SU736592A1

SU736592A1 - Способ получени иммобилизованной пектиназы

Info

Publication number: SU736592A1
Application number: SU782606773A
Authority: SU
Inventors: З.Я. Муйжниеце; А.К. Арен; Д.Я. Дайя; В.С. Чудар; В.Д. Брумштейн; А.Н. Самсонова; И.Н. Богомолова; Н.Ю. Новосельцева
Original assignee: Научно-производственное объединение "Биохимреактив"
Priority date: 1978-04-21
Filing date: 1978-04-21
Publication date: 1984-03-23

Abstract

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИ- ЗОВАННОЙ ПЕКТИНАЗЫ путем св зывани ее с нерастворимым носителем, содержащим изоцианатные группы, о т л и .чающийс тем, что, с целью упрощени процесса и экономий сырьй/ в качестве носител используют силохром , обработанный дийзоцианатом адипиновой кислоты,1,6-гексаметилендиамином и повторно - дииэоцнайатом адипиновой кислоты, а св зывание фермента с носителем осуществл ют в водной среде при 18-20&deg;С и концентрации фермента в исходном растворе 1-3%. (Л с: 00 о:) ел

Description

изобретение относитс к получению иммобилизованных ферментов, в частности пектиназы/ Котора примен етс в различных отрасл к пищевой промыш ленности и в научно-исследовательской работе. Иммобилизованные ферменты позвол ют устранить три важнейчше причины ограниченного применени ферментов: труднодоступность чистых ферме тов, ойнократное их использование, неустойчивость. Иммобилизаци , в частности, пёктиназ вл етс важной проблемой, особенно в св зи с ее : использованием в пищевой промыиШенности , так как этот фермент в иммобилизованной форме рбесдечи ва.ет мно fSftgaTHocTb йспелъзОваШ энзима, исключает стадию отделени отработа шего фермента от сока, создает усло ви дл ведени непрерывного процесса Известно.несколько способов получени иммобилизованной пектиназы, однако все они включают трудоемкие этапы синтеза носителей либо основаны на применении высоких температур в процессе получени биокатализаторов tfl . :, Известен способ получени иммоби лизованной пектиназы, включающий синтез носител И св зывание с ним фермента в фосфатномбуфере, рН 5,0 Фермент используют в.виде 10%-ного раствора, реакцию св зывани ведут при 4°С 21 V - . Используемый в способе носитель .получают при взаимодействии этиленгликол с ТолуилендиизоцианаТом при , причем получаемый носитель обладает активными изоцианатными группами . -- V..,, ,..-.: . -., : ,, ... . . ,. .,., ... ...,,,.„„ . , . ,. ... Недостатком этого способа вл етс высокий расход пектиназы (10%), так как образование системы носитель фермент происходит при избытке толу илендиизоцианата в реакционной смеси прич.ем одна его часть расходуетс на синтез урЪтана са1 тйШ1ьаШ :изоцианатными группами{ опреленное KOличёство уретайа впоследствии реагирует с ферментом, образу нужный продукт - препарат реагирует с ферментом , образу нужный продукт препарат иммобилизованной пектинаэы друга реагирует с изоцианатными группами только что образовавшегос урётана, привод к возникновению уже неактивных в отношении фермента алло фонйтныхгрупп, а треть , непрореагировайа часть, остаетс в реакцион ном растворе. При добавлении фермента к последнему часть энзима, как

5iO-CQ-NH-CCHaU-N O указано выше, СЕ зываетс с уретаном и дает пенополиуретановый ферментный Препарат, остальна же часть реагирует со свободным толуилендиизоцианатом и при промывке конечного продукта удал етс . 1фоме того, процесс получени комплекса фермент - носитель сравнительно сложный: работа проводитс как при оУйбсйтёльно высоких, так и при нйзких температурах, реакци уретана с ферментом зкзотермична, что требует обеспечени условий,, исключающих инактивацию пектиназы. Недостатками известного способа вл ютс Также относительно небольша поверхность носител , так как пОлиуг)ётанова пена, полученна по описанному способу, обладает макроструктурой , и проведение иммобилизации пектиназьа в среде органических реагентов, отрицательно вли ющих на активность ферментов. Целью изобретени вл етс упрощение проце.сса, экономи сырь (при обеспечении высокого выхода активности катализатора). Цель достигаетс тем, что в качестве носител используют силохром, обработанный ДиизоциаНатом адипиновой кислоты,1,б-гексаметилендиамином и повторно динзоцианатом адипиновой кислоты, а св зывание фермента с носителем провод т в водной среде при 18-20°С и концентрации фермента в исходном pacTBQpe 1-3%. Согласно изобретению способ получени иммобилизованной пектиназв состоит в св зывании её с силохромок, обработанным диизоцианатом адипиновой кислоты, 1-б-гексаметилендиаминрм и повторно - диизоцианатом адипиновой кислоты, причем св зывание прО вод т в водной среде при 18-20 С и концентрации фермента в исходном растворе 1-3%. Носитель обладает микроструктурой и вследствие этого значительной поверхностью , что обеспечивает высокую эффективность каталитического действи при наличии св занного фермента. Эффективность каталитического действи , как известно, определ етс величиной поверхности носител - чём больше эта величина, тем бол.БШе на носителе св зываетс фермента и тем эффективнее действует катализатор. Обработйа силохрома диизоцианатом и 1,б-гексаметилендиамином (последний служит вставкой, обеспечивающей стерическй выгодное расположение молейул фермента при св зывании) проводитс по следующей схеме:

Claims

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММОБИЛИ- ЗОВАННОЙ ПЕКТИНАЗЫ путем связывания ее с нерастворимым носителем, содержащим изоцианатные группы, отличающийся тем, что, с целью упрощения процесса и экономии сырья, в качестве носителя используют силохром, обработанный диизоцианатом адипиновой кислоты,1,6-гексаметилендиамином и повторно - диизоциайатом адипиновой кислоты, а связывание фермента с носителем осуществляют в водной среде при 18-20°С и концентрации фермента в исходном растворе

4-3%.

м сл ьо указано выше, связывается с уретаном и дает пенополиуретановый ферментный препарат, остальная же часть реагирует со свободным толуилендииэоцианатом и при промывке конечного продукта удаляется.· Кроме того, процесс получения комплекса фермент - носитель сравнительно сложный: работа проводится как при относительно высоких, так и при низких температурах, реакция уретана с ферментом экэотермична, что требует обеспечения условий,, исключающих инактивацию пектиназы. Недостатками известного способа являются также относительно небольшая поверхность носителя, так как полиуретановая пена, полученная по описанному способу, обладает макроструктурой, и проведение иммобилизации пектиназы в среде органических реагентов, отрицательно влияющих на активность ферментов.

Целью изобретения является упрощение процесса, экономия сырья (при обеспечении высокого выхода активности катализатора).

Цель достигается тем, что в качестве носителя используют силохром, обработанный Дииэоцианатом адипиновой кислоты,1,б-гексаметилендиамином и повторно:- диизоцианатом адипиновой кислоты, а связывание фермента с носителем проводят в водной среде при 18-20°С и концентрации фермента в исходном растворе 1-3%.

Согласно изобретению способ получения иммобилизованной пектиназы состоит в связывании её с силохромом, обработанным диизоцианатом адипиновой кислоты, 1-6-гексаметилендиами40 ном и повторно - диизоцианатом адипиновой кислоты, причем связывание про· водят в водной среде при 18-20°С и концентрации фермента в исходном * растворе' 1-3%.

Носитель обладает микроструктурой и вследствие этого значительной поверхностью, что обеспечивает высокую эффективность каталитического действия при наличии связанного фермента.

₍ Эффективность каталитического действия, как известно, определяется величиной поверхности носителя - чём .больше эта величина, тем больше на • носителе связывается фермента и тем эффективнее действует катализатор. Обработка силохрома диизоцианатом и 1,6-гексаметилендиамином (последний служит вставкой, обеспечивающей стериЧескй выгодное расположение молекул фермента при связывании) проводится по следующей схеме: