JPH09188630A - 膵臓機能改善剤 - Google Patents
膵臓機能改善剤Info
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- JPH09188630A JPH09188630A JP8296201A JP29620196A JPH09188630A JP H09188630 A JPH09188630 A JP H09188630A JP 8296201 A JP8296201 A JP 8296201A JP 29620196 A JP29620196 A JP 29620196A JP H09188630 A JPH09188630 A JP H09188630A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】優れた膵臓機能改善剤の提供。
【解決手段】ベータセルリン蛋白質またはそのムテイン
を含有してなる膵臓機能改善剤。 【効果】本発明の改善剤は、未分化膵臓幹細胞に作用し
て、インシュリンを産生する膵臓ベータ細胞への分化を
促進する作用を有する。また、未分化膵臓幹細胞を膵臓
の他の細胞、例えばパンクレアティックポリペプチドを
産生するＦ細胞へと分化誘導させる作用も有する。従っ
て、糖尿病（例えば、インシュリン依存性糖尿病）、糖
尿病における膵臓機能障害などの改善・治療を促進し、
膵臓の機能を改善することができる。さらに、本発明の
改善剤は、未分化型膵ガンの予防・治療剤としても有用
である。
を含有してなる膵臓機能改善剤。 【効果】本発明の改善剤は、未分化膵臓幹細胞に作用し
て、インシュリンを産生する膵臓ベータ細胞への分化を
促進する作用を有する。また、未分化膵臓幹細胞を膵臓
の他の細胞、例えばパンクレアティックポリペプチドを
産生するＦ細胞へと分化誘導させる作用も有する。従っ
て、糖尿病（例えば、インシュリン依存性糖尿病）、糖
尿病における膵臓機能障害などの改善・治療を促進し、
膵臓の機能を改善することができる。さらに、本発明の
改善剤は、未分化型膵ガンの予防・治療剤としても有用
である。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ベータセルリン蛋
白質またはそのムテインを含有する膵臓機能改善剤に関
する。
白質またはそのムテインを含有する膵臓機能改善剤に関
する。
【０００２】
【従来の技術】ベータセルリン蛋白質（以下、ＢＴＣ蛋
白質と略記する場合がある）は、トランスジェニックマ
ウス由来膵臓ベータ腫瘍細胞が産生する蛋白性因子で、
その全アミノ酸配列がｃＤＮＡの解析から明らかにされ
ている〔Shingら；サイエンス（Science），259：1604
（1993）, Sasadaら；バイオケミカル・アンド・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Bioche
m. Biophys. Res. Commun.），190：1173（1993）〕。
ＢＴＣ蛋白質は、当初マウス３Ｔ３細胞に対する増殖促
進活性をもつ因子として見いだされたが、その後、血管
平滑筋細胞、網膜色素上皮細胞に対しても増殖促進活性
を有することが見いだされた〔Shingら；サイエンス（S
cience），259：1604（1993）〕。天然に存在するヒト
ＢＴＣ蛋白質は極めて微量であり、また、これをヒトの
組織から得る試みは種々の制約によって極めて困難であ
った。しかし、最近、遺伝子工学的手法を駆使して、高
純度のヒトＢＴＣ蛋白質が多量に、かつ比較的安価に生
産されるようになった（特開平６−８７８９４）。そし
て、ＢＴＣ蛋白質が、創傷、潰瘍や血管奇形の治療、あ
るいは糖尿病において認められるアテローム性動脈硬化
症、糖尿病性網膜症のような平滑筋細胞増殖に起因する
病気の治療に使用できる競合剤（例、抗体、偽ペプチ
ド）の作成などに用いられることが報告されている（特
開平４−３５２８００および特開平６−８７８９４）。
さらに、ＢＴＣ蛋白質のｍＲＮＡは、脳以外の各種臓
器、例えば肝臓、腎臓、膵臓などで検出されていること
から、これらの臓器においても何らかの機能を果たして
いると考えられるが、その機能の詳細はほとんど明らか
にされていない。
白質と略記する場合がある）は、トランスジェニックマ
ウス由来膵臓ベータ腫瘍細胞が産生する蛋白性因子で、
その全アミノ酸配列がｃＤＮＡの解析から明らかにされ
ている〔Shingら；サイエンス（Science），259：1604
（1993）, Sasadaら；バイオケミカル・アンド・バイオ
フィジカル・リサーチ・コミュニケーションズ（Bioche
m. Biophys. Res. Commun.），190：1173（1993）〕。
ＢＴＣ蛋白質は、当初マウス３Ｔ３細胞に対する増殖促
進活性をもつ因子として見いだされたが、その後、血管
平滑筋細胞、網膜色素上皮細胞に対しても増殖促進活性
を有することが見いだされた〔Shingら；サイエンス（S
cience），259：1604（1993）〕。天然に存在するヒト
ＢＴＣ蛋白質は極めて微量であり、また、これをヒトの
組織から得る試みは種々の制約によって極めて困難であ
った。しかし、最近、遺伝子工学的手法を駆使して、高
純度のヒトＢＴＣ蛋白質が多量に、かつ比較的安価に生
産されるようになった（特開平６−８７８９４）。そし
て、ＢＴＣ蛋白質が、創傷、潰瘍や血管奇形の治療、あ
るいは糖尿病において認められるアテローム性動脈硬化
症、糖尿病性網膜症のような平滑筋細胞増殖に起因する
病気の治療に使用できる競合剤（例、抗体、偽ペプチ
ド）の作成などに用いられることが報告されている（特
開平４−３５２８００および特開平６−８７８９４）。
さらに、ＢＴＣ蛋白質のｍＲＮＡは、脳以外の各種臓
器、例えば肝臓、腎臓、膵臓などで検出されていること
から、これらの臓器においても何らかの機能を果たして
いると考えられるが、その機能の詳細はほとんど明らか
にされていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】糖尿病は、高血糖が持
続することにより様々な合併症が引き起こされることを
特徴とする疾病である。この疾病は、インシュリン依存
型、インシュリン非依存型およびその他に分類され、多
様な成因によって起こると考えられているが、基本的に
はインシュリン作用の不足により発症する。特に、イン
シュリン依存型糖尿病では産生されるインシュリン量の
絶対的な不足がその原因となっている。このような状況
において、糖尿病などを予防・治療するため、膵臓機能
を改善する薬剤の開発が望まれている。
続することにより様々な合併症が引き起こされることを
特徴とする疾病である。この疾病は、インシュリン依存
型、インシュリン非依存型およびその他に分類され、多
様な成因によって起こると考えられているが、基本的に
はインシュリン作用の不足により発症する。特に、イン
シュリン依存型糖尿病では産生されるインシュリン量の
絶対的な不足がその原因となっている。このような状況
において、糖尿病などを予防・治療するため、膵臓機能
を改善する薬剤の開発が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の課
題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、公知のＢＴＣ蛋白質
が多分化能を有する膵外分泌腺由来細胞に作用して、こ
れをベータ細胞などへと分化させるという全く新規な活
性を有することを見いだし、この知見に基づいてさらに
研究を行なった結果、本発明を完成するに至った。すな
わち、本発明は、 （１）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインを含有
してなる膵臓機能改善剤、 （２）ベータセルリン蛋白質が、配列番号：３、配列番
号：４、配列番号：５および配列番号：６からなる群か
ら選ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされるアミ
ノ酸配列を有する蛋白質である第（１）項記載の改善
剤、 （３）ベータセルリン蛋白質が、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有する蛋白質または配列番号：２で
表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質である第（１）
項記載の改善剤、 （４）ベータセルリン蛋白質のムテインが、配列番
号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列
の１〜４０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
配列番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミ
ノ酸配列の１〜４０個程度のアミノ酸が他のアミノ酸配
列に置換したアミノ酸配列、または配列番号：１もし
くは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列に１〜４０
個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を有する蛋白
質である第（１）項記載の改善剤、
題に鑑み、鋭意研究を重ねた結果、公知のＢＴＣ蛋白質
が多分化能を有する膵外分泌腺由来細胞に作用して、こ
れをベータ細胞などへと分化させるという全く新規な活
性を有することを見いだし、この知見に基づいてさらに
研究を行なった結果、本発明を完成するに至った。すな
わち、本発明は、 （１）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインを含有
してなる膵臓機能改善剤、 （２）ベータセルリン蛋白質が、配列番号：３、配列番
号：４、配列番号：５および配列番号：６からなる群か
ら選ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされるアミ
ノ酸配列を有する蛋白質である第（１）項記載の改善
剤、 （３）ベータセルリン蛋白質が、配列番号：１で表わさ
れるアミノ酸配列を有する蛋白質または配列番号：２で
表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質である第（１）
項記載の改善剤、 （４）ベータセルリン蛋白質のムテインが、配列番
号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列
の１〜４０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列、
配列番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミ
ノ酸配列の１〜４０個程度のアミノ酸が他のアミノ酸配
列に置換したアミノ酸配列、または配列番号：１もし
くは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列に１〜４０
個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を有する蛋白
質である第（１）項記載の改善剤、
【０００５】（５）ベータセルリン蛋白質のムテイン
が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端か
ら１２個または３０個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配
列を有する蛋白質である第（１）項記載の改善剤、 （６）さらにアクチビンを含有する第（１）項〜第
（５）項記載の改善剤、 （７）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインに対す
るアクチビンの含有割合が約１：１０〜１０：１である
第（６）項記載の改善剤、 （８）糖尿病の予防・治療剤である第（１）項〜第
（７）項記載の改善剤、 （９）糖尿病における膵臓機能障害または老人性のイン
シュリン分泌低下に伴う膵臓機能低下症の予防・治療剤
である第（１）項〜第（７）項記載の改善剤、 （１０）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインを含
有してなる未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分
化促進剤、 （１１）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインを含
有してなる未分化型膵ガンの予防・治療剤、および （１２）膵臓機能改善剤を製造するためのベータセルリ
ン蛋白質またはそのムテインの使用を提供する。
が、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端か
ら１２個または３０個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配
列を有する蛋白質である第（１）項記載の改善剤、 （６）さらにアクチビンを含有する第（１）項〜第
（５）項記載の改善剤、 （７）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインに対す
るアクチビンの含有割合が約１：１０〜１０：１である
第（６）項記載の改善剤、 （８）糖尿病の予防・治療剤である第（１）項〜第
（７）項記載の改善剤、 （９）糖尿病における膵臓機能障害または老人性のイン
シュリン分泌低下に伴う膵臓機能低下症の予防・治療剤
である第（１）項〜第（７）項記載の改善剤、 （１０）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインを含
有してなる未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分
化促進剤、 （１１）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインを含
有してなる未分化型膵ガンの予防・治療剤、および （１２）膵臓機能改善剤を製造するためのベータセルリ
ン蛋白質またはそのムテインの使用を提供する。
【０００６】さらに、本発明は、 （１３）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインをコ
ードするＤＮＡを含有してなる膵臓機能改善剤、 （１４）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインをコ
ードするＤＮＡを含有してなる未分化膵臓幹細胞から膵
臓ベータ細胞への分化促進剤、 （１５）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインをコ
ードするＤＮＡを含有してなる未分化型膵ガンの予防・
治療剤、および （１６）膵臓機能改善剤を製造するためのベータセルリ
ン蛋白質またはそのムテインをコードするＤＮＡの使用
を提供する。
ードするＤＮＡを含有してなる膵臓機能改善剤、 （１４）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインをコ
ードするＤＮＡを含有してなる未分化膵臓幹細胞から膵
臓ベータ細胞への分化促進剤、 （１５）ベータセルリン蛋白質またはそのムテインをコ
ードするＤＮＡを含有してなる未分化型膵ガンの予防・
治療剤、および （１６）膵臓機能改善剤を製造するためのベータセルリ
ン蛋白質またはそのムテインをコードするＤＮＡの使用
を提供する。
【０００７】本発明のＢＴＣ蛋白質またはそのムテイン
を含有する膵臓機能改善剤（以下、改善剤と略記する場
合がある）、未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への
分化促進剤（以下、分化促進剤と略記する場合がある）
または未分化型膵ガンの予防・治療剤に用いられるＢＴ
Ｃ蛋白質としては、ＢＴＣ様活性、すなわち線維芽細
胞、血管平滑筋細胞、網膜色素上皮細胞などの細胞増殖
促進作用を有する蛋白質であれば何れのものであっても
よい。また、蛋白質以外の物質、例えば、発酵生産物、
合成化合物、合成ペプチドなども用いることができる。
また、ＢＴＣ蛋白質としては、天然由来のものでもよ
く、遺伝子工学的手法によって製造された組換え型蛋白
質であってもよい。天然由来のＢＴＣ蛋白質としては、
例えば、ヒト、サル、マントヒヒ、チンパンジー、ブ
タ、ウシ、ヒツジ、ウマ、マウス、ラットなどあらゆる
哺乳動物由来のＢＴＣ蛋白質が用いられ、なかでも、ヒ
ト、マウス由来のものなどが好ましく、特にヒト由来の
ものが好適である。また、本発明の改善剤、分化促進剤
または予防・治療剤を適用する対象動物と同じ動物由来
のＢＴＣ蛋白質を用いるのが好ましい。すなわち、本発
明の改善剤等をヒトに適用する場合は、ヒト由来のＢＴ
Ｃ蛋白質を用いるのが好ましい。
を含有する膵臓機能改善剤（以下、改善剤と略記する場
合がある）、未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への
分化促進剤（以下、分化促進剤と略記する場合がある）
または未分化型膵ガンの予防・治療剤に用いられるＢＴ
Ｃ蛋白質としては、ＢＴＣ様活性、すなわち線維芽細
胞、血管平滑筋細胞、網膜色素上皮細胞などの細胞増殖
促進作用を有する蛋白質であれば何れのものであっても
よい。また、蛋白質以外の物質、例えば、発酵生産物、
合成化合物、合成ペプチドなども用いることができる。
また、ＢＴＣ蛋白質としては、天然由来のものでもよ
く、遺伝子工学的手法によって製造された組換え型蛋白
質であってもよい。天然由来のＢＴＣ蛋白質としては、
例えば、ヒト、サル、マントヒヒ、チンパンジー、ブ
タ、ウシ、ヒツジ、ウマ、マウス、ラットなどあらゆる
哺乳動物由来のＢＴＣ蛋白質が用いられ、なかでも、ヒ
ト、マウス由来のものなどが好ましく、特にヒト由来の
ものが好適である。また、本発明の改善剤、分化促進剤
または予防・治療剤を適用する対象動物と同じ動物由来
のＢＴＣ蛋白質を用いるのが好ましい。すなわち、本発
明の改善剤等をヒトに適用する場合は、ヒト由来のＢＴ
Ｃ蛋白質を用いるのが好ましい。
【０００８】具体的には、配列番号：３、配列番号：
４、配列番号：５および配列番号：６からなる群から選
ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされるアミノ酸
配列を有する蛋白質などが用いられ、より具体的には、
ヒト由来ＢＴＣ蛋白質としては、例えば、配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質（特開平６−
８７８９４）などが用いられる。マウス由来ＢＴＣ蛋白
質としては、例えば、配列番号：２で表わされるアミノ
酸配列を有する蛋白質〔Shingら；サイエンス（Scienc
e），259：1604（1993）〕などが用いられる。また、こ
れらＢＴＣ蛋白質は、アミノ酸のみで構成される単純蛋
白質であってもよく、糖蛋白質，リポ蛋白質，ヘム蛋白
質，金属蛋白質，フラビン蛋白質，リン蛋白質などの複
合蛋白質であってもよい。糖蛋白質である場合、糖鎖と
しては、例えば、Ｄ−マンノース，Ｄ−ガラクトース，
Ｌ−フルクトースなどの中性糖、Ｄ−グルコサミン，Ｄ
−ガラクトサミンなどのアミノ糖、およびシアル酸など
が挙げられる。
４、配列番号：５および配列番号：６からなる群から選
ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされるアミノ酸
配列を有する蛋白質などが用いられ、より具体的には、
ヒト由来ＢＴＣ蛋白質としては、例えば、配列番号：１
で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質（特開平６−
８７８９４）などが用いられる。マウス由来ＢＴＣ蛋白
質としては、例えば、配列番号：２で表わされるアミノ
酸配列を有する蛋白質〔Shingら；サイエンス（Scienc
e），259：1604（1993）〕などが用いられる。また、こ
れらＢＴＣ蛋白質は、アミノ酸のみで構成される単純蛋
白質であってもよく、糖蛋白質，リポ蛋白質，ヘム蛋白
質，金属蛋白質，フラビン蛋白質，リン蛋白質などの複
合蛋白質であってもよい。糖蛋白質である場合、糖鎖と
しては、例えば、Ｄ−マンノース，Ｄ−ガラクトース，
Ｌ−フルクトースなどの中性糖、Ｄ−グルコサミン，Ｄ
−ガラクトサミンなどのアミノ糖、およびシアル酸など
が挙げられる。
【０００９】ＢＴＣ蛋白質のムテインとしては、例え
ば、上記のＢＴＣ蛋白質の少なくとも１個の構成アミノ
酸が欠失している欠失型ムテイン、ＢＴＣ蛋白質の少な
くとも１個の構成アミノ酸が他のアミノ酸に置換してい
る置換型ムテイン、ＢＴＣ蛋白質に少なくとも１個のア
ミノ酸が付加している付加型ムテインなどが用いられ
る。アミノ酸の欠失、置換または付加の数は、ＢＴＣ蛋
白質が本来有する作用を失わない限り何個でもよい。具
体的には、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わ
されるアミノ酸配列の１〜４０個程度のアミノ酸が欠失
したアミノ酸配列、配列番号：１もしくは配列番号：
２で表わされるアミノ酸配列の１〜４０個、好ましくは
１〜９個程度のアミノ酸が他のアミノ酸配列に置換した
アミノ酸配列、または配列番号：１もしくは配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列に１〜４０個、好まし
くは１〜９個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を
有する蛋白質などが用いられ、なかでも、次の部分アミ
ノ酸配列、 His Phe Ser Arg Cys Pro Lys Gln Tyr Lys His Tyr
Cys Ile（配列番号：３）、 Gly Arg Cys Arg Phe Val Val（配列番号：４）、 Glu Gln Thr Pro Ser Cys（配列番号：５）、および Gly Ala Arg Cys Glu Arg Val Asp Leu Phe Tyr（配
列番号：６）からなる群から選ばれる少なくとも１つの
アミノ酸配列を有する蛋白質などが好ましい。これらの
ムテインの中でも、欠失型ムテインなどが好ましく、例
えば、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わされる
アミノ酸配列のＮ末端から１〜４０個程度のアミノ酸が
欠失したアミノ酸配列を有する蛋白質などが好ましい。
ば、上記のＢＴＣ蛋白質の少なくとも１個の構成アミノ
酸が欠失している欠失型ムテイン、ＢＴＣ蛋白質の少な
くとも１個の構成アミノ酸が他のアミノ酸に置換してい
る置換型ムテイン、ＢＴＣ蛋白質に少なくとも１個のア
ミノ酸が付加している付加型ムテインなどが用いられ
る。アミノ酸の欠失、置換または付加の数は、ＢＴＣ蛋
白質が本来有する作用を失わない限り何個でもよい。具
体的には、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わ
されるアミノ酸配列の１〜４０個程度のアミノ酸が欠失
したアミノ酸配列、配列番号：１もしくは配列番号：
２で表わされるアミノ酸配列の１〜４０個、好ましくは
１〜９個程度のアミノ酸が他のアミノ酸配列に置換した
アミノ酸配列、または配列番号：１もしくは配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列に１〜４０個、好まし
くは１〜９個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を
有する蛋白質などが用いられ、なかでも、次の部分アミ
ノ酸配列、 His Phe Ser Arg Cys Pro Lys Gln Tyr Lys His Tyr
Cys Ile（配列番号：３）、 Gly Arg Cys Arg Phe Val Val（配列番号：４）、 Glu Gln Thr Pro Ser Cys（配列番号：５）、および Gly Ala Arg Cys Glu Arg Val Asp Leu Phe Tyr（配
列番号：６）からなる群から選ばれる少なくとも１つの
アミノ酸配列を有する蛋白質などが好ましい。これらの
ムテインの中でも、欠失型ムテインなどが好ましく、例
えば、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わされる
アミノ酸配列のＮ末端から１〜４０個程度のアミノ酸が
欠失したアミノ酸配列を有する蛋白質などが好ましい。
【００１０】より具体的には、ＢＴＣ蛋白質の欠失型ム
テインとしては、例えば、配列番号：１もしくは配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個ま
たは３０個のアミノ酸を欠失したアミノ酸配列を有する
ヒトＢＴＣ蛋白質の欠失型ムテインなどが用いられる
〔Watanabeら; ジャーナル・オブ・バイオケミストリー
（Journal of Biochemistry），269：9966 (1994）〕。
特に、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端
から１２個または３０個のアミノ酸を欠失したアミノ酸
配列を有するヒトＢＴＣ蛋白質の欠失型ムテインが好適
である。その他のＢＴＣ蛋白質のムテインとしては、Ｂ
ＴＣ蛋白質のＮ末端がアシル化されたもの、グリコシル
化されたもの、ポリエチレングリコール誘導体などの化
学修飾されたものなど、ＢＴＣ蛋白質の有する作用を失
わない限り何れのものでもよい。また、上記のＢＴＣ蛋
白質またはそのムテインは、Ｃ末端のカルボキシル基が
アミド化またはエステル化されていてもよい。上記のＢ
ＴＣ蛋白質またはそのムテインの塩としては、とりわけ
薬理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩
としては、例えば、無機酸（例、塩酸、リン酸、臭化水
素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例、酢酸、ギ
酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、
酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いら
れる。
テインとしては、例えば、配列番号：１もしくは配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個ま
たは３０個のアミノ酸を欠失したアミノ酸配列を有する
ヒトＢＴＣ蛋白質の欠失型ムテインなどが用いられる
〔Watanabeら; ジャーナル・オブ・バイオケミストリー
（Journal of Biochemistry），269：9966 (1994）〕。
特に、配列番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端
から１２個または３０個のアミノ酸を欠失したアミノ酸
配列を有するヒトＢＴＣ蛋白質の欠失型ムテインが好適
である。その他のＢＴＣ蛋白質のムテインとしては、Ｂ
ＴＣ蛋白質のＮ末端がアシル化されたもの、グリコシル
化されたもの、ポリエチレングリコール誘導体などの化
学修飾されたものなど、ＢＴＣ蛋白質の有する作用を失
わない限り何れのものでもよい。また、上記のＢＴＣ蛋
白質またはそのムテインは、Ｃ末端のカルボキシル基が
アミド化またはエステル化されていてもよい。上記のＢ
ＴＣ蛋白質またはそのムテインの塩としては、とりわけ
薬理学的に許容される酸付加塩が好ましい。この様な塩
としては、例えば、無機酸（例、塩酸、リン酸、臭化水
素酸、硫酸）との塩、あるいは有機酸（例、酢酸、ギ
酸、プロピオン酸、フマル酸、マレイン酸、コハク酸、
酒石酸、クエン酸、リンゴ酸、蓚酸、安息香酸、メタン
スルホン酸、ベンゼンスルホン酸）との塩などが用いら
れる。
【００１１】本発明の改善剤、分化促進剤または未分化
型膵ガンの予防・治療剤に用いられるＢＴＣ蛋白質また
はそのムテインのうち、配列番号：１で表わされるアミ
ノ酸配列を有するヒトＢＴＣ蛋白質、配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個または３０個
のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列を有する欠失型ヒト
ＢＴＣムテイン、および配列番号：２で表わされるアミ
ノ酸配列を有するマウスＢＴＣ蛋白質は公知であるが、
それら以外のＢＴＣ蛋白質およびそのムテインは、自体
公知の方法あるいはそれに準じる方法に従って製造する
ことができる。例えば、上記ＢＴＣ蛋白質は、自体公知
のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明のペプチ
ドまたは前駆体を適当なペプチダーゼで切断することに
よって製造することができる。ペプチドの合成法として
は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによって
も良い。すなわち、本発明のペプチドまたは前駆体を構
成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを
縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離
することにより目的のペプチドを製造することができ
る。公知の縮合方法や保護基の脱離としてはたとえば、
以下の〜に記載された方法が挙げられる。
型膵ガンの予防・治療剤に用いられるＢＴＣ蛋白質また
はそのムテインのうち、配列番号：１で表わされるアミ
ノ酸配列を有するヒトＢＴＣ蛋白質、配列番号：１で表
わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個または３０個
のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列を有する欠失型ヒト
ＢＴＣムテイン、および配列番号：２で表わされるアミ
ノ酸配列を有するマウスＢＴＣ蛋白質は公知であるが、
それら以外のＢＴＣ蛋白質およびそのムテインは、自体
公知の方法あるいはそれに準じる方法に従って製造する
ことができる。例えば、上記ＢＴＣ蛋白質は、自体公知
のペプチドの合成法に従って、あるいは本発明のペプチ
ドまたは前駆体を適当なペプチダーゼで切断することに
よって製造することができる。ペプチドの合成法として
は、例えば、固相合成法、液相合成法のいずれによって
も良い。すなわち、本発明のペプチドまたは前駆体を構
成し得る部分ペプチドもしくはアミノ酸と残余部分とを
縮合させ、生成物が保護基を有する場合は保護基を脱離
することにより目的のペプチドを製造することができ
る。公知の縮合方法や保護基の脱離としてはたとえば、
以下の〜に記載された方法が挙げられる。
【００１２】M. Bodanszky および M.A. Ondetti、ペ
プチド シンセシス (Peptide Synthesis), Interscienc
e Publishers, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ ペプチド(The Peptide),
Academic Press, New York (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 ペプ
チドまたは前駆体の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成
広川書店 また、反応後は通常の精製法、たとえば、溶媒抽出・蒸
留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ
ー・再結晶などを組み合わせて本発明のペプチドまたは
前駆体を精製単離することができる。上記方法で得られ
るペプチドまたは前駆体が遊離体である場合は、公知の
方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に
塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換
することができる。
プチド シンセシス (Peptide Synthesis), Interscienc
e Publishers, New York (1966年) SchroederおよびLuebke、ザ ペプチド(The Peptide),
Academic Press, New York (1965年) 泉屋信夫他、ペプチド合成の基礎と実験、 丸善(株)
（1975年） 矢島治明 および榊原俊平、生化学実験講座 1、 ペプ
チドまたは前駆体の化学IV、 205、(1977年) 矢島治明監修、続医薬品の開発 第14巻 ペプチド合成
広川書店 また、反応後は通常の精製法、たとえば、溶媒抽出・蒸
留・カラムクロマトグラフィー・液体クロマトグラフィ
ー・再結晶などを組み合わせて本発明のペプチドまたは
前駆体を精製単離することができる。上記方法で得られ
るペプチドまたは前駆体が遊離体である場合は、公知の
方法によって適当な塩に変換することができるし、逆に
塩で得られた場合は、公知の方法によって遊離体に変換
することができる。
【００１３】本発明の改善剤、分化促進剤または未分化
型膵ガンの予防・治療剤には、上記したＢＴＣ蛋白質ま
たはそのムテインの他に、アクチビンを配合することが
できる。アクチビンは、卵胞刺激ホルモンの分泌を促進
するホルモンとして知られており（実験医学，Vol.10，
No.15，1992）、例えば、アクチビンＡ、アクチビン
Ｂ、アクチビンＡＢなどが用いられ、なかでも、アクチ
ビンＡが好ましい。これらのアクチビンは市販のもの
（オーストラル、バイオロジカル社製）を用いることが
できる。アクチビン自体はＢＴＣ様活性を有していない
が、ＢＴＣ蛋白質の作用を増強する作用を有しているの
で、ＢＴＣ蛋白質と併用するのが好ましい。また、アク
チビンは本発明の改善剤等に配合して用いるのが好まし
いが、ＢＴＣ蛋白質とは別個に製剤化して、ＢＴＣ蛋白
質を含有する製剤とアクチビンを含有する製剤とを併用
することによって、ＢＴＣ蛋白質の作用を増強させるこ
ともできる。
型膵ガンの予防・治療剤には、上記したＢＴＣ蛋白質ま
たはそのムテインの他に、アクチビンを配合することが
できる。アクチビンは、卵胞刺激ホルモンの分泌を促進
するホルモンとして知られており（実験医学，Vol.10，
No.15，1992）、例えば、アクチビンＡ、アクチビン
Ｂ、アクチビンＡＢなどが用いられ、なかでも、アクチ
ビンＡが好ましい。これらのアクチビンは市販のもの
（オーストラル、バイオロジカル社製）を用いることが
できる。アクチビン自体はＢＴＣ様活性を有していない
が、ＢＴＣ蛋白質の作用を増強する作用を有しているの
で、ＢＴＣ蛋白質と併用するのが好ましい。また、アク
チビンは本発明の改善剤等に配合して用いるのが好まし
いが、ＢＴＣ蛋白質とは別個に製剤化して、ＢＴＣ蛋白
質を含有する製剤とアクチビンを含有する製剤とを併用
することによって、ＢＴＣ蛋白質の作用を増強させるこ
ともできる。
【００１４】本発明のＢＴＣ蛋白質またはそのムテイン
をコードするＤＮＡを含有する膵臓機能改善剤（以下、
ＤＮＡ含有改善剤と略記する場合がある）、未分化膵臓
幹細胞から膵臓ベータ細胞への分化促進剤（以下、ＤＮ
Ａ含有分化促進剤と略記する場合がある）または未分化
型膵ガンの予防・治療剤（以下、ＤＮＡ含有未分化型膵
ガンの予防・治療剤と略記する場合がある）に用いられ
るＢＴＣ蛋白質またはそのムテインをコードするＤＮＡ
としては、前述したＢＴＣ蛋白質またはそのムテインを
コードする塩基配列を含有するＤＮＡであればいかなる
ものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮ
Ａライブラリー、前記した動物の細胞・組織由来のｃＤ
ＮＡ、前記した動物の細胞・組織由来のｃＤＮＡライブ
ラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに
使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミ
ド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよ
い。また、前記した動物の細胞・組織よりｍＲＮＡ画分
を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Po
lymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称
する）によって増幅することもできる。具体的には、配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するヒト由来
ＢＴＣ蛋白質をコードするＤＮＡとしては、例えば、配
列番号：７で表わされる塩基配列を有するＤＮＡ（特開
平６−８７８９４）などが用いられ、配列番号：２で表
わされるアミノ酸配列を有するマウス由来ＢＴＣ蛋白質
をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：８で
表わされる塩基配列を有するＤＮＡ〔シング（Shing）
等；サイエンス（Science），259：1604（1993）〕など
が用いられる。
をコードするＤＮＡを含有する膵臓機能改善剤（以下、
ＤＮＡ含有改善剤と略記する場合がある）、未分化膵臓
幹細胞から膵臓ベータ細胞への分化促進剤（以下、ＤＮ
Ａ含有分化促進剤と略記する場合がある）または未分化
型膵ガンの予防・治療剤（以下、ＤＮＡ含有未分化型膵
ガンの予防・治療剤と略記する場合がある）に用いられ
るＢＴＣ蛋白質またはそのムテインをコードするＤＮＡ
としては、前述したＢＴＣ蛋白質またはそのムテインを
コードする塩基配列を含有するＤＮＡであればいかなる
ものであってもよい。また、ゲノムＤＮＡ、ゲノムＤＮ
Ａライブラリー、前記した動物の細胞・組織由来のｃＤ
ＮＡ、前記した動物の細胞・組織由来のｃＤＮＡライブ
ラリー、合成ＤＮＡのいずれでもよい。ライブラリーに
使用するベクターは、バクテリオファージ、プラスミ
ド、コスミド、ファージミドなどいずれであってもよ
い。また、前記した動物の細胞・組織よりｍＲＮＡ画分
を調製したものを用いて直接Reverse Transcriptase Po
lymerase Chain Reaction（以下、ＲＴ-ＰＣＲ法と略称
する）によって増幅することもできる。具体的には、配
列番号：１で表わされるアミノ酸配列を有するヒト由来
ＢＴＣ蛋白質をコードするＤＮＡとしては、例えば、配
列番号：７で表わされる塩基配列を有するＤＮＡ（特開
平６−８７８９４）などが用いられ、配列番号：２で表
わされるアミノ酸配列を有するマウス由来ＢＴＣ蛋白質
をコードするＤＮＡとしては、例えば、配列番号：８で
表わされる塩基配列を有するＤＮＡ〔シング（Shing）
等；サイエンス（Science），259：1604（1993）〕など
が用いられる。
【００１５】ＢＴＣ蛋白質またはそのムテインをコード
するＤＮＡのクローニングの手段としては、ＢＴＣ蛋白
質またはそのムテインをコードするＤＮＡの部分塩基配
列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いて、ＰＣＲ法に
よって前記ＤＮＡライブラリー等から目的とするＤＮＡ
を増幅するか、または適当なベクターに組み込んだＤＮ
ＡをＢＴＣ蛋白質またはそのムテインの一部あるいは全
領域を有するＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標
識したものとのハイブリダイゼーションによって選別す
ることができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例
えば MolecularCloning ２nd（ジェー・サムブロック
（J. Sambrook）等、Cold Spring HarborLab. Press, 1
989年）に記載の方法などに従って行なわれる。また、
市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書
に記載の方法に従って行なうことができる。具体的に
は、特開平４−３５２８００、特開平６−８７８９４、
サイエンス（Science），259：1604（1993）などに記載
の方法あるいはそれに準ずる方法に従って、ＢＴＣ蛋白
質またはそのムテインをコードするＤＮＡのクローニン
グすることができる。クローン化されたＢＴＣ蛋白質ま
たはそのムテインをコードするＤＮＡは、目的によりそ
のまま、または所望により制限酵素で消化したり、リン
カーを付加したりして使用することができる。該ＤＮＡ
はその５'末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有
し、また３'末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡ
Ａ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの
翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡ
アダプターを用いて付加することもできる。ＢＴＣ蛋白
質またはそのムテインをコードするＤＮＡの発現ベクタ
ーは、例えば、（イ）ＢＴＣ蛋白質またはそのムテイン
をコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出
し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロ
モーターの下流に連結することにより製造することがで
きる。具体的には、特開平４−３５２８００、特開平６
−８７８９４、サイエンス（Science），259：1604（19
93）などに記載の方法あるいはそれに準ずる方法に従っ
て、ＢＴＣ蛋白質またはそのムテインをコードするＤＮ
Ａの発現ベクターを製造することができる。
するＤＮＡのクローニングの手段としては、ＢＴＣ蛋白
質またはそのムテインをコードするＤＮＡの部分塩基配
列を有する合成ＤＮＡプライマーを用いて、ＰＣＲ法に
よって前記ＤＮＡライブラリー等から目的とするＤＮＡ
を増幅するか、または適当なベクターに組み込んだＤＮ
ＡをＢＴＣ蛋白質またはそのムテインの一部あるいは全
領域を有するＤＮＡ断片もしくは合成ＤＮＡを用いて標
識したものとのハイブリダイゼーションによって選別す
ることができる。ハイブリダイゼーションの方法は、例
えば MolecularCloning ２nd（ジェー・サムブロック
（J. Sambrook）等、Cold Spring HarborLab. Press, 1
989年）に記載の方法などに従って行なわれる。また、
市販のライブラリーを使用する場合、添付の使用説明書
に記載の方法に従って行なうことができる。具体的に
は、特開平４−３５２８００、特開平６−８７８９４、
サイエンス（Science），259：1604（1993）などに記載
の方法あるいはそれに準ずる方法に従って、ＢＴＣ蛋白
質またはそのムテインをコードするＤＮＡのクローニン
グすることができる。クローン化されたＢＴＣ蛋白質ま
たはそのムテインをコードするＤＮＡは、目的によりそ
のまま、または所望により制限酵素で消化したり、リン
カーを付加したりして使用することができる。該ＤＮＡ
はその５'末端側に翻訳開始コドンとしてのＡＴＧを有
し、また３'末端側には翻訳終止コドンとしてのＴＡ
Ａ、ＴＧＡまたはＴＡＧを有していてもよい。これらの
翻訳開始コドンや翻訳終止コドンは、適当な合成ＤＮＡ
アダプターを用いて付加することもできる。ＢＴＣ蛋白
質またはそのムテインをコードするＤＮＡの発現ベクタ
ーは、例えば、（イ）ＢＴＣ蛋白質またはそのムテイン
をコードするＤＮＡから目的とするＤＮＡ断片を切り出
し、（ロ）該ＤＮＡ断片を適当な発現ベクター中のプロ
モーターの下流に連結することにより製造することがで
きる。具体的には、特開平４−３５２８００、特開平６
−８７８９４、サイエンス（Science），259：1604（19
93）などに記載の方法あるいはそれに準ずる方法に従っ
て、ＢＴＣ蛋白質またはそのムテインをコードするＤＮ
Ａの発現ベクターを製造することができる。
【００１６】
【発明の実施の形態】本発明のＢＴＣ蛋白質またはその
ムテインを含有する膵臓機能改善剤、分化促進剤または
未分化型膵ガンの予防・治療剤は、公知の製剤学的製造
法に準じ、所望により製剤学的に許容される担体（希釈
剤、賦形剤を含む）などを用いて製造することができ
る。本発明の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガン
の予防・治療剤を、例えば、注射用水溶液とする場合に
は、水溶性剤（例、蒸留水）、水溶性溶剤（例、生理食
塩水、リンゲル液）、油性溶剤（例、ゴマ油、オリーブ
油）などの溶剤、または所望により溶解補助剤（例、サ
リチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム）、緩衝剤（例、
ブドウ糖、転化糖）、安定剤（例、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコール）、保存剤（例、ベンジル
アルコール、フェノール）、無痛化剤（例、塩化ベンザ
ルコニウム、塩酸プロカイン）などの添加剤を用いて、
通常の手段により製造することができる。該注射用水溶
液の液性は、ｐＨ約３〜８に、好ましくはｐＨ約５〜７
に調整する。上記ｐＨ範囲に液性を調整するためには、
例えば、希塩酸や希アルカリ（例、希水酸化ナトリウ
ム、希炭酸水素ナトリウム）などを添加してもよい。本
発明の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予防
・治療剤におけるＢＴＣ蛋白質の含有量は、製剤全体に
対して通常約１〜９５重量％、好ましくは約１０〜８０
重量％、さらに好ましくは約２０〜７０重量％である。
本発明の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予
防・治療剤におけるアクチビンの含有量は、製剤全体に
対して通常約９０重量％以下、好ましくは約８０重量％
以下である。ＢＴＣ蛋白質とアクチビンの配合割合は、
通常約１：１０〜１０：１、好ましくは約１：５〜５：
１、さらに好ましくは約１：２〜２：１であるが、特
に、約１：２の割合で使用するのが好ましい。その他の
成分（担体など）の含有量は、ＢＴＣ蛋白質の作用を阻
害しない限り、適宜選択することができるが、製剤全体
に対して、通常約０.０１〜９０重量％、好ましくは約
０.１〜８０重量％である。
ムテインを含有する膵臓機能改善剤、分化促進剤または
未分化型膵ガンの予防・治療剤は、公知の製剤学的製造
法に準じ、所望により製剤学的に許容される担体（希釈
剤、賦形剤を含む）などを用いて製造することができ
る。本発明の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガン
の予防・治療剤を、例えば、注射用水溶液とする場合に
は、水溶性剤（例、蒸留水）、水溶性溶剤（例、生理食
塩水、リンゲル液）、油性溶剤（例、ゴマ油、オリーブ
油）などの溶剤、または所望により溶解補助剤（例、サ
リチル酸ナトリウム、酢酸ナトリウム）、緩衝剤（例、
ブドウ糖、転化糖）、安定剤（例、ヒト血清アルブミ
ン、ポリエチレングリコール）、保存剤（例、ベンジル
アルコール、フェノール）、無痛化剤（例、塩化ベンザ
ルコニウム、塩酸プロカイン）などの添加剤を用いて、
通常の手段により製造することができる。該注射用水溶
液の液性は、ｐＨ約３〜８に、好ましくはｐＨ約５〜７
に調整する。上記ｐＨ範囲に液性を調整するためには、
例えば、希塩酸や希アルカリ（例、希水酸化ナトリウ
ム、希炭酸水素ナトリウム）などを添加してもよい。本
発明の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予防
・治療剤におけるＢＴＣ蛋白質の含有量は、製剤全体に
対して通常約１〜９５重量％、好ましくは約１０〜８０
重量％、さらに好ましくは約２０〜７０重量％である。
本発明の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予
防・治療剤におけるアクチビンの含有量は、製剤全体に
対して通常約９０重量％以下、好ましくは約８０重量％
以下である。ＢＴＣ蛋白質とアクチビンの配合割合は、
通常約１：１０〜１０：１、好ましくは約１：５〜５：
１、さらに好ましくは約１：２〜２：１であるが、特
に、約１：２の割合で使用するのが好ましい。その他の
成分（担体など）の含有量は、ＢＴＣ蛋白質の作用を阻
害しない限り、適宜選択することができるが、製剤全体
に対して、通常約０.０１〜９０重量％、好ましくは約
０.１〜８０重量％である。
【００１７】製剤化にあたっては、ＢＴＣ蛋白質を含有
する水溶液に、さらにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を
配合し、液性をｐＨ約３〜８になるように調整すると、
保存中のＢＴＣ蛋白質の活性の低下が少なく好都合であ
る。ＨＳＡとしては、いかなるものでもよいが、本発明
の改善剤等を臨床に適用するためには、非経口投与に用
いられる程度の品質のものが好ましい。例えば、健康人
血漿を材料としてCohnのエタノール分画第６法によって
分画精製したものなどが用いられる。また、安定化剤と
して、アセチルトリプトファン・ナトリウム、カプリル
酸ナトリウムを含有するものであってもよい。ＨＳＡ
は、水溶液とした場合、水溶液１ｍｌ当たり約０.１ｍ
ｇ〜５０ｍｇ、とりわけ約０.５ｍｇ〜２０ｍｇ含有さ
せることが好ましい。本発明の改善剤、分化促進剤また
は未分化型膵ガンの予防・治療剤の製剤化にあたって
は、上記ＨＳＡに加えるに、さらにグリシン，グルタミ
ン酸，アスパラギン酸，アラニン，プロリンなどのアミ
ノ酸、モノアミノ脂肪族アミノ酸、環状アミノ酸、ブド
ウ糖，マンノースなどの単糖類、ソルビット，マンニッ
トなどの糖アルコール類、およびこれらの生理学的に許
容される配合できる塩もしくは誘導体の１種または２種
以上を配合してもよい。上記配合剤は、各成分を水溶液
とする場合、水溶液１ｍｌ当たり、単糖類または糖アル
コール類に関しては約１０〜１００ｍｇ、アミノ酸に関
しては約５〜５０ｍｇ配合することが好ましい。本発明
の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予防・治
療剤を製剤化したもの（ＨＳＡを配合したもの）を溶液
状態でｐＨ約５〜７になるように調整するために、グル
タミン酸などの酸性アミノ酸を配合する場合には、該物
質を上記所定量加えることにより所定の液性に調整で
き、また、所望により、上記酸性アミノ酸を配合しない
場合には、塩酸、リン酸などの鉱酸、もしくはコハク
酸、酒石酸、クエン酸などの緩衝剤で所定の液性に調整
する。
する水溶液に、さらにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を
配合し、液性をｐＨ約３〜８になるように調整すると、
保存中のＢＴＣ蛋白質の活性の低下が少なく好都合であ
る。ＨＳＡとしては、いかなるものでもよいが、本発明
の改善剤等を臨床に適用するためには、非経口投与に用
いられる程度の品質のものが好ましい。例えば、健康人
血漿を材料としてCohnのエタノール分画第６法によって
分画精製したものなどが用いられる。また、安定化剤と
して、アセチルトリプトファン・ナトリウム、カプリル
酸ナトリウムを含有するものであってもよい。ＨＳＡ
は、水溶液とした場合、水溶液１ｍｌ当たり約０.１ｍ
ｇ〜５０ｍｇ、とりわけ約０.５ｍｇ〜２０ｍｇ含有さ
せることが好ましい。本発明の改善剤、分化促進剤また
は未分化型膵ガンの予防・治療剤の製剤化にあたって
は、上記ＨＳＡに加えるに、さらにグリシン，グルタミ
ン酸，アスパラギン酸，アラニン，プロリンなどのアミ
ノ酸、モノアミノ脂肪族アミノ酸、環状アミノ酸、ブド
ウ糖，マンノースなどの単糖類、ソルビット，マンニッ
トなどの糖アルコール類、およびこれらの生理学的に許
容される配合できる塩もしくは誘導体の１種または２種
以上を配合してもよい。上記配合剤は、各成分を水溶液
とする場合、水溶液１ｍｌ当たり、単糖類または糖アル
コール類に関しては約１０〜１００ｍｇ、アミノ酸に関
しては約５〜５０ｍｇ配合することが好ましい。本発明
の改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予防・治
療剤を製剤化したもの（ＨＳＡを配合したもの）を溶液
状態でｐＨ約５〜７になるように調整するために、グル
タミン酸などの酸性アミノ酸を配合する場合には、該物
質を上記所定量加えることにより所定の液性に調整で
き、また、所望により、上記酸性アミノ酸を配合しない
場合には、塩酸、リン酸などの鉱酸、もしくはコハク
酸、酒石酸、クエン酸などの緩衝剤で所定の液性に調整
する。
【００１８】本発明の改善剤は低毒性であるので、膵臓
機能障害や膵臓機能低下に対して安全な膵臓機能改善剤
として使用することができる。具体的には、本発明の改
善剤は、細胞分化促進因子として膵臓ベータ細胞の分化
を促進する作用を有する。すなわち、本発明の改善剤
は、未分化膵臓幹細胞に作用して、これを膵臓ベータ細
胞へと分化させることができ、このようにして分化誘導
されて生じた膵臓ベータ細胞は、インシュリンを分泌・
産生することができる。また、本発明の改善剤は、未分
化膵臓幹細胞を膵臓の他の細胞、例えばＦ細胞へと分化
させることができ、このようにして分化誘導されて生じ
たＦ細胞は、パンクレアティックペプチド（以下、ＰＰ
と略称する場合がある）を産生することができる。さら
には、本発明の改善剤はin vivoにおける耐糖能改善作
用を有する。従って、本発明の改善剤は、糖尿病（例え
ば、インシュリン依存性糖尿病）、糖尿病における膵臓
機能障害、老人性のインシュリン分泌低下に伴う膵臓機
能低下症などの改善剤（予防・治療剤）としても有用で
ある。本発明の分化促進剤は低毒性であるので、未分化
膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への安全な分化促進剤、
インシュリン分泌促進剤などとして使用することができ
る。本発明の未分化型膵ガンの予防・治療剤は低毒性で
あるので、未分化型膵ガンの安全な予防・治療剤として
使用することができる。
機能障害や膵臓機能低下に対して安全な膵臓機能改善剤
として使用することができる。具体的には、本発明の改
善剤は、細胞分化促進因子として膵臓ベータ細胞の分化
を促進する作用を有する。すなわち、本発明の改善剤
は、未分化膵臓幹細胞に作用して、これを膵臓ベータ細
胞へと分化させることができ、このようにして分化誘導
されて生じた膵臓ベータ細胞は、インシュリンを分泌・
産生することができる。また、本発明の改善剤は、未分
化膵臓幹細胞を膵臓の他の細胞、例えばＦ細胞へと分化
させることができ、このようにして分化誘導されて生じ
たＦ細胞は、パンクレアティックペプチド（以下、ＰＰ
と略称する場合がある）を産生することができる。さら
には、本発明の改善剤はin vivoにおける耐糖能改善作
用を有する。従って、本発明の改善剤は、糖尿病（例え
ば、インシュリン依存性糖尿病）、糖尿病における膵臓
機能障害、老人性のインシュリン分泌低下に伴う膵臓機
能低下症などの改善剤（予防・治療剤）としても有用で
ある。本発明の分化促進剤は低毒性であるので、未分化
膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への安全な分化促進剤、
インシュリン分泌促進剤などとして使用することができ
る。本発明の未分化型膵ガンの予防・治療剤は低毒性で
あるので、未分化型膵ガンの安全な予防・治療剤として
使用することができる。
【００１９】本発明の改善剤、分化促進剤または未分化
型膵ガンの予防・治療剤の対象動物としては、例えば、
ヒトまたは哺乳動物が挙げられ、具体的にはヒト、サ
ル、マントヒヒ、チンパンジー、ブタ、ウシ、ヒツジ、
ウマ、マウス、ラットなどが挙げられる。本発明の改善
剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予防・治療剤の
投与方法としては、経口的、非経口的の何れであっても
よいが、非経口的に行なうのが好ましい。例えば、静脈
内注射または皮下注射することによって非経口的に行な
うことができる。本発明の改善剤または分化促進剤の使
用量は投与対象、年齢、体重、健康状態、性別、投与時
間、投与方法、膵臓機能障害の程度などによって異なる
が、例えば、注射投与として用いる場合には、成人に対
して、ＢＴＣ蛋白質量として、一日量約０.０２μｇ〜
１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２μｇ〜２ｍｇ／ｋｇと
なるように投与する。本発明の未分化型膵ガンの予防・
治療剤の使用量は、投与対象、年齢、体重、健康状態、
性別、投与時間、投与方法、未分化型膵ガンの程度など
によって異なるが、例えば、注射投与として用いる場合
には、成人に対して、ＢＴＣ蛋白質量として、一日量約
０.０２μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２μｇ〜
２ｍｇ／ｋｇとなるように投与する。
型膵ガンの予防・治療剤の対象動物としては、例えば、
ヒトまたは哺乳動物が挙げられ、具体的にはヒト、サ
ル、マントヒヒ、チンパンジー、ブタ、ウシ、ヒツジ、
ウマ、マウス、ラットなどが挙げられる。本発明の改善
剤、分化促進剤または未分化型膵ガンの予防・治療剤の
投与方法としては、経口的、非経口的の何れであっても
よいが、非経口的に行なうのが好ましい。例えば、静脈
内注射または皮下注射することによって非経口的に行な
うことができる。本発明の改善剤または分化促進剤の使
用量は投与対象、年齢、体重、健康状態、性別、投与時
間、投与方法、膵臓機能障害の程度などによって異なる
が、例えば、注射投与として用いる場合には、成人に対
して、ＢＴＣ蛋白質量として、一日量約０.０２μｇ〜
１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２μｇ〜２ｍｇ／ｋｇと
なるように投与する。本発明の未分化型膵ガンの予防・
治療剤の使用量は、投与対象、年齢、体重、健康状態、
性別、投与時間、投与方法、未分化型膵ガンの程度など
によって異なるが、例えば、注射投与として用いる場合
には、成人に対して、ＢＴＣ蛋白質量として、一日量約
０.０２μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約２μｇ〜
２ｍｇ／ｋｇとなるように投与する。
【００２０】本発明のＤＮＡ含有改善剤、ＤＮＡ含有分
化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・治療
剤は、例えば、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウイルス
ベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスア
ソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクター
に挿入した後、上記したＢＴＣ蛋白質またはそのムテイ
ンを含有する改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガン
の予防・治療剤と同様にして製造することができる。本
発明のＤＮＡ含有改善剤は低毒性であるので、膵臓機能
障害や膵臓機能低下に対して安全な膵臓機能改善剤とし
て使用することができる。具体的には、本発明の改善剤
は、細胞分化促進因子として膵臓ベータ細胞の分化を促
進する作用を有する。すなわち、本発明のＤＮＡ含有改
善剤は、未分化膵臓幹細胞に作用して、これを膵臓ベー
タ細胞へと分化させることができ、このようにして分化
誘導されて生じた膵臓ベータ細胞は、インシュリンを分
泌・産生することができる。また、本発明のＤＮＡ含有
改善剤は、未分化膵臓幹細胞を膵臓の他の細胞、例えば
ＰＰを産生するＦ細胞へと分化誘導させる作用も有す
る。さらには、本発明のＤＮＡ含有改善剤はin vivoに
おける耐糖能改善作用を有する。従って、本発明のＤＮ
Ａ含有改善剤は、糖尿病（例えば、インシュリン依存性
糖尿病）、糖尿病における膵臓機能障害、老人性のイン
シュリン分泌低下に伴う膵臓機能低下症などの改善剤
（予防・治療剤）としても有用である。本発明のＤＮＡ
含有分化促進剤は低毒性であるので、未分化膵臓幹細胞
から膵臓ベータ細胞への安全な分化促進剤、インシュリ
ン分泌促進剤などとして使用することができる。本発明
のＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・治療剤は低毒性で
あるので、未分化型膵ガンの安全な予防・治療剤として
使用することができる。
化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・治療
剤は、例えば、該ＤＮＡを単独あるいはレトロウイルス
ベクター、アデノウイルスベクター、アデノウイルスア
ソシエーテッドウイルスベクターなどの適当なベクター
に挿入した後、上記したＢＴＣ蛋白質またはそのムテイ
ンを含有する改善剤、分化促進剤または未分化型膵ガン
の予防・治療剤と同様にして製造することができる。本
発明のＤＮＡ含有改善剤は低毒性であるので、膵臓機能
障害や膵臓機能低下に対して安全な膵臓機能改善剤とし
て使用することができる。具体的には、本発明の改善剤
は、細胞分化促進因子として膵臓ベータ細胞の分化を促
進する作用を有する。すなわち、本発明のＤＮＡ含有改
善剤は、未分化膵臓幹細胞に作用して、これを膵臓ベー
タ細胞へと分化させることができ、このようにして分化
誘導されて生じた膵臓ベータ細胞は、インシュリンを分
泌・産生することができる。また、本発明のＤＮＡ含有
改善剤は、未分化膵臓幹細胞を膵臓の他の細胞、例えば
ＰＰを産生するＦ細胞へと分化誘導させる作用も有す
る。さらには、本発明のＤＮＡ含有改善剤はin vivoに
おける耐糖能改善作用を有する。従って、本発明のＤＮ
Ａ含有改善剤は、糖尿病（例えば、インシュリン依存性
糖尿病）、糖尿病における膵臓機能障害、老人性のイン
シュリン分泌低下に伴う膵臓機能低下症などの改善剤
（予防・治療剤）としても有用である。本発明のＤＮＡ
含有分化促進剤は低毒性であるので、未分化膵臓幹細胞
から膵臓ベータ細胞への安全な分化促進剤、インシュリ
ン分泌促進剤などとして使用することができる。本発明
のＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・治療剤は低毒性で
あるので、未分化型膵ガンの安全な予防・治療剤として
使用することができる。
【００２１】本発明のＤＮＡ含有改善剤、ＤＮＡ含有分
化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・治療
剤の対象動物としては、例えば、ヒトまたは哺乳動物が
挙げられ、具体的にはヒト、サル、マントヒヒ、チンパ
ンジー、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、マウス、ラットな
どが挙げられる。本発明のＤＮＡ含有改善剤、ＤＮＡ含
有分化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・
治療剤の投与方法としては、経口的、非経口的の何れで
あってもよいが、非経口的に行なうのが好ましい。例え
ば、静脈内注射または皮下注射することによって非経口
的に行なうことができる。本発明のＤＮＡ含有改善剤、
ＤＮＡ含有分化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガン
の予防・治療剤の投与量は、投与対象、年齢、体重、健
康状態、性別、投与時間、投与方法、症状などにより差
異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（体重６０
ｋｇとして）においては、一日につき約０.１ｍｇ〜１
００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好まし
くは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場
合は、その１回投与量は投与対象、対象組織、症状、投
与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形で
は通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日に
つき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜
２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度
を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物
の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与すること
ができる。
化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・治療
剤の対象動物としては、例えば、ヒトまたは哺乳動物が
挙げられ、具体的にはヒト、サル、マントヒヒ、チンパ
ンジー、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマ、マウス、ラットな
どが挙げられる。本発明のＤＮＡ含有改善剤、ＤＮＡ含
有分化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガンの予防・
治療剤の投与方法としては、経口的、非経口的の何れで
あってもよいが、非経口的に行なうのが好ましい。例え
ば、静脈内注射または皮下注射することによって非経口
的に行なうことができる。本発明のＤＮＡ含有改善剤、
ＤＮＡ含有分化促進剤またはＤＮＡ含有未分化型膵ガン
の予防・治療剤の投与量は、投与対象、年齢、体重、健
康状態、性別、投与時間、投与方法、症状などにより差
異はあるが、経口投与の場合、一般的に成人（体重６０
ｋｇとして）においては、一日につき約０.１ｍｇ〜１
００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好まし
くは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場
合は、その１回投与量は投与対象、対象組織、症状、投
与方法などによっても異なるが、例えば、注射剤の形で
は通常成人（体重６０ｋｇとして）においては、一日に
つき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜
２０ｍｇ程度、より好ましくは約０．１〜１０ｍｇ程度
を静脈注射により投与するのが好都合である。他の動物
の場合も、６０ｋｇ当たりに換算した量を投与すること
ができる。
【００２２】
【実施例】以下に、本発明を実施例および試験例を示し
てさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限
定されるものではない。
てさらに詳細に説明するが、本発明の範囲はこれらに限
定されるものではない。
【００２３】
【実施例１】ヒトＢＴＣ蛋白質を含有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質２.５ｇを蒸留水１リットルに溶か
し、これにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）１.１ｇを加
えて溶かし、滅菌濾過してアンプル（容量５ミリリット
ル）に４ミリリットルずつ分注する。これを凍結乾燥機
に入れて乾燥後、封をすると使用時溶解用のアンプルが
得られる。使用に際しては、該アンプルを開封し、２ミ
リリットルの生理食塩水に溶解し、皮下、静脈または筋
肉内投与用注射剤とする。これを膵臓機能改善剤、未分
化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分化促進剤、また
は未分化型膵ガンの予防・治療剤として使用する。
し、これにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）１.１ｇを加
えて溶かし、滅菌濾過してアンプル（容量５ミリリット
ル）に４ミリリットルずつ分注する。これを凍結乾燥機
に入れて乾燥後、封をすると使用時溶解用のアンプルが
得られる。使用に際しては、該アンプルを開封し、２ミ
リリットルの生理食塩水に溶解し、皮下、静脈または筋
肉内投与用注射剤とする。これを膵臓機能改善剤、未分
化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分化促進剤、また
は未分化型膵ガンの予防・治療剤として使用する。
【００２４】
【実施例２】ヒトＢＴＣ蛋白質およびアクチビンＡを含
有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質２.５ｇおよびアクチビンＡ１２.５ｇ
を蒸留水１リットルに溶かし、これにヒト血清アルブミ
ン（ＨＳＡ）１.０ｇを加えて溶かし、滅菌濾過してア
ンプル（容量５ミリリットル）に４ミリリットルずつ分
注する。これを凍結乾燥機に入れて乾燥後、封をすると
使用時溶解用のアンプルが得られる。使用に際しては、
該アンプルを開封し、２ミリリットルの生理食塩水に溶
解し、皮下、静脈または筋肉内投与用注射剤とする。こ
れを膵臓機能改善剤、未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ
細胞への分化促進剤、または未分化型膵ガンの予防・治
療剤として使用する。
有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質２.５ｇおよびアクチビンＡ１２.５ｇ
を蒸留水１リットルに溶かし、これにヒト血清アルブミ
ン（ＨＳＡ）１.０ｇを加えて溶かし、滅菌濾過してア
ンプル（容量５ミリリットル）に４ミリリットルずつ分
注する。これを凍結乾燥機に入れて乾燥後、封をすると
使用時溶解用のアンプルが得られる。使用に際しては、
該アンプルを開封し、２ミリリットルの生理食塩水に溶
解し、皮下、静脈または筋肉内投与用注射剤とする。こ
れを膵臓機能改善剤、未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ
細胞への分化促進剤、または未分化型膵ガンの予防・治
療剤として使用する。
【００２５】
【実施例３】ヒトＢＴＣ蛋白質をコードするＤＮＡを含
有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質をコードするＤＮＡ（配列番号：７）
２.５ｇを蒸留水１リットルに溶かし、これにヒト血清
アルブミン（ＨＳＡ）１.１ｇを加えて溶かし、滅菌濾
過してアンプル（容量５ミリリットル）に４ミリリット
ルずつ分注する。これを凍結乾燥機に入れて乾燥後、封
をすると使用時溶解用のアンプルが得られる。使用に際
しては、該アンプルを開封し、２ミリリットルの生理食
塩水に溶解し、皮下、静脈または筋肉内投与用注射剤と
する。これを膵臓機能改善剤、未分化膵臓幹細胞から膵
臓ベータ細胞への分化促進剤、または未分化型膵ガンの
予防・治療剤として使用する。
有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質をコードするＤＮＡ（配列番号：７）
２.５ｇを蒸留水１リットルに溶かし、これにヒト血清
アルブミン（ＨＳＡ）１.１ｇを加えて溶かし、滅菌濾
過してアンプル（容量５ミリリットル）に４ミリリット
ルずつ分注する。これを凍結乾燥機に入れて乾燥後、封
をすると使用時溶解用のアンプルが得られる。使用に際
しては、該アンプルを開封し、２ミリリットルの生理食
塩水に溶解し、皮下、静脈または筋肉内投与用注射剤と
する。これを膵臓機能改善剤、未分化膵臓幹細胞から膵
臓ベータ細胞への分化促進剤、または未分化型膵ガンの
予防・治療剤として使用する。
【００２６】
【実施例４】ヒトＢＴＣ蛋白質を含有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質０.５ｇを蒸留水１リットルに溶か
し、これにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）２.０ｇを加
えて溶かし、滅菌濾過してアンプル（容量５ミリリット
ル）に４ミリリットルずつ分注する。これを凍結乾燥機
に入れて乾燥後、封をすると使用時溶解用のアンプルが
得られる。使用に際しては、該アンプルを開封し、２ミ
リリットルの生理食塩水に溶解し、皮下、静脈または筋
肉内投与用注射剤とする。これを膵臓機能改善剤、未分
化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分化促進剤、また
は未分化型膵ガンの予防・治療剤として使用する。
し、これにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）２.０ｇを加
えて溶かし、滅菌濾過してアンプル（容量５ミリリット
ル）に４ミリリットルずつ分注する。これを凍結乾燥機
に入れて乾燥後、封をすると使用時溶解用のアンプルが
得られる。使用に際しては、該アンプルを開封し、２ミ
リリットルの生理食塩水に溶解し、皮下、静脈または筋
肉内投与用注射剤とする。これを膵臓機能改善剤、未分
化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞への分化促進剤、また
は未分化型膵ガンの予防・治療剤として使用する。
【００２７】
【実施例５】ヒトＢＴＣ蛋白質およびアクチビンＡを含
有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質２.５ｇおよびアクチビンＡ５.０ｇを
蒸留水１リットルに溶かし、これにヒト血清アルブミン
（ＨＳＡ）１.０ｇを加えて溶かし、滅菌濾過してアン
プル（容量５ミリリットル）に４ミリリットルずつ分注
する。これを凍結乾燥機に入れて乾燥後、封をすると使
用時溶解用のアンプルが得られる。使用に際しては、該
アンプルを開封し、２ミリリットルの生理食塩水に溶解
し、皮下、静脈または筋肉内投与用注射剤とする。これ
を膵臓機能改善剤、未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細
胞への分化促進剤、または未分化型膵ガンの予防・治療
剤として使用する。
有する注射剤 ヒトＢＴＣ蛋白質２.５ｇおよびアクチビンＡ５.０ｇを
蒸留水１リットルに溶かし、これにヒト血清アルブミン
（ＨＳＡ）１.０ｇを加えて溶かし、滅菌濾過してアン
プル（容量５ミリリットル）に４ミリリットルずつ分注
する。これを凍結乾燥機に入れて乾燥後、封をすると使
用時溶解用のアンプルが得られる。使用に際しては、該
アンプルを開封し、２ミリリットルの生理食塩水に溶解
し、皮下、静脈または筋肉内投与用注射剤とする。これ
を膵臓機能改善剤、未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細
胞への分化促進剤、または未分化型膵ガンの予防・治療
剤として使用する。
【００２８】
【試験例１】インシュリン産生ベータ細胞への分化およ
びパンクレアチックポリペプチド産生Ｆ細胞への分化に
及ぼすＢＴＣ蛋白質の効果 化学発癌剤で誘発された膵臓癌由来細胞株ＡＲ４２Ｊ
〔Christophe; アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジ
オロギー（Am. J. Physiol.），266：G963（1994）〕を
２０ｍＭ ヘーペス／ＮａＯＨ（ｐＨ７.４），５ｍＭ
ＮａＨＣＯ3，１０％ 牛胎児血清および種々の濃度のヒ
トＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）を含むダルベッコ改変
イーグルＭＥＭ培地（フロー社，米国）を用いて、１０
5細胞／ｍｌの濃度になるようにガラスカバースリップ
上に播き、炭酸ガスインキュベーター内（５％炭酸ガ
ス、９５％空気）において３７℃で培養した。５日後に
細胞を３％パラホルムアルデヒドで固定し、０.１％ ト
ライトンＸ-１００（商品名）で５分間処理した後、ブ
ロッキングエース（森永乳業，日本）、一次抗体〔抗イ
ンシュリン抗体または抗パンクレアティックポリペプチ
ド抗体〕、次いで二次抗体〔インドカルボシアニン共役
（indocarbocyanine-conjugated）ろば抗ウサギＩｇＧ
抗体またはインドカルボシアニン共役（indocarbocyani
ne-conjugated）ろば抗ギニピッグＩｇＧ抗体〕をイン
キュベートした。次に、細胞をCarl Zeiss社（NY, US
A）製アキオフォート（Axiophoto）で検鏡した。その結
果、〔図１〕の○で示したように、蛍光染色された細
胞、すなわちインシュリンを産生するベータ細胞に分化
した細胞数は、ＢＴＣ蛋白質の濃度に依存して増加し、
２×１０ -9ＭのＢＴＣ蛋白質存在下では最大約４％の細
胞がインシュリンを産生するベータ細胞になることが分
かった。また、〔図１〕の●で示したように、この時、
約５％の細胞がパンクレアティックポリペプチド（Ｐ
Ｐ）を産生するＦ細胞に分化することも判明した。同様
の結果は、ＲＴ−ＰＣＲを用いたｍＲＮＡの解析からも
得られた。すなわちＢＴＣ蛋白質存在下で、ＡＲ４２Ｊ
細胞は、インシュリン ｍＲＮＡ、ＰＰ ｍＲＮＡ、グル
コキナーゼ ｍＲＮＡ、グルコーストランスポーター２
ｍＲＮＡを合成するように分化したが、グルカゴン ｍ
ＲＮＡは検出されなかった。
びパンクレアチックポリペプチド産生Ｆ細胞への分化に
及ぼすＢＴＣ蛋白質の効果 化学発癌剤で誘発された膵臓癌由来細胞株ＡＲ４２Ｊ
〔Christophe; アメリカン・ジャーナル・オブ・フィジ
オロギー（Am. J. Physiol.），266：G963（1994）〕を
２０ｍＭ ヘーペス／ＮａＯＨ（ｐＨ７.４），５ｍＭ
ＮａＨＣＯ3，１０％ 牛胎児血清および種々の濃度のヒ
トＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）を含むダルベッコ改変
イーグルＭＥＭ培地（フロー社，米国）を用いて、１０
5細胞／ｍｌの濃度になるようにガラスカバースリップ
上に播き、炭酸ガスインキュベーター内（５％炭酸ガ
ス、９５％空気）において３７℃で培養した。５日後に
細胞を３％パラホルムアルデヒドで固定し、０.１％ ト
ライトンＸ-１００（商品名）で５分間処理した後、ブ
ロッキングエース（森永乳業，日本）、一次抗体〔抗イ
ンシュリン抗体または抗パンクレアティックポリペプチ
ド抗体〕、次いで二次抗体〔インドカルボシアニン共役
（indocarbocyanine-conjugated）ろば抗ウサギＩｇＧ
抗体またはインドカルボシアニン共役（indocarbocyani
ne-conjugated）ろば抗ギニピッグＩｇＧ抗体〕をイン
キュベートした。次に、細胞をCarl Zeiss社（NY, US
A）製アキオフォート（Axiophoto）で検鏡した。その結
果、〔図１〕の○で示したように、蛍光染色された細
胞、すなわちインシュリンを産生するベータ細胞に分化
した細胞数は、ＢＴＣ蛋白質の濃度に依存して増加し、
２×１０ -9ＭのＢＴＣ蛋白質存在下では最大約４％の細
胞がインシュリンを産生するベータ細胞になることが分
かった。また、〔図１〕の●で示したように、この時、
約５％の細胞がパンクレアティックポリペプチド（Ｐ
Ｐ）を産生するＦ細胞に分化することも判明した。同様
の結果は、ＲＴ−ＰＣＲを用いたｍＲＮＡの解析からも
得られた。すなわちＢＴＣ蛋白質存在下で、ＡＲ４２Ｊ
細胞は、インシュリン ｍＲＮＡ、ＰＰ ｍＲＮＡ、グル
コキナーゼ ｍＲＮＡ、グルコーストランスポーター２
ｍＲＮＡを合成するように分化したが、グルカゴン ｍ
ＲＮＡは検出されなかった。
【００２９】
【試験例２】インシュリンを産生するベータ細胞への分
化に及ぼす種々の因子の効果 試験例１の場合と同一条件で、インシュリンを産生する
ベータ細胞への分化に及ぼす種々の因子の効果を調べ
た。結果の一部を〔図２〕に示したが、１×１０-9Ｍの
濃度ではアクチビン（Activin）Ａ、上皮成長因子（Ｅ
ＧＦ）、トランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−
α）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、インシュリン様
成長因子（ＩＧＦ）、ガストリン、コレシストキニンお
よびＴＧＦ−βのいずれもＡＲ４２Ｊ細胞をインシュリ
ンを産生するベータ細胞へと分化誘導しなかったが、ヒ
トＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）は約２.５％のＡＲ４
２Ｊ細胞をインシュリンを産生するベータ細胞へと分化
誘導した。また、〔図２〕に示したように、２×１０-9
ＭのアクチビンＡおよび１×１０-9ＭのＥＧＦ、あるい
は２×１０-9ＭのアクチビンＡおよび１×１０-9ＭのＴ
ＧＦ−αの存在下では，ＡＲ４２Ｊ細胞はインシュリン
を産生するベータ細胞に分化しなかったが、２×１０-9
ＭのアクチビンＡおよび１×１０-9ＭのヒトＢＴＣ蛋白
質（Betacellulin）の存在下では約１０％のＡＲ４２Ｊ
細胞がインシュリンを産生するベータ細胞に分化した。
このことから、アクチビンＡがＢＴＣ蛋白質の分化誘導
作用を増強することが分かった。
化に及ぼす種々の因子の効果 試験例１の場合と同一条件で、インシュリンを産生する
ベータ細胞への分化に及ぼす種々の因子の効果を調べ
た。結果の一部を〔図２〕に示したが、１×１０-9Ｍの
濃度ではアクチビン（Activin）Ａ、上皮成長因子（Ｅ
ＧＦ）、トランスフォーミング成長因子α（ＴＧＦ−
α）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、インシュリン様
成長因子（ＩＧＦ）、ガストリン、コレシストキニンお
よびＴＧＦ−βのいずれもＡＲ４２Ｊ細胞をインシュリ
ンを産生するベータ細胞へと分化誘導しなかったが、ヒ
トＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）は約２.５％のＡＲ４
２Ｊ細胞をインシュリンを産生するベータ細胞へと分化
誘導した。また、〔図２〕に示したように、２×１０-9
ＭのアクチビンＡおよび１×１０-9ＭのＥＧＦ、あるい
は２×１０-9ＭのアクチビンＡおよび１×１０-9ＭのＴ
ＧＦ−αの存在下では，ＡＲ４２Ｊ細胞はインシュリン
を産生するベータ細胞に分化しなかったが、２×１０-9
ＭのアクチビンＡおよび１×１０-9ＭのヒトＢＴＣ蛋白
質（Betacellulin）の存在下では約１０％のＡＲ４２Ｊ
細胞がインシュリンを産生するベータ細胞に分化した。
このことから、アクチビンＡがＢＴＣ蛋白質の分化誘導
作用を増強することが分かった。
【００３０】
【試験例３】インシュリン産生ベータ細胞に分化したＡ
Ｒ４２Ｊ細胞におけるインシュリンの分泌 試験例１と同一方法により１×１０5細胞／ｍｌの濃度
で径６ｃｍのディッシュにＡＲ４２Ｊ細胞を播種し、１
×１０-9Ｍ ヒトＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）および
２×１０-9Ｍ アクチビンＡ存在下で５日間培養した。
次に、細胞をＤＭＥＭで洗い、１０μＭ トルブタマイ
ド（tolbutamide）または４０ｍＭ カリウムイオン（hi
gh K+）存在下に５.５ｍＭ グルコースを含むクレブス
−リンガーバイカーボネート緩衝液中で６０分間インキ
ュベートした後、培養液を集め、培養液中のインシュリ
ン濃度をＴＲ−ＩＦＭＡ（a time-resolved immunofluo
rometric assay system）〔ロップグリン（Lovgren）
等; 「Alternative Immunoassays」 ダブリュー・ピー・
コリンズ（W. P. Collins）著，John Whiley & SonsLt
d., 203頁、1985年〕を用いて測定した。〔図３〕に示
したように、分化したＡＲ４２Ｊ細胞は、培養液中に有
意のインシュリンを分泌しており、それは４０ｍＭの高
濃度カリウムイオン（high K+）またはトルブタマイド
（tolbuamide）で促進されることが分かった。
Ｒ４２Ｊ細胞におけるインシュリンの分泌 試験例１と同一方法により１×１０5細胞／ｍｌの濃度
で径６ｃｍのディッシュにＡＲ４２Ｊ細胞を播種し、１
×１０-9Ｍ ヒトＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）および
２×１０-9Ｍ アクチビンＡ存在下で５日間培養した。
次に、細胞をＤＭＥＭで洗い、１０μＭ トルブタマイ
ド（tolbutamide）または４０ｍＭ カリウムイオン（hi
gh K+）存在下に５.５ｍＭ グルコースを含むクレブス
−リンガーバイカーボネート緩衝液中で６０分間インキ
ュベートした後、培養液を集め、培養液中のインシュリ
ン濃度をＴＲ−ＩＦＭＡ（a time-resolved immunofluo
rometric assay system）〔ロップグリン（Lovgren）
等; 「Alternative Immunoassays」 ダブリュー・ピー・
コリンズ（W. P. Collins）著，John Whiley & SonsLt
d., 203頁、1985年〕を用いて測定した。〔図３〕に示
したように、分化したＡＲ４２Ｊ細胞は、培養液中に有
意のインシュリンを分泌しており、それは４０ｍＭの高
濃度カリウムイオン（high K+）またはトルブタマイド
（tolbuamide）で促進されることが分かった。
【００３１】
【試験例４】糖尿病マウスにおけるＢＴＣ蛋白質の耐糖
能改善作用 ８週齢の雄ＩＣＲマウスにアロキサン膵部分潅流（１０
０ｍｇ／ｋｇ体重、上腸間膜動脈をクランプし、静脈
（ｉ.ｖ.）投与して、膵頭部ベータ細胞を温存し、膵尾
部ベータ細胞のみを破壊する）を行ない、糖尿病モデル
マウスを作成した〔ダイアベット・フロンティア（Diab
etes Frontier）7:285-286,(1966)および同誌7:287-28
8,(1966)）。この糖尿病マウスにアロキサン処置後、１
日目よりヒトＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）を１ｍｇ／
ｋｇ体重／日で８週間連日皮下投与し、処置前と処置後
２，４または８週後に腹腔内糖負荷試験（ipGTT）（２
ｇ グルコース／ｋｇ体重）を行ない、負荷前および負
荷後１および２時間の血糖値を測定するとともに、体重
変化を経時的に測定した。その結果、アロキサン処置前
０週後〔図４〕、アロキサン処置後４週後〔図５〕に腹
腔内糖負荷試験を行なった場合では、ＢＴＣ蛋白質投与
群と非投与群の間に差がなかった。しかし、〔図６〕に
示したように、アロキサン処置後８週目に腹腔内糖負荷
試験を行なった場合、ＢＴＣ蛋白質投与群（▲）におけ
る糖負荷１時間後の血糖値が、ＢＴＣ蛋白質非投与群
（●）に比べて明らかに低下することが観察された。こ
の結果から、ヒトＢＴＣ蛋白質が耐糖能改善作用を有す
ることが明らかになった。なお、投与群、非投与群間の
マウスの体重には有意差がなかった。
能改善作用 ８週齢の雄ＩＣＲマウスにアロキサン膵部分潅流（１０
０ｍｇ／ｋｇ体重、上腸間膜動脈をクランプし、静脈
（ｉ.ｖ.）投与して、膵頭部ベータ細胞を温存し、膵尾
部ベータ細胞のみを破壊する）を行ない、糖尿病モデル
マウスを作成した〔ダイアベット・フロンティア（Diab
etes Frontier）7:285-286,(1966)および同誌7:287-28
8,(1966)）。この糖尿病マウスにアロキサン処置後、１
日目よりヒトＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）を１ｍｇ／
ｋｇ体重／日で８週間連日皮下投与し、処置前と処置後
２，４または８週後に腹腔内糖負荷試験（ipGTT）（２
ｇ グルコース／ｋｇ体重）を行ない、負荷前および負
荷後１および２時間の血糖値を測定するとともに、体重
変化を経時的に測定した。その結果、アロキサン処置前
０週後〔図４〕、アロキサン処置後４週後〔図５〕に腹
腔内糖負荷試験を行なった場合では、ＢＴＣ蛋白質投与
群と非投与群の間に差がなかった。しかし、〔図６〕に
示したように、アロキサン処置後８週目に腹腔内糖負荷
試験を行なった場合、ＢＴＣ蛋白質投与群（▲）におけ
る糖負荷１時間後の血糖値が、ＢＴＣ蛋白質非投与群
（●）に比べて明らかに低下することが観察された。こ
の結果から、ヒトＢＴＣ蛋白質が耐糖能改善作用を有す
ることが明らかになった。なお、投与群、非投与群間の
マウスの体重には有意差がなかった。
【００３２】
【試験例５】ＢＴＣ蛋白質の膵臓癌細胞の増殖抑制作用 ＡＲ４２Ｊのクローン７１細胞 約３×１０3個を２ｎＭ
のヒトＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）および１％ウシ胎
仔血清を含むダルベッコ改変イーグルＭＥＭ培地を用い
て径３ｃｍのファルコンシャーレ（ベクトンディッキン
ソン、米国）に藩種した後、３７℃、５％炭酸ガス存在
下で培養し、経時的に細胞数の増加をコールターカウン
ターにより計測した。ヒトＢＴＣ蛋白質を含まない場合
を対照とした。得られた結果を〔図７〕に示した。〔図
７〕に示されているように、ヒトＢＴＣ蛋白質を含む培
地（○）では、ヒトＢＴＣ蛋白質を含まない培地（●）
に比べて、明らかにクローン７１細胞の増殖が抑えられ
ていることが判明した。
のヒトＢＴＣ蛋白質（配列番号：１）および１％ウシ胎
仔血清を含むダルベッコ改変イーグルＭＥＭ培地を用い
て径３ｃｍのファルコンシャーレ（ベクトンディッキン
ソン、米国）に藩種した後、３７℃、５％炭酸ガス存在
下で培養し、経時的に細胞数の増加をコールターカウン
ターにより計測した。ヒトＢＴＣ蛋白質を含まない場合
を対照とした。得られた結果を〔図７〕に示した。〔図
７〕に示されているように、ヒトＢＴＣ蛋白質を含む培
地（○）では、ヒトＢＴＣ蛋白質を含まない培地（●）
に比べて、明らかにクローン７１細胞の増殖が抑えられ
ていることが判明した。
【００３３】
【発明の効果】本発明のＢＴＣ蛋白質またはそれをコー
ドするＤＮＡを含有する膵臓機能改善剤は、未分化膵臓
幹細胞に作用して、インシュリンを産生する膵臓ベータ
細胞への分化を促進する作用を有する。また、未分化幹
細胞を膵臓の他の細胞、例えば、パンクレアティックポ
リペプチドを産生するＦ細胞へと分化誘導させる作用も
有する。本発明の膵臓機能改善剤は、糖尿病（例えば、
インシュリン依存性糖尿病）、糖尿病における膵臓機能
障害などの予防・治療剤として有用である。さらに、本
発明の膵臓機能改善剤は、未分化型膵ガンの予防・治療
剤としても有用である。
ドするＤＮＡを含有する膵臓機能改善剤は、未分化膵臓
幹細胞に作用して、インシュリンを産生する膵臓ベータ
細胞への分化を促進する作用を有する。また、未分化幹
細胞を膵臓の他の細胞、例えば、パンクレアティックポ
リペプチドを産生するＦ細胞へと分化誘導させる作用も
有する。本発明の膵臓機能改善剤は、糖尿病（例えば、
インシュリン依存性糖尿病）、糖尿病における膵臓機能
障害などの予防・治療剤として有用である。さらに、本
発明の膵臓機能改善剤は、未分化型膵ガンの予防・治療
剤としても有用である。
【００３４】
【配列番号：１】 配列の長さ：８０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Asp Gly Asn Ser Thr Arg Ser Pro Glu Thr Asn Gly Leu Leu Cys Gly 1 5 10 15 Asp Pro Glu Glu Asn Cys Ala Ala Thr Thr Thr Gln Ser Lys Arg Lys 20 25 30 Gly His Phe Ser Arg Cys Pro Lys Gln Tyr Lys His Tyr Cys Ile Lys 35 40 45 Gly Arg Cys Arg Phe Val Val Ala Glu Gln Thr Pro Ser Cys Val Cys 50 55 60 Asp Glu Gly Tyr Ile Gly Ala Arg Cys Glu Arg Val Asp Leu Phe Tyr 65 70 75 80
【００３５】
【配列番号：２】 配列の長さ：８０ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：タンパク質 配列 Ａｓｐ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｕ
Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １ ５
１０ １５ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ ２０ ２５
３０ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｈｉｓ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｇｌｕ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｃｙｓ ５０ ５５
６０ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｒｇ Ｃｙｓ
Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ ６５ ７０
７５ ８０
Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｃｙｓ Ｇｌｙ １ ５
１０ １５ Ａｌａ Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｃｙｓ Ｔｈｒ Ｇｌｙ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ａｒｇ Ｇｌｎ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｌｙｓ ２０ ２５
３０ Ｔｈｒ Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｇｌｎ
Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｈｉｓ ３５ ４０
４５ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｇｌｕ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｃｙｓ Ｉｌｅ Ｃｙｓ ５０ ５５
６０ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｒｇ Ｃｙｓ
Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｔｙｒ ６５ ７０
７５ ８０
【００３６】
【配列番号：３】 配列の長さ：１４ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド 配列 Ｈｉｓ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｃｙｓ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｔｙｒ
Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｉｌｅ １ ５
１０
Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ｃｙｓ Ｉｌｅ １ ５
１０
【００３７】
【配列番号：４】 配列の長さ：７ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３８】
【配列番号：５】 配列の長さ：６ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００３９】
【配列番号：６】 配列の長さ：１１ 配列の型：アミノ酸 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ペプチド
【００４０】
【配列番号：７】 配列の長さ：２４０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATGGGAATT CCACCAGAAG TCCTGAAACT AATGGCCTCC TCTGTGGAGA CCCTGAGGAA 60 AACTGTGCAG CTACCACCAC ACAATCAAAG CGGAAAGGCC ACTTCTCTAG GTGCCCCAAG 120 CAATACAAGC ATTACTGCAT CAAAGGGAGA TGCCGCTTCG TGGTGGCCGA GCAGACGCCC 180 TCCTGTGTCT GTGATGAAGG CTACATTGGA GCAAGGTGTG AGAGAGTTGA CTTGTTTTAC 240
【００４１】
【配列番号：８】 配列の長さ：２４０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 特徴を決定した方法：Ｓ 配列 GATGGGAACA CAACCAGAAC ACCAGAAACC AATGGCTCTC TTTGTGGAGC TCCTGGGGAA 60 AACTGCACAG GTACCACCCC TAGACAGAAA GTGAAAACCC ACTTCTCTCG GTGCCCCAAG 120 CAGTACAAGC ATTACTGCAT CCATGGGAGA TGCCGCTTCG TGGTGGACGA GCAAACTCCC 180 TCCTGCATCT GTGAGAAAGG CTACTTTGGG GCTCGGTGTG AGCGAGTGGA CCTGTTTTAC 240
【００４２】
【図１】インシュリンを産生するベータ細胞への分化お
よびパンクレアティックポリペプチド（ＰＰ）を産生す
るＦ細胞への分化に対するヒト・ベータセルリン蛋白質
の濃度依存性を示す。横軸の〔Betacellulin〕（Ｍ）は
ヒト・ベータセルリン蛋白質の濃度（Ｍ）を示し、縦軸
（Positive Cell）は全細胞に対する各ホルモンを産生
した細胞の割合（％）を示す。○はインシュリンを産生
するベータ細胞を、●はＰＰを産生する細胞を示す。
よびパンクレアティックポリペプチド（ＰＰ）を産生す
るＦ細胞への分化に対するヒト・ベータセルリン蛋白質
の濃度依存性を示す。横軸の〔Betacellulin〕（Ｍ）は
ヒト・ベータセルリン蛋白質の濃度（Ｍ）を示し、縦軸
（Positive Cell）は全細胞に対する各ホルモンを産生
した細胞の割合（％）を示す。○はインシュリンを産生
するベータ細胞を、●はＰＰを産生する細胞を示す。
【図２】インシュリンを産生するベータ細胞への分化に
及ぼす各種因子の効果を示す。縦軸は因子の名称を示
し、横軸は全細胞に対するインシュリンを産生した細胞
（Insulin Positive Cell）の割合（％）を示す。Activ
inＡはアクチビンＡを、ＥＧＦは上皮成長因子を、ＴＧ
Ｆ-αはトランスフォーミング成長因子αを、Betacellu
linはヒト・ベータセルリン蛋白質を示し、各濃度は１
×１０-19Ｍである。ActivinＡ＋ＥＧＦ、ActivinＡ＋
ＴＧＦ-αおよびActivinＡ＋Betacellulinは、それぞれ
１×１０-19ＭのＥＧＦ、ＴＧＦ-αまたはBetacellulin
に２×１０-19ＭのActivinＡを添加した場合を示す。
及ぼす各種因子の効果を示す。縦軸は因子の名称を示
し、横軸は全細胞に対するインシュリンを産生した細胞
（Insulin Positive Cell）の割合（％）を示す。Activ
inＡはアクチビンＡを、ＥＧＦは上皮成長因子を、ＴＧ
Ｆ-αはトランスフォーミング成長因子αを、Betacellu
linはヒト・ベータセルリン蛋白質を示し、各濃度は１
×１０-19Ｍである。ActivinＡ＋ＥＧＦ、ActivinＡ＋
ＴＧＦ-αおよびActivinＡ＋Betacellulinは、それぞれ
１×１０-19ＭのＥＧＦ、ＴＧＦ-αまたはBetacellulin
に２×１０-19ＭのActivinＡを添加した場合を示す。
【図３】カリウムイオンまたはトルブタミド存在下にお
けるインシュリン産生ベータ細胞へ分化したＡＲ４２Ｊ
細胞からのインシュリン分泌を示す。横軸のnone、high
Ｋ+およびtolbutamideは、それぞれカリウムイオンなら
びにトルブタマイドの非存在下、４０ｍＭのカリウムイ
オン存在下、および１０μＭのトルブタマイド存在下を
示す。縦軸（Insulin）は分泌したインシュリンの濃度
（pg/mg・protein）を示す。
けるインシュリン産生ベータ細胞へ分化したＡＲ４２Ｊ
細胞からのインシュリン分泌を示す。横軸のnone、high
Ｋ+およびtolbutamideは、それぞれカリウムイオンなら
びにトルブタマイドの非存在下、４０ｍＭのカリウムイ
オン存在下、および１０μＭのトルブタマイド存在下を
示す。縦軸（Insulin）は分泌したインシュリンの濃度
（pg/mg・protein）を示す。
【図４】アロキサン処置前０週後に腹腔内糖負荷試験
（ipGTT）を行なった時の糖尿病マウスにおけるヒト・
ベータセルリン蛋白質の耐糖能改善作用を示す。横軸の
Time(hour)は腹腔内への糖投与後の時間を示す。縦軸の
Blood glucose(mg/ml)は血糖値を示す。○はアロキサン
非処理マウスの、●はアロキサン処理／ヒト・ベータセ
ルリン蛋白質非投与マウスの、▲はアロキサン処理／ヒ
ト・ベータセルリン蛋白質投与マウスの結果を示す。
（ipGTT）を行なった時の糖尿病マウスにおけるヒト・
ベータセルリン蛋白質の耐糖能改善作用を示す。横軸の
Time(hour)は腹腔内への糖投与後の時間を示す。縦軸の
Blood glucose(mg/ml)は血糖値を示す。○はアロキサン
非処理マウスの、●はアロキサン処理／ヒト・ベータセ
ルリン蛋白質非投与マウスの、▲はアロキサン処理／ヒ
ト・ベータセルリン蛋白質投与マウスの結果を示す。
【図５】アロキサン処置４週後に腹腔内糖負荷試験（ip
GTT）を行なった時の糖尿病マウスにおけるヒト・ベー
タセルリン蛋白質の耐糖能改善作用を示す。横軸のTime
(hour)は腹腔内への糖投与後の時間を示す。縦軸のBloo
d glucose(mg/ml)は血糖値を示す。○はアロキサン非処
理マウスの、●はアロキサン処理／ヒト・ベータセルリ
ン蛋白質非投与マウスの、▲はアロキサン処理／ヒト・
ベータセルリン蛋白質投与マウスの結果を示す。
GTT）を行なった時の糖尿病マウスにおけるヒト・ベー
タセルリン蛋白質の耐糖能改善作用を示す。横軸のTime
(hour)は腹腔内への糖投与後の時間を示す。縦軸のBloo
d glucose(mg/ml)は血糖値を示す。○はアロキサン非処
理マウスの、●はアロキサン処理／ヒト・ベータセルリ
ン蛋白質非投与マウスの、▲はアロキサン処理／ヒト・
ベータセルリン蛋白質投与マウスの結果を示す。
【図６】アロキサン処置８週後に腹腔内糖負荷試験（ip
GTT）を行なった時の糖尿病マウスにおけるヒト・ベー
タセルリン蛋白質の耐糖能改善作用を示す。横軸のTime
(hour)は腹腔内への糖投与後の時間を示す。縦軸のBloo
d glucose(mg/ml)は血糖値を示す。○はアロキサン非処
理マウスの、●はアロキサン処理／ヒト・ベータセルリ
ン蛋白質非投与マウスの、▲はアロキサン処理／ヒト・
ベータセルリン蛋白質投与マウスの結果を示す。
GTT）を行なった時の糖尿病マウスにおけるヒト・ベー
タセルリン蛋白質の耐糖能改善作用を示す。横軸のTime
(hour)は腹腔内への糖投与後の時間を示す。縦軸のBloo
d glucose(mg/ml)は血糖値を示す。○はアロキサン非処
理マウスの、●はアロキサン処理／ヒト・ベータセルリ
ン蛋白質非投与マウスの、▲はアロキサン処理／ヒト・
ベータセルリン蛋白質投与マウスの結果を示す。
【図７】ヒト・ベータセルリン蛋白質の膵臓癌細胞に対
する増殖抑制作用を示す。横軸のＤａｙは培養日数を示
す。縦軸のCell numberは膵臓癌由来細胞株ＡＲ４２Ｊ
・クローン７１細胞の細胞数（×１０-3）を示す。○は
ヒトＢＴＣ蛋白質を含む培地で、●はヒトＢＴＣ蛋白質
を含まない培地で培養した結果を示す。
する増殖抑制作用を示す。横軸のＤａｙは培養日数を示
す。縦軸のCell numberは膵臓癌由来細胞株ＡＲ４２Ｊ
・クローン７１細胞の細胞数（×１０-3）を示す。○は
ヒトＢＴＣ蛋白質を含む培地で、●はヒトＢＴＣ蛋白質
を含まない培地で培養した結果を示す。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 7/08 Ａ６１Ｋ 37/36 14/47 37/43 ＡＣＪ
Claims (12)
- 【請求項１】ベータセルリン蛋白質またはそのムテイン
を含有してなる膵臓機能改善剤。 - 【請求項２】ベータセルリン蛋白質が、配列番号：３、
配列番号：４、配列番号：５および配列番号：６からな
る群から選ばれる少なくとも１つの配列番号で表わされ
るアミノ酸配列を有する蛋白質である請求項１記載の改
善剤。 - 【請求項３】ベータセルリン蛋白質が、配列番号：１で
表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質または配列番
号：２で表わされるアミノ酸配列を有する蛋白質である
請求項１記載の改善剤。 - 【請求項４】ベータセルリン蛋白質のムテインが、配
列番号：１もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸
配列の１〜４０個程度のアミノ酸が欠失したアミノ酸配
列、配列番号：１もしくは配列番号：２で表わされる
アミノ酸配列の１〜４０個程度のアミノ酸が他のアミノ
酸配列に置換したアミノ酸配列、または配列番号：１
もしくは配列番号：２で表わされるアミノ酸配列に１〜
４０個程度のアミノ酸が付加したアミノ酸配列を有する
蛋白質である請求項１記載の改善剤。 - 【請求項５】ベータセルリン蛋白質のムテインが、配列
番号：１で表わされるアミノ酸配列のＮ末端から１２個
または３０個のアミノ酸が欠失したアミノ酸配列を有す
る蛋白質である請求項１記載の改善剤。 - 【請求項６】さらにアクチビンを含有する請求項１〜５
記載の改善剤。 - 【請求項７】ベータセルリン蛋白質またはそのムテイン
に対するアクチビンの含有割合が約１：１０〜１０：１
である請求項６記載の改善剤。 - 【請求項８】糖尿病の予防・治療剤である請求項１〜７
記載の改善剤。 - 【請求項９】糖尿病における膵臓機能障害または老人性
のインシュリン分泌低下に伴う膵臓機能低下症の予防・
治療剤である請求項１〜７記載の改善剤。 - 【請求項１０】ベータセルリン蛋白質またはそのムテイ
ンを含有してなる未分化膵臓幹細胞から膵臓ベータ細胞
への分化促進剤。 - 【請求項１１】ベータセルリン蛋白質またはそのムテイ
ンを含有してなる未分化型膵ガンの予防・治療剤。 - 【請求項１２】膵臓機能改善剤を製造するためのベータ
セルリン蛋白質またはそのムテインの使用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29620196A JP3945846B2 (ja) | 1995-11-09 | 1996-11-08 | 膵臓機能改善剤 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29123895 | 1995-11-09 | ||
| JP7-291238 | 1995-11-09 | ||
| JP29620196A JP3945846B2 (ja) | 1995-11-09 | 1996-11-08 | 膵臓機能改善剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09188630A true JPH09188630A (ja) | 1997-07-22 |
| JP3945846B2 JP3945846B2 (ja) | 2007-07-18 |
Family
ID=26558461
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29620196A Expired - Fee Related JP3945846B2 (ja) | 1995-11-09 | 1996-11-08 | 膵臓機能改善剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3945846B2 (ja) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002541117A (ja) * | 1999-04-06 | 2002-12-03 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | 糖尿病治療へのＥｒｂＢレセプターリガンドの使用 |
| WO2006123466A1 (ja) * | 2005-05-17 | 2006-11-23 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | 膵臓機能改善のための医薬又は飲食品 |
| WO2006123465A1 (ja) * | 2005-05-17 | 2006-11-23 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | 膵臓機能改善のための医薬又は飲食品 |
| WO2006123464A1 (ja) * | 2005-05-17 | 2006-11-23 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | 膵臓機能改善のための医薬又は飲食品 |
| WO2008096781A1 (ja) * | 2007-02-07 | 2008-08-14 | National University Corporation Okayama University | ベータセルリンムテイン |
| JP2008545715A (ja) * | 2005-05-27 | 2008-12-18 | ファイブ プライム セラピューティクス， インコーポレイテッド | 筋細胞へのグルコース取り込みを刺激する方法および組成物ならびに疾患を治療する方法および組成物 |
| JP2015180215A (ja) * | 2004-04-27 | 2015-10-15 | ヴィアサイト，インコーポレイテッド | Ｐｄｘ１発現性内胚葉 |
| US10421942B2 (en) | 2003-12-23 | 2019-09-24 | Viacyte, Inc. | Definitive endoderm |
| US10465162B2 (en) | 2004-04-27 | 2019-11-05 | Viacyte, Inc. | Anterior endoderm cells and methods of production |
-
1996
- 1996-11-08 JP JP29620196A patent/JP3945846B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| JP4794049B2 (ja) * | 1999-04-06 | 2011-10-12 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | 糖尿病治療へのＥｒｂＢレセプターリガンドの使用 |
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| US11746323B2 (en) | 2004-04-27 | 2023-09-05 | Viacyte, Inc. | PDX1 positive foregut endoderm cells and methods of production |
| WO2006123466A1 (ja) * | 2005-05-17 | 2006-11-23 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | 膵臓機能改善のための医薬又は飲食品 |
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| WO2008096781A1 (ja) * | 2007-02-07 | 2008-08-14 | National University Corporation Okayama University | ベータセルリンムテイン |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3945846B2 (ja) | 2007-07-18 |
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