JPH08503198A

JPH08503198A - Ｏｐ−３誘導形態形成

Info

Publication number: JPH08503198A
Application number: JP6511392A
Authority: JP
Inventors: オパーマン，ハーマン; オズカイナック，エンジン; クベラサムパス，サンゲーベル; シー．ルーガー，ディヴッド; エッチ．エル．パング，ロイ; エム．コーエン，チャールズ
Original assignee: クリエイティブバイオモレキュルズ，インコーポレイテッド
Priority date: 1992-11-03
Filing date: 1993-11-02
Publication date: 1996-04-09
Also published as: EP0672064A1; AU5590094A; WO1994010203A2; AU681362B2; WO1994010203A3; CA2147598A1

Abstract

(57)【要約】（１）新規な形態形成蛋白質の核酸及びアミノ酸配列；（２）生物学的に活性な型の蛋白質を生産し、及び発現する方法；（３）哺乳動物の前駆体細胞群を増加させる方法、前駆体細胞を分化させ、ｉｎｖｉｖｏ、若しくはｉｎｖｉｔｒｏでそれらの分化した表現型を維持するよう、前駆体細胞を剌激する方法、ｉｎｖｉｖｏで組織特異的成長を誘導する方法、及びｉｎｖｉｖｏで病気になった、若しくは損傷した組織を置換する方法を含む、哺乳動物において組織形態形成を誘導するのに、その蛋白質を利用する方法が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】ＯＰ−３誘導形態形成発明の分野本発明は全般に組織形態形成に関する、さらに詳しくは哺乳動物における組織形態形成を誘導する新規な蛋白質に関する。発明の背景細胞分化は胎児において開始し、有機体の生存期間中、いろいろな程度に成人の組織修復及び再生のメカニズムにおいて継続する形態形成の中心的な特徴である。成人組織の形態形成の程度は異なる組織により変わるし、特に、問題の組織の細胞ターンオーバーの程度とも関連する。この観点より、組織は３つの広いカテゴリーに分類される：（１）細胞分裂が無かったり、初期の発達段階で形成された細胞の殆どが、一生涯ずっと維持される、神経及び骨格筋のような静止細胞群を有する組織；（２）一般に殆ど細胞分裂がないが、適当な剌激に反応して、細胞が分裂して、同じ分化型の娘細胞を産生することができる、肝臓のような、条件付きで再生する細胞群を含む組織；（３）成人で速いそして連続的な細胞のターンオーバーで特徴づけられる血液、精巣及び重層扁平上皮細胞を含む、永続的に再生する細胞群を有する組織。ここで、最終的に分化した細胞は比較的に寿命が短く幹細胞や前駆体細胞として知られている別個のサブポピュレーションの細胞の増殖で置換される。これらの細胞を分化させる剌激を支配する細胞レベル、及び分子レベルの事象については、熱心に研究されている分野である。医学の分野で細胞分化、及び組織形態形成を制御する因子の発見で病気の、若しくは損傷した哺乳動物組織、及び器官を修復、及び再生させる医療能力を著しく進歩させるであろうことは予測される。特に有用な分野は再建手術、及び、関節炎、気腫、骨粗鬆症、心筋症、肝硬変、神経変性疾患等を含む組織変性疾患の治療などがある。細胞分化に役割を果たすと思われる多くの各種の因子が、近年単離されてきた。最近、ＴＧＦ−βスーパーファミリ−蛋白質の構造関連蛋白質の各種のメンバーが真のモルフォジェンとして同定されてきた。この蛋白質のファミリーは、保存された６、若しくは７個のシスティン骨格を含む、形態形成活性を有するＣ末ドメイン内に、著しいアミノ酸配列相同性を共有しているが、骨、軟骨、肝臓、象牙質、歯周靭帯、セメント質、神経組織、消化管上皮粘膜などを含む各種の器官、及び組織で組織特異的形態形成を誘導することができる。その蛋白質は明らかに、表面リセプターに結合し、若しくは前駆体細胞に接触し、相互作用する。そしてモルフォジェン、形態形成的に許容しうる環境で前駆体細胞が増殖し、分化するように前処置され、剌激されることになる。自然に存在する組織で必要な血管形成、結合組織形成、神経形成などを含む、新しい器官特異的組織の形成で頂点に達する進展的細胞レベル、及び分子レベルの事象を誘導することができる。組織形態形成に有用な蛋白質の中には、もともと、ＯＰ−１（関連出願でＯＰ１とも云う）、ＯＰ−２（関連出願でＯＰ２とも云う）、ＣＢＭＰ２蛋白質のような骨誘導蛋白質、又、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、及びそのマウス相同体、Ｖｇｒ− １、ＤＰＰ、及び６０Ａ（猩々蝿より）、Ｖｇｌ（爪蛙より）ＧＤＦ−１（マウスより）のようなアミノ酸配列関連蛋白質がある。例えば、オッパーマンらの米国特許５、０１１、６９１号、リーの（１９９１）ＰＮＡＳ８８：４２５０− ４２５４、ワートンらのＰＮＡＳ８８：９２１４−９２１８を参照。これらのＴＧＦ−βスーパーファミリーのメンバーは形態形成蛋白質のファミリーは、前駆体細胞の増殖及び細胞分化を促進したり、分化した細胞の成長及び維持を支援することも含め、組織形態形成につながる全カスケードを誘導することができるＴＧＦ−βサブファミリーの他のメンバーとは異なる蛋白質の別個のサブファミリーからなる。形態形成蛋白質は見かけ上、内分泌、パラクリン、若しくはオートクリン因子として作用する。特に内因性モルフォジェンはそれが作用する近接する細胞、若しくは遠くの組織の細胞により合成され、分泌蛋白質は作用する細胞まで輸送される。さらに形態形成蛋白質のファミリーはＴＧＦ−βのように、線維症性（瘢痕）組織の形成を誘導するより、むしろ真の組織形態形成を誘導する。モルフォジェンはプロセッシングを受けて前駆体配列のＣ末ドメインからなる成熟したジスルフィド結合２量体が生じる成熟蛋白質より約３倍の大きさの前駆体分子として、細胞内で合成される。蛋白質は、還元されたとき、即ち、１量体では不活性で酸化されホモ２量体として、又、ヘテロな２量体が産生される条件で他のモルフォジェンと結合した時に活性である。組織形態形成に有用な蛋白質は、典型的には、例えば、軟骨産生軟骨芽細胞、骨産生骨芽細胞、造血細胞、若しくは肝細胞など局所の環境の性質に依存するが、組織特異的な方法で細胞が、遊走、増殖、分化する適切な環境を必要とする。形態形成蛋白質により誘導された細胞の増殖、及び分化は細胞が定着できる適切な下層を必要とする。増殖し、分化している細胞はさらに細胞表面マーカーのような、それらの組織特異性を方向づける適切なシグナルの存在を必要とする。本発明の目的は、自然に存在する、若しくは生合成的に構築されるのいずれでも、対立形質の、種の、キメラ型の、及び他のアミノ酸配列のそれらの変種を含む、それを特定するアミノ酸配列、及びそれをコードする核酸からなる新規な、精製形態形成蛋白質”ＯＰ−３”、及びその蛋白質を哺乳動物において、各種の組織の組織形態形成の進展的カスケードを誘導するのに利用する方法を提供することにある。ＯＰ−３の形態形成の性質は前駆体細胞の増殖、及び分化を誘導できる能力、成熟組織の形成につながる事象の進展を通じて分化された表現型を支持及び維持する能力を含む。他の目的は、組換ＤＮＡ技術を利用して、形態形成活性を有する各種のＯＰ− ３の発現し、単離する方法を提供することにある。さらに他の目的として、有用なモルフォジェンを特定する一般配列を提供することにある。さらに他の目的としては、ＯＰ−３との結合に使用できる組織特異的無細胞基質、及びそれらを製造する方法を提供することにある。他の目的は、各種の応用にＯＰ−３を利用することを含み、哺乳動物において前駆体細胞数を増加させる方法；前駆体細胞をｉｎｖｉｖｏ若しくはｉｎｖｉｔｒｏで分化するのを促進し、それらの分化した表現型を維持する方法；ｉｎｖｉｖｏで組織特異的成長を誘導する方法、及びｉｎｖｉｖｏで病気の、若しくは損傷した組織を置換する方法を含む。本発明のこれらや他の目的、及び特徴は以下の説明、図、及び請求項から明らかになるであろう。発明の要約ここで、”ＯＰ−３”という新規な実質的に純粋な蛋白質をコードする新規な実質的に純粋な遣伝子配列が発見された。この新規な蛋白質は本出願人により、以前に開示されている（例えば，ＵＳ９２／０１９６８（ＷＯ９２／１５３２３）やＵＳ９２／０７４３２（ＷＯ９３／０５７５１）を参照）形態形成蛋白質ファミリーのメンバーである。従って、本発明はＯＰ−３を哺乳動物において組織形態形成の進展的カスケードを誘導するのに利用する方法を提供する。特に、これらの方法はＯＰ−３を利用し、まだ運命づけられていない前駆体細胞の増殖を誘導し、適切な環境条件下で組織特異的方法で剌激された、これらの前駆体細胞の分化を誘導し、これらの分化した細胞の成長、及び維持を支援するのに提供される。これらの蛋白質はそれらの分化した表現型とは異なる細胞の再分化を促進するのにも使用できる。従って、ＯＰ−３は適切な、形態形成的に許容しうる環境で、組織形態形成の進展的カスケードを開始し維持するのにも使用できる。本発明で用いられるように、有用なＯＰ−３モルフォジェンは本発明で特定されるように形態形成活性を有するキメラ型蛋白質も含む、配列表番号１（”ｍＯＰ−３”）で提供されているＤＮＡ配列でコードされる蛋白質、及び他の自然に存在するアミノ酸配列変種、及び生合成的アミノ酸配列変種のみならず、それらの対立形質及び種の変種を含む。”形態形成活性を有するフラグメント”とは、配列表番号１の配列の一部、若しくは全部によりコードされ、本発明で特定する形態形成活性を有する全ての蛋白質、及び蛋白質フラグメントからなると理解される。特に、本発明で特定されるように、モルフォジェンは一対のポリペプチド鎖からなり、この各ポリペプチド鎖は少なくとも配列表番号１の残基３０３から３９９までで（若しくは配列表番号３のＯＰ−１の残基３３５−４３１）特定されるＣ末の６個のシステイン骨格からなり、ポリペプチド鎖が折り畳まれたとき、一対のポリペプチド鎖からなる２量体蛋白種が、本発明で特定するように、蛋白質がモルフォジェンとして作用することができるように適切な鎖内若しくは鎖間のジスルフィド結合を含む、適切な３次構造をとれるような機能的に等価なこれらのシステイン配列（例えば、アミノ酸の挿入または欠如（配列のシステインの直鎖配列を換えるが、折り畳まれた構造での関係は変えずに））を含む。特に、モルフォジェンは一般的に形態形成的に許容しうる環境では、以下の全ての生物学的機能が発揮できる：前駆体細胞の増殖を促進する；前駆体細胞の分化を促進する；分化した細胞の増殖を促進する；分化した細胞の成長と維持を支援する。一つの局面では本発明のモルフォジェンは一対のポリペプチド鎖からなる形態形成活性を有する２量体種からなり、それにはポリペプチド鎖の少なくとも一つはそれらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１の残基３０３から３９９までで特定されるアミノ酸配列からなる。好ましいモルフォジェンは少なくとも一つのポリペプチド鎖は配列表番号１の残基２９８−３９９、残基２６１−３９９、若しくは２６４−３９９からなる。または、両ポリペプチド鎖のアミノ酸配列はそれらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種を含み、以下に開示するように、自然に存在する配列、生合成的に構成した変種、及びキメラ型の構成物を含む、配列表番号１のアミノ酸配列の一部、若しくは全部により特定することができる。一つのポリペプチド鎖のみが配列表番号１のアミノ酸配列の一部、若しくは全部で特定される場合は、他のポリペプチド鎖は、好ましくは、例えば、ＵＳ９２／０７４３（ＷＯ９３／０５７５１）で開示されるように、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列を含み、キメラ型変種も含む、ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢＭＰ２Ｂ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、Ｖｇｒ−１、Ｖｇｌ，６０Ａ、ＤＰＰ、ＧＤＦ−１を含む、少なくとも、他の既知のモルフォジェンファミリーのメンバーのＣ末の６個のシステイン骨格を特定する配列からなる。他の有用な配列は、米国特許５、０１１、６９１号に開示されているように生合成構成物を含む。本発明の他の局面では、有用なモルフォジェンの配列同一性を有し、ＯＰ−３の新規な特徴を具体化している一般配列が提供されている。本発明の他の局面では、本発明のモルフォジェンはそれらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１にリストされている一般配列の一部、若しくは全部でコードされる形態形成活性を有する蛋白質からなる。さらに他の局面では、本発明は、厳密なハイブリダイゼーション条件下で、配列表番号１の塩基１２０から８４８までのＯＰ−３蛋白質のプロ領域の一部、若しくは全部とハイブリダイズする核酸によりコードされるモルフォジェンからなる。本発明で使用されるように、厳密なハイブリダイゼーション条件”とは３７℃、一晩、４０％ホルムアミド、５×ＳＳＰＥ，５×デンハルト溶液，０．１％ＳＤＳでハイブリダイズし，そして、５０℃で０．１×ＳＳＰＥ，０．１％ＳＤＳで洗浄することで特定される。本発明の１局面は、ＯＰ−３の形態形成活性を有するフラグメントは、限定するわけではないが、以下のようなものを含む哺乳動物の病気の、または損傷した組織の置換に有用である：気腫からくる損傷した肺組織；腎硬変、肝硬変を含む硬変組織；心筋症、アテローム血栓症、若しくは心塞栓症からくる損傷した心臓、若しくは血管組織；潰瘍性尖孔、及び、またはその修復からくる損傷した胃、若しくは消化管の他の粘膜組織；物理的傷害、アルツハイマー病のような変性疾患、多発性硬化症、若しくは栓塞症からくる損傷した神経組織；代謝性骨疾患や他の骨リモデリング病からくる損傷した軟骨、及び骨組織；病気や機械的傷害が原因の損傷した象牙質、歯周、及び／若しくはセメント質組織；炎症、及び／若しくは慢性炎症の結果として損傷した組織の置換。本発明で提供されるように、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントは組織特異的部位にｉｎｖｉｖｏで供給され、その部位で組織形態形成の進展的カスケードを誘導する。ＯＰ−３と接触してｅｘｖｉｖｏで剌激された細胞もまた、その組織部位に供給することができる。これらの場合は、存在する組織は、適切な下層、若しくは形態形成的に許容しうる環境下で増殖し、分化している細胞の足場を提供し、又発達中の組織の組織特異的に配向させる必要なシグナルを提供することなどで、必要な基質要件を提供する。蛋白質や剌激された細胞もまた、成型された基質と結合することができ、そしてｉｎｖｉｖｏの部位での医療材として移植することができる。成型された基質は生体内適合性で、好ましくは以下に述べるような特徴を有する生体内分解性の無細胞基質であることが望ましい。発達中の組織の組織特異的に配向させる必要なシグナルが、内因性に供給されない場合は、基質も又、好ましくは組織特異的ものである。他の局面では、モルフォジェン蛋白質ファミリーのメンバーも又、外部からの物体、及び初期の組織傷害に対して生体の細胞性、及び体液性の炎症反応を調節することができる。多くの例では、組織機能の損失は組織破壊の効果、及びそれに続く初期の、若しくは繰り返される組織への傷害に対する生体の免疫／炎症反応と関連する瘢痕組織の形成に起因する。瘢痕組織形成の程度は一般に傷害組織の再生能力や組織傷害の程度や類型に依存する。このように、他の局面では、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントは、ＯＰ−３やＯＰ−３蛋白質と接触することにより剌激された細胞を新たに傷害された組織部位へ供給することにより免疫反応媒介の組織傷害を軽減することを含む、瘢痕組織の形成を予防、若しくは実質的に抑制するのに使用することができる。ＯＰ−３蛋白質は、組織損傷を作り、炎症／免疫反応を誘導するような外科的、若しくは他の臨床的手法の一部のように、組織損傷の予想される部位に供給することにより、予防剤として供給することができる。特に有用な具体例としては、移植される器官、及び／若しくは組織の組織生存性を昂進する輸送手段の一部として使用することができる。モルフォジェンは、採取の前、その輸送中、及び／若しくは以下に述べるように受取る宿主への移植中に移植される器官、及び／若しくは組織に供給される。ＯＰ−３は、また、ｉｎｖｉｔｒｏ、若しくは哺乳動物において、間葉系前駆体、若しくは幹細胞群を増加、若しくは再生するのにも使用できる。例えば、前駆体細胞は個々の骨髄から単離され、細胞が増殖するのを誘導するのに十分な時間、及び濃度で形態形成性ＯＰ−３で、ｅｘｖｉｖｏで剌激でき、骨髄に戻される。適切な前駆体細胞の他の起源は培養株化細胞から得られ、培養で剌激され、引き続き生体に供給される、生体内適合性の細胞を含む。また、ＯＰ−３を全身投与（例えば、経口、若しくは非経口）で供給することができる、若しくは注射ないし他の方法で、ｉｎｖｉｖｏで分裂活性を誘導するように、個々の前駆体細胞群に供給することができる。例えば、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントはｉｎｖｉｖｏで、例えば、分裂活性を誘導するのに全身注射で細胞に供給することができる。同様に、造血幹細胞の特別の群は、ＯＰ−３と接触させ、例えば、問題の細胞を抽出するため個別の血を潅流（血漿透析）し、それらの細胞をｅｘｖｉｖｏで剌激し、刺激された細胞を血に戻すことにより、増加させることができる。個々のの前駆体細胞群を増強する能力は、再生しうる細胞群の損失、若しくは減少に起因する病気の現存の治療方法を著しく高めるであろうことが予測される。特に重要な２つの適用は、血液変性および損傷した、若しくは損失した免疫機能を含む病気の治療を含む。本発明のモルフォジェンは、さらに、上皮細胞群の増殖を抑制することができる。上皮細胞群を抑制する能力は乾癬、皮膚炎や他の炎症性皮膚病や、また、例えば、胃潰瘍や口粘膜炎や炎症性腸疾患で誘導される潰瘍を含む、潰瘍の治癒での消化管の潰瘍性疾患と関連する組織損傷を減少させるのに用いることができる。本発明の他の局面では、形態形成ＯＰ−３は、存在する分化した細胞をその表現型を発現し続けるように分化した細胞の成長、及び維持を支援するのに使用することができる。この活性は、機能の損失が、例えば、老化細胞に生じうる、及び／若しくは骨粗鬆症やアルツハイマー病を含む多くの神経変性疾患で明らかなように、細胞が老化、若しくは休止する代謝機能の減少、若しくは損失したことによる場合は組織変性の治療に特に有用であることが予測される。ＯＰ−３の治療される細胞への直接投与、若しくは経口、若しくは非経口投与により、全身的に供給されることにより、これらの細胞をそれらの表現型を発現し続け、それにより機能不全の効果を逆転するよう剌激することができる。さらに、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントは休止細胞の成長を剌激し、それにより、これらの細胞の外因性のＤＮＡを取り込む能力を潜在的に昂進するように遺伝子治療にも使用することができる。更に本発明の他の局面では、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントは、さらに、腫瘍形成中に起こりうるように、分化経路から離れた細胞の再分化を誘導するのにも使用できる。この活性は、特に腫瘍の成長を減少させ、若しくは実質的に抑制する処置に有用であることが予測される。この方法は、さらに、これらの細胞の逆分化及び／若しくは再分化を誘導することが予測される。前述したように、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントは細胞に、これらの細胞を形質転換されていない細胞の形態学的、及び表現型の特徴を戻すよう剌激し、直接、若しくは全身的に供給することができる。本発明の更に他の局面では、ＯＰ−３は細胞の細胞接着分子（ＣＡＭ）の発現を促進するために使用することができる。ＣＡＭ類は組織形成に必要な細胞−細胞相互作用を遂行するのに特定される分子である。ＣＡＭ類は組織境界形成、胎児誘導、及び遊走等を含む、組織の発達や、組織の安定化及び再生において、基本的な調節作用を有していると信じられている。異なるＣＡＭレベルが、先天的欠陥、腫瘍、及び変性疾患等を含む、多くの組織病で関係している。特に、Ｎ−ＣＡＭの発現は、網膜形成、シナプス形成や神経筋組織接着を含む正常な神経細胞の発達及び分化と関連する。Ｎ−ＣＡＭ同種異形の一つ以上の抑制により正常な組織の発達を抑制することが知られている。異なるＮ−ＣＡＭ発現レベルは、さらに、神経芽細胞（下方参照）を含む腫瘍や、又、正常圧水頭症ジェンを処置される細胞に直接、若しくは哺乳動物に全身的に、例えば非経口的に、若しくは経口投与で間接的に投与して１以上のＣＡＭ類、特にＮ−ＣＡＭ類とＬ１の細胞性発現を誘導するのに使用できる。ＣＡＭ類は、現在まだ同定されていない分子によりその活性が誘導される形態調節経路の１部として考えられてきた（例えば，エーデルマン，Ｇ．Ｍ．（１９８６）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．ＣｅｌｌＢｉｏｌ．、２：８１−１１６を参照）。いかなる特定の理論に制限されることなく、本発明で開示されるモルフォジェンは、この経路の誘導剤として作用することができる。本発明の方法で使用される基質類は器官特異的組織由来のものであってもよく、若しくは合成的に作ることもできる。本発明の一つの具体例は、ＯＰ−３（若しくは、ＯＰ−３により剌激された前駆体細胞の集合体）が組織特異的部位、例えば、組織特異的部位に全身投与、移植、若しくは注射等により供給されたとき、その部位に存在する組織は、病気であれ、損傷であれ、遊走する前駆体細胞の分化、及び増殖のための適切な基質、若しくは足場として作用する能力を有している。又、別に、成型された基質は損傷している組織に維持されている傷害の程度が大きな場合には必要であると思われるように、剌激された前駆体細胞または形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントと共に外部から供給しても良い。基質は生体内適合性であり、それが遊走前駆細胞の分化及び増殖を許容し、形態形成的に許容しうる環境を提供することができる様な次元を有する、適切に修飾された無細胞基質である。基質は、また、細胞接着を許容し、そして生体内分解性であることが好ましい。必要な組織配向シグナルが内因性に提供できない場合、基質は、又、組織特異的であっ留ことが好ましい。成型された基質は、例えば、組織から細胞内の非構造的成分を実質的に除去するのに溶媒で組織を処置することにより、脱水調製された器官特異的組織から生成される。又別の方法では、基質は生体内適合性、好ましくはｉｎｖｉｖｏで生体内分解性である構造分子を用いて合成的に作ることができ、又、適切な組織特異的細胞接着因子と成型することもできる。分子はコラーゲン、ラミニン、若しくはヒアルロン酸のように天然に存在するものでもよく、または、例えば、ポリ乳酸、ポリ酪酸やポリグリコール酸やそれらのコポリマーからなる合成ポリマーであっても良い。現在好ましい構造ポリマーは組織特異的コラーゲンを含む。現在好ましい細胞接着因子はグリコサミノグリカンやプロテオグリカンを含む。基質は、さらに、哺乳動物の生体からの遊走前駆体細胞の流入、増殖、及び分化を昂進するように、その表面上の孔や小孔の数を増加させる薬剤、若しくは薬剤類と共に処置することができる。本発明は、このように、組織モルフォジェンとして、ＵＳＳＮ６６７、２７４及びＵＳＳＮ７５２、７６４に開示されているモルフォジェンの一般ファミリーの新規な種の変種である、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを用いる組成物及び方法に関する。形態形成的に活性なＯＰ−３及び蛋白質フラグメントは天然に存在する原料から単離することができ、若しくはそれらは、従来の組換ＤＮＡ技術を用いて、生合成的に構成することもできる。本発明の組成物、及び方法に有用な活性ＯＰ−３は、例えば、組換ＤＮＡ技術により産生される、変化したグリコシル化パターン、変化したＮ末、及び活性な切断型を有する形を含む。活性なＯＰ−３蛋白質は以下に説明するように、ＯＰ−３活性ドメイン及び非ＯＰ−３配列の両者からなる、例えば、成熟型蛋白質のプロドメイン、及び／若しくはＮ末領域からなるキメラ型構成物を含む。ＯＰ−３蛋白質はそのままの、若しくは切断されたｃＤＮＡから、若しくは前核、若しくは真核宿主細胞で合成されたＤＮＡ類から発現し、精製し、分解しそして形態形成活性を有する組成物を形成するのに２量化することができる。有用な宿主細胞は、大腸菌を含む前核細胞、及びＣＨＯ，ＣＯＳ、メラノーマ、若しくはＢＳＣ細胞のような哺乳動物細胞、若しくは昆虫／バキュロウイルス系のような真核細胞を含む。このように、組換ＤＮＡ技術をヒトを含む各種の哺乳動物において組織特異的細胞分化及び組織形態形成を誘導することができる大量のＯＰ−３を生産するのに利用することができる。図面の簡単な説明図１はマウスＯＰ−２とＯＰ−３のｃＤＮＡ配列の核酸配列比較である。エクソンの範囲は配列の下に横線で示してある；ダイアモンドマークはエクソン２とエクソン３の中のヌクレオチドの差を示している；そして図２は真性のものと、組換ＯＰ−１（レーン１）、とのＯＰ１／ＯＰ３キメラ型蛋白質構成物（レーン４−８）の哺乳動物細胞での発現比較した免疫ブロットである。詳細な説明本発明は新規な蛋白質ＯＰ−３をコードし、形態形成活性を有するｍＯＰ−３の新規な遺伝子配列を提供するものである。遺伝子配列は、もともと、マウスｃＤＮＡラィブラリーで同定されていたもので、本発明は同定し、遺伝子を他種より単離する方法を提供するものである。当業者で熟練したものであれば理解できるように、本発明で説明される方法はＯＰ−３遺伝子を、ゲノミックライブラリーを含む、他のライブラリーより単離するのに用いることができる。本発明は、また、ＯＰ−３遺伝子配列及びそれがコードする蛋白質を製造する手段を提供するものである。本発明はさらに、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを用いて哺乳動物の組織形態形成の進展的カスケードを誘導する方法及び組成物を提供するものである。本発明で提供される方法、及び組成物は前駆体細胞の増殖、及び／若しくは分化を促進し、損傷した組織の修復及び再生を誘導することなどを含む広い範囲の応用に利用することができる。本発明の形態形成ＯＰ−３種はＵＳ９２／０１９６８（ＷＯ９２／１５３２３）及びＵＳ９２／０７４３２（ＷＯ９３／０５７５１）で開示されているモルフォジェンファミリーの新しいメンバーである。本発明で開示されるように、ＯＰ−３は天然原料から単離されたり、若しくは従来の組換ＤＮＡ技術を用いて生合成的に作ったり、標準的な化学的技術で合成的に作ることができる。形態形成活性を有するＯＰ−３は、それに限定するものではないが、骨、軟骨、象牙質、神経組織、肝臓、歯周靭帯、セメント質、肺臓、心臓、腎臓、多くの消化管の組織を含む、各種の組織で組織特異的な進展的カスケードを開始し維持するのに有用である。本発明で開示される、今まで実験に使用されたことのない間葉系前駆体細胞と結合して、ＯＰ−３は、これらの前駆体細胞の増殖、及び分化を誘導することができる。これらの細胞の分化に配向させる適切な組織特異的シグナル、及び形態形成的に許容しうる環境の存在で、ＯＰ−３は機能的組織を生じるために胎児の発育中に起こる細胞性、及び分子的事象のカスケードを再生することができる。例えば、蛋白質は、前駆体細胞を軟骨細胞や、骨芽細胞への増殖、及び分化を誘導し、適切な石灰化や骨リモデリングを誘導し、適切な骨組織血管新生を誘導し、分化した骨髄の形成を誘導することからなる、ｄｅｎｏｖｏの軟骨、及び内軟骨性骨形成を誘導することができる（後述の実施例７を参照）。以下に、本発明の組成物や方法に有用なＯＰ−３蛋白質を説明する核酸やアミノ酸の詳細な説明が、それらをどのように作るか、治療投与の方法や手段についての説明も含み、開示される。さらに、（１）組織モルフォジェンや治療剤としてのこれらの蛋白質の適切性を示し、（２）異なる組織での本発明により包含されるモルフォジェンを試験するアッセイを提供する非限定的な多くの実施例が示される。さらに実施例９では、内因性ＯＰ−３の発現、及び／若しくは分泌を促進できるモルフォジェン産生促進剤を同定する化合物をスクリーニング方法を提供する。ＯＰ−３産生促進剤はまた、ＯＰ−３蛋白質投与に替わって、若しくはそれに追加して、本発明で開示される治療適用のいずれにも使用できる。Ｉ．有用なモルフォジェンここで特定されるように、新しい器官特異的組織の形成で最高になる細胞性、及び分子的事象の進展的カスケードを誘導することができ、少なくとも保存されたＣ末の６個のシステイン骨格、若しくは機能的に等価なもの（前述）からなる場合その蛋白質を形態形成性という。特に、モルフォジェンは一般的に形態形成的に許容しうる環境で以下の生物学的機能の全てを発揮できる：前駆体細胞の増殖を促進し；前駆体細胞の分化を促進し；分化した細胞の増殖を促進し；分化した細胞の成長、及び維持を支援する。ここで最初に説明されるモルフォジェンファミリーの蛋白質が、いかに同定されるかの説明、及びそれらを作り、それらの形態形成活性を試験する方法の説明が、例えば、国際出願ＵＳ９２／０１９６８（ＷＯ９２／１５３２３）に開示されている。そこで開示されるように、モルフォジェンは天然原料素材から精製することができるし、若しくは好ましくはここで開示されているように、前核細胞、若しくは真核細胞から組換技術で作ることができる。また、新規なモルフォジェン配列が、そこに開示されている方法によて同定される。特に有用な現在までに同定されているモルフォジェンは、ＯＰ−１、ＯＰ−２、ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢＭＰ２Ｂ、（蛋白質の形態形成活性ドメインはそれぞれ、ＢＭＰ２Ａと、ＢＭＰ２Ｂ、若しくはＢＭＰ２とＢＭＰ４の様な従来技術で引用される）ＢＭＰ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、Ｖｇｒ−１、ＧＤＦ−１、Ｖｇｌ、ＤＰＰ，６０Ａ、及びそれらの対立形質、種の変種、及び他のアミノ酸配列変種、キメラ型モルフォジェンを含む。米国特許５、０１１、６９１号で開示される形態形成活性を有する生合成的構成物（例えば、ＣＯＰ−１、ＣＯＰ−３、ＣＯＰ− ４、ＣＯＰ−５、ＣＯＰ−７、及びＣＯＰ−１６）も又有用であると考えられる。新規なモルフォジェンＯＰ−３、及びその遺伝子配列が、ここで、同定された。本発明で有用なＯＰ−３蛋白質は、配列表番号１に示される形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントのいずれのアミノ酸配列、若しくはそれらの対立形質、種、若しくは他のアミノ酸配列変種も含む。形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントは、また、配列表番号１に示される核酸配列の一部、若しくは全部でコードされる形態形成活性を有するいずれの蛋白質も含む。形態形成蛋白質は、さらに、厳密な条件下で、例えば配列表番号１の塩基１２０−８４８のようなＯＰ−３のプロ領域をコードする核酸配列の少なくとも一部とハイブリダイズする核酸の一部、若しくは全部によりコードされる蛋白質からなる。ｍＯＰ−３遺伝子は３９９のアミノ酸の鎖長の未成熟の翻訳産物として最初に発現される蛋白質（”ｍＯＰ−３”）をコードする。この前駆体形はここでは” プレプロ型”といい（配列表番号１のアミノ酸残基１−３９９）Ｎ末のシグナルペプチド配列、特色として約２０以下の残基からなり、続いて、分解して成熟型になる”プロ”ドメインがある。本蛋白質の”プロ”型はプロドメインと成熟ドメインからなり培養哺乳動物細胞から分泌される最初の型と思われる溶解型種を形成する。ｍＯＰ３の残基１−１７を含むと予想されるシグナルペプチドは翻訳時に、フォンハイジン（（１９８６）ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓｅａｒｃｈ１４：４６８３−４６９１）の方法を利用して与えられた配列中の予想できる分解部位で、早く分解される。形態形成活性を有するＯＰ−３蛋白質の好ましい型は、それらのフラグメントも含み、適切に２量化し、ジスルフィド結合しているプロセッシングされた配列からなる。溶解型の本蛋白質が望まれる場合は、本蛋白質は、好ましくは、成熟ドメイン、若しくはそれの活性部分、及びプロドメインの一部、若しくは全部からなる。他の既知のモルフォジェンとのアミノ酸配列相同性により、プロドメインは、おそらく、標準的なＡｒｇ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ分解部位を示す配列表番号１の残基２５７−２６０で分解され、鎖長が１３９アミノ酸の成熟配列（配列表番号１、残基２６１−３９９）を生じる。又、別に、プロドメインは残基２６０ −２６３で分解し鎖長のより短い１３５のアミノ酸配列（配列表番号１のアミノ酸残基２６４−３９９）を生じる。ここで開示されているＯＰ−１、ＯＰ−２、及びＯＰ−３を含む全てのモルフォジェンはアミノ酸配列Ｃ末ドメインに保存された少なくとも６個のシステイン骨格、および好ましくは保存された７個のシステイン骨格からなる。（例えば，ＵＳ９２／０１９６８（ＷＯ９２／１５３２３）を参照）。ｍＯＰ−３に保存された６個のシステイン骨格（配列表番号１）はアミノ酸残基３０３−３９９で特定される。保存された７個のシステイン骨格はアミノ酸残基２９８−３９９で特定される。例えば、国際出願ＵＳ９２／０７４３２（ＷＯ９３／０５７５１）で開示されているＯＰ−１、ＯＰ−２、ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢＭＰ２Ｂ、ＢＭＰ３、ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、Ｖｇｒ−１、Ｖｇｌ，６０Ａ、ＤＰＰ、及びＧＤＦ−１を含む既知のモルフォジェンファミリーに見いだされる保存された６個ののシステイン骨格に加えて、ＯＰ−３蛋白質は、ＯＰ− ２蛋白質のようにのように保存されたＣ末ドメインにさらにもう一つシステイン残基（配列表番号１の残基３３８）を有している。ＯＰ−３の成熟配列は、現在までに同定されたモルフォジェンと著しいアミノ酸配列相同性を共有している。特に、７個のシステインフラグメントは相当するｍＯＰ−２とｈＯＰ−２と７９％以上のアミノ酸配列同一性を示し、相当するＯＰ−１と６６％以上の同一性を示す。ＯＰ−２のように、ＯＰ−３は７個のシステインドメインのなかに８個のシステインを有している（例えば、配列表番号１の位置３３８のところに）。さらに、ＯＰ−３は現在までに同定されたモルフォジェンのなかでも保存された７個のシステインドメインの位置９（配列表番号１の残基３１５）の残基がセリンで、他のモルフォジェンは、特色としてこの位置ではトリプトファンを有していることで、ユニークである（以下の表Ｉと国際出願ＵＳ９２／０７３５８（ＷＯ９３／０４６９２）の表II参照）。ここで用いられるように、”アミノ酸配列相同性”とはアミノ酸配列の類似性を意味すると理解され、相同性のある配列は同一、若しくは類似のアミノ酸を共有し、類似アミノ酸はデイオフらのＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ；第５巻、補、３４５−３６２ページ（Ｍ．Ｏ．Ｄａｙｏｆｆ、編、国立生物医学研究財団、ワシントンＤ．Ｃ．１９７８）で特定される保存されたアミノ酸である。このように、参照配列と７０％のアミノ酸配列相同性を共有する候補配列は参照配列と候補配列とを並べてみて、候補配列の７０％が参照配列の相当するアミノ酸と同一、若しくはそれらへの保存されたアミノ酸変化を構成することが要求される。”アミノ酸同一性”は二つの並べられた配列間で同一のアミノ酸であることが必要であることが理解できる。このように、参照配列と６０％のアミノ酸同一性を有する候補配列は参照配列と候補配列を並べたときに候補配列の６０％のアミノ酸が参照配列の相当するアミノ酸と同一であることが必要である。ここで用いられるように、計算される全ての相同性と同一性は参照配列としてＯＰ−３を用いる。又、ここで用いられるように、配列はニードルマンらの（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３−４５３の方法を用いて相同性、及び同一性の計算のため並べられ、同一性が並置配列プログラム（Ａｌｉｇｎｐｒｏｇｒａｍ）（ＤＮＡスター，ＩＮＣ．）で計算される。全ての場合、並べられたとき候補配列の内部のギャップやアミノ酸挿入は相同性／同一性計算をするときは無視される。このように、有用なＯＰ−３変種はこれに限るものではないが、配列表番号１からのアミノ酸配列を含み、ここでは、位置３３８のシステインが他のアミノ酸、好ましくは、チロシン、ヒスチジン、イソロイシン、セリンや、例えば、デイオフらのＡｔｌａｓｏｆＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅａｎｄＳｔｒｕｃｔｕｒｅ；第５巻、補、３４５−３６２ページ（Ｍ．Ｏ．デイオフ、編、国立生物医学研究財団、ワシントンＤ．Ｃ．１９７９）で特定されるようにそれらの保存的、代替えアミノ酸で置換される。さらに他の有用なＯＰ−３変種はその位置３１５のセリンが他のアミノ酸、好ましくはトリプトファン、やそれらの保存的代替えアミノ酸で置換される蛋白質を含む。以下に示す一般配列７（配列表番号１２）、及び一般配列８（配列表番号１３）はＯＰ−１、ＯＰ−２、ＯＰ−３、ＣＢＭＰ２Ａ、ＣＢＭＰ２Ｂ、ＢＭＰ３、６０Ａ、ＤＰＰ、Ｖｇｌ，ＢＭＰ５、ＢＭＰ６、Ｖｇｒ−１、及びＧＤＦ−１を含む現在までに同定された好ましいモルフォジェン蛋白質ファミリーのメンバーの間で、共有される相同性を収容する。これらの蛋白質のアミノ酸配列がここで（以下の配列リスト及び表Ｉを参照）、及び／若しくは当業者に、また、例えば、１９９２年８月２８日に出願した国際公開ＵＳ９２／０７３５８で開示される。一般配列はＣ末ドメインにこれらの配列で共有され、６、及び７個のシステイン骨格（それぞれ、一般配列７、及び８）で特定されるアミノ酸同一性、及び配列内で替わりうる位置の別の残基の両者を含む。一般配列は位置４１（一般配列７）、若しくは位置４６（一般配列８）にもう一つのシステインを許容し、分子間、分子内のジスルフィド結合が形成されるようなシステイン骨格を提供し、蛋白質の３次構造に影響する特定の臨界的なアミノ酸を含有する。一般配列７ここで各Ｘａａは以下のように特定された一以上のアミノ酸からなる群から独立的に選択される：”Ｒｅｓ”は”残基”を意味する。残基２．のＸａａ＝（ＴｙｒまたはＬｙｓ）；残基３．のＸａａ＝ＶａｌまたはＩｌｅ）；残基４．のＸａａ＝Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＧｌｕ）；残基６．のＸａａ＝（Ａｒｇ、Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，ＬｙｓまたはＡｌａ）；残基７．のＸａａ＝（ＡｓｐまたはＧｌｕ）；残基８．のＸａａ＝（Ｌｅｕ、ＶａｌまたはＩｌｅ）；残基１１．のＸａａ＝（Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ａｓｐ，Ｈｉｓ，ＡｓｎまたはＳｅｒ）；残基１２．のＸａａ＝（Ａｓｐ，Ａｒｇ，ＡｓｎまたはＧｌｕ）；残基１３．のＸａａ＝（ＴｒｐまたはＳｅｒ）；残基１４．のＸａａ＝（ＩｌｅまたはＶａｌ）；残基１５．のＸａａ＝（ＩｌｅまたはＶａｌ）；残基の１６．Ｘａａ＝（ＡｌａまたはＳｅｒ）；残基１８．のＸａａ＝（Ｇｌｕ，Ｇｌｎ，Ｌｅｕ，Ｌｙｓ，ＰｒｏまたはＡｒｇ）；残基１９．のＸａａ＝（ＧｌｙまたはＳｅｒ）；残基２０．のＸａａ＝（ＴｙｒまたはＰｈｅ）；残基２１．のＸａａ＝（Ａｌａ、Ｓｅｒ，Ａｓｐ，Ｍｅｔ、Ｈｉｓ，Ｇｌｎ，ＬｅｕまたはＧｌｙ）；残基２３．のＸａａ＝（Ｔｙｒ，ＡｓｎまたはＰｈｅ）；残基２６．のＸａａ＝（Ｇｌｕ，Ｈｉｓ、Ｔｙｒ，Ａｓｐ，Ｇｌｎ，ＡｌａまたはＳｅｒ）；残基２８．のＸａａ＝（Ｇｌｕ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，ＧｌｎまたＡｌａ）；残基３０．のＸａａ＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ、Ｐｒｏ，Ｇｌｎ，ＩｌｅまたはＡｓｎ）；残基３１．のＸａａ＝（Ｐｈｅ，ＬｅｕまたはＴｙｒ）；残基３３．のＸａａ＝（Ｌｅｕ、ＶａｌまたはＭｅｔ）；残基３４．のＸａａ＝（Ａｓｎ，Ａｓｐ，ＡｌａＮＴｈｒまたはＰｒｏ）；残基３５．のＸａａ＝（Ｓｅｒ，Ａｓｐ、Ｇｌｕ，Ｌｅｕ，ＡｌａまたはＬｙｓ）；残基３６．のＸａａ＝（Ｔｙｒ，Ｃｙｓ，Ｈｉｓ，ＳｅｒまたはＩｌｅ）；残基３７．のＸａａ＝（Ｍｅｔ、Ｐｈｅ，ＧｌｙまたはＬｅｕ）；残基３８．のＸａａ＝（Ａｓｎ、ＳｅｒまたはＬｙｓ）；残基３９．のＸａａ＝（Ａｌａ，Ｓｅｒ、ＧｌｙまたはＰｒｏ）；残基４０．のＸａａ＝（Ｔｈｒ、ＬｅｕまたはＳｅｒ）；残基４４．のＸａａ＝（Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＴｈｒ）；残基４５．のＸａａ＝（Ｖａｌ、Ｌｅｕ、ＭｅｔまたはＩｌｅ）；残基４６．のＸａａ＝（ＧｌｎまたはＡｒｇ）；残基４７のＸａａ＝（Ｔｈｒ，ＡｌａまたはＳｅｒ）；残基４８．のＸａａ＝（ＬｅｕまたはＩｌｅ）；残基４９．のＸａａ＝（ＶａｌまたはＭｅｔ）；残基５０のＸａａ＝（Ｈｉｓ、ＡｓｎまたはＡｒｇ）；残基５１．のＸａａ＝（Ｐｈｅ，Ｌｅｕ，Ａｓｎ，Ｓｅｒ，ＡｌａまたはＶａｌ）；残基５２．のＸａａ＝（Ｉｌｅ，Ｍｅｔ、Ａｓｎ、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＧｌｙまたはＬｅｕ）；残基５３．のＸａａ＝（Ａｓｎ、Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ｇｌｕ，ＧｌｙまたはＰｈｅ）；残基５４．のＸａａ＝（Ｐｒｏ，ＳｅｒまたはＶａｌ）；残基５５．のＸａａ＝（Ｇｌｕ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｖａｌ，ＰｒｏまたはＬｙｓ）；残基５６．のＸａａ＝（Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ｔｙｒ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，ＩｌｅまたはＨｉｓ）；残基５７．のＸａａ＝（Ｖａｌ，ＡｌａまたはＩｌｅ）；残基５８．のＸａａ＝（ＰｒｏまたはＡｓｐ）；残基５９．のＸａａ＝（Ｌｙｓ，ＬｅｕまたはＧｌｕ）；残基６０．のＸａａ＝（Ｐｒｏ，ＶａｌまたはＡｌａ）；残基６３．のＸａａ＝（ＡｌａまたはＶａｌ）；残基６５．のＸａａ＝（Ｔｈｒ，ＡｌａまたはＧｌｕ）；残基６６．のＸａａ＝（Ｇｌｎ，Ｌｙｓ，ＡｒｇまたはＧｌｕ）；残基６７．のＸａａ＝（Ｌｅｕ、ＭｅｔまたはＶａｌ）；残基６８．のＸａａ＝（Ａｓｎ，Ｓｅｒ，ＡｓｐまたはＧｌｙ）；残基６９．のＸａａ＝（Ａｌａ、ＰｒｏまたはＳｅｒ）；残基７０．のＸａａ＝（Ｉｌｅ、Ｔｈｒ，ＶａｌまたはＬｅｕ）；残基７１．のＸａａ＝（Ｓｅｒ、ＡｌａまたはＰｒｏ）；残基７２．のＸａａ＝（Ｖａｌ，Ｌｅｕ，ＭｅｔまたはＩｌｅ）；残基７４．のＸａａ＝（ＴｙｒまたはＰｈｅ）；残基７５．のＸａａ＝（Ｐｈｅ，Ｔｙｒ，ＬｅｕまたはＨｉｓ）；残基７６．のＸａａ＝（Ａｓｐ、ＡｓｎまたはＬｅｕ）；残基７７．のＸａａ＝（Ａｓｐ、Ｇｌｕ，Ａｓｎ，ＡｒｇまたはＳｅｒ）；残基７８．のＸａａ＝（Ｓｅｒ、Ｇｌｎ，Ａｓｎ、ＴｙｒまたはＡｓｐ）；残基７９．のＸａａ＝（Ｓｅｒ、Ａｓｎ，Ａｓｐ、ＧｌｕまたはＬｙｓ）；残基８０．のＸａａ＝（Ａｓｎ、ＴｈｒまたはＬｙｓ）；残基８２．のＸａａ＝（Ｉｌｅ，ＶａｌまたはＡｓｎ）；残基８４．のＸａａ＝（ＬｙｓまたはＡｒｇ）；残基８５．のＸａａ＝（Ｌｙｓ，Ａｓｎ，Ｇｌｎ，Ｈｉｓ，ＡｒｇまたはＶａｌ）；残基８６．のＸａａ＝（Ｔｙｒ，ＧｌｕまたはＨｉｓ）；残基８７．のＸａａ＝（Ａｒｇ、Ｇｌｎ，ＧｌｕまたはＰｒｏ）；残基８８．のＸａａ＝（Ａｓｎ、Ｇｌｕ，ＴｒｐまたはＡｓｐ）；残基９０．のＸａａ＝（Ｖａｌ、Ｔｈｒ，ＡｌａまたはＩｌｅ）；残基９２．のＸａａ＝（Ａｒｇ、Ｌｙｓ，Ｖａｌ，Ａｓｐ，ＧｌｎまたはＧｌｕ）；残基９３．のＸａａ＝（Ａｌａ、Ｇｌｙ，ＧｌｕまたはＳｅｒ）；残基９５．のＸａａ＝（ＧｌｙまたはＡｌａ）；残基９７．のＸａａ＝（ＨｉｓまたはＡｒｇ）上に述べたように一般的配列８（Ｓｅｑ．ＩＤＮｏ．１３）は一般的配列７の全部を含み、さらにＮ末が以下の配列を含む：従って、残基７で始まる一般的配列８の各Ｘａａは、一般的配列７で開示されている各残基の数値が、一般的配列８では５ずつずれているようになっている一般的配列７で特定される特定のアミノ酸である。このように一般的配列７の”残基２のＸａａ＝（ＴｙｒまたはＬｙｓ）”は一般的配列８の残基７になっている。一般的配列８では残基２のＸａａ＝（Ｌｙｓ，Ａｒｇ，ＡｌａまたはＧｌｎ）；残基３．のＸａａ＝（Ｌｙｓ，ＡｒｇまたはＭｅｔ）；残基４．のＸａａ＝（Ｈｉｓ，ＡｒｇまたはＧｌｎ）；残基５．のＸａａ＝（Ｇｌｕ，Ｓｅｒ，Ｈｉｓ，Ｇｌｙ，Ａｒｇ、ＰｒｏＴｈｒまたはＴｙｒ）。表Ｉは、以下に示されるが、ヒトＯＰ−１、マウスＯＰ−１、ヒトｈＯＰ−２、マウスＯＰ−２、マウスＯＰ−３（ｍＯＰ−３、配列表番号１）の７個のシステイン骨格を特定するＣ末のアミノ酸配列を比較している。表で、配列を本質的にＮｅｅｄｌｅｍａｎらの方法（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８：４４３−４５３）に従って並べ、並置配列プログラム（ＤＮＡスター，Ｉｎｃ．）により計算した。表では、３個のドットは、その位置にｈＯＰ−１のアミノ酸と同じアミノ酸であることを示す。３個のダッシュはその位置にアミノ酸が存在しないが相同性を示す目的で示されている。以下のアミノ酸比較から明らかなように、マウスＯＰ−３とマウス及びヒトＯＰ−１、ＯＰ−２の間には著しいアミノ酸配列相同性がある。 II．治療薬としてＯＰ−３蛋白質を投与する方法及びその製剤 II．ＡＯＰ−３蛋白質の考察本発明で開示されるモルフォジェンは適当な手段により、好ましくは、直接、若しくは全身に、例えば、非経口的に、若しくは経口で、投与する事が出来る。モルフォジェンが直接（例えば、局所で、注射により所望の組織部位へ）、若しくは非経口的に、静脈内、皮下、筋肉内、眼窩内、眼、脳室内、頭蓋内、関節包内、脊髄内、くも膜下槽内、腹腔内、バッカル、直腸、膣、鼻腔内あるいはエアロゾル投与により投与されるが、モルフォジェンは好ましくは水溶液からなる。溶液は生理学的に許容できるもので、望まれるモルフォジェンを患者に投与するのに加えて、溶液は患者の電解質や体液バランスに副作用を示さないものである。このように、モルフォジェンの水系溶媒は通常の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ、０．１５Ｍ、ｐＨ７−７．４）よりなる。モルフォジェン含有水溶液は例えば蛋白質を、５０％エタノールまたは０．１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、若しくは０．１％ＨＣｌを含有するアセトニトリリル若しくは同等の溶剤に溶解することによって調製することができる。そして、一容のその溶液を、例えば、１０容のリン酸生理食塩緩衝液（ＰＢＳ）に添加し、さらにヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を含むことができる。できた溶液は好ましくはさらに撹拌する。望まれる場合は、与えられたモルフォジェンは適切な分子と結合してより溶解性をあげることができる。例えば、成熟２量体がモルフォジェンのプロドメインと結合することによりその蛋白質の溶解性を著しく高める。例えば、ＯＰ−３のプロ型は生理緩衝溶液で溶解する種を含む。事実、内因性の蛋白質はこの形で特定の組織に輸送（例えば、分泌及び循環）されると考えられている。この溶解型の蛋白質はモルフォジェン分泌性哺乳動物細胞の培養液から得ることができる。また、溶解型の種は成熟２量体（あるいは、その活性フラグメント）とプロドメインの一部若しくは全部と複合体を形成することにより製剤することができる。溶解度を上げることができ、かつ特に経口投与に有用な他の分子はカゼインである。例えば０．２％のカゼインをすることにより成熟活性型ＯＰ−１の溶解度を８０％増加させる。ミルク、及び／若しくは各種血清蛋白質に存在する他の成分も又有用である。経口あるいは非経口投与に有用な溶液は、製剤技術の公知の方法のいずれによっても調製することができる。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，（ジエンナーロ，Ａ、編），ＭａｃｋＰｕｂ．、１９９０に開示されている。製剤は、例えば、ポリエチレングリコールのようなポリアルキレングリコール、又は植物油、又は水素化ナフタレンのようなものも含んでもよい。直接投与の製剤は、特に、グリセリンや他の高粘度の組成物をふくんでもよい。生物適合性ポリマー、好ましくは、例えば、ヒアルロン酸、コラーゲン、リン酸トリカルシウム、ポリブチレート、ポリラクチド、ポリグリコリド、ラクチド／グリコリドコポリマーのような生物吸収性ポリマーを含む、はｉｎｖｉｖｏで、溶解型モルフォジェンの放出を制御できる有用な賦形剤として使用できる。他の可能性のある、当該モルフォジェンの有用な非経ロデリバリーシステムはエチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋め込み可能な注入システムやリポソームを含む。吸入投与の製剤としては、賦形剤として、例えば、ラクトースを含んでもよいし、例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココレート、デオキシコレート、又は油性溶液を鼻用ドロップ剤や鼻腔内投与用ゲルとして、含む水溶液であってもよい。本発明で開示されたモルフォジェンは経口投与することもできる。治療薬としての蛋白質は一般的には、殆どの蛋白質が血流に吸収される前に、哺乳類の消化器系の消化酵素や酸により、容易に分解されるので、実際的ではない。しかしながら、本発明で開示したモルフォジェンは、一般に、酸に対して安定で、蛋白分解酵素に耐性である。（例えば，米国特許４、９６８、５９０号）さらに、少なくとも一つのモルフォジェン、ＯＰ−１、はウシ乳腺抽出物、初乳やミルク、唾液中で同定されている。さらに、乳腺抽出物から精製されたＯＰ−１が形態形成活性を有している。例えば、この蛋白質は、米国特許４、９６８、５９０号に開示されているように、標準的なｉｎｖｉｖｏの骨アッセイを用いて評価すると、適当なマトリックス剤に結合して皮下に埋め込んだときに、軟骨内骨形成を誘導する。さらに、内因性のモルフォジェンもまたヒト血清中で検出されている。これらの知見は経口、及び非経口投与はモルフォジェンをヒトに投与する有効な手段であることを示している。。さらに、ここに開示される成熟型の特定のモルフォジェンは特徴的に僅かしか溶解しないが、ミルク（及び乳腺抽出物や初乳）に存在するモルフォジェンは、おそらく成熟な、形態形成活性を有する型がインタクトな配列のプロドメインと結合することにより、及び／若しくは一つ以上のミルク成分と結合することにより容易に溶解する。従って、本発明で提供される化合物は、例えば、後述する如く、モルフォジェンのプロドメインの一部、若しくは全部、及び前述した如く、カゼインを含み、ｉｎｖｉｖｏ、若しくはｉｎｖｉｔｒｏでそれらの溶解度をたかめることができる分子と結合させることができる。本発明で提供される化合物はモルフォジェンを所望の組織へ標的化する事が出来る分子と結合することができる。例えば、テトラサイクリンやジフォスフォネート（ビスフォスフォネート）は、哺乳類に全身投与したとき、骨ミネラル、特に骨リモデリング帯に結合する事は知られている。従って、これらの分子はＯＰ −３を骨組織へ標的化する有用な試薬として含むことが出来る。また、別の選択として、所望の標的組織細胞表面と特異的に相互作用する抗体や他の結合蛋白質をもまた使用することができる。さらに、そのような標的化分子はモルフォジェンと、例えば、化学的架橋、又はＡｓｐ−Ｐｒｏのような酸分解しやすい結合を作る標準的な遺伝子工学的手段などにより、共有結合させてもよい。有用な標的化分子は、例えば、米国特許５、０９１、５１３号に開示されている単一鎖結合部位テクノロジーを利用して、デザインすることができる。上記の如く、モルフォジェンファミリーはそれらのＣ末活性ドメインに著しい配列相同性を共有している。反対にその配列は成熟蛋白質のプロドメインや、Ｎ末の３９個のアミノ酸を特定している配列とは著しく異なっている。従って、プロドメインおよび／若しくはＮ末配列はモルフォジェンに特異的である可能性がある。上述した如く、現在までに同定されたモルフォジェンは異なる組織で、区別して発現されている。従って、特定の理論に限られることなく、生体内の自然な状況では選択されたモルフォジェンが、特徴として、特定の組織に作用する。従って、これらのモルフォジェン特異的配列の一部、又は全部が、本発明で開示されているモルフォジェンの組織標的化分子として作用することが出来る。例えば、プロドメインは、プロドメインと結合したモルフォジェンをその組織に配向させるのに、標的組織で一以上の分子と特異的に相互作用する事が出来る。このように、ＯＰ−３を骨組織に標的化する他の有用な標的化分子は、例えば、プロドメインの一部、若しくは全部、及び／若しくは成熟蛋白質のＮ末等のように、モルフォジェン特異的配列の一部、若しくは全部を含んでもよい。これらの蛋白質の全ては、本来、骨組織と関連して発見された（例えば，米国特許５、０１１、６９９号を参照）ＯＰ−１やＢＭＰ２やＢＭＰ４のモルフォジェン特異的な配列は、特に有用である。また、ＧＤＦ−１のモルフォジェン特異配列は形態形成ＯＰ−３を神経組織、特に脳組織へ標的化するのに使用さうることがきる。ここではＧＤＦ−１が主として発現されているようである（例えば，ここで引用文献として挙げているＬｅｅ、ＰＮＡＳ，８８：４２５０−４２５４（１９９１）を参照）。上述の如く、本蛋白質のプロ型はモルフォジェン分泌哺乳動物細胞の培養液より得ることができる。又別に、適切な種が成熟２量体（若しくはその活性フラグメント）とプロドメインの一部、若しくは全部と複合化し、製剤化することができる。例えば、非ＯＰ−３のプロドメイン、及び／若しくは非ＯＰ− ３のＮ末からなるキメラ型ＯＰ−３蛋白質は標準的な組換ＤＮＡ手法、及び／若しくは当業者でよく開示されており、後述する自動化学的核酸合成手法を用いて合成することができる。最後に、本発明で提供されるＯＰ−３蛋白質は単独、又は組織修復や、再生することができる、若しくは炎症を阻害する事が出来る分子を含め、組織形態形成に有効な事が知られている他の分子と併用で投与する事が出来る。骨粗鬆症患者の骨組織成長を促進する有用な補助因子の例は例えば、それに限るものではないが、ビタミンＤ₃、カルシトニン、プロスタグランジン、副甲状腺ホルモン、デキサメタゾン、エストロジェン、ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−IIが挙げられる。神経組織修復や再生に有用な補助因子は神経成長因子がある。他の有用な補助因子には症状を緩和する補助因子があり、それらには、防腐剤、抗生物質、抗ウイルス剤、抗菌剤、鎮痛剤や麻酔剤が挙げられる。本発明で提供される化合物は薬理学的に許容しうる、毒性のない賦活剤やキャリヤーとの混合による薬理学的組成物に製剤する事が出来る。上記の如く、そのような組成物は非経口投与では、特に溶液、又は懸濁液の形で、経口投与では、特に錠剤やカプセル剤の形で、あるいは、鼻腔内では、特に、散剤や鼻用ドロップやエアロゾルの形で作ることが出来る。組織表面への接着が望まれるところに、フィブリノーゲン−トロンビン組成物若しくは例えば国際出願ＵＳ９１／０９２７５に開示されている他のそのような生物接着剤に分散されたモルフォジェンの組成物が含まれる。組成物はさらに、塗布されたり、噴霧されたり、又は、他の方法で所望の組織表面に適用することが出来る。組成物は、ヒトあるいは他の哺乳類に治療的に有効な量、例えば、上述したようにその特定ステップを含む形態形成を誘導するのに十分な時間、標的組織へ適当な濃度のＯＰ−３を供給する量を、非経口、又は経口投与のために製剤化される。ＯＰ−３が移植処置の一部として使用される場合、モルフォジェンは、ドナーから組織や器官を切除するのに先立って移植されるべき生体組織や器官にモルフォジェンを供給することが出来る。ＯＰ−３はドナー主に、直接、ＯＰ−３からなる製剤の組織への注射、又は間接的に、例えば上述したいづれかの手段を用いて、経口又は非経口投与により供給することが出来る。また、さらに、一度ドナーから除去されれば、器官または生体組織はＯＰ−３を含む保存溶液に入れられる。さらに、レシピアントにもまた、好ましくは、移植直前、又は同時にモルフォジェンを投与する。全てのケースについてＯＰ−３は危険な状態の組織へ、組織への注射によるように、直接投与することが出来、又は本発明で開示し、若しくは従来技術で知られている方法で経口、若しくは非経口的に供給することが出来る。ＯＰ−３が組織や器官保存液からなる場合、入手出来るどのような市販品の保存溶液でも効果的に使用できる。例えば、当業者に知られている有用な溶液には、コリンズ溶液、ウィスコンシン溶液、ベルツァー溶液、ユーロコリンズ溶液、酪酸化リンゲル溶液等が含まれる。一般に器官保存溶液は通常、以下の性質の１以上を有している：（ａ）哺乳動物細胞の内側の浸透圧と実質的に同等な浸透圧（溶液の特徴として超浸透圧で、哺乳動物細胞の内側より僅かに高い浸透圧を作るのに十分な量のＫ⁺，及び／若しくはＭｇ⁺⁺が存在する）；（ｂ）溶液は特徴として細胞に実質的に正常なＡＴＰレベルを維持することができる；そして（ｃ）溶液は通常、細胞の最適なグルコース代謝ができるようにしている。器官保存溶液は凝集阻害剤や、グルコース、フラクトースや他の糖質のようなエネルギー源、代謝物、重金属キレート剤、低温での生存率をたかめる高粘度のグリセリンや他の物質、酸素フリーラジカル阻害剤、及び／若しくは消去剤、及びｐＨ指示薬を含有している。保存溶液の詳細な説明、及び有用な成分は、例えば、米国特許５、００２、９６５号に見だすことができる。ＯＰ−３は移植される器官や生体組織の生存性を昂進するのに有用であると考えられる。モルフォジェンは、骨髄移植、皮膚、消化管粘膜や他の生体組織の移植におけると同様、肺臓、心臓、肝臓、腎臓、若しくは膵臓移植に特に有利に用いることができる。当業者に理解できるように治療組成物に開示された化合物の濃度は、薬剤の投与量、用いられる化合物の化学的特性（例えば疎水性）や、投与経路などを含むいろいろな因子により変化する。投与されるべき薬剤の好ましい用量もまた、おそらく、組織損失若しくは欠陥のタイプや程度、特定患者の全体的な健康状態、選ばれた化合物の相対的生物学的有効性、化合物の製剤、投与経路等に依存する。一般的に本発明の化合物は、非経口投与用には約０．００１から１０重量／容量％の化合物を含有する水溶性生理緩衝溶液で供給される。一般的な薬剤量範囲は１日約１０ｎｇ／ｋｇから約１ｇ／ｋｇ体重である；好ましい範囲は約０．１ μｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ体重である。成熟モルフォジェンが（例えば、ＯＰ−１、２０ｐｇ）連続２１日間正常な生育期のラットに毎日投与されたとしても、モルフォジェン誘導の病理学的病変は認められなかった。さらに、毎日１０日間正常新生マウスに１０μｇのモルフォジェンの全身注射（例えば、ＯＰ− １）をしても、おおきな異常所見はみられなかった。 II．Ｂ基質調製ＯＰ−１を散布することができ、遊走前駆体細胞の分化及び増殖を許容する構造、若しくは骨格を提供するために適当に調製された生体内適合性の、好ましくはｉｎｖｉｖｏで生体内分解性の基質に、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを外科的に移植し、ＯＰ−３が散布される。基質は、また、分化しつつある細胞の組織特異性を配向することができ、さらに形態形成的に許容しうる環境を提供し、本質的に成長阻害シグナルのないシグナルを供給することができる。成型された基質は手術に前もって望まれるように成形され、若しくは、手術中に医師や、技師により、形作られる。このように、本素材は、組織を修復したり、ｄｅｎｏｖｏで成長を誘導するために、局所的な、皮下の、腹腔内の、筋肉内の移植に使用することができる。基質は、好ましくは、ｉｎｖｉｖｏで生体内分解性のもので、移植材の型で若しくは型に非常に近接した型で、生体にゆっくりと吸収され、新しい組織成長で置換される。基質は、もともと、微粒子であってもよい。本発明で有用な基質の製造方法及び使用方法の詳細を以下に記述する。 II．Ｂ（ｉ）組織由来の基質適切な、生体内適合性の、ｉｎｖｉｖｏで生体内分解性の無細胞基質は天然に存在する組織から調製することができる。組織は、組織の細胞性、非構造的成分を実質的に抽出するために適切な薬剤で処理される。薬剤は組織と結合した、いづれの形態形成阻害成分を抽出することができるものである。その結果の素材は、非構造的に結合した成分を実質的に除去した多孔性の、無細胞基質である基質は、また、さらに基質を修飾する薬剤で処理してその表面に孔や尖孔の数を増加することができる。当業者の熟練者であれば、どの薬剤が種々の組織について、非構造的成分の抽出が最も適切かを決める方法については知っている。例えば、肝臓や肺臓のような軟組織は組織の細胞構造を破壊し非構造的成分を抽出するのに、例えば、薄切し、１００％エタノールのような非極性溶剤に曝すことができる。素材は、その後、乾燥し、粉末化して、非接着性の多孔粒子にするか、若しくはゲル様の溶液で保存することができる。コラーゲンが最も多い蛋白性成分である軟骨や象牙質のような構造組織は、本質的にはサンパスらの（１９８３）ＰＮＡＳ８０：６５９１−６５９５の方法に従って、脱灰し、塩酸グアニジンで抽出することができる。例えば、粉末化され、脱灰された象牙質は４℃で１６時間５容量の４Ｍ塩酸グアニジン、５０ｍＭトリス−塩酸、ｐＨ７で抽出することができる。懸濁液は濾過する。残った不溶性の素材は集められ、基質を製造するのに利用される。この素材は、実際殆どがコラーゲン性のものである。それには、形態形成活性はない。基質粒子は、さらに、基質から好ましくない成分を抽出することができ、基質素材の表面構造を変化させるコラーゲン原線維修飾剤で処理することができる。有用な薬剤には、酸、有機溶剤、加熱された水溶性媒体がある。これらの基質処理の詳細な説明は、例えば、米国特許４、９７５、５２６号、及び１９９０年９月７日に公開された（ＷＯ９０／１００１８）国際公開ＵＳ９０／００９１２に開示されている。現在のところ、最も好ましい薬剤は基質粒子表面の面積や多孔性を増加させるためには、水のような加熱水溶性原線維修飾媒体である。現在のところ、最も好ましい水溶性媒体は、加熱前にコラーゲンを膨潤させるのに役立つｐＨ約４．５以下の、例えば、約ｐＨ２−ｐＨ４の範囲での酸性水溶性媒体である。０．１％酢酸が、そのｐＨは約３であるが、現在のところ最も好ましい。０．１Ｍ酢酸も使用することができる。いろいろな量の脱脂、脱灰、グアニジン抽出した骨コラーゲンを水ジャケット付きガラスフラスコ内で一定に撹拌しながら、水溶性媒体（１ｇ基質／３０ｍｌ水溶性媒体）で加熱し、前もって決められた時間、一定の温度で維持する。約０．５から２時間の間は許容できそうであるが、好ましい処理時間は、約１時間である。用いられる温度は約３７℃から６５℃の範囲内での温度を一定に保つ。現在のところ、好ましい加熱処理温度は約４５℃から６０℃の範囲である。加熱処理後、基質は濾過され、洗浄され、凍結乾燥され、移植に用いられる。酸性水溶性媒体が使用されたときは洗浄や凍結乾燥の前に中和するのが好ましい。現在のところ好ましい中和緩衝液は、ｐＨ７，２００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液である。基質を中和するのに、好ましくは、基質を最初、熱処理後、冷却し、その後、酸性水溶性媒体（例えば、０．１％酢酸）を除去し中和用緩衝液で置換し、基質を３０分間撹拌する。中和緩衝液をその後除去し基質を洗浄し凍結乾燥することができる。他の有用な原線維修飾処理には酸処理（例えば、トリフルオロ酢酸やフッ化水素）、及びジクロロメタン、アセトニトリル、イソプロパノール、及びクロロフォルムのような溶媒処理、及び特定の酸／溶媒の併用等が含まれる。原線維修飾剤との接触後処理された基質は、以下の様式の処方に従って、いづれの抽出成分をも除去するのに洗浄される：１．ＴＢＳ（トリス生理緩衝液）に基質材を１ｇ／２００ｍｌで懸濁し、４℃ で、２時間撹拌する；若しくは、６Ｍ尿素、５０ｍＭトリス−塩酸、５００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．０（ＵＴＢＳ）、若しくは、水に懸濁し、室温（ＲＴ）で３０分（そのｐＨを中和するのに十分な時間）撹拌する；２．遠心分離し、洗浄工程を繰り返す；そして３．遠心分離する；上清を捨てる；水で残渣を洗浄する；そして、凍結乾燥する。又別に、適切な基質素材を市販品で入手することができる。例えば、マトリゲルＴＭ（コラボレーティブリサーチ，Ｉｎｃ．，ベッドフォード）のようなマウス肉腫細胞由来の細胞外基質抽出物を効果的に使うことができる。 II．Ｂ（ｉｉ）合成基質上述した、天然由来の組織特異的基質に加えて、有用な組織特異的基質を合成的に成型することができる。これらの多孔性の生物内適合性で、ｉｎｖｉｖｏで生体内分解性の合成基質は１９９１年（ＷＯ９１／１８５５８）１２月１２日に公開された国際公開ＵＳ９１／０３６０３に開示されている。簡単に云うと、基質は生体内適合性で、生体内分解性コラーゲンの多孔性の架橋構造のポリマー、及び組織特異的細胞接着因子のような適切な、組織特異的グリコサミノグリカンからなる。不溶性コラーゲン、酸可溶性コラーゲン、中性、若しくは塩基性水溶液に可溶なコラーゲンを含む、各種のソース由来のコラーゲンは、市販のこれらのコラーゲン同様、これらの合成基質に使用するのに適している。グリコサミノグリカン、ムコポリサッカライドは組織特異的分布を有している動物起源のヘキサミン含有ポリサッカライドであり、それ故モルフォジェン剌激分化細胞の組織特異性を決定するのに役立つよう使用することができる。ＧＡＧｓとの反応でコラーゲンにもう一つの価値ある性質、即ち、動物宿主から免疫反応（体外生体反応）の惹起の不能性を与える。化学的に、ＧＡＧｓはグリコシディル結合し多かれ少なかれ規則的に、ヘキソウロン酸、若しくはヘキソース部分（ドッジソンらＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅＭｅｔａｂｏｌｉｓｍａｎｄｉｔｓＤｉｓｏｒｄｅｒｓ（ディッケンズら編）第１巻、アカデミックプレス（１９６８））で変化する残渣よりなる。有用なＧＡＧｓにはヒアルロン酸、ヘパリン、ヘパリン硫酸、コンドロイチン６−硫酸、コンドロイチン４−硫酸、デルマタン硫酸、及びケラタン硫酸が含まれる。他のＧＡＧｓは本発明で説明する基質を形成するのに適切で、当業者の熟練者であれば、他の適切なＧＡＧｓを知っているか、日常の実験で確定することができる。ムコポリサッカライドのより詳細な説明は、アスピナルのＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ、パーガモンプレス、オクスフォード（１９７０）、を参照されたい。例えば、米国出願番号５２９、８５２号に開示されているように、コンドロイチン−６−硫酸は内軟骨性骨形成が必要なところで使用することができる。ヘパリン硫酸は、一方では、肺組織の修復に使用される合成基質を成型するのに使用することができる。コラーゲンはＧＡＧと酸性水溶性溶液中で、好ましくは希釈酢酸溶液中で反応させることができる。ＧＡＧを水溶性コラーゲン分散液中に滴下することにより、ＧＡＧで被覆された絡み合ったコラーゲン原線維の共沈になる。繊維の絡み合った塊はホモゲナイズして微細繊維の均一分散液とし、濾過乾燥する。コラーゲン−ＧＡＧ生成物の不溶性は、共有結合でこれらの素材と架橋することにより望まれた程度まで高められ、それは、これらの素材が再吸収されること対して耐性を高めるのに役立つ。一般に、脱水熱的操作による架橋が好ましいが、架橋コラーゲンに適切などのような共有結合的架橋方法も、これらの複合材料を架橋させるのに適切である。乾燥したとき、架橋粒子は本質的には球状で直径約５００μｍである。走査型電子顕微鏡で見ると表面に約２０μｍ、内部で４０μｍの孔を示した。内部は細胞接着のための表面を供給する繊維状の及びシート状の構造からなっている。粒子の内部の至る所に細胞に接近できるように、孔は相互に連結している。素材は約９９．５％のボイドボリュームを有し、その素材が、ミクロ担体１ｇ当たりで成長することができる細胞集団に関して非常に有効になるようにしている。他の有用な合成基質は生体内適合性で、ｉｎｖｉｖｏで生体内分解性を示す合成ポリマー、例えばグリコール酸、乳酸、及び／若しくは酪酸およびそれらのコポリマーや誘導体も含む合成ポリマーから成型される。これらのポリマーは当業者に公知であり、市販品を入手できる。例えば、ポリ乳酸（例えば、分子量１００キロダルトン）、８０％ポリラクチド／２０％グリコシド、若しくはポリ３ −ヒドロキシ酪酸（例えば、分子量３０キロダルトン）からなるポリマーは全部ポリサイエンスから購入可能である。ポリマー組成物は、一般に粒子の形で得ることができる。さらに、高分子組成物の形態を変えることができ、例えば、当業者で既知の多くの特定の溶媒処理のいずれでも用いて、多孔性を増加させることができる。モルフォジェンが基質表面に吸着するところでは、工程は、好ましくは、ポリマーの加水分解が避けられる条件下（例えば、エタノール−トリフルオロ酢酸溶液のような非水溶液）で行われる。本発明で開示されるＯＰ−３蛋白質は以下のいずれかの方法を用いて、適切な基質と結合及び分散することができる：１．エタノール沈殿塩酸グアニジンに溶解したモルフォジェンに基質を添加する。試料をボルテックスミキサーで撹拌して、低温でインキュベートする。試料をその後ボルテックスミキサーで撹拌する。冷無水エタノールを混合物に添加し、その後それを撹拌しインキュベートする。遠心分離（小型分離器で、高速）後、上清を除去する。基質を水に濃縮した冷エタノールで洗浄し、凍結乾燥する。２．アセトニトリルトリフルオロ酢酸凍結乾燥この操作で、アセトニトリルトリフルオロ酢酸（ＡＣＮ／ＴＦＡ）溶液中の形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを担体素材に添加する。試料を激しく何回もボルテックスミキサーで撹拌し、それから凍結乾燥する。３．緩衝食塩水凍結乾燥生理食塩水中の形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントの調製も又、基質とボルテックスミキサーで撹拌し、凍結乾燥し、形態形成活性素材を製造する。組織形態形成は形態形成的に許容しうる環境が必要である。明らかに、永久に再生し続ける細胞群から構成されない、完全な機能を有する健全な組織には、連続する組織成長を抑制するシグナルが存在するはずである。このように、フィードバック調節メカニズムのような、調節メカニズムが存在し、細胞成長及び分化の調節を制御しているものと考えられる。実際に、ＴＧＦ−β及びＭＩＳの両者とも適切な濃度で存在すれば細胞成長を抑制することができることが知られている。さらに、骨モデル系を用いて、脱灰及びグアニジン抽出され実質的に非コラーゲン性蛋白質を除去した骨由来担体からなる骨形成材は、骨誘導モルフォジェンと結合して移植されたとき、内軟骨性骨形成をさせることが示されうる。しかしながら、もし骨由来担体が脱灰されておらず、低塩でのみ洗浄されている場合には、例えば、内軟骨性骨形成の誘導は抑制され、担体内に１以上の抑制因子が存在することが示唆される。 III．実施例実施例１．ＯＰ−３の組換生産本発明の方法及び組成物に有用なＯＰ−３蛋白質は、天然原料から精製することができるし、あるいは標準的な組換技術を用いて生産することができる。ＯＰ −３モルフォジェンの組換生産の一般的考察を以下に説明する。Ａ．新規なｍＯＰ−３配列の同定形態形成性ＯＰ−３蛋白質をコードする遺伝子配列はＵＳＳＮ６７７、２７４で本質的に開示されたＯＰ−２のミッド−プロ領域（プレ−プロ蛋白質のアミノ酸残基１２５から２２５までに相当する）に特異的なマウスＯＰ−２ｃＤＮＡをハイブリダイゼーションのプローブとして、０．３ｋｂＥｃｏＲＩ−ＢａｍＨＩＯＰ−２フラグメントを用いて同定された。³²Ｐ−プローブをランダムヘキサヌクレオチドプライミング法を用いて調製し、ハイブリダイゼーションを以下の条件を用いて行った：４０％ホルムアミド、５×ＳＳＰＥ，５×デンハルト溶液、０．１％ＳＤＳ、３７℃、一晩、そして０．１×ＳＳＰＥ，０．１％ＳＤＳ５０℃で洗浄する。悪性奇形腫細胞株ＰＣＣ４（ストラタジェンＩｎｃ．、ラホヤ、ＣＡ，カタログ番号＃９３６３０１）から作られたマウスｃＤＮＡライブラリーから約１×１０⁶ファージ（λ ｚａｐIIに載って）をスクリーニングした。このスクリーニングで、３巡以上のスクリーニングで精製した４個のクローンを得た。このｃＤＮＡｓを含有するプラスミッドＤＮＡを製造指針に従って、 λ ｚａｐII切断操作を用いて得た。４個のクローンの内３個がＯＰ−３をコードするＤＮＡ配列を示した。本発明でｍＯＰ−３と呼称し、配列表番号１で開示されているＤＮＡ配列はこの操作で同定された。単離したｍＯＰ−３ＤＮＡ配列は他の既知のモルフォジェンと同様に、プロ領域（配列表番号１の残基２０−２６０、若しくは２０−２６３で本質的に特定される）と成熟領域（配列表番号１の残基２６１−３９９、若しくは２６４−３９９で本質的に特定される）からなる蛋白質をコードし、保存されたシステイン骨格からなる機能的ドメインを含む。ＯＰ−２のように、ＯＰ−３は７個のシステインドメイン内の８個のシステインで特徴づけられる（例えば、配列表番号１の３３８位）。余分のシステインは、おそらく、分子間ジスルフィド結合を供給することにより、折り畳まれた構造を安定化するのに役立つようである。余分のシステインは、また、ＯＰ−３と８個のシステインからなる他のモルフォジェン、例えば、ＯＰ−２、若しくは、適当な位置に余分なシステインが挿入されている修飾されたＯＰ−１、とのヘテロダイマーを形成するのを可能にしている。余分のシステインはテトラマー形成をも可能にする。余分のシステインからなる発現された蛋白質は容易にＳＤＳゲル電気泳動で検出できるように、余分のシステインは合成を抑制したり、翻訳配列の安定性を著しく減少させることはない。最初のグリコシル化部位はＯＰ−２、及びＯＰ−３の両者とも余分のシステインのちょうどＣ末にあり、これで保護効果を示すことができる。ヒト及びマウスのＯＰ−２のｃＤＮＡ配列が配列表番号７及び９に提供されており、ヒトＯＰ−２の染色体配列が配列表番号１１に提供されており、そこに、これらの蛋白質のコーディング領域を特定しているエクソンが示されている。エクソン領域が後述の図１にも示されている。ヒトＯＰ−２部分は標準的なクローニング操作を用いて、３個のオーバーラップしているファージクローン上の染色体ライブラリー（クローンテク，ＥＭＢＬ ♯ＨＬ１０６７Ｊ）から単離された。ＯＰ−２をコードする情報は、２７ｋｂ以上におよび、ＯＰ−１のように７個のエクソンを含有する。７個のシステインドメインのエクソンーイントロン境界領域の比較でＯＰ−１のそれらと位置が一致することがわかった。最初のＯＰ− ２エクソンは、シグナルペプチドを含む、３３４ｂｐのコーディング配列（１１１アミノ酸）を含有し、最も大きなイントロン（１４ｋｂ）が後に続く。２番目のエクソン（１９０ｂｐ，６４アミノ酸）は短いイントロン（０．４ｋｂ）によりエクソン３（１４９ｂｐ，４９アミノ酸）から分離されている。さらに、大きな３番目の９．５ｋｂのイントロンが続いている。４番目のエクソン（１９５ｂｐ，６５アミノ酸）は成熟部位（”ＯＰ−２−Ａｌａ”）をコードし、０．８ｋｂのイントロンが続いている。７個のシステインドメインがエクソン５から７までの上にある：エクソン５（８０ｂｐ，２７アミノ酸）は成熟ＯＰ−２の最初のシステインをコードし、イントロン５（長さ０．５ｋｂ）が続き、エクソン６（１１１ｂｐ，３７アミノ酸）は２．５ｋｂのイントロンにより１４７ｂｐ（４９アミノ酸）コーディング配列を有する７番目の、最後のエクソンから離れている。上述したように、エクソン−イントロン境界領域はヒトＯＰ−１、及びＯＰ− ２という、蛋白質のモルフォジェンファミリーの２つの異なるメンバー間に保存されている。同様に、ヒト及びマウスＯＰ−２、という２つの種変種モルフォジェン間のエクソン−イントロン境界領域は、同様に保存されていることが予測される。図１はマウスＯＰ−２及びマウスＯＰ−３をコードしているｃＤＮＡ領域の配列示している。エクソン境界領域は配列の下の縦線で示してある。両配列は同じ数のヌクレオチドを有している。ヌクレオチド配列はＮ末、及びＣ末領域で約８０％保存されている。図では、両配列間でのヌクレオチド同一性は点画で示してある。さらに、配列の中央領域は高度に保存され、この保存された領域はエクソン２とエクソン３の境界領域にある。この領域には、たった３個のヌクレオチドの違いしかなく、ダイアモンド印で図中に示されている。ヌクレオチド配列の保存の高度さが、ＯＰ−２及びＯＰ−３がエクソン２及び３のヌクレオチド配列を共有していることを示している。異なる蛋白質は別にスライスされた転写物からのもであり、若しくはそれらのコーディング配列の一部を共有している独立した遺伝子から生じるものである。ＯＰ−２のエクソン２の上流にあるイントロン１（配列表番号１１参照）は大きく（１４．６ｋｂ）ＯＰ −３遺伝子、及び／若しくはその最初のエクソン配列、の最初を含むことができる。確かに、他の啼乳動物の遺伝子で見られてきたように、これらのモルフォジェンの１以上のイントロンは転写調節機能を有する配列を含む。本発明、及びＵＳＳＮ７５２、７６４で開示されているスクリーニング操作及び標識化したＯＰ−２フラグメント、若しくは、好ましくは標識化したＯＰ−３フラグメントを用いて、他の種、及び他のライブラリーから、若しくはＯＰ−３遺伝子配列を単離することができる。別に、若しくはさらに、成熟蛋白質のＮ末領域、若しくは３’端ノンコーディングフランキング領域、及び停止プコドンが続いている領域に対するプローブをＯＰ−３他の種の変種をスクリーニングするのに使用することができる。これらの配列はモルフォジェンの中で実質的に変化し、モルフォジェン特異的配列を表している。ＯＰ−３の哺乳動物細胞での発現はＣＯＳ（霊長類腎臓、ＡＴＣＣ、ＣＲＬ−１６５０）やＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞（例えば、ＣＨＯ−ＤＸＢII、ローレンスケイシンより、コロンビア大、ＮＹ）を用いることにより容易に実現できる。哺乳動物細胞の発現の例示的プロトコルを以下に説明する。他の有用な真核細胞系は、昆虫／バキュロウイルス系、若しくは哺乳動物補体系を含む。Ｂ．新規なＯＰ−３配列の発現ＯＰ−３蛋白質を発現させるために、ＯＰ−３ＤＮＡを適当な、市販品のｐＵＣ型ベクター（例えばｐＵＣ−１９，ＡＴＣＣ＃３７２４５、ロックビル、メリーランド州）の挿入箇所に適当なプロモーター／エンハンサー配列及び３’末端配列に従ってサブクローン化される。現在のところ好ましいプロモーター／エンハンサー配列はＣＭＶプロモーター（ヒトサイトメガロウイルスの主たる中間体−アーリープロモーター、好ましくはイントロンフリー若しくは“短い”型プロモーター）とラウス肉腫ウイルスＬＴＲエンハンサー配列（例えばクローンテク，Ｉｎｃ．、パロアルトーより得られる）により増強されたマウス乳ガンウイルスプロモーター（ｍＭＴＶ）である。発現はまた、トランスアクチベーティングエンハンサー配列を用いて増強する事が出来る。プラスミドは、好ましくはセレクタブルマーカー、最も好ましくは例えばＳＶ４０アーリープロモーター制御下に増幅可能なマーカーとしてＤＨＦＲを含んでいる（ＡＴＣＣ＃３７１４８）。トランスフェクション、細胞培養、遺伝子増幅や蛋白発現条件は当業者によく知られている、例えば，アウスベルら（編）ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、ジヨンウイリー＆サンズ、ニューヨーク（１９８９）などの開示されている標準的な条件である。簡単にはトランスフェクトされた細胞は０．１−０．５％の透析された牛胎児血清を含む培地で培養され、サブクローニングし標準的なウエスタンブロット、あるいはノーザンブロットで評価して、安定的にトランスフェクトされた高発現型の細胞株が得られる。組み込まれた配列状態やコピー数増幅の程度を調べるのにサザーンブロットもまた用いられる。例えば、ＯＰ−３活性ドメイン、及び、例えば他の異なるモルフォジェンからのプロドメインの一部、若しくは全部からなるキメラ型ＯＰ−３モルフォジェンは、標準的な組換ＤＮＡ技術、及び／若しくは自動ＤＮＡ合成器を用いて、望まれた配列を構成するために構築することができる。有用なキメラ型は非ＯＰ−３配列が成熟ＯＰ−３蛋白質をコードするＯＰ−３配列に結合し、その非ＯＰ−３配列が、少なくとも一つのモルフォジェンからのシグナルペプチドプロッセシング部位と“Ａｒｇ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ”プロッセシング配列の間の配列の一部、若しくは全部をコードする。又別に、非ＯＰ−３配列は、その非ＯＰ−３配列は成熟蛋白質のＮ末をコードする配列を含むが、例えば、６若しくは７個のシステイン骨格をコードするＯＰ−３配列に結合する。当業者であれば理解できるように、非ＯＰ−３配列は一つ以上のモルフォジェンからの配列からなる、及び／若しくは、新規な生物合成配列からなってもよい。キメラ型ＯＰＩ−ＯＰ３ポリペプチド鎖をコードする生物合成的遺伝子構築物の哺乳動物での発現は図２で表されているイムノブロットで示されている。ＣＭＶプロモーター調節下での構築物を担持するベクターを標準的な操作を用いて、本発明で開示しているようにＣＨＯ細胞（ＣＨＯ−ＤＸＢII）へトランスフェクトした。キメラ型遺伝子はＯＰ−１の保存された７個のシステインドメインをＯＰ−３のそれとと置換することにより構築した。得られたキメラ遺伝子はヒトＯＰ−１の全プレ−プロードメインを含み、そして成熟部位と保存されたＣ末の７個のシステインドメインの最初のシステインの間の成熟ＯＰ−１の領域はマウスＯＰ− ３の保存された７個ノシステインドメインに融合したが、７個のシステインドメインの出発点でＯＰ−３で見られるもともと、リジン残基であったところを２個のアルギニン残基で融合された。遺伝子融合は、潜在突然変異生成による一致している部位に作られた、新しく作られたＯＰ−１のＳａｃＩ部位で、ＯＰ−３のＳａｃＩ部位（７個のシステイン骨格の最初のシステインの近く）を切断することにより実現できた。ＳａｃＩ部位は、それぞれ、ＯＰ−１のＣｙｓ−Ａｒｇ−Ａｒｇ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕの配列、及びＯＰ−３ｙｓ−Ｌｙｓ−Ｌｙｓ−Ｈｉｓ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ配列中のそれぞれのＧｌｕ−Ｌｅｕジペプチドをコードする。キメラ型遺伝子はＣＭＶ（サイトメガロウイルス）ＭＩＥ”短い”（イントロンフリー）プロモーターの下流、及びｐＵＣベクターのＳＶ４０転写終末の上流側に配置された。このプラスミッドはＤＨＦＲマーカーとウイルス変換活性要素をコードするＤＮＡをＣＨＯｄｈｆｒ（−）宿主に、共にトランスフェクトさせ、メトトレキセート選択をさせ、サブクローニングを含む１ｍＭメトトレキセートで、１巡の増幅をした。１０μｌの時間の経過した（３日齢）培養上清を以下のように”ウエスタンブロット”（イムノブロツト）で分析した。１０μｌの採取された培地を、β−メルカプトエタノール（５％）含有の濃縮されたＳＤＳ試料緩衝液と共に、短時閤、加熱し、前もって染色した分子量標準（バィオーラッド、リッチモンド、ＣＡ）と並べて１５％ＳＤＳポリアクリルアミドゲル（Ｌａｅｍｍｌｉの緩衝系で）上で電気泳動で直接分析した。蛋白質をゲルから”ウエスタンブロット”操作によりイモビロン膜へ移した。キメラ型ＯＰ−１／ＯＰ−３蛋白質は、Ｓｅｒ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−で始まる成熟型ＯＰ−１の最初の１７のアミノ酸を表現している合成ペプチドに対するウザギ血清との反応で検出される。ＣＨＯ細胞で発現した真の組換ＯＰ−１は比較のために含まれる。図中、試料レーンは以下の通りである：レーン１：ＯＰ−１；レーン４、５、６、７、及び８：キメラ型ＯＰ−１／ＯＰ−３；レーン９、及び１０：前もって染色された分子量標準。組換蛋白質の見かけの泳動度は、このゲル上では約２０キロダルトンであるが、観察される多種の原因であるＯＰ−１、及びＯＰ−３のグリコシル化の結果である。発現された蛋白質はその後以下のように精製することができる。０．５％ＦＣＳ，で調製された感染された哺乳動物細胞の一般的な２Ｌ調製では、例えば、全蛋白質は、一般的には、約７００ｍｇである。培地のＯＰ−３の量は、ウエスタンブロットで評価すると約０．１−５．０ｍｇの間である。ＯＰ−３培地はその後低塩濃度の生理緩衝６Ｍ尿素溶液に希釈され、強カチオン交換体として作用するＳ−セファロースカラムにかけた。ＯＰ−３は低塩濃度でカラムに結合し、血清蛋白質は除去される。カラムは、引き続き、６Ｍ尿素、２０ｍＭＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．０中でＮａＣｌグラージエント、例えば，０．１ＭＮａＣｌ−１．０ＭＮａＣｌで展開される。殆どのコンタミはグラージェントの最初に除去され、ＯＰ−３は高塩濃度で、主として溶出される。試料は、その後フェニルセファロースカラム（疎水性相互作用クロマトグラフィー）にかける。ＯＰ−３は高濃度の弱撹乱性塩（chaotropic salts）（例えば、生理緩衝６Ｍ尿素溶液中１Ｍ硫安）の存在下でフェニル−セファロースに結合する。一度、ＯＰ−３が結合すると、カラムは減少硫安グラージェント、例えば，生理緩衝６Ｍ尿素溶液中０．６Ｍ−０．０Ｍ硫安のグラージェントで展開する。再び、殆どのコンタミはグラージェントの最初で除去され、ＯＰ−３は低濃度の硫安、若しくは硫安無しで、主として溶出される。フェニル−セファロースカラムから溶出されたＯＰ−３はその後水で透析し、逆相クロマトグラフィーカラム（例えば、Ｃ−１８ＨＰＬＣ）にかけるために、例えば、３０％アセトニトリル，０．１％ＴＦＡで透析し調製される。別のクロマトグラフィープロトコルで６Ｍ尿素が存在しない状態でＳ−セファロースクロマトグラフィーを行うこともできる。結合した蛋白質はそれから塩の段階的溶出で（例えば，０．１−０．６ＭＮａＣｌ）で溶出される。残存するＯＰ−３は、それから、６Ｍ尿素の存在で溶出することができる。６Ｍ尿素の溶出は、１段階で最高の回収ができる非尿素溶出の代わりにも使用することができる。さらに、ＯＰ−３はフェニル−セファロースカラムから３８％エタノール− ０．０１％ＴＦＡで溶出され、それにより、それをＣ−１８カラムに載せる前に溶出液を透析する必要性を省略することができる。最後に、さらに精製度や蛋白質濃度を高めるために、複数のＣ−１８カラムを使用することができる（例えば、３本）。ＯＰ−３は、また、ヒドロキシアパタイトのカラムにも６Ｍ尿素が存在しない、低リン酸濃度（５ｍＭ以下のリン酸）で効率的に結合する。結合したＯＰ−３はカラムから、生理緩衝溶液中で約０．００１−０．５Ｍの段階溶出の濃度勾配の溶出で除去することができる。さらに、溶出段階で尿素（６Ｍ）を加えてもよい。他の関連するクロマトグラフィー法もまた、ＯＰ−３を真核細胞培養系から精製するのに使用することができる。例えば、ヘパリン−セファロースはＳ−セファロースカラムとの併用で使用することができる。又、別に固定化金属イオンアフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）（例えば、Ｃｕ²⁺若しくはＺｎ⁺ ）や生理リン酸緩衝溶液を効果的に使用することができる。Ｃ．溶解型ＯＰ−３複合体治療製剤に有用で、水溶液で改善された溶解性を有し、本質的にアミノ酸からなるＯＰ−３モルフォジェンの現在好ましい型は、モルフォジェンファミリーに特徴的な７個以上のシステイン残基を有し、モルフオジエンフアミリーのメンバーのプロ領域の一部、若しくは全部、あるいはそれらの対立形質の、種の、あるいは他の配列変種からなるペプチドと複合体を形成している、少なくとも１００個のアミノ酸のペプチド配列からなる２量体形態形成蛋白質である。好ましくは、２量体形態形成蛋白質が２個のペプチドと複合体形成している。また、２量体形態形成蛋白質は好ましくは非共有結合でプロ領域ペプチド若しくはペプチドと複合体を形成する。プロ領域ペプチドは、また好ましくは、ＯＰ−３モルフォジェンのプロ領域（例えば、配列表番号１の残基１８−３５）を特定する少なくともＮ末の１８個のアミノ酸からなる。さらに好ましい具体例としては、プロ領域全長を実質的に特定するペプチドが用いられる。他の溶解型のモルフォジェンは、これら蛋白質の未切断のプロ型の２量体や、２量体の一つのサブユニットが当該蛋白質の未切断プロ型であり、他のサブユニットが成熟型の蛋白質である““２量体”であり、好ましくは切断プロドメインペプチドと非共有結合的に結合するそれらの切断型のものも含む。上述した如く、有用なプロドメインは各種の切断型、特に、蛋白分解酵素のＡｒｇ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇ開裂部位で開裂された切断型のみならず、プロ領域全長からなる。例えば、ＯＰ−３でＡｒｇ−Ｘａａ−Ｘａａ−Ａｒｇで開裂する可能なプロ配列は配列表番号１の残基１８−２６０（予測される全長型）；若しくは１８−２６３で特定される配列を含む。従って、現在好ましいプロ配列はＯＰ−３、若しくは他の既知のモルフォジェンのプロ領域の全長型をコードする配列である。有用性を有すると期待される他のプロ配列は生合成プロ配列、特に一以上のモルフォジェンのプロ配列のＮ末部分由来の配列を含む配列を含む。当業者に理解できるように、このプロ領域をコードしている有用な配列は既知のモルフォジェンをコードする遺伝子配列より得ることができる。別の方法では、キメラ型のプロ領域は一以上の既知のモルフォジェンの配列より構築できる。さらに他の方法では、一以上の既知のプロ領域配列の合成配列変種を作ることができる。他の好ましい局面では、有用なプロ領域ペブチドは、ＯＰ−３のプロ領域配列の、少なくともＮ末の１８個のアミノ酸をコードするＤＮＡ，若しくはＲＮＡ配列、例えぼ配列表番号１のヌクレオチド１２０−１７３、と厳密な条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖を含む。さらに、他の好ましい局面では、有用なプロ領域ペプチドは、ＯＰ−１若しくはＯＰ−２のプロ領域配列の少なくともＮ末の１８個のアミノ酸をコードするＤＮＡ，若しくはＲＮＡ配列、例えば配列表番号３及び７の、それぞれ、ヌクレオチド１３６−１９２及び１５２−２１１、と厳密な条件下でハイブリダイズする核酸によりコードされるアミノ酸配列からなるポリペプチド鎖を含む。Ｃ．１．調整培地や体液から溶解型モルフォジェン複合体の単離モルフォジェンは哺乳動物細胞から溶解型複合体として発現する。しかしながら、一般に、複合体は精製過程で、一般的には精製溶液によく添加される変性剤、例えば洗剤、アルコール、有機溶媒、水構造破壊剤や溶液のｐＨを下げるのに添加される化合物などに曝された時に解離する。変性剤のない条件で行う調整培地（または場合によっては、血清、脳脊髄液、腹水などの体液）からの溶解型蛋白質の現在もっとも好ましい精製プロトコルは以下にのべる。当該方法は速く、再現性もよく実質的に純粋な形で溶解型モルフォジェン複合体が単離される。溶解型ＯＰ−３モルフォジェン複合体は調整培地から、変性剤なしで行われる、単純な３工程のクロマトグラフィープロトコルを利用して単離することが出来る。プロトコルは培地（あるいは体液）をアフィニティーカラムに通し、次いでイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー工程を含む。以下に述べるアフィニティーカラムはＺｎ−ＩＭＡＣである。本発明のプロトコルは各種のモルフォジェンの精製に一般的な適用が可能であり、それらの全ては以下に述べるプロトコルのほんの僅かの変更により単離可能であることが予測される。別のプロトコルとしては、標準的な操作を利用して作られた、例えば、ＯＰ− ３プロドメインに特異な抗体（例えば、蛋白Ａ結合のセファロースカラムに結合した）を用いて免疫アフィニティーカラムを利用する事が予測される。免疫アフィニティーカラムを展開するプロトコルは従来技術に開示されている。（例えば，ＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｍ．ドイチャー、編、アカデミックプレス，サンディエゴ、１９９０、特に第VII節及び第ＸＩ節）本実験ではＯＰ−１は従来技術（国際出願ＵＳ９０／０５９０３（ＷＯ９１／０５８０２）参照）に開示されているように啼乳動物のＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞で発現された。０．５％ＦＢＳを含むＣＨＯ細胞調整培地は、最初に、固定化金属イオン・アフィニティークロマトグラフィー（ＩＭＡＣ）で精製された。調整培地由来の溶解型ＯＰ−１複合体は選択的にＺｎ−ＩＭＡＣ樹脂に結合し、その結合した複合体を効果的に溶出させるには、高濃度のイミダゾール（５０ｍＭイミダゾール、ｐＨ８）が必要である。Ｚｎ−ＩＭＡＣ段階では、カラムを通過する分画、及び３５ｍＭイミダゾール洗浄分画に溶出する多くのコンタミしている血清蛋白質から、溶解型ＯＰ−１を分離する。Ｚｎ−ＩＭＡＣ精製溶解型ＯＰ−１は次に２０ｍＭＮａＰＯ₄（ｐＨ７．０）と５０ｍＭＮａＣｌで平衡化されたＳ−セファロース・カチオン交換カラムに適用される。このＳ−セファロース段階ではさらに精製して次のゲル濾過工程への調製に溶解型ＯＰ−１複合体を濃縮するのに役立っている。蛋白質をＴＢＳで平衡化されたセファクリルＳ−２００ＨＲカラムに適用した。実質的に同じプロトコルを利用して、溶解型モルフォジェンを血清、脳脊髄液、腹水を含む一つ以上の体液から単離することもできる。ＩＭＡＣはカラム容量の３倍量の０．２ＭＺｎＳＯ４で飽和されたキレーティング・セファロース（ファルマシア）を用いて行った。調整培地はｐＨ７に滴定され、５００ｍＭＮａＣｌ、２０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）で平衡化した樹脂に直接、載せられた。Ｚｎ−ＩＭＡＣ樹脂には樹脂１ｍＬ当たり８０ｍＬの最初の調整培地が載せられた。負荷のあとカラムは平衡緩衝液で洗浄され、殆どのコンタミ蛋白質は緩衝液中３５ｍＭイミダゾール（ｐＨ７．０）で溶出した。溶解型ＯＰ−１複合体は、その後、２０ｍＭＨＥＰＥＳ、５００ｍＭＮａＣｌ溶液中、５０ｍＭイミダゾール（ｐＨ８．０）で溶出した。溶解型ＯＰ−１複合体を含む５０ｍＭイミダゾール溶出画分は９倍量の２０ｍＭＮａＰＯ₄で希釈し、２０ｍＭＮａＰＯ₄（ｐＨ７．０）、５０ｍＭＮａＣｌで平衡化しているＳ−セファロースカラムにかけた。Ｓ−セファロース樹脂に樹脂１ｍＬ当たり、８００ｍＬの最初の調整培地を充填した。充填後Ｓ−セファロースカラムは平衡緩衝液で洗浄され、１００ｍＭＮａＣｌで、引き続き２０ｍＭＮａＰＯ₄（ｐＨ７．０）中３００ｍＭと５００ｍＭＮａＣｌで溶出した。３００ｍＭＮａＣｌ溶出分はさらにゲル濾過クロマトグラフィーで精製した。５０ｍｌの３００ｍＭＮａＣｌ溶出分を、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）、５０ｍＭトリス、１５０ｍＭＮａＣｌ（ｐＨ７．４）で平衡化されたセファクリルＳ−２００ＨＲ（ファルマシア）に吸着させた。カラムは１０ｍＬの分画で流速５ｍＬ／分で溶出した。溶解型ＯＰ−１の見かけの分子量は蛋白質分子量標準（アルコール脱水素酵素，（ＡＤＨ、１５０キロダルトン）、牛血清アルブミン（ＢＳＡ，６８キロダルトン）炭酸脱水酵素（ＣＡ，３０キロダルトン）及びチトクロムＣ（ｃｙｔＣ，１２．５キロダルトン））と比較して決定した。Ｓ−２００カラム分画の純度は、コマッシーブルーで染色した標準的な１５％ポリアクリルアミドＳＤＳゲル上での分離により測定した。成熟ＯＰ−１とプロドメインの同一性は、標準的な逆相Ｃ１８ＨＰＬＣを用いて成熟ＯＰ−１をプロドメインから分離した後に、Ｎ末配列分析で測定した。溶解型ＯＰ−１複合体は見かけ１１０キロダルトンの分子量で溶出している。二つのプロドメイン（各々、３９キロダルトン）と結合している一つの成熟ＯＰ −１２量体（３５−３６キロダルトン）と溶解型ＯＰ−１複合体の予測される組成とよく一致している。最終的な複合体の純度は、適切な分画について還元型１５％ポリアクリルアミドゲル分析により証明する事が出来る。複合体成分は、標準的な操作を用いてＳ−２００、又はＳ−２００ＨＲからの複合体を含む分画について逆相Ｃ１８ＨＰＬＣカラムにかけ、アセトニトリル・グラージェント（０．１％ＴＦＡ）で溶出することにより証明できる。この段階で複合体は解離し、プロドメインと成熟種は分かれて溶出する。これらの分離した種はその後標準的な操作を利用して（例えば，ＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｍ．ドイチャー、編、アカデミックプレス，サンディェゴ、１９９０、特にｐｐ６０２−６１３参照）Ｎ末配列分析にかけられ、単離された３６ｋＤａ、３９ｋＤａの蛋白の同一性について、それぞれ成熟モルフォジェン、単離された切断型プロドメインとして確認された。ＯＰ−１産生する哺乳動物細胞から単離されたプロドメインＮ末配列分析で２つの形のプロ領域、即ち、インタクト型（配列表番号１６の残基３０から始まる）と切断型（配列表番号１６の残基４８から始まる）があることがわかった。単離した成熟種のポリペプチドサブユニットのＮ末配列分析では配列表番号１６の残基２９３、３００、３１３、３１５、３１６及び３１８から始まる成熟配列の一連のＮ末があることが判明した。これらの全ては、標準的な骨誘導アッセイで示されるように活性である。Ｃ．２ｉｎｖｉｔｒｏ溶解型モルフォジェン複合体形成培養培地や体液から、溶解型複合体を精製する別の方法として、溶解型複合体は精製プロドメインや成熟２量体種からつくることもできる。複合体形成が成功するにはジスルフィド結合に影響せず、これらの分子の折りたたまれた構造を緩和するのに十分な変性条件下で成分の解離が必要である。好ましくは、変性条件が、切断プロドメインが、緩和された折りたたみ状件下で、成熟２量体種と結合する機会をもてるに十分な分子内小孔の環境を擬似することである。そこで変性剤の溶液中の濃度は、制御され、好ましくは、プロドメインが２量体と結合したままで、２量体とプロ領域の適切なリフォールディングが許容できるように段階的にに減少させる。有用な変性剤としては、ｐＨ４−１０、好ましくはｐＨ６ −８の緩衝液中で、４−６Ｍの尿素またはグアニジン塩酸塩（ＧｕＨＣｌ）を含む。そして、溶解型複合体は調節された透析か、変性剤の最終濃度が０．１−２Ｍ以下の尿素、又はＧｕＨＣｌ、好ましくは１−２Ｍ以下の尿素、又はＧｕＨＣｌの溶液に希釈する事によって作られ、これを好ましくは生理緩衝液に希釈する。蛋白質精製や変性操作や考察については従来技術によく開示されており、適切な変性プロトコルをすぐに開発するための詳細は当業者の通常の技術を有するものにより容易に決められる。一つの有用なテキストは、例えば，ＧｕｉｄｅｔｏＰｒｏｔｅｉｎＰｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ、Ｍ．ドイチャー、編、アカデミックプレス，サンディエゴ、１９９０、特に第Ｖ節。複合体形成は一つ以上のシャペロン蛋白質を加えることにより支援される。Ｃ．３溶解型モルフォジェン複合体の安定性生理緩衝液中、例えば、トリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）やリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中での高度に精製された溶解型モルフォジェンの安定性は、いろいろな手段で増強できる。現在好ましくは、プロ配列の少なくとも最初の１８アミノ酸（例えば、ＯＰ−３の配列表番号１の残基１８−３５）からなるプロ領域、好ましくはプロ領域の全長からなるプロ領域によるものである。残基１８−３５は他のモルフォジェンのＮ末部分と配列相同性を示し、全てのモルフォジェンの複合体安定性を増強するのに特に有用と考えられている。溶解型モルフォジェン複合体の安定性を増強させる他の有用な手段は、３つのクラスの添加剤を含む。これらの添加剤は塩基性アミノ酸（例えば、Ｌ−アルギニン、リジンとベタイン）；非イオン性洗剤（例えば、ツイーン８０又はＮｏｎｌｄｅｔＰ−１２０）；とキャリア蛋白質（例えば、血清アルブミンとカゼイン）を含む。これらの添加剤の有用な濃度は１−１００ｍＭ、好ましくは、１０−７０ｍＭ（５０ｍＭを含む）塩基性アミノ酸を含む；０．０１−１．０％、好ましくは、０．０５− ０．２％（０．１％を含む）（容量／容量）の非イオン性洗剤を含む；０．０１ −１．０％、好ましくは０．０５−０．２％（０．１％を含む）（重量／容量）のキャリア蛋白質を含む。実施例２．ＯＰ−３の細胞分裂効果２．１ラット、及びヒト骨芽細胞に対するモルフォジェンの細胞分裂効果以下の実施例は以下のアッセイ法を用いて、ｉｎｖｉｔｒｏで骨芽細胞の増殖を誘導するＯＰ−３の能力を示すのに使用することができる。骨芽細胞の培養を含むこの及び全ての実施例において、ラット骨芽細胞に富んだ一次培養が好ましく用いられた。これらの培養は、個別の細胞が分化の異なる段階にいる点において不均一であるが、これらの培養は、樹立された株化細胞から得られる骨芽細胞より、より正確にｉｎｖｉｖｏでの骨芽細胞の代謝及び機能を反映すると考えられている。特に示されない限り、用いられた全ての化学試薬は標準的な、市販品として入手できる、シグマ化学会社、セントルイス；カルバイオ化学、サンディエゴ、及びアルドリッチ化学会社、ミルウオーキーを含む、多数の出所から容易に入手できるものである。ラット骨芽細胞に富んだ一次培養物は、例えば，ワン等の（１９７５）ＰＮＡＳ７２：３１６７−３１７１に開示されているような標準的な処方に従って、新生の縫合線のないラット頭蓋冠（例えば、１−２日齢の動物から、ロング−エバンス種、チャールズリバー、ウイルミントン，マサチューセッツ州）の連続的なコラーゲナーゼ消化により調製される。ラット骨芽細胞の単一細胞懸濁液をそれから多穴プレート（例えば、２４穴プレート）に１０％ＦＢＳ（胎児ウシ血清）、Ｌ−グルタミン及びペニシリン／ストレプトマイシンを含有するアルファＭＥＭ（イーグル修飾培地、ギブコ、ロングアイランド）に各ウエル５０、０００の骨芽細胞の濃度で加えられた。細胞は３７℃で２４時間インキュベートされ、その時に成長培地を１％ＦＢＳを含有するアルファＭＥＭ培地で置換し、細胞が実験中、血清を除去した成長培地にあるように、さらに２４時間、細胞をインキュベートした。培養細胞は３つの群に分けられた：（１）例えば，０．１、１．０、１０．０、４０、及び８０ｎｇのＯＰ−３が入っているウエル；（２）０．１，１．０，１０．０、及び４０ｎｇの局所作用成長因子（例えば、ＴＧＦ−β）が入っているウエル；（３）対照群で成長因子のないもの。細胞はそれからさらに１８時間インキュベートされ、その後、各ウエルが、２μＣｉ／ウエルの³Ｈ−チミジンでパルスされ、さらに６時間インキュベートされた。過剰なラベルは、その後、０．１５ＭのＮａＣｌ冷溶液で洗浄され、それから、２５０μｌの１０％トリクロロ酢酸を各ウエルに加え、室温で３０分間インキュベートした。細胞は、それから、３回、冷蒸留水で洗浄し、１％ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を加え、３７℃で３０分間溶解した。生成した細胞分解物は当業者に公知の標準的な手段で採取し、³Ｈ−チミジンの細胞性ＤＮＡへの取り込みを細胞の細胞分裂活性の指標として液体シンチレーションで測定した。この実験ではＯＰ−３は³Ｈ− チミジンのＤＮＡへの取り込みを促進し、このように骨芽細胞の細胞増殖を促進することが予測される。反対に、ＴＧＦ−βの効果は一時的で、２相性である。高濃度では、ＴＧＦ−βは骨芽細胞の増殖に有意な効果はなかった。ＯＰ−３の骨芽細胞の増殖に対するｉｎｖｉｔｒｏの効果は、ヒト一次骨芽細胞（上述したように、通常の成人患者の骨組織より得られ、調製される）、及びヒト骨肉腫由来の株化細胞を用いて評価することができる。全ての場合、ＯＰ −３は内軟骨性の骨形成を誘導するモルフォジェンの能力に従って、細胞増殖を誘導することが予測される（以下の実施例７を参照）。２．２前駆体細胞剌激以下の実施例はＯＰ−３の間葉系前駆体細胞の増殖を促進する能力を示している。有用な未使用の幹細胞は分化可能な幹細胞を含み、従来の方法（例えば、ファラジらの、（１９８８）ＶｏｘＳａｎ．、５５（３）：１３３−１３８、若しくは、ブロクスマイヤーらの、（１９８９）ＰＮＡＳ８６：３８２８−３８３２を参照）を使用して、血液から未使用の幹細胞を得るのと同様に、骨髄、若しくは晴帯血から単離することができる。又別に、胎児細胞（例えば、培養中胚葉株化細胞）を用いることができる。前駆細胞を入手し、ＯＰ−３フラグメントの細胞増殖を促進する能力を測定する他の方法はｉｎｖｉｖｏの原料からの前駆体細胞を採取することである。例えば、遊走性前駆体細胞を流入させることができる生体内適合性の基質素材を遊走性前駆体細胞の流入に十分な長さのｉｎｖｉｖｏの部位に移植することができる。例えば、骨由来のグアニジン抽出基質は例えば、サンパスらの（（１９８３）ＰＮＡＳ８０：６５９１−６５９５）または、米国特許４、９７５、５２６号に開示されているように成型され、本質的にはＳａｍｐａｔｈらの方法に従って、ラット皮下部位に移植することができる。３日後、移植物を除去し、基質と結合している前駆体細胞を散布し培養した。得られた前駆体細胞は、しかしながら、その後、ｉｎｖｉｔｒｏで公知の、及び前述した標準的な細胞培養条件でインキュベートした。外部からの剌激がないと、前駆体細胞は培養でそれら自身、全く、若しくは、ほんの僅かしか増殖しない。しかしながら、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントが存在すると培養前駆体細胞は増殖することが予測される。細胞成長は公知の標準的な方法を使用して視覚的に、若しくは分光光学的測定により測定できる。実施例３．モルフォジェン誘導細胞分化３．１胎児間葉系細胞分化形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを細胞分化させるのに使用することができる。ＯＰ−３の細胞分化を誘導する能力はＯＰ−３の存在下に初期間葉系細胞を培養し、その後、公知の標準的な細胞培養、及び細胞染色を用いてトルイジンブルーで染色し培養細胞の病理を研究することにより示されることができる。例えば、下顎骨になることが運命づけられているラット間葉系細胞は段階１１で、上にある上皮細胞から離され、ｉｎｖｉｔｒｏで標準的な組織培養条件下で、例えば、化学的に特定された、血清フリー培地で、例えば、６７％のＤＭＥＭ（ダルベッコ・イーグル修飾培地）、２２％Ｆ−１２培地、１０ｍＭＨｅｐｅｓｐＨ７、２ｍＭグルタミン、５０μｇ／ｍｌトランスフェリン、２５μｇ／ｍｌインスリン、微量要素、２ｍｇ／ｍｌオレイン酸に結合したウシ血清アルブミン、ＨＡＴ（０．１ｍＭヒポキサンチン、１０μＭアミノブテリン、１２μＭチミジン）で培養された時、分化を続けないことは知られている。しかしながら、これらの同じ細胞をさらに１日、上にある内胚葉と接触させていると、そのとき、段階１２の細胞になり、それらは、軟骨細胞を形成するためにｉｎｖｉｔｒｏでそれら自身の分化を続ける。さらに、骨芽細胞への、究極的には下顎骨への分化には適切な局所環境、例えば、血管新生環境が必要である。ＯＰ−３の存在下、例えば，１０−１００ｎｇ／ｍｌ、ｉｎｖｉｔｒｏで培養された段階１１の間葉系細胞は、もしそれが上にある内胚葉細胞から採取された細胞生成物と培養されたとき、ｉｎｖｉｔｒｏで分化を続けるように、軟骨細胞を形成するためにｉｎｖｉｔｒｏで分化を続けることが予測される。この実験は、種々の組織でのＯＰ−３の細胞分化能を示すのに種々の間葉系細胞で実行することができる。他のモルフォジェン誘導細胞分化の実施例としては、ＯＰ−３の骨芽細胞分化誘導能が一次骨芽細胞培養物、若しくは骨芽細胞様の株化細胞を用いて、かつ、分化した骨芽細胞の表現型に特異的な各種の骨細胞マーカー、例えば、アルカリフォスファターゼ活性、副甲状腺ホルモン−媒介の環状ＡＭＰ（ｃＡＭＰ）産生、オステオカルシン合成、昂進した石灰化速度などをアッセイすることにより、ｉｎｖｉｖｏで示すことができる。３．２ＯＰ−３による骨芽細胞のアルカリフォスファターゼ誘導血清フリーの培地で培養された細胞をＯＰ−３濃度範囲が、例えば，０．１，１．０，１０．０、４０．０、若しくは８０．０ｎｇＯＰ−３／ｍｌの培地でインキュベートする；若しくは類似の濃度範囲のＴＧＦ−βとインキュベートする。インキュベーションして７２時間後に細胞層を０．５ｍｌの１％トリトンＸ− １００で抽出する。得られた細胞抽出物を、それから、遠心分離し、１００μｌの抽出物を９０μｌのパラニトロソフェニルリン酸（ＰＮＰＰ）／グリセリン混合物に加え、３７℃のウオーターバスで３０分間インキュベートし、反応を１００μｌの苛性ソーダで停止する。試料をその後プレートリーダー（例えば、ダイナテクＭＲ７００プレートリーダー、ｐ−ニトロフェノールを標準として用い，４００ｎｍの吸光度を測定する）にかけ、アルカリフォスファターゼ活性の存在と量を測定する。蛋白質濃度はバイオラッド法で測定する。アルカリフォスファターゼ活性は単位／μｇ蛋白質で計算される。ここで、１単位とは１ナノモルのｐ−ニトロフェノールが３７℃３０分で放出されることをいう。ＯＰ−３のみが骨芽細胞アルカリフォスファターゼの産生を促進し、このように、骨芽細胞の分化した表現型の成長及び発現を促進する。ＯＰ−３モルフォジェンのラット骨芽細胞によるアルカリフォスファターゼの産生に対する長期間の効果も又、以下に開示される。ラット骨芽細胞が調製され、上述したように多穴プレートで培養する。この実験で、６セットの２４ウエルプレートで各ウエルに５０、０００ラット骨芽細胞を入れる。各プレートのウエルは上述のように調製され、３群に分けられる：（１）例えば、培地ｌｍｌ当たりｌｎｇのＯＰ−３；（２）培地１ｍｌ当たり４０ｎｇのＯＰ−３；そして（３）培地ｌｍｌ当たり８０ｎｇのＯＰ−３。各プレートはいろいろの長さの時間インキュベートする：０時間（対照時間）、２４時間、４８時間、９６時間、１２０時間、及び１４４時間。各インキュベーション期間後に、細胞層を０．５ｍｌの１％トリトンＸ−１００で抽出する。得られた細胞抽出物を遠心分離し、アルカリフォスファターゼ活性をパラニトロソフェニルリン酸（ＰＮＰＰ）を用いて実施例３．１のように測定する。ＯＰ−３は、用量依存的に骨芽細胞のアルカリフォスファターゼの産生を促進し、ＯＰ−３の用量をさらに増加させるとアルカリフォスファターゼ産生レベルが増加する。さらに、処理された骨芽細胞におけるＯＰ−３剌激によるアルカリフォスファターゼの高いレベルは、長時間続くものと予想される。３．３ＯＰ−３蛋白質による副甲状腺ホルモン介在のｃＡＭＰ誘導ｉｎｖｉｔｒｏで、ラット骨芽細胞における副甲状腺ホルモン媒介のｃＡＭＰ産生に及ぼすＯＰ−３の効果を以下の様に開示することができる。上述の如く、ラット骨芽細胞が調製され、多穴プレートで培養する。培養細胞は、その後、３群に分けられる：（１）例えば、１．０，１０．０、及び４０．０ｎｇＯＰ−３／ｍｌ培地の入っているウエル；（２）例えば、類似の濃度範囲のＴＧＦ−βの入っているウエル；（３）成長因子の入っていない対照群。プレートは、その後、さらに７２時間インキュベートされる。７２時間の終わりに、細胞を０．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）と１ｍＭ３−イソブチル−１ −メチルキサンチンを含有する培地で２０分間処理し、つづいてウエルの半分に、ヒト組換副甲状腺ホルモン（ｈＰＴＨ、シグマ、セントルイス）を２００ｎｇ／ｍｌの濃度で加え１０分間処理する。細胞層をその後０．５ｍｌの１％トリトンＸ−１００で各ウエルから抽出する。ｃＡＭＰレベルをその後ラジオイムノアッセイキット（例えば、アマーシャム、アーリントンハイツ、イリノイ州）を用いて測定する。ＯＰ−３のみがＰＴＨ−介在のｃＡＭＰ反応の増加を促進し、このように、骨芽細胞の分化表現型の成長、及び発現を促進する。３．４ＯＰ−３蛋白質によるオステオカルシン産生誘導オステオカルシンはｉｎｖｉｖｏで骨石灰化速度に必須の役割をしており、骨芽細胞により合成される骨特異的蛋白質である。血清中に循環しているオステオカルシンのレベルは骨芽細胞活性、及びｉｎｖｉｖｏでの骨形成のマーカーとして使用される。骨芽細胞に富んだ培養でのオステオカルシン合成の誘導はｉｎｉｔｒｏでのＯＰ−３形態形成の有効性を示すのにも使用することができる。上記のようにラット骨芽細胞を調製し、多穴プレートで培養する。この実験で培地に１０％ＦＢＳを追加し、２日目に細胞を新鮮な１０ｍＭ β−グリセロリン酸（シグマ）を加えた新鮮な培地で培養される。５日目に始まり、その後１週間に２回細胞は上記全ての成分と新鮮なＬ（＋）−アスコルビン酸を最終濃度が５０μｇ／ｍｌになるよう加えた完全石灰化培地で培養される。ＯＰ−３はその後ウエルに直接、例えば、０．１％トリフルオロ酢酸を含有した５０％アセトニトリル（若しくは５０％エタノール）中で、５μｌモルフォジェン／ｍｌ培地以下の濃度で加える。対照ウエルは溶剤ビヒクルのみを加える。細胞はその後再培養され、標準的な蛋白質分解酵素阻害剤を含有する標準的なラジオイムノアッセイ用緩衝液で１：１に希釈し−２０℃でオステオカルシンのアッセイされるまで保存される。オステオカルシン合成は市販品として入手できるオステオカルシン特異抗体を用いて標準的なラジオイムノアッセイで測定する。石灰化は長時間（１３日間）の培養で、固定した細胞層の改変フォンコッサ染色技術を用いて測定する：細胞を２３℃で、１０分聞、新鮮な４％パラホルムアルデヒド中で固定し、引き続き冷０．９％ＮａＣｌでリンスする。固定された細胞は、その後、市販品で入手できるキット（シグマ）を用いて、ｐＨ９．５で１０分間、内因性アルカリフォスファターゼのため染色する。紫色に染色された細胞は、それから、メタノールで脱水され、空気乾燥する。暗室で３％硝酸銀に３０分、インキュベートした後、水でリンスした試料を３０秒間２５４ｎｍ紫外線に黒銀染色リン酸結節を展開するのに暴露した。ここの石灰化部分（少なくとも、２０μｍの大きさ）は解剖顕微鏡で数を数え、培養当たりの結節数で表現する。ＯＰ−３は骨芽細胞培養でのオステオカルシン合成を促進する。ＯＰ−３に反応して、増加したオステオカルシン合成は用量依存的で１３日間のインキュベーション後の基本的レベルの著しい増加を示した。昂進したオステオカルシン合成は、また、ラット−オステオカルシン特異プローブを用いて、上昇したオステオカルシンｍＲＮＡメッセージ（２０倍増加）を検出することにより確認することができる。さらにオステオカルシン合成の増加は、石灰化結節の出現により測定されるように、長期間の骨芽細胞の培養で増加した石灰化と関連する。ＯＰ−３は処理されていない培養物と比較すると、著しく、初期石灰化速度を増加する。３．５モルフォジェン誘導ＣＡＭ発現本発明で開示されるモルフォジェンは、ＣＡＭ発現を、特にＮ−ＣＡＭ発現をそれらの形態形成誘導の一部として誘導する（係属中のＵＳＳＮ９２２、８１３参照）。ＣＡＭ類は組織の発達過程での必須の段階として、全ての組織で同定された形態調節分子である。Ｎ−ＣＡＭ類は少なくとも３個のアイソフォーム（Ｎ −ＣＡＭ−１８０，Ｎ−ＣＡＭ−１４０，Ｎ−ＣＡＭ−１２０、ここで”１８０ ”、”１４０”、”１２０”はＳＤＳボリアクリルアミドゲル電気泳動により測定されたアイソフォームの見かけの分子量を表している）からなり、少なくとも発達組織において一時的に、神経組織において永久的に発現する。Ｎ−ＣＡＭ− １８０、及びＮ−ＣＡＭ−１４０のアイソフォームは発達中、及び成人組織のいずれでも発現する。Ｎ−ＣＡＭ−１２０アイソフォームは成人組織のみで見いだされる。他の神経系ＣＡＭはＬ１である。ＯＰ−３のＣＡＭ発現を促進する能力はＮＧ１０８−１５細胞を使用した、以下のプロトコルを使用して示すことができる。ＮＧ１０８−１５は形質転換した融合細胞株（神経芽腫ｘ神経膠腫、ＡＴＣＣ、ロックビル、メリーランド州）で形質転換した胎児性ニューロンの形態学的特徴を示すものである。下記の実施例４に示すように、未処理のＮＧ−１０８−１５細胞は線維芽細胞性、若しくは殆ど分化していない形態を示し、発達中の細胞と通常的に関連するＮ−ＣＡＭの１８０、及び１４０のアイソフォームのみを発現する。モルフォジェン処理に続いて、これらの細胞は、成人ニューロンの形態学的特徴を示し、３つのＮ−ＣＡＭアイソフォームの全てのレベルを昂進して発現する。この実施例では、ＮＧ１０８−１５細胞を標準的な培養操作を用いて、次第に濃度の増加するＯＰ−３の存在下で４日間培養し、全細胞抽出物について標準的なウエスタンブロットが行われた。Ｎ−ＣＡＭアイソフォームが他の三つのアイソフォーム全てと交差反応する抗体、シグマ化学、セントルイス、から入手したｍＡＢＨ２８．１２３、を用いて検出し、異なるアイソフォームは電気泳動ゲル上での異なる泳動度で区別できる。対照のＮＧ１０８−１５細胞（未処理）は１４０キロダルトン、及び１８０キロダルトンのアイソフォームを発現するが、１００μｇまでの蛋白質を用いてウエスタンブロット分析で測定しても１２０キロダルトンのアイソフォームは発現しない。ＮＧ１０８−１５細胞をＯＰ−３で処理すると、１８０キロダルトン、及び１４０キロダルトンのアイソフォームが用量依存的に増加し、さらに１２０キロダルトンのアイソフォームも誘導される。さらに、ＯＰ−３誘導のＣＡＭ発現は病理学的検査では細胞凝集と関連する。実施例４．ＯＰ−３蛋白質誘導の形質転換した表現型の再分化本発明で開示されているＯＰ−３モルフォジェンは、形質転換細胞を形質転換していない細胞に特徴的な形態へ、再分化させることができる。実施例で以下にモルフォジェンが誘導する神経起源（ＮＧ１０８−１５）の形質転換ヒト株化細胞の再分化；同様に、マウス神経芽細胞（ＮＩＥ−１１５）、及びヒト胎児カルシノーマ細胞の、未形質転換細胞に特徴的な形態への再分化について詳述する。上述したように、ＮＧ１０８−１５は神経芽細胞と神経膠腫細胞（ＡＴＣＣ、ロックビル、メリーランド州、より入手）を融合して作られた形質転換ハイブリッド細胞で、形質転換胎児ニューロンに特徴的な形態、例えば、線維芽細胞性形態を有することを示す。特に、細胞は多角形の細胞体で、短く、釘状の突起を有し隣接細胞と殆ど接触しない（係属中のＵＳＳＮ９２２、８１３参照）。ＮＧ１０８−１５細胞を化学的に特定される血清フリーの培地で、０．１から３００ｎｇまでのモルフォジェン（例えば、ＯＰ−３）と４時間培養するインキュベーションで順序正しい用量依存的な細胞形態の変化を誘導することが予測される。この実施例では、ＮＧ１０８−１５細胞はポリ−Ｌ−リジンでコートされた６穴プレートで継代培養する。各ウエルは２．５ｍｌの化学的に特定された培地で４０−５０、０００細胞を含有する。３日目に、０．０２５％トリフルオロ酢酸を含有する６０％エタノールに溶解した２．５μｌのモルフォジェン（例えば、ＯＰ−３）を添加する。異なる濃度の形態形成性ＯＰ−３で試験された（代表的には、０−３００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度で試験される。）。培地は、毎日、モルフォジェンの新しいアリコートと交換される。ＯＰ−３は、細胞体を丸くし、相の活発化、短い神経袖策の突起の延長、及び他の細胞超構造の重要な変化も含め、形質転換細胞の用量依存的再分化を誘導することが予測される。７日後、処理された細胞は顕微鏡検査で視覚的に測定されるように、高密度に充填され、多層に凝集する上皮層を形成し始めるはずである。さらに、モルフォジェン誘導再分化は、ＤＮＡ合成、細胞分裂、細胞生存性での変化と関連せずに起こり、形態変化が細胞分化に２次的なものであり、若しくはモルフォジェンの毒性効果ではないようにする。さらに、モルフォジェン誘導再分化は、³Ｈ−チミジン取り込みで測定すると、酪酸や、ＤＭＳＯ，レチノイン酸、若しくは同様な実験でのフォルスコリンなどのように、形質転換細胞の分化を促進することが分かっている他の分子とは異なり、細胞分裂を阻害しない。このように、ＯＰ−３は再分化誘導後は細胞の安定性、及び生存性を維持する。本発明で開示されているＯＰ−３モルフォジェンは、従って、腫瘍や、神経系、特に、網膜芽腫、神経膠腫を含む神経芽腫の治療において、の腫瘍性病変の治療に有用な治療剤を提供する。さらに関連する実施例として、ＯＰ−３の形質転換細胞の”再分化”を誘導する能力は、以下のアッセイを用いて示すことができる。特に、ＯＰ−３のヒトＥＣ細胞（胎児ガン細胞、例えば，ＮＴＥＲＡ−ＺＣＬ．Ｄ１，ＡＴＣＣ，ロックビル、メリーランド州）に対する効果が測定される。外部からの剌激物がない場合、これらの細胞は、未分化幹細胞として維持され、血清フリーの培地（ＳＦＭ）での成長を誘導することができる。モルフォジェン処理無しでは、細胞は猛烈に増殖し、浮遊性である。モルフォジェン存在下ではＥＣ細胞は扁平な細胞として成長し、接着性になり凝集塊を形成する。さらに、成長速度が約１０倍減少している。最終的に、細胞は分化が誘導される。実施例では、ＯＰ−３の濃度を変え（例えば、０−３００ｎｇ／ｍｌ）、培養細胞（例えば、２．５ｍｌの化学的に特定された培地に４０−５０、０００細胞）に毎日添加され、処理の効果を視覚的検査で測定する。ＯＰ−３は未形質転換胎児細胞に特徴的な形態への、これらの細胞の再分化を促進することが予測される。実施例５．表現型の維持形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを細胞の分化した表現型を維持するのに使用することができる。この応用は、特に老化、若しくは休止細胞における表現型の連続した発現を誘導するのに有用である。５．１表現型維持のｉｎｖｉｔｒｏモデルモルフォジェンの表現型維持能は容易に測定できる。多くの分化した細胞は公知の標準的な組織培養条件下（例えば、ＣｕｌｔｕｒｅｏｆＡｎｉｍａｌＣｅｌｌｓ：ＡＭａｎｕａｌｏｆＢａｓｉｃＴｅｃｈｎｉｕｅｓＣ．Ｒ．フレッシュニー、編、ウイリー、１９８７）でｉｎｖｉｔｒｏで、複数回継代していると老化、若しくは休止する。しかしながら、これらの細胞がＯＰ −３のようなモルフォジェンと共にｉｎｖｉｔｒｏで培養されると、細胞は多数回の継代を通してそれらの表現型の発現を維持するよう剌激される。例えば、培養骨肉腫細胞や頭蓋冠細胞のような、培養骨芽細胞のアルカリフォスファターゼ活性はｉｎｖｉｔｒｏでの多数回の継代すると著しく減少する。しかしながら、細胞がＯＰ−３の存在下で培養されるとアルカリフォスファターゼ活性は長期間にわたり維持されるはずである。同様に、筋細胞の表現型発現はモルフォジェン存在下で維持される。この実験では、骨芽細胞は実施例２で開示されているように培養される。細胞を複数の群にわけ、ＯＰ−３の濃度（例えば，０− ３００ｎｇ／ｍｌ）と継代回数（例えば、３−５回）を変えて標準的な方法でィンキュベートする。継代した細胞は分化細胞の代謝機能の指標として、実施例３で開示されているように、アルカリフォスファターゼ活性を試験する。ＯＰ−３が存在しないで培養した骨芽細胞はＯＰ−３処理細胞と比較して、アルカリフォスファターゼ活性が低いはずである。５．２表現型維持のｉｎｖｉｖｏモデル表現型維持能力は、国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０７４３２（ＷＯ９３／０５７５１）に開示されているようにラット骨粗鬆症モデルを用いて、ｉｎｖｉｖｏで示すことができる。雌性ロングエバンスラット（チャールズリバー、ウイルミントン、マサチューセッツ州）を、標準的な手術技を用いて、擬手術、若しくは卵巣摘除し、エストロジェン産生の低下からくる骨粗鬆症的条件を作る。術後、まもなく、例えば、卵巣摘除後２００日、ラットに生理リン酸緩衝液（ＰＢＳ）、若しくはモルフォジェン（例えば、ＯＰ−３、１−１００μｇ）を全身的（例えば、毎日、尾静脈注射）に２１日間投与する。ラットをその後屠殺し、血清アルカリフォスファターゼレベル、血清カルシウムレベル、血清オステオカルシンレベルを上述したようなまた前記公報に記載されているように標準的な方法を用いて測定する。有効量のＯＰ−３を処置したラットはオステオカルシンやアルカリフォスファターゼレベルが上昇するはずである。さらに、頚骨骨幹部の組織形態学的計測によりＯＰ−３処置ラットの骨量は、未処置の、卵巣摘除ラットと比較して、改善されるはずである。事実、ＯＰ−３動物の骨量が擬手術ラット（例えば、卵巣摘除されていない）の骨量に匹敵（接近）することが予測される。実施例６．前駆体細胞群の増殖前駆体細胞をｉｎｖｉｖｏ、若しくはｅｘｖｉｖｏで増殖するよう剌激することができる。細胞は、ｉｎｖｉｖｏで形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを含有する殺菌試料を注射、若しくは他の投与方法で個体に投与し剌激することができる。例えば、個体の造血系多能性幹細胞群を個体の骨髄に適切な濃度のＯＰ−３を注射、若しくは他の方法で供給することにより増殖を促進することができる。細胞の増殖を促進するのに十分な濃度で、十分な時間、殺菌条件下で形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントで昂進された前駆体細胞群と接触させることにより、ｅｘｖｉｖｏで前駆体細胞を剌激することができる。適切な濃度と、剌激時間は、本質的に、上述の実施例２に開示されている手順に従って、実験的に決めることができる。約０．１−１００ｎｇ／ｍｌの間のモルフォジェン濃度、及び約１０分から７２時間、若しくは、より一般的には、約２４時間の剌激時間が、約１０⁴か１０⁶の細胞の細胞群を剌激するのに、概して、十分であるはずである。剌激された細胞は、その後、例えば、適切なｉｎｖｉｖｏの部位に細胞を注射することにより、個体に供給される。適切な、生体内適合性前駆体細胞を公知の方法、若しくは本発明で上述の方法のいずれをを用いても得ることができる。実施例７．損失した、若しくは損傷した組織の再生ＯＰ−３を病気の、若しくは損傷した啼乳動物の組織の修復に使用することができる。修復されるべき組織を、好ましくは、まず調べ、必要であれば、過剰の壊死した、若しくは邪魔になる癒痕組織を、例えば、切除により、若しくは医療技術で知られている、外科的、化学的、若しくは他の方法で除去する。ＯＰ−３は組織部位へ直接、殺菌され、生体内適合性の組成物として、外科的移植、若しくは注射のいずれかにより、供給することができる。モルフォジェンは、また、経口、若しくは非経口投与により、全身的に供給することもできる。又別に、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントに剌激された前駆体細胞を含有する殺菌した、生体内適合性の組成物を組織部位の供給することができる。部位にある組織は、それが、病気のものであれ、損傷したものであれ、前駆体細胞の増殖、及び組織特異的分化を許容する適切な基質を供給する。さらに、損傷、若しくは病気の組織部位は、特に、さらに外科的手段により侵襲された部位は、形態形成的に許容しうる環境を供給する。ＯＰ−３の全身投与は特定の応用（例えば、例として、骨粗鬆症、及び他の骨リモデリングサイクルの病気の処置）には十分である。ある環境では、特に、組織損傷のひどいところで、組織は細胞の流入や増殖のための十分な基質を供給する。これらの例の中に、ＯＰ−３、若しくは、ＯＰ− ３により剌激された前駆体細胞を、後述する手段のいずれかを用いて調製された、適切な、生体内適合性の、成型された基質と共に、組織部位へ供給することが必要である。基質は、好ましくは、ｉｎｖｉｖｏで生体内分解性である。基質は組織特異的で、及び／若しくは７０−８５０μｍ、より好ましくは、１５０− ４２０μｍの範囲の寸法の多孔性粒子からなる。ＯＰ−３は、また、免疫／炎症反応媒介の組織損傷や、傷害に続く癒痕組織形成を抑制、若しくは実質的に阻害するのに使用することができる。ＯＰ−３は、新しい傷害組織部位に、その部位で組織形態形成を誘導するのに供給するが、それで、未分化結合組識への遊走性線維芽細胞の凝集を抑制する。ＯＰ−３は、好ましくは、傷害から５時間以内に組織部位へ殺菌した医薬品剤として供給される。免疫／炎症反応が、不可避的に若しくは故意に起こった場合、例えば外科的若しくは他の競合的臨床治療法の一部として、ＯＰ−３は、好ましくは予防的に患者に、治療の前若しくは治療に付随して供給する。以下に、７個の実施例をあげ、骨、肝、神経、象牙質、セメント質、及び歯周組織におけるＯＰ−３誘導組織形態形成を示すプロトコルについて説明する。７．１ＯＰ−３誘導骨形態形成蛋白質の形態形成活性を示し、評価するための特に有用な補乳動物細胞組織モデル系は内軟骨性骨組織形態形成モデルであり、これは当業者に知られており、例えば、米国特許４、９６８、５９０号に開示されている。内軟骨性骨形成を誘導する能力には、前駆体細胞の増殖が軟骨芽細胞や骨芽細胞へを誘導する能力、軟骨基質形成、軟骨石灰化及び骨リモデリングを誘導する能力、適切な血管新生や造血性骨髄分化を誘導する能力等が含まれる。形態形成材が置かれている局所的環境は組織形態形成にとって重要である。ここで用いられる”局所的環境”とは組織構造基質や組織の周辺の環境を含むものと理解される。例えば、それらの増殖のため適切に固定する下層が必要なことに加えて、モルフォジェンにより剌激された細胞はそれらの分化の組織特異的に配向させるシグナルも必要である。これらのシグナルは異なる組織で変わるし、細胞表面マーカーであってもよい。さらに新しい組織の血管新生は血管新生を支援する局所環境が必要である。以下に、ＯＰ−３のｉｎｖｉｖｏでの形態形成への有用性を評価する各種の操作とＯＰ−３含有組成物について説明する。組成物は、多くの公知の方法のいずれかの方法で哺乳動物に、注射したり、外科的に移植される。例えば、外科的移植バイオアッセイは本質的にサンパスらのＰＮＡＳ８０：６５９１−６５９５、及び米国特許４、９６８、５９０号などの方法に従って実施することができる。病理学的切片を作成し、染色するのがｉｎｖｉｖｏ、特に組織修復処置での形態形成の程度を測定するのに好ましい。切除された移植物をブワン溶液で固定し、パラフィン包埋し、６−８μｍの切片を作成する。トルイジンブル−若しくはヘマトキシリン／エオシンで染色することにより、新しい組織の最終的な発達を明らかに示される。１２日間の移植は、通常、移植物が新しく誘導された組織を含有しているかどうかを測定するのに十分である。成功した移植は、誘導組織の発達の段階を通して、生じた組織特異的事象を同定し、追跡することができるような制御された進行を示す。例えば、内軟骨性骨形成での段階は：（１）１日目に白血球；（２）２及び３日目に間葉系細胞の遊走及び増殖；（３）５及び６日目に軟骨細胞の出現；（４）７日目に軟骨基質の形成；（５）８日目に軟骨石灰化；（６）９及び１０日目に血管浸潤、骨芽細胞の出現、新しい骨の形成；（７）１２から１８日の間に破骨細胞の出現、骨リモデリングの開始；そして（８）２１日目に造血性骨髄細胞の分化で小骨ができる。病理学的評価に加えて、生物学的マーカーを組織形態形成のマーカーとして使用することができる。有用なマーカーは、移植物が均一になった後、その活性をアッセイ（例えば、分光光度法で）することができる組織特異的酵素を含む。これらのアッセィは、動物から移植物を除去した後、組織形成の評価を定量、かつ迅速に得るために有用である。例えば、アルカリフォスファターゼ活性は骨形成のマーカーとして利用できる。全身投与されたＯＰ−３の取り込みは、標識フラグメント（例えば、放射能標識した）を用いて、新しい組織でのそれらの局在化を測定し、及び／若しくは標準的な標識化プロトコル、及びパルス追跡法等を利用して循環器系からの消失を追跡することにより、追跡することができる。ＯＰ−３は、その取り込みが追跡でき、投与されたＯＰ−３の濃度と相関する組織特異的分子標識と共に投与することができる。例として、雌性ラットの卵巣の除去により、骨アルカリフォスファターゼ活性が低下し、ラットは骨粗髭症（実施例５に開示されている）になる傾向を示す。もし、雌性ラットにＯＰ−３を投与されると、全身のカルシウム濃度の低下が見られるはずであり、それは、投与されたＯＰ−３の存在に関連し、増加したアルカリフォスファターゼ活性と符号する。７．２モルフォジェン誘導肝臓再生他の例として、部分的肝臓切除に引き続き起こる実質的な損傷肝組織の形態形成を誘導する方法について説明する。この一般的プロトコルの変形が他の異なる組織でのＯＰ−３のモルフォジェン活性を試験するのに使用することができる。一般的な方法は、本質的に再生しない組織の部分を切除し、ＯＰ−３を、好ましくは、可溶性の製剤として切除した組織部位へ投与し、傷を閉じ、将来、その部位を検査することなどを含む。骨のように、肝臓は出産後損傷したとき再生する能力を有する。ＯＰ−３は、例えぼ、１ｍｇ／ｍｌ、生体内適合性溶液中で、例えば、（例えば、精製された組換成熟型ＯＰ−３）を５０％エタノール、若しくは０．１％トリフルオロ酢酸若しくは適当な酸を含有する適当な溶媒に溶解する。又別に、成熟型蛋白質はプロドメインと結合して溶解することができる。注射可能なＯＰ− ３溶液は、例えぼ、１容量のＯＰ−３溶媒−酸保存溶液を９容量の滅菌ＰＢＳ（生理リン酸緩衝液）に溶解した０．２％ラット血清アルブミンで希釈して調製される。本実験では、成長段階のラット、及び老齢ラット（例えば、ロングエバンス、チャールズリバー、ウイルミントン）をケタミンを使用して麻酔する。二つの肝臓小葉（左と右）を切り（約小葉の１／３）、ＯＰ−３を切断縁に沿って多数の部位に局所的に注射した。注射したＯＰ−３の量は、例えば、１０００μｌのＰＢＳ／ＲＳＡ（生理リン酸緩衝液／ラット血清アルブミン）注射用緩衝液に１００μｇであってもよい。プラセボサンプルは注射用緩衝液のみである。実験的アッセイでは、好ましくは、各群、５匹のラットが使用される。傷を閉じ、ラットに通常の餌を食べさせ、水道水を飲ませる。１２日後、ラットは屠殺され、ＯＰ −３の肝再生の効果を、最も効果的に評価するため、視覚的に観察される。ＯＰ −３フラグメントを注射した群は、例えば、肝臓に切った跡を全く残さずに、完全な肝組織再生を示すことが予測される。反対に、ＰＢＳのみが投与された対照群は試料に切開部が残っておりほんの僅かの再生しか認められない。他のモルフォジェン（例えば、ＯＰ−１）についての先の実験は、これらのモルフォジェンのみが肝組織再生を誘導することを示している。７．３モルフォジェン誘導象牙質、セメント質、及び歯周靭帯再生さらに他の例では、ＯＰ−３の象牙質形成を誘導する能力も又、示すことができる。現在まで、歯髄組織の損傷に対する予測できない反応は歯科学での基本的な臨床上の問題である。サルは低級な非霊長類の哺乳動物を基礎にしたモデルより、ヒト歯科生物学的により、示唆的と考えられているので、カニクイざるが霊長類のモデルとして選ばれた。標準的な歯科外科的操作を利用して、試料歯の歯髄上に直に接しているエナメル質と象牙質を（ドリルで）除去することにより、歯髄の小さな領域（例えば、２ｍｍ）を露出し、歯冠歯髄組織の部分的切除を行って、止血を誘導し、歯髄処置を適用し、標準的な操作で孔をシールし、充填した。用いられた歯髄処置は以下よりなる：担体基質に散布された形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメント；担体基質単独、及び無処置。動物一匹につき１２個の歯（各処置４個）を調製し、２匹の動物が使用された。４週目に歯を抜きだし象牙質形成の分析のため病理学的プロセスにのせられ、及び／若しくは、象牙質石灰化を分析するのに、研磨される。ＯＰ−３の骨象牙質修復に対する効果は、対照試料処置（ＰＢＳ）とＯＰ−３と比較することにより、視覚的に観察することができる。ＯＰ−３＋担体基質は、外科的に露出された健康な歯髄に修復性の骨象牙質の形成を誘導する。反対に、担体基質単独で処置された歯髄は修復性の象牙質を形成しない。同様に、脱灰した歯とＯＰ−３を外科的に調製したイヌ歯槽に移植すると、９３年９月１５日に出願した国際出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／０８７４２でＯＰ−１について開示されているように、新しいセメント質組織や歯周靭帯、さらに新しい歯槽骨や象牙質組織を含む、新しい歯周組織の形成を促進することが予測される。反対に、未処置の歯、若しくは担体ビヒクルのみで処置された歯は歯周組織の成長を誘導しない。７．４モルフォジェン誘導神経組織修復さらに他の例として、中枢神経系（ＣＮＳ）修復に対する、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントによる再生効果の誘導はラット脳貫通モデルを用いて説明できる。実験において、雄性ロングエバンスラットを麻酔し、頭部分を手術用に準備する（毛を刈って、アルコール消毒する等）。頭蓋冠を標準的な外科手術を用いて露出し、０．０３５Ｋのワイアーを用いて各葉の中心に向かってドリルで穴をあけ、きっかり頭蓋冠を貫通させる。モルフォジェン（例えば、ＯＰ− ３、２５μｇ）、若しくはＰＢＳを含有する２５μｌの溶液をハミルトンシリンジで各穴に投与する。溶液を表面の下、約３ｍｍの深さで、下層の皮質、脳梁、及び海馬に放出する。皮膚をその後、縫合し、動物を回復させる。術後３日でラットを断頭屠殺し、それらの脳を切片作成に供した。瘢痕組織形成はグリア小線維酸性蛋白質、グリア瘢痕のマーカー蛋白質であるが、を免疫蛍光染色で、定性的に瘢痕形成の程度を測定するのに評価する。切片もまた、ＯＰ −３特異抗体で蛋白質の存在を測定するのに調べられる。グリア小線維酸性蛋白質のレベルの低下はＯＰ−３で処置されたラットの組織切片で観察されることが予測され、モルフォジェンのグリア瘢痕形成を抑制し、従って神経再生を剌激することが証明される。ＯＰ−３の伸長した距離の抹消神経系軸索成長を促進する能力は以下のモデルを使用して示すことができる。抹消神経系のニューロンはそれら自身の後述する損傷の上に新しい突起を伸長させることができるが、誘導がなければこれらの伸長は、一般的には、適切に結合することができず死んでしまう。損傷箇所が拡がっているところでは、例えば、５、若しくは１０ｍｍ以上、再生は殆ど、若しくは全く起こらない。他のモルフォジェン、例えばＯＰ−１、での以前の実験ではモルフォジェンは抹消神経系の軸索成長を長い距離にわたり促進していて、損傷した抹消神経回路の修復、及び再生を可能にしている。本実施例で、ＯＰ−３の神経再生促進はラット坐骨神経モデルを用いて示される。切断端が生理食塩水で充満している神経誘導チャネルに挿入された場合、ラット坐骨神経は５ｍｍの間隙を、時には、１０ｍｍの間隙の両端まで自然に再生することができる。本実験で少なくとも１２ｍｍの間隙の両端まで神経再生することが試験される。体重２３０−２５０ｇの成熟雌性スプラーグードーリーラット（チャールズリバー）をペントバルビタールナトリウム塩（３５ｍｇ／ｋｇ体重）の腹腔注射で麻酔をかける。大腿骨のちょうど後方で、平行に、皮膚を切開する。外側広筋と膝屈曲筋の間の無血管筋肉横断平面を入れ、坐骨神経の周辺の弛緩した線維疎性組織に続ける。弛緩した組織は、どの部分も、脈管遮断することなく、その全長にわたり坐骨神経を解放するように縦に分割される。手術顕微鏡下で坐骨神経を大腿骨の中央でミクロの鋏で切断し、神経断端を１２ｍｍ離しているＯＰ−３ゲル移植片を移植する。移植領域を、内部にモルフォジェン溶液を充填してある内径１．５ｍｍ、長さ２０ｍｍのシリコンチューブで包む。特に、チューブの中央１２ｍｍは１から５μｇの実質的に純粋な組換技術で生産したＯＰ−３蛋白質を約１００μｌのＭＡＴＲＩＧＥＬ^TM（コラボレイティブリサーチ，Ｉｎｃ．、ベッドフォード、マサチューセッツ州から）、マウス骨肉腫組織由来の細胞外基質抽出物、と混合し、リン酸緩衝液に可溶化した組織基底膜、ラミニン、タイプ IVコラーゲン、ヘパリン硫酸、プロテオグリカン、及びエンタクチンを含むが、を含有して調製されたＯＰ−３ゲルからなる。それから、神経断端を各端に４ｍｍ挿入し、モルフォジェン充填のチューブを直接欠陥部位に移植する。各断端はモルフォジェンゲルに接触させ、市販で入手できる手術用１０−０ナイロンで神経束保護鞘である神経上膜を通して３針でシリコンチューブ内に締め付ける。ＯＰ−３ゲル移植片に加えて、空のシリコンチューブの対照移植片、ゲルのみ充填したシリコンチューブ、及び動物の坐骨神経の１２ｍｍの切断部分を縫合前に１８０゜反転させた、“反転”自己移植片も又、好ましく、移植される。全ての実験は、好ましくは、ｎ＝４で行われる。全ての傷は、好ましくは、１０日後にはずされる傷クリップで閉じられる。ラットの両足に移植される。３週間目に動物は屠殺され、移植片は除去され、ドライアイスで直ぐに凍結される。凍結切片はその後移植部位全てにわたり切られ、フルオセイン（例えば、シグマ化学会社、セントルイスより得られる）で標識された抗神経繊維抗体を用いた免疫蛍光染色で軸索の再生が検査される。坐骨神経の再生はＯＰ−３ゲルで間隙が充填されている全ての移植部位で、１２ｍｍ全長にわたり起こることが予測される。反対に、空のシリコンチューブ、ゲル単独、反転自己移植は神経再生を示さない。実施例８．モルフォジェン発現組織の同定モルフォジェン組織分布を測定することは特定の組織で発現される異なるモルフォジェンを同定したり、さらに、新しい関連するモルフォジェンを同定するのに用いることができる。組織分布は、また、候補モルフォジェン産生促進剤をスクリーニングしたり同定するのに用いる有用なモルフォジェン産生組織を同定するのにも使用することができる。モルフォジェン（若しくは、それらのｍＲＮＡ転写物）は、種々な組織において標準的な方法で容易に同定されし、また発現が少ないかもしれない組織において、その僅かに変更した方法で容易に同定される。例えば、蛋白質分布は標準的なウエスタンブロット分析、若しくは免疫蛍光技術、及びモルフォジェンに、若しくは関心のモルフォジェンに特異的な抗体を用いて測定することができる。同様に、モルフォジェン転写物の分布は標準的なノーザンハイブリダイゼーションプロトコル、及び転写物−特異的プローブを用いて測定することができる。転写物に特異的にハイブリダイズし、他の関連する転写物から、関心の転写物を区別することができるいかなるプローブも用いることができる。本発明で開示されるモルフォジェン類はそれらの活性、Ｃ末ドメインで高度な相同性を共有し、特定のモルフォジェン転写物の組織分布は未成熟蛋白質のプロ領域、及び／若しくは成熟蛋白質のＮ末領域に特異的なプローブを用いることにより、最もよく、測定することができる。他の有用な配列は、３’端のノンコーディングフランキング領域及び直ぐに続く停止コドンである。配列のこれらの部分は本発明のモルフォジェン類の間で、実質的に変わり、従って、各蛋白質に特異的である。例えば、特に有用なＯＰ−３特異的プローブ配列は３’端の未翻訳配列、例えば、配列表番号１のヌクレオチド１３１０−１６７４、部分由来のもので、それはＯＰ−２を含む、他のモルフォジェン配列と殆ど、若しくは全く相同性を共有しない。選ばれたフラグメントは、それから、公知の標準的な手段で標識化される。これらのモルフォジェン特異的プローブ、これは合成的に作ってもよいし、クローン配列から得ることができるが、を用いて、モルフォジェン転写物は当業者に公知の標準的な方法で啼乳動物組織で同定することができる。適切なハイブリダイゼーションの詳細な説明は、オズケイナックらの、（１９９１）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１７９：１１６−１２３、及びオズケイナックらの、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６７：２５２２０−２５２２７に開示されている。要約すると、全ＲＮＡは各種の組織（例えば、マウス胎児、発達中及び成人の肝臓、腎臓、精巣、心臓、脳、胸腺、胃）より、コムスチャスキーらの、（（１９８７）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１６２：１５６−１５９）等の標準的な方法で抽出する。ポリ（Ａ）＋ＲＮＡはオリゴ（ｄＴ）− セルロースクロマトグラフィー（例えば、タイプ７、ファルマシアＬＫＢバイオテクノロジー、Ｉｎｃ．）を用いて調製する。各組織からのポリ（Ａ）＋ＲＮＡ（一般に、１５μｇ）は１％アガロース／ホルムアミドゲルで分画され、ナイトラン膜（シュライシャーシュエル）上に転写する。転写に続き、膜を８０ ℃で焼き、ＲＮＡを紫外光で架橋する（一般的には，１ｍＷ／ｃｍ²で３０秒）。ハイブリダイゼーションに先立って、適切なプローブを加熱変性する。ハイブリダイゼーションは約１回／分、約１５時閤、３７℃で回転瓶装置で回転するルーサイトシリンダーの中で、４０％ホルムアミド、５×ＳＳＰＥ，０．１％ＳＤＳハイブリダイゼーションミックスを用いて行われる。ＯＰ−３特異的な０．５ｋｂのプローブはＯＰ−３ｃＤＮＡのＳｔｕＩ−ＢｇｌIIフラグメントから作られる。フラグメントは、３’端のヌクレオチド１３１０−１６７４からの未翻訳配列、及びさらに１４０塩基を含有する。フラグメントは、標準的な技術を用いて標識化し、前述したようにハイブリダイゼーションが行われた。現在までに、ＯＰ−３は、ＯＰ−２のように、初期の胎児組織に発現されるようである。特に、マウス胎児のノーザンブロットは２．９ｋｂに強いバンド、及び２．３ｋｂの弱いバンドで示されるように、８日目胎児に、豊富なＯＰ−３発現が示される。実施例９．内因性モルフォジェンレベルを変化させる候補化合物のスクリーニングアッセイ内因性ＯＰ−３モルフォジェンのレベルに影響するように投与することができる候補化合物（群）を以下のスクリーニングアッセイを用いて発見でき、そこでは、測定可能なモルフォジェンを産生するタイプの細胞により産生するモルフォジェンのレベルが、この化合物の細胞に対する効果を評価するために、化合物と一緒に培養細胞をインキュベートし、及びインキュベートすることなく測定する。これは、蛋白質若しくはＲＮＡレベルのいずれでもよく、モルフォジェンの検出により、できる。さらに詳細については、国際出願ＵＳ９２／０７３５９（ＷＯ９３／０５１７２）でも開示されている。９．１培養細胞の成長腎臓、副腎、膀胱、脳、若しくは他の器官の細胞培養は文献に広く開示されているように調製することができる。例えば、腎臓は新生、若い、若しくは成熟齧歯類（マウス、若しくはラット）から体外移植することができ、全体、若しくは薄切（１−４ｍｍ）組織として器官培養に用いることができる。腎臓、副腎、膀胱、脳、乳腺、若しくは他の組織由来の一次培養組織や樹立細胞株は従来の細胞培養技術に従って、多穴プレート（６穴若しくは２４穴）で樹立することができ、期間中（１−７日）血清の存在下若しくは不存在下で培養できる。細胞は、例えば、血清含有ダルベッコ修飾イーグル培地（Ｇｉｂｃｏ，ＬｏｎｇＩｓｌａｎｄ、ＮＹ）で、若しくは望まれる場合は血清フリーの培地で、若しくは特定の培地（例えば、インスリン、トランスフェリン、グルコース、アルブミン若しくは成長因子類）で培養できる。モルフォジェン産生のレベルを試験するサンプルは培養上清、細胞溶解物等を含み、一定期間毎、採取され、モルフォジェン産生をイムノブロット分析（サンブルックら、編、１９８９、分子クローニング、コールドスプリングハーバプレス、コールドスプリングハーバー、ニューヨーク）で評価し、あるいは細胞培養自身の一部を一定期間毎採取し、ＲＮＡ分析用にポリＡ＋ＲＮＡを調製するのに使用できる。いくつかの培養ではｄｅｎｏｖｏモルフォジェン合成を追跡するのに従来技術に従って、³⁵Ｓ−メチオニン／³⁵Ｓ−システインの混合物で６−２４時間で標識化した。そして、モルフォジェン蛋白質合成を従来通りの免疫沈降法で評価した。９．２モルフォジェン蛋白質レベルの測定細胞型により、モルフォジェン蛋白質、例えばＯＰ−３、の産生を定量するのに、その蛋白質に特異的なポリクロナル若しくはモノクロナル抗体を用いて、モルフォジェンを検出するのにイムノアッセイを行うことができる。例えば、ＯＰ −３は、以下のように、ＥＬＩＳＡ法でＯＰ−３に特異的なポリクロナル抗体を用いて検出できる。１μｇ／１００μｌのアフィニティー精製したＯＰ−３に特異的なポリクロナルウサギＩｇＧを９６穴プレートの各ウエルに加え、３７Ｃで１時間インキュベートする。各ウエルを４回、ｐＨ８．２、ツイーン２０を含む０．１５ＭＮＡＣｌ、０．１６７Ｍほう酸ナトリウム緩衝液（ＢＳＢ）で洗浄する。非特異的結合を最小限におさえるため、ウエルをＢＳＢ中１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ）で完全に満たしてブロックし３７℃で１時間インキュベートする。ウエルはその後４回、０．１％のツイーン２０含むＢＳＢで洗浄する。細胞培養上清の試験試料の各々の適当に希釈した１００μｌのアリコートを各ウエルにｎ＝３で加え、３７℃で３０分インキュベートした。インキュベートした後、１００μｌのビオチン化ウサギ抗ＯＰ−３血清（ストック溶液は約１ｍｇ／ｍｌ、使用前に１％ＢＳＡを含むＢＳＢに１：４００で希釈する）を各ウエルに加え３７℃３０分インキュベートする。ウエルをその後４回、０．１％のツイーン２０含むＢＳＢで洗浄する。１００μｌのストレパビディン−アルカリ（サザンバイオテクノロジー協会，Ｉｎｃ．バーミンガム、アラバマ、使用前に０．１％のツイーン２０含むＢＳＢで１：２０００に希釈する）を各ウエルに加え、３７℃３０分インキュベートする。プレートを４回ｐＨ７．２、０．５Ｍトリス緩衝食塩水で洗浄する。５０μｌの基質（ＥＬＩＳＡ増幅システムキット、ライフテクノロジーズ、Ｉｎｃ．、ベセスダ、メリーランド州）を１５分間、室温でインキュベートしてある各ウエルに加えた。その後、５０μｌの増幅剤（同じ増幅システムキットから）を加え、さらに１５分間、室温でインキュベートした。反応は５０ μｌの０．３Ｍ硫酸を加えて停止させた。各ウエルの溶液の４９０ｎｍのＯＤ値を記録する。培養培地中のＯＰ−３のレベルを定量するために、テストサンプルと平行してＯＰ−３標準曲線を作成した。ポリクロナル抗体は以下のように作られる。各ウサギに、５００μｌの完全フロィンドァジュバントと混合した０．１％ＳＤＳ中、１００μｇ／５００μｌの組換技術で産生したＯＰ−３蛋白質、若しくは蛋白質フラグメントで一次免疫した。抗原は動物の背中や脇腹の多数の箇所に皮下注射した。不完全フロインドアジュバントをもちいて同様な方法で１カ月後、ウサギにブースター投与した。検査用の血は７日後に耳静脈より採血する。２回のブーストと検査の採血は、ＯＰ −３に対する抗体がＥＬＩＳＡ法で血清に検出できるまで、一カ月間隔でおこなった。その後、ウサギは１カ月毎に１００μｇの抗原でブーストし、ブースト後７日と１０日にと採血（１回１５ｍｌ）を行う。特定のモルフォジェンに特異的なモノクロナル抗体は以下のように調製出来る。マウスにはＯＰ−３蛋白質、若しくはＯＰ−３に特異的な蛋白質フラグメントを２回注射する。この蛋白質は、好ましくは、組換技術により産生されたものである。最初の注射には完全フロインドアジュバント中に１００μｇのＯＰ−３を含有し皮下投与される。２回目の注射は不完全アジュバントに５０μｇのＯＰ− ３を含有し腹腔内に投与する。マウスはその後、８カ月間にわたり、いろいろな時間に４回の腹腔内注射で全部で２３０μｇのＯＰ−３を投与する。マウスには細胞融合の１週間前にＯＰ−３（例えば、１００μｇ）で、及びさらに、適切な架橋剤で牛血清アルブミンと結合したＯＰ−３特異的ペプチド（例えば、成熟蛋白質のＮ末端に相当する）を腹腔内にブーストする。ブーストは融合前５日間（ＩＰ）、４日間（ＩＰ）、３日間（ＩＰ）、１日（ＩＰ）繰り返した。マウス脾細胞を市販ミエローマ細胞とＰＥＧ１５００（ベーリンガーマンハイム）を使って１：１の比率で融合し、融合細胞をプレートにのせ、抗原としてＯＰ−３を用いてＯＰ−３に特異的な抗体をスクリーニングする。細胞融合とモノクロナルのスクリーニングの工程は従来技術で広く知られた標準的な本によく開示された標準的な操作で行うことが出来る。他の具体例本発明は、その精神や本質的特徴から離れることなく、他の明示的な形で具体化できる。従って、本具体例は、全ての点に関して、説明のためのものであり、限定するものではないと理解されるべきであり、本発明の範囲は、前述の説明によるよりも、むしろ、添付されている請求項により示されるもので、それ故、請求項に等価の意味、及び範囲内での全ての変更はここに包含されるものである。配列表（１）全般情報：（i）出願人：（Ａ）名称：クリエイティブバイオモレキュルズ，インコーポレィテッド（Ｂ）街名：45 サウスストリート（Ｃ）市名：ホプキントン（Ｄ）州名：マサチューセッツ（Ｅ）国名：アメリカ合衆国（Ｆ）郵便番号：01748 （Ｇ）電話：1-508-435-9001 （Ｈ）テレファクス：1-508-435-0454 （Ｉ）テレックス：（ii）発明の名称：ＯＰ−３誘導形態形成（iii）配列数：１３（iv）通信先住所：（Ａ）あて先：クリエイティブバイオモレキュルズ，インコーポレィテッド（Ｂ）街名：45 サウスストリート（Ｃ）市名：ホプキントン（Ｄ）州名：マサチューセッツ（Ｅ）国名：アメリカ合衆国（Ｆ）郵便番号：01748 （v）コンピューター読みとり型：（Ａ）媒体：フロッピーディスク（Ｂ）コンピューター：IBM PC兼用式（Ｃ）操作システム：PC-DOS/MS-DOS （Ｄ）ソフトウエア：Patentln Release#1.0，バージョン#1.25 （vi）本出願データ：（Ａ）出願番号：（Ｂ）出願日：（Ｃ）分類：（vii）先願出願データ：（Ａ）出願番号：米国 07/667,274 （Ｂ）出願日：1991年3月11日（vii）先願出願データ：（Ａ）出願番号：米国 07/752,764 （Ｂ）出願日：1991年8月30日（vii）先願出願データ：（Ａ）出願番号：米国 07/753,059 （Ｂ）出願日：1991年8月30日（vii）先願出願データ：（Ａ）出願番号：米国 07/752,857 （Ｂ）出願日：1991年8月30日（vii）先願出願データ：（Ａ）出願番号：米国 07/923,780 （Ｂ）出願日：1992年7月31日（vii）先願出願データ：（Ａ）出願番号：米国 07/922,813 （Ｂ）出願日：1992年７月31日（viii）代理人情報：（Ａ）名前：ピッチャー，エドムンドアール．弁護士（Ｂ）登録番号：27,829 （Ｃ）名簿／照会番号：CRP-076PC （ix）テレ通信情報：（Ａ）電話：（508）435-9001 （２）配列表番号１関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：１６７４塩基対（Ｂ）類型：核酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（ix）特記：（Ａ）名前／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：６９．．１２６８（Ｄ）他の情報：／脚註＝”ｍＯＰ３−ＰＰ” （xi）配列図：配列表番号１（２）配列表番号２関連情報：（ｉ）配列特徴：（Ａ）鎖長：３９９アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（xi）配列図：配列表番号２（２）配列表番号３関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：１８２２塩基対（Ｂ）類型：核酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：ｃＤＮＡ（iii）仮説：無（iv）アンチセンス：無（vi）起源：（Ａ）生物：ホモサピエンス（Ｆ）組織：海馬（ix）特記：（Ａ）名前／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：４９．．１３４１（Ｃ）同定方法：実験的（Ｄ）他の情報：／機能＝”骨形成蛋白質” ／生成物：”ｈＯＰ１−ＰＰ” ／脚註＝”ｈ０Ｐ１ｃＤＮＡ” （xi）配列図：配列表番号３：（２）配列表番号４関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：４３１アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（xi）配列図：配列表番号４（２）配列表番号５関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：１８７３塩基対（Ｂ）類型：核酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：ｃＤＮＡ（iii）仮説：無（iv）アンチセンス：無（vi）起源：（Ａ）生物：届歯類（Ｆ）組織：胎児（ix）特記：（Ａ）名前／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：１０４．．１３９３（Ｄ）他の情報：／機能＝”骨形成蛋白質” ／生成物：”ＭＯＰ１−ＰＰ” ／脚註＝”ＭＯＰ１（ｃＤＮＡ）” （xi）配列図：配列表番号５：（２）配列表番号６関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：４３０アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（xi）配列図：配列表番号６（２）配列表番号７関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：１７２３塩基対（Ｂ）類型：核酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：ｃＤＮＡ（vi）起源：（Ａ）生物：ホモサピエンス（Ｆ）組織：海馬（ix）特記：（Ａ）名前／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：４９０．．１６９６（Ｄ）他の情報：／機能＝”骨形成蛋白質” ／生成物：”ｈＯＰ２−ＰＰ” ／脚註＝”ｈ０Ｐ（ｃＤＮＡ）” （xi）配列図：配列表番号７：（２）配列表番号８関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：４０２アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（xi）配列図：配列表番号８：（２）配列表番号９関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：１９２６塩基対（Ｂ）類型：核酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（vi）起源：（Ａ）生物：齧歯類（Ｆ）組織：胎児（ix）特記：（Ａ）名前／キー：ＣＤＳ（Ｂ）位置：９３．．１２９８（Ｄ）他の情報：／機能＝”骨形成蛋白質” ／生成物：”ｍＯＰ２−ＰＰ” ／脚註＝”ｍＯＰ２ｃＤＮＡ（xi）配列図：配列表番号９：（２）配列表番号１０関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：３９９アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（xi）配列図：配列表番号１０（２）配列表番号１１関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：６４１８塩基対（Ｂ）類型：核酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：ＤＮＡ（染色体）（ix）特徴：（Ａ）名前／キー：混合型（Ｂ）位置：１．．６３６１（Ｄ）他の情報：／脚註＝”ＨＯＰ−２染色体配列” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：１．．８３７（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン１” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：混合型（Ｂ）位置：８８４．．８８５（Ｄ）他の情報：／脚註＝”この配列の位置８８４と８８５の間にギャッブが生じる” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：１０８８．．１２７７（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン２” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：１３５０．．１８１４（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン３” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：混合型（Ｂ）位置：１８３４．．１８３５（Ｄ）他の情報：／脚註＝”この配列位置１８３４と１８３５の間にギャッブが生じる” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：１８８３．．２０７７（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン４” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：２９０２．．２９８１（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン５” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：３５０７．．３６１７（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン６” （ix）特徴：（Ａ）名前／キー：エクソン（Ｂ）位置：６１１６．．６３６１（Ｄ）他の情報：／脚註＝”エクソン７” （xi）配列図：配列表番号１１：（２）配列表番号１２関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：９７アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（ix）特記：（Ａ）名前／キー：蛋白質（Ｂ）位置：１．．９７（Ｄ）他の情報：／標識＝一般配列７脚註＝”各Ｘａａが明細害に特定されるように一つ以上の特定アミノ酸のグルーブから独立して選択される” （xi）配列図：配列表番号１２（２）配列表番号１３関連情報：（i）配列特徴：（Ａ）鎖長：１０２アミノ酸（Ｂ）類型：アミノ酸（Ｃ）構成：単一（Ｄ）トポロジー：直鎖（ii）分子型：蛋白質（ix）特記：（Ａ）名前／キー：蛋白質（Ｂ）位置：１．．１０２（Ｄ）他の情報：／標識＝一般配列８脚註＝”各Ｘａａが明細書に特定されるように一つ以上の特定アミノ酸のグルーブから独立して選択される” （xi）配列図：配列表番号１３

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年１１月９日【補正内容】請求の範囲１．それらの対立形質、及び種のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の少なくとも残基３０３から３９９で特定されるアミノ酸からなる実質的に純粋な蛋白質。２．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、及び種のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の少なくとも２９８から３９９で特定される請求項１記載の蛋白質。３．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、及び種のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の少なくとも２６４から３９９で特定される請求項２記載の蛋白質。４．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、及び種のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の少なくとも２６１から３９９で特定される請求項３記載の蛋白質。５．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、及び種のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の少なくとも１８から３９９で特定される請求項４記載の蛋自質。６．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、及び種のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の少なくとも１から３９９で特定される請求項５記載の蛋白質。７．それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号１の塩基６９−１２６５で特定されるＤＮＡ配列からなる核酸によりコードされる蛋白質の抗原決定基に結合する実質的に純粋な抗体。８．それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号１の塩基１−１６７４で特定されるＤＮＡ配列の一部あるいは全部からなる実質的に純粋な核酸。９．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該核酸が厳密な条件下で配列表番号１の１２０から８４８で特定されるＤＮＡの一部、若しくは全部とハイブリダイズするＤＮＡ配列からなる形態形成活性を有する蛋白質をコードする実質的に純粋な核酸。１０．それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号１の塩基１２０から８４８で特定されるＤＮＡの一部、若しくは全部からなる実質的に純粋な核酸。１１．それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２の少なくともアミノ酸残基３０３から３９９までで特定される形態形成蛋白質をコードする実質的に純粋な核酸。１２．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該蛋白質が配列表番号２の少なくともアミノ酸残基２９８から３９９までで特定される請求項１１記載の核酸。１３．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該蛋白質が配列表番号２の少なくともアミノ酸残基２６４から３９９までで特定される請求項１２記載の核酸。１４．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該蛋自質が配列表番号２の少なくとも２６１から３９９までで特定される請求項１３記載の核酸。１５．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該蛋白質が配列表番号２の少なくとも１８か３９９までで特定される請求項１４記載の核酸。１６．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該蛋白質が配列表番号２の少なくともアミノ酸残基１から３９９までで特定される請求項１５記載の核酸。１７．それらの対立形質、及び種の変種も含む、当該配列が形態形成蛋白質をコードするのに十分である、配列表番号１の塩基６９−１２６５で特定される核酸配列の少なくとも一部からなるベクター。１８．請求項１７記載のベクターで形質転換された細胞。１９．それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２の少なくとも残基３０３か３９９までで特定される蛋自質をコードする核酸を発現させるのに適応できる細胞。２０．それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号１の核酸配列の少なくとも一部をコードする実質的に純粋な形態形成蛋白質。２１．哺乳動物において、前駆体細胞群を増加させる以下のものからなる組成物：前駆体細胞が、それらの対立形質、若しくは種の変種も含む、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメントに、当該前駆体細胞が増殖されるよう剌激されるのに十分な濃度で、十分な時間、暴露され、ｅｘｖｉｖｏで剌激される。２２．哺乳動物において、組織成長を誘導する以下のものからなる組成物：前駆体細胞が、ｉｎｖｉｖｏで組織部位で使用されたとき、それらの対立形質、若しくは種の変種も含む、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメントに、当該前駆体細胞が増殖されるよう刺激されるのに十分な濃度で、十分な時間、暴露され、ｅｘｖｉｖｏで刺激され、当該部位で組織特異的分化及び増殖が可能である。２３．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２のアミノ酸残基３０３がら３９９からなる請求項２１、または２２記載の組成物。２４．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２のアミノ酸残基２９８から３９９からなる請求項２３記載の組成物。２５．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６４から３９９からなる請求項２４記載の組成物。２６．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６１から３９９からなる請求項２５記載の組成物。２７．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２のアミノ酸残基１８から３９９からなる請求項２６記載の組成物。２８．当該形態形成活性を有ずるフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種も含む、配列表番号２のアミノ酸残基１から３９９からなる請求項２７記載の組成物。２９．当該前駆体細胞が造血多能性幹細胞である請求項２１，．または２２記載の組成物。３０．当該前駆体細胞が間葉系起源である請求項２１、または２２記載の組成物。３１．哺乳動物において、組織部位で置換組織の形成を誘導する以下のものからなる組成物：当該組織に特異的で、形態形成的に許容しうる組織特異的環境を供給しうる成分を有する生体内適合性の無細胞基質；及び、当該基質に吸収ざれ、かつ、組織置換の要求されている組織特異部位に供給されたときに、当該部位で組織形態形性の進展的カスケードを誘導するのに、それらの対立形質、種の変種も含む、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント。３２．哺乳動物において、組織部位で置換組織の形成を誘導する以下のものからなる組成物：形態形成的に許容しうる組織特異的環境を供給しうる生体内適合性の無細胞基質；及び、当該基質に吸収され、かつ、組織置換の要求されている組織特異部位に供給されたときに、当該部位で組織形態形成の進展的カスケードを誘導するのに、それらの対立形質、種の変種も含む、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント。３３．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基３０３から３９９からなる請求項３１、または３２記載の組成物。３４．当該形態形成活性を有するフラグメントか、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２９８から３９９からなる請求項３３記載の組成物。３５．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６４から３９９からなる請求項３４記載の組成物。３６．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６１から３９９からなる請求項３５記載の組成物。３７．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基１８から３９９からなる請求項３６記載の組成物。３８．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基１から３９９からなる請求項３２記載の組成物。３９．当該基質が生体内分解性である請求項３１、または３２記載の組成物。４０．当該基質が器官特異組織由来のものである請求項３１、または３２記載の組成物。４１．当該基質がコラーゲン、及びグリコサミノグリカン及びプロテオグリカンからなる群より選択される細胞接着因子からなる請求項３１、または３２記載の組成物。４２．当該基質が当該哺乳動物の生体からの遊走性前駆体細胞の接着、分化及び増殖を許容する構造を特定する請求項３１、または３２記載の組成物。４３．前駆体細胞群を増加させる以下のステップからなる方法：前駆体細胞を、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント、若しくは対立形質の変種、若しくは種の変種に、当該前駆体細胞が増殖されるよう刺激されるのに十分な濃度で、十分な時間、接触させる。４４．さらに以下のステップからなる請求項４３記載の方法：当該剌激された前駆体細胞を、哺乳動物に、当該哺乳動物の前駆休細胞群を増加させるために供給する。４５．以下のステップからなる哺乳動物における組織成長を誘導する方法：前駆体細胞を、哺乳動物で組織特異部位に供給ざれたとき、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント、若しくは対立形質の変種、若しくは種の変種に、当該前駆体細胞が当該部位で組織特異的分化及び増殖が可能であるように十分な濃度で、十分な時間、接触させる。４６．当該前駆体細胞が間葉系起源のものである請求項４３、または４５記載の方法。４７．以下のステップからなる哺乳動物において分化した細胞の表現型発現を維持する方法：当該分化した細胞を、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント、若しくは対立形質の変種、若しくは種の変種と当該細胞がそれらの表現型が発現されるよう剌激されるのに十分な濃度で、十分な時間、接触させる。４８．当該分化した細胞が老化、または休止細胞である請求項４７記載の方法。４９．哺乳動物において、組織部位で組織成長を誘導する以下のものからなる方法：当該部位に、当該形態形成活性を有するフラグメントが形態形成的に許容しうる組織特異的部位に供給されたとき、当該部位で組織形態形成の進展的カスケードを誘導することができるように、十分な濃度で、十分な時間、形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント、若しくは対立形質の変種、若しくは種の変種を供給する。５０．当該組織が肝組織で、当該組織部位が肝臓である請求項４９記載の方法。５１．当該組織が軟骨、若しくは骨組織で当該組織部位が多孔骨である請求項４９記載の方法。５２．当該形態形成活性を有し、配列表番号２で特徴づけられるＯＰ−３フラグメント、若しくはそれらの対立形質の変種、若しくは種の変種が、生体内適合性、無細胞基質に結合して当該部位に供給される請求項４９記載の方法。５３．当該基質が当該組織に特異な成分を有している請求項５２記載の方法。５４．当該基質が生体内分解性である請求項５２記載の方法。５５．当該基質が器官特異組織由来である請求項５２記載の方法。５６．当該基質が当該組織に特異なコラーゲン及び細胞接着因子からなる請求項５２記載の方法。５７．当該基質が当該哺乳動物の生体からの遊走性前駆細胞の接着、分化及び増殖を許容する構造を特定する請求項５２記載の方法。５８．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基３０３から３９９までからなる請求項４３、４５、４７、または４９記載の方法。５９．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２９８から３９９までからなる請求項５８記載の方法。６０．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６４から３９９までからなる請求項５９記載の方法。６１．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６１から３９９までからなる請求項６０記載の方法。６２．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基１８から３９９までからなる請求項６１記載の方法。６３．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基１から３９９までからなる請求項６２記載の方法。６４．形態形成活性を有する蛋自質を生産する以下のステップからなる方法：細胞を配列表番号２のアミノ酸残基３０３か３０９までからなる形態形成蛋白質をコードする核酸配列に形質感染し；当該細胞を適切な培養培地で細胞培養し；当該核酸から当該形成蛋白質を発現させ；そして、当該培養培地から当該蛋白質を単離し精製する。６５．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２９８から３９９までからなる請求項６４記載の方法。６６．当該形態形成蛋自質が、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６４から３９９までからなる請求項６５記載の方法。６７．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基２６１から３９９までからなる請求項６６記載の方法。６８．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基１８から３９９までからなる請求項６７記載の方法。６９．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、及び種の変種を含む、配列表番号２のアミノ酸残基１から３９９までからなる請求項６８記載の方法。７０．当該アミノ酸配列変種が配列表番号２の３１５位のセリン、若しくは３３８位のシステインにアミノ酸置換を有する請求項１、２、または３記載の蛋白質。７１．当該アミノ酸配列変種が配列表番号２の３１５位のセリンの位置にトリプトファン残基を有する請求項７０記載の蛋白質。。７２．配列表番号２の３３８位の当該システイン残基がチロシン、ヒスチジン、イソロイシン及びセリンからなる群から選択されるアミノ酸で置換される請求項７０記載の蛋白質。７３．請求項１、２、若しくは３記載のアミノ酸配列からなるキメラ型モルフォジェン。７４．当該モルフォジェンアミ．ノ酸配列変種が配列表番号２の３１５位のセリン若しくは３３８位のシステインにアミノ酸置換を有する請求項２２、２３、３１、または３２記載の組成物。７５．当該モルフォジェンアミノ酸配列変種が配列表番号２の３１５位のセリン若しくは３３８位のシステインにアミノ酸置換を有する請求項４３、４５、４７、または４９記載の方法。７６．当該蛋白質がモルフォジェンファミリーの一員、若しくはそれらの対立形質の変種、若しくは種の変種のプロ領域からなるペブチドと複合体を形成する２量体蛋自質種からなり、当該プロ領域がモルフォジェン蛋白質の分泌型から成熟型にプロセシングされる前にモルフォジェン蛋白質の成熟領域の配列のＮ末に存在するアミノ酸配列からなる請求項１、２、３、またぱ４記載の蛋白質。７７．当該２量体蛋白質種が当該ぺプチドと非共有結合で複合体を形成する請求項７６記載の蛋白質。７８．当該２量体蛋白質種が２個の当該蛋白質と複合体を形成する請求項７６記載の蛋白質。７９．当該ペプチドが当該プロ領域を特定する配列の少なくとも１８のアミノ酸からなる請求項７６記載の蛋白質。８０．当該ペプチドが当該ブロ領域の全長からなる請求項７９記載の蛋白質。８１．当該ペプチドが配列表番号３のヌクレオチド１３６−１９２、若しくは配列表番号７のヌクレオチド１５７−２１１で特定されるＤＮＡと厳密な条件下ハイブリダイズする核酸からなる請求項７６記載の蛋白質。８２．当該ペプチドが配列表番号２のプロ領域の少なくとも最初の１８のアミノ酸からなり、当該プロ領域が配列表番号２の残基１８から２６０で特徴づけられる請求項７６記載の蛋白質。８３．当該複合体が塩基性アミノ酸、界面活性剤、若しくは担体蛋白質に暴露することでさらに安定化される請求項７６記載の蛋白質。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｋ 1/02 8318−4Ｈ 14/475 8318−4ＨＣ１２Ｎ 5/10 15/09 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 9282−4Ｂ // Ａ６１Ｋ 39/395 Ｄ 9284−4Ｃ (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） 9455−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＳ (Ｃ１２Ｎ 5/00 ＢＣ１２Ｒ 1:91） (31)優先権主張番号０４０，５１０ (32)優先日 1993年３月31日 (33)優先権主張国米国（ＵＳ） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＫ，ＬＵ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ (72)発明者オズカイナック，エンジンアメリカ合衆国 01757 マサチューセッツ，ミルフォード，パーデュードライブ 44 (72)発明者クベラサムパス，サンゲーベルアメリカ合衆国 02053 マサチューセッツ，メドウェイ，スプリングストリートシックス (72)発明者ルーガー，ディヴッドシー. アメリカ合衆国 01748 マサチューセッツ，ホプキントン，ダウネイストリート 19 (72)発明者パング，ロイエッチ．エル. アメリカ合衆国 023750 ニューハンプシャー，エトナ，パートリッジロード 15 (72)発明者コーエン，チャールズエム. アメリカ合衆国 02193 マサチューセッツ，ウェストン，ハリントンレインワン

Claims

【特許請求の範囲】１．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の残基３０３から３９９で特定されるアミノ酸からなる実質的に純粋な蛋白質。２．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の２９８から３９９で特定される請求項１記載の蛋白質。３．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の２６４から３９９で特定される請求項２記載の蛋白質。４．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の２６１から３９９で特定される請求項３記載の蛋白質。５．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の１８から３９９で特定される請求項４記載の蛋白質。６．当該アミノ酸配列が、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の１から３９９で特定される請求項５記載の蛋白質。７．配列表番号１の塩基６９−１２６５で特定されるＤＮＡ配列からなる核酸によりコードされる蛋白質の抗原決定基に結合する実質的に純粋な抗体。８．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列の変種も含む、配列表番号１の塩基１−１６７４で特定されるＤＮＡ配列の一部、若しくは全部からなる実質的に純粋な核酸。９．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該核酸が厳密な条件下で配列表番号１の塩基１２０から８４８で特定されるＤＮＡの一部、若しくは全部とハイブリダイズするＤＮＡ配列からなる形態形成活性を有する蛋白質をコードする実質的に純粋な核酸。１０．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１の塩基１２０から８４８で特定されるＤＮＡの一部、若しくは全部からなる実質的に純粋な核酸。１１．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該核酸が配列表番号１の塩基９７５から１２６５で特定されるＤＮＡ配列からなる形態形成蛋白質をコードする実質的に純粋な核酸。１２．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該ＤＮＡ配列が配列表番号１の塩基９６０から１２６５で特定される請求項１１記載の核酸。１３．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該ＤＮＡ配列が配列表番号１の塩基８５８から１２６５で特定される請求項１２記載の核酸。１４．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該ＤＮＡ配列が配列表番号１の塩基８４９から１２６５で特定される請求項１３記載の核酸。１５．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該ＤＮＡ配列が配列表番号１の塩基１２０から１２６５で特定される請求項１４記載の核酸。１６．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該ＤＮＡ配列が配列表番号１の塩基６９から１２６５で特定される請求項１５記載の核酸。１７．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、当該配列が形態形成蛋白質をコードするのに十分である、配列表番号１の塩基６９−１２６５で特定される核酸配列の少なくとも一部からなるベクター。１８．請求項１７記載のベクターで形質転換された細胞。１９．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１の塩基９７５−１２６５で特定される配列からなる核酸を発現させるのに適応できる細胞。２０．それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１の核酸配列の少なくとも一部をコードする実質的に純粋な形態形成蛋白質。２１．哺乳動物において、前駆体細胞群を増加させる以下のものからなる組成物：前駆体細胞が、それらの対立形質、若しくは種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントに、当該前駆体細胞が増殖されるよう刺激されるのに十分な濃度で、十分な時間、暴露され、ｅｘｖｉｖｏで剌激される。２２．哺乳動物において、組織成長を誘導する以下のものからなる組成物：前駆体細胞が、ｉｎｖｉｖｏ組織部位内に置かれたとき、組織特異的分化及び増殖できるように十分な濃度で、十分な時間、それらの対立形質、若しくは種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントに、当該前駆体細胞が暴露されることにより、剌激される。２３．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１のアミノ酸残基３０３から３９９からなる請求項２１、または２２記載の組成物。２４．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１のアミノ酸残基２９８から３９９からなる請求項２３記載の組成物。２５．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６４から３９９からなる請求項２４記載の組成物。２６．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６１から３９９からなる請求項２５記載の組成物。２７．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１のアミノ酸残基１８から３９９からなる請求項２６記載の組成物。２８．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種も含む、配列表番号１のアミノ酸残基１から３９９からなる請求項２７記載の組成物。２９．当該前駆体細胞が造血多能性幹細胞である請求項２１、または２２記載の組成物。３０．当該前駆体細胞が間葉系起源である請求項２１、または２２記載の組成物。３１．哺乳動物において、組織部位で置換組織の形成を誘導する以下のものからなる組成物：当該組織に特異的で、形態形成的に許容しうる組織特異的環境を供給しうる成分を有する生体内適合性の無細胞基質；及び、当該基質に吸収され、かつ、組織置換の必要な組織特異部位に供給されたときに、当該部位で組織形態形性の進展的カスケードを誘導するのに、それらの対立形質、種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメント。３２．哺乳動物において、組織部位で置換組織の形成を誘導する以下のものからなる組成物：形態形成的に許容しうる組織特異的環境を供給しうる成分を有する生体内適合性の無細胞基質；及び、当該基質に吸収され、かつ、組織置換の必要な組織特異部位に供給されたときに、当該部位で組織形態形性の進展的カスケードを誘導するのに、それらの対立形質、種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメント。３３．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基３０３から３９９からなる請求項３１、または３２記載の組成物。３４．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２９８から３９９からなる請求項３３記載の組成物。３５．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６４から３９９からなる請求項３４記載の組成物。３６．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６１から３９９からなる請求項３５記載の組成物。３７．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基１８から３９９からなる請求項３６記載の組成物。３８．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基１から３９９からなる請求項３２記載の組成物。３９．当該基質が生体内分解性である請求項３１、または３２記載の組成物。４０．当該基質が器官特異組織由来のものである請求項３１、または３２記載の組成物。４１．当該基質がコラーゲン、及びグリコサミノグリカン及びプロテオグリカンからなる群より選択される細胞接着因子からなる請求項３１、または３２記載の組成物。４２．当該基質が当該哺乳動物の生体からの遊走性前駆体細胞の接着、分化及び増殖を許容する構造を特定する請求項３１、または３２記載の組成物。４３．前駆体細胞群を増加させる以下のステップからなる方法：前駆体細胞を、それらの対立形質、若しくは種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントに、当該前駆体細胞が増殖するよう剌激されるのに十分な濃度で、十分な時間、接触させる。４４．さらに以下のステップからなる請求項４３記載の方法：当該剌激された前駆体細胞を、哺乳動物に、当該哺乳動物の前駆体細胞群を増加させるために供給する。４５．以下のステップからなる哺乳動物における組織成長を誘導する方法：前駆体細胞を、哺乳動物の組織特異部位に供給されたとき、それらの対立形質、若しくは種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントに、当該前駆体細胞が当該部位で組織特異的分化及び増殖が可能であるように十分な濃度で、十分な時間、接触させる。４６．当該前駆体細胞が間葉系起源のものである請求項４３、または４５記載の方法。４７．以下のステップからなる哺乳動物において分化した細胞の表現型発現を維持する方法：当該分化した細胞を、それらの対立形質、種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントと当該細胞がそれらの表現型が発現されるよう刺激されるのに十分な濃度で、十分な時間、接触させる。４８．当該分化した細胞が老化、または休止細胞である請求項４７記載の方法。４９．哺乳動物において、組織部位で組織成長を誘導する以下のものからなる方法：当該部位に、当該形態形成活性を有するフラグメントが形態形成的に許容しうる組織特異的部位に供給されたとき、当該部位で組織形態形成の進展的カスケードを誘導することができるように、十分な濃度で、十分な時間、それらの対立形質、種の変種も含む、形態形成活性を有するＯＰ−３フラグメントを供給する。５０．当該組織が肝組織で、当該組織部位が肝臓である請求項４９記載の方法。５１．当該組織が軟骨、若しくは骨組織で当該組織部位が多孔骨である請求項４９記載の方法。５２．当該ＯＰ−３、若しくはそれらの対立形質若しくは種の変種が、生体内適合性、無細胞基質に結合して当該部位に供給される請求項４９記載の方法。５３．当該基質が当該組織に特異な成分を有している請求項５２記載の方法。５４．当該基質が生体内分解性である請求項５２記載の方法。５５．当該基質が器官特異組織由来である請求項５２記載の方法。５６．当該基質が当該組織に特異なコラーゲン及び細胞接着因子からなる請求項５２記載の方法。５７．当該基質が当該哺乳動物の生体からの遊走性細胞の接着、分化及び増殖を許容する構造を特定する請求項５２記載の方法。５８．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基３０３から３９９までからなる請求項４３、４５、４７、または４９記載の方法。５９．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２９８から３９９までからなる請求項５８記載の方法。６０．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６４から３９９までからなる請求項５９記載の方法。６１．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６１から３９９までからなる請求項６０記載の方法。６２．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基１８から３９９までからなる請求項６１記載の方法。６３．当該形態形成活性を有するフラグメントが、それらの対立形質、種、及び他のアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基１から３９９までからなる請求項６２記載の方法。６４．形態形成活性を有する蛋白質を生産する以下のステップからなる方法：細胞を配列表番号１のアミノ酸残基３０３か３０９までからなる形態形成蛋白質をコードする核酸配列に形質感染し；当該細胞を適切な培養培地で細胞培養し；当該核酸から当該形成蛋白質を発現させ；そして、当該培養培地から当該蛋白質を単離し精製する。６５．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、種、及びアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２９８から３９９までからなる請求項６４記載の方法。６６．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、種、及びアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６４から３９９までからなる請求項６５記載の方法。６７．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、種、及びアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基２６１から３９９までからなる請求項６６記載の方法。６８．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、種、及びアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基１８から３９９までからなる請求項６７記載の方法。６９．当該形態形成蛋白質が、それらの対立形質、種、及びアミノ酸配列変種を含む、配列表番号１のアミノ酸残基１から３９９までからなる請求項６８記截の方法。７０．当該アミノ酸配列変種が配列表番号１の３１５位のセリン、若しくは３３８位のシスティンにアミノ酸置換を有する請求項１、２、または３記載の蛋白質。７１．当該アミノ酸配列変種が配列表番号１の３１５位のセリンの位置にトリプトファン残基を有する請求項７０記載の蛋白質。７２．配列表番号１の３３８位の当該システイン残基がチロシン、ヒスチジン、イソロイシン、及びセリンからなる群から選択されるアミノ酸で置換される請求項７０記載の蛋白質。７３．請求項１、２、若しくは３記載のアミノ酸配列からなるキメラ型モルフォジェン。７４．当該モルフォジェンアミノ酸配列変種が配列表番号１の３１５位のセリン若しくは３３８位のシステインにアミノ酸置換を有する請求項２２、２３、３１、または３２記載の組成物。７５．当該モルフォジェンアミノ酸配列変種が配列表番号１の３１５位のセリン若しくは３３８位のシステインにアミノ酸置換を有する請求項４３、４５、４７、または４９記載の方法。７６．一般配列７、または８（配列表番号１２、または１３）で特定されるアミノ酸配列からなるモルフォジェン。７７．当該蛋白質がモルフォジェンファミリーのメンバー、若しくはそれらの対立形質、種、及び他の配列変種のプロ領域からなるペプチドと複合体を形成する２量体蛋白質種からなる請求項１、２、３、または４記載の蛋白質。７８．当該２量体蛋白質種が当該ペプチドと非共有結合で複合体を形成する請求項７７記載の蛋白質。７９．当該２量体蛋白質種が２個の当該蛋白質と複合体を形成する請求項７７記載の蛋白質。８０．当該ペブチドが当該プロ領域を特定する配列の少なくとも１８のアミノ酸からなる請求項７７記載の蛋白質。８１．当該ペプチドが当該プロ領域の全長からなる請求項８０記載の蛋白質。８２．当該ペプチドが配列表番号３のヌクレオチド１３６−１９２、若しくは配列表番号７のヌクレオチド１５７−２１１で特定されるＤＮＡと厳密な条件下ハイブリダイズする核酸からなる請求項７７記載の蛋白質。８３．当該ペプチドがＯＰ３のプロ領域（配列表番号１）の少なくとも最初の１８のアミノ酸からなる請求項７７記載の蛋白質。８４．当該複合体が塩基性アミノ酸、界面活性剤、若しくは担体蛋白質に暴露することでさらに安定化される請求項７７記載の蛋白質。