SK284064B6 - Vodný a lyofilizovaný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov - Google Patents

Vodný a lyofilizovaný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov Download PDF

Info

Publication number
SK284064B6
SK284064B6 SK183-96A SK18396A SK284064B6 SK 284064 B6 SK284064 B6 SK 284064B6 SK 18396 A SK18396 A SK 18396A SK 284064 B6 SK284064 B6 SK 284064B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
ngf
composition
water
pharmaceutical composition
aqueous
Prior art date
Application number
SK183-96A
Other languages
English (en)
Other versions
SK18396A3 (en
Inventor
Victoria M. Knepp
Deborah M. Lidgate
Richard Maskiewicz
Leo Gu
Original Assignee
Syntex (U. S. A.) Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Syntex (U. S. A.) Inc. filed Critical Syntex (U. S. A.) Inc.
Publication of SK18396A3 publication Critical patent/SK18396A3/sk
Publication of SK284064B6 publication Critical patent/SK284064B6/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
    • A61K38/185—Nerve growth factor [NGF]; Brain derived neurotrophic factor [BDNF]; Ciliary neurotrophic factor [CNTF]; Glial derived neurotrophic factor [GDNF]; Neurotrophins, e.g. NT-3
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/02—Inorganic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
    • A61K47/12—Carboxylic acids; Salts or anhydrides thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/827—Proteins from mammals or birds
    • Y10S530/839—Nerves; brain

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Vodný farmaceutický prostriedok obsahuje (a) 0,0001 až 0,125 % hmotn. rastového faktora nervov, (b) až 1,25 % hmotn. nosiča, (c) 0,5 až 1,0 % hmotn. soli, vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku, a (d) pufer v množstve dostatočnom na udržanie pH vodného prostriedku v rozsahu 4,5 až 6,0. Lyofilizáciou sa obsah vlhkosti vodného prostriedku zníži na menej ako 2 %, pričom lyofilizovaný farmaceutický prostriedok obsahuje 0,001 až 1,25 dielov rastového faktora nervov, 30 až 90 dielov cukru a menej ako 1 diel vody. Výhodne tento prostriedok obsahuje biologicky prijateľný vodorozpustný nosič, je v intracerebroventrálnej infúznej forme a používa sa najmä na liečenie Alzheimerovej choroby ľudí.ŕ

Description

Oblasť techniky
Predkladaný vynález sa týka vodného a lyofilizovaného farmaceutického prostriedku rastového faktora nervov vhodného na liečenie neurónových dysfunkcií ľudí, najmä na liečenie Alzheimerovej choroby.
Doterajší stav techniky
Rast alebo život buniek reguluje množstvo polypeptidov a proteínov. Takéto molekuly sa označujú ako „rastové faktory“. Príklady rastových faktorov zahŕňajú epidermálny rastový faktor (epidermal growth factor - EGF), kyslý a zásaditý rastový faktor fibroblastu (acidic and basic fibroblast growth factor - aFGF a bFGF), rastový faktor odvodený od doštičiek (platelet derived growth factor - PDGF), riasinkový neurotrofný faktor (ciliary neurotrophic factor - CNTF) a rastový faktor nervov (NGF). Z nich ako prvý bol identifikovaný a charakterizovaný NGF (Levi-Montalcini, R., a kol. J. Exp. Zool.. 116: 321, 1951).
NGF podporuje prežitie a aktivitu určitých typov neurónových buniek. Navyše NGF podporuje premenu nezrelých neurónových buniek na postmitotické zrelé neuróny.
Čistenie NGF zo žliaz myší spod hornej čeľuste viedlo k identifikácii komplexu, ktorý obsahuje tri podjednotky a, β a γ. Predpokladá sa, že celá neurotropná aktivita NGF sídli v podjednotke β, proteíne, ktorý je zložený zo 118 aminokyselín a má molekulovú hmotnosť 13 000 Da (Varon, S., a kol., Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 57: 1782 -
- 1789, 1967; Greene, L. A., a kol., Neurobiol, 1: 37 - 48, 1971). V roztoku tvorí podjednotka β diméry s molekulovou hmotnosťou 26 500 Da.
NGF bol navrhnutý na liečenie určitých degenerativnych chorôb tak periférneho, ako aj centrálneho nervového systému. Bolo navrhnuté, že podávanie NGF môže byť užitočné pri liečení chorôb, pri ktorých nedostatok NGF, abnormality jeho receptora alebo zmeny v jeho transporte alebo vnútrobunkovom spracovaní vedú k utlmeniu neurónovej funkcie, atrofii alebo dokonca k bunkovej smrti. Takéto choroby zahrnujú dedičnú senzóriu a motorickú neuropatiu, dedičnú a riedko sa vyskytujúcu systemickú degeneráciu, amyotrofnú roztrúsenú sklerózu, Parkinsonovu chorobu a Alzheimerovu chorobu (Goedert, M., a kol., Mol, Brain Res., 1: 85 - 92, 1986, Mobley, W. C. , a kol., Soc. Neurosci Abstr.. 13: 186, 1987, Mobley, W. C, a kol., Soc. Neurosci Abstr., 4: 302, Hefti, F., a kol., Ann Neurol.. 20: 275 - 281, 1986). O NGF sa tiež predpokladá, že znižuje úmrtnosť, neurónových buniek po vystavení určitým toxínom, ako je 6-hydroxydopamín (Aloe. L., Árch. Ital. Biol., 133: 326 - 353, 1975), viniblazín a kolchicín (Menesini-Chem, M. G., a kol., Proc. Natl. Acad. Sci USA, 74: 5559 - 5563, 1977, Johnson, E. M., Brain Res., 141: 105 -
- 118, 1978) a kapsaicín (Otten, U., Náture, 301: 515 - 577, 1983).
Vysoká expresia MGF mRNA v hipokampe, oblasti spojenej s pamäťou a učením, naznačuje, že klinické aplikácie NGF môžu byť účinné pri liečení demencie (Kaisho, Y., a kol., Biochem. Biophys. Res. Comm. 174: 379 - 385, 1991). O intraventrikulámom podávaní NGF bolo referované, že pôsobí ako prevencia smrti bazálnych cholinergných neurónov mozgu po axotómii a naznačuje, že NGF môže byť účinný pri podpore prežitia buniek po zranení. (Hefti, F., J. Neurosci., 6: 2155 - 2162, 1986, Williams, L., a kol., Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 83: 9231 - 9235, 1986, Kromer, L. Science. 235: 214 - 216, 1987).
Použitie NGF na liečenie so sebou nesie nezanedbateľné problémy. Tieto problémy súvisia s 1. udržaním bioaktivity NGF, ktorý môže byť pozmenený počas výroby, čistenia alebo skladovania a 2. podávaním NGF, relatívne veľkej, hydrofílnej molekuly tak, aby dosiahol centrum v takom množstve, aby bol účinný. Bioaktivita NGF, ako aj iných proteínov, závisí od jeho sekundárnej a terciámej štruktúry. Podjednotka NGF má tri interné disulfidické mostíky, o ktorých sa predpokladá, že sú dôležité pre bioaktivitu (Kanaya, E., a kol., Gene, 83: 65 - 74, 1989, Iwane, M., a kol., Biochem. Biophys. Res. Commun. 171: 116 - 122, 1990, Hu, G. L. a Neet, K. E., Gene, 70: 57 - 65, 1988). Navyše v rozsahu v akom proteín denaturuje, sa znižuje účinné množstvo biologicky aktívneho NGF. Preto sa musí integrita proteínu udržať počas výroby a spracovania, rovnako ako počas podávania. Proteíny sú predovšetkým náchylné k degradácii pri zvýšených teplotách.
Nižšie teploty všeobecne znižujú degradáciu proteínu. Napriek tomu je oveľa ekonomickejšie skladovať proteín pri laboratórnej teplote, t. j. pri 25 °C, ako pri teplotách v chladničke, t. j. 4 °C. Preto je žiaduca stabilita prostriedku tak pri laboratórnej teplote, ako aj v chladničke pri 4 °C.
Navyše k problémom so stabilitou, NGF, ako mnohých iných proteínov, sa nešpecifický viaže na povrchy. Táto nešpecifická väzba sa môže prejaviť na mnohých materiáloch ako je sklo a plasty, napríklad polyetylén alebo polypropylén. Tieto materiály môžu mať podobu fľaštičiek, skúmaviek, striekačiek, implantovaných infúznych zariadení alebo akéhokoľvek povrchu, ktorý príde do styku s NGF počas výroby, skladovania alebo podávania.
Ďalším problémom v podávaní proteínov ako je NGF, v podobe terapeutík je slabá absorpcia v tele a degradácia žalúdočnými kyselinami. Orálne podávanie je preto všeobecne nevhodné. Aby sa prekonala táto absorpčná bariéra je nutné podávať tieto proteíny injekčné alebo infuzne.
Injekcie sú vhodné, ak je liečené miesto ľahko dostupné. Napriek tomu, ak je toto miesto relatívne dostupné, ako je CNS, je pre dlhodobú aplikáciu praktickejšia kontinuálna infúzia. Tento spôsob podávania môže byť z dôvodov rôznych komplikácií nepraktický. Napríklad kontinuálna infúzia sa dá uskutočniť implantáciou NGF pumpou do mozgu, ale dlhodobé vystavenie proteínov telesnej teplote často spôsobuje degradáciu proteínu. Tiež môže dôjsť k strate z dôvodu adsorpcie proteínu v komôrke pumpy.
Navyše k problémom spojeným s podávaním NGF sú tiež pridružené problémy spojené s dlhodobým skladovaním od výroby do podania. Lyofilizácia je spôsob dlhodobého skladovania biologických proteínov, ktorým hrozí degradácia, agregácia a/alebo nešpecifická adsorpcia. Napriek tomu lyofilizácia predstavuje problémy. Ako sa počas mrznutia zníži objem kvapaliny, efektívna koncentrácia soli dramaticky vzrastie, čo môže viesť k denaturácii proteínu a zníženiu účinnej farmaceutickej aktivity po rekonštrukcii. Navyše môže denaturáciu spôsobiť tvorba kryštálov ľadu a vďaka tomu tiež znížiť účinné množstvo dostupného bioaktivneho NGF. Prostriedok musí byť teda taký, aby sa zamedzila koncentračná fluktuácia soli a minimalizovala sa tvorba kryštálov ľadu.
Jedným z predmetov predkladaného vynálezu je poskytnutie vodných farmaceutických prostriedkov NGF, ktoré si udržiavajú bioaktivitu aspoň počas jedného mesiaca pri teplote 4 až 40 °C.
Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie prostriedkov NGF, ktoré si udržujú bioaktivitu po lyofilizácii a rekonštitúcii.
Ďalším predmetom predkladaného vynálezu je poskytnutie spôsobov skladovania biologicky aktívnych NGF v roztoku.
Podstata vynálezu
Podstatou vynálezu je vodný a lyofilizovaný farmaceutický prostriedok, ktorý sa môže skladovať pri teplotách, ktoré sú nižšie, rovnaké alebo vyššie ako laboratórna teplota, bez toho, aby došlo k podstatnej strate množstva alebo aktivity proteínu.
Vodný farmaceutický prostriedok podľa vynálezu obsahuje
a) rastový faktor nervov,
b) biologicky prijateľnú soľ v množstve na dosiahnutie izotonicity,
c) pufer na udržanie pH prostriedku v rozsahu 4,5 až 6,0 a
d) vodu, s podmienkou, že uvedený prostriedok neobsahuje vo vode rozpustný celulózový polymér alebo vo vode rozpustný polysacharid a ďalej obsahuje biologicky prijateľný vo vode rozpustný nosič.
Tento prostriedok obsahuje
a) 0,0001 až 0,125 % hmotn. rastového faktora nervov vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku,
b) 0,1 až 1,25 % hmotn. nosiča vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku,
c) 0,5 až 1,0 % hmotn. soli vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku,
d) pufer v množstve dostatočnom na udržanie pH vodného prostriedku v rozsahu 4,5 až 6,0.
Výhodne prostriedok podľa vynálezu obsahuje 10 až 500 g rastového faktora nervov, 5 mg/ml ľudského krvného albumínu, 8,7 mg/ml chloridu sodného, 2,1 mg/ml kyseliny citrónovej a vodu a pH prostriedku je upravené na 5,2.
Ďalším predmetom vynálezu je vodný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov vhodný na lyofilizáciu, ktorý obsahuje
a) 1 až 1250 pg/ml rastového faktora nervov,
b) 30 až 90 mg/ml biologicky prijateľného napučiavacieho činidla,
c) pufer v množstve dostatočnom na udržanie pH vodného prostriedku v rozsahu 5,5 až 6,0 a
d) vodu, s podmienkou, že uvedený prostriedok neobsahuje vo vode rozpustný celulózový polymér alebo vo vode rozpustný polysacharid.
Výhodne prostriedok obsahuje 1 až 1250 pg/ml rastového faktora nervov a 30 až 90 mg/ml napučiavacieho činidla, ktorým je cukor, najmä zmes sacharózy a manitolu, pufrom je citrátový pufer a pH prostriedku je 5,8 až 6,2. Lyofílizáciou sa obsah vlhkosti uvedeného prostriedku zníži na menej ako 2 % a takýto lyofilizovaný farmaceutický prostriedok obsahuje 0,001 až 1,25 dielov rastového faktora nervov, 30 až 90 dielov cukru a menej ako 1 diel vody, ako aj biologicky prijateľný vo vode rozpustný nosič.
Vodný farmaceutický prostriedok sa používa na liečenie neurónových dysfunkcií ľudí, je v intracerebroventrálnej infúznej forme a používa sa najmä na liečenie Alzheimerovej choroby ľudí.
Rozvoj stabilných, parenterálnych dávkovacích foriem NGF vyžaduje zhodnotenie mnohých faktorov, vrátane spôsobu podávania, adsorpčných interakcii a kompatibility so spracovacím zariadením a potencionálnych prostriedkov na podávanie. Ďalšou skutočnosťou, ktorú je potrebné vziať do úvahy, je stabilita NGF vo vodnom prostriedku pri tep lotách nižších, rovnakých alebo vyšších ako je laboratórna teplota. Jedným z príkladov podľa predkladaného vynálezu je prostriedok NGF vo vodnom roztoku, ktorý má stabilitu v určitom rozsahu teplôt a najmä teplôt zvýšených (aspoň 40 °C). Tento prostriedok je zložený z vodného roztoku NGF, soli a pufra, ktorý má pH 4,5 až 6,0. Prostriedok môže ďalej nepovinne obsahovať nosič. Kombinácia zložiek prekvapivo poskytuje roztoku veľmi priaznivé charakteristiky, najmä pokiaľ ide o stabilitu pri zvýšených teplotách. Tiež zaručuje, že prostriedok NGF je vhodný na lyofilizáciu. Predkladaný vynález tiež opisuje spôsoby skladovania NGF.
Tak ako sa používa v predkladanom vynáleze, znamená „biologicky prijateľný“ materiály, ktoré sú charakteristické tým, že nemajú in vivo nepriaznivý vplyv. „Laboratórna teplota“ je 22 °C až 25 °C. „Telesná teplota“ je 36 °C až 40 °C. „Lyofilizovateľný prostriedok“ znamená vodný prostriedok NGF, ktorý sa dá lyofilizovať tak, že obsah vlhkosti je nižší ako 2 % a po rekonštrukcii si NGF udrží prinajmenšom 70 % východiskovej bioaktivity. „Izotonický“ znamená roztok, ktorý má rovnaký osmotický tlak ako krvné sérum, 300 milimólov na liter. „Nosič“ je biologicky prijateľný emulgátor, dispergačný prostriedok, povrchovo aktívna látky alebo proteín, ktorý zníži adsorpciu NGF na povrchu.
„NGF“ označuje akúkoľvek formu rastového faktora nervov, výhodne podjednotku rastového faktora nervov, ktorý má biologickú aktivitu a viaže sa na NGF receptory. Termín NGF tiež zahrnuje hybridizované a modifikované formy NGF, ktoré sa viažu k NGF receptorom a udržujú si bioaktivitu NGF. Modifikované formy NGF môžu tiež zahrnovať spojené proteíny, ako sú tie, ktoré sú opísané v prácach Iwai, S., a kol., Chem. Pharm. Bull., 34: 4724 4730, 1986 a Kanaya, E., a kol., Gene, 83: 65 - 74, 1989 a NGF fragmenty a hybridy, v ktorých sú určité aminokyseliny odstránené alebo nahradené pri udržaní dostatočnej bioaktivity NGF a väzby k receptorom, aby sa zaručila terapeutická aktivita.
Preferovaná forma NGF je ľudský NGF (human NGF - hNGF). Najpreferovanejšiou formou hNGF je rekombinantný hNGF (rhNGF). Spôsoby získania NGF vhodného na použitie v prostriedkoch podľa predkladaného vynálezu sú osobám vzdelaným v danej problematike známe. Napríklad vhodný rhNGF môže byť produkovaný baculovírusovým expresným systémom (Bamett, J., a kol., Exp. Neurol., 110: 11 - 24, 1990, EPO 370,171), kvasnicovým expresným systémom (Kanaya, E., a kol., Gene, 83: 65 - 74, 1989), expresným systémom buniek cicavcov (mammalian celí - CHO) (Iwane, M., a kol., Biochem. Biophys. Res. Comm.. 171: 116 - 122, 1990) alebo COS expresným systémom (Bruce, G., a kol., Neurobiol. Aging, 10: 89 - 94, 1989). NGF by mal byť prinajmenšom z 65 % čistý, výhodne prinajmenšom z 85 % čistý, výhodnejšie z 95 % čistý a najvýhodnejšie prinajmenšom z 98 % čistý. Čistota izolovaného NGF, ktorý je určený na použitie v prostriedkoch podľa predkladaného vynálezu, sa dá stanoviť striebrom farbenou SDS-PAGE alebo inými prostriedkami, ktoré sú osobám vzdelaným v danej problematike známe.
Opisované vodné prostriedky NGF obsahujú NGF v terapeuticky účinných množstvách. Výhodne tvorí NGF 0,0001 až 0,125 % hmotnostných vodného prostriedku, čo zodpovedá 1 až 1250 g/ml. Výhodnejšie tvorí NGF 0,001 až 0,10 % hmotnostných (10 až 1000 g/ml) vodného prostriedku. Ešte výhodnejšie tvorí NGF 0,01 až 0,10 % (100 až 1000 g/ml) hmotnostných vodného prostriedku.
Najvýhodnejšie tvorí NGF 0,01 až 0,05 % hmotnostných (100 až 500 g/ml) vodného prostriedku.
Vodné prostriedky NGF nepovinne obsahujú nosiče. Prítomnosti nosiča v prostriedku znižuje alebo zamedzuje adsorpcíu NGF na rôzne povrchy. Potreba nosiča závisí od koncentrácie NGF vo vodnom prostriedku. Pri dostatočne vysokej (vyššej ako 500 g/ml) koncentrácii NGF zostane v roztoku dostatok NGF, aby vyrovnal stratu spôsobenú povrchovou adsorpciou. Vhodný nosič zahrnuje, ale týmto vymenovaním nie je nijako obmedzený, polysorbáty ako je TweenR 80, poloxaméry ako je PluronicR F68 a proteíny ako sérum albumín. Preferovaný nosič jc proteín. Ľudský krvný albumín (human sérum albumín - HSA) je preferovaný najviac. Hmotnostný pomer NGF k nosiču je 0,0001 : : 1 až 1 : 1. Preferovanejší pomer je 0,01 : 1 až 0,5 : 1. Ak sa ako nosič použije HSA, preferovaná koncentrácia HSA je 0,1 až 1,25 % hmotnostných (t. j. až 12,5 mg/ml) vodného prostriedku. Preferovaný prostriedok obsahuje 0,3 až 0,7 % HSA hmotnosti vodného prostriedku, výhodnejšie 0,4 až 0,6 % HSA hmotnosti vodného prostriedku. Najpreferovanejší prostriedok obsahuje 0,5 % (t. j. 5 mg/ml) HSA hmotnosti vodného prostriedku.
Prostriedky NGF tiež obsahujú dostatočné množstvo biologicky prijateľnej soli, aby sa udržala izotonicita kvapaliny. Soľ tiež pôsobí tak, že udržuje NGF v roztoku. Výhodne obsahuje prostriedok NGF množstvo soli, ktoré je dostačujúce na to, aby bol izotonický, vo fyziologicky prijateľných medziach, s ľudskou krvou alebo mozgovomiechovým mokom. Preferovaná soľ je chlorid sodný (NaCl), ale dajú sa použiť aj iné fyziologicky prijateľné soli ako je chlorid draselný (KC1), chlorid vápenatý (CaCl2) a chlorid horečnatý (MgCl2). Soľ môže byť buď jediná, alebo kombinácia solí. Preferovaný prostriedok obsahuje 0,5 až 1,0 % (t. j. 5 až 10 mg/ml) soli z celkovej hmotnosti vodného prostriedku. Preferovanejší prostriedok obsahuje 0,6 až 0,9 % soli z celkovej hmotnosti vodného prostriedku. Výhodnejšie prostriedok obsahuje 0,7 % až 0,9 % soli z celkovej hmotnosti vodného roztoku. Najvýhodnejšie prostriedok obsahuje 0,87 % (t. j. 8,7 mg/ml) soli z celkovej hmotnosti vodného prostriedku.
Prostriedok NGF ďalej obsahuje biologicky prijateľný pufer, ktorý udržuje pH počas skladovania. Zistili sme, že NGF je stabilnejší pri nízkom pH. Preferovaný stabilný prostriedok nGF je pufŕovaný biologicky prijateľným pufrom na pH 4,5 až 6,0 a výhodnejšie na 5,0 až 5,4. Najpreferovanejšie pH prostriedku je 5,2. Preferovaný pufer je kyselina citrónová, ale aj iné pufŕe schopné udržať pH v požadovanom rozsahu sú použiteľné. Iné vhodné pufŕe zahrnujú kyselinu octovú/octan a kyselinu maleínovú/maleát. Preferované množstvo pufra sa mení v závislosti od typu použitého pufra a jeho pufŕačnej kapacity. Pufer by mal byť v prostriedku obsiahnutý v množstve, ktoré je dostačujúce na udržanie výsledného pH prostriedku v preferovanom rozsahu pH. Preferovaná koncentrácia pufra na stabilizáciu prostriedku NGF je 0,01 až 0,3 % hmotnostných vodného prostriedku (0,1 až 0,3 mg/ml), najpreferovanejšia je koncentrácia 0,1 až 0,25 % pufra z celkovej hmotnosti vodného roztoku prostriedku (1,0 až 2,5 mg/ml), a napreferovanejšia koncentrácia pufra je 0,2 % pufra z celkovej hmotnosti vodného prostriedku (2,0 gm/ml).
Prostriedok obsahuje vodu v množstve dostatočnom na dosiahnutie vhodnej koncentrácie zložiek prostriedku.
Preferované stabilné prostriedky NGF sú zložené z 1 až 1250 g/ml HSA, 5 až 10 mg/ml NaCl, 0,2 až 3,0 mg/ml kyseliny citrónovej a vody, kedy pH prostriedku je upravené na 4,5 až 6,0, výhodnejšie 5,0 až 5,4. Najpreferovanejšic stabilné prostriedky NGF obsahujú 10 až 500 g/ml NGF, 5 mg/ml HSA, 8,7 mg/ml NaCl, 2,1 mg/ml kyseliny citrónovej a vodu, kedy pH prostriedku je upravené na 5,2.
Lyofilizované prostriedky podľa predkladaného vynálezu sú predovšetkým použiteľné pri dlhodobom skladovaní NGF, najmä pri zvýšených teplotách. Lyofilizované prostriedky podľa predkladaného vynálezu obsahujú NGF, biologicky prijateľné plnidlá, pufer, ktorý upravuje pH prostriedku na 5,5 až 6,5, nepovinne biologicky prijateľnú soľ, nepovinne biologicky prijateľný, vodorozpustný nosič a vodu.
NGF je v lyofilizovaných prostriedkoch prítomný v rovnakom koncentračnom rozsahu ako vo vodných prostriedkoch. Plnidlo všeobecne poskytuje mechanickú podporu tým, že poskytuje matricu, ktorá udržuje svoju konformáciu počas a po lyofilizácii. Ako plnidlo sa dá použiť jeden alebo viacero druhov cukrov. Cukry tak, ako sa tento výraz používa v predkladanom vynáleze, zahrnujú, ale nie sú týmto vymenovaním nijako obmedzené, monosacharidy, oligosacharidy a polysacharidy. Príklady vhodných cukrov zahrnujú, ale nie sú týmto vymenúvaním nijako obmedzené, fruktózu, glukózu, manózu, sorbózu, xylózu, maltózu, sacharózu a dextrán. Pojem cukry tiež zahrnuje cukomé polyoly ako je manitol, sorbitol, inozitol, dulcitol, xylitol a arabitol. Podľa predkladaného vynálezu sa dajú tiež použiť: zmesi cukrov.
Preferované plnidlo zahrnuje kombináciu cukrov. Preferované plnidlo je zmes sacharózy a manitolu. Bez väzby na nejakú teóriu sa predpokladá, že sacharóza tvorí po zmrazení a následnej lyofilizácii amorfné sklo a poskytuje zlepšenie potenciálnej stability proteínu (napr. prevencie agregácie) tým, že tvorí molekulárnu disperziu NGF v pevnom skle. Stabilita sa tiež môže zlepšiť vďaka tomu, že cukor pôsobí ako náhrada za vodu stratenú počas lyofilizácie. Molekuly cukru sa skôr ako voda viažu k proteínu vodíkovými väzbami, manitol, keď sa zmieša v pomere 1 : 1 hmotnostné so sacharózou (ktorá má teplotu skleného prechodu -36 °C), zvýši teplotu skleného prechodu o 5 °C na -31 °C. To značne skráti čas sušenia prostriedku počas lyofilizácie, ale ešte uchová amorfnú sklenú matricu prostriedku a preto sa pokladá za výhodu najmä pri väčšom rozsahu výroby. Iné plnidlá, ktoré majú uvedené charakteristiky, môžu nahradiť jeden alebo obidva tieto cukry.
Prostriedky podľa predkladaného vynálezu, ktoré sa lyofilizujú, majú výhodne vyššie pH ako prostriedky, ktoré sa nelyofilizujú alebo sa rekonštituujú. Plnidlá (cukry), ktoré sú prítomné v lyofilizovaných prostriedkoch podľa predkladaného vynálezu, sú všeobecne oveľa stabilnejšie pri vyššom pH. Výhodne je pH prostriedku pred lyofilizáciou
5,5 až 6,5. Výhodnejšie je pH lyofilizovaného prostriedku NGF 5,8 až 6,2. pH najpreferovanejšieho lyofilizovateľného prostriedku NGF je 6,0. Ak sa ako plnidlo použije sacharóza, preferované pH lyofilizovateľného prostriedku je 6,0, pretože sa pri kyslom pH sacharóza neredukujúca disacharid, hydrolyzuje na redukujúce cukry D-fruktózu a D-glukózu. Citrátový pufer je najpreferovanejší pufer pre lyofilizovateľné prostriedky, ale dajú sa použiť aj iné biologicky prijateľné pufŕe, ako je maleátový. Preferovane sú inc pufŕe ako acetátový, pretože kyselina octová má snahu sa odparovať počas lyofilizácie. Môže byť nevyhnutné upraviť kyselinou alebo bázou výsledné pH. Akákoľvek strata dlhodobej stability vodného NGF z dôvodu vyššieho pH ako je 6,0 sa pravdepodobne prekoná zvýšením stability, ku ktorej dôjde po lyofilizácii NGF.
V ideálnom prípade sa pri výbere pufra počíta s prípadnými zmenami pH pri lyofilizácii, ktoré sú spôsobené postupnou kryštalizáciou zložiek pufra. Napríklad pokiaľ ide o fosfátové pufre, má bázická zložka vyšší eutektický bod ako kyslá zložka, ktorá preto vykryštalizuje prvá a pH sa zmení. Preferovaný je citrátový pufer, pretože sa predpo klada, že obidve zložky pufra majú rovnaké eutektické body, čo vedie k veľmi malej zmene pH pri poklese teploty. Iné vhodné pufre by mali mať zložky s rovnakými alebo podobnými eutektickými bodmi.
Lyofilizovateľné prostriedky tiež nepovinne obsahujú biologicky prijateľné soli. Soli, ktoré sa dajú vybrať z rovnakej skupiny ako soli pre vodné prostriedky, sú v lyofilizovateľnom prostriedku prítomné v rovnakej alebo nižšej koncentrácii ako vo vodných prostriedkoch. Pretože koncentrácia solí môže počas lyofilizácie vzrastať, je žiaduce znížiť koncentráciu soli prítomnej v lyofilizovateľných prostriedkoch, aby sa zabránilo denaturácii proteínu. Zníženie koncentrácie soli v lyofilizovateľnom prostriedku sa môže kompenzovať počas rekonštitúcie tak, že výsledný prostriedok je dostatočne izotonický, aby bol vhodný na podávanie liečenému pacientovi.
Nepovinne obsahujú lyofilizovateľné prostriedky biologicky prijateľný vodorozpustný nosič. Koncentrácia nosičov môže byť, pokiaľ ide o lyofilizované prostriedky podľa predkladaného vynálezu, rovnaká ako tých, ktoré sú vhodné na použitie do vodných prostriedkov podľa predkladaného vynálezu.
Preferované lyofilizovateľné prostriedky obsahujú 1 až 1250 g/ml NGF, 15 až 45 mg/ml sacharózy, 15 až 45 mg/ml manitolu, nepovinne 7 až 9 mg/ml NaCl a 0,1 až 0,7 mg/ml kyseliny citrónovej pri pH 5,6 až 6,5. Najpreferovanejšie lyofilizovateľné prostriedky NGF obsahujú 100 až 1250 g/ml NGF, 30 mg/ml sacharózy, 30 mg/ml manitolu, 5 mg/ml ľudského krvného albumínu, nepovinne 8,7 mg/ml NaCl a 0,3 mg/ml kyseliny citrónovej. Najpreferovanejšie pH lyofílizovateľného prostriedku je 6,0.
Lyofilizovateľné prostriedky podľa predkladaného vynálezu sa lyofilizujú na obsah zvyškovej vlhkosti nižší ako 2 %, no napriek tomu, prostriedky, ktoré uchovávajú biologickú aktivitu NGF pri vyššom alebo nižšom obsahu vlhkosti, tiež spadajú do rámca predkladaného vynálezu. Preferované lyofilizované prostriedky obsahujú 0,001 až 1,25 dielov rastového faktora nervov, 30 až 90 dielov cukru a menej ako 1 diel vody.
Lyofílizovaný prostriedok NGF sa rekonštituuje rozpúšťadlom, ktoré obsahuje pufer, ako je citrátový pufer, a soľ, ako je chlorid sodný, ktorý je vyžadovaný, aby výsledný rekonštituovaný prostriedok bol podobný kvapalnému vodnému prostriedku, t. j. 1 až 1250 g/ml NGF, 1 až
12,5 mg/ml HSA, 5 až 10 mg/ml NaCl, 0,2 až 0,3 mg/ml kyseliny citrónovej, 1,5 až 30 mg/ml sacharózy a 1,5 až 30 mg/ml manitolu, pH 5,2.
Lyofílizovaný prostriedok podľa predkladaného vynálezu sa dá tiež použiť ako súčasť súpravy, ktorá predstavuje ľahký a ekonomický spôsob ako uchovávať stabilný lyofilizovaný NGF vo forme, ktorá sa dá ľahko a rýchlo rekonštruovať vehikulom na podávanie pacientovi, ktorý liečbu potrebuje. Okrem lyofílizovaného prostriedku NGF obsahujú súpravy podľa predkladaného vynálezu tiež rekonštitučné vehikulum. Rekonštitučné vehikulum je zložené zo sterilnej vody a množstva soli, ktoré je dostatočné na to, aby bol výsledný rekonštituovaný prostriedok izotonický. Rekonštitučné vehikulum môže ďalej obsahovať pufer. Celkové množstvo rekonštitučného vehikula, ktoré je prítomné v súprave, by malo byť dostatočné na to, aby bola výsledná koncentrácia NGF vhodná na podávanie pacientovi, ktorý liečbu potrebuje. V preferovanom príklade podľa predkladaného vynálezu obsahuje súprava dve fľaštičky. Jedna fľaštička obsahuje sterilný lyofílizovaný prostriedok NGF podľa predkladaného vynálezu a druhá fľaštička obsahuje sterilné rekonštitučné vehikulum. Pri použití súpravy sa vhodné množstvo rekonštitučného vehikula prevedie do fľaštičky, ktorá obsahuje lyofílizovaný prostriedok NGF. Po rozpustení lyofílizovaného prostriedku môže byť rekonšituovaný prostriedok ihneď podávaný pacientovi.
Z dôvodu dlhodobej stability rekonštituovaného prostriedku podľa predkladaného vynálezu je tiež možné pripraviť dostatok rekonštituovaného prostriedku na niekoľko dávok.
Prostriedky podľa predkladaného vynálezu sa dajú použiť na liečenie jedincov, ktorí trpia stavmi liečiteľnými pomocou NGF terapie. Obvykle sú takéto prostriedky sterilné a vhodné na intravenózne, intramuskuláme, parenterálne alebo intracerebroventrikuláme. Takáto liečba je použiteľná na liečenie neurónových dysfunkcií vrátane neurónových poškodení alebo degenerácie neurónov zodpovedajúcej NGF. NGF môže byť predovšetkým použiteľná na liečenie chorôb spôsobených stratou centrálnych cholinergných neurónov ako je Alzheimerova choroba.
NGF vo vzťahu k liečeniu Alzheimerovej choroby a iných foriem demencie j e opísané v EP 0 3 70 171. Prostriedky podľa predkladaného vynálezu na liečenie demencie sa dajú podávať akoukoľvek z mnohých ciest v závislosti od konkrétneho koncového užitia. Najvhodnejší spôsob závisí od použitia a liečeného subjektu.
Aby sa prekonali problémy spôsobené hematocerebrálnou bariérou, NGF sa dajú podávať do CNS priamymi intraventikulámymi injekciami alebo liekmi naplnenými implantátom alebo pumpou. Iným spôsobom podávania je kontinuálna infúzia intracerebroventrikulámou kanylou. Pripadne môže konjugát NGF s molekulou nosiča, ako je transferín, prechádzať hematocerebrálnou bariérou.
Terapeuticky účinné množstvo NGF je 0,001 až 0,5 mg denne, výhodne 0,01 až 0,10 mg denne, najvýhodnejšie 0,02 až 0,06 mg denne. Presná dávka a režim podávania bude závisieť od mnohých faktorov ako je spôsob podávania a stupeň postihnutia osoby, ktorá sa lieči.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Testovacie postupy
Identifikácia a množstvo NGF stanovené pomocou HPLC na reverznej fáze
NGF bol identifikovaný a kvantifikovaný analýzou vzoriek s objemom 1 na HPLC (Hewlett Packard HP 1090 Liquid Chromatograph) na reverznej fáze, na 4 - 6 mm x x 25 cm L Dynamax (Rainin Inštrument Co. Wobum, MA, USA) 300 5 m analytickej kolóne s reverznou fázou s predkolónkou Dynamax 300 5 m 4,6 mm x 1,5 cm a UV detektorom s diódovým lúčom pri 220 nm. Mobilné fázy boli (A) 0,1 % kyseliny trifluóroctovej a (B) 0,1 % kyseliny trifluóroctovej v acetonitrile s gradientmi, ktoré sa menia od 25 % (B) do 60 % (B) počas 45 minút pri prietoku 0,5 ml/min. a tlaku 11,7 až 13,8 MPa (1700 až 2000 psi) pri laboratórnej teplote.
Identifikácia NGF bola založená na porovnávaní retenčného času vo vzorke s retenčným časom čerstvo pripravenej kalibrovanej štandardnej vzorky NGF vo vzorke, ktorá bola vyrobená z NGF z rovnakej šarže. Množstvo NGF vzorky sa vypočítalo porovnávaním so štandardnou krivkou, ktorá s získala postupným riedením vzorky so známou koncentráciou.
Stanovenie koncentrácie NGF (g/ml) pomocou testu ELISA Koncentrácie NGF boli tiež stanovované pomocou testu ELISA. Tak štandardy, ako aj vzorky sa analyzovali po tretinách. Každá doštička obsahovala kompletnú štandardnú krivku NGF a referenčný slepý pokus bez NGF.
Do každej z 96 jamiek mikrotitračnej doštičky sa pridalo 100 1 protilátky (myšacej monoklonálnej 24C1 proti rhNGF), každá doštička bola zabalená Saranovým obalom s vlhkým papierovým obrúskom a inkubovaná cez noc v chladničke pri 2 až 8 °C. Jamky sa vyprázdnili, trikrát premyli pomocou Wheatonovej samolepiacej súpravy striekačiek, ktorá dopraví do každej jamky 250 1 premývacieho pufra (ktorý obsahuje 500 mM Tris, 2 M chlorid sodný a je pufrovaný na pH 7) a nechali sa uschnutí. Potom sa pridalo 200 1 blokovacieho pufra (1 % roztok hovädzieho krvného albumínu) do každej jamky, aby sa blokovali nešpecifické centrá, do každej jamky sa pridalo 50 1 vzorky a doštičky sa inkubovali minimálne počas 1 hodiny pri laboratórnej teplote pri miešaní na trepačke doštičiek. Jamky sa opäť vyprázdnili, nechali uschnúť a pridalo sa 50 1 štandardných a vzorkových roztokov. Doštičky sa potom prikryli a inkubovali počas 2 hodín pri laboratórnej teplote. Jamky sa opäť vyprázdnili, štyrikrát premyli pufrom a nechali uschnúť. Do každej jamky sa pridalo päťdesiat (50) 1 biotynylovej protilátky (myšacej monoklonálnej 8C1 proti rhNGF), doštičky sa prikryli a inkubovali počas 2 hodín. Jamky sa vyprázdnili, premyli a nechali uschnúť podľa opísaného postupu a do každej jamky sa pridalo 501 streptavidínu konjugovaného s chrenovou peroxidázou. Doštičky sa prikryli a inkubovali počas 20 minút pri laboratórnej teplote pri miešaní na trepačke doštičiek. Doštičky sa päťkrát premyli premývacim pufrom. Po pridaní 50 1 ortofenyléndiamínového (OPD) substrátového pufra sa doštičky prikryli a inkubovali počas 1 hodiny v tme.
Na stanovenie absorbancie v každej jamke sa použil Vmax Kinetic Microplate (Molecular Devices, Mountain View) odčítač. Pre každú jamku bola odčítaná základná absorbancia pri 650 nm od vrcholovej absorbancie pri 450 nm, čím sa získala čistá absorbancia. Koncentrácia NGF vo vzorke bola stanovená porovnávaním so štandardnou krivkou NGF.
Stanovenie aktivity NGF
Bioaktivita NGF bola stanovená PC-12 biostanovením. PC-12 biostanovenie je založené na zvýšení metabolickej aktivity PC-12 feochromocytových buniek (Greene, Trends Neurosci. 7: 91, 1986) po vystavení pôsobeniu NGF. Metabolická aktivita buniek PC-12 bola meraná zvýšeným bunkovým príjmom 3-[4,5-dimetyltiazol-2-yl]-2,5-difenyltetrazólium bromidu (CigHiíNjBr) (MTT), ktorý je bunkovou dehydrogenázou prevádzaný na nerozpustné, vnútri bunky modré, kryštály.
Každá jamka na mikrotitračnej doštičke s 96 jamkami obsahovala okolo 30 000 buniek PC-12 v 50 1 média RPMI-1640 (Sigma). Postupným riedením vzorky a štandardov boli pripravené roztoky 0,006 až 400 ng rhNGF na ml v RPMI-1640 s 0,2 % hovädzieho krvného albumínu (BSA). Do každej jamky bolo pridaných 50 1 každého roztoku tak, že sa získali koncentrácie 0,003 až 200 ng NGF na ml a každá koncentrácia bola testovaná trikrát. Po 2 dňoch pri 37 °C v atmosfére 5 % CO2 bolo pridaných 10 g MTT do každej jamky a doštičky sa inkubovali počas ďalších štyroch hodín. Bol pridaný jeden objem 20 % v 50 % dimetylformamide (DMF) s pH 4,7, doštičky boli obalené celofánom, uzatvorené v plastikovom obale a inkubovanc cez noc pri 37 °C. Doštičky boli odčítané ďalší deň pomocou Vmax odčítača pri 575 nm. Pomer ED50 vzorkovej krivky k ED50 štandardnej krivke poskytne relatívny potenciál preparátov.
Príklad 1
Prostriedok NGF
Vodné prostriedky, ktoré obsahovali 1,10, 100 a 1000 g/ml rhNGF, 5 mg/ml HSA, 8,7 mg/ml chloridu sodného a 2,1 mg/ml kyseliny citrónovej a vodu v množstve, ktoré je dostatočné na to, aby sa pripravilo 10 ml roztoku pufrovaného na pH 5,2. Kyselina citrónová a soľ sa rozpustila v 70 % celkového objemu vody, pH sa upravilo pomocou NaOH/HCl a pri miernom miešaní sa pridal HSA a NGF spolu so zvyškom vody do celkového objemu a prostriedok sa filtroval cez 0,2 Millipore Millex-GV filter.
Expresia rhNGF použitého na prípravu prostriedkov prebehla v hmyzích bunkách pomocou baculovírusového expresného vektora a rhNGF sa čistil iónovo výmennou chromatografiou a chromatografiou na reverznej fáze ako je opísané v práci Bemett, J., a kol., Exp. Neurol., 110: 11 -24, 1990.
Príklad 2
Stabilita prostriedkov NGF pri 5 °C a 25 °C
250 1 alikvoty zo 100 g/ml NGF prostriedku z príkladu 1 sa skladovali pri 5 °C a 25 °C (lab. teplota) v polyetylénových liekovkách počas 6 mesiacov. HPLC na reverznej fáze (reverse phase HPLC - RP-HPLC), ELISA a biostanovenie (opísané vyššie) vzoriek nepreukázali žiadnu sfratu proteínu po 6 mesiacoch (tabuľka 1).
Tabuľka 1
Stabilita NGF pri 5 °C a 25 °C meraná RP-HPLC, ELISA a PC-21 biostanovením
teplota pri skladovaní Í°C) 5 lab, t. !22 až
RP-HPLC US* 1 týždeň 99 2 99 2
RP-HPLC %LS* 2 týždeň 99 6 91 5
RP-HPLC %LS* i týždeň 96 4 95 5
RP-HPLC US* 4. týždeň 100 3 103 3
RP-HPLC US* 6 týždeň 1C1 3 99 5
ELISA US* ej mesiacov 103 6 104 13
relatívny potenciál
stanovený biostanovením LC6 14 123 3
INGTJ testu ' 1LS - % label strength - —————— [NGF] kontroly aktivita testu % relatívneho potenciálu ------—----aktivita kontroly (Hodnoty RP-HPLC predstavujú priemer štandardná odchýlka 2 až 4 stanovení. Hodnoty biostanovenia predstavujú priemer 95 % intervalu spoľahlivosti 3 stanovení).
Príklad 3
Stabilita rôznych prostriedkov NGF skladovaných v polyetylénových katétroch pri 37 °C.
250 1 alikvoty NGF prostriedkov, ktoré obsahovali 1 až 1000 g/ml rhNGF získanej pomocou postupu opísaného v príklade 1 sa skladovali v priesvitnom polyetylénovom katétri (vnútorný priemer 0,030 palca (7,62 mm) a vonkajší priemer 0,048 palca (12,2 mm)) pri 37 °C počas 4 týždňov. Výsledky, ako sú ukázané v tabuľke 2, ukazujú, že nedošlo k zreteľnej strate obsahu proteínu (ako bolo stanovené RP-HPLC) ani NGF aktivity (ako bolo stanovené PC-12 biostanovením).
Tabuľka 2
Stabilita NGF prostriedkov v polyetylénových katétroch pri °C meraná RP-HPLC a PC-12 biostanovením ítiGFl v SLSčase 0 po 1 týždni ( g/ml) stanovené
RP-HPLC
HS* pc 2 týždňoch stanovené
RP-HPLC jLS* % relatívneho po 4 týždňoch potenciálu pc stanovené 4 týždňoch
RP-HPLC otanovené
PC-12 pomocou biostanovenia
104 3 87 6
94 14 92 4
100 102 4
3 10134
1CC L 11845
2 12934
1000 .107
4
3
108 3 3 [NGF] testu * %LS = % label strength « --------------[NGF] kontroly aktivita cestu % relatívneho potenciálu = --aktivita kontroly (Hodnoty RP-HPLC predstavujú priemer štandardná odchýlka 2 až 4 stanovení. Hodnoty biostanovenia predstavujú priemer 95% intervalu spoľahlivosti 3 stanovení).
Príklad 4
Stabilita prostriedku NGF v rôznych prostriedkoch, ktoré sa používajú na jeho podávanie
Alikvoty 100 g/ml NGF prostriedku z príkladu 1 sa plnili buď do infusaid Model 600 implantovateľnej infúznej pumpy (Shiley-Infusaid Inc., Norwood, MA) Medtronic Synchromed inplantovateľnej infúznej pumpy (Medtronics Inc. minneapolis, MN), alebo Alzet Model 2ML 4 mini osmotickej infúznej pumpy (Alza Corpl., Palo Alto, CA). Pumpy sa umiestili do vodného kúpeľa s teplotou 37 °C a zapol sa výtok prostriedku z pumpy. Týždenné vzorky sa zhromažďovali počas 4 týždňov a analyzovali sa na obsah proteínu a aktivitu pomocou RP-HPLC, ELISA a PC-12 biostanovenia.
Dáta v tabuľke 3 neukazujú žiadne zreteľné zníženie koncentrácie NGF alebo NGF aktivity.
Tabuľka 3
Stabilita NGF prostriedkov v rôznych prostriedkoch, ktoré sa používajú na jeho podávanie pri 37 °C počas 1 mesiaca.
(Hodnoty RP-HPLC predstavujú priemer štandardná odchýlka 2 až 4 stanovení. Hodnoty biostanovenia predstavujú priemer 95 % intervalu spoľahlivosti 3 stanovení).
Príklad 5
Štúdium stability prostriedkov NGF pri pH 4 až 10
Boli pripravené vodné prostriedky, ktoré obsahovali 100 g/ml NGF, 1 mg/ml HSA a 9 mg/ml chloridu sodného, pufrované na pH 4 až 10 a sterilné filtrované cez 0,2 filter (Millex-GV, Millipore Corp.), spôsobom opísaným v príklade 1. Prostriedky s pH 4 až 5 sa pufrovali pomocou acetátu a prostriedky s pH 6 až 10 sa pufrovali pomocou Tris. Alikvoty 1 ml sa umiestili do polypropylénových liekoviek, v ktorých boli inkubované buď pri laboratórnej teplote (23 °C až 25 °C), alebo pri 37 °C. Vzorky sa vybrali v rôznych časoch a analyzovali sa pomocou RPHPLC. Rýchlostná konštanta reakcia prvého radu, ktorá predstavuje stratu NGF z roztoku sa vyniesla do grafu ako funkcia pH. Rýchlosti degradácie NGF v roztoku sa zvyšujú, ak je pH nižšie ako 4,5 s vyššie ako 6,0. Najvyššia stabilita je pri pH 5,2.
Príklad 6
Stabilita prostriedkov NGF ako funkcia koncentrácie nosiča
Testoval sa typ množstva nosičov, aby sa stanovil ich vplyv na stabilitu NGF. Bol pripravený 100 g/ml vodný prostriedok, ktorý je opísaný v príklade 1 a vodné prostriedky, ktoré obsahujú iné nosiče a sú vypísané v tabuľke 4. Každý prostriedok bol sterilné filtrovaný cez 0,2 Millipore Millex-GV filter. Stabilita NGF v rôznych prostriedkoch bola stanovená pomocou inkubácie NGF prostriedkov pri 37 °C v polypropylénových liekovkách. Vzorky sa vybrali po dvoch týždňoch a pomocou RP-HPLC sa zisťoval obsah proteínov.
Tabuľka 4
Stabilita rôznych prostriedkov NGF inkubovaných počas 2 týždňov excipíent želatína ľudský krvný albumín ľudský krvný albumín ľudský krvný albumín
Tween 80 (i hmotnostné} po 2 týždňoch í>4 9
0,5
2 prostriedok podávanie tLS* pc 1 týždni stanovené RP-HPLC tLS* po 2 týždni stanovené RP-HPLC %LS* po 4 týždni stanovené RP-HPLC tLS* po 4 týždni stanovené ELISA t relatívneho potenciáli: po 4 týždňoch stanovené PC-12 biostanovením
Infusaid Model GCO implantcvatelná infúzna pumpa
3
101 3
1'2 4
11
10Ω
Medtronics
Synchromed iraplantvateíná infúzna pumpe.
109 2
3
3
Alzet 2 ML 4 osmctická minipumpa
9S 3
7
9D 5 nestanovené nestanovené
Pluronic F-68
0, 02
5 * %LS = % label strength [NGF] testu l relatívneho potenciálu [NGF] kontroly aktivita testu aktivita kontroly [NGF] testu tLS - % label strength « --------------[NGF] Kontroly (Hodnoty RP-HPLC predstavujú priemer štandardná odchýlka 2 až 4 stanovení).
Príklad 7
Prostriedok NGF na lyofilizáciu
Vodný prostriedok NGF, ktorý obsahuje 100 g/ml NGF, 30 mg/ml sacharózy, 30 mg/ml manitolu, 5 mg/ml HSA a 0,3 mg/ml kyseliny citrónovej, pri ktorom sa pH upravilo na 6,0 pomocou NaOH, sa pripravil pri laboratórnej teplote. V 70 % celkového objeme sa rozpustila kyselina citrónová a cukry, upravilo sa pH a pri miernom miešaní sa pridal HSA a NGF spolu s vodou do celkového objemu.
Príklad 8
Lyofilizácia prostriedku NGF
Bola testovaná lyofilizačná stabilita vodného NGF v prostriedku z príkladu 7. Jednomililitrové alikvoty prostriedku NGF pripraveného podľa príkladu 7 sa umiestili do 5 ml sklenených baniek Typ 1 ukončených lyofilizačnými uzávermi. Banky obsahujúce prostriedok sa umiestili do lyofilizačnej komôrky (FTS Systems Inc.), ktorá bola ekvilibrovaná na 5 pred začatím chladenia. Teplota komôrky sa potom znížila na -40 °C. Nasledovali 2 hodiny pri -40 °C, komôrka sa evakuovala a tlak sa udržoval na 80 až 100 miliTorr (10,66 Pa až 13,33 Pa) a prípadné výchylky sa upravovali pomocou dusíka. Bolo nastavené zvyšovanie teploty o 4 °C za hodinu dokiaľ sa nedosiahla konečná teplota sušenia 25 °C. Konečný obsah vlhkosti 1 až 2 % hmotnostné produktu sa dosiahol po 30 hodinách cyklu.
Lyofilizačný prach sa skladoval pri 5 °C a «konštituoval pri laboratórnej teplote po 3 dňoch pomocou 1 ml rozpúšťadla, ktoré obsahuje 8,7 mg/ml chloridu sodného a 1,1 mg/ml kyseliny citrónovej pufrovanej na pH 5,2. Vzorky sa analyzovali na obsah NGF pomocou RP-HPLC. Po lyofilizácii nebola pozorovaná žiadna strata proteínu.
Príklad 9
Štúdium stability prostriedku NGF pri skladovaní v sklenených fľaštičkách pri 2 až 8 °C
Vodné prostriedky, ktoré obsahujú 100 alebo 1000 g/ml rhNGF boli pripravené pomocou postupu opísaného v príklade 1, s tým rozdielom, že násada bola znížená na 1,5 litra. Alikvoty 4,2 ml sa umiestili do sklenených baniek Typ Iz flintového skla s uzávermi z butylovej gumy pokrytej teflonom a skladovali sa pri 2 až 8 °C. Výsledky, ako sú ukázané v tabuľke 5, ukazujú, že nedošlo k značnej strate obsahu proteínu (ako bolo stanovené pomocou RP-HPLC a ELISA) ani NGF aktivity (ako bolo stanovené pomocou PC-12 biostanovenia).
Tabuľka 5
Stabilita NGF prostriedku pri skladovaní pri 2 až 8 °C meraná pomocou RP-HPLC ELISA a PC-12 biostanovania nominálna RPHťiC r? HPLC ELISA ?C blosldiioveiiig
ÍNUF] ILS‘ tLS* ÍLS* 4LS* výchtxiis. po 12 mesiacoch po .1.2 mesiacoch po 12 mesiacoch
10'J /nJ~lC3~l Ϊ0Π 102 3 Ί02“δ
LOGO g/nl 102 1 101 1 103 3 102 20 [NGF] v Čase testu VLS * % label strength * ------------------východiskový [NOF]
Identifikácia a množstvo NGF stanovené pomocou HPLC na reverznej fáze
V tomto príklade 9 bol použitý tento postup:
NGF bol identifikovaný a kvantifikovaný analýzou vzoriek s objemom 100 1 na HPLC (Heewlett Packard HP 1090 Liguid Chromatograph) na reverznej fáze, na 4 - 6 mm x 250 mm, Bakcrbond Wide-Pore Butyl (C4) s veľkosťou pórov 300 A (j. T. Baker Inc. Phillipsburg NJ, USA) a UV detektorom s diódovým lúčom pri 210 nm. Mobilné fázy boli (A) 0,2 % kyseliny trifluóroctovej vo vode a (B) 60 % acetonitrilu v pufri (A) s gradientmi, ktoré sa menia od 29 % (B) do 75 % (B) počas 65 minút pri prietoku 1,0 ml/min. a tlaku 11,11 MPa (110 bar) pri laboratórnej teplote.
Ďalej bol použitý postup opísaný v testovacích postupoch HPLC.
Priemyselná využiteľnosť
Prostriedky podľa predkladaného vynálezu sú priemyselne využiteľné pri výrobe liekov, ktoré sa dajú použiť na liečenie chorôb súvisiacich s rastovým faktorom nervov.

Claims (14)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Vodný farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje
    a) rastový faktor nervov,
    b) biologicky prijateľnú soľ v množstve na dosiahnutie izotonicity,
    c) pufer na udržanie pH prostriedku v rozsahu 4,5 až 6,0 a
    d) vodu, s podmienkou, že uvedený prostriedok neobsahuje vo vode rozpustný celulózový polymér alebo vo vode rozpustný polysacharid.
  2. 2. Vodný farmaceutický prostriedok podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že ďalej obsahuje biologicky prijateľný vo vode rozpustný nosič.
  3. 3. Vodný farmaceutický prostriedok podľa nároku 1 alebo 2, vyznačujúci sa tým, že obsahuje
    a) 0,0001 až 0,125 % hmotn, rastového faktora nervov vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku,
    b) 0,1 až 1,25 % hmotn. nosiča vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku,
    c) 0,5 až 1,0 % hmotn. soli vzhľadom na celkovú hmotnosť prostriedku,
    d) pufer v množstve dostatočnom na udržanie pH vodného prostriedku v rozsahu 4,5 až 6,0.
  4. 4. Vodný farmaceutický prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa t ý m , že jeho pH je 5,0 až 5,4.
  5. 5. Vodný farmaceutický prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje 10 až 500 g rastového faktora nervov, 5 mg/ml ľudského krvného albumínu, 8,7 mg/ml chloridu sodného, 2,1 mg/ml kyseliny citrónovej a vodu a pH prostriedku je upravené na 5,2.
  6. 6. Vodný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov vhodný na lyofilizáciu, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje
    a) 1 až 1250 pg/ml rastového faktora nervov,
    b) 30 až 90 mg/ml biologicky prijateľného napučiavacieho činidla,
    c) pufer v množstve dostatočnom na udržanie pH vodného prostriedku v rozsahu 5,5 až 6,0 a
    d) vodu, s podmienkou, že uvedený prostriedok neobsahuje vo vode rozpustný celulózový polymér alebo vo vode rozpustný polysacharid.
  7. 7. Vodný farmaceutický prostriedok podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že obsahuje 1 až 1250 pg/ml rastového faktora nervov a 30 až 90 mg/ml napučiavacieho činidla.
  8. 8. Vodný farmaceutický prostriedok podľa nároku 6 alebo 7, vyznačujúci sa tým, že napučiavacím činidlom je cukor.
  9. 9. Vodný farmaceutický prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov 6až 8, vyznačujúci sa tým, že napučiavacím činidlom je zmes
    SK 284064 Bé sacharózy a manitolu, pufŕom je citrátový pufer a pH prostriedku je 5,8 až 6,2.
  10. 10. Vodný farmaceutický prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov 6až 9, vyznačujúci sa tým, že sa lyofilizáciou obsah jeho vlhkosti zníži na menej ako 2 %.
  11. 11. Lyofilizovaný farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje 0,001 až 1,25 dielov rastového faktora nervov, 30 až 90 dielov cukru a menej ako 1 diel vody, s podmienkou, že uvedený prostriedok neobsahuje vo vode rozpustný celulózový polymér alebo vo vode rozpustný polysacharid.
  12. 12. Vodný farmaceutický prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa t ý m , že obsahuje biologicky prijateľný vo vode rozpustný nosič.
  13. 13. Vodný farmaceutický prostriedok podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa t ý m , že sa používa na liečenie neurónových dysfunkcií ľudí.
  14. 14. Vodný farmaceutický prostriedok podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že je v intracerebroventrálnej infúznej forme na liečenie Alzheimerovej choroby ľudí.
SK183-96A 1993-08-20 1994-08-16 Vodný a lyofilizovaný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov SK284064B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/109,798 US6277828B1 (en) 1993-08-20 1993-08-20 Pharmaceutical formulations of nerve growth factor
PCT/US1994/009245 WO1995005845A1 (en) 1993-08-20 1994-08-16 Pharmaceutical formulations of nerve growth factor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK18396A3 SK18396A3 (en) 1996-10-02
SK284064B6 true SK284064B6 (sk) 2004-09-08

Family

ID=22329623

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK183-96A SK284064B6 (sk) 1993-08-20 1994-08-16 Vodný a lyofilizovaný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov

Country Status (32)

Country Link
US (2) US6277828B1 (sk)
EP (1) EP0721343B1 (sk)
JP (2) JP4592830B2 (sk)
KR (1) KR100341193B1 (sk)
CN (1) CN1163265C (sk)
AT (1) ATE226085T1 (sk)
AU (1) AU677699B2 (sk)
BG (1) BG62951B1 (sk)
BR (1) BR9407278A (sk)
CA (1) CA2169834C (sk)
CZ (1) CZ292422B6 (sk)
DE (1) DE69431562T2 (sk)
DK (1) DK0721343T3 (sk)
ES (1) ES2181723T3 (sk)
FI (1) FI113241B (sk)
HK (1) HK1012990A1 (sk)
HU (1) HU228152B1 (sk)
IL (3) IL110725A (sk)
LT (1) LT4051B (sk)
LV (1) LV11279B (sk)
NO (1) NO317627B1 (sk)
NZ (1) NZ271873A (sk)
PL (1) PL176387B1 (sk)
PT (1) PT721343E (sk)
RO (1) RO114742B1 (sk)
RU (1) RU2126265C1 (sk)
SI (1) SI9420048B (sk)
SK (1) SK284064B6 (sk)
TW (1) TW427905B (sk)
UA (1) UA43348C2 (sk)
WO (1) WO1995005845A1 (sk)
ZA (1) ZA946333B (sk)

Families Citing this family (41)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5981485A (en) 1997-07-14 1999-11-09 Genentech, Inc. Human growth hormone aqueous formulation
JP2001506226A (ja) * 1995-05-12 2001-05-15 ザ ロックフェラー ユニヴァーシティ シナプシンのモジュレーションによるアルツハイマー病の治療法
US6090781A (en) * 1996-11-06 2000-07-18 Genentech, Inc. Stabilizing formulation for NGF
CA2234231C (en) * 1995-11-07 2009-04-14 Genentech, Inc. Stabilizing formulation for ngf
US6964947B1 (en) * 1995-11-07 2005-11-15 Genentech, Inc. Stabilizing formulation for NGF
AU3214597A (en) * 1996-05-29 1998-01-05 Universal Preservation Technologies, Inc. Long-term shelf preservation by vitrification
CN1059597C (zh) * 1996-08-08 2000-12-20 陈素兰 神经损伤修复制剂
DE69836543T2 (de) * 1997-05-01 2007-09-20 Protechtion Unlimited, Inc., Wilmington Nervenwachstumsfaktor als impfstoffadjuvans
US6313089B1 (en) 1997-08-20 2001-11-06 Duke University Complexes of apolipoprotein E and ciliary neurotrophic factor (CNTF) and methods of use
JP2001518449A (ja) * 1997-09-30 2001-10-16 デューク・ユニバーシティー アポリポタンパク質ｅ／成長因子複合体およびその使用法
US6979442B1 (en) 1998-08-17 2005-12-27 Pfizer Inc. Stabilized protein compositions
KR20040065278A (ko) * 2001-12-21 2004-07-21 노보 노르디스크 에이/에스 변경된 인자 ⅶ 폴리펩티드의 액체 조성물
BR0215216A (pt) * 2001-12-21 2004-11-16 Novo Nordisk Healthcare Ag Composição aquosa lìquida, método para preparar uma composição aquosa lìquida de um polipeptìdeo de fator vii, uso de uma composição aquosa lìquida, e, método para o tratamento de uma sìndrome de resposta ao fator vii
US20040009918A1 (en) * 2002-05-03 2004-01-15 Hanne Nedergaard Stabilised solid compositions of modified factor VII
BRPI0311959B8 (pt) 2002-06-21 2021-05-25 Novo Nordisk Healthcare Ag composição, métodos para preparar um polipeptídeo estável do fator vii, e para tratar uma síndrome responsiva do fator vii, e, uso do polipeptídeo do fator vii
MXPA05009914A (es) * 2003-03-18 2006-01-09 Novo Nordisk Healthcare Ag Composiciones farmaceuticas acuosas, liquidas de polipeptidos del factor vii.
US7897734B2 (en) * 2003-03-26 2011-03-01 Novo Nordisk Healthcare Ag Method for the production of proteins
KR20060015574A (ko) * 2003-05-23 2006-02-17 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 용액 중 단백질 안정화
CN1318087C (zh) * 2003-06-06 2007-05-30 北京三诺佳邑生物技术有限责任公司 去白蛋白神经生长因子制剂
WO2004112828A1 (en) * 2003-06-25 2004-12-29 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid composition of factor vii polypeptides
WO2005002615A1 (en) * 2003-07-01 2005-01-13 Novo Nordisk Health Care Ag Liquid, aqueous pharmaceutical composition of factor vii polypeptides
CN102872451A (zh) 2003-08-14 2013-01-16 诺和诺德医疗保健公司 因子vii多肽类的含水液体药物组合物
KR20150138427A (ko) * 2003-12-19 2015-12-09 노보 노르디스크 헬스 케어 악티엔게젤샤프트 인자 ｖｉｉ 폴리펩티드의 안정화된 조성물
US8168222B2 (en) 2004-09-07 2012-05-01 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Amphiphilic polymer-protein conjugates and methods of use thereof
US8017151B2 (en) * 2004-09-07 2011-09-13 Board Of Regents Of The University Of Nebraska By And Behalf Of The University Of Nebraska Medical Center Amphiphilic polymer-protein conjugates and methods of use thereof
US20090325978A1 (en) * 2006-08-14 2009-12-31 Katsumi Onai Stable lyophilized preparation
EP2081645B8 (en) * 2006-11-08 2013-07-10 P· MIND Co., Ltd Apparatus for accelerating production of neurotrophic factor
EP1958618A1 (de) 2007-02-15 2008-08-20 Octapharma AG Verfahren zur Gefriertrocknung mit optimierter Rekonstitution von Biopolymeren
BRPI0913684A2 (pt) * 2008-09-26 2015-10-20 Adocia complexo composto por um polissacarídeo substituído por um triptofano ou um derivado de triptofano a partir de uma proteína ligadora à heparina, composição farmacêutica e seus usos
CN102232932B (zh) * 2010-04-27 2013-06-05 重庆莱美药业股份有限公司 果胶-阿霉素轭合物的冻干制剂及制备方法
EP2694094B1 (en) 2011-04-07 2017-08-16 Neovacs METHOD FOR TREATING IFNalpha RELATED CONDITIONS
WO2013117729A1 (en) * 2012-02-08 2013-08-15 Institut National De La Recherche Agronomique Use of beta-nerve growth factor for inducing ovulation in mammals
EP3287140B1 (en) * 2015-04-21 2021-06-02 Staidson (Beijing) Biopharmaceuticals Co., Ltd. Nerve growth factor composition and powder injection
ES2893239T3 (es) * 2015-04-21 2022-02-08 Staidson Beijing Biopharmaceuticals Co Ltd Composición de factor de crecimiento nervioso y polvo de inyección
ES2893952T3 (es) * 2015-04-21 2022-02-10 Staidson Beijing Biopharmaceuticals Co Ltd Composición de factor de crecimiento nervioso y polvo para inyección
US9868828B2 (en) * 2015-06-23 2018-01-16 Amolifescience Co., Ltd. Defined three-dimensional microenvironment for stem cell
WO2017164349A1 (ja) 2016-03-25 2017-09-28 アステラス製薬株式会社 ＰＥＧ化抗ヒトＮＧＦ抗体Ｆａｂ'フラグメント含有医薬組成物
MX2018014916A (es) * 2016-06-01 2019-07-18 Servier Ip Uk Ltd Formulaciones de oxido de polialquileno-asparaginasa y metodos de preparacion y uso del mismo.
CN109260147B (zh) * 2018-10-15 2019-09-13 珠海亿胜生物制药有限公司 一种用于治疗或预防神经损伤的重组人碱性成纤维细胞生长因子注射剂
US11767504B2 (en) 2020-08-14 2023-09-26 Albcura Corporation Albumin compositions and methods of producing and using same
IL302317A (en) 2020-10-28 2023-06-01 Dompe Farm Spa Pharmaceutical packaging including polypropylene containers and aqueous formulations of NGF packed in them

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ235556A (en) 1986-11-05 1991-06-25 Ethicon Inc Breast milk substitute containing recombinant human egf
NZ226170A (en) * 1987-09-18 1990-07-26 Ethicon Inc Stable freeze-dried pharmaceutical composition containing epidermal growth factor
IT1219874B (it) * 1988-03-18 1990-05-24 Fidia Farmaceutici Utilizzazione del fattore di crescita nervoso umano e sue composizioni farmaceutiche
US5096885A (en) 1988-04-15 1992-03-17 Genentech, Inc. Human growth hormone formulation
JPH0418031A (ja) * 1989-02-16 1992-01-22 Hiroshi Saito 損傷治癒促進剤
JP3283288B2 (ja) * 1991-03-08 2002-05-20 電気化学工業株式会社 生理活性ペプチド製剤
JP2818834B2 (ja) * 1991-08-12 1998-10-30 大塚製薬株式会社 ＩＬ−１α安定化医薬製剤

Also Published As

Publication number Publication date
IL124941A0 (en) 1999-01-26
BR9407278A (pt) 1996-10-01
US7074763B2 (en) 2006-07-11
CA2169834A1 (en) 1995-03-02
EP0721343B1 (en) 2002-10-16
LT96011A (en) 1996-07-25
US6277828B1 (en) 2001-08-21
JPH10508000A (ja) 1998-08-04
PL176387B1 (pl) 1999-05-31
BG62951B1 (bg) 2000-12-29
NO317627B1 (no) 2004-11-29
HU228152B1 (en) 2012-12-28
RU2126265C1 (ru) 1999-02-20
CZ292422B6 (cs) 2003-09-17
RO114742B1 (ro) 1999-07-30
PT721343E (pt) 2003-01-31
BG100371A (bg) 1996-12-31
LV11279B (en) 1996-10-20
SI9420048A (en) 1996-10-31
TW427905B (en) 2001-04-01
CZ42496A3 (en) 1996-05-15
JP2007314572A (ja) 2007-12-06
AU677699B2 (en) 1997-05-01
SK18396A3 (en) 1996-10-02
CN1163265C (zh) 2004-08-25
ES2181723T3 (es) 2003-03-01
LV11279A (lv) 1996-06-20
EP0721343A1 (en) 1996-07-17
AU7566894A (en) 1995-03-21
DK0721343T3 (da) 2003-02-17
PL313084A1 (en) 1996-05-27
KR100341193B1 (ko) 2002-06-21
FI113241B (fi) 2004-03-31
CN1133012A (zh) 1996-10-09
IL110725A (en) 2004-09-27
DE69431562T2 (de) 2003-06-18
CA2169834C (en) 2008-11-04
DE69431562D1 (de) 2002-11-21
HUT74728A (en) 1997-02-28
LT4051B (en) 1996-10-25
HK1012990A1 (en) 1999-08-13
HU9600371D0 (en) 1996-04-29
WO1995005845A1 (en) 1995-03-02
IL110725A0 (en) 1994-11-11
JP4592830B2 (ja) 2010-12-08
NZ271873A (en) 1996-10-28
FI960750A0 (fi) 1996-02-19
NO960651D0 (no) 1996-02-19
NO960651L (no) 1996-02-19
ZA946333B (en) 1996-02-19
FI960750A (fi) 1996-02-20
IL124941A (en) 2006-12-10
SI9420048B (sl) 2003-12-31
US20010007662A1 (en) 2001-07-12
ATE226085T1 (de) 2002-11-15
UA43348C2 (uk) 2001-12-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK284064B6 (sk) Vodný a lyofilizovaný farmaceutický prostriedok rastového faktora nervov
US5981485A (en) Human growth hormone aqueous formulation
CA2139358C (en) Human growth hormone aqueous formulation
US5763394A (en) Human growth hormone aqueous formulation
Österberg et al. Development of a freeze-dried albumin-free formulation of recombinant factor VIII SQ
EP0448146B1 (en) Stabilized gonadotropin containing preparations
AU2003238862A2 (en) Formulations for amylin agonist peptides
US5635176A (en) Pharmaceutical compositions containing IL-6
US5384132A (en) Stabilized gonadotropin containing preparations
US5270057A (en) Stabilized gonadotropin containing preparations
AU2003251284B9 (en) Stable pharmaceutical composition comprising erythropoietin
KR100310796B1 (ko) 신경생육인자약학배합물
EP1189600B1 (en) Grf-containing lyophilized pharmaceutical compositions
AU2002368075A1 (en) Stable pharmaceutical composition comprising erythropoietin
WO1995022342A1 (en) Pharmaceutical formulations of ciliary neurotrophic factor

Legal Events

Date Code Title Description
MK4A Patent expired

Expiry date: 20140816