SK5242003A3 - Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) - Google Patents
Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) Download PDFInfo
- Publication number
- SK5242003A3 SK5242003A3 SK524-2003A SK5242003A SK5242003A3 SK 5242003 A3 SK5242003 A3 SK 5242003A3 SK 5242003 A SK5242003 A SK 5242003A SK 5242003 A3 SK5242003 A3 SK 5242003A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- cells
- stem cells
- somatic stem
- ussc
- cell
- Prior art date
Links
- 210000001988 somatic stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 34
- 210000004700 fetal blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 29
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 109
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims abstract description 46
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 20
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 6
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000003169 placental effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 210000002901 mesenchymal stem cell Anatomy 0.000 claims description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 14
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 14
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 14
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 12
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims description 12
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 claims description 11
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 9
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 9
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 claims description 9
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims description 8
- 108010034065 fibulin 2 Proteins 0.000 claims description 7
- 210000001178 neural stem cell Anatomy 0.000 claims description 7
- 102100031813 Fibulin-2 Human genes 0.000 claims description 6
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 claims description 6
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 claims description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims description 5
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 5
- 108010013996 Fibromodulin Proteins 0.000 claims description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 4
- 102100022749 Aminopeptidase N Human genes 0.000 claims description 3
- 102000017177 Fibromodulin Human genes 0.000 claims description 3
- 101000757160 Homo sapiens Aminopeptidase N Proteins 0.000 claims description 3
- 101000935043 Homo sapiens Integrin beta-1 Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000320 Hyaluronan Synthases Proteins 0.000 claims description 3
- 102100025304 Integrin beta-1 Human genes 0.000 claims description 3
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 claims description 3
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 claims description 3
- 239000012620 biological material Substances 0.000 claims description 3
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000002771 cell marker Substances 0.000 claims description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003918 Hyaluronan Synthases Human genes 0.000 claims description 2
- 238000004115 adherent culture Methods 0.000 claims description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 claims description 2
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000002792 vascular Effects 0.000 claims description 2
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020084 Bone disease Diseases 0.000 claims 1
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 claims 1
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 claims 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 claims 1
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 claims 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 abstract description 19
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 12
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 abstract description 8
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 abstract description 7
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 abstract description 5
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 abstract description 4
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 abstract description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 abstract 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 23
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 18
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 17
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 14
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 12
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 10
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 10
- 230000009816 chondrogenic differentiation Effects 0.000 description 9
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 8
- RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N alizarin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)C3=C(O)C(O)=CC=C3C(=O)C2=C1 RGCKGOZRHPZPFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000009818 osteogenic differentiation Effects 0.000 description 8
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 8
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- 102000001301 EGF receptor Human genes 0.000 description 6
- 108060006698 EGF receptor Proteins 0.000 description 6
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 6
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 description 6
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 description 6
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 6
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 6
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 6
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 6
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 description 6
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 6
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 6
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 5
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 5
- 108090000379 Fibroblast growth factor 2 Proteins 0.000 description 5
- 102100024785 Fibroblast growth factor 2 Human genes 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 5
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 5
- 108091000117 Tyrosine 3-Monooxygenase Proteins 0.000 description 5
- 102000048218 Tyrosine 3-monooxygenases Human genes 0.000 description 5
- 210000001789 adipocyte Anatomy 0.000 description 5
- SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N all-trans-retinoic acid Chemical compound OC(=O)\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C SHGAZHPCJJPHSC-YCNIQYBTSA-N 0.000 description 5
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 5
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 229930002330 retinoic acid Natural products 0.000 description 5
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 4
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 4
- 102100032925 Chondroadherin Human genes 0.000 description 4
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 4
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 4
- 108010043471 Core Binding Factor Alpha 2 Subunit Proteins 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010028750 Integrin-Binding Sialoprotein Proteins 0.000 description 4
- 102000016921 Integrin-Binding Sialoprotein Human genes 0.000 description 4
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 4
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 4
- 102000008730 Nestin Human genes 0.000 description 4
- 108010088225 Nestin Proteins 0.000 description 4
- 102000008763 Neurofilament Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010088373 Neurofilament Proteins Proteins 0.000 description 4
- 102000004874 Synaptophysin Human genes 0.000 description 4
- 108090001076 Synaptophysin Proteins 0.000 description 4
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 4
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 4
- DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N beta-glycerol phosphate Natural products OCC(CO)OP(O)(O)=O DHCLVCXQIBBOPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L beta-glycerolphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].CC(CO)OOP([O-])([O-])=O GHRQXJHBXKYCLZ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 108010059427 chondroadherin Proteins 0.000 description 4
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000000799 fluorescence microscopy Methods 0.000 description 4
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 4
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 description 4
- 210000005055 nestin Anatomy 0.000 description 4
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 4
- 230000002188 osteogenic effect Effects 0.000 description 4
- 101710135378 pH 6 antigen Proteins 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 229960001727 tretinoin Drugs 0.000 description 4
- 108010081589 Becaplermin Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012752 Hepatectomy Methods 0.000 description 3
- 102100037852 Insulin-like growth factor I Human genes 0.000 description 3
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 102000004264 Osteopontin Human genes 0.000 description 3
- 108010081689 Osteopontin Proteins 0.000 description 3
- 102100033237 Pro-epidermal growth factor Human genes 0.000 description 3
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 230000002648 chondrogenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 3
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 3
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;(2r,3s,4r,5r)-2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O RSGFPIWWSCWCFJ-VAXZQHAWSA-N 0.000 description 2
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GEBBCNXOYOVGQS-BNHYGAARSA-N 4-amino-1-[(2r,3r,4s,5s)-3,4-dihydroxy-5-(hydroxyamino)oxolan-2-yl]pyrimidin-2-one Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](NO)O1 GEBBCNXOYOVGQS-BNHYGAARSA-N 0.000 description 2
- 102100032528 C-type lectin domain family 11 member A Human genes 0.000 description 2
- 101710167766 C-type lectin domain family 11 member A Proteins 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 102000002664 Core Binding Factor Alpha 2 Subunit Human genes 0.000 description 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102100037362 Fibronectin Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 101001034652 Homo sapiens Insulin-like growth factor 1 receptor Proteins 0.000 description 2
- 101000994369 Homo sapiens Integrin alpha-5 Proteins 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102100039688 Insulin-like growth factor 1 receptor Human genes 0.000 description 2
- 102100032817 Integrin alpha-5 Human genes 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 108010013709 Leukocyte Common Antigens Proteins 0.000 description 2
- 102000017095 Leukocyte Common Antigens Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102000008109 Mixed Function Oxygenases Human genes 0.000 description 2
- 108010074633 Mixed Function Oxygenases Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 2
- 102000001393 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Human genes 0.000 description 2
- 108010068588 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Proteins 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 2
- 206010067584 Type 1 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 230000009815 adipogenic differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 210000002960 bfu-e Anatomy 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 2
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 210000003321 cartilage cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000022159 cartilage development Effects 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 210000001612 chondrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 2
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 2
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical group O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000006481 glucose medium Substances 0.000 description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 2
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 2
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 2
- 210000000963 osteoblast Anatomy 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 2
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 2
- 101150002954 rmf gene Proteins 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 231100000241 scar Toxicity 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 5-azacytidine Chemical compound O=C1N=C(N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 NMUSYJAQQFHJEW-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N Abietic-Saeure Natural products C12CCC(C(C)C)=CC2=CCC2C1(C)CCCC2(C)C(O)=O RSWGJHLUYNHPMX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 210000002237 B-cell of pancreatic islet Anatomy 0.000 description 1
- 101150082143 CD24 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013925 CD34 antigen Human genes 0.000 description 1
- 108050003733 CD34 antigen Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000189662 Calla Species 0.000 description 1
- 208000032544 Cicatrix Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 101100481408 Danio rerio tie2 gene Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 description 1
- 206010019663 Hepatic failure Diseases 0.000 description 1
- 108010020382 Hepatocyte Nuclear Factor 1-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102100022057 Hepatocyte nuclear factor 1-alpha Human genes 0.000 description 1
- 102100022054 Hepatocyte nuclear factor 4-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108050004132 Hepatocyte nuclear factor 4-alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000008949 Histocompatibility Antigens Class I Human genes 0.000 description 1
- 108010088652 Histocompatibility Antigens Class I Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101500025419 Homo sapiens Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 101000599852 Homo sapiens Intercellular adhesion molecule 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000692455 Homo sapiens Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 101000884271 Homo sapiens Signal transducer CD24 Proteins 0.000 description 1
- 101000851007 Homo sapiens Vascular endothelial growth factor receptor 2 Proteins 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 108010001127 Insulin Receptor Proteins 0.000 description 1
- 102100036721 Insulin receptor Human genes 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000143 Mouse Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101100437777 Mus musculus Bmpr1a gene Proteins 0.000 description 1
- 101100481410 Mus musculus Tek gene Proteins 0.000 description 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004160 Phosphoric Monoester Hydrolases Human genes 0.000 description 1
- 108090000608 Phosphoric Monoester Hydrolases Proteins 0.000 description 1
- 102100024616 Platelet endothelial cell adhesion molecule Human genes 0.000 description 1
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 1
- 102100040990 Platelet-derived growth factor subunit B Human genes 0.000 description 1
- 108010019674 Proto-Oncogene Proteins c-sis Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N Rosin Natural products O(C/C=C/c1ccccc1)[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 KHPCPRHQVVSZAH-HUOMCSJISA-N 0.000 description 1
- 102100025373 Runt-related transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100038081 Signal transducer CD24 Human genes 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102100033177 Vascular endothelial growth factor receptor 2 Human genes 0.000 description 1
- LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl] n-[(z)-1,3-dihydroxyoctadec-4-en-2-yl]carbamate Chemical compound CCCCCCCCCCCCC\C=C/C(O)C(CO)NC(=O)O[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LEBBDRXHHNYZIA-LDUWYPJVSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000003367 anti-collagen effect Effects 0.000 description 1
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 1
- 229940127219 anticoagulant drug Drugs 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002376 aorta thoracic Anatomy 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 229960002756 azacitidine Drugs 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000033558 biomineral tissue development Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009640 blood culture Methods 0.000 description 1
- 230000010478 bone regeneration Effects 0.000 description 1
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009933 burial Methods 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002659 cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000432 density-gradient centrifugation Methods 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 101150022753 galc gene Proteins 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940116978 human epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229940099552 hyaluronan Drugs 0.000 description 1
- KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N hyaluronan Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)C1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H](C(O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-MNSSHETKSA-N 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000013394 immunophenotyping Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 230000016507 interphase Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 208000007903 liver failure Diseases 0.000 description 1
- 231100000835 liver failure Toxicity 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004070 myogenic differentiation Effects 0.000 description 1
- GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N nepidermin Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(C)C)C(C)C)C1=CC=C(O)C=C1 GVUGOAYIVIDWIO-UFWWTJHBSA-N 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000001272 neurogenic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004967 non-hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 230000001582 osteoblastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002611 ovarian Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 1
- 210000000578 peripheral nerve Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 229960002429 proline Drugs 0.000 description 1
- QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N propylene Natural products CC=C QQONPFPTGQHPMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004805 propylene group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([*:1])C([H])([H])[*:2] 0.000 description 1
- 210000001147 pulmonary artery Anatomy 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000037387 scars Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 210000001082 somatic cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003594 spinal ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 210000004500 stellate cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009168 stem cell therapy Methods 0.000 description 1
- 238000009580 stem-cell therapy Methods 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N trans-cinnamyl beta-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC=CC1=CC=CC=C1 KHPCPRHQVVSZAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 210000003954 umbilical cord Anatomy 0.000 description 1
- 210000003606 umbilical vein Anatomy 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/54—Ovaries; Ova; Ovules; Embryos; Foetal cells; Germ cells
- A61K35/545—Embryonic stem cells; Pluripotent stem cells; Induced pluripotent stem cells; Uncharacterised stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/50—Placenta; Placental stem cells; Amniotic fluid; Amnion; Amniotic stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/48—Reproductive organs
- A61K35/51—Umbilical cord; Umbilical cord blood; Umbilical stem cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P41/00—Drugs used in surgical methods, e.g. surgery adjuvants for preventing adhesion or for vitreum substitution
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0607—Non-embryonic pluripotent stem cells, e.g. MASC
Description
Predkladaný vynález sa týka somatickej kmeňovej bunky, plurality kmeňových buniek, liečiva obsahujúceho kmeňové bunky podľa vynálezu a spôsobg pre ich purifikáciu, izoláciu, a jedinečného diferenciačného potenciálu kmeňovej bunky podía vynálezu.
Doterajší stav techniky
Hoci kmeňové bunky sa neustále obnovujú svojou zámennou, všeobecne majú velmi pomalú cyklizáciu. Obecne sa predpokladá, že tieto bunky dávajú vzniknúť krátkodobo sa amplifikujúcej bunkovej populácii s obmedzenou sama seba obnovovanou kapacitou k zvýšeniu počtu diferencovaných buniek. Až dopošial bolo úsilie zamerané ha lokalizáciu kmeňových buniek v dospelom človeku, a preto sa v jestvujúcej literatúre uvádza množstvo náhradných markerov (napr. testy tvorby kolónií pre hematopoetické línie).
Rad US patentov, napr.
| 5 | 736 | 396, | 5 | 811 | 094, | 5 | 827 |
| 5 | 908 | 784, | 5 | 942 | 225, | 5 | 965 |
| 6 | 087 | 113, | 5 | 858 | 390, | 5 | 804 |
| 6 | 054 | 121, | 5 | 827 | 735, | 5 | 906 |
| US 5 486 359, 5 591 625, |
| 740, 5 837 539, 5 908 782, |
| 436, 6 010 696, 6 022 540, |
| 446, 5 846 796, 5 654 186, |
| 934 sa zaoberá mezenchymálnymi |
kmeňovými bunkami (mesenchymal stem cells, MSC), ktoré môžu byť diferenciované na niekolko typov progenitorových
01-937-03-Ce buniek, ako napr. svalových progenitorových buniek, progenitorových buniek spojivových tkanív a oválnych buniek. Svalové progenitorové bunky sa ďalej diferencujú na srdcové, skeletálne bunky, rovnako ako na bunky hladkého svalstva, zatiaľ čo progenitorové bunky spojivových tkanív sa môžu diferencovať na bunky kostí, chrupky a tukové bunky. Oválne bunky sa môžu diferencovať na pečeňové alebo pankreatické bunky (Grornpe et al, 2001) . Doposiaľ je diskutovaná prítomnosť nehematopoetických kmeňových buniek v pupočníkovej krvi (Mayani et al., 2000; Mareschi et al., 2001). Nemecká patentová prihláška DE 198 03 267 Al ako prvá popisuje progenitory osteoblastov a tvorbu kostí z ľudskej pupočníkovej krvi.
Jednako len, použitie týchto mezenchymálnych progenitorových buniek podľa doterajšieho stavu techniky je často obmedzené, lebo tieto bunky sú priveľa vyvinuté, aby mohli byť užitočnými prostriedkami pre generovanie orgánov a tkanív. Inými slovami, zdá sa, že sú už priveľmi predurčené a špecializované k poskytnutiu funkčného regenerujúceho sa orgánu alebo tkaniva.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu.je poskytnutie kmeňovej bunky, ktorá je schopná sa diferencovať na odlišné progenitorové bunky, ako sú mezenchymálne bunky, neurálne bunky, krvné bunky a endoteliálne bunky.
Ďalším predmetom vynálezu je poskytnutie kmeňovej bunky, ktorá nemá nevýhody embryonálnych kmeňových buniek.
01-937-03-Ce
Bolo zistené, že novo identifikovaná kmeňová bunka je schopná riešiť vyššie uvedené ciele vynálezu. Somatická kmeňová bunka podľa vynálezu je získaná z ľudskej pupočníkovej krvi, placentárnej krvi a/alebo z krvi novorodenca, pričom táto kmeňová bunka je odlišná, ale schopná diferencovať sa na mezenchymálne kmeňové alebo progenitorové bunky, na hematopoetickú líniu kmeňových alebo progenitorových buniek, na neurálne kmeňové alebo progenitorové bunky, alebo na endoteliálne kmeňové alebo pečeňové progenitorové bunky. Tieto bunky predstavujú progenitory hematopoetických línií, mezenchymálnych kmeňových buniek, rovnako ako neurálnych kmeňových buniek. Jedinečná multifunkčná kapacita a technológia expanzie týchto neobmedzených somatických kmeňových buniek (unrestricted somatic stem cells, USSC) z pupočníkovej krvi (cord blood, CB), buď to ako somatických kmeňových buniek ako takých, alebo ako buniek nasmerovaných za odlišných diferenciačných protokolov, umožňuje presnú charakterizáciu, štandardizáciu a využitie k produkcii a k realizácii terapie pomocou kmeňových buniek v regeneratívnej medicíne.
Obr. 1 uvádza mikrofotografiu primárnej USSC kultúry, bunky sú vysiate v nízkej hustote.
Obr. 2 uvádza mikrofotogŕafiu konfluentnej USSC kultúry.
Obr. 3 uvádza FACS analýzu pre antigén CD45 počas kultivácie in vitro.
Obr. 4 uvádza FACS analýzu pre embryonálny marker SSEA4.
01-937-03-Ce
Obr. 5 uvádza FACS analýzu pre HLA-triedu I (A,B,C), HLA DR a CD14.
Obr. 6 uvádza kinetiku FACS pre povrchový marker CD34.
t
Obr. 7 uvádza mikrofotografiu buriiek USSC po neuronálnej indukcii.
Obr. 8 uvádza, že USSC podlá vynálezu exprimujú nestín ako marker neurálnych kmeňových buniek v anti-nestín imunofarbení.
Obr. 9 uvádza bunky USSC generujúce neuronálnu líniu.
Obr. 10 uvádza bunky USSC generujúce gliálnu líniu*
Obr. 11 uvádza tvorbu minerálizovaných nodulov po osteogénnej indukcii a po farbení s alizarínovou červenou (B) .
Obr. 12 uvádza farbenie peletovej kultúry, odvodenej z USSC, pomocou alciánovej modrej.
Obr. 13 uvádza farbenie kolagénu typu II (zelená) kultúr USSC po chondrogénnej diferenciácii.
Obr. 14 uvádza adipogénnu diferenciáciu kultúr USSC, ako je preukázané farbením olejovou červenou.
Obr. 15 uvádza mikrofotografiu kultúr USSC pred a po myogénnej diferenciácii.
01-937-03-Ce
Obr. 16 uvádza imunocytochémiu pre slow-acting myozín po ošetrení azacytidínom.
Obr. 17 uvádza fenotyp oválnych buniek derivátov USSC.
Obr. 18 uvádza prežívanie a integráciu kultúr USSC po injekcii do SCID pečeňového parenchýmu.
Somatické kmeňové bunky podlá prekladaného vynálezu môžu byť izolované a purifikované rôznymi metódami, vrátane krokov zahrnujúcich izoláciu v hustotnom gradiente, kultiváciu adherentných buniek a subkultiváciu s použitím rastových faktorov, ako je popísané v príklade 1. Po vytvorení konfluentnej buňkovej vrstvy je izolačný proces k odvodení buniek podľa vynálezu rutinne riadený pomocou morfológie (fibroblastoidnej morfológie) a analýzy fenotypu s použitím protilátok proti povrchovým antigénom CD13 (pozitívny), CD14 (negatívny), CD45 (negatívny) a CD29 (pozitívny; viď príklad 2).
Somatická kmeňová bunka podľa vynálezu negatívne reaguje s markermi špecifickými pre hematopoetickú líniu, ako je CD45, a preto je odlišná od hematopoetických kmeňových buniek, ktoré taktiež môžu byť izolované z placentárnej pupočníkovej krvi. CD14 je ďalším povrchovým antigénom, ktorý nemôže byť detekovaný na USSC. Ďalej je kmeňová bunka podlá vynálezu charakterizovaná súborom antigénov, ktoré sú prítomné na bunkovom povrchu, ako je CD13, CD29, CD44 a CD49e. Preparáty USSC sú ďalej charakterizované prítomnosťou transkriptov mRNA pre molekuly určitých receptorov, ako je receptor epidermálneho rastového faktora (EGF-R), alfa receptor doštičkového rastového faktora (PSGF-RA) a receptor inzulínového
01-937-03-Ce rastového faktora (IGF-R). Tieto bunky sú taktiež typické svojou expresiou transkripčných faktorov, ako je YB1 (X-box transkripčný faktor 1), Runxl („runt related transkripčný faktor 1) a AML1C (transkripčný faktor akútnej myeloidnej leukémie 1 ), detekovaných pomocou ŔT-PCR. Jednako len preparáty USSC sú typicky negatívne pre transkripty pre chondrogénny transkripčný faktor Cart-1 a neurálne markery, ako je neurofilament, synaptofyzín, tyrozín hydroxyláza (TH) a gliálny fibrilárny kyslý proteín (glial fibrillary acidic protein, GFAP).
Tabulka 1: Analýza transkripčných vzoriek z USSC pomocou RT-PCR
Výsledky RT-PCR získané s predpokladanými oligonukleotidovými primérmi a mRNA z USSC a s pozitívnymi kontrolnými mRNA z iných tkanív, ako sú bunky kostné, chrupkové, mozgové a mononukleárne bunky z pupočníkovej krvi.
| NázOV | PCR výsledok pre USSC | PCR výsledok (iné tkanivá) |
| PDGFR | + | + (dospelá kosť) |
| IGFR | + | + (dospelá kosť) |
| neurofilament | - | + (dospelá pečeň) |
| CD105 | + | + (mononukleárne bunky z pupočníkovej krvi |
| G FAP | - | + (fetálny mozog) |
| synaptofyzín | — | + (fetálny mozog) |
| tyrozín hydroxyláza | - | -t- (fetálny mozog) |
| YB1 | + | + (fetálny mozog) |
01-937-03-Ce
| Runxl | + | + (dospelá kosť) |
| AMLlc | + | + (dospelá kosť) |
| BMPR II | + | + (dospelá chrupka) |
| kolagén typu I | + | + (dospelá kosť) |
| Cart-1 | - | + (mononukleárne bunky z pupočníkovej krvi) |
| chondroadherín | - | + (dospelá kosť) |
| CD49e | + | + (dospelá kosť) . |
Bola priamo zrovnávaná expresia RNA v preparátoch USSC a buniek MSC odvodených z kostnej drene (Caplan, 1991) s použitím kvantitatívnej Affymetrix GeneChip ™ microarrays. Transkript génu pre fibulín-2 (číslo v génovej banke X82494) bol detekovaný v USSC o vysokých hladinách expresie, ale nie u MSC. Produkcia fibulínu-2 bola skôr preukázaná vo fibroblastoch (Pan et al., 1993). Northern blottová analýza mRNA z rôznych ľudských tkanív preukazuje prevahu transkriptu o 4,5 kb v tkanivách srdca, placenty a ovárií (Zhang et al., 1994). Proteín bol lokalizovaný svetelným mikroskopom u ľudských embryí v 4-10 týždni tehotenstva s použitím polyklonálnych protilátok. Fibulín-2 bol primárne detekovaný vnútri neuroepitélia, spinálnych ganglií a periférnych nervov (Miosge et al., 1996).
Na krysom zvieracom modeli sú krysie pečeňové myofibroblasty (rMF) kolokalizované s fibulínom-2. Tieto bunky sú umiestnené v portálnom poli, stenách centrálnych žíl a iba príležitostne v parenchýme. V raných štádiách fibrózy boli rMF detekované vnútri vyvíjajúcich sa jaziev.
V pokročilých štádiách fibrózy predstavujú rMF väčšinu buniek umiestnených vnútri jaziev (Knittel et al., 1999).
V inom zvieracom modeli je myšací proteín fibulín-2
01-937-03-Ce exprimovaný počas epiteliálne-mezenchymálnej transformácie v endokardiálnom vankúšovom matrixe počas embryonálneho vývoja srdca. Fibulín-2 je taktiež syntetizovaný prekurzorovými bunkami hladkého svalstva vyvíjajúcich sa ciev oblúka aorty a koronárnymi endoteliálnymi bunkami pochádzajúcimi z buniek neurálnych líšt a epikardiálnych buniek (Tsuda et al., 2001).
Transkripty génu pre hyaluronan syntázu (D84424), fibromodulínového génu (U05291) a transkript 1NFLS (WO3746) neboli v USSC detekované, zatial čo v MSC boli detekované vo vysokých hladinách. Northern blott analýza preukázala, že hyaluronan syntáza je všade prítomne exprimovaná v ludských tkanivách (Itano and Kimata, 1996). Produkt tohoto enzýmu, hyaluronan, má rad funkcií vrátane výplňovej a lubrikačnej pre kĺby, a poskytuje matrix, ktorým môžu bunky migrovať (Halí et al., 1995). Fibromodulín je členom rodiny malých intersticiálnych (vmedzerených) proteoglykánov. Proteín vykazuje širokú tkanivovú distribúciu, s najvyšším množstvom pozorovaným v kĺbovej chrupke, šlache a väzivu (Sztrolovics et al., 1994). Transkript 1NFLS bol klonovaný z ľudskej fetálnej pečene.
Gén CD24 (L33930) je exprimovaný o velmi nízkej hladine v USSC v zrovnaní s úrovňou expresie v MSC. CD24 je exprimovaný vo vela bunkách B- línií a na zrelých granulocytoch (Van der Schoot et al., 1989).
V zrovnaní s MSC sú somatické bunky podlá vynálezu odlišné na základe tkanivového zdroja, z ktorého sú izolované. Ďalej sú USSC charakterizované tým, že neexprimujú žiadny ľudský leukocytárny antigén triedy I (HLA-class I) . Na rozdiel od somatických kmeňových buniek
01-937-03-Ce podľa vynálezu, skoršie popísané MSC izolované z kostnej drene a svalových tkanív exprimujú na svojom povrchu velmi vysoké hladiny antigénu HLA-triedy I. Bunka podľa vynálezu taktiež exprimuje štádiovo špecifický časný antigén 4 (SSEA4) (viď obr. 4).
Somatická kmeňová bunka podía vynálezu typicky vykazuje fibroblastoidný bunkový povrch a proliferuje adherentným spôsobom.
Vo výhodnom uskutočnení predkladaného vynálezu je somatická kmeňová bunka podía vynálezu (USSC) prítomná v pluralite alebo zmesiach predstavujúcich prekurzory iných somatických kmeňových buniek, ako sú hematopoetická línia prednostne exprimujúca AC133 a CD34, mezenchymálne progenitorové somatické kmeňové bunky, neuronálne progenitorové somatické kmeňové bunky, alebo ich kombinácie. Toto uskutočnenie je výhodné preto, že predstavuje vysoký regéneratívny potenciál, založený na schopnosti diferencovať sa na iné odlišné somatické kmeňové bunky, alebo prítomnosť takých somatických kmeňových buniek, ako výhodné uskutočnenie vynálezu.
Podía vynálezu je poskytnuté liečivo (regeneratívne terapeutikum) obsahujúce somatické kmeňové bunky podía vynálezu, rovnako ako pluralitu alebo zmesi somatických kmeňových buniek podía vynálezu. Liečivo môže ďalej obsahovať substancie nosičov alebo pomocné látky, ktoré sú liečebne a farmakologicky akceptovateľné. Predkladaný vynález sa taktiež týka spôsobu použitia USSC alebo plurality alebo zmesí kmeňových buniek podľa vynálezu v génovej terapii, náhrade orgánov, testovaní farmaceutík,
01-937-03-Ce rastu krvných ciev in vitro a v terapii vaskulárnych, kostných, pečeňových, pankreatických a neurálnych ochorení.
Tak napríklad, USSC podľa predkladaného vynálezu môžu byť aplikované lokálne v mieste potreby, tzn. s alebo bez biomateriálov.
Lokálne a/alebo systémové podanie USSC je vhodné v závislosti od typu ochorení. USSC môžu byť aplikované priamo alebo spoločne s farmaceutický prijateľnými nosičmi alebo adjuvans. S výhodou môžu byť pridané ďalšie látky, ktoré podporujú liečbu ochorení. Tak napríklad, spoločne s USSC môžu byť ortopedických aplikáciách použité látky, ktoré zlepšujú regeneráciu kostí.
V zásade, metódy, ktoré sú známe pre aplikáciu MSC, môžu byť aplikované analogickým spôsobom, ako náhle sú použité USSC. Ďalej, použitie kmeňových buniek je popísané napríklad v B.E.Strauer et al.M „Intrakoronare, humane autologe Stammzelltransplantation zur Myokardregeneration nach Herzinfarkt, Dtsch med Wochenschr 2001; 126:932-938; Quartô R., et al. „Repair of Large Bone Defects with the Use of Autologous Bone Marrow Stromal Cells, N Engl J Med 2001; 344:385-386; Vacanti C.A., „Brief Report: Replacement of an Avulsed Phalanx with Tissue-Engineered Bone N Engl J Med 2001; 344:1511-1514, May 17, 2001; Hentz V.R., „Tissue Engineering for Reconstruction of the Thump, N Engl J Med 2001; 344:1547-1548; Brittberg M., „Treatment of Deep Cartilage Defects in the Knee with Autologous Chondrocyte Transplantátion, N Engl J Med 1994; 331:889-895, Oct 6, 1994; Freed C.R., „Transplantation of Embryonic Dopamine Neurons for Severe Parkinson's Disease, N Engl J Med 2001; 344:710-719; Shin'oka T., „Transplantation of a Tissue01-937-03-Ce
Engineered Pulmonary Artery, N Engl J Med 2001; 344:532533; Shapiro A.M.J., „Islet Transplantation in Seven Patients with Type 1 Diabetes Mellitus Using a Glucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen, N Engl J Med 2000; 343:230-238. Tieto referencie sú tu zahrnuté ako odkazy.
Ďalej sú podrobnejšie popísané kmeňové bunky podía vynálezu.
Kmeňové bunky podía vynálezu sú adherentné bunky s fibroblastoidným bunkovým povrchom a dvomi alebo tromi jadrami (viď Obr. 1), získané po ošetrení trypsínom-EDTA a vysiatí za príslušných kultivačných podmienok (príklad 1), rýchlo expandujú ku konfluencii s morfológiou typu „long stretched(Obr.2). Obr. 1 ukazuje mikrofotografiu primárnej USSC kultúry. Bunky vysiate o nízkej hustote vykazujú fibroblastoidnú morfológiu USSC. Tieto bunky môžu byť lahko pestované cez viacej ako 14 kultivačných pasáží. Obr. 2 ukazuje mikrofotografiu konfluentnej USSC kultúry. Takmer konfluentná bunková vrstva USSC vykazuje paralelnú orientáciu buniek.
Fenotypové povrchové markery primárnej adherentnej bunkovej vrstvy, rovnako ako ich derivátov v následných pasážach, Sú a zostávajú negatívne pre marker CD45. Obr. 3 ukazuje FACS analýzu pre antigén CD45 počas kultivácie in vitro. CD45, charakteristický markerový antigén pre hematopoetickú bunku, je takmer nedetekovatelný v USSC z neskorších pasáží (Obr. 3 v dňoch 48, 54, 82) .
Po in vitro kultivácii s použitím metódy A (príklad 1) sa preparáty USSC stali pozitívnymi pre štádiovo-špecifický
01-937-03-Ce časný antigén 4 (SSEA4) a vykazovali homogénnu expresiu tohoto embryonálneho markera. Obr. 4 ukazuje FACS analýzu pre SSEA4 embryonálny marker. Bunky produkované metódou A (príklad 1) silno vykazujú expresiu štádiovo-špecifického časného antigénu 4 (SSEA4) . V zhodnú dobu sú USSC kultúry negatívne pre expresiu povrchového antigénu HLA-triedy I. (Obr. 5A), expresiu HLA-DR antigénu (Obr. 5B) rovnako ako je negatívny CD14 (Obr. 5C) . Obr. 5 ukazuje FACS analýzu pre HLA-triedu I (A,B,C), HLA DR a CD14. Kultúry USSC podía vynálezu po expanzii in vitro sú negatívne pre antigén HLAtriedy I (Panel A). Tieto bunky sú taktiež negatívne pre povrchové antigény HLA-DR (Panel B) a CD14 (Panel C), ktoré sú charakteristické pre bunky prezentujúce antigén (HLA-DR) a monocyty (CD14).
Obr. 6 ukazuje kinetiku FACS pre povrchový marker CD34. USSC boli pestované v H5100/PEI cez 10 pasáží. Počas tejto kultivačnej doby bolo pozorované signifikantné zvýšenie expresie antigénu CD34. Pokial sa jedná o marker hematopoetických kmeňových buniek CD34, ukazuje Obr. 6, že v pasáži 3 až do dňa 54 neboli detekované žiadne CD34 pozitívne bunky. Naopak, v siedmej pasáži v dni 82 sa objavila nová CD34 pozitívna subpopulácia. Na druhej strane, ak také CD34 a/alebo FIK1 pozitívne progenitory boli kultivované v médiu kondicionovanom cytokínom špecifickom pre hematopoetickú diferenciáciu, vyvinuli sa typické zmiešané alebo hematopoetické kolónie pre prekurzory červených a bielych krvných buniek (CFU-GM a BFU-E) zrovnateľné s CD45+ hematopoetickými progenitorovými bunkami.
Na druhej strane, ak sú kultivované mononukleárne bunky z pupočníkovej krvi postrádajúce CD14 v médiu
01-937-03-Ce s vysokým obsahom glukózy, vykazujú tieto bunky typické charakteristiky neurálnych kmeňových buniek. Obr. 7 ukazuje mikrofotografiu USSC po neuronálnu indukciu. USSC podľa vynálezu, kultivované v „Dulbecco's modified eagle médium (DMEM) high glucose, vykazujú m'orfológiu podobnú astrocytom. Obr. 7 ukazuje príklad takých kultivovaných buniek vykazujúcich gliálnu morfológiu, získanú v kultúre po 13 dňoch (príklad 6). Po expanzii pomocou PEI exprimujú USSC nestín, marker neurálnych kmeňových buniek. Prvé pozorovanie naznačuje, že nestínové farbenie je menej zreteľné po tom, kedy bunky boli stimulované neurálne indukčným činidlom, ako je kyselina retinová (RA), bázický fibroblastový rastový faktor bFGF a nervový rastový faktor β (NGF-β) (McKay, 1997).
Podrobnejšie^ Obr. 8 Ukazuje USSC podľa vynálezu exprimujúci marker neurálnych kmeňových buniek nestín. (A) USSC boli inkubované v H5100/PEI médiu po 7 dní a podrobené štandardnej anti-nestín imunohistochémii. (B) Bunky boli inkubované po 7 dní v H5100/PEI s nasledujúcou 9dennou indukciou v H5100 s RA, bFGFa NGF. Je treba si povšimnúť, že nestínové farbenie je znížené v zrovnaní s bunkami pestovanými za podmienok podľa (A).
Ďalšia analýza týchto buniek odhalila taktiež expresiu proteínov charakteristických pre neurálne bunky, ako je kyselina γ-aminomaslová (GABA, Obr. 9 B), tyrozín hydroxyláza (Obr. 9 B), synaptofyzín (Obr. 9 D), neurofilament (Obr. 9 F), alebo typické gliové antigény, ako galaktocerebrozid (GalC, Obr. 10 B) a gliový fibrilárny kyslý proteín (GFAP Obr. 10 D). Obr. 9 ukazuje USSC podlá vynálezu generujúce bunky neuronálnej línie. USSC podľa vynálezu boli pestované v H51008PEI po 7 dní a udržované po
01-937-03-Ce dní na H5100 obsahujúcom RA, bFGF a NGF. Po uskutočnení štandardného fixačného protokolu, boli aplikované neuronálne špecifické protilátky.(A,C,D)fotografie s fázovým kontrastom, (B,D,F) fluorescenčné fotografie rovnakých preparátov ako v A,C,D. DAPI (modrá), farbivo pre DNA, je použito k farbenie jadier buniek. (B) Dvojitá imunofluorescenčná fotografia používajúca anti-GABA (červená) a anti-tyrozínhydroxyláza (TH, zelená). (D) Antisynaptofyzínové farbenie (zelená). (F)Je znázornené neurón špecifické anti-neurofilamentové farbenie (červená). Bola použitá zmes protilátok proti odlišným, subtypom neurofilamentu. Obr. 10 uvádza USSC podlá vynálezu generujúce bunky gliovej línie. Bunky boli podrobené rovnakým kultivačným podmienkam, ako je uvedené v Obr. 9. DAPI je v modrej farbe.(A,C) Predvedenie fotografií s fázovým kontrastom. (B) Zhodné bunky, ako je pozorované v (A), ktoré boli podrobené anti-GalC imunofarbeniu (červená). Zhodné bunky ako v (C) farbené s využitím protilátky proti gliovému fibrilárnemu kyslému proteínu (GFAP, červená).
Jednako len, ako náhle sú vyššie popísané univerzálne kmeňové bunky odobraté z akejkoľvek expanznej pasáže a sú indukované v.kultivačných podmienkach s DAG (dexametazón, kyselina askorbová, β-glycerol fosfát) alebo v médiu obsahujúcom fibronektín, je indukovaná diferenciácia osteogénnej línie (príklad 3). Ako je uvedené v Tabulke 2, špecifické kostné markerové gény (alkalická fosfatáza, osteokalcín, kolagén typu I) sú lahko indukované a sú detekovatelné pomocou RT-PCR.
01-937-03-Ce
| kontrola | deň 7 | deň 14 | |
| β-aktín (pozitívna kontrola) | + | + | + |
| alkalická fosfatáza | - | + | + |
| kolagén typu II | - | + | + |
| osteokalcín | + | + | - |
Tabulka 2: RT-PCR analýza počas osteogénnej diferenciácie USSC.
Všetky tri markerové gény pre osteogénnu diferenciáciu vykazujú zvýšenú expresiu mRNA v 7. dni indukcie DAG, βaktín slúži ako pozitívna kontrola.
Obr. 11 ukazuje tvorbu minerálizovaných nodulov po osteogénnej indukcii a po farbení alizarínovou červení (B). Bola indukovaná osteogénna diferenciácia takmer konfluentných USSC vrstiev pridaním dexametazónu, kyseliny askorbovej a β-glycerol fosfátu do kultivačného média H5100. V 10. dni stimulácie sa objavili charakteristické kostné noduly (HA) . Ukladanie minerálov v týchto noduloch môže byť demonštrované farbením alizarínovou červenou (11B). Za týchto osteogénnych indukčných podmienok sa bunky podlá vynálezu podrobujú kompletnej osteogénnej diferenciácii, ako je preukázané akumuláciou mineralizovanej kosti v jednotlivých noduloch (Obr. 11A), ktoré môžu byť farbené alizarínovou červenou (Obr. 11B). Inak povedané, akumulácia hydroxyapatitu v bunkovej kultúre môže byť detekovaná po šiestich dňoch pomocou farbenia podlá von Kossa.
01-937-03-Ce
Z týchto výsledkov je zrejmé, že pupočníková krv obsahuje až doposial nedetekovanú veľmi časnú kmeňovú bunku, ktorá môže byť expandovaná do rozsiahlych množstiev Okrem toho, táto bunka môže byť indukovaná k diferenciácii na MSC a odtiaľ na osteoblasty, ako bolo už preukázané v Obr. 11A. Po kompletnej indukcii pomocou DAG a ďalšej diferenciácii môžu byť získané mineralizované kostné noduly, ako je uvedené v Obr. 11B s farbením alizarínovou červenou.
Mnohostrannosť buniek podľa vynálezu je dokonca väčšia, ako je demonštrované chondrogénnou diferenciáciou po kultivácii v „DMEM high glucose, obsahujúcom dexametazón, prolín, pyruvát sodný, ITS+ Premix a TGF-βΙ (Johnstone et al., 1998). V dni 0 a 14 týchto diferenciačných pokusov boli bunky pozberané a analyzované pomocou RT-PCR (Tabulka 3, príklad 4).
| kontrola | 14.deň | |
| β-aktín (pozitívna kontrola) | + | + |
| Cart-1 | - | + |
| kolagén typu II (neštiepený) | - | + |
| chondroadherín | - | + |
Tabulka 3: RT-PCR analýza počas chondrogénnej diferenciácie USSC.
V 14. dni chondrogénnej stimulácie sú exprimované tri charakteristické markerové gény realizujúcej sa chondrogenézy.
01-937-03-Ce
Výsledky týchto štúdií jasne preukazujú zvýšenie Cart 1, špecifického chondrogénneho transkripčného faktora 14 dní po chondrogénnej stimulácii. Okrem toho transkripty mRNA pre dva typické extracelulárne proteíny chrupky (kolagén typu II a chondroadherín) boli taktiež zvýšené. Okrem toho bunky podľa vynálezu zreteľne produkovali molekuly extracelulárneho proteoglykánu typického pre chondrocytárnu diferenciáciu, ako bolo preukázané farbením alciánovou modrou. Obr, 12 ukazuje farbenie peletovej kultúry ,odvodenej z USSC, alciánovou modrou. USSC boli pestované v sedimentačnej kultúre v chondrogénnom diferenciačnom médiu. Po 6 dňoch v indukčnom médiu nebolo farbením alciánovou modrou detekovatelné žiadne šignifikantné množstvo proteoglykánov (PG), ako charakteristických markerov chondrogénnej diferenciácie (Panel A). Naopak, PG sú lahko detekovatelné, ako je naznačené modrou/zelenou farbou (Panel B).
Okrem toho prítomnosť kolagénu typu II, špecifického pre chrupku, môže byť preukázaná na úrovni proteínu. Obr. 13: Farbenie kolagénu typu II (zelená) kultúr USSC po chondrogénnej diferenciácii.
USSC boli kultivované v chondrogénnom diferenciačnom médiu. V 14. dni bola preukázaná expresia kolagénu typu II proteínu extracelulárneho matrixu, fluorescenčnou mikroskopiou s použitím primárnej protilátky anti-kolagén typu II a sekundárne protilátky FITC anti-mouse. (Obr.
13B) .
Ďalšia mnohostrannosť neobmedzenej kmeňovej bunky.je tu preukázaná diferenciáciou také predchádzajúce kultúry,
01-937-03-Ce expandované podľa PEI protokolu, na tukové bunky s použitím vyšších koncentrácií dexametazónu (príklad 5).
Obr. 14 ukazuje tukové bunky, ktoré môžu byť špecificky farbené olejovou červenou (Sigma). Adipocyty sú i
charakteristické vysokým množstvom intracelulárnych vezikúl a špecifickým farbením olejovou červenou.
Okrem toho, keď sú USSC kultivované po 24 hodín v H5100 s 10 μΜ 5'-azacytidínu a následne s 100 ng/ml bFGF, vykazujú zrejmý dôkaz svalovej diferenciácie. Zmena v bunkovej morfológii je sprevádzaná expresiou slow-acting myozínu (Obr. 15 a 16).
Okrem toho je pravidelne pozorované objavenie sa a proliferácia typických oválnych buniek v pozdných pasážach (Obr. 17), akonáhle USSC indukované PEI sú subklonované zo subpopulácie CD34+, ktorá je znázornená na Obr. 6 (príklad 8). Tieto bunky v rôznych stupňoch exprimujú enzým dipeptidyl peptidázu IV, čo znamená, že sa také oválne bunky môžu ďalej diferencovať na pečeňové bunky.
In vitro expandované USSC prežívajú a persistujú po injekcii do regenerujúcej pečene myší SCID s čiastočnou 50% hepatektómiou rovnako, ako do nehepatektomizovanéj pečene, kde mononukleárne bunky nemôžu byť detekované, aj keď je transplantovaný 25krát vyšší počet buniek. Obr. 18 ukazuje prežívanie a integráciiu kultúr USSC po injekcii do pečeňového parenchýmu myší SCID. Obr. 18 A: Červená fluorescencia 7 dní po transplantácii indikuje prežívanie a integráciu ľudských USSC podía vynálezu označených PKH26 do pečeňového tkaniva myší (bez hepatektómie). Naopak, po transplantácii mononukleárnych buniek odvodených
01-937-03-Ce z pupočníkovej krvi (MNC) nebola detekovatelná žiadna červená fluorescencia naznačujúca integráciu ľudských MNC. Obr. 18 B: Kryo-rezy myšacieho pečeňového tkaniva odpovedajúce A: Transmisná svetelná mikrofotografia myšacieho pečeňového tkaniva s integrovanými ľudskými USSC.
Vzhladom na to, že prekurzory pre pečeňové bunky a pre pankreatické bunky β-ostrovčekov sú identické, môžu také oválne bunky odvodené z pupočníkovej krvi (CB) tiež byť diferencované na inzulín produkujúce β-ostrovčekové bunky, čo je robí užitočnými ako prostriedky pre bunkovú terapiu u diabetických pacientov alebo u pacientov so zlyhaním pečene.
Okrem týchto zrejmých klinických aplikácií akýchkoľvek z dobre charakterizovaných a za štandardných podmienok expandovaných komponent kmeňových buniek a ich potomstvo môžu byť použité k monitorovaniu a stanoveniu pôsobenia a molekulárnych, ako aj celulárnych účinkov novo vyvíjaných farmakologických látok, čím môžu byť nahradené určité pokusy na zvieratách.
Preto tu popísané dobre štandardizované kmeňové bunky a diferencované bunky odvodené z kultúr ľudskej pupočníkovej krvi môžu byť použité ako cenné reagenty pre farmaceutický priemysel a pre priemysel s biomateriálmi.
Preparáty USSC za vhodných kultivačných podmienok vytvárali mnohonásobné kolónie odlišných hematopoetických línií, poskytujúcich dôkaz, že tieto bunky môžu viesť k hematopoéze.
01-937-03-Ce
Vo vhodnom kondicionovanom kultivačnom médiu s definovanými koncentráciami VRGF, Fit 3L, SCGF (stem celí growth factor, rastový faktor kmeňových buniek) a v metylcelulóze také bunky vytvárajú zmiešané kolónie s bunkami taktiež pozitívnymi na FLK1+ a AC133+, Tiel a Tie2 markery. Po ďalšej diferenciácii sa vyvinuli charakteristiky markerového profilu pre endoteliálne bunky s negatívnym AC133, CD31+, CD54+, VWF+, VE-Catherin+.
Je nárokovaná zrejmá použitelnosť takých endoteliálnych buniek pre rast autológnych a allogénnych krvných ciev in vitro pre terapiu vaskulárnych ochorení.
Súčasne je zrejmé, že všetky tieto in vitro generované a homogénne expandované progenitory a ich diferencované bunky budú na úrovni klonov slúžiť ako mimoriadne významné prostriedky pre stanovenie roly špecifických génov a ich produktov v bunkovej biológii a pre všetky nasledujúce liečebné aplikácie, založené na bunkami alebo molekulami sprostredkovaných terapiách.
Iba malý počet týchto jedinečných bunkových typov je postačujúci pre tvorbu rozsiahleho počtu adherentne rastúcich USSC podlá vynálezu a viacej diferencovaných mezenchymálnych kmeňových buniek pre produkciu liečebne aplikovatelných regeneratívnych bunkových typov.
Celkom novým aspektom tohoto poznania je skutočnosť, že také progenitory sa môžu asymetricky vyvíjať do dvoch odlišne sa diferencujúcich typov. Toto odhaľuje nový biologický princíp spoločnej regulácie komponentmi vo funkčne orientovanej bunkovej regenerácii, ktorá sa uskutočňuje dokonca aj in vitro.
01-937-03-Ce
Prínosom tohoto vynálezu je, že terapie založené na kmeňových bunkách môžu byť navrhnuté podľa tohoto princípu a nespočívajú iba v jednom typu klonovaných buniek. Vynále je ďalej popísaný v nasledujúcich neobmedzujúcich príkladoch.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Odber pupočníkovej krvi (cord blood - CB)
Odber pupočníkovej krvi bol v pôrodníckom oddelení uskutočnený so súhlasom matky. Po narodení dieťaťa, keď bola placenta doposial v maternici, bola pupočníková šnúra dvakrát zasvorkovaná a odrezaná 7 - 10 cm od pupka. Po dezinfekcii šnúry bola napichnutá umbilikálna žila a CB bola odobratá do zberných vakov obsahujúcich citrát-fosfát dextrózu (CPD) ako antikoagulant.
Izolácia mononukleárnych buniek z pupočníkovej krvi
Pupočníková krv bola opatrne prevedená do roztoku Ficcolu (o hustote 1, 077 g/cm3 ) . Bola uskutočnená hustotná gradientová centrifugácia (450 g, izbová teplota, 25 min) . Mononukleárne bunky (MNC) z interfázy boli odobraté a dvakrát boli premyté fosfátovým fyziologickým roztokom, pH
7,3 (PBS).
Príprava adherentných vrstiev fibroblastoidnej morfológie
01-937-03-Ce
Mononukleárne bunky boli vysiate o hustote približne 5xl03 buniek/cm2 do kultivačných fliaš T25 (Nuncion) [A.),
B.), C.)]. Pre iniciáciu rastu adherentných kmeňových buniek boli použité štyri odlišné kultivační metódy:
A) . MNC z pupočníkovej krvi boli spočiatku kultivované v Myelocult H5100 médiu (StemCell Technologies, Vancouver/Canada) obsahujúcom IO7 M dexametazónu.
B. ) MNC z pupočníkovej krvi boli spočiatku kultivované v Mesencult médiu (StemCell Technologies, Vancouver/Canada) obsahujúcom IO-7 M dexametazónu.
C. ) MNC z krvi boli spočiatku kultivované v DMEM low glucose (BioWhittaker) s 30% FCS obsahujúcom IO”7 M dexametazónu.
D. ) MNC z pupočníkovej krvi boli vysiate o hustote 5xl06/ml do 10 ml média Myelocult H5100 (StemCell technologies, Vancouver, Canada) do 50ml kultivačných fliaš (Nuncion) bez dexametazónu.
Všetky kultúry boli kultivované pri 37 °C v 5% CO2 v plne nasýtenej atmosfére, boli vyživované odstránením všetkého média s neadherentnými bunkami jednou za týždeň a pridaním 10 ml čerstvého média. V určitých časových intervaloch boli adherentné) fuziformné bunky odstránené použitím 0,05% trypsínu a 0,53 mM EDTA po 2 min, premyté médiom obsahujúcom 50% sérum, zhromaždené centrifugáciou pri 780 g a analyzované prietokovou cytometriou alebo RTPCR. Po dvoch až troch týždňoch sa objavili adherentné bunky s fibroblastoidnou morfológiou približne v 30 % všetkých bunkových kultúr.
01-937-03-Ce
Kultivačné podmienky pre expanziu USSC podľa vynálezu
UŠSC podlá vynálezu môžu byť expandované v médiu H5100 obsahujúcom 10 ng/ml IGF I (Insulin-like growth factor-I, inzulínu podobný rastový faktor I), 10 ng/mlPDGF-BB (Platelet-derived growth factor-BB, doštičkový rastový faktor BB)a 10 ng/ml rh-human EGF (Recombinant Human epidermal growth factor, ľudský rekombinantný epidermálny rastový faktor) (PEI médium) o hustote v rozmedzí lxlO4 až lxlO5 buniek/ml (expanzná metóda A). Alternatívne, preparáty USSC môžu byť expandované v iniciačnom rastovom médiu A, B a C.
Príklad 2
Imunofenotypizace buniek cytofluorometriou
Aby mohol byť stanovený imunofenotyp USSC, boli bunky farbené s anti-CD45 konjugovanou s FITC (Becton Dickinson, Coulter), anti-CD14 konjugovanou s PE (PharMingen,
Coulter), antiSSEA-4 (MC-813-70) označenou kozím F(ab')2 anti-Mouse IgG+IgM (H + 1)-FITC (Coulter), ahti-CD10-PE (CALLA, PharMingen), anti-HLA-class I (Coulter) označenou kozím F(ab')2 anti-Mouse IgG+IgM (H + 1)-FITC, anti-CD13-PE (Becton Dickinson, Coulter), anti-CD29 (Coulter), anti-CD44 (Coulter), anti-CD49e (Coulter), anti-CD90 (Coulter), antiHLA-class II-FITC (Coulter). Bunky boli analyzované s použitím EPICS XL (Coulter) alebo FACS ahalyzéra (Becton Dickinson).
Príklad 3
01-937-03-Ce
Preukaz osteogénneho diferenciačného potenciálu USSC
USSC získané tak, ako bolo popísané v príklade 1, boli kultivované vo štandardnom médiu dokial nedosiahli 70% konfluencie. Osteogénna diferenciácie týchto buniek bola indukovaná pridaním 10'7 M dexametazónu, 50 Bg/ml kyseliny askorbovej a 10 mM β-glycerolfosfátu (Bruder et al. 1994, Jaiswal et al., 1977). V 10.dni stimulácie vykazovali bunky ukladanie fosfátov vedúce ku kostným nodulom.
Mineralizované kostné noduly boli detekované farbením alizarínovou červenou nasledovne: Adherentné bunky v kultúre boli dvakrát premyté PBS, pH 7,3 a farbené s 5 ml 0,1% roztoku alizarínovej červenej po dobu jednej hodiny pri izbovej teplote, a následne s 0,1% kyselinou octovou a absolútnym etanolom, rovnako ako PBS. Farbenie vápnika alizarínovou červenou a podlá von Kossa preukazuje mineralizáčný potenciál týchto buniek (Stanford et al., 1995, Rungby et al., 1993). Osteogénna diferenciácia bola taktiež preukázaná pomocou RT-PCR s použitím diferenciačných markerov špecifických pre kosť, ako je osteokalcín (OC), osteopontín (OP) , kostná špecifická alkalická fosfatáza (AP), kostný sialo-proteín (BSP), receptor alfa doštičkového rastového faktora (PDGF-Ra), receptor epidermálneho rastového faktora (EGFR) a kolagén typu I. t '
Príklad 4
Preukaz chondrogénneho diferenciačného potenciálu USSC.
Pre chondrogénnu diferenciáciu bolo 2xl05 adherentných buniek umiestnené do sedimentačnej kultúry v 15ml propylénových skúmavkách. Ako kultivační médium bolo
01-937-03-Ce použité médium „DMEM high glucose obsahujúce dexametazón, prolín, puruvát sodný, ITS+ Premix a TGF-βΙ (Johnstone et al., 1998, Yoo et al., 1998). V 7., 14. a 21. dni boli bunkové frakcie analyzované pomocou RT-PCR na špecifické génové produkty chrupky kódujúce Cart-1, kolagén typu II a chondroadherín. Okrem toho boli USSC použité v sedimentačných kultúrach. Po dvoch týždňoch boli rezy Dewax fixované s 4% paraformaldehydom po dobu 15 min pri izbovej teplote a premyté etanolom. Rezy boli farbené v 1% alciánovej modrej/3% kyseliny octovej, pH 2,5 (Sigma)po dobu 5 min a premyté destilovanou vodou. Jasne vykazovali pozitívne farbenie špecifických proteoglykánov, ako bolo preukázané farbením alciánovou modrou (Obr. 12) (Chao, G. Et al., 1993). Po chondrogénnej indukčnej perióde 14 dní boli bunky fixované podľa štandardného protokolu a analyzované fluorescenčnou mikroskopiou (Rosenbaum et al., 1998), ktorá preukázala prítomnosť kolagénu typu II v špecifickom extracelulárnom matrixe (Obr. 13 B) .
Príklad 5
Preukaz adipogénneho diferenciačného potenciálu USSC
USSC boli kultivované v H5100 obsahujúcom IO-6 M dexametazónu, 50 gg/ml kyseliny askorbovej a 10 mM βglycerolfosfátu, čo viedlo k čiastočnej diferenciácii USSC na adipocyty, ako bolo preukázané farbením olejovou červenou (Ramirez-Zacarias et al., 1992).
Príklad 6
Preukaz neurogénneho diferenciačného potenciálu USSC
01-937-03-Ce
Izolácia buniek a kultivačné podmienky pre gliálne bunky
Mononukleárne bunky z pupočníkovej krvi získané tak, ako bolo popísané, boli zbavené buniek CD14+ pomocou izolačného systému „CD14/magnetic activated celí sorting (MACS) využívajúceho VS+ separačné stĺpce podlá návodu výrobca (Miltenyi Biotec, Bergisch Gladbach). Mononukleárne bunky zbavené CD14 boli kultivované o hustote 2xl06/ml v 10 ml High Glucose Médium (Dulbecco's MEM s 4 500 g/l glukózy)v T25 kultivačných fľašiach (Nunclon) a inkubované pri 37 ° C v 5% CO2 v plne nasýtenej atmosfére. Po 10 - 15 dňoch boli detekované bunky gliálneho tvaru.
Diferenciácia k neurálnym bunkám
A) Bunky boli expandované po 7 dní buď to v H5100 médiu samotnom, alebo v prítomnosti 40 pg/ml PDGFB, 10 pg/ml EGF, 10 pg/ml IGF-I. Bunky boli ošetrené trypsínom a vysiate o hustote približne 3,5xl03 buniek/cm2 do 24jamkových kultivačných platni na viečka potiahnuté poly Dlyzínom (PDL) a laminínom (PDL/lam). Následne bola iniciovaná diferenciácia pridaním indukčných agensov, ako je all-trans kyselina retinová (10-5 M) , bGFG (20 ng/ml) a NGF-β (50 ng/ml).
Fluorescenčná mikroskopia
Po indukčnej perióde (27 dní) boli bunky fixované podía štandardného protokolu (Rosenbaum et al., 1998) a farbené s protilátkami proti neurálnym špecifickým antigénom. Vzorky boli analyzované s použitím fluorescenčnej a transmisnej svetelnej mikroskopie.
01-937-03-Ce
Príklad 7
Preukaz diferenciačného potenciálu na myocytickú líniu lxlO4 USSC bolo kultivované v H5100 médiu (StemCell Technology), doplnenom 10 ng/ml PDGFBB, 10 ng/ml EGF, 10 ng/ml IGF, pri 37 °C, 5% CO2/ dokial nebolo dosiahnuté 70% konfluencie. Potom boli bunky inkubované s 10 μΜ 5'azacytidínu (Sigma) po 24 h, dvakrát premyté PBS a kultivované v H5100 médiu doplnenom 100 ng/ml bFGF (Sigma). Po 1 týždni v diferenciačnom médiu došlo ku zmene morfológie buniek (Obr. 15). Po 10 dňoch boli bunky ošetrené trypsinom a prenesené do fibronektínom potiahnuté sklené komôrky pre imunofarbenie.
Imunohistochémiá
Bunky boli fixované pomocou 5% formaldehyd/PBS po dobu 15 min a premyté dvakrát PBS, pH 7,3. S použitím štandardného protokolu boli bunky inkubované so špecifickou primárnou protilátkou anti-skeletálny myozín (slow) (kloň NOQ7.54D, 1:400) (znázornené zelene) a primárnou protilátkou anti-CD13. (znázornené červene), alebo s monoklonálnou primárnou protilátkou anti-skeletálny myozín (kloň MY-32, 1:4000). Farbenie pre USSC kultivované za vyššie uvedených podmienok bolo pozitívne(Obr. 16).
Príklad 8
Ľudské bunky USSC rovnako ako mononukleárne bunky odvodené z pupočníkovej krvi (MNC) boli značené s PKH26 RED Fluórescent Celí Linker Kit (Sigma, PKH26-GL). 2xl05 USSC a 5xl06 MNC boli injikované do pečeňového parenchýmu myší
01-937-03-Ce
SCID s a bez 50% hepatektómie. 7 dní po transplantácii bolo dosiahnuté kompletnej pečeňovej regenerácie u hepatektomizovaných zvierat. Pečeňové tkanivo bolo analyzované fluorescenčnou mikroskopiou kryo-rezov na prítomnosť červene označených ludských buniek (Obr. 18).
Príklad 9
Preukaz potenciálu USSC k diferenciácii na,hematopoetickú líniu.
Tri odlišné preparáty USSC (USSCKCB55 v médiu DMEM obsahujúce 30 % FCS, USSCKCB121 v médiu H5100 obsahujúcom dexametazón, USSCKCB13 v médiu MesenCult obsahujúcom dexametazón a USSCGK121 v médiu H5100 obsahujúcom PEI) rastúce vo vhodnom expanznom médiu po predĺženú dobu (pasáže 5 až 8) boli vysiate v množstve 250 μΐ bunkovej suspenzie (2xl04 - 2xl05 ) buniek trojmo do 24-jamkových doštičiek v kultivačnom médiu špecifickom pre hematopoézu. (Methocut 4434) . Boli počítané kolónie o viacej ako 50 bunkách a podlá zavedených kritérií boli klasifikované ako bunky odvodené z granulocyt/makrofágu (CFU-GM), časného erytroidu (BFU-E) alebo multipotentné (CFU-GEMM) progenitorové bunky. Za diferenciačných podmienok bola zrejmá tvorba kolónií v odlišných kultúrach od prvého týždňa pozorovania až po nasledujúce tri týždne. Preparáty USSC vytvárali mnohonásobné kolónie odlišných línií, čo poskytlo dôkaz o tom, že tieto bunky môžu viesť k hematopoéze.
Príklad 10
01-937-03-Ce
Molekulárne metódy pre analýzu neobmedzených somatických kmeňových buniek a ich následných diferenciačných produktov
Boli vybrané PCR-priméry pre amplifikáciu špecifických cDNA sekvencií osteokalcínu, osteopontínu, kostného sialoproteínu, alkalickej fosfatázy, PDGFRa a EGF receptora z odlišných príslušných exónov tak, aby bolo možné je rozlíšiť podía veľkosti ich odpovedajúcich generovaných fragmentov DNA. Prostredníctvom klonovania do vektora pCRLl (Invitrogen/USA) a následnej transformácie do kmene E.coli TOP 10F boli získané odpovedajúce špecifické cDNA klony , ktoré boli charakterizované pomocou cyklického sekvenovania na automatickom sekvenátore (Applied Biosystems).
Reakcie RT-PCR boli uskutočnené vo dvojstupňovom postupe. 200 ng celkovej RNA buniek bolo najskôr reverzne transkribované s 10 U AMV reverznej transkriptázy (Promega, Mannheim), 1,5 pmol 3'-génovo špecifickými primérmi, 1 mM dNTPs a doplnkovým pufrom (Promega, Manheim) v objeme 20 μΐ po 1 h pri 50 °C. PCR reakcia bola uskutočnená s 2 μΐ cDNA s 1 U HotStarTaq DNA polymerázou, pufrom a Q-roztokom (Qiagen, Hilden), 1,5 mM dNTPs a 20 pmol 3'- a 5'- génovo špecifickým primárom. Reakcia PCR bola uskutočnená s iniciačným stupňom po dobu 15 min pri 95 ° C, 37 cyklov pri 94 ° C po 30 s, 56 ° C po 30 s, 68 ° C po 1 min a finálnym polymérizačným stupňom po dobu 5 min pri 68 ° C.
Tabulka 4: PCR-priméry pre amplifikáciu špecifických cDNA sekvencií
Tabulka ukazuje 5'- a 3'- sekvencie primérov vyšetrovaných génov a očakávanou dĺžku PCR fragmentu v bp (pároch báz).
01-937-03-Če
| názov j 5 'primérová sekvencia(!3'p | y—--- >rimérová sekvencia | bp | |
| PDGFRalfa | acágtggagattacgaatgtg | cacarcagtggtgatctcag ’ | 251 |
| IGFR | cgagtggagaaatctgcgg | gaccagggcgtagttgtag | 272 |
| EGFR: | tgccacaaccagtgtg ct | ccacataattacggggacac . | 205 |
| Ineurofilament | attcgcgcgcagcttgaag ’ · | cctggtaggaggca'atgtc | 2t-5 |
| GFAP; | ctctccctggctcgaatgc ' | cctcctgatäactggccg | 871 |
| synaptofyzín | cctgcagaacaagtaccgag ' | ccttg ctg ccca ta gtcg c | 516 |
| /rozín hydroxyláza | caccttcgcgcagttctcg | . ctgtccagcacgtcgatgg | 387 |
| ΪΒ1 ; | ggtgaggaggcagcaaatgt | agggttggaatactgtggtc | 279 |
| Runxl | gcaagctgaggagcggcg. | gaccgacaaacctgaagtc | 296 |
| AMLlc | cagtgcttcatgagagaatgc | gaccgacaaacctgaagtc | 453 |
| Cart-1 | ggagacgctggacaatgag | ggtagctgtcagtccttggc | 550 |
| CD105 | cctgccactggacacagg | atggcagctctgtggťgttg | 411 |
| kolagén typu I | ggacacaatggattgcaagg | a a cca ctg ctcca ctctg g | 441 |
| kolagén typu II | . tttcccaggtcaagatggtc | cttca gca cctgtctca cca | 377 |
| osteokalcín | agtccagcaaaggtgcagc | • ggccgtagaagcgccgat | ^31 |
| kalická fosfatáza | gcttcagaagctcaacacca i | cgttgtctgagtaccagtcc | 454 |
| beta aktín | gagaaaatcttgcaccacac | ctcggtgaggatcttcat | 340 |
01-937-03-Ce
Odkazy
Bruder S.,· Fink DJ., and Caplan Al. (1994). Mesenchymal sterri cells in bone formation, bo'né.repaír, and-skeletal regeneration therapy. J.' Celí.' Biochem. 55:284. ' ·/'? . ý ' · ·; .
Caplan, AL, Mesenchymal stem cells. (1991) J. Orthop. Ŕes.,9: 641-50.
Grompe,' M and Finegold M J. Liver Stem Cells. / p. 455 - 497 from Stem Celí Biology, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.
Grompe, M. and Finegold M J. Liver stem cells . p.'455-497 from Stem Celí Biology, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001. ·.
Halí, C. L,; Yang, B.; Yang, X.; Zhang, S.; Turley, M.; Samuel, S.; Lange, L. A.; Wang, C.; Curpen, G. D.; Savani, R. C.; Greenberg, A. H.; Turley, E. A. :
Overexpression of the hyalúronan receptor RHAMM.is transforming and is aiso required for H-ras transformation. Celí 82: 19-26, 1995.
Itano, N.; Kimata, K. Expression cloning and molecular characterization of HAS protein, a eukaryotic hyalúronan synthase. J. Biol. Chem. 27í: 9875-9878, 1995 '
Jaiswal N, Haynesworth SE, Caplan Al, Bruder SP. Osteogenic differentiation of. purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells in vitro. J Celí Biochem. 1997 Feb;64(2):295-312. ;
Johnstone B, Hering . TM,' Caplan Al, Goldberg VM,. Yoo JU. In vitro chondrogenesis of. bóne marrow-derived mesenchymal pŕogenitor cells. Exp Celí Res. 1998 Jan 10;238(l):265-72. .
KňitteLT, Kobold D, Piscaglia F, Saile B, Neubauer. K, Mehde M, Timpl Ŕ, Ramadori G. Localization of liver myofibroblasts and hepatic'stellate cells in normál and diseased rať'livers: distinct roles ' .of (myo-)fibroblast subpopulations in hepatic tissue repaír. Histocherrr Celí Biol 1999 .Nov;ll2(5):387-401
01-937-03-Ce
Kritzik M.R. and Sarvetnick N. Pancreatic Stem Cells, p. 499 - 513. from Stem
Celí Biology, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2001.
Mareschi K, -Biasin E, Piacibello W, Aglieťta M,-Madon E, Fagioli F.
. Haematologica 2001 0ct;86(10):1099-1.00. Isofation.of human mesenchymal . 'stem cells: bone rharrow versus umbilical cord bíood. . .
Pan, T.-C.; Sasaki, T.; Zhang/R.-Z.; Fassler, R.; Timpl, R.; Chu, M.-L. :
Structure and expression of fibulln-2, a novel extracellular. matrix protein with multiplé EGF-like repeats and consensus motifs for calcium binding. j. Celí Biol. 123:1269-1277, 1993.·.
Ramírez-Zacarias JL, Castro-Munozledo F,. Kuri-Harcuch W. Histochemistry
1992 Jul;97(6):493-7. Quantitation of aďipose conversion and triglycerides by staining intracýtoplasmic lipids with Oil red O.
Rosenbaum, C., Kluwe, L., Mautner, VF., Friedrich, R.E., Muller, HW.,
Hanemann, CO. (1998): Enhanced proliferation and potassium conductanceof.
Schwann cells isolated from NF2 schwannomas can be ŕedučed by quinidine.
. Neurobiol Dis 5, 55-64.
Rungby J, Kassem M, Eriksen EF, Danscher G.. Histochem J. 1993
Jun;25(6) :446-51. The von Kossa reaction for.calcium deposits: silver. lactate staining increases sensitivity and reduces background. - . ' • Stanford CM, Jacobson PA, Eanes ED, Lembké LA., Midu'ra RJ. J Biol Chem 1995
Apr 21;270(16):9420-8. Rapidly forming apatitic minerál in an osteoblastic celi line (UMR106-01 BSP). Λ ?/..· ' ·. --Shapiro A.M. J., Lakey J.R.T., Ryan E. A., Kbrbutt G. S./Toth E., Warnock G.
:L.; Kneteman N. M., Rajotte R. V. N Engl J Med 2000 Juľ 27; (.343):230-238. Islet Transplantation in Seven Patients .with Type 1 Diabetes Mellitus Using a .GIucocorticoid-Free Immunosuppressive Regimen. -///-/ / -.- . ...
Šztrolovics, R.; Cheň, X.-IM.; Grover, J.; Roughley, P. J.; Korénberg, J. R; :
Locaiization of the humari.ôbromodulin gene. (FMOD) to chromosomé lq32 and . completion of the cDNA sequence. Genomicš 23: 715-717,1994.· ' .
01-937-03-Ce
Tsuda T, Wang H, Timp! R, Chu.ML. Fibulin-2 expression marks transformed mesenchymal cells in develo'ping cardiac. valves, aortic árch vesseľs, and coronary vessels. Dev Dyn'20Ól Sep;222(l):89-100 .ú
Van der Schoot, C. E.; Huizínga, T. W.J.; Gadd, S. K.; Majdic, O.; Wijmans, R.; Knapp, W.; Von dem Borne, A. E. G. . :·Identification of three novel PIlinkéd proteins on granulocytes.In: Knapp, W.; Dorken, B.; Gilks, W. R.; Rieber, E. P.; Schmidt, R. E.;.Stein, H.; Von dem Borne, A. E. G. K. : Leukocyte Typing IV: White Celí Differentiation Antigens. Oxford: Oxford.Univ. Press (pub.) 1989. Pp. 887-891 ·.
Yoo JU, Barthel TŠ, Nishimura K, Solchaga L, Caplan ÁI, Goldberg VM, Johnstone B. The chondrogenic potential. of. humán : bone-marrow-derived mesenchymal progeriitor' cells. J Bone Joint Surg Am. 1998 Dec;80(12):174557.
Zhang, R.-Z.; Pan, T.-C.; Zhang, Z.-Y.; Mattei, M.-G.; Timpl, R.; Chu, M.-L. : Fibulin-2 (FBLN2): human cDNA.sequence, mRNA expression, and mapping of the gene on human and mouse chromosomes. Genomics.22: 425-430, 1994.
Významy použitých skratiek
DAG osteogénne diferenciačné médium obsahujúce dexametazón, kyselinu askorbovú a βglycerolfosfát
HLA ludský leukocytový antigén
MSC mezenchymálna kmeňová bunka
PEI médium obsahujúce PDGF-BB, EGF a IGF
SSEA4 štádiovo špecifický časný antigén 4
USSC neobmedzená somatická kmeňová bunka
PG proteoglykány
Claims (11)
1.Neobmedzená somatická kmeňová bunka (USSC) získaná z ludskej pupočníkovej krvi, placentárnej krvi a/alebo krvných vzoriek novorodencov, kde spomínaná somatická kmeňová bunka je diferencovaná od, ale schopná diferencovať na mezenchymálne kmeňové alebo progenitorové bunky, hematopoetickú líniu kmeňových alebo progenitorových buniek, neurálnych kmeňových alebo progenitorových buniek alebo endoteliálnych kmeňových alebo progenitorových buniek.
2.Somatické kmeňové bunky podľa nároku 1 reagujúce negatívne s markermi špecifickými pre CD45, a CD14 a pozitívne s markerom pre CD13, CD29, CD44 a CD49 povrchových antigénov.
3.Somatická kmeňová bunka podľa nároku 1 reagujúca pozitívne s markerom SSEA4 embryonálnej kmeňovej bunky po kultivácii vo vhodnom médiu a exprimujúca transkripčné faktory YB1, AML-1 a RUNX-1.
4.Somatické kmeňové bunky zreteľne diferencované od mezenchymálnych kmeňových buniek na základe tkanivového zdroja pre izoláciu a vzoriek exprimovaných povrchových antigénov (HLA I), rovnako ako transkripčných faktorov.
5.Somatické kmeňové bunky podľa nároku 1 diferencované od MCS na základe expresie fibulínu-2 (číslo v génovej banke X82494) a absencie expresie hyaluronan syntázy (D84424), fibromodulínu (U05291) a 1NFLS (WO3846), ako je stanovené Affimetrix analýzou.
01-937-03-Ce
6.Somatické kmeňové bunky podľa nároku 1, ktoré majú fibroblastoidný bunkový tvar a požiadavky adherentného rastu.
7. Pluralita alebo zmes somatických kmeňových buniek podľa nároku 1, somatické kmeňové bunky pre hematopoetickú líniu, prednostne exprimujúcu AC133 a CD34, mezenchymálne progenitorové somatické kmeňové bunky, neurálne progenitorové somatické kmeňové bunky alebo ich kombinácie.
8. Pluralita alebo zmes somatických kmeňových buniek podľa nároku 7, kde mezenchymálne progenitorové bunky alebo neurálne progenitorové bunky sú diferencované z kmeňovej bunky podľa nároku 1.
9. Liečivo obsahujúce somatické kmeňové bunky podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 alebo pluralitu alebo zmes somatických kmeňových buniek podľa nároku 7 a/alebo 8.
10.Spôsob použitia neobmedzených somatických kmeňových buniek podlá ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 alebo plurality alebo zmesi kmeňových buniek podľa nároku 7 a/alebo 8 v génovej terapii, náhrade orgánov, testovaní farmaceutík, testovaní biomateriálov vrátane ortopedických zariadení, in vitro rastu krvných ciev, terapii vaskulárnych a srdcových chorôb alebo ochorení hladkého svalstva, kostí a pečene, pankreatických a neurálnych ochoreniach.
11.Spôsob pre izoláciu a purifikáciu neobmedzených neonatálnych kmeňových buniek podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 6 zahrnujúci kroky hustotnej gradientovej izolácie, kultivácie adherentných buniek a subkultivácie s použitím rastových faktorov.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US24516800P | 2000-11-03 | 2000-11-03 | |
| PCT/EP2001/012768 WO2002036751A2 (en) | 2000-11-03 | 2001-11-03 | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (ussc) |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK5242003A3 true SK5242003A3 (en) | 2003-11-04 |
Family
ID=22925565
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK524-2003A SK5242003A3 (en) | 2000-11-03 | 2001-11-03 | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) |
Country Status (25)
| Country | Link |
|---|---|
| US (3) | US7560280B2 (sk) |
| EP (1) | EP1404815B1 (sk) |
| JP (2) | JP4799804B2 (sk) |
| CN (1) | CN100480375C (sk) |
| AT (1) | ATE340255T1 (sk) |
| AU (2) | AU2953302A (sk) |
| BG (1) | BG107770A (sk) |
| CA (1) | CA2426987C (sk) |
| CY (1) | CY1106287T1 (sk) |
| CZ (1) | CZ20031165A3 (sk) |
| DE (1) | DE60123293T2 (sk) |
| DK (1) | DK1404815T3 (sk) |
| EA (1) | EA008619B1 (sk) |
| EE (1) | EE200300205A (sk) |
| ES (1) | ES2272563T3 (sk) |
| HK (1) | HK1071771A1 (sk) |
| HU (1) | HUP0301600A3 (sk) |
| IL (2) | IL155608A0 (sk) |
| MX (1) | MXPA03003844A (sk) |
| NO (1) | NO20031999L (sk) |
| PL (1) | PL362293A1 (sk) |
| PT (1) | PT1404815E (sk) |
| SK (1) | SK5242003A3 (sk) |
| UA (1) | UA81390C2 (sk) |
| WO (1) | WO2002036751A2 (sk) |
Families Citing this family (102)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ATE292473T1 (de) * | 1998-07-30 | 2005-04-15 | Us Gov Health & Human Serv | Thymosin beta 4 stimuliert wundheilung |
| US8609412B2 (en) * | 1999-08-05 | 2013-12-17 | Regents Of The University Of Minnesota | Mapc generation of lung tissue |
| ATE514772T1 (de) * | 1999-08-05 | 2011-07-15 | Abt Holding Co | Multipotente erwachsene stammzellen und verfahren zu deren isolierung |
| US8075881B2 (en) * | 1999-08-05 | 2011-12-13 | Regents Of The University Of Minnesota | Use of multipotent adult stem cells in treatment of myocardial infarction and congestive heart failure |
| US7015037B1 (en) | 1999-08-05 | 2006-03-21 | Regents Of The University Of Minnesota | Multiponent adult stem cells and methods for isolation |
| US10638734B2 (en) | 2004-01-05 | 2020-05-05 | Abt Holding Company | Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof |
| US7927587B2 (en) * | 1999-08-05 | 2011-04-19 | Regents Of The University Of Minnesota | MAPC administration for the treatment of lysosomal storage disorders |
| US8252280B1 (en) | 1999-08-05 | 2012-08-28 | Regents Of The University Of Minnesota | MAPC generation of muscle |
| IL157332A0 (en) * | 2001-02-14 | 2004-02-19 | Multipotent adult stem cells, sources thereof, methods of obtaining and maintaining same, methods of differentiation thereof, methods of use thereof and cells derived thereof | |
| JP2005502672A (ja) * | 2001-08-29 | 2005-01-27 | リジェナークス・バイオファーマスーティカルズ・インコーポレイテッド | サイモシンβ４、類似体、アイソフォームおよびその他の誘導体を用いて心筋障害の発生前、発生中または発生後に発生する炎症、損傷およびその他の変化を治癒または予防する方法 |
| DE10144326B4 (de) * | 2001-09-10 | 2005-09-22 | Siemens Ag | Verfahren und System zur Überwachung eines Reifenluftdrucks |
| DE10158680B4 (de) * | 2001-11-30 | 2004-04-08 | Universitätsklinikum Hamburg-Eppendorf | Verfahren zur ex vivo-Expansion und -Differenzierung von multipotenten Stammzellen |
| US20050214940A1 (en) * | 2002-01-23 | 2005-09-29 | Rao Mahendra S | Pure populations of astrocyte restricted precursor cells and methods for isolation and use thereof |
| WO2003070922A1 (en) * | 2002-02-19 | 2003-08-28 | Medipost Co., Ltd. | Isolation and culture-expansion methods of mesenchymal stem/progenitor cells from umbilical cord blood, and differentiation method of umbilical cord blood-derived mesenchymal stem/progenitor cells into various mesenchymal tissues |
| CN1717177A (zh) | 2002-11-26 | 2006-01-04 | 人类起源公司 | 细胞治疗剂、细胞治疗单元及其用于治疗的方法 |
| US20060228798A1 (en) | 2002-11-27 | 2006-10-12 | Catherine Verfaillie | Homologous recombination in multipotent adult progenitor cells |
| JP4672370B2 (ja) * | 2002-12-05 | 2011-04-20 | ケース ウエスタン リザーブ ユニバーシティ | 虚血の細胞ベースの治療 |
| US7470538B2 (en) * | 2002-12-05 | 2008-12-30 | Case Western Reserve University | Cell-based therapies for ischemia |
| JP3762975B2 (ja) * | 2003-03-18 | 2006-04-05 | 学校法人慶應義塾 | 単球由来多能性細胞ｍｏｍｃ |
| US20040203142A1 (en) * | 2003-04-14 | 2004-10-14 | Reliance Life Sciences Pvt. Ltd. | Growth of neural precursor cells using umbilical cord blood serum and a process for the preparation thereof for therapeutic purposes |
| ATE510005T1 (de) | 2003-06-27 | 2011-06-15 | Univ Laval | Verfahren zur isolierung von zellen aus der nabelschnur |
| WO2005001079A2 (en) | 2003-06-27 | 2005-01-06 | Ethicon, Incorporated | Soft tissue repair and regeneration using postpartum-derived cells |
| US8790637B2 (en) | 2003-06-27 | 2014-07-29 | DePuy Synthes Products, LLC | Repair and regeneration of ocular tissue using postpartum-derived cells |
| DE602004031033D1 (de) * | 2003-10-09 | 2011-02-24 | Core Dynamics Ltd | Verfahren zum tiefgefrieren, auftauen und transplantieren von lebensfähigem knorpel |
| AU2004296848A1 (en) | 2003-12-04 | 2005-06-23 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for the treatment of lysosomal storage disorders |
| EP1708757A4 (en) * | 2003-12-19 | 2007-01-17 | Viacell Inc | USE OF PLURIPOTENTIAL CELLS TAKEN FROM HUMAN CORDIAL BLOOD BLOOD FOR THE TREATMENT OF DISEASE |
| EP1544290A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-06-22 | Yu-Show Fu | A cell system for generating somatic cells |
| GB0329449D0 (en) * | 2003-12-19 | 2004-01-28 | Omnicyte Ltd | Stem cells |
| WO2005072790A1 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-11 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Device for directional cooling of biological matter |
| WO2005072523A2 (en) * | 2004-02-02 | 2005-08-11 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Biological material and methods and solutions for preservation thereof |
| AU2004316477B2 (en) | 2004-02-11 | 2010-10-07 | Aldagen, Inc. | Stem cell populations and methods of use |
| EP1747265B1 (en) * | 2004-04-23 | 2011-04-20 | BioE LLC | Multi-lineage progenitor cells |
| US7622108B2 (en) | 2004-04-23 | 2009-11-24 | Bioe, Inc. | Multi-lineage progenitor cells |
| US20070298015A1 (en) * | 2004-04-28 | 2007-12-27 | Viacell, Inc. | Treatment of Muscular Dystrophy with Mobilized Peripheral Blood Pluripotent Cells |
| US20050265980A1 (en) * | 2004-05-14 | 2005-12-01 | Becton, Dickinson And Company | Cell culture environments for the serum-free expansion of mesenchymal stem cells |
| WO2005120591A1 (en) * | 2004-06-07 | 2005-12-22 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Method for sterilization of biological preparations |
| EP1778007A1 (en) * | 2004-08-12 | 2007-05-02 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Method and apparatus for freezing or thawing of a biological material |
| WO2006074308A2 (en) * | 2005-01-07 | 2006-07-13 | Wake Forest University Health Sciences | Regeneration of pancreatic islets by amniotic fluid stem cell therapy |
| WO2006086639A1 (en) * | 2005-02-10 | 2006-08-17 | Regents Of The University Of Minnesota | Vascular/lymphatic endothelial cells |
| EP1850661A2 (en) * | 2005-02-22 | 2007-11-07 | Interface Multigrad Technology (IMT) Ltd. | Preserved viable cartilage, method for its preservation, and system and devices used therefor |
| CN101575590B (zh) * | 2005-02-28 | 2012-05-23 | 中国医学科学院血液学研究所泰达生命科学技术研究中心 | 人脐带间充质干细胞的制备方法 |
| EP1874922A4 (en) * | 2005-04-19 | 2009-10-28 | Univ Johns Hopkins | METHOD USING STROMA CELLS FROM UMBILICAL CORD BLOOD TO DEVELOP AND GRAFT NUCLEAR CELLS DERIVED FROM UMBILICAL CORD BLOOD |
| US20080311084A1 (en) * | 2005-05-05 | 2008-12-18 | Verfaillie Catherine M | Mapc Engraftment in the Hematopoietic System |
| AU2005331559B2 (en) * | 2005-05-05 | 2012-04-19 | Regents Of The University Of Minnesota | Use of NK cell inhibition to facilitate persistence of engrafted MHC-I negative cells |
| JP2008545703A (ja) * | 2005-05-27 | 2008-12-18 | バイアセル インコーポレーティッド | 幹細胞を用いた虚血の処置 |
| WO2007117262A2 (en) * | 2005-07-29 | 2007-10-18 | Athersys, Inc. | Culture of non-embryonic cells at high cell density |
| WO2007015252A2 (en) | 2005-08-03 | 2007-02-08 | I.M.T. Interface Multigrad Technology Ltd. | Somatic cells for use in cell therapy |
| JP2007528229A (ja) * | 2005-08-26 | 2007-10-11 | ソウル ナショナル ユニバーシティ インダストリー ファウンデーション | 臍帯血から分離された多能性幹細胞及びこれを含有する虚血性壊死疾患治療用細胞治療剤 |
| JP2009511061A (ja) | 2005-10-14 | 2009-03-19 | リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミネソタ | 膵臓表現型を有する細胞への非胚性幹細胞の分化 |
| AU2006325710B2 (en) | 2005-12-16 | 2012-05-17 | Ethicon, Inc. | Compositions and methods for inhibiting adverse immune response in histocompatibility-mismatched transplantation |
| US9125906B2 (en) | 2005-12-28 | 2015-09-08 | DePuy Synthes Products, Inc. | Treatment of peripheral vascular disease using umbilical cord tissue-derived cells |
| EP2471904B1 (en) | 2005-12-29 | 2018-10-24 | Celularity, Inc. | Placental stem cell populations |
| CA2646491A1 (en) * | 2006-04-17 | 2007-10-25 | Bioe, Inc. | Differentiation of multi-lineage progenitor cells to respiratory epithelial cells |
| US7875453B2 (en) * | 2006-06-14 | 2011-01-25 | Bioe Llc | Differentiation of multi-lineage progenitor cells to hepatocytes |
| CN101611139B (zh) * | 2006-11-13 | 2012-07-04 | 伊西康公司 | 利用微载体的产后来源的细胞的体外扩增 |
| WO2008085229A2 (en) * | 2006-11-15 | 2008-07-17 | Arteriocyte Inc. | Cell-based therapies for treating liver disease |
| AU2007321928A1 (en) * | 2006-11-24 | 2008-05-29 | Regents Of The University Of Minnesota | Endodermal progenitor cells |
| MX2009005496A (es) | 2006-11-30 | 2009-06-03 | Medipost Co Ltd | Uso de una composicion que contiene una celula madre mesenquimal derivada de sangre del cordon umbilical humano para inducir diferenciacion y proliferacion de celulas precursoras neurales o celulas madre neurales a celulas neurales. |
| CN101835479A (zh) * | 2007-07-25 | 2010-09-15 | 佰欧益有限公司 | 多系祖细胞分化为软骨细胞 |
| CA2714777A1 (en) * | 2007-10-31 | 2009-05-07 | Cryo-Cell International, Inc. | Methods for co-culturing cord blood derived cells with menstrual stem cells |
| US20120156134A1 (en) | 2007-12-20 | 2012-06-21 | Shayne Squires | Compositions and methods for detecting or eliminating senescent cells to diagnose or treat disease |
| AU2009205886B2 (en) | 2008-01-18 | 2015-08-27 | Katholieke Universiteit Leuven | Stem cell aggregates and methods for making and using |
| US20090202978A1 (en) * | 2008-02-13 | 2009-08-13 | Ginadi Shaham | Method and apparatus for freezing of a biological material |
| US20090233993A1 (en) * | 2008-03-06 | 2009-09-17 | Burnham Institute For Medical Research | Compositions and methods for inhibiting gsk3 activity and uses thereof |
| CN101543644B (zh) * | 2008-03-27 | 2012-07-25 | 中国人民解放军总医院 | 无支架工程软骨组织的构建方法及其产品 |
| WO2009143241A2 (en) * | 2008-05-21 | 2009-11-26 | Bioe, Inc. | Differentiation of multi-lineage progenitor cells to pancreatic cells |
| US8728805B2 (en) | 2008-08-22 | 2014-05-20 | Anthrogenesis Corporation | Methods and compositions for treatment of bone defects with placental cell populations |
| PL3006459T3 (pl) | 2008-08-26 | 2022-01-17 | City Of Hope | Sposób i kompozycje dla wzmocnionego działania efektorowego komórek t przeciw guzowi nowotworowemu |
| GB0818725D0 (en) | 2008-10-13 | 2008-11-19 | Habib Nagy A | Pharmaceutical composition |
| EP2182055A1 (en) | 2008-10-14 | 2010-05-05 | Heinrich-Heine-Universität Düsseldorf | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) |
| US9057051B2 (en) | 2008-10-31 | 2015-06-16 | Katholieke Universiteit Leuven | Optimized methods for differentiation of cells into cells with hepatocyte progenitor phenotypes, cells produced by the methods, and methods of using the cells |
| KR20100054711A (ko) | 2008-11-14 | 2010-05-25 | 메디포스트(주) | 간엽 줄기세포 또는 이의 배양액을 포함하는 신경질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| US10179900B2 (en) | 2008-12-19 | 2019-01-15 | DePuy Synthes Products, Inc. | Conditioned media and methods of making a conditioned media |
| US20110020292A1 (en) * | 2009-07-21 | 2011-01-27 | Abt Holding Company | Use of Stem Cells to Reduce Leukocyte Extravasation |
| CN102625829B (zh) * | 2009-07-21 | 2015-05-06 | Abt控股公司 | 干细胞用于减少白细胞外渗的用途 |
| US8759098B2 (en) | 2009-12-04 | 2014-06-24 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Method for cloning pluripotent stem cells |
| WO2011069093A1 (en) | 2009-12-04 | 2011-06-09 | Boston Biomedical Research Institute, Inc. | Detecting and counting tissue-specific stem cells and uses thereof |
| US20110206647A1 (en) * | 2010-02-25 | 2011-08-25 | Abt Holding Company | Modulation of Angiogenesis |
| WO2011106476A1 (en) * | 2010-02-25 | 2011-09-01 | Abt Holding Company | Modulation of microglia activation |
| EP3940060A1 (en) | 2010-02-25 | 2022-01-19 | ABT Holding Company | Modulation of macrophage activation |
| WO2011127113A1 (en) | 2010-04-08 | 2011-10-13 | Anthrogenesis Corporation | Treatment of sarcoidosis using placental stem cells |
| CA3128483A1 (en) | 2010-05-12 | 2011-11-17 | Abt Holding Company | Modulation of splenocytes in cell therapy |
| US9090878B2 (en) | 2010-06-17 | 2015-07-28 | Katholieke Universiteit Leuven | Methods for differentiating cells into hepatic stellate cells and hepatic sinusoidal endothelial cells, cells produced by the methods, and methods for using the cells |
| WO2012027358A1 (en) | 2010-08-23 | 2012-03-01 | President And Fellows Of Harvard College | Optogenetic probes for measuring membrane potential |
| AU2011293440B2 (en) | 2010-08-24 | 2016-05-05 | Katholieke Universiteit Leuven | Non-static suspension culture of cell aggregates |
| WO2012048275A2 (en) | 2010-10-08 | 2012-04-12 | Caridianbct, Inc. | Configurable methods and systems of growing and harvesting cells in a hollow fiber bioreactor system |
| WO2012092485A1 (en) | 2010-12-31 | 2012-07-05 | Anthrogenesis Corporation | Enhancement of placental stem cell potency using modulatory rna molecules |
| WO2012141571A1 (en) * | 2011-04-11 | 2012-10-18 | M Abdullah Jaffar Ali Bin | Protein-free culture media products |
| CN102776150A (zh) * | 2011-05-13 | 2012-11-14 | 上海交通大学医学院附属第九人民医院 | 一种诱导脐带间充质干细胞分化为内皮细胞的方法 |
| AU2012262273B2 (en) | 2011-06-01 | 2017-09-14 | Celularity Inc. | Treatment of pain using placental stem cells |
| SG10201604543PA (en) | 2011-06-06 | 2016-07-28 | ReGenesys BVBA | Expansion of stem cells in hollow fiber bioreactors |
| GB201119335D0 (en) | 2011-11-09 | 2011-12-21 | Univ Leuven Kath | Hepatitis virus infectable stem cells |
| KR102161726B1 (ko) | 2013-04-12 | 2020-10-06 | 사베리오 라프란체스카 | 이식용 장기의 개선 |
| DK2992088T3 (da) | 2013-04-30 | 2019-11-11 | Univ Leuven Kath | Celleterapi for myelodysplastiske syndromer |
| JP6633522B2 (ja) | 2013-11-16 | 2020-01-22 | テルモ ビーシーティー、インコーポレーテッド | バイオリアクターにおける細胞増殖 |
| EP2952578A1 (de) | 2014-06-03 | 2015-12-09 | Peter Wernet | Epigenetische Reprogrammierung von fötalen Stammzellen |
| IL292650B2 (en) | 2014-09-19 | 2024-04-01 | Hope City | IL13RA2-targeted chimeric antigen receptor T cells |
| TW201613622A (en) * | 2014-10-14 | 2016-04-16 | Bionet Corp | Composition for skincare and pharmaceutical composition and preparation method thereof |
| SG11201806245TA (en) | 2016-01-21 | 2018-08-30 | Abt Holding Co | Stem cells for wound healing |
| CN106377547B (zh) * | 2016-09-30 | 2019-05-31 | 孔五一 | 脐带血再生粒子的提取方法及其用途 |
| CN113637633B (zh) * | 2021-08-16 | 2023-11-03 | 浙江大学 | 一种促进间充质干细胞向成骨细胞分化的方法 |
| CA3232099A1 (en) | 2021-09-23 | 2023-03-30 | Adam Ezra Cohen | Genetically encoded voltage indicators and uses thereof |
Family Cites Families (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3639949A1 (de) | 1986-11-22 | 1988-06-09 | Diagen Inst Molekularbio | Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren |
| US5192553A (en) * | 1987-11-12 | 1993-03-09 | Biocyte Corporation | Isolation and preservation of fetal and neonatal hematopoietic stem and progenitor cells of the blood and methods of therapeutic use |
| US5486359A (en) * | 1990-11-16 | 1996-01-23 | Osiris Therapeutics, Inc. | Human mesenchymal stem cells |
| US5851832A (en) * | 1991-07-08 | 1998-12-22 | Neurospheres, Ltd. | In vitro growth and proliferation of multipotent neural stem cells and their progeny |
| US5672346A (en) * | 1992-07-27 | 1997-09-30 | Indiana University Foundation | Human stem cell compositions and methods |
| US6482231B1 (en) * | 1995-11-20 | 2002-11-19 | Giovanni Abatangelo | Biological material for the repair of connective tissue defects comprising mesenchymal stem cells and hyaluronic acid derivative |
| US5842477A (en) * | 1996-02-21 | 1998-12-01 | Advanced Tissue Sciences, Inc. | Method for repairing cartilage |
| AU2730497A (en) * | 1996-04-17 | 1997-11-07 | Case Western Reserve University | Cryopreservation and extensive subculturing of human mesenchymal stem cells |
| US5843633A (en) * | 1996-04-26 | 1998-12-01 | Amcell Corporation | Characterization of a human hematopoietic progenitor cell antigen |
| JPH10295369A (ja) | 1997-02-26 | 1998-11-10 | Japan Tobacco Inc | 造血幹細胞の製造方法 |
| JPH10306027A (ja) | 1997-03-07 | 1998-11-17 | Otsuka Pharmaceut Co Ltd | 免疫寛容誘導剤 |
| AU8401498A (en) * | 1997-07-14 | 1999-02-10 | Osiris Therapeutics, Inc. | Cardiac muscle regeneration using mesenchymal stem cells |
| DE19833476B4 (de) | 1998-07-24 | 2005-08-25 | Huss, Ralf, Dr. | Genetisch modifizierte CD34-Negative, adhärent wachsende hämatopoetische Stammzellen und deren Verwendung in der Gentherapie |
| CA2371017A1 (en) | 1999-04-27 | 2000-11-02 | Layton Bioscience, Inc. | Cell therapy for chronic stroke |
| US20020142457A1 (en) * | 1999-12-28 | 2002-10-03 | Akihiro Umezawa | Cell having the potentiality of differentiation into cardiomyocytes |
| WO2003070922A1 (en) * | 2002-02-19 | 2003-08-28 | Medipost Co., Ltd. | Isolation and culture-expansion methods of mesenchymal stem/progenitor cells from umbilical cord blood, and differentiation method of umbilical cord blood-derived mesenchymal stem/progenitor cells into various mesenchymal tissues |
| US20040197310A1 (en) * | 2003-02-12 | 2004-10-07 | Sanberg Paul R. | Compositions and methods for using umbilical cord progenitor cells in the treatment of myocardial infarction |
-
2001
- 2001-11-02 US US09/985,335 patent/US7560280B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2001-11-03 DK DK01990388T patent/DK1404815T3/da active
- 2001-11-03 PT PT01990388T patent/PT1404815E/pt unknown
- 2001-11-03 AU AU2953302A patent/AU2953302A/xx active Pending
- 2001-11-03 WO PCT/EP2001/012768 patent/WO2002036751A2/en active IP Right Grant
- 2001-11-03 AT AT01990388T patent/ATE340255T1/de active
- 2001-11-03 UA UA2003044039A patent/UA81390C2/xx unknown
- 2001-11-03 EE EEP200300205A patent/EE200300205A/xx unknown
- 2001-11-03 CA CA2426987A patent/CA2426987C/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 EA EA200300536A patent/EA008619B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-11-03 HU HU0301600A patent/HUP0301600A3/hu unknown
- 2001-11-03 EP EP01990388A patent/EP1404815B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 CN CNB018217028A patent/CN100480375C/zh not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 PL PL36229301A patent/PL362293A1/xx unknown
- 2001-11-03 SK SK524-2003A patent/SK5242003A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-11-03 CZ CZ20031165A patent/CZ20031165A3/cs unknown
- 2001-11-03 ES ES01990388T patent/ES2272563T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 IL IL15560801A patent/IL155608A0/xx unknown
- 2001-11-03 AU AU2002229533A patent/AU2002229533B2/en not_active Expired
- 2001-11-03 DE DE60123293T patent/DE60123293T2/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-11-03 MX MXPA03003844A patent/MXPA03003844A/es active IP Right Grant
- 2001-11-03 JP JP2002539497A patent/JP4799804B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2003
- 2003-04-28 IL IL155608A patent/IL155608A/en not_active IP Right Cessation
- 2003-04-30 BG BG107770A patent/BG107770A/bg unknown
- 2003-05-02 NO NO20031999A patent/NO20031999L/no not_active Application Discontinuation
-
2004
- 2004-01-15 US US10/758,644 patent/US7556801B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2005
- 2005-05-31 HK HK05104566.1A patent/HK1071771A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-12-11 CY CY20061101781T patent/CY1106287T1/el unknown
-
2008
- 2008-01-28 JP JP2008016859A patent/JP4805960B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
2009
- 2009-04-02 US US12/417,294 patent/US20090238803A1/en not_active Abandoned
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US7560280B2 (en) | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (USSC) | |
| AU2002229533A1 (en) | Human cord blood derived unrestricted somatic stem cells (ussc) | |
| JP6483187B2 (ja) | 増強された幹細胞組成物 | |
| Itescu et al. | New directions in strategies using cell therapy for heart disease | |
| EP3107995B1 (en) | Biophysically sorted osteoprogenitors from culture expanded bone marrow derived mesenchymal stromal cells (mscs) | |
| US20070243172A1 (en) | Multipotent stem cells derived from placenta tissue and cellular therapeutic agents comprising the same | |
| JP6545690B2 (ja) | 栄養膜基底層から由来した幹細胞及びそれを含む細胞治療剤 | |
| KR20170036105A (ko) | 치료학적 용도의 줄기 세포 조성물 및 줄기 세포의 제조 방법 | |
| Brown et al. | Stem Cells and Acellular Preparations in Bone Regeneration/Fracture Healing: Current Therapies and Future Directions | |
| Que et al. | Multilineage-Differentiating Stress-Enduring Cells: A Powerful Tool for Tissue Damage Repair | |
| Kögler et al. | Cord Blood Content | |
| DIFFERENTIATE et al. | Final accepted version | |
| Sivajothi | Comparative properties of stromal cells and their role in tissue regeneration | |
| CALAVUL et al. | The Role of Stem Cell in Plastic Reconstructive and Aesthetic Surgery | |
| Lindroos | Characterization and optimization of in vitro culture conditions of adult stem cells for clinical cell therapy | |
| Malagola | Isolation and characterization of mesenchymal stromal cells from the canine liver | |
| Itescu | Monitoring Stem Cell Research |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FC9A | Refused patent application |