JPH0418031A - 損傷治癒促進剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、神経成長因子（以下、ＮＧＦと略称すること
もある。）と線維芽細胞成長因子（以下、ＦＧＦと略称
することもある。）とを組み合わせてなる動物組織損傷
の治俯促進剤に関する。

従来の技術 神経成長因子（ＮＧＦ）は知覚神経細胞や交感神経細胞
の成長、分化および機能発現に重要な役割を担っている
蛋白性細胞成長因子である。ＮＧＦは１１６〜１１８個
のアミノ酸からなるポリペプチドが２個結合した二量体
て、マウス顎下腺、モルモット前立腺、ヘビ毒液などに
多く含まれている。これらの材料、特にマウス顎下腺か
らＮＧＦは容易に精製できる（Ｂｏｃｃｈ　ｉｎ　ｉ　
、　Ｖ、ら　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、６４　：　７Ｂ７　　
７９４．　２９６９　、　Ｍｏｂｌｅｙ、Ｗ、Ｃ，ら　
Ｂｉｏｃｈｅ＋ｎ１ｓｔｒｙ上５　：　５５４３−５５
５１．１９７６）。さらに最近マウス、ヒト、ウシなど
のＮＧＦ遺伝子がクローニングされ、それらの構造が明
らかにされた（ＳＣＯＬＬ、Ｊ、、らＮａｔｕｒｅ３０
２：５３８　５４０．１９８３゜Ｕｌｌｒｉｃｈ、Ａ、
、ら　Ｎａｔｕｒｅ　３０３　：　８２１−８２５゜１
９８３　、　Ｍｅｉｅｒ、Ｒ，、ら　ＥＭＢＯＪ、、５
　：　ｌ　４８９−１４９３．１９８５）。これらの遺
伝子を用いた遺伝子工学的手法により、高純度のＮＧＦ
が大量にしかも比較的安価に生産されるようＩこなった
。

一方、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）は、ペプチド性因
子で、等電点が塩基性のＦＧＦと酸性のＦＧＦがあり、
共に全アミノ酸配列が明らかにされているＩＦ、　Ｅｓ
ｃｈら；　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ
ｉ。

ＵＳ八へ５：６５０７　　　（１９８５）およびＸ、　
Ａ。

Ｔｈｏｍａｓら；　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ
、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８２　：６４０９（１９８５）
］。

ＦＧＦは、ｉｎ　ｖｉｉｒｏでは３Ｔ３細胞や血管内皮
細胞を含む中胚葉由来細胞に対して増殖促進作用を、ｉ
ｎ　ｖｉｖｏでは血管新生作用を示すことが知られてい
る［Ｄ、　　Ｇｏｓｐｏｄａｒｏｗｉｃｚら；　Ｅｎｄ
ｏｃｒｉｎｅＲｅｖｉｅｗｓ　８　：　９５（１９８７
）］　。中でもＦＧＦの血管新生作用は細胞増殖作用と
相まって損傷、火傷の治療薬、動物組織移植時の前処理
剤および血栓症、動脈硬化症などの予防治療薬としての
可能性を示すものである。天然に存在するヒトＦＧＦは
極めて微量であり、またこれをヒトの組織から得る試み
は種々の制約によって極めて困難である。

しかし最近ヒ１−ＦＧＦは、遺伝子工学的手法を駆使し
て、高純度のものが大量に、しかも比較的安価に生産さ
れるようになった（ヨーロッパＩ許出願公開第２３７．
９６６号公報参照）。

発明が解決しようとする問題点 上記したＮＧＦやＦＧＦについて、それぞれ損傷の治療
への応用が試みられている。

その始値効果を高めるために、上記薬物の投与量を増加
するなどの方法が知られているが、特に著効はなく、大
量投与による効果を期待するのは困がである。

問題を解決するための手段 本発明者らは、ＮＧＦあるいはＦＧＦによる損傷の治療
薬の応用開発を行っている途上、ＮＧＦをＦＧＦと併用
することにより治癒が高まり、単独使用では得ることが
できない強い治癒効果が得られることを見い出し、これ
に基づいてさらに鋭意研究を行い本発明を完成した。

すなわち本発明は、ＮＧＦとＦＧＦとを組み合わせてな
る動物組織損傷の治癒促進剤である。

上記ＮＧＦは、ＮＧＦ活性すなわち神経成長作用を有す
る物質であればいずれでもよい。例えば動物体内や動物
細胞で産生される天然のＮＧＦや遺伝子組み換え技術で
生産されるＮＧＦやこれらの関連物質やムティンが挙げ
られる。上記ＮＧＦやこれらの関連物質やムティンは、
蛋白質である場合、糖鎖を有していてもよくまた有さな
くてもよい。ＮＧＦとしてはヒトのもの、ウシのものあ
るいはマウスのものでもよい。由来が、組織の損傷を治
癒される動物と同じ種由来のものを用いるのが好ましい
。

具体的には、Ｂｏｃｃｈｉｎｉ　Ｖ、ら、　Ｐｒｏｃ、
　Ｎａ１ｌ。

Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ、　６４．７８７−７９
４（１９６９）、　Ａ、　Ｕｌｌｒｉｃｈら、ネイチャ
ー（Ｎａｔｕｒｅ）　３０３　：　８２１　８２５（１
９８３）、　Ｒ，Ｍｅｉｅｒら、　ＴｈｅＥＭＢＯＪｏ
ｕｒｎａｌ、ｖｏｌ、５．　１４８９−１４９３（１９
８６）に示されるＮＧＦや、その生物学的もしくは免疫
学的活性に必要な一部分のアミノ酸配列からなるフラグ
メントでもよい。

ざらにＮＧＦとしては、該ポリペプチドの構成アミノ酸
の一部が欠損しているか他のアミノ酸に置換されたムテ
ィンでもよい。またそのアミン末端にさらにメチオニン
残基（Ｍｅｔ）を有するものと有さないものの混合物で
あってもよく、また、アミノ末端にＭｅｔを有さずセリ
ン（Ｓｅｒ）で始まるものでもよい。

上記ＦＧＦは、ＦＧＦ活性すなわち線繊芽細胞成長促進
作用を有する物質であればいずれでもよい。ＦＧＦとし
ては、天然由来のものでもよく、また遺伝子工学的手法
により製造されたものでもよい。また、これらの関連物
質やムティンでもよい。

ＦＧＦとしては、酸性のもの（以下、ａＦＧＦと略称す
ることもある。）、塩基性のもの（以下、ｂＦＧＦと略
称することもある。）が挙げられる。

特に、塩基性ＦＧＦが好ましい。

また、該哺乳動物のａＦＧＦの例としては、たとえば、
ウシのａ　Ｆ　Ｇ　Ｆ　［Ｌ　Ａ、　Ｔｈｏｍａｓら。

Ｐｒｏｃ、　ＮａＬｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ
　　８土：３５７（１９８４））、ヒトのａ　Ｆ　Ｇ　
Ｆ　［Ｇ、　Ｇｉｍｅｎｅｚ−Ｇａｌｌｅｇ。

ら、　Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、
　Ｃｏｍｍｕｎ、　　］　３８　：６１１（１９８６）
］　などがあげられる。

該哺乳動物のｂＦＧＦの例としては、たとえば、ウシの
ｂＦＧＦ　［プロシーデインダス・オブ・ザ・ナショナ
ル・アカデミ−・オブ・サイエンシズ（Ｐｒｏｃ、　Ｎ
ａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、）　ＬＩＳＡ、第８２巻
　第６５０７頁（１９８５年）３ヒトのｂＦＧＦＣヨー
ロッパ特許公開公報第２３７９６６号公報、ヨーロピア
ン・モレキュラー・バイオロジー・オーガナイゼイショ
ン自ジャーナル（Ｅｕｒｏｐｅａｎ　　Ｍｏｌｅｃｕｌ
ａｒＢｉｏｌｏｇｙ　　Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ（Ｅ
　Ｍ　Ｂ　Ｏ）　　Ｊｏｕｒｎａｌ第５巻、第２５２３
頁（１９８６年））〕などがあげられる。由来が、組織
損傷を治癒される動物と同じ種由来のものを用いるのが
好ましい。

上記ムティンとしては、本来、元のペプチドあるいは蛋
白質のアミノ酸配列が変異したものであり、したがって
該変異としては、アミノ酸付加。

構成アミノ酸の欠損、他のアミノ酸への置換が挙げられ
る。

該アミノ酸の付加としては、少なくとも１個のアミノ酸
が付加しているものが挙げられる。

該構成アミノ酸の欠損としては、少なくとも１個のＦＧ
Ｆ構成アミノ酸が欠損しているものが挙げられる。

該他のアミノ酸への置換としては、少なくとも１個のＦ
ＧＦ構成アミノ酸の別のアミノ酸で置換されているもの
が挙げられる。

ＦＧＦに少なくとも１個のアミノ酸が付加しているムテ
ィンにおける少なくとも１個のアミノ酸としては、ペプ
チドを発現する際に用いられる開始コドンに基因するメ
チオニンや、シグナルペプチドは含まれないものである
。

付加されているアミノ酸の数としては、少なくとも１個
であるが、ＦＧＦの特徴を失わない限り何個でもよい。

さらに好ましくは、ＦＧＦと相同性（ホモロジー）が認
められており、同様の活性を示すタンパクのアミノ酸配
列の一部あるいはすべてが挙げられる。

ＦＧＦの少なくとも１個のＦＧＦ構成アミノ酸が欠損し
ているムティンにおける欠損している構成アミノ酸の数
としては、ＦＧＦの有する特徴を失わない限り何個でも
よい。

ＦＧＦの少なくとも１個のＦＧＦ構成アミノ酸が別のア
ミノ酸で置換されているムティンｌこおける置換される
前の少なくとも１個のＦＧＦ構成アミノ酸の数としては
、ＦＧＦの特徴を失わない限り何個でもよい。

置換される前の構成アミノ酸の例としては、システィン
、システィン以外のものが挙げられる。

システィンが特に好ましい。置換される前の構成アミノ
酸としてシスティン以外のものとしては、アスパラギン
酸、アルギニン、グリシン、バリンなどが挙げられる。

置換される前の構成アミノ酸がシスティンである場合に
は、置換されたアミノ酸としては、たとえば中性アミノ
酸が好ましい。該中性アミノ酸の具体例としては、たと
えば、グリシン、バリン。

アラニン、ロイシン、インロイシン、チロシン。

フェニルアラニン、ヒスチジン、トリプトファン。

セリン、スレオニン、メチオニンなどが挙げられる。特
に、セリン、スレオニンが好ましい。

置換される前の構成アミノ酸がシスティン以外のもので
ある場合には、置換された別のアミノ酸としては、たと
えば、アミノ酸の親水性、疎水性あるいは電荷の点で、
置換される前のアミノ酸とは異なる性質をもつものを選
ぶ。具体的には置換される前のアミノ酸がアスパラギン
酸の場合には、置換されたあとのアミノ酸としてアスパ
ラギン。

スレオニン、バリン、フェニルアラニン、アルギニンな
どが挙げられるが、特にアスパラギン、アルギニンが好
ましい。

置換される前のアミノ酸がアルギニンの場合にはｌｉｉ
換されたあとのアミノ酸としてグルタミン。

スレオニン、ロイシン、フェニルアラニン、アスパラギ
ン酸が挙げられるが、特にグルタミンが好ましい。

置換される前の構成アミノ酸がグリシンである場合には
、置換されたあとのアミノ酸としては、スレオニン、ロ
イシン、フェニルアラニン、セリン、グルタミン酸、ア
ルギニンなどが挙げられ、特にスレオニンが好ましい。

置換される前の構成アミノ酸がセリンである場合には、
置換されたあとのアミノ酸としては、メチオニン、アラ
ニン、ロイシン、システィン、グルタミン、アルギニン
、アスパラギン酸などが挙げられ、特にメチオニンが好
ましい。

置換される前の構成アミノ酸がバリンである場合には、
置換されｌ；あとのアミノ酸としては、セリン、ロイシ
ン、プロリン、グリシン、リジン。

アスパラギン酸などが挙げられ、特にセリンが好ましい
。

置換される前の元の構成アミノ酸としては、アスパラギ
ン酸、アルギニン、グリシン、セリン。

バリンが好ましい。

置換されたあとのアミノ酸としては、アスパラギン、ク
ルタミン、アルギニン、スレオニン、メチオニン、セリ
ン、ロイシンが好ましい。

置換されたムティンの最も好ましいものとしては、構成
アミノ酸であるシスティンがセリンに置換されｌ：もの
が最も好ましい。

上記の置換においては、２以上の置換を同時に行なって
もよい。特に、２または３個の構成アミノ酸が置換され
るのが好ましい。

本発明のムティンは、上記した付加、欠損、置換の２つ
または３つが組み合わさったものでもよい。

該ムティンを製造するためには、特定部位指向性変異誘
発技術（Ｓｉｔｅｄｉｒｅｃｔｅｄ　ｔｎｕｔａｇｅｎ
ｅｓｉｓ）が採用される。該技術は周知であり、アール
・エフ・レイザー（Ｌａｔｈｅｒ、　Ｒ，Ｆ、）及びジ
エイ・ピー・レコック（Ｌｅｃｏｑ、　Ｊ、　Ｐ、）、
ジェ矛ティック・エンジニアリング（Ｇｅｎｅｔｉｃ　
　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ）、アカデミツクブレス社（
１９８３年）第３１−５０頁、に示されている。オリゴ
ヌクレオチドに指示された変異誘発はエム・スミス（Ｓ
ｍｉｔｈ、　Ｍ、）及びニス・ギラム（Ｇｉｌｌａｍ、
　Ｓ、）、ジエネティック・エンジニアリング：原理と
方法、プレナムプレス社（１９８１年）３巻　１−３２
頁に示されている。

該ムティンをコードする構造遺伝子を製造するためには
、たとえば、 （ａ）ＦＧＦの構造遺伝子の１＊鎖からなる１本ｇ４Ｄ
ＮＡを突然変異株オリゴヌクレオチドプライマーと雑種
形成させる（この１本鎖で代替えすべきシスティン用コ
ドン、又は場合によりこのコドンと対合をつくるアンチ
センス・トリプレットを包含する領域に対して上記プラ
イマーは相補的なものである。但し、当該コドンの他の
アミノ酸暗号化用コドン、又は場合によりアンチセンス
・トリプレットとの不一致はこの限りでない。）、（ｂ
）ＤＮＡポリメラーゼによりプライマーを伸長させ、突
然変異性へテロニ量体（ｈｅｔｅｒｏｄｕｐｌｅｘ）を
形成させる、及び （ｃ）この突然変異性へテロニ量体を複製する。

次に、突然変異化された遺伝子を運搬するファージＤＮ
Ａを単離し、プラスミドへ組み込む。

このようにして得られたプラスミドで適当な宿主を形質
転換し、得られた形質転換体を培地に培養することによ
り、ムティンを製造することができる。

該ムティンの例およびその製造法の例としては、たとえ
ばヨーロッパ特許出願公開第２８１，８２２号公報の記
載のものが挙げられる。

本発明におけるＮＧＦおよびＦＧＦはそれぞれ底置性で
あるので、安全に使用することができる。

本発明の治癒促進剤は、神経細胞の顕著な延命作用およ
び神経突起伸長作用を示し、さらに投与部位に顕著な血
管新生作用を示す。

したがって、本発明の治癒促進剤は、動物組織の損傷の
治癒の促進に用いることができる。また、本発明の治癒
促進剤は、動物組織たとえば臓器等の移植における接着
に有効である。

すなわち本発明の動物組織損傷の治癒促進剤は動物の各
種損傷、例えば皮膚、筋肉、骨、神経などの損傷の治療
に対して有効であり、とりわけ神経損傷、神経切断、例
えば脳損傷に対して有効である。また外科的手術による
損傷の治癒に対しても有効である。末剤は、とりわけ外
的要因による損傷の治癒を促進するために有効である。

また、本発明の動物組織損傷の治癒促進剤は、種々の移
植、例えば細胞移植、組織移植、皮膚移植、臓器移植、
とりわけ脳移植に対して有効である。上記脳移植の対象
疾病の例としては老人痴はう症、特にアルツハイマー病
などが挙げられる。

該移植においては、移植した細胞等の接着が促進され、
移植した細胞等が活性化される。また末剤は、損傷を受
けていない面同志を接着する場合にも有効である。

該動物としては、温血哺乳動物が挙げられ、その例とし
てはたとえばマウス、ネコ、犬、牛、羊。

ヤギ、ブタ、ウサギ、ヒトなどが挙げられる。

本発明の治癒促進剤は、動物組織に投与することにより
動物組織損傷の治癒を促進させる。該投与としては、非
経口的に行なわれ、たとえば、本発明の治癒促進剤を該
動物組織に塗布、散布することにより、動物組織を本発
明の治癒促進剤に浸漬することにより、動物組織を本発
明の治癒促進剤を含有する培地に培養することにより、
本発明の治癒促進剤を動物に注射投与することにより行
なわれる。

移植の場合には、接着面あるいはその周辺もしくは移植
される臓器等に本発明の治癒促進剤を塗布、散布しある
いはこれらを本発明の治癒促進剤に浸漬することにより
投与される。

本発明の治癒促進剤の使用量は、その使用方法。

使用目的などにより異なるが、ＮＧＦおよびＦＧＦのタ
ンパク質量として、塗布、散布、浸漬する場合には、た
とえば各々の濃度として約１１００ｎ／ａＱ　〜ｌ　Ｏ
μｇ／１ｌ１１２、さらに好ましくは約５００ｎｇ／−
〜５μｇ／ｌｎＱのものを用いるのが好ましい。

培養培地に含有させて用いる場合には、たとえば、各々
の濃度として約０　、１　ｎｇ／顧〜１０ｎｇ／ｍｌ、
さらに好ましくは約０．５ｎｇ／ｍＱ〜５　ｎｇ／顧の
濃度として用いるのが好ましい。

注射投与して用いるには、たとえば各々を一日量約０　
、０２　ｐｇ／ｋｇ　−０、０２ｍｇ／ｋｇ、ざらｊコ
好ましくは約０．２μｇ／　ｋｇ−０、０２ｍｇ／　ｋ
ｇとなる量を投与するのが好ましい。

本発明のＮＧＦとＦＧＦとを組合わせてなる治癒促進剤
は、上記２物質を公知の製剤学的製造法に準じ、所望に
より製剤学的に許容される担体（希釈剤、賦形状を含む
）などを用い、混合して一剤となして用いることができ
る。またそれぞれの物質を別途製剤化し用時希釈剤等を
用いて一剤となして用いることができる。さらに上記の
ようにそれぞれ別途製剤化したものを、別個に同時にま
たは時間差をおいて同一対象に用いることもできる。

本発明の治癒促進剤が水溶液である場合は、水性溶剤（
例、蒸留水）、水溶性溶剤（例、生理的食塩水、リンゲ
ル液）、油性溶剤（例、ゴマ油、オリーブ油）等の溶剤
、または所望により溶解補助剤（例、サリチル酸ナトリ
ウム、酢酸ナトリウム）、緩衝剤（例、クエン酸ナトリ
ウム、グリセリン）、等張化剤（例、ブドウ糖、転化糖
）、安定剤（例、ヒト血清アルブミン、ボリュチレング
リコール）、保存剤（例、ベンジルアルコール、フェノ
ール）、無痛化剤（例、塩化ベンザルコニウム、塩酸プ
ロ力イン）等の添加剤を用いて、常套手段により製造さ
れる。

また、該水溶液におけるｐＨは、約３〜８に、さらに好
ましくは約５〜７に調整される。上記ｐＨ範囲に調整す
るためには、たとえば稀塩酸や稀アルカリ（例、希水酸
化ナトリウム、希炭酸水素ナトリウム）等を添加するこ
とにより行われる。

また、本発明の治癒促進剤が固型状のものは、たとえば
各成分を凍結乾燥するか、あるいは固型状（例、粉末状
）の各成分に希釈剤（例、蒸留水、生理的食塩水、ブド
ウ糖）、賦形剤（例、カルボキシメチルセルロ−ス ウム）、保存剤Ｃ例、ベンジルアルコール、塩化ベンザ
ルコニウム、フェノール）、ｍｉ化剤に’Ｆ　ウ糖、グ
ルコン酸カルシウム、塩酸プロ力イン）等を混合し、常
套手段により固型状製剤に製造することができる。

本発明の治癒促進剤の製剤化にあたって、ＮＧＦおよび
／またはＦＧＦを含有する水溶剤に、さらにヒト血清ア
ルブミン（ＨＳＡ）を配合し、溶液状態でｐＨ約３〜８
を示すように調整すると、保存中および凍結や凍結乾燥
操作におけるＮＧＦならびにＦＧＦ活性の低下が少なく
、また凍結乾燥品においてはその再溶解時の溶状が澄明
であるので好都合である。

ＨＳＡとしては、いかなるものでもよいが、本組成物を
臨床応用するためには、非経口投与に用いる程度の品質
のものが好ましい。

例えば、雌康人血漿を原料としてＣｏｈｎのユタノール
分画第６法によって、分画精製したものが用いられる。

また安定剤としてアセチルトリプトファンナトリウムや
、カプリル酸ナトリウムを含有するものであってもよい
。

Ｈ５Ａは、各成分を水溶液とした場合に、水溶液１！ｌ
！１２当り約０　、１　ｍｇ〜５０ｍｇ、とりわけ約０
．５ｍｇ〜２０ｍｇ含有させることが好ましい。

本発明の治癒促進剤の製剤化にあたっては、上記ＩＳＡ
に加えさらにグリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸
、アラニン、プロリンなどのアミノ酸とりわけモノアミ
ノ脂肪族アミノ酸、もしくは環状アミノ酸、ブドウ糖、
マンノースなどの単糖類、ソルビット、マンニット等の
糖アルコール類、およびこれらの生理学的に許容できる
塩もしくは誘導体の１種または２種以上を配合してもよ
い。

上記配合剤は、各成分を水溶液とした場合に、水溶液１
顧当り、単糖類または糖アルコール類に関しては約１０
〜ｌｏｏｍｇ、アミノ酸に関しては約５〜５０ｍｇ配合
することが好ましい。

本発明の治癒促進剤を製剤化したもの（ＨＳ　Ａを配合
したもの）を溶液状態でｐＨ約３〜８．好ましくはｐＨ
約５〜７に示すように調整するために、グルタミン酸な
どの酸性アミノ酸を配合する場合は該物質を上記所定量
加えることにより所定のｐＨに調整でき、また所望によ
り、または上記酸性アミノ酸を配合しない場合は塩酸、
リン酸等の鉱酸、もしくはコハク酸、酒石酸、クエン酸
等の緩衝剤で所定のｐＨに調整する。

本発明の始値促進剤を用いる場合には、該組成物が水溶
液のものである場合には、そのまま塗布、散布、浸漬、
注射用溶解液として用いる。

該組成物が固型状のものである場合ｊ二は、前記した適
当な溶剤を用いて溶解し、塗布、散布、浸漬、注射用溶
解液として用いる。なお、所望により前記したと同様の
単糖類、糖アルコール類、アミノ酸等を含有し、前記と
同様にｐＨ調整された溶解液で溶解後便用することも出
来る。

上記の本発明の製剤を製造するにあたっては、通常用い
られる常套手段が採用される。

本発明のＮＧＦとＦＧＦとを組合わせてなる動物組織損
傷の治癒促進剤は、それぞれの単独使用の場合よりも、
格別に顕著な神経細胞の延命、神経突起の伸長および血
管新生作用を示す。特に、移植組織の定着を高めたり、
手術後の組織の変性破壊を最小限にとめることができる
。

したがって、本発明の治癒促進剤は、動物組織の損傷の
治療や、動物組織の移植の前処理剤として有利に用いる
ことができる。

寒五貝 以下に寅験例および実施例を挙げて、本発明をより具体
的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものでは
ない。

なお以下に示す実施例で用いられたＮＧＦは、Ｂｏｃｃ
ｈｉｎｉ　らの方法［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａ
ｄ、　Ｓｃｉ。

ＵＳＡ　、−艷４，７８７−７９４（１９６９）］に記
載の方法により製造されたものであり、ｂＦＧＦはアマ
ジャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）社販売のコードＡＲＮ　　
１２１００　（ＡＭＧＥＮ　Ｂｊｏ］ｏｇｉｃａｌ、　
Ｃａ１ｉｆｏｒｎｉａ製造。

ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔウシｂ　Ｆ　ＧＦ）を用い！二
。

実施例１　（移植ラット上類神経節に対するＮＧＦｉ３
よびｂＦＧＦの効果） ３適冷雄性Ｗｉｓｔｅｒう７トより上類神経節を摘出し
、］μｇ／ｍ（２のＮＧＦおよびｌａｇ／ａｎのｂＦＧ
Ｆを含む１０％胎児牛血清を添付したイーグルＭＥＭ培
地中で室温下３０分間インキュベートした後、去勢され
た成熟雄ラット（体重２００−２５０ｇ）の第三脳室に
移植した。２週間後、移植上類神経節を取り出し、１０
％ホルマリンにより固定して厚さ８μｍの連続パラフィ
ン切片を作製した。この切片をニラスル染色した後、顕
微鏡下で生存ニューロン数を数え、単位体積当りの生存
ニューロン数を移植効率の指標とした。結果を第１表に
示す。

ネ；　　Ｐ＜０．０５ 第１表から明らかな如く、ＮＧＦおよびｂＦＧＦで同時
にｖＩ処理すると、移植された上頚神経節の神経細胞の
生存は著しく有意に増加した。さらにこれらの移植片に
は、ＮＧＦあるいは、ｂ　Ｆ　Ｇ　Ｆ単独処理群に較べ
て著名に高密度の毛細血管が観察された（次に示す第２
表及び第１図および第２図参照：第１図は薬物投与のな
い組織の顕微鏡写真を示す。第２図はＮＧＦおよびｂＦ
ＧＦ処理した組織の顕微鏡写真を示す。）。これらの毛
細血管の直径は他の単独処理群のそれより大きかった。

第２表 ＊、　Ｐ＜０．０５ 統計は、−元配置分散分析後の　Ｄｕｎｃｕｎ’　ｓａ
＋ｕｌｔｉｐｌｅ　ｒａｎｇｅ　ｔｅｓｔにて行った。

ＮＧＦおよびｂＦＧＦ併用群は５％の危険率をもって未
処置群と比して有意に毛細血管数の増加、神経細胞生存
率の上昇をもたらした。

また、ＮＧＦ処理処理土びＮＧＦ十ｂＦＧＦ併用群は、
ＭａｎｎｗｈｉｔｎｙのＵ　ｔｅｓｔにより、対照群（
未処理群）よりも有意に（危険率く５％）神経突起伸長
作用を示した。

製剤例１ １１！１２当たりＮＧＦ　ｌμｇおよびｂＦＧＦ１μｇ
を含有するように、これらの成分を水に溶解し、さらに
胎児牛血清を１０％となるように添加し、ＮＧＦおよび
ｂＦＧＦを含有する水溶液　（ｐＨ７）を調整し、浸漬
用水溶液とする。

発明の効果 本発明のＮＧＦとＦＧＦとを組合せてなる動物組織損傷
の始値促進剤は、それぞれの単独使用の場合よりも、格
別に顕著な神経細胞の延命、神経突起の伸長および血管
新生作用を示す。したがって、本発明の動物組織損傷の
始値促進剤は、各種損傷の治療剤や移植の前処理剤とし
て有利に用いることができる。

【図面の簡単な説明】 第１図は、実施例１で得られた、薬物投与のない組織を
示す、生物の形態の顕微鏡写真である。 第２図は、実施例１で得られた、ＮＧＦおよびｂＦＧＦ
処理した組織を示す、生物の形態の顕微鏡写真である。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 神経成長因子と線維芽細胞成長因子とを組み合わせてな
   る動物組織損傷の治癒促進剤。