SU1602867A1 - Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа - Google Patents
Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа Download PDFInfo
- Publication number
- SU1602867A1 SU1602867A1 SU884620831A SU4620831A SU1602867A1 SU 1602867 A1 SU1602867 A1 SU 1602867A1 SU 884620831 A SU884620831 A SU 884620831A SU 4620831 A SU4620831 A SU 4620831A SU 1602867 A1 SU1602867 A1 SU 1602867A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- human
- iii
- cells
- monoclonal antibodies
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к гибридомной технологии и может быть использовано в медицине и биологии. Целью изобретени вл етс получение штамма гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L, продуцирующего моноклональные антитела (МОН АТ) к человеческому коллагену I и III типа. Штамм получают гибридизацией клеток селезенки мыши линии BALB/C, иммунизированной человеческим коллагеном I типа, с клетками миеломы мыши Х63 Р3/Ад 8.653. Штамм депонирован под номером ВСКК(П) N163 Д. Гибридому культивируют в среде ДМЕМ с бикарбонатом и 20% тел чьей эмбриональной сывороткой, 2 мМ L-глутамина, 2 мМ пирувата натри , 100 мкг/мл канамицина, 5 мкг/мл фунгизона, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола при 37°С в атмосфере 5% CO2. Штамм продуцирует МОН АТ класса YGM, которые специфически св зываютс с человеческими коллагенами I и III типов. На 3-4 день культивировани концентраци МОН АТ составл ет 1-10 мкг/мл в культуральной среде и 10-30 мг/мл в асцитной жидкости.
Description
Изобретение относитс к гибридом- ной технологии и может быть использовано в медицине и биологии. «
.Цель изобретени - получение штамма гибридных культивируемых клеток животных MUS mussuius L, продуцирующего моноклональные антитела к человеческим коллагенам I и III типов.
Штамм получают следующим образом. Мышей линии BALB/C иммунизируют подкожно введением 50 мкг человеческого коллагена I типа в 0,5 мл полного адьюванта Фрейнда. Через 10 и
20 дней-после первого введени провод т дополнительные иммунизации аналогичным образом. Через 3 дн после .последней иммунизации иммунных мьш1ей забивают, 15x10 клеток селезенки- гибридизуют с 5х10 -клеток миеломы мьшш X63.P3/Ag 8. 653 в течение 1 мин в присутствии 0,7 мл раствора, содержащего 45% (по объему) полиэтиленгли- кол (НЭГ) мол.массы 1000 и 15% диме- тилсульфрксида. Посл е гибридиз.ации и отмьшки клеток средой DMEM от НЭГ клетки высевают в 96-луночные панели
О5
о
NP
00 «35
31602867
о 1x10® клеток в лунку. Дл культи- цровани и селекции гибридов испольуют среду DMEM с добавлением ,20% эмриональной коровьей сыворотки, 2 мМ , -глутамина, 10 мМ пирувата натри , 100 мкг/мл канамицина, 5 мкг/мл фун- изона, 0,05 мК 2-14еркаптоэтанола, ,15% гидрокарбоната натри , 100 мкК ипоксантина, 0,4 мкМ аминоптерина, Q 16 Ml-I тимидина в атмосфере 5% углекисого газа при 37 С. .
С помощью иммуноферментного метода отбирают гибриды по способности проуцировать антитела к коллагенам 1 и III типов. Отобранные гибриды дважды клонируют методом конечных разведений . После повторного клонировани практически 100% субклонов продуцируют антитела к коллагенам. Продукци 20 этих антител сохран етс , по крайней мере, до 50 пассажа. .
Условное наименование нового штамма НС1.
Условное наименование-антител, .и через тезируемых .штаммом НС1, АмС1 ,Ытамм депонирован вспециализиро- ванной коллекции перевиваемых соматических .клеток позвоночных Всесоюзной коллекции клеточных культур под номе- Q ром BCKK(II) № 163Д и. характеризуетс следующими свойствами. Культуральные свойства. Культивирование гибридных клеток провод т в пластиковых флаконах. Посевна доза.100 тыс. клеток в 1 мл, плотность в монослое 1x10 клеток на 1 кв.см. Культуру-пассируют как суспензионную в дозе 100 тыс. клеток в 1 мл 1 раз в 5 дней или в дозе более 100 тыс. клеток в 1 мл 1 раз в 3 дн Через 3-4 дн в культуральной.среде можно .обнаружить моноклональные антитела к коллагенам, концентраци кото- рых составл ет НЮ мкг/мл в зависи- мости от посевной-дозы.
Станд ни , Сре тел чьей 2 мМ L-г ри , 100 фунгизон при 37 С газа.
Харак штамма. ные. анти класса М св зываю нами I и вительн ци . Кл 1x10 кл рогатого метилсул лах. Зам коробке толщиной лами ос
35
40
кий азо
Разм вод ной ность п ма по составл Конт ри ми и на при севах н микопла
Пр зывани . III, IV бумином
Взаи личными иммуноф
На д с .роловой торыми Дл это раствор в 200 м воре, р при забуфер ром (ЭФ 140 мМ в чейк 5 ной сре ЭФРТ, с титело и инкуб
- Клетки штамма культивируют также в организме животных. Интактным мышам линии BALB/C за 10 дней до иъек- ции штамма ввод т внутрйбрюшинно (в/бр) по 0,5 мл пристана. Штамм инъецируют в/бр. по (1-5) х 10 кле- foK в Гмл среды,Игла. Асцит образовываетс через 8-12 дней. Концентраци антитела в асцитной жидкости 10- 30 мг/мл. Возможна, по крайней мере, двукратна перевивка штамма с сохранением продукции антител.
Стандартные услови культивировани , Среда ДМЕМ с бикарбонатом и 20% тел чьей эмбриональной сыворотки, 2 мМ L-глутамина, 2 мМ пирувата натри , 100 мкг/мл канамицина, 5 мкг/фл фунгизона, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола при 37 С в атмосфере 5% углекислого газа.
Характеристика полезного продукта штамма. Итамм продуцирует моноклональные . антитела - иммуноглобулины мьшш класса М. Эти антитела специфически св зываютс с человеческими коллагенами I и III типов. В пределах чувствительности использованных консерваци . Клетки штамма консервируют по 1x10 клеток/мл сыворотки крупного рогатого скота с добавлением 10% ди- метилсульфоксида в пластиковых ампулах . Замораживание ампул провод т в коробке из вспененного полистирола с толщиной стенок 1 см. Коробку с ампулами оставл ют при температуре -70 С
.и через
Q
5
0
1 сут перенос т ампулы в жидкий азот дл хранени .
Размораживание провод т быстро в вод ной бане при .. Жизнеспособность после размораживани , оцениваема по включению трипанового синего, составл ет не менее 60%. Контаминаци . Контаминаци бактери ми и грибами в культуре не обнаруже на при длительном наблюдении и при посевах на питательные среды. Заражение микоплазмами не вы влено.
Пример 1. Определение св зывани антител AmCl с коллагенами I, .III, IV и V типов, фибриногеном, альбумином и фибронектином человека.
Взаимодействие антител АмС1 с раз- личными антигенами изучают с помощью иммуноферментного метода.
На дно чеек 96- чеечной полисти- с .роловой панели сорбируют белки, с которыми определ ют св зывание антител. Дл этого в чейки внос т по 50 мкл раствора белка с концентрацией 10 мг/мл в 200 мМ бикарбонатном буферном растворе , рН 9,0, и оставл ют на 16 ч при . После п тикратной промывки забуференным физиологическим р аство- ром (ЭФРТ), содержащим 5 NaH2P04, 140 мМ NaCl, 0,05% твина 20, рН 7,4, в чейки внос т по 50 мкл культураль- 5 ной среды от штамма НС1 или раствора ЭФРТ, содержащих моноклональное антитело АмС1 в различной концентрации, и инкубируют 30 мин при 37 С. Несв
51
завшиес антитела отмывают ЭФРТ 5 ра в чейки внос т ковалентно св занные с пероксидазой хрена антитела кролика против иммуноглобулинов мьппи в ко центрации 5 мкг/мл в 50 мкл раствора ЭФРТ. Через 30 мин инкубации при несв завшиес антитела отмывают указанным вьше способом, а количество оставшейс в чейках пероксидазы, пропорциональное количеству молекул антител АмС1, определ ют,по расщеплению субстрата дл пероксидазы (HjOj) в присутствии хромогена - ор- тофенилендиамина. Реакцию останавливают добавлением 50%-ной серной кислоты до конечной концентрации 5%. Интенсивность окрашивани измер ют на микроспектрофотометре при длине волны 490 нм.
Результаты свидетельствуют о высокой специфичности взаимодействи антител с коллагенами I и III типов в диапазоне исследованных концентраций
Перекрестна реакци антител с основными компонентами.соединительной ткани и межклеточного матрикса отсутствует , следовательно, полученные aii- титела можно использовать дл исследовани синтеза и экспрессии коллагеном различными клетками чело1зека при культивировании их in vitro дл изучени распределени коллагепоп в различных органах и ткан х человека п иммуногистологических исследовани х как в норме, так и при патологии.
Пример 2. Определение св зывани антител а АмС1 с коллагенами .1, III типов человека в присутствие плазмы крови человека.
Сорбцию коллагенов на подложку и исследование реакции взаимодействи провод т, как указано в примере 1.
Иммобилизованные человеческие коллагены I или III типов инкубируют в
-плазме крови человека или в растворе ЭФРТ 1 ч при З7 с. После этого к коллагенам добавл ют антитела АмС1 в различной концентрации соответственно в плазме крови или в ЗФРТ.
Из f aHHbix этого примера следует, что присутствие плазмы крови не измен ет св зывани исследуемых антител с коллагенами I и III типов по сравнению со св зыванием в растворе ЭФРТ .и, следовательно, антитела АмС1 могут быть использованы дл визуализации мест экспонировани в кровеносном русле коллагенов I и/или III типов и -до ставки в места экспонировани различных эффекторов.
Таким образом предлагаемый штамм RC1 имеет следующие преимущества: синтезирует моноклонапьные антитела, взаимодействующие с интерстициальными человеческими коллагенами I и III ти- noBj плазма крови не вли ет на взаимодействие антител АмС1 с коллагенами I и III типов.
Результаты приведенных примеров однозначно свидетельствуют о высокой специфичности моноклонального антитела АмС1, вырабатываемого штаммом ПС1, и показывают возможность использовани указанного антитела дл исследовани синтеза и экспрессии коллагенов различными клетками человека при культивировании их дл изучени распределени коллагенов в различных органах и ткан х человека п иммуногистологических исследовани х, как в норме, так и при патологии.; дл визуализации мест экспонировани в кровеносном русле коллагенов I и/или III типов и доставки в места экспонировани различных Э(3)фектов. Таким образом, предлагаемое моноклональное антитело име ет большое практическое значение и может быть использовано в самом широком круге задач, св занных с проблемами биологии и медицины;
Claims (1)
- Формула изобретениШтамм гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus L,, ВСКК(П) N 163Д, используемый дл по лучени моноклональных антител.к человеческому коллагену I и III типа.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884620831A SU1602867A1 (ru) | 1988-12-15 | 1988-12-15 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884620831A SU1602867A1 (ru) | 1988-12-15 | 1988-12-15 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1602867A1 true SU1602867A1 (ru) | 1990-10-30 |
Family
ID=21415410
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884620831A SU1602867A1 (ru) | 1988-12-15 | 1988-12-15 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1602867A1 (ru) |
-
1988
- 1988-12-15 SU SU884620831A patent/SU1602867A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Macarak F. J.., Howard P. s. Lally E. T. - J. Hist CyT, 1986/ V..34, 8, 1003-101J. . * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU1602867A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа | |
SU1514769A1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ: КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ ΜΙΙ5 МиЗОТ ПК-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ОДНОЦЕПОЧЕЧНОМУ АКТИВАТОРУ ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНО | |
SU1602866A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа | |
SU1500669A1 (ru) | ыгБФФ їЛєЧЛјИпз ТлОогЛВЛЧлЕФпз ТОЕгЦТ мЛВЦгИпз Фдв ФдвГдУдв ` ЬЧЦјл»ЕИг ФЦИЦТОЦИБОоИпз БИгЛгЕО Т юЕОЦВЕюЕГТЦФл ЦјИЦ»ЕЬЦюЕюИЦФл БТгЛВБгЦЧл ЬОБъФЛИЦїЕИБ лЧЦТЛИБъИЦїЦ гЛЬБ | |
SU1555360A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека | |
RU2003681C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к @ -цеп м IG человека | |
RU2265658C2 (ru) | Штамм гибридных клеток животного mus musculus l. 9e2, используемый для получения моноклональных антител к белку e вируса западного нила штамм wnv/leiv-vig99-27889 | |
SU1413132A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к митохондриальной креатинфосфокиназе человека | |
SU1315473A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши @ @ ,используемый дл получени моноклональных антител к ангиотензинпревращающему ферменту легких человека | |
SU1604849A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., продуцирующий моноклональные антитела к бактери м рода BRUceLLa | |
SU1445184A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS ВСКК (П) N 62 D, используемый дл получени моноклональных антител к МYсовастеRIUм тUвеRсULоSIS | |
SU1402617A1 (ru) | Способ получени моноклональных антител к легким @ -Цеп м иммуноглобулинов человека | |
SU1496266A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS - продуцент моноклональных антител против ангиотензин-превращающего фермента из легких человека | |
SU1416509A1 (ru) | Способ получени моноклональных антител к легким @ -Цеп м иммуноглобулинов человека | |
RU2008350C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к jgg человека | |
SU1744112A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L - продуцент моноклонального антитела к щелочной фосфатазе тюлен | |
CN104293738A (zh) | 一种抗人FcεRⅠα亚基单克隆抗体及其应用 | |
SU1445183A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к МYсовастеRIUм воVIS (BCG) | |
SU1595903A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. продуцент моноклональных антител к инсулину | |
SU1513030A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к липопротеидам низкой плотности плазмы крови человека | |
SU1742326A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к МYсовастеRIUм воVIS | |
RU2265051C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus l. pkkk (п) 679d-продуцент моноклональных антител, специфичных к белково-полисахаридному антигену yersinia enterocolitica о3 и о9 сероваров | |
Lammerding-Köppel et al. | 20-OH-Ecdysone-induced morphogenetic movements in a Chironomus cell line are accompanied by expression of an embryonic muscarinic system | |
RU2542381C2 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ mus musculus α-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К ГРАНУЛОЦИТАРНОМУ КОЛОНИЕСТИМУЛИРУЮЩЕМУ ФАКТОРУ (GCSF) ЧЕЛОВЕКА | |
RU2380413C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 6G2 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К БЕЛКУ ТЕПЛОВОГО ШОКА 70 |