JPH05506030A - 哺乳動物に組織修復促進の傾向を与える方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 哺乳動物に組織修復促進の傾向を与える方法技術分野 本発明は、哺乳動物、特にヒトに組織修復促進の傾向を与える方法に関する。

さらに詳しくは、本発明は、組織損傷の前に哺乳動物をトランスフォーミング成 長因子−βで処理して組織の修復を促進する方法に関する。

背景技術 βトランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ〜β群）は多機能性のサイトカインで あり、造血、神経、心臓、線維芽細胞および腫瘍細胞を含む多くの型の細胞によ り産生され、様々な組織起源に由来するＭｉ胞の成長および分化を調節すること がテ！［５ｐｏｒｎう、　５ｃｉｔ狙ｃｅ　２３３　：　５３２　（１９８６） ］、種々のストローマ要素の形成および同化を刺激することができる。

現在、少なくとも５形態のＴＧＦ−β、即ちＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧ Ｆ−β３、ＴＧＦ−β４およびＴＧＦ−β５が同定されている。この群のＴＧＦ −βを種々の種（例えば、ヒト、マウス、ミドリザル、ブタ、ウシ、ニワトリお よびカエル）から、および種々の体供給源（例えば、骨、血小板または胎ｆＡ） から精製するための、組換え細胞培養においてそれを産住させるための、および その活性を測定するための適切な方法は既知である。例えば、Ｒ，Ｄｅｒｙｎｃ ｋら［Ｎａｔｕｒｅ　３１６：　７０１−７０３　（１９８５）コニ欧州特許公 開Ｎｏ、　２００．３４１　（１９８６年１２月１０日公開）、Ｎｏ、　１６９ ゜０１６　（１９８６年１月２２日公開）、Ｎｏ、　２６８．５６１　（１９８ ８年５月２５日公開）、およびＮｏ、　２６７゜４６３　（１９８８年５月１８ 日公開）：米国特許Ｎｏ、　４．７７４．３２２　；　Ｃｈｅｉｆｅｔｚら［Ｃ ｅ１ｌ　４８　：　４０９−４１５　（１９８７）］　：　Ｊａｋｏｗｌｅｖら ［Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎ、　ｇ　：　７４７−７５５　（１９ ８８）コGＤｉｊｋｅらに ｒＯｃ、　Ｎａｔｌ、＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳＡ　８５　：　４７１５−４ ７１９　（１９８ｇ）］　：　Ｄｅｒｙｎｃｋら［Ｊ、Ｂｉ盾戟AＣｈｅｍ、２ ６１ ：　４３７７−４３７９　（１９８６）］　；　５ｈａｒｐｌｅｓら［ＤＮＡ　 ６４　：　２３９−２４４　（１９１１１７）］　；　Ｄｅ窒凾獅モ汲轣m洩虹 コ ７）コ；　Ｄｅｒｙｎｃｋら［ＥＭＢＯＪ、　Ｍ　：　３７３７−３７４３　（ １９８８）］　；　５ｅｙｅｄｉｎら［Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ■香A　２６１ ＋　５６９３−５６９５　（１９８６）］　；　Ｍａｄｉｓｅｎら［ＤＮＡ　７ 　：　１−８　（１９８８）］　；ならびにＨａｎｋｓら［■ Ｎａｔｌ＾ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（ＵＳＡ）　８５　：　７９−８２　（１９ｇ ｇ）］を参照。

ＴＧＦ−β１の活性型は、３９０アミノ酸前駆体のカルボキシ末端１１２アミノ 酸の二量体化により形成されるホモ二量体である［Ｄｅｒｙｎｃｋら、　Ｎａｔ ｕｒｅ　（上記）］。

組換えＴＧＦ−β１がクローン化され［Ｄｅｒｙｎｃｋら、匣色狂（上記）］、 チャイニーズハムスター卵卵細胞において発現されている［Ｇｅｎｔｒｙら、　 Ｍｏ１．Ｃｅ１１．Ｂｉｏｌ　Ｌ：３４１ｇ−３４２７（１９８７）］。

ＴＧＦ−β２は４１４アミノ酸の前駆体型を有しており、ＴＧＦ−β１の活性型 と約７０％の相同性を有するカルボキシ末端１１２アミノ酸からホモ二量体へと プロセシングされる［Ｍａｒｑｕａｒｄｔら、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２ ６２　：　１２１２７　（１９ｇ？）］。ＴＧＦ−β２はブタの血小板［５ｅｙ ｅｄｉｎら、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２６２　：　１９４６−１９４９ 　（１９８７）］およびヒトのグリオブラストーマ細胞［Ｗｒａｎｎら、　堕Ｂ ＯＪ、　６　：　１６３３　（１９８７）］から精製されており、組換えヒトＴ ＧＦ−β２がクローン化されている［ｄｅＭａｒｔｉｎら、旦ＭＢＯＪ、６　： 　３６７３　（１９８７）コ。

最も最近になって発見された形態のＴＧＦ−βであるＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β ４およびＴＧＦ−β５はｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより 同定された。これら３種の遺伝子の推定タンパク質産物のどれも天然の供給源か ら単離されていないが、ノーザン・プロットは対応するｍＲＮＡの発現を示す。

ヒトおよびブタのＴＧＦ−β３がクローン化され、既に記載されている［Ｄｅｒ ｙｎｃｋら、印想とＪ、　！　ｌ　３７３７−３７４３　（１９８８）＋　ｔｅ ｎ　Ｄｉｊｋｅら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　ＳｃｉA　ＵＳＡ 競 ：　４７１５　（１９８８）］。ＴＧＦ−β４およびＴＧＦ−β５は、それぞれ ニワトリ軟骨細胞ｃＤＮＡライブラリーから［Ｊａｋｏｗｌｅｗら、　Ｍｏ１ｅ ｃ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、　ｇ　：　１１８６−１１９５　（１９８８）コ、 およびカエル卵母細胞ｃＤＮＡライブラリーからクローン化された。１またはそ れ以上の別の型のＴＧＦ−β配列から得たプローブを用いてカエル卵母細胞ｃ　 Ｄ　Ｎ　Ａライブラリーをスクリーニングすることができる。ＴＧＦ−β４　ｍ ＲＮＡはニワトリ胚軟骨細胞において検出可能であるが、成長している胚または ニワトリ胚線維芽細胞におけるＴＧＦ−β３　ｍＲＮＡよりはるかに少ない。Ｔ ＧＦ−β５ｍＲＮＡは神経胚状態を過ぎたカエル胚およびアフリカッメガエルの オタマジャクシ（ＸＴＣ）細胞において発現される。

ＴＧＦ−βは、多種多様の正常および新生細胞の両方に対して数多くの調節作用 を有することが示されている。ＴＧＦ−βは、細胞の増殖、分化、および細胞機 能における他の重要な過程を刺激または阻害することができるので、多機能性で ある［Ｓ＋）Ｏｒｎら（上記）］。ＴＧＦ−βおよびその作用の総説については 、５ｐｏｒｎらＩＪ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｌ　１０５　：　１０３９−１０４５　 （１９８７）］、５ｐｏｒｎおよびＲｏｂｅｒｔｓ［Ｎａｔｕｒｅ　３３２@： 　２１７ −２１９　（１９８８）］およびＲｏｂｅｒｔｓら［Ｒｅｃｅｎｔ　Ｐｒｏｇｒ ｅｓｓ　ｉｎ　Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　４４　F　１３７− １９７　（１９８８）］を参照。

天然のＴＧＦ−β１は生物学的に潜在性の形態で造られることが多く（この形態 に限定されるわけではない）、変性剤、例えば尿素、熱、プラスミン、高塩、エ ンドグリコシダーゼＦ１カテブンンＤ、ＩＶ型コラゲナーゼ、共培養された内皮 細胞および層成細胞、ウロキナーゼなどのプラスミノーゲン活性化因子、刺激さ れた破骨細胞、または両極端のｐＨなどによってインビトロで活性化することが できる。例えば、Ｐｉｒｃｈｅｒら［Ｃａｎｃ、　Ｒｅｓ、　４４　：　５５３ ８−５５４３　（１９８４）　：　”非形質転換およびＫｉｒｓｔｅｎ肉腫ウィ ルスで形質転換された正常ラット腎細胞からの潜在性ＴＧＦ−β”］　；　Ａｎ ｔｏｎｅｌｌｉ−Ｏｒｌｉｄｇｅら［Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、Ａｃａｄ、　Ｓｃ ｉ、　ＵＳＡ　８６　：　４５４４−S５４８　（１９８９） ：”層成細胞および毛細管内皮細胞からの潜在性ＴＧＦ−β”］　；　Ｌａｗｒ ｅｎｃｅら［旦匹ｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１ ３３　：　１０２６−１０３４　（１９８５）　：　”ニワトリ胚線維芽細胞■ ■ の潜在性ＴＧＦ−β”］　；　０ｒｅｆｆｏら［Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂｉｏｐｈ ｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１５８　：　８１７−W２３ （１９８９）　：　−ネズミ骨器官培養物からの潜在性ＴＧＦ−β−］　；　Ｋ ｅｓｋｉ−Ｏｊａら［Ｊ、Ｃｅ１ｌＢｉｏ１．１０７：　（６Ｐａｒｔ　３）、 　１９８８．５０ａ　；　”ヒト肺腺癌セルラインからの潜在性ＴＧＦ−β“コ ；　Ｍｉｙａｚｏｎｏおよび１１１ｅｌｄｉｎ［Ｊ、Ｃｅ１１．Ｂｉｏｃｈｅｍ 、５ｕｐｐ、　Ｑ　（１３ｐａｒｔ　Ｂ）　１９W９゜ ｐ９２］ならびにＭｉｙａｚｏｎｏおよびＥｅｌｄｉｎ［Ｎａｔｕｒｅ　３３８ 　：　１５８−１６０　（１９８９）　：”ヒト血小板からの潜在性ＴＧＦ−β およびその炭水化物構造”コニおよびＰｉｒｃｈｅｒら［Ｂｉｏｃｈｅｍ、　Ｂ ｉｏｐｈｙｓ、　Ｒｅｓ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　１３６　：　３０−３７　（１９ ８６）　；　”ヒト血液血小板からの潜在性ＴＧＦ−β“］を参照。さらに、Ｌ ａｗｒｅｎｃｅら［Ｊ、Ｃｅ１１．　Ｐｈｙｓｉｏｌ、　１２１　：　１８４− １８８　（１９８４）］；　ＫｒｙｃｅｖｅＪａｒｔｉｎｅｒｉｅら［Ｉｎｔ、 　Ｊ、　Ｃａｎｃｅｒ　３５　：　５５３−５５８　（１９８５）］　；　Ｂｒ ｏｗ獅轣mゴＧＦ −β”、　ＮＹ　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、Ｍｅｅｔｉｎｇ　Ａｂｓｔｒａｃｔ　（１ ９８９年５月１８−２０日月；　Ｄａｎｉｅｌｐｏｕｒら［k Ｃｅｌｌ、Ｐｈｙｓｉｏｌ、　１３８　：　７９−８６　（１９８９）コ　；　 Ｗａｋｅｆｉｅｌｄらり、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６３　：@７６４６−７６５ ４　（１９８８）］　：およびＭｉｙａｚｏｎｏら［Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅ ｍ、　２６３　：　６４０７−６４１５　（１９８ｇ）コをQ照。

いくつかのグループがヒト血小板から分泌された潜在型ＴＧＦ−β１の特徴を調 べている。Ｐｉｒｃｈｅｒら（上記）は、これが４００Ｋａの見かけ分子量を有 すると記載した。さらに最近になって、これは約２３５Ｋｄの３成分複合体とし て特徴付けられている。これによれば、活性なＴＧＦ−β１（２５Ｋｄ二量体） はプロセシングされた前駆体の残りの部分（７５Ｋｄ二量体）と非共有結合によ って結合しており、これが次に１２５〜１６０Ｋｄの非関連タンパク質にジスル フィド結合している［Ｙａｋｅｆｉｅｌｄら、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、　２ ６３　（上記）　：　ＭｉｙａｚｏｎＯら（上記）　；　ＭｉｙａｚｏｎB ら（Ｊ、Ｃｅ１ｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ、５ｕｐｐ、　β２（１２Ｐａｒｔ　Ａ）、 １９８ｇ、　ｐ、２００）：　１Ｔａｋｅｆｉｅｌｄら（ＪA　Ｃｅ１ｌ。

Ｂｉｏｃｈｅｍ、５ｕｐｐ１．　ＩＩＡ：　０．４６　（１９８７）］。

１２５〜１６０Ｋｄの結合タンパク質の機能は解明されていない。最近の特徴付 けにより、これは少なくとも１４のＥＧＦ様の反復と６つの潜在的なＮ−グリコ リル化部位およびカルシウム結合ドメインを含むことがわかっているＩＪａｎｚ ａｋｉら、”ＴＧＦ−β”、　ＮＹ　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ｍｅｅｔｉｎｇ　 ａｂｓｔｒａｃｔ　（１９８９年５月１８−２０日）　；　Ｍｉｙ≠■ ｏｎｏ、”ＴＧＦ−β”、ＮＹ　Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ｍｅｅｔｉｎｇ　ａｂｓｔ ｒａｃｔ　（１９８９年５月１８−２０日）］。培養中に多くの細胞により分泌 される潜在性ＴＧＦ−βは類似の構造を有しており［ｆａｋｅｆｉｅｌｄら、　 Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｆｆｌ、　（上記）コ、これが、ＴＧＦ−β１がインビボ で標的細胞によって恐らく最初に認識されるであろう形態である。ＴＧＦ−βの 前駆体の残余部分が前駆体領域における配列の保存に基づいて重要かつ独立した 生物学的機能を有するかもしれないことが示唆されていた［Ｒｏｂｅｒｔｓら、 　Ｒｅｃｅｎｔ　Ｐｒｏｇｅｒｓｓ　ｉｎ　Ｈｏｒｍｏｎｅ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ 　（上記）］。さらに、前駆体ＴＧＦ−β１の３３位Ｃ二おける突然変異が、成 熟ＴＧＦ−β１の収量を高めることが報告されており、前駆体の”プロ”ａ城の 三量化が潜在性を付与するのに必要であると示唆されている［Ｂｒｕｎｎｅｒら 、Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈｅｍ、２６４　＋　１３６５０−１３６６４　（１９８９ ）］。

通常の組織修復は、多くの細胞種が関与する複雑かつ連続した過程である。線維 芽細胞、炎症細胞および角化細胞のすべてが一体となって機能して細胞の分裂、 分化および移動を促進する。これらの過程が次いで結合組織の堆積および血管形 成の増強を導く。最近のデータによれば、これらの過程が、自己分泌および傍分 泌の両様式でＴＧＦ−βなどのペプチド成長因子によって媒介されていることも あることが示唆されている［Ｐｏ５ｔｌｅｔｈｖａｉｔｅら、　Ｊ、Ｅｘｐ、Ｍ ｅｄ、　１６５：　２５１−２５６　（１９８７）；　Ａｓ５ｏｉａｎら、　Ｎ ａｔｕｒｅ　３０８：　８０４−８０６　（１９８４）］。内生ＴＧＦ−βの量 がラットの傷部位において一時的に増加することが報告されている［Ｃｒｏｍａ ｃｋら、　Ｊ、Ｓｕｒｇ、Ｒｅ５４２：　６２２−６２８　（１９８７）］。ま た、複数の成長因子を含有する血小板の粗抽出物が慢性の皮膚潰瘍の治癒を促進 する［Ｋｎｉｇｈｔｏｎら、　Ａｎｎ、Ｓｕｒｇ、　２０４：　３２２−３３０ 　（１９８６）］。

これら研究の結果は、正常な治癒が局所的に産生されたペプチド成長因子によっ て媒介されているという仮説を間接的に支持するものである。

インビボにおいて、ＴＧＦ−β１は皮肉注射されたときに肉芽組織の形成を引き 起こす［ＲｏｂｅｒｔＳら、　Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、Ａｃａｄ、Ｓｃｉ、ＵＳＡ　 ８３：　４１６７−４１７１　（１９８６）：　５ｐｏｒ獅轣B と江寒岬±：　１３２９−１３３１　（１９８３）］。イイントロにおいて、Ｔ ＧＦ−β１はフィブロネクチンおよびＩ型コラーゲンの発現を刺激しくその一部 はｍＲＮＡ量の増加によって媒介される）、細胞周辺マトリックスへのフィブロ ネクチンの堆積を増加させる［Ｗｒａｎａら、　Ｅｕｒ、Ｊ、Ｂｉｏｃｈｅｍ、 １５９：　６９−７６　（１９８６）；　ＩｇｎｏｔｚおよびＭａｓｓａｇｕｅ 。

ｏｐｈｙｓ、Ｒｅｓ、ｃｏｍｍｕｎ、　１３８：　９７４−９８０　（１９８６ ）］。

コラーゲン媒体中のＴＧＦ−βを正常ラットの切傷に単一適用すると、未処置ま たはコラーゲン媒体処置した切傷と比較して張力が有意に増加した［Ｍｕｓｔｏ ｅら。

５ｃｉｅｎｃｅ　２３７：　１３３３−１３３６　（１９８７）　；また、Ｂｒ ｏｗｎら、　Ａｎｎ、Ｓｕｒｇ、　２０８：　７８８−７９S　（１ ９８８）をも参照コ。別の研究においては、ＴＧＦ−β処置によってラットの傷 部位におけるヒドロキシプロリンとチミジンのドキソルビンン抑制の取込みが逆 転することが報告されており、ＴＧＦ−βが細胞の増殖を刺激することによって 、およびコラーゲン合成を高めることによって切傷の強度を増強することもある ことが示唆されている［Ｇｒｏｔｅｎｄｏｒｓｔら、　Ｊ、Ｃｌ１ｎ、Ｉｎｖｅ ｓｔ、　７６：　２３２３−２３２９　（１９８５）］。

これらの結果は、手術による切傷の治癒に一層近似した動物モデルを用いて広げ られた［Ｃｕｒｔｓｉｎｇｅｒら、Ｓｕｒｇｅｒｙ、　Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｙ　 ＆　０ｂｓｔｅｔｒｉｃｓ　１６８：　５１７−５２２　i１９ ８９）コ。ＴＧＦ−βはヒト線維芽細胞の強力な化学誘因物質であり［Ｐｏ５ｔ ｌｅｔｈｖａｉｔｅら（上記）コ、ラットの腎臓線維芽細胞の培養物においてコ ラーゲンの合成を刺激する［Ｒｏｂｅｒｔ５ら、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａ ｃａｄ、　Ｓｃｉ、　ＵＳ＾（上記）］ことから、線線維芽胞によるコラーゲン の産生を直接刺激することにより、または傷領域にペプチド成長因子を放出する であろう炎症細胞を誘因することにより張力を増加させるであろうとか全身的に 投与あるいは外傷組織に局所的に適用されたときに外傷を治療するのに有用であ り、細胞、特に線維芽細胞の迅速な増殖の促進を伴うことが開示されている［例 えば、ＥＰ　１２８．８４９：　ＥＰ　１０５．０１４：米国特許Ｎｏ、　４． ８４３．０６３：　Ｎｏ、　４．７７４．３２２；　４．７７４．２２８：およ びＮｏ、　４．８１０．６９１を参照］。しかし、哺乳動物に外傷を与える前に 該哺乳動物に組織修復促進の傾向を与える薬物の必要性も存在している。

即ち、本発明の目的は、組織損傷をまだ受けていない哺乳動物を処置下ることに よって外傷周囲の細胞の増殖を促進し、その結果として迅速な治癒を促進するた めの方法を提供することである。

この目的およびその他の目的は当業者には明らかであろう。

発明の開示 不発明は、動物に組織損傷を与える荊に該動物に有効量のＴＧＦ−βを全身投与 することからなる、哺乳動物に組織修復促進の傾向を与える方法を提供するもの である。ＴＧＦ−βを、組織損傷を与える前の約２４時間以内に投与するのが好 ましい。ＴＧＦ−βを、組織損傷を与える時点の約２４時間前から約５分以上前 までの範囲の時間内に投与するのがさらに好ましい。

驚くべきことに、傷を与える前の少なくとも２４時間に哺乳動物にＴＧＦ−βを １回で全身投与すると、傷の／ｉ５！＠が劇的に促進されることがわっ１ったっ この発見は、ＴＧＦ−βの循１′：ｂの血漿半減期が約５分にすぎないことがら 特に驚くべ図１は、ヒトＴＧＦ−β１、ヒトＴＧＦ−β２、ヒトＴＧＦ−３３、 ニワトリＴＧＦ−β４、および刀ニルＴＧＦ−β５の配列を示すものである。

図２は、線形の皮膚切傷のピーク負荷（これは≦変の尺度である）を示すもので あるっラントに傷を付１ブるときに３ｍｇのプレドニゾロン（星印）でＩｉ：ｉ 内円処置して治ｆｅｄ程を減弱させるフ、または食塩水（黒）で処置して減弱さ れていない治癒の対照とした。食塩水（斜線）または１０μｇ／ｋｇのｒｈＴＧ Ｆ−β１（陰影）を、傷を付ける２４時間前（−２４ｈｒ）または傷を付けると き（Ｏｈｒ）に静脈内投与した。

図３は、傷を付けるときに筋内内により３ｍｇのメチルプレドニゾロンを用いて 、および静脈内により食塩水（黒）または１０μｇ／ｋｇ、　１００　Ａ１ｇ／ ｋｇもしくは５００μｇ／ｋｇのｒｈＴＧＦ−β１を用いて処置した減弱治癒の ラット皮膚線形切傷のピーク負荷を示すものである。食塩水て処置したがメチル プレドニゾロンで処置されていない群を減弱されていない治癒の対照とした。

本明細書て用いる”ＴＧＦ−β“なる用語は、任！の種に由来する任！のＴＧＦ −βの完全長の天然アミノ酸配列を有する上記した一層の分子を意味する。±明 細書におけるこのよう？；ＴＧＦ−βへの言及は、ＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−Ｂ２ 、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４およびＴＧＦ−Ｂ５（これらの配列は図１にＴ、 されている）を含む現在同定されている形態のいずｒ、コ１、ならびに将来に？ いて同定されるＴＧＦ−５種（既知ＴＧＦ−βのいずれっ１の配列から導かれ、 ７５％またはそれ以上の残基が同一であるポリペプチドを含む）、それらのアレ ル、およびそれらの予め決定したアミノ酸配列変異体（それらが本明細書中に記 載した方法において有効であるなら）を言及するものであることは理解されよう 。具体的な用語である”ＴＧＦ−β１”、”ＴＧＦ−β２′および”ＴＧＦ−β ３′は、文献に記載されているＴＧＦ−βを意味する［例えば、Ｄｅｒｙｎｃｋ ら、　Ｎａｔｕｒｅ　（上記）　：　５ｅｙｅｄｉｎら、　Ｊ、Ｂｉｏｌ、Ｃｈ ｅｍ、　２６２　（上記）、およびｄｅＭａｒｔｉｎら（上記）コ。さらに、Ｔ ＧＦ−βは、成熟型ＴＧＦ−βおよび前駆体の結合もしくは非結合型複合体とし て、または潜在型にあるものが適切かつ有用である。

ＴＧＦ−β群の構成員は、分子の成熟部分に９個のシスティン残基を有し、成熟 領域において他の既知のＴＧＦ−β配列と少なくとも６５％の配列の同一性を有 し、そして同一のレセプターを競合するであろうものと定義される。さらに、こ れらの全ては、Ｎ−末端の近くに相同性の高い領域を有し、後にプロセシングに よって除去されるであろう前駆体の部分中に３個のシスティン残基の保存を示す さらに大きな前駆体としてコードされているようである。また、ＴＧＦ−β群は ４または５個の環基性アミノ酸のプロセシング部位を有しているようである。

ＴＧＦ−βはあらゆる供給源、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトに由来 するのが適切である。ヒト以外の動物、例えばブタまたはウシ供給源に由来する ＴＧＦ−βを用いてヒトを処置することができる。同様に、家畜、農場、動物園 、スポーツまたは愛玩動物などの他の哺乳動物種を処置することが所望であると きには、ヒトＴＧＦ−βならびに他の種に由来するＴＧＦ−βが適当に用いられ る。

本明細書で用いる”組′ａ損傷“なる用語は、軟または硬組織に対するあらゆる 形態の損傷または外傷（熱的に、および／または機械的に誘導された外傷を含む ）、ならびに炎症、感染および免疫反応によって引き起こされる損傷を指す。組 織損傷の例には、手術による切傷、例えば内部および表皮の手術による切傷なら びに角膜手術：火傷（１度、２度あるいは３度を問わない）；骨の損傷、例えば 骨折、骨欠損および補欠移植であり、臀部置換などの損傷に付随する手術を含む ：裂傷、切傷および穿通側を含む創傷；ｉｉｌｇｊ（例えば、糖尿病、歯、血友 病、怒張または床づれの潰瘍など）の発生が予想される部位、好ましくは手術に よって急性の傷に変換される慢性疾患または潰瘍、骨髄炎などの骨の感染：なら びに、軟組織のあらゆる炎症または免疫反応、例えば骨欠損に導くあらゆる炎症 性疾患またはリューマチ性関節炎（感染性または非感染性を問わない）で見られ るものなどが含まれる。

Ｂ１本発明実施の様式 本発明の方法は、組織に修復促進の傾向を与える薬物として有効量のＴＧＦ−β を、哺乳動物（家畜、農場、動物園、スポーツまたは愛玩動物を含むがヒトが好 ましい）に全身投与することからなる。

本発明の方法によって治療することができる患者の種類には、正常な組織修復を 受けるかまたは受けることが期待される患者だけでなく、異常な組織修復を示す かまたは示すことが予想される患者が含まれる。減弱された傷治癒は多くの原因 を有しており、これら原因には糖尿病、尿毒症、栄養不良、ビタミン不足、およ びコルチコステロイド、放射または抗新生物薬物（ドクソルビシンなど）による 全身処置が含まれる。即ち、本発明は後者ならびに前者の種類の患者を処置する ことを意図している。

ＴＧＦ−β分子は、関係している特定の組織、それぞれの患者の症状、ＴＧＦ− βを放出する部位、投与方法、および医学者に既知の他の因子を考慮に入れて、 信頼できる医学的実施態様に一致する方法で処方され投与されるであろう。即ち 、本発明の目的のためには、ＴＧＦ−βの”治療学的有効量”とは、ＴＧＦ−β の投与後に組織損傷を受けた哺乳動物の組織修復を促進するに有効な量である。

望ましい純度のＴＧＦ−βと生理学的に許容しうる担体、賦形剤、あるいは安定 化剤を混合することによって、ＴＧＦ−βを保存あるいは投与用に調剤する。

そのような成分は、使用される投与量および濃度では被投与者に対して非毒性で ある。ＴＧＦ−βが水溶性である場合は、酢酸塩あるいは他の有機酸塩のような 緩衝液（約５〜６のｐＨが好ましい）中に調剤する。ＴＧＦ−β変異体が部分的 にしか水に溶けない場合には、その溶解度を増大させるために、これを非イオン 性の界面活性化剤［例えば、ツイーン、プルロニックあるいはポリエチレングリ コール（ＰＥＧ）、例えば、０．０４〜０．０５％（Ｗ／Ｖ）のツイーン８０］ と配合することによってマイクロエマルジョンとして調剤する。所望により他の 成分も添加することができる：例えば、抗酸化剤（アスコルビン酸など）、低分 子量（約１０残基より小さい）のポリペプチド（ポリアルギニンあるいはトリペ プチドなど）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン、あるいは免疫グロブリ ンなど）、アミノ酸（グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、あるいはアル ギニンなど）、キレート化剤（ＥＤＴＡなど）、および糖アルコール（マンニト ールあるいはソルビトールなど）である。

治療投与に使用するＴＧＦ−βは滅菌状態でなければならない。滅菌は、滅菌濾 過膜（例えば、０．２ミクロン膜）で濾過することによって容易に達成される。

通常、ＴＧＦ−βは熱的および酸化変性に対して安定性が高いので水溶液として 、または凍結乾燥形態で保存されるであろう。ＴＧＦ−β調型物のｐＨは通常は 約５であろうが、ある種の場合にはより高いかもしくはより低いｐＨ値も適切で あろう。ある種の上記賦形剤、担体あるいは安定化剤を使用することによって、 ＴＧＦ−βの塩が生成することは理解されるであろう。

ＴＧＦ−βを含有する治療学的組成物は、通常、滅菌出入口の付いた容器（例え ば、皮下注射針で突き刺せる栓の付いた静脈内液剤バッグもしくはＩくイアル） に入れる。

徐放性製剤をｙ４製することもてき、これにはマイクロカプセル粒子および移植 可能な物品からなる製剤が含まれる。徐放性のＴＧＦ−β組成物を調製するため には、ＴＧＦ−βを生物分解性のマトリックスもしくはマイクロカプセル甲に導 入するのが好ましい。この目的に適した素材はポリラクチドであるが、その他の ポリ−（α−ヒドロキシカルボン酸）ポリマー、例えばポリ＝Ｄ−（−）−３− ヒドロキシ酪酸（ＥＰ　１３３．９８８Ａ）を用いることもできる。他の生物分 解性ポリマーには、ポリ（ラクトン）、ポリ（アセタール）、ポリ（オルトエス テル）、あるいはポリ（オルトカーボネート）が含まれる。ここで最初に考慮し なければならないことは、担体自体あるいはその分解産物が標的組織において非 毒性であること、およびその症状をさらに悪化させないということである。これ は、代表的な動物モデル（減刑されたラット皮膚線形切傷モデル）において、も しくはそのようなモデルが利用できない場合には正常な動物において、通常のス クリーニングを行なうことによって決定することができる。

徐放性組成物の例としては、米国特許Ｎｏ、　３．７７３．９１９、ＥＰ　５８ ，４８１Ａ、米国特許Ｎｏ、　３．８８７．６９９、ＥＰ　１５ｇ、２７７Ａ、 カナダ特許Ｎｏ、　１．１７６、５６５、Ｕ、　Ｓｉｄｍａｎら［肛叩ｏ１ｙｍ ｅｒｓ　２２：　５４７　（１９ｇ３）］、およびＲ，Ｌａｎｃｅｒらにｈｅｍ 、Ｔｅｃｈ、　１２：　９８　（１９８２）］を参照。

感染によって引き起こされる組織損傷を、有効量のセフォロスボリンまたはペニ シリンなどの抗生物質と配合したＴＧＦ−βによって治療することができる。

別法によれば、この抗生物質とＴＧＦ−βを上記の一般的方法を用いて患者に別 々に投与してもよい。治療を行なう医師は、感染症状を治療するための通常の治 療法に基づいて抗生物質の適切な投与量および投与経路を決定することができる であろう。

使用されるＴＧＦ−βの投与量は上述の因子、特に予想される組織損傷の種類に 依存する。一般的な提案として、例えば１またはそれ以上の単回投与、連続注入 またはポーラス注射のいずれによるかにかかわらず、約０．０１５から５ｍｇ／ ｋｇまで、好ましくは０．５ｍｇ／ｋｇまでのＴＧＦ−β用量を患者に投与する ことができる。、不発明の利点は、ＴＧＦ−βの１回のみの投与を好ましくは静 脈内で行なうところにあり、従って１回投与法が好ましい。しかし、他の投与処 方も有用であろう。この投与は、組織に損傷を与える前に（例えば、手術の前に ）、好ましくは組織損傷を与える前の約２４時間以内に、さらに好ましくは組織 損傷の前の２４時間以内から約５分以上までに行なう。

本発明を以下に挙げる実施例においてさらに詳しく説明する。この実施例は本発 明の態様の１つを示すことを、を図したものであり、唯一の態様ではない。

実施例１ 組換えヒトＴＧＦ−β１をクローン化し［Ｄｅｒｙｎｃｋら、　Ｎａｔｕｒｅ　 （上記）］、チャイニーズ・ハムスター卵巣細胞において発現させた［例えば、 Ｇｒａｙｃａｒら、　Ｍｏ１ｅｃｕｌａｒ　Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　３： 　１９７７−１９８６　（１９８９）および米国特許Ｎｏ、　４．８８６．７４ ７（１９８９年１２■ １２日発行）に記載されている方法を用いるコ。このタンパク質を次のように精 製した：即ち、細胞培養液を集め、この培養液をＰｅ１ｌｉｃｏｎカセツトシス テムで濃縮し、この濃縮液を３倍容量の５０１の試薬アルコール：ＨＣｌの混合 液で希釈し、この混合物を４℃で１時間放置し、ｐＨを７５〜８に調節し、この 混合物を遠心し、この上清をカチオン交換Ｓ　５ｅｐｈａｒｏｓｅ　Ｆａｓｔ　 Ｆｌｏｙカラム（６Ｍ尿素、２０ｍＭ　ＭＯＰＳ緩衝液、ｐＨ８で予め平衡化す る）にかけ、このカラムを同じ緩衝液で洗浄し、同じ緩衝液中の０〜０．４Ｍ塩 化ナトリウムの勾配液で溶離し、ゲル上を移動させた勾配分画からプールを調製 し、このプールのｐＨを４．５に調節し、このプールを第２のカチオン交換Ｓ　 Ｐ　Ｔｏｙｏｐｅａｒｌカラム（２Ｍ尿素、５ＱｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐ Ｈ４，，５で予め平衡化する）にかけ、このカラムを同じ緩衝液で洗浄し、同じ 緩衝液中の０〜１Ｍ塩化ナトリウムの勾配液で溶離し、ゲル上を移動させた勾配 分画からプールを調製し、このプールを撹拌セルＡａ＋ｉｃ。

ｎ濃縮器で濃縮し、この濃縮液をＨＷ５５Ｓ　Ｔｏｙｏｐｅａｒｌゲル濾過カラ ムにかけ、１Ｍ酢酸で洗浄し、ゲル上を移動させた勾配分画からプールを調製し 、そしてこのプールをＣｅ１ｌｕｆｉｎｅ　ＧＨ−２５によりｐＨ５の２０ｍＭ 酢酸ナトリウム緩衝液中に交換した。

媒体（食塩水）は、ＴＧＦ−β１を含有させずにｐＨ５の酢酸ナトリウム緩衝液 中で配合した。この原材料を使用時まで４℃で保存した。

動物の手術 雄性の成体Ｓｐｒａｇｕｅ　Ｄａｗｌｅｙラット（３００〜３５０ｇ）［Ｃｈａ ｒｌｅｓ　Ｒｉｖｅｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、　Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、 　ＭＡ］をＮＩＨおよびＡｍｅｒｉｃａｎ　Ａｓ５ｏｃｉａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　 ｔｈｅ　、八ｅＣｒｅｄｉｔａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ａｎｉ ｍａｌ　Ｃａｒｅのガイドラインに従って維持し、ケタミン塩酸塩／キンラジン 塩酸塩／アセチルプロマシンマレイン酸塩の混合物の筋肉的注射によって麻酔し た。背中と脇腹の体毛を刈り込み、ベタジンと７０％アルコールのリンス液で消 毒した。この時点で、それぞれのラットに食塩水または４種濃度のＴＧＦ−β１ のいずれかを１．０ｍｌ／ｋｇの容量で１回の静脈内（ｉｖ）注射により投与し た。媒体またはＴＧＦ−βｌの注射の後に、皮下の皮筋層まで切ることによって 、長さが約２．５ＣＩｍの２対の対称的な横断性の完全厚みの皮膚切傷を作った 。この傷を横切って均等に分けられた２つの遮断された４−０ステンレススチ一 ル縫合によってそれぞれの傷を閉じた。手術後にそれぞれのラットに、５ｍｇの メチルプレドニゾロンの筋肉的注射を１回行なって炎症を抑制して治癒過程を減 刑させるか、または食塩水を投与して減刑されていない治癒の対照とした。これ らの動物をカゴに戻し、回復させた。

手術時ではなく手術の２４．４８または７２時間前にＴＧＦ−β１を静脈内で１ 回投与することを除いて同じ方法で別の動物を処置した。

組織試料の採取 一定の時間毎にラットを安楽死させ、それぞれの傷跡の中心から傷の１〜２ｍｍ の横断切片を採取し、試料を光学顕微鏡試験用には１０％の中性緩衝化ホイレマ リン中で固定し、電子顕微鏡用にはＫ　ａｒｎｏｖｓｋｙ溶液中で固定した。そ れぞれの傷から２つの８ｘ２５ｍｍ試料を採取し、傷強度測定のために１０％ホ ルマリン中で７日間固定した。

張力測定 幅と長さが均一になるように組織を調整しく８ｍｍｘ　２５ｍｍ）、傷跡の端部 を試料の両側に露出させた。目盛りの付いた張力計［Ｉｎ５ｔｒｏｎ　Ｕｎｉｖ ｅｒｓａｌ　Ｔｅｓｔｉｎｇ　Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ　Ｍｏｄｅｌ　１０１１． 　Ｉｎ５ｔｒｏｎ　Ｃｏｒｐ、、　Ｃａｎｔｏｎ、　ＭＡ］を用いて、コードさ れた試料について張力測定を行なった。測定した値は破断強度（ｇ）であり、こ れは傷跡組織が目で見て破断し、大きなふれが記録紙に現れたときに組織にかか った力をｇで測定するものである。

未減刑の治癒の対照（食塩水）群ならびに減刑された治癒の対照（食塩水）群お よびＴＧＦ−β１処１された群で２つの独立した研究を行なった。第１の研究に よって、皮膚切傷の直前または２４時間前に静脈内投与したときの１０μｇ／ｋ ｇＴＧＦ−β１の食塩水対照に対する効果を比較した。この研究の結果を図２に 示すが、１０μｇ／ｋｇのＴＧＦ−β１で処置した傷は、同時に行なった媒体対 照と比較すると強度の増加（ｐ＜０．０５）を示すことがわかった。さらに、Ｔ ＧＦ−β１で処置した減刑された治癒の傷は、媒体で処置された未減刑の治癒の 傷の約９０％の強度であった。

第２の研究は、１００μｇ／ｋｇおよび５００μｇ／ｋｇ用量のＴＧＦ−β１の 追加を伴っているが設計としては同一である。結果を図３に示すが、３種のＴＧ Ｆ−β１用量のすべてが、減刑された治癒の媒体対照と比較して線形切傷の強度 を増加させルコとがわかった（ｐ＜０．０１）。１００オヨヒ５００　μｇ／ｋ ｇ用ｊｌ１７）ＴＧＦ−β］は、減刑された治癒の傷を、未減刑冶應の媒体処置 の傷と同じ強度まで回復させた（図３）。

このように、ＴＧＦ−βは、］０〜５００μｇ／ｋｇの１回の１ｖ投与で投与し たときに、このモデルにおいて傷治癒を促進するのに有効である。このモデルは 、臨床試験で得られるであろう結果を予測させるものである。

配列表 （１）一般的情報 （１）特許出願人　ジエネンテク、インコーポレイテッド（１、発明の名称：　 哺乳動物に組織修復促進の傾向を与える方法（ｉｔｉ）　配列の数・　５ （ｉｖ）　連絡先・ （Ａ）　名宛人・ジエネンテク、インコーポレイテッド（Ｂ）　通り：ポイント ・サン・ブルーノ・ブールバード４６０番（Ｃ）　市・サウス・サン・フランシ スコ（Ｄ）　州　カリファルニア （Ｅ）　国　アメリカ合衆国 （Ｆ）ＺＩＰ：９４０８０ （Ｖ）　コンピューター解読書式 （Ａ）　媒体型：５２５インチ、３６０Ｋｂフロツピーデイスク（Ｂ）　コンビ ニ−ター：ＩＢＭＰＣ適合（Ｃ）　オペレーティング・システム：　ＰＣ−ＤＯ Ｓ／ＭＳ−ＤＯ３（Ｄ）　ソフトウェア・ｐａｔｉｎ　（ジエネンテク）（ｖｉ ）　本出願のデータ。

（Ａ）　出願番号、未　定 （Ｂ）　出願日・本　日 （Ｃ）　分類　未　定 （ｖｆｉ）　優先権主張出願のデータ：（Ａ）　出願番号：米国０７１５０４． ４９５（Ｂ）　出願日・１９９０年４月４日 （ｖｉ）　弁理士／代理人情報 （Ａ）　氏名　ハサク、ジャネット・イー（Ｂ）　登録番号：２８．６１６ （Ｃ）　参照／整理番号　６３７ （ｉｘ）　電話連絡先情報 （Ａ）　電話番号：　４１５／２６６−１８９６（Ｂ）　ファックス番号：　４ １５／９３２−９８８１（Ｃ）　テレックス番号　９１０／３７１−７１６８（ ２）　配列番号１の情報 （１）　配列の特徴・ （Ａ）　長さ　３９０アミノ酸 （Ｂ）　型　アミノ酸 （Ｄ）　トポロン−０直鎖状 （ｉｖ）　配列：配列番号１・ ５ａｒ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　Ｌ４ｕ　Ｌａｕ　Ａｒｇ　 Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　ＧｌｕＡｓｐ　Ｐｈ＠Ａｒｑ　Ｌｙ １！　Ａｓｐ　Ｌ＠ｕ　ＧｌｙＴｒｐ　Ｌｙｓ　Ｔｒｐ工ｌａ　Ｈｉｓ　Ｇｌｕ 　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ３０５　コ１０　３Ｌ５ ＧＩＹ　ＴＹＴ　Ｈ１！Ｉ　Ａｌａ　Ａｓｎ　ｉ’ｈａ　Ｃｙｓ　Ｌｅｕ　Ｇｌ ｙ　Ｐｒｏ　ｃｙ！！　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　工１ａＴｒｐ３２０　コ２５　３コ０ ５ｅｒ　Ｌａｕ　Ａ！！Ｐ　Ｔｈｒ　Ｇｌｎ　Ｔｙｒ　Ｓａｒ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ 　Ｉａｕλｌａ　Ｌ４ｕ　’ｒｙｒ　Ａｓｎ　Ｇｌｎコ３５　３４０　３４５ （２）　配列番号２の情報 （ｉ）　配列の特徴： （Ａ）　長さ＝４１４アミノ酸 （Ｂ）　型　アミノ酸 （Ｄ）　トポロジー・直鎮状 （ｔｖ）　配列　配列番号２・ Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ａｌａ　Ｌａｕ　Ｓａｒ　Ｉａｕ　５＠ｒ　Ｔｈｒ　Ｃｙｓ　 ｌｉ；ａｒ　Ｔｈｘ置論ｕ　Ａ３１ｐ　Ｍｅｔ　Ａ５ｐＧｉｎ　Ｐｈａ　Ｍａｔ 　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　Ａｒｇ工ｍｅ　Ｇｌｕ　Ａｌａ　Ｉｌａ　Ａｘｑ　Ｇｌｙ　 Ｇ１ｎ工１ａ　ＬｅｕＳａｒ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｌｙｓ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｅａ ｒ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ａｓｐ　Ｔｙｒ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｐｒ。

Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　ＶａｌＡｌａ　５＠ｒ　Ｉ ｌ＠Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　ＡｒｇＡｓｐ　Ｌａｕ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ 　Ｇｌｕ　Ｌｙｅ　Ａｌａ　Ｅａｒ　Ａｒｑ　Ａｒｇ　Ａｌａ　Ａｌａ　Ａｌａ 　Ｃｙｓ　（ｙｌｕＡｒｇ　Ｇｌｕ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　Ａｓｐ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ 　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ａｌａ　Ｉ、ｙｓ　Ｇｌｕ　Ｖａｌ　Ｔｙｒ　Ｌｙｓ９５　 １ｏｏ　１０５ Ｘｌｅ　Ａｓｐ　Ｍａｔ　Ｐｒｏ　Ｐｒｏ　Ｐｈａ　Ｐｈａ　Ｐｒｏ　Ｓｅｒ　 Ｇｌｕ　Ｈｉｓ　Ａｌａ　工１ａ　Ｐｒｏ　Ｐｒ。

Ｔｈｒ　Ｐｈａ　Ｔｙｒ　Ａｒｇ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｐｈａ　Ａｒｇ　工ｌａ　 Ｖａｌ　Ａｒｇ　Ｐｈａ　Ａｓｐ　Ｖａｌ　５ｉｒＡｌａ　Ｍｅｔ　Ｇｌｕ　Ｌ ｙｇ　Ａ！ｉｎ　Ａｌａ　ｓａｒ　Ａｓ１ｎ　Ｌａｕ　ＶａｌＬｙｓ　Ａｌａ　 Ｇｌｕ　Ｐｈａ　社ｑＶａｌ　Ｐｈａ　Ａｒｇ　Ｌｅｕ　Ｇｌｎ　Ａｓｎ　Ｐｒ ｏ　Ｌｙｅ入１ａ　Ａｒｇ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　Ａｒｇ１５５　 １６０　：Ｌ６５ Ｘ１＊　Ｇｌｕ　Ｌｅｕ　Ｔｙｒ　Ｇｉｎ　Ｉｌａ　Ｌａｕ　Ｌｙｇ　５ａｒ　 ＬＹＩＥ　ＡＪ！Ｐ　Ｌａｕ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　Ｐｒ。

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３コ５　コ４０　コ４５ Ｃｙｓ　Ｐｒｏ　Ｔｙｒ　Ｌｅｕ　Ａｒｇ　Ｓａｒ　Ａｌａ　Ａｎｐ　Ｔｈｒ　 Ｔｈｒ　Ｈｉｓ　Ｓａｒ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｌａｕ３５０　コ５５　３６０ Ｇｌｙ　Ｌａｕ　Ｔｙｒ　Ａｓｎ　Ｔｈｒ　Ｌａｕ　Ａｓｎ　Ｐｒｏ　Ｇｌｕ　 Ａｌａ　Ｓａｒ　Ａｌａ　Ｓａｒ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ３６５　コツ０　３７５ ＣｙＳ　Ｖａｌ　Ｐｒｏ　Ｇｌｎ　Ａｓｐ　Ｚ、ｅｕ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌａｕ 　Ｔｈｒ　ｘｌｅ　Ｌａｕ　Ｔｙｒ　Ｔｙｒ　Ｖａ１３８０　３Ｂ５　３９０ Ｇｌｙ　Ａｒｇ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｌａｕ　 Ｓｅｒ　Ａｓｎ　Ｍａｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ（２）　配列番号４の情報 （１）　配列の特徴： （、へ）　長さ：３０４アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｄ）　トポロジー：直鎖状 （ｔｖ）　配列：配列番号４： Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　Ｇｌｙ　Ｆ！ｉｓ　入１ａ入ｌｉｐ　Ｇｌｕ　Ｍａｔ　Ａｒｇ 　工ｌａ　Ｓｉｒ　Ｉｌａ　Ｇｌｕ　Ｇｌｙ　ＰｈａＰｒｏ　Ｌａｕ　Ｔｙｒ　 Ｉｌａ　入ｓｐ　Ｐｈａ　Ａｒｇ　Ｌｙｓ　入ｇｐ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ｔｒｐ　 Ｌｙｓ　’ｒｒｐ　工１・２ユ５　２２０　２２５ Ｈ１ｓ　Ｇｌｕ　Ｐｒｏ　Ｌｙｓ　Ｇｌｙ　Ｔｙｒ　Ｍａｔ　Ａｌａ　入ｓｎ　 Ｐｈａ　Ｃｙｓ　Ｍａｔ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　ａｙｓＰｒｏ　’！’ｙｒ　工ｌ＠ 　Ｔｒｐ　Ｓａｒ　Ａｌａ　Ａｓｐ　Ｔｈｒ　Ｇｉｎ　Ｔｙｒτｈｒ　Ｌｙｓ　 ’Ｖａｌ　Ｌｅｕ入１ａＬａｕ　Ｔｙｒ　入ｓｎ　Ｇｉｎ　Ｈｉｓ　Ａｘｎ　Ｐ ｒｏ　Ｇａｙ入１ｍ　Ｓａｒ入１ａ　Ａｌａ　Ｐｒｏ　Ｃｙｓ　ＣｙｓＶａｌ　 ｐｒｏ　Ｇｉｎ　Ｔｈｒ　Ｌ＠ｕ　Ａｊｐ　ｐｒｏ　Ｌａｕ　Ｐｒｏ　ＩＩｓ　 Ｉｌａ　ＴＹｒ　ＴＹｒ　Ｖａｌ　ＧａｙＡｘｑ　Ａ！！ｎ　Ｖａｌ　Ａｌ”ｇ Ｖａｌ　Ｇｌｕ　Ｇｉｎ　Ｌａｕ　Ｓａｒ　Ａｓｎ　Ｍａｔ　Ｖａｌ　Ｖａｌ　 入ｒｇ　入１ａ２９０　２９５　コ００ （２）　配列番号５の情報 （１）　配列の特徴： （Ａ）　長さ：１９８アミノ酸 （Ｂ）　型二アミノ酸 （Ｄ）　トポロジー：直鎮状 （汁）　配列：配列番号５： 入ｓｐ　Ｇｌｕ　Ｔｒｐ　Ｍａｔ　Ｓａｒ　Ｉ’ｈａ入ｓｐ　Ｖａ１丁ｈｒ　Ｌ ｙｓ　Ｔ’ｈｒ　Ｖａｌ　Ａｓｎ　Ｇ工ｕＴｒｐ工　５　１０　１５ Ｌａｕ　Ｌｙｓ　１１９人１ｍ　Ｇｌｕ　Ｇｌｕ　Ａｇｎ　Ｇｌｕ　Ｇｌｎ　Ｐ ｈ＠　Ｇａｙ　Ｌａｕ　Ｇｉｎ　Ｐｒｏ　λ１ａｃｙｓ　ＬＹＩＩ　ｃｙｓ　Ｐ ｒｏ　Ｔｈｒ　Ｐｒｏ　Ｇｉｎ　λ１ｍ　ＬｙｌＩ　Ａｊｐ　Ｉｌａ　入ｓｐ　 Ｉｌａ　Ｇｌｕ　ＧｌｙＰｈａ　Ｐｒｏ入１ａ　Ｌａｕ入ｒｇ　Ｇｌｙ入ｊｐ　 Ｌａｕ入１ａ　Ｓａｒ　ｂｕ　！；ａｘ　Ｓａｒ　Ｌｙｓ　ＧｌｕＡｊｎ　ｌｒ ｈ！″ＬＹＩＩ　Ｐｒｏ　’！’ｙｒ　Ｌａｕ　Ｍａｔ　ＩＩｓ　Ｔｈｒ　！； ａｒ　Ｍｌｌｔ　Ｐｒｏ　Ａｌａ　Ｇｌｕ　）■窒■ ６５　フＯ７５ Ｉｌ・入ｓｓｐ　Ｔｈｒ　Ｖａｌ　Ｔｈｒ　Ｓａｒ　５ｔｒ　Ａｒｇ　ＬＹＩＩ 　ＬＹＩＩ　入ｒｇ　Ｇｌｙ　Ｖａｌ　Ｇｌｙ　Ｇ１ｎ８０　ｇ５　９０ Ｇｌｕ　Ｔｙｒ　Ｃｙｓ　Ｐｈａ　Ｇｌｙ　Ａｊｎ　Ａａｎ　Ｇｌｙ　Ｐｒｏ　 入ｍｎ　ＣＹＩＩ　ＣＹＩＩ　Ｖａｌ　Ｌｙｓ　Ｐｒ。

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の ピーク負荷（ｇ） 平均：Ｓ、Ｅ、Ｍ。

ピーク負荷（ｇ） 二均：＝Ｓ、Ｅ、〜１゜ 〜　Ａ　Φ　■　０　〜 ｏｏｏｏｏ。

要　約　書 とからなる。ＴＧＦ−βは、組織損傷を与える前の寄り２４時間以内（：投与す るのが好ましい。

国際調査報告 レヤ瞥帝判會軸１Ｍｔ＾−１１１１１０１−ロー−−１しＰＣＴ／ＵＳ９１１０ １８６１国際調査報告

Claims (11)

【特許請求の範囲】
1. １．哺乳動物に組織損傷を与える前に有効量のＴＧＦ−βを該哺乳動物に全身投 与することからなる、哺乳動物に組織修復促進の傾向を与える方法。
2. ２．ＴＧＦ−βが組織損傷を与える前の約２４時間以内に投与される請求項１記 載の方法。
3. ３．ＴＧＦ−βが組織損傷を与える時点の約２４時間前から約５分以上前までの 範囲の時間内に投与される請求項１記載の方法。
4. ４．投与が１回の投与である請求項１記載の方法。
5. ５．投与が静脈内である請求項１記載の方法。
6. ６．ＴＧＦ−βがヒトＴＧＦ−βである請求項１記載の方法。
7. ７．ＴＧＦ−βがＴＧＦ−β１である請求項６記載の方法。
8. ８．哺乳動物がヒトである請求項１記載の方法。
9. ９．組織修復が創傷の治癒であり、組織損傷が創傷である請求項１記載の方法。
10. １０．組織修復が骨の修復であり、組織損傷が骨折、補欠移植または骨欠損であ る請求項１記載の方法。
11. １１．組織損傷が手術による切傷である請求項１記載の方法。