SK283947B6 - Farmaceutické kompozície tizoxanidu a nitazoxanidu - Google Patents
Farmaceutické kompozície tizoxanidu a nitazoxanidu Download PDFInfo
- Publication number
- SK283947B6 SK283947B6 SK708-2003A SK7082003A SK283947B6 SK 283947 B6 SK283947 B6 SK 283947B6 SK 7082003 A SK7082003 A SK 7082003A SK 283947 B6 SK283947 B6 SK 283947B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- acid
- composition
- particles
- nitazoxanide
- active
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/425—Thiazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
- A61K31/425—Thiazoles
- A61K31/426—1,3-Thiazoles
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
- A61P33/12—Schistosomicides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Virology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Nitrogen And Oxygen As The Only Ring Hetero Atoms (AREA)
Abstract
Farmaceutické kompozície obsahujúce ako aktívnu zložku najmenej jednu zlúčeninu zvolenú zo skupiny, ktorú tvorí zlúčenina vzorca (I) a zlúčenina vzorca (II). Farmaceutické kompozície sa stabilizujú najmenej jednou farmaceuticky prijateľnou kyselinou. Aktívna zložka je výhodne vo forme častíc s veľkosťou častice menšou než 200 um a stredná veľkosť častíc je väčšia než 5 um. Farmaceutické kompozície sú zvlášť použiteľné pri liečbe oportúnnych infekcií osôb s oslabeným alebo suprimovaným imunitným systémom a pri liečbe infekcií motolicou.ŕ
Description
Tento vynález sa týka farmaceutickej kompozície, zvlášť použiteľnej pri liečbe oportúnnych infekcií osôb s oslabeným alebo suprimovaným imunitným systémom a pri liečbe infekcií motolicami (trematódami).
Doterajší stav techniky
Existuje naliehavá potreba vývoja spôsobov liečby početných parazitámych a bakteriálnych infekcií osôb s oslabeným imunitným systémom (AIDS, karcinóm, staršie osoby, choroby starnutia, príjemcovia imunosupresívnych liečiv po transplantácii orgánov). Inou oblasťou záujmu sú infekcie motolicou, obzvlášť v tropickom podnebí. Preto tu je potreba farmaceutickej kompozície, ktorú by znášali aj imunitné oslabené osoby a ktorá by bola skladovateľná aj v tropickom prostredí.
Špecificky prvok Toxoplasma gondii je medzi prevládajúcimi príčinami latentných infekcií centrálneho nervového systému vo svetovom meradle. Týmto parazitom je infikovaných veľa zdravých ľudí, ale obvykle ich imunitný systém udrží organizmus pod kontrolou. Toxoplasma gondii je najobvyklejším oportúnnym patogénom mozgu pacientov trpiacich AIDS. V dnešnej dobe sa toxoplazmóza stáva stále väčším problémom nielen kvôli AIDS, ale aj vplyvom rastúceho používania imunosupresívnych liečiv (podávaných napríklad pacientom po transplantácii orgánov). Toxoplazmóza sa obvykle lieči kombináciou pyrimethaminu a sulfadiazínu. Sú to účinné lieky, ale nezabíjajú cysty parazita, takže liečba musí pokračovať pri udržiavacích dávkach. Toxicita si často vynúti vysadenie lieku, zvlášť u ľudí imunosuprimovaných (prijímajúcich imunosupresívne lieky) a nasleduje recidíva. Štatistika preto nie je priaznivá pri uvádzanej úmrtnosti asi 70 % u imunodeficientných pacientov a priemernom prežívaní štyri mesiace.
Kryptosporidióza je spôsobená mikroskopickým parazitným prvokom Cryptosporidium parvum. U osôb s normálnou imunitou môže byť hnačka spôsobená týmto prvokom prudká a dlhá, ale dočasná (self-limiting). U pacientov trpiacich AIDS kryptosporidiálna hnačka často ohrozuje ich život. Odhaduje sa, že z pacientov AIDS asi 15 - 20 % trpí týmto ochorením. Až dosiaľ neexistuje žiadna trvalo účinná alebo osvedčená terapia kryptosporidiózy.
U pacientov trpiacich AIDS bol najčastejšie identifikovaný ako patogén Enterocytozoon bieneusi, parazitná mikrosporídia nájdená u takmer jednej štvrtiny pacientov. Teraz sa zdá, že tento drobný parazit môže byť označený ako príčina značného podielu mnohých nevysvetlených prípadov porúch trávenia, hnačky a telesného chátrania nositeľov HIV. Žiadna účinná liečba dosiaľ neexistuje.
HlV-pozitívne osoby infikuje niekoľko ďalších druhov mikrosporidií vrátane Encephalitozoon heliem a cuniculi a nový druh označený ako Septata intestinalis. Nedávna správa zisťuje, že infekcia diseminovanými mikrosporídiami v súčasnosti nadobúda na význame.
Od kryptosporidiózy je klinicky neodlíšiteľná infekcia parazitom Isospora belli. Je známy skôr v tropickom pásme a v USA bol nájdený u menej ako 1 % pacientov, aj keď jeho skutočný výskyt je pravdepodobne vyšší.
Pneumocystis carinii sa všeobecne zaraďuje ako parazitný prvok; niektoré práce však uvádzajú, že by mohol patriť medzi fungi (huby), s ktorými zdieľa určité genetické sekvencie. Pneumocystis carinii obvykle infikuje pľúca (Pneumocystis Carinii Pneumonia (PCP) - zápal pľúc spôsobený P. c.). Uvádza sa, že liečba je úspešná u 40 - 60 % pacientov, pričom však sú problémy s toxicitou lieku zvlášť u imunitné oslabených pacientov. Medzi mnohými vážnymi prípadmi infekcie detí vírusom ľudskej imunodeficiencie (HIV) zaujíma PCP výnimočné postavenie vplyvom svojho vysokého výskytu, ojedinelého rozloženia podľa veku a častej úmrtnosti. PCP je najbežnejšia vážna oportúnna infekcia detí infikovaných HIV; výskyt PCP medzi malými deťmi infikovanými HIV bez profylaktického ošetrenia je odhadovaný na najmenej 12 % v prvom roku života. Veľa detí umiera krátko po rozvinutí choroby PCP.
Mycobacterium Avium Complex (MAC) patrí k infekciám, ktoré spôsobuje čeľaď veľmi podobných mykobakteriálnych mikroorganizmov Mycobacterium avium a Mycobacterium intracellulare. Pokiaľ sa vyskytuje u ľudí imunitné neoslabených, je obvykle vo forme infekcie dýchacieho ústrojenstva. U pacientov trpiacich AIDS je MAC obvykle diseminovaný (diseminovaný MAC alebo DMAC) a takmer každý orgán môže byť zasiahnutý. V nedávnom výskume sa zistilo, ž.e baktérie MAC boli nájdené u 43 % pacientov, ktorí prežili 2 roky po diagnostikovaní AIDS. Pre diseminovaný MAC nebola nájdená žiadna štandardná terapia. Obvykle sa predpisujú kombinácie liekov, a ak sú úspešné, vyžaduje sa ich doživotné podávanie. Naliehavo je potrebný účinnejší spôsob liečby.
Osoby nakazené HIV sú zvlášť náchylné k infekciám Mycobacterium tuberculosis a priebeh choroby sa urýchľuje. Zatiaľ čo u osôb neinfikovaných HIV je extrapulmonáma tuberkulóza neobvyklá, u HlV-pozitívnych osôb sa často vyskytuje. CDC zverejnila smernice na liečbu TBC, ktoré zohľadňujú rastúci výskyt tuberkulózy odolnej proti širokému spektru liečiv (MDR-TB). Úmrtnosť medzi pacientmi AIDS s MDR-TB je veľmi vysoká (asi 80 %) a postup choroby je extrémne prudký.
Preto existuje naliehavá potreba vývoja nových spôsobov liečby týchto infekcií, ktoré sú u ľudí i zvierat tak časté a trvalo ich ohrozujú.
Tiež existuje potreba mať k dispozícii širokospektrálne lieky na zjednodušenie liečby infekcií spôsobených motolicou (trematóda). V súčasnej dobe je nutné diagnostikovať špecifickú patogénnu motolicu a predpísať liekovú terapiu špecifickú pre danú motolicu. Veľa menej vyvinutých krajín nie je vybavených prostriedkami na diagnostikovanie špecifickej motolice. Nájdenie lieku so širokou pôsobnosťou by odstránilo potrebu tejto diagnózy.
Schistosoma mansoni, krvná motolica, je pôvodcom schistosomiázy, druhej najvýznamnejšej tropickej parazitárnej choroby ľudí po malárii, a najdôležitejšou infekciou motolicou u ľudí. Schistosoma haematobium je iný významný druh infikujúci človeka. Vo svetovom meradle trpí schistosomiázou viac ako 200 miliónov ľudí vrátane niekoľko sto tisíc osôb v USA.
Fasciola hepatica, bežná pečeňová motolica, je predovšetkým chorobou oviec, ale človek býva náhodným hostiteľom. Tento parazit dokáže prežiť aj pri silnej imunitnej odozve hostiteľa. Na liečbu sa ponúka bithionol, ktorý však nie je v Spojených štátoch schválený.
Preto pretrváva potreba farmaceutickej kompozície s dlhou skladovateľnosťou aj v tropických podmienkach a so širokou pôsobnosťou proti motoliciam.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je predovšetkým farmaceutická kompozícia obsahujúca ako aktívnu zložku najmenej jednu zlúčeninu vybranú zo skupiny, ktorú tvorí zlúčenina vzorca (ľ)
OH
(I) a nitazoxanid vzorca (II) a zlúčenina vzorca (II)
pričom ďalej obsahuje najmenej jednu farmaceutický prijateľnú kyselinu v množstve zlepšujúcom stabilitu.
Aktívna zložka je výhodne v podobe častíc veľkosti pod 200 pm a stredná veľkosť častice je väčšia než 5 pm.
Teraz bolo pozorované pri výskumoch na zvieratách a pri klinických výskumoch na ľuďoch, že účinnosť liečby s použitím zlúčenín vzorca (I) a (II) závisí od veľkosti častice aktívnej zložky lieku a od stability zlúčeniny.
Opísané farmaceutické kompozície sú vhodné na liečbu nákaz ľudí a zvierat motolicou spôsobených patogénmi Schistosoma ako napríklad Schistosoma mansoni, Schistosoma haematobium, Schistosoma mekongi, Schistosoma japonicum, Schistosoma intercalatum, patogénmi Fasciola ako napríklad Fasciola hepatica a Fasciola gigantica, Fasciolopsis biski; a Dicrocoelium dendriticum, Heterophyes heterophyes a Metagonimus yokogawa.
Farmaceutické kompozície sú tiež účinné pri liečbe imunooslabených pacientov trpiacich oportúnnymi infekciami patogénmi Cryptosporidium parvum, Isospora belli, Enterocytzoon bineusi, Encephalitozoon intestinalis, Mycobacterium tuberculosis, Mycobacterium avium intracellulare, Pneumocystis carinii a Toxoplasma gondii.
Farmaceutická kompozícia môže byť vo forme vhodnej na orálne podanie, ako pevná dávkovacia forma, kvapalná suspenzia alebo ako pasta.
Pre lepšie porozumenie podstaty a predmetu tohto vynálezu by bolo užitočne odkázať na nasledujúci podrobný opis, ktorý je treba vnímať s pripojenými obrázkami, v ktorých:
Obrázok 1: ukazuje percentá inhibície a prežívania buniek hostiteľa pri aplikácii nitazoxanidu proti E. intestinalis.
Obrázok 2: ukazuje percentá inhibície a prežívania buniek hostiteľa pri aplikácii nitazoxanidu proti V. corneae.
Obrázok 3: ukazuje percentá inhibície a prežívania buniek hostiteľa pri aplikácii albendazolu proti E. intestinalis.
Obrázok 4: ukazuje percentá inhibície a prežívania buniek hostiteľa pri aplikácii albendazolu proti V. corneae.
Obrázok 5 a 6: ukazuje hodnoty optickej hustoty získané pre každú kultivačnú jamku vynášané proti koncentráciám lieku v kultúre.
Obrázok 7: je graf založený na zisťovaní účinnosti nitazoxanidu proti mykobaktérii pomnoženej v kvapalnom živnom bujóne.
Obrázok 8: ukazuje percento aktívnych častíc s objemom menším než 0 pm.
Farmaceutická kompozícia podľa tohto vynálezu zahrnuje ako aktívnu zložku najmenej jednu zlúčeninu vybranú zo skupiny, ktorú tvorí desacetylnitazoxanid vzorca (I)
Nitazoxanid (NTZ), zlúčenina so vzorcom (II), je generický názov 2-(acetyloxy)-N-(5-nitro-2-tiazolyl)benzamidu, zlúčeniny, ktorú po prvý raz syntetizovali Rossignol a Cavier v r. 1975; 2 mg nitazoxanidu možno rozpustiť v 1 ml DMSO. Nitazoxanid sa ľahko vstrebáva pri orálnom podaní.
Až dosiaľ nebol podaný dôkaz, že zlúčeniny vzorca (I) a/alebo (II) by mohli byť v širokom rozsahu účinné proti infekciám spôsobeným motolicami alebo že by boli dostatočne netoxické, aby ich znášali aj imunooslabené osoby.
Príprava a určité použitia pre nitazoxanid sa opisujú v patente USA 3 950 351 a v prácach publikovaných prihlasovateľom. Desacetylnitazoxanid, zlúčenina vzorca (I), sa niekedy uvádza ako tizoxanid alebo d-ΝΤΖ a je metabolitom nitazoxanidu.
V patente WO 95/28393 opísal prihlasovateľ spôsob prípravy čistej zlúčeniny vzorca (II) i použitie kompozície obsahujúcej zmes zlúčenín vzorca (I) a (II).
Teraz bolo pozorované, že pevné častice zlúčeniny vzorca (I), zlúčeniny vzorca (II) alebo ich zmesí s veľkosťou častíc medzi 170 a 520 pm (stredná veľkosť častice = = 352 pm) majú veľmi obmedzenú účinnosť pri orálnom podávaní ľuďom alebo zvieratám. Účinnosť takých častíc je menšia ako účinnosť existujúcich farmaceutických produktov a preto je pre komerčné účely neprijateľná.
Na psoch tiež bolo pozorované, že orálne podávanie jednotlivej dávky 50 mg pevných častíc zlúčeniny vzorca (I) a zlúčeniny vzorca (II) s veľkosťou častíc pod 5 pm na kg hmotnosti psa spôsobilo zvieratám závažné nepriaznivé následky.
Teraz sa zistilo, že ak má byť zaistená účinná a bezpečná liečba infekcií spôsobených ľuďom i zvieratám parazitmi, baktériami, hubami a vírusmi, musí farmaceutická kompozícia, čí už v pevnej dávkovacej forme, alebo kvapalnej suspenzii obsahovať účinnú dávku aktívnej zložky vo forme pevných častíc obsahujúcich zlúčeninu vzorca (I) a/alebo vzorca (II) s veľkosťou častice menšou než 200 pm, pričom stredná veľkosť častice aktívnych pevných častíc je väčšia než 10 pm.
Prítomnosť vysokého obsahu častíc aktívnej zložky s veľkosťou väčšou než 200 pm vzhľadom na obsah častíc veľkosti medzi 5 a 200 pm významne znižuje chemoterapeutickú aktivitu zlúčenín. Je výhodné, keď farmaceutické kompozície podľa vynálezu neobsahujú viac než 5 % hmotnostných aktívnych pevných častíc veľkosti väčšej než 200 pm. Najvýhodnejšie je, keď farmaceutické kompozície podľa vynálezu neobsahujú prakticky žiadne aktívne pevné častice s veľkosťou väčšou než 200 pm.
Prítomnosť vysokého obsahu častíc aktívnej zložky s rozmerom pod 5 pm vzhľadom na obsah častíc s rozmermi medzi 5 a 200 pm môže vyvolať pri zvieratách alebo u ľudí záporné účinky. Okrem toho sa zistilo, že častice s rozmermi pod 5 pm sú rýchlejšie vstrebávané zo zažívacieho traktu do krvného obehu a preto nie sú dostatočne účinné proti parazitom, baktériám, hubám a vírusom v zažívacom trakte zvierat a ľudí.
Ani skúsení vedci nemohli predvídať, že veľkosť častice zlúčeniny vzorca (I) a zlúčeniny vzorca (II) by mohla mať taký významný dopad na ich antimikrobiálnu aktivitu pri liečbe zvierat a ľudí. Napríklad pri výskumoch uskutočňovaných prihlasovateľom nemali antiparazitické zlúčeniny ako albendazol, mebendazol, niklosamid, praziquantel a metronidazol tak výrazný rozdiel antiparazitickej aktivity pri liečbe zvierat a ľudí v závislosti od ich veľkosti častíc. Okrem toho by ani skúsený vedec nemohol predvídať, že rozmery častíc zlúčeniny vzorca (1) a zlúčeniny vzorca (II) by mali taký nepriaznivý dopad na schopnosť zvierat a ľudí znášať podávanie uvedenej aktívnej zložky.
Zlúčeniny vzorca (I) a (II) môžu byť podávané buď v pevnej dávkovacej forme, alebo ako vodné suspenzie, ale uprednostňuje sa, aby farmaceutické kompozície obsahovali účinnú dávku aktívnej zložky vo forme pevnej častice vzorca (I) a/alebo (11) s rozmerom častíc pod 200 pm, pričom je stredná veľkosť uvedenej aktívnej pevnej častice väčšia než 10 pm ako možno zistiť prístrojom CoulterR Counter LS 100. Toto zariadenie používa laserové lúče vlnovej dĺžky 750 nm na triedenie častíc v rozmedzí 0,4 pm do 900 pm (priemer) lomom svetla. Vzorky sú merané vo vode s malým prídavkom prípravku Triton X-100 na zvýšenie zmáčavosti a deflokuláciu prášku.
Je výhodné, keď stredná veľkosť častice uvedených aktívnych pevných častíc je medzi 10 a 100 pm, výhodne medzi 20 a 50 pm.
Príklady výhodných kompozícii sú:
- kompozície s menej ako 10 % hmotnostnými uvedených aktívnych pevných častíc s veľkosťou častíc nad 100 pm;
- kompozície s najmenej 50 % hmotnostnými uvedených aktívnych pevných častíc s veľkosťou častíc pod 50 pm.
Je výhodné, keď stredná veľkosť častice uvedených aktívnych pevných častíc je medzi 10 a 100 pm, výhodnejšie medzi 20 a 50 pm. Vo výhodnom uskutočnení kompozície má menej ako 10 % uvedených aktívnych pevných častíc veľkosť častice menšiu než 5 pm.
Aktívna zložka alebo zložky použité v pevnej dávkovacej forme alebo suspenzii je výhodne zmes pevných častíc zlúčenín vzorca (I) a vzorca (II) s veľkosťou častíc menšou než 200 pm, pričom je hmotnostný obsah zlúčeniny vzorca (I) vzhľadom na hmotnosť zlúčenín vzorca (I) a (II) v uvedenej zmesi medzi 0,5 % a 20 %, výhodnejšie 0,5 % a 10%.
Vynález sa tiež týka uvedených farmaceutických kompozícii, ktoré výhodne obsahujú najmenej jednu farmaceutický prijateľnú kyselinu. Príklady takých kyselín predstavujú: kyselina citrónová, kyselina glutámová, kyselina jantárová, kyselina etánsulfónová, kyselina octová, kyselina vínna, kyselina askorbová, kyselina metánsulfónová, kyselina fumarová, kyselina adipová, kyselina jablčná a ich zmesi. Kyselina citrónová je veľmi vhodná. Prítomnosť uvedenej kyseliny zlepšuje stabilitu aktívnej zložky alebo zložiek.
Pomer hmotnosti farmaceutický prijateľnej kyseliny k hmotnosti uvedených aktívnych pevných častíc je výhodne medzi 0,01 a 0,5, ešte radšej medzi 0,03 a 0,2. Je výhodné, keď množstvo kyseliny postačuje na upravenie pH suspenzie medzi 2 a 6, výhodnejšie medzi 3 a 5, najvýhodnejšie medzi 3,5 a 4,5.
Spôsoby prípravy pevných a kvapalných dávkovacích foriem tejto farmaceutickej kompozície sú opísané v patente WO/95/28393 a tieto opisy sú tu zahrnuté vo forme odkazu. Tieto kompozície výhodne obsahujú zvlhčovadlo a prípadne i derivát škrobu ako jc opísané v patente USA 5 578 621, ktorého obsah tuje zahrnutý formou odkazu pokiaľ ide o opis prípadného zvlhčovadla a derivátov škrobu. Zvlhčovadlo opísané v patente USA 5 578 621 slúži ako disperzné činidlo.
Tieto farmaceutické kompozície v pevnej dávkovacej forme, v kvapalnej dávkovacej forme, ako pasty alebo masti môžu v prípade potreby obsahovať ďalšie aktívne činidlá ako sú antibiotiká, antivírusové prostriedky alebo inhibítory protónovej pumpy. Aj keď to nie jc výhodné, tieto farmaceutické kompozície môžu tiež obsahovať aktívne pevné častice zlúčeniny vzorca (I) a/alebo zlúčeniny vzorca (II) väčšie než 200 pm.
Kompozície môžu obsahovať vchikulá (cxcipicnty) známe ako použiteľné na prípravu foriem vhodných na orálne podávanie.
Je výhodné, keď v záujme vynikajúcej účinnosti proti širokému spektru parazitov, baktérií, húb a vírusov je rozdeľovači súčiniteľ uvedených aktívnych pevných častíc medzi 0,8 a 2, výhodne medzi 1,1 a 1,9, najlepšie vyšší než 1,5, pričom sa uvedený rozdeľovači súčiniteľ vypočíta podľa vzorca:
F90 % = (090% - 0|C'%)/((09O% + 010 %)/2), v ktorom
- Fw%je rozdeľovači súčiniteľ pri 90 %;
- 090% je maximálna veľkosť častice vo frakcii častíc zodpovedajúcich 90 % uvedených aktívnych pevných častíc a
- 01O% je maximálna veľkosť častice vo frakcii častíc zodpovedajúcich 10 % uvedených aktívnych pevných častíc.
V špecifickom uskutočnení vynálezu sú častice zlúčeniny vzorca (1) azalebo (II) pripravené uvedenými spôsobmi a potom sú mleté, takže menej ako 10 % uvedených aktívnych častíc presahuje veľkosť 100 um, menej ako 50 % uvedených častíc je väčších než 50 pm a menej ako 10 % uvedených aktívnych častíc je menších než 5 pm, pričom je stredná veľkosť častíc medzi 20 a 50 pm. Potom sú uvedené aktívne častice granulované s použitím zmesi obsahujúcej aktívne pevné častice a aspoň jedno granulačné činidlo. Príklady granulačného činidla predstavujú: polyvinylpyrolidón, voda, alkohol, sacharóza, hydroxycelulóza a ich zmesi. Je výhodné, keď sa počas granulačného procesu pridá aspoň jedna farmaceutický prijateľná kyselina.
Vynález sa týka pevných dávkovacích foriem obsahujúcich kompozíciu podľa vynálezu, ako sú tablety, dispergovateľné tablety, povlečené tablety, matrice atď. Dávkovacia forma podľa vynálezu obsahuje napríklad: pevné aktívne častice s veľkosťou častíc pod 200 pm, pričom menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť nad 100 pm, menej ako 50 % uvedených častíc má veľkosť nad 50 pm a menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť pod 5 pm, pričom je stredná veľkosť častíc medzi 20 a 50 pm;
- najmenej jedno granulačné činidlo;
- najmenej jedno zvlhčovadlo;
- najmenej jeden derivát škrobu a
- najmenej jednu farmaceutický prijateľnú kyselinu, ktorá sa výhodne pridáva počas granulačného procesu.
Kvapalné dávkovacie formy ako sú vodné suspenzie zlúčeniny podľa vynálezu obsahujú napríklad:
- ako aktívne činidlo pevné aktívne častice obsahujúce zlúčeninu vzorca (I) a/alebo zlúčeninu vzorca (II) s veľkosťou častíc pod 200 pm, pričom menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť nad 100 pm, menej ako 50 % uvedených
SK 283947 Β6 častíc má veľkosť nad 50 pm a menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť pod 5 pm a
- najmenej jedno granulačné činidlo;
- najmenej jednu farmaceutický prijateľnú kyselinu, takže pH suspenzie je medzi 2 a 6, výhodne medzi 3 a 5, najradšej medzi 3,5 a 4,5;
- najmenej jedno zahusťovadlo, napríklad xantánovú, aguarovú alebo carruba živicu, kryštalickú celulózu, karboxymetylcelulózu alebo ich zmesi.
Pastovité alebo masťové formy podľa vynálezu, vhodné na orálne podávanie, obsahujú napríklad:
- ako aktívne činidlo pevné častice obsahujúce zlúčeninu vzorca (I) a/alebo zlúčeninu vzorca (II) s veľkosťou častíc pod 200 pm, pričom menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť nad 100 pm, menej ako 50 % uvedených častíc má veľkosť nad 50 pm a menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť pod 5 pm a
- najmenej jedno zvlhčovadlo;
- najmenej jednu farmaceutický prijateľnú kyselinu, takže pH suspenzie je medzi 2 a 6, výhodne medzi 3 a 5, najradšej medzi 3,5 a 4,5;
- najmenej jedno zahusťovadlo, napríklad xantánovú, aguarovú alebo carruba živicu, kryštalickú celulózu, karboxymetylcelulózu alebo ich zmesi.
Pasty alebo masťové formy na vonkajšie alebo intravaginálne aplikácie obsahujú napríklad:
- ako aktívne činidlo pevné častice obsahujúce zlúčeninu vzorca (I) a/alebo zlúčeninu vzorca (II) s veľkosťou častíc pod 200 pm, pričom menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť nad 100 pm, menej ako 50 % uvedených častíc má veľkosť nad 50 pm a menej ako 10 % uvedených častíc má veľkosť pod 5 pm a
- najmenej jedno zvlhčovadlo;
- najmenej jednu farmaceutický prijateľnú kyselinu, takže pH suspenzie je medzi 2 a 6, výhodne medzi 3 a 5, najradšej medzi 3,5 a 4,5;
- cetylalkohol a/alebo glyceridové deriváty, a/alebo propylénglykol;
- najmenej jedno zahusťovadlo, napríklad xantánovú, aguarovú alebo carruba živicu, kryštalickú celulózu, karboxymetylcelulózu alebo ich zmesi.
Suchá a čistá zlúčenina vzorca (I) a suchá a čistá zlúčenina vzorca (II) boli podrobené mletiu a triedeniu sitovou technikou.
Po mletí mali častice zlúčeniny vzorca (I), zlúčeniny vzorca (II) a ich zmesi distribúciu veľkosti častíc podľa obrázka 8. Obrázok 8 ukazuje percentuálny podiel častíc s menším rozmerom než 0 pm.
Z uvedeného vyplýva, že:
- menej ako 10 % hmotnostných častíc malo veľkosť častice menšiu než asi 5 pm;
- menej ako 10 % hmotnostných častíc malo veľkosť častice väčšiu než asi 70 pm;
- stredná veľkosť častice je asi 40 pm;
- rozdeľovači súčiniteľ častíc je asi 1,73, pričom sa uvedený rozdeľovači súčiniteľ vypočítal podľa rovnice:
F90 % = (090 % - 010 %X(09O % + 010 %)/2), v ktorej • F9o% je rozdeľovači súčiniteľ pri 90 %;
- 09O % je maximálna veľkosť častice vo frakcii častíc zodpovedajúcich 90 % uvedených aktívnych pevných častíc a
- 01O% je maximálna veľkosť častice vo frakcii častíc zodpovedajúcich 10 % uvedených aktívnych pevných častíc.
Nasledujúce tabuľky ilustrujú príklady takých kompozícií.
Tabuľka 1
Príklad kompozície dispergovateľných tabliet na orálne podávanie obsahujúcich ako aktívne zložky zlúčeninu vzorca (II) a zlúčeninu vzorca (I)
Nitazoxanid (99 %) + desacetylnitazoxanid (I %) 200 mg
Mikrokryštalická celulóza
Avicel pH 102 od firmy FMC-USA 116mg
Krospovidon 25mg
Stearát horečnatý 3mg
Koloidný oxid kremičitý 5mg
Kyselina citrónová 10mg
Jahodová prichuť č. 877720 od firmy Robertet 10mg
Sacharinát sodný 2mg
Tabuľka 2
Príklad kompozície povlečených tabliet na orálne podávanie obsahujúcich ako aktívne zložky zlúčeninu vzorca (II) a zlúčeninu vzorca (I)
Nitazoxanid 500 mg
Kukuričný škrob 60mg
Predgelatinizovaný kukuričný škrob 70mg
Hydroxypropylmetylcelulóza Smg
Sacharóza 20mg
Sodný glykolát škrobu 30mg
Kyselina citrónová 25mg
Mastenec 8mg
Stearát horečnatý 7mg
Povlaky: na tablety alebo granuly obsahujúce 500 mg aktívnej zložky sa nastrekuje horúci cukrový roztok alebo povlakový film
Tabuľka 3
Príklad vodnej suspenzie obsahujúcej zlúčeninu vzorca (II) a zlúčeninu vzorca (I) ako aktívne zložky na orálne podávanie; pH suspenzie bolo okolo 4.1
Nitazoxanid (98 %) + desacetylnitazoxanid (2 %)2 g
Destilovaná voda 100 ml
Benzoát sodný 0,2g
Sacharóza 30,5g
Xantánová živica 0.2g
Mikrokryštalická celulóza a sodná karboxytnetylcelulóza
Avicel R.C-591 od firmy FMC-USA 0.8g
Kyselina citrónová 0,2g
Dihydrát citrátu sodného50 mg
Jahodová príchuť Č. 877720 od firmy Robertet 125 mg
Červené farbivo č 33 D a C1 mg
Tabuľka 4
Príklad pasty na orálne podávanie obsahujúcej zlúčeninu vzorca (II) a zlúčeninu vzorca (I) ako aktívne zložky
Nitazoxanid (98 %) + desacetylnitazoxanid (2 %) | 500 mg |
Minerálny olej | 10 g |
Surový cukor | 1 g |
Mikrokryštalická celulóza a sodná karboxyinetylce | tlulóza |
Avicel RC-59J od firmy FMC-USA | 0.8 g |
Kyselina citrónová | 0.2 S |
Tabuľka 5 | |
Príklad pasty alebo masťovej formulácie na intravaginálne alebo vonkajšie podávanie, pričom uvedená pasta alebo masť obsahuje zlúčeninu vzorca (II) a zlúčeninu vzorca (I) ako aktívne zložky | |
Nitazoxanid (98 %) + desacetylnitazoxanid (2 % | ) 8 g |
Kremafor A6 | 2 g |
Kremaľor A25 | '5 g |
Minerálny olej | 7 S |
Luvitol EHO | 7 g |
Glycerylmonoester | 4 g |
Cetylalkohol | 3 g |
Simetikon | 0.5 g |
Germaben II | 1 g |
Pro pyl eugly k ol | ©5 g |
Destilovaná voda | 62.5 g |
Farmaceutické kompozície podľa vynálezu sú kompozície so širokým spektrom účinkov na parazity, baktérie, huby a vírusy, zvlášť keď sú podávané orálne.
Účinnosť a bezpečnosť opísaných farmaceutických kompozícií pri podávaní zvieratám i ľuďom boli vynikajúce. Pri klinických výskumoch na ľuďoch bolo špecificky zistené, že účinnosť uvedených farmaceutických kompozícií je pri liečbe parazitámych ochorení výrazne vyššia ako pri tých istých formuláciách s použitím aktívnej zlúčeniny s veľkosťou častice medzi 170 a 520 pm (stredná veľkosť častice = 352 pm), i keď sa väčšie častice podávali pacientom v dávkach až trikrát vyšších a počas dlhšej doby. Príklady rýchlosti uzdravení sú uvedené v tabuľke 6.
Tabuľka 6
Porovnanie výsledkov klinických výskumov na ľuďoch s použitím zlúčenín vzorca (1) a vzorca (II) s veľkosťami častíc v rozmedzí 170 pm až 520 pm (priemer = 352 pm) s výsledkami získanými s použitím zlúčenín vzorca (J) a vzorca (II) s veľkosťami častíc v rozmedzí od 5 pm do 200 pm (priemer = 34 pm).
Zlúčenina vzorca (I) (98 %) + zlúčenina vzorca (II) (2 %)
Parazit | Veľkosť častice 170 až 520 tím Dávka 15-50 ir.g/kg/deň počas 3 až 7 dni Vyliečeni/celok * % vyliečených | Veľkosť častice 5 až 200 pm Dávka 15 mg/kg/deŕl počas 3 dní Vyliečeni/celok = % vyliečených |
Blastocystis hominis | 12/27 ~ 44 % | 10/10*- J no % |
Entamoeba histolyticA | 29/47 - 62 % | 106/133 80 % |
Giardia lamblia | 1 1 /37 = 30 % | 50/7 3 = 68 “Á |
Astaris lumbricoides | 3/69 = 4 % | 144/179 80 % |
Trichuris trichiura | 7/48 - 15 % | 58/79 - 73 % |
V prípade všetkých parazitov uvedených v tabuľke 6 bol podiel uzdravených výrazne lepší u pacientov liečených aktívnymi časticami veľkosti medzi 5 a 200 pm ako pri liečbe aktívnymi časticami v rozmedzí veľkostí 170 až 520 pm, pričom vo všetkých prípadoch bola štatistická významnosť p < 0,02 (s použitím štandardných testov X2). Tak to bolo, aj keď dávky aktívneho činidla s väčšou veľkosťou častíc boli bežne vyššie a čas liečby bol často dlhší než čas podávania farmaceutických kompozícií aktívneho činidla s veľkosťou častíc pod 200 pm. U žiadnej skupiny pacientov sa nevyskytli nežiaduce účinky.
Výsledky podobné uvedeným údajom z výskumov na ľuďoch boli zistené aj pri testoch na zvieratách.
Okrem toho nežiaduce účinky pozorované na psoch po orálnom podaní jednorazovej dávky 50 mg zlúčeniny vzorca (I) a zlúčeniny vzorca (II) na kg hmotnosti psa neboli pozorované pri extenzívnych výskumoch na zvieratách pri použití zlúčeniny vzorca (I) a zlúčeniny vzorca (II) s veľkosťou častice medzi 5 a 200 pm (priemer >10 pm), aj keď tá istá dávka alebo vyššia dávka týchto zlúčenín bola podávaná denne počas času 90 dní alebo dlhšie.
Okrem toho boli uvedené kompozície stále aj v podmienkach 40 °C a 65 % relatívnej vlhkosti počas času šiestich mesiacov, alebo v prípade kvapalných suspenzií, keď boli suspendované vo vode za uvedených podmienok, počas 3 mesiacov, čim je zaistené, že aktívne zložky ncdcgradujú a že kompozície si udržujú svoju účinnosť počas takej doby po príprave, ktorá je vhodná na liečebné a komerčné účely.
V ďalšom bude ukázaná účinnosť farmaceutických kompozícii.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Cryptosporidium parvum
V prípravnom klinickom experimente sa 30 osôb trpiacich AIDS s chronickou kryptosporidálnou hnačkou liečilo orálnym podávaním nitazoxanidu pri denných dávkach 500 až 2000 mg. Pokiaľ hnačka neustala, podávanie nitazoxanidu pokračovalo ďalšie 4 týždne s maximálnou dennou dávkou 2000 mg.
Dvadsaťosem osôb dokončilo dva alebo viac týždňov liečby a do ôsmeho týždňa po liečení bolo 16 z nich schopných vyhodnotenia z hľadiska terapeutickej odozvy. V tejto poslednej skupine 12 osôb malo 50 % alebo väčšie obmedzenie dennej frekvencie vylučovania a desať jednotlivcov malo výrazné zníženie alebo úplnú likvidáciu parazitov v stolici, pričom u štyroch osôb bol tento organizmus nepreukázateľný. Šesť pacientor' splnilo kritériá klinickej a parazitologickej odozvy.
Pacienti, ktorým boli podávané vyššie denné dávky lieku počas dlhšej doby, mali väčšiu šancu na pozitívnu odozvu.
Pokus s nitazoxanidom pri kryptosporidiálnej hnačke v dôsledku AIDS s použitím značenia fluorescenčnou látkou preukázal pokles frekvencie vylučovania u osôb, ktorým bolo denne podávané 500, 1000, 1500 alebo 2000 mg lieku. Účastníci pokusu mali počty CD4+ 42 buniek/mm3 (v rozsahu 0-303 buniek/mm3), priemerný počet denných stolíc 6,7 počas 15 mesiacov, oocysty Cryptosporidium parvum v stolici a žiadne ďalšie zjavné črevné patogény. Takmer u všetkých účastníkov zlyhala terapia s azitromycínom alebo paromycínom.
Po 23 týždňoch malo 9 osôb z 13 kompletnú klinickú odozvu (prevažne tvarovanú stolicu jedenkrát až trikrát denne) a 4 z 13 mali čiastočnú klinickú odozvu (najmenej % pokles dennej frekvencie stolice alebo zmenu konzistencie stolice na najmenej 75 % tvarovanej stolice). Do ukončenia pokusu došlo u 8 z 11 osôb k úplnému vyhladeniu parazita a ďalšie 3 mali podstatné zníženie koncentrácie oocýst. Bol zistený trend k lepšej odozve pri dávkach 1000 mg denne a vyšších a pri dlhšej liečbe. Traja účastníci pokusu dostali žihľavkovú vyrážku na pokožke; zdravotný režim dodržiavalo viac než 90 % účastníkov viac ako štyri týždne.
Príklad 2
Cryptosporidium parvum
Pokus in vitro, údaje o dávkovaní
Nitazoxanid sa rozpustil v sterilnom dimetylsulfoxide (DMSO) a skúšal sa na jednobunkových vrstvách infikovaných intaktnými oocystami Crypotosporidium parvum pri koncentráciách 100 pg/ml, 10 pg/ml, 1 pg/ml a 0,1 pg/ml. Paralelne sa uskutočnil druhý test pri koncentráciách nitazoxanidu 20 pg/ml, 2 pg/ml, 0,2 pg/ml a 0,02 pg/ml. Tieto koncentrácie sa docielili technikou postupného riedenia s použitím kompletnej živnej pôdy DMEM až do dosiahnutia finálnej koncentrácie DMSO 0,5 %. Pri kontrolnom médiu (pôde) sa dosiahlo to isté zriedenie.
Pri pokuse sa použila bunková kultúra MDBKF5D2 vypestovaná v sedemmimilimetrových komôrkach; ako Cyklosporidium parvum oocysty GCH1 v počte 5 x 104 na jamku; išlo o porovnanie paromomycínu (pozitívna kontrola) s nitazoxanidom (experimentálny liek). Obsiahnuté bolo aj imúnne králičie antisérum obsahujúce sporozoity Cryptosporidium parvum (0,1 %) a s fluoresceínom konjugované kozie sérum proti králičej protilátke (1 %).
Test toxicity
200 pl pôdy obsahujúcej nitazoxanid pri koncentráciách 100, 10, 1 a 0,1 pg/ml a príslušné kontrolné pôdy sa umiestnili do dvoch jamiek platne s 96 jamkami obsahujúcich konfluentné jednobunkové vrstvy buniek MDBKF5D2 a do dvoch jamiek bez tejto vrstvy. Liek sa na jednobunkových vrstvách inkuboval pri 37 °C a 8 % CO2; po 24 hodinách (prvý pokus) a 48 hodinách (druhý pokus) sa do každej jamky pridal MTS (Owenov roztok) a PMS v množstve 333 pg/ml, resp. 25 pM. Platňa sa vrátila do inkubátora a potme sa vyvíjala dve hodiny. Potom sa odobralo zvrchu kultúry 100 pl supematantu a previedlo na novú platňu s mikrotitrom na zistenie optickej hustoty prístrojom ELISA pri 490 nm. Výsledky sa zaznamenali a analyzovali. Toxicita v percentách sa vypočítala odčítaním strednej optickej hustoty (OD) supematantu z kultúry s liekom od ÓD supematantu kontrolnej pôdy bez lieku, vydelením strednou optickou hustotou supematantu z kontrolnej pôdy a násobením 100.
OD pôdy - OD lieku x ioo
OD pôdy
Test intaktných oocýst Cryptosporidium parvum
Na konfluentných jednobunkových vrstvách MDBKF5D2 sa pri 37 °C a v prostredí 8 % CO2 inkubovali v nitazoxanide (100, 20, 10, 2, 1, 0,2, 0,1 a 0,02 pg/ml) oocysty Cryptosporidium parvum v množstve 5 x 104 na jamku. Stupeň infekcie v každej jamke sa stanovil imunofluorescenčnou analýzou po 24 a 48 hodinách. Inhibícia v percentách sa stanovila odčítaním priemerného počtu parazitov na 10 polí v jamkách s testovaným liekom od priemerného počtu parazitov na 10 polí v jamkách s kontrolnou pôdou bez lieku, delením tohto rozdielu priemerným počtom parazitov v kontrolných pôdach a vynásobením sto.
počet v kontrolných pôdach x 100
Výsledky
Pokus 1: 24 hodín
Zlúčenina | Koncentrácia | Stredná (+SD)· | Toxicita | Inhibícia % |
Infikovaná pôda | 0 | 983.5 (±128.2) | 0 | 0 |
Paromomycin | 2 mg/ml | 482(+47,1) | 23,8 | 51 |
NTZ | 1 OO pg/ml | strata | 88.1 | NA ·“ |
10 Mg/ml | 55,5(113,5) | 65.1 | 94,4 | |
1 pg/ml | 224,5(+28.5) | 8.3 | 77.2 | |
0.1 Mg/ml | 474.5(±29,5) | 19,3 | 51,8 |
* Počet parazitov/l0 polí ♦· Nie je k dispozícii vplyvom toxicity
Pokus 2: 48 hodín
Zlúčenina | Koncentrácia | Stredná ( + SD)* | Toxicita % | Inhibícia % |
Infikovaná pôda | 0 | 223 1,25 (+90.03) | 0 | 0 |
Paromomvcín | 2 mg/ml | 580(+33.42) | 40,8 | 74,01 |
NTZ | 20 Mg/ml | 68.75(+13.77) | 92.87 | 96.92 |
2 pg/ml | 1 13,75( + 21,36) | 24.93 | 94.90 | |
0.2 Mg/ml | 1 020( +158,48) | 16.56 | 54.29 | |
0.02 itg/ml | 1041(+191.46) | 21,23 | 53,33 |
‘Počet parazitov/lO poli
Účinok nitazoxanidu na intaktné oocysty Cryptosporidium parvum
V pokuse 1 mal nitazoxanid pri koncentráciách 10, 1 a 0,1 pm/ml za následok hodnoty inhibície parazitov 94,4, 77,2 a 51,8 % a toxicitu proti bunkám v percentách 65,1, 8,3 a 19,3 %. Hoci pri zriedení 10 pg/ml došlo k takmer úplnej inhibícii infekcie parazitmi, boli zrejmé vysoké stupne toxicity. Pri zriedení 1 pg/ml nitazoxanidu vyšlo priaznivo porovnanie s paromomycínom koncentrácie 2 mg/ml z hľadiska inhibície parazitov i toxicity proti bunkám (77,2 % inhibície parazitov a 8,3 % celulámej toxicity v prípade nitazoxanidu pri zriedení 1 pg/ml v porovnaní s 51 % inhibíciou parazitov a 23,8 % toxicity proti bunkám v prípade paromomycínu pri 2 mg/ml).
Pri pokuse 2 sa liek modifikoval s cieľom dosiahnuť lepšiu distribúciu dávok pri minimálnej toxicite. V dôsledku toho zostali kultúry živé i po 48 hodinách a nielen po 24 hodinách ako v pokuse 1. Inkubácia počas 48 hodín mala samozrejme za následok vyššiu relatívnu toxicitu proti bunkám ako ukazuje porovnanie s paromomycínom v oboch pokusoch. Koncentrácia nitazoxanidu 20 pg/ml bola pri inkubácii počas 48 hodín stále príliš toxická, i keď sa jednobunková vrstva zdala dosiaľ intaktná. Je možné, že vysoká toxicita nutne ovplyvňujúca funkciu buniek má taktiež účinok na vývoj infekcie parazitom. Pri zriedení 2 pg/ml nitazoxanidu bola zábrana infekcie parazitom značná pri relatívne nízkej celulámej toxicite. Ďalšie riedenia taktiež mali za následok značnú inhibíciu a nízku toxicitu proti bunkám. Pri koncentrácii lieku 2 pg/ml mierna toxicita proti bunkám a inhibičná aktivita 94,90 % ukazuje, že nita zoxanid je pri koncentrácii 2 pg/ml vhodnejší ako paromomycín pri infekcii s Cryptosporidium parvum in vitro než paromomycin pri koncentrácii 2 mg/ml (tisíckrát vyššia koncentrácia).
Príklad 3
Cryptosporidium parvum
Informácia: dávkovanie a prechovávanie in vitro
Nitazoxanid a desacetylnitazoxanid (NTZ a NTZdes) boli testované na jednobunkových vrstvách infikovaných intaktnými oocystami Cryptosporidium parvum a excystovanými sporozoitmi pri koncentráciách 10, 1, 0,1 a 0,01 pg/ml. Každá zlúčenina sa rozpustila v 100 % dimetylsulfoxide (DMSO) a zriedila sterilným médiom DMEM. Každá koncentrácia nitazoxanidu rovnako ako kontrolné médiá obsahovala konštantné množstvo DMSO 0,025 %.
Pri pokuse sa použili bunkové kultúry z buniek MDBKF5D2 vypestované v sedemmilimetrových komôrkach; ako Cyklosporidium parvum použité oocysty GCH1 v počte 5 x 104 na jamku; šlo o porovnanie paromomycínu (pozitívna kontrola) proti nitazoxanidu (experimentálny liek). Obsiahnuté bolo aj imúnne králičie antisérum obsahujúce sporozoity Cryptosporidium parvum (0,1 %) a s fluoresceínom konjugované kozie sérum proti králičej protilátke (1 %).
Test toxicity
200 pl pôdy obsahujúcej nitazoxanid pri uvedených koncentráciách a príslušné kontrolné pôdy sa umiestnili do dvoch jamiek platne s 96 jamkami obsahujúcich konfluentnú jednobunkovú vrstvu buniek MDBKF5D2 a do dvoch jamiek bez tejto vrstvy. Liek sa na vrstvách inkuboval pri 37 °C 8 % CO2; po 48 hodinách sa do každej jamky pridal MTS (Owenov roztok) a PMS v množstve 333 pg/ml, resp. 25 pM. Platňa sa vrátila do inkubátora a potme sa vyvíjala dve hodiny. Potom sa odobralo zvrchu kultúry 100 pl každého supematantu a previedlo na novú mikrotitračnú platňu na zistenie optickej hustoty prístrojom ELISA pri 490 nm. Výsledky sa zaznamenali a analyzovali. Toxicita v percentách sa vypočítala odčítaním strednej optickej hustoty (OD) supematantu z lieku od strednej optickej hustoty OD supernatantu kontrolnej pôdy bez lieku, vydelením strednou optickou hustotou supematantu z kontrolnej pôdy a násobením 100.
OD pôdy - OD lieku x | q o OD pôdy
Klasifikácia cytotoxicity bola stanovená takto: 0,5 % toxicita = 0, 6 % až 25 % toxicita = 1, 26 % až 50 % toxicita 2,51 % až 75 % toxicita = 3 a 76 až 100 % toxicita = = 4. Piati, že cytotoxicita 0 až 1 sa má považovať za prijateľnú úroveň toxicity. Toxicity hodnôt 2, 3 a 4 sa považujú ako vysoko toxické pre jednobunkovú vrstvu.
Testovanie intaktných oocýst Cryptosporidium parvum
Na konfluentných jednobunkových vrstvách MDBKF5D2 sa pri 37 °C a v prostredí 8 % CO2 inkubovali v nitazoxanide pri uvedených koncentráciách oocysty Cryptosporidium parvum v množstve 5 x 104 na jamku. Stupeň infekcie v každej jamke sa stanovil imunofluorescenčnou analýzou po 48 hodinách a analyzoval sa počíta čom. Inhibícia v percentách sa stanovila odčítaním priemerného počtu parazitov na pole v medikovaných jamkách od priemerného počtu parazitov na pole v jamke s kontrolnou pôdou bez lieku, delením tohto rozdielu priemerným počtom parazitov v kontrolných pôdach a násobením stom.
počet v kontr. pôdach - počet v pôdach s liekom x 100 počet v kontrolných pôdach
Výsledky
Pokus s oocystami Cryptosporidiumparvum (48 hod.)
Lieky | Kone | Paraiit | ±SD | Tox/O D | ±SD | Inhib. % | Tox % | Klasifikácia |
Vodné médiá | 0 | 681,58 | ±271,02 | 2,024 | ±0,18 | 0 | 0 | 0 |
Paromomycin | 2000 | 115,75 | ±44,65 | 1,219 | +0 009 | 83,02 | 39,79 | 2 |
DMSO médiá 0,025 | 0 | 628,50 | ±171,94 | l· 799 | + 1.45 | 0 | 0 | 0 |
NTZ | 10 | 11,75 | ±7,33 | 0,413 | ±0,13 | 98,13 | 77,07 | 4 |
1 | 39,67 | ±13,13 | 1,618 | ±0,326 | 93,69 | 10,09 | 1 | |
o.l | 643,42 | +229,73 | 1,878 | ±0,154 | <0 | <0 | 0 | |
0,01 | 714,33 | ±194,79 | J 617 | -0,072 | íO | 10,12 | 1 | |
Nové | 10 | 13.75 | 16,66 | 0,337 | ±0,005 | 97,81 | 81,27 | 4 |
NTZdes | 39,92 | ±13,49 | 1.710 | +0,033 | 93,65 | 4,97 | O | |
o,· | 649,86 | ±152,19 | 1.506 | +0.119 | <0 | 16,29 | 1 | |
0,01 | 749,33 | ±139,49 | 1.721 | ±0.144 | SC | 4,36 | 0 |
Kone: - pg/ml; Parazit - priemerný počet parazitov/pole (analyzovaných 12 polí); Inhib. % - inhibícia infekcie parazitom v %; Tox % - toxicita lieku proti bunkám v %.
Z uvedeného je zrejmé, že inhibičná aktivita NTZdes je rovnaká ako pri NTZ v príklade II. Nitazoxanid a desacetylnitazoxanid boli rovnako účinné in vitro proti Cryptosporidium parvum pri paralelných testoch, získané výsledky 98 % a 94 % inhibície pri riedeniach 10 a 1 pg/ml pre obe zlúčeniny. V prípade nitazoxanidu bolo zriedenie 1 pg/ml najnižšou koncentráciou dosahujúcou viac než 90 % inhibície, zatiaľ čo 50 % inhibície bolo možné dosiahnuť s nižšou koncentráciou nitazoxanidu napríklad 0,2, 0,1 a 0,02 pg/l. V tých istých experimentálnych podmienkach paromomycin použitý ako pozitívna kontrola bol 2000-krát menej účinný, pretože dosahoval pri koncentrácii 2000 pg/ml inhibičnú účinnosť len 51 až 83 %.
Príklad 4
E. intestinalis a K. cornea
Bunky 2RK-13 (pečeňové bunky králika) sa uložili na kultivačné platne s 24 jamkami v množstve 2,6 x 103 buniek na jamku (1,0 ml média, RPMI 1640 s 2 mM L-glutamínu a 5 % teplom aktivované hovädzie fetálne sérum). Platne sa inkubovali cez noc v inkubátore s atmosférou CO2 pri teplote 37 °C, počas tejto doby sa jamky spojili (jedno zdvojenie, takže množstvo buniek na jamku bolo asi 5 x 103).
K hostiteľským bunkám sa pridali mikroorganizmy Šeptala intestinalis (z tkanivových kultúr) v množstve v pomere asi 3 : 1, teda asi 15 x 106 mikroorganizmov na jamku. Výsledkom tohto pomeru bolo, že sa infikovalo asi 50 % hostiteľských buniek.
Lieky sa rozpustili v DMSO, vode alebo metanole (v závislosti od rozpustnosti) na roztoky koncentrácie
1,0 mg/ml. Tieto roztoky sa skladovali pri -70 °C. Všetky zriedenia v týchto experimentoch sa uskutočňovali v kompletnom tkanivovom kultivačnom médiu. Všetky zriedenia sa skúšali v troch jamkách.
Médium (obsahujúce čerstvo zriedené lieky) sa nahradzovalo každé tri až štyri dni.
Šiesty deň po pridaní parazitov a liekov sa na bunkách zisťuje toxicita. Kontrolné bunky s liekmi, ale bez parazitov sú študované z niekoľkých hľadísk: konfluencia, morfológia buniek a či sú prítomné mŕtve alebo plávajúce bunky. Bunky inkubované iba s parazitmi sú kontrolované z hľadiska infekčnosti parazitov (prítomnosť parazitofómych vakuol). Bunky inkubované s parazitmi a liekmi sa hodnotia z hľadiska toxicity pre hostiteľské bunky a množstva prítomných parazitofómych vakuol (či je veľké, stredné, malé).
Na desiaty deň sa do kultivačných jamiek pridá 100 μΐ 10 % SDS (cieľová koncentrácia 0,5 %), aby došlo k prasknutiu membrán hostiteľských buniek a uvoľnili sa mikrosporidie. Celkové množstvo parazitov v každej jamke sa stanoví zisťovaním alikvotného množstva hemacytometrom. Výsledky sa vyjadrujú v percentách inhibície (v pomere k počtu infikovaných buniek bez prídavku lieku).
Výsledky ukazujú obrázky 1 až 4.
Príklad 5
Toxoplasma gondii
Nitazoxanid a desacetylnitazoxanid sa testovali proti parazitom, konkrétne proti Toxoplasma gondii kmeň RH, udržovanému opakovanými pasážami myšami. Bunkové kultúry fibroplastov MRC5 od firmy Bio-Merieux, Francúzsko, boli v kultivačných platniach s 96 jamkami inokulované týmto kmeňom Toxoplasma gondii. Do každej kultivačnej jamky (s výnimkou 8 kontrolných jamiek použitých ako negatívna kontrola) sa pridalo 200 čerstvo odobratých tachyzoitov. Po 4 hodinách inkubácie sa do týchto kultúr pridali zriedené roztoky liekov.
Nitazoxanid (NTZ) a desacetylnitazoxanid (dNTZ) sa skúšali v koncentráciách v rozmedzí medzi 8 x 104 a 40 mg/1. Lieky sa najskôr rozpustili v DMSO pri koncentráciách 2 mg/ml a potom sa postupným riedením v kultivačnej pôde pripravili v potrebných koncentráciách. Nedošlo ku vzniku zrazenín.
Tieto zriedenia liekov sa pridali ku kultúram (na každé zriedenie 8 jamiek) a nasledovala inkubácia kultivačných platní počas 72 hodín. Potom boli kultúry fixované studeným metanolom. Rast Toxoplasma gondii sa zisťoval na prístroji ELISA pomocou králičej protilátky proti Toxoplasma gondii značenej peroxidázou. Pre každú jamku sa zaznamenala hodnota optickej hustoty.
Výsledky sa prezentujú grafom, v ktorom sa vynášajú údaje optickej hustoty proti koncentrácii lieku v kultúre. Štatistický rozbor spočíval v regresnej analýze pri intervale spoľahlivosti 95 % a stanovení kriviek závislosti dávka/odozva z hodnôt optickej hustoty pre každý liek.
Jedna platňa bola kontaminovaná Giemsou na zistenie jej cytopatického účinku na kultúry.
Boli uskutočnené tri oddelené experimenty. V každom experimente sa pre každú zlúčeninu použili dve kultivačné platne; v každej kultivačnej platni sa pre každú koncentráciu lieku použilo 8 replikačných jamiek.
Výsledky
V troch súpravách pokusov boli získané podobné výsledky. Grafické znázornenie výsledkov jedného reprezen tatívneho pokusu pre každý liek je ukázané na obrázkoch 5a, b, c a 6a, b, c.
Nitazoxanid (obrázky 5a, b, c)
Pri koncentráciách v rozmedzí 10’4 mg/1 a 0,3 mg/1 nebol zaznamenaný žiadny inhibičný účinok. Značný efekt mala koncentrácia > 0,6 mg/1 a úplná inhibícia rastu Toxoplasma sa dosiahla pri koncentráciách > 2,5 mg/1. Pri koncentráciách > 2,5 mg/1 však bola na jednobunkovej vrstve zaznamenaná výrazná toxicita.
Mikroskopické skúmanie jednobunkovej vrstvy ukázalo, že NTZ pri koncentrácii 1,25 mg/1 vyvolalo na parazitmi infikovaných bunkách cytopatický efekt vo forme zväčšenia parazitofómych vakuol a zníženia počtu intracelulámych parazitov. Na základe regresnej analýzy možno odhadnúť, že 50 % inhibičný účinok má zriedenie 1,2 mg/’l.
Desacetylnitazoxanid (obrázky 7a, b, c)
S desacetylnitazoxanidom boli dosiahnuté obdobné výsledky: žiadny účinok pri koncentráciách v rozmedzí 10’4 mg/1 a 0,3 mg/1, inhibícia pri koncentrácii > 0,6 mg/1 a výrazná toxicita pri koncentrácii > 2,5 mg/1. Možno odhadnúť, že 50 % inhibičný účinok má zriedenie 1,2 mg/1.
Získané výsledky boli reprodukovateľné v troch oddelených pokusoch pri hodnotení inhibičného účinku lieku na opakovaných kultiváciách pre každú koncentráciu lieku.
Pri NTZ i desacetylnitazoxanidu bolo možné pozorovať pri koncentráciách okolo 1,2 mg/1 výraznú inhibíciu rastu Toxoplasma so zmenami na parazitofóme vakuoly, ale bez výrazných zmien na samotnom parazite.
Tieto výsledky ukazujú, že tieto lieky majú dobrú aktivitu proti Toxoplasma gondii a žc tento terapeutický účinok možno očakávať in vivo pri koncentráciách okolo 1 mg/1 v sére alebo tkanivách.
Príklad 6
Mycobacteria
Bolo zistené, že nitazoxanid má antimikrobiálnu aktivitu proti mykobaktériám tuberkulózy. Nasledujúca tabuľka ukazuje výsledky zisťovania MIC nitazoxanidu a tizoxanidu (NTZdes) proti Mycobacterium intracellular agarovou dilučnou technikou. Tieto výsledky sú založené na niekoľkých experimentoch s použitím agarovej dilučnej techniky na agare Middlebrook, z ktorých každý trval 3 týždne. Získané údaje preukazujú, že nitazoxanid má MIC proti Mycobacteria 2 pg/ml a tizoxanid má MIC 4 pg/ml pri použití štandardného kmeňa Mycobacterium intracellular od ATCC a štandardnej agarovej dilučnej techniky.
MIC (minimálna inhibičná koncentrácia) nitazoxanidu proti Mycobacteria intracellulare
MIC* | |
nitazoxanid | 2 ug/ml |
tizoxanid | 4 μ g/ ml |
*MIC sa stanovili štandardnou agarovou dilučnou technikou počas 3 týždňov s použitím agaru Middlebrook 7H11. V tomto pokuse bol použitý M. intracellular ATCC 13950, štandardný kmeň.
Obrázok 7 je graf založený na štúdiu účinnosti nitazoxanidu proti mykobaktériám vypestovaným v kvapalnom bujóne. Použili sme kolorimetrickú analýzu MTS umožňujúcu stanoviť rast po 4 hodinách v porovnaní s počítaním na agare, ktoré to umožňuje po 3 týždňoch. Ako možno vidieť na údajoch na obrázku 7, pokiaľ sa nitazoxanid pridal 72 hodín po začiatku kultivácie, bolo možné pozorovať bezprostredný účinok na kontinuálny rast v porovnaní s rastom v samotnom kontrolnom médiu. Pri dávke 3 pg/ml nitazoxanidu sa na budúcich 24 hodín rast zastaví a potom ďalšie dva dni pokračuje pomalý rast. Dávka 50 pg/ml pôsobila počas 144 hodín kultivácie dokonale bakteriostaticky.
Príklad 7
Cryptosporidium parvum
Účinok nitazoxanidu proti Cryptosporidiumparvum bol skúšaný na experimentálne infikovaných myšiach. Nitazoxanid bol dodaný firmou Romark Laboratories, L. C. Tampa, Florida.
Celková dávka pre človeka (1 g/deň počas 7 dní = 7 g) bola modifikovaná na použitie pri myšiach podľa Pageta a Bamesa. Ľudská dávka bola násobená faktorom 0,0026 pre myši (vážiace približne 20 g) a získalo sa celkové množstvo lieku potrebné pre každého hostiteľa ráno a večer počas 7 dní nasledujúcich po sebe. Každá myš prijala denne 2,6 mg (7000 mg x 0,0026/7). Dávky boli podávané orálne s použitím plastovej injekčnej striekačky so špeciálne upravenou špičkou ihly (around tip needle).
Dvadsať (20) dvojdenných cicajúcich myších mláďat sa infikovalo orálnym podaním 100 000 oocýst Cryptosporidium parvum získaných z infikovaných teliat. Pred podaním myšiam sa oocysty skoncentrovali pomocou cukomého roztoku technikou opísanou Fayerom a Ellisom. Všetkým myšiam boli odoberané rektálne výtery a denne skúmané modifikovanou kontaminačnou technikou Niehl-Neelsenovou opísanou Graczykom a ďalšími. Oocysty sa objavili v truse 2 dni po orálnej infekcii zvierat. Od tretieho dňa po infekcii zvierat bolo desiatim myšiam podávané 1,3 mg nitazoxanidu ráno a večer 7 dní po sebe nasledujúcich, zatiaľ čo 10 zostávajúcich myší sa použilo ako neliečená kontrola. Rektálne výtery boli odoberané denne všetkých sedem dní liečby a každý deň sedem dní nasledujúcich po ukončení liečby. Oocysty boli suspendované v oleji a pod mikroskopom počítané v 100 poliach.
Výsledky
Výsledky ukázané v nasledujúcej tabuľke jasne dokazujú, že nitazoxanid podávaný v dennej dávke 2,6 mg/deň 7 po sebe nasledujúcich dní bol účinný proti Cryptosporidium parvum a redukoval počet oocýst v truse infikovaných myší, ako vyplýva z porovnania s kontrolnými zvieratami. Skúšaný liek znížil na konci tretieho dňa liečby uvoľňovanie oocýst do stolice pri 6 z 10 liečených myší. Na siedmy deň na konci liečby bola táto produkcia oocýst celkom eliminovaná a všetky liečené zvieratá mali negatívne výsledky pri kontrole trusu na rozdiel od neliečených kontrolných myší. Tento efekt trval po ukončenej liečbe najmenej 7 dní, ako vyplýva z negatívneho výsledku kontroly na tretí a siedmy deň po ukončení liečby.
Počet zistených cocýst/pole v olejove, imerzii | ||||||||
3 deň | liečby | posledný deň liečby | 3 deň po liečbe | 7 deň po liečbe | ||||
Myš č. | Kou- | Lieče- | Kou- | Lieče- | Kon- | Lieče- | Kon· | Lieče- |
trolná | na | trolná | na | trolná | ná | trolná | n á | |
skúp. | skup | skúp | skup | skup | skup | skup | sku p. | |
1 | 3.U | 0,0 | 5 0 | 0.0 | 4. C | o.o | 2.0 | 0,0 |
2 | 4,0 | 0.0 | 4.0 | 0.0 | 3,0 | 0.0 | 1.0 | o.o |
3 | 6.0 | 0.0 | S.U | 0,0 | 4.0 | 0.0 | 0,5 | 0.0 |
4 | 3.0 | 2.0 | 3.0 | 0.0 | 2.0 | 0.0 | 1.0 | 0,0 |
5 | 5,0 | 2.0 | 3.f | U,0 | 3.0 | 0,0 | 0.5 | 0,0 |
b | J 0 | 0.0 | 4.0 | 0.0 | 5.0 | 0.0 | 2,0 | 0.0 |
7 | 3,0 | 0.0 | 5.0 | 0.0 | 4.0 | 0.0 | 1.0 | 0.0 |
8 | 5.0 | 1.0 | 5.0 | o.o | 1,0 | o.o | 0.5 | 0.0 |
9 | 3.0 | 3.0 | 3.0 | o.o | 2.0 | 0.0 | 1.0 | 0,0 |
10 | 0,0 | 5,0 | 0,0 | 2.0 | 0,0 | 0.5 | o.o | |
Celkom | 35 | 8,0 | 4.2 | 0,0 | 30 | o.o | 10 | o.o |
Priemer | 3.5 | 0.8 | 4.2 | o.o | 3 0 | o.o | 1.0 | o.o |
Účinnosť | 60 % | 100 % | 100 % | 1 00 % |
Príklad 8
Mycobacterium
Nitazoxanid sa porovnával s antibiotikom izoniazidom. Ako mykobakteriálny kmeň bol použitý BCG (bacil Calmette a Guerin). Citlivosť tohto kmeňa bola tá istá ako pri M. tuberculosis, ale tento kmeň bol neškodnejší a preto nevyžadoval žiadne náročné opatrenia.
Myšiam bolo denne podávané 4 mg lieku na myš v 0,2 ml slnečnicového oleja. Výsledky pri myšiach liečených nitazoxanidom boli porovnateľné so skupinou liečenou izoniazidom.
107 | 105 | |||||
Slezina | Pečeň | Pľúca | Slezina | Pečeň | Pľúca | |
Nitazo | 1,575.000 | 1,575.000 | 57.500 | 68.250 | 70.000 | 50 |
800.000 | 1,550.000 | 122.500 | 65,000 | 87.500 | 75 | |
875 000 | 1,550.000 | 30 000 | 75.000 | 35 000 | 150 | |
950.000 | 750.000 | 75.000 | 60.000 | 60.000 | 50 | |
INH | 475.000 | 1,050.000 | 1 1.000 | 20.000 | 21.250 | 50 |
255.000 | 750.000 | 5.750 | 15.250 | 27.500 | 12$ | |
200.000 | 975.000 | 4 000 | 60.000 20.000 | 52 500 37.500 | 50 50 | |
PBS | 1,500.000 | 2,125.000 | 92.500 | 102.500 | I95.OOO | 750 |
1.525.000 | 1,800.000 | 98 000 | 140.000 | 175.000 | 800 | |
1,925 000 | 1,750.000 | 177.500 | 98 000 | 150 000 | 500 | |
1,675 000 | 1,800.000 | J 17.500 | 105.000 | 150 000 | 750 |
Príklad 9
Fasciola hepatica
Účinnosť nitazoxanidu a desacetylnitazoxanidu proti Fasciola hepatica bola skúšaná in vitro.
Dospelé jedince Fasciola hepatica boli získané zo žlčovodov pečene troch teliat porazených kvôli fasciolosis vo veterinárnom diagnostickom laboratóriu firmy Hardy's Meat Packers, Bunkie, LA. Motolice boli premývané jednu hodinu v sterilnom soľnom roztoku a prenesené do sterilného roztoku alebo RPMI (pH 7,4) na ďalšie 3 hodiny. Potom boli motolice uchovávané cez noc pri 37 °C v prostredí s 5 % CO2 v sterilnej zmesi RPMI-králičie sérum (objemový pomer 50 : 50) alebo v sterilnom RPMI (pH 7,4).
Kultivácia in vitro (37 °C a 5 % CO2) bola uskutočnená modifikáciou spôsobu Ibarra a Jenkinsa (Z. Parasitenkd. 70: 655 - 661, 1984). Pri dodržovaní sterilných podmienok sa motolice dvakrát premyli po 2 - 3 minútach v Hankovom rovnovážnom soľnom roztoku (pH 7,2) a individuálne umiestnili do jamiek kultivačných platni Linbro so šiestimi jamkami obsahujúcimi alikvotných 10 ml zamýšľaného zriedenia lieku v kultivačnom médiu. Toto médium pozostávalo zo zmesi (v objemovom pomere 50 : 50) RPMI a králičieho séra s 2 % králičej krvi a 100 ppm penicilínu a 100 ppm streptomycínu. Použili sa výhradne motolice s normálnou aktivitou a morfológiou.
Zásobné roztoky NTZ alebo jeho metabolitu D-NTZ od firmy Romark sa rozpustili v DMSO (2000 pg/ml) a zriedili v kultivačnom médiu s použitím volumetrickej banky s objemom 100 ml na prípravu špecifickej koncentrácie lieku (100, 50, 25, 10, 5, 3, 1 pg/ml). V každej replikovancj kultúre boli umiestnené dve motolice, jedna v nesubstituovanej kultivačnej pôde s RBC a druhá v kultivačnej pôde bez lieku a s RBC.
Motolice sa skúšali z hľadiska účinkov liekov, ako sa prejavovali smrťou, poruchami hybnosti alebo morfologickými zmenami v porovnaní s nemedikovanými kontrolnými motolicami pomocou zozadu vysvieteného panelu a osvetlenej trikrát zväčšujúcej šošovky.
Výsledky
Experiment 1
V prípade D-NTZ boli motolice pri zriedení lieku 50 a 100 pg počas jednej hodiny mŕtve alebo umierajúce. Pri koncentrácii 25 pg boli po prvej hodine 4 zo 7 motolíc umierajúce, dve boli aktívne a jedna bola malátna; do troch hodín boli všetky mŕtve okrem dvoch malátnych a len jedna motolíca zostala malátna nažive aj po štyroch hodinách. Pri koncentrácii lieku 10 pg bola po 1, 3 a 4 hodinách zaznamenaná obmedzená aktivita a do 7 hodín boli všetky mŕtve alebo umierajúce. V prípade zriedenia na 5 pg a 3 pg bola pri niektorých jedincoch pozorovaná znížená aktivita, pričom v kategórii so zriedením 3 pg bol pozorovaný o niečo slabší nástup; v skupinách s koncentráciou lieku 3 a 5 pg boli do 50 hodín všetky motolice mŕtve okrem jednej malátnej motolice v každej skupine. V skupine s koncentráciou lieku 1 pg bolo po 42 až 74 hodinách pozorované zníženie aktivity a po 91 hodine zostali nažive len 3 aktívne a jedna umierajúca motolica; v tejto skupine 1 pg zostala po 115 hodinách len jedna malátna motolica. V kontrolnej skupine s RBC bola úmrtnosť sledovaná po 66 hodinách (jedna motolica), 91 hodinách (jedna motolica) a 115 hodinách (štyri motolice). V kontrolnej skupine bez RBC boli po 91 hodine nažive všetky motolice a po 115 hodinách bola jedna mŕtva.
Experiment 2
V prípade NTZ bola pri 8 replikovaných prípadoch pozorovaná v porovnaní s D-NTZ o niečo väčšia aktivita skorším ovplyvnením hybnosti a úmrtnosti. Pri skupinách s koncentráciou lieku 100, 50 a 25 pg boli po jednej hodine mŕtve alebo umierajúce všetky motolice okrem jednej v skupine 25 pg, ktorá bola mŕtva po troch hodinách. Vo všetkých ostatných medikovaných skupinách bolo po jednej hodine zreteľné zníženie hybnosti v závislosti od veľkosti dávky. V skupine 10 pg po 16 hodinách prežila len jedna motolica. V skupine s koncentráciou lieku 5 pg boli po 6 hodinách aktívne len 3 motolice a žiadna nebola aktívna po 16 hodinách. V skupine 3 pg boli po 23 hodinách nažive len 2 malátne motolice; tieto však boli po 41 hodinách mŕtve. V skupine 1 pg uhynula do 16 hodín jedna motolica, do 41. hodiny tri motolice a do 74 hodín päť motolíc; po 91 hodinách boli aktívne 3 motolice a po 115 hodinách si uchovala aktivitu jedna motolica. V kontrolnej skupine s RBC bolo po 74 hodinách aktívnych 7 z 8 motolíc, po 91 hodinách 3 a dve motolice zostali aktívne po 115 hodinách. V kontrolnej skupine bez RBC bolo po 74 hodinách aktívnych 6 z 8 motolíc, po 91 hodinách 4 a dve motolice zostali aktívne po 115 hodinách.
V skupinách s vysokou dávkou (25, 50, 100 pg) bola smrť motolíc rýchla a bola spojená s kontrakciou a zvraštením („curling“) ventrálnej časti. Pri medikácii v nižších koncentráciách väčšina motolíc načas spomalila a po smrti alebo pri umieraní bola ochablejšia a sploštená. Počínajúc 91. hodinou sa pri niektorých replikovaných prípadoch stala pre výsledky experimentov obmedzujúcim faktorom kontaminácia. V prípade D-NTZ došlo po 115 hodinách k vytvoreniu súvislého prekrytia dvoch replikovaných platní bakteriálnym alebo pliesňovým porastom s následným úhynom. Pri pokuse s NTZ toto prekrytie a úhyn motolice na celých replikovaných platniach nastalo po 91 hodinách (dve replikované platne) a 115 hodinách (5 replikovaných platní). Pozorovanie po 139 hodine nebolo uznané za platné z dôvodu celkovej kontaminácie väčšiny platní.
Závery
Z pokusov s oboma skúšanými liekmi vyplýva ich značná účinnosť pri usmrcovaní motolíc. O niečo vyššia účinnosť proti F. hepatica bola pozorovaná pri nitazoxanide ako pri desacetylnitazoxanide, jeho hlavnom metabolite, o ktorom sa usudzuje, že je účinný na hepatickej úrovni.
K rýchlej smrti motolíc dochádza pri aplikácii D-NTZ in vitro v koncentráciách >50 pg počas hodiny, pri koncentráciách 25 pg počas 4 hodín a pri koncentráciách 10 pg počas 6 až 7 hodín. Desať pg môže byť vhodnou jednorazovou liečebnou cielenou dávkou lieku pokiaľ farmakokinetické údaje ukazujú, že tkanivová koncentrácia sa udrží >6 až 8 hodín po jednorazovej liečbe.
Silná schopnosť usmrcovať motolice do 74 hodín (tri dni) bola pri oboch zlúčeninách zistená pri koncentráciách 3 pg a 5 pg. Dlhšie prežívanie, ale nie tak dlhé ako pri kontrolných nemedikovaných motoliciach, bolo pozorované pri koncentrácii 1 pg; použitie tohto lieku v tejto koncentrácii na motolice v pečeni počas 3 až 4 dni preto môže mať na parazity nedostatočný účinok.
Príklad 10
Fasciola gigantica
Nitazoxanid bol testovaný na účinnosť proti nedospelým a dospelým jedincom Fasciola gigantica na experimentálne infikovaných králikoch.
Encystované metacerkáric Fasciola gigantica (EMC) boli zhromaždené na celofánovej blane 28 až 35 dní po infekcii slimákov L. calludi miracídiom Fasciola gigantica s použitím techniky, ktorú opísal Abdel-Ghany, v ktorej sú slimáky denne vystavené na 30 minút v čistej odchlórovanej vode z vodovodu umelému svetlu. Získané encystované metacerkárie (EMC) sa 5 až 8 dní skladovali pri 4 °C v chladničke pod hladinou vody, skôr než sa použili na infekciu experimentálnych zvierat.
V tomto výskume bolo použitých štyridsať (40) králikov Boscat s hmotnosťou 1,5 až 2 kg, ktoré boli zaradené do dvoch experimentálnych skupín po 20 jedincoch.
Zvieratá v skupine 1 sa orálne infikovali 35-40 encystovanými metacerkáriami zabalenými v liste hlávkového šalátu vloženom na koreň jazyka zvierat. Papuľky zvierat boli ručne držané zavreté dokým nedošlo k zhltnutiu encystovaných metacerkárií. Táto skupina I sa použila na testovanie nitazoxanidu proti nedospelým štádiám (4 - 5 týždňov starým) Fasciola gigantica.
Zvieratá zo skupiny 2 sa orálne infikovali rovnako ako v prvej skupine 10 až 15 encystovanými metacerkáriami a použili sa na skúšku účinnosti nitazoxanidu proti motoliciam v skorom štádiu dospelosti (starým >10 týždňov).
Desiatim zvieratám v skupine 1 bolo v čase vzdialenom 4 týždne od ich infekcie parazitmi v nedospelom štádiu ich vývojového cyklu podávaných 7 po sebe nasledujúcich dni ráno a večer 35 mg nitazoxanidu. Zostávajúcich 10 zvierat skupiny 1 tvorilo neliečenú kontrolnú skupinu.
Desiatim zvieratám v skupine 2 bolo v čase vzdialenom 10 týždňov od ich infekcie parazitmi v dospelom štádiu ich vývojového cyklu podávaných 7 po sebe nasledujúcich dní ráno a večer 35 mg nitazoxanidu. Zostávajúcich 10 zvierat skupiny 2 tvorilo neliečenú kontrolnú skupinu.
Až do ukončenia experimentu boli všetky zvieratá kŕmené suchou potravou.
Sedem dní po podaní poslednej dávky nitazoxanidu boli všetky zvieratá v oboch skupinách usmrtené. Povrch pečene sa skúmal z hľadiska prítomnosti migrujúcich nekrotických rýh zvlášť pre vývojové štádiá nedospelých parazitov. Tieto nekrotické oblasti boli študované pomocou dvoch chirurgických ihiel s cieľom získať migrujúce juvenilné motolice technikou, ktorú opísal El-Bahy. Pečeň sa rozrezala na malé kúsky zvlášť v okolí migrujúcich rýh a macerovala sa pod mikroskopom s cieľom extrahovať motolice. Brušná dutina a visccrálnc povrchy sa premyli teplou vodou. Táto výplachová voda sa spojila, preliala sitom a skúmala na prítomnosť juvenilných motolíc. Všetky nájdené parazity, vrátane ich telesných častí, sa spočítali pri liečených i neliečených zvieratách v oboch skupinách 1 a 2. Živé motolice mali svetloružovú farbu, boli priesvitné a mali neporušené integumenty, ľahko sa teplou vodou vyplavovali z pečeňových tkanív, zatiaľ čo mŕtve motolice mali farbu sivastú, boli uvoľnené a mali porušené nekrotické povrchy. Účinnosť nitazoxanidu sa vypočítala pomocou vzorca:
% účinnosti = a ' x 100 , a
kde:
a = počet motolíc získaných zo stolice kontrolných zvierat; b = počet motolíc získaných zo stolice liečených zvierat.
Výsledky
Výsledky výskumu uvedené v tabuľke 7 ukazujú výrazný pokles počtu nedospelých motolíc extrahovaných z králičej pečene liečenej skupiny v porovnaní s kontrolnou skupinou. Tento pokles v percentách bol priemerne 46,77 % (v rozmedzí 40 až 60 %).
Tabuľka 7
Účinnosť nitazoxanidu proti nedospelým jedincom (4 týždne starým) Fasciola gigantica pri pokusne infikovaných králikoch
Počet motolíc získaných z králičej pečene | |||
Králik i. | Neliečená kontrola | Liečené králiky | Účinnosť °/o |
4 | 42 % | ||
4 | 12 % | ||
6 | 50 % | ||
4 | 50 % | ||
3 | 40 % | ||
2 | 60 % | ||
J | 40 % | ||
6 | 3 | 5 0 °/o | |
9 | 4 | 50 % | |
10 | 3 | 40 % | |
Priemer | 6,2 | 3.3 | 46,77 % |
Vo vývojovom štádiu ranej dospelosti motolíc, ktorými boli králiky infikované, mal nitazoxanid totálnu účinnosť (100 % redukciu) a pri skúmaní pečene liečených králikov neboli zistené žiadne červy (motolice) v porovnaní so zvieratami z kontrolnej skupiny neliečených králikov, ako je zrejmé z tabuľky 8.
Tabuľka 8
Účinnosť nitazoxanidu proti jedincom v ranom štádiu dospelosti (10 týždňov starým) Fasciola gigantica v pokusne infikovaných králikoch.
Počet motolíc získaných z králičej pečene
Králik í | Neliečená kontrola | Liečené králiky | Účinnosť % |
l | 4 | o.o | 100 % |
0,0 | 100 % | ||
0.0 | 100 % | ||
4 | 0,0 | 100 % | |
0.0 | 100 % | ||
0.0 | 100 % | ||
0.0 | 100 % | ||
o.o | 100 % | ||
0.0 | 100 % | ||
10 | 0.0 | 100 % | |
Priemer | 2.9 | 0.0 | 100 % |
Nitazoxanid podávaný 7 po sebe nasledujúcich dní v dávke 70 mg/deň je mierne účinný proti nedospelým jedincom Fasciola gigantica a kompletne účinný proti týmto parazitom vo vývojovom štádiu ranej dospelosti.
Príklad 13
Schistosoma
Nitazoxanid bol skúšaný proti Schistosoma mansoni a Schistosoma hematobium v experimentálne infikovaných myšiach.
Štyridsať (40) bielych myší s hmotnosťou 30 až 50 g bolo rozdelených do dvoch liečených skupín po 20 zvieratách. Prvá skupina bola infikovaná s 300 - 500 voľnými a aktívnymi cerkáriami Schistosoma mansoni suspendovanými v 0,25 ml destilovanej vody a intraperitoneálnou injekciou podanými všetkým myšiam. Druhá skupina bola infikovaná rovnakým spôsobom, ale cerkáriami Schistosoma hematobium. Obe skupiny potom boli chované v laboratóriu celkovo 70 dní.
Sedemdesiat dní po infikovaní zvierat bolo v každej skupine 10 zvierat liečených nitazoxanidom dávkou 1,3 mg podávanou sedem po sebe nasledujúcich dní orálne ráno aj večer. Sedem dní po ukončení liečby boli usmrtené všetky zvieratá a z pečene každej myši sa perfúziou vlažnou vodou (37 “C) extrahovali červy. Získané jedince Schistosoma pri všetkých liečených a kontrolných zvieratách boli spočítané. Účinnosť nitazoxanidu bola vypočítaná s použitím nasledujúceho vzorca:
% účinnosti = 4 - t> x 100 , a
kde:
a = počet jedincov Schistosoma získaných z výplachu kontrolných zvierat b = počet jedincov Schistosoma získaných z výplachu liečených zvierat.
Výsledky
Výsledky v tabuľkách 9 a 10 jasne preukázali, že nitazoxanid podávaný v dávkach 2,6 mg/deň 7 dni po sebe nasledujúcich bol účinnejší proti Schistosoma hemalobium, kde bolo pozorované zníženie počtu červov o 82,85 % v porovnaní s kontrolnými zvieratami, ako proti Schistosoma mansoni, kde zníženie proti kontrolnej skupine myší dosiahlo len 59,91 %. Tieto výsledky sú konzistentné s výsledkami v správe Abaza a ďalších, podľa ktorej nitazoxanid nebol účinný pri liečbe pacientov proti S. mansoni, ako vyplýva z pozitívneho nálezu vajíčok po liečbe nitazoxanidom.
Tabuľka 9
Účinnosť nitazoxanidu proti dospelým jedincom (13 týždňov starým) Schistosoma mansoni v myšiach.
Počet motolic odstránených z myšej pečene | ||
Μγ3 č. | Neliečené kontrolné myäi | Liečené myši |
1 | 21 | 10 |
2 | 29 | 9 |
3 | 32 | 10 |
4 | 26 | 1 1 |
5 | 24 | 13 |
6 | 19 | 10 |
7 | 20 | 9 |
8 | 24 | 12 |
9 . | 22 | 8 |
10 | 30 | 7 |
Celkom | 247 | 99 |
Priemer/myš | 24,7 | 9,9 |
Účinnosť | 59,91 |
Tabuľka 10
Účinnosť nilazoxanidu proti dospelým jedincom (13 týždňov starým) Schistosoma hematobium v myšiach.
Počet motolic odstránených 2 myšej pečene | ||
Myš č | Neliečené kontrolné myíi | Liečené myši |
i | 18 | 3 |
2 | 16 | 3 |
y | 14 | 2 |
4 | 19 | 2 |
s | 12 | 4 |
6 | 10 | 4 |
7 | 13 | 2 |
12 | 2 | |
9 | 17 | 0,0 |
10 | 9 | 2 |
Celkom | 140 | 24 |
Príemer/myš | 14 | 2.4 |
Účinnosť | 82,85 |
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (21)
1. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa t ý m , že ako účinnú zložku obsahuje aspoň jednu zlúčeninu vybranú zo skupiny zahrnujúcej desacetylnitazoxanid vzorca (I) a nitazoxanid vzorca (II) a ďalej obsahuje farmaceutický prijateľnú kyselinu.
2. Farmaceutická kompozícia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že farmaceutický prijateľná kyselina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej kyselinu citrónovú, kyselinu glutámovú, kyselinu jantárovú, kyselinu etánsulfónovú, kyselinu octovú, kyselinu vínnu, kyselinu askorbovú, kyselinu metánsulfónovú, kyselinu fumarovú, kyselinu adipovú, kyselinu jablčnú a ich zmesi.
3. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačuj úca sa t ý m , že farmaceutický prijateľnou kyselinou je kyselina citrónová.
4. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačuj úca sa t ý m , že farmaceutický prijateľnou kyselinou je kyselina askorbová.
5. Kompozícia podľa nároku 1,vyznačujúca sa t ý m , že farmaceutický prijateľná kyselina je prítomná v množstve, dostatočnom na úpravu pH farmaceutickej kompozície pri styku s vodou na 2 až 6, pričom hmotnostný pomer farmaceutický prijateľnej kyseliny k farmaceutickej kompozícii je medzi 0,01 a 0,5.
6. Kompozícia podľa nároku 5,vyznačuj úca sa t ý m , že hmotnostný pomer farmaceutický prijateľnej kyseliny k farmaceutickej kompozícii je medzi 0,03 a 0,2.
7. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačujúca sa t ý m , že je v pevnej dávkovej forme, pričom aktívne častice sú granulované v prítomnosti aspoň granulačného činidla za vzniku granulovaných aktívnych pevných častíc.
8. Kompozícia podľa nároku 5, vyznačuj úca sa t ý m , že aktívne častice pred granuláciou majú veľkosť častíc menšiu než 200 pm a strednú veľkosť častíc väčšiu než 5 pm.
9. Kompozícia podľa nároku 8, vyznačujúca sa t ý m , že stredná veľkosť aktívnych častíc je medzi 10 a 100 pm.
10. Kompozícia podľa nároku 7, vyznačujúca sa t ý m , že granulované pevné aktívne častice zahrnujú 2 až 99,97 % hmotnostných účinnej zlúčeniny a 0,03 až 10 % hmotnostných granulačného činidla.
11. Kompozícia podľa nároku 7, vyznačujúca sa t ý m , že granulačné činidlo je vybrané zo skupiny zahrnujúcej polyvinylpyrolidón, vodu, alkohol, sacharózu, hydroxycelulózu a ich zmesi.
12. Kompozícia podľa nároku 7, vyznačujúca sa t ý m , že v granulovaných aktívnych pevných časticiach je hmotnostný pomer farmaceutický prijateľnej kyseliny a účinnej zložky medzi 0,01 a 0,5.
13. Kompozícia podľa nároku 7, vyznačujúca sa t ý m , že farmaceutický prijateľná kyselina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej kyselinu citrónovú, kyselinu glutámovú, kyselinu jantárovú, kyselinu etánsulfónovú, kyselinu octovú, kyselinu vínnu, kyselinu askorbovú, kyselinu metánsulfónovú, kyselinu fumarovú, kyselinu adipovú, kyselinu jablčnú a ich zmesi.
14. Kompozícia podľa nároku 2, vyznačuj úca sa t ý m , že je vo forme suspenzie pevných častíc aspoň jednej zlúčeniny vybranej zo skupiny zahrnujúcej desacetylnitazoxanid a nitazoxanid v kvapaline.
15. Kompozícia podľa nároku 14, vyznačujúca sa tým, že pevné častice pred vytvorením suspenzie sú granulovaná v prítomnosti aspoň granulačného činidla za vzniku granulovaných aktívnych pevných častíc.
16. Kompozícia podľa nároku 14, vyznačujúca sa tým, že kvapalinou je voda.
17. Kompozícia podľa nároku 14, vyznačujúca sa tým, že pH suspenzie je medzi 2 a 6.
18. Kompozícia podľa nároku 14, vyznačujúca sa t ý m , že pH suspenzie je medzi 3 a 5.
19. Kompozícia podľa nároku 2, v y z n a č u j ú c a sa t ý m , že je vo forme pasty zahrnujúcej aktívne častice aspoň jednej zlúčeniny vybranej zo skupiny zahrnujúcej desacetylnitazoxanid a nitazoxanid, zmáčadlo a zahusťovadlo.
20. Kompozícia podľa nároku 19, vyznačujúca sa tým, že farmaceutický prijateľná kyselina je vybraná zo skupiny zahrnujúcej kyselinu citrónovú, kyselinu glutámovú, kyselinu jantárovú, kyselinu etánsulfónovú, kyselinu octovú, kyselinu vínnu, kyselinu askorbovú, kyselinu metánsulfónovú, kyselinu fumarovú, kyselinu adipovú, kyselinu jablčnú a ich zmesi.
21. Kompozícia podľa nároku 19, vyznačujúca sa tým, že aktívne častice majú veľkosť častíc menšiu než 200 pm, menej než 10 % hmotnostných týchto častíc má veľkosť väčšiu než 100 pm, menej než 50 % týchto častíc má veľkosť väčšiu než 50 pm a menej než 10 % hmotnostných týchto častíc má veľkosť menšiu než 5 pm.
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US08/852,447 US5968961A (en) | 1997-05-07 | 1997-05-07 | Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide |
US08/887,809 US5965590A (en) | 1994-09-08 | 1997-07-03 | Method for treatment of opportunistic infections with pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide |
US08/887,810 US5856348A (en) | 1994-09-08 | 1997-07-03 | Method for treatment of trematodes with pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide |
PCT/US1998/009229 WO1998050035A1 (en) | 1997-05-07 | 1998-05-06 | Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
SK283947B6 true SK283947B6 (sk) | 2004-05-04 |
Family
ID=27420362
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1511-99A SK283946B6 (sk) | 1997-05-07 | 1998-05-06 | Farmaceutické kompozície tizoxanidu a nitazoxanidu |
SK708-2003A SK283947B6 (sk) | 1997-05-07 | 1998-05-06 | Farmaceutické kompozície tizoxanidu a nitazoxanidu |
Family Applications Before (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SK1511-99A SK283946B6 (sk) | 1997-05-07 | 1998-05-06 | Farmaceutické kompozície tizoxanidu a nitazoxanidu |
Country Status (35)
Country | Link |
---|---|
EP (2) | EP1005342B1 (sk) |
JP (1) | JP3739802B2 (sk) |
KR (2) | KR100426657B1 (sk) |
CN (2) | CN100515420C (sk) |
AP (1) | AP1103A (sk) |
AR (1) | AR057242A2 (sk) |
AT (2) | ATE228839T1 (sk) |
AU (1) | AU740022B2 (sk) |
BG (2) | BG109365A (sk) |
BR (1) | BR9808722A (sk) |
CA (2) | CA2418634C (sk) |
CZ (2) | CZ298269B6 (sk) |
DE (2) | DE69809928T2 (sk) |
DK (2) | DK1222921T3 (sk) |
EA (2) | EA002908B1 (sk) |
EE (1) | EE04870B1 (sk) |
ES (2) | ES2150404T3 (sk) |
GE (1) | GEP20032970B (sk) |
HK (1) | HK1025907A1 (sk) |
HU (1) | HU229641B1 (sk) |
IL (2) | IL132516A (sk) |
IS (1) | IS2087B (sk) |
LV (1) | LV12492B (sk) |
ME (1) | ME00530B (sk) |
NO (2) | NO313983B1 (sk) |
NZ (2) | NZ513881A (sk) |
OA (1) | OA11169A (sk) |
PL (1) | PL193275B1 (sk) |
PT (2) | PT1222921E (sk) |
RO (1) | RO120605B1 (sk) |
SI (1) | SI20149B (sk) |
SK (2) | SK283946B6 (sk) |
TR (1) | TR199902733T2 (sk) |
UA (2) | UA57079C2 (sk) |
WO (1) | WO1998050035A1 (sk) |
Families Citing this family (10)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2467321A1 (en) | 2004-05-14 | 2005-11-14 | Paul J. Santerre | Polymeric coupling agents and pharmaceutically-active polymers made therefrom |
EP1976516B9 (en) | 2006-01-09 | 2013-10-30 | Romark Laboratories, L.C. | Viral hepatitis treatment |
LT2395840T (lt) * | 2009-02-13 | 2020-07-10 | Romark Laboratories, L.C. | Nitazoksanido kontroliuojamo atpalaidavimo farmacinės kompozicijos |
CA2761876C (en) * | 2009-05-12 | 2017-01-03 | Romark Laboratories L.C. | Haloalkyl heteroaryl benzamide compounds |
KR20170141830A (ko) | 2009-06-26 | 2017-12-26 | 로마크 레버러토리즈, 엘.씨. | 인플루엔자를 치료하기 위한 화합물 및 방법 |
BR112014018149B1 (pt) | 2012-01-27 | 2020-09-29 | Siegfried Rhein S.A. De C.V | Composição farmacêutica de nitazoxanida |
CN107105660A (zh) * | 2014-11-11 | 2017-08-29 | 罗马克实验室有限公司 | 使用替唑尼特、其类似物或盐的前药的治疗组合物和治疗方法 |
WO2019148293A1 (en) | 2018-02-02 | 2019-08-08 | Interface Biologics, Inc. | Glass formulations comprising steroid dimers and uses thereof |
JP2023524494A (ja) | 2020-05-01 | 2023-06-12 | リップル セラピューティクス コーポレーション | 眼障害を処置するためのヘテロ二量体組成物と方法 |
WO2022130406A1 (en) * | 2020-12-15 | 2022-06-23 | Cipla Limited | Inhalation composition of nitazoxanide or its derivatives for use in coronavirus disease |
Family Cites Families (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB1437800A (en) * | 1973-08-08 | 1976-06-03 | Phavic Sprl | Derivatives of 2-benzamido-5-nitro-thiazoles |
US4315018A (en) * | 1978-12-07 | 1982-02-09 | Rossignol Jean F | Specific parasiticidal use of 2-benzamido-5-nitro-thiazole derivatives |
US5387598A (en) * | 1994-04-13 | 1995-02-07 | Rossignol; Jean-Francois | Composition and galenic formulation suitable for combatting affections of the lower abdomen |
US5578621A (en) * | 1994-09-08 | 1996-11-26 | Romark Lab Lc | Benzamide derivatives |
-
1998
- 1998-05-06 DK DK02002887T patent/DK1222921T3/da active
- 1998-05-06 WO PCT/US1998/009229 patent/WO1998050035A1/en active IP Right Grant
- 1998-05-06 AT AT98920285T patent/ATE228839T1/de active
- 1998-05-06 EE EEP199900578A patent/EE04870B1/xx unknown
- 1998-05-06 CN CNB2004100459536A patent/CN100515420C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 IL IL13251698A patent/IL132516A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 CZ CZ0391199A patent/CZ298269B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 JP JP54843798A patent/JP3739802B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 EP EP98920285A patent/EP1005342B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 EP EP02002887A patent/EP1222921B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 CZ CZ20060366A patent/CZ298270B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 DK DK98920285T patent/DK1005342T3/da active
- 1998-05-06 BR BR9808722-3A patent/BR9808722A/pt not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 KR KR10-1999-7009930A patent/KR100426657B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 AT AT02002887T patent/ATE281166T1/de active
- 1998-05-06 CN CNB988049007A patent/CN1158074C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 PT PT02002887T patent/PT1222921E/pt unknown
- 1998-05-06 RO RO99-01166A patent/RO120605B1/ro unknown
- 1998-05-06 ES ES98920285T patent/ES2150404T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 TR TR1999/02733T patent/TR199902733T2/xx unknown
- 1998-05-06 SI SI9820037A patent/SI20149B/sl not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 KR KR1020037011334A patent/KR100576646B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 CA CA002418634A patent/CA2418634C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 DE DE69809928T patent/DE69809928T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 PL PL336805A patent/PL193275B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 PT PT98920285T patent/PT1005342E/pt unknown
- 1998-05-06 AU AU72895/98A patent/AU740022B2/en not_active Ceased
- 1998-05-06 CA CA002288003A patent/CA2288003C/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-05-06 GE GEAP19985109A patent/GEP20032970B/en unknown
- 1998-05-06 NZ NZ513881A patent/NZ513881A/xx not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 HU HU0003330A patent/HU229641B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 ES ES02002887T patent/ES2232687T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 EA EA199901012A patent/EA002908B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 SK SK1511-99A patent/SK283946B6/sk unknown
- 1998-05-06 IL IL15579998A patent/IL155799A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 NZ NZ500149A patent/NZ500149A/en not_active IP Right Cessation
- 1998-05-06 DE DE69827417T patent/DE69827417T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-05-06 AP APAP/P/1999/001675A patent/AP1103A/en active
- 1998-05-06 ME MEP-2008-877A patent/ME00530B/me unknown
- 1998-05-06 SK SK708-2003A patent/SK283947B6/sk unknown
- 1998-05-06 EA EA200100956A patent/EA002920B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1998-06-05 UA UA99126626A patent/UA57079C2/uk unknown
- 1998-12-06 BG BG109365A patent/BG109365A/en unknown
-
1999
- 1999-10-19 IS IS5223A patent/IS2087B/is unknown
- 1999-10-29 OA OA9900239A patent/OA11169A/en unknown
- 1999-11-04 NO NO19995406A patent/NO313983B1/no not_active IP Right Cessation
- 1999-12-01 LV LVP-99-170A patent/LV12492B/en unknown
- 1999-12-06 BG BG103958A patent/BG64973B1/bg unknown
-
2000
- 2000-08-17 HK HK00105181A patent/HK1025907A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-04-18 NO NO20021832A patent/NO335781B1/no not_active IP Right Cessation
-
2003
- 2003-04-04 UA UA2003042974A patent/UA74388C2/uk unknown
-
2006
- 2006-12-14 AR ARP060105534A patent/AR057242A2/es not_active Application Discontinuation
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
LT4751B (lt) | Tizoksanido ir nitazoksanido farmacinės kompozicijos | |
US5965590A (en) | Method for treatment of opportunistic infections with pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide | |
SK283947B6 (sk) | Farmaceutické kompozície tizoxanidu a nitazoxanidu | |
CN114903896B (zh) | 贝达喹啉在制备治疗弓形虫病药物中的应用 | |
AU756451B2 (en) | Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide | |
MXPA99010215A (en) | Pharmaceutical compositions of tizoxanide and nitazoxanide | |
CN114917209A (zh) | 白皮杉醇在抗弓形虫感染的应用 |