SK285075B6

SK285075B6 - Súprava na transplantáciu chondrocytov na povrchu kĺbu

Info

Publication number: SK285075B6
Application number: SK240-99A
Authority: SK
Inventors: Henrik Vide-Hansen; Charlotte Lundsgaard; Ahmed Idouraine; Kurt B. Osther
Original assignee: Verigen Transplantation Services International Ag
Priority date: 1996-08-30
Filing date: 1997-08-29
Publication date: 2006-05-04
Also published as: US20030195532A1; US6379367B1; EP1384452B1; EP1181908A1; SK24099A3; US5989269A; AU4171097A; EP1459709A1; DE69739363D1; JP2002502272A; HK1063003A1; CN1500447A; US6283980B1; HU225952B1; NZ518474A; DK200200178U1; DE69726896D1; DE29724585U1; SG119137A1; KR20030097603A

Abstract

Súprava na transplantáciu chondrocytov na povrchu kĺbu obsahuje hemostatickú bariéru (1) vopred spracovanú na odolanie resorpcii, na uloženie na uvedený povrch, kryciu náplasť (2) vopred spracovanú na odolanie resorpcii, na prekrytie daného povrchu, a organickú glejovinu, na prilepenie uvedenej hemostatickej bariéry (1) a/alebo uvedenej krycej náplasti (2) na daný povrch. Súprava prípadne ďalej obsahuje chirurgický nástroj na tvarovanie stien miesta štepu a matricový materiál vhodný ako nosič chondrocytov.

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka oblasti transplantácie chondrocytov (zrelých buniek chrupky), transplantácie kostí a chrupiek, liečby, náprav kĺbov a prevencie artritických chorôb. Osobitne sa týka metód prípravy polohy štepov, zariadenia na túto prípravu a autológnych transplantácií buniek na pripravené vrúbľové miesto.

Doterajší stav techniky

Každý rok sa uskutočňuje v Spojených štátoch amerických viac ako 500 000 artroplastických zákrokov a úplných kĺbnych náhrad. Približne rovnaký počet podobných postupov sa uskutočňuje v Európe. V týchto číslach je zahrnutých približne 90 000 celkových kolenných náhrad a okolo 50 000 postupov na nápravu poškodenia kolien za rok v Európe. Počet zákrokov je v podstate rovnaký v USA. (V: Praemer A., Fumer S., Rice, D. P., Musculoskeletal conditions in the United States. Američan Academy of Orthopaedic Surgeons, Park Ridge, III., 1992,125). Spôsob regenerácie-liečby chrupky by mal byť čo najvýhodnejší, a mal by sa vykonávať v najčasnejšom stave poškodenia kĺbu, čím sa zníži počet pacientov, ktorí potrebujú umelé kĺbne náhrady. Týmito preventívnymi postupmi liečenia by sa tiež znižoval počet pacientov s rozvinutou osteo-artritídou.

Techniky používané na vyrovnávanie povrchu chrupkovej štruktúry kĺbov sa pokúšali hlavne o vykonanie nápravy chrupky použitím subchondálneho vŕtania, abrázie a iných metód, pričom excizia nemocnej chrupky a subchondálnej kosti zanechávali vaskularizovanú pórovitú kosť obnaženú (Insall, J., Cli. Orthop. 1974, 101, 61; Ficat R. P. a kol., Clin Orthop. 1979, 144, 74; Johnson L. L., In: Operative Arthroscopy, McGinty J. B., Ed., Raven Press, New York, 1991,341).

Coon a Cahn (Science 1966, 153, 1116) opísali techniku kultivácie chrupky syntetizovanými bunkami somitov kuracieho embrya. Neskoršie Cahn a Lasher (PNAS USA 1967, 58, 1131) použili systém na analýzu postihnutí syntéz DNA ako predpokladu na diferenciáciu chrupky. Chondrocyty reagujú na obidva EFG a FGF rastom (Gospodarowicz a Mescher, J. Celí Physiology 1977, 93, 117), ale hlavne stratou svojej rozlišujúcej funkcie (Benya a kol., Celí 1978, 15, 1313). Metódy kultivácie chondrocytov boli opísané a v podstate sú používané s menšími úpravami Brittbergom, M. a kol. (New Engl. J. Med. 1994, 331, 889). Bunky kultivované týmito postupmi boli použité ako autológne transplantáty do kolenných kĺbov pacientov. Ďalej, Kolettas a kol. (J. Celí Science 1995, 108, 1991) skúmali expresiu špecifických molekúl chrupky, ako sú koiagény a proteoglykány, pri predĺženej bunkovej kultivácii. Zistili, že napriek morfologickým zmenám počas kultivácie monovrstvových kultúr (Aulthouse, A. a kol., In Vitro Celí Dcv. Biol., 1989, 25, 659; Archer, C. a kol., J. Celí Sci. 1990, 97, 361; Hänselmann, H. akol., J. Celí Sci. 1994, 107, 17; Bonaventure, J. a kol., Exp. Celí Res. 1994, 212, 97), v porovnaní so suspenziou kultúr rastúcich nad agarózovými gélmi, alginátovými lôžkami alebo ako spinner kultúry (zachovávajúce si kruhovú bunkovú morfológiu) testovaných rôznymi vedcami, sa nezmenili chondrocytmi exprimované markéry ako typy II a IX koiagény a nezmenili sa veľké zhluknuté proteoglykány, agrekan, versikan a spojený proteín (Kolettas, E. a kol., J. Celí Science 1995,108,1991).

Artikuláme chondrocyty sú špecializované mezenchymálne odvodené bunky nájdené iba v chrupke. Chrupka je avaskuláme tkanivo, ktorého fyzikálne vlastnosti závisia od extracelulámej matrice produkovanej chondrocytmi. Počas endochondrálnej osifikácie sa chondrocyty podrobujú maturácii vedúcej k bunkovej hypertrofii, charakterizovanej počiatkom expresie kolagénu typu X (Upholt, W. B. a 01sen, R. R., V: Cartilaqe Molecular Aspects (Halí, B & Newman, S, Eds.) CRC Boca Raton 1991, 43; Reichenberger, E. a kol., Dev. Biol. 1991, 148, 562; Kirsch, T. a kol., Differentiation, 1992, 52, 89; Stephens, M. a kol., J. Celí Sci. 1993,103, 1111).

Prebytočná degradácia kolagénu typu II vo vonkajších vrstvách artikulámych povrchov kĺbov je tiež spôsobená osteo-atritídou. Kolagénová sieť je preto zoslabovaná a následne sa rozvíja fibrilácia, čím sa substancie matrice, ako proteoglykány, strácajú a prípadne sa úplne premiestňujú. Taká fibrilácia oslabenej osteoartritickej chrupky môže dosiahnuť dole na kalcifikovanú chrupku a na subchondrálnu kosť. (Kempson, G. E. a kol., Biochim. Biophys. Acta 1976,428, 741; Roth, V. a Mow. V.C, J. Bone Joint Surgery, 1980, 62A, 1102; Woo, S. L.-Y. a kol., v Handbook of Bioenqineering (R. Skalak a S. Cien eds,), McGraw-Hill, New York, 1987, str. 4,1-4,44).

Opis základného výskumu, histologickej a mikroskopickej anatómie kosti, chrupky a iných takých spojivových tkanív, je možné nájsť napríklad vo Wheater, Burkitt a Daniels, Functional Histology, 2. vyd., (Churchill Livingstone, London, 1987, Kap. 4). Opisy základnej histologickej anatómie defektov v kosti, chrupke a iných spojivových tkanivách je možné nájsť napríklad vo Wheater, Burkitt, Stevens a Lowe, Basic Histopathology, (Churchill Livingstone, London, 1985, Kap. 21).

Cez výhody kultivácie chondrocytov a manipulácií s kosťou a chrupkou neboli dosiahnuté väčšie úspechy pri pokusoch transplantovať chrupku alebo chondrocyty na nápravu poškodených kĺbnych povrchov. Opis predloženého vynálezu poskytuje účinné a výkonné prostriedky na promotovanie transplantácie chrupky a/alebo chondrocytov na miesto poškodenia v kĺbe alebo inom chrupkou krytom kosťovom povrchu, pričom chrupka je regenerovaná na fixáciu poškodenia. Predložený vynález rovnako poskytuje chirurgické nástroje, ktoré sú určené na prípravu miesta štepu, aby účinná integrácia transplantovaného materiálu na miesto štepu dopadla úspešne.

Podstata vynálezu

Predmetom vynálezu je súprava (kit) na transplantáciu chondrocytov na povrchu kĺbu, ktorá obsahuje hemostatickú bariéru vopred spracovanú na odolanie resorpcii, na uloženie na uvedený povrch, kryciu náplasť vopred spracovanú na odolanie resorpcii, na prekrytie daného povrchu, a organickú glejovinu, na prilepenie uvedenej hemostatickej bariéry a/alebo uvedenej krycej náplasti na daný povrch. Súprava prípadne ďalej obsahuje chirurgický nástroj na tvarovanie stien miesta štepu a matricový materiál vhodný ako nosič chondrocytov.

Predložený vynález poskytuje spôsob účinného liečenia spojujúceho chrupkového povrchu kĺbu transplantáciou chondrocytov na vhodnej matrici, na povrch, ktorý má byť liečený, s hemostatickou bariérou a krycou bezbunkovou náplasťou, zahŕňajúci najskôr vloženie hemostatickej bariéry blízko povrchu, ktorý má byť liečený, vloženie chondrocytov na vhodnej matrici na povrch, ktorý má byť liečený, vzdialene od hemostatickej bariéry, prekrytie povrchu, ktorý má byť liečený, bezbunkovou krycou náplasťou.

Hemostatická bariéra, ako bude ďalej opísaná, je bariéra, ktorá inhibuje alebo bráni prenikaniu vaskularizujúcich buniek a tkaniva do transplantovaného materiálu. Konkrétne poskytuje predložený vynález hemostatickú bariéru, ktorou je resorbovateľný, semipermeabilný materiál, ktorý inhibuje alebo zabraňuje vaskulámej infiltrácii bariérou. V jednom rozpracovaní obsahuje hemostatická bariéra kolagén.

Bezbunkový, alebo buniek prostý, ako sa používa tu ako v stave techniky, znamená materiál, ktorý je v podstate bez intaktných buniek, ktoré sú schopné ďalšieho bunkového delenia, promulgácie alebo biologickej aktivity. Vo výhodnom rozpracovaní je buniek prostý materiál bez všetkých intaktných, jadro tvoriacich buniek. V jednom rozpracovaní zahŕňa predložený vynález použitie buniek prostej krycej náplasti, ktorá obsahuje semipermeabilnú kolagénovú matricu. V inom výhodnom rozpracovaní postupuje porézny povrch buniek prostej krycej náplasti priamo na implantovanom materiáli.

Predložený vynález ďalej poskytuje autológnu transplantáciu kolagénu alebo chondrocytov na miesto štepu, pričom miesto štepu bolo najskôr pripravené chirurgickou úpravou na lepší príjem materiálu štepu. V jednom rozpracovaní jc miesto štepu modelované tak, že steny štepového miesta sú tvarované v zvlnenom vzore tak, že materiál štepu, keď sa uloží na miesto štepu a roztiahne sa, až sa uvedie do kontaktu so stenou miesta štepu, bude odolný proti odobraní alebo vypudení celého štepu z miesta štepu. Predložený vynález ďalej poskytuje chirurgické nástroje určené na modelovanie miesta štepu, ako je uvažované podľa postupu podľa vynálezu.

Prehľad obrázkov na výkresoch

Predložený vynález bude lepšie vysvetlený na základe nasledujúcich obrázkov, ktoré ilustrujú niektoré vlastnosti predloženého vynálezu, kde:

obr. 1 A je znázornením typického kĺbneho zakončenia kosti. Typicky je materiál kosti pokrytý na kĺbe chrupkovitým povrchom.

Obr. 1 B ukazuje príklad, keď nastalo poškodenie alebo zranenie na chrupkovitom prekrytí (medzera v chrupke), a tento defekt môže byť liečený priamo, nepatrne rozšírený alebo tvarovaný, aby prijal materiál štepu chirurgickými postupmi pred liečením.

Obr. 1 C ukazuje, ako je hemostatická bariéra (očíslovaná ako 1) vložená na poškodené miesto chrupkovitého prekrytia, aby inhibovala alebo bránila vaskularizácii na regenerovanej chrupke, od kosti, na ktorej leží. Chondrocyty, ktoré majú byť implantované na dutinu defektu, sú potom uložené navrch hemostatickej bariéry.

Obr. 2 je znázornením liečeného poškodenia (medzery v chrupke) chrupkovitého prekrytia potiahnutím semipermeabilným bezbunkovým materiálom (označeným ako č. 2), ktorý je použitý, aby tvoril prekrytie/ náplasť alebo bandáž cez poškodené miesto. Toto prekrytie je fixované na mieste, buď zošitím na okraji dutiny v liečenej chrupke, alebo pripojením iným spôsobom. Toto prekrytie pokrýva poškodenú plochu kĺbu, kam je umiestnený transplantát s kultivovanými chondrocytmi/chrupkou, alebo je umiestnený pod čiastočne pripojené prekrytie.

Obr. 3 A je schéma znázorňujúca rôznu reakciu na stlačenie a strižné sily tvrdšej a mäkšej chrupky s následnou oblasťou ohraničenia.

Obr. 3B znázorňuje miesto štepu potom, čo bolo vytvarované poškodenie so zvlnenými stenami.

Obr. 3C znázorňuje vytvorené miesto štepu s hemostatickou bariérou (1), transplantovaným materiálom (3), bez bunkovou krycou náplasťou (2) na mieste s artikulámym chrupkovým povrchom (4).

Obr. 4A znázorňuje jedno rozpracovanie chirurgického prostriedku podľa predloženého vynálezu, vykazujúceho rezacie zuby (5) a dopredu vyčnievajúci vkladací klinec (6). Znázornenie priečneho rezu napravo znázorňuje dve možné konfigurácie rezacích nožov.

Obr. 4B znázorňuje druhé rozpracovanie chirurgického prostriedku podľa predloženého vynálezu.

Obr. 5 je schéma ilustrujúca rôzne modifikované reakcie na stlačenie a strižné sily tvrdšej chrupky a mäkšej chrupky po modelovaní miesta štepu.

Obr. 6A je obraz MRI kolena prasiatka vykazujúceho poškodenie chrupky v ľavom (mediálnom) kĺbnom hrbole. Obr. 6B je obraz MRI rovnakého kolena prasiatka tri mesiace po liečbe.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Tento vynález sa týka použitia určitých výrobkov, ktoré inhibujú tvorbu vaskulámeho tkaniva, napríklad ako sú vytvorené kapilárne kľučky vyčnievajúce do chrupky, počas postupu autológnej transplantácie chondrocytov na postihnuté miesta chrupky. Tvorba vaskulámeho tkaniva zo spodnej kosti má snahu sa premietať do novotvorenej chrupky, čo vedie k objaveniu sa iných buniek, ako požadovali mezenchymálne špecializované chondrocyty.

Kontaminujúce bunky zavádzané vaskularizáciou môžu viesť k zvýšeniu zásahu a prerastaní do chrupky tvorenej implantovanými chondrocytmi. Jedným z typov komerčných produktov, ktoré môžu byť použité v tomto vynáleze, je Surgicel^(R) (Ethicon Ltd., UK), ktorý sa absorbuje po 7 až 14 dňoch. Použitie tohto materiálu v postupe podľa predloženého vynálezu je opakom bežného použitia hemostatického prostriedku, ako je Surgicel^(R), ako je to opísané vo vloženom letáku od Ethicon Ltd.

Prekvapivo sme zistili, že v situácii, keď si prajete inhibovať revaskularizáciu v chrupke, pôsobí hemostatický materiál ako gélu podobný umelý koagulát. Pokiaľ by boli prítomné bunky červených krviniek v plnej hrúbke poškodenia artikulámej chrupky, ktorá je pokrytá takou hemostatickou bariérou, budú tieto červené krvinky premenované na hematín, a takto sa urobia neschopnými indukovať vaskulámy rast. Preto hemostatický produkt použitý ako revaskularizačná inhibičná bariéra s, alebo bez fibrínových adhezív, ako je napríklad Surgicel^(R), je účinný pre predložený postup, ako je mienený predloženým vynálezom. Inou častou tohto vynálezu je použitie komponenty bez buniek, ktorá je použitá ako náplasť pokrývajúca poškodenú plochu kĺbu, na ktorej sú transplantované kultivované chondrocyty/chrupka, použitím na transplantáciu autológnych chondrocytov. Postup podľa vynálezu sa tiež týka použitia vhodných alogenických chondrocytov alebo xenogenických chondrocytov na opravu chrupkových defektov.

Preto predložený postup opisuje metódu účinnej opravy alebo liečby poškodenia chrupky v artikulámych kĺbnych kosťových prekrytiach, ktorá zahŕňa podávanie činidla alebo prostriedku na blokovanie vaskulámej invázie do miesta chrupky, ktoré má byť opravené, a tiež poskytnutie buniek prostej bariéry, ktorá bude izolovať opravené miesto a udržovať: transplantované bunky na mieste. Preto predložený vynález tiež poskytuje kit obsahujúci hemostatický bariérový komponent na vloženie na miesto, ktoré má byť liečené tak, že dôjde k účinnej inhibícii vaskularizácie na mieste, ktoré je opravované; a chondrocyty, ktoré majú byť transplantované, sú uložené na miesto, ktoré sa opravuje, semi permeabilná buniek prostá bariéra je prekrytá cez opravované miesto tak, že transplantované chondrocyty sú udržované na mieste, ale sú ešte schopné zvyšovať prístup živín.

Niektoré aspekty vynálezu boli doložené príkladmi použitia in vitro systému pri štúdiu správania chondrocytov, keď sú v kontakte s určitým produktom alebo kombináciou určitých produktov, ktoré inhibujú tvorbu vaskulámeho tkaniva. Tento in vitro test predpovedá schopnosť určitých testovaných materiálov inhibovať vaskularizáciu, ktorá nastane in vivo, keď sa vytvoria kapilárne kľučky prenikajúce do chrupky počas autológnej transplantácie chondrocytov do defektov chrupky.

Vhodné hemostatické produkty sú charakterizované tým, že majú schopnosť inhibovať rast alebo inváziu vaskulámeho tkaniva, osteocytov, fibroplastov a pod. do rozvíjajúcej sa chrupky. Vhodný hemostatický materiál dosiahne cieľ metódy podľa predloženého vynálezu tým, že bude zabránené vaskulámej alebo celulámej invázii do rozvíjajúcej sa chrupky, aby sa optimalizovala tvorba chrupky a dosiahla sa oprava plnej hrúbky poškodenia artikulámej chrupky. V ideálnom stave bude hemostatická bariéra stabilná po široké časové obdobie, postačujúce k úplnej oprave chrupky, a potom schopná resorbovať alebo inak sa zničiť v priebehu času. Jeden materiál identifikovaný ako vhodný sa nazýva Surgicel^<R) W1912 (absorbovateľný hemostat obsahujúci oxidovanú regenerovanú sterilnú celulózu; Lot GG3DH, Ethicon Ltd, UK). Iným príkladom vhodného materiálu je BíoGide^(R) (podložka komerčne dostupného typu I kolagénovej matrice; Geistlich Sohne, Švajčiarsko).

Vhodný organický glejový materiál môže byť zaistený komerčne, ako je napríklad Tisseel^(R) alebo Tissucol^(R) (adhezívo na báze fibrínu; Immuno AG, Rakúsko), Adhesive Proteín (Cat. #A-2707, Sigma Chemical, USA) a Dow Coming Medical Adhesive B (Cat.#895-3, Dow Coming, USA).

Chirurgické nástroje uvažované podľa predloženého vynálezu môžu byť vyrobené z kovu a/alebo plastu vhodného na chirurgické inštrumenty na jednorazové alebo na viacnásobné použitia. Rezacie nástroje obsahujú rezacie zuby, ktoré sú plne kruhové alebo ploché, alebo niečo medzi tým. Pretože je chrupka relatívne mäkký materiál, môže byť výhodné vyrobiť tvrdené plastové rezacie okraje, ktoré budú schopné formovať chrupku bez toho, že by boli schopné poškodiť kosť. Tieto rezacie nástroje môžu byť vyrobené na vytvorenie otvorov na podávanie tekutiny, odoberanie odrezaných zvyškov a tekutiny odsatím, na optické vlákna na osvetlenie a objasnenie defektného miesta.

Niektoré aspekty predloženého vynálezu budú lepšie zrozumiteľné na základe nasledujúcich príkladov, ktoré sú uvedené na ilustráciu, nie však akékoľvek obmedzenie.

Príklad 1

Aby mohol byť Surgicel^<R) použitý podľa predloženého vynálezu na prevenciu vzniku krvných ciev v autológnej implantovanej chrupke alebo chondrocytoch, bol Surgicel^(R) najskôr spracovaný s fixačným prostriedkom, ako je glutaraldehyd. Krátko, Surgicel^<R) bol spracovaný s 0,6 % glytar-aldehydom počas 1 minúty, nasledovalo niekoľkokrát premytie pre elimináciu zvyškov glutar-aldehydu, ktoré sú inak pre tkanivo toxické. Alebo môže byť Surgicel^<R)spracovaný s fibrínovým adhezivom označovaným Tisseel® pred spracovaním s glutaraldehydom, ako je opísané v príklade 2. Bolo zistené, že Surgicel^(R) fixovaný napríklad fixačným prostriedkom, ako je glutaraldehyd, premytý ste rilným fyziologickým roztokom (0,9 %) a uložený v mrazničke, sa nerozpúšťa počas 1 až 2 mesiacov. Všeobecne je Surgicel resorbovaný v čase medzi 7 a 14 dňami. Tento čas je príliš krátky, pretože je potrebný dlhší čas na bránenie vzniku krvných ciev alebo vaskularizácii samotnej z kosťovej štruktúry do implantovanej chrupky predtým, ako dorastú implantované chondrocyty na pevnú chrup-kovú vrstvu, ktorá dostáva svoje nutričné požiadavky z najbližšej chrupky. Inými slovami, postačujúca inhibícia vaskularizácie je potrebná po dlhší čas, ako je napríklad jeden mesiac. Preto by nemal byť produkt absorbovaný výrazne pred týmto časom. Na druhú stranu, resorpcia je nakoniec potrebná. Preto by mal mať organický materiál, použitý ako inhibičná bariéra, tieto schopnosti, a bolo zistené, že Surgicel®, spracovaný týmto spôsobom, túto funkciu poskytne.

Príklad 2

Surgicel® bol tiež potiahnutý organickou glejovinou, v tomto príklade bol použitou glejovinou Tisseel® ale iné môžu byť použité tiež. Tento produkt, spoločne so Surgiceleim®, produkuje použiteľnú bariéru na konkrétny účel vynálezu. Akákoľvek hemostatická alebo vaskuláma inhibičná bariéra môže byť použitá. Tisseel® bol miešaný, ako je opísané ďalej. Potom bol Surgicel® potiahnutý prostriedkom Tisseel^(R) sprejovým nanesením na materiál Surgicel® na obidvoch stranách, až do namočenia. Potom bol Tisseel® (fíbrínová glejovina) ponechaný stuhnúť pri teplote miestnosti. Bezprostredne pred ukončením tuhnutia bol potiahnutý Surgicel® vložený do 0,6 % glutaraldehydu na 1 minútu a potom bol premytý sterilným fyziologickým (0,9 %) roztokom. Potom bolo pH upravené PBS a/alebo NaOH, až bolo pH stabilné pri 7,2 až 7,4. Neskoršie bol takto spracovaný Surgicel premytý 15 mM Hepes tlmivým roztokom v tkanivovom kultivačnom médiu, ako je minimálne základné médium/Fl 2.

Ako bolo uvedené, použili sme v tomto príklade Tisseel® ako fibrínové adhezívum na potiahnutie Surgicelu®. Ďalej tiež môže byť fibrínové adhezivum alebo glejovina aplikované priamo na dno poškodenia smerom ku kosti, na ktorej je Surgicel® nalepený. Použitý systém in vitro, namiesto testovania in vivo, sa skladal z NUNCLON™ Delta 6-priehlbňovej sterilnej likvidovateľnej dosky pre výskumné práce buniek (NUNC, InterMed, Roskilde, Dánsko). Každá priehlbeň merala v priemere približne 4 cm.

Podľa vynálezu môže byť fibrínovým adhezivom akékoľvek adhezívum, ktoré spoločne s fibrínovou zložkou produkuje glejovinu, ktorá je ľuďmi tolerovaná (Ihara, N, a kol., Bums Incl. Therm. Inj., 1984, 10, 396). Vynález tiež anticipuje inú ďalšiu ílovú zložku, ktorá môže byť použitá namiesto fibrínového adhezíva. V tomto vynáleze sme použili Tissee® alebo Tissucol® (Immuno AG, Viedeň, Rakúsko). Kit Tisseel® sa skladá z nasledujúcich zložiek: Tisseel®, lyofilizovaný, vírusovo inaktivovaný Sealer, obsahujúci proteín schopný zrážania, z toho:

fibrinogén, Plazmový fibronektín (CIG) a Faktor XIII, a Plazminogén.

Roztok aprotinínu (hovädzieho)

Trombín 4 (hovädzí) Trombín 500 (hovädzí) Roztok chloridu vápenatého

Kit Tisseel® obsahuje aplikačný systém DUPLOJECT®. Fibrínové adhezívum alebo dvojzložkové tesnivo používajúce kit Tisseel® je spojené spôsobom podľa vloženého listu Immuno AG produktu.

Príklad 3

Chondrocyty boli kultivované v minimálnom základnom kultivačnom médiu obsahujúcom HAM F12 a 15 mM Hcpcs tlmivého roztoku a 4 až 7,5 % autológneho séra v inkubátore s CO? pri 37 °C a uchované v laboratóriu Triedy 100 vo Verigen Európe A/S, Symbion Science Park, Kodaň, Dánsko. Na kultivácie chondrocytov môžu byť použité aj iná zloženia kultivačného média. Bunky boli trypsínované použitím trypsínu EDTA počas 5 až 10 minút a sčítané pomocou farbenia životaschopnosti Trypanovou modrosťou v Biirker-Turk komore. Počet buniek bol upravený na 7,5 x 10⁵ buniek na ml. Jedna doska NUNCLON™ bola nezakrytá v laboratóriu Triedy 100.

Surgicelová^(RI hemostatická bariéra bola rozrezaná na veľkosť vhodnú na dno priehlbne v NUNCLON™ tkanivovej kultivačnej miske. V tomto prípade sú kruhové, s veľkosťou približne 4 cm (ale môžu byť akejkoľvek vhodnej veľkosti) a sú vložené za aseptických podmienok na dno v priehlbni NUNCLON™ Delta 6-priehlbňovej sterilnej likvidovateľnej dosky na výskumné práce buniek (NUNC, InterMed, Roskilde, Dánsko). Hemostatická bariéra, ktorá má byť vložená na dno priehlbne, bola vopred ošetrená, ako je uvedené v príklade 1. Toto ošetrenie zdržuje výrazne absorpciu Surgicelu. Potom bola hemostatická bariéra niekoľkokrát premytá v destilovanej vode a postupne toľkokrát, až bol vymytý nezreagovaný glutaraldchyd. Malé množstvo bunkového kultivačného média obsahujúceho sérum bolo aplikované na absorpciu hemostatickou bariérou a súčasne na udržanie hemostatickej bariéry vlhkou na dne priehlbne.

Približne 10⁶ buniek v 1 ml kultivačného média bolo vložených priamo navrch hemostatickej bariéry, rozptýlených cez celý povrch hemostatickej bariéry vopred ošetrenej 0,4 % glutaraldehydom, ako bolo opísané. Potom boli misky inkubované v CO₂ inkubátore pri 37 °C počas 60 min. Množstvo 2 až 5 ml tkanivového kultivačného média obsahujúceho 5 až 7,5 % séra bolo opatrne pridávané do priehlbni obsahujúcich bunky a na zabránenie postriekania buniek sa držala pri vypúšťaní média špička pipety tangenciálne k stene priehlbne. Ukázalo sa, že pH média bolo príliš nízke (pH okolo 6,8). Potom bolo pH upravené na 7,4 až 7,5. Ďalší deň začali niektoré z chondrocytov rásť na hemostatickej bariére a vytvárať zhluky. Niektoré z buniek zahynuli vzhľadom na pôsobenie nízkeho pH pred úpravou pH. Dosky boli inkubované počas 3 až 7 dní, so zmenou prostredia v deň 3.

Na konci inkubačnej periódy bolo prostredie dekantované a bol pridaný studený zmrznutý 2,5 % glutaraldehyd obsahujúci 0,lM sodnú soľ dimetylarzínovej kyseliny (tiež označovaný kakodylát sodný, pH upravené pomocou HCl na 7,4) ako fixačný prostriedok na prípravu buniek a nosiča (hemostatická bariéra) na neskoršiu prípravu na elektrónovú mikroskopiu.

Príklad 4

Chondrocyty boli kultivované v minimálnom základnom kultivačnom médiu obsahujúcom HAM F12 a 15 mM Hepes tlmivého roztoku a 5 až 7,5 % autológneho séra v CO₂ inkubátore pri 37 °C a uchované v laboratóriu Triedy 100 vo Verigen Európe A/S, Symbion Science Park, Kodaň, Dánsko. Na kultivácie chondrocytov môžu byť použité aj iné zloženia kultivačného média. Bunky boli trypsínované použitím trypsínu EDTA počas 5 až 10 minút a sčítané pomocou farbenia životaschopnosti Trypanovou modrosťou v Biirker-Turk komore. Počet buniek bol upravený na 7,5 x 10⁵ buniek na ml. Jedna doska NUNCLON™ bola odkrytá v laboratóriu Triedy 100.

Surgicel^(R) (na použitie ako hemostatická bariéra) bol ošetrený 0,6 % glutaraldehydom počas 1 minúty, ako je opísané v príklade 1, a premytý 0,9 % sterilným roztokom chloridu sodného alebo, výhodne, tlmivým roztokom, ako je PBS tlmivý roztok alebo kultivačné médium, ako je MEM/F12, pretože pH je po ošetrení glutaraldehydom 6,8 a malo by byť prednostne 7,0 až 7,5. Tisseel^(R> bol aplikovaný na obidvoch stranách Surgicelu^<R) použitím DUPLOJECT® systému, a takto vytvoril poťah na obidvoch stranách Surgicelu^(R>, keď sa uvažuje o použití náplasti, s fíbrínovým adhezivom. Glejovina sa ponechá uschnúť za aseptických podmienok počas aspoň 3 až 5 minút. „Potiahnutá“ hemostatická bariéra sa vloží na dno priehlbne vNUNCLON™ Delta 6ti priehlbňovej sterilnej likvidovateľnej dosky na výskumnú prácu. Malé množstvo kultivačného média tkaniva obsahujúceho sérum bolo použité na absorpciu do hemostatickej bariéry. Približne 10⁶ buniek v 1 ml tkanivového kultivačného média obsahujúceho sérum bolo vložených priamo navrch Hemostatu, dispergované na povrch hemostatickej bariéry. Potom boli dosky inkubované v CO₂ inkubátore pri 37°C počas 60 minút. Množstvo 2 až 5 ml tkanivového kultivačného média obsahujúceho 5 až 7,5 % séra bolo opatrne pridávané do priehlbní obsahujúcich bunky a na zabránenie postriekania buniek sa držala pri vypúšťaní média špička pipety tangenciálne k stene priehlbne. Po 3 až 6 dňoch prieskum mikroskopom ukázal, že bunky prilipli a rástli na Surgicele^(R) vyhovujúcim postupom, čo svedči o tom, že Surgicel^<R) nevykazoval toxickosť k chondrocytom a že chondrocyty rástli uspokojivo na Surgicele^<R).

Dosky boli inkubované počas 3 až 7 dní, so zmenou prostredia v deň 3. Na konci inkubačnej periódy bolo prostredie dekantované a bol pridaný studený zmrznutý 2,5 % glutaraldehyd obsahujúci 0,lM sodnú soľ dimetylarzínovej kyseliny, tiež označovaný kakodylát sodný, pH upravené pomocou HCl na 7,4, ako fixačný prostriedok na prípravu buniek a nosiča (hemostatická bariéra) na neskoršiu prípravu na elektrónovú mikroskopiu.

Príklad 5

Chondrocyty boli kultivované v minimálnom základnom kultivačnom médiu obsahujúcom HAM F12 a 15 mM Hepes tlmivého roztoku a 5 až 7,5 % autológneho séra v CO₂ inkubátore pri 37 °C a uchované v laboratóriu Triedy 100 vo Verigen Európe A/S, Symbion Science Park, Kodaň, Dánsko. Bunky boli trypsínované použitím trypsínu EDTA počas 5 až 10 minút a sčítané pomocou farbenia životaschopnosti Trypanovou modrosťou v Burker-Tíirk komore. Počet buniek bol upravený na 7,5 x 10⁵ až 2 x 10⁶buniek na ml. Jedna doska NUNCLON™ bola odkrytá v laboratóriu Triedy 100.

Bolo zistené, že Bio-Gide^(R) môže byť použitý ako resorbovateľná dvojvrstvová membrána, ktorá sa použije ako náplasť alebo bandáž pokrývajúca poškodenú plochu kĺbu, kam budú kultivované chondrocyty, rovnako ako hemostatická bariéra, transplantované. Bio-Gide^(R) je membrána z čistého kolagénu získaná štandardizovaným riadeným výrobným postupom (od E. D. Geistlich Sohne AG, CH-6110 Wolhusen). Kolagén je vyrezaný z veterinárne overených ošípaných a je opatrne purifikovaný, aby sa zabránilo antigénnym reakciám, a sterilizovaný v dvojitých blistroch T-ožiarovaním. Dvojvstrvová membrána má porézny povrch a hustý povrch. Membrána je vyrobená z kolagénu typu I a typu III bez ďalšieho sitovania alebo chemického ošetrenia. Kolagén je resorbovaný 24 týždňov. Membrána si ponecháva svoju štrukturálnu integritu dokonca za vlhka a môže byť upevnená prišitím alebo klincom. Membrána môže byť rovnako „zlepená“ použitím fibrínového adheziva, ako je Tisseel^lR) k najbližšie rastúcej chrupke alebo tkanivu, buď miesto šitia ihlou, alebo spoločne so šitím.

Bio-Gide^<R) bol nepotiahnutý v laboratóriu Triedy 100 a vložený za aseptických podmienok na dno priehlbní v NUNCLONTM Delta 6ti priehlbňovej sterilnej likvidovateľnej dosky na výskumnú prácu - buď s poréznym povrchom dvojvrstvovej membrány lícom hore, alebo so stranou s hustým povrchom hore. Približne 10⁶ buniek v 1 ml tkanivového kultivačného média obsahujúceho sérum bolo vložených priamo navrch Bio-Gide^(R), dispergovaných na povrchu porézneho alebo hustého povrchu Bio-Gide^(R). Potom bola doska inkubovaná v CO₂ inkubátore pri 37 °C počas 60 minút. Množstvo 2 až 5 ml tkanivového kultivačného média obsahujúceho 5 až 7,5 % séra bolo opatrne pridávaných do priehlbne obsahujúcej bunky a na zabránenie postriekania buniek sa držala pri vypúšťaní média špička pipety tangenciálne k stene priehlbne.

Druhý deň potom boli chondrocyty vložené do priehlbne obsahujúcej Bio-Gide^(R) a bunky boli skúmané Nikon Inverted mikroskopom. Bolo zaznamenané, že niektoré chondrocyty prilipli k okraju Bio-Gide. Samozrejme nebolo možné pozerať sa cez Bio-Gide samotný použitím tohto mikroskopu.

Dosky boli inkubované počas 3 až 7 dní so zmenou prostredia v deň 3. Na konci inkubačnej periódy bolo prostredie dekantované a bol pridaný studený zmrznutý 2,5 % glutar-aldehyd obsahujúci 0,1M sodnú soľ dimetylarzínovej kyseliny, tiež označovaný kakodylát sodný, pH upravené pomocou HC1 na 7,4, ako fixačný prostriedok na prípravu buniek a Bio-Gide^<R) nosiče s bunkami kultivovanými buď na poréznom povrchu, alebo na hustom povrchu. Potom boli Bio-Gide^<R) náplasti zaslané na elektrónovú mikroskopiu do Oddelenia patológie, Herlev nemocnice, Dánsko.

Elektrónová mikroskopia ukázala, že chondrocyty kultivované na hustom povrchu Bio-Gidc^ÍR| nerástli na kolagénovej štruktúre Bio-Gide^(R), zatiaľ čo bunky kultivované na poréznom povrchu naozaj rástli na kolagénovej štruktúre a ďalej vykazovali prítomnosť proteoglykánov a žiadne známky fibroblastových štruktúr. Tento výsledok ukazuje, že keď je kolagénová náplasť, ako napríklad náplasť BioGide*^, prišitá ako náplasť kryjúca poškodenie chrupky, porézny povrch má byť lícom dole smerom k poškodeniu, kam budú kultivované chondrocyty injektované. Ty potom budú schopné preniknúť kolagénom a produkovať hladký chrupkový povrch v zhode s neporušeným povrchom, na tejto ploche bude vystavená hladká vrstva proteoglykánov. Naproti tomu, keď hustý povrch kolagénu je lícom dole na poškodenie, chondrocyty, ktoré majú byť implantované, sa nezjednotia s kolagénom, a bunky nebudú produkovať: rovnaký hladký povrch, ako to bolo opísané.

Príklad 6

Chondrocyty boli kultivované v minimálnom základnom kultivačnom médiu obsahujúcom HAM F12 a 15 mM Hepes tlmivého roztoku a 5 až 7,5 % autológneho séra v CO₂ inkubátore pri 37 °C a uchované v laboratóriu Triedy 100 vo Verigen Európe A/S, Symbion Science Park, Kodaň, Dánsko. Bunky boli trypsínované použitím trypsínu EDTA počas 5 až 10 minút a sčítané pomocou farbenia životaschopnosti Trypanovou modrosťou v Biirker-Tiirk komore. Počet buniek bol upravený na 7,5 x 10⁵ až 2 x 10⁶buniek na ml. Jedna doska NUNCLON™ bola nekrytá v laboratóriu Triedy 100.

Bio-Gide^(R), použitá ako resorbovateľná dvojvrstvová membrána, môže byť tiež použitá spoločne s organickou glejovinou, ako je Tisseel® s ďalším, výrazne vyšším ob sahom aprotinínu, ako sa normálne v Tissccl^(R) nachádza, ako je opísané v produktovom letáku. Zvýšením obsahu aprotinínu na asi 25 000 KlU/ml bude resorpcia materiálu odložená o týždne, namiesto normálneho rozpätia dní.

Na testovanie tohto znaku in vitro je Tisseeľ^R) aplikovaný na dno priehlbne NUCLONTM dosky, a ponechaný úplne stuhnúť. Kolagénová náplasť, ako je Bio-Gide^<R), je potom aplikovaná cez Tisseeľ^R) a prilipnutá na dno priehlbne. Táto kombinácia Bio-Gide^<R| a Tisseel^(R> je označená ako hemostatická bariéra, ktorá bude inhibovať alebo brániť rozvoju infiltrácie krvných ciev do plochy transplantácie chondrocytov. Táto hybridná kolagénová náplasť môže byť teraz použitá pre obidva, ako hemostatická bariéra na spodku lézie (najbližšie k povrchu, ktorý sa opravuje), ale tiež ako podložka (nosič) na tvorbu chrupky, pretože distálny povrch môže byť porézna strana kolagénovej náplasti, a tak podporuje infiltráciu chondrocytov a chrupkovej matrice. Preto môže byť táto hybridná kolagénová náplasť použitá tiež na prekrytie vrchu implantátu s kolagénovým poréznym povrchom smerom dole k implantovaným chondrocytom a tvoriacim bariéru navrchu. Hybridná kolagénová náplasť, so zvýšeným obsahom aprotinínu, môže tiež byť použitá bez organickej glejoviny, ako je Tisseel^<R), a uložená na poškodenie priamo, prilipnutím prirodzenou silou. Preto môže byť kolagénová náplasť použitá ako hemostatická bariéra a buniek prosté zakrytí opravovaného/transplantovaného miesta, s poréznym povrchom náplastí orientovaným smerom k transplantovaným chondrocytom/chrupke. Iný variant môže použiť kolagénovú náplasť, ktorá sa skladá z kolagénu typu II (ako od Geistlich Sohne AG, CH-6110 Wolhusen)'.

Predložený vynález teda poskytuje hybridnú kolagénovú náplasť, kde je uvedenou náplasťou kolagénová matrica so zvýšenou hladinou obsahu aprotinínu, prednostne okolo 25 000 KTU/ml, v spojení s organickou matricovou glejovinou, kde je kolagénová zložka podobná Bio-Gide(^Rl resorbovateľnému dvojvrstvovému materiálu kolagénu typu II, a organická glejovina je podobná materiálu Tisscel^lR). V inom rozpracovaní nepoužíva hybridná kolagénová náplasť žiadne organické glejoviny na prilepenie na opravované miesto.

Príklad 7

Vzhľadom na oslabenú štruktúru osteoartritickej chrupky môže byť prilipavosť kultivovaných autológnych chondrocytov transplantovaných na vrúbľové miesto poškodenej chrupky obmedzená, tvorí sa marginálna zóna (zóna ohraničenia) medzi novoimplantovanou chrupkou/chondrocytmi a susednou tvorenou chrupkou. Táto marginálna zóna bude najzreteľnejšia, keď je vrúbľovacic miesto pripravené na štep vytvorením rovných hladkých stien vyrezaných v lineárnom tvare. Strižné sily a sily stlačenia cez takú marginálnu zónu (ako je znázornené na obr. 3A) budú uplatňovať veľkú silu na posunutie štepu, keď je miesto štepu rozrezané v lineárnom tvare. Marginálna zóna a rozdielny pohyb materiálov pozdĺž tejto zóny budú inhibovať súbežné liečenie medzi materiálom štepu a okolitým materiálom. Trhanie marginálnej zóny je vyvolávané, pokiaľ je tvrdosť priliehajúceho materiálu rôzna. V mnohých prípadoch je materiál štepu mäkší ako okolitý materiál, ale v niektorých prípadoch osteoartritickej choroby môže byť okolitá chrupka v skutočnosti mäkšia ako implantované chondrocyty/chrupka.

Preto, na vyriešenie tohto problému, uvádza postup podľa vynálezu použitie chirurgických nástrojov na tvarovanie stien miesta štepu tak, že sú steny nelineárne, a takto tvorí zvlnené povrchy, ktoré znižujú trhanie marginálnej zóny a zaisťujú zakotvenie materiálu štepu. Rovnako je možné tvarovať miesto štepu tak, že priemer miesta bližšieho k povrchu kosti má väčší rozmer, ako otvor vzdialenejší od kosti a povrchu chrupky, ktorá sa má opraviť, takže dôjde k efektu „reverzného lievika“. Zúžený otvor na povrchu bráni redukciou trhania marginálnej zóny a vypudenia materiálu štepu z miesta štepu. Výhodné rozpracovanie opisuje tvarovanie stien miesta štepu v tvare podobnom vsunutému otvoru na príjem upevnenia alebo skrutky (ako je znázornené na obr. 3B), a takto poskytuje mechanickú odolnosť proti stlačeniu a/alebo vypudeniu materiálu štepu z miesta štepu, čo je možné opísať ako „mužské“ alebo „ženské“ vsunutie.

Chirurgické nástroje uvažované podľa predloženého vynálezu môžu byť vyrobené z kovu a/alebo plastu vhodného na prípravu chirurgických nástrojov na jedno použitie alebo viacnásobné opätovné použitie. Pretože je chrupka relatívne mäkký materiál, je výhodné vyrábať vytvrdené plastické rezacie okraje, ktoré budú schopné tvarovať chrupku bez toho, že by poškodili kosť. Tieto prerezávacie nástroje môžu byť vyrobené na vytváranie otvorov na podávanie tekutiny, odsávanie odrezaných zlomkov a tekutiny, a vedenie optických vláken na osvetlenie a zviditeľnenie poškodeného miesta. V niektorých rozpracovaniach nástrojov môže mať základ nástroja dopredu vystupujúci bod alebo špendlíku podobnú štruktúru, ktorá napomáha vo vedení a uložení nástroja na miesto štepu. Samozrejme by mal byť taký hrot tvarovaný tak, aby bolo minimálne poškodenie kosti ležiacej pod ním.

Zatiaľ čo vyrezávacím povrchom nástroja môže byť jednotlivý zub, alebo niekoľké zuby, alebo opísaný skrutke podobný vzor, ako je ten v kovovom závitníku použitom na tvorbu závitových otvorov v kovových častiach. Charakteristika požadovaná pre vyrezávací nástroj je taká, aby vytvorené vytvarované miesta boli vlnité, a nie lineárne. V niektorých rozpracovaniach napríklad môžu byť rezacie okraje nástroja tvarované podobne, ako je znázornené na obr. 4A alebo ako je na obr. 4B. Rezacie okraje môžu byť rovné, alebo kruhové tak, že obaľujú vôkol priemer rezacieho nástroja. Môže byť navrhnutých veľa iných tvarov na účely postupu podľa predloženého vynálezu, aby bolo vytvorené rozhranie, ktoré poskytuje mechanickú odolnosť proti rôznym reakciám na stlačenie a pôsobenie strihových síl na transplantovaný materiál a okolitý materiál.

Príklad 8

Štyri mesiace staré prasiatko Yorkshirského plemena bolo podrobené úplnej anestézii a uložené na chrbát. Prasiatko bolo omyté a zakryté na chirurgickej súprave v „Harrington Arthritis Research Center“, vo Phoenixe v Arizone. Celý chirurgický zákrok bol vykonaný aseptický. Ľavá zadná noha a priliehajúce brucho a plocha slabiny boli očistené jódom. Kolenný kĺb bol lokalizovaný, a jabĺčko bolo lokalizované. Stredný rez bol uskutočnený približne 3 cm od posteriomej časti jabĺčka a približne bolo odrezaných niekoľko subkutis, svalových vrstiev a ligamentov, aby sa získal prístup k strednej femorálnej kondyle. Použitím kruhového dláta bola pripravená lézia v bielej chrupke na strednej časti mediálnej kondyly, pri zanechaní 0,5 až 1 cm okraja ku koncu chrupkovitého prekrytia posteriormediálnej časti kondyly (ľavá kondyla, obr. 6A). 0,5 až 1 cm defekt bol umiestnený na kaudálnu hmotnosť nesúcu časť mediálnej kondyly. Celý chirurgický zákrok bol vykonaný bez stlačenia na ľavý femur. Rôzne vrstvy a koža boli príslušným spôsobom zošité.

Tretí deň bolo zviera opäť prenesené na chirurgické miesto a uložené ako prv na chirurgický stôl a uvedené do celkovej anestézie. Ľavá zadná noha, brucho a oblasť slabiny boli ionizované, ako bolo uvedené. Stehy by rozstrihnuté a plocha otvorená. Bolo zaznamenané, že v kolennom kĺbe je prítomný mierny hematóm. Krvná zrazenina bola odstránená a defekt vyšetrený pohľadom. Bola tu krvná zrazenina, ktorá bola odstránená. Sterilný chirurgický nástroj vybavený „mužským“ závitovým rezacím okrajom, s veľkosťou zodpovedajúcou, alebo mierne väčšou, ako je obvod lézie, bol opatrne naskrutkovaný dole na defekt. Vložka z Bio-Gide*’ bola rozrezaná na veľkosť zodpovedajúcej spodnej časti defektu. Prvá použitá glejovina, nazvaná Adhesive Proteín (A-2707, Sigma Chemical, USA) bola nanesená na hustú stranu upravenej vložky hemostatickej bariéry, a vložka bola vložená hustou stranou dole na dno íézie, a použitá ako bariéra, ako je opísané. Bolo pozorované, že glejovina neschne veľmi rýchlo. Mierne krvácanie od spodku defektu sa okamžite zastavilo. Druhý BioGide(R) bol urezaný s o niečo väčším priemerom, ako lézia, a bol vložený hustou stranou navrch (takže porézna strana bola dole smerom k štepu), ako bolo opísané.

Táto nebunková krycia vložka potom bola prišitá na dutinu s ponechaným jedným koncom otvoreným, kade môžu byť chondrocyty, ktoré majú byť implantované, injektované do miesta štepu. Priliehajúce časti ku koncu vložky boli prekryté druhou glejovinou, Dow Coming Medical Adhesive B (Cat.#895-3, Dow Coming, USA). Táto druhá glejovina sa sušila oveľa rýchlejšie a oveľa účinnejšie ako prvá glejovina. Bolo zistené, že počas tohto osobitného postupu nebola prvá glejovina usušená dostatočne na to, aby pri skúške zošitia pokrytia udržala hemostatickú bariéru na mieste. Hlavná bariéra vytvorená na proximálnom povrchu miesta štepu bola glejovinou samotnou.

Použitím 1 ml striekačky a ihly 16 bola bunková suspenzia chondrocytov (okolo 0,6 ml) natiahnutá do zásobníka striekačky. Krátka ihla miery 23 bola prepojená na ihlu miery 16, a bunková suspenzia bola injektovaná pod prišitú kryciu náplasť na mieste štepu (okolo 10 x 10⁶ buniek). Potom bol otvorený kraj vložky prilepený, pred vyberaním ihly, a ihla bola opatrne vytiahnutá. Nebolo pozorované žiadne presakovanie buniek. Rana bola zošitá, žiadny turniket nebol použitý, žiadne krvácanie nebolo pozorované. Konečné kožné vrstvy boli prišité. Po prišití neboli pozorované žiadne protruze kože, čo značí, že tam nebol žiadny hematóm. PostoperaČné vyliečenie bolo bez mimoriadnych udalostí.

Ako sa predpokladalo, transplantované chondrocyty produkovali chrupkovú matricu dostatočnú na to, aby bol opravený defekt vytvorený v artikulámom chrupkovom povrchu kolenného kĺbu testovaného zvieraťa. Obr. 6A je MRI obraz kolena prasiatka, ktorý ukazuje poškodenie chrupky vytvorené v kolene (ľavá kondyla, mediálna kondyla), a obr. 6B je MRI obraz rovnakého kolena prasiatka tri mesiace po liečbe, ktoré ukazuje opravu poškodenia.

Príklad 9

Kit obsahujúci zložky vhodné na realizáciu postupu podľa vynálezu umožní bežné vykonávanie postupu podľa vynálezu v chirurgickom prostredí. Vo výhodnom rozpracovaní poskytuje kit podľa vynálezu sterilné zložky určené na ľahké použitie v chirurgickom prostredí, a poskytne vhodnú hemostatickú bariéru, vhodnú kryciu náplasť a pokiaľ je to nutné, organickú glejovinu. Kit podľa vynálezu môže rovnako poskytnúť sterilný, buniek-prostý matricový materiál, vhodný na podporu autológnych chondrocytov, ktoré majú byť implantované na povrch artikulámeho poškodenia kĺbu. V jednom rozpracovaní obsahuje kit podľa vynálezu hemostatickú bariéru zo Surgicelu^(R) a Bio-Gide^(R) kryciu náplasť s vhodným poťahom organickou glejovinou Tisseel^(R), pričom Surgicel^(K) a Bio-Gide^w boli spracované, v súlade s predloženým vynálezom, na zvýšenie času do resorpcie.

V inom výhodnom rozpracovaní sú hemostatická bariéra aj krycia náplasť obidve semipermeabilná kolagénová matrica, ktorá je spracovaná na predĺženie času do resorpcie materiálu. Rovnako je možné poskytnúť Tisseel^(R)glejovinú vo vylepšenej forme ako samostatnú zložku, ktorá sa aplikuje, ako je potrebné, pretože každý postup opravy/transplantácie má vlastný variant a jedinečné okolnosti postupu.

Ďalšie rozpracovanie kitu podľa vynálezu zahŕňa chirurgický nástroj, ako je opísaný v príklade 7, alebo jeho vhodné varianty.

Od odborníka v danej oblasti techniky je možné očakávať, že navrhne rad variácii a/alebo modifikácií vynálezu, a ukáže v konkrétnych realizáciách bez toho, žc by sa odchýlil z rozsahu vynálezu, ako je opísaný.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Súprava na transplantáciu chondrocytov na povrchu kĺbu, vyznačujúca sa tým, že obsahuje hemostatickú bariéru vopred spracovanú na odolanie resorpcii, na uloženie na uvedený povrch, kryciu náplasť (2) vopred spracovanú na odolanie resorpcii, na prekrytie daného povrchu, a organickú glejovinu, na prilepenie uvedenej hemostatickej bariéry a/alebo uvedenej krycej náplasti na daný povrch.
2. Súprava podľa nároku 1,vyznačujúca sa t ý m , že ďalej obsahuje chirurgický nástroj na tvarovanie stien miesta štepu a matricový materiál vhodný ako nosič chondrocytov.