil, siklopropiletil, siklopropilpropil, siklopropilbütil, siklobütilmetil, siklobütiletil, siklobütilpropil, siklopentilmetil, siklopentiletil, siklopentilpropil, siklohekzilmetil, siklohekziletil ve siklohekzilpropil gibi bir alkil baglayici zincir ile baglanan sikloalkil kisimlarina refere eder. Her bir alkil, sikloalkil ve sikloalkilalkil grubu, burada belirtilen sekilde istege bagli olarak sübstitüe edilebilir. daha fazla çift baga sahip siklobütenil, siklopentil, siklohekzenil, sikloheptenil ve siklooktenil halkalara refere eder.

Böyle bir sübstitüsyonun, sübstitüe atom ve sübstitüentin kabul edilen degerligi ile uyumlu olmasi ve sübstitüsyonun, örnegin, yeniden düzenleme, siklizasyon, eliminasyon vb. ile spontan olarak transformasyona ugramadigi stabil bir bilesikte sonuçlanmasi kosuluyla, "sübstitüsyon" veya "ile sübstitüenin" dolayli olarak belirteni içerdigi anlasilacaktir. Burada kullanildigi üzere, "sübstitüe" terimi, aksi belirtilmedikçe organik bilesiklerin kabul edilebilen tüm sübstitüentlerini içermek üzere tasarlanir.

Genis bir açida, kabul edilebilen sübstitüentler, organik bilesiklerin asiklik ve siklik, dallanmis ve dallanmamis, karbosiklik ve heterosiklik, aromatik ve nonaromatik sübstitüentlerini içerir. Kabul edilebilen sübstitüentler, uygun organik bilesiklere yönelik bir veya daha fazla ve ayni veya farkli olabilir. Bulusun amaçlarina yönelik, nitrojen gibi heteroatomlar, heteroatomlarin degerliklerini karsilayan, burada açiklanan organik bilesiklerin hidrojen sübstitüentleri ve/veya herhangi bir kabul edilebilen sübstitüentine sahip olabilir. Bu bulus, organik bilesiklerin kabul edilebilen sübstitüentleri ile herhangi bir sekilde sinirlanmayi amaçlamaz. kullanildiginda, aliciya büyük ölçüde toksik olmayan ve büyük ölçüde zararli olmayan anlamina gelir. bulusun bir bilesigi) ile uyumlu olabilen tasiyici, solvent, eksipiyan ve tuz kastedilir. teknikte siradan uzman olanlar tarafindan, "farmasötik formülasyon" ve "farmasötik bilesim" terimlerinin genellikle birbiriyle degistirilebilir olduklari ve bu nedenle bunlarin uygulamanin amaçlarina yönelik kullanildiklari anlasilir.

Bulusa göre uygun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlar, teknikte uzman biri tarafindan kolayca belirlenecektir ve örnegin alüminyum, kalsiyum, lityum, magnezyum, potasyum, sodyum ve çinkodan yapilan alkali veya alkalin-toprak metalik tuzlari gibi basit tuzlari veya N,N'-dibenziletilendiamin, klorprokain, kolin, dietanolamin, etilendiamin, meglümin (N-metilglükamin) ve prokainden yapilan organik tuzlari içerecektir. Lizin, arjinin, trometamin, trietilamin ve benzeri gibi farmasötik olarak kabul edilebilir aminleri olan tuzlar ayrica kullanilabilir. Bulusun bilesiklerinin böyle tuzlari, örnegin, bulusun bilesigi ile uygun bazin reakte edilmesiyle bulusun bilesiginden klasik teknikler kullanilarak hazirlanabilir.

Tipta kullanildiginda, bulusun bir bilesiginin tuzlari, farmasötik olarak kabul edilebilir olabilir, ancak farmasötik olarak kabul edilebilir olmayan tuzlar, karsilik gelen serbest baz veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlarini hazirlamak üzere rahatlikla kullanilabilir.

Burada kullanildigi üzere, "amino asit konjugati" terimi, herhangi bir uygun amino asit ile bulusun bir bilesiginin bir konjugatina refere eder. Bir açida. bulusun bir bilesiginin uygun amino asit konjugati, safra veya intestinal sivilarda artan bütünlügün ek avantajina sahiptir. Mevcut bulus, bulusun bilesiklerinin herhangi birinin glisin ve taurin konjugatlarini kapsar. Örnegin, formülün (I) bir bilesiginin glisin ve taurin konjugatlari, asagidaki formüle sahiptir: Ig'l'a"'l ilziiiriiii Bir açida, bulusun bir bilesiginin glisin ve taurin konjugatlari, bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu olabilir. Bulusun bilesiklerinin amino asit konjugatlari, teknikte bilinen yöntemlere göre hazirlanabilir. Örnegin serbest asit, standart peptid birlesme durumlari kullanilarak glisin veya taurin amino asidine baglanabilir.

Bir açida, Bilesik 100'ün taurin konjugatinin sodyum tuzu, asagidaki sekilde hazirlanabilir.

N93,; ?SÜ hicsu 'IZIIl .in misir b.:nJi.g:.'.i Bilesik 100, bir baz (örnegin, Et3N) ve polar bir protik solvent (örnegin, EtOH) içindeki taurin ile muamele edilir. Ortaya çikan karisim, bir birlesme reaktifi (örnegin, DMT-MM (4-(4,6-Dimetoksi-1,3,5-triazin-2-iI)-4-metilm0rfolinyum klorid)) ile muamele edilebilir.

Reaksiyon karisimi, konsantre edilebilir ve bir baz (örnegin, 3% w/v NaOH aköz solüsyonu) içinde çözünür. Ortaya çikan reaksiyon karisimi, bir organik solvent (örnegin, AcOEt) ile özütlenebilir. Aköz faz, konsantre edilebilir ve Bilesik 100”ün taurin konjugatini vermek üzere önce örnegin, H20 (nötral pH'a kadar) ile ve akabinde örnegin, H20/MeOH 80:20 v/v ile ayristirilarak bir silika pedi üzerinde filtrelenir. Uygun amino asitler glisin ve taurin içerir ancak bunlarla sinirli degildir.

Mevcut bulusun bazi bilesikleri, solvatlanmayanin yani sira, örnegin hidratlar gibi solvatlanan formlarda bulunabilir.

Mevcut bulus, burada açiklanan bulusun bilesiklerinin sentezine yönelik yöntemleri saglar. Mevcut bulus ayrica, örneklerde gösterilen asagidaki semalara göre bulusun açiklanan çesitli bilesiklerinin sentezine yönelik detayli yöntemleri saglar.

Bulusun sentetik prosesleri, fonksiyonel gruplarin genis çapli bir çesitliligini tolere edebilir, bu nedenle çesitli sübstitüe baslangiç materyalleri kullanilabilir. Prosesler genellikle bilesigi ayrica, bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, esteri veya önilacina dönüstürmek üzere belirli durumlarda istenir olabilmesine ragmen tüm proses boyunca veya bitimine yakin istenen nihai bilesigi saglar.

Bulusun bilesikleri, ticari olarak uygun baslangiç materyalleri, literatürde bilinen bilesikler kullanilarak veya teknikte uzman kisilerce bilinen veya buradaki ögretilerin isiginda uzman kisilerce anlasilir olacak olan standart sentetik yöntemlerin ve prosedürlerin uygulanmasiyla kolayca hazirlanan ara ürünlerden çesitli yollarla hazirlanabilir. Organik moleküller ve fonksiyonel grup transformasyonlari ve manipülasyOnlarinin hazirlanmasina yönelik standart sentetik yöntemler ve prosedürler, ilgili bilimsel Iiteratürden veya sahadaki standart ders kitaplarindan elde edilebilir. Herhangi bir veya birkaç kaynakla sinirli olmamasina ragmen, Smith, M. B., March, J., March's Advanced Organik Chemistry: Reactions, Mechanisms ve Structure, 5th edition, John Wiley & Sons: New York, 2001; ve Greene, T.W., Wuts, P.G. M., Protective Gruplari in Organik Synthesis, 3rd edition, John Wiley & Sons: New York, 1999 gibi klasik metinler kullanislidir ve teknikte bilinen organik sentezlerin referans ders kitaplarini kabul eder. Sentetik yöntemlerin asagidaki açiklamalari, mevcut bulusun bilesiklerinin hazirlanmasina yönelik genel prosedürleri göstermek ancak sinirlama mak üzere tasarlanir.

Bu basvuruda kullanilan tüm kisaltmalar, John Wiley & Sons Inc tarafindan "Protective Groups in Organic Synthesis" veya MERCK & Co., Inc tarafindan MERCK INDEX veya Aldrich gibi kimyasallarin tedarikçileri tarafindan diger kimyasal kitaplar veya kimyasal kataloglar içinde veya teknikte bilinen kullanima göre bulunur.Sema 1 7 bilesikýi 100 bilesik 101 Reaktifler ve kosullar: a) 1) MeOH, p-TSA, ultrason, 3 saat, nicel; 2) A020, oda sicakliginda 2 gün, %80; f) HI %57, AcOH, oda sicakliginda 30 dakika; g) Cr03, AcOH, oda sicakliginda 45 dakika; h) Zn tozu, NaOAc, reflüks 20 dakika; i) NaOH 2M, MeOH, oda sicakliginda gece boyu, bilesikten (5) elde edilen %65; 1) NaBH4, THF/HzO 421, %70; m) Na(s), sec-BuOH, 50 °C, %70.

Sentez, teknikte bilinen yöntemler kullanilarak hazirlanan baslangiç materyali olarak öo-etil-kolik asidin (G-ECA, 1) kullanimina dayanir. 6-ECA (1), bilesik 2'yi elde etmek üzere THF içinde NaHC03'ün varliginda A020 ile reflükslenerek C3 pozisyonunda Selektif olarak korunan karsilik gelen metil esteri vermek üzere ultrason irradyasyonu altinda MeOH içinde p-TSA ile muamele edilir. Bilesik 2, oda sicakliginda CHzCI2 içinde oati (bilesik 3; bilesik 2'den elde edilen yaklasik %48) elde etmek üzere oda sicakliginda CH2CI2içinde A020, Bi(OTf)3iIe muamele edilir.

Benzen içinde örnegin, 12 saat Br2 ile bilesik 3`ün muamelesi, bilesik 4'ü vermistir. Yeni damitilan piridin içinde NaBH4 ve NaOAc ile bilesik 4'ün reaksiyonu, silika jel saflastirmasindan sonra yaklasik %59 verimde, karsilik gelen 11ß-12ß epoksidi (bilesik ) vermistir. Oda sicakliginda ACOH içinde Hl ile bilesik 5'in reaksiyonu, bilesik 6'yi Üretmek üzere ACOH içinde CrOs ile C11 pozisyonunda oksidize edildikten sonra halohidrin ara ürününü saglamistir. Kaynayan ACOH ve alkali hidroliz (NaOH/MeOH) asidi (bilesik 7; bilesik 5'ten elde edilen yaklasik %65 verim) saglamistir.

Bilesik 7, Bilesik 100'ü saglamak için kromatografik saflastirmadan sonra, 30i,7a,11ß- trihidroksi-60i-etiI-5ß-kolan-24-oik asit (Bilesik 100; bilesik 3'ten elde edilen yaklasik karbonilde stereoselektif olarak azaltilmistir. Alternatif olarak, bilesik 7, saflastirmadan sonra Bilesik 101'i (yaklasik %70 verim) elde etmek üzere sec-BuOH içinde 50°C'de sodyum ile azaltilmistir. ekleme sekli anlamina gelir. Bazi bilesikler, kristalin kati durumunda solvent moleküllerinin sabit bir molar oranini saglamak üzere bir egilime sahiptir, böylece bir solvat olusturulur. Solventin su olmasi halinde, olusturulan solvat bir hidrattir; solvent alkol oldugunda, olusturulan solvat bir alkolattir. Hidratlar, suyun HzO olarak moleküler halinde tutuldugu maddelerden biri ile suyun bir veya daha fazla molekülünün kombinasyonu ile olusturulur, böyle bir kombinasyon, bir veya daha fazla hidrati olusturabilir. reaktanlari yeterli miktarda çözündüren devam eden reaksiyonlara inert olan herhangi bir solvent veya solvent karisimina refere eder.

Burada açiklanan bilesikler, asimetrik merkeze sahiptir. Asimetrik olarak sübstitüe bir atomu içeren mevcut bulusun bilesikleri, optik olarak aktif veya rasemik formlarda izole edilebilir. Örnegin rasemik formlarin çözünmesi yoluyla veya optik olarak aktif baslangiç materyallerinin sentezi yoluyla optik olarak aktif formlarin nasil hazirlanacagi teknikte iyi bilinir. Olefinlerin bazi geometrik izomerleri C=N çift baglari ve benzerleri, burada açiklanan bilesiklerde mevcut olabilir ve tüm böyle stabil izomerler mevcut bulusta tasarlanir. Mevcut bulusun bilesiklerinin cis ve trans geometrik izomerleri açiklanir ve bir izomer karisimi olarak veya ayri izomerik formlar olarak izole edilebilir.

Bir yapinin tüm kiral, diastereomerik, rasemik ve geometrik izomerik formlari, spesifik stereokimyasal veya izomerik form özellikle gösterilmedikçe istenir. Mevcut bulusun bilesiklerini hazirlamak üzere kullanilan tüm prosesler ve burada yapilan ara ürünler, mevcut bulusun parçasi olacak sekilde degerlendirilir. Gösterilen tüm totomerler veya açiklanan bilesikler mevcut bulusun parçasi olacak sekilde degerlendirilir. Dahasi, bulus ayrica burada açiklanan bilesiklerin metabolitlerini içerir.

Bulus ayrica, bulusun formülünde anlatilanlara özdes olan izotopikal olarak etiketli bilesikleri içerir, ancak buna ragmen bir veya daha fazla atom, daha yaygin olarak dogada bulunan atomik kütle veya kütle numarasindan farkli olan bir atomik kütle veya kütle numarasina sahip bir atom ile yer degistirilir. Bulusun bilesiklerine birlestirilebilen izotoplarin örnekleri, 3H,”C,14C,2H ve 18F gibi hidrojen, karbon, nitrojen, florin izotoplarini içerir.

Daha önce bahsedilen izotoplarin ve/veya diger atomlarin diger izotoplarini içeren mevcut bulusun bilesikleri ve bunlarin farmasötik olarak kabul edilebilir tuzlari, solvatlari veya amino asit konjugatlari, mevcut bulusun kapsami dahilindedir. Mevcut bulusun, örnegin 3H ve 14C gibi radyoaktif izotoplarin birlestirildigi izotopik olarak etiketli bilesikleri, ilaç ve/veya substrat doku dagilim analizlerinde kullanislidir. Tritiye, yani, e'H ve karbon-14, yani, 14C, izotoplari, bunlarin hazirlanis ve saptanabilirlik kolayligina yönelik özellikle tercih edilir. 11C ve 18F izotoplari, PET'te (pozitron emisyon tomografisi) özellikle kullanislidir. PET, beyin görüntülemede kullanislidir. Ayrica, döteryum gibi agir izotoplar yani, 2H ile sübstitüsyon, yüksek metabolik stabiliteden sonuçlanan belirli terapötik avantajlari, örnegin artmis in vi'vo yarilanma süresi veya azaltilmis dozaj gereksinimlerini saglayabilir ve böylece bazi sartlarda tercih edilebilir. Bu bulusun izotopik olarak etiketli bilesikleri genellikle, izotopik olmayan etiketli bir reaktif için kolayca bulunabilen bir izotopik olarak etiketli reaktif ile sübstitüe edilerek, asagidaki Semalarda ve/veya Örneklerde açiklanan prosedürlerin gerçeklestirilmesiyle gibi teknikte bilinen teknikler yoluyla hazirlanabilir. Bir düzenlemede, bulusun bilesikleri, tuzlari, hidratlari, solvatlari veya amino amino asit konjugatlari izotopik olarak etiketli degildir.

Bir bilesige yönelik olarak herhangi bir degisken (örnegin, RX), herhangi bir bilesen veya formülde birden fazla kez meydana geldiginde, her bir meydana gelisindeki tanimi, her bir diger meydana gelisindeki tanimindan bagimsizdir. Böylece, örnegin, bir grubun bir veya daha fazla RX kisimlari ile sübstitüe edildigi gösterilirse, akabinde her bir meydana gelisteki RX, RX tanimindan bagimsiz olarak seçilir. Ayrica sübstitüentler ve/veya degiskenlerin kombinasyonlari, ancak yalnizca böyle kombinasyonlarin, belirlenmis atomlarin normal degerligi içinde stabil bilesiklerde sonuçlanmasi halinde kabul edilebilirdir.

Burada kullanildigi üzere, "tedavi etmek", "tedavi edilmesi" veya "tedavi" terimi, halihazirda duruma sahip olan bir öznede herhangi bir fark edilir derecede bir durumun semptomlarinin, markörlerinin ve/veya herhangi bir negatif etkisinin azaltilmasi anlamina gelir. Bazi düzenlemelerde tedavi, hastalik veya durumu gelistirme riskini azaltma amacina yönelik durumun sadece erken belirtilerini gösteren bir özneye uygulanabilir.

Burada kullanildigi üzere "önlemek", "önleme" veya "önlenmesi" terimi, bir hastalik, bozukluk ve/veya durumun bir veya daha fazla semptomunun veya özelliklerinin baslangicini kismen veya tamamen önlemek veya geciktirmek üzere herhangi bir yönteme refere eder. Önleme, bir hastalik veya durumun belirtilerini göstermeyen bir özneye uygulanabilir.

Burada kullanildigi üzere "özne", bir insan veya hayvan (hayvan olmasi durumunda, daha tipik olarak bir memeli) anlamina gelir. Bir açida, özne bir insandir. Böyle bir öznenin, bir FXR agonisti ile tedaviye ihtiyaci oldugu düsünülebilir.

Burada kullanildigi üzere "doymamis", en az bir doymamislik derecesine (örnegin, en az bir ikili veya üçlü bag) sahip bilesiklere veya yapilara refere eder.

Burada kullanildigi üzere "bulusun bir bilesigi terimi, formüllerden (I, II, III veya IV) herhangi birinin bir bilesigini veya burada açikça tarif edilen herhangi bir bilesigi içerir.

Burada kullanildigi üzere farnesoid X reseptör veya FXR, örnegin, alternatif birlesme izoformlari ve dogal olarak olusan izoformlari içeren böyle reseptörün tüm memeli FXR türleri, sinirlama olmaksizin siçan FXR (Gen Bankasi Erisim No. NM_021745), fare FXR (Gen bankasi Erisim No. NM_009108) ve insan FXR (Gen bankasi Erisim No. NM_005123) içerir.

Burada kullanildigi üzere ayrica obetikolik asit, INT-747, 6ECDCA, 6-alfa-etil kenodeoksikolik asit veya öoi-etiI-30i,7d-dihidroksi-5ß-kolan-24-oik asit olarak bilinen Bilesik A asagidakidir MAbCOZH kolan-23-sülfat sodyum tuzu olarak bilinen Bilesik B asagidakidir H3` . “OH 5ß-kolan-24-oik asit olarak bilinen Bilesik C asagidakidir Burada kullanildigi üzere, ayrica 60-etil-23(R)-metil kenodeoksikolik asit ve S- EMCDCA olarak bilinen Bilesik D asagidakidir Burada kullanildigi üzere, ayrica CA olarak bilinen kolik asit asagidakidir Burada kullanildigi üzere, ayrica CDCA olarak bilinen kenodeoksikolik asit asagidakidir Burada kullanildigi üzere, ayrica TCDCA olarak bilinen taurokenodeoksikolik asit asagidakidir ”V `isi/`VS OH (:4 IF>H ;ni Burada kullanildigi üzere, ayrica TUDCA olarak bilinen tauroursodeoksikolik asit asagidakidir Burada kullanildigi üzere, ayrica LCA olarak bilinen litokolik asit asagidakidir Bulusun Yöntemleri Bulusun bilesikleri, insanlar dahil olmak üzere memeliler gibi öznelerin terapisinde kullanislidir. Bulusun bilesikleri özellikle, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznedeki bir hastalik veya durumun tedavisi veya önlenmesinin bir yönteminde kullanislidir. Bir açida, hastalik veya durum, FXR-aracilidir (örnegin FXR, hastalik veya durumun baslangicinda veya seyrinde bir rol oynar). Bir açida, hastalik veya durum, azaltilmis FXR aktivitesi aracilidir. Bir açida, hastalik veya durum, kardiyovasküler hastalik, kronik karaciger hastaligi, Iipid bozukluk, gastrointestinal hastalik, renal hastalik, metabolik hastalik, kanser ve Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznedeki kardiyovasküler hastaligin tedavisinde veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kardiyovasküler hastaligin tedavisinin bir yöntemi ile ilgilidir. Bir açida bulus, kardiyovasküler hastaligin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida kardiyovasküler hastalik, aterosklerosis, arterioskleroz, dislipidemi, hiperkolesteremi, hiperlipidemi, hiperlipoproteinemi ve hipertrigliseridemiden seçilir. refere eder. Hiperlipidemi, en az üç sekilde ortaya çikabilir: (1) hiperkolestrolemi, yani, artmis bir kolestrol seviyesi; (2) hipertrigliseridemi, yani, artmis bir trigliserit seviyesi; ve (3) kombine hiperlipidemi, yani', hiperkolestrolemi ve hipertrigliserideminin bir kombinasyonu.

VLDL seviyeleri ve düsük HDL seviyeleri) içeren kan plazmasindaki anormal Iipoprotein seviyelerine refere eder.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede kolestrol seviyelerinin azaltilmasi veya kolestrol metabolizmasi, katabolizma, besinsel kolestrol absorpsiyonu ve revers kolestrol tasinmasinin modüle edilmesinden seçilen bir kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede kolestrol, trigliserit veya safra asidi seviyelerini etkileyen bir hastaligin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede trigliseritleri azaltmanin bir yönteminde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede artmis bir kolestrol seviyesi ile iliskili bir hastalik durumunun hastaligin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, bir öznede artmis kolestrol seviyesi ile iliskili bir hastalik durumunun tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, bir öznede artmis kolestrol seviyesi ile iliskili bir hastalik durumunun önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida, hastalik durumu, koroner arter hastaligi, gögüs anjini, karotid arteri hastaligi, inme, serebral arterioskleroz ve ksantomadan seçilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit atinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede bir Iipid bozuklugun tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, bir Iipid bozuklugun tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, bir Iipid bozukluk önlenmesinin bir yöntemi ile ilgilidir.

Lipid bozukluklar, kolestrol ve trigliseritlerin anormalitelerine yönelik terimlerdir. Lipid anormaliteleri, vasküler hastalik ve özellikle kalp krizi ve inme için artmis risk ile ilgilidir.

Lipid bozukluklardaki anormaliteler, genetik yatkinligin yani sira diyetle alim dogasinin bir kombinasyonudur. Birçok Iipid bozukluk, sismanlik ile iliskilidir. Lipid bozukluklar, diyabet, metabolik sendrom (bazen insülin rezistans sendromu olarak adlandirilir), yetersiz tiroid içeren diger hastaliklar veya belirli ilaç tedavilerinin (organ nakli olmus insanlarda reddetmeyi engelleyici rejimlere yönelik kullanilanlar gibi) sonucu ile iliskili olabilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede Iipid metabolizmasini etkileyen hastaligin (yani, lipodistrofi) bir veya daha fazla semptomunun tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, Iipid metabolizmasini etkileyen hastaligin bir veya daha fazla semptomunun tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, Iipid metabolizmasini etkileyen hastaligin bir veya daha fazla semptomunun önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede Iipid birikintisinin azaltilmasinda kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede kronik karaciger hastaliginin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kronik karaciger hastaliginin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kronik karaciger hastaliginin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida, kronik karaciger hastaligi, primer biliyer siroz (PBC), serebrotendinöz ksantomatozis (CTX), birincil sklerozan kolanjit (PSC), ilaçla uyarilan kolestazis, gebeligin intrahepatik kolestazi, beslenmeye bagli parenteral kolestazis (PNAC), asiri bakteriyal büyüme veya sepsis iliskili kolestazis, otoimmün hepatit, kronik viral hepatit, alkolik karaciger hastaligi, alkolik olmayan yagli karaciger hastaligi (NAFLD), alkolik olmayan steatohepatit (NASH), karaciger nakliyle iliskili graft versus host hastaligi, canli donör karaciger nakli yenilenmesi, konjenital hepatik fibröz, koledokolityazis, granülomatöz karaciger hastaligi, intra- veya ekstrahepatik malignite, Sjogren sendromu, Sarkoidoz, Wilson hastaligi, Gaucher hastaligi, hemokromatoz ve alfa 1-antitiripsin yetmezliginden seçilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede kolestazisin komplikasyonlarini içeren bir veya daha fazla kolestazis semptomunun tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, bir veya daha fazla kolestazis semptomunun tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, bir veya daha fazla kolestazis semptomunun önlenmesiyle ilgilidir.

Kolestazis tipik olarak, karaciger içinde (intrahepatik) veya karaciger disinda (ekstrahepatik) faktörlerden kaynaklanir ve normal olarak ortadan kaldirilmak yerine safra tuzlari birikintisine, safra pigment bilirubine ve kan dolasiminda lipidlere neden olur. Intrahepatik kolestazis, vücudun safralari ortadan kaldirma yetenegini zayiflatan hepatit gibi bozukluklar ile veya küçük kanallarin yaygin tikanikligi ile karakterize edilir.

Intrahepatik kolestazis, alkolik karaciger hastaligi, primer biliyer siroz, vücudun bir baska kismindan yayilan kanser (metastaz), birincil sklerozan kolanjit, safra kesesi taslari, biliyer kolik ve akut kolesistitten kaynaklanabilir. Bu ayrica, ameliyat komplikasyonu, ciddi yaralanma, kistik fibröz, enfeksiyon veya intravenöz beslenme olarak olusabilir veya ilaçla uyarilan olabilir. Kolestazis, bir gebelik komplikasyonu olarak olusabilir ve siklikla ikinci ve üçüncü trimester boyunca gelisir.

Ekstrahepatik kolestazis en çok siklikla koledokolityazis (Safra Kanal Taslari), iyi huylu biliyer darliklar (ortak kanalin kanser olmayan daralmasi), kolangiokarsinoma (duktal karsinoma) ve pankreatik karsinomadan kaynaklanir. Ekstrahepatik kolestazis, birçok ilaç tedavisinin bir yan etkisi olarak ortaya çikabilir.

Bulusun bir bilesigi, biliyer atrezi, obstetrik kolestazis, neonatal kolestazis, ilaçla uyarilan kolestazis, Hepatit C enfeksiyonundan kaynaklanan kolestazis, primer biliyer siroz (PBC) gibi kronik kolestatil karaciger ve birincil sklerozan kolanjit (PSC) dahil ancak bunlarla sinirli olmaksizin intrahepatik veya ekstrahepatik kolestazisin bir veya daha fazla semptomunun tedavisi veya önlenmesinde kullanilabilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede karaciger rejenerasyonu artirmada kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida, yöntem karaciger nakline yönelik karaciger rejenerasyonunu artirir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede fibrözün tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, fibrözün bir tedavi yöntemi ile ilgilidir. Bir açida bulus, fibrözün önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile Dolayisiyla burada kullanildigi üzere fibröz terimi, patolojik durumlar veya hastaliklara bagli fibröz, fiziksel travmaya bagli fibröz ("travmatik fibröz"), radyasyon hasarina bagli fibröz ve kemoterapiye maruz kalmaya bagli fibrözü içeren tüm bilinen fibrotik bozukluklara refere eder. Burada kullanildigi üzere "organ fibrözü" terimi, karaciger fibrözü, böbrek fibrözü, akciger fibrözü ve ince bagirsak fibrözünü içerir ancak bunlarla sinirli degildir. "Travmatik fibröz", ameliyata ikincil fibröz (cerrahi skarlasma), kaza ile olusmus fiziksel travma, yaniklar ve hipertrofik skarlasmayi içerir ancak bunlarla sinirli degildir.

Burada kullanildigi üzere, “karaciger fibrözü”, örnegin hepatit B veya 0 virüsü kaynakli olan viral olarak indüklenmis karaciger fibrözü; alkol (alkolik karaciger hastaligi), bunlarla sinirli olmamak üzere metotreksat dahil bazi farmasötik bilesikler, bazi kemoterapötik ajanlara ve mega dozlarda arsenikaller veya A vitaminin kronik sindirimi, oksidatif stres, kanser radyasyon terapisi veya bunlarla sinirli olmamak üzere karbontetraklorid ve dimetilnitrosamin dahil bazi endüstriyel kimyasallara maruziyet; ve primer biliyer siroz, primer sklerozan kolanjit, yagli karaciger, obezite, alkolik olmayan steatohepatit, kistik fibröz, hemokromatoz, oto-immün hepatit ve steatohepatit gibi hastaliklar dahil olmak üzere her türlü nedenden kaynaklanan karaciger fibrözünü içerir. Karaciger fibrözündeki mevcut terapi öncelikle, nedensel ajanin uzaklastirilmasina, örnegin, fazla demirin uzaklastirilmasi (örnegin, hemokromatoz durumunda), viral yükün azaltilmasina (örnegin, kronik viral hepatit durumunda) veya toksinlere maruziyetin elimine edilmesine veya azaltilmasina (örnegin, alkolik karaciger hastaligi durumunda) yöneliktir. Kortikosteroidler ve kolkisin gibi anti-inflamatuvar ilaçlar, karaciger fibrözüne neden olabilen inflamasyonun tedavisinde kullanima yönelik ayrica bilinir.

Teknikte bilindigi üzere karaciger fibrözü, genellikle bir biyopsi numunesinin histolojik siniflandirilabilir. SO, fibröz olmamasini gösterirken, S4, sirozu gösterir. Karaciger fibrözünün siddetini asamalandirmaya yönelik çesitli kriterler mevcutken, genelde fibrözün erken asamalari, karacigerin bir portalindaki (bölge) skarlasmanin ayrik, lokalize alanlari ile tanimlanirken, fibrözün geç asamalari, köprü fibriyozisi (karaciger bölgelerini geçen skarlasma) ile tanimlanir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina Ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede organ fibrözünün tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida fibröz, karaciger fibrözüdür.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede gastrointestinal hastaligin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, gastrointestinal hastaligin bir tedavi yöntemi ile ilgilidir. Bir açida bulus, gastrointestinal hastaligin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida gastrointestinal hastalik, inflamatuvar bagirsak hastaligi (IBD), irritabl bagirsak sendromu (IBS), asiri bakteriyel büyüme, malabsorpsiyon, post-radyasyon koliti ve mikroskopik kolitten seçilir. Bir açida, inflamatuvar bagirsak hastaligi, Crohn hastaligi ve ülseratif kolitten seçilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede renal hastaligin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, renal hastaligin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, renal hastaligin önlenmesinin bir yöntemi ile iliskilidir. Bir açida renal hastalik, diyabetik nefropati,fokalsegmentalglomerüloskleroz(FSGS),hipertansif nefroskleroz, kronik glomerülonefrit, kronik transplant glomerülopati, kronik interstisyel nefrit ve polikistik böbrek hastaligindan seçilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede metabolik hastaligin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, renal hastaligin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, renal hastaligin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida, metabolik hastalik, insülin direnci, hiperglisemi, seker hastaligi, diabezite ve obeziteden seçilir. Bir açida seker hastaligi, tip l diyabettir. Bir açida, seker hastaligi tip II diyabettir.

Yaygin bir sekilde diyabet olarak anilan seker hastaligi, vücutta uygun kan seker seviyelerini korumak üzere bozuklukla sonuçlanan glükozun üretimi ve yararlaniminda genellikle metabolik kusurlar ile karakterize edilen bir hastalik veya duruma refere eder.

Tip II diyabet durumunda hastalik, insülinin genis bir konsantrasyon araligi boyunca biyolojik etkilerini kullanma becerisini kaybettigi insülin direnci ile karakterize edilir.

Insülin cevap verebilirligine karsi bu direnç, karacigerde glükoz üretiminin ve salgilanmasinin ve adipoz dokuda Iipolizin yetersiz Insülin represyonu ve kasta glükoz alimi, oksidasyon ve depolamanin yetersiz insülin aktivasyonu ile sonuçlanir. Ortaya çikan durum, "hiperglisemi" olarak adlandirilan artmis kan glükozudur. Kontrolsüz hiperglisemi, retinopati (gözlerde kan damari hasarina bagli bozulma veya görme kaybi); nöropati (sinir sisteminde kan damari hasarina bagli sinir hasari ve ayak problemleri); ve nefropati (böbreklerde kan damari hasarina bagli böbrek hastaligi), hipertansiyon, serebrovasküler hastalik ve koroner kalp hastaligini içeren mikrovasküler ve makrovasküler hastaliklar için artmis bir riske bagli artmis ve prematür mortalite ile iliskilidir. Bu nedenle, glükoz homeostazisin kontrolü, kritik olarak diyabet tedavisine yönelik önemli bir yaklasimdir.

Insülin direnci, hipertansiyon, glükoz intoleransi, hiperinsülinemi, artmis trigliserit seviyeleri ve azalmis HDL kolestrolü ve merkezi ve tüm obezitenin kümelenmesini bütünlestirmek üzere hipotize edilir. Insülin direnci ile glükoz intoleransinin iliskisi, plazma trigliseritte bir artis ve yüksek yogunluklu Iipoprotein kolestrol konsantrasyonlarinda bir düsüs, hipertansiyon, hiperürisemi, daha küçük daha yogun düsük yogunluklu Iipoprotein partikülleri ve plazminojen aktivatör inhibitör-15in yüksek dolasan seviyeleri "Sendrom X" olarak refere edilir. Dolayisiyla, "Sendrom X"i hazirlayan hastalik sartlari, durumlar veya bozukluklarin kümesini içeren insülin direnci ile iliskili herhangi bir bozuklugun tedavisi veya önlenmesinin yöntemi saglanir. Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede metabolik sendromun tedavisi veya önlenmesinin bir yöntemi ile iliskilidir. Bir açida bulus, metabolik sendromun tedavisinin bir yöntemi ile iliskilidir. Bir açida bulus, metabolik sendromun önlenmesinin bir yöntemi ile iliskilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina Ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede kanserin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kanserin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kanserin önlenmesinin bir yöntemi ile ilgilidir. Bir açida kanser, kolorektal kanserdir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini Içeren bir öznede safra kesesi taslarinin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, safra kesesi taslarinin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, safra kesesi taslarinin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir safra kesesi tasi, safra bilesenlerinin akresyonu ile safra kesesi içinde olusturulan kristalin bir konkresyondur. Bu taslar, safra kesesinde olusturulur ancak, kistik kanal, ortak safra kanali, pankreatik kanal veya Vater kabarcigi gibi safra yolunun diger kisimlari içine distal olarak geçebilir. Nadiren, siddetli enflemasyon durumunda safra kesesi taslari, safra tasi ileusu olarak adlandirilan tikanikliga potansiyel olarak neden olarak yapisik bagirsak içine safra kesesi yoluyla asindirma yapabilir. Safra kesesindeki safra kesesi taslarinin varligi, akut kolesistit, safra kesesindeki safranin retansiyonu ile karakterize edilen inflamatuvar bir duruma ve siklikla intestinal mikroorganizmalar araciligiyla ikincil bir enfeksiyona, büyük bir çogunlukla Escherichia coli ve Bacteroides türlerine neden olabilir. Safra yolunun diger parçalarinda safra kesesi taslarinin varligi, yükselen kolanjit veya pankreatit gibi ciddi durumlara yol açabilen safra kanallarinin tikanmasina neden olabilir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede kolestrol safra kesesi tasi hastaliginin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kolestrol safra kesesi tasi hastaliginin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, kolestrol safra kesesi tasi hastaliginin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatinin etkili bir miktarina Ihtiyaç duyan bir özneye uygulanmasini içeren bir öznede nörolojik hastaligin tedavisi veya önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, nörolojik hastaligin tedavisinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida bulus, nörolojik hastaligin önlenmesinde kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir. Bir açida, nörolojik hastalik inmedir.

Bir açida bulus, burada açiklandigi üzere kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir ve ayrica burada bilesik, oral, parenteral, intramüsküler, intranazal, sublingual, intratrakeal, inhalasyon, oküler, vajinal, rektal ve intraserebroventrikülerden seçilen bir yol ile uygulanir. Bir açida, yol oraldir.

Bir açida, burada açiklanan yöntemlerin biri veya daha fazlasinda degerlendirilen bilesik, bir FXR agonistidir. Bir açida bilesik, selektif bir FXR agonistidir. Bir açida bilesik, TGR5`i aktive etmez. Bir açida bilesik, metabolik yolaklarda (örnegin, bir AlphaScreen analizi ile ölçülen sekilde) bulunan diger nükleer reseptörleri aktive etmez.

Bir açida, metabolik yolaklarda bulunan böyle diger nükleer reseptörler, LXRß, PXR, CAR, PPARd, PPARö, RARci, VDR, TR, PR, RXR, GR ve ER'den seçilir. Bir açida, bilesik apoptozisi indükler.

Bir açida bulus, safra asidi homeostazisinde bulunan bir veya daha fazla genin ifade seviyesini regüle etmede kullanima yönelik bulusun bilesikleri ile ilgilidir.

Bir açida bulus, bulusun bir bilesiginin bir hücreye uygulanmasiyla bir hücrede CYP7d1 ve SREBP-1C'den seçilen bir veya daha fazla genin ifade seviyesini asagi regüle etmenin bir yöntemi ile ilgilidir. Bir açida bulus, bulusun bir bilesiginin bir hücreye uygulanmasiyla bir hücrede OSTci, OSTß, BSEP, SHP, UGTZB4, MRP2, FGF-19, PPARV, PLTP, APOCII ve PEPCK'ten seçilen bir veya daha fazla genin ifade seviyesini yukari regüle etmenin bir yöntemi ile ilgilidir.

Bulus ayrica, bir hastalik veya durumun (örnegin, bir hastalik veya durum FXR aracili) tedavisi veya önlenmesine yönelik bir ilaç maddesinin üretimi ile ilgilidir, burada ilaç maddesi, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içerir. Bir açida bulus, yukarida açiklanan hastaliklar veya durumlardan herhangi birinin tedavisi veya önlenmesine yönelik bir ilaç maddesinin üretimi ile ilgilidir, burada ilaç maddesi, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içerir.

Bulus ayrica, bir hastalik veya durumun (örnegin, bir hastalik veya durum FXR aracili) tedavisi veya önlenmesine yönelik bir yöntemde kullanima yönelik bir bilesim ile ilgilidir, burada bilesim, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içerir. Bir açida bulus, yukarida açiklanan hastaliklar veya durumlardan herhangi birinin tedavisi veya önlenmesine yönelik bir yöntemde kullanima yönelik bir bilesim ile ilgilidir, burada bilesim, bulusun bir bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatini içerir.

Formülasyonlar Bulusun yöntemleri, bulusun bir bilesiginin etkili bir miktarinin uygulanmasi adimini içerir. Burada kullanildigi üzere "etkili miktar" terimi, belirtilen etkiyi elde etmek üzere yeterli olan bulusun bir bilesiginin bir miktarina refere eder. Dolayisiyla, FXR aracili hastaliklar veya durumlarin önlenmesi veya tedavisine yönelik bir yöntemde kullanilan bulusun bir bilesiginin etkili bir miktari, FXR aracili hastaligi veya durumu önlemek veya tedavi etmek için yeterli bir miktar olacaktir.

Benzer sekilde, kolestatil bir karaciger hastaligi veya artan safra akisinin önlenmesi veya tedavisine yönelik bir yöntemde kullanima yönelik bulusun bir bilesiginin etkili bir miktari, ince bagirsaga safra akisini artirmak üzere yeterli bir miktar olacaktir.

Istenen biyolojik etkileri elde etmek üzere gerek duyulan bulusun bilesiginin miktari, planlanan kullanim, uygulama yolu ve alici gibi birkaç faktöre bagli olacaktir ve sonuç olarak operatör doktor veya veterinerin takdirinde olacaktir. Genellikle, FXR aracili hastalik ve durumun tedavisine yönelik tipik bir günlük doz, örnegin yaklasik 0.01 mg/kg ile yaklasik 100 mg/kg araliginda olmasi beklenebilir. Bu doz, tek birimlik bir doz olarak veya çesitli ayri birimlik dozlar olarak veya sürekli bir infüzyon olarak uygulanabilir. Benzer dozlar, kolestatil karaciger hastaliklarinin önlenmesi ve tedavisini içeren diger hastaliklarin, durumlarin ve terapilerin tedavisine yönelik uygulanabilir olacaktir.

Bu nedenle bir baska açida, mevcut bulus, aktif içerik olarak, en az bir farmasötik tasiyici veya çözücü ile birlikte ve/veya bununla karisim içerisinde bulusun bir bilesigini içeren farmasötik bir bilesim saglar. Bu farmasötik bilesimler, daha önce belirtilen hastaliklarin veya durumlarin önlenmesi veya tedavisinde kullanilabilir.

Tasiyici, farmasötik olarak kabul edilebilir olmalidir ve bilesimdeki diger içerik maddeleri ile uyumlu olmalidir, yani zararli bir etkiye sahip olmamalidir. Tasiyici, kati veya sivi olabilir ve örnegin, aktif içerik maddesinin agirlikça %0.05 ila 95 arasinda içerebilen bir tablet gibi tercihen bir birim doz formülasyonu olarak formüle edilir. istenirse diger fizyolojik aktif içerik maddeleri, bulusun farmasötik bilesimlerinde ayrica birlesmis olabilir.

Olasi formülasyonlar, oral, sublingual, bukal, parenteral (örnegin subkütan, intramüsküler veya intravenöz), rektal, transdermali içeren topikal, intranazal ve inhalasyon uygulamaya yönelik uygun olanlari içerir. Özeli bir hastaya yönelik daha uygun uygulama araçlari, tedavi edilen hastalik veya durumun dogasina ve siddeti veya kullanilan terapinin dogasina ve aktif bilesigin dogasina baglanacaktir, ancak mümkün oldugunda oral uygulama, FXR aracili hastaliklar ve durumlarin önlenmesi ve tedavisine yönelik tercih edilir. Oral uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, ayri birimler olarak, örnegin tabletler. kapsüller. kaseler, pastiller, aktif bilesigin önceden belirlenen bir miktarini içeren her biri; tozlar veya granüller olarak; aköz veya aköz olmayan sivilarda solüsyonlar veya süspansiyonlar olarak; veya as yag-içinde-su veya su-içinde-yag emülsiyonlari olarak saglanabilir.

Sublingual veya bukal uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, aktif bilesigi ve tipik olarak seker ve akasya veya kitre gibi aromali bir bazi ve jelatin ve gliserin veya sükroz akasya gibi inert bir bazda aktif bilesigi içeren pastilleri içeren pastilleri içerir.

Tipik olarak parenteral uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, aktif bilesigin önceden belirlenen bir konsantrasyonunu içeren steril aköz solüsyonlari içerir; solüsyon tercihen, planlanan alicinin kani ile izotoniktir.

Parenteral uygulamaya yönelik ilave uygun formülasyonlar, sürfaktanlar ve siklodekstrinler gibi fizyolojik olarak uygun ko-solventleri ve/veya karmasik ajanlari içeren formülasyonlari içerir. Yag-içinde-su emülsiyonlari, parenteral formülasyonlara yönelik ayrica uygun formülasyonlardir. Bu tarz solüsyonlarin tercihen intravenöz olarak uygulanmasina karsilik, bunlar, subkütan veya intramüsküler enjeksiyon yoluyla ayrica uygulanabilir.

Rektal uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, örnegin, kakao yagi gibi tercihen supozituar baz olusturan bir veya daha fazla kati tasiyicilardaki aktif içerik maddesini içeren birim-doz supozituarlar olarak saglanir.

Topikal veya intranazal uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, merhemler, kremler, yönelik uygun tasiyicilar, vazelin, Ianolin, polietilenglikoller, alkoller ve bunlarin kombinasyonlarini içerir.

Bulusun formülasyonlari, herhangi bir yöntem ile, tipik olarak üniform sekilde ve tamamen, aktif bilesigin sivilar veya ince bölünmüs kati tasiyicilar veya ikisi ile gerekli oranlarda karistirilmasi ile ve akabinde gerekli olmasi halinde ortaya çikan karisimin istenen biçime sekillendirilmesiyle hazirlanabilir. Örnegin bir tablet, aktif içerik maddesi ve bir veya daha fazla opsiyonel içerik maddesinin toz veya granüllerini, örnegin bir baglayici, yaglayici, inert çözücü veya yüzey aktif dagitici ajan içeren bir karisimin sikistirilmasiyla veya toz haline getirilmis aktif içerik maddesi ve inert sivi çözücünün bir karisiminin kaliplanmasiyla hazirlanabilir.

Inhalasyon ile uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, doz ayarli basinçli aerosoller, nebülizörler veya insuflatörlerin çesitli türleri araciligiyla üretilebilen ince parçacikli tozlari veya bugulari içerebilir.

Agiz yoluyla pulmoner uygulamaya yönelik olarak tozlarin veya damlalarin parçacik boyutu, brons agacina dagitmayi saglamak üzere tipik olarak 05-10 pm, tercihen 1-5 um araligindadir. Nazal uygulamaya yönelik 10-500 um araligindaki bir parçacik boyutu, nazal bosluktaki retansiyonu saglamak üzere tercih edilir.

Doz ayarli inhalerler, tipik olarak sivilastirilmis bir itici gazdaki aktif içerik maddesinin bir süspansiyon veya solüsyon formülasyonunu Içeren basinçli aerosol kaplardir. Bu cihazlar kullanimlari sirasinda, aktif içerik maddesini içeren ince parçacikli bir spreyi üretmek üzere tipik olarak 10 ila 150 ul araliginda bir ayarli hacmin dagitilmasi için adapte edilen bir valf yoluyla formülasyonu bosaltir. Uygun itici gazlar, örnegin, diklorodiflorometan, trikloroflorometan, diklorotetrafloroetan ve bunlarin karisimlari gibi bazi kloroflorokarbon bilesiklerini içerir. Formülasyon, ayrica bir veya daha fazla ko- solventi, örnegin, oleik asit veya sorbitan trioleat, anti-oksidanlar ve uygun aroma verici ajanlar gibi etanol sürfaktanlari içerebilir.

Nebülizörler, aktif içerik maddesinin solüsyon veya süspansiyonlarini terapötik bir aerosol buguya veya dar bir venturi açikligi araciligiyla sikistirilmis bir gaz, tipik olarak hava veya oksijenin akselerasyonu yoluyla veya ultrasonik karistirma yoluyla dönüstüren ticari olarak uygun cihazlardir. Nebülizörlerin kullanimina yönelik uygun formülasyonlar, sivi bir tasiyicidaki aktif içerik maddesinden olusur ve formülasyonun en fazla %40 w/w, tercihen %20 w/w'den azini içerir. Tasiyici tipik olarak, tercihen örnegin, sodyum kloridin eklenmesiyle vücut sivilari ile izotonik hale getirilen su veya seyreltik aköz alkolik solüsyondur. Opsiyonel katki maddeleri, formülasyon örnegin metil hidroksi-benzoat, anti-oksidanlar, aroma verici ajanlar, uçucu yaglar, tamponlama ajanlari ve sürfaktanlar steril hazirlanmadiginda koruyucu içerir.

Insuflasyon yoluyla uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, burna çekme seklinde nazal bosluga alinan veya bir insuflatör araciligiyla dagitilabilen ince parçalanmis tozlari içerir. Insuflatördeki toz, elle çalistirilan bir pompa araciligiyla veya inhalasyon üzerine cihaz araciligiyla hava çekilmesiyle dagitilan toz ve in situ açilan veya delinen, tipik olarak jelatin veya plastikten yapilan kapsüllerde veya kartuslarda bulunur.

Insuflatörde kullanilan toz, yalnizca aktif içerik maddesinden veya aktif içerik maddesi içeren bir toz harmani, Iaktoz gibi uygun bir toz çözücü ve opsiyonel bir sürfaktandan olusur. Aktif içerik maddesi tipik olarak, 0.1 ila 100 w/w formülasyon içerir. Özellikle yukarida bahsedilen içerik maddelerine ek olarak, mevcut bulusun formülasyonlari, konu bakimindan formülasyon türüne yönelik önemi olan eczacilikta teknikte uzman olanlar tarafindan bilinen diger ajanlari içerebilir. Örnegin, oral uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, aroma verici ajanlari içerebilir ve intranazal uygulamaya yönelik uygun formülasyonlar, parfümleri içerebilir.

Asagidaki Örnekler, açiklayicidir ve herhangi bir sekilde bulusun kapsamini sinirlandirmak üzere yorumlanmamalidir. ÖRNEKLER Genellikle, bir ilaç adayi olarak bulusun bir bilesiginin potansiyeli, teknikte bilinen çesitli analizler kullanilarak test edilebilir. Örnegin, FXR'ye yönelik in vitro validasyon için: bunun aktivitesi ve selektivitesi, AIphaScreen (biyokimyasal analiz) kullanilarak degerlendirilebilir; gen ifadesi, RT-PCR (FXR hedef gen) kullanilarak degerlendirilebilir; ve sitotoksisite (örnegin, HepG2), ATP içerigi, LDH salinimi ve Kaspaz-3 aktivasyonu kullanilarak degerlendirilebilir. TGRS'e yönelik in vitro validasyon için: bunun aktivitesi ve selektivitesi, HTR-FRET (hücre bazli analiz) kullanilarak degerlendirilebilir; gen ifadesi, RT-PCR (TGR5 hedef gen (yani, cFOS)) kullanilarak degerlendirilebilir; ve sitotoksisite (örnegin, HepG2), ATP içerigi, LDH salinimi ve Kaspaz-3 aktivasyonu kullanilarak degerlendirilebilir. ADME (absorpsiyon, dagilim, metabolizma ve salgiIama)/farmakokinetik özellikler ve bulusun bilesiklerinin In vi'vovalidasyonu, teknikte bilinen yöntemler kullanilarak çalisilabilir. Örnek 1: Bilesiklerin (100 ve 101) Sentezi Bilesikler (100 ve 101), asagidaki semaya göre sentezlenmistir. 6ECA1 2 I T iiilvsih 100 bine-sik 1D? Reaktifler ve kosullar: a) 1) MeOH, p-TSA, ultrason, 3 saat, nicel; 2) A020, AcOH, oda sicakliginda 45 dakika; h) Zn tozu, NaOAc. reflüks 20 dakika; i) NaOH 2M.

MeOH, oda sicakliginda gece boyu, bilesikten (5) elde edilen %65; 1) NaBH4, THF/HzO 4:1, %70; m) Na(s), sec-BuOH, 50 °C, %70.

Sentez, teknikte bilinen yöntemler kullanilarak hazirlanan baslangiç materyali olarak öd-etiI-kolik asit (6-ECA. 1) kullanimina dayanir. 6-ECA (1 ). bilesik 2'yi saglamak üzere THF'de NaHCOa'ün varliginda Ac2O ile reflükslenerek C3 pozisyonunda selektif olarak korunan karsilik gelen metil esteri saglamak üzere ultrason irradyasyonu altinda MeOH içinde p-TSA ile muamele edilmistir. Bilesik 2, oda sicakliginda CH2CI2 içinde PCC ile muamele edilmistir, akabinde oda sicakliginda CH2CI2 içinde A020, Bi(OTf)3 ile muamele, ara ürün metil 3d,7o-diasetoksi-12-okso-5ß-kolan-24-oat (bilesik 3; bilesikten (2) elde edilen yaklasik %48) saglamistir.

Benzen içinde örnegin, 12 saat Bu ile bilesik 3'ün muamelesi. bilesik 4'ü vermistir. Yeni damitilan piridin içinde NaBH4 ve NaOAc ile bilesik 4'ün reaksiyonu, silika jel saflastirmasindan sonra yaklasik %59 verimde, karsilik gelen 11ß-12ß epoksidi (bilesik ) vermistir. Oda sicakliginda AcOH içinde HI ile bilesik 5iin reaksiyonu, bilesik 6'yi üretmek üzere AcOH içinde Cr03 ile C11 pozisyonunda oksidize edildikten sonra halohidrin ara ürününü saglamistir. Kaynayan AcOH ve alkali hidroliz (NaOH/MeOH) asidi (bilesik 7; bilesik 5'ten elde edilen yaklasik %65 verim) saglamistir.

Bilesik 7, Bilesik 100'ü saglamak için kromatografik saflastirmadan sonra, 3d,7d,11ß- trihidroksi-öd-etil-5ß-kolan-24-oik asit (Bilesik 100; bilesik 3'ten elde edilen yaklasik karbonilde stereoselektif olarak azaltilmistir. Alternatif olarak, bilesik 7, saflastirmadan sonra Bilesik 101'i (yaklasik %70 verim) elde etmek üzere sec-BuOH içinde 50 °C”de sodyum ile azaltilmistir. Örnek 2: Bilesik 100, güçlü, spesifik bir FXR agonistidir Çekirdekte, ligand-bagli nükleer reseptörler (NRiler), dogrudan bazal transkripsiyonel düzenek ile etkileserek veya koaktivatörler denilen temas eden köprüleme faktörleri ile baglama domeninde (LBD) bulunan aktivasyon fonksiyonu 2 (AF-2) ile koaktivatörler üzerinde bulunan nükleer reseptör kutulari (NR kutusu) arasinda meydana gelir (Nolte LXXLL peptid dizisinin, AF-2 bölgesi ile farkli proteinlerin etkilesimini kolaylastiran AIphaScreen, steroid reseptör koaktivatör 1'in (SRC-1) NR kutusunda mevcut olan FXR ve LXXLL motifi arasindaki hakim olan bimoleküler etkilesimin avantaji elde edilerek yeni modülatörleri tespit etme amaciyla kullanilmistir.

Insan FXR-LBD-GST, biyotinlenmis LXXLL SRC-1 peptidinin varliginda gösterilen reseptör-koaktivatörü olusturuldugunda artar. E050 degerleri, kenodeoksikolik asit (CDCA; bir pozitif kontrol olan) için 8.9 uM, Bilesik bir için 0.16 uM ve Bilesik 100 için 0.16 uM'dir. Bu sonuçlar, gerçeklestirilen üçünün temsili bir deneyinden elde edilen üç kopyali numunelerin ortalama ± S.D.'sidir. AlphaScreen analizi, 0.84 2' faktörü ile gösterildigi üzere oldukça saglam ve tekrarlanabilir bir analizdir (Zhang JH, et al.. J agonistidir.

Ayrica, asagidaki tablodaki veriler, Bilesik 1001ün insan FXR`sine yönelik selektif oldugunu ve insan TGRS'î için aktif olmadigini gösterir.

AIphaScreen . .

Bilesik . Insan TGR5 (NCI- Insan TGR5 asiri Analizi Insan FXR H716 hücre) ifadesi Ref. CDCA = ±3uM Bilesik Bilesik 3±2 41.5 Bilesik 0.2±0.018 15±5 Bilesik Bilesik 175 0.9 Ek olarak, AIphaScreen analizi kullanilarak, Bilesik 100'ün spesifik olarak FXR'yi aktive ettigi ve metabolik yolaklarda bulunan 13 diger nükleer reseptörü aktive etmedigi gösterilmistir.

B'I 'k ixi< Lwl; PXR ('AR I'I'Alio Pl'ARc'i viutir;` iesi Aklivasyonu Aktivasyonu Aktivasyonu Aktivasyonu Aktivasyonu AktivaSyonu AkhVaSYOHU (Referans (('nttx- i'i'iisitiisi? ( -Riiliifii: u iicii- “' `_ 4 “JSN” “J” :”11 .tl-EU ?v im: . i' ° ' uioS \ ' ' “ Standard” *1 h ' 'MJ tm› ' ” ” OJIUBpN-Ii .LMl ?Mi l`('~.tu`v1l I'I(`~.(u\1l Il( -iiIUMI F( `.(p`v1l [5(1. (Mal) 1;('...(u\1) |:(`.ii(.u'\1) B'kîs'k 0.16 Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktif degil Bilsisik 0.03 Aktit degil Aktil degil 444 Aktif degil Aktit degil Aktit degil Bllîîlk 0.10 Aktif degil Aktif degil Am degii Aktif degil Aktif degil Aktif degil RARU. VDR TR PR RXR QR [R Bilesik Aklivasyonu Aktivasyonu Aktivasyonu Aktivasvonu Aktivasyonu Aktivaswnu Aktivasyonu . . _ ' r . Hi`- (› (Referans G“ÄIFTW H'Gîsksm rumni ieron= 31:32:“ ;- I'uitm* (Him standardi] iiw› iiMS› u\1.i Iuiw m1) i.Mi ”Mi ll(`~.('u\'1l Rklm-“l lî(`u.luMt lî(`«. (pH) H& [uMi I;(`›..ituM`i l;(`›..iti17\1) B'Iîs'k Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktit degil Aktif degil Aktiî degil Bilesik Aktil degil Aktir degil Aktir degil Aktif degil Aktif degil Aktif aegii Aktif degil BIIBSIK Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktif degil Aktif degii Aktif degil Aktif degil *: ters agonist.

Bilesik 5-Luc sistemi ile kisa süreli transfekte edilen HEK293T hücre hattinin kullanimi ile hücre bazli transaktivasyon analizlerinde test edilir (Sekil 1). Bilesik 100 ile FXR aktivasyonu, bu bilesiklerin hücre bazli analizlerindeki güçlü FXR agonistleri oldugunu gösteren bilesik A Sekil 1. HEK293T hücrelerindeki bir transaktivasyon analizindeki bilesik A'ya kiyasla Bilesik 100'ün aktivitesini gösteren bir ile indüklenen ile karsilastirilabilir. grafiktir. NT, bilesik A veya Bilesik 100'e maruz kalmaksizin FXR vektör ile transfekte edilen hücrelerdir. Degerler, uM cinsinden temsil edilir.

Safra asitleri (BA'Iar), sadece çesitli nükleer hormon reseptörlerini modüle etmez, ayrica G proteini ile baglanan reseptör (GPCR) TGRS'e yönelik agonistlerdir sinyalleme, sadece BA sentezini ve enterohepatik yeniden sirkülasyonu degil, ayrica trigliserit, kolestrol, glükoz ve enerji homeostazisini regüle ederek çesitli metabolik yolaklari modüle eder. TGR5'i aktive etmek için bulusun bir bilesiginin kapasitesini degerlendirmek için, Bilesik 100 ve diger karsilastirma bilesikleri, TGR5 aktivasyonu için okunan bir deger olarak intraselüler cAMP'nin bir artisina yönelik gösterilir.

Temelde TGR5 ifade eden insan enteroendokrin NCI-H716 hücreleri, Bilesik 100'ün artan konsantrasyonlarina maruz kalmistir ve intraselüler cAMP seviyeleri TR-FRET ile ölçülmüstür. Litokolik asit (LCA) pozitif kontrol olarak kullanilmistir.

Sekil 2A'da gösterildigi üzere Bilesik 100, intraselüler cAMP seviyesinde hiçbir degisikligin gözlenmedigi sekilde fizyolojik olarak reseptör ifade eden hücrelerde TGR5 aktivitesini indüklemez. Ayrica Bilesik 100'ün TGR5`e baglanip baglanamayacagini degerlendirmek için TGR5'i asiri ifade eden klonal bir hücre hatti, Bilesik 100'ün farkli konsantrasyonlarina maruz kalir. Sekil ZB'de gösterilen sonuçlar, TGR5 reseptörünün asiri ifadesi ile dahi, Bilesik 100'ün hiçbir iliskili etkiye sahip olmadigini gösterir. Sekil 2A, Bilesik ve fizyolojik seviyelerde TGR5 ifade eden insan enteroendokrin hücrelerinde LCA'yi gösteren bir grafiktir. Sonuçlar, temsili bir deneyin gerçeklestirilen üçünden elde edilen numunelerin üç kopyasinin ortalama ± 8. D.”si olarak gösterilir. Sekil 28, Bilesik ve TGR5'i asiri ifade eden insan Çin hamster yumurtalik (CHO) hücrelerindeki LCA'yi gösteren bir grafiktir. Örnek 3: Bilesik 100 ile modüle edilen FXR hedef genler FXR hedef genlerini modüle etmek için Bilesik 100'ün kapasitesini degerlendirmek üzere nicel RT-PCR analizler gerçeklestirilmistir. HepG2 hücreleri, bulusun bir bilesiginin endojen FXR genetik agini regüle edip edemeyecegini belirlemek için iliskili bir hücre hatti olarak seçilmistir. FXR hedef genleri indüklemek üzere bulusun bir bilesiginin yeterligi, bilesikler A, B ve 100'ün 1pM'si ile gece boyu muamele edilen hücrelerden toplam RNAinin izole edilmesiyle degerlendirilmistir. Bilesik A, güçlü bir FXR selektif agonist olarak belirlenir ve bilesik B, ikili güçlü bir FXR/TGR5 agonist olarak belirlenir. Bilesik 100'ün HepG2 hücrelerindeki gen aktivasyon profili, bilesiklerA ve B'nin profilleri ile karsilastirilmistir (Pellicciari, R, et al., J Med Chem. 2002; Aug 15; FXR, BA homeostazisinde bulunan çesitli hedef genlerin ifadesini regüle eder. Kisaca FXR, yani, Iipid metabolizma, safra-asitleri metabolizmasi ve karbohidrat metabolizmasini içeren çesitli metabolik yolaklarda merkezi bir rol oynar. Gen ifadesi profillemesi ile ilgili olarak, Iipid metabolizmasi içinde bulunan proteinleri kodlayan genler, örnegin, APOCII, APOE, APOAI, SREBP-1C, VLDL-R, PLTP ve LPL içerir; safra-asitleri metabolizmasinda bulunan proteinleri kodlayan genler, örnegin, OSToi/ß, BSEP, MRP2, SHP, CYP7A1, FGF19, SULT2A1 ve UGTZB4 içerir; ve karbohidrat metabolizmasinda bulunan proteinleri kodlayan genler, örnegin, PGC1a, PEPCK ve GLUT2 içerir.

Sekiller 3A-3H`de gösterildigi üzere, FXR'nin Bilesik 100 aktivasyonu, karaciger ve ince bagirsaktaki nükleer reseptör SHP'nin seviyelerinin artmasiyla ve FGF19'un seviyesinin artmasiyla BA biosentetik enzimleri CYP7A1'in ifadesini dolayli olarak 100 ayrica, BSEP ve OSTd ve OSTß içeren BA'nin tasinmasinda bulunan proteinleri kodlayan genlerin ifadesini pozitif olarak regüle eder. Yeni sentezlenen BA'Iar, taurin veya glisin ile konjuge edilir ve akabinde aktif olarak safra kesesinde salinir, FXR, bu kritik proseslerin ikisini de regüle eder. Monoanyonik- ve dianyonik ile konjuge edilen BA'Iar akabinde sirasiyla, BSEP ve birden fazla ilaçla iliskili protein 2 (MRP2) tarafindan aktif olarak safra kesesinde salinir. Bu tasiyicilar, ABC tasiyici ailesine aittir ve ikisi de transkripsiyonel seviyede FXR tarafindan indüklenir. Bu ABC tasiyicilarinin regülasyonu, karaciger ve bunu izleyen hepatik hasardaki BA birikintisinden kaçinmak için kritik öneme sahiptir (Schinkel AH, et al., Mammalian drug efflux transporters of the ATP binding cassette (ABC) family: ari overview. Adv Drug Deliv Rev. 2012; Sep 13).

Sekil 3, Bilesik , CYP'nin regüle eden ifadesindeki diger karsilastirma bilesiklerini gösteren bir dizi grafiktir. Muamele edilmemis hücrelere göre y-ekseninin, ifadedeki kat degisimlerini gösterdigi, Sekiller 3A-3H'de belirtilir. Veriler, B2Myye göre normalize edilmistir. Hata çubuklari, üç kopyanin standart sapmasini gösterir.

FXR aktivasyonu, periferik dokulardan kolesterolün, biliyer bosaltim ve bunu takip eden fökal eliminasyon için karacigere gönderilmesi ile sonuçlanan bir proses olan ters Bu metabolik senaryoda FXR, fosfolipidlerin ve kolesterolün, LDL'den HDL'ye transferinden sorumlu fosfolipid transfer proteininin (PLTP), ApoE, ApoC-l, ApoC-IV gibi hepatik lipoproteinlerin ve HDL'nin hepatik aliminda yer alan tutucu reseptör B1'in (SRB1) ifadesini regüle eder.

FXR, hepatik de novo lipogenez ve trigliserit kleransinin regüle edilmesiyle trigliserit (TG) metabolizmasini kontrol eder. Bilesik 100 ile aktivasyonu üzerine FXR, yag asidi sentezi ve lipogenez stimulasyonunda kritik bir rol oynayan bir transkripsiyon faktörü olan SREBP-1cinin ifadesini asagi regüle eder (Sekiller 4A-4D) (Landrier, JF, et al., J aktivasyonu ayrica TG kleransini modüle eder. FXR`nin bu ilave TG-azaltma etkisi, Apo-C-l1 LPL ve VDL reseptörü gibi anahtar genlerin indüksiyonu yoluyla moleküler Sekil 4, Bilesik ve PPARV (D)'de bulunan regüle eden PLTP'deki diger karsilastirma bilesiklerinin gösteren bir dizi grafiktir. Muamele edilmemis hücrelere göre y-ekseninin, ifadedeki kat degisimlerini gösterdigi, Sekiller 4A-4D'de belirtilir. Veriler, B2M'ye göre normalize edilmistir. Hata çubuklari, üç kopyanin standart hatasini gösterir.

FXR ayrica, karbohidrat metabolizmasinda bir role sahip olabilir. (Ma K, et al., J Clin çalisilmistir (Sekil 5). Sekil 5, Bilesik 100'ün ve PEPCK gen üzerindeki diger karsilastirma bilesiklerinin regülasyonunu gösteren bir grafiktir. Y-ekseni, muamele edilmemis hücrelere göre ifadedeki kat degisimlerini gösterir. Veriler, B2M'ye göre normalize edilmistir. Hata çubuklari, üç kopyanin standart hatasini gösterir.

Toplu olarak gen ifadesi çalismalari, Bilesik 100'ün bilesik A veya B olarak ayni FXR hedef genlerini modüle ettigini gösterir (ayrica bakiniz Tablo 3).

Gen Bilesik A (1uM) Bilesik B (1 uM) Bilesik 100 (1uM) Gen Bilesik A (1uM) Bilesik B (1 uM) Bilesik 100 (1i.iM) OSToi yukari yukari yukari OSTß yukari yukari yukari BSEP yukari yukari yukari SHP yukari yukari yukari CYP70i1 asagi asagi asagi UGT2B4 yukari yukari yukari MRP2 yukari yukari yukari FGF-19 yu kari yukari yukari PPARy yukari yukari yukari PLTP yukari yukari yukari APOCII yukari yukari yukari PEPCK yukari yukari yukari SREBP-1C asagi asagi asagi Örnek 4: Bilesik 100, HepG2 hücrelerinde sitotoksik etki kullanmaz.

Bilesik 100yün in vitro sitotoksisitesini degerlendirmek için iki farkli analiz yöntemi uygulanmistir. Analizler, ATP seviyelerinin ölçülmesiyle hücre canliligini ve LDH saliniminin ölçülmesiyle sitotoksisiteyi degerlendirir. Adenozin Trifosfat (ATP) nükleotidi, bir koenzim olarak her hücrede kullanilan ve mitokondriyal DNA'nin integral bir parçasi olan multifonksiyonel bir molekül oldugundan, temel moleküler seviyedeki enerji kaynagini temsil eder (Kangas L, et al., Medical Biology, 1984; 62, 338- oldugunda, "dolasimdaki moleküler birim" olarak adlandirilir. Bu, metabolizmada ATP'nin önemli rolünü ve ATP içerigindeki bir düsüsün selüler hasarin ortaya çikmasindaki birinci adim olmasini saglamaktir (Storer RD, et al., Mutation Research, Hücre canliligi, test bilesiklerinin konsantrasyonu ve maruz kalinan süreyle iliskili intraselüler ATP'nin ölçümü olarak belirlenmistir (Sussman, NL.; Promega Cell Notes, Sekil 6, 4 saat boyunca bilesiklerin gösterilen konsantrasyonlari ile muamele edilen HepG2 hücrelerinde ATP ölçümünü gösteren bir grafiktir. Bu, Bilesik 100'ün farkli konsantrasyonlarinin varliginda tüm hücrelerin, yalnizca araç ile muamele edilen hücreler olarak canli kaldigini gösterir, yani', Bilesik 100 ile muamele edilen tüm hücreler canli kalir (%100). LCA, iyi bilinen bir sitotoksik safra asidi, karsilastirici olarak kullanilmistir ve Tamoksifen, analizlere yönelik pozitif kontroller olarak kullanilmistir.

Hücrelerin canliligini belirlemenin ilave bir yöntemi, selüler bölümlere ayirmayi tanimlayan membranin bütünlügünü saptamaktir. Zarar görmüs hücre membranlarinda bilesenlerin sitoplazmadan sizmasinin ölçülmesi, membran bütünlügünün kaybini gösterir ve LDH salinimi, hücrelerdeki yaygin toksisiteyi belirlemek için kullanilan yöntemdir. HepG2 hücreleri, Bilesik 100 ile muamele edilir, seri dilüsyonlar gerçeklestirilir, LCA dilüsyonlari hücre olmadan ve muamele edilmemis hücreler ile birlikte analiz kontrolü olarak plakali hücrelere eklenmistir. Analiz, her bir test bilesigi konsantrasyonuna yönelik üç kopya halinde gerçeklestirilmistir.

Sonuçlar, Bilesik 100'ün HepG2 hücreleri üzerinde herhangi bir sitotoksik etkiyi indüklemedigini gösterir. Kontrol Tamoksifen yaklasik 25 uM'de sitotoksik etkileri kullanmazken, Litokolik Asit 70 uMide LDH salinimini artirir (bakiniz Tablo 4).

Bilesik Membran bütünlügü ECso (uM) (LDH ölçümü) Tamoksifen 35±10 Bilesik A 190±30 Bilesik B* 670 Bilesik 100 Toksisite yok (%100 yasayan hücreler) Bilesik 101 Toksisite yok (%100 yasayan hücreler) * Rizzo et al., Mol. Pharm. 2010 Örnek 5: Bilesik 100, sitokrom P450 enzimlerini inhibe etmez.

Ilaç-ilaç etkilesimlerine yönelik Bilesik 100'ün potansiyelini degerlendirmek için. alti ana Bilesik 100 ile sitokrom P450 enzimleri arasindaki etkilesimi belirlemek üzere, Bilesik 100, rekombinant CYP450 proteinleri (baculosomes; lnvitrogen), substratlar ve inhibitörler kullanilarak bir fluoresans sinyalinin üretimini inhibe etmek (veya etmemek) üzere bunun kapasitesi ile analiz edilmistir (Bidstrup, TB, et al., Br J Clin Pharmacol, selektif inhibitör, ayni plakada test edilmistir (Tablo 5).

Bilesik A Referans: >10 Furafilin = 0.5pM CYP3A4 (Yesil Substrat) Referans: >1O Ketokonazol = CYP3A4 (Mavi Substrat) Referans: >1O Ketokonazol = Referans: Bilesik B Bilesik CPY450 Bilesik A Bilesik B Bilesik 100 Sülfafenazol = 0.4uM Referans: >10 >1O >10 Mikonazol = 0.06pM Referans: >10 >1O >10 Kuinidin = 0.01 uM Referans: >1O >1O >10 Bilesik 100'ün ilaç-ilaç etkilesim etkilerinden etkilenmesinin olasi olmadigini göstererek, bilesikler A ve B gibi Bilesik 100'ün, test edilen Sitokrom P450 enzimlerini inhibe Örnek 6: Bilesik 100, insan ERG potasyum kanalini inhibe etmez iyon kanal fonksiyonunu belirlemek üzere PredictorTM hERG Fluoresans Polarizasyon analizi, hERG kanalini bloke etmek Için test bilesiklerinin egiliminin bir ön belirlemesine yönelik etkili bir yöntem sagladigi sekilde uygulanmistir (Dorn, A, et al. J Biomol transfekte hücrelerdeki dingin membran potansiyaline katki sagladigi varsayimina dayanir ve bu nedenle hERG kanallarinin bir blogu, hücre membraninin bir depolarizasyonu ile sonuçlanmalidir. Analiz, patch kenetleme elektrofizyoloji çalismalari ile kesin olarak iliskili olan verinin üretilmesiyle potansiyel hERG kanal bloke edicilerini tanimlamak üzere tasarlanmistir. Predictor analizinden elde edilen sonuçlar, patch kenetleme tekniklerinden elde edilenler ile yüksek bir korelasyon Patch kenetleme* Radyoligand* FP Bilesik IC50 (nM) Astemizol 1.2 1 1.3 Dofetilid 12 40 6.9 Terfenadin 16 30 23 Bepridil 550 170 210 Tablo 6, patch kenetleme ve radyoligand displasman analizlerinden rapor edilen ICso degerleri ile PredictorTM hERG Fluoresans Polarizasyon analizi ile üretilen ICso degerlerinin karsilastirilmasini gösterir. hERG potasyum kanali ile sabit bir sekilde transfekte edilen Çin hamsteri yumurtalik hücrelerinden elde edilen membran hazirlanislari, Predictor fluoresans polarizasyon analizi kullanilarak bu kanal üzerinde Bilesik 100'ün potansiyel inhibitör etkisini degerlendirmek için kullanilmistir. hERG potasyum kanalinin inhibisyonunun bir sonucu olarak membran polarizasyonunun indirgenmesi, dogrudan fluoresans polarizasyonunun (FP) bir indirgenmesi ile iliskilidir. Sonuçlar, bilesikler A ve B gibi Bilesik 100'ün hERG potasyum kanalini bloke veya inhibe etmedigini gösterir.

Analiz, test bilesiginin 16-noktali bir doz-yaniti ve pozitif kontroller E-4031 ve Tamoksifen kullanilarak üç kopya halinde gerçeklestirilmistir. E-4031,e yönelik IC elde edilmistir. fazla analiz penceresi iyi düsünülmüstür. Z' degeri, oldukça iyi bir analiz gösteren 0.78'dir. Lineer olmayan regresyon egrilerii IC50 degerlerini hesaplamak üzere GraphPad Prism (GraphPad Software Inc.) analizleri yoluyla elde edilmistir.

Kisaca, FXR yoluyla sinyalleme, metabolik yolaklarin çesitliligini modüle eder, böylece selektif FXR modülatörleri, karacigeri, böbregi etkileyen kronik hastaliklarin yani sira metabolik hastaliklarin bir araliginin tedavisine yönelik etkili adaylardir. Burada açiklanan örneklerdeki sonuçlar, Bilesik 100'ü güçlü ve spesifik bir FXR agonisti olarak karekterize eder. Önemli biçimde, güçlü bir sekilde FXR'yi aktive etmesine ragmen, Bilesik 100, diger nükleer reseptörlere karsi aktivite göstermez ve safra asidi GPCR TGRS'i aktive etmez.

Yüksek nükleer reseptör selektivitesine ek olarak, Bilesik 100, bir ilaç adayina yönelik uygun bir farmakolojik profili isler. Bilesik 100, bir karaciger toksisite yoksunlugu gösteren insan HepG2 karaciger hücreleri üzerinde sitotoksik etki göstermez ve Bilesik 100'ün önemli ilaç-ilaç etkilesim riskinden yoksun oldugunu gösteren test edilen herhangi bir CYP450 enzimini inhibe etmez. Ayrica Bilesik 100, insan ERG potasyum kanalini inhibe etmez.

Bilesik 100'ün kombine selektivitesi ve potensi ile birlikte uygun ilaç-benzeri özellikleri, özellikle çok iyi güvenli profili, Bilesik 100'ü hastaligin tedavisinde ve önlenmesinde etkili bir aday haline getirir. Örnek 7: Bilesik 100'ün Fizyokimyasal özellikleri Suda çözünürlük, kritik miselüler konsantrasyon, yüzey gerilimi ve LogPA gibi Bilesik 100'ün fizyokimyasal özellikleri, teknikte bilinen yöntemler kullanilarak belirlenmistir.

Bilesik 100'ün bu özellikleri, dogal ve sentetik analoglar ile karsilastirilmistir (Tablo 7).

Safra Asidi Ws (uM) CMC(b)(mM) STCMc1°>(Din/cm) LogPMdl TCDCA hs 3.0 - 0.9 TUDCA hs 2.2 - 1.1 Safra Asidi Bilesik A Bilesik B Bilesik C Bilesik D Bilesik E Civic(mM) STCMCl°>(Din/cm) 43.2-48.8 43.3-47.9 LogPA.(d) aWs: suda çözünürlük, protonlu türler olarak BA'ya refere eder ve bu nedenle, yüksek çözünürlügü (hs) olan Bilesik B, TCDCA ve TUDCA için degerlendirilmezler; b CMC: 0.15 M NaCI su solüsyonunda belirlenen Kritik Misel Konsantrasyonu; ° STcmc: 0.15 M NaCI su solüsyonunda CMC'de Yüzey Gerilimi; d LogPA': iyonize türler olarak çalisilan safra asitlerinin 1-0ktanoI-su dagilim katsayisi; Örnek 8: id ve iv uygulamadan sonra safra fistül siçanlarinda farmakokinetikler ve metabolizma: in-vivo In-vivo modellerde siçanlara, 1 pmol/dakika/Kg.1 saatte Bilesik 100'ün tekli dozu uygulanmistir (bakiniz Sekiller 7A, ?B ve YC). Sekil 7A, id ve iv uygulamaya yönelik Bilesik 100'ün koleretik etkisini gösteren bir grafiktir. Sekil 78, id ve iv uygulamaya yönelik Bilesik 100'ün salgilanmasini gösteren bir grafiktir. Sekil 70, zamanla Bilesik 100'ün plazma konsantrasyonunu gösteren bir grafiktir.

Claims (1)

1. ISTEMLER 1. Formülün (I) bir bilesigi: R4 (1), veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatidir, burada: R1, hidroksil; R2, hidrojen, hidroksil, alkil veya halojen, burada söz konusu alkil, bir veya daha fazla R8 ile sübstitüe degildir veya sübstitüedir; R3, hidrojen, hidroksil, alkil veya halojen, burada söz konusu alkil, bir veya daha fazla Rb ile sübstitüe degildir veya sübstitüedir; R4, alkil, alkenil, alkinil veya halojen, burada söz konusu alkil, bir veya daha fazla RC ile sübstitüe degildir veya sübstitüedir; Ra, Rb ve Rclnin her biri, bagimsiz olarak halojen veya hidroksil; R5, hidroksil, OSOaH, 0803', OCOCH3, OPOaHz, OP032- veya hidrojendir; veya baglandiklari karbon atomu ile birlikte R5 ve R6, bir karbonil olusturur. 2. istem 1'e göre, asagidaki formüle sahip bir bilesik: HR4R ('11) HR“ (III), veya bunun herhangi birinin farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatidir. istem 1 veya 2'ye göre bilesik olup, özelligi R2 veya R3'ten birinin, hidroksil veya halojen olmasi ve kalan R2 veya R3'ün hidrojen veya sübstitüe olmayan alkil olmasidir. Istemler 1-3'ten herhangi birine göre bilesik olup, özelligi, R2 veya R3'ten birinin, hidroksil olmasi ve kalan R2 veya R3'ün hidrojen olmasidir. Istemler 1-4'ten herhangi birine göre bilesik olup, özelligi, R5 veya RG'dan birinin, hidroksil olmasi ve kalan R5 veya Rß'nin hidrojen olmasidir. Istemler 1-3'ten herhangi birine göre bilesik olup, özelligi R2`nin hidroksil veya halojen olmasidir. istem 1 veya Z'ye göre bilesik olup, özelligi R3'ün hidrojen veya sübstitüe olmayan alkil olmasidir. istem 7'ye göre bilesik olup, özelligi, R3'ün metil olmasidir. Istemler 1-7'den herhangi birine göre bilesik olup, özelligi R2'nin hidroksil olmasi ve R3'ün hidrojen olmasidir. Istemler 1-9'dan herhangi birine göre bilesik olup, özelligi R5'in hidroksil olmasidir. 11.Istemler 1-10'dan herhangi birine göre bilesik olup, özelligi Rainin hidrojen olmasidir. 12. Istemler 1-7 ve 9-11'den herhangi birine göre bilesik olup, özelligi. R2 ve R5`ten her birinin hidroksil olmasi ve R3 ve Rß'dan her birinin hidrojen olmasidir. 13. Istemler 1-12'den herhangi birine göre bilesik olup, özelligi R4'ün alkil olmasidir. 14. Istemler 1-13'ten herhangi birine göre bilesik olup, özelligi R4'ün sübstitüe olmayan alkil olmasidir. 15. Istemler 1-14'ten herhangi birine göre bilesik olup, özelligi R4'ün etil olmasidir. 16. Istem 1'e göre asagidaki formülün bir bilesigi: Cu /VCOzH veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatidir. 17. Istem 1'e göre asagidaki formülün bir bilesigi: veya farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugatidir. 18. Istemler 1-17'den herhangi birine göre bilesigi veya bunun farmasötik olarak kabul edilebilir bir tuzu, solvati veya amino asit konjugati ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir eksipiyani içeren farmasötik bir bilesimdir. 5 19.Bir öznede FXR aracili bir hastalik veya durumun tedavisinde veya önlenmesinde kullanima yönelik, istemler 1-17'den herhangi birine göre bir bilesiktir. 20. istem 19'a göre kullanima yönelik bilesik olup, özelligi FXR aracili söz konusu 10 hastalik veya durumun, kardiyovasküler hastalik, kronik karaciger hastaligi, Iipid bozukluk, gastrointestinal hastalik, renal hastalik. metabolik hastalik, kanser ve nörolojik hastalik arasindan seçilmesidir.