JP2016518429A

JP2016518429A - ファルネソイドｘ受容体調節物質としての、胆汁酸の１１−ヒドロキシル誘導体およびそのアミノ酸抱合体

Info

Publication number: JP2016518429A
Application number: JP2016513357A
Authority: JP
Inventors: ロベルトペッリッチャリ，
Original assignee: インターセプトファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド
Priority date: 2013-05-14
Filing date: 2014-05-14
Publication date: 2016-06-23
Anticipated expiration: 2034-05-14
Also published as: US20140371190A1; AU2014267324B2; HK1253326A1; EA030152B1; CY1122614T1; EP3848038B1; HK1221471A1; BR112015028399A2; DK3360881T3; US10532061B2; US9611289B2; SI3360881T1; CN105377870A; US20210228599A1; BR112015028399B1; US11000532B2; CR20150643A; JP2018127481A; EP3360882B1; IL242555B

Abstract

本発明は、式（Ｉ）の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体［式中、Ｒ１はヒドロキシ基であり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６は、本明細書に記載の通りである］を提供する。本発明は一般に、選択的ＦＸＲ作動薬ならびにそれらの製造方法および使用方法に関する。本発明はまた、有効量の、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、疾患および状態の治療方法または予防方法も提供する。一態様で、疾病または状態は、ＦＸＲ介在性である。【化１】

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０１３年５月１４日に出願された、米国特許出願第６１／８２３，１６９号明細書（その全内容を参照により本願明細書に援用する）に基づく優先権、およびその利益を主張するものである。

ＦＸＲは、ステロイド、レチノイド、および甲状腺ホルモンの受容体を含む、リガンド活性化転写因子の核内受容体ファミリーのメンバーである（Ｄ．Ｊ．Ｍａｎｇｅｌｓｄｏｒｆ，ｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ８３：８４１−８５０（１９９５））。ＦＸＲは、肝臓、腸、腎臓、および副腎で最も豊富に発現されることが、ノーザン解析およびその場解析から分かる（Ｂ．Ｍ．Ｆｏｒｍａｎ，ｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ８１：６８７−６９３（１９９５）およびＷ．Ｓｅｏｌ，ｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｎｏｌ．９：７２−８５（１９９５））。ＦＸＲは、９−シスレチノイン酸受容体（ＲＸＲ）とのヘテロダイマーとしてＤＮＡに結合する。ラットＦＸＲは、マイクロモル濃度のファルネソイド、たとえばファルネソールおよび幼若ホルモン等により活性化される（Ｂ．Ｍ．Ｆｏｒｍａｎ，ｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ８１：６８７−６９３（１９９５））。しかし、これらの化合物は、マウスＦＸＲおよびヒトＦＸＲを活性化することができず、内在性ＦＸＲリガンドの性質を疑わしいまま放置している。いくつかの天然胆汁酸（たとえば、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ）、デオキシコール酸（ＤＣＡ）、リトコール酸（ＬＣＡ）、ならびにそのタウリン抱合体およびグリシン抱合体）は、ＦＸＲリガンドの役割を果たし、生理的濃度でＦＸＲに結合してＦＸＲを活性化する（国際公開第００／３７０７７号パンフレット）。

Ｄ．Ｊ．Ｍａｎｇｅｌｓｄｏｒｆ，ｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ８３：８４１−８５０（１９９５）Ｂ．Ｍ．Ｆｏｒｍａｎ，ｅｔａｌ，Ｃｅｌｌ８１：６８７−６９３（１９９５）Ｗ．Ｓｅｏｌ，ｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｎｏｌ．９：７２−８５（１９９５）

胆汁酸は、肝臓で形成されて十二指腸内に分泌されるコレステロール代謝産物であり、十二指腸では食餌由来の脂質およびビタミン類の可溶化および吸収において重要な役割を担う。ほとんどの胆汁酸（〜９５％）はその後回腸で再吸収され、腸肝臓循環系経由で肝臓に戻る。肝臓におけるコレステロールの胆汁酸への変換は、フィードバック制御下にある：胆汁酸は、胆汁酸生合成における律速段階を触媒する酵素をコード化する、チトクロームＰ４５０７ａ（ＣＹＰ７ａ）の転写を下方制御する。ＦＸＲは、胆汁酸によるＣＹＰ７ａ発現の抑制に関与していることが示唆される（Ｄ．Ｗ．Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｃｅｌｌ９７：５３９−５４２（１９９９））。回腸で、胆汁酸は高い親和力で胆汁酸を結合し、それらの細胞取り込みおよび輸送に関与し得る腸内胆汁酸結合蛋白質（ＩＢＡＢＰ）の発現を誘発する。胆汁酸は、ヒト、ラット、およびマウスＩＢＡＢＰ遺伝子プロモーターに保存されているＩＲ−１タイプ応答配列に結合するＦＸＲの活性化を介して、ＩＢＡＢＰ発現に対する作用を調節することが立証されている。このように、ＦＸＲは、胆汁酸およびコレステロールのホメオスタシスに関与する標的遺伝子の、刺激（ＩＢＡＢＰ）と抑制（ＣＹＰ７ａ）の両方に関与している。したがって、薬剤開発に適したＦＸＲ調節物質が必要である。本発明はこの必要に対処する。

本発明は、化合物およびこれらの化合物を調製する方法を提供する。
具体的には、本発明は式Ｉ：

の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体［式中、Ｒ^１、Ｒ^２、Ｒ^３、Ｒ^４、Ｒ^５およびＲ^６は、本明細書に記載の通りである］を提供する。本発明の化合物は、疾患および状態の治療および予防に有用である。

本発明はまた、本発明の化合物、その薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体、および薬学的に許容できる担体または賦形剤を含む医薬組成物も提供する。

本発明はまた、有効量の、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、疾患および状態の治療方法または予防方法も提供する。一態様で、疾病または状態は、ＦＸＲ介在性である。

本発明はまた、疾病または状態（たとえば、ＦＸＲが介在する疾病または状態）を治療または予防するための薬剤の製造も提供し、ここで薬剤は、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を含む。

本発明はまた、疾病または状態（たとえば、ＦＸＲが介在する疾病または状態）を治療または予防する方法で使用するための組成物も提供し、ここで組成物は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を含む。

別段の定義がない限り、本明細書で使用される全ての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者に一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書では、文脈上、明らかに別段の指示がない限り、単数形は複数も含む。本明細書に記載のものと類似したまたは同等の方法および材料を、本発明の実行またはテストで使用することができるが、適当な方法および材料を以下に記述する。本明細書に記載の全ての出版物、特許出願、特許、および他の参考文献は、参照により本明細書に援用される。本明細書に引用されている参考文献は、請求項に係る発明の先行技術と認められない。抵触する場合、定義を含め、本明細書が規制するであろう。加えて、材料、方法、および実施例は例示に過ぎず、制限の意図はない。

本発明の他の特色および利点は、以下の詳細な説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。

ＨＥＫ２９３Ｔ細胞でのトランス活性化アッセイにおける本発明の化合物および比較化合物の活性を示すグラフである。生理的学的レベルでＴＧＲ５を発現するヒト腸内分泌細胞（Ａ）およびＴＧＲ５を過剰発現するヒトチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｂ）で、本発明の化合物のＴＧＲ５活性の欠如を示す一連のグラフである。ＯＳＴα（Ａ）、ΟＳＴβ（Ｂ）、ＢＳＥＰ（Ｃ）、ＭＲＰ２（Ｄ）、ＣＹＰ７Ａ１（Ｅ）、ＳＨＰ（Ｆ）、ＦＧＦ−１９（Ｇ）、およびＵＧＴ２Ｂ４（Ｈ）の発現の制御における、本発明の化合物および他の比較化合物の活性を示す一連のグラフである。脂質代謝（Ａ）、ＳＲＥＢＰ−１Ｃ（Ｂ）、ＡＰＯＣＩＩ（Ｃ）、およびＰＰＡＲγ（Ｄ）に関与するＰＬＴＰの制御における、本発明の化合物および他の比較化合物の活性を示す一連のグラフである。ＰＥＰＣＫ遺伝子に対する本発明の化合物および他の比較化合物の制御を示すグラフである。指示濃度の本発明の化合物で４時間処理した、ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＴＰの測定値を示すグラフである。皮内（ｉｄ）投与および静脈内（ｉｖ）投与の場合の化合物１００の胆汁分泌促進作用（Ａ）、ｉｄ投与およびｉｖ投与の場合の、化合物１００の継時的な分泌（Ｂ）、および化合物１００の継時的な血漿濃度（Ｃ）を示す一連のグラフである。皮内（ｉｄ）投与および静脈内（ｉｖ）投与の場合の化合物１００の胆汁分泌促進作用（Ａ）、ｉｄ投与およびｉｖ投与の場合の、化合物１００の継時的な分泌（Ｂ）、および化合物１００の継時的な血漿濃度（Ｃ）を示す一連のグラフである。皮内（ｉｄ）投与および静脈内（ｉｖ）投与の場合の化合物１００の胆汁分泌促進作用（Ａ）、ｉｄ投与およびｉｖ投与の場合の、化合物１００の継時的な分泌（Ｂ）、および化合物１００の継時的な血漿濃度（Ｃ）を示す一連のグラフである。

本発明の化合物
本発明は、式Ｉ：

の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体
［式中：
Ｒ^１はヒドロキシルであり；
Ｒ^２は、水素、ヒドロキシル、アルキル、またはハロゲンであって、前記アルキルは未置換であるかまたは１つまたは複数のＲ^ａで置換されており；
Ｒ^３は水素、ヒドロキシル、アルキル、またはハロゲンであって、前記アルキルは未置換であるかまたは１つまたは複数のＲ^ｂで置換されており；
Ｒ^４は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはハロゲンであって、前記アルキルは未置換であるかまたは１つまたは複数のＲ^ｃで置換されており；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、およびＲ^ｃはそれぞれ独立にハロゲンまたはヒドロキシルであり；
Ｒ^５はヒドロキシル、ＯＳＯ_３Ｈ、ＯＳＯ_３ ⁻、ＯＣＯＣＨ_３、ＯＰＯ_３Ｈ、ＯＰＯ_３ ^２−、または水素であり；また
Ｒ^６はヒドロキシル、ＯＳＯ_３Ｈ、ＯＳＯ_３ ⁻、ＯＣＯＣＨ_３、ＯＰＯ_３Ｈ、ＯＰＯ_３ ^２−、または水素である；
あるいはＲ^５およびＲ^６を、それらが結合している炭素原子とまとめると、カルボニルを形成する］
に関する。

一態様で、本発明は化合物式ＩＩ：

の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体に関する。

一態様で、本発明は、式ＩＩＩ：

の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体に関する。

一態様で、本発明は式ＩＶ：

の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体に関する。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物は、化合物（たとえば、天然の化合物、または非塩型、非溶媒和型、および非抱合体型の化合物）である。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物は薬学的に許容できる塩である。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物はアミノ酸抱合体である。一態様で、アミノ酸抱合体はグリシン抱合体である。一態様で、アミノ酸抱合体はタウリン抱合体である。

一態様で、本発明は式Ｉの化合物に関し、ここでＲ^２またはＲ^３の一方はヒドロキシルまたはハロゲンであり、残りのＲ^２またはＲ^３は水素または未置換のアルキルである。一態様で、Ｒ^２またはＲ^３の一方はヒドロキシルであり、残りのＲ^２またはＲ^３は水素である。

一態様で、本発明は式Ｉの化合物に関し、ここでＲ^５またはＲ^６の一方はヒドロキシルであり、残りのＲ^５またはＲ^６は水素である。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^２はヒドロキシルまたはハロゲンである。一態様で、Ｒ^２はヒドロキシルである。別の態様で、Ｒ^２はハロゲンである。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^３は水素または未置換のアルキルである。一態様で、Ｒ^３は水素である。別の態様で、Ｒ^３はメチルである。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^２はヒドロキシルであり、Ｒ^３は水素である。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^５はヒドロキシルである。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^６は水素である。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^２およびＲ^５はそれぞれヒドロキシルであり、Ｒ^３およびＲ^６はそれぞれ水素である。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^４はアルキルまたは水素である。一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここでＲ^４は未置換のアルキルである。一態様で、Ｒ^４はメチル、エチル、プロピル、またはブチルである。一態様で、Ｒ^４はメチルまたはエチルである。一態様で、Ｒ^４はメチルである。一態様で、Ｒ^４はエチルである。

一態様で、本発明は、化合物

またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体に関する。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物はＦＸＲ作動薬である。一態様で、本発明の化合物は極めて強力なＦＸＲ作動薬である。たとえば、本発明の化合物は、（たとえば、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイで測定するとき）１μΜ未満、０．８μΜ未満、０．６μΜ未満、０．４μΜ未満、または０．２μΜ未満の濃度でＦＸＲを活性化するのに対して、ＣＤＣＡでは１５μΜである。たとえば、本発明の化合物は、（たとえば、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイで測定するとき）０．２μΜ未満の濃度でＦＸＲを活性化する。たとえば、本発明の化合物は、（たとえば、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイで測定するとき）、１μΜ未満、０．８μΜ未満、０．６μΜ未満、０．４μΜ未満、または０．２μΜ未満のＥＣ_５０でＦＸＲを活性化するのに対して、ＣＤＣＡでは８．９μΜである。たとえば、本発明の化合物は、（たとえば、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイで測定するとき）０．２μΜ未満のＥＣ_５０でＦＸＲを活性化する。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物は、他の核内受容体に対して活性がない。一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物はＴＧＲ５を活性化しない（たとえば、ＨＴＲ−ＦＲＥＴＴＧＲ５アッセイで測定するとき、ＴＧＲ５は生理学的レベルで発現されるかまたは過剰発現される）。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物はアポトーシスを誘発する。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物は、（たとえば、ＬＤＨ放出アッセイまたは細胞内ＡＴＰアッセイで測定するとき）ヒトＨｅｐＧ２肝臓細胞に対して細胞傷害作用を示さない。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物は、ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ３Ａ４（緑色の基質）、ＣＹＰ３Ａ４（青色の基質）、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、およびＣＹＰ２Ｅ１から選択される１つまたは複数のＣＹＰ４５０イソ型を阻害しない。たとえば、本発明の化合物は、ＣＰＹ４５０阻害アッセイで測定するとき、１０μΜを超えるＩＣ_５０を有する。

一態様で、本発明は式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶの化合物に関し、ここで化合物はヒトＥＲＧカリウムチャネルを阻害しない。

一態様で、本発明は、本発明の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体の合成方法に関する。

一態様で、本発明は、１つまたは複数の本発明の化合物、その薬学的に許容できる塩、溶媒和物、またはアミノ酸抱合体を含有するキットに関する。一態様で、キットは薬学的に許容できる成分をさらに含む。

一態様で、本発明は、本発明の化合物および薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物に関する。

本発明によって解決すべき一技術的問題は、代謝性疾患および慢性肝疾患治療のための興味をそそる標的を代表する、核ホルモンファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）の作動薬である、新規な化合物の特定である。天然の胆汁酸は、いくつかの核ホルモン受容体を調節するばかりでなく、Ｇ蛋白質−結合受容体（ＧＰＣＲ）ＴＧＲ５の作動薬でもあることは周知である。選択性は、核ホルモン受容体を調節することを対象とする薬剤化合物にとって問題であり得る。このように、本発明の目的は、特異的ＦＸＲ作動薬である化合物、たとえば、他の核内受容体に対して活性を示さない化合物または胆汁酸ＧＰＣＲＴＧＲ５を活性化しない化合物を提供することである。薬剤化合物の開発における他の問題としては、不適当な薬物動態プロフィル、毒性（たとえば、肝臓）および望ましくない薬物−薬物相互作用等の安全問題などがある。したがって、本発明のさらなる目的は、前述の技術的問題に悩まされない化合物、すなわち、適当な薬物動態プロフィルを有する化合物、細胞に対して細胞傷害作用を発揮しない化合物、チトクロームＰ４５０酵素を阻害しない化合物、および／またはｈＥＲＧを阻害しない化合物を提供することである。

本明細書で言及される特許および科学文献は、当業者が入手できる知識を確立する。本明細書に引用されている交付済み特許、出願書類、および参考文献は、あたかもそれぞれが参照により組み込まれるかのように具体的にまた個々に指示されたのと同程度に、参照により本明細書に援用される。矛盾する場合には、本開示が優先するであろう。

本発明では、（明示的に別段の定めがない限り）以下の定義を使用する。

全体を通して使用される一般的化学用語は、それらの通常の意味を有する。たとえば、用語アルキルは、分岐または非分岐の飽和炭化水素基を指す。用語「ｎ−アルキル」は、非分岐のアルキル基を指す。用語「Ｃ_ｘ〜Ｃ_ｙアルキル」は、分岐または非分岐の炭化水素基の中にｘ〜ｙ個（両端値を含む）の炭素原子を有する、アルキル基を指す。一例として、しかし無制限に、用語「Ｃ_１〜Ｃ_８アルキル」は、１、２、３、４、５、６、７、または８個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の炭化水素部分を指す。「Ｃ_１〜Ｃ_６」は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有する、直鎖状または分枝状の炭化水素部分を有する。「Ｃ_１〜Ｃ_４アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔｅｒｔ−ブチル等の、１、２、３、または４個の炭素原子を有する直鎖状または分枝状の炭化水素部分を指す。用語「Ｃ_１〜Ｃ_４ｎ−アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、およびｎ−ブチル等の、１、２、３、または４個の炭素原子を有する直鎖状炭化水素部分を指す。用語「Ｃ_３〜Ｃ_６シクロアルキル」は、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルを指す。用語「Ｃ_３〜Ｃ_７シクロアルキル」は、シクロヘプチルも含む。用語「Ｃ_３〜Ｃ_８シクロアルキル」は、シクロオクチルも含む。シクロアルキルアルキルは、アルキルリンカー鎖により連結されたシクロアルキル部分、たとえば、しかし無制限に、シクロプロピルメチル、シクロプロピルエチル、シクロプロピルプロピル、シクロプロピルブチル、シクロブチルメチル、シクロブチルエチル、シクロブチルプロピル、シクロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、シクロペンチルプロピル、シクロヘキシルメチル、シクロヘキシルエチル、およびシクロヘキシルプロピル等を指す。各アルキル、シクロアルキル、およびシクロアルキルアルキル基は、任意選択的に、本明細書に明記されている通りに置換されていてもよい。

用語「Ｃ_４〜Ｃ_８シクロアルケニル」は、１つまたは複数の不飽和部位、たとえば、１つまたは複数の二重結合を有するシクロブテニル、シクロペンチル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニル、およびシクロオクテニル環を指す。

用語「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモ、またはヨードを指す。

用語「ヒドロキシル」は、ＯＨを意味する。

「置換」または「と置換された」は、このような置換は置換される原子と置換基との許容される原子価に準拠していること、また置換の結果、たとえば転位、環化、消失等による変形を自発的に受けない、安定な化合物になることという暗黙の条件を含むということが理解されよう。本明細書で使用されるとき、用語「置換された」は、特段の定めがない限り、有機化合物の許容される全置換基を含むと考えられる。一つの広範な態様で、許容される置換基は、有機化合物の、非環式および環式置換基、分枝状および非分岐置換基、炭素環式および複素環式置換基、芳香族および非芳香族置換基を含む。好適な有機化合物のために許容される置換基は、１つでも複数でもよく、同一でも異なってもよい。本発明では、窒素等のヘテロ原子は、水素置換基および／またはヘテロ原子の原子価を満たす本明細書に記載の有機化合物の任意の許容される置換基を有してもよい。本発明は、有機化合物の許容される置換基によるいかなる方法よっても制限されるものではない。

本明細書で形容詞として使用されるとき、用語「薬学の」または「薬学的に許容できる」は、レシピエントに実質的に非毒性であり無害であることを意味する。

「医薬製剤」はさらに、担体、溶媒、賦形剤および塩が、製剤の有効成分（たとえば、本発明の化合物）と相容性でなければならないことを意味する。用語「医薬製剤」および「医薬組成物」は一般に互換的であり、本出願ではそのように使用されることは、当業者に理解される。

本発明による好適な薬学的に許容できる塩は、当業者により容易に決定され、また、たとえば、アルミニウム、カルシウム、リチウム、マグネシウム、カリウム、ナトリウム、および亜鉛から作られるアルカリ塩またはアルカリ土類金属塩等の塩基性塩、あるいはΝ，Ν’−ジベンジルエチレンジアミン、クロルプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）、およびプロカインから作られる有機塩を含むであろう。リシン、アルギニン、トロメタミン、トリエチルアミン等々の薬学的に許容できるアミン類との塩類も使用することができる。本発明の化合物のそのような塩類は、従来技術を使用して、本発明の化合物から、たとえば、好適な塩基と本発明の化合物とを反応させることにより、調製することが可能である。

薬剤で使用されるとき、本発明の化合物の塩は、薬学的に許容できるべきであるが、薬学的に許容できない塩を便利に使用して、対応する遊離塩基または薬学的に許容できるその塩を調製することが可能である。

本明細書で使用されるとき、用語「アミノ酸抱合体」は、いかなる適当なアミノ酸との本発明の化合物の抱合体も指す。一態様で、本発明の化合物のこのような適当なアミノ酸抱合体は、胆汁または腸液中での完全性増強という更なる利点を有する。本発明は、本発明のあらゆる化合物のグリシン抱合体およびタウリン抱合体も含む。たとえば、式Ｉの化合物のグリシン抱合体およびタウリン抱合体は次式：

を有する。

一態様で、本発明の化合物のグリシン抱合体およびタウリン抱合体は、その薬学的に許容できる塩になり得る。本発明の化合物のアミノ酸抱合体は、当技術分野で公知の方法に従って調製することができる。たとえば、標準ペプチドカップリング条件を使用して、遊離酸をグリシンまたはタウリンアミノ酸に結合させることができる。

一態様で、化合物１００のタウリン抱合体のナトリウム塩は、以下の通りに調製することができる。

化合物１００を、極性プロトン性溶媒（たとえば、ＥｔＯＨ）中、塩基（たとえば、Ｅｔ_３Ｎ）およびタウリンで処理する。結果として得られる混合物は、カップリング試薬（たとえば、ＤＭＴ−ＭＭ（４−（４，６−ジメトキシ−ｌ，３，５−トリアジン−２−イル）−４−メチルモルホリニウムクロリド））で処理することができる。反応混合物を濃縮し、塩基（たとえば、ＮａＯＨの３％ｗ／ｖ水性溶液）に溶解することができる。結果として得られる反応混合物を、有機溶剤（たとえば、ＡｃＯＥｔ）で抽出することができる。水相を濃縮し、シリカパッドで濾過し、最初に、たとえば、Ｈ_２Ｏで（中性ｐＨまで）、次いで、たとえば、Ｈ２Ｏ／ＭｅＯＨ８０：２０ｖ／ｖで溶離して、化合物１００のタウリン抱合体を生じる。適当なアミノ酸としては、グリシンおよびタウリンなどがあるが、その限りではない。

本発明の化合物のいくつかは、非溶媒和形で存在することもあり、溶媒和形で、たとえば、水和物等で存在することもある。

本発明は、本明細書に記載されている本発明の化合物の合成方法を提供する。本発明はまた、実施例に示す下記のスキームに従って、開示された様々な本発明の化合物を合成するための詳細な方法も提供する。

本発明の合成プロセスは、多種多様な官能基に寛容であり、したがって様々な置換された出発材料を使用できる。プロセスは一般に、全過程の終わりまたは終わり間近に所望の最終化合物を提供するが、場合によっては、化合物をその薬学的に許容できる塩、エステルまたはプロドラッグにさらに変換することが望ましいこともある。

本発明の化合物は、市販の出発材料、文献で公知の化合物、または容易に調製される中間体を使用し、標準合成方法および当業者に公知の手順、または本明細書の教示に照らして熟練した職人に明白になるであろう手順を使用することによって、種々の方法で調製することができる。標準合成方法ならびに有機分子調製および官能基変換の手順および操作は、適切な科学文献または当該分野の標準テキストから得ることができる。いずれか１つまたはいくつかの情報源に限定されるものではないが、たとえばＳｍｉｔｈ，Ｍ．Ｂ．，Ｍａｒｃｈ，Ｊ．，Ｍａｒｃｈ’ｓＡｄｖａｎｃｅｄＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｒｅａｃｔｉｏｎｓ，Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，ａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ，５ｔｈｅｄｉｔｉｏｎ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ，２００１；およびＧｒｅｅｎｅ，Ｔ．Ｗ．，Ｗｕｔｓ，Ｐ．Ｇ．Ｍ．，ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄｅｄｉｔｉｏｎ，ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ：ＮｅｗＹｏｒｋ，１９９９等（参照により本明細書に援用する）の古典的テキストは有用であり、当業者に公知の、定評ある有機合成の参考教科書である。以下の合成方法の説明は本発明の化合物の調製の基本手順を例示することを目的とするものであり、制限するものではない。

本出願で使用される省略形は全て、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃによる“ＰｒｏｔｅｃｔｉｖｅＧｒｏｕｐｓｉｎＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ”またはＭＥＲＣＫ＆Ｃｏ．，ＩｎｃによるＭＥＲＣＫＩＮＤＥＸあるいは他の化学の本またはＡｌｄｒｉｃｈ等の化学薬品供給業者による化学薬品カタログに見られるか、または当技術分野で公知の使用に従う。

試薬および条件：ａ）１）ＭｅＯＨ、ｐ−ＴＳＡ、超音波、３時間、定量的；２）Ａｃ_２Ｏ、ＮａＨＣＯ_３、ＴＨＦ、還流１２時間、８５％；ｂ）ＰＣＣ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、６時間、６２％；ｃ）Ａｃ_２Ｏ、Ｂｉ（ＯＴｆ）_３、ＣＨ_２Ｃｌ_２、１時間、９１％；ｄ）Ｂｒ_２、ベンゼン、３０℃ 終夜、７４％；ｅ）ＮａＢＨ_４、ＮａＯＡｃ、Ｐｙｒ、室温２日、８０％；ｆ）ＨＩ５７％、ＡｃＯＨ、室温３０分；ｇ）ＣｒＯ_３、ＡｃＯＨ、室温４５分；ｈ）Ｚｎ細粉、ＮａＯＡｃ、還流２０分；ｉ）ＮａＯＨ２Ｍ、ＭｅＯＨ、室温終夜、化合物５から６５％；ｌ）ＮａＢＨ_４、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ４：１、７０％；ｍ）Ｎａ（ｓ）、ｓｅｃ−ＢｕＯＨ、５０℃、７０％。

合成は、当技術分野で公知の方法を使用して調製された、６α−エチル−コール酸（６−ＥＣＡ、１）の、出発材料としての使用に基づく。６−ＥＣＡ（１）を、超音波照射下、ＭｅＯＨ中ｐ−ＴＳＡで処理して対応するメチルエステルを生じ、ＴＨＦ中ＮａＨＣＯ_３の存在下でＡｃ_２Ｏと共に還流させることによって、これをＣ３位で選択的に保護し、化合物２が得られた。室温で、化合物２をＣＨ_２Ｃ１_２中ＰＣＣで処理し、続いて室温でＡｃ_２Ｏ、ＣＨ_２Ｃ１_２中Ｂｉ（ＯＴｆ）_３で処理することにより、中間体メチル３α，７α−ジアセトキシ−１２−オキソ−５β−コラン−２４−オアート（化合物３；化合物２から約４８％）が得られた。

化合物３を、ベンゼン中Ｂｒ_２で、たとえば１２時間処理することにより化合物４を生成した。用時蒸留したピリジン中、化合物４とＮａＢＨ_４およびＮａＯＡｃとの反応により、対応する１１β−１２βエポキシド（化合物５）を、シリカゲル剤精製後、約５９％の収率で生じた。室温で、化合物５とＡｃＯＨ中ＨＩと反応することにより、ハロヒドリン中間体が得られ、次いでこれを、ＡｃＯＨ中ＣｒＯ_３を用いてＣ１１位で酸化して、化合物６を生成した。沸騰ＡｃＯＨ中での化合物６とＺｎ細粉との反応およびアルカリ加水分解（ＮａＯＨ／ＭｅＯＨ）により、３α、７α−ヒドロキシ−１２−ケト−５１３−コラン−２４−酸（化合物７；化合物５から収率約６５％）が得られた。

ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ＝（４：１、ｖ／ｖ）の混合物中ＮａＢＨ_４を使用して、化合物７を、Ｃ１１−カルボニルで立体選択的に還元し、３α，７α，１１β−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸（化合物１００；化合物３から約２７％）を生じ、クロマトグラフィ精製後、化合物１００が得られた。あるいは、５０℃で、化合物７をｓｅｃ−ＢｕＯＨ中ナトリウムで還元し、精製後、化合物１０１を生じた（約７０％収率）。

「溶媒和物」は、化学量論量または非化学量論量のいずれかの溶媒を含む、溶媒付加形を意味する。いくつかの化合物は、一定のモル比の溶媒分子を結晶質固体に捕捉する傾向があり、こうして溶媒和物を形成する。溶媒が水であれば、形成される溶媒和物は水和物である；溶媒がアルコールであるとき、形成される溶媒和物はアルコラートである。水和物は、１分子または複数分子の水と、水がその分子状態をＨ_２Ｏとして保持する物質の１つとの組み合わせによって形成され、このような組み合わせは、１つまたは複数の水和物を形成することができる。

用語「適当な溶媒」は、所望の反応を達成する媒質を提供するために反応物を十分に可溶化する、進行中の反応に対して不活性な、任意の溶媒、または溶媒の混合物を指す。

本明細書に記載の化合物は、不斉中心を有することができる。非対称的に置換された原子を含有する本発明の化合物は、光学活性体またはラセミ体で単離することができる。光学活性体の調製方法は、たとえば、ラセミ体の分割によるかまたは光学活性な出発材料からの合成によるなど、当技術分野で周知である。オレフィンの多くの幾何学異性体、Ｃ＝Ｎ二重結合、等々も、本明細書に記載の化合物に存在することができ、またそのような安定な異性体全部が本発明で熟考される。本発明の化合物のシス幾何学異性体およびトランス幾何学異性体が記述されており、異性体の混合物として、または別々の異性体として、単離することができる。特定の立体化学または異性体が特に指示されない限り、構造の全てのキラル異性体、ジアステレオマー異性体、ラセミ異性体、および幾何学異性体を意図する。本発明の化合物を調製するために使用される全てのプロセスおよびその中で作られる中間体は、本発明の一部であると考えられる。表示または記載されている化合物の全ての互変異性体もまた、本発明の一部であると考えられる。さらに、本発明は、本明細書に記載の化合物の代謝産物も含む。

１つまたは複数の原子が自然界で最もよくみられる原子質量または質量数とは異なる原子質量または質量数を有する原子に置き換えられていることを除けば、本発明の式で列挙されたものと同一である同位元素で標識された化合物も、本発明は包含する。本発明の化合物に組み入れることができる同位元素の例としては、水素、炭素、窒素、フッ素の同位元素、たとえば^３Ｈ、^１１Ｃ、^１４Ｃ、^２Ｈ、および^１８Ｆ等がある。

前述の同位元素および／または他原子の他の同位元素を含む本発明の化合物およびその薬学的に許容できる塩、溶媒和物またはアミノ酸抱合体は、本発明の範囲内である。同位元素で標識された本発明の化合物、たとえば^３Ｈおよび^１４Ｃ等の放射性同位元素が中に組み込まれたものは、薬剤および／または基質組織分布アッセイで有用である。トリチウム化した、すなわち^３Ｈ、および炭素−１４、すなわち^１４Ｃ、同位元素は、それらを調製しやすくまた容易に検出できるため特に好ましい。^１１Ｃおよび^１８Ｆ同位元素は、ＰＥＴ（陽電子放射型断層撮影法）で特に有用である。ＰＥＴは脳撮像で有用である。さらに、重水素、すなわち、^２Ｈ等の、より重い同位元素で置換することにより、より大きい代謝安定性，たとえばインビボ半減期の増加または必要用量の減少に起因するある種の治療利点を提供することができ、したがって場合によっては好ましいかもしれない。本発明の同位元素で標識された化合物は一般に、たとえば、スキームおよび／または以下の実施例に開示されている手順を実行することにより、非同位元素標識試薬を容易に利用できる同位元素標識された試薬に代えることにより、当技術分野で公知のテクニックによって調製することができる。一実施態様で、本発明の化合物、その塩、水和物、溶媒和物、またはアミノ酸抱合体は同位元素標識されていない。

ある化合物で何らかの変数（たとえば、Ｒ^ｘ）が、何かの構成成分または式に複数回出現するとき、各出現時におけるその定義は、他の全ての出現時における定義と無関係である。したがって、たとえば、ある基が、１つまたは複数のＲ^ｘ部分で置換されることが表示されているのであれば、そのときは各出現時におけるＲ^ｘは、Ｒ^ｘの定義から独立して選択される。また、置換基および／または変数の組み合わせが許容されるが、このような組み合わせは、指定された原子の通常の原子価内で安定した化合物が結果的に生じる場合に限られる。

本明細書で使用されるとき、用語「治療する」、「治療すること」、または「治療」は、状態を現在有する対象者における相当程度の、症状、マーカー、および／または状態の何か負の影響を減少することを意味する。いくつかの実施態様で、疾病または状態を呈するリスクを低減させるために、状態の初期徴候のみを示す対象者に治療を施行することが可能である。

本明細書で使用されるとき、用語「予防する」、「予防」、または「予防すること」は、疾患、障害、および／または状態の１つまたは複数の症状もしくは特徴の開始を、部分的にまたは完全に予防するかまたは遅らせる任意の方法を指す。疾病または状態の徴候を示さない対象者に、予防を施行することが可能である。

本明細書で使用されるとき、「対象者」はヒトまたは動物（動物の場合、より一般的には哺乳動物）を指す。一態様で、対象者はヒトである。このような対象者は、ＦＸＲ作動薬による治療を必要としていると考えることができる。

本明細書で使用されるとき、「不飽和」は、少なくともある程度の不飽和（たとえば、少なくとも１つの二重結合または三重結合）を有する化合物または構造を指す。

本明細書で使用されるとき、用語「本発明の化合物」は、式Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、またはＩＶのいずれかの化合物、あるいは本明細書に明確に開示されているいずれかの化合物を含む。

本明細書で使用されるとき、ファルネソイドＸ受容体すなわちＦＸＲは、たとえば、選択的スプライスイソ型および天然のイソ型を含む、そのような受容体の全哺乳動物形を指す（たとえば、Ｈｕｂｅｒｅｔａｌ．，Ｇｅｎｅ２９０：３５−４３（２００２）を参照）。代表的なＦＸＲ種は、無制限に、ラットＦＸＲ（ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿０２１７４５号）、マウスＦＸＲ（Ｇｅｎｂａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿００９１０８号）、およびヒトＦＸＲ（ＧｅｎＢａｎｋ寄託番号第ＮＭ＿００５１２３号）を含む。

本明細書で使用されるとき、化合物Ａは、

であり、これはオベチコール酸、ＩＮＴ−７４７、６ＥＣＤＣＡ、６−α−エチルケノデオキシコール酸、または６α−エチル−３α、７α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸としても知られる。

本明細書で使用されるとき、化合物Ｂは、

であり、これはＩＮＴ−７６７または６α−エチル−３α、７α、２３−トリヒドロキシ−２４−ノル−５β−コラン−２３−硫酸ナトリウム塩としても知られる。

本明細書で使用されるとき、化合物Ｃは、

であり、これはＩＮＴ−７７７または６α−エチル−２３（Ｓ）−メチル−３α，７α、１２αトリヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸としても知られる。

本明細書で使用されるとき、化合物Ｄは、

であり、これは６α−エチル−２３（Ｒ）−メチルケノデオキシコール酸、およびＳ−ＥＭＣＤＣＡとしても知られる。

本明細書で使用されるとき、化合物Ｅは、

である。

本明細書で使用されるとき、コール酸は、

であり、これはＣＡとしても知られる。

本明細書で使用されるとき、ケノデオキシコール酸は、

であり、これはＣＤＣＡとしても知られる。

本明細書で使用されるとき、ウルソデオキシコール酸は、

であり、これはＵＤＣＡとしても知られる。

本明細書で使用されるとき、タウロケノデオキシコール酸は、

であり、これはＴＣＤＣＡとしても知られる。

本明細書で使用されるとき、タウロウルソデオキシコール酸は、

であり、これはＴＵＤＣＡとしても知られる。

本明細書で使用されるとき、リトコール酸は、

であり、これはＬＣＡとしても知られる。

発明の方法
本発明の化合物は、ヒトを含む、哺乳動物等の対象者における治療で有用である。特に、本発明の化合物は、有効量の本発明の化合物、その薬学的に許容できる塩、溶媒和物、またはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の疾病または状態を治療または予防する方法で有用である。一態様で、疾病または状態は、ＦＸＲ−介在性である（たとえば、疾病または状態の開始もしくは進行において、ＦＸＲがある役割を果たす）。一態様で、疾病または状態に、ＦＸＲ活性低下が介在する。一態様で、疾病または状態は、心血管疾患、慢性肝疾患、脂質障害、胃腸病、腎疾患、代謝性疾患、癌および神経疾患から選択される。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の心血管疾患を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、心血管疾患を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、心血管疾患を予防する方法に関する。一態様で、心血管疾患は、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、脂質異常症、高コレステロール血症、高脂血症、高リポ蛋白血症および高トリグリセリド血症から選択される。

用語「高脂血症」は、異常に高値の脂質が血中に存在することを指す。高脂血症は、少なくとも３つの形態で出現し得る：（１）高コレステロール血症、すなわち、高コレステロール値；（２）高トリグリセリド血症、すなわち、高トリグリセリド値；および（３）複合高脂血症、すなわち、高コレステロール血症と高トリグリセリド血症の合併症。

用語「脂質異常症」は、低値および／または高値のリポ蛋白質（たとえば、高値のＬＤＬ、ＶＬＤＬおよび低値のＨＤＬ）の両方を含む、血漿中のリポ蛋白質異常値を指す。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者のコレステロール値を低下させることまたはコレステロール代謝、異化、食餌性コレステロールの吸収、およびコレステロール逆輸送を調節することから選択される方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者のコレステロール値、トリグリセリド値、または胆汁酸値に影響を与える疾病を治療または予防す方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者のトリグリセリドを低下させる方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の高コレステロール値と関連した疾病状態を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、対象者の高コレステロール値と関連した疾病状態を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、対象者における高コレステロール値と関連した疾病状態を予防する方法に関する。一態様で、疾病状態は、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、および黄色腫から選択される。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の脂質障害を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、脂質障害を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、脂質障害を予防する方法に関する。

脂質障害は、コレステロールおよびトリグリセリドの異常を表す用語である。脂質異常は、血管疾患、特に心臓発作および脳卒中のリスク上昇と関連がある。脂質障害における異常は、遺伝学的素因ならびに食事摂取の性質の組み合わせである。多くの脂質障害は、過体重であることと関連している。脂質障害は、糖尿病、メタボリックシンドローム（時にはインスリン抵抗症候群と呼ばれる）、甲状腺機能低下またはある種の投薬の結果（たとえば、移植を受けた人々における拒絶反応抑制治療方式のために使用されたもの等）を含む、他の疾病と関連している可能性もある。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の、脂質代謝に影響を与える疾病（すなわち、リポジストロフィ）の１つまたは複数の症状を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、脂質代謝に影響を与える疾病の１つまたは複数の症状を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、脂質代謝に影響を与える疾病の１つまたは複数の症状を予防する方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の脂質蓄積を減少させる方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の慢性肝疾患を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、慢性肝疾患を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、慢性肝疾患を予防する方法に関する。一態様で、慢性肝疾患は、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、脳腱黄色腫症（ＣＴＸ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、薬物性胆汁鬱滞、妊娠の肝内胆汁鬱滞、非経口栄養関連の胆汁鬱滞（ＰＮＡＣ）、細菌過剰増殖または敗血症関連の胆汁鬱滞、自己免疫肝炎、慢性ウイルス性肝炎、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝臓移植関連の移植片対宿主病、生体ドナー移植肝再生、先天性肝線維症、総胆管結石症、肉芽腫性肝疾患、肝内または肝外悪性腫瘍、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、ウィルソン病、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス、およびα１−抗トリプシン欠乏症から選択される。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の胆汁鬱滞の合併症を含む、胆汁鬱滞の１つまたは複数の症状を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、胆汁鬱滞の１つまたは複数の症状を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、胆汁鬱滞の１つまたは複数の症状を予防することに関する。

胆汁鬱滞は一般に、肝臓内（肝内）または肝臓外（肝外）の要因に起因し、正常に排出される代わりに、胆汁塩、胆汁色素ビリルビン、および脂質が血流中に蓄積されるという結果をもたらす。肝内胆汁鬱滞は、体が胆汁を排出する能力を損なう小管の広範な閉塞または障害、たとえば肝炎等を特徴とする。肝内胆汁鬱滞は、アルコール性肝疾患、原発性胆汁性肝硬変、身体の他の部分から広がった（転移した）癌、原発性硬化性胆管炎、胆石、胆石疝痛および急性胆嚢炎に起因することもある。肝内胆汁鬱滞は、外科手術、重傷、嚢胞性線維症、感染症または静脈内栄養補給の合併症として起こることもあり、薬剤誘発性のこともある。胆汁鬱滞は、妊娠の合併症として起こることもあり、多くの場合、第二期および第三期に発症する。

肝外胆汁鬱滞は、総胆管結石症（胆管結石（ＢｉｌｅＤｕｃｔＳｔｏｎｅｓ））、良性胆道狭窄（総胆管の非癌性狭窄）、胆管癌（腺管癌）および膵臓癌に起因することが最も多い。肝外胆汁鬱滞は、多くの投薬の副作用として起こることもある。

本発明の化合物は、胆道閉鎖症、産科胆汁鬱滞、新生児胆汁鬱滞、薬物性胆汁鬱滞、Ｃ型肝炎感染症から生じる胆汁鬱滞、慢性胆汁鬱滞性肝疾患、たとえば原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、および原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）を、無制限に含む、肝内胆汁鬱滞または肝外胆汁鬱滞の１つまたは複数の症状を治療または予防するために使用することが可能である。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の肝再生を増進する方法に関する。一態様で、本方法は、肝臓移植のための肝再生を増進することである。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の線維症を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、線維症を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、線維症を予防する方法に関する。

したがって、本明細書で使用されるとき、線維症という用語は、病的状態または疾病による線維症、身体外傷による線維症（「外傷性線維症」）、放射線障害による線維症、および化学療法剤への曝露による線維症を含む、広く認められている全ての線維性障害を指す。本明細書で使用されるとき、用語「臓器線維症」は、肝線維症、腎臓の線維症、肺の線維症、および腸の線維症を含むが、その限りではない。「外傷性線維症」は、外科手術（術後瘢痕化）、偶発性身体外傷、熱傷、および肥厚性瘢痕化に続発する線維症を含むが、その限りではない。

本明細書で使用されるとき、「肝線維症」は、Ｂ型肝炎ウイルスまたはＣ型肝炎ウイルスによるもの等の、ウイルス誘発性肝線維症；アルコール（アルコール性肝疾患）、メトトレキサートを含むがその限りではないある種の医薬品、いくつかの化学療法剤、およびヒ素剤または大量投与におけるビタミンＡの慢性的経口摂取、酸化的ストレス、癌放射線療法、または四塩化炭素およびジメチルニトロソアミンを含むがその限りではないある種の工業化学薬品への曝露；ならびに原発性胆汁性肝硬変、原発性硬化性胆管炎、脂肪肝、肥満、非アルコール性脂肪性肝炎、嚢胞性線維症、ヘモクロマトーシス、自己免疫肝炎、および脂肪性肝炎等の疾病を含むがその限りではない、あらゆる原因による肝線維症を含む。肝線維症の現行治療は主として、病因の除去、たとえば、余分な鉄の除去（たとえば、ヘモクロマトーシスの場合）、ウイルス量の減少（たとえば、慢性ウイルス性肝炎の場合）、あるいは毒素への曝露の排除または減少（たとえば、アルコール性肝疾患の場合）に向けられる。コルチコステロイドやコルヒチン等の消炎剤は、肝線維症に至ることがある炎症の治療に使用されることも知られている。

当技術分野で公知の通り、肝線維症は、通常は生検標本の組織学的検査に基づいて５段階の重症度（Ｓ０、Ｓ１、Ｓ２、Ｓ３、およびＳ４）に臨床的に分類され得る。Ｓ０は、線維症を示さないが、Ｓ４は硬変を示す。肝線維症の重症度を病期分類するための様々な基準が存在するが、一般に線維症の初期段階は、肝臓の一門脈（帯域）における、不連続な限局した領域の瘢痕化によって特定されるが、線維症の後期は、架橋線維症（肝臓の帯域を越える瘢痕化）によって特定される。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の臓器線維症を治療または予防する方法に関する。一態様で、線維症は肝線維症である。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の胃腸病を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、胃腸病を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、胃腸病を予防する方法に関する。一態様で、胃腸病は、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、細菌過剰増殖、吸収不良、放射線照射後大腸炎、および、顕微鏡的大腸炎から選択される。一態様で、炎症性腸疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎から選択される。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の腎疾患を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、腎疾患を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、腎疾患を予防する方法に関する。一態様で、腎疾患は、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、高血圧性腎硬化症、慢性糸球体腎炎、慢性移植糸球体腎症、慢性間質性腎炎、および多発性嚢胞腎から選択される。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の代謝性疾患を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は腎疾患を治療する方法に関する。一態様で、本発明は腎疾患を予防する方法に関する。一態様で、代謝性疾患は、インスリン抵抗性、高血糖症、真性糖尿病、糖尿肥満、および肥満から選択される。一態様で、真性糖尿病はＩ型糖尿病である。一態様で、真性糖尿病はＩＩ型糖尿病である。

真性糖尿病は、通例糖尿病と言われ、結果的に体内の適切な血糖値を維持できなくなる、一般に、グルコースの産生および利用における代謝障害を特徴とする、疾病または状態を指す。

ＩＩ型糖尿病の場合、疾病はインスリン抵抗性を特徴とし、広範囲の濃度にわたってインスリンがその生物学的作用を発揮する力を失う。インスリン反応性に対するこの抵抗性は、筋肉におけるグルコース取り込み、酸化および貯蔵のインスリン活性化不足、ならびに脂肪組織における脂質分解と肝臓におけるグルコース産生および分泌のインスリン抑制不足を招くことになる。結果として生じる状態は、血糖値上昇であり、これは「高血糖症」と呼ばれる。制御されない高血糖症は、網膜症（目の血管損傷による視力低下または視力喪失）；ニューロパシー（神経系に対する血管損傷による神経損傷と足の障害）；および腎症（腎臓の血管損傷による腎疾患）、高血圧、脳血管疾患および環動脈性心疾患を含む、微小血管疾患および大血管疾患のリスク増大による若年死増加を伴う。したがって、グルコース・ホメオスタシスのコントロールは、糖尿病の治療に非常に重要な手法である。

高血圧、耐糖能異常、高インスリン血症、トリグリセリド値上昇およびＨＤＬコレステロール低下、および腹部肥満および全般的肥満の集団は、インスリン抵抗性によって一体化されると仮定されてきた。インスリン抵抗性と、耐糖能異常、血漿トリグリセリド上昇および高比重リポ蛋白質コレステロール濃度低下、高血圧、高尿酸血症、より小さくより高密度の低比重リポ蛋白質粒子、およびより高いプラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１の血中濃度との結びつきは、「Ｘ症候群」と呼ばれてきた。したがって、「Ｘ症候群」を構成する一群の疾病状態、状態または障害を含むインスリン抵抗性に関連した障害を治療または予防する方法が提供される。一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者のメタボリックシンドロームを治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、メタボリックシンドロームを治療する方法に関する。一態様で、本発明は、メタボリックシンドロームを予防する方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の癌を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、癌を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、癌を予防する方法に関する。一態様で、癌は大腸癌である。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の胆石を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、胆石を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、胆石を予防する方法に関する。

胆石は、胆汁成分の沈着によって、胆嚢内で形成される結晶質凝結物である。これらの結石は胆嚢で形成されるが、胆道系の他の部分、たとえば胆嚢管、総胆管、膵管、またはファーター膨大部等に、遠位移行することもある。稀に、重度の炎症の場合、胆石は、胆嚢を通って、胆石性イレウスと呼ばれる閉塞を引き起こす可能性がある粘着性の腸内に浸食することがある。胆石が胆嚢に存在することは、胆嚢における胆汁の滞留および多くの場合、腸内細菌（主として大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）およびバクテロイデス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ）種）による続発性感染症を特徴とする炎症状態である、急性胆嚢炎につながり得る。胆石が胆道系の他の部分に存在することによって、胆管の閉塞を起すことがあり、これは上行性胆管炎や膵炎等の重篤な状態につながり得る。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者のコレステロール胆石症を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、コレステロール胆石症を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、コレステロール胆石症を予防する方法に関する。

一態様で、本発明は、有効量の本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の神経疾患を治療または予防する方法に関する。一態様で、本発明は、神経疾患を治療する方法に関する。一態様で、本発明は、神経疾患を予防する方法に関する。一態様で、神経疾患は脳卒中である。

一態様で、本発明は、本明細書に記載の方法に関し、さらに、本化合物は、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、舌下、気管内、吸入、眼内、経膣、直腸、および脳室内から選択される経路で投与される。一態様で、経路は経口である。

一態様で、本明細書に記載の方法の１つまたは複数で利用される化合物はＦＸＲ作動薬である。一態様で、化合物は、選択的ＦＸＲ作動薬である。一態様で、化合物は、ＴＧＲ５を活性化しない。一態様で、化合物は（たとえば，ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイで測定するとき）、代謝経路に関与する他の核内受容体を活性化しない。一態様で、代謝経路に関与するこのような他の核内受容体は、ＬＸＲβ、ＰＸＲ、ＣＡＲ、ＰＰＡＲα、ＰＰＡＲδ、ＲＡＲα、ＶＤＲ、ＴＲ、ＰＲ、ＲＸＲ、ＧＲ、およびＥＲから選択される。一態様で、化合物はアポトーシスを誘発する。

一態様で、本発明は、胆汁酸ホメオスタシスに関与する１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを制御する方法に関する。

一態様で、本発明は、本発明の化合物を細胞に投与することにより、ＣＹＰ７α−１およびＳＲＥＢＰ−１Ｃから選択される１つまたは複数の遺伝子の、細胞における発現レベルを下方制御する方法に関する。一態様で、本発明は、本発明の化合物を細胞に投与することにより、ＯＳＴα、ＯＳＴβ、ＢＳＥＰ、ＳＨＰ、ＵＧＴ２Ｂ４、ＭＲＰ２、ＦＧＦ−１９、ＰＰＡＲγ、ＰＬＴＰ、ＡＰＯＣＩＩ、およびＰＥＰＣＫから選択される１つまたは複数の遺伝子の、細胞における発現レベルを上方制御する方法に関する。

本発明はまた、疾病または状態（たとえば、ＦＸＲが介在する疾病または状態）を、治療または予防するための薬剤の製造にも関し、ここで薬剤は、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を含む。一態様で、本発明は、本明細で上述された疾病または状態のいずれか１つを治療または予防するための薬剤の製造に関し、ここで薬剤は、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を含む。

本発明はまた、疾病または状態（たとえば、ＦＸＲが介在する疾病または状態）を治療または予防するための方法で使用するための組成物にも関し、ここで、組成物は、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を含む。一態様で、本発明は、本明細書で上述された疾病または状態のいずれか１つを治療または予防するための方法で使用するための組成物に関し、ここで、組成物は、本発明の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を含む。

製剤
本発明の方法は、有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む。本明細書で使用されるとき、用語「有効量」は、規定の効果を達成するのに十分な本発明の化合物の量を指す。したがって、ＦＸＲ介在性の疾病または状態を予防または治療するための方法で使用される本発明の化合物の有効量は、ＦＸＲ介在性の疾病または状態を予防または治療するのに十分な量になる。

同様に、胆汁鬱滞性肝疾患または胆汁流量増加を予防または治療するための方法で使用するための本発明の化合物の有効量は、腸への胆汁流量を増加するのに十分な量になる。

所望の生物学的効果を達成するために必要な本発明の化合物の量は、所期の用途、投与方法、およびレシピエント等の多数の要因に左右され、最終的に訪問医または獣医の判断に従うことになる。概して、ＦＸＲ介在性の疾病および状態を治療するための一般的な日用量は、たとえば、約０．０１ｍｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇの範囲にあると予測され得る。この用量は、単回単位用量として、または数回に分けられた単位用量として、または連続注入として、投与し得る。同様の投薬量を、他の疾病の治療、状態および胆汁鬱滞性肝疾患の予防および治療を含む療法に適用できるであろう。

このように、さらなる態様で、本発明は、有効成分として、少なくとも１つの医薬担体または希釈剤と一緒に、および／または少なくとも１つの医薬担体または希釈剤との混合物で、本発明の化合物を含む、医薬組成物を提供する。これらの医薬組成物は、前述の疾病または状態の予防または治療で使用することが可能である。

担体は、薬学的に許容できなければならず、また組成物中の他成分と相容性でなければならない、すなわち、組成物中の他成分に対して悪影響があってはならない。担体は、固体でも液体でもよく、好ましくは、単位用量製剤、たとえば、０．０５〜９５重量％の有効成分を含有し得る錠剤として製剤される。必要であれば、他の生理学的有効成分を本発明の医薬組成物に組み入れてもよい。

可能な製剤としては、経口投与、舌下投与，バッカル投与，非経口（たとえば皮下、筋肉内、または静脈内）投与、直腸投与、経皮、鼻腔内を含む局所投与および吸入投与に適した製剤などがある。ある特定の患者に最適の投与方法は、治療しようとしている疾病または状態の性質および重症度、または使用しようとしている療法の性質および活性化合物の性質によって異なるが、可能であれば、ＦＸＲ介在性の疾病および状態の予防および治療には経口投与が好ましい。経口投与に適した製剤は、それぞれ所定量の活性化合物を含有する、錠剤、カプセル剤、カシェー剤、薬用ドロップ剤等の不連続単位として；散剤または顆粒剤として；水液または非水液の溶液または懸濁液として；あるいは水中油エマルジョンまたは油中水エマルジョンとして、提供することが可能である。

舌下またはバッカル投与に適した製剤としては、有効化合物および、一般に糖およびアカシアまたはトラガント等の香味をつけた基剤を含む薬用ドロップ、および、たとえば、ゼラチンおよびグリセリンまたはスクロースアカシア等の不活性ベース中に有効化合物を含むトローチなどがある。

非経口投与に適した製剤は一般に、所定の濃度の活性化合物を含有する滅菌水溶液を含む；溶液は、好ましくは所期のレシピエントの血液と等張である。

非経口投与に適したさらなる製剤としては、生理学的に好適な助溶剤および／または錯化剤、たとえば界面活性剤およびシクロデキストリンを含有する製剤などがある。水中油エマルジョンも非経口製剤に適した製剤である。このような溶液は、好ましくは静脈内投与されるが、皮下注射または筋内注射で投与することも可能である。

直腸投与に適した製剤は、好ましくは、たとえばカカオバター等の、坐薬基剤を形成する１つまたは複数の固体担体中に有効成分を含む単位用量坐薬である。

局所適用または鼻腔内適用に適した製剤としては、軟膏剤、クリ−ム剤、ローション剤、ペースト剤、ゲル剤、スプレー剤、エアロゾル剤、および油剤などがある。このような製剤に適した担体としては、ワセリン、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、およびそれらの組み合わせなどがある。

本発明の製剤は、任意の適当な方法で、一般に、活性化合物と液体担体または微粉固体担体もしくはその両者とを、必要な比率で、一様にかつ均質に混合し、次いで、必要に応じて、結果として生じる混合物を所望の形状に成形することによって、調製することが可能である。

たとえば、錠剤は、有効成分の粉末または顆粒および１つまたは複数の任意選択的成分、たとえば、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、または表面活性分散剤を含む均質な混合物を圧縮することによって、あるいは粉末の有効成分と不活性な液体希釈剤との均質な混合物を成型することによって、調製することが可能である。

吸入による投与に適した製剤としては、様々なタイプの定量加圧エアロゾル、ネブライザー、または注入器を用いて生成され得る微細な粒子細粉またはミストなどがある。

口経由の肺内投与では、気管支樹内への送達を確実にするために、散剤または小滴の粒径は、一般に０．５〜１０μｍ、好ましくは１〜５μｍの範囲内である。経鼻投与では、鼻腔内での滞留を確実にするために、１０〜５００μｍの範囲の粒径が好ましい。

定量式吸入器は、一般に有効成分の懸濁液製剤または溶液製剤を液化噴射剤中に含有する、加圧エアロゾルディスペンサーである。使用中、これらの装置は、有効成分を含有する微細粒子スプレーを生成するために、計量体積、一般に１０〜１５０μｌを送達するように適合させた弁を通って製剤を排出する。適当な噴射剤は、ある種のクロロフルオロカーボン化合物、たとえば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテ卜ラフルオロエタンおよびそれらの混合物を含む。製剤は、１つまたは複数の助溶剤、たとえば、エタノール界面活性剤、たとえばオレイン酸またはソルビタントリオレート、酸化防止剤および適当な香味料をさらに含有してもよい。

ネブライザーは、圧縮ガス（一般に空気または酸素）を、狭いベンチュリ・オリフィスを通して加速するか、または超音波撹拌のいずれかによって、有効成分の溶液または懸濁液を治療用エアロゾルミストに変換する市販の装置である。ネブライザーでの使用に適した製剤は、液体担体中の有効成分からなり、製剤の４０％ｗ／ｗまで、好ましくは２０％ｗ／ｗ未満を構成する。担体は一般に水または希アルコール水溶液であり、好ましくはたとえば、塩化ナトリウムの添加によって、体液と等張にされる。製剤が無菌で調製されないのであれば、任意選択的添加物は、保存料、たとえば、メチルヒドロキシ−安息香酸塩、酸化防止剤、香味料、揮発性油、緩衝剤および界面活性剤を含む。

吹送による投与に適した製剤は、注入器によって送達されるか、または鼻から吸う方法で鼻腔内に取り込まれることが可能な、細かく砕かれた粉末を含む。注入器内で、粉末は、一般にゼラチン製またはプラスチック製のカプセルまたはカートリッジに入っており、これは原位置で穴があけられるか開封されて、吸入時に装置を通して引き込まれる空気によるか、または手動のポンプによって、粉末が送達される。注入器で使用される粉末は、有効成分のみか、または有効成分、適当な粉末希釈剤（ラクトース等）、および任意選択的界面活性剤を含む粉末ブレンドのいずれかからなる。有効成分は、一般に製剤の０．１〜１００ｗ／ｗである。

上に特記した成分に加えて、本発明の製剤は、問題のタイプの製剤に関心のある、薬学の技術分野における熟練者に公知の他の作用剤も含んでもよい。たとえば、経口投与に適した製剤は香味料を含んでもよく、鼻腔内投与に適した製剤は香料を含んでもよい。

以下の実施例は例示であり、多少なりとも、本発明の範囲を制限するものと解釈してはならない。

概して、本発明の化合物の薬剤候補としての可能性は、当技術分野で公知の様々なアッセイを使用してテストすることができる。たとえば、ＦＸＲのインビトロ検証の場合：その活性および選択性は、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ（生化学アッセイ）を使用して評価することができる；遺伝子発現は、ＲＴ−ＰＣＲ（ＦＸＲ標的遺伝子）を使用して評価することができる；また細胞傷害性（たとえば、ＨｅｐＧ２）は、ＡＴＰ含量、ＬＤＨ放出、およびカスパーゼ−３活性化を使用して評価することができる。ＴＧＲ５のインビトロ検証の場合：その活性および選択性は、ＨＴＲ−ＦＲＥＴ（細胞ベースのアッセイ）を使用して評価することができる；遺伝子発現は、ＲＴ−ＰＣＲ（ＴＧＲ５標的遺伝子（すなわち、ｃＦＯＳ））を使用して評価することができる；細胞傷害性（たとえば、ＨｅｐＧ２）は、ＡＴＰ含量、ＬＤＨ放出、およびカスパーゼ−３活性化を使用して評価することができる。本発明の化合物のＡＤＭＥ（吸収、分布、代謝、および排泄）／薬物動態特性およびインビボ検証も、当技術分野で公知の方法を使用して試験することができる。

実施例１：化合物１００および化合物１０１の合成
化合物１００および化合物１０１を、下記のスキームに従って合成した。

試薬および条件：ａ）１）ＭｅＯＨ、ｐ−ＴＳＡ、超音波、３時間、定量的；２）Ａｃ_２Ｏ、ＮａＨＣＯ_３、ＴＨＦ、還流１２時間、８５％；ｂ）ＰＣＣ、ＣＨ_２Ｃｌ_２、６時間、６２％；ｃ）Ａｃ_２Ｏ、Ｂｉ（ＯＴｆ）_３、ＣＨ_２Ｃｌ_２、１時間、９１％；ｄ）Ｂｒ_２、ベンゼン、３０℃終夜、７４％；ｅ）ＮａＢＨ_４、ＮａＯＡｃ、Ｐｙｒ、室温２日、８０％；ｆ）ＨＩ５７％、ＡｃＯＨ、室温３０分；ｇ）ＣｒＯ_３、ＡｃＯＨ、室温４５分；ｈ）Ｚｎ細粉、ＮａＯＡｃ、還流２０分；ｉ）ＮａＯＨ２Ｍ、ＭｅＯＨ、室温終夜、化合物５から６５％；ｌ）ＮａＢＨ_４、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ４：１、７０％；ｍ）Ｎａ（ｓ）、ｓｅｃ−ＢｕＯＨ、５０℃、７０％。

合成は、当技術分野で公知の方法を使用して調製された６α−エチル−コール酸（６−ＥＣＡ、１）を出発材料として使用することに基づく。６−ＥＣＡ（１）を、超音波照射下、ＭｅＯＨ中ｐ−ＴＳＡで処理して対応するメチルエステルを生じ、これを、ＴＨＦ中ＮａＨＣＯ_３の存在下でＡｃ_２Ｏと共に還流することによりＣ３位で選択的に保護して、化合物２が得られた。室温で、化合物２をＣＨ_２Ｃｌ_２中ＰＣＣで処理し、続いて室温で、Ａｃ_２Ｏ、ＣＨ_２Ｃｌ_２中Ｂｉ（ＯＴｆ）_３で処理して、中間体メチル３α，７α−ジアセトキシ−１２−オキソ−５β−コラン−２４−オアート（化合物３；化合物２から約４８％）が得られた。

化合物３を、ベンゼン中Ｂｒ_２で、たとえば１２時間処理して、化合物４を生成した。化合物４と、ＮａＢＨ_４および用時蒸留したピリジン中ＮａＯＡｃとの反応で、対応する１１β−１２βエポキシド（化合物５）を、シリカゲル剤精製後約５９％の収率で生じた。室温で、化合物５と、ＡｃＯＨ中ＨＩとの反応により、ハロヒドリン中間体が得られ、次にはＡｃＯＨ中ＣｒＯ_３でこれをＣ１１位で酸化して、化合物６を生成した。化合物６と、沸騰ＡｃＯＨ中Ｚｎ細粉との反応およびアルカリ加水分解（ＮａＯＨ／ＭｅＯＨ）で、３α，７α−ヒドロキシ−１２−ケト−５１３−コラン−２４−酸が得られた（化合物７；化合物５から約６５％収率）。

化合物７は、ＴＨＦ／Ｈ_２Ｏ＝（４：１、ｖ／ｖ）の混合物中ＮａＢＨ_４を使用してＣ１１−カルボニルで立体選択的に還元して、３α，７α，１１β−トリヒドロキシ−６α−エチル−５β−コラン−２４−酸（化合物１００；化合物３から約２７％）を生じ、クロマトグラフィ精製後、化合物１００が得られた。あるいは、５０℃で、化合物７をｓｅｃ−ＢｕＯＨ中ナトリウムで還元して、精製後、化合物１０１（約７０％収率）を生じた。

実施例２：化合物１００は、強力な、特異的ＦＸＲ作動薬である。
核内で、リガンド結合核内受容体（ＮＲｓ）は、基本転写装置と直接相互に作用することによるか、またはコアクチベーターと呼ばれる架橋因子と接触させることによって、転写の開始を調節する（ＯｎａｔｅＳＡ，ｅｔａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９５；２７０：１３５４−１３５７；ＷａｎｇＪＣ，ｅｔａｌ，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ１９９８；２７３：３０８４７−３０８５０；ＺｈｕＹ，ｅｔａｌ，ＧｅｎｅＥｘｐｒ１９９６；６：１８５−１９５）。ＮＲｓとそれらのコアクチベータとのリガンド依存的相互作用は、受容体リガンド−結合ドメイン（ＬＢＤ）に位置する活性化機能２（ＡＦ−２）と、コアクチベータ上に位置する核内受容体ボックス（ＮＲｂｏｘ）との間で生じる（ＮｏｌｔｅＲＴ，ｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ１９９８；３９５：１３７−１４３）。ＮＲボックスに存在するＬＸＸＬＬペプチド配列は、異なる蛋白質とＡＦ−２領域との相互作用を促進するというシグネチャーモチーフを表すことが、数行の証拠で証明された（ＨｅｅｒｙＤＭ，ｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ１９９７；３８７：７３３−７３６；ＴｏｒｃｈｉａＪ，ｅｔａｌ，Ｎａｔｕｒｅ１９９７；３８７：６７７−６８４）。

ステロイド受容体コアクチベータ１（ＳＲＣ−１）のＮＲボックスに存在するＦＸＲとＬＸＸＬＬモチーフの間に広がる二分子相互作用を利用することによって新規な調節物質を同定するために、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎを使用した。

ビオチン化ＬＸＸＬＬＳＲＣ−１ペプチドの存在下、指示されたリガンドの濃度を上昇させながら、ヒトＦＸＲ−ＬＢＤ−ＧＳＴをインキュベートした。複合体受容体−コアクチベータが形成されるとき、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎ信号が増加した。ＥＣ_５０値は、ケノデオキシコール酸（ＣＤＣＡ；陽性対照である）では８．９μΜであり、化合物Ａでは０．１６μΜであり、化合物１００では０．１６μΜであった。これらの結果は、実施した３つの中の代表的な実験の、三重試料の平均値±Ｓ．Ｄ．である。ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイは、０．８４というＺ’因子で示される通り、非常に頑強で再現性のあるアッセイである（ＺｈａｎｇＪＨ，ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｍｏｌＳｃｒｅｅｎ１９９９；４：６７−７３）。このように、化合物１００は非常に強力なＦＸＲ作動薬である。

さらに、下表のデータから、化合物１００はヒトＦＸＲ選択的であり、ヒトＴＧＲ５には活性を持たないことが分かる。

さらに、ＡｌｐｈａＳｃｒｅｅｎアッセイを使用して、化合物１００はＦＸＲを特異的に活性化し、代謝経路に関与する他の１３の核内受容体を活性化しないことが証明された。

Ｇａｌ４−ＦＸＲ−ＬＢＤキメラを一時的に形質移入したＨＥＫ２９３Ｔ細胞株および（ＵＡＳ）５−Ｌｕｃシステムを使用して、細胞−ベースのトランス活性化アッセイで、化合物１００によるＦＸＲ活性化もテストした（図１）。化合物１００によるＦＸＲ活性化は、化合物Ａにより誘発されたものと同等であり、これらの化合物が強力なＦＸＲ作動薬であることが細胞ベースのアッセイで分かる。図１は、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞でのトランス活性化アッセイで、化合物Ａと比較した化合物１００の活性化を示すグラフである。ＮＴは、化合物Ａまたは化合物１００に曝露されていない、ＦＸＲベクター形質移入細胞である。値は、μΜで表してある。

胆汁酸（ＢＡｓ）は、いくつかの核ホルモン受容体を調節するばかりでなく、Ｇ蛋白質結合受容体（ＧＰＣＲ）ＴＧＲ５の作動薬でもある（ＭａｋｉｓｈｉｍａＭ，ｅｔａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９９；２８４：１３６２−１３６５；ＰａｒｋｓＤＪ，ｅｔａｌ，Ｓｃｉｅｎｃｅ１９９９；２８４：１３６５−１３６８；ＭａｒｕｙａｍａＴ，ｅｔａｌ，ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍｕｎ２００２；２９８：７１４−７１９；ＫａｗａｍａｔａＹ，ｅｔａｌ，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２００３；２７８：９４３５−９４４０）。ＦＸＲおよびＴＧＲ５を介した情報伝達は、ＢＡ合成および腸肝臓再循環のみならず、トリグリセリド、コレステロール、グルコース、およびエネルギーホメオスタシスも制御して、いくつかの代謝経路を調節する。本発明の化合物がＴＧＲ５を活性化する能力を評価するために、ＴＧＲ５活性化の読み出しとして、細胞内ｃＡＭＰの増加について化合物１００および他の比較化合物をスクリーニングした。ＴＧＲ５を構成的に発現するヒト腸内分泌ＮＣＩ−Ｈ７１６細胞を、化合物１００の濃度を上昇させながら曝露し、細胞内ｃＡＭＰ濃度をＴＲ−ＦＲＥＴで測定した。リトコール酸（ＬＣＡ）を陽性対照として使用した。

図２Ａから分かるように、細胞内ｃＡＭＰ濃度の変化が認められなかったため、化合物１００は、生理学的に受容体を発現する細胞でＴＧＲ５活性を誘発しない。化合物１００が、ＴＧＲ５を結合できるかどうかをさらに評価するために、ＴＧＲ５を過剰発現するクローン細胞株を種々の濃度の化合物１００に曝露した。図２Ｂに図示した結果から、ＴＧＲ５受容体が過剰発現しても、化合物１００は、妥当な作用を示さなかったことが分かる。図２Ａは、生理学的レベルでＴＧＲ５を発現するヒト腸内分泌細胞における、化合物１００（無活性）およびＬＣＡのＴＧＲ５活性を示すグラフである。実施した３つの中の代表的な実験の三重の試料の平均値±Ｓ．Ｄ．として結果を示す。図２Ｂは、ＴＧＲ５を過剰発現するヒト・チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞における、化合物１００（無活性）およびＬＣＡのＴＧＲ５活性を示すグラフである。

実施例３：化合物１００により調節されるＦＸＲ標的遺伝子
化合物１００がＦＸＲ標的遺伝子を調節する能力を評価するために、定量的ＲＴ−ＰＣＲアッセイを実施した。本発明の化合物が内在性ＦＸＲ遺伝的ネットワークを制御できるかどうかを決定するための関連細胞株として、ＨｅｐＧ２細胞を選択した。１μＭの化合物Ａ、化合物Ｂ、および化合物１００で終夜処理した細胞から総ＲＮＡを単離することによって、本発明の化合物がＦＸＲ標的遺伝子を誘発する能力を評価した。化合物Ａは、強力なＦＸＲ選択的作動薬として確立され、化合物Ｂは、二重効能ＦＸＲ／ＴＧＲ５作動薬として確立されている。ＨｅｐＧ２細胞における化合物１００の遺伝子活性化プロフィールを、化合物Ａおよび化合物Ｂのプロフィールと比較した（Ｐｅｌｌｉｃｃｉａｒｉ，Ｒ，ｅｔａｌ．，ＪＭｅｄＣｈｅｍ．２００２；Ａｕｇ１５；４５：３５６９−７２；Ｒｉｚｚｏ，Ｇ，ｅｔａｌ．，Ｍｏｌ．Ｐｈａｒｍ．，２０１０；７８：６１７−６３０）。

ＦＸＲは、ＢＡホメオスタシスに関与するいくつかの標的遺伝子の発現を制御する。簡単に記載すると、ＦＸＲは、すなわち、脂質代謝、胆汁酸代謝、および炭水化物代謝を含む、いくつかの代謝経路で中心的役割を果たす。遺伝子発現プロフィール分析に関して言えば、脂質代謝に関与する蛋白質をコード化する遺伝子としては、たとえば、ＡＰＯＣＩＩ、ＡＰＯＥ、ＡＰＯＡＩ、ＳＲＥＢＰ−１Ｃ、ＶＬＤＬ−Ｒ、ＰＬＴＰ、およびＬＰＬなどがあり；胆汁酸代謝に関与する蛋白質をコード化する遺伝子としては、たとえば、ＯＳＴα／β、ＢＳＥＰ、ＭＲＰ２、ＳＨＰ、ＣＹＰ７Ａ１、ＦＧＦ１９、ＳＵＬＴ２Ａ１、およびＵＧＴ２Ｂ４などがあり；また、炭水化物代謝に関与する蛋白質をコード化する遺伝子としては、たとえば、ＰＧＣｌａ、ＰＥＰＣＫ、およびＧＬＵＴ２などがある。

図３Ａ〜３Ｈに示す通り、ＦＸＲの化合物１００活性化は、肝臓および腸内の核内受容体ＳＨＰレベルを上昇させることおよびＦＧＦ１９のレベルを上昇させることによって、ＢＡ生合成酵素ＣＹＰ７Ａ１の発現を間接的に抑制する（Ｇｏｏｄｗｉｎ，Ｂ，ｅｔａｌ，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ２０００；６：５１７−５２６）。化合物１００に活性化されたＦＸＲはまた、ＢＳＥＰを含む、ＢＡ、ならびにＯＳＴαおよびＯＳＴβの、輸送に関与する蛋白質をコード化する遺伝子の発現を正に制御する。新たに合成されたＢＡｓは、タウリンまたはグリシンと抱合され、次いで胆嚢で活発に分泌され、ＦＸＲはこれらの重要なプロセスの両方を制御する。一価陰イオン抱合ＢＡおよび二価陰イオン抱合ＢＡは次に、それぞれＢＳＥＰおよび多剤耐性関連蛋白質２（ＭＲＰ２）によって、胆嚢で活発に分泌される。これらの輸送体はＡＢＣ輸送体ファミリーに属し、両者ともに転写レベルでＦＸＲにより誘発される。これらのＡＢＣ輸送体の制御は、肝臓でのＢＡ蓄積および結果として生じる肝損傷を避けるために非常に重要である（ＳｃｈｉｎｋｅｌＡＨ，ｅｔａｌ．，ＭａｍｍａｌｉａｎｄｒｕｇｅｆｆｌｕｘｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒｓｏｆｔｈｅＡＴＰｂｉｎｄｉｎｇｃａｓｓｅｔｔｅ（ＡＢＣ）ｆａｍｉｌｙ：ａｎｏｖｅｒｖｉｅｗ．ＡｄｖＤｒｕｇＤｅｌｉｖＲｅｖ．２０１２；Ｓｅｐ１３）。

図３は、ＯＳＴα（Ａ）、ＯＳＴβ（Ｂ）、ＢＳＥＰ（Ｃ）、ＭＲＰ２（Ｄ）、ＣＹＰ７Ａ１（Ｅ）、ＳＨＰ（Ｆ）、ＦＧＦ−１９（Ｇ）、およびＵＧＴ２Ｂ４（Ｈ）の発現制御における、化合物１００および他の比較化合物の活性を示す一連のグラフである。図３Ａ〜３Ｈで、ｙ軸は未処理細胞と比較した、発現の倍率変化を示すことに注目されたい。データは、Ｂ２Ｍを基準に正規化した。エラーバーは、３反復の標準誤差を示す。

ＦＸＲ活性化は、胆汁処理および結果として生じる糞便排泄のための、末梢組織から肝臓へのコレステロールの送達を招来するプロセスである、コレステロール逆輸送に寄与する（Ｌａｍｂｅｒｔ，Ｇ，ｅｔａｌ．，ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２００３；２７８，２５６３−７０）。この代謝シナリオで、ＦＸＲは、リン脂質およびコレステロールの、ＬＤＬからＨＤＬ、肝臓のリポ蛋白質、たとえばＡｐｏＥ、ＡｐｏＣ−Ｉ、ＡｐｏＣ−ＩＶへの転移に関与するリン脂質転移蛋白質（ＰＬＴＰ）、およびＨＤＬの肝臓取り込みに関与するスカベンジャー受容体Ｂ１（ＳＲＢ１）の発現を制御する。

ＦＸＲは、肝臓のデノボ脂質生成およびトリグリセリドクリアランスによって、トリグリセリド（ＴＧ）代謝をコントロールする。化合物１００によって活性化されると、ＦＸＲは、ＳＲＥＢＰ−１ｃ（脂肪酸合成および脂質生成を刺激する際に重要な役割を果たす転写因子）の発現を下方制御する（図４Ａ〜４Ｄ）（Ｌａｎｄｒｉｅｒ，ＪＦ，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ２００４；１１３，１４０８−１８）。デノボ脂質生成の減少に加えて、ＦＸＲ活性化はまた、ＴＧクリアランスも調節する。ＦＸＲの、この追加的なＴＧ−低下作用は、たとえばＡｐｏ−Ｃ−ＩｌＬＰＬおよびＶＤＬ受容体等の鍵遺伝子の誘発によって、分子レベルで説明される（Ｋａｓｔ，ＨＲ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌ２００１；１５，１７２０−８）。

図４は、脂質代謝に関与するＰＬＴＰ（Ａ）、ＳＲＥＢＰ−１Ｃ（Ｂ）、ＡＰＯＣＩＩ（Ｃ）、およびＰＰＡＲｙ（Ｄ）の制御における、化合物１００および他の比較化合物の活性を示す一連のグラフである。図４Ａ〜４Ｄで、ｙ軸は未処理細胞と比較した、発現の倍率変化を示すことに注目されたい。データは、Ｂ２Ｍを基準に正規化した。エラーバーは、３反復の標準誤差を示す。

ＦＸＲは、炭水化物代謝でも役割を果たすかもしれない（ＭａＫ，ｅｔａｌ．，ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ．２００６；１１６：１１０２−９）。化合物１００を使用して、ＰＥＰＣＫ遺伝子制御を試験した（図５）。図５は、ＰＥＰＣＫ遺伝子に対する、化合物１００および他の比較化合物の制御を示すグラフである。ｙ軸は未処理細胞と比較した、発現の倍率変化を示す。データは、Ｂ２Ｍを基準に正規化した。エラーバーは、３反復の標準誤差を示す。

全体として、遺伝子発現試験から、化合物１００は、化合物Ａまたは化合物Ｂと同じＦＸＲ標的遺伝子を調節することが分かった（表３も参照）。

実施例４：化合物１００は、ＨｅｐＧ２細胞で細胞傷害作用を発揮しない。
化合物１００のインビトロ細胞傷害性を評価するために、異なる２つのアッセイ法を使用した。アッセイは、ＡＴＰ値を測定することによって細胞生存能を評価し、ＬＤＨ放出を測定することによって細胞傷害性を評価した。アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）ヌクレオチドは、あらゆる細胞でコエンザイムとして使用される多機能分子であり、またミトコンドリアＤＮＡの必須部分であるため、基本分子レベルでのエネルギー源の代表である（ＫａｎｇａｓＬ，ｅｔａｌ．，ＭｅｄｉｃａｌＢｉｏｌｏｇｙ，１９８４；６２，３３８−３４３；ＣｒｏｕｃｈＳＰＭ，ｅｔａｌ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，１９９３；１６０，８１−８８；ＰｅｔｔｙＲＤ，ｅｔａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎ．Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎ．１９９５；１０，２９−３４）。細胞内エネルギー転移に関しては、ＡＴＰは「通貨の分子単位（ｍｏｌｅｃｕｌａｒｕｎｉｔｏｆｃｕｒｒｅｎｃｙ）」と呼ばれてきた。これは、代謝におけるＡＴＰの重要な役割を保証することであり、またＡＴＰ含量の低下は細胞損傷を明らかにする上での第一ステップである（ＳｔｏｒｅｒＲＤ，ｅｔａｌ．，ＭｕｔａｔｉｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ，１９９６；３６８，５９−１０１；ＣｒｅｅＩＡ，ＡｎｄｒｅｏｔｔｉＰＥ．，ＴｏｘｉｃｏｌｏｇｙｉｎＶｉｔｒｏ，１９９７；１１，５５３−５５６）。

曝露時間および試験化合物の濃度と関連した細胞内ＡＴＰの指標として、細胞生存能を測定した（Ｓｕｓｓｍａｎ，ＮＬ．；ＰｒｏｍｅｇａＣｅｌｌＮｏｔｅｓ，Ｉｓｓｕｅ３．２００２）。

図６は、指示濃度の化合物で４時間処理した、ＨｅｐＧ２細胞におけるＡＴＰの測定値を示すグラフである。細胞を媒体のみで処理したとき、種々の濃度の化合物１００の存在下で全ての細胞が生育可能であることが証明された、すなわち、化合物１００で処理した全ての細胞は生育可能のままである（１００％）。ＬＣＡ（周知の細胞傷害性胆汁酸）を比較器として使用し、タモキシフェンをアッセイの陽性対照として使用した。

細胞の生存能を測定するための追加的方法は、細胞の区画化を明確にする膜の完全性を検出することである。細胞質からの成分の漏出を測定することは、損傷した細胞膜で、膜完全性の喪失を示し、またＬＤＨ放出は、細胞における共通毒性を決定するために使用される方法である。ＨｅｐＧ２細胞を化合物１００で処理し、段階希釈を実施し、ＬＣＡ希釈液を、アッセイ対象としての無細胞および未処理細胞と一緒に、プレーティングした細胞に加えた。アッセイは、各テスト化合物濃度について三重に実施した。

結果から、化合物１００はＨｅｐＧ２細胞に対して細胞傷害作用を誘発しないことが分かる。リトコール酸は７０μΜでＬＤＨ放出を増加したが、対照のタモキシフェンはほぼ２５μΜで細胞傷害作用を発揮した（表４参照）。

実施例５：化合物１００はチトクロームＰ４５０酵素を阻害しない。
薬物−薬物相互作用について化合物１００の可能性を評価するために、６つの主要なＣＹＰ４５０イソ型（ＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、ＣＹＰ２Ｅ１、ＣＹＰ３Ａ４）を調査した。（Ｏｂａｃｈ，ＲＳ，ｅｔａｌ．，ＪＰｈａｒｍｃｏｌＥｘｐＴｈｅｒ，２００６；３１６（１）：ｐ．３３６−４８）。

化合物１００とチトクロームＰ４５０酵素との間の相互作用を測定するために、組み換えＣＹＰ４５０蛋白質（ｂａｃｕｌｏｓｏｍｅｓ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、基質およびインヒビターを使用して、蛍光信号の産生を阻害する（またはしない）能力により化合物１００を分析した（Ｂｉｄｓｔｒｕｐ，ＴＢ，ｅｔａｌ．，ＢｒＪＣｌｉｎＰｈａｒｍａｃｏｌ，２００３；５６（３）：ｐ．３０５−１４）。陽性対照として、各ＣＹＰ４５０イソ型の選択的インヒビターを同一プレートでテストした（表５）。

ＩＣ_５０＞１０μΜは、化合物がＣＹＰ４５０を阻害しないことを意味する。得られた結果は、化合物１００が薬物−薬物相互作用によって影響されそうにないことを示し、化合物１００は、化合物ＡおよびＢのように、テストしたチトクロームＰ４５０酵素を阻害しないことを示した。（Ｒｉｚｚｏ，Ｇ，ｅｔａｌ．，ＭｏｌＰｈａｒｍ，２０１０；７８：６１７−６３０）。

実施例６：化合物１００は、ヒトＥＲＧカリウムチャネルを阻害しない。
Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ^ＴＭｈＥＲＧ蛍光偏光アッセイは、テスト化合物がｈＥＲＧチャネルをブロックする傾向の仮決定に効率的な方法を提供するため、イオンチャネル機能を測定するために、このアッセイを使用した。（Ｄｏｒｎ，Ａ，ｅｔａｌ．ＪＢｉｏｍｏｌＳｃｒｅｅｎ，２００５；１０（４）：３３９−４７）。本アッセイは、ｈＥＲＧカリウムチャネル活性は、永続的に形質移入した細胞における静止膜電位に寄与し、したがってｈＥＲＧチャネルのブロックは細胞膜の脱分極を招来するという仮定に基づく。本アッセイは、パッチ−クランプ電気生理学試験と正確に相互関連のあるデータを作成することにより、潜在的ｈＥＲＧチャネルブロッカーを特定するためのものである。Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒアッセイの結果は、パッチ−クランプテクニックで得られた結果と高い相関性を示す（表６）（Ｄｏｒｎ，Ａ，ｅｔａｌ．ＪＢｉｏｍｏｌＳｃｒｅｅｎ，２００５；１０（４）：３３９−４７）。

表６は、Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ^ＴＭｈＥＲＧ蛍光偏光アッセイで生成したＩＣ_５０値と、パッチ−クランプおよび放射性リガンド置換アッセイで報告されたＩＣ_５０値との比較を示す。

Ｐｒｅｄｉｃｔｏｒ蛍光偏光アッセイを使用して、このチャネルに対する化合物１００の潜在的阻害作用を評価するために、ｈＥＲＧカリウムチャネルを安定的に形質移入されたチャイニーズハムスター卵巣細胞由来の膜調製物を使用した。ｈＥＲＧカリウムチャネル阻害の結果としての膜分極の低下は、蛍光偏光の低下と直接的に相関がある（ＦＰ）。化合物Ａおよび化合物Ｂと同様、化合物１００はｈＥＲＧカリウムチャネルをブロックまたは阻害しないことが、結果から分かる。

本アッセイは、テスト化合物の１６−点用量反応、ならびに陽性対照Ｅ−４０３１およびタモキシフェンを使用することにより、三重に実施した。Ｅ−４０３１で１５ｎＭ（ΔｍＰ＝１６３）、およびタモキシフェンで１．４μΜ（ΔｍＰ＝１８３）というＩＣ_５０が得られた。１００ｍＰ（ミリ偏光）を超えるアッセイウインドウが良好と考えられる。Ｚ’値が０．７８であったことは、優れたアッセイを示す。ＩＣ_５０値を算出するための、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ（ＧｒａｐｈＰａｄＳｏｆｔｗａｒｅＩｎｃ．）解析により、非線形回帰曲線が得られた。

簡単に記載すると、ＦＸＲを介した情報伝達は種々の代謝経路を調節し、そのように選択的なＦＸＲ調節物質は、肝臓、腎臓を冒す様々な慢性疾患、ならびに代謝性疾患の治療のための、魅力的な候補である。本明細書に記載の実施例の結果から、化合物１００は、強力で特定的なＦＸＲ作動薬として特徴づけられる。

注目すべきは、化合物１００はＦＸＲを強力に活性化するが、他の核内受容体に対して活性を示さず、胆汁酸ＧＰＣＲＴＧＲ５を活性化しなかったことである。高い核内受容体選択性に加えて、化合物１００は、薬剤候補に適した薬理学的プロフィールを有する。化合物１００は、ヒトＨｅｐＧ２肝臓細胞に対して細胞傷害作用を示さず、肝臓毒性のないことを示し、またテストしたＣＹＰ４５０酵素のいずれも阻害せず、化合物１００には、薬物−薬物相互作用のリスクがないことを示す。さらに、化合物１００はヒトＥＲＧカリウムチャネルを阻害しない。

化合物１００の選択性および有効性の組み合わせは、その好ましい薬様特性、特に優れた安全性プロフィールと共に、疾病を治療および予防するための化合物１００を魅力的な候補とする。

実施例７：化合物１００の生理化学的特性
化合物１００の生理化学的特性、たとえば水溶性、臨界ミセル濃度、表面張力およびＬｏｇＰ_Ａ等を、当技術分野で公知の方法を使用して決定した。化合物１００のこれらの特性を、天然および合成の類似物と比較した（表７）。

実施例８：皮内（ｉｄ）投与後および静脈内（ｉｖ）投与後の、胆汁瘻ラットにおける薬物動態学および代謝：
インビボ
インビボモデル、ラットに、化合物１００を１μｍｏｌ／分／Ｋｇ１時間で単回投与した（図７Ａ、７Ｂ、および７Ｃを参照）。図７Ａは、ｉｄおよびｉｖ投与の場合の、化合物１００の胆汁分泌促進作用を示すグラフである。図７Ｂは、ｉｄおよびｉｖ投与の場合の、化合物１００の継時的分泌を示すグラフである。図７Ｃは、化合物１００の継時的血漿濃度を示すグラフである。

等価物
当業者は、本明細書に記載の特定の実施態様および方法の多くの等価物を認識するか、またはせいぜいルーチンの実験を使用して確認することができるであろう。このような等価物は、本発明の範囲に含まれることを意図する。

本明細書に引用されている全ての特許、特許出願、および参考文献を、参照により本明細書に明示的に援用する。

Claims

式Ｉ：

の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体
［式中：
Ｒ^１はヒドロキシルであり；
Ｒ^２は、水素、ヒドロキシル、アルキル、またはハロゲンであって、前記アルキルは未置換であるかまたは１つまたは複数のＲ^ａで置換されており；
Ｒ^３は水素、ヒドロキシル、アルキル、またはハロゲンであって、前記アルキルは未置換であるかまたは１つまたは複数のＲ^ｂで置換されており；
Ｒ^４は水素、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはハロゲンであって、前記アルキルは未置換であるかまたは１つまたは複数のＲ^ｃで置換されており；
Ｒ^ａ、Ｒ^ｂ、およびＲ^ｃはそれぞれ独立にハロゲンまたはヒドロキシルであり；
Ｒ^５はヒドロキシル、ＯＳＯ_３Ｈ、ＯＳＯ_３ ⁻、ＯＣＯＣＨ_３、ＯＰＯ_３Ｈ、ＯＰＯ_３ ^２−、または水素であり；また
Ｒ^６はヒドロキシル、ＯＳＯ_３Ｈ、ＯＳＯ_３ ⁻、ＯＣＯＣＨ_３、ＯＰＯ_３Ｈ、ＯＰＯ_３ ^２−、または水素である；
あるいはＲ^５およびＲ^６を、それらが結合している炭素原子とまとめると、カルボニルを形成する］。
式ＩＩ：

を有する、請求項１に記載の化合物、
またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体。
式ＩＩＩ；

を有する、請求項１に記載の化合物、
またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体。
式ＩＶ：

を有する、請求項１に記載の化合物、
またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体。
前記化合物が化合物である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物が前記薬学的に許容できる塩である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物が前記アミノ酸抱合体である、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
前記アミノ酸抱合体がグリシン抱合体である、請求項７に記載の化合物。
前記アミノ酸抱合体がタウリン抱合体である、請求項７に記載の化合物。
Ｒ^２またはＲ^３の一方がヒドロキシルまたはハロゲンであり、残りのＲ^２またはＲ^３が水素または未置換のアルキルである、請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^２またはＲ^３の一方がヒドロキシルであり、残りのＲ^２またはＲ^３が水素である、請求項１０に記載の化合物。
Ｒ^５またはＲ^６の一方がヒドロキシルであり、残りのＲ^５またはＲ^６が水素である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^２がヒドロキシルまたはハロゲンである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^２がヒドロキシルである、請求項１３に記載の化合物。
Ｒ^２がハロゲンである、請求項１３に記載の化合物。
Ｒ^３が水素または未置換のアルキルである、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^３が水素である、請求項１６に記載の化合物。
Ｒ^３がメチルである、請求項１６に記載の化合物。
Ｒ^２がヒドロキシルであり、Ｒ^３が水素である、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^５がヒドロキシルである、請求項１〜１９のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^６が水素である、請求項２０に記載の化合物。
Ｒ^２およびＲ^５がそれぞれヒドロキシルであり、Ｒ^３およびＲ^６がそれぞれ水素である、請求項１〜１４および請求項１６〜２１のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^４がアルキルまたは水素である、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の化合物。
Ｒ^４が未置換のアルキルである、請求項２３に記載の化合物。
Ｒ^４がメチル、エチル、プロピル、またはブチルである、請求項２４に記載の化合物。
Ｒ^４がメチルまたはエチルである、請求項２５に記載の化合物。
Ｒ^４がメチルである、請求項２６に記載の化合物。
Ｒ^４がエチルである、請求項２６に記載の化合物。
次式

を有する、請求項１に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体。
前記化合物がＦＸＲ作動薬である、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物が、他の核内受容体に対して活性でない、請求項１〜３０のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物がＴＧＲ５を活性化しない、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物がアポトーシスを誘発する、請求項１〜３２のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物がヒトＨｅｐＧ２肝細胞に対して細胞傷害作用を示さない、請求項１〜３３のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物がＣＹＰ１Ａ２、ＣＹＰ３Ａ４（緑色の基質）、ＣＹＰ３Ａ４（青色の基質）、ＣＹＰ２Ｃ９、ＣＹＰ２Ｃ１９、ＣＹＰ２Ｄ６、およびＣＹＰ２Ｅ１から選択される１つまたは複数のＣＹＰ４５０イソ型を阻害しない、請求項１〜３４のいずれか一項に記載の化合物。
前記化合物がヒトＥＲＧカリウムチャネルを阻害しない、請求項１〜３５のいずれか一項に記載の化合物。
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物またはアミノ酸抱合体を合成する方法。
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の１つまたは複数の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、またはアミノ酸抱合体を含むキット。
薬学的に許容できる成分をさらに含む、請求項３８に記載のキット。
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、および薬学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、またはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、対象者の疾病または状態を治療または予防する方法。
前記疾病または状態がＦＸＲ介在性の疾病または状態である、請求項４１に記載の方法。
前記疾病または状態に、ＦＸＲ活性低下が介在する、請求項４２に記載の方法。
前記疾病が、心血管疾患、慢性肝疾患、脂質障害、胃腸病、腎疾患、代謝性疾患、癌、および神経疾患から選択される、請求項４１〜４３のいずれか一項に記載の方法。
前記疾病が、アテローム性動脈硬化症、動脈硬化症、脂質異常症、高コレステロール血症、高脂血症、高リポ蛋白血症、および高トリグリセリド血症から選択される心血管疾患である、請求項４４に記載の方法。
前記疾病が、原発性胆汁性肝硬変（ＰＢＣ）、脳腱黄色腫症（ＣＴＸ）、原発性硬化性胆管炎（ＰＳＣ）、薬物性胆汁鬱滞、妊娠の肝内胆汁鬱滞、非経口栄養関連の胆汁鬱滞（ＰＮＡＣ）、細菌過剰増殖または敗血症関連の胆汁鬱滞、自己免疫肝炎、慢性ウイルス性肝炎、アルコール性肝疾患、非アルコール性脂肪肝疾患（ＮＡＦＬＤ）、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、肝臓移植関連の移植片対宿主病、生体ドナー移植肝再生、先天性肝線維症、総胆管結石症、肉芽腫性肝疾患、肝内または肝外悪性腫瘍、シェーグレン症候群、サルコイドーシス、ウィルソン病、ゴーシェ病、ヘモクロマトーシス、およびα１−抗トリプシン欠乏症から選択される慢性肝疾患である、請求項４４に記載の方法。
前記疾病が、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、細菌過剰増殖、吸収不良、放射線照射後大腸炎、および顕微鏡的大腸炎から選択される胃腸病である、請求項４４に記載の方法。
前記炎症性腸疾患がクローン病および潰瘍性大腸炎から選択される、請求項４７に記載の方法。
前記疾病が、糖尿病性腎症、巣状分節性糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）、高血圧性腎硬化症、慢性糸球体腎炎、慢性移植糸球体腎症、慢性間質性腎炎、および多発性嚢胞腎から選択される腎疾患である、請求項４４に記載の方法。
前記疾病が、インスリン抵抗性、高血糖症、糖尿病、糖尿肥満、および肥満から選択される代謝性疾患である、請求項４４に記載の方法。
前記糖尿病がＩ型糖尿病である、請求項５０に記載の方法。
前記糖尿病がＩＩ型糖尿病である、請求項５０に記載の方法。
前記疾病が癌である、請求項４４に記載の方法。
前記癌が大腸癌である、請求項５３に記載の方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者のコレステロール値を低下し、かつ／またはコレステロール代謝、異化、食餌性コレステロールの吸収、およびコレステロール逆輸送を調節する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者のコレステロール値、トリグリセリド値、または胆汁酸値に影響を与える疾病を治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の脂質代謝に影響を与える疾病の１つまたは複数の症状を治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の高コレステロール値と関連した疾病状態を治療または予防する方法。
前記疾病状態が、冠動脈疾患、狭心症、頸動脈疾患、脳卒中、脳動脈硬化症、および黄色腫から選択される、請求項５８に記載の方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の胆汁鬱滞の１つまたは複数の症状を治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の胆石を治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者のトリグリセリドを低下させる方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者のメタボリックシンドロームを治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者のコレステロール胆石症を治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の脂質蓄積を減少させる方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の肝再生を増強する方法。
前記方法が、肝臓移植のための肝再生増進である、請求項６６に記載の方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の線維症を治療または予防する方法。
有効量の、請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を、必要としている対象者に投与することを含む、前記対象者の臓器線維症を治療または予防する方法。
前記線維症が肝線維症である、請求項６９に記載の方法。
前記疾病が神経疾患である、請求項４４に記載の方法。
前記神経疾患が脳卒中である、請求項７１に記載の方法。
前記化合物またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体が、経口、非経口、筋肉内、鼻腔内、舌下、気管内、吸入、眼内、経膣、直腸、および脳室内から選択される経路で投与される、請求項４１〜７２のいずれか一項に記載の方法。
前記経路が経口である、請求項７３に記載の方法。
前記化合物がＦＸＲ作動薬である、請求項４１〜７４のいずれか一項に記載の方法。
前記化合物が選択的ＦＸＲ作動薬である、請求項７５に記載の方法。
前記化合物がＴＧＲ５を活性化しない、請求項４１〜７６のいずれか一項に記載の方法。
前記化合物がアポトーシスを誘発する、請求項４１〜７７のいずれか一項に記載の方法。
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を細胞に投与することによって、細胞における１つまたは複数の遺伝子の発現レベルを制御する方法であって、前記遺伝子が胆汁酸ホメオスタシスに関与する、遺伝子の発現レベルを制御する方法。
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を細胞に投与することによって、ＣＹＰ７α１およびＳＲＥＢＰ−１Ｃから選択される１つまたは複数の遺伝子の、細胞における発現レベルを下方制御する方法。
請求項１〜２９のいずれか一項に記載の化合物、またはその薬学的に許容できる塩、溶媒和物、もしくはアミノ酸抱合体を細胞に投与することによって、ＯＳＴα、ＯＳＴβ、ＢＳＥＰ、ＳＨＰ、ＵＧＴ２Ｂ４、ＭＲＰ２、ＦＧＦ−１９、ＰＰＡＲγ、ＰＬＴＰ、ＡＰＯＣＩＩ、およびＰＥＰＣＫから選択される１つまたは複数の遺伝子の、細胞における発現レベルを上方制御する方法。