SK32693A3 - Cyclopeptides, a method of preparing them and their use as drugs - Google Patents

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových cy k I opcp l: i ilnv , ktoré sú tvorené zby tkaní! prírodných a nepri rodných aminokyselín, ich výroby a použitia ako liečiv. Peptidy sú ΛΝΡ-agoni s ty. .

Nové cyklopep t .i.dy predstavujú parciálne sekvencie, parciálne sekvencie d i skon t i nuá I ne medzi sebou spojené, i, modifikované parciálne sekvencie a analógy takzvaných atriálnych na tr iuretických faktorov, ANP alebo at r .i ál.nych na t r :i u re t i okých pcpt.idov.

Doterajší stav techniky

ANP je syntetizovaný hlavne v svalových bunkách srdečných komôr, tam je tiež ukladaný ako prohormón ti uvoľňovaný mechanickým dráždením zvýšeným napätím steny. Pôsobí, ako relaxans ciev, znižuje krvný tlak, pôsobí d i ureticky a saluLcricky, zvyšuje glomerulárnu filtráciu, redukuje objem plazmy ti zvyšuje hematokri Ľ, znižuje aktivitu plazmového ren i nu a hladinu aldostcrónu v plazme, pôsobí. spmasmoly L icky na hladké svalstvo čreva a bronchoI y t icky. Pôsobenie je sprosti' 4 redkované špecifickými receptormi.

L

V tomto opise a v nárokoch holi použité skratky podľa doporučen í a IUPAC-IUB .1 o i n t Commission of B iochcmica l Nomenclaturc (Eur.J .B iochcm. 138,9-37, 1984). Boli použité aj ďalšie skratky, ktoré sú ďalej vysvetlené.

Aund	w -am inoundekanová kyse1 i na
Abu t	ý - am i nomas 1 ovil kysel i na
Aoc	ω-am inooktánová kysel i na
Apen	δ-am inopentánová kysol i na
Aca	ί - am i nokap rófiová kysol i na
Aib	« -am i no i zomas 1 ová kyse 1 i ria
Ala	a 1 ti n í n
Ala	P - či 1 či n í n
Arg	a rg i n í n
Asp	asparágová kysol i na
Azt	0 II |—N--C—|
Bum	to re.butyloxymetyl
BOC	terc. bu ty 1 oxykčirbony 1
B tu	3-am i no-1 -ka rboxymety 1 -py rro 1 i d í n- 2- on
B z i.	benzy .1.
Bz	benzoy1
Cha	ey k 1 obe x y 1 a 1 čin í n
Cle	eyk.l oleuc i n
CIg	3-am i no- 1 - k či rboxyme ty 1 - hexahyd r oáze p i n
Ctr	c i t r u 1 i n
Dap	2,3-L-d i am.i noprop i onová kysol i nu
DM F	N , N - d i me ty 1 formám i d
DPPA	d i f enyl. fosfory laz i d
DCC	d icyk 1ohexy1karbodi im i d
DIC	d i izopropy]karbodi i m i d
Gly	gl.ye í n
His	b i s t i d i n
HOB t	1 - hyd roxybenzo t r i azo 1
íle	i zo l.eue i n
Leu	1 euc i n
Lys	1 y s i n

-on

Menoe menty 1oxykarhonyI

Me mety I

Met met i on i n

Mtr 4-metoxy-2,3,6-t r imety IľenyIsuI ľonyI

Nal· 1 - na ľ ty I a Ianí n

Nie cn₃-(αι₂)₂-^α|(Νΐι₂)-COOII

Or n oi.-n.it.in

Phe fenylalanín

Pmc pentametyIehrómansuI ľony l

Ser serín

The 3 - am i no-7-ka rboxy-te t ľahyd ro i žoch i no I i n-1 -on

Thi *\S

CH₂-CH(NH₂)-COOH

Tos

Trc

Trt t ľ i ty I

Tyr tyrozín

Val. val í n

Z benzyloxykaľbony1

Výraz aminokyselina zahrňuje (pokiaľ nie je výrazne v nasledujúcom texte ináč uvedené) prírodné a nepri rodné aminokyseliny, ako aj ich D- a tiež L-formy. Výraz -aminokyselina zahrňuje tiež a ,ct - d isuhst i tuované aminokyseliny.

Ak je aminokyselina uvedená bez preľixn ( napr. Orn) , predstavuje L-ľonnu aminokyseliny. D-forma je výrazne označená (D-Orn).

Podstata vynálezu

Vyná l ez sa týka eyk 1opept idov všeobeenného vzorca I s ANP agonistiekou účinnosťou ρΛη-Bn-Cn-Dn- En- ľn-Gn-Hn- I n-Kn.....j (I) v ktorom sled členov Bn až Kn je sledom am inokyse1 i nových zvyškov h ANP

-Arg(27)-Phe(8)-Gly(9)-G 1 y(Ί G)-Arg(1 1 )-Met(I2)-Asp(13)-Arg(14) lle(15)- alebo jeho p r i es torovo štruktúrnych a funkčných ekvivalentov An znamená medzeru í ková skupinu, ktorá spája Bn s Kn a ovplyvňuje priestorovú štruktúru týchto molekúl tak, že sa ey k .1 opep t i dy viažu na ANP receptory a ich farmaceutický prijateľné sol i .

Výhodné sú eyk Iopept idy, v ktorých medzeru í ková skupina An v časti ležiacej za členom Bn obsahuje aromatický alebo cykloali fa t i oký zvyšok.

Väčšina am inokyse1 i nových zvyškov môže byť vo forme I)aleho L. Výhodné sú cyk Iopept idy, v ktorých sú členy alebo väčšina členov Bn , Cn , En , En , Gn , I In , In a Kn v L-ľorme.

Medze rn.í ková skupina An udržuje α-C-atúiny členov Bn a Kn vo vzdialenosti 5 až 15 Angstromov. (Konformáci a z 2D-NMR merania vo vodnom roztoku, výsledky úko medzné podmienky na simuláciu molekulovej dynamiky).

An sa neviaže na ANľ-ľece|i I ory , ovplyvňuje však schopnosť väzby na receptory a tým farmakologickú účinnosť cykoIpept idov všeobecného vzorca I.

Za priestorovo štruktúrne a funkčné ekvivalenty aiuinnkyselinových zvyškov ANP sú považované am inokyscI i nové zvyšky prípadne peptidové templaty (ako aj I.,- formy a tiež D-formy) ktoré spôsobujú, že sa cyklopeptidy všeobecného vzorca I viažu na ANP-receptory. Doteraz realizované výskumy ukázali, že napr. sled (Bn až Kn) -Arg-Cha-D-ΛIa-G1y-Arg-1Ie-Asp-Arg-IIevykazuje veľmi dobré hodnoty väzby na receptory a farmakologické účinnosti . Jednotl ivé členy sledu sú nahradí teľné zvyšky podobnej priestorovej štruktúry a/alebo funkcie, čím je schopnosť väzby na receptory viac či menej ovplyvňovaná a v mnohých prípadoch sa farmakologická účinnosť mení v rámci známej ΛΝΡ-agoni s t ickej účinnosti. Zmenami jednotlivých členov je ovplyvniteľný typ, veľkosť a doba farmakologickej účinnosti. Ak sa mení viac ako jeden z členov Bn až Kn, potom sa pod ľa doterajších vedomostí zmena farmakologickej účinnosti. skladá zo zmien, zodpovedajúcich jednotí i vým variáciám. V nasledujúcom zozname sú štrukturálne podobné príklady vzťahu medzí schopnosťou väzby na receptory a sledom členov cyklo pept.idov všeobecného vzorca I. (Opis testu je v d’a I šoiii tex te uvedený pod názvom Väzba na ANP-receptory).

Zlúčeniny označené *) majú v uvedenom teste väzby - x

IC50- hodno tu menšiu ako 5.10 móI , iné zlúčeniny majú menšiu afinitu.

A * ) p βΑ l.a - Phe-Λ ľg - Phe - Ι)-Λ I a-G I y - A ľg- I I e-Asp-A ľg- I I e B * ) pβΛΙa-Phe-Aľg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Aľg-I I c-Asp-D-A ľg-I I e

C _ΓβΛ1a-Phe-D-Aľg-Phe-D-ΛIa-GIy-Aľg-1 Ie-Asp-D-Aľg-Γ1 eD«) Z - Dap-A rg-C'ha- B- Λ I a-G I y - A ľg - I I e-Asp-Λ ľg-J I e

E ll-Dap-Aľg-Cha-D-A I a-G I y-Aľg- I I e-Asp-Aľg- I I e

G * ) p β A I a - Phe - A ľg - Phe - D - Λ I a-G I y - A ľg- I I e - Asp - A ľg- I I e -i

II») ι-βΑ I a-Phe-Aľg-Phe-D-Λ I a-G I y-A ľg-I le-Asp-Aľg-I l· βΛ l.a- Phe - D-Λ ľg - Phe - D- Λ I a-G I y - A ľg- I I e-Asp-D-Λ ľg- I I eΚ») -βΛΊ a-Phe-Arg-Cha-B-Ala-G I y-Aľg-I I e-Asp-A.ľg-I le-βΑ I a-Aľg-Cha-D-A I a-G l.y-Aľg-I I e-Asp-Aľg- I le7

Ako už bolo uvedené výraz aminokysel i ny zahŕňa aminokysel i riy prírodné a nepri rodné. Nepri rodné aminokyseliny sú výhodne, pokiaľ nie jtí výslovne: uvedený užší význam, vzhľadom na svoju

molekulovú	hino t nos ť , p r í padne:	d í žk u ved ľa j š i ehe	i reťazca,	tie,
ktorých ve	ľkosť zodpovetlá veľkosti p r í rodných aminokysel	í n .
Akí)	soli prichádzajú do	úvahy so 1 i s fyz	: i o 1og i cky	pr i -
j a te ľným i	anorganickými alebo	organickými kysel	inami ako	na p-
r í k lad IICI	, HBr, ll2SO4, H3PO4	, kyse: 1 i učí ma 1 e í	nová, kyse1 i na
fumarová,	kyse 1 i na e.i t tónová ,	kyse1 i na v í nna,	kysel i na	oe to-

vá.

Centrá eh i. ra I i ty v nových peptidoch môžu m ti ť konfiguráciu R, S alebo R,S.

Členy Bn,Fn, I n zodpovedajú Arg (27), Arg(ll) prípadne A.ľg (14) ΛΝΡ alebo i eh priestorovo štruktúrnym a funkčným ekvivalentom . Bn, Fn In môžu byť nezávisle na sebe o-aminokyse'1 i nové zvyšky s dvoma bázickými vedľajšími reťazcami alebo výhodne s jedným bázickým vedľajším reťazcom. Bázickým vedľajším reťazcom sa výhodne rozumie a I kyl- alebo ey k l oa l ky I ový vedľajší reťazec, ktorý obsahuje 1 až 4, (výhodne 1 alebo 2) bázické skupiny. Vhodnými bázickými skupinami sú napr í k l.tul -NH-, =NII, -NH₂, -IIN-C(NII)-NII_?, -C(NII)-ΝΗ₂. Výhodne je najmenej jedna z bázických skupín vedľajšieho reťazca dvoj väzbová. Ďalej sú výhodné vedľajšie reťazce, ktorých prvá bázická skupina je spojená s δ-ubi íkovým atómom «-aminokyseliny alebo s atómom uhlíka, ktorý je ešte ďalej umiestnený v peptidovom reťazci.. Výhodné sú alkylové vedľajšie reťazce s 1 až. 6, najmä 3 alebo 4 uhlíkovými atómami a cykloalkylovú vedľajšie reťazce - (CH ₂ ) _y ~{C/^~ ( Cl 1₂ ) - , kde x a y nezávisle na sebe sú alebo 2 a (CA) predstavuje cykloa.lkyl s 5 alebo 6 atómami uhlíka. Výhodne: sú bázické skupiny na konci ved ľa j š i eho reťazca .

K

Člen Cn zodpovedá, ako už bolo uvedené, Phe(K) ANP alebo jeho štruktúrnym alebo ľunkčným ekvivalentom. Cn môže byť α-am i nokyse l..i nový zvyšok s dvoma lipoľi Inými bočnými reťazcami alebo výhodne jedným I i po ľ i Iným bočným ľcťazcom. Za lipofilný vedľajší reťazec je v tejto polohe považovaný alkylový bočný reťazec s 1 až 7 atómami uhIíka (výhodne s 1 až 4 atómami, uhlíka, najmä s 1 atómom uhlíka). Tieto bočné a I kýlové reťazce môžu obsahovať jednu alebo dve oxyskupiny (-0-), Tioskupiny (-S-) alebo skupiny -C(0)0-. Tieto bočné alkylkové reťazce nesú jeden alebo dva zvyšky. Tieto zvyšky sú nezávisle na sebe ey k .l oa I i ľa t i eké zvyšky (výhodne ey k I oa I k y I ové) , obsahujúce 3 až K), výhodne 4 až 7 atómov ubi íka. Aromatickým zvyškom je výhodne fenyl, naľtyl, substituovaný (napríklad N0₂, hydroxy, fény I(Cj_₄)a IkyIoxy alebo (C|_₄)alkoxy ľenyI alebo 5- alebo 6- členný prípadne tiež beiízokondenzovaný aromatický heteroeyk 1 us, ktorý obsahuje 2 atómy N alebo ako jeden člen N a jeden člen kruhu 0 alebo S alebo ako člen kruhu obsahuje N, S alebo O a ostatné členy kruhu tvorí C, výhodne tienyl , furyl , pyrrolyl , imidazolyl , pyrazolyl , pyridyl , pyrazinyl , pirimidinyl, py r i daz i ny I., indolyl, i žoch i no I y I , ch inoly I chromany.l , tiaz.olyl, oxazol y ľ, morľolinyl.

Členy Dn a En zodpovedajú Gly (9) prípadne Gly (10) ANP alebo jeho priestorovo štruktúrnym alebo ľunkčným ekvivalent o m .

Dn a En môžu nezávisle na sebe znamenať Gly alebo zvyšok «-aminokyseliny, ktorá štruktúru natívnej aminokyseliny spolu znamenať ίύ-am inokyseI i nový napodobnil j e pri es torovú (G.l.y) alebo Dn a En môžu zvyšok .-NH(CII₂)₂_ , ,-C0alebo peptidový temp.lát. V polohách Dn a En sú výhodne vhodné amxnokystí'l i nové zvyšky, ktoré pod ľa štatistickej analýzy i i

Chou-a a Fasmana (Biophysical .lomná I , zv . 2b, 1979, 3 b 7 j

-383) sa často nachádzajú v β-konľormáci i. Výhodné sú naprí k- i

J ad ain.í nokyse I i ny , k toré sa vyskytujú v zvýšenom počte v po- j loháeh i+1 a i +2, najmä tie s početnosťou (1,06 (tabuľka 1 uvedenej pubIikáeie). I

Vhodnými peptidovými templátmi sa rozumejú tie, ktoré ina j ú konformáei u β - o táčavos t i .

' í

Členy Cn a Kn zodpovedajú, ako už bolo uvedené, Met ;

(12) prípadne íle (15) ΛΝΡ alebo jeho priestorovo štruktúr- · nych a funkčným ekvivalentom. Gn a Kn môžu nezávisle na sebe znamenať a-am inokyseI i nový zvyšok vždy s dvoma lipoľi Inými bočnými reťazcami alebo výhodne s jedným I i poľ i Iným bočným j reťazcom. Lipoľi Iným bočným reťazcom sa v tých to polohách ro- ·!

zum.ie alkylový bočný reťazec s 1 až 10 atómami uhlíka, výhod- i ne 1 až 6 atómami, ubi íka, najmä reťazec s najmenej troma atómami uhlíka. Tieto alkylové bočné reťazce môžu naviac obsahovať jednu alebo dve oxyskupiny (-0-) alebo tioskupiny (-S-) (ako napríklad v met tónine). Tieto bočné reťazce môžu tiež obsahovať 1 až 2 alkylové zvyšky. .

i (

Člen lln zodpovedá, ako už bolo uvedené, Asp(13) ΛΝΡ alebo jeho priestorovo štruktúrnym a funkčným ekvivalentom.

Člen pôsobí ako medzerník, lln môže ľ) y ť «-aminokyselinový zvyšok, menovite Gly alebo zvyšok, ktorý v bočnom reťazci nene- i sie žiadnu funkčnú skupinu alebo -COOH a/alebo -CONI^· Výhod- * ne je bočným reťazcom alkylový bočný reťazec s 1 až 6 (výhodne 1 - 3) atómami uhlíka, ktorý tiež môže niesť fenylovú skupinu a/alebo HOOCťCI^) j _4 alebo I^N-CO(ΟΙ₉.) [ 4- .

ο

An znamená, ako už bolo uvedené, medze, rn í kovu skupinu. Tá to skúp i na môže by ť

a)	skúp i na	-Aj-A2-A3-
b)	skúpi na	-A4-A^-
ľ)	skúp i na	am i nokyse1 i ny	všeobecného	vzorca	! 1 1
		-Nll-	(012),,,-01 (R) -	-co-	(III).
	A1	môže znamenať	Gly alebo	zvyšok	(t-am i nokyse 1 i ny

dvoma bočnými reťazcami a.lebo výhodne jedným bočným reťazcom. Tieto bočné reťazce nenesú žiadne funkčné skupiny. Výhodne je takýmto bočným reťazcom rozvetvený alebo nerozvclvcný alkylový bočný reťazec s 1 až 6 atómami uhlíka.

A2 je ková len Ľná väzba alebo

W -am i nokyse.l i nový zvyšok všeobecného vzorca II

-NH- (CII₂)_n-CO- (II) kde n znamená číslo od I do 11 (výhodne 1 až 6).

A₃ môže byť α-am i.nokyse I i nový zvyšok s dvoma bočnými I ipofi I nými reťazcami a lebo výhodne jedným I i poľ i Iným bočným reťazcom. Pod I i.poľi lným bočným reťazcom sa rozumie v tejto polohe alkylový bočný reťazec s 1 až 7 atómami uhlíka (výhodne 1 až 4 atómami ubiíka, najmä jedným atómom uhIíka). Tieto alkylové bočné reťazce môžu obsahovať jednu alebo dve oxyskupiny (-0-) alebo -C(0)0-skúp iny. Tieto alkylové bočné reťazce nesú jeden alebo dva zvyšky. Tieto zvyšky sú nezávisle na sebe cykloali ľa t ické alebo aromatické zvyšky. Cyk IoaI i ľa t ický zvyšok (výhodne cykloalkylový zvyšok) obsahuje 3 až 10, výhodne 4 až 7, atómov uhlíka. Aromatický zvyšok je výhodne ľeny], , naftyl, substituovaný (napríklad N0₉, hydroxy, ľeny I (Cj_₄)-a Ikoxy alebo C|_₄ alkoxy)ľenyl alebo 5- alebo 0členný prípadne benzokondenzovaný aromatický líc te rocy k 1 us , kde 2 členy kruhu sú N alebo jeden člen je N a jeden je 0 alebo S, alebo jeden člen je N, S alebo 0 a ostatné sú C, výhodne tienyl, furyl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl, pyraz.inyl, pyrimidinyl, py r i daz i ny I , indolyl, izoehinoly.l. , eh i no! y I , eh romány 1, tiazolyl, oxazolyl, mor rol inyl.

A₄ môže byť peptidový templát alebo M-aminokysél inový zvyšok obecného vzorca II

-NH- (Cll₂) ,,-CO(II) kde n je celé číslo od 1 do 11 (výhodne I až 6);

pod výraz peptidový templát spadajú skupiny ako napríklad Glg, B tu, The a Tre.

zvyšok alebo -C(0)()-skup i ny den alebo dvti zvyšky

A^ môže byť kovalentná väzba s dvoma I ipofi Inými bočnými jedným I i poľ i Iným bočným reťazcom. Potí I i poľ i Iným bočným reťazcom stí rozumie v tejto polohe alkylový bočný reťazec s 1 až 7 atómami uhlíka (výhodne 1 až 4 atómami uhlíka, najmä jedným atómom ubi íka). Tento alkylový bočný reťazec môže obsahovať jednu alebo tlve oxyskupiny (-0-), tioskupiny (-S-) Tento alkylový bočný reťazec nesie jeTieto zvyšky sú nezávisle na sebe cykloa.l i fa t ieké alebo aromatické zvyšky. Cy k I oa I i ľa ti cký zvyšok (výhodne cy k .1 oa I ky l.ový zvyšok) obsahuje 3 až K), výhodne 4 až 7, atómov uhlíka. Aromatický zvyšok je výhodne feny1, naftyl, substituovaný (napríklad N()₂ , hydroxy, ľeny I (C _{t 4}) - a I koxy alebo Cj ₄ a I koxy ) fény.1 alebo 5- alebo 6- členný prípadne benzokondenzovaný aromatický heĽeroeykIus, kde 2 členy kruhu alebo « - am inokyseI i nový reťazcami alebo výhodne

I pyrcoly.l, imidazolyl, pyľazolyl, pyridyl, d i ny l , py r i daz i nyI , i ndoI y I , i žoch i no I y I , nyl , tiazolyl , oxazolyl , inorľol i ny I .

An môže tiež byť aminokyselinový vzorca III -Nll-(Cll₂) „,-CH (R)-CO- (III), kde 11 a R je NIIX, ΟΧ , SX , NXY, - Nl I (11) - C (O) - Cl 1₂ -N(II)-C(O)-CII₂-N(ľl)-C(O) -X ¹ , -N(II) -C(0) -Cll=( -N (II)-C(0) -O-CI kde sú N alebo jeden člen je N a jeden je O alebo S, alebo jeden člen je N, S alebo O a ostatné sú C, výhodne tienyl, ľuryl, py raz i nyI , py ľ i m i eh i no I y I , eh ronia zvyšok všeobecného m je celé číslo 1 až

X¹ i A , o-x¹ ,

111 - X ¹ alebo l_?-X ¹ ,

X znamená vodík, nesuhst i tuovaný alebo substituovaný benzoy1 ový zvyšok, nesuhst i tuovaný alebo substituovaný cyklohexyl kaľbonyIový zvyšok, nésubslituovaný alebo substituovaný benzyIoxykaľbony1ový zvyšok, 2-,3alebo 4-pyr idy1mety Ioxykarbony Iový alebo tosylový zvyšok,

Y znamená Cl až C14 -alkylový zvyšok alebo aryl- (Cl až C14 -a IkyIový)zvyšok a χΐ je (a)fenyl, (β) 1, 2 alebo 3 substituenty (substituenty:

halogén, t r i f Iuórmety I alebo n i t ro subst i tuovaný fenyl, (y)naftyl, (25) benzo/h/t i eny I , (f) pyr idýl alebo (4j) py raz i ny I .

Výhodný je aminokyselinový zvyšok vzorca III, kile m je 1, 2, 3 alebo 4 a R-NIIX, -NXY,

-NH(H)-C(O)-CH₂-X¹,

-N(II) -C(0) -Cll₂-O-X ¹ ,

-N(H)-C(0)-X¹ ,

-N(II) -C(O)-CII=CH-X¹ -N(H) -C(0) -O-CI^-X¹ .

a I ebo

Výhodné sú cy k'1 opepf i dy uvedeného všeobecného vzorca , kde

Bn, En ti In nezávisle nu sebe sú Arg, D-Arg, Lys, l)-Lys, Orn, D-Orn , homo-Arg, D-honio-A rg, hup, D-Dup alebo 4-ami no-Phe, výhodne Arg, D-Acg, Lys, D-Lys alebo Orn,

Cn je Phe, D-Phe, 4-N0₂-Phe D-Ser(Bzl), Tyr, D-Tyr, D-Tyr, D-Na'l., Thi, D-Thi, Asp(Bzl),

Cha, D-Cha, Ser(Bzl), Tyr(Bzl), D-Tyr(Bzl), Nal, D-Asp(Bz I ) , His, Π-II i s ,

G.lu(Bz.l) alebo D-Glu(Bzl), Tyr(BzI) alebo (4-N0₂))-Phe, výhodne: Phe, Ch

Tyr, Nal.,

Dn a En nezávisle na sebe sú Ala, Gly, Pro, Asp alebo Thr alebo ich 0-forma, výhodne je Pro, D-Pro, Ser alebo D-Ser,

Ser, Asn, Lys, Dn D-Ala, Gly,

En je Gly, Asp alebo Asn či lebo

Dn a En spolu znamenajú u-am inokyseI i nový zvyšok v.zorea -NH-(Cl·^) 2-5^_C0- alebo peptidový lemplál, výhodne Btu, Clg, The alebo Trc alebo i eh D-ľormy, najmä D-Biu,

Gn či Kn sú nezávisle πει sebe íle, D-íle, Met, D-Met, Nie, D-N.le, Leu, D-Leu, Val či lebo D-Val , výhodne íle, Met, Nie alebo Leu, lln je IIOOC-(CII2) | _4-CII (NH)-CO-, D-formy tohto zvyšku, Gly, Ala, D-Ala, Asn, D-Asn, Phe či lebo D-Phe, výhodne Asp, Glu alebo Gly,

An znamená

a) skupinu -AJ-Á2-A3- kde

A| je A.l či , Gly, Phe, Vči I , 1 l.e alebo jeho D-ľornia, výhodne Gly, Λ 1 či alebo D-Ala,

Λ₂ je zvyšok ω-aniinokysul i ny vzorca I I , kde n je 2 , 3 a I ebo 5,

Λ₃ je Phe, D-Pbe, 4-N()₂-Pbe, Cha, D-Cha, Ser(Bzl), D-Ser(Bzl), Tyr, D-Tyr, Tyr(Bzl), D-Tyr(Bzl), Nal, D-Nal, Th i , D-Th i , Asp(Bzl), D-Asp(Bzl),

II i s alebo D-llis, výhodne Phe, Ty r, Cha, Nal (4-N0₂)Phe, alebo

-λ4	-λ5-	, kde
Λ4	je	zvyšok -am i nokyse1	i ny vzorca I I , kde n
	je	2, 3 alebo 5,
Λ5	je	Phe, D-Phe, 4-NO2-ľhe,	Cha , l)-Cha , Sc r (Bz 1 ) ,
	D-S	er(Bzl); Tyr, D-Tyr,	Ty r(Bzl) , D-Tyr(Bzl) ,
	Nal	, D-Nal, ľbi, D-Thi,	Asp(Bzl), D-Asp(Bzl),
	II i s	, D-llis, Glu (Bzl) ale	:bo D-Glu(Bzl).výhodne
	Phe	, Tyr, Cha, Nal alebo	(4-N09)-Pbe,

alebo

c) ani i no k y se I i nový zvyšok vzorca III, kde iu je I , 2, 3 alebo 4 a R má význam definovaný v nároku 8, kile X je vodík, nesubs tituovaný alebo chlórom, metoxy alebo (Cl až C3)alkyloín substituovaný henzoyIový zvyšok, eyklohexyIový- alebo me ty .1.oxy ka rhony I ový zvyšok, nesubs t i tuovaný alebo metoxy, nitro, t r i f Iuórmety I alebo kyano substituovaný bcnzyloxykarbonylový zvyšok, výhodne benzyIoxykarhony1, 4-metoxybenzyíl oxy ka rhony I , 2- alebo 4-t r i ΙΊ uó rme t y I benzy I ka rhony Ί , naj mä benzy 1 oxy ka r bony I., 4 - n i t robenzy I oxy ka r bony .1 a I e bo 2- alebo 4-t r i fΊuórmetyIbenzy1oxykarbonyI , najmä benzyloxykarbonyl , 4 - n i t robenzy I oxy ku rlx iny I alebo 2- uIľImi

4- tri f I uo rme ty l.benzy I oxy ku rbony I ,

Y predstavuje Cl už Cl4-aI kýlový zvyšok u lebo (Cl už Cl 4-a'l.ky I )-fény I ový zvyšok, výhodne benzyl alebo fény I etyl , a

X^ predstavuje feny l alebo mono- alebo d i-subst ituovaný fenyl, 2-pyridyl, 2-pyrazinyl, 3-benzo/b/1 ienyI alebo 2-naftyl., naj mä tie, kde

znamená skupinu -Λ|-Α2-Α3-,	kde
A1 je	Gly,
A2 Je	Aea, pAlii, Apen, Abut	, Gly alebo znamená ková len tnú
väzbu	a
A3 je	Phe, Phe(4-NO2), Tyr	alebo Tyr(Bzl) alebo

An znamená skupinu -Α4-Λ3-, kde

A4 j c βΑΙ.α, Aea, Tbc, Aund, B tu alebo D-B tu a

A^ znamená koval.entnú väzbu, Phe, D-.Phe, Phe(4-N0₂), Tyr,

Tyr(Bzl) alebo Cha alebo

An znamená um i nokyse I i. nový zvyšok vzorca III

-NH-(Cll₂) _in-CH (R)-CO-, kde m je I alebo 4 a R je skupina -NHX, kde II je H, Z, Bz, Henoe, (4-No₂)Z, Tos, je alebo An je X -Lys-, kile 2

X je jedna z nasledujúcich skupín

() -

Ο

Výhodné sú cyklopeptidy všeobecného vzorca la

-Ai -A2-A^-Bn-Cn-I)n-En-ľn-Gn-lln- I 11-K11(la) a ich soli, kde

A₂ j Aund,

Aca , p-Ala,

Ápen ,

Abut alebo

Gly alebo kovu l e l.n tnú väzba,

A₃ je Phe,

Pbe(4N0₂) ,

Cha ,

Tyr alebo Tyr(Bzl),

Bn je Arg,

Cn j e Phe,

Cha,

Ty ľ alebo Ty r(Bz1) ,

Dn je D-Ala,

Pro alebo D-Pro,

En je Gly alebo

Dn a En spolu tvoria β-Ala,

A hu t,

Aoe,

L-Ckg,

L-B tu a l ebo

Fn je Arg alebo Lys.

Gn	je	íle, Me t , Aib alebo Nie ,
H n	je	Asp alebo Aib,
I n	je	Arg,
Kn	je	í le a
A1	je	Gly .

Najmä výhodné sú eykľopept idy a prípadne ieh soli, kde A₂ je _; -am inokyse1 i nový zvyšok vzorca

-NH- (CII₂)₂_₄-CO- ,

A₃ je Pbe, Ty r, Cha, Na I alebo 4-NO₂-Phe,

Bn, Fn a In nezávisle na sebe sú Arg, I).-Aľg, Lys,

D-Lys, Orn alebo Ctr,

Cn je Pbe, Cha, Tyr, Na I alebo Tyr(Bzl),

Dn je D-A la, Gly, Pbe alebo D-Pbe,

En je Gly alebo A l.l a alebo

Dn a En spolu tvoria D-B tu,

Gn a Kn sú nezávisle na sebe íle, met, Nie alebo Leu,

Hn je Asp, Glu alebo Gly a

Aj je Gly, A I a alebo D-A la, najmä tie, kde

- 19A₂ j e β-Ala,

Apen u lebo Abu C ,

A₃ je Phu,

Phe(4-NO₂),

Cha alebo Tyr.

Bn je Arg,

Cn j e Phe,

Cha,

Tyr alebo Tyr(Bzl),

Dn je D-Ala,

En je Gly alebo

Dn a En spolu tvoria D-Btu,

Fn je Arg alebo Eys ,

Gn j e 11 e,

Met alebo Nie,

Hn je Asp,

In je Arg,

Kn je I I.e a ^A1 j^e Gly.

Výhodnými zlúčeninami pod ľa vynálezu sú najmä:

|-βΑ I a-Arg - Phe-fí-A I a-G I y-Arg- I I e - A s p - A r g - I I e -Aea-Arg-Phe-D-A Ia-GIy-Arg-I le-Asp-Arg-I Ie_ΓβΛΙa-Phe-Arg-Phe-D-A1a-GI y-Arg- I le-Asp-Arg- I le-Aea-Phe-A rg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Arg-I le-Asp-Arg-I Ie-βΑ I a- Phe-Arg- Phe-I)-A 1 a-G I y-Arg- I I c-Asp-Arg- 1 Ie-GIy-Phe(4-NO2)-A rg-Phe-D-Λ Ia-G1 y-A rg-I Ie-Asp-A rg-I Ie-GI y . r-βΑ la- Phe-Arg- Pbe-D-Λ I a-G 1 y-Arg-Me t -Asp-Arg- I I e-G I y8 . - βΑl a-Cha-Arg-Cha-D-A I a-G J y - Arg- I le-Asp-Arg- I I e-G I y 9.

pAla-Phe(4-NO2)-Arg-Phe-D-ΛIa-GI y-Arg- I le-Asp-Arg- I le-Gly —

10.

_rpAla-Pbe(4-NO2)-Arg-Cha-D-ΛIa-GIy-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Glý . j— p Λ I a-Ty r-Λ rg-Cha- D- A I a-G I y-Λ rg - I I e- Asp-A rg- I le-Gly

12. -pAla-Ty r(BzI)-Arg-Cha-D-Λ Ia-GI y-Arg-I le-Asp-Arg- ΓΙ e-GI y

-Aca-Phe-Arg-Pbe-pAla-Arg-I I e-Asp-Arg-I Ie-GIyr-Aca - Phe-Arg-Abu t - Arg -í l e-Asp-Arg- I le-Gly —

-Apen-Phe-Arg-Phe-D-Λ 1a-G1 y-Arg-1	1 e -Asp-A rg-I	le-Gly-
-Abu C -Phe-Arg-Phe-D-Λ 1a-Gly-Arg- 1	1 e-Asp-A rg-1	1 e-Gly-
-Gly-Phe-Arg-Phe-D-A 1a-G1 y-Arg-1 1	e-Asp-Arg-11	e-Gly-

ρβΑ Ιa-Arg-Phe-D-A Ia-GIy-Λrg-I le-Arg-I le-Gly-Aca- A rg. Phe-D-A Ia-GI y-A rg-I I e-Asp-A rg-I Ie-GIy-Aund-Arg-Phe-D-A Ia-GIy-Λ rg-I I c-Asp-A rg-I Ie-GI yη

-Aea-Phe - A rg-Phe-Aoe-A rg-I I e-Asp-A rg-I Ie-GIy-βΛI a-Phe-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y-Arg-A i h-Asp-Arg-I Ie-GI y βΑΙa-Phe-A rg-Phe-D-A Ia-GI y-A rg-IΊ e-Λ i h-A rg-I I e-G I y p βΑΙα-Phe -Arg- Phe -L-B Ľ u -Arg- I le-Asp-Arg- I le-Gly-,

25. ι-βΛ I a-Phe-A rg-Phe-D-B t u-A rg-1 le-Asp-Arg-l le-Gly-

26.	-βΑ1 a-Phe-A rg-Phe-P ro-G1 y-Arg-	I 1 e-Asp-Arg- 1 1 e-G 1 y-j
27 .	-pAla-Phe-Arg-Phe-D-Pro-Gly-Ar	g - 1 1 e-Asp-Arg - 1 1 e-G 1 y-|
28 .	-Tyr-Arg-Phe-D-Λ1a-G1y-Λrg-1 1 e	-Asp-Arg-I 1e-G1 y-
29.	rTyr(Bzl)-Arg-Phe-D-Λ1a-G1y-Λr	g - I 1 e-Asp-Arg- I 1 e-G'l y-
30.	-Phe-A rg-Ty r- D-A 1a-G1 y-A rg-I 1 e	-Asp-Arg-1le-Gly-
31 .	— Phe-Arg-Ty r(Bzl)- D-Λ 1a-G1y-Λ rg-I 1 e-Asp-A rg-1 1 e-G 1 y
32.	- β Ala - Phe-A rg - Phe - L-C.l.g- Arg - 1 1	e-Asp-Arg-1le-Gly-
33 .	pβΛΊa-Phe-Arg-Phe-D-Λ 1a-G1 y-A r	g-N 1 e-Asp-Arg-I le-Gly-

ako aj ich soli

Výhodné sú eyk I opept.i dy všeobecného vzorca Ib

-A₄-A g-Bn- Cn - l)n - En - F n - Gn -11 n - I n - K n a ich soli, kde

A4 je Aund,

Aca , β-A 1 a,

Clg, Tlie, B Ľ u alebo D-B t. u,

A^ je Phe, D-Phe,

Phe(4-NO₂),

Cha ,

Ty r ,

Tyr(Bzl) alebo ková len Iná väzba,

Bn je Arg,

D-Arg,

C.tr,

Lys alebo ková lentbá väzba,

Cn je Phe,

Cha,

Ser(Bz 1) a Iebo Tyr(Me),

Dn je D-A I a,

Gly alebo Az t ,

En je Gly,

Fn je Arg alebo Lys ,

Gn j c 1 I e, D-I I e,

Met alebo Nie,

Hn je Asp, D-Asp,

Gly alebo koval en tná väzba, ln je Arg alebo D-Arg a

Kn je íle.

Výhodné sú najmä eykIopeptidy, prípadne i eh soli, kde

A₄ je -am inoa lkánkyseI i nový zvyšok vzorca

-NH-(Cl·^)2_4“C0- alebo ak Aj znamená ková len tnú väzbu,

Clg, Tbc, B tu alebo D-B tu, je Phe, Tyr, Cha, Na I alebo 4-N02Pbe,

Bn, Pn a ln sú nezávisle na sebe Arg, D-Arg, Lys, D-Lys,

Orn aaalebo Ctr,

Cn je Phe, Cha, Tyr, Na I alebo Tyr(Bzl),

Dn je D-Ala, Gly, Phe alebo D-Phe,

En je Gly alebo ΛI či alebo

Dn a En sú spolu D-Btu,

Gn a Kn sú nezávisle na sebe Ile, Met, Nie alebo Leu a

Hn je Asp, Glu alebo Gly, najmä tie, kde

A4 je β-Ala,

Apen alebo

Abut alebo ak A^ je koval entí väzb znamená Clg, Tbc, B tu alebo D-Btu

A₅ je Phe,

Phe(4-N0₂),

Chci alebo Tyr alebo

Bn	je	Arg,
Cn		Phe, Ch či , Tyr alebo Tyr(Bzl) ,
Dn	je	D-A l.a,
En	je	Gly alebo
Dn	a I	2n spolu znamena
Fn	je	Arg alebo Lys,
Cn	je	íle, Met alebo Nie
H n	je	Asp ,
I n	je	Arg a

Kn je íle.

2Ί

Výhodnými zlúčeninami podľa vynálezu sú:

Ί	-Aund-Phe-Arg-Phe-D-A 1a-Gly-Arg- I	1e-Asp-Arg-1	le-Gly-
2.	-Aca-Phe-A rg-Phe-D-Λ 1 a-G 1 y-A rg-I 1	e -As p-A rg-I 1	e-Gly -
3- 1	-Aca-Phe-A rg-Phe-D-A 1a-G1 y-Lys- I 1	e-Asp-Arg-I1	e-G l y-|

4. r pA1 a-Phe-A rg-Phe-D-B tu-Λ rg-I Ie-Asp-A rg-I I e-G I y2Κ

5. -βA I a-Pbe-Arg-Pbe-D-A I a-G 1 y -Lys-N Ie-Asp-Arg-I I e 6. ,-βΛΊa-Pbe-Aľg-Se ľ(Bz I)- D-Λ Ia-GI y-Lys-N Ie-Asp-A ľg-I I e-

7.	-Aca-Pbe-Lys-Phe-D-A'l a-G 1 y-Arg-I le-Asp-Arg-I le-
8	-Aca-Pbe-Lys-Pbe-D-A 1a-G1 y-Lys-I le-Asp-Arg-1 le-
9 .	-Aea-Pbe-A rg-Cba-D-Λ 1 a-G 1 y-A rg- 1 1 e-Asp-A rg-1 1 e-
10.	-Aca-D-Pbe-Arg-Phe-D-A1a-G1y-Arg-J 1e-Asp-Arg-1 1	e-
11 .	-Aca-Cba-A ľg - Phe-D-A l.a-G.1 y-Arg - I 1 e-Asp-A r g- 1 1 e-1
12.	npAla-Pbe-Arg-Cba-D-A1a-G1y-Arg-I 1e-Asp-Arg-1 1 e	-
13.	- p A 1 a - Pbe-A rg-Cba-D-Λ 1 a-G 1 y - A rg - Me t: - Asp- A rg- 1 1 e	-
14	- pA 1a-Pbe(4-NO2)-Arg-Pbe-D-Λ 1a-G1y-Λrg-I 1e-Asp-	A r
,5.	- PAla - Pbe - Lys-Cha-D-Λ 1 a-G 1 y-Arg- I 1 e-Asp-Λ r g - I 11:

I .

17.

.

19.

20.

.

22.

23.

2.4 .

.

26.

-C l.g-Λ rg-CI la - D-Λ Ia-GIy-Λ rg-I I e-Asp-Λ rg- I I e -

ι-βΑΊ a-Phe (4-NO2)-Arg-Cha-D-Λ 1a-G1 y-Arg-I le-Asp-Arg-1 le-
r p A la-Ty r (B/. 1 ) - Arg-Cha - D - Λ 1 a-G 1 y-Arg - 1 1 e-Asp-A r g	- I le--
p P A'l.a-Ty r - A rg-Cha-D-Λ.1 a-G 1 y - A rg- 1 le-Asp-Arg	- 1 le-	1
-The-Arg-Cha - D-Λ l.a-G 1 y-Arg - I 1 e-Asp-A rg - 1 1 e-
- P A l.a - Phe-C t r -Cha- D-Λ 1 a-G 1 y-A rg- 1 le-Asp-Arg	- 1 le-
-The-Phe-a rg-Cha-D-A 1a-G1y-Λ rg-- 1 1 e-Asp-- A r	g- 1 I.e	-
-C 1 g-A rg-Cha-D-A 1a-GI y-A rg-I le-Asp-Arg-I I e-
^-Aund-Arg-Phe-D-A 1 a-GI y-Arg- I 1 e-Asp-Arg- 1 I e	-
-Aund-Phe-Arg-Phe-D-A 1a-G1 y-Arg-I le-Asp-Arg	- I I e-
- Aeti -Arg- Phe - D-Λ 1 a - G 1 y - Lys - N 1 e-Asp- A rg - 1 1 c -

i .

rAca-Λ rg-Se r ( Bz I ) -1)-Λ I a-G I y - Lys-N I e-Asp-A ľg- I I e28 .

i-Aea- Phe - A rg- Phe-D-Λ I a-G I y - l.ys-N Ie-Λ ľg-IΊ e29.

pAl.a- Phe-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y- Lys-N I e - A rg- I I e-j

30.

-Aca-Arg-Phe-D-Λ I a-G I y - Lys-N I e-Arg - I I e31 .

i- pAl.a-A rg - Phe - D-Λ I a-GI y-Lys-NIe-Λ rg-1 I e

32.

,-βΑ I a-Phe-G I y - Se r (Bz I)- D-Λ Ia-GI y-Lys-N I e-Asp-Arg-I le33.

i- Aca - Phe-G I y - Ser (Bz I.) - D-A I a-G l y - Lys-N I e-Asp-A rg - 1 1 e -i

34.

-pAl.a-G I y-Ser (Bz 1 ) -D-Λ I a-G I y-Lys-N I e-Asp-Arg- I I e₃

35.

i-Aca-Gl y-Ser (Bz 1 ) -D-Λ Ia-G I y-Lys-N le-Asp-A.rg- I I e

36.

-pA I a-Ser (Bz I )-D-Λ I a-G ly-Lys-N l e-Asp-Arg- I I e-.

37.

i- Aca-Ser (Bz I) - D-A 1 a-G I y-Lys-N I e-Asp-Arg- I I e-i .

- B tu-Λ rg - Plic - Ι)-Λ I a -G I y-Λ rg- I I e - Asp - Λ r g - I I c 39 .

- D-B tu-A rg-Phe-D-Λ I a-G 1 y-A rg-I I e-Asp-A rg-I I e40.

P (J Ala-Arg- Phe-D-ΛΊ a-G I y-Arg- 1 I e-Arg- I I e η .

- Aca - A rg-Phe- D-Λ Ia-GI y-A rg-I Ie-Λ rg-I I e42.

,-pAla - Phe-Arg-Phc-D-A 1 a-G I y-Arg- I I e-Asp-A rg - B tu43.

-Aca- Phe-Arg- Phe - Ι)-Λ I a-G I y-Λ rg- I I e-G I y - A rg - I I c44 .

.

.

j-Aca- Phe-A rg-Ty r (Me) - D-Al a-G I y-Λ rg- II e-Asp-A rg- I I e-

-Aca- Phe-Arg- Phe-D-Λ 1a-G1y-Arg-D-1 1 c-Asp - A rg- 1 1 c-j

-Aca-Phe-A rg-Phe-D-A 1a-G1 y-A rg-I 1 e-D-Asp-A rg-II e-

47.

.

-Aca-Phe-D-A rg-Phe-D-A Ia-G1y-Λ rg-I 11	j-Asp-A rg-I 1 c -	‘ j f
-Aca-D-Phe-A rg-Phe-D-A 1a-G1 y-A rg-I 11	;-Asp-Arg-1 1 e-	i

a ich soli.

Výhodné sú eyklopeptidy všeobecného vzurea soli, kde

An je H-Lys,

Z-Lys,

Bz-Lys,

Henoe-Lys, (4-N0₂)Z-Lys,

Bz- D-Lys,

Tos-Lys,

H-Dap ti I eho Z-Dap,

Bn je Arg,

Lys,,

Phe alebo Orn,

Cn j e Phe,

Cha alebo Sei(Bzl),

Dn je D-Ala,

En je Gly alebo

Dn a En tvoria spolu L-Clg alebo D-Clg,

Fn je Arg alebo Lys ,

Gn je íle alebo Nie,

I a ich

Hn je Asp,

In je Arg a

K n j e íle.

Výhodné sú najmä cyk.l opep t i dy , prípadne ich soli,

An je am inoa lkaIkyseI i nový zvyšok vzorca -NH-(CH₂)_r)-CH(R)-CO-, kde n je 1 alebo 4, R je NHX alebo NXY,

X je benzyloxykarbonyI, 4-ni ťrobenzy1oxykarbonyI , 2- alebo 4-t r i ľ 1uórmetyIbenzyIoxykarbonyI , eyk.l.ohexy I oxykarbony I alebo me ty I oxy ka rbony I a Y je benzyl alebo ľenyletyl,

Bn, Fn a In sú nezávisle na sebe Arg, D-Arg, lys, D-Lys, Orn a Iebo Ctr, kde

Cn	je	Phe ,	Cha, Tyr,	Na 1, Tyr(Bzl) alebo 4-N02-Phc,
D n	je	D-A I i	a, Gly, Phe	; alebo D-Phe,
En	je	Gly,	Ala alebo	Phe alebo
Dn	a	En tvor i a spo 1 u	D-Btu, L-Clg alebo D-Clg,
Gn	a !	K n s ú	nezávi s 1 e	na sebe Íle, Me t, Nie a 1ebo Leu a
H n	je	Asp ,	Glu alebo	G l.y ,
naj mä	t i e ,	kde
An	je	I I-Ly:	s ,
		Z-Ly:	S,

Bz-Lys,

Menoc-Lys, (4-N0₂)Z-Lys, Bz- D-Lys, Bz-D-Lys,

Tos-Lys,

I

- 35 ΙΊ-Dap alebo Z-Dap,

Bn je Arg, Lys, Orn alebo Phe,

Cn je Phe,

Cha alebo Ser(Bzl),

Dn je D-Ala,

En je Gly alebo

Dn a En tvor i ti spolu

L-C.lg alebo D-Clg,

Fn		Arg	alebo
		Lys ,
Gn		I le	a 1 e Ix>
		N.l e ,	1
H n	jtJ	Asp,
1 n	j ľ	Arg	a

Kn je íle

Výhodným i z l účen í nnami podTa vynáI ezu sú:

1. H - Lys-Arg-Phe-D-Ala-G 1 y-Lys-NIe - Asp-Arg- I le-

2.	Z -Lys-A rg-Phe-D-Ala-G1 y-Lys-Nie-Asp-Arg-1le1
3.	Z-Lys-Arg-Ser(Bzl)-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-
4.	Bz-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-N1e-Asp-Arg-Ile-
5 .	Z-Lys-A.rg- Phe-D-Ala-Gly-Arg- 1 le-Asp-Arg- I 1 e-i 1____
6.	Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-G l.y- Arg - I le-Asp-Arg- 1 1 e-

. Menne - Lys - A rg - Phe - Ι)-Λ I a-G I y-Λ rg- I I e -Asp-A rg- I 1 e 8 . Menne - Lys-A rg-Cha-D-A l.a-G.I y - A ľg - I I e-Asp-A rg- I I e9 . II - Lys - Lys - Cha - D - Λ 1 a-G I y - A rg- I I e-Asp-A rg- I I e-

10. Z-Lys-Lys-Cha-D-Λ 1a-G1y-Λ rg-1 1e-Asp-A rg-1 1 e1
11. Z-Lys-Phe-Phe-D-A 1a-G1y-Arg-I 1 e-Asp-Arg-I le1
12. (4-N02 ) Z-Lys-Λ rg-Cha-D-Λ 1 a-G 1 y-Λ rg-1 le-Asp-Arg-I lc-i 1_
13. Z-Lys-Orn-Cha-D-A 1a-G íy-Λ ľg-1 1 e-Asp-Arg- Lle-
14. H - Lys - A rg - Phe - D- A l.a-G.I y - Lys-N .1 e - Asp-A rg - I 1 e-
1 5 . II - Lys-Λ rg-Se r (Bz 1 ) - D-Λ 1 a-G 1 y - Lys - N 1 c - Asp - A rg 1	-lle-
16. Bz-Lys-A ľg-Phe-D-Λ 1a-G1 y-Lys-N1e-Asp-Arg-1 1 e-
17. Bz-Lys-Arg-Ser(Bz1)-D-Λ 1a-G1 y-Lys-N1e-Asp-Arg-I 1 e1

18 .	Bz - D - Lys-A rg-Se r(Bz1)- D-Λ 1 ;i - C! 1 y -1 .y s - N 1 c -	Asp-Ar	g-'	c -
19.	Tos-Lys-Λ ľg-Phe-D-Λ 1a-G1 y-Λ ľg-1 1 c-Asp-Λ c	g-llc-
20.	H-Lys-Arg-Phe-L-C1 g-Arg-I le-Asp-Aľg-1 Ie1
21 .	Z-Lys-A ľg-Phe-L-C1 g-A ľg-I 1e-Asp Aľg-1 1 c1
22.	Z-Lys-Arg-Cha-L-C1 g-A rg-Ile-Asp-Arg-I 1e1
23.	Z-Lys-Arg-Cha-D-C1 g-Arg-I 1e-Asp-Arg-1 1 c-
24 .	H-Dap-Arg-Cha-D-A 1 a-G.I y-Arg - I le-Asp-Arg-	I 1 e-|
25 .	Z-Dap-Arg-Cha-D-AJa-G1 y-A rg-IIe-Asp-A rg-	1 1 e-|

ako a j i ch so I i.

Výhodné sú cy k l.opep ľ i dy všeobecného vzorca I soli, kde

An má vyššie uvedený význam,

Bn je Arg,

Lys,

Phe a lebo Orn ,

Cn je Phe,

Cha alebo Ser(Bzl) ,

Dn je D-Ala,

En je Gly laebo

Dn a En sú spolu L-Clg alebo n-cig,

Fn je Arg alebo Lys ,

Gn j e I I e a l ebo Nie,

Hn.je Asp,

In je Arg a

K n j' e íle.

a ich

Výhodné sú najmä cykIopepĽ idy, prípadne ich soli, kde

An je aminoa1kánkyseI i nový zvyšok vzorca -NH- (CII₂)_nCH(R)-CO- , kde n je 1 alebo 4,

R je - Nl l ( H ) - C (0) - CI 1₂ - X ¹ -N (II )-C(0) -Cll2-O-X ¹ -N (II)-C(0)-X ¹ -N (II)-C(0)-CII=CH-X ¹ -N(II) -C(0) -0-CII2-X^l , kde X'znamená a) fény I , h) I alebo 2 suhstituentam.í substituovaný f'eriy I , e) I- alebo 2-naftyl, d) 3-benzo/b/Ľ ienyI , e) 2-pyridyl alebo f) 2-pyrazinyl,

Bn, Fn a In nezávisle na sebe sú Arg, D-Arg, Lys, D-Lys,

Orn a Iebo Ct r,

Cn je Phe, Cha, Tyr, Na I , Ty r(Bzl) alebo 4-N07-Phe,

Dn je D-Ala, Gly, Phe alebo D-Pbe,

En je Gly, AI a alebo Phe alebo

Dn a En sú spolu dokopy D-Btu, L-Clg alebo D-Clg,

Gn a Kn nezávisle na sebe sú Íle, Met, Nie alebo Leu a Hn je Asp, Glu alebo Gly, najmä tie, kde

An znamená -Nll-(Cll₂) ₄-CII (R)-CO-, kde R má vyššie definovaný význam a -Bn-Cn-Dn-E-Fn-Gn-H-Jn-Kn- znamená reťazec -Arg-Cba-D-Λ Ia-GI y-Arg-1 I e-Asp-Λrg-I leako je ilustrované v príkladoch

Zlúčeniny pod ľa vynálezu su ΛΝΡ-agoni s ty. Ako priľodzený ΛΝΡ vykazujú

- špecif ickú a afin i tnú väzbu na ANP-receptory

- d.iurctické a salureťickc vlastnosti

- účinnosť pri znižovaní krvného tlaku

- zvyšovanie hematok r i tu

- zvyšovanie hladiny cyklického GMP (GMP: pravdcpodohná intraee l.u l.á rna sprostredkujúca látka (second messenger) , ktorý jc možné po podaní ANP zistiť v plazme vo zvýšenom množstve)

- zvýšená g Iome ru 1 á rna f i I t rac i a

- účinnosť spôsobujúca reIaxáci u e iev

- broncho1 y t ieká účinnosť

- spasmofyt ická účinnosť na hladké svalstvo, najmä na črevá.

Uvedené vlastnosti zlúčenín pod ľa vynálezu holi jednotlivo testované nasledujúcimi spôsobmi :

- Väzba na ANP-reeeptury

Väzba na ANP-reeepto ry zo zona-gIomeruI osa buniek.hovädzích nadol» I ičiek sa stanoví metódou podľa Burgissera a spol . (Biochem. Bi.ophys. Res. Coinmun. 133,1201, (1985)) , modifikovanou podľa Burgissera (2. Vorld Congresse on B i o I og i ca I ly Act.ive Atrial Peptides, máj 16-21, New York Am. Soľ. llypertens., abstr. B181, str. 209 (1987)) s obchodne dostupným kilom fy AN AV A, Vangen, Švajčiarsko.

- Znižovanie krvného tlaku, d i urelická/saI uťer ieká účinnosť, vzostup hema tok r i tu , vzostup cyklo ...GMP

Pokusy sa uskutočňujú na na rkol i žuvaných (Nemhulal^) spontánne hype r tenz í vnych potkanoch (Ivariovas). Tracea sa kanyluje. Krvný tlak sa registruje z A.earotis cez prenášač tlaku (Statham) na zapisovači (Valannabe Mu I t i eorde r)_;. Srdečná frakvencia sa vypučí la z počtu pulzov v časovevej jednotke. Aplikácia substancie sa vykonáva kanylou

V . j ugu.l.a r i s . Mechúr sa kanyluje malým brušným rezom a odoberá sa moč. Objem moču sa stanoví gravimelr ieky. Sodík a draslík chlór sa stanovuje e I ek t ro 1'i I t ráe i ou . z arteriálnej krvi. Cyklický GMP z sa iner.ia fotometrický,

Menia t ok r i. t ar te rá.l ne j Hamburg).

sa me r i a krvi obchodne dostupnou rad ioskúškou ( I BL,

- Vplyv na glomerulárnu filtráciu

Gl ome ru I á r na filtračná rýchlosť sa iiicria na narkotizovaných psoch stanovením clearence inuI inu štandardným spôsobom pod ľa ľúbia spol . , (Kl iii.Vsehr.33, 729 (1955)).

-Relaxácia ciev

Pôsobenie na relaxáciu ciev analogicky k ANP sa stanoví moil i f i k ovanou metódou potí ľa ľa i stína a spol . (Eur..J . Pliarmaeo 1.. 102, 169(1984)). Králičia hrudná aorta sa kont rabuje supramax.iinál.nou koncentráciou serotori i nu . 15 minút po podaní testovanej substancie sa merajú seroton inom spôsobené kontrakcie v porovnaní s kontrolou vykonávanou s rozpúšťadlom. Z viacerých dávok sa stanoví graficky EC^p.

- Broncho l.y t i cká účinnosť

Podľa metódy Konzetťa a Rósslera (Areh.exper.Path. Pharmaeol. 195, 71 (1940)) sa skúša ari lagon i zác i a h i s tam i nových bronebospazmov po i.v. podaní testovanej substancie.

- Spasmo!y t ická účinnosť na kurčacom rek te

Podľa metódy Curr.i.e-a a spol. (Science, 221/4605, 71 (1983)) sa stanoví spasmoI y t ická účinnosť proti karbaehoIovým kontrakciám na kurčacom rekte.

Aplikácia zlúčenín podľa vynálezu sa môže uskutočňovať intravenózne, subkulánnc, i n tramuskuI úrnc, inlraperi loneálne, intranasá lne, inhaláciou, transdermáI ne, výhodne ión toľorézou alebo z literatúry známym enhance om a orálne. U zvierat rôznych druhov ležia dávky, ktoré vyvolávajú výrazný pokles krvného tlaku (>2<) mm llg) a/alebo diurczu (t- 300 %) prípadne salurézu (+ 300 %) , ako aj vzostup hematokritu (+ 3 %) a cyklického GMP (+ 200 %) medzi 1/ug/kg a 50 mg/kg. Dávky na b ronchoI y t ické pôsobenie na morčatách sa pohybujú v rovnakom rozsahu. Väzba uči receptory z buniek zóna g lome rul osa z hovädzích nádob 1 i či ak mól./1 sa dosahuje s IC med z i . 10¹⁰ a 1 . 10⁵

Relaxačné pôsobenie na cievy aorty sa dosahuje s ECc^j medzi 1.10'^ t ráči c na spasmoI y t ické pôsobenie v rovnakých množstvách.

na prstencoch kráI i če j a 1 . 1 0⁴ móI/I . Koneenna kurčacic rektiim sú

Pretože ľcceptorová väzba jednotlivých zlúčenín pod ľa vynálezu ako aj ANP v polene i i dobre kôre I uje s biologickými účinkami, je potvrdená identita mechanizmu účinku medzi prirodzenými. peptidmi a tu opísanými zlúčeninami. Preto je tiež možné očakávať od zlúčenín podľa vynálezu aj ďalšie v lastnosti opísané pri biologických vlastnostiach prirodzených peptidov, ktoré tu nie sú jednotlivo opísané.

Mohutnosť pôsobeni a zlúčenín podľa vynálezu je porovnateľná s pôsobením ANP. Podstatnou výhodou zlúčenín podľa vynálezu je ich výrazne menšia molekulová veľkosť. Zo stavu techniky nebolo možné odvodiť, že zlúčeniny s tak výrazne menšou veľkosťou molekuly budú mať také uspokojivé hodnoty účinnosti. Syntéza zlúčenín pod ľa vynálezu je podstatne jed noduehšia, a preto lacnejšia ako syntéza ANP alebo derivátov ANP s väčšou molekulovou hmotnosťou, ktoré sú podobné ANP.

B.i.ovyuž.i Ceľnosť zlúčenín podľa vynálezu (najmä pri t ransile rmá I ne j apl ikáci i) je podstatne väčšia ako pri ANP a ANP-podobných derivátoch. Zlúčeniny podľa vynálezu na rozdiel od ANP neobsahujú žiadne d.isultidovč mostíky, čím je ich metabol ická stabi I i ta voči ANP a ANP-podobným derivátom lepš :i a .

Nasledujúce zlúčeniny sú mimoriadne výhodné , pretože ich hodnota väzby ANP-receptorov (opis testu pozri vyššie väzba na ANP-receptory) IC^p je menšia ako 5.10”^ mól.

i

-Aund-Phe-Arg-Phe-D-A 1a-G1 y-A rg-I le-Asp-Arg-I le-Gly-
-Aca-Phe-Arg-Phe-D-AIa-G1 y-A rg-I	le-Asp-Arg-Ile-Gly-
-Aca-Phe-A rg-Phe-D-A 1a-G1 y-Lys-1	1 e-Asp-A rg-1 1 c-G 1 y —

βΑΊa-Phe-A rg-Phe-D-B tu-A ľg-I le-Asp-Arg-1 Ie-GIy-βΑΙ a-Phe-A ľg-Phe- D-Λ Ia-GI y-A ľg-I le-Asp-Arg-I le-Gly-Phe(4-N02)-A rg-Phe- D-Λ 1a-GI y-A rg-I I e-Asp-A rg-I le-Gly- β Ala - Phe - A rg - Phe - D - Λ I a-G I y - A rg - Me ť - Asp - A ľg- ΓΙ e-G I y -i

-βΑ la-Cha-Arg-Cha-D-A I a-G I y-Arg- I le-Asp-Arg- I I e-G I y-i βΑ1 a-Phe(4-N02)-A rg-Phe- D-Λ I a-G I y-A rg-I I e-Asp-A rg-I le-Gly

-46r-BAla-Phe (4-Ν02)-Arg-Cha-D-Ala- Gly-Arg-1 le-Asp-Arg-Ile-Glyi-BAla-Tyr-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-I le-GlypflAla-Tyr (Bzl) -Arg-Cha-D-Al a-Gly-Arg--I le-Asp-Arg-I le-Glyp-Apen-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-I le-Gly

Abut-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly

-Gly-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-I le-Gly-, |~QA1 a-Phe-Arg-Phe-D-Btu-Arg-I le-Asp-Arg-I le-Gly|~βΑ1 a -Phe-Arg-Phe-Pro-Gly-Arg-1 le-Asp-Arg-Ile-Glyj-BAla-Phe-Arg-Phe-D-Pro-Gly-Arg-Ile-Asp--Arg-Ile-Gly-Tyr-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-Gly nTy r(Bzl)-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-GlypPhe-Arg-Tyr-D-Ala-Gly-Arg-Ile

-Asp-Arg-Ile-Gly

-47• Phe-Arg-Tyr (Bz 1)- D-A la-Gly-Arg-I le-Asp-Arg -I le-Gly· ]

-BAla-Phe-Arg-Phe-L-Clg-Arg-I le-Asp-Arg-I le-Gly-.

i-BAla-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Nle-Asp-Arg-I le-Gly r-BA 1 a-A rg-Phe-D-A la-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ile f-Aca-Arg-Phe-D-Al a-Gly-Arg-I le-Asp-Arg - I lepBAla-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ι ler- Aea- Phe-A r g-Phe-D-Al a-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-íle-.

-BAla-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile

-BAla-Phe-Arg-Se r(Bzl)-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-.

-Aea-Phe-Lys-Phe-D-A la-G ly-Arg - Ile-Asp-Arg-Ile-.

pAea-Phe-Lys-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Ile-Asp-Arg-IleAca-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-11 e-.

-43,-Aca-D-Phe-Arg-Phe-D-Al a-Gly-Arg - Ile-Asp-Arg-Ile-, .-Aca-Cha-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ile-, r-βΑ 1 a-Phe-Arg-Cha-D-A 1 a-Gly-Arg-1 le-Asp-Arg-Ile-i i-BAla-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-I le

J.

j-βΑla-Phe(4-N02)-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I1e-Asp-Arg-Ile j-βΑΙ a - Phe-Lys-Ch a-D-A1 a-Gly-Arg-1 le-Asp-Arg-íle-.

j-GAla-Phe(4-NO2)-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IlepGAla-Tyr(Bzl)-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-, j~BA 1 a-Ty r-Arg-Cha-D-Al a-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile_rfiAla-Phe-Ctr-Cha-D-Ala

-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile j-Thc-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-I le3

Aund-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ile-i

-49-Aund-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg- Ile-Asp-Arg-Ile-, r-Aca-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-I le-, pAca-Arg-Ser(Bzl) -D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-I le-, pBtu-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-I le-i r-D-Btu-Arg-Phe-D-Al a-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-IlepAca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ι le-Gly-Arg-1 le-i pAca-Phe-Arg-Tyr (Me) -D-Al a-Gly-A rg-I le-Asp-Arg-I le-,

-Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-D-Ile-Asp-Arg-Ile «-Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-D-Asp-Arg-IlepAca-Phe-D-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IlepAcá-D-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ile-, i-BAla-Phe-D-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-l le-Asp-Arg-Ilei-BAla-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-D-Arg-Ile

-50Η - Lvs -Λ r g-Phe-D-Λ1 a -G1y-Lys-N1e-A s p-Λ r g -11 e

Z-Lys-Arg-Phe-D-Al a-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-1 le-i

Z-Lys-Arg-Ser (Bzl)-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-i

Bz-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-IleZ-L s-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-IleMenoc-Lys-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-1 le-i

Menoc-Lys-Arg-Cha-D-A1a-Gly-Arg-1 le-Asp-Arg-1 le-i

H-Lys-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg- I le-Asp-Arg - Ile-i

Z-Lys-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-, (4-NO )ZLys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile

-51H-Lys-At.g-Ser (Bzl) -D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-IleBz-Lys-Arg-Phe-D-Ala

-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile

B z-Lys-Arg-Ser (Bzl)-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-.

Bz-D-Lys-Arg-Ser(Bzl)-D-Ala-Gly-Lys-Nle-Asp-Arg-Ile-.

I___J

T o s - Lys-Arg-Phe-D-Ala-G ly-Arg-Ile-As p-Arg-I leH-Lys-Arg-Phe-L-Clg-Arg-1le-Asp-Arg-Ιle-

Z-Lys-Arg-Cha-D-Clg-Arg-I le-Asp-Arg-1 le-.

Z-Dap-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ι le-.

(4-NO₂)Z-L^s-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Met-Asp-Arg-Ile (4-NC>2) Z-Lys-Orn-Cha-D-Al a-G ly-Arg-1 le-Asp-Arg-1 le—

-53s-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ile-

I í

j i

Vzhľadom na spektrum účinnosti môžu byť zlúčeniny podľa vynálezu použité ako ant i bypeľľenzíny, ako bypotenzíva, ako diuretika, na zlepšenie prekrvenia (vazodi I a l ačná účinnosť) , napríklad pri. vaskulárnej i nsu f i c i enc i i a na I iečenie srdečne j insuí i c ienci e, koronárne j insnľ i c ienei e, ccrebrovaskulárnej insuťi c ienei e, obličkovej insuľ i e ienei e, pri; akútnom zlyhaní obličiek a pri edémoch akéhokoľvek pôvodu, napr. mozgovom edéme, tiež pri cirhóze pečene, d’a I e j ako spasmo I y t i kčt na všetky orgány z hladkých svalov, najmä žaIúdočno-črevný trakt, vrátane močového mechúra či orgánov od vádza j úe i eh moč a akí) b r o n c b o I y t i k á .

Ďalej je možné ich použiť na diagnostiku obrazu choroby a na skúšanie orgánového systému. Môžu byť použi té ako pomocné látky na výrobu ti čistenie (aľinitná chromá ľograf i a) protilátok, prípadne pri receptonových preparáciách ako aj pri imunologických testoch (napríklad RIA, ELI SA) a testoch väzby na receptory (napríklad rad ioreeeptorová skúška) ako špecifické a selektívne ligandy.

Vynález sa tiež týka použitia zlúčenín všeobecného vzorca 1 ako liečiva čí ľa rmaeeu t i ckýcb prípravkov, ktoré obsahujú tieto zlúčeniny. Výhodné je použitie pre ľudí.

Na pči ren te rá I ne ap I. i káe i e sa zo z I účeii í n potí ľa vyučí I ezu a prípadne z ďalších obvyklých substancií uľahčujúcich rozpustenie, emulgátorov alebo ďalších pomocných látok pripravia roztoky, suspenzie alebo emulzie. Ako rozpúšťadlá prichádzajú do úvahy napríklad voda, fyziologický roztok kuchynskej soli alebo alkoholy, napríklad etanol, p ropand i o I· alebo glycerín, roztoky cukrov ako roztoky glukózy či lebo muríni tu alebo tiež zmesi rôznych rozpúšťadiel.

i

Okrem toho zlúčeniny môžu byť aplikované implani á tmi, napríklad z polylaktidu, po I yg I yko I i du alebo po I yhyd roxyinasl.ovej kyseliny. Ďalšie možnosti apl ikácie sú i n tranasá 1 na aplikácia, inhalacnti aplikácia ( p i ezo- -p r í s l ro j , dávkovací aerosól., práškový inhalátor), t randermáI na aplikácia (náplasťové prípravky, krémy, masti, gély, pasívne náplasti, pričom účinnosť môže byť zvýšená enhanccerem pene t ráčiou a/alebo elektrickým poľom (i ontoforézou)) , orálna aplikácia (tabletky, kapsule, dražé atď.).

Do rozsahu vynálezu spadá tiež použitie zlúčenín všeobecného vzorca I ako komponentov a medziproduktov vo vyššie uvedených biochemických, bi oteelin i ekýeb a imunologických spôsoboch (vyrobil protilátok, afinitná ch ronia log ra ľ i u , RIA, ELISA, rad ioreceptorová skúška).

Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť vyrobené všeobecne známymi metódami v chémii peptidov. Tieto metódy sú opísané v Houben-Veyl , Methoden der organischen Chemie, d i e I 15/2. Výhodne sa vyrábajú syntézou peptidov v tuhej l'áze (napr í k I ad G.Barany, R.B. Merriľield v The Pept ides-AnaIysi s, Biology, zv.2, 2-2X4 (19X0), Academic Press, New York alebo R.C. Sbeppard, Int. J. Pept. Res. 21, 1IX (19X3) alebo inými známymi metódami. Ako chrániace skupiny am i mtky.se 1 i ny sa použ i va j ú tie skupiny, ktoré sú opísané v Houben Vey I, Methoden der organischen Chemie diel 15/1. Výhodne sa používajú uretánové chrániace skupiny ako napríklad f IuorenyImetoxykarbonyI - alebo terc . bu toxyka r bonyl ová skupina. Aby sa zabránilo vedľajším reakciám sú obyčajne prípadne prítomné skupiny v bočných reťazcoch aminokyselín naviac skupinami (pozri napríklad chránené vhodnými ch rán iaci m i Houben-Veyl dial 15/1 alebo

T.V.Greene, Protective Groups in Organic Synthesis). Požíva sa Arg(N0₂) , Arg(di-Z), Arg(Pmc), Arg(Ml.r), Tyr(tBu), Tyr(Bzl), Ty r (2,6 - d i-C I - Bz I ) , Ser(tBu), Se.r(Bzl), Asp(tBu), Asp(Bzl), Glu(tBu), Glu(Bzl), His(Trt), llis(Bum), Lys(Boc), llomo-Arg(M t ľ) , llomo(Arg( ľmc) ,

Lys (Z), Z_Lys, Oľn(Boc),

Honio-A ľg (N0₉ ) .

Na syntézu zlúčenín všeobecného vzorca I syntézou v tuhej fáze sú vhodné známe živice na báze pol ys tyrénu,po Iyakry1 am idu a polyéteru. Na syntézu eyklopept.itlov je žiadúce použiť také zakotvené skupiny, ktoré pri odštiepení poskytujú peptidkarboxyIové kyseliny. Výhodné je použiť také zakotvené skupiny, ktorých odštiepenie prebieha za takých miernych podmienok, že prípadne uvedené chrániace skupiny bočného reťazca ostanú. Používajúc I'moe-s Ľ ra tég i u sú takými zakotvenými skupinami: 2~metoxy-4-aIkoxybenzyI-a Ikoholová skupinti (M . Merg.l.er a spol . , Proccdings of the 10 th American Pept ide Symposium 1987, St.l.ouis, str. 2.59 GG. R : Marshal.l vyd. Escoiii , Laiden (1988), Hyd roxyk.ro tonoy I am i dome ty Iskúpi nti (II.Kunz, B.Dombo, Angew.Chem. I n t.Ed.Eng1 . 27, 711 (1988)) alebo t r i a 1 koxy benzhy d ry 1 - a I koho I - skúp i na (ll.Rink, P. Si ehe r, Pept ideš 1988, str. 139, G.Juríg, E.Bayer Eds., V.deGruyter, Ber I í n 1989).

Odštiepenie am i no-eh rán iace j skupiny sa uskutočňuje v prípade Bos-skupiny kyselinou t r i f Iuóroctovou v dichlórmetáne alebo v prípade Emoc-skupiny výhodne organickou bázou, najmä amíny ako je napr. pi peridí n alebo morfolín v DME alebu N-metyIpyrol i doňu. Bežné koncentrácie sú 20 až 50 % bázy v rozpúšťadle, reakčný čas je 10 až 120 minút. Štiepenie sa uskutočňuje výhodne v dvoch krokoch, pričom prvý reakčný čas je asi 3 minúty. Živica sa potom krátko premyje rozpúšťadlom. Vykonúi sa ďalšie odštiepenie 20 % p i pe r í d í rnim v DME, potom sa roztok odsaje ti živica sa dôkladne premyje rozpúšťadlom. Výhodnými rozpúšťadlami na tieto premývacie stupne sú DME, NMP, dichlórmetán, t r i.ch.l órmetán, metanol, etanol, izopropanol, voda a tetrahydrofurán. Po úplnom odstránení p i pe ľ i d í nu sa pripojí Fmoc-aminokyseI i na potrebná na ďalšia kopuláciu. Tento cyklus sa opakuje tak dlho už vznikne požadovaný na živicu naviazaný pepl.id.

Na kopuláciu môžu by Ľ použité metódy známe v chémii pept.idov (viď llouben Vey I., Methoden der organ i.schenn Chemi e, diel 15/2). Výhodne sa poouživajú karbod i i m idy ako di.cyklohexyl.ka rhod i i m i d , d i i zopropy 1 karbod i i m i d , e ty I -(3-d i me ty I am i nopropy.l ) karbod i imid alebo 0-henzot r iazoI - 1-y I te t ráme ty I u rutí iumhexaf 1uórofosfát alebo tetraf Iuórohorát (R.Knorr a spol., THL, 1927 (198*1)) alebo henzo i r i azo I - I - y I - < >x y - t r i s- (d i me tylám i no) - f os Tort i umhexal I uórof osi á t (B.Castro a spol . , ΊΊΙL 1975, 1219). Prídavkom I - hydroxyhenzot r iazoI u (IIOBt) alebo

3-hyd roxy-4-t»xo-3,4-d i hyd rohenzof. r i az i nu (HOOht.) sa môže podporiť racemizáci a, prípadne zvýšiť reakčná rýchlosť. Aminokyseliny Asn a Gin sa výhodne kopulujú vo forme svojich N-chranených p-n i trofenyI es Letov. Kopulácia sa obyčajne uskutočňuje 2- až 5-násobným prebytkom N-chránenej aminokyseliny a kopulačná reakcia sa uskutočňuje v rozpúšťadle ako je dich.l.órme tán , dimetylformamid, N-me ty I py r ro I i don (NMP) alebo ich zmesi . Priebeh k.opu.lačnej reakcie sa sleduje Kaiserovým testom (E. Kti i ser a kol . , Anál . B i ochem. 34, 5*15 (1*170) alebo

TNBS-testom. V prípade neúplnej acylácie sa kopulácia opakuje až je úplná. Syntéza v tuhej fáze môže byť uskutočnená tak manuálne, ako a j pomocou syntetizátora pept idov.

ry.l az i d (DPPA) hodná syntéza

Takto syntetizované peptidy sa nakoniec cyklizujú vhodnými , v I i teratúre opísanými spôsobmi . Ako cyk I i začne činidlá môžu byť použité činidlá používané na kopuláciu aminokyselín ako je pentafIuórfenyI ester/DMAP aíeho d i fény I fosfoNa syntézu zlúčenín obecného vzorca I jé výna tuhej laze potila ľmoc-s t ra tég i e používajúc pritom zakotvené 2-meloxybenzy1oxybezyIcsLetové skupiny. Na tvorbu sekvencii sú vhodné DCC/IIOBt-, DIC/HOBt- alebo TBTU-spôsoby. Po vytvorení sekvencii na živici sa obvyklým odštiepi N-termi nú l na Fmoc-skupi na, živica sa po odstránení pi per i.d.í nu dôkladne; premyje d i ch I o rníc l anom a potom sa spracuje 1 % roztokom kyseliny t r i ľ Iuóroctovej, aby došlo k odštiepeniu pep t i.du . Ch rán i ace skupiny bočného reťazca peptidu zostávajú pritom zachované. Po oddest i I ovaň í rozpúšťadla sa peptidy nechajú reagovať s cyklizačným č i n i d I nm, výhodne s d i fény If osf o ry I az i.dom , na zodpovedajúce cyklopeptidy. Potom sa ešte odstránia uvedené chrániace skupiny bočného reťazca vhodným odšt iepujúci m činidlom. Výhodné sú zmesi kyseliny trifluóroctovej/scavengeru. Ako scavenger sa použije substancia ako napríklad a n i zo 1 , t i oari i ζι > I , krezol, t inkreznl , e ľ.ánd.itiol, voda alebo podobné látky ako aj zmesi týchto látok.

Peptidy sa potom spracujú bežným i spôsobmi v chémi i peptidov a p reč istia.

Čistenie získaných surových produktov sa vykonáva polnocou gólovej ch ronia tograf i e napríklad na Scpliadcxe G25 (MR 1400) alebo G15 (MR 1400) 1 % alebo 5 % kysel inou octovou.

V prípade potreby sa vykoná ďalšie čistenie pomocou preparatívnej RP-HPLC s metanol- alebo aceton i t r i I-voda gradientami s prídavkom 1 až 2 % kyseliny trifluóroctovej.

Na čistenie môžu tiež byť použité kat iónvýmcnné živice na báze Sephadexu alebo polystyrénu.

Čistenie sa výhodne vykonáva IIPIC s reverznou fázou s použitím gradientov voda/aceton i t r H s prídavkom 0,1 až 0,2 % kyse l i ny t r i f Iuóroctove j. t

Čistota zlúčenín všeobecného vzorca I sa skúša pomocou RP-HPLC. Vykonáva stí analýza aminokyselín na i ónovýmennej živici. (LKB) a pomocou plynového chromátograľu na ch i rá I noín stĺpci dodatočná kontrola raccmizáci e. Odtiaľ sa snímajú ^³C-NMR spektrá (Bruker 400 Mllz) a FAB-hmotové spektrá (Finnigan MAT 90). Stanovenie sekvencii sa vykonáva sekvenľovaní m v plynnej fáze po tryptickom štiepení.

Nasledujúce príklady ob jasňu jú syntézu zlúčenín pod ľa vynálezu bez toho, aby vynález akokoľvek obmedzova1 i.

Príklady u s k u t oč n en i a v y n álezu

Príklad 1

-βΑla-Phe-Λ rg-Phe-D-A I a-G I y-A rg-I I e-Asp-Λ rg-I I e-GlySyntéza peptidov sa uskutočňuje na syntetizátore peptidov ACT200 firmy Advanced ChemTech s použitím Fmoc-s traLégie s použitím mod i ľ i kovaného riadiaceho programu. 50 ml trepacŕ reaktor sči naplní 1 g 2-me toxybenzy l.és te rove j živice firmy Baehem, Švajčiarsko, ktorá bokí privedená do cyklu 0,5 mmól Fmoc-gIycinu. Použijú sa rias I ed u j úce deriváty am i nokysel. in: Fmoc- I l e-011, Pmoc-Arg (M t r)-OH , Iľmoe-Asp ( tBu)-011, Fmoc-Gl y-011, Fmoc-D-Λ l.a-OII Fmoc-Phe-OII a Fmoc-βΛ I a-OH . KopuI.úc.i a sa vykonáva vždy 3 ekv i va l en tam i Fmoc am i nokyse I i ny , 1-hydroxybenzotriazolu a d icyk IohexyIkarbodi i m idu (čas kopulácie 40 minút). Po vykonaní TNBS-testu sá pri neúplnej acy1 ác i i. opakuje kopulácia s použitím rovnakých reagentov a prebytku. Pri neúplnej acyIáci i sa naštartuje ďalší cyklus syntézy. Odštiepenie chrániac í eh skupín sa vy koral vždy 20 % piper.idinom v DMF (jedenkrát 3 minúty, jedenkrát 15 minút).

Medzi reakciami sa vždy živica premyje lOkrát. DMF. Po vytvorení sekvencie 11 - βΑ I a - Phe - Λ ry, (M t r) - ľlie - D - Λ I a - (.ϊ I y - Λ rg ( M t ΟΙ le-Asp ( tBu) - Arg (M L r) - I I e-G I y- na polymérnom nosiči sa živica dôkladne premyje premyje d i eh I órmeľanom a potom 5krát vždy 20 ml 1 % roztoku kyseliny Ľ r i f Iuóroct ovej v d i eh I órmeľane pri teplote miestnosti maximálne po 10 minút (až do intenzívneho lilavého zafarbenia živice). Roztoky sa spoja aodparia vovákuu. Zvyšok sa rozotrie s éterom, éter sa dekantuje, pepti d sa suší v prúde dusíka a vyberie sa do 130 ml DMF, ktorý má hodnotu pil nastavenú na asi 8,5 t r i e ty I am í nom , roztok sa ochladí na -20 a pridá sa 0,2 g (0,75 imiió I ) d i fény I ľosfo0, rylazidu. Zmes sa nechá stáť 48 hod í n pri -20 pri 4 . Hodnota pH sa udržuje t r i e ty I am ínom na 8,5. Potom sa DMF odstráni vo vákuu, zvyšok sa dvakrát rozotrie s éterom, éter sa dekantuje a zvyšok sa vysuší v prúde dusíka. Chrániace skupiny bočného reťazca sa odstraňujú kyselinou t r.i.f 1 uóroc tovou/an i zo I om (90/10) 24 hodín pri teplote miestnosti. Roztok sa odparí vo vákuu, zvyšok stí digeruje s éterom sa prečistí cez Dynama x C.'l 8 , hod í n

Su rovy /um-stlpec (10 x 2,14 cm) s použi tím gradientov A: voda/aceton.i t r i I/kyse I i na t r i f I uó roe tová 95/5/0,2 a B: detto 20/80/0,2 od 10 % A na 80 % B za li minút, prietok 20 ml, retenčný čas 6,01 minút. Po vysušení vymrazcníiii sa získa amorfný bezfarebný prášok. FAB-MS (M-t-H)x — 1360,5.

a sus i pep t i d

Príklad 2

-Aund-Phe-Arg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Arg-I I e-Asp- Arg-I le-GlyS použitím Finoc-Aund-Oh namiesto Fmoc-βΛ 1 a-OII sa získa surový peptid postipom opísaným v príklade 1, ktorý sa prečistí v opísaných podmienok pre ch ronia tog ra ľ i u (5% až 80 % B za II m i. n ú Ľ , r e tenčný čas 7,45 m i n u t) .

FAB-MS (M+H)+ = 1473,2.

Príklad 3

-Aca-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I I c-Asp-Arg-I le-GlyS použitím Fmos-Aca-OH namiesto Fmoe-βΛIa-Oh sa síska surový peptid postupom podľa príkladu 1, ktorý sa prečistí v podmienkach uvedených pre ch ronia tograf i u (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 6,00 minút). FAB-MS (M+H)+ = 1403,1.

Príklad 4 p Aca-Phe-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y-Lys- I I e-Asp-A rg-I I e-G I yS použitím Fmoc-Lys (BOC)-OH a Fmoc-Aca-01-1 namiesto Fmoc-βΑ Ι a-OII sa získa surový peptid postupom podľa príkladu 1, ktorý sa prečistí ch ronia l og ra f’i ou v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 5,80 minút).

FAB-MS (M+ll)+ = 1374,9.

Príklad 5

-βΑΙa-Phe-A rg-Phe-D-B tu A rg-I I e-Asp-A rg-I Ie-GIyS použitím Fnioc-D-B tu-OII namiesto Fmoc-D-A I a-OII sa získa surový peptid postupom opísaným v príklade 1, ktorý sa prečistí chromátograf. i ou v opísaných podmienkach (5 % na 80 %

B za 11 minút, retenčný čas 6,05 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1372,7.

Príklad 6

-(4-NO2)-Phe-Λ rg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Λ rg-I I e-Asp-Arg-I Ie-GIyS použitím Pmoc-Phe (4N02)-011 a bez Fmoc-βΛ I a-011 sa postupom podlá príkladu 1 získa surový peplid, ktorý sa prečistí eh ronia tograf i ou v opísaných potím i erikách (5 % na 8(1 % B za 11 minút, retenčný čas 6,45 minút).

FAB-MS (M+ll) + = 1334,9.

Príklad 7

-βΑΙ a -Phe-A rg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Λ rg-Me ť -Asp-Λ rg-I le-GlyPrí.davne sa použije Pmoc-Me t-011 a postupom opísaným v príklade 1 stí získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromátograficky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 6,10 minút).

FAB-MS (M+ll)+ = 1378,8.

Príklad 8

- βΑΙ a-Cha-A rg-Cha- D - Λ 1 a-G I y - A rg - I I e-Asp - A rg- I le-GlyS použitím Fmoe-Cha-OH namiesto Pinoe-Phe-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromátograficky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 7,75 minút).

FAB-MS (M+ll)+ = 1373,0.

Príklad 9 _rpAla-Phe(4-NO2)-Arg-Phe-D-ΛIa-G1y-Arg- I le-Asp-Arg- I le-Gly-,

S použitím Fmoc-Phe(4-NO2) sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí ehromatografi.cky v opísaných podmienkach (5 % na BO % B za 11 minút, retenčný čas 6,50 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1406,2.

Príklad 10 p βΑ I a -Phe(4-N02)-Arg-Cha-D-Λ Ia-G1 y-A rg-I I e-Asp-A rg-I le-GlyS použitím Fmoe-Cha-OH a Fmoc - Phe (4 - N02)-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograficky v opísaných podmienkach (5 % na BO % B za 11 minút, retenčný čas 7,40 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1412,0.

Príklad 11 ,-βΑ l.u-Ty r-Arg-Cha-D-Ala-G 1 y-A ľg-I I e-Asp-Λ rg- I le-Gly-,

S použitím Fmoc-Tyr ( tBu)-011 a Fmoc-Cha-OH stí postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromá tog.raf. i cky v opísaných podmienkach (5 % na BO % B za minút, retenčný čas 6,40 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1383,2.

Príklad 1.2 ι-βΛ l a-Ty r (Bz l ) -Arg-Cha-P-A l a-G l y-Arg- I I e-Asp-Arg- I I c-G l yS použi tím Fmoc-Ty r (Bz I )-ΟΙ 1 a Fmoe-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograf'i eky v opísaných podmienkach (5 % na HO % B za minút, retenčný čas 8,50 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1473,2.

Príklad 13

í.·

-Aea-Phe-Arg-Phe-βΛ1a-Λ rg-I 1e-Asp-A rg-I Ie-GIyS použitím Fmoe-Aca-OII a ľmoc-βΛ I a-OII sa postupom opi- ' saným v príklade 1 získti surový peptid, ktorý sa prečistí chromátografieky v opísaných podmienkach (20 % na 80 % B za minút, retenčný čas 4,60 minút). ;

FAB-MS (M+H)+ = 1345,9 í

Príklad 14 r-Aea- Phe-Arg - Phe-A hu t -Arg- 1 I e- Asp- Á rg - I I e - G I y -.

J---- _t f

S použitím Fmoc-Aea-OII namiesto Fmoe-βΛ I a-OII j a Finoc-Abu t-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový , peptid, ktorý sa prečistí ch ronia tograf i eky v opísaných pod- i mienkach (20 % na 80 % B za 10 minút, retenčný čas 4,85 mi- t n ú t ) . í

FAB-MS (M+H)+ = 1373,8. !

ί i

I

Príklad 15

-Apen-Phe-Arg-Phe-D-Λ I a-G I y-Arg-I I c-Asp-A rg-I I e-G IyS použitím Fiiioc-Apen-OII namiesto Fmoc-βΛ I a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograficky v opísaných podmienkach (20 % iia 80 % B za 10 minút, retcnčný čas 4,50 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1388,8.

Príklad 16

-A hu t: - Phe - Arg - Phe - D - Λ I a-G l.y-Λ rg - I I e - Asp - A rg- I 1 e - G I y S použitím Fmoe-Ahu t-OH namiesto Fmoc-βΛ I a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí. chromátograficky v opísaných podmienkach (20 % na 80 % B zči 10 minút, retcnčný čas 4,35 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1374,8.

Príklad 17 <-G l.y - Phe - A rg - Phe - D - A I a-G I y - A rg- 1 Ie-Asp-A rg- 1 I e-G I y η

S použitím Fmoc-G l.y-OH namiesto Fiiioc-βΛ I a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromátografieky v opísaných podmienkach (20 % na 80 % B za 10 minút, retcnčný čas 4,45 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1346,8.

I

Príklad 18.

-pAla-Arg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Arg-I Ie-Asp-Arg-I Ie-GIyS použitím v príklade I opísaných Fmoe-am inokyseI í n sa získa surový peptid, ktorý sa prečistí ch ronia tograf i cky v opísaných podmienkach (20 % na 80 % B za 10 mínu t, retenčný čas 3,25 m i nút) .

FAB-MS (M+H)+ =1213,8.

Príklad 19

-Aca-A rg-Phe-D-ΛIa-GIy-Λ rg-I Ie-Asp-A rg-I Ie-GIyS použitím Fmoe-Aea-OII namiesto Fmoe-βΑ I a-ΟΙΊ sa postupom opísaným v príklade 1 získči surový peptid, ktorý sa prečistí ch romá togra f: i cky v opísaných podmienkach (20 % na 80 % B za 10 minút, retenčný čas 3,45 minút).

FAB-MS (M+ll)+ = 1255,8.

Príklad 20 p Aund-A rg - Phe-D-A I a-G 1 y-Λ rg- I I e-Asp-Arg-I le-GlyS použitím Fiiioc-Aurid-OII namiesto Fmoe-βΑ I a-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograf icky v opísaných podmienkach (20 % nti % B za 10 minút, retenčný čas 5,15 minút).

FAB-MS (M+ll)+ = 1325,8.

- 66 Príklad 21 r- Aca - Pbe - A ľg - Pbe-Aoc-A ľg- 1 le-Asp-Arg-I Ie-GI yS použitím í'moe-Aea-OII namiesto a Fmoe-Aoe-OII síi postupom opísaným v príklade I l'moe- β Λ I a-OH p r i praví surový peptid, ktorý sa prečistí ch ronia togra ľ i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 7,10 minút) .

FAB-MS (M+H)+ = 1416,2.

Príklad 22

- βΑ I a-Phe-A rg-Pbe-D-A Ia-GI y-A rg-Λ i b-Asp-A rg-I I e-G IyS prídavným použitím Fmoe-Aib-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograf i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 5,70 minút).

FAB-MS (M+ll) + =1217,8.

Príklad 23 i- β Al. a - Pbe-Aľg - Pbe-D-Λ I a-G I y-Aľg - l l.e - A i b-A rg- I I e-G I y-.

S použitím Fmoc-A i b-Oľl namiesto Fmoe-Asp/tBu-OII sa postupom opísaným v príklade I pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí ehromatograľ ieky v opísaných podmienkach (35 % na % za 13,5 minút, retenčný čas 3,70 minút).

FAB-MS (M+ll)+ = 1330,9.

Príklad 24

-βΑI u-Phe-Λ rg-Phe- L-B Ľm-Λ ľg-I Ie-Asp-Arg-I le-GlyS použitím ľmoe-L-Btm-OII nami es Vo ľmoc-D-AIa-OH sa postupom opísaným v príklade I pripraví surový peplid, klorý sa prečistí chromátograficky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za II minút, retenčný čas 5,90 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1372,7.

Príklad 25 pβΑΙa-Phe-Arg-Phe- D-B tm-A rg-1 I e-Asp-A rg- 1 le-GlyS použitím Fmoc-D-Btm-OII namiesto Fmoe-D-Λ 1 a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získti surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograficky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 6,05 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1372,7.

Príklad 24 i-βΑΙ. a - Phe-A rg - Phe - P ro-G I y-Λ rg - I I e-Asp-A rg - 1 le-Gly-,

S použitím Fmoc-Pro-OH namiesto Fmoc-D-Λ I a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí ehromatograficky v opísaných podmicnkach (5 % na % za 11 minúť, retenčný čas 6,15 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1386,8.

I

-βΛI a-Phe-Λ rg-Phe-D-P ro-GIy-Λ ľg-I I e-Asp-A ľg-I Ie-GIy- 68 Príklad 27

S použitím Fmoc-D-Pro-OH namiesto Fmoc-D-A I a-OII sa postupom opísaným v príklade sa prečistí eh ronia togra f'i eky 80 % B za 11 minút, retenčný FAB-MS (M+ll)+ = 1386,8.

Príklad 28

-Ty r-A rg-Phe- D-Λ Ia-GI y-A rg-I I e-Asp-A rg-I le-Gly1 pripraví surový’ pept i d, ktorý v opísaných podmienkach (5 % na čas 6,35 m i nú t) .

S prídavným použitím Fmoe-Ty r ( tBu)-011 a bez Fmoc-βΛ I a-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí eh ronia tograf i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za II minút, retenčný čas 5,40 minút). FAB-MS (M+!l)+ = 1306,0.

Príklad 29

Ty r(BzI)-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y-A rg-I Ic-Asp-Arg-I I e-G I y

S prídavným použitím Fmoe-Ty r (Bz l )-011 a bez Fmoe-βΑΙ a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí ch ronia tog raf i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 6,10 m i n ú t) .

FAB-MS (M+H)+ = 1395,9.

Príklad 30

- Phe-A rg-Ty r -D-Λ Ia-GI y-A rg-1 I e - Asp - A rg- I I e -(ϊ I y S prídavným použitím Fmoc-Ty r ( l'Bu)-OH a bez Fmoe-βΛΊ a-OII sa postupom opísaným v príklade I pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograficky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minúť, retenčný čas 6,55 minút) .

FAB-MS (M+H)+ = 1 305,9.

Príklad 31

-Phe-A rg-Tyr(BzI)- D-A Ia-GIy-Λ rg-I 1 e-Asp-A rg-1 I e-G IyS prídavným použitím Fmoc-Tyr(BzI)-OH a bez Fmoc-βΑΙ a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa prečistí ch ronia tograf i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 7,10 minút). FAB-MS (M+H)+ = 1395,9.

Príklad 32 i-βΑΙ a - Phe - A rg - Phe - L-C I g-A rg - I I e-Asp- A rg - I I e -G I y ->

S použitím Fnioe-L-CIg-OH namiesto Fmoc-D-Λ I a-OII sa' postupom opísaným v príklade 1 pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí chromatograficky v opísaných podmienkach (5 % na % B za 11 minút, retenčný čas 6,90 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1400,8.

Príklad 33 i-βΑ 1 a - Phe-Λ rg - Phe-D-Λ I a-G I y-Arg-N I e-Asp-A rg - I I e-G 1 yS prídavným použitím Fmoc-NIe-OII sa postupom opísaným v príklade 1 pripraví surový peptid, ktorý sa prečistí chromátograf.i cky v opísaných podmienkach (5 % na BO % B za minút, retenčný čas 6,40 minút).

FAB-MS (M+H)+ = 1360,4.

Príklad 34 r β Ala-Phe - A i:g-Cha-D-Λ I a-G I y - A rg-Me t-Asp-A rg- I le-.

Syntéza peptidov sči uskutočňuje nči syntetizátore peptidov ACT200 firmy Advanced GhcmTech s použitím Fmoc-s tralég i e s použitím modifikovaného riadiaceho programu. 50 ml trepac.í. reaktor sa naplní 1 g 2-metoxybenzyI eš te rove j živice firmy Baehem, Švajčiarsko, ktorá ho I a privedená do cyklu 0,5 mmól Fmoc-i z i Ieucínu. Boli použité nasledujúce deriváty aminokyselín: Fmoe-Λ rg (M Ľ r )-011, Fmoc-Me t-011,

Fmoc-Asp ( tBu) - OH , Fmoc-G I y - OH , Fmoe- D-Λ I a-011 Fmoe-Cha-OH a Fmoc-βΑ I a-OII, Fmoc-βΑ I a-011. Kopulácia sa vykonáva 3 ekvivalentami Fmoc-aminokyseI iny, 1 - hyd roxy henz.o t r i azo I u a dicyklohexyIkarhodi i m idu (doba kopulácie 40 minút). Po vykonaní TNBS-testu sa pri neúplnej aeyláeii opakuje kopuláciu s použitím rovnakých reagentov či prebytku. Pri neúplnej acy 1 ác i j sa naštartuje ďalší cyklus syntézy. Odštiepenie Fmoc-chrán iacíeh skupín sa vykonúi 20 % p i pe r i d i nom v DMF (jedenkrát 3 minúty, jedenkrát 15 minút) . Medzi reakciami sa živica premýva lOkrát DMF. Po vytvorení sekvencie H^AI.a-Phe-Arg(Mtr)-ChaD-Ala-Gl y-A rg (M t r ) - Me t - Asp ( t Bu) - A rg (M t r) - IΊ e- nči pol ymé r nom nosiči sa ž i v i cči dôkladne premyje d i ch I órmelanom či potom

5krát vždy 20 ml. 1 % roztoku kyseliny Ľ ľ i ľ I uó roe tove j v tlichlórmetanc pri teplote miestnosti maximálne po 10 rniiiúl (až do intenzívneho Hlavého zafarbenia živice). Roztoky sa spoja a oddes ti I u j ú vo vákuu. Zvyšok sa rozotrie s éterom, éter sa dekantuje, peptid sa suší v prúde dusíka a vyberie sa do 1.30 ml DMF, pil sa nastaví na asi 8,5 t r i e ty I am í ηοηι, roztok sa ochladí na -20 a pridá sa 0,2 g (0,75 mmól) d i ľeny I ľosľo-20 nom °C, hod í n na 8,5. ľotom rozotrie s e téry laz í du. Zmes sa nechá stád 48 hodín pr pri 4 Hodnota pil sa udržuje trietylam sa DMF odstráni vo vákuu, zvyšok sa dvakrá rom, éter sa zleje a zvyšok sa vysuší v prúde dusíka. Chrániace skupiny bočného reťazca su odštiepia kyselinou trifluóroctovou/anizolom (90/10) za 24 hod í n. Roztok sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa di.geruje s éterom a suší. Surový peptid sa prečistí cez Dynamax Cl8, /um-stípee (10 x 2,15 cm) s použitím gradientov Λ: voda/aceton í t r i l/kysel i na tri ľluóroctová 95/5/0,2 a B: detto 20/80/0,2 od 10 % B na 80 % B za 11 minút, prietok 20 ml, retenčriý čas 7,80 minúť. Po vysušení vymrazením sa získa amorfný bezfarebný prášok. FAB-MS (M+H)+ = 1327,9.

Príklad 35 βAla-Arg- Phe-D- A I a-Gly- Arg- Π e-Asp-A rg - I I e

S použitím Fmoe- I I e-Oľl namiesto Fmoe-Met-OH a bez Fmoc-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade I získa surový pept.id, ktorý sa čistí eh roma tograť i eky v opísaných podmienkach (20 % na 80 % B za 10 minút, retenčriý čas 3,25 minút) FAB-MS (M+H)+ = 1156,7.

Príklad 36 pAca-Arg - Phe-D-Λ Ia-G1 y-Arg-I Ie-Asp-I le-i

S použitím Fmoc-Ača-OII namiesto Fmoc-|JA I a-011 a Fmoc-Ile-OH namiesto Fmoe-Met-OH a bez Fmoc-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ehromatograficky v opísaných podmienkach (20 % na X0 % B za 10 minút, retenčný čas 3,70 minút)

FAB-MS (M+íl)+ = 119X.X.

Príklad 37 pAund-Arg-Phe-D-Λ I a-G I y-Arg- I I e-Asp -Arg- I I e-i

S použitím Fmoc-Aund-011 namiesto Fmoc-βΛ I a-011 a Fmoe-Ile-OH namiesto Fmoe-Me t-OH a bez Fmoc-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový pep t i d, ktorý sa čistí chromatograficky v opísaných podmienkach (20 % na X0 % B za 10 minút, retenčný čas 5,55 minút)

FAB-MS (M+H)+ = 1268,9.

Príklad 3X ,— Aca- Phe - A rg - Phe - D-Λ I a-G I y - A rg - 1 I e - Asp - A rg - I I e -i

S použitím Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoc-βΛ I a-011 a Fmoe-I.le-OH namiesto Fmoe-Me t-OH a bez Fmoc-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peplid, ktorý sa čistí chromatograficky v opísaných podmienkach (20 % na X0 % B za 10 minút, retenčný čas 4,90 minút)

FAB-MS (M+ll)+ = 126X,9.

Príklad 39 .- β Al a ~ Phe - A rg - Phe - D - Λ I a-G I y - A rg- I 1 e - Asp - A rg- I 1 eS použitím Fmoe-1 I e-OII namiesto Fmoe-Cha-OH sa postupom opísaným v pri klade peptid, ktorý sa čistí ch ronia tog.ra ľ i eky v kach (20 % na 80 % B za 10 minút, retenčný FAB-MS (M+H)+ = 1304,0.

Fmoe-Met-OH a bez 1 p r i p rav í surový opísaných podmienčas 4,50 minút)

Príklad 40

P βΑΙα - Phe - A rg- Phé - D-Λ I a-G I y - Lys - N I e-Asp-A rg- 1 I e-.

S použitím Fmoe-Lys(BOC)-OH a Fmoc-N I e-OII namiesto Fmoc-Met-OII a bez Fmoe-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch ronia tograf i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas ň,10 minút)

FAB-MS (M+H)+ = 1275,0.

Príklad 41 ι-βΑ1^- Phe-Arg-Se r (Bz I ) -I)-A I a-G I y- Lys-N 1 e-Asp-Arg- I I e-i

S prídavným použitím Fmoe-Lys (BOC)-011 a Fmoe - Se r (Bz I ) -OH namiesto Fmoe-Cha-OII a bez Ftttot-N l e-OII sá postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograf icky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B zči 10 minút, retenčný čas 6,20 minút)

FAB-MS (M+ll) + = 1.305,0.

Pr.i klad 42 pAca-Phe-Lys - Phe - D-Λ l.a-G I y-Arg- I I e-Asp-Λ rg-I I e —,

S použitím ľmoc-Aca-OII namiesto Fmoc-βΛ I a-OII a Finoc-I l.e-OII nam iesto Fmoc-Met-OH a Fmoe-Lys (BOC)-011 bez Fmoc-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí eh ronia tograf i eky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas.6,60 minút) FAB-MS (M+H)+ =1318,2.

Príklad 43 i-Aca - Phe - Lys - Phe-D-Λ Ia-G1 y- Ly s - 1 I e - Asp - A rg - 1 I e —

S prídavným použitím Fmoe-Lys (BOC)-011 a Fmoe-Aea-Oľl namiesto Fmoe-βΑ I a-OII a Fmoe-Ile-OII namiesto Fmoe-Me t-OH a bez Fmoc-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade I získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograľ ieky v opísaných podmienkach (5 % rút 80 % B za 11 minút, retenčný čas 6,40 minút) FAB-MS (M+H)+ = 1290,2.

Príklad 44 j-Aca-Phe-Λ rg-Cha-I)-A 1 a-G I y - Λ rg-I le-Asp-Arg-I le-| t

S použitím Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoc-βΛ I a-011 a Fmoe.-I le-OII namiesto Fmoe-Met-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ehromatograficky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 7,35 minút)

PAB-HS i··!·!!,, v, f 2

Príklad 45 ,-Aca- D - Phe-Arg-Phe-D-ΛIa-GIy-Λ rg-I I e-Asp-A rg- I I e-.

S použitím Fiiioc-Aea-OII u a m i es t o Fmoc - βΛ I a - 011 a Fmoc- II e-011 namiesto ľmoc-Me ť-OII a ľmoe-D-Phe - 011 a bez Fmoe-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade I získa surový peptid, ktorý sa čistí chromálograľ ieky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retcnčný čas 6,35 minút) FAB-MS (M+ll)+ = 1 346,2.

Príklad 46 ,-Aea - Cha - A rg - Phe - D- Λ I a-G 1 y - A rg- I I c - Asp - A rg- I I c — .

S použitím Fiiioc-Aea-OII namiesto ľmoe - βΛ I a-OII a Fmoc-I lc-011 namiesto Fmoc-Me t-011 a sa postupom op í saným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograf.ieky v opísaných podmienkach (5 % na 80 % B za 11 minút, retenčný čas 7,35 minút)

FAB-MS (M+ll)+ = 1352,0.

Príklad 47 |— βΑΊ,α-Phe-A rg-Cha-D-Λ I a-G I y-A rg- I le-Asp-Arg- I Iľ-i

S použitím Fmoc- I 1 c-011 namiesto Fmoc-Mct-0H sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograíiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B zti 11 min, retenčný čas 5,90 min).

FAB-MS (M + li)+ = 1309,5

Príklad 4« — βΑ I a-(4N02)Phe-Λ rg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Λ rg-I I e-Asp-Λ rg-I I e- Za prídavného použitia Fmoe-(4-N02) Phe-011 a Finoc-I le-011 namiesto Fmoe-Met-OII ti bez Fmoe-Cha-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa požadovaný surový peptid, ktorý sa čistí eh roma t og raf i <m zri opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 6,85 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1348,9

Príklad 49 — βΑ la-Phe-Lys-Cha-Ι)-Λ I a-G I y-Arg-I 1 e-Asp-Λ ľg-I 1 e- Za prídavného použitia Fmoe-Lys (BOC)-OII a Fmoe-Ile-OH namiesto Fmoe-Met-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ehromalografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 6,75 min) FAB-MS (M+H)+ = 1281,9

Príklad 50

- C.1 g-Λ rg-Cha- D- A 1 a-G I y-A rg- I I e-Asp-Arg-I I e —

Za použitia Fmoc-C 1 g-()ll namiesil) Fmoc- Ala-OII a l'mocI le-OH namiesto Fmoc-Me t-011 a bez Fmoc-Phe-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za II nrin, retenčný čas 7,35 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1259,8

Príklad 51 r pAla-(4N02)Phe-Arg-Cha-D-AIa-GIy-Arg- I le-Asp-Arg- I I c Za použitia Fmoc-(4-NO2) Phe-OII namiesto Fmoc-Phe-OH a Finoc- 1 le-OII namiesto Fmoc-Me t -011 sa postupom op í sanýni v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 6,45 min).

FAB-MS (M+II)+ = 1354,7

Príklad 52

- p A la-Ty r (bz I ) - Arg-Cha -1)-Λ I a-G I y-Arg- I 1 c-Asp-Arg- I I e —

Za použitia Fmoc-Tyr(bzI)-OH namiesto Fmoc-Phe-OII a Fmoc-I le-OII namiesto Fmoc-Me Ľ-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch ronia tog ra78 f iou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 8,20 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1415,9

Príklad 53

- pAla-Ty r-Arg-Cha-D-A'l a-G I y-Aľg-I le-Asp-Arg-1 le —

Za použitia Fmoc-Ty r - / Ľ Bu / - 011 Fmoc-Ile-OH namiesto Fmoe-Met-OH sa príklade 1 zí.skti surový peptid, ktorý f iou zči opísaných podmienok (5 % retenčný čas 6,45 min).

FAB-MS (M+H)+ - 1325,8 namiesto I'moe-Phe-OII a postupom opísaným v sa čistí eh ronia l og rana 80 % B za 10 min.

Príklad 54

The-Arg-Cha-D-Λ I a-G I y-Arg- I I e-Asp-Arg- I I e—

Za použitia Finoe-THc-OII namiesto Fmoc-βΛ I a-011 a Fiiioľ-Il.e-OH namiesto Fmoe-Met-011 a bez Fmoc-Phe-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromátogra- fiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 6,45 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1279,7

Príklad 55 _Γ-β A la - Phe - C ť r - Cha - D - Λ I a-G I y - A ľg -1 le-Asp-Arg-I I e—

Za prídavného použitia miesto Fmoc-Met-OH sa postupom surový peptid:, ktorý sa čist i podmienok (5 % na 80 % B za 10 FAB-MS (M+ll)+ = 1310,6

Fmoe-C t r-011 a l'moe-I I e - 011 na-, opísaným v príklade I pripraví ch ronia t og ra ľ i ou za opísaných min, retenčný čas 7,00 min).

Príklad 56

--The-Phe-Λ rg-Cha-D-Λ I a-G I y-A rg-I I e-Asp-A rg-I I e—

Za použitia Fmoc-The-OII Fmoe-I I e-011 namiesto Fmoe-Me t-011 príklade T získa surový peptid, k f.iou za opísaných podmienok (5 retenčný čas 7,60 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1426,7 namiesto Fmoc-βΑI a-OH a sa postupom torý sa čistí % na .80 % op i sariýin v chromá tograB za 10 min,

Príklad 57 — Clg-Arg-Cha-D-Ala-GIy-Arg-1 Ie-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Finoe-C l.g-OII namiesto Fmoe-βΛ I a-OII a Fmoe-Ile-OII namiesto Fmoc-Met-OH a bez Fmoe - Phe-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí

- 80 chromatograf i ou opísaných podmienok (5 % na 80 % 1$ za 10 min, retenčný čas 8,90 min). FAB-MS (M+H)+ = 1406,7

Príklad 58 —Acéi-A rg - Phe-D-Λ Ia-GI y-Lys-N Ie-Asp-A rg- I I c—

Zíi prídavného použitia Fmoc-Lys (BOC)-011 a Fmoc-Aca-OII namiesto Fmoc-βΛ I a-0H a Finoc-N I e-011 namiesto Fmoc - Me t - 011 a bez Fmoc-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade I získa surový pept.itt, ktorý sa čistí eh roma togra ľ i oli za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 5,45 min). FAB-MS (M+ll)+ =1170,6

Príklad 59

--Aca-A rg-Se r(BzI)-D-Ala-Gly-Lys-N I e-Asp-A rg-I I e—

Za použi t i a

Fmoc-Aca-011 nam i cs to ľmoc- βΛ I a-OII,

Fmoc-N.l e-OII namiesto Fmoc-Me t-OH ti Fmoc-Ser (Bz I )-011 namiesto

Fmoc-Cha-OH sa peptid:, ktorý postupom opísaným v príklade I získa surový sa éislí eh roma tog ra ľ.i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 5,70 min). FAB-MS (M+ll)+ = 1200,5

-. 8 I

Príklad 60

- Aca-Phe-Arg-Phe-D-A Ia-GI y-Lys-N1 e-Arg-I le—

Za prídavného použitia Fmoe-Lys (BOC)-OH ľmoc-Aca-OII namiesto Fmoe-βΛ 1 a-OII a Fmoc-N I e-011 namiesto Fmoc-Me t-011 a bez Fmoe-Cha-OH ti ľmoe-Asp ( tBu)-011 sa postupom opísaným v prí klade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromátografj.ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B zti 11 .min, retenčný čas 7,10 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1089,5

Príklad 61

--βΑΙ. a-Phe-A rg-Phe-D-Λ 1 a-G I y-Lys-N i e-A rg-I I e—

Za použitia Fmoc-Lys (BOC)-011 a Fmoc-N I e-011 namiesto Fmoc-Me t-OII bez Fmoc-Cha-Oll ti Fmoe-Asp ( tBu)-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sri čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za II min, retenčný čas 6,90 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1160,6

Príklad 62

--Aca-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y-Lys- N 1 e-A rg-I I e—

Zti použitia Fmoc-Lys (BOC)-011 a Fmoe-Aca-OH namiesto Fmoe-βΑ Ι a-OII a Fmoe-N.l e-011 namiesto Fmoe-Met-OII ti bez postupom opísaným v príklade I získa surový sa čistí ehromatografiou za opísaných na 80 % B za 11 min, retenčný čas 5,95 min)

FAB-MS (M+H)+ = 1055,7 rmoc-cna-un sa peptií, ktorý podmienok (5 %

Príklad 63

-- βΛ.l.a-Arg - Phe-D-A I a-G I y - Lys - N I e - A rg- I I e—

Za použitia Fmoe-Lys(BOC)-OH a Fmoe-N I e-OII namiesto Fmoc-Meť-OH a bez Fmoe-Cba-OH a Fmoe-Asp(lBu)-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid. , ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za II min, retenčný čas 5,90 min).

FAB-MS (M+H)+ =1013,6

Príklad 64

-- βΑ l.a - Pbe-G I y-Se r (Bz I ) - D-Λ I a-G I y - Lys-N I e-Asp-Arg- I I e—

Zíi použitia Fmoe-Lys (BOC)-OH a Fmoe-Se r (Bz I )-011 n Fmoc-Nl.e-OH namiesto Fmoc-Me ľ-OH a bez Fmoe-Cba-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograf iou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,85 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1206,4

Príklad 65 — Aea - Phe-G I y - Phe-I)-A 1 a-G I y - Lys-N I e-Asp-A rg- I I e—

Za použitia Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoe-βΛ I a-OII a ľmoc-Nl.e-OH namiesto Fmoe-Met-OII a Fmoe-Lys (BOC)-OH a bez Fmoe-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograľi on za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za II min, rčlcnčný čas 7,40 min). FAB-MS (M+H)+ = 1248,5

Príklad 66 — βΑΊ a-GI y-Se r(B zI)-D-Λ I a-G I y -Lys-N I e-Asp-A rg- I I c

Zéi použitia Fiiioc-Lys (BOC)-011 a ľmoe-Se r ( Bz I )-OH namiesto Fmoc-Phc-011 a Fmoc-N le-011 namiesto Fmoe-Met-OH a bez Fmoe-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid:, ktorý sa čistí chromátografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 5,80 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1059,4

Príklad 67 p-Aca-Gly-Se r(BzI)-D-Λ 1a-GI y -Lys-N Ie-Asp-A rg- I I e—|

Za použitia Fmoc-Aca-OH namiesto Fiiioc - βΛ I a-Olí ,

Fmoc-Ser(Bzl)-OH namiesto Fmoc-Cha-OH a Fmoc-N le-011 namiesto Fmoc-Met-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograľ iou za opísaných podmienok ‘ (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,20 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1101,5

Príklad 68

--βΑΊ a-Se r(BzI)- D-Λ Ia-GI y-Lys-N Ie-Asp-A rg-I I e—

Za použitia Fmoc-Se ľ (Bz I )-OH namiesto Fmoc-Clia-OII a Fmoc-I I e-011 namiesto Fmoc-Mc ť-011 a prídavku Fmoc-Lys (BOC)-011 sa postupom opísaným v príklade I získa surový peptid, ktorý sa čistí cli romatog ra f i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B Zít 11 min, retenčný čas 6,05 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1002,6

Príklad 69

--Aca-Se r(Bz1)- D-A Ia-GI y-Lys-N I e-Asp-A rg-I I e— :i

Zri použitiu Finoc-Aea-OH namiesto Fmoe-βΛ I a-OII, Finoe-Il.e-OII ntimi.esto Fmoe-Met-011 a Fmoe-Ser(BzI)-OH namiesto Fmoc-Cha²0H a Fmoc-Lys(BOC)-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,60 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1044,5

Príklad 70

--B t u-A rg-Phe-D-Ala-Gly-Λrg-I I e-Asp-A ľg- I I e—

Zn použitia Finoc-B tu-OII - I l.e-OII namiesto Fmoc-Me t-OH opísaným v príklade 1 získa ehromatografiou za opísaných min, retenčný čas 5,34 min). FAB-MS (M+H)+ = 1225,6 namiesto Fmoc-βΛ I a-OII a ľmoca bez Fmoc-Cha-011 sa postupom surový peptid, ktorý sa čistí podmienok (5 % na 80 % B za 11

Príklad 71

-D-Btu-Aľg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-I Ie-Asp-Arg-I I e—

Za použitia ľmoc-D-B t u-011 namiesto ľmoc-|1A I a-OII a ľmoc-I .1 e-OII namiesto Fmoc-Met-0!l a bez ľmoc-Cba-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 5,15 min).

FAB-MS (M+ll) + = 1225,6

Príklad 72

-- pÁ.la-A rg - Phe - D-Λ I a-G I y-Λ rg- I 1 e - A rg - I I e - —

Za použitia ľmoc-II e-011 namiesto ľmoc-Me t-011 a bez Finoc-Cha-OH a ľmoc-Asp ( tBu)-OH sa postupom opi suným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatograf.íou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,15 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1041,5

Príklad 73

--Aea-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y-A rg-I I e-A rg-I I e—

Za použitia Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoc-fiA.I a-OII ti Fmoc-Ile-OII namiesto Fmoc-Met-OH a bez Fmoe-Cha-0H a ľmoc-Asp (tBu) sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch roma tog ra C i ou za opísaných podiiiienúk (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas ó 10 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1083,9

Príklad 74

- -Aca-Phe-Λrg-Phe-D-Λ Ia-G1y-Λrg-I le-Gly-Arg-l I e—

Za použitia ľmoe-Aca-OII -Il.e-OH nam i es to Fmoc-Met-OH stí 1 získa surový peptid, ktorý sa Silných podmienok (5 % na 80 % B mín) .

FAB-MS (M+H)+ = 1331,2

Príklad 75 namiesto Fmoc-βΛ I a-OII, Fmoepostupom opísaným v príklade čistí ch ronia tograf i ou za op í za II min, reienčný čas 5,80 — -Acíi - Phe-Λ rg-Ty r (OMe) - D-Λ I a-G I y - A rg - I I c - Asp- A rg- I I e—

Za použi t i a Fmoe-Tyr(OMe)-OH a Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoc-βΛ I a-OII ti Fmoc-I I e-OH namiesto Fmoc-Me t-Olí a bez Fmoc-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch ronia tog raf i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 1.1 min, retenčný čas 6,85 min). FAB-MS (M+ll)+ = 1376,2

Príklad 76

-- Aca - Phe-Λ rg - Phe - l)-A I a-G I y-A rg -1) - I le-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoc-βΛ I a-OII a Fmoe-D-IIe-OH namiesto Fmoc-Met-OH a bez Fmoc-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 in.i.n, retenčný čas 7,10 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1346,0

Príklad 77

- - Aca-Phe-A rg-Phe-D-A l.a-G I y-A rg-I Ie-D-Asp-Arg-I le— ____

Za použitiu Fmoc-D-Asp ( tBu) namiesto Fmoc-Asp ( tBu)-OH , Fmoc-Aca-OII namiesto Fmoc-βΑ I a-OII a I-'nioc-I le-OII namiesto Fiiiiic-Met-OII a bez Fmoc-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 1 1 min, retenený čtis

6,60 m i n) .

FAB-MS (M+H)+ = 1345,0

Príklad 78

- -Aca-Phe-D-A rg-Phe- D-Λ I a-G I y-A rg-1 le-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Fmoc-D-Arg (M t r)-Oll a Fmoc-Aca-OII namiesto Fmoc-β Al a-OH a Fmoc-I l.e-011 namiesto Fmoc-Me ť-Oll a bez Fmiie-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch ronia t og ra f i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,65 min). FAB-MS (M+H)+ = 1346,0

Príklad 79

- -Aca-D-Phe-A rg-Phe-D-Λ Ia-GI y-A rg-I le-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Fmoc-D-Phe-OH a Fmoc-Aca-OH namiesto Fmoc-pAIa-OH či Fmoc-I le-OII namiesto Fmoc-Me t-OII a bez Fmoc-Gha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý za sa čistí Ľhroiiiatogľuľiuii % B za 11 min, retenčný čas FAB-MS (M+ll) + - 1346,0 *>I»í sanýeh 6,55 min).

podmienok (5 % na «SO

Príklad 80

- -Phe-Arg-Phe-D-Λ 1a-GI y-A rg-I I e-Asp-A rg-I I e—

Za použitia Fmoe-I I e-011 namiesto Fmoe-Met-OII a bez Fmoe-Cha-OH a Fmoe-Aea-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ehromaĽografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas

6,55 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1232,5

Príklad 81

- -Λ I a - Phe - A rg - Phe - D - Λ I a - G I y - A rg- I I c - Asp - D - A rg - I I e—

Za použitia Fmoe-D-Arg (M t r) - 011 a Fmoe-Ile-OH namiesto Fmoe-Met-OII a bez Fmoe-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromaLografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za I I mi n, retenčný čas

6,15 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1303,7

Príklad 82

--β Al a-Plie - D-A rg-Phe - D-Λ I a-G I y-A rg-I I e-Asp-D-Arg-I le—

i.

Za použitia Fmoe-D-A rg ( M t r)-011 a Fmoe-I le-OH namiesto Fmoc-Met-OII a bez Fmoe-Cha-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí eh ronia tog ra ľ i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 1 1 min, retenčný čas ň , 0 5 m i n ) .

FAB-MS (M+ll)+ = 1346,0

Príklad 83

- -Arg-Phe-D-ΛIa-GIy-Arg-I Ie-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Fmoc-lle-OII namiesto Fmoc-Met-OII a bez Finoc-C'ha-OII a Fmoe-βΛ I a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za I1 min, retenčný čas

5,45 m in).

FAB-MS (M+ll)+ = 1085,5

Príklad 84

- -βΑI a-Phe-D-Arg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Λ rg-I I e-Asp-A rg- I I e—

Zči použitia Fmoe-I)-A rg ( M t: r )-OH namiesto Fmoe-Λ rg ( M t r)-OH a Fmoe-I le-OH namiesto Fmoc-Met-OII a bež Fmoe-Cha-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 m i n, retenčný čas 6,40 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1303,7

Príklad X5

- -βΛ l.a-Phe-Arg-Cha-Az t-G I y-Arg-1 le-Asp-Arg-l I e—

Za použitia Fmoc-Azt-OH namiesto Fmoc-D-A I a-OII a Fmoe-Ile-OII namiesto Fmoe-Me t-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromá log raľ i ou za opísaných podmienok (5 % na X0 % B za 10 min, retenčný čas 7,20 m in).

FAB-MS (M+IQ+ = 1321,7

Príklad X6

- -βΑ I a-Arg-Chci-D-Λ I a-G 1 y-Arg- I I e-Asp-Arg - I I e—

Za použitia Fmoc-I I c-011 namiesto Fmoc-Met-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí eh ronia tog raľ i ou zri opísaných pôdni i enok (5 % na X0 % B za 10 min, retenčný čas 6,35 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1162,5

Príklad X7

--Arg-Cha-D-AIa-GIy-Arg-I Ie-Asp-Arg-I I e— ‘ ;

Za použitia Fmoe-Ile-OH namiesto Fmoe-Me t-011 a bez í

Fmoc-βΛΙ a-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý síi čistí eh ronia t og raľ i ou za opísaných podmienok (5 % na X0 % B za 10 min, retenčný čas 6,10 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1091,5 ' i

í y i

Príklad 8« r -Phe-Arg-Cha-D-AIa-GIy-Arg- I le-Asp-Arg-1 le—

Za použi Ľia I'moe- 1 le-OII namiesto Fmoe-Me Ľ-Oll a bez Fmoc-βΑ Ι a-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový pepti t, ktorý sa čistí eh ronia togra ľ i iiu za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 8,25 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1238,8

Príklad 89

II - Lys - A rg - Phe - Ι)-Λ I a-G 1 y - l.ys - N I e-Asp-A rg- I I e—

Syn téza peptidu sa uskutočňuje na synteztítore peptidov ACT 200 firmy Advanced ChemTeeh za použitia Fmoc-s trategi e za použitia modifikovaného riadiaceho programu do 50 ml trepaei.eho reaktoru sa umiestni 1 g 2-me toxyhenzy I es te rove j živice firmy Baclien, Švajčiarsko, k tórií bola .uvedená do cyklu 0,5 mmol Fmoe-i zo.l eueí nu . Boli použité niísledujúce deriviíty aminokyselín : ľmoe-A ľg (M t r )-ΟΙ I, Fmoc-Asp ( t Bu)-ΟΙ I , Fmoe-NIe-OH, Fmoe-Lys (BOC)-Oll, Fmoe-G I y-OII, ľmoe-D-A I a-OII, Fmoc-Phe-0H a BOC-Lys (Fmoe)-OH . Kopulčícic sa vykonávajú za použi tia vždy 3 ekvivalentov Fmoe-aminokyseI iny, 1 - hydroxybenzot r iazo].u a d i.eyk I ohexy 1 ka rhod i i m i du (doba kopulčícic 40 minút). Po vykonaní TNBS-testu sa pri neúplnej aey I čie i i kopúl lícia opakuje za použitia rovnakých reagencií a prebytkov. Pri úplnej aey 1 čie i i sa naštartuje dá I š í cyklus syntézy. Odštiepenie Fmoc-ch nín i ae i eh skupín sa uskutočňuje 20 % piper.id.í.noin v DMF (raz 3 minúty, raz 15 minút).

Medzi jednotlivými reakciami sa Živica p-remyje vždy 10-krát DMF. Po výstavbe I ineárnej sekvencie BOC-Lys-Arg ( M t r ) - Phe - D- A l.a-G I y - Lys (BOC) - N I e - As p (t Bu ) - A rg (M t r) - I I e- na polymérnom nosiči sa živica dôkladne premyje d i ch I órmetánom a potom sa spracuje 5-krát vždy 20 ml 1 % roztoku kysel iny tr i f1uóoetovej v dichlórmetáne pri teplote.· miestnosti maximálne po 10 minút (až do intenzívneho l i I ci sfarbenia živice) . Roztoky stí spoja a zahustia vo vákuu. Zvyšok sa rozotrie s éterom, éter sa odekantuje, peptid sa suší v prúde dusíka a vyberie sa do 130 ml DMF, hodnota pil sa nastaví na asi 8,5 triety laniínnm, roztok sa ochladí na -20 C a pridá sa 0,2 g (0,75 mmol) dίfény I fosfory 1azidu. Neehii sa stál’ 48 hodín pri. -20 °C a 48 hodín pri 4 °C. Hodnota pH sa udržuje t r i.e ty lani í nom na 8,5. Potom sa odstráni vo vákuu, zvyšok sa rozotrie dvakrát s éterom, éter sa oddekanluje a zvyšok sa suší. v prúde dusíka. Chrániace skupiny bočného reťazca sa odštepujú zmesou kyseliny t r i f Iuóroclovej/ani zo I u (90/10) počas 24 hodín pri teplote miestnosti. Roztok sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa rozotrie s éterom a vysuší. Surový peptid sa čistí cez 3 /um stĺpec Dynamaxu 08 (10 x 2,14 cm) za použitia jedného z gradientov A: voda/aeeton i t r i I/kysel i na t r.i f l.uó.roe tová 95/5/0,2 a B: d t to 20/80/0,2 od 5 % B rm 80 % B zá 11 minút, prietok 20 ml, retenčný čas 5,25 minúť. Po sušení vymrazovaním sa získa amorfný bezfarebný prášok.

FAB-MS (M+H)+ - 1186,0

Príklad 90

Z- Lys-Arg - Phe - D-A I a-G l.y- Lys-N I e-Asp-Arg- I I eZči použitia Z-Lys ( Fmoc)-OH namies to BOC-Lys ( Fmoc) -011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí, chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,60 miri).

FAB-MS (M+H)+ = 1320,0

Príklad 91

Z- Lys-Λ rg-Ser (Bz I ) - Ι)-Λ I a-G I y- Lys - N I e - Asp-A rg - I I e—

Za použitia Z-Lys ( Fiiioc)-ΟΙ I namiesto BOL-Lys ( l-'moc)-OH u Fmoc-Ser(Bz1)-OH namiesto Fmoe-Phe-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí eh ronia tograf.i.ou za opísaných podmienok (5 % na 90 % B za 1 1 min, retenčný čas 6,95 min).

FAB-MS (M+H)-t- = 1350,0

Príklad 92

Bz-Lys- A rg-Phe- D-A Ia-GI y-Lys-Nle-Asp-Arg-I I e—

Za použ i t i a Bz-Lys(Fmoe)-OH nam i es to BOC-Lys(Fmoe)-OH sa postupom opísaným v príklade I získa surový peptid, ktorý sa čistí eh ronia ť og ra ľ i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retcnčný čas 6,00 min).

FAB-MS (M+ll) + = 1290,0

Príklad 93

Z-Lys-Arg-Phe-D-A Ia-GIy-Arg-I Ie-Asp-Arg-I I e—

Za použi tia Z-Lys(Fmoe)-OH namiesto BOC-Lys ( Fmoc )-011 a hez Fmoe-NIe-OH a Fiiioc-Lys (ROC)-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí eh ronia tog rafiou zti opísaných podmienok (5 % na 80 % B za II min, retenčný čas 6,65 min). FAB-MS (M+H)+ = 1348,0

Príklad 94

H-Lys-A rg-Cha-D-Λ 1 a-G I y-A rg-I I e-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Fmoc-Cha-OH namiesto Fmoc-Phe-OII a Fmoc-Il.e-OH namiesto Fmoc-N 1 e-OII a bez Fmoc-Lys (BOC)-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čisti chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,00 min).

FAB-MS (M+ll) + = 1219,7

Príklad 95

Z-Lys-Arg-Cha-D-A l.a-G i y-Arg-I le-Asp-Arg-I le—

Za použitia Z-Lys ( Fmoc)-011 namiesto BOC-Lys ( Fmoc)-OH , Fmoc-Cha-OH namiesto Fmoe-Phe-OII a ľ'moe-I le-011 namiesto Fmoe-Nl.e-011 a bez Fmoc-Lys (BOC)-OH sa postupom opísaným v príklade 1 pripraví surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % nti 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,35 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1353,7

Príklad 96

Menoe-Lys-A rg-Phe-D-Λ Ia-GIy-Arg-I le-Asp-Arg-I I e—

Zči použitia Menoe-Lys ( ľmoc)-011 namiesto BOC-Lys ( Fmoc)-OH tt i

a Fmoe-I le-OII namiesto Fmoe-N I e-011 a bez. Fmoe-l.ys (BOC)-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch roma tog ra ľ i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 m i π, re tenčný čas 8,20 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1395,8

Príklad 97

Menoc-Lys-A rg-Cha-D-Λ I a-G I y-A rg-I I e-Asp-Λ rg-1 I e—

Za použ i t i a Menoc-Lys ( Fmoe)-011 namiesto BOC-Lyš(Fmoe)-OH, Fmoc-Cha-OH namiesto Fmoe-Phe-OH ti Fmoe-Ile-OII namiesto Fmoe-N! e-ΟΗ a bez Fmoe-Lyš ( BOC)-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získči surový peptid, ktorý sa čistí chromá tograf.iou zéi opísaných podmienok (20 % na . 80 % B za II min, retenčný čas 7,00 min).

FAB-MS (M+ll)+ = 1402,0

Príklad 98

II - Lys - Lys - Cha - D - Λ I a - G I y - Λ r g - I I e - As p - A rg - 1 I e—

Za použitia Fmoe-I le-OII namiesto Fmoc-N 1 e-OII a Fmoc-Cha-OH namiesto Fmoe-Phe-ΟΠ sa postupom opísaným v príklade,1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromátograf i ou zči opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,40 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1191,8

Príklad 99

Z-Lys-Lys-Cha-D-Λ Ia-GIy-Arg-I I e-Asp-Arg-I I e

Za použitia Z-Lys(Fmoe)-OH namiesto BOC-Lys ( ľmoe.)-ΟΙ I a Fmoc-Ile-OH namiesto ľmoe-NI e-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získti surový peplid, ktorý sa čistí chromá ťograf iou z ti opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 7,75 min).

FAB-MS (M+H)-t- = 1326,0

Príklad 100

Z-Lys-Phe-Phe-D-Λ Ia-GI y-Arg-I Ί e-Asp-Arg-I I c—

Za použitia Z-Lys ( Fiiioc)-OH namiesto BOC-Lys ( Fmoe)-011 a Fmoe-I le-011 namiesto Fmoc-N le-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ehromatograf iou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za II min, retenčný čas 8,40 m i h) .

FAB-MS (M+ll)+ = 1339,0

Príklad 101 (4-N0₂)Z-Lys-A rg-Cha-D-Λ Ia-GI y-A rg-I Ie-Asp-Arg-I I e—

Za použitia (4-N0₂) Z-Lys ( Fmoe)-011 namiesto BOC-Lys (Fmoc)-OH, Fmoe-11 e-OH namiesto Fmoc-N I e-Oíl ti Fmoc-Cha-OH namiesto Fmoc-Phe-Olí sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch roma togra ľ i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 8,45 min). FAB-MS (M+H)+ = 1398,9

Príklad 102

Z-Lys-Orn-Cha-D-A Ia-GIy-Λrg-I le-Asp-Arg-I I c—

-Nie-OH a príklade 1

Za použitia Z-Lys ( Fmoe)-011 namiesto HOC-Lys ( Fmoe)-011, Fmoc-Cha-OH namiesto ľmoe-Phe-OII a Fmoe- I lc-011 namiesto Fmocnav i ae Fiuoc-Orn (BOC)-011 sa postupom opísaným v získa surový peptid, ktorý sa čistí chromalografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, reteričný čas 7,80 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1311,8

Príklad 103

H-Lys-A rg-Se r(Bz1)-D-Ala-Gly-Lys-N I e-Asp-Λ rg-I I e—

Za použitia Fmoe-Se r (Bz I )-OH namiesto Fmoe-Phe-011 sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 in i n, retenčriý čas 5,55 min).

FAB-MS (M+H)-t- =1216,0

Príklad 104

Bz-Lys tA rg-Phe- D-Λ Ia-GI y-Lys-NIe-Asp-A rg-I I e—

Za použ i t i a Bz- Lys ( Fmoe) -011 nám i es to BOC- Lys ( Fmoe) -OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčriý čas 6,40 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1290,0

Príklad 106

Bz - Ly s - A rg - Se r - ( Bz I ) -l)-Ala-Gly- Lys -N I e-Asp-A rg-I I e—

Za použ i t i ti Bz- Lys ( Fmoe) -011 nam i es to BOC- Lys ( Fmoe) -011 a Fmoe-Ser(BzI)-OH namiesto Fmoe-Phe sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ehromatograf.i.ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 1 1 min, retenčný čas 6,35 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1319,7

Príklad 107

Tos- Lys - Arg - Phe-D-A.l a-G I y-Arg- I le-Asp-Arg-I I e—

Za použ i t i a Tos-Lys(Fmoe)-OH nam i es to BOC-Lys(ľmoe)-OH a Fmoe-I .le-OII namiesto Fmoe-N I e-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatugraf.iou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,90 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1367,7

Príklad 108

II- Lys- A rg - Phe-C I g- A rg - I le-Asp-Arg-I I e—

Za použitia Fmoc-Clg-OII namiesto Fmoc-Gly-OH a namiesto Fmoe-D-A I a-OII a Fmoe- I le-OII, namiesto Fmoe-N I e-OII sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou zči opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 4,85 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1253,8

Príklad 109

Z-Lys-A rg-Phe-C I g-A ľg-I Ie-Asp-A rg-I !e

Za použi tia Z-Lys-( Fmoe) -OH namiesto BOC-Lys(Fmoc)-OII, Fmoc-Clg-OH namiesto Fmoe-Gly-OH a Fmoc-I)-A I a-OII a Fmoc - I le-0H nam i esto Fmoc-NIe-OII ti bez Fmoc-Lys (BOC)-OH sa pos tupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromatografiou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 6,85 min).

FAB-MS (M+II)+ = 1387,8

Príklad 110

Z- Lys - A rg-Cha-C l.g-Arg- I I e-Asp - A rg- I I e—

Za použitia Z-Lys(Fmoe)-OH namiesto BOC-Lys(Fmoc)-OH, Fmoe-Cha-OH namiesto Fmoc-Phe-OII a Fmoe-1 le-OII namiesto Fmoe-Nle-OII ti Fmoe-C l.g-OII namiesto Fmoe-Gly-OII ti namiesto ľmoe-D-A.la-Oľl ti bez Fmoe-Lys (BOC)-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch ronia Ľografi.ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 11 min, retenčný čas 8,70 min).

FAB-MS (M+li)+ = 13 94,0

Príklad 111

Z-Lys-A rg-Cha-D-CI g-A rg-I Ie-Asp-Arg-I I e—

Za použ i t i a Z- Lys ( Fmoe) -OH nam i es to BOC- Lys ( Fmoe) -Oll , . Finoc-Cha-OH namiesto Fmoe-Phe-OII, Fmoe-C lg-011 namiesto Fmoe-Gly-OII a Finoe-D-AI a-OII a Fmoe-I le-OII namiesto Fmoc-NIe-OII a

00 bez Fmoc-Lys(BOC)-OH su postupom opísaným v príklade I získa surový peptid, ktorý sa čisti chromatograľ iou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 9,80 min). FAB-MS (M+ll)+ = 1393,9

Príklad 112

H - Dap- A rg-Cha-D-A.l a-G 1 y-Λ rg- I I e - Asp - A rg - I I e—

Za použitia BOC-Dap(Fmoe)-011 namiesto BOC-Lys(Fmoe)-OH a Fmoc-Ile-OH namiesto Fmoe-NIe-OH a bez Fmoe - Lys (BOC)-011 stí postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí ch roma tograf i ou zči opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 mín, retenčný čas 6,85 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1177,5

Príklad 113

Z - Dap - A rg-Cha - D-A l.a-G I y-A rg- J I e-Asp-A r g- I I e—

Za použitia Z-Dap(Fmoc)-OH namiesto BOC-Lys(Fmoc)-OH, Fmoc-Cha-OH namiesto Fmoe-Phe-OII a Fmoe-I I c - 011 namiesto Fmoe-Nle-OH a bez Fmoc-Lys(BOC)-OH sa postupom opísaným v príklade 1 získa surový peptid, ktorý sa čistí chromátograf i ou za opísaných podmienok (5 % na 80 % B za 10 min, retenčný čas 8,10 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1311,6

Analogicky sa pri p ľaví (4-N0₂)Z-Lys-Arg-Cha-D-A 1a-GI y-Arg-Mc t-Asp-Arg-I I e—

Čistí sa ch ronia togra f i ou za opísaných podmienok (10 % na 90 % B za 10 min, retenčný čas 7,4 min).

FAB-MS (M+H)+ = 1417,0 (4-N0₂)Z-Lys-Orn-Cha-D-A 1a-G1y-Arg-I 1 e-Asp-A rg-I 1 e—

Čistí sa ch ronia tog raf i ou za opísaných podmienok (10 % na 90 % B za 10 min, retenčný čas 7,8 min).

FAB-MS (M+IQ + = 1356,6

Príklad 114

2-Pyr idyIace ty I -Lys-Arg-Cha-P-A1a-GIy-Λ rg- 1 Ie-Asp-Arg-I I c—

Syntéza peptidu sa uskutočňuje na syntezátore peptidov ACT 200 firmy Advanced ChemTech za použitia Fmoc-s trategi e za použitia modi f i kovaného riadiaceho programu do 50 ml t.repac.ieho reaktoru sa umiestni 1 g 2-metoxyhenzyI esťcrove j živice firmy Bachen, Švajčiarsko, ktorá bola uvedená do cyklu 0,5 mmol. Fmoc-i zo I euc í nu . Boli použité následujúce deriváty aminokyselín : Finoc-Arg(M t r)-OH , Fmoc-Asp(tBu)-OH, Fmoc-lle-OH, Fnioc-GI y-011, Fmoc-D-A 1 a-OII, Fmoe-Cha-OII a 2-pyridylace-tyl-Lys(Fmoc)-OH. Kopulácie sa vykonávajú za použitia vždy 3 ekvivalentov Fmoe-aminokyseI iny, 1 - hydroxybenzot r iazol.u a d ieyk 1ohexyIkarhod i i m idu (doba kopulácie 40 minút). Po

I

102 % roztoku kysoliny l ep I o 1 e m i es Ľnosl i vykonaní TNBS-testu sa pri neúplnej aeyIáei i kopulácia opakuje za použitia rovnakých reagencii a prebytkov. Pri úplnej aey I áe i i sa naštartuje tľa I š í cyklus syntézy. Odštiepenie Fmoe-chrániaci eh skupín sa uskutočňuje 20 % piper.i.tl.í nom v DMF (raz 3 minúty, raz 15 minút).

Medzi jednotlivými reakciami sa živica premyje vžtly 10-krát DMF. Po výstavbe lineárnej sekvencie 2-pyritlylacetyl-Lys-Arg(M t r)-Cha-D-Λ Ia-GI y-Arg(M t r)- I I e-Asp(tBu)-A rg(M t r)- I I e na polymérnom nosiči sa živica dôkladne premyje d i eh I órmetánom a potom sa spracuje 5-k rát vždy 20 ml t r i fluóoclove j v d i ch Iórmetáne pri maximálne po 10 minút (až do intenzívneho I i la sfarbenia živice). Roztoky sa prečistia ti odparia vo vákuu. Zvyšok sa rozotrie s éterom, éter sa oddckant uj e, peptid sa suší v prúde dusíka a vyberie sa do 130 ml DMF, hodnota pH sa nastaví na asi 8,5 t r i e ty I am ínom, roztok sa ochladí na -20 °C a pridá sa 0,2 g (0,75 mmol) d i fény 1 fosforyIazidu. Nechá sa stád 48 hodín pri. -20 °C a 48 hod í n pri 4 *’C. Hodnota pil sa udržuje tr i e ty l am ínom na 8,5. Potom sa odstráni DMF vo vákuu, zvyšok sa rozotrie dvakrát s éterom, éter sa oddckantuje a zvyšok sa suší v prúde dusíka. Chráň iaee skupiny bočného reťazca sa odštepujú zmesou kyseliny L r i ľ Iuóroctovej/ani zo I u (90/10) počas 24 hodín pri teplote miestnosti. Roztok sa zahustí vo vákuu, zvyšok sa digeruje s éterom a vysuší. Surový peptid sa čistí cez 3 /um stĺpec Dynainaxu 018 (10 x 2,14 cm) za použitia jedného z gradientov A: voda/aeeton i t r i I/kyseI i na t r.i.f luó roc tovťi 95/5/0,2 a B: dtto 20/80/0,2 z 10 % B na 90 % B za 11 minút, prietok 10 m I/m i n, retenčný čas 8,2 minút. Po sušení vymrazovaním sa získa amorfný bezfarebný prášok.

FAB-MS (M+ll) + = 1338,6

Príklady 115 až 124

X-Lys-Arg-Cha-D-AIa-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-I I e—

03

Za ρουζ i -Lys(Fmoe)-OH sa pept.i.t, ktorý sa (10 % na 90 % tabuľka).

tia X - Lys ( Fmoe)-011 namiesto 2-py r i dy I ace. t y I postupom opísaným v príklade 1 získa surový čistí ch roma log raf i ou za opísaných podmienok B za 11 min, retenčný čas viď. následujúca í'.·.', i'·.?

Pri k l.ad retenčný FAB-MS (M+ll) čas (min)

9,5

9,9

8,7

1338,6

1393 , 7

1403 , 6

1.3 2 5 , 3

1382 , 8

1385,8 i

í

I ί

r i

l i

i.

i í

I !

i

I 04

Pr.íklad č.

120

121

122 ^C1-O°^r o

123

124

(1) : OdchýIka od ie Cenený čas

7,6

8,1

7,5 čistenia pod ľa pri kladu 1

B na 90 % B za 10 m pľ i e tok I0 m I/m i n.

FAB-MS (M+ll)

1415.7 (1417,7) 1 Br

1398.8

1388

1404

1422 »· í

I.

i í

05

Gél (pre transdermálne podanie, najmä spojené s i on t a> ľo rézou ) % účinnej substancie všeobecného vzorca I v citraťovom pu f re pi l 4 , 1 (zloženie viď ďalej)

0,25 % agaróza

Zloženie c i ť rá tového pufru pil 4,1

Roztok I:

10,5 g moriohydrátu kyseI iny c i trónovej 100,0 ml hydroxidu sodného 1 inó I / I do 500,0 ml des t i I ovanú voda

Roztok lI:

100,0 m I kysse.liria ch I orovod í ková 0,1 mó I / 1 do 250,0 ml roztok I

Vyšš i e	uvedený roztok sa zahreje	asi na 60 (,C za
miešania a	po rozpustení vše	Ľkých čas t	í c agarózy sa nechá
vyehl adnú ť	na teplotu miestnosti.
Roztok pre	i n j eke i e
10,5 g	Nall2P04.2H20
95,5 g	Nall2P04.12H2O	> P ti ľ	e r pH 7,4
22,0 g	NaCI
do 5000 iii.l	des t i 1 ovanú voda

Tento tlmivý roztok sa spracováva v au tok láve 30 minút pri. 121 °C a 98,0665 kPa.

f ·.·

J·..

í

K

r.'.

i ·'

06

K tomuto roztoku sa pridá 1,5 g všeobecného vzorca I a vzniknutý roztok sa úe i nne j suhs turie i e s te r i 1 ne ľ i I t ruj e.

V uvedených príkladoch na prípravky je možné napríklad použiť zlúčeninu vzorca (4-N0₂)Z-Lys-Λ rg-Cha-D-A I a-G I y-A rg-I I e-Asp-A rg-I I e— alebo inú z vyššie uvedených zlúčenín.

107

1> Λ T E N T 0 V ľ·

Claims (1)

1. NÁROKY

   1. Cy k 1 opep t i dy všeobcenného vzorua I s ANI’ ugon i s Ľ i ekou účinnosťou p- A n - B n - C n - D n - E n - í'n - Gn - II n - I n - K n—j ( I ) kde sled členov Bn až Kn predstavuje sled am inokyseI i nových zvyškov h ANP

   -Arg(27)-Phe(B)-Gly(9)-Gly(10)-Arg(I1)-Me l (12)-Asp(I3)-Arg(14)I.le(15)~ alebo jeho priestorové štruktúrne a funkčné ekvivalenty a An znamená medzeru í ková skupinu, ktorá spája Bn s Kn a ovplyvňuje priestorovú štruktúru tých to molekúl tak,· že sa cyklopeptidy viažu na ANP receptory a i eh farmaceutický prijateľné sol i.

   2. Cyk I opep v i dy podľa nároku 1, kde medze rri í ková skupina v časti ležiacej za členom Bn obsahuje aromatický či lebo cyk I oči I i f a t ieký zvyšok .

   3. Cyklopeptidy pod ľči nároku I alebo 2, kde členy

   Bn , Cn , En , Fn , Gn , Hn , I n či Kn sú v L-forme.

   t

   4. Cyklopept.i d pod ľ či nároku 1 až 3, kde Bn je a-aminokyse1 i nový zvyšok s jedným alebo d voiii i bočnými reťazcami, kde bočný reťazec (e) alebo jeden z oboch bočných re ťčizeov obsahuje(ú) jednu, dve, tri alebo štyri bázické skupiny.

   10Κ

   Cn je a-am inokyseI i nový zvyšok s jedným alebo dvoma prípadne -0-, -S- alebo -C(0)0- obsahujúcimi a I kýlovým i bočnými reťazcami., p.r.ičom bočný (é) reťaze (e) nesie(ú) alebo jeden z nich nesie zvyšok alebo dva zvyšky, pričom každý zvyšok znamená cykloalkyl s 3 až 10 atómami uhlíka, fenyl, naľtyl, substituovaný napríklad hydroxy, ľenyI (C j ₄)aIkyIoxy, (C j_₄)a Ikoxy, N0₂ , fenyl alebo 5- alebo 6- členný aromatický he te rocy k I lis , kde 2 členy predstavujú N alebo jeden člen N a jeden je 0 alebo S alebo jeden člen je N, S alebo 0 a ostatné sú C, výhodne tienyl, fu ryl, pyrrolyl, imidazolyl, pyrazolyl, pyridyl , py raz i ny I , p i r i m i.d i ny 1 , py r i daz i ny I , i ndo lyl, i žoch i nolyl, ch.inolyl, ch romány I , tiazolyl, oxazolyl, morľo I i ny I .

   Dn a En každý nezávisle na druhom znumenú Gly alebo « - am i nok y se I. i nový zvyšok, ktorý napodobňuje priestorovú štruktúru natívnej aminokyseliny Gly ti lebo

   Dn a En spolu znamenajú 6d -am i nokysel i nový zvyšok -Nll (Cll₉ ) | j -C0aleho peptidový templát,

   Fn je α-am.i nokysel. i nový zvyšok s jedným alebo dvomi bočnými reťazcami , kde bočný (é) reťazec (e) ti lebo jeden z oboch bočných reťazcov ohsahuje(ú) jednu, dve, tri alebo štyri bázické skupiny,

   Gn je «-am inokyseI i nový zvyšok s jedným alebo dvomi llpof.i Inými bočnými reťazcami ,

   I I n j t: a-am i nokyse I i nový zvyšok, ktorý je v bočnom (ýcli) reťazci (och) neobsahuje žiadnu funkčnú skupinu alebo -COOII alebo -C0NH₂ obsahuje ako funkčnú skupinu.

   In je a-am inokysel i nový zvyšok s jedným alebo dvomi bočnými

   I 0 9 reťazcami, kde bočný (é) reťazee(e) alebo jeden z bočných reťazcov obsahuj e(ú) jednu, dve, tr i alebo štyri bázické skupiny,

   Kn je a-aminokyse1 i nový zvyšok s jedným alebo dvomi llpofilnými bočnými reťazcami.

   5. Cyk I opept i d podľa nároku 4, kile

   Bn, Fn a In nezávisle na sebe znamenajú «-aminokyselinový zvyšok s bočným reťazcom, kde bočný reťazec obsahuje jednu alebo dve bázické skupiny,

   Cn je α-amínokyseI i nový zvyšok s bočným reťazcom,

   Dn a En majú nezávisle na sebe význam definovaný v nároku 4 alebo

   Dn a En spolu tvor i au? -am i nokyse I i nový zvyšok

   -NH-(Cll₂) ₂_ j-CO- alebo peptidový Ľciiipláť,

   Gn a Kn nezáv is l e na sebe znamenajú a-am inokyse1 i nový zvyšok s llpofilným bočným reťazcom, kile bočný reťazec je (Cj-Cg)alkyl,ktorý môže tiež obsahovať jeden alebo dva -S- alebo -G- v reťazci,

   Hn je Gly alebo α-am i.nokyse I i nový zvyšok, ktorého bočný reťazec je (Cj-C₍-) a I ky I , fény I - (Cj-C₍-)-a I ky I , II^N-CO-(CH₂) [ _₄ alebo H00C- (Cll₂) , _₄- ,

   6. Cyklopeplid podľa nároku 5, kde

   Bn, Fn a In nezávisle na sebe znamenajú Arg, D-Arg, Lys, D-Lys, Orn, D-Orn, homo-Arg, D-homo-Arg, Dap, D-Dap alebo 4-am.i no-Phe , výhodne Arg, D-Arg, Lys, D-Lys alebo Orn,

   K)

   Cn znameá Phe, D-Phe, 4-NO₂-Phe, Cha, D-Cha, Ser(Bzl) , D-Ser (Bzl), D-Ser(Bzl), Tyr, D-Tyr, Tyi(Bzl), l)- 'ľy r ( Bz I ) , Na I , D-Nal, Thi, I)-Th i , Asp(Bzl), D-Asp(hzl), His, D-llis, G I u(Bz I ) alebo D-G.l.11 (Bzl) , výhodne Phe, Cha, Tyr, Na I , Ty r (Bzl) alebo (4-N0₂)-Phe,

   Dn a En nezávisle na sebe znamenaj ú Ala, Gly, ľni, Ser, Asn, Lys, Asp alebo Thr alebo ich D-formy, výhodne je l)n , D-Ala,. Gly, Pro, D-Pro, Ser alebo D-Scr,

   En je Gly, Asp alebo Asn alebo

   Dn a En spolu znamenajú ω - ani i nokyse I i nový zvyšok vzorca -NH - (Cll₂)₂_ í;-CO- alebo peptľídový templáť, vybodne Bťu, Clg, The alebo Tre alebo i eh D-formy, najmä D-B tu,

   Cn a ;Kn nezávisle na sebe znamenajú Íle, D-I I e, MeĽ, D-Met, Nie, D-NIc, Leu, D-Leu, Val alebo D-Vyl, výhodne Ilc, Met, Nie alebo Leu, lln znamená IIOOC- (Cll₂) j ₄-CII (NH-)-CO- , jeho D-f o rmy , G I y , Ala, D-Ala, Asn, D-Asn, Phe aleho D-Phe, výhodne Asp, Glu aleho Gly.

   7. Cyklopeptid podľa jedného z nárokov I až 6, kile

   An je

   a) skupina -A^-A^A^-, kde

   A| je Gly alebo zvyšok a-am i nokyse I. i ny , ktorej bočný reťazec (ce) nenesú žiadne funkčné skupiny,

   1 I

   Λ₂ znamená ková len tnú väzbu alebo zvyšok o»-am inokyseI iny vzorca II kde

   -NH - (CII₂)_n-COn je ce I é číslo od 1 do 11, (II)

   An znamená α-am.i nokyse I i nový zvyšok s jedným alebo dvoma poprípade -0-, -S- alebo -C(0)0- obsahujúcimi alkylovými bočnými. reťazcami , kde bočný reťazcc(ce) alebo jeden z obidvoch bočných reťazcov nesie jeden alebo dva zvyšky, kile každý z uvedených zvyškov je vždy cykloalkyl s 3 až. 10 atómami uhlíka, fenyl, naftyl, suhst i tuovaný (napríklad hydroxy, fény 1 (Cj _₄)a l.ky.l.oxy , (Cj _₄)a.l koxy , N0₂)-fenyI alebo 5alebo 6-členný aromat ický lieterocyk I us , kile 2 členy kruhu sú

   N alebo jeden člen je N a jeden 0 alebo S, alebo jeden člen je N, S alebo O, či ostatné členy sú C, výhodne t i enyl , f u ryl , pyrrol.yi, imidazol.yl, pyrazolyl, pyridyl, pyrazinyl, pyrirni d iny1 , pyridazinyl, indolyl, izochinilyl, chinolyl, ch romány I , tiazolyl , oxazolyl , morfol inyI , alebo

   b) skupinu -A₄- A^-, kde

   A₄ znamená pep t i ílový temp lá t a I eho to-am i nokyse I i nový zvyšok vzorca í I

   NII- (CII₂)_n-C0(II) kde n je celé číslo 1 až 11

   I 2 znamení! kovalentnú väzbu alebo «-am i nokyse I i nový zvyšok s jedným alebo dvoma poprípade -O- , -S- alebo -C(0)0 obsahujúcimi a 1. ky .1 ovým i bočnými reťazcami, kde bočný reťazec(e) alebo, jeden z oboch bočných reťazcov nes i e(ú) jeden alebo dva zvyšky, pričom každý zo zvyškov znamená cykloalkyl s .3 až 10 atómami. ubi í k a , fenyl , naf’tyl , substi tuovaný (napríklad hydroxy, f eny I. (Cj _ ₄) a I ky I oxy , (C j _ ₄) a l.koxy , N0₂)-fenyl. alebo 5aiebo 6-členný aromatický be te rocy k I us , kile 2 členy kruhu sú N alebo jeden člen je N a jeden 0 alebo S, alebo jeden člen je N, S alebo 0, a ostatné členy sú C, výhodne t ienyl, fu ryl, pyrrol.y! , ímídazoly l , pyrazolyl , pyr.i m i d iny I , pyridazinyl, indolyl, pyr.idyl , py raz inyl , i zoehi n i 1 y I , eh i no I y I , chromanyl , t iazoI y 1 , oxazolyl , morfo I inyl , alebo

   c) am i nokyseI i nový zvyšok vzorca III -NH- (CH₂)_in-CH(R) -CO (III), kde. m je celé číslo od 1 do 11 a R znamená NIIX, OX , SX , NXY , -Nll (II)-C(0)-Cll₂-X¹ ,

   -N (II)-C(O)-Cll₂-O-X ¹ ,

   -N (II) -C(0) -X¹ ,

   -N(II)-C(0)-CH=CH-X ¹ alebo -N(II) -C(0) -O-CI^-X¹ , kde X znamená vodík, nesubst i tuovaný alebo substituovaný benzoyIový zvyšok,nesubst i tuovaný alebo substituovaný eyk.l ohexy I oxykarbony I ový zvyšok , nesubst i tuovaný alebo substi tuovaný benzyIoxykarhonyIový zvyšok, 2-, 3-, alebo 4-pyr idyImety IoxykarbonyIový zvyšok alebo losy Iový zvyšok,

   X znamená Cl už 04 -alkylový zvyšok alebo aryl-(Cl íiž C14-aľkyl) zvyšok a

   I 3

   X¹ znamená («) ľeny I , (β) 1, 2 alebo 3 substituenty zo skupiny halogén, ť r i ľluórmely I alebo nilľo subsiiiuovaný ľenyl, (^f) naľtyl, (δ) benzo/b/-t i eny I , (6) pyridy I alebo (Ί) py raz inyl.

   8. Cyklopeplid pod ľa nároku 7, kde Λιι znamená

   a) - A i - A₂ - Λ3 - , kde Aj znamená n-ainínokysel i nový zvyšok s jedným (C,_) alkylovým hoéným reťazcom,

   A₂ j e tu-am i nokyse I i nový zvyšok vzorca II, kde n je celé číslo od 1 do 6,

   Αβ je a - am inokyse1 i nový zvyšok reťazcom alebo S j edným bočným skupinu -A₄A^- kde A\j je zvyšok u> vzorca II, kde n je celé číslo 1 až - tllll i 6 n 0 k y s e 1 i i ny Ac; je α-aminokysel i nový zvyšok reťazcom, s j edným bočným am inokyse1 i nový zvyšok vzorca III, k tie m je 1 , 2, 3

   alebo 4 a R je -NHX, -NHY,

   -NH(II)-C(0)-ΟΙ₂-Χ’ ,

   -N(II) -C(0) -Cl^-O-X¹ ,

   -N(H)-C(0)-X¹

   - N (I I) -C (0) - Cl l=CH - X¹ alebo -N (II)-C (O)-O-CH₂-X ¹ .

   9. Cy k l.opep t i d podľa nároku 8, kde An znamená íi ) skupinu - A j - Λ ₂ - A ₃ - kde

   A| znamená Ala, Gly, Phe, Val, íle, Leu u lebo Nie alebo ich D-formu, výhodne Gly, Ala alebo D-Ala,

   A₂ znamená oj - am i noky se I i nový zvyšok vzorca I I , kde n je 2, 3 alebo 5,

   I 1 4

   A3 znamená Phe, D-Phe, , 4-N0₂ -Phe, Cha, l)-Cha, Se r ( Bz 1 ) , D-Ser(Bzl), , Ty, D-Tyr , Tyr(Bzl), D-ľyr(Bzl) Nal , D-Na 1 , , T h i , D-Th i , Asp(Bzl), D-Asp(Bzl) alebo I I i s a 1 e ho (4-N0₇)Phe, D-ll is, 1 výhodne Phe, Tyr, Cha, Na

   b) skupinu — A 4 — A 3 — , k d e

   Λ4 je zvyšok -ainiiiukyscl i ny vzorca I I , kde n je 2 , 3 a I ebo 5 , l'i

   I·:

   je Phe, D-Phe, l)-Sei (Bzl ) , Tyr Nal , D-Na 1 , Thi II i s , D-ll i s , G 1 u Phe , Tyr, Cha ,

   4-N0₉-Phc, Cha,D-Cha, Ser(Bzl), D-Tyr, Tyr(Bzl), D-Tyr(Bzl), , D-Thi, Asp(Bzl), I)-Asp(Bzl), (Bzl) alebo D-GI u(BzI),výhodne

   Nal alebo (4-NO₂)-Phe, alebo

   c) ani i nokyse I i nový zvyšok vzorcu III, kde m je 1, 2, 3 a lebo · a R má význam definovaný v nároku 8, kde X je vodík, nesubst ituovaný alebo chlórom, metoxy alebo (Cl až C3)a 1 kýlom substituovaný benzoylový zvyšok, cyk I oliexy I ový- alebo (

   mety IoxykarbonyIový zvyšok, nesubsti tuovaný alebo metoxy, i

   n.itro, t r i f 1uórmety I alebo kyanoskupinou substituovaný i benzyloxykarbonyIový zvyšok, výhodne benzyIoxykarbony I , j

   4-metoxybenzyI oxyka rbony 1 , 2- alebo 4-t r ifluórmety IbenzyI - ί karbonyl, najmä benzyboxykarbonyI , 4 - n i trobenzy1oxykarbonyI ¹ alebo 2- alebo 4-t r i f Iuórmety IbenzyIoxykarbony I , _t

   Y znamená Cl až C14-alkylový zvyšok alebo (Cl až C14-alkyl)fenylový zvyšok, výhodne benzyl alebo fenyletyl, a

   j i

   I i

   1 5 χϊ znamená fenyl alebo mono- alebo d i-subst i luovaný fenyl, 2-pyridyl, 2-pyrazinyl, 3 - henzo/l»/t i eny I alebo 2-naf tyl.

   10. Cykl opep t i d pod ľa nriároku 1 až 9, kde

   An znamení! skupinu -Aj-A-^-A^-, kile

   Aj je Gly, ^A2 J ^ľ Aca , βΛ1 a, Apen, A hu ť , Gly a 1 e b< > z name ná koval e n t n ú dl väzbu a ^A3 J*¹¹ Phe , Phe(4-NO₂), Tyr alebo Ty r(Bzl) alebo

   An znamená skupinu -Λ^-Λ^-, kde

   A ₄ je βΑΙ.a, Aea, The, Aund, B tu alebo D-B tu a

   A$ je kovaléntná väzba, Phe, D-.Phe, Phe(4-N0?), Tyr,

   Tyr(Bzl) alebo Cha alebo

   An je am inokyseI i nový zvyšok vzorca I 1 I

   -NH - (CII2) n,-CH (R)-CO-, kde m je I alebo 4 a R je skupina

   -NHX, kde X je II, Z., Bz, Menoe, (4-No-?)Z alebo Tos ~ alebo A n je X -Lys-, k tie

   X je jedna z nasledujúcich skupín

   - 116 -

   Ο

   1 7

   Bn je Arg, D-Arg, Lys, Orn alebo Cl'ľ,

   Cn je Cha, Phe, Ser(Bzl), Tyr, ľyr(Bzl) alebo 'ľyi(Me), Dn je D-Ala, Pro alebo D-Pio,

   En je Gly, a I e bo

   Dn a En spolu tvoria L-Clg, D-Clg alebo D-Btu,

   Fn je Arg alebo Lys,

   Gn je íle, D-íle, Nie alebo Met,

   Hn je Asp, D-Asp alebo Gly,

   In je Arg alebo D-Arg a

   Kn je íle.

   11. Cyklopeptíd pod ľa nároku 10 , kde

   An je -G I y-βΑ I a-Phe-,

   -G I y-βΑI α-Ty r(BzI) - ,

   -βΑI a-Phe,

   -βΑ la-Plie (4-NO₂) - Lys- ,

   -(4-N0₂)Z-Lys-,

   Lys

   Bn je Arg, Lys,Ctr alebo Orn, Cn je Cha alebo Phe,

   Dn je D-λ la.

   En je Gly,

   Fn je Arg,

   Gn je íle alebo Met,

   Hn je Asp,

   In je Arg a

   K n j e 1.1 e .

   -1 1812. Gyklopeptid podie nároku '

   BA1a-Phe-Arg-Phe-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ιle-Gly pBAla-Tyr(Bzl)-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-Ιle-Glyr-BAla-Phe-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-íle _rBAla-Phe-Lys-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Iler-BAl a-Phe( 4-N02) -Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-1 le-Asp-Arg-Ι le r-BAl a-Phe-Ctr-Cha-D-Al a-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-1 le₃ (4 -NC>2) Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-I le-Asp-Arg-IleX-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Ile-Asp-Arg-Ilekde (4~NO₂)Z-Lys-Arg-Cha-D-Ala-Gly-Arg-Met-Asp-Arg -1 le-.

   (4 -NC>₂) Z-Lys-Orn-Cha-D-Al a-G ly-Arg-I le-Asp-Arg -íle1 1 9 a jeho farmaeeut ieky p r i j ateľné soli

   13. Spôsob výroby ey k I opep t: i ílov potí ľa niektorého z. nárokov 1 až 12 alebo jeho solí, v y z n a é u j ú e i sa t ý m, že sa známymi, metódami v chémii peptidov vytvoria lineárne pept idové sekvenei e zo zodpovedajúcich fragmentov a

   potom sa eyk l. izujú a ak je to po t r ehné vy tvor i a zodpovedajúce soli. 14 . Fa rinaceu t i eký p r í pravok , obsahu j úe i z 1účen i nu pod ľ niektorého z nárokov 1 až 12. 15 . Použ i t i e z 1 účen i ny pod ľa n i e k torélio z nárokov 1 až 12 na výrobu ant ihypertenzí ví( prípadne hypotenzi í va . 16. Použ i L i e z 1úéen i ny pod ľa n i t:k torélio z nárokov 1 až 12 na výrobu diuretiku. 17. Použitie zlúčeniny podľa n i ek torélio z nárokov 1 až 12 na výrobu vazod i l.atá tora 18 . Použ i t i e z 1účeniny pod ľa niektorého z nárokov 1 až 12 na výrobu spasmo1 y Ľ i ká. 19 . Použ i t i e z 1.účen i ny pod ľa n i ek torélio z nárokov 1 až 12 na výrobu hroneho1 y t ika.