PL94776B1 - Sposob separowania z cieczy zawierajacej substancje krwi zawartych w niej zwiazkow zelazo-porfiryny oraz pochodnych lub ich produktow rozkladu - Google Patents

Description

Opis patentowy opublikowano: 30.12.1977 94776 MKPA23J1/06 A23kl04 Int.a.2A23Jl/06 A23K 1/04 CZYTELNIA Twórca wynalazku: Uprawniony z patentu: Paul Goran Sigvard lindiroos, Sztokholm (Szwecja) Sposób separowania z cieczy zawierajacej substancje krwi zawartych w niej zwiazków zelazo-porfiryny oraz pochodnych lub ich produktów rozkladu Wynalazek dotyczy sposobu separowania z cieczy zawierajacej substancje krwi, zawartych w niej zwiazków zelazo-porfiryny oraz pochodnych lub ich produktówrozkladu.Metody laboratoryjne oddzielania zwtiazków zelaza i globiny chromatograficznie lub przez ekstrakcje znane byly dawniej. W metodach tych stosowano ja¬ ko rozpuszczalniki keton metylo-etylowy, aceton i dwumetylowy amid mrówkowy.Dla skali technicznej mniej wygodna jest meto¬ da chromatograficzna, natomiast ekstrakcja przy po¬ mocy rozpuszczalników nie nadaje slile dla wyodreb¬ niania produktów dla celów paszowych lub spozyw¬ czych.Wynalazek umozliwia zastosowanie nieskompliko¬ wanego procesu, przy uzyciu organicznego rozpu¬ szczalnika o odwadniajacych wlasciwosciach oraz przez dodanie srodka zwiekszajacego stezenie jonów, lub o efekcie odwadniajacym, jak np. chlorek sodu, siarczan sodu lub siarczan amonu, benzoesan sodu lub poliglikol. Proces powyzszy moze byc równiez regulowany przez dodatki wplywajace na pH, jak kwasy nieorganiczne, np. kwas solny lub kwas siar¬ kowy, wzglednie kwasy organiczne, jak np. kwas oc¬ towy lub kwas cytrynowy. Wynalazek daje tym sa¬ mym technicznie i ekonomicznie realna metode wy¬ odrebniania zwlilazków zelaza od globiny i umozliwia tym wykorzystanie jej dla celów paszowych i spo¬ zywczych.Przez zastosowanie metody wedlug wynalazku wyodrebnia sie w pierwszym rzedzie, glównie przez odwirowanie, czesc skladników zelazopochodnych, np. wystepujace w formie wieloczasteczkowej w skoncentrowanych roztworach lub zaadsorbowane na materiale proteinowym. Efekt aglomeracji moze byc zwtilekszony przez dodatek, np. chlorku sodu. ^ Z uzyskanej, droga odwirowania górnej fazy cieklej wytraca sie globine przez dodanie substancji zwiekszajacych stezenie jonowe wzglednie odwadnia¬ jacych, podczas gdy skladniki zelaza pozostaja w roz¬ tworze w formie rozpuszczonej wzglednie drobnej dyspersji.Srodowisko wytworzone przez wysoka zawartosc rozpuszczalnika, np. etanolu, oraz niska zawartosc wody przy odpowiednim stezeniu jonowym oraz ni¬ skiej wartosci pH, jest wyraznie korzystne dla utrzy¬ mania w cieczy zwiazków zelaza w formie drobno rozproszonej wzglednie rozpuszczonej. To samo do¬ tyczy pochodnych i ich produktów rozkladu, podczas gdy globina daje sie odwirowac.Wynalazek zostanie ponizej blizej objasniony za pomoca przykladów.Przyklad I. Do 5 g roztworu hemoglobiny o zawartosci 15% suchej substancja zawierajacej okolo 33% -owego etanolu przy temperaturze —8°C wkroplono mieszanine 1,1 ml 1 M kwasu solnego i 5 ml wody, przy równoczesnym mieszaniu i chlo¬ dzeniu. Po dodaniu, temperatura wynosila —7°C zas wartosc pH 2,5. 80 ml 94%-owego etanolu wkroplono czanu amonu, po czym roztwór odwirowano przy 8000 X S w ciagu 10 minut. Otrzymano szara paste .w ilosci 3,8 g z zawartoscia suchej substancji równa 14,6%.Przyklad V. Wedlug tego przykladu przepro¬ wadzono ekstrakcje skladników zelazopochodnych z osadu globiny. Do 5 g roztworu hemoglobiny (o wlasciwosciach jak w przykladzie 1) o tempe¬ raturze —8°C wkroplono, przy równoczesnym mie- io szaniu i chlodzeniu, mieszanine skladajaca sie z 11 ml wody, 4 ml etanolu oraz 1 ml 1 M kwasu solnego 0 temperaturze —6°C. Po dodaniu temperatura wy¬ nosila —4°C, zas wartosc pH 2,9. Wartosc pH pod¬ wyzszona zostala przy pomocy 7 ml 0,1 M roztworu wodorotlenku sodu. Wytracenia dokonano przez do- damiie 0,2 g siarczanu amonu i ciemnobrazowa paste centryfugowano przy okolo 300 X S- Uzyskana paste rozrobiono wielokrotnie w malych ilosciach 94%- owego etanolu przy pH= 3 i temperaturze —12°C oraz odwirowano. Otrzymuje sie przy tym 3,05 g szarej pasty o zawartosci suchej substancji 18,8%.Przyklad VI. Z 5 g roztworu hemoglobiny (o wlasciwosciach jak w przykladzie I) wydzielono hemoglobine przez dodatek 10 ml 94%-owego eta- nolu w czasie mieszania i chlodzenia do temperatu¬ ry —6°C. Osad odwirowano przy 2000X6 w ciagu minut, przy czym otrzymano 6 g czerwonej pasty.Na spodzie probówki po odwirowaniu osadza sie niewielka ilosc czarnej pasty. Czerwona paste do- dano do roztworu 70 ml 94%-owego etanolu i 1,1 ml 1 M kwasu solnego o temperaturze —12°C przy ró¬ wnoczesnym mieszaniu i chlodzeniu. Po zmieszaniu wartosc pH wynosila 2,9, a temperatura —12°C. Mie¬ szanine odwirowano przy 27 000 X 8 w ciagu 10 mi- nut, przy czym otrzymano mniejsze ilosci czarnej pasty. Do górnej fazy cieklej dodano 2,0 ml 40%-owe¬ go roztworu siarczanu amonu i 10 ml wody. Tem¬ peratura wynosila —8°C, zas wartosc pH 3,4. Szary osad odwirowano przy 8000 XS w ciagu 10 minut, przy czym otrzymano 1,5 szarej pasty o zawartosci suchej substancji 39,3%.Przyklad VII. Do roztworu 20 ml 94%-owego etanolu oraz 1,1 ml 1 M kwasu solnego o tempera¬ turze —12°C wkroplono, przy równoczesnym mie- 4.5 szaniu i chlodzeniu 5 g roztworu hemoglobiny (o wla¬ sciwosciach jak w przykladzie I). Po dodaniu war¬ tosc pH wynosila 2,9 a temperatura —12°C. Miesza¬ nine, która posiada barwe brazowo-czarna odwiro¬ wano przy 27 000 X g w ciagu 10 minut, przy czym 50 otrzymano 2,2 g czarnej pasty o zawartosci suchej substancji 2,7% oraz jasnobrazowa górna faze cie¬ kla, która pózniej przyjmuje konsystencje zelu. Do górnej fazy cieklej wkrapla sie w czasie mieszania i chlodzenia 70 ml 94%-owego, zimnego etanolu po 55 czym 0,8 ml 40%-owego roztworu siarczanu amonu oraz 8 ml wody. Temperatura po dodaniu wynosila —6°C. Osad odwirowano przy 8000XS w ciagu 10 minut, przy czym otrzymuje sie 1,7 bialej pasty o za¬ wartosci suchej substancji 36%. przy ochlodzeniu do —10°C. Globine wytracono poprzez dodatek 0,3 ml siarczanu amonu w 20%-owym roztworze wodnym i odwirowano przy 8000 X £ w ciagu 10 minut. Górna faza ciekla jest koloru cie¬ mnobrazowego zas frakcja zageszczona /(pasta) — koloru szarego. Paste plucze sie w 85%-owym eta¬ nolu o temperaturze —10°C i wartosci pH 3,1, oraz odwirowuje, przy czym otrzymuje sie ok. 2,4 g pasty o suchej zawartosci równej 23%.Przyklad II. Do roztworu zawierajacego 36 ml 94%-owego etanolu, 6 ml wody oraz 0,55 ml 1 M kwasu solnego o temperaturze —12°C wkroplono przy równoczesnym mieszaniu i chlodzeniu 2,5 g roztworu hemoglobiny (o wlasciwosciach jak w przy¬ kladzie I). Po wkropleniu temperatura wynosila —12°C, zas wartosc pH 3,0. Z kolei dodano 45 ml 94%-owego etanolu i roztwór poddano wirowaniu przy 8000 X S przez 10 minut. Otrzymano paste w ilosci mniejszej niz 0,1 g.Globina wytraca sie przez dodanie 0,4 ml 20%- owego roztworu siarczanu amonu. Kwasowosc do- • prowadza sie przy pomocy kwasu solnego do pH 3,0.Osad odwirowuje sie w sposób podany w przykla- dize I, przy czym otrzymuje sie 0,45 g pasty o suchej zawartosci równej 36%. Z górnej fazy cieklej wytra¬ ca sie dodatkowa ilosc pasty przez dodatek 0,4 ml siarczanu amonu, przy czym otrzymuje sie 0,40 g pasty o suchej zawartosci równej 42%. Pasty sa ko¬ loru jasnoszarego. * Górna faza ciekla jest koloru ciemnobrazowego i nie wytraca sie po zadaniu kwa¬ sem trójchlorooctowym.Przyklad III. Do roztworu, skladajacego sie z 20 ml 94%-owego etanolu i 1,1 ml 1 M kwasu sol¬ nego o temperaturze —15°C wkrapla sie przy równo¬ czesnym mieszaniu i chlodzeniu 5g roztworu hemo¬ globiny (o wlasciwosciach jak w przykladzie I). Po wkropleniu temperatura wynosila —15°C, zas war¬ tosc pH 2,9. Mieszanina poddana zostala odwirowa¬ niu przy 27 000X2 w ciagu 20 minut, przy czym otrzymano czarna paste w ilosci 0,9 g z zawartoscia suchej substancji — 8,3%. Do ciemnobrazowej gór¬ nej fazy cieklej dodano przy równoczesnym miesza¬ niu i ehlodzemiu 50 ml 94%-owego etanolu o tempe¬ raturze —15°C i substancje wytracono przez dodanie ml wody i 1,2 ml 20%-owego siarczanu amonu.Osad odwirowano przy 8000 Xg w ciagu 10 minut i otrzymana paste rozcienczono w 94%-owym eta¬ nolu o temperaturze —15°C, po czym odwirowano jak wyzej. W rezultacie otrzymano 1,6 g pasty o za¬ wartosci suchej substancji 37,6%. W stanie suchym pasta byla koloru jasnoszarego.Górna faza ciekla pozostala po odwirowaniu, nie wytracala sie po zadaniu kwasem trójchlorooctowym.Przyklad IV. Do roztworu, skladajacego sie z 40 ml 94%-owego etanolu i 1,1 ml 1 M kwasu sol¬ nego o temperaturze —15°C wkroplono; przy równo¬ czesnym mieszaniu i chlodzeniu 5 g roztworu hemo¬ globiny (o wlasciwosciach jak w przykladzie I). Po ukonczonym dozowaniu temperatura wynosila —15°C, zas wartosc pH 2,9. Do mieszaniny wkroplo¬ no 5 ml 20%-owego chlorku sodowego li roztwór odwirowano przy 27 000 X S w ciagu 20 minut, przy czym otrzymano 1,4 g czarnej pasty z zawartoscia suchej substancji 11%. Do górnej fazy cieklej doda¬ no 12 ml wody oraz 1 ml 20%-owego roztworu siar- PL

Claims (1)

1. Zastrzezenlie patentowe Sposób separowania z cieczy zawierajacej substan¬ cje krwi, zawartych w niej zwiazków zelazo-porfi- ryny oraz pochodnych lub ich produktów rozkladu, 10 15 20 25 30 35 10 4.5 50 55 6094 776 5 6 a z nich, tzw. zwiazki zelaza, od globiny, znamienny tym, ze ciecz chlodzi sie do temperatury od 0°C do 20°C, wartosc pH utrzymuje sie ponizej 4,5 korzy¬ stnie pormiedzy 2,5 a 4,5, a do cieczy dodaje sie or¬ ganiczny rozpuszczalnik o wlasciwosciach odwadnia¬ jacych, jak etanol lub mieszaniny etanolu z gliko¬ lem lub gliceryna, w ilosci odpowiadajacej przynaj¬ mniej 40 procentom objetosciowym, korzystnie 75 procentom objetosciowym, liczac calkowita ilosc cie¬ czy, przy utrzymaniu wyzej podanej temperatury, a wytracone zwiazki zelaza oddziela sie, ewentual- 5 nie droga dodawania soli, jak chlorek potasu lub cytrynian sodu, po czym globine wytraca sie z roz¬ tworu. PL