SU944580A1 - Способ получени поверхностного антигена гепатита В - Google Patents

Description

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОВЕРХНОСТНОГО АНТИГЕНА ГЕПАТИТА В

Claims (2)

1. Изобретение относитс  к медицине и касаетс  получени  поверхностного антигена гепатита В. Известен способ получени  поверхностного антигена гепатита В путем осаждени  из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта 1. Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода антигена. Целью изобретени   вл етс  повышение выхода антигена. Цель достигаетс  тем, что согласно способу получени  поверхностного антигена гепатита В путем осаждени  из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта , осаждение провод т 4%-ным раствором риванола из расчета 35-45 мл на 100 мл сыворотки, после прогревани  осуществл ют протеолиз 0,2-ным раствором трипсина из расчета 15-20 мл на 100 мл антигенсодержащей жидкости и очистку провод т диализом против дистиллированной воды при 4-5°С. Пример. Берут 2000 мл HBs - антигенположительной сыворотки (или плазмы), осветл ют ее центрифугированием 20 мин при 3000 об/мин, довод т рН сыворотки до 8,5 с помощью 15%-го раствора углекислого натри , после чего 30 мин при посто нном помешивании приливают 800 мл 4%-ного водного раствора риванола. Смесь оставл ют на 4-5 ч при 4 С. Надосадочную жидкость декантируют и отбрасывают, так как весь HBj-aHTHreH переходит в твердую фазу. К осадку с целью его ресуспендировани . добавл ют 400 мл 1,5%-го раствора хлористого натри  и оставл ют на 10-12 ч при 4°С. Полученную творожистую массу центрифугируют при 3000 об/мин 30 мин. Осадок удал ют. К 570 мл супернатанта добавл ют 300 мл дистиллированной воды и провод т температурную обработку при 80°С в течение 1 ч. Продукт термообработки гемогенизируют, добавл   небольшие порции дистиллированной воды, после чего центрифугируют 30 мин при 3000 об/мин. К 540 мл супернатанта добавл ют 81 мл 0,2%-го раствора трипсина, довод т рН до 7,8 и при 20°С перемешивают 4-5 ч. Продукты деградации белков удал ют и раствор отдиализовывают против дистиллированной воды 24 ч. Далее НВ-антигенную фракцию концентрируют с помощью сефадекса Г-200, который после этого регенерируют . Весь процесс очистки поверхностного антигена гепатита В контролируют реакци ми встречного иммуноэлектрофореза, преципитацией в геле с полипреципитирующей кроличьев сывороткой против человеческих сывороточных белков, спектрометрически . Выход целевого продукта 33%, относительный показатель очистки 128,
2. 2. Предлагаемый способ обеспечивает высокий выход целевого продукта при хорошей степени очистки. Формула изобретени  Способ получени  поверхностного антигена гепатита В путем осаждени  из сыворотки крови с последующим прогреванием полученного осадка, отделением антигенсодержащей жидкости и очисткой целевого продукта, отличающийс  тем, что, с целью повышени  выхода антигена, осаждение провод т 4%-ным раствором риванола из расчета 35-45 мл на 100 мл сыворотки, после прогревани  осуществл ют протеолиз 0,2%-ным раствором трипсина из расчета 15-20 мл на 100 мл антигенсодержащей жидкости и очистку провод т диализом против дистиллированной воды при 4-5°С. Источники информации, прин тые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 545356, кл. А 61 К 35/16, 1976.