DE2333883B2

DE2333883B2 - Verfahren zur Herstellung von hochgereinigtem Humanalbumin

Info

Publication number: DE2333883B2
Application number: DE2333883A
Authority: DE
Inventors: Paule Caluire Gattel; Jacques Limonest Liautaud; Marie-France Lyon Makula; Robert Lyon Plan
Original assignee: Institut Merieux SA
Current assignee: Institut Merieux SA
Priority date: 1972-07-05
Filing date: 1973-07-03
Publication date: 1982-09-16
Also published as: FR2190437A1; DK134425C; JPS5312965B2; CA1028320A; NL179874B; NO140579B; RO64629A; NL7309361A; US3992367A; LU67931A1; NO140579C; ES416597A1; BR7305002D0; BE801888A; SU591126A3; GB1441751A; DK134425B; FR2190437B1; AR195041A1; DE2333883A1

Description

nach Patentanmeldung 23 33 8843-41 dadurch gekennzeichnet, daß man in Stufe d) Caprylationen in einer Menge entsprechend 15 bis 30 Gew.-% Natriumcaprylat, bezogen auf das Gewicht der Proteine, verwendet und in einem pH-Bereich thermokoaguliert, der

bei 15 Gew.-% Natriumcaprylat 4,85 bis 435 bei 20 Gew.-% Natriumcaprylat 4,95 bis 5,05 bei 25 Gew.-% Natriumcaprylat 5,1 und bei 30 Gew.-% Natriumcaprylat 5,15 beträgt,

und in Stufe c) eine Trichloressigsäurekonzentration von ungefähr 8 χ 10~² Mol/l und den pH-Wert auf 4,8-5,25 einstellt

2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß man als Ausgangsstoff Plasma verwendet, das nur den Verfahrensstufen d) und e) unterworfen wird.

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zum Herstellen von hochgereinigtem Humanalbumin, sowohl aus Ausgangsstoffen, die nicht mit Hämoglobin verunreinigt sind, wie Plasma, als auch aus Ausgangsstoffen, die mit Hämoglobin verunreinigt sind, z. B. aus Plazenta, Plazentablut oder ganz allgemein aus jedem Typ von hämolysiertem Blut

Es sind bereits Verfahren zur Herstellung von gereinigtem Albumin bekannt, jedoch hat ss keines dieser Verfahren ermöglicht, ins Gewicht fallende Mengen von hochgereinigtem, nicht-denaturiertem Albumin in wirtschaftlich tragbarer Weise herzustellen,

ίο vor allem in den Fällen, in denen der Ausgangsstoff aus einem Material besteht, das zahlreiche Verunreinigungen und vornehmlich Hämoglobin enthält Insbesondere gelingt es nach bekannten Verfahren, z. B. durch fraktionierte Ausfällung der Proteine aus Placentablut und Äthanol gemäß Taylor et aL, Journal of American Chemical Society, Bd. 78 (1956), Seite 1356, nicht alle Hämoglobinspuren zu eliminieren. Daneben werden auch die Gruppensubstanzen und alkalischen Phosphatasen durch bekannte Verfahren nicht erfaßt Diese können zwar gemäß der Hauptpatentanmeldung P 23 33 8843 durch

a) Abtrennen der Globuline

b) Entfernen des Hämoglobinanteils in an sich bekannter Weise durch Fällung oder Adsorption aus der nach a) verbleibenden Flüssigkeit

c) Entfernen der Enzyme bzw. Konzentrieren des gelösten Albumins entweder durch Zugeben von Trichloressigsäure bis zu einer Konzentration von

jo 3 bis ¹OxIO-²MoI/! zu der Albuminlösung, die einen Äthanolgehalt von 25% aufweist und auf Temperaturen unter Null, vorzugsweise auf —5 bis -10⁰C gekühlt ist oder durch Fällen der Albuminlösung mit Polyphosphorsäure, Abtrennen des gebildeten Niederschlags und Wiederauflösen bis zu einer Proteinkonzentration von 10 g/l oder durch Einengen der Albuminlösung sowie -gegebenenfalls nach einer Klärung in der gekühlten Lösung — Einstellen eines Alkoholgehalts von etwa 75% und einer Trichloressigsäurekonzentration von etwa 8xl0"² Mol/l, Entfernen des sich dabei bildenden Niederschlags, Ausfällen der Albumine durch Neutralisieren der gekühlten Lösung vorgereinigt worden ist durch Erhitzen aus Temperaturen von 52-64° C für die Dauer von mehr als einer halben Stunde in Gegenwart von Caprylationen und, falls erforderlich, Reinigen der erhaltenen konzentrierten Albuminlösung durch Fällung Dialyse und/oder Adsorption

eliminiert werden, was aber häufig für die vollständige ' Hämoglobinentfernung nicht immer ausreicht

Zwar ist aus der US-PS 27 05 230 die Fällung von

verunreinigenden Proteinen aus Serumalbumin mittels Natriumcaprylat bekannt jedoch ist hier das Problem der Hämoglobinentfernung nicht angesprochen, das

besondere Schwierigkeiten macht Aus der US-PS 27 65 299 ist ferner ein ähnliches

Verfahren zur Reinigung von Serumalbumin mittels Thermokoagulation in Gegenwart von 0,075 bis 0,02 m

Caprylat beschrieben, das bei 45° bis 75° C und einem

pH-Weit 43 bis 5,5 durchgeführt wird. Aber auch hier ist die Caprylatmenge als kritischer Parameter nicht zur Proteinmenge in Beziehung gebracht Wie gefunden wurde, ist aber hinsichtlich der

Hämoglobinabtrennung nicht nur die Caprylatmenge

sondern auch der pH-Wertbereich kritisch, bei welchem bestimmte Mengen verwendet werden.

Die Erfindung ist durch die Gegenstände der Ansprüche 1 und 2 gekennzeichnet

Zweckmäßig verwendet man als zu reinigende Lösung eine solche, deren Proteingehalt weniger als 50 g/l beträgt, am besten eine solche, deren Proteingehalt bei etwa 20 g/l Hegt Gemäß einer günstigen Ausführungsform wird die Caprylsäure i» Form von Natriumcaprylat zugegeben, doch ist es ebenfalls möglich, sie auch in jeder anderen Form zuzusetzen, z. B. in Form der Säure selbst und nicht in Form eines Salzes. In diesem Fall wird der Gehalt an Caprylsäure durch eine einfache Rechnung ermittelt, die von den oben angegebenen Werten ausgeht, die allerdings dem Fall entsprechen, daß die Caprylsäure in Form von Natriumcaprylat zugesetzt wird.

Ganz allgemein ist der pH-Wert um so größer zu wählen, je größer das Verhältnis der Menge des Caprylats zu der der Proteine ist

Beispielsweise soll der pH-Wert in dem Fall, in dem der Caprylatgehait 15% des Gehaltes an Proteinen ausmacht, 4,85 bis 4,95 betragen, während in dem Fall, in dem der Caprylatgehait 20% des Gehaltes :n Proteinen ausmacht, der pH-Wert 4,95 bis 5,05 betragen soll. Bei einem Caprylatgehait von 25% soll der pH-Wert nahe bei 5,1 liegen, während er bei einem Caprylatgehait von 30% 5,15 betragen soll.

Die in dieser Weise vorgenommene Thermokoagulation ermöglicht es, einen großen Teil des Hämoglobins zu eliminieren und das denaturierte Albumin und ebenso die Fremd-Proteine zu fällen.

In dem Fall, in dem die zu reinigende Lösung aus Plasma erhalten worden ist, ermöglicht es das beschriebene Verfahren, nach Durchführung der Verfahrensstufen a) und c) ein gereinigtes Albumin zu gewinnen, das unmittelbar verwendet werden kann.

In dem Fall, in dem die zu reinigende Lösung aus einer Quelle stammt, die stärker mit Fremdkörpern verunreinigt ist z. B. aus Placeta, Placentablut oder hämolysiertem Blut, kann man der Thermokoagulation mindestens eine der eingangs genannten Arbeitsstufen a-c vorschalten, die darin bestehen, die Hauptmenge des Hämoglobins zj eliminieren, die Enzyme, wie die alkalischen Phosphatasen, durch Fällung der Proteine mittels einer Säure, wie Trichloressigsäure oder einer Polyphosphorsäure, zu eliminieren und auch die Blutgruppensubstanzen zu eliminieren.

Die Eliminierung des Hämoglobins kann insbesondere in Gegenwart einer Äthanol-Konzentration von unter 60% durch Zusatz eines Halogenkohlenwasserstoffes, wie Chloroform, durchgeführt werden. Sie kann jedoch auch durch Zusatz eines Halogenkohlenwasserstoffes ohne Alkohol oder mittels irgendeiner anderen, an sich bekannten Arbeitsweise herbeigeführt werden.

Die Eliminierung der Enzyme, wie der Phosphatasen, die insbesondere nach der Stufe der Eliminierung des Hämoglobins durchgeführt wird, wird vor allem in Gegenwart einer Äthanol-Konzentration unter 25% durch Zugabe von Trichloressigsäure herbeigeführt Die Konzentration der Säure kann größenordnungsmäßig 3 bis 1Ox 10"² Mol/l betragen, liegt insbesondere jedoch bei etwa 4,2xl0-² Mol/l, wobei die Säure oder Proteinlösung bei einer Temperatur von unter 0⁰C, insbesondere zwischen -5° und -10⁰C, bis zur Gesamtfällung der Proteine zugegeben wird.

Abgesehen von der Eliminierung der Enzyme ermöglicht diese Stufe zugleich, die Menge des Albumins in Lösung beträchtlich zu konzentrieren infolee der Tatsache, daß das Albumin ausfäll·.

In manchen Fällen ist es möglich, die Fällung mit Trichloressigsäure durch eine Fällung mit einer Polyphosphorsäure zu ersetzen.

Die Stufe der Eliminierung der Gmppensubstanzen wird insbesondere bei einer Äthanol-Konzentration von etwa 75%, bei einer Protein-Konzentration von zweckmäßig unter 10 g/l oder bis zu 10 g/l durch Zugabe der Trichloressigsäure zur Lösung bei einer Temperatur von unter 0⁰C, z.B. zwischen —5° und

ίο -10°C, durchgeführt Die Menge der Trichloressigsäu-. re kann insbesondere ungefähr 8 χ 10~² Mol/l betragen.

Der erhaltene Niederschlag wird verworfen. In diesem Stadium sind die Gruppensubstanzen eliminiert worden.

Diese Stufe gestattet es zugleich, die alkalischen Phosphatasen in einer solchen Weise zu entfernen, daß die vorangehende Stufe der Eliminierung der Phosphatasen unter Umständen ganz fortgelassen werden kann. Sie wird dann zweckmäßig durch eine einfache Konzentrierung der Proteine ersetzt

Weitere Vorteile und Merkmale der Erfindung sind aus den Zeichnungen zu entnehmen. Es zeigt

F i g. 1 die Kurven des Hämoglobinspiegels und der Ausbeute an Proteinen als Funktion des pH-Wertes für eine erste Albumin-Partie,

2ϊ F i g. 2 die gleichen Kurven für eine andere Partie,

F i g. 3 Kurven für die Albumin-Ausbeute und den Hämoglobinspiegel als Funktion des Caprylatgehaltes für den gleichen pH-Wert.
In F i g. 1 sind ah Funktion der auf der Abszisse

jo eingetragenen pH-Werte die Kurven R der Ausbeute an Proteinen und die Kurven H des Hämoglobinspiegels nach der Caprylatbehandlung eingezeichnet. Die Partie aus Placenta-Humanalbumin enthält zu Beginn 20 g Proteine, hauptsächlich Albumin, pro Liter und einen Hämoglobinspiegel von etwa unter 0,2 (optische Dichte einer l%igen Lösung). Die Kurve R gibt so die Gewichte der Proteine in g/l wieder und zwar im wesentlichen des Albumins, das nach der Thermokoagulation mit Caprylat in Lösung bleibt Die Färbung H des Albumins wird photometrisch durch einfache Ablesung an Beckmann-Spektrophotometer bei 403 nm bestimmt, nachdem die Lösung auf 10 g Proteine/l eingestellt worden ist.

Wie man aus der Zeichnung entnehmen kann, verlaufen bei einer Caprylatmenge von 2 g/l, was einem Wert von 10% des ursprünglichen Gewichts der Proteine entspricht, die Kurven R\₀ und Hi₀, die diesem Caprylatgehait entsprechen, im wesentlichen horizontal. Das bedeutet, daß es praktisch keine Proteine gibt, die

so ausfallen, und daß der Hämoglobinspiegel praktisch konstant bleibt Bei einem Gehalt von 10% Caprylat ist es also nicht möglich, die Thermokoagulation nach der Lehre der Erfindung durchzuführen.

Wenn man nun 15 Gew. % Capryiat, bezogen auf das Gewicht der Proteine, verwendet, d. h. 3 g Caprylat pro Liter, dann werden die erhaltenen Ergebnisse durch die Kurven R\$ und H\s veranschaulicht Es ist zu ersehen, daß die Ausbeute an Proteinen um so höher ist, je größer der pH-Wert ist, daß aber der Hämoglobinspiegel sich in gleichem Sinne entwickelt Ungeachtet dessen ist es für einen pH-Wert im Bereich von 4,8 möglich, den Hämoglobinspiegel um mehr als die Hälfte zu senken, wenn man einen Verlust von ungefähr 4 g Proteinen/1 in Kauf nimmt Hierbei ist die Reinheit des nach dem erfindungsgemäßen Verfahren erhaltenen Albumins verhältnismäßig unabhängig von der Ausbeute ό,η Proteinen, denn die Fremd-Proteine und die Fraktion des denaturierten Albumins fallen als erste aus.

Es genügt also, eine volle Fällung zu haben, um sicher zu sein, daß man die quasi-Gesamtmenge der unerwünschten Proteine eliminiert hat. Die Fortsetzung der Fällung eliminiert einen Teil des reinen Albumins und setzt so die Ausbeute herab.

Für den Fall, daß der Gehalt an Caprylat 20% des ursprünglichen Gehalts an Proteinen, d. h. 4 g/l, beträgt, sind die Ergebnisse anhand der Kurven R20 und f/20 veranschaulicht Man kann ersehen, daß man bei einem pH-Wert um 4,95 bis 5 immer noch eine wesentliche Menge gereinigten Albumins zurückbehält und dennoch deutlich den Hämoglobingehalt herabsetzen kann.

Fig.2 gibt die Kurven R' und H' als Gehalt an Proteinen und den Hämoglobinspiegc! nach der Thermokoagulation wieder, die an einer zweiten behandelten Partie Placentaalbumin gemessen wurden.

Bei einem Capryiatgehait von 20% des ursprünglichen Gewichts der Proteine, d. h. von 20 g/l, in der der Thermokoagulation zu unterwerfenden Lösung erhält man eine Kurve R '20, welche die Ausbeute an Proteinen wiedergibt, die weitgehend der Kurve Ä20 entspricht. Die Kurve W» folgt einem Verlauf, der dem der Kurve //20 ziemlich ähnelt, und dort liegt der günstigste Bereich um den pH-Wert 5 herum.

Erhöht man den Capryiatgehait auf 25%, was die Kurven Ä'25 und //'25 veranschaulichen, so kann man feststellen, daß ein günstiger Bereich um den pH-Wert von 5,1 herum liegt

Bei einem Capryiatgehait von 30% schließlich erhält man Ergebnisse, welche die Kurven Ä30 und W₃₀ veranschaulichen, die besagen, daß der optimale pH-Wert nahe bei 5,15 liegt In der Tat erzielt man in diesem pH-Bereich eine erhebliche Senkung des Hämoglobinspiegels bei einer noch vertretbaren Albuminausbeute.

F i g. 3 veranschaulicht das Verhalten einer thermokoagulierten Albumin-Partie als Funktion des Caprylatgehaltes in % bei dem stets gleichen pH-Wert von 5. Die Temperatur beträgt 60°, und die Thermokoagulation hat 1 Stunde in Anspruch genommen. Man kann feststellen, daß die Ausbeute an Proteinen und ebenso der Hämoglobinspiegel abnehmen, wenn der Capryiatgehait ansteigt, daß aber ein Optimum bei einem Capryiatgehait von 20% erreicht wird. In der Tat beträgt bei diesem Wert die Ausbeute 90%, was besagt, daß nur 10% der Proteine ausgefällt worden sind, während der Hämoglobinspiegel von ungefähr 03) auf einen Wert zwischen 0,1 und 0,5 gelangt ist

Die folgenden Beispiele erläutern die Durchführung des erfindungsgemäßen Verfahrens.

Beispiel 1

Aus einem Ausgangsmaterial von ungefähr 7 Tonnen Plazentas bereitet man sich zunächst die nach Fällung der Gobuline mit Äthanol verbleibende Flüssigkeit, den Überstand

(1) Eliminierung des Hämoglobins

Man gibt zu der überstehenden Flüssigkeit bzw. dem Oberstand, dessen Äthanolgehalt 25% beträgt und der ungefähr 58 g Proteine pro kg Planzenta enthält Chloroform in einer solchen Menge, daß das Gesamtvolumen ungefähr 17 000 Liter beträgt, die 0,6% Chloroform enthalten. Das pH wird auf einen Wert zwischen 6,0 und 6,1 eingestellt

Aus der überstehenden Flüssigkeit, die unter diesen Bedingungen auf einer Temperatur von ungefähr 24° C gehalten wurde, fällt ein Niederschlag aus, der abgetrennt und verworfen wird.

Durch diesen Umstand wird das Volumen des Überstands auf ungefähr 16 000 Liter herabgesetzt Zu

diesem Zeitpunkt beläuft sich die Proteinausbeute größenordnungsmäßig auf 8 g/kg, und der größte Teil des Hämoglobins ist eliminiert worden.

(2) Eliminierung der Enzyme

Z den 16 000 Litern Überstand, die — wie oben angegeben — erhalten worden sind und die ungefähr 25% Äthanol enthalten, gibt man nach Senken der Temperatur auf —8° C Trichloressigsäure zu, bis eine Konzentration von 4,2 χ 10~² Mol/Liter eingestellt ist Die Menge der Proteine beträgt ungefähr 4 g/Liter. Man erhält auf diese Weise eine Ausfällung von annähernd 1000 kg, während die überstehende Flüssigkeit in einer Menge von annähernd 15 000 Liter verworfen wird. Zu diesem Zweck bedient man sich vorzugsweise einer hermetisch abgeschlossenen Zentrifuge mit kontinuierlichem Ausstoß der Ausfällung.

Auf diese Weise sind die alkalischen Phosphatasen und andere Enzyme, wie die Transaminasen, eliminiert oder denaturiert worden.

Die Fällung wird dann wieder in verdünnter Sodalösung gelöst bis das pH neutral ist und das Volumen wird mit Wasser auf 1300 Liter aufgefüllt

(3) Klärung

Die wiedergelöste Ausfällung wir! mit Siliciumdi-

oxyd-Pulver (»Aerosil«) versetzt, bis eine Aerosil-Kon zentration von ungefähr 0,2% eingestellt ist Es bildet sich so ein Niederschlag in einer Menge von ungefähr 50 kg, der abzentrifugiert und verworfen wird Die überstehende geklärte Lösung entspricht einer Protein ausbeute von ungefähr 6,5 g/kg.

(4) Eliminierung der Gruppensubstanzen

Es sei daran erinnert daß die Gruppensubstanzen hauptsächlich aus Polysacchariden der Wände der roten Blutkörperchen bestehen, die während der Hämolyse in Lösung gegangen sind und eliminiert werden müssen.

Die geklärte Lösung wird in einem Gemisch aus Äthanol und Trichloressigsäure derart verdünnt, daß der endgültige Alkoholspiegel ungefähr 75% und der Trichloressigsäureanteil ungefähr 8 χ 10~² Mol/l betragen. Der Gehalt an Proteinen liegt bei ungefähr 10 g/L die Temperatur wird auf etwa —7° C gehalten, und es bildet sich eine Fällung von ungefähr 10 kg, die verworfen wird und auf diese Weise sind die Gruppensubstanzen eliminiert wordea Diese Stufe vervollständigt zugleich die Eliminierung evtL noch vorhandener restlicher Enzyme.

Der Überstand der ungefähr 8 g Proteine pro Liter enthält wird filtriert. Der pH-Wert wird auf einen Wert zwischen 6,5 und 7 eingestellt und die Temperatur ständig auf einem Wert zwischen —5°C und — 10⁰C gehalten. Zu diesem Zeitpunkt bildet sich eine Albuminfällung, die durch Abzentrifugieren gewonnen wird

Man erhält ungefähr 14 kg der Ausfällung, und die überstehende Flüssigkeit wird verworfen.

(5) Reinigung des Albumins

Die Fällung wird erneut in Wasser gelöst, bis eine

es Volumenmenge von ungefähr 280 Liter erreicht ist, und die Proteinausbeute beträgt in diesem Augenblick 5g/kg.

Nach einer Dialyse gegen destilliertes Wasser zwecks

Eliminierung des Alkohols stellt man den Proteinspiegel auf 20 g/l ein, versetzt die Lösung mit Natriumcaprylat bis zu einer Konzentration von 2,41 χ 10~² Mol/l, und man stellt z. B. mit einem Acetatpuffer den pH-Wert auf einen Wert zwischen 5 und 5,05 ein.

Diese Lösung wird ungefähr 1 Stunde lang auf einer Temperatur von 60⁰C gehalten.

Die verbliebenen Proteine — außer dem Albumin — sind so koaguliert worden, und sie werden verworfen als Fällung mit den letzten Hämoglobin-Spuren und ebenso der Fraktion des denaturierten Albumins. Es bleibt allein das praktisch reine Albumin in Lösung.

Die überstehende Flüssigkeit, auf ungefähr 1750 Liter aufgefüllt, wird danach filtriert. Die verdünnte Albumin-Lösung wird dann konzentriert durch Einstellung des Äthanolgehalts auf 40%, des pH-Werts auf 4,8 bis 4,9 und der Temperatur auf etwa -8° C. Es bildet sich dann ein Niederschlag, der zunächst gesammelt und dann wieder gelöst wird, und diese neue Lösung wird dann dialysiert und danach mit Aluminiumoxydgel behandelt. Es wird dann ein Konzentrieren im Vakuum und eine sterilisierende Filtration vorgenommen, die schließlich ungefähr 95 Liter einer konzentrierten Lösung von praktisch reinem Albumin mit einem Albumingehalt von 200 g/l liefert In dieser Endstufe beträgt die Proteinausbeute größenordnungsmäßig 2,7 g/kg. Die Farbe der Lösung gleicht derjenigen der meisten hochwertigen Lösungen, die aus Plasma stammen.

Das erfindungsgemäß erhaltene Humanalbumin kann zur Herstellung von Proteinlösungen dienen, die als Transfusionsflüssigkeiten therapeutisch verwendbar sind, beispielsweise für die Behandlung von Schockzuständen oder für die Fälle, in denen eine lebensbedrohende Blutverminderung im Kreislauf eingetreten ist. Es wird vom Empfängerorganismus sehr gut vertragen und verursacht keine Reaktionen, wie sie bei den bekannten Albuminpräparaten häufig eintreten, wie den hypotensiven Effekt beim perfundierten Hund.

Beispiel 2 (nachgereicht)

Beispiel 1 wurde wiederholt, wobei jedoch die Stufe der Entfernung der Gruppensubstanzen mittels Trichloressigsäure in Gegenwart von 75% Äthanol fortgelassen wurde. Die Versuche wurden jeweils mehrfach durchgeführt.

Die optische Dichte als Maß für den Hämoglobingehalt, gemessen durch UV-Absorption bei 403 nm in einer Lösung mit 10 g/l Albumin in einer Meßzelle von 1 cm betrug vor der Caprylatbehandlung 0,20 und nach der Behandlung

Probe Nr.

optische Dichte

0,023 0,029 0,047 0,080 0,048

Beispiel 3

(nachgereicht)

Es wurde Beispiel 1 wiederholt jedoch statt der ersten

Behandlung mit Trichloressigsäure in Gegenwart von

25% Äthanol zur Konzentrierung des Albumins und zur Enzymfällung lediglich unter vermindertem Druck auf 30⁰C erwärmt.

Während vor der Caprylatbehandlung die optische Dichte 0,183 bis 0,202 betrug, betrug diese nach der Behandlung mit Caprylat 0,048 bis 0,066.

Hierzu 3 Blatt Zeichnungen

Claims

Patentansprüche:

1. Verfahren zum Herstellen von hochgereinigtem Humanalbumin aus gefrorener Placenta, Placentablut oder hämolysiertem Blut durch

a) Abtrennen der Globuline aus dem Blut,

b) Entfernen des Hämoglobinanteils durch Fällung oder Adsorption aus der nach a) verbleibenden Flüssigkeit,

c) Eliminierung der Enzyme bzw. Konzentrieren des gelösten Albumins, wobei man entweder zu der Proteinlösung, die einen Äthanolgehalt von 25% aufweist und auf Temperaturen unter Null, vorzugsweise auf -5 bis — 10°C gekühlt ist, Trichloressigsäure bis zu einer Konzentration von 3 bis 10xlO~²Mol/l zufügt oder wobei man die Albuminlösung durch Versetzen mit Phosphorsäure ausfällt und den gebildeten Niederschlag abtrennt und ihn bis zu einer Proteinkonzentration von weniger als 10 g/l wieder auflöst, oder wobei man die Albuminlösung nur einengt, worauf man gegebenenfalls nach einer Klärung in der gekühlten Lösung einen Alkoholgehalt von etwa 75% und eine Trichloressigsäurekonzentration von 5 bis 8 xlO-² Mol/l einstellt, den sich dabei bildenden Niederschlag entfernt, die Albumine durch Neutralisieren der gekühlten Lösung ausfällt und gegebenenfalls in Stufe

d) die nach c) erhaltenen Albumine bis zu einer Konzentration von max. 50 g/l in Wasser löst, die Lösung bis zu einer Konzentration entsprechend 2 —12 g/l Natriumcaprylat mit Caprylationen versetzt und diese nach Einstellen auf den pH-Bereich von 4,5 bis 5,5 auf Temperaturen von 52-64° C für die Dauer von mehr als einer halben Stunde erhitzt und, falls erforderlich,

e) Reinigen der erhaltenen Albuminlösung durch Fällung, Dialyse und/oder Adsorption, ,