SK3032003A3 - Method for producing peptide salts, their use and pharmaceutical preparations containing these peptide salts - Google Patents

Description

Vynález sa týka nového spôsobu výroby solí peptidov, zvlášť ťažko rozpustných solí peptidov, a jich použitia pre výrobu liečiv. Ďalej sa vynález týka farmaceutických kompozic, ktoré obsahujú aspoň jednu sol peptidu pripravenú podľa vynálezu, ako aj ich výroby.

Doterajší šťav techniky

V medzinárodnej patentovej prihláše č. PCT/EP94/03904 se popisuje výroba ťažko rozpustného peptidu reakciou vodného roztoku kyslej soli s roztokom kyseliny octovej a bázického peptidu za vzniku zrazeniny ťažko rozpustenej adičnej soli peptidu s kyselinou. Napríklad sa popisuje výroba LHRH antagonistov Cetrorelix Embonat.

Podstata vynálezu

Predmetom tohoto vynálezu je nový spôsob výroby solí peptidov, vyznačený tým, že reaguje adičná sol kyseliny a bázického peptidu (východzia sol peptidu) (1) v prítomnosti vhodného riediaceho činidla so zmesným meničom iontov alebo so zmesou kyslého a bázického meniča iontov za tvorby volného bázického peptidu, hneď potom sa menič iontov oddelí a potom reaguje voľný bázický peptid s anorganickou alebo organickou kyselinou za vzniku požadovanej adičnej soli peptidu a kyseliny (konečná sol peptidu) (2) a nakoniec sa odstráni riediace činidlo.

Výraz „bázický peptid tu značí poly(aminokyseliny), tiež v zmysle čiastočnej štruktúry vo vnútri v väčšej celkovej štruktúry, ktoré majú bázické aminokyseliny ako arginín, pyridylalanínn alebo lysín, alebo N-terminus peptidú alebo jednoducho aspoň jednu bázickú skupinu. Výhodnými peptidmi sú LHRH-antagonisti Antidu, A-75998, Ganirelix, Nal-Gluantagonista, Centrorelix, Teverelix (Antarelix ®) ako aj antagonisti podlá patentov US 5 942 493 a DE 19911771.3, ktorých obsah sa tým referenciami uvádza. Ďalšie peptidy sú Abarelix, Azaline B, Detirelix, Ramorelix (Stoeckemann and Sandow, J. Cancer Res. Clin. Oncol. 1993, 119, 457) a RS68439. Štruktúry uvedených peptidov sa nachádzajú v Behre et al., GnRH antagonists: an overview, Proceedings of the 2^nd World Conference on Ovulation Induction, The Parthenon Publishing Group Ltd.;Kutscher et al. , Agew. Chem. 1997,109,2240.

Ako kyseliny acetáty, východzie látky použitej sa jedná s výhodou o hydrochlóridy, sulfáty.

adičnej soli lahko rozpustné peptidov a soli ako

Podlá spôsobu podlá vynálezu sa východzia sol peptidú v riediacom činidle celkom alebo čiastočne rozpustí alebo v ňom suspenduje. Hneď potom sa pridá riediace činidlo. Rozpúšťadlá alebo riediace činidlá môžu byť rovnaké alebo rôzne. Ako rozpúšťadlá popr. riediace činidlá prichádzajú do úvahy napríklad: voda, etanol, metanol, propanol, izopropanol, butanol, acetón, dimetylketón, metyletylketón, dimetylacetamid, dimetylformamid, N-metylpyrrolidón, acetonitril, pentán, hexán, heptán a ich zmesi. Výhodné sú etanol, izopropanol alebo acetón. Výhodný je tiež obsah vody 1 až 60 %, s výhodou 5 až 50 %.

K roztoku popr. suspenzii východzej soli peptidu sa pridá zmesný menič iontov, teda zmes kyslého a bázického meniča iontov. Ako menič iontov prichádza do úvahy napríklad Amberlite ®.

Množstvo meniča iontov sa riadi podľa počtu bázických skupín peptidu. Množstvo sa zisťuje prídavkom až na udržanie konštantej hodnoty pH. Napríklad sa potrebuje na 1 g Cetrorelixu 10 g Amberlitu MB-3.

Hodnoty pH bázických roztokov pri príprave báz sa nastavia podľa každej použitej účinnej látky-soli, zvlášť u solí peptidov s bázický reagujúcimi aminokyselinami, zvlášť však u solí LHRH-antagonistov (napríklad Cetrorelix, D-63153, Abarelix, Ganirelix, Ramorelix, ktoré môžu byť vo forme acetátu), podľa každej použitej účinnej látky na hodnotu 7,5 až 13 .

Teplota by nemala prekročiť 25-30 °C, aby se zabránilo degradácii peptidu. Reakčná doba pre prípravu voľnej bázy udáva obyčajne dobu niekoľkých minút, napríklad 20 minút pokiaľ sa vychádza z acetátu Cetrorelixu. Môže byť však tiež dlhšia, napríklad 1 h pokiaľ sa vychádza z embonátu Cetrorelixu. Po dosiahnutí konštantej hodnoty pH by mala byť reakcia prerušená, pretože sa môžu tvoriť napríklad produkty rozkladu na základe bázicity roztokov.

Hneď potom sa odstráni z reakčnej zmesi menič iontov. Odstánenie je možné uskutočňovať presievaním, filtráciou, centrifugáciou alebo stĺpcovou filtráciou.

Číry až kalný roztok voľnej peptidovej bázy, ktorý je nestabilný, by mal čo možno najrýchlejšie reagovať s kyselinou za tvorby požadovanej adičnej soli s kyselinou. Kyselinu je možné pridávať ako pevnú látku alebo v roztoku popr. ako suspenziu. Rovnako tak je možné pridať roztok volnej bázy peptidu ku kyseline.

Reakčné doby ležia v oblasti niekoľkých minút až niekoľkých hodín. Napríklad pre tvorbu embonátu Cetrorelixu činí doba reakcie 1,5 h. Hneď potom sa reakčný roztok, ktorý je obyčajne číry, sterilné filtruje. Hneď potom je možné rozpúšťadlo odstrániť za získania čistej soli peptidu. Alternatívne je možné pred odstránením rozpúšťadla pridávať k roztoku pomocné látky, prídavné látky alebo nosiče. Pomocnú látku je možné pridávať pred sterilnou filtráciou alebo po sterilnej filtrácii ako pevnú látku alebo ako sterilné sfiltrovaný roztok.

Vhodnými pomocnými látkami sú napríklad mannitol, sorbitol, xylit, rozpustný škrob.

Podľa vynálezu je možné pripraviť prídavkom príslušnej kyseliny nasledujúce soli: acetát, adipát, askorbát, alginát, benzoát, benzensulfonát, bromid, uhličitan, citrát, chlorid, dibutylfosfát, dihydrogencitrát, dioktylfosfát, dihexadecylfosfát, fumarát, glukonát, glukuronát, glutamát, hydrogenuhličitan, hydrogenvinan, hydrochlorid, hydrogencitrát, jódid, laktát, alfa-liponová kyselina, malát, maleát, malonát, pamoát (embonát), palmitát, fosfát, salicylát, stearát, sukcinát, sulfát, vinan, tannát, oleát, oktylfosfát.

Vynález sa ďalej objasňuje pomocou nasledujúceho príkladu, bez toho, že by ne neho bol obmedzený.

Príklady uskutočnenia

Príklad 1

46,47 g D-20761 sa pridávalo po častiach k 1193 g vody a počas miešania sa 'rozpúšťalo.(= roztok 1). Roztok 1 sa hneď potom zriedil počas miešania 3261 g 96% etanolu, (roztok 2) . Roztok 2 sa po zriedení sfiltroval cez predbežný filter so sklenenými vláknami a filtrát sa počas miešania doplnil 390 g Amberlite MB3 (zmesný menič iontov pozostávajúci z iontomeničov zo silne kyslých kationtov a aniontov) (= zmes 1). 316,8 g mannitu sa rozpustilo počas miešania v 1267 g vody (= roztok 3). Po 15 min. miešaní, sa zmerala hodnota pH roztoku zmesi 1, a po ďalšom päťminútovom miešaní sa merala hodnota pH ešte raz. Roztok sa hneď po dosiahnutí hodnoty pH 12,5 oddelil na site s jemnými okami od Amberlitu MB3. (= roztok 4).

4162 g roztoku 4 sa doplnilo počas miešania 5,34 g kyseliny embonovej. Táto zmes sa silne miešala ďalšie 1,5 h a trocha zakalený roztok sa hneď potom filtroval predbežným filtrom so sklenenými vláknami. Pri tomto roztoku bola hodnota pH 8,4 (= roztok 5). Namerané hodnoty pH sa merali hladkou elektródou s viskóznym elektrolytom. Hodnoty pH boli brané iba ako relatívne, pretože merané roztoky popr. suspenzie obsahujú etanol a tým vykazovali podobne vyššie hodnoty.

3333 g roztoku 5 sa v reakčnej aparatúre temperovanej na teplotu miestnosti sterilné filtrovalo a 528 g roztoku 3 s roztokom 5 temperovaným na teplotu miestnosti počas miešania sterilné filtrovalo. (= roztok 6).

Roztok 6 sa zohrial na 40 °C a hneď potom destiloval etanol/vodná zmes až na < = 1931 g za vákua, (suspenzia 1) .

i>

Suspenzia 1 Cetrorelix-Embonát sa schladila na teplotu miestnosti a zriedila sa sterilné sfiltrovanou vodou pre injekčný účel počas miešania na 3000 g. (suspenzia 2) .

Hotová, na teplotu miestnosti temperovaná suspenzia 2 sa hneď potom plnila vždy 3 g do 10 ml injekčných fľaštičiek, opatrili sa zátkou na sušenie vymrazovaním a previedli sa do zariadenia na sušenie vymrazovaním.

Injekčné fľaštičky pri teplote dosky -40°C zmrzli v zariadení na sušenie vymrazovaním. Sušenie nastávalo pomocou programu sušenia pri rastúcej teplote dosky od -40°C až 20 °C. Zariadením na sušenie vymrazovaním prúdil sterilné filtrovaný dusík, injekčné fľaštičky boli uzavŕené v zariadení a hneď potom boli nasadené obrúbené vrchnáčiky a pripevnili sa.

Po sušení vymrazovaním sa uzavŕené injekčné fľaštičky pri 12 kGy (min)-15 kGy sterilovali γ-žiarením. Optimálne je to posledné.

injekčná fľaštička s 140,0(7) mg obsahuje 34,07 mg Cetrorelix-embonátu, čo zodpovedá 30 mg Cetrorelixu a 106 mg mannitolu. K rekonštitúcii sa použili 2 ml vody pre injekčné účely. Získaná suspenzia mohla byť podaná per i.m. alebo s.c.dávke.

Biologický účinok

Podlá príkladu 1 získaný Cetrorelix embonát (2:1) lyofilizát (30 mg) sa resuspendoval v 2 ml vody pre injekčné účely mohol potom byť podaný parenterálne, s výhodou subkutánne (s.c.) alebo intramuskulárne (i.m.).

Pri podávaní s.c. je pre Cetrorelix embonát (2:1) biologická dostupnosť približne 30-50 % (100 %= intravenózne podaný Cetrolixacetát). Jedinečnou výhodou lyofilizátu

Cetrorelixu embonátu (2:1) je nepatrný popr. žiadny nárazový efekt pre pacienta. Doba účinku je závislá od dávky a leží v oblasti 2-8 týždňov alebo dlhšia pri dávke 30-150 mg.

Lyofilizovaný Cetrorelix-embonát podlá vynálezu je práve vo fázy 1 klinických testov na ľuďoch.

Obr. 1 ukazuje priebeh koncentrácie Cetrorelixu v plazme v závislosti od doby (v hodinách) začínajúci od i.m. dávky 60 mg lyofilizovaného Cetrorelixu embonátu (2:1) podlá Príkladu 1 u človeka. Žiadny nárazový efekt (cca 100 ng/ml) nebol pozorovaný. Doba účinku vyššia ako 700 hodín. Od 150 h po podaní konštantný obraz plazmy približne 2 ng/ml. Biologická dostupnosť ležala pri 40 %.

Priemyselná využitelnosť

Oblasti použitia solí peptidov napríklad BPH, myómy a endometrióza.

Claims (9)

1. Spôsob výroby solí peptidov, vyznačujúci sa tým, že sa adičná sol kyseliny a bázického peptidu (východzia sol peptidu) (1) nechá reagovať v prítomnosti vhodného riediaceho činidla so zmesným meničom iontov alebo zmesou kyslého a bázického meniča iontov za tvorby voľných bázických peptidov, hneď potom sa oddelí menič iontov a potom sa voľný bázický peptid nechá reagovať s anorganickou alebo organickou kyselinou za vzniku požadovanej adičnej soli peptidu s kyselinou (konečná sol peptidu) (2) a nakoniec sa odstráni riediace činidlo.

2. Spôsob podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa ako východzia sol peptidu použije sol Cetrorelixu, Teverelixu, Abarelixu, Ganirelixu, Azalinu B, Antidu, A75998, Detirelixu, Ramorelixu, RS-68439.

3. Spôsob podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že kyselinou je kyselina embonová, kyselina stearová, kyselina salicylová.

4. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 3, v y z n a čujúci sa t ý m, že molárny pomer Cetrorelixu ku kyseline embonovej činí 2:1.

5. Spôsob podľa niektorého z nárokov 1 až 4, vyzná č u j ú c i sa t ý m, že sa riediace činidlo odstráni sušením vymrazovaním.

6. Sol peptidu pripravená spôsobo podľa nárokov 1 až 5.

Ί . Lyofilizovaná sol peptidu pripravená spôsobom podlá nároku 5.

8. Farmaceutická kompozícia obsahujúca sol peptidu podlá nárokov 6 alebo 7 spoločne s farmaceutickými pomocnými látkami, nosičom a/alebo ...

9. Spôsob výroby farmaceutického prostriedku podlá nároku 8, vyznačujúci sa tým, že sa pridajú celkom alebo čiastočne farmaceutické pomocné látky, nosič a/alebo pred odstránením riediaceho činidla.

10. Použitie soli peptidu podľa nárokov 1 až 5 na prípravu liečiva na parenterálnu aplikáciu u cicavcov.