SU910135A3 - Способ отделени гемо-железа от глобина - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ОТДЕЛЕНИЯ ГЕМО-ЖЕЛЕЗА ОТ ГЛОБИНА

1

Изобретение относитс  к гематологии и касаетс  обработки жидкостей, содержащих составные компоненты крови.

HinecreH способ разделени  гемоглобина крови, включающий поэтапную обработку раС 5 твора, содержащего гемоглобин, сол ми и органическими растворител ми {.

Однако ичиестный способ не обеспечивает высокого выхода и сохранени  нативных свойств глобина.10

Цель и;юбретени  - повышение выхода и сохранение нативных свойств глобина.

Поставленна  цель достигаетс  тем, что довод т рН исходного раствора до 2,5-4,5 затем обрабатывают его этанолом в концентра- IS vaiK 40-9 об.% и хлористым натрием, выпавщий в осадок гемин удал ют, а глобин осаждают из раствора и отдел ют центрифугированием .

Способ осуществл ют следующим образом. 20

Сначала отдел ют часть железосодержащего компонента, котора  существует в виде скоплени  в концентрированных растворах или сщсорПирусчс  на прогеиновом компоненте: JIO oi.iijiciiiii ocvHioi ГРЛЯЮ1 посрепством цен- 25

трифугировани . Добавл ют хлорид натри , затем в образующемс  верхнем слое происходит осаждение глобина путем добавлени  в этот слой вещества, способного увеличивать ионную силу или 1. обезвоживание в то врем , как железосодержащий компонент остаетс  в жидкой фазе в жидком нлн тонкодиспергированном состо нии.

Среда, создаваема  за счет высокого содержани  растворител , например этанола, и низкого содержани  воды, с определенной ионной .силой и низкой величиной рН благопри тствует тому, что гемин и его производные, а также продукты его разложени  в данной жидкости сохран ютс  в жидком или тонкодиспергированном состо нии, так что глобин можно отдел ть путем центрифугировани .

Claims (2)

1. Пример1.К5г раствора гемоглобина с содержанием сухого вещества 15% и эт4нола 33% при -8° С добавл ют по капл м при одновременном перемещивании и охлаждении смесь 1,1 мл 1 М сол ной кислоты и 5 мл воды. После этого добавлени  температура -7°С, рН 2,5. К этой смеси добавл ют по капл м 80 мл 94%-ного этанола, охлажда  ее до -10°С. Глобин выпадает в осадок при добавлении к сме си 0,3 мл сульфата аммони  в виде 20%-ного водного раствора и центрифугируют 10 мин при 8000 д. Поверхностный жидкостный слой имеет  рко-коричневый цвет, а выпавший осадок серого цвета. Этот осадок промывают в 85%-ном этаноле при -10°С и рН 3,1, затем центрифугируют, в результате чего получают 2.4г массы с содержанием сухого вещества 23%. Пример
2. 2. В раствор 36 мл 94%-ного этанола, 6 мл воды и 0,55 мл 1 М сол ной кислоты при -12°С ввод т по капл м при одновременном помешивании и охлаждении 2.5г раствора гемоглобина, температура остаетс  -12° С, рН 3,0. Затем к смеси добавл ют 45 мл 94%-ного этанола и жидкость центрифугируют в течение 1 мин при 8000 д, получают густую массу в количестве 0,1 г. Глобин выпадает в осадок при добавлении 0,4 мл 20%-ного раствора сульфата аммони , рН довод т до 3,0, путем центрифугировани  так же, как в примере 1, получают 45 г густой массы с содержанием сухого вещества 36%. Дальнейшее осаждение из поверхностного жидкого сло  осуществл ют путем добавлени  0,4 мл сульфата аммони , получают 9,40 г мае сы с содержанием сухого вещества 42%. Полученна  густа  масса светло-серого цвета, поверхностный слой  рко-коричневого цвета, не образует осадка при введении трихлоруксу ной кислоты. ПримерЗ.К раствору 20 мл 94%-ного этанола и 1,1 мл 1 М сол ной кислоты при -15° С добавл ют по капл м при одновременном перемешивании и охлаждении 5 г раствора гемоглобина, рН 2,9. Смесь центрифугирую при 27000 g в течение 20 мин, образуетс  черна  густа  масса в количестве 0,9 г с содержанием сухого вещества 8,3%. К поверхностному коричневому слою при перемешивании и охлаждении добавл ют 50 мл 94%-ного этанола при , при добавлении 10 мл воды и 1,2 мл 20%-ного сульфата аммони  вьшадает осадок. Осадок отдел ют центрифугированием при 8000 9 в течение 10 мин и полученную густую массу суспендируют в 94%-ном этаноле при -15 С и снова отдел ют центрифугированием при тех же услови х. Получают 1,6 г массы светло-серого цвета с содержанием сухого вещества 37,6%. Пример 4. К раствору 40 мл 94%-ного этанола и 1,1 мл 1М сол ной кислоты при -15° С при перемешивании и охлаждении добавл ют по капл м 5 г раствора гемоглобина, рН 2,0. К этой смеси добавл ют по капл м 5 мл 20 кого хлорида натри  и жидкость центрк фугируют при 27000 g в течение 20 мин, получают 1,4 г черной густой массы с содержанием сухого вещества 11%. К этому поверхностному слою добавл ют 12 мл воды и 1 мл 20%-ного раствора сульфата аммони , после чего жидкость центрифугируют при 8000 g в течение 10 мин. Получают серую массу в количестве 3,8 г с содержанием сухого вещества 14,6%. Пример5. К5мл раствора гемоглобина при -8°С добавл ют по капл м при одновременном перемешивании и охлаждении смесь 11 мл воды, 4 мл этанола и 1 мл 1 М сол ной кислоты, температура смеси -6°С. После добавлени  температура -4°С, рН 2,9. При добавлении 7 мл 0,1 М раствора гидрата окиси натри  рН 3,9. При добавлении 0,2 г сульфата аммони  выпадает осадок в виде коричневой массы. Осадок отдел ют центрифугированием при 300 д. Жидкую массу суспендируют несколько раз в небольших количествах 94%-ного этанола при рН 3,0 и температуре -12° С и отдел ют центрнфугированием. Получают 3,05 г серой массы с содержанием сухого вещества 18,8%. Пример 6. Из 5г гемоглобинового раствора осаждают гемоглобин добавлением в этот раствор 10 мл 94%-ного этанола при перемешивании и осажде}ши при -6°С. Выпавший осадок отдел ют центрифугированием в течение 5 мин при 2000 g, получают 6 г красной густой массы. На дне центрифуги образуетс  осадок черного цвета. Красную массу добавл ют к -70 мл раствора 94%-ного этанола и 1,1 мл 1 М сол ной кислоты при -12° С при перемешивании и охлаждении. После добавлени  рН раствора 2,9, температура -12°С. Смесь центрифугируют 10 мин при 27000 g, образуетс  небольшое количество черной массы. Невыпавший в осадок слой жидкости добавл ют в 2 мл 40%-ного раствора сульфата аммони  и 10. мл воды. Температура этой смеси составл ет -8° С, рН 3,4. Вьшавший осадок отдел ют центрифугированием в течение 10 мин при 800 д. Полу-, чают 1,5 г серой густой массы с содержанием сухого вещества 93,3%. П р и М е р 7. К 20 мл 94%тного раствора этанола и 1,1 мл 1 М сол ной кислоты при , -12° С добавл ют по капл м при перемешивании и охлаждении 5 г раствора гемоглобина. После добавлени  рН 2,9 температура -12°С. Полученную смесь кори шевато-черного цвета ентрифугируют в течение 10 мин при 27000 g, олучают 2,2 г черной массы с содержанием ухого вещества 2,7%; всплыва  на поверхHocri ., светло-коричнева  жидкость приобретает гелеобра:1ную консистенцию. К невыпавшему в осадок жидком слою добавл ют по капл м при перемешивании и охлаждении 70 мл холодного этанола , а затем 0,8 мл 40%-ного раствора сульфата аммони  и 8 мл воды. После этого до .бавлени  температура составл ет -6°С. Выпавший осадок отдел ют центрнфугированием в течение 10 мин при 8000 д, полу чают 1,7 г белой густой массы с содержанием сухого вещества 36%. Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход продукта с сохранением нативных свойств глобина. 6 Формула изобретени  Способ отделени  гемо-железа от глобина, включающий поэтапную обработку раствора, содержащего гемоглобин, сол ми и органическими растворител ми, отлича-ющийс   тем, что, с целью повышени  выхода и сохранени  нативных свойств глобнна, довод т рН исходного раствора до 2,5-4,5, зат.ем обрабатывают его этанолом в концентра щш 40-91 об.% и хлористым натрием, выпавший в осадок гемин удал ют, а глобин осаждают иэ раствора и отдел ют центрифугированием .® Источники информации, прин тые во вниманне при экспертизе 1. Бреслер С. Е. Введение в молекул рную биологию. 1973, с. 130-131.