SU591126A3 - Способ получени альбумина - Google Patents

Description

1

Изобретение относитс  к получению лекарственных препаратов.

Известен способ получени  сывороточного альбумина из растворов, содержащих альбумин , путем нагревани  очищаемого раствора ае менее 20 мин при температуре 45-75°С в присутствии каприлат-иона 0,0075-0,02 М концентрации и рН 4,8-5,7 отделени  осадка коагулированных белков центрифугированием, осветлени  и концентрировани  очищенного альбумина известными приемами 1.

Однако известный способ  вл етс  трудоемким , а получаемый продукт содержит примеси .

С целью упрощени  технологии производства альбумина и выделени  примесей по предлагаемому способу перед термокоагул цией раствор концентрируют, например, осажда  альбумин, добавлением трихлоруксусной кислоты до концентрации от 3 до моль/л в присутствии этилового спирта концентрацией от 40 до 60°/о, раствор ют в воде осадок альбумина , примеси удал ют в присутствии этанола концентрацией от 55 до 75% путем добавлени  трихлоруксусной кислоты, и после удалени  осадка довод т рН до 6,5-7,0 дл  осаждени  альбумина, затем раствор ют его в воде.

Дл  термокоагул ции в присутствии каприлата натри , составл ющего 15% от содержани  протеинов, рН устанавливают в пределах 4,85-4,95, при 20% рН - 4,95-5,05, а при 30% рН довод т до 5,15.

С целью удалени  больщей части примесей гемоглобина перед концентрированием добавл ют углеводород, содержащий галогенпроизводные , например, хлороформ в присутствии этанола.

Claims (3)

1. Способ получени  очищенного альбумина, в частности альбумина человека, из раствора очищаемого альбумина, содержащего чужеродные или денатурированные протеины, заключаетс  в том, что осуществл ют термокоагул цию нежелательных элементов путем нагревани  раствора в присутствии каприловой кислоты до температуры 52-64°С, предпочтительно между 56-60°С. Термокоагул цию провод т, например, 1 ч в присутствии каприлата натри , составл ющего 15-30% от содержани  протеинов в растворе, при рН между 4,8-5,25. Каприловую кислоту ввод т в виде каприлата натри , но можно вводить и в чистом виде. Величина рН тем больще, чем больще содержание каприлата по отношению к протеинам. Термокоагул ци  позвол ет устранить больщую часть гемоглобина и осадить денатурированныи альоумин, а также чужеродные протеины . Если исходный раствор плазматического происхождени , то предлагаемым способом получают очищенный альбумин, пригодный дл  непосредственного применени . Если же исходный раствор содержит чужеродные примеси, например из плаценты, плацентарной крови или. гемолизной крови, то перед термокоагул цией удал ют большую часть гемоглобина, ферментов , таких как щелочные фосфатазы, путем осаждени  протеинов с помощью кислоты, например трихлоруксусной или полифосфорными кислотами, а также удал ют наполнители различных групп. Гемоглобин удал ют в присутствии этанола в концентрации 60% с добавлением галогенированного углеводорода, такого как хлороформ . Ферменты (такие как фосфатазы) удал ют после удалени  гемоглобина в присутствии этанола в концентрации до 60%, например 25%, с добавлением трихлоруксусной кислоты Концентраци  кислоты может быть в пределах от 3 до lOlCT моль/л, предпочтительно 4,210 моль/л. Кислоту добавл ют в протеиновый раствор lipH температуре ниже 0°С, предпочтительно (-5) - (-10)°С, до полного осаждени  протеинов. В некоторых случа х трихлоруксусную кислоту можно заменить полифосфорной. Удаление наполнителей различных групп осуществл ют при концентрации этанола выще 55%, например 75%, и концентрации протеинов преимущественно меньшей или равной 10 г/л, добавл   трихлоруксусную кислоту в раствор при температуре ниже 0°С, например (-5) - (-10) °С. Концентраци  трихлоруксусной кислоты 8-10 моль/л. Полученный осадок удал ют. На этой же стадии удал ют также щелочные фосфатазы, если они присутствуют. Пример. Из 7 т плаценты получают известным способом плавающий на ее поверхности глобулин путем осаждени  его этанолом. Дл  увеличени  гемоглобина верхний слой, сотхержащий 58 г протеинов на 1 кг плаценты , добавл ют 25%-ный этанол и хлороформ так, чтобы весь объем ( 17000 л) содержал 0,6% хлороформа; рН довод т до 6,0-6,1. Верхний слой в этих услови х поддерживают при температуре 24°С. В результате образуетс  осадок, который отдел ют и выбрасывают, удал   большую часть гемоглобина. Объем верхнего сло  уменьшаетс  до 16000 л (в этот момент выход протеинов 8 г/кг). Дл  удалени  ферментов в верхний слой (16000 л) добавл ют 25%-ный этанол .и трихлоруксусную кислоту концентрации 4,2-10- моль/л; температуру до добавлени  понижают до -80°С. Получают осадок около 1000 кг (выход протеинов 4 г/л), который удал ют, примен   герметичные центрифуги с непрерывным выбросом осадка. Верхний слой уменьшаетс  до 15000 л. Таким образом удал ют или денатурируют щелочные фосфатазы и другие фер.менты, такие как трансамилазы. Осадок снова раствор ют в воде и объем довод т до 1800 л водой. Затем производ т осветление. Дл  этого повторно растворенный осадок наполн ют кремниевым порошком (аэросил) в концентрации 0,2%. Образуетс  осадок 50 кг, который отдел ют центрифугированием. Осветленный плавающий сверху раствор соответствует выходу протеинов около 6,5 г/кг. При удалении групповых наполнителей осветленный раствор разбавл ют смесью 75%-ного этанола и трихлоруксусной кислоты Концентрацией около 8-10 моль/л. Содержание протеинов 10 г/л. Температуру поддерживают около -7°С. В результате групповые наполнители выпадают в осадок 10 кг, котор-ый удал ют. На этом этапе удал ют также остаточные ферменты. Далее верхний слой, содержащий около 8 г протеинов на 1 л, фильтруют, рН довод т до 6,5-7, температуру поддерживают между -5 и -10°С. Образуетс  осадок альбумина 140 кг, который центрифугируют, а верхний плавающий слой удал ют. Очищают альбумин путем повторного растворени  осадка в воде, получают объем 280 л, выход протеинов 5 г/кг. После диализа в дистиллированной воде довод т содержание протеинов до 20 г/л, добавл ют в раствор каприлат натри  крнцентрацией 2,41-10 моль/л и довод т (при помощи уксусного тампона) рН до 5,0-5,05. Этот раствор выдерживают при температуре 60°С около часа. Оставшиес  протеины, кроме альбумина , коагулируют и вывод тс  в осадок с последними следами гемоглобина, также как денатурированна  часть альбумина. В растворе остаетс  лищь практически чистый альбумин. Затем верхний слой довод т до 1750 л и фильтруют. Разбавленный раствор альбумина концентрируют, добавл   40%-ный этанол при рН 4,8-4,9 и температуре -8°С. Получают осадок , который собирают и повторно раствор ют. Новый раствор диализуют, обрабатывают глиноземным гелем, концентрируют в вакууме, после чего провод т стерилизирующую фильтрацию и получают 95 л концентрированного практически чистого альбумина с содержанием 200 г/л. На этой последней стадии выход протеинов 2,7 г/кг. Полученный альбумин можно примен ть дл  терапевтических целей в медицине . Формула изобретени  1. Способ получени  альбумина из раствора альбумина, содержащего чужеродные и денатурированные протеины, путем нагревани  раствора , подлежащего очистке, при температуре между 52°С и 64°С включительно в присутствии каприлата натри  при рН между 4,8 и 5,25 включительно, сепарации с помощью центрифугировани  из осадка коагулированных протеинов , осветлени  и концентрации очищенного альбумина известными методами, отличающийс  тем, что, с целью упрощени  технологии производства и выделени  примесей, перед термокоагул цией раствор концентрируют, например , осажда  альбумин добавлением трихлоруксусной кислоты до концентрации от 3 до 10-Ю моль/л в присутствии этилового

   спирта в концентрации от 40 до , раствор ют в воде осадок альбумина, затем примеси удал ют в присутствии этанола в концентрации от 55 до 75% путем добавлени  трихлоруксусной кислоты и после удалени  осадка довод т рН до 6,5-7,0 дл  осаждени  альбумина, затем раствор ют осадок в воде.
2. 2. Способ по п. 1, отличающийс  тем, что дл  термокоагул ции в присутствии каприлата натри , составл ющего 15% от содержани  протеинов, рН устанавливают в пределах 4,85-

   4,95, при рН - 4,95-5,05, а при SQo/o рН довод т до 5,15.
3. 3. Способ по п. I, отличающийс  тем, что, с целью удалени  большей части примесей гемоглобина, перед этапом концентрировани  добавл ют углеводород, содержащий галогенпроизводные , например, хлороформ в присутствии этанола.

   Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе:

   1. Патент США № 2765299, кл. 260-122, 1956.