SU1555360A1 - Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека - Google Patents
Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека Download PDFInfo
- Publication number
- SU1555360A1 SU1555360A1 SU884441161A SU4441161A SU1555360A1 SU 1555360 A1 SU1555360 A1 SU 1555360A1 SU 884441161 A SU884441161 A SU 884441161A SU 4441161 A SU4441161 A SU 4441161A SU 1555360 A1 SU1555360 A1 SU 1555360A1
- Authority
- SU
- USSR - Soviet Union
- Prior art keywords
- strain
- monoclonal antibodies
- gonadotropic hormones
- subunit
- man
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относитс к гибридомной технологии и может быть использовано дл иммунологического определени уровн гонадотропных гормонов в биологических жидкост х организма. Цель изобретени - получение штамма гибридных культивируемых клеток, продуцирующих моноклонольные антитела, специфичные к α-хорионическому, α-лютеинизирующему, α-фолликулостимулирующему и α-тиреотропному гонадотропинам человека. Штамм получен путем гибридизации клеток мышиной миеломной линии Х.63.AG8.653 с клетками селезенки мыши BALB/с, иммунизированной хорионическим гонадотропином человека. Штамм депонирован под номером ВСКК (П) N 235Д. Продуцирует моноклональные антитела JGG класса в количестве 10 мкг/мл культуральной среды и 7 мг/мл асцитической жидкости, титры антител 1:3000 и 2.105 соответственно, определенные в твердофазном ИФА.
Description
Изобретение относитс к гибридом- ной технологии и может быть использовано дл иммунологического определени уровн гонадотропных гормонов в биологических жидкост х организма.
Цель изобретени - получение штамма гибридных культивируемых клеток, продуцирующих моноклональные антитела (монАТ), специфичные к о(-хориони- ческому, civ-лютеинизирумщему, ликулостимулирующему и е(-тиреотроп- ному гонадотропинам человека.
Штамм получают следующим обра- эом.
В качестве антигена использован препарат хорионического гонадотро- пина человека (ХГЧ).
Мышей линии BALB/c иммунизируют внутрибрюшинно по следующей схеме: в 1-й день - 500 ед. препарата в смеси с полным абъювантом Фрейнда (ПАФ) на 14 и 28-й дни - по 250 ед. препарата с ПАФ, реиммунизаци на 56-й день - 2500 ед, препарата ХГЧ в забуфербн- ном физиологическом растворе хлорида натри . Через 72-96 ч после реимму- низации у мыши стерильно удал ют селезенку и готов т суспен ию спленоел ел ел
СО ©
цитов. Клетки селезенки мыши BALB/c иммунизированной препаратом ХГЧ, сливают (гибридизуют) с клетками мыши- ной миеломы X 63.Ag8.653. Сливающий агент ПЭГ-1500 (50% раствор). Селекцию провод т на среде HAT, два клонировани методом лимитирующего разведени (1 клетка на 3 лунки), 100% позитивных клонов.
Полученный штамм гибридных клеток обозначен D85 . Штамм хранитс в Специализированной коллекции перевиваемых соматических клеток позвоночных Всесоюзной коллекции клеточных культур под номером ВСКК (П) № 2351) и характеризуетс следующими признаками .
Культуральные признаки. Стандартные услови выращивани . Среда ДМЕМ+ + 10% фетальной сыворотки крупного рогатого скота (Fes) температура при культивировании 37 С, газова фаза - ,воздух +5% CO.J, Способ культивирова- ни - в пластиковых флаконах на 50- 250 мл, посевна доза 500.000 клеток/мл , кратность рассева 1:2, врем субкультивировани 3-4 дн .
В организме животного - мышь BALB/ обработанна приставом (0,5 мл в/бр. за 5-40 дней до инокул ции), доза инокул ции 3-8 млн клеток, врем образовани асцита 10-20 дней.
Характеристика продуцируемого продукта . Штамм гибридных клеток продуцирует монАТ IgG класса, направленны рротив.Л-ХГЧ, оН1Г, -ФСГ и человека. Концентраци полезного продукта (монАТ против of-ХГЧ. с/-ЛГ, - #-ФСГ и оРГТГ человека) в культураль ной среде около 10 мкл/мл, в асцити- ческой жидкости - около 7 мг/мл, титры данных антител при определении с помощью твердофазного иммунофермент- ного метода 1:3000 в культуральной Среде, 2x10 - в асцитической жидкое ти, при концентрации антигена при нанесении на пластинки 30 ед/мл офици- нального препарата ХГЧ.
Определение антител провод т имму лофлуоресцентными и радиоиммунологическими методами. Продукци монАТ стабильна по крайней мере в течение 35 пассажей ин витро и 15 пассажей на животных, если гибридома перевиваетс на мышах о Контаминации бактери ми и грибами нет, микоплаз- мы не вы влены.
0
5
0
5
0
5
0
5
Способ криоконсервации. 4x1 Ofc клеток в ДМЕМ+10% DMSO, замораживание в пенопластовой коробке , при -70 С, жизнеспособность клеток после размораживани 70-90% (оценка жизнеспособности по исключению клетками трипанового синего после 24 ч культивировани ),
.Пример 1. При использовании гибридомы получены специфические к Л-ХГЧ, rf-ЛГ, #-ФСГ и Л-ТТГ человека монАТ путем выделени их из асцитической жидкости мыши. Из 1 мл асцитической жидкости с помощью высаливани сульфатом аммони с последующей ионообменной хроматографией на клонках с ДЕАЕ-52 целлюлозой выдел ют 7,5 мг монАТ к анти- (/-ХГЧ, of-ЛГ, ofr-ФСГ и С/-ТТГ человека.
Контроль на специфичность монАТ провод т в системе твердофазного им- муноферментного анализа. МонАТ реагируют с of-ХГЧ, цельной молекулой ХГЧ (официальный препарат J, ЛТ, ФСГ и ТТГ человека, не реагируют с ЛГ свиньи, коровы, лошади, ФСГ-свиньи и коровы и ХГ-лошади. I
Пример 2. Продуцируемые штаммом монАТ используют дл разработки твердофазной системы иммуно- ферментного анализа дл определени ХГЧ и ЛГЧ в биологических жидкост х организма. На пластинках адсорбируют монАТ против р-ХГЧ или Ј-ЛГЧ „ (10 мкг/мл), инкубируют при 4°С в течение 12-17 ч. Отмывают несв завшиес с пластиком монАТ буфером PBS 3 pasaj инкубируют пластинки при комнатной температуре в течение 1 ч, повторно отмывают 3 раза буфером PBS с твином-20 (0,5 мл на 1 л - 0,05%). Добавл ют исследуемую пробу биологической жидкости (сыворотка крови, моча ). Инкубируют 1 ч при 37°С, отмывают 3 раза смесью PBS - твин-20, добавл ют конъюгированные с пероксида- зой монАТ (концентраци 4 мг/мл) в рабочем разведении (1:1600) в PBS - твин-20. Инкубируют 1 ч при 37°С, отмывают 5 раз смесью PBS - твин-20 и 3 раза холодной водопроводной водой , добавл ют субстрат, 4 мкл 33%- Н202на 20 мин при комнатной температуре . Останавливают реакцию добав- лением 10%-ного раствора H2S04 и учитывают результат путем измерени оптической плотности при 492 нм.
5 1555360
Claims (1)
- Использование штамма гибридомы -Формула изобретенипозвол ет получать монАТ, реагирую- (Штамм гибридных культивируемыхщие с ХГЧ, ЛГЧ, ФСГЧ и ТТГЧ в разветклеток животных Mus.musculus BCKKдении 1 мкг/мл и проводить определе-.(П) # 235DT используемый дл получе-Vни уровн гонадотропных гормонов в ни моноклокальных антител к о -субъбиологических жидкост х организма сединице гонадотропных гормонов чепомощью иммунологических методов.ловека.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884441161A SU1555360A1 (ru) | 1988-06-13 | 1988-06-13 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU884441161A SU1555360A1 (ru) | 1988-06-13 | 1988-06-13 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SU1555360A1 true SU1555360A1 (ru) | 1990-04-07 |
Family
ID=21381553
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU884441161A SU1555360A1 (ru) | 1988-06-13 | 1988-06-13 | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
SU (1) | SU1555360A1 (ru) |
-
1988
- 1988-06-13 SU SU884441161A patent/SU1555360A1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Ozturk M. et al. Physiological studies of human Chorionic Gonado- tropin (hCG), ahCG and BhCG as measured by specific monoclonal Immuno-f radiometric Assays. Endocrinology, v. 120, ff 2, 1987, p.549-558. * |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2758394B2 (ja) | ヒト腫瘍壊死因子に対するモノクロナール抗体 | |
WO1983001739A1 (en) | Monoclonal antibodies against brugia malayi | |
SU1555360A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS, используемый дл получени моноклональных антител к @ -субъединице гонадотропных гормонов человека | |
US4873189A (en) | Monoclonal antibodies to bluetongue virus antigen | |
JPH0789998A (ja) | 抗ミクロシスチンモノクローナル抗体およびそれを産生するハイブリドーマ | |
AU656181B2 (en) | Heterobifunctional antibodies possessing dual catalytic and specific antigen binding properties and methods using them | |
SU1721090A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.-продуцент моноклонального антитела, реагирующего с @ -субъединицей ХГЧ, ЛГЧ, ТТГЧ и ЛГ и ХГ лощади | |
SU1721091A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L.-продуцент моноклонального антитела, реагирующего с @ -субъединицей хорионического гонадотропного гормона человека и лютеинизирующего гормона человека | |
SU1631074A1 (ru) | Штамм культивируемых гибридных клеток животных MUS мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител против альфа-фетопротеина человека | |
SU1514769A1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ: КЛЕТОК ЖИВОТНЫХ ΜΙΙ5 МиЗОТ ПК-ПРОДУЦЕНТ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К ЧЕЛОВЕЧЕСКОМУ ОДНОЦЕПОЧЕЧНОМУ АКТИВАТОРУ ПЛАЗМИНОГЕНА УРОКИНАЗНО | |
RU2097425C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животного mus musculus l. - продуцент моноклональных антител к a-детерминанте поверхностного антигена вируса гепатита b | |
RU2265658C2 (ru) | Штамм гибридных клеток животного mus musculus l. 9e2, используемый для получения моноклональных антител к белку e вируса западного нила штамм wnv/leiv-vig99-27889 | |
SU1721089A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L.-продуцент моноклонального антитела к глутаматным рецепторам мозга человека | |
RU2092553C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животного mus musculus l - продуцент моноклональных антител к а-детерминанте поверхностного антигена вируса гепатита b | |
RU2003682C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS MUSCULUS L. - продуцент моноклональных антител к @ -легким цеп м иммуноглобулинов человека | |
SU1530638A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS - продуцент моноклонального антитела к фактору некроза опухолей - альфа человека | |
JPH0543358B2 (ru) | ||
SU1685997A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS L. - продуцент моноклональных антител к тиреотропному гормону человека | |
RU2097426C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животного mus musculus l. - продуцент моноклональных антител к a-детерминанте поверхностного антигена вируса гепатита b | |
SU1555361A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS.мUSсULUS-продуцент моноклональных антител, специфичных к @ -хорионическому гонадотропину человека и @ -лютеинизирующему гормону человека, свиньи и коровы | |
WO1983001837A1 (en) | Monoclonal antibodies against schistosoma | |
SU1604849A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных MUS мUSсULUS L., продуцирующий моноклональные антитела к бактери м рода BRUceLLa | |
SU1726511A1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток MUS мUSсULUS L, используемый дл получени моноклональных антител к общим антигенным детерминантам инсулина человека и свиньи | |
RU2049817C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток мыши mus musculus l., используемый для получения моноклональных антител к фенобарбиталу | |
SU1514768A1 (ru) | ШТАММ ГИБРИДНЫХ КУЛЬТИВИРУЕМЫХ клеток животных ми5 миБсиьи5-продуцент моноклонального антитела к ре2 КОМБИНАНТНОМУ ФАКТОРУ НЕКРОЗА ОПУХОЛЕЙ-БЕТА ЧЕ |