SU1602866A1 - Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа - Google Patents
Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа Download PDFInfo
- Publication number
- SU1602866A1 SU1602866A1 SU884620265A SU4620265A SU1602866A1 SU 1602866 A1 SU1602866 A1 SU 1602866A1 SU 884620265 A SU884620265 A SU 884620265A SU 4620265 A SU4620265 A SU 4620265A SU 1602866 A1 SU1602866 A1 SU 1602866A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- monoclonal antibodies
- collagen
- cells
- human
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к гибридомной технологии и может быть использовано в медицине и биологии. Целью изобретени вл етс получение штамма гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L, продуцирующего моноклональные антитела к человеческому коллагену IY типа. Штамм получают гибридизацией клеток селезенки мыши линии BALB/C, иммунизированной человеческим коллагеном IY типа, с клетками миеломы мыши Х63.Р3/Ад 8.653. Штамм депонирован под номером ВСКК(П) 164Д. Гибридому культивируют в среде ДМЕМ с бикарбонатом и 20% тел чьей эмбриональной сывороткой, 24 мМ L-глутамина, 2 мМ пирувата натри , 100 мкг/мл канамицина, 5 мкг/мл фунгизона, 0,05 мМ 2-меркаптоэтанола при 37°С в атмосфере 5% CO2. Штамм продуцирует моноклональные антитела класса I дМ, которые специфически св зываютс с человеческим коллагеном IY типа. На 3-4 день культивировани концентраци моноклональных антител составл ет 1-10 мг/мл в культуральной жидкости и при культивировании в организме животного в асците - 10-30 мг/мл.
Description
Изобретение относитс к гибридом- ной технологии и может быть использовано в меди1щне и биологии.
Цель изобретени - получение штамма гибридных культивируемых клеток животных MUS musculus L, продуцирующего моноклональные антитела к человеческому коллагену IV типа.
Штамм получают следующим образом.
Мышей линии BALB/C иммунизируют подкожно введением 50 мкг человеческого коллагена IV типа в 0,5 мл полного адьюванта Фрейнда. .Через 10 и 20 дней после первого введени провод
д т дополнительные иммунизации аналогичным образом. Через 3 дн после последней иммунизаи 1и иммунных мкпией -забивают , 15x10 клеток селезенки гиб- ридизуют с 5x10 клеток миеломы мыши X63.P3/Ag.8.653 в течение 1 мин в г . присутствии 0,7 мл раствора, содержащего 50% (по объему) полиэтиленглико- ла (ЦЭГ) мол.массы 1000 и 15% диметнл сульфоксида. Цосле гибридизации и отмывки клеток средой DMEM от ЦЭГ клетки высевают в 96-луноч}1ые панели по 1x10 клеток в лунку. Дл культивировани и селекции гибридов используют
О5
о ю
00
о о
3160
среду DMEM с добавлением 29% эмбриональной коровьей сыворотки, 2 мМ L- глутамина, 10 мМ пирувата на ГЕри -,, 100 мкг/мл канамицина, 5 м аЕЧ}4нл зона 0,05 мМ 2-меркаптоэта :сща,.. 0„ гидрокарбоната натри , 100 мйй иипо- ксантина, 0,4 мкК аминоптери з, мМ тимидина в атмосфере 5% ур-1твКиез1,о:го газа при 37 С.
Гибриды отбирают по спасюйюэзе ш продуцировать антитела к тк актека, Отобранные гибриды двалд ы ЩЕешвщааш методом конечных разведений. повторного клонировани пражфийееки 100% субклонов продуцируют а т-итела к коллагенам. Продукци эт-и-х антител сохран етс , по крайней мере, до 50 пассажа.
Условное наименование штамма НС4.
Условное наименование ан Твйг.егь, синтезируемых штаммом НС4, РмСА, .
Штамм депан ирован во В&ет эюз ой коллекции клеточных культзФ шщ .н-апо- ром ВСКК(П) № и ка рале-11@ри уеФс следующими свойствами.
Культуральные свойства. Культивирование гибридных клеток НС4 провод т в пластиковых флаконах. Посевна доза 100 тыс. клеток в 1 мл плотность в монослое 1x10 клеток/мл Культуру пассируют как суспензионную в дозе 100 тыс.клеток в 1 мл 1 раз в 5 дней или в дозе более lOO тыс„клеток в 1 мл 1 раз в 3 дн . Через 3-4 дн в культуральной среде можно обнаружить моноклон ал ьные антитела к коллагену, концентраци которых составл ет 1-10 мг/мл в зависимести от посевной дозы.
Клетки штамма НС4 культив и;р.у ЮТ также в организме животных. Ингажтньда Мышам линии BALB/C -за 10 дней до инъе-к- ции штамма ввод т внутрибрюшннмо (в/бр) по 0,5 мл пристана. Ш1гамм инъ- ецируют в/бр. по (1-5) X 10 israeTOK в 1 мл среды Игла. Асцит образуемс че- .рез 8-.12 дней. Концентраци аштшфела в асцитной жидкости 10-30 мг/м .. Возможна , по крайней мере, дву ёршрша перевивка штамма с сохранедвем продукции антител.
Стандартные услови кульдает рова- ни . Среда DMEM с бикарбонатом и 20% тел чьей эмбриональной сыворотки, 2 м L-глутамина, 2 мМ пирувата натри , 100 мкг/мл канамицина, 5 мкг/мл фун- гизона, 0,05 мМ 2-7меркапт0эФа «ла пр . 37°С в атмосфере 5% углекислого газа
0
0
5
л
5
40
45
50
Хара ктеристика полезного продукта штамма. ЫФамм продуцирует монрклог- нальные аититела - иммуноглобулины мыши класса К. Эти антитела специфически св зываютс с человеческими коллагеном IV типа, с незначительной пе- рекр.естной реакцией с коллагеном Г типа . В пределах чувствительности ис- польз.ова«ных ме тодов не обнаружено св зьшаН йе с человеческими альбумином, .инчэр©Н ОМ, фибронектином и коллаге нами IM. и V типов. Присутствие плазмы кf)J©ви №& вли ет на взаимодействие мон окло нальных антител с человеческим к-оллаге«0м IV типа.
КлетК И штамм-а консервируют по 1 х X 10 клеток/мл сыворотки крупного рогатого скота с добавлением 10% ди- метилсульфоксида в пластиковых ампулах . Замораживание ампул провод т в коробке из вспененного полистирола с толщиной стенок 1 см. Коробку с ампулами оставл ют при -70°С. и через 1 сут пере-нос -т ампулы в жидкий азот дл хфа-н-ени .
Размораживание провод т быстро в вод ной бане при . Жизнеспособность после размораживани , оцениваема по включению трипанойого синего, составл ет не менее 60%.
Контаминацию бактери ми и грибами в культуре не обнаруживают при длительном наблюдении и при посевах на питательные среды. Заражение микоплаз мами не вы влено методом гибридизации клеточной ДНК с универсальным диагностическим зондом (плазмидой PMG16), содержа.щим фрагмент рибосомного гена, общего дл всех видов микоплазм.
Пример 1. Определение св зывани антител АмС4 с коллагенами I, III, IV и V типов, фибриногеном, альбумином и фибронектином человека.
№а дно чеек 96- чеечной полистироловой панели сорбируют белки, с которыми определ ли св зывание антител. Дл этого в чейки внос т по 50 мкл раствора белка с концентрацией 1-0 м кг/м-л в 200 мМ бикарбонатном буферном растворе, рН 9,0 и оставл ют на 1-6 ч при . После п тикратной промывки з-абуфе:ренным физиологическ раствором (ЭФРТУ, содержащим 5 мМ NaHjF04, 140 мМ NaCl, 0,05% твина 20, рН 7,4, в чейки внос т по 50 мкл культуральной среды от штамма НС4 или р аствора ЭФРТ, содержащих могоклональ- ное антитело АмС4 в различной концентрации , и инкубируют 30 мин при . Несв завпшес антитела отмывают ЭФРТ 5 раз, в чейки внос т ковалентно св занные с пероксидазой хрена антитела кролика против иммуноглобулинов мыши с концентрацией 5 мкг/мл в ,50 мкл раствора ЗФРТ. Через 30 мин инкубации при нecв зaвшIiec антитела от мывают указанным выше способом, а количество оставшейс в чейках перок- сидазы, пропорциональное количеству молекул антител АмСА, определ ют количественно по расщеплению субстрата дл пероксидазы (HjOj) в присутствии хромогена - ортофенилендиамина. Реакцию останавливают добавлением 50%-ной серной кислоты до конечной концентра- ции 5%.
Положительна реакци про вл етс изменением окрашивани от желтого до коричневого и просчитываетс на спектрофотометре при длине волны 490 им.
Результаты примера 1 свидетельствуют о высокой специфичности взаимодействи антител с коллагеном IV типа в диапазоне исследопанных концентраций . Наличие некоторой перекр СТ 1ой реакции с коллагеном 1 тигга не может служить преп тствием при использовании антител АмС4 дл вы влени багзаль- ной мембраны ввиду отсу,тстии is ба- зальной мембране коллагена 1 типа.
И.р и м е р 2, Определение сп зы- вани антител АмСА с человечрск)1м кол лагеном IV типа в присутствии плазмы крови человека.
Антитела АмСА инкубируют в плазме крови или в ЭФРТ 30 мин при 37°С и
затем добавл ют к коллагену. Дальней шие определени провод т аналогично описанным в примере 1,
Из данных примера 2.следует, что присутствие плазмы крови, по сравнению с раствором ЭФРТ, не измен ет св - зьгоани исследуемых антител с коллагеном IV типа.
Результаты приведенных примеров однозначно свидетельствуют о высокой специфичности моноклонального антитела АмСА, вырабатываемого штаммом НСА, и показывают: возможность использовани указанных антител дл типировани опухолей, вы влени мест инвазии опухолевых клеток .в стенках сосудов; дл исследовани синтеза и экспрессии колг лагена IV типа различными клетками человека при культивирова П1и их in vitro; дл изучени распределе1ги коллагена IV типа в различных органах и ткан х человека в иммуногистологичес- ких исследовани х, как в норме, так и при патологии.
Таким образом, предлагаемое моно- клона;п ное антитело имеет большое практическое значение и может быть использовано и самом широком круге задач , сп ланных с проблемами биологии и медицины.
Claims (1)
- Формула изобретени5050Штамм гибридных культивируемых кле- 35 ток ЖИ1ЮТНЫХ Mas miisculus L. BCKK(II) N 16AI), используемый дл получени моноклонал1)Ных антител к человеческому коллагену IV типа.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884620265A SU1602866A1 (ru) | 1988-12-15 | 1988-12-15 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884620265A SU1602866A1 (ru) | 1988-12-15 | 1988-12-15 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1602866A1 true SU1602866A1 (ru) | 1990-10-30 |
Family
ID=21415157
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884620265A SU1602866A1 (ru) | 1988-12-15 | 1988-12-15 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1602866A1 (ru) |
-
1988
- 1988-12-15 SU SU884620265A patent/SU1602866A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Madre J. А., Furtlmayr Н. - Amer. J. Pathol, 1979, v. 94, 322 - 332. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
SU1602866A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену IY типа | |
SU1602867A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к человеческому коллагену I и III типа | |
CN116143917A (zh) | 一种抗d-二聚体的抗体及其制备方法和用途 | |
SU1362746A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к поверхости эндотелиальных клеток пупочной вены человка | |
SU1514769A1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ: КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ ΜΙΙ5 МиЗОТ ПК-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ОДНОЦЕПОЧЕЧНОМУ АКТИВАТОРУ ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНО | |
SU1496266A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS - продуцент моноклональных антител против ангиотензин-превращающего фермента из легких человека | |
SU1413132A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к митохондриальной креатинфосфокиназе человека | |
SU1312097A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши @ @ ,используемый дл получени моноклональных антител к ангиотензин-превращающему ферменту легких человека | |
SU1308625A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши @ @ ,используемый дл получени моноклональных антител к ангиотензинпревращающему ферменту легких человека | |
RU2265051C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus l. pkkk (п) 679d-продуцент моноклональных антител, специфичных к белково-полисахаридному антигену yersinia enterocolitica о3 и о9 сероваров | |
SU1315473A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши @ @ ,используемый дл получени моноклональных антител к ангиотензинпревращающему ферменту легких человека | |
RU2525663C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 2F9-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К ЛИЗОСТАФИНУ И ИНГИБИРУЮЩИХ ЕГО ЛИТИЧЕСКУЮ АКТИВНОСТЬ | |
SU1521776A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS - продуцент моноклонального антитела, нейтрализующего биологическую активность человеческого фактора некроза опухолей-альфа | |
SU1604849A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., продуцирующий моноклональные антитела к бактери м рода BRUceLLa | |
SU1555360A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека | |
SU1500669A1 (ru) | ыгБФФ їЛєЧЛјИпз ТлОогЛВЛЧлЕФпз ТОЕгЦТ мЛВЦгИпз Фдв ФдвГдУдв ` ЬЧЦјл»ЕИг ФЦИЦТОЦИБОоИпз БИгЛгЕО Т юЕОЦВЕюЕГТЦФл ЦјИЦ»ЕЬЦюЕюИЦФл БТгЛВБгЦЧл ЬОБъФЛИЦїЕИБ лЧЦТЛИБъИЦїЦ гЛЬБ | |
RU2003681C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L., используемый дл получени моноклональных антител к @ -цеп м IG человека | |
RU2265658C2 (ru) | Штамм гибридных клеток животного mus musculus l. 9e2, используемый для получения моноклональных антител к белку e вируса западного нила штамм wnv/leiv-vig99-27889 | |
SU1416509A1 (ru) | Способ получени моноклональных антител к легким @ -Цеп м иммуноглобулинов человека | |
CN106924758A (zh) | 一种用于多发性骨髓瘤的生物标志物 | |
SU1571063A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека | |
SU1446154A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к мембранному белку ЕSснеRIснIа coLI в препарате рекомбинантного интерлейкина-2 человека | |
SU1712412A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L - продуцент моноклонального антитела к пирофосфатазе ЕSснеVIнIа coLI | |
RU2380413C1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ Mus musculus 6G2 - ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ, СПЕЦИФИЧНЫХ К БЕЛКУ ТЕПЛОВОГО ШОКА 70 | |
SU1595903A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. продуцент моноклональных антител к инсулину |