SU1571063A1 - Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека - Google Patents
Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека Download PDFInfo
- Publication number
- SU1571063A1 SU1571063A1 SU884456403A SU4456403A SU1571063A1 SU 1571063 A1 SU1571063 A1 SU 1571063A1 SU 884456403 A SU884456403 A SU 884456403A SU 4456403 A SU4456403 A SU 4456403A SU 1571063 A1 SU1571063 A1 SU 1571063A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- interferon
- cells
- mon
- strain
- medium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к биотехнологии и может быть использовано дл определени содержани γ-интерферона в биологических жидкост х и в культуральной среде. Целью изобретени вл етс получение штамма гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS, продуцирующего моноклональные антитела (Мон АТ), специфичные к γ-интерферону человека. Штамм получают гибридизацией клеток селезенки мышей, линии BALB/с, иммунизированных рекомбинантным γ-интерфероном человека, с клетками миеломы SP2/О AG 14. Клетки культивируют в среде RPMI 1640 с добавлением некоторых аминокислот, а также 50 мкМ 2-меркаптоэтанола и 10% сыворотки плода коровы при 37°С в атмосфере 5% CO2. Клетки пассируют 2-3 раза в неделю
кратность рассева 1:2. Штамм продуцирует Мон АТ, относ щиес к классу IG G. Секреци Мон АТ на третий-четвертый день культивировани составл ет 3-10 мкг/мл среды и 3-5 мг/мл асцитической жидкости. Мон АТ специфически взаимодействует с γ-интерфероном человека, а также с рекомбинантным γ-интерфероном.
Description
Изобретение относитс к области биотехнологии и может быть использовано дл определени содержани у-интерферона в биологических жидкост х и в культуральной среде.
Целью изобретени вл етс получение штамма гибридных культивируемых клеток животных Mus musculus - продуцента моно- клональных антител (Мои AT), специфичных к у-интерферону человека.
Штамм получают следующим образом.
Клетки мышиной миеломы SP2/0. Ад 14 гибридизуют с клетками селезенки мыши линии BALB/c, иммунизированной реком- бинантным у -интерфероном человека по схеме, обеспечивающей максимальный иммунный ответ дл слабых антигенов. Предварительно подбирают оптимальные услови дл сли ни спленоцитов с клетками миэломы, что обеспечивает высокую степень гибридизации клеток. В результате селекции полученных гибридных клеток на среде ГАТ, скрининга гибридов по признаку продукции антител к у -интерферону и последующего клонировани отбирают штамм 159Д (авторское наименование у-745), стабильно продуцирующий Мон AT к у-интерферону .
Штамм хранитс в специализированной коллекции клеточных культур Института цитологии АН СССР - ВСКК(П). Регистрационный номер депонировани 159Д. К моменту
сл
VI
о
( со
депонировани штамм продуцирующий Мои АТ шел 15 пассажей. Культуральные признаки. Стандартные услови культивировани - среда RPM1 1640 с добавлением следующих аминокислот, мг на 1 л среды: L-аланина 8,9; L-аспараплна; Н2015.0; L-аспарэгино- вой кислоты 13,0; глицина 7,5; L-глютамино- вой кислоты 14,7; L-пролина 11,5; L-серина 10,5, а также 50 мкм 2-меркаптоэтанола и 10% сыворотки плода коровы.
Клетки культивируют в пластиковой или стекл нной посуде в закрытой системе или в атмосфере 5%-ной СОа при 27°С. При росте на указанной среде штамм образует округлые клетки. Врем удвоени попул ции 24-30 ч. Клетки пассируют 2-3 раза в неделю . Кратность рассева 1:2.
Культивирование в организме животных . Прививка гибридных культивируемых клеток штамма 159Д сингенным мышам линии BALB/c вызывает у них образование асцитной опухоли. В асцитной жидкости содержатс Мон AT ку-интерфероны. Способность к продукции Мон AT стабильно сохран етс на прот жении по крайней мере 15 пассажей в культуре и 2 пассажей при перевивках на животных (срок наблюдени ), а также при переводе асцитных клеток на обычную ростовую среду. Штамм продуцирует Мон AT, относ щиес к классу IgG. Продуктивность штамма. При стандартных услови х культивировани штамма 159Д продуцирует Мон AT в количестве 3-10 мкг/мл среды в зависимости от условий культивировани . Решающее значение имеет качество сыворотки плода коровы.
При культивировании штамма 159Д п vivo от одной мыши можно получить 3-7 мл асцитической жидкости (в среднем 5 мл) с содержанием Мон AT к у -интерферону 3-5 мг/мл (в среднем 4 мг/мл).
Дл получени больших количеств Мон AT целесообразно использовать культивирование штамма In vivo с последующим извлечением Мон AT из асцитической жидкости.
Криохонсерваци проводитс в смеси равных объемом кондиционированной ростовой среды и 20%-ного диметилсульфокси- да на ростовой среде при концентрации 0,5 -1-106 клеток в 1 мл. Режим замораживани : 1° в мин от 20° до минус 60°С, 10° в мин от минус 60° до 100°С, 50° в мин от минус 100° до минус 150°С. Клетки хран т в жидком азоте. Отогревают при 40°С в течение 1-2 мин; далее разбавл ют 10-кратным объемом среды, центрифугируют 5 мин при
1000 об/мин и высевают в ростовую среду. Жизнеспособность клеток штамма 159Д после размораживани , определенна по включению трипанового синего, 60-70%. Контаминаци . Бактерии и грибы в культуре не обнаружены. Микоплазма не вы влена по включению тимидиновой метки.
Пример. Кажда мышь линии BALB/c предварительно получает внутрибрюшинно 0 по 0,5 мл пристана. Через 8-10 дней подготовленным таким образом животным внутрибрюшинно ввод т гибридные клетки, полученные из асцитической жидкости мышей - носителей опухоли. Дл этого из 5 брюшной полости мыши извлекают 5,2 мл асцитической жидкости, которую стерильно центрифугируют 7 мин при 1000 об/мин на центрифуге К-23. Осадок клеток отмывают стерильным фосфатным буферным раство- 0 ром (0,02 М фосфатный буфер с 0,14 М NaCI, рН 7,2) и повторно центрифугируют в том же режиме. Осадок ресуспендируют в 1,5 мл фосфатного буфера и провод т подсчет клеток в камере Гор ева. Каждой из трех вз тых 5 в опыт мышей ввод т 2,5x10 клеток в объеме 0,5 мл. Спуст 9 дней мышей забивают и из брюшной полости извлекают асцитиче- скую жидкость. Всего от трех мышей получено 14,9 мл асцитичес кой жидкости (3,8 + 4,9 0 +6.2).
Клетки из асцитической жидкости отдел ют центрифугированием и используют дл дальнейших перевивок гибридомы, а из насадочной жидкости извлекают Мон AT. 5 С помощью стандартного твердофазного иммуноферментного метода установлено , что полученна асцитическа жидкость содержит Мон AT к у - интерферону. К препарату у-интерферона, собированному 0 в лунках платы дл иммунологических исследований , добавл ют разведенную асци- тическую жидкость. После инкубации и соответствующих отмывок в лунки добавл ют коньюгированные с перексидазой хрена 5 кроличьи антитела и против мышиных иммуноглобулинов . По окончании фермента- тивной реакции расцеплени N262 в присутствии диаминобензимида развивающуюс окраску регистрируют на спектрофотометре 0 Мультискан при длине волны 450 нм. Св зывание Мон AT с интерфероном обнаружено при разведении асцитической жидкости до Ю 5.
Дл получени Мон AT из асцитической 5 жидкости иммуноглобулины осаждают сульфатом аммони до 50% насыщени . Осадок отдел ют центрифугированием, раствор ют в 20 мМ фосфатного буфера с 0,14 М NaCI и обессоливают на колонке РД 10. Белковый
раствор нанос т на колонку моно QHR 5/5, вл ющуюс частью системы быстрой жидкостной хроматографии. За один проход из раствора иммуноглобулинов, соответствующего 0,5 мл асцитической жидкости, элюи- руют 2 мг Мон AT. Таким образом, при культивировании гибридомы штамма 159Д в виде асцитной формы опухоли выход Мон AT около 20 мг/мышь. ч
Характеристика Мон AT, продуцируемых штаммом гибридомы 159Д.
Мон AT, секретируемые в асцитическую жидкость клетками гибридомы штамма 159Д, св зываютс как с нативным у-интер- фероном человека, полученным из донорской крови, так и с рекомбинантным у-интерфероном, полученным от бактериальных процуцентов. Св зывание Мон AT с указанными препаратами у-интерферона установлено в тесте твердофазного иммуно- ферментного анализа, а также методом им- муноблотинга.
По данным электрофореза в полиакри- ламидом геле Мон AT, продуцируемые клетками гибридомы штамма 159Д, относ тс к классу IgG.
Характерной особенностью Мон AT, продуцируемых гибридомой 159Д, вл етс
то, что они узнают в молекуле рекомбинан- тного у-интерферона эпитоп, локализованный вне С-концевой последовательности из 15 аминокислот.
Друга особенность Мон AT состоит в
том, что они оказываютс способными взаимодействовать с у-интерфероном, уже сорбированным на других Мон AT (полученных от гибридомы штамма 158Д). Это обсто тельство открывает возможность использовани антител, продуцируемых штаммом гибридомы 159Д, дл изготовлени тест-набора дл количественного определени у-интерферона в биологических жидкост х и
культуральной среде. При этом Мон AT, продуцируемые штаммом 159Д, должны использоватьс в иммуноферментном или радиоиммунном методах анализа в качестве вторых (верхних) или индикаторных антител
в виде конъюгата с ферментом или с радиоактивной меткой.
Claims (1)
- Формула изобретени Штамм гибридных культивируемых кле- ток животных Mus musculus BCKK (П)-159Д, используемый дл получени моноклональ- ных антител к у-интерферону человека.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884456403A SU1571063A1 (ru) | 1988-07-06 | 1988-07-06 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884456403A SU1571063A1 (ru) | 1988-07-06 | 1988-07-06 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1571063A1 true SU1571063A1 (ru) | 1990-06-15 |
Family
ID=21388019
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884456403A SU1571063A1 (ru) | 1988-07-06 | 1988-07-06 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1571063A1 (ru) |
-
1988
- 1988-07-06 SU SU884456403A patent/SU1571063A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
T.lmmun. Meth. 79, 1985, p. 293-305. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN1920011A (zh) | 识别增殖性人肝细胞的抗体、增殖性人肝细胞和功能性人肝细胞 | |
JPS60500864A (ja) | 近縁関係にあるが別個のタンパク質間に存在する共通決定基に対して特異的なハイブリド−マ抗体の製造および特性づけ | |
WO2021143157A1 (zh) | 用于检测刺参低聚肽的肽段、单克隆抗体、胶体金试纸条及检测方法 | |
Liedgens et al. | Highly efficient purification of the labile plant enzyme 5-aminolevulinate dehydratase (EC 4.2. 1.24) by means of monoclonal antibodies | |
SU1571063A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека | |
US4618585A (en) | Hybridoma cell lines producing monoclonal antibodies directed against cervical cancer cells | |
SU1567624A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -интерферону человека | |
Hokama et al. | Cross‐reactivity of ciguatoxin, okadaic acid, and polyethers with monoclonal antibodies | |
SU1445183A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к МYсовастеRIUм воVIS (BCG) | |
SU1446154A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к мембранному белку ЕSснеRIснIа coLI в препарате рекомбинантного интерлейкина-2 человека | |
SU1527260A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ - тимозину | |
SU1384614A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши мUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к урокиназе человека | |
SU1414870A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS ,используемый дл получени моноклональных антител к Са @ -АТФазе саркоплазматического ретикулума сердца собаки | |
SU1564184A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к гормону роста крупного рогатого скота | |
SU1645296A1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животных МUSмUSсULUS L - продуцент моноклональных антител против фактора Н @ эритроцитов крупного рогатого скота | |
SU1381158A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к урокиназе человека | |
SU1413132A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных мUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к митохондриальной креатинфосфокиназе человека | |
RU2342428C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных - продуцент моноклональных антител крысы к гипогликозилированным и дегликозилированным изоформам опухоль-ассоциированного антигена человека muci | |
SU1604849A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., продуцирующий моноклональные антитела к бактери м рода BRUceLLa | |
SU1514770A1 (ru) | ШТАММ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ ГИБРИДНЫХ клеток животных миз мизсиьиз-продуЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ ФАКТОРА V ЭРИТРОЦИТОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | |
SU1742326A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к МYсовастеRIUм воVIS | |
SU1446157A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS,используемый дл получени моноклональных антител к мембранному белку ЕSснеRIснIа coLI в препарате рекомбинантного интерлейкина-2 человека | |
SU1402617A1 (ru) | Способ получени моноклональных антител к легким @ -Цеп м иммуноглобулинов человека | |
RU2116344C1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животного mus. musculus - продуцент моноклонального антитела к термостабильному поверхностному антигену возбудителя мелиоидоза | |
SU1631075A1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител против альфа-фетопротеина человека |