HU229641B1 - Pharmaceutical compositions containing tizoxanide and nitazoxanide - Google Patents

Description

Ozoxanidot és nítazoxanidoi tartalmazó· gyógyszerkészstmények

A találmány hatóanyagként az

es a

0™C0“CK

-co—y

(II) képletö vegyületek közül legalább egy vegyüietet tartalmazó gyógyszerkészítményekre vonatkozik.

A hatóanyag előnyösen 20 pm-nél kisebb részecskeméretű formában és 10 pm-nél nagyobb átlagos részecskeméretű formában van jelen.

A találmány ezenkívül legalább egy gyógyszerészetileg elfogadható savval stabilizált gyógyszerkészítményekre is vonatkozik,

A gyógyszerkészítmények különösen hasznosak a veszélyeztetett vagy elnyomott immunrendszerű személyek opportunista fertőzéseinek és trematoda fertőzéseknek a kezelésére.

Sürgetően szükség van a veszélyeztetett ímmunrendszerű személyek (AIDS fertőzött, rákos betegek, idősek, öregek, szerváit; líetéses betegek immunszoppresszív gyógyszerrel kezeltek) esetében számos parazita- és baktériálís fertőzés kezelésére alkalmazható módszerek kifejlesztésére. Az érintett másik terület a trematoda fertőzések, különösen a trópusi klímákon. Ezért szükség van olyan gyógyszerkészítményre, amelyet még a veszélyeztetett ímmunrendszerü emberek is képesek elviselni és amely még trópusi környezetben is stabilan tárolható.

Közelebbről a Toxop/asma gooé/r egy protozoon és a központi idegrendszer látens fertőzésének legelterjedtebb okai közé tartozik. Számos egészséges ember meg van fertőzve a parazitával, de az immunrendszer a szervezetet általában ellenőrzés alatt tartja. A Γ. gor?dv az AIDS fertőzött személyeknél az agy leggyakoribb opportunista patogénje. Jelenleg a toxoplazmózás nem csak az AIDS, de az Immunszuppresszlv gyógyszerek (pl. szervátüífetéses betegek által szedett gyógyszerek) szélesebb körű használata miatt is fokozott problémát, jelent. A toxopiazmózíst rendszerint pihmetamin és szulfadizin kombinációjával kezelik. Bár ezek a gyógyszerek hatékonyak, nem pusztítják el a parazita cisztákat, ezért a kezelést fenntartó dózis adagolásával folytatni kell, A toxicitás gyakran szükségessé teszi a gyógyszer bevitel felfüggesztését, különösen ímmunszuppresszió és visszaesés esetén. A statisztikák nem kedvezőek, immunhiányos betegeknél a közzétett halálozási arány kb. 70 %-os és az átlagos túlélés négy hónap,

A erypfosporidiösisf a C/ypfospor/d/om parvum mikroszkopikus protozoon parazita okozza. A normál ímmunfunkciőjú személyeknél a C. panzum által okozott diarrhea intenzív és tartós lehet, de önkorlátozó jellegű. AIDS betegeknél a cryptosporidfális diarrhea gyakran életveszélyes. A becslésesek szerint az AIDS betegek 15-20 %-a szenved ebben Mindeddig nincs konzisztensen hatékony vagy elfogadott terápia a eryptosporidiosis éllen.

Áz AIDS betegeknél a leggyakrabban azonosított patogén az Enferocyfozcw b/eoeus/, amely a betegek közel egynegyedében megtalálható mikrospőrás parazita. Jelenleg ügy tűnik, hogy ez a parazita lehet a HÍV beteg betegeknél tapasztalható gyenge felszívódás, a diarrhea és a súlycsökkenés számos váratlan esete nagy részének kiváltója. Ezekre jelenleg nincs hatékony kezelés.

Számos egyéb Microsporidia faj fertőzi meg a HÍV pozitív betegeket, beleértve az EacephaZ/fozoon óe/fem-et és canZcuZét és a Sapfafa ártesf/mV/s-nak említett új fajokat is. Egy újabb beszámoló arra utal, hogy növekedik az elterjedt Microsporidia fertőzések jelentősége.

Az Zsospora óe$ parazita általi fertőzés kliníkailag megkülönböztethetetlen a Cíyptöspondiosistóí. A trópusi klímán elterjedtebb /, óe/Zét az USA-ban csak a betegek kevesebb, mint 1 %-ánál észlelték, bár tényleges előfordulása valószinöleg nagyobb.

- 5 A Prteumocysds canrt/M általában a protozoán paraziták közé egyes vizsgálatok azt jelzik, hogy egy gombaféle lehet, amellyel bizonyos genetikai szekvenciái közösek. A P. csnrtv rendszerint a tüdőt fertőzi meg (Pneumocystis Cariníi Pneumonia (PCP)) A terápia a közlések alapján betegek mintegy 4Ü-8Ö %-ánál hatásos, a problémák közé tartozik a gyógyszer toxioitása, különösen a veszélyeztetett immnnrendszerü betegeknél Az emberi immunhiány vírus (HÍV) fertőzés számos erélyes jelentkezése között gyermekeknél a PCP első helyen áll, tekintettel nagyfokú elterjedtségére, egyedülálló kormegoszlására és gyakori mortalitására. PCP a leggyakoribb súlyos opportunista fertőzés s HÍV fertőzött gyermekeknél; a PCP előfordulása a profilaktikus kezelés nélküli HÍV fertőzött csecsemőknél az első életévben legalább 12 %~ra becsült Sok gyermek a PCP kialakulását követően rövid idővel meghal.

A Mycobactenum Avinurn Complex (MAC) az igen hasonló mikobakteriális szervezetek, a Mycoőacfedum avwn és az M rntmee/lo/are által kiváltott fertőzésekre utal. Ha MAC fordul elő egy nem immunveszélyeztetett embernél, az rendszerint a iégzőtraktus fertőzésének formájában jelentkezik. AIDS betegeknél a MAC gyakran szétterjed (szétterjedt MAC vagy DMAC), és majdnem minden szervrendszert érinthet. Ez újabb közlemény szerint MAC baktériumot találtak olyan betegek 43 %-ában, akik az AIDS diagnózist követően túlélték a második évet. A szétterjedt MAC betegségre nem alakult ki standard terápia. Rendszerint gyógyszer kombinációkat Írnak elő, és hatásosság esetén a kezelést az egész életen át folytatni kell. Sürgősen szükség van egy hatékonyabb kezelésre.

A HÍV fertőzöttek különösen érzékenyek a Myoobacfenom fuóemu/os/s fertőzésre és a megbetegedés folyamata felgyorsul. Míg a tűdön kívüli tuberkulózis szokatlan a nem HÍV fertőzött betegeknél, gyakran előfordul HÍV pozitív embereknél. A CDC irányt mutatott TB kezeléshez, ami a multi-gyógyszer rezísztens TB (MDR-TS} növekvő előfordulására hívta fel a figyelmet. Az MDRTB-s AIDS betegek között a mortalitás igen magas (kb. 8Ü %) és a betegség előrehaladása rendkívül gyors.

Ezek szerint sürgősen szükség van ezen fertőzések kezelési módszerének kidolgozására az embereknél és állatoknál a megelőzés és kezelés céljából,

Ugyancsak szükség van szélesspektrumű gyógyszerre a tremafoda fertőzések kezelésének egyszerűsítésére. Jelenleg szükség van a specifikus

.. 4 ·· tremafoda patogén diagnosztizálására és azután az adott trematodára specifikus gyógyszer terápia előírására. Számos kevésbé fejtett ország nincs ellátva felszereléssel a specifikus tremafoda diagnosztizálására.. Egy szélesspekírumű gyógyszer kifejlesztése kiküszöbölné a diagnózis iránti követelményeket.

A Sc/j/sfosoma maoscm, a vérmétely a schlstosomlasís kiváltója, ami az ember második legfontosabb trópusi parazita betegsége (a malária után), és az ember legfontosabb tremafoda fertőzése. A ScbZsfosoma baemafobZum egy másik fontos faj, amely az: emberre fertőző. Világszerte több mint 200 millió egyén, beleértve több százezer embert az USA-ban, szenved a sohlsfosomlasistói.

A Fasc/ö/s bepaboa, a közönséges májméteiy, elsősorban birka betegség, de az ember az akaratlan gazda. A parazita erélyes gazda immunválasz esetén is képes a túlélésre. A kezelésre BlfbionoR javasolnak, de ennek alkalmazása az USA-han nincs engedélyezve.

így szükség van olyan gyógyszerkészítményre, amely még trópusi környezetben is stabilan tárolható és amely széles hatásspektrumé a trematodákkal szemben.

Az AIDS, 1998, 10(2) irodalmi helyen immun veszélyeztetett AIDS betegek nítazoxaníd, azaz a (II) képletü vegyüiet 1ÖÜÜ vagy 500 mg-os napi orális dózisával történő kezelését ismertetik.

Állatkísérletekben és emberi klinikai vizsgálatokban megfigyeltük, hogy az (I) és a (II) képletü vegyületeket használva a kezelés hatásossága függ a hatóanyag részecske méretétől és a vegyületek stabilitásától.

A leírt gyógyszerkészítmények alkalmasak az emberek és állatok tremafoda fertőzésének kezelésére, amit a Scd/sfosoma, Igy pl. a Scbrsfosoma maosZdf, a Soó/sfosoma baemeföófom.. a Scbisfosoma mekoapf a Soö/sfosoma /aponfoom, a Sah/stosoma Zrderea/afom; a FascZo/a, pl, a FasoZo/a bepadoa és a FascZo/a gZgaoáca, a FascZofa ö/skZ; és a DZarocoe/Zum deoddtZcum, a FZeferop/ryes befofopbyes és a A-fetagoaZmus yokogaw okoz,

A gyógyszerkészítmények ugyancsak hatékonyak a C^pfospond/um parvum, az Zsospora be//Z, az Enferooytzooo bZeoeusZ, az Eocepha/ifozoor? ZofesíZna/Zs, a Mycoóscfedum foóerccfosis, a MyooőacterZem aws ZoZrace/ZaZare, a Poeomoeysós cartna és a Toxop/asma gondiZ által kiváltott opportunista fertőzések kezelésében veszélyeztetett immunrendszerü betegeken .

A gyógyszerkészítmény szájon át történő bevételre alkalmas formájú lehet, így pl. szilárd adagolási forma, folyékony szuszpenziő vagy paszta.

Az ábrák rövid leírása

A jelen találmány jellegének és célkitűzéseinek teljesebb megértéséhez a csatolt ábrákra utalunk, ahol az 1. ábra az £. fofeséna/fs nitazoxanid által kiváltott százalékos gátlását és gazdasejt életképességét mutatja, a 2. ábra a V. corneae nitazoxanid által kiváltott százalékos gátlását és életképességét mutatja, a 3. ábra az E /nfeséna//s albendazol által kiváltott százalékos gátlását és gazdasejt életképességét mutatja, a 4. ábra a V comeae albendazol által kiváltott százalékos gátlását és gazdasejt életképességét mutatja, az 5. és a 6. ábra az egyes T. gondé' kultúrákban kapod OD értékek görbéjét mutatja a kultúrában levő hafoanyagkoncentráeió függvényében, a 7. ábra egy táblázat, amely a nitazoxanid folyékony táptalajban növekedő mycobactenumokkal szembeni hatékonyságának vizsgálatán alapul, a 8. ábra a Φ pm~nél kisebb mérető hatóanyag részecskék százalékos mennyiségét mutatja.

A jelen találmányhoz tartozik olyan gyógyszerkészítmény beadása, amely hatóanyagként az (I) képletü dezacetíl-nitazoxanídból

OH

O.......GO.....CH„ \ ⁰ és a (II) képletű nitazoxanldbői

O,.N

• CO- · A

álló csoportból kiválasztott legalább egy vegyületet tartalmaz.

-δ A (Η) képietü nitazoxanid (NTZ) a 2-(acetoxi)-N-(5-nitro-2-tiazoil)-benzamfd nemzetközi szabad neve, ezt a vegyületet Rosslgnol és Cavier 1975-ben szintetizálta, 2 g nitazoxanid 1 ml DírtSÖ-ban (dlmetll-szuifoxid) feloldható, A nitazoxanid orálisan könnyen felszívódik.

Mindeddig^ nem volt bizonyíték arra, hogy a (!) és/vagy a (il) képietü vegyület széles körben hatékony lenne a trematoda fertőzésekkel szemben, vagy hogy ezek eléggé nem mérgeznek ahhoz, hogy még az immunveszélyeztetett emberek is tolerálják ezeket.

A nitazoxanid előállítását és bizonyos felhasználásait az US 3,950,351 számú szabadalom, valamint a jelen feltaláló publikációi ismertetik. A dezacetA nitazoxanid, amely az (í) képietü vegyület, esetenként fízoxanld vagy d-NTZ néven ismeretes és a nitazoxanid metaboiitja.

A WÖ 95/28393 számon közzétett nemzetközi bejelentésben a jelen feltaláló eljárást ír le a (II) képietü tiszta vegyület gyártására, valamint az (I) és a (li) képietü vegyületek keverékét tartalmazó kompozíció felhasználására.

Megfigyeltük, hogy az (I) képietü vegyület, (11) képietü vegyület vagy ezek keverékének 17Ö és 520 pm közötti részecskeméretü szilárd részecskéi (átlagos részecskeméret ~ 352 pm) embereknek vagy állatoknak orálisan beadva igen korlátozott hatékonyság űak Az ilyen részecskék hatékonysága távol van a létező gyógyszerekétől és ezért szabályozási vagy kereskedelmi célokra

Kutyákon azt is megfigyeltük, hogy a (I) képietü vegyület és a (II) képi vegyület 5 um-nél kisebb részecskeméretü szilárd részecskéi 50 egyszeri adagként orálisan beadva az állatokban erélyes kedvezőtlen reakciókat váltottak kl.

Felismertük, hogy az emberek és állatok paraziták, baktériumok, gombák és vírusok által okozott fertőzéseinek hatékony és biztonságos kezelésére a gyógyszerkészítményeknek akár szilárd adagolási formában, akár vizes szuszpenzióként a hatóanyag hatékony dózisát 200 p~nél kisebb részecskeméretü szilárd részecskék alakjában kell tartalmazniuk, és az (1) képietü vegyületet és/vagy a (II) képietü vegyületet tartalmazó készítmények esetében az aktív szilárd részecskék átlagos részecskeméretének 10 pm~nél nagyobbnak kell lennie.

Ha az 5 és 200 pm közöli részecskeméret részecskék mennyiségéhez képest a 200 pm-nél nagyobb részecskeméret hatóanyag nagy mennyiségben van jelen, jelentősen csökken a vegyületek kemoterápiás aktivitása. Előnyös esetben a találmány szerinti gyógyszerkészítmények nem tartalmaznak 5 tömeg%~nái nagyobb mennyiségű 200 pm-nél nagyobb részecskeméret aktív szilárd részecskéket Még előnyösebb esetben a találmány szerinti gyógyszerkészítmények lényegében nem tartalmaznak 200 pm-nél nagyobb méretű aktív szilárd részecskéket. Ha az 5 és 200 pm közötti részecskeméretű részecskékhez képest az 5 pm-nél kisebb méretű szilárd hatóanyag részecskék nagy mennyiségben vannak jelen, hátrányos hatásokat okozhatnak állatokon vagy embereken. Ezenkívül megfigyeltük, hogy az 5 pm-nél kisebb méretű részecskék a gyomor-bél rendszerből gyorsabban abszcrbeálódnak a véráramba, és ezért nem annyira hatékonyak a parazitákkal, baktériumokkal, gombákkal és vírusokkal szemben, amelyek rendszerint az állatok és emberek gyomor-bél traktusában élnek.

Szakember nem láthatta előre, hogy az (I) képletű vegyület és a (II) képletű vegyület részecskemérete ilyen szignifikáns hatást okoz ezek antlmlkrobíáiis aktivitásában embereken és állatokon. így például a feltaláló által vezetett vizsgálatban olyan antíparazífa vegyületek, mint az albendazol, a mebendazoL a níkíözamín, a praziguantel és a metronidazol nem matattak ilyen jellegzetes különbséget a részecskemérettől függően az antiparazita aktivitásban embereknél vagy állatoknál. Ezenkívül szakember nem láthatta előre, hogy az (I) képletö vegyület és a (II) képletű vegyület részecskemérete milyen hátrányos hatást gyakorolhat az emberek vagy állatok azon képességére, hogy az említett hatóanyag beadását tolerálják.

Az (I) és a (II) képletű vegyület(ek) beadhatók szilárd adagolási formában vagy vizes szuszpenzióként, és az az előnyös, ha a gyógyszerkészítmény az hatóanyag hatékony dózisát az (I) és/vagy a. (II) képletű vegyület 2ÖÖ pm-nél kisebb méretű szilárd részecskéi formájában tartalmazza, aktív szilárd részecskék átlagos részecskemérete 10 pm-nél nagyobb Coulter® Counter LS 100 készülékkel meghatározva. Ez a készülék 750 nm hullámhosszúságú lézer fényt basznál a 0,4 és 900 pm közötti átmérőjű részecskék méretének meghatározására fénydifTrakciőval A mintákat vízben mértük, amely kis mennyiségű Triton X-10Ö-I tartalmazott a por nedvesítbelóségének és deflokkulálódásának növelésére.

Előnyösen az említett aktív szilárd részecskék átlagos részecskemérete 10 és 1ÖÖ pm, előnyösen 20 és 50 pm közötti. Az előnyös kompozíciók példát:

olyan készítmény, amelynél az említett aktív szilárd részecskék lö tömeg%~nál kisebb mennyiségének a részecskemérete nagyobb 100 pm-néi;

olyan készítmény, amelynél az említett aktív szilárd részecskék legalább 50 iömeg%-a 50 pm-nél kisebb részecskemérető.

Előnyösen az említett aktív szilárd részecskék átlagos részecskemérete 10 és 100 pm, különösen 20 és 50 pm közötti. A készítmény előnyös kiviteli alakja szerint az említett aktív szilárd részecskék 10 %-nál kisebb mennyisége 5 pm~nél kisebb részecskeméretö,

A szilárd adagolási formában vagy szuszpenzióban használt vagy hatóanyagok előnyösen az (I) képletü és a (II) képiető vegyületek 200 pm-nél kisebb részecskeméretű szilárd részecskéinek a keveréke, ahol a említett keverékben az (I) képletü vegyület tömegaránya az (I) képlet és a (II) képiető vegyületek tömegéhez viszonyítva 0,5 és 20 % között, előnyösen 0,5 és 10 % között van.

A találmány a fent leírt olyan gyógyszerkészítményekre is vonatkozik, amelyek előnyösen; legalább egy, gyogyszerészetileg elfogadható savat tartalmaznak. Az ilyen savak példái az alábbiak: cítromsav, glotamínsav, borostyánkősav, etánszulfonsav, ecetsav, borkősav, aszkorblnsav, metánszulfonsav, fumársav, adipinsav, almasav és ezek keverékei. A citromsav igen alkalmas. A említett sav jelenléte javítja az hatóanyag vagy hatóanyagok stabilitását.

A gyogyszerészetileg elfogadható sav és az említett aktív szilárd részecskék tömegaránya előnyösen 0,01 és 0,5 között, előnyösen 0-,03 és 0,2 között van. Előnyösen a sav mennyisége elegendő a sznszpenziö pH-értékének 2 és 6 közé, előnyösebb módon 3 és 5 közé, legelőnyösebben 3,5 és 4,5 közé állítására.

A gyógyszerkészítmény szilárd és folyékony adagolási tormáinak előállítási technikáit és előnyős példáit a WO05/28393 számon közzétett nemzetközi bejelentésben írták le. A kompozíciók előnyösen valamilyen nedvesitőszert és esetleg egy keményítoszármazékot tartalmaznak, így például olyanokat, amelyeket az US 6,578,821 számú szabadalmi leírásban Ismertetnek. A nedvesitöszer, amint azt az US 5,578,621 számú szabadalmi leírás leírja, diszpergálőszerként szolgál.

Az ilyen gyógyszerkészítmények, akár szilárd vagy folyékony adagolási formában vagy pasztaként vagy kenőcsként adott esetben további hatóanyagokat, így például antibiotikumokat, vírus elleni szereket vagy protonpumpa Inhibitorokat tartalmazhatnak. Bár nem tartozik az előnyök közé, az Is lehetséges, hogy az Ilyen gyógyászati készítmények az (!) képletű és/vagy a (II) képletű vegyületek olyan aktív szilárd részecskéit tartalmazzák, amelyeknek a mérete 200 pm~néí nagyobb,

A készítmények tartalmazhatnak olyan excipienseket, amelyeket az orális beadásra alkalmas formák elkészítésére szokásosan alkalmaznak.

Előnyösen a paraziták, baktériumok, gombák és vírusok széles spektrumával szembeni kiváló hatékonyság eléréséhez az említett aktív szilárd részecskék eloszlási tényezője 0,8 és 2 között, előnyösen 1,1 és 1,9 között, legelőnyösebben 1,6 felett van, az említett eloszlási fényezőt a következő képlettel számítjuk ki:

Fsö% (Φ§ο% - Φιο%)/(( Φδο% + Φΐβ%)/2), ahol

Fgo% az eloszlási tényező 90 %-nál:

Φδο% ez említett aktív szilárd részecskék 90 %-ának megfelelő részecskefrakció legnagyobb részecskemérete és

Φ·!ο% az említett aktív szilárd részecskék 10 %-ának megfelelő részecskefrakciő legnagyobb részecskemérete.

A találmány egy speciális megvalósítása szerint a (I) és/vagy a (II) képletű vegyületek részecskéit a fentiekben leirt módszerrel előállítjuk, majd megőröljük, hogy az említett aktív részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete nagyobb, mint 100 pm, az említett aktív részecskék kevesebb, mint 50 %-ának mérete nagyobb, mint 60 pm, és az említett aktív részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete kisebb, mint 6 pm és az átlagos részecskeméret 20 és 50 um között legyen. Az említett aktív részecskéket ezután aktív szilárd részecskéket és legalább egy granuláiószert tartalmazó keverék használatával granuláljuk, A

- 10granulálószer példái: poli(vínihpírrolídon), víz, alkohol, szacharóz, hidroxi-cellulóz és ezek keverékei. Előnyösen legalább egy gyógyszerészetileg elfogadható savat adagolunk be a granulálási eljárás alatt.

A találmány a találmány szerinti kompozíciót tartalmazó szilárd adagolási formákra, igy például tablettákra, diszpergáíható tablettákra, bevont tablettákra, mátrixokra, stb. is vonatkozik. A találmány szerinti adagolási forma tartalmaz például:

szilárd aktív részecskéket 200 pm-nél kisebb részecskemérettel, az említett részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete nagyobb, mint 100 pm, az említett részecskék kevesebb, mint 50 %-ának mérete nagyobb, mint 50 pm és az említed részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete kisebb, mint 5 pm, az átlagos részecskeméret 20 és 50 pm között van;

legalább egy granulálószert; legalább egy nedvesítőszert; legalább egy keményítő származékot és legalább egy gyógyszerészetileg^ elfogadható savat, amelyet előnyösen a granulálási eljárás alatt adagolunk be.

A találmány szerinti folyékony adagolási formák, így pl. vizes szuszpenziók például tartalmaznak hatóanyagként (I) képletű és/vagy a (II) képletű vegyűíetet tartalmazó szilárd részecskéket, amelyeknek a részecskemérete 2ÖÖ pm-nél kisebb, az említett részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete nagyobb, mint 100 pm, az említett részecskék kevesebb, mint 50 %-ának mérete nagyobb, mint 50 pm és az említett részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete kisebb, mint 5 pm;

legalább egy granulálószert;

legalább egy nedvesítőszert;

legalább egy, gyógyszerészetileg elfogadható savat, a szuszpenzíó pH-értéke 2 és 6 között, előnyösen 3 és 5 között, különösen 3,5 és 4,5 között van, legalább egy sűrlioszerk például xénián gyantát, guargyantát, kristályos cellulózt, karúba gyantát, karboxi-metíl-eeliulőzi vagy ezek keverékét.

A találmány orális beadásra alkalmas paszta vagy kenőcs formái például tartalmazzák hatóanyagként az (!) képletű és/vagy a (II) képletű vegyűíetet tartalmazó szilárd részecskéket, amelyeknek részecskemérete 200 pm-nél kisebb,

- η az említett részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete nagyobb, mint 100 pm, az említett részecskék kevesebb, mint 50 %-ának mérete nagyobb, mint 50 pm és az említett részecskék kevesebb, mint: 10 %-ának mérete kisebb, mint 5 pm; legalább egy nedvesítőszert;

legalább egy gyógyszerészeti!^ elfogadható savat, a szuszpenzió pH-értéke 2 és 8 között, előnyösen 3 és 5 között, különösen 3,5 és 4,5 között van, legalább egy sürltöszert, például xantán gyantát, guargyantát, kristályos cellulózt, karúba gyantát, karboxl-metil-celiulózt vagy ezek keverékét tartalmazzák.

A trópusi vagy íntravaginálís alkalmazásra alkalmas paszta vagy kenőcs formák például tartalmaznak hatóanyagként az (I) képletű és/vagy a (II) képletű vegyületet tartalmazó szilárd részecskéket, amelyeknek a részecskemérete 200 pm-nél kisebb, az említett részecskék kevesebb, mint 10 %-énak mérete nagyobb, mint 100 pm, az említett részecskék kevesebb, mint 50 %-énak mérete nagyobb, mint 50 pm és az említett részecskék kevesebb, mint 10 %-ának mérete kisebb, mint 5 pm;

legalább egy nedvesítőszert;

legalább egy gyógyszerészeti lég elfogadható savat, a szuszpenzió pH-értéke 2 és 8 között, előnyösen 3 és 5 között, különösen 3,5 és 4,5 között van; cetlialkoholt és/vagy glicerin származékokat és/vagy propilén-glikölí; legalább egy sűritöszert, például xantán gyantát, guargyantát, kristályos cellulózt, karúba gyantát, karbcxi-metil-celíulózt vagy ezek keverékét tartalmazzák.

Gyógyszerkészítmények előállításának a leírása (1) képletű száraz, tiszta vegyületet és (II) képletö száraz, tiszta vegyületet őrlésnek és azután szitaszövet segítségével osztályozásnak vetünk alá.

Őrlés után az (!) képletű, a (II) képletű vegyület és ezek keverékének részecskéinek részecskeméret megoszlása a 8. ábrán látható. A 8. ábra a Φ pm~ né! kisebb méretű részecskék százalékos arányát mutatja.

A említett ábrából látható, hogy a részecskék kevesebb, mint 10 tömeg% a kb, 5 pm~néí kisebb részecskeméretű;

a részecskék kevesebb, mint 10 tömeg%-a kb, 70 pm-néí nagyobb részecskeméretű;

az említett eloszlási

- 12az átlagos részecskeméret kb. 40 pm; a részecskék eloszlási tényezője mintegy 1,73, tényezőt a kővetkező képlettel számítottuk ki:

Fso% ” (Φδο% - Φιο%)/((Φ§ο% * Φιο%)/2χ ahol

Fao% az eloszlási tényező 90 %-nát;

Φ§ο% a említett aktív szilárd részecskék 90 %-ána.k megfelelő részeoskefrakció legnagyobb részecskemérete és

Φ·ιο% a említett aktív szilárd: részecskék tö %-anak megfelelő részecskefrakció legnagyobb részecskemérete.

Az ilyen kompozíciók specifikus példáit az alábbi táblázatokban adjuk meg.

1. táblázat

Hatóanyagokként (II) képletű és (I) képletű vegyületet tartalmazó, orális bevételre szolgáló diszpergáíhaló tabletták összetétele

Nifazoxanid (99%) * dezacetil-nitazoxaníd (1 %) 200 mg

Mikrokristályos cellulóz

Avlcel pH 102, forgalmazza FMC-USA 118 mg

Crospovídon 25 mg

Magnézíum-szfearáí 3 mg

Kolioidális szilídum-díoxíd 5 mg

Citromsav 10 mg

No, 877720 málna aroma, forgalmazza Róbertét 10 mg

Nátnuro-szahannát 2 mg

2. táblázat

Hatóanyagokként (II) képletű és (I) képletű vegyületet tartalmazó, orális bevételre szolgáló, bevont tabletták összetétele

Nifazoxanid

500 mg 80 mg

Eiözselatinátt. kukorica keményítő	70 mg
Hidroxipropil-metíS-ceOulőz	5 mg
Szacharóz	20 mg
Nátnum-keményítő-glikolát	30 mg
Citromsav	25 mg
Talkum	8 mg
Magnézium-sztearát	7 mg

Bevonatok:

Forró cukor oldat vagy fHmhevonaf amit. az 500 mg hatóanyagot tartalmazó tablettákra vagy részecskékre poriasztunk

3. táblázat leid orális bevételre szolgáló vizes sznszpenzió összetétele

Nltazoxanid (98%) + dezacetil-nitazoxaníd (2 %> Desztillált víz

Náirium-benzoát

Szacharóz

Xénián gyanta

Mikrokristályos cellulóz és karboxí-metíioellulóz-nátríum

Avícel RC-591, forgalmazza FMC-USA

Cítromsav

Nátnum-oítrát-dibidrát

No. 877720 málna aroma, forgalmazza Róbertét No. 33 D és C vörös színezék

2g 100ml

0,2 g 30,5 g

0,2 g

0,8 g 0,2 g mg

125 mg 1 mg

4. táblázat

Hatóanyagokként (II) képletü és (I) képletü vegyületet tartalmazó, orális bevételre szolgáló paszta példája

500 mg

.. 14-

Ásványolaj	lOg
Barna cukor	1 g
Mikrokristályos cellulóz és karboxi-metiloeilulóz-nátrium
Avicel RC-591, forgalmazza FMC-USA	0,8 g
Citromsav	0,2 g

5, táblázat

Hatóanyagokként (H) képletű és (I) képletű vegyületet tartalmazó, intravaginális vagy trópusi alkalmazásra szolgáló paszta vagy kenőcs példája

Nífazoxanid (93%) * dezacetil-nltazoxanld (2 %) 8 g

Cremaphor A6 6 g

Cremaphor Á25 1,5 g

Ásványolaj 7 g

Luvltol EHO 7 g

Glicerín-monoészter 4 g

Cetiíalkohol 3 g

Simetlcone 0,5 g

Germaben H l g

Propslén-giíkol 3,5 g

Desztillált víz 82,5 g

A találmány szerinti gyógyszerkészitmények olyan kompozíciók, amelyek széles hatásspektrummal rendelkeznek a parazitákkal, baktériumokkal, gombákkal és vírusokkal szemben, különösen orális beadás esetén.

Az előzőekben ismertetett gyógyszerkészítmények hatékonysága és biztonságossága állatoknál és embereknél kiváló. Különösen embereken végzett klinikai vizsgálatokban figyeltük meg, hogy a fentiekben leld gyógyszerkészítmények hatékonysága különösen jobb volt parazita fertőzések kezelésénél, mint az ugyanolyan készítmények, amelyek hatóanyagként 170 és 520 pm közötti méretű részecskéket (átlagos részecskeméret = 352 pm) tartalmaztak, még akkor Is, ha a nagyobb részecskéket a betegeknek háromszor nagyobb dózisban és

- ÍS hosszabb időn keresztül adtuk is be. A kapott gyógyulási arányok példáit a 6. táblázat mutatja.

6. táblázat

Az (I) képletö és (II) képietű vegyületekkel végzett humán klinikai vizsgálatok •eredményeinek összehasonlítása, ahol az. (I) és (Ii) képletö vegyületek részecskemérete 170 pm-tól 520 pm-ig terjedt (átlag = 352 pm), az olyan (!) képietű és (ll) képletö vegyületekkel végzett, humán klinikai vizsgálatok eredményeivel, ahol a részecskeméret 5 pm-tól 20 pm-lg terjedt (átlag = 34 ym) fi) képietű vegyölet (98%) ·*· (ll) képletö vegyüiet {£ %)

Részecskeméret '170 - 520 pm Részecskeméret 5 - 200 pm

Dózis = 15 ·--- 50 mg/kg/nap Dózis =15 mg/kg/nap

- 7 napon keresztül 3 napon keresztül gyógyultak száma/összes = gyógyulás! arány %-ban

Parazita

Blastocytystis hominis	12/27 = 44%
Entamoeba bistoiyfioa	29/47 = 82%
Glardsa lamblla	11/37 = 30%
Ascaris lumbrlooides	3/89 = 4%
Tríchurís tnchiura	7/48 = 15%

10/10 = 100% 108/133 = 80%

50/73 = 88% 144/179 = 80%

58/79 = 73%

A gyógyulási arány a 6, táblázatban felsorolt paraziták mindegyikénél észrevehetően jobb volt azoknál a betegeknél, akiket 5 és 200 pm közötti méretű aktív részecskékkel kezeltünk, szemben azokkal, akiket 170 és 520 pm közötti mérető aktív részecskékkel kezeltünk, a statisztikus szignifikancia az egyes esetekben p < 0,02 (standard X² próba használatával). Ezt tapasztaltuk, még akkor is, ha a nagyobb részeeskeméreiö hatóanyag dózisai rendszerint nagyobbak voltak és a kezelés időtartama is gyakran hosszabb volt, mint azoknál a betegeknél, akik olyan gyógyszerkészitményt kaptak, amelyben az aktív részecskék mérete kisebb volt 200 pm-néi. Jelentős hátrányos mellékhatást a betegek egyik csoportjánál sem észleltünk.

Az embereken leírt vizsgái hasonló eredményeket kaptunk állatkísérletekben is.

Ezenkívül az (I) képletü és (11) képletü vegyüietek 50 mg/kílogramm egyedi dózis orális bejuttatása után kutyáknál megfigyelt hátrányos reakciókat nem figyeltük meg széleskörű állatkísérletekben, ahol az (f) képletü és (Ii) képletü vegyüietek részecskemérete 5 és 200 ym között volt (átlag > 10 pm), még ha a vegyületeket ugyanakkora vagy nagyobb dózisban juttattuk is be 90 napon át vagy még hosszabb időn keresztül.

Ezenkívül az említett készítmények stabilak (még ha 40 °C hőmérsékletnek és 65% relatív páratartalomnak tettük Is ki ezeket hat hónapon keresztül, illetve folyékony szuszpenziók esetében, ha vízben szuszpendálínk ugyanilyen feltételek mellett 3 hónapon át), ezért feltételezhető, hogy az aktív alkotórészek nem degradálódnak és a kompozíciók elkészítésük után olyan hosszú időn át megtartják hatékonyságukat, ami gyógyászati és kereskedelmi célokra megfelelő.

A következőkben a gyógyszerkészítmények hatékonyságát szem

1. példa

CRypTOSPÖROLW PAWÜM

Egy előzetes klinikai kísérletben 30 krónikus cryptosporidiális diarrhea-ban szenvedő AIDS beteget orálisan napi 500 -2000 mg nitazoxanlddei kezeltünk. Ha a diarrhea folytatódott, a betegek további négy héten át kaptak nitazoxanidot napi 2000 mg-ig.

Huszonnyolc személy részesült két- vagy több-hetes terápiában és ezek közül 16-nál értékelhető volt a terápiára való reagálás nyolc-hetes kezelés után, Ez utóbbi csoportban 12 személynél 50 %-kal vagy még nagyobb mértékben csökkent a napi bélmozgás gyakorisága és 10 személynél a paraziták észrevehetően csökkentek vagy megszűntek a székletben, 4 személynél pedig az organizmus nem volt detektálható. Hat betegnél mind a klinikai, mind a patológiai reakció kritérium kedvezően alakult.

Azok a betegek akik hosszabb időn át nagyobb napi hatóanyagdózist kaptak, hajlamosabbak voltak a pozitív reakcióra.

A nitazoxankt nyílt („open-laheí”) vizsgálatában AIDS-szel összefüggő cryptosporidiális diarrheánál csökkent bélmozgást dokumentáltunk olyan személyek között, akik napi 500, 1000, 1500 vagy 2000 mg hatóanyagdózíst kaptak. Kísérteti személyeknél az átlagos· CÖ4* szám 42 sejt/mm³ (tartomány ö~ 303 mg sejt/mml, a napi átlagos bélmozgás 8,7 volt 15 hónap átlagéban, Cryptosporídíum parvum oocysták voltak a székletben, és nem találtunk egyéb Ismert emésztőrendszeri patogént. Az azithrornyón vagy paromomydn terápia csaknem mindegyik betegnél hatástalan volt.

hét után 13-ból 9 esetben teljes klinikai gyógyulást (egy-háromszori túlnyomórészt alaktartó széklet naponta), és 13-ból 4 esetben részleges klinikai gyógyulást (a napi széklet ürítés legalább 50 %-os csökkenése vagy a széklet konzisztencia változása ügy, hogy legalább 75 %~a alaktané) tapasztaltunk. A vizsgálat végén 11 esetből 8-nái a parazita teljesen eltűnt és másik három esetben lényegesen csökkentek az oocysta szintek. Hajlam mutatkozott a jobb reagálásra napi 1ÖÖ0 mg vagy mg nagyobb dózisnál és hosszabb kezelési időnél. A kísérlet két résztvevőjénél csalánkiütés jelentkezett; több, mint 90 %~uk négy hétnél hosszabb ideig vett részt a vizsgálatban.

f n v/tra dózis információ:

Nítazoxanidot steril dimetll-szulfoxidban (DMSO) feloldottunk és intakt C. pa/wm oocystával megfertőzött sejt-monörétegekkel szemben vizsgáltuk 100 pg~ ml, 10 μα/ml, 1 pg/ml és 0,1 pg/ml koncentrációnál. Egy második kísérletet is végeztünk, amelyben a nitazoxanidot további 20, 2, 0,2 és 0,02 pg/ml koncentrációban vizsgáltuk. Ezeket a koncentrációkat komplett D'MEM közeggel végzett sorozat hígítással kaptuk, a végső DMSO koncentráció 0,5% volt, A közeg kontroll is 0,5 % DMSO-t tartalmazott.

A kísérlethez 7 mm-es kamrákban szaporított MDSKF5D2 sejtek sejtkultúráját és Gypfosporctí/bm párnámként GCH1 oöcystákat használtunk lyukanként 5 x 10* mennyiségben, és paromomlcint hasonlítottunk (pozitív kontroll) nítazoxaníddal (kísérleti hatóanyag). A felhasznált anyagok Immuné Antiparvum sporozoita nyúl szérum (0/1 %) és fluoreszoeln-konjugált kecske antlnyúl antitest (1 %) voltak.

- 3δToxicitás vizsgálat

S8-lyukú lemez két-két. összefolyó MDBKF5D2 sejt monorétegeket tartalmazó lyukába és két-két, monoréteg nélküli lyukába 200-200 pl, nitazoxanídof 100, 10, Illetve 0,1 pg/ml koncentrációban tartalmazó közeget és a megfelelő kontroll anyagokat helyeztünk. A hatóanyagot a monorétegeken 37 Χοή 8 % CC>2 tartalmú légkörben ínkubáltuk. A 24. órában (1. kísérlet) és a 48, órában (2. kísérlet) MTS-t (Owen-féle oldat) és PMS-t adtunk minden egyes lyukhoz 333 pg/ml, illetve 25 pM koncentrációban. A lemezt előhívás céljából 2 órára visszatettük az inkubátorba, sötétbe. Két óra után mindegyik téiülúszőböl 1Ö0-1ÖÖ pl-t egy új mikrotiter lemezre vittünk át és a leolvasásokat 490 nm-en EL1SA készülékben végeztük. Az eredményeket feljegyeztük és elemeztük. A százalékos toxícitásf a hatóanyagos felüiűszók átlagos optikai sűrűségét (OD) kivonva a kontroll közeges felüiűszók (hatóanyag nélküli) átlagos optikai sűrűségéből (OD) és az eredményt elosztva a kontroll közeg O-D értékével, majd löö-zai megszorozva kaptuk meg:

Oü közeg - Ου hatóanyag x

Intakt 0. parwm oooysta vizsgálat

Lyukanként 5 χ 10⁴ C. parvum ooeystákat nitazoxanídban (100, .20, 10., .2,1, 0,2, 0,1 és 0,02 pg/rnl} inkubáltunk 37 ’C-on (8 % CO2) összefolyó MDBKF5D2 sejt monorétegeken. Az infekció szintjét az egyes lyukakban 24 és 48 óra elteltével Immunofiuoreszeencia analízissel meghatároztuk és elemeztük, A százalékos gátlás mértékét oly módon kaptuk meg, hogy a hatóanyagot tartalmazó lyukakban mért átlagos parazita szám/IÖ mező értékét kivontuk a kontroll közeges (hatóanyag nélküli) lyukakban mért átlagos parazita szám/IÖ mező értékéből és az eredményt elosztottuk a kontroll közegre kapott számmal, majd megszoroztuk 100-zal:

kontroli közegre vonatkozó szám- hatóanyapos tesztre von, szám x 100 kontroll közegre vonatkozó szám

Eredmények

1. kísértet: 24 óra múlva

Vegyület	Koncentráció	Átlag (+SD}*	Százalékos toxieitás	Százalékos gátlás
Fertőzött	0	983,5(± 128,2)	0	0
közegek
Paromomycin	2 mg/ml	482(±47,1)	23,8	51
NTZ	100 ug/mi	Elveszett	88,1	NA**
	10 pg/ml	55,5(±13,5)	05,1	94,4
	1 pg/ml	224,5(±28,5)	8,3	77,2
	0,1 pg/ml	474,5(x29,5)	19,3	51,8

* Parazita szám/10 mező ** A toxfeítás miatt nem áll rendelkezésre

2. kísérlet: 48 óra múlva

Fertőzött	| Koncentráció lö	1 Átlag A-SD)* 2231t25(±90,03}	Százalékos toxieitás 0	Százalékos gátlás 0
Paromomycin	2 mg/ml	580(433,42}	40,8	74,01
NTZ	20 pg/ml	88,75(±13,77)	92,87	96,92
	2 pg/ml	I 113,75(121,38}	24,93	94,90
	0,2 pg/ml	| 1020(±158,48}	18,58	54,29
1	0,02 pg/ml	1041 (±191.46) □	21,23	53,33

* Parazita szám/10 mező

Az 1. kísérletben 10, 1 és 0,1 nitazoxanid koncentrációnál a kapott parazita gátlás szintje 94,4, 77,2; illetve 51,8 % és a sejt toxieitás szintje 5,1, 8,3 és 91,3 %-os veit. Bár '19 pg/ml-nél közel teljes parazita fertőzés gátlás következett be, a magas toxieitási arány evidens volt. 1 pg/ml nitazoxanid koncentráció esetén a parazita gátlás és a sejt toxieitás kedvezőbb volt, mint 2 mg/ml paromomycin koncentráció esetén (77,2 % parazita gátlás és 8,3 % toxieitás 1 pg/ml nitazoxanid

-20esetén, szemben az 51% parazita. gátlással és 23,8 % sejt toxicitássai 2 mg/ml paromornyein koncentrációnál).

A 2, kísérletben mődositottuk a. gyógyszert, hogy jobb dózis eloszlást kapjunk minimális toxicitássai. Ennek eredményeként a kultúrák az 1, kísérletben kapott 24 órával szemben 48 órán át életképesek maradtak, A 48 órás ínkubáiás egyértelműen nagyobb relatív sejt toxícítást eredményezett, ami mindkét kísérletben látható a paromornyein vizsgálatából A nítazoxaníd 28 pg/mí koncentrációnál 48 órás ínkubáiás után még mindig túl mérgező volt, bár a sejt monoréteg továbbra is intakt maradt. Lehetséges, hogy a magas toxicitás, aminek befolyásolnia keli a sejt funkciót, egyúttal hatással van a parazita infekclóra/kífejlödésre. 2 pg/ml nitazoxanid a parazita Infekciót jelentős mértékben gátolta aránylag: alacsony sejt toxicitás mellett. A további hígítások jelentős gátlást és csekély toxícítást eredményeztek. A 2 pg/ml hatóanyag koncentrációnál kapott mérsékelt sejt toxicitás és 94,90 %-os gátló aktivitás azt jelzi; hogy a nitazoxanid 2 pg/mí-nél kedvezőbb hatású, mint a 2 mg/ml (azaz 1800-szer nagyobb) koncentrációban alkalmazott paromornyein /n v/iro C, parwn fertőzés esetén.

/0 v/tro dózis és tárolási információk

Nitazoxanid és dezacetil-nitazoxanid (NTZ és HTZdez) tételeket vizsgáltunk intakt C.parvum oocystákkal és cysta nélküli sporozoitával fertőzött sejt monorétegekkel szemben 10, 1, 0,1 és 0,0'1 pg/ml koncentrációnál. Mindegyik vegyütetet 1ÖÖ % dimetil-szulfoxidban (DMSO) oldottunk fel és steril DMEM-mel felhígítottuk a kívánt koncentrációra, A nitazoxanid és a kontroll közeg mindegyik koncentrációja állandó 0.,025% OMSO-t tartalmazott,

A kísérlethez 7 mm-es kamrákban tenyésztett MDBKF5D2 sejtkultúráf és C/ypíospomf/üm pa/wnr-ként lyukanként 5 χ 18⁴ GCH1 oocysíál használtunk és a kísérleteket úgy végeztük, hogy a paromomycint (pozitív kontroll) a nltazoxanlddal (kísérleti hatőanyag/gyógyszer) hasonlítottuk össze, A kísérlethez ezenkívül Immuné Anli-Cryptöspondíum parvum sporozoita nyűi szérumot (0,1 %) és fluoreszcein-konjugáít kecske antí-nyűi antitestet (1 %) használtunk fel.

98~lyukú lemez kel-két, összefolyó MD8KF5D2 sejt monorétegeket tartalmazó lyukába és két-kél, monoréteg nélküli lyukába 200-208 pg/ml. nitazoxanid oldatot az előzőekben említett koncentrációkban tartalmazó közegeket és megfelelő kontroll anyagokat helyeztünk. A hafóanyagot/gyégyszert a monorétegeken 37 °C-on 8%-os CG? alatt Inkubáltuk. 48 óra után mindegyik lyukba MTS-t (Owen-íéie oldat) és PMS-í adtunk 333 pg/ml, Illetve 25 yM mennyiségben. A lemezt 2 órára visszahelyeztük az inkubátorba a sötétbe, hogy előhívjuk őket. 2 óra után az egyes felüiúszökhől 188 pl-t áíviítünk egy új mikrofiter lemezre és ELISA készülékben 490 nm-nél leolvasástuk. Az eredményeket feljegyeztük és elemeztük. A százalékos toxicitást a hatóanyagos feiülúszők átlagos optikai sűrűségét (OD) kivonva a kontroll közeges feiülúszők (hatóanyag nélküli) átlagos optikai sűrűségéből (ÖD), az eredményt elosztva a kontroli közeg OD értékével és megszorozva 100-zal kaptuk meg;

A ciiotoxicitás pontokat a következőképpen rendeltük hozzá: 0,5% toxicitás - 0,

-25% toxioitás

28-50 % toxioitás ~ 2, 51--78 % toxioitás és 76toxicitás - 4, Standardként a 8 vagy 1 cifotoxicifás pont tekinthető elfogadható szintű toxícitásnak A 2, 3 vagy 4 toxioitás pont a sejt monoréteggei szemben túl magas toxioitás szintet képvisel .

Intakt C. penzum ocoysta vizsgálat

Lyukanként 5 x 10⁴ C. par/am oocystét ínkubáltunk a fentiekben említett koncentrációjú nitazoxanid oldatokban, 37 °C~on (8 % Cö₂y összefolyó MÖBKF5D2 sejt. monorétegeken. Az infekció szintjét az egyes lyukakban 48 óra elteltével Immunfiuoreszcencía analízissel meghatároztuk és számítógéppel elemeztük. A százalékos gátlás mértékét oly módon kaptuk meg, hogy a hatóanyagos (gyógyszer) teszt lyukakban mért az átlagos parazita szám/mezó értéket kivontuk a kontroll közeges (hatóanyag nélküli) lyukakban mért átlagos parazita szám/mező értékéből és az eredményt elosztottuk a kontroll közegre kapott számmal majd megszoroztuk íöö-zal kontroll közegre vonatkozó szám- hatóanyagos tesztre vonatkozó szám x 100 kontroll közegre vonatkozó szám

Eredmények:

C. parvam oooysta vizsgálat (48 óra után)

Gyógyszer (hatóanyag) Vizes közeg	I Konc. 0	I Parazita I 818,58	±SD ±271,02	Tox./ OD 2,024	±SD ±0,18	% gátlás 0	| % I Tox. J 0	Pont 0
Paromomycin	200	115,75	±44 5	1,219	±0,009	83,02	I 39,79	2
0,025%	0	| 628,50	±171,94	1,798	±1,45	0	10	0
DMSO közeg		I I
NTZ	10	I 11,75	±7,33	0,413	±0,13	98,13	i 77,07	4
		| 39,6?	±13,13	1,618	±0,328	93,89	I 10,09	1
	ο,ι	| 643,42	±229,73	1,878	±0,154	<0	| <o	0
	0.01	i 714,33	±194 79	1,617	±0,072	<Ö	| 10,12	1
Új NTZdez	10	i 13,75	±6,88	0,337	±0,005	97,81	i 81,27	4
	1	ΐ 39,92	±13,49	1,710	±0,033	93,65	4.97	o
	0,1	| 649,86	±152,19	1,508	±0,119	<0	j 16,29	1
	0.01	I 749,33	±139.49	1,721	±0,144	<0	i 4,36	0

Konc.; ug/mi;

Parazita ~~ átlagos parazita szám/mező (12 mezöt elemeztünk);

% gátlás - a parazita fertőzés %-os gátlása;

% tox. - a sejtekre a hatóanyag (gyógyszer) által kifejtett toxlcitás %-ban.

A fentiekből látható, hogy az NTZdez gátló aktivitása ugyanakkora volt, mint a 2. kísérletben az NTZ által kifejtett.

Mind a níiazoxanld. mind a dezacetíí-nitazoxaníd azonos mértékben hatásos volt in vitro a Cryyrtospondw? pa/wm-maí szemben, amikor párhuzamosan vizsgába az egyes vegyületek esetén SS és 94 %~os gátlást a legalsó kaptunk 10, illetve 1 pg/ml-nél. A nitazoxsnídnál az 1 koncentráció, amely 90 % feletti gátlást adott, míg az 50 %-os gátlás κη nitazoxanid koncentrációknál, Így 0,2, 0,1 és 0.,02 pg/ml-nél elérhető volt. Ugyanilyen kísérleti feltételek mellett paromomycht használva pozitív kontrollként az 2ÖÖO-szer kevésbé volt hatásos 2000 pg/ml koncentrációnál 51-83 % közötti gátlássá!.

4. példa

E //V7EST/A/AŐ/S és ki C0EAE4

24-lyukú tenyésztő lemezekre 2RK-13 sejteket (nyúlvese sejtvonal) vittünk fel lyukanként 2,6 x 10^v sejt koncentrációban (1,0 ml közeg; RPMI 1640 2 mM glotaminnai és 5 % hővel inaktíváit totális horjúszérummal). A lemezeket 37 °G~on CO2 atmoszférában egy éjszakán át inkubáltuk, ezalatt a lyukakban a sejtek összefolytak (kétszereződéssel 5 x

A gazdasejtekhez Septafe ínfesártaás (szővetkultúrából származó) organizmusokat adtunk 3:1 arányban a becsült gazdasejfek számára vetítve vagy 15 x 1Ö^S organizmus per lyuk mennyiségben . Ez az arány a gazdasejtek kb. 50 %os fertőződését eredményezte.

A hatóanyagokat DMSÖ-ban, metanolban vagy vízben (az oldhatóságtól függően) feloldottuk 1,9 mg/ml-es törzsadatok készítése céljából A törzsoídatokat -70 ^öC-on tároltuk, A kísérletekhez használt hígításokat komplett szovetkullűra készítettük, Mindegyik hígítást három-három lyukban vizsgáltunk.

A közeget három-négy naponként cseréltük (frissen hígított hatóanyagot tartalmazóra).

A hatodik napon (paraziták és a hatóanyagok, hozzáadása után) meghatároztuk a sejtekre a toxioitást. A kontroll sejtekhez csak hatóanyagot adtunk, parazitákat nem és megvizsgáltuk az összefolyást, a sejtek morfológiáját és az elpusztult vagy lebegő sejtek jelenlétét. A csak parazitákkal inkubáit sejteket megvizsgáltuk annak megállapítására, hogy a paraziták fertőzőek-e (azaz vakuoiák jelenlétére), A parazitákkal és hatóanyagokkal inkubáit

24sejteknél értékeltük a gazdasejt-toxídtásf és a parazitofor vakuolák relatív számát (azaz magas, közepes vagy alacsony).

A tizedik napon 100 pl 10 %-os SDS-t (0,5 % végső koncentráció) adtunk a közeges lyukakhoz a gazdasejt membránok felszakításához, és a microsporidiumok kiszabadításához. Egy aliquol részen hemacitométerrel meghatároztuk az egyes lyukakban jelenlevő paraziták összegét. Az eredményeket mint százalékos gátlást fejeztük ki (a hatóanyagot nem tartalmazó fertőzött sejtekre vonatkoztatva).

Az eredményeket az 1-4. ábra mutatja.

5. példa

TOXOALASMA GOND//

A nítazoxanidot és a dezacetil-nítazoxanidot vizsgáltuk parazitákkal, közelebbről egerekben sorozatos passzálással fenntartott Γοχορ/asma goodk RH törzzsel szemben. MRC5 fibroblaszt (Bio-Merteux, Franciaország) sejtkuitú rakat 96-lyukü mikroiemezeken tenyésztve F gondíl-val beoltottunk. Minden egyes lyukhoz 200 frissen learatott tachyzoítát adtunk, kivéve 8 kontroli lyukat (negatív kontroll) 4 órás inkubálás után a kultúrákhoz hozzáadtuk a hatóanyag hígításokat.

A nítazoxanidot (NTZ) és a dezaeelit-nrtazoxanidot (dNTZ) 8-1Q⁴ és 40 mg/l közötti koncentráció tartományban vizsgáltuk. A hatóanyagokat először DMSObán feloldottuk 2 mg/ml koncentrációban, majd a közeggel sorozat hígításokat készitettünk. Kiválást nem tapasztaltunk.

A kultúrákhoz hatóanyag hígításokat adtunk (mindegyik hígításhoz 8 lyukat .használva) és a lemezeket 72 órán át ínkubáltuk. Ezután a kultúrákat hideg metanollal rögzítettük. A T.gondi növekedés értékelését EU.SA készülékkel végeztük peroxidázzal jelölt házinyúl anti T. gondií antitest használatával. Az optikai sűrűség értékeket mindegyik lyuknál feljegyeztük.

Az eredményeket az egyes lyukakra kapott OD értékeket a kultúrában levő hatőanyagkoncentráció függvényében ábrázolva Ismertetjük. A statisztikai elemzéshez regressziós analízist használtunk 95 %-os megbízhatósági intervallummal és az egyes hatóanyagokra kapott OD értékekből a dózis-válasz görbék meghatározásával.

-25Egy lemezt Giemsa-val szennyeztünk, hogy megvizsgáljuk a kultúrákban a cítopátiás hatást.

Három különálló kísérletet végeztünk. Minden egyes kísérletben két lemezt használtunk minden egyes vegyüíethez; mindegyik lemezen 8 ismétlést (lyukat) használtunk mindegyik hatóanyagkoncentráciöhoz.

A három kísérletsorozatban hasonló eredményeket kaptunk. Az egyik reprezentatív kísérlet eredményeit mutatjuk be grafikusan az egyes hatóanyagok esetére az 5.a, b, c és a 8.a, b, c ábrán.

Nem tapasztaltunk gátló hatást a 1Ö*⁴ és 0,3 mg/l közötti koncentráció tartományban. Észrevehető hatás mutatkozott >0,6 mg/i koncentrációknál a Toxop/asma növekedés teljes gátlásával >2,5 mg/1 koncentrációknál Azonban markáns toxioitást tapasztaltunk a sejt monorétegre a >2,5 mg/1 koncentráció esetén.

A monoréteg mikroszkópos vizsgálata azt mutatta, hogy az NTZ 1,25 mg/1 koncentrációnál a parazitával fertőzött sejteken cítopátiás hatást Indukált, megnövelve a parazitofor vakuolákat és csökkentve a sejteken belüli paraziták számát. A regressziós elemzésből az 5ö %-os gátló koncentráció 1,2 mg/l-re volt becsülhető.

Hasonló eredményeket kaptunk a dezaeefii-nifazoxaníddaí; nem volt hatás a 10' és Ö,3Ö mg/l közötti koncentráció tartományban; gátlás a >0,8 mg/l koncentráció és markáns gátlás a >2,5 mg/l koncentráció esetén. Az 50 %-os gátló koncentráció 1,2 mg/l-re volt becsülhető.

A kapott eredmények három különálló kísérletben reprodukálhatók voltak, a hatóanyag: gátló hatását ismételt kultúrákon minden egyes hatóanyag koncentráció esetén megvizsgáltuk.

Az NTZ és a dezacetil-NTZ esetében egyaránt megfigyelhető volt a Tbxop/asroa növekedés markáns gátlása kb. 1,2 mg/l koncentrációnál, a

- 26 parazitofor vakuolák változtak, maga a parazita azonban nem változott meg észrevehetően.

Ezek az eredmények azt jelzik, hogy ezek a hatóanyagok jó hatást mutatnak T. gondv-vai szemben, és terápiás hatás várható in vivő a szérumban vagy szövetekben biztosított kb. 1 mg/í koncentráció esetén.

WCÖSACTEFdA

Tapasztalataink szerint a nitazoxaníd antimíkrobiálís hatást mutat TB organizmusokkal szemben. A következő táblázat egy olyan kísérlet adatait tartalmazza, amelynek során nitazoxaníd és tizoxanid minimális gátló koncentrációját (MIC) vizsgáltuk Mycobsict&nam fotmce//c/ar~rai szemben, agar hígításos technikával. Az eredmények több kísérleten alapulnak, amelyek mindegyike kb. 3 hétig tartott Middlebrook agar használatával végzett agar hígításos módszerrel. A kapott eredmények azt jelzik, hogy a nitazoxaníd MIC értéke 2 pg/ml, a tizoxanidé 4 pg/ml ATCC-ben letétbe helyezett Mycobact&mim /ntraee/fo/ar standért törzset használva standard agar hígításos vizsgálatban.

Nitazoxaníd és tizoxanid MIC értéke Mycobactenom /nfracefe/enral szemben .......

Nitazoxaníd 2 pg/rnl

Tizoxanid 4 pg/ml ^kei^’’’st^ard'”agar hígításos módszerrel határoztuk meg

Middlebrook 7H11 agar-t használva 3 héten keresztül. Ehhez a kísérlethez az ATCC 1335Ö számon letétbe helyezett M. intracellular törzset használtuk standard

A 7. ábra a nitazoxaníd folyékony táptalajban tenyésztett myoobacteriumokkal szembeni hatékonyságán alapul. MTS kolodmetriás vizsgálatot használtunk, ami lehetővé teszi a növekedés meghatározását 4 óra alatt szemben az agar számlálási módszernél elérhető 3 héttel. Amint az a 7. ábrán közölt adatokból látható, a kultúra iniciálása után 72 órával a nitazoxaníd

- 4. t hozzáadása azonnal hatot a növekedés folytatására, szemben az egyedül kontroll közeget tartalmazó kultúrák növekedésével. A nitazoxanid 3 pg/ml-es dózisa megállította a növekedést a következő 24 órára és a növekedés a következő két napon keresztül is lassú volt. Az. 50 pg/ml dózis teljesen bakfenosztatikus volt a kultúra 144 órás tenyésztése alatt.

7. példa

A nitazoxanid Cryptospöridíum parvom-ra gyakorolt hatását vizsgáltok kísérletileg fertőzött egereken. A nítazoxanidot a Romark Laboratories, L.C., Tampa, Florida, USA szállította.

A teljes humán dózist (í g/nap 7 napon át, azaz 7 g) Plaget és Barnes szerint módosítottuk az egérnél történő használathoz. A humán dózist az egér esetére ö,ÖÖ28-fel megszoroztuk (tömege kb. 20 g), hogy megkapjuk a hatóanyag teljes mennyiségét, ami szükséges volt minden reggel és este 7 egymást követő napon át történő beadáshoz. Minden egyes egér 2,8 mg/nap adagot kapott (7000 mg x 0,0028/7). A dózisokat szájon át juttattuk be lekerekített hegyű tűvel ellátott műanyag fecskendővel.

Húsz (20) 2-napos nem elválasztott egeret fertőzött borjúkból kapott Crypfospondo?? parvum 100.000 oooystájának orális bevitelével megfertőztünk. A bevitelt megelőzően az oocystákaf cukor oldattal betőményítettük a Fáyer & Bilis által leírt módszerrel. Minden egyes egér esetében rektáiis mintát vettünk és naponta elemeztük a Gaczyk és munkatársai által leírt módosított Niehi-Meelsen technika használatával. Az oooysták a székletben az állatok orális fertőzését követően 2 nap múlva jelentek meg. Az állatok fertőzését követő 3. napon 10 egér reggel és este 1,3 mg nítazoxadint kapott, míg a fennmaradó lö egér kezeletlen kontrollként szolgált. Rektáiis mintát vettünk naponta a kezelés 7 napja alatt és a kezelés befejezését kővető 7 napon át. Az oocystákaf olajban szuszpendáltuk és mikroszkóp alatt 100 mezőnként megszámoltuk.

Eredmények

A következő táblázatban látható eredmények világosan jelzik, hogy a 2,6 mg/nap napi dózisban 7 egymást követó napon bevitt nitazoxaníd hatásos volt a C^pfosportcfe? pasvwm-mal szemben csökkentve az ooeysták számát a fertőzött egerek székletében, szemben a kontroll állatokkal. A teszt hatóanyag (gyógyszer) csökkentette az ooeysták számát 10 kezelt egér közül 6-nál a kezelés harmadik napjának végére. A 7 napos kezelés végén az ooeysták száma teljesen lecsökkent:, mindegyik kezelt állatnál a széklet vizsgálat negatív volt összehasonlítva a kezeletlen kontroll egerekkel. Ez a hatás a kezelés után legalább 7 napon át tartott, mint azt a kezelés befejezése utáni 3. és 7. napon

ÍV

; Egér serkontrgil csoport ált ooeysták száma A kezelés utáni j 3. napon kontroll j Kezeit csoport I csoport I csoport j kezeit [kontrol csoport csoport

A kezelés utáni 7.

Kontroll i kezelt csoport i csoport

1	3,0	0,0 15,0	10,0 [ 4,0 10,0 | 2,0	ΐ o,o
2	4,0	0,0 4,0	i 0,0 í 3,0 10.0 h,o j I ’ i	! o,o
3	6,0	Ö,Ö 5,0	| 0,0 j 4,0 j 0,0 i 0,5
4 ~5	3,0 FÖ..................	2,0 3,0 'FF |Fö	|~Ö[ö fjÖ fÖJÖ phO pöö ko |··θ··θ·-·······.............	! 0,0 'ö,q i

o

ΓΐΣ...42!

' 0,ö j 4,C ao Fu luf főj

I 0.0

I 0.0 összesen

Átlag

8,1 CM 80 % j 100 % |:

0.0 koo %

100% sag

8. példa

-29M/CÖSACTER/UM

A nitazoxanidot izoníazid antibiotikummal hasonlítottuk össze, A protokollhoz BCG-t (Badlie de Calmette et Gyárin) használtunk myeobactehum törzsként. Ezen törzs érzékenysége megegyezett az M fcőerou/osrs érzékenységével; de ez a törzs ártalmatlanabb és így nem volt szükség tuberkolózis nagymértékű visszaszorítására.

mg/egér/nap adagot'0,2 ml napraforgóolajban juttattunk be az egerekbe. A nitazoxanlddat kezelt egerek eredménye összemérhető volt az izcniazidct kapott csoportéval.

575 000 1 550 000 1 550 000 750

I H

10' I 10^b

Lép

Nltazo I 1 575 000

I 800 000

875 000 I 950 000

PBS

475 000 |	1 050000	11 000	20 000	21 250 ;	50 {
255 000 |	750 000	5 750	15 250	27 500 |	125 |
200 000 |	975 000	4 000	60 000 20 000	52 500 37 500 í	50 | 50 |
1 500 000 |	2125 000	92 500	102 500	195 000	750 |
1 525 000	1 800 000	98 000	140 000	175000	800 I
1 925 000	1 750 000	177 500	98 000	150 000	500 |
1 075 000 |	1 800 000	117500	105 000	150 000	750 |

FAGC/OLA HERA77CA

A nítazoxaníd és a dezacetil-nitazoxanid ín vitro hatékonyságét vizsgáltuk Fasc/o/a őepaéoa esetében

A kifejtett F. h&p&tíca-t fasciolosis miatt elpusztított 3 borjú májának az epevezetékból nyerték ki a Louisiana Veterinary Medinai Lafeoratory-ban (Hafdy’s Meaí Packers, Bankié, LA, USA). A kinyert anyagot sfent sóoldatban 1 órán át mosták, majd steril sóoldatba vagy RPMI-be (pH 7,4) vitték át további 3 órára. A mételyeket ezután steril RPMI-nyúl szérumban (50:50 ti. arány) vagy steril RPM1ben (pH 7,4) tartották éjszakán át 37 ^:'Οοη 5 %-os CO; atmoszférában

Az in vítro kultúrát (37 °C, 5 % CO;) a módosított Ifearra és Jenkins módszerrel (Z. Parasitenkd. 70:656-661, 1984) állítottuk elő. Steril technika használatával a mételyeket kétszer 2-3 percig mostuk Hank-féle kiegyensúlyozott só oldatban (pH 7,2) és egyenként hat lyukat tartalmazó Linbro lemezek lyukaiba helyeztük, amelyek a hatóanyag (gyógyszer) táptalajjal készített hígításainak' 10 ml-es aliquot részeit tartalmazták. Ez utóbbi 50:50 tf. arányú steril RPMI-nyúl szérumot tartalmazott 2 % nyúl vérrel, valamint löö penicillint és 100 ppm sztreptomícint. Csak a normális aktivitású és mortoíoglájé mételyeket használtuk fel.

A Romark cég által biztosított NTZ-nek vagy metaboiitjának, a D-NTZ-nek a tőrzsoldataít DMSC-ban (2000 pg/ml) feloldottuk és táptalajban hígítottuk 100 mles mérölömhíköt használva, hogy a meghatározott hatóanyag koncentrációkat (100, 50, 25, 10, 5, 3, 1 pg/ml) kapjuk. Minden egyes ismétléshez két kontroll mételyt használtunk, egyet a. RBC nélküli győgyszermenies táptalajban, egyet az RBC-t tartalmazó hatóanyagmentes táptalajban.

A mételyeken megvizsgáltuk a hatőanyagos kezelés hatásosságát, amit az elhalás, a mozgási zavarok vagy a morfológiai változások bizonyítottak a kezeletlen kontroll mételyekhez viszonyítva, hátulról megvilágított panel és megvilágított 3-szores nagyítású nagyiíólencse használatával.

1. kísérlet; A D-NTZ esetében a mételyek 50 és 100 pg-os kezelésnél közel voltak az elpusztuláshoz vagy elhaltak egy órán belül. 7 métely közül négy a 25 pg-os kezelésnél már csaknem elpusztult, kettő aktív volt és egy renyhe volt egy órán belül; három óra alatt a két renyhe métely kivételével mind elpusztult és négy óra elteltével csak egy renyhe métely maradt életben. 10 pg-nál csökkent aktivitást tapasztaltunk 1, 3 és 4 óra elteltével és 7 óra elteltével mindegyik már csaknem: vagy teljesen elpusztult. Egyes egyebeknél csökkent aktivitás volt látható az 5 és a 3 pg-os kezelést kapott csoportnál 24 óra elteltével a 3 pg-os csoportnál a hatás fellépése valamivel lassúbb veit; a 3 és az 5 pg-os kezelő lyukakban minden elhalt 50 éra elteltével, kivéve egy-egy renyhe mételyt mindegyik csoportban. Az aktivitás kismértékű lassulása volt észlelhető az 1 pg-os csoportban 42-74 éra elteltével és csak 3 aktív vagy egy pusztuláshoz közeli állapotban lévő métely maradt életben 91 óra elteltével: 115 éra elteltével csak egy renyhe métely maradt az 1 pg-os csoportban. Az RBC-f tartalmazó kontroll csoportban mortalitás volt megfigyelhető 86 óra elteltével (egy métely), 91 óra elteltével (egy métely) és 115 óra elteltével (négy métely). Az RBC nélküli kontroll csoportban mind életben volt 91 óra elteltével és csak egy hullott el 115 óra elteltével.

2. kísérlet: N'TZ esetében valamivel nagyobb aktivitást tapasztaltunk, korábban változott a mozgékonyság és a mortalitás a 8 Ismétlésben a D-NTZ-véi kapott eredményekhez képest, A 180, 50 és 25 pg-os csoportban mindegyik métely elhalt vagy vagy közei volt az elpusztuláshoz, kivéve egy mételyt 1 óra elteltével a 25 pg-os csoportban, ez 3 óra elteltével pusztult el. A mozgékonyság dózis függő csökkenése volt látható a hatóanyagot (gyógyszert) kapott többi csoport mindegyikénél 1 órától kezdve. 10 pg-nái csak egy métely élte túl a 16 órát. Az 5 pg-os csoportban csak 3 métely volt aktív 8 óra elteltével és egyetlen sem 16 óra elteltével. 23 óra elteltével csak 2 métely maradt életben a 3 pg-os csoportban; ezek 41 óra elteltével hullottak el. Az 1 pg-os csoportban egy métely hullott el 16 óra elteltével, három 41 óra elteltével és öt 74 óra elteltével; három aktív maradt 91 óra elteltével is és egy métely aktív volt 115 éra elteltével is. Az RBC tartalmú kontroll csoportban 8-ból 7 métely volt életben 74 óra elteltével, 3 91 óra elteltével és 2 fülélte a 115 órát. Az RBC tartalmú kontroll csoportban 8 mételyből 6 volt aktív 74 óra elteltével, 4 volt aktív 91 óra elteltével és kettő aktív maradt 115 óra elteltével is.

A mételyek elpusztulása a nagy dózisú csoportokban (25, 50, 100 pg) gyors volt és kapcsolatba volt hozható az összebűzódással és -tekeredéssel. Alacsonyabb gyógyszereséé! szinteknél a legtöbb métely lelassult egy időre és relaxálfabb volt és ellaposodott amikor közel volt az elpusztuláshoz vagy elhalt. A 91. órában kezdődő szennyezés korlátozta a kísérleti eredményeket néhány ismétlésben. A D-NTZ kísérletben jelentős bakteriális vagy gombás felnövekedés következett be 115 éra elteltével és két ismétlés, esetében mortalitást okozott. Az NTZ kísérletben felnövekedés és métely mortalitás -következett be az összes ismétlő lemeznél 91 óra elteltével (2 Ismétlés) és 115 óra elteltével (5 Ismétlés). A 139 óra utáni leolvasások a legtöbb lemez általános szennyeződése miatt nem voltak érvényesnek tekinthetők.

Következtetések

A nfezoxamd erős mételyölé hatására utaltak a vizsgált hatóanyagokkalekkel végzett kísérletek, az F. őepaácáva/ szemben valamivel nagyobb méteiyőlö hatás volt megfigyelhető a nitazoxanid esetében, mint a dezaoetil-nitazoxaníddal, amely annak, fő metabolltja, amiről azí tartják, hogy a máj szintjén aktív.

Gyors mételypusztulás következett be 1 órán belül ín vitro >58 pg D-KTZ hatóanyagszintnél, 4 órán belül 25 pg-nál és 8-7 órán belül 18 pg-nái. A tíz pg megfelelő egyszeri hatóanyag-adag lehet, ha a farmakoklnetíkaí adatok szerint a szövet szintek az egyszeri kezelés után >6-8 órán st fennmaradnak.

Erős méteiyőlö aktivitás volt megfigyelhető 74 óra (3 nap) elteltével mindkét vegyület esetében 3 és 5 pg-os dózisnál. Az 1 pg dózis szintnél meghosszabbodott túlélést figyeltünk meg, ami megközelítette, de nem volt azonos mértékű a hatóanyag nélküli kontroll mételyek túlélésével; ha a májszövetekben levő mételyekhez, ezt a hatóanyag-mennyiséget juttatjuk el 3-4 napon át, ez nem gyakorol megfelelő terápiás hatást a parazitákra.

10. példa

F4SC/OL4 G/GA.AT/C.4

A nitazoxanídot kifejlett és fejletlen Fasciola gígantlcával szemben vizsgáltuk kísérletileg fertőzött nyulakban.

L, calludi csigákat megfertőztünk Fasciola gigantica miracidíumokkal az Abdel-Ghany által leírt technikával, ahol a csigákat naponta 38 percen át mesterséges megvilágításnak tettük ki tiszta, klórmenfesített csapvízben, majd 2835 nap múlva a Fasciola gigantica betokosodott metacercáriáit (EMC) cellofán lapon összegyűjtöttük. A keletkező betokosodott meíaeercahákat (EMC) 4 °C-on tároltuk hűtőszekrényben vízfelszín alatt, amíg kísérteti állatok fertőzésére fel nem használtuk őket.

Negyven (40) darab, 1,5-2 kg testtömegö Boscat nyalat vontunk be a vizsgálatba és két, 20-28 állatot tartalmazó kezelési csoportot alakítottunk ki.

Az 1. csoport állatait orálisan megfertőztük salátaíevélbe burkolt 35-40 darab betokosodott metaeercanával, amelyet az állatok nyelvgyökére toltunk. Az állatok száját kézzel addig tartottuk csukva, amíg a betokosodott metacercariákat te nem nyelték. Az 1. csoport állatait használtuk a nitazoxaníd éretlen szakaszban levő (4-5 hetes) Fasciola giganticával szembeni hatékonyságának meghatározására.

A 2. csoport állatait az előzőekhez hasonlóan orálisan megfertőztük 10-15 darab betokosodott metaeercanával és ezeket használtuk a metazoxanid kifejtett (>10 hetes) mételyekkel szembeni hatásosságának vizsgálatára.

Az 1. csoportból lö állat 35 mg nitazoxanidot kapott reggel és este 7 egymást követő napon át, fertőzésük után 4 héttel, a paraziták életciklusának fejletlen szakaszában. A fennmaradó tíz állat az 1. csoportban kezeletlen kontrollként szolgált

A 2. csoportból 10 állat 35 mg nitazoxanidot kapott reggel és este 7 egymást követő napon át, fertőzésük után lö héttel a paraziták életciklusának kifejlett szakaszában. A fennmaradó tíz állat a 2. csoportban kezeletlen kontrollként szolgáit.

Mindegyik állatot száraz táplálékkal etettünk a kísérletek befejezéséig.

Az utolsó nitazoxaníd dózis beadása után hét nappal minden egyes csoportból az összes nyírtat leoltok. A máj felületén megvizsgáltuk a nekrotikos migráló barázdák jelenlétét, különösen a parazita ciklus fejletlen szakaszában. Ezeket a nekrotikos területeket két orvosi tü használatával vizsgáltuk, hogy eltávoiifsuk a fiatal migráit mételyeket az El-Bahy által leírt technikával. A májakat kis darabokra szeleteltük, különösen a migrációs barázdák körül és mikroszkóp alatt maceráitok, hogy a jelen lévő mételyeket kinyerjük. A hasüreget és a zsígerek felületét meleg vízzel lemostuk, A vizet azután összegyűjtöttük, leszűrtük és megvizsgáltuk fiatal mételyek kimutatása céljából. Az 1. és a 2. csoportban mind a kezelt, mind kezeletlen állatokból a kapott parazitákat és azok részeit összeszámoltuk. Az élő mételyek rózsaszínű pálcikákként láthatók, az áttetsző részek az érintetten burkok, amelyek a májszövetből meleg vízzel könnyen extrahálhatők, míg az elhalt mételyek lazák, szürkés színűre fakultak és töredezett, nekrotíkus felületet mutattak. A nitazoxanid hatásosságát a következő képlettel számítottuk ki:

x 100 ahol a = a kontroll állatok székletéből kinyert mételyek száma b = a kezelt állatok székletéből kinyert mételyek száma.

Eredmények

A vizsgálat eredményei, amint azt a 7. táblázatban közreadjuk, azt mutatták, hogy a kezeit csoportban jelentős csökkenés volt a a nyulak májából kinyert fejletlen mételyek számában a kontroll csoporthoz képest. A csökkenés százalékos mértéke a számítások alapján 46,77 % volt (40-60 % között).

7. táblázat

A nitazoxanid kifejletlen (4 hetes) F. g/ganáoá-vai szembeni hatásossága kísérletileg fertőzött nyuiakban

A májból kinyert mételyek száma
Nyűi sorsz.	Kezeletlen kontroll	Kezelt nyűi	%-os hatásosság
1	7	4	42%
2	7	4	42 %
3	6	3	50%
4	8	4	50%
5	5	3	40%
6	5	>2	60 %
7	5	3	40%
8	8	3	50%
9	8	4	50 %
10	5	3	40%
Átlag	6,2	3,3	46,77 %

- 35 Fertőzésük korai kifejlett szakaszában a nitazoxanid teljes hatást mulatott <100 %-os csökkenés) és nem volt métely látható a kezelt nyulak májának vizsgálata során, szemben a kezeletlen kontroli állatokkal, mint az a 8. táblázathői látható.

8. táblázat

A nitazoxanid korai fejlettségű (18 hetes) F. g/ganédá-val szembeni hatásossága kísérletileg fertőzött nyálakban

A 70 mg/nap dózisban 7 egymást követe napon bevitt nitazoxanid mérsékelten hatásos volt a Fasc/o/a gígaohoa kifejletlen állapotával szemben és teljesen hatásosnak bizonyait a parazita korai fejlettségi szakaszában.

13.

A nitazoxanidef megvizsgáltuk Soö/sfosoma mansooévai és Soá/stosoma bemafob/um-mai szemben kísérletileg fertőzött egerekben.

Negyven (40) darab, 30 - 80 g közötti tömegű fehér egeret két kezelési csoportra osztottunk, csoportonként 20-20 egeret véve. Az első csoportot ö_;25ml desztillált vízben szuszpendált 300-500 Soőisfosoma mansonf szabad aktív cérnádéivá! fertőztük meg, amit az egyes egerekbe intraperitoneálls injekció formájában juttattunk be. A második csoportot hasonló módon fertőztük, de 5oó/ctosoma óemafob/um cercanáfckal. Ezt a két csoportot azután összesen 70 napig tartottuk a laboratóriumban.

Az állatok megfertőzése után 70 nappal mindegyik csoportból 10 egeret, kezeltünk nítazoxaníddal orálisan bejuttatott 1,3 mg dózis formájában reggel és este, hét egymást követő napon keresztül. A kezelés befejezése után hét nap múlva az összes egeret leöltük és a mételyeket az egyes állatok májából langyos vízzel (37 *C) végzett perfúzióval extraháltuk. Az extrahált mételyeket összeszámoltuk mindegyik kezelt és kezeletlen kontroll állatnál. A nítazoxanld hatásosságát a következő képlettel számítottuk ki:

a · b %-os hatásosság = -------- x 100 a

ahol: a ~ a kontroll állatok székletéből kinyert mételyek száma b ~ a kezeit állatok székletéből kinyert mételyek száma.

A 9. és 10. táblázatban látható eredmények azt mutatják, hogy a nítazoxanld napi 2,6 mg/nap dózisban egymást kővető 7 napon át bejuttatva hatékonyabb volt a Scb/sfosoma hemafoó/um-mal szemben, ahol 82,85 %-os méteiyszám csökkenés volt megfigyelhető a kontroll állatokhoz viszonyítva, míg a Scó/ofosoma marison/ esetében csak 59,61 %-os mételyszám csökkenést értünk el a kontroll állatokhoz képest. Az eredmények konzisztensek az Abaza és mtársaí által közöitekkel olyan betegekre vonatkozóan, akiknél a nítazoxanld nem volt hatásos az S. manso.néval szemen, amint azt a nítazoxaníddal végzett utókezelés pozitív csiraszáma mutatta.

9. táblázat

A nítazoxanld fejlett (13 hetes) Sob/sfosomá-val szembeni hatásossága egerekben

Kezeletlen kontroli I Kezelt eqér

10. táblázat

Claims (38)

1. A nítazoxaníd fejlett (13 hetes) Soh/sfosema bemafobfam-mal szembeni hatásossága egerekben

   OH

   -----\

   0,<

   V^z' Vh·

   -CO·' (I) és a (11) képietű or ~N !1

   -coO-CO-CH, \ (11) vegyület által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyületet tartalmazó orális gyógyszerkészítmény, ahol a hatóanyag olyan aktív részecskék formájában van jelen, amelyeknek részecskemérete kisebb, mint 200 pm és az átlagos részecskeméret nagyobb, mint 10 pm.
2. 2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az aktív szilárd részecskék átlagos részecskemérete 10 -190 pm.
3. 3. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az aktív szilárd részecskék átlagos részecskemérete 20 - 50 pm.
4. 4. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az aktív szilárd részecskék kevesebb, mint 10 tőmeg%-ának részecskemérete nagyobb, mint 1ÖÖ pm.
5. 5. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az aktív szilárd részecskék legalább 50 fömeg%~ának részecskemérete kisebb, mint 50 pm.

   - 39
6. 6. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az aktív szilárd részecskék kevesebb, mint 10 tömeg%-ának .a részecskemérete kisebb δ pm-néi.
7. 7. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol ez aktív szilárd részecskék eloszlási tényezője 0.8 és 2 között van és ez eloszlási tényezőt a következő k&r

   F§0% “ (φ 99% “ φ 5.0%) ' ((Φ 90%··φ ’tö%) / 2)

   F_So% ez eloszlási tényező 90 %-náf;

   é<!0% az aktív szilárd részecskék 90 %-ának megfelelő ré és

   V 59% >/» az aktív szilárd részecskék

   0/„ gfelelő legnagyobb részecskemérete.
8. 8. Az 1. igénypont szerinti készítmény, ahol az aktív szilárd részecskék eloszlási tényezője 1,1 és 1,9 között van. és az eloszlási tényezőt a következő képlettel számoljuk ki;

   FsS% ~ (Φ 99% ·- φ 50%) ί ((Φ 99% ·* Φ 59%) ' 2) ahol

   F_9Ö% az eloszlási tényező 90 %-nál φ-%% sz aktív szilárd részecskék S0 %-ának. megfelelő részecskefrakció legnagyobb részecskemérete és

   Φ _Kl% az aktív szilárd részecskék lő %-ának megfelelő részecskefrakció legnagyobb részecskemérete.
9. 9. Hatóanyagként az (I) képletü // (0 es a (Π) kí '-'Χ / ·

   Ο,Ν' δ''

   ΝΗ...........GÖΟ...Ν

   CO-CH, vegyület által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyüietet és győgyászatilag elfogadható sav egy stabilitást javító- mennyiségét tartalmazó orális gyógyszerkészítmény.
10. 10. A 9. igénypont szerinti készítmény, ahol a győgyászatilag elfogadható savat a cítromsav, glutaminsav, borostyánkősav, elánszulfonsav, ecetsav, borkősav, aszkorbinsav, metánszulfonsav, fumársav, adiplnsav, almasav és ezek keverékei által alkotott csoportból választjuk.
11. 11. A 9. igénypont szerinti készítmény, ahol a győgyászatilag elfogadható sav és az aktív szilárd részecskék tömegaránya 0,01 - 0,5.
12. 12. A 9. igénypont szerinti készítmény, ahol a gyógyászatlíag elfogadható sav és az aktív szilárd részecskék tömegaránya 0,03 - 0,2.
13. 13, Hatóanyagként az (I) képletű

    OH

    O.,N

    NH-CO' és a (II) képletű

    41 -Μ

    O--CO-CH,

    OJ

    NH·—CO·· (H) vegyület által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyület alkalmazása immunveszélyeztefett emlősben a C/yp/osp.mcfem patvum, fsospora be/E Efíterocytzoen b/eaeusí Epcephataxo?· znfes&nafe, Mycobaateníjm teb&rcelösis.. Mycobacfebum av/um mtracefo/are, Poeomocysás earw és Toxop/asma gondv által alkotott csoportból kiválasztott mikroorganizmus által okozott fertőzés kezelésére használható gyógyszerkészítmény előállítására, ahol a hatóanyag 200 pm-nál kisebb részecskeméretű és 10 pm~néi nagyobb átlagos részecskeméretü aktív részecskék formájában van jelen,
14. 14. A 13. Igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a hatóanyag 20 - 50 pm átlagos részecskeméretü részecskék formájában van jelen.
15. 15. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a gyógyszerkészítmény legalább egy gyógyászatííag elfogadható savat ís tartalmaz.
16. 16. A 15. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a gyógyászatííag elfogadható savat a citromsav, glutamlnsav, borostyánkősav, etánszulfonsav, eoetsav, borkősav, aszkorbinsav, metánszulfönsav, fumársav, adípinsav, almasav és ezek keveréke által alkotott csoportból választjuk.
17. 17. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a hatóanyag az (!) képletű vegyület.
18. 18. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a hatóanyag a (II) képletű vegyület.
19. 19. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél az emlős ember és a hatóanyagot napi 500-2000 mg mennyiségben adjak be.

    az (I) képletü

    CLN

    CO

    OH \

    (h és a (II) képletü

    O-CO-CH,

    V (11) vegyület által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyület alkalmazása trematoda által okozott parazita fertőzés kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmény előállítására, ahol a hatóanyag 2ÖÖ pm-nál kisebb részecskeméretö és 10 pm~néi nagyobb átlagos részecskeméretö aktív részecskék formájában van jelen.
20. 21. A 20. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a trematoda a Scb/sfosoma, Fasc/c/a, Fasc/o/ops/s. Cícmeoe//om. .Heferopőyes és őfefagon/bms által alkotott csoportból van kiválasztva.
21. 22. A 21. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a trematoda a .Scri/sfosoma manson/, Scó/sfosoma baemafob/vm, Soü/sfosoma mekongZ, Scb/stescma /apon/cum., Scb/sfosoma mfema/afam, Fasom/a bepaáca, Fase/o/a .grganto, Faso?ofops/s ó/sk/, Ö/crocoe//vm denóbócvm, Heferopbyes befempóyes és Mefagon/mos yokogawa által alkotott csoportból van kiválasztva,
22. 23. A 21. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a hatóanyag 20 - SO pm átlagos részecskeméretö részecskék alakjában van jelen.
23. 24. A 21. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a gyógyszerkészítmény legalább egy gyógyászatHag elfogadható savat is tartalmaz.

    -43 25. A 24. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a gyógyászatílag elfogadható savat a citromsav, glutaminsav, borosíyánkösav, etánszuífonsav, ecetsav, borkősav, aszkorbinsav, metánszulfcnsav, fumársav, adlpinsav, almasav és ezek keverékei által alkotott csoportból választjuk kl,

    2.8. A 21. igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a gyógyászatílag elfogadható sav és aktív részecskék tömegaránya Ö,Ö1 - 0,5.
24. 27. A 21. Igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a hatóanyag (!) képietü vegyület.
25. 28, A 21. Igénypont szerinti alkalmazás, amelynél a hatóanyag (ií) képietü vegyület,
26. 29. Gyógyászati hatású tartalmaz az (h paszta helyi beadásra, amely hatóanyagként

    OH és a (i!) képietü

    ο.χ

    -co·

    Λ // .//

    O—CO-CH,

    -co—(\ /.>

    A v (il) vegyület által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyület szilárd részecskéit, ahol a részecskék részecskemérete kisebb, mint 2ÖÖ pm és átlagos részecskemérete nagyobb, mint 10 pm;

    és a paszta tartalmaz legalább egy süntőszert;

    legalább egy nedvesítőszert; és . 44 legalább egy győgyászatilag elfogadható savat, és a paszta pH-értéke 2 és 6 közötti
27. 30. A 29^:. igénypont szerinti, gyógyászati hatású paszta, amely a cetilaikohol giíceríd-származékok, propilén-glikol és ezek keverékei által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy adalékanyagot is tartalmaz.
28. 31. Granulálószer jelenlétében granulált hatóanyagot tartalmazó gyógyszerkészítmény orális beadásra, ahol a hatóanyag az (I) képietö

    O.

    (0 és a (II) képletű

    O--CO--CH,,

    O₂N ^Ks^z ,z-s.

    'CO' (II) vegyűlet által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyűlet szilárd aktív részecskéinek a tormájában van jelen és az aktív részecskék részecskemérete kisebb, mint 200 pm és átlagos részecskemérete nagyobb, mint 10 pm.
29. 32. A 31. igénypont szerinti készítmény, ahol a granolálöszert a poiívinilplrrolidon, víz, alkohol, szacharóz, hidroxi-ceiiulóz és ezek keverékei által alkotott csoportból választjuk ki
30. 33 A 31. igénypont szerinti készítmény, ahol a granulált, aktív, szilárd részecskék legalább egy győgyászatilag elfogadható savat tartalmaznak.
31. 34. A 33. igénypont szerinti készítmény, ahol a győgyászatilag elfogadható savat a cifromsav, glutamínsav, borostyánkösav, etánszulfonsav, ecetsav, borkősav, aszkorbínsav, metánszulfonsav, fumársav, adipínsav, aimasav és ezek keverékei által alkotott csoportból választók kí.
32. 35. A 33. igénypont szerinti készítmény, ahol a gyógyászatilag elfogadható sav és a hatóanyag tömegaránya 0.01 - 0.5.

    38. Hatóanyagot, nedvesítőszert és keményítő-származékot tartalmazó gyógyszerkészítmény orális beadásra, ahol a hatóanyag az (I) képletü

    0, (0 és a (lí) képletű .x

    }.·«· (lí)

    CH, vegyüíet által alkotott csoportból kiválasztott legalább egy vegyüíet szilárd aktív részecskéinek az alakjában van jelen és a részecskék részecskemérete kisebb, mint 200 pm és átlagos részecskemérete nagyobb, mint 10 pm.
33. 37. A 38. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, amely legalább egy gyógyászatilag elfogadható savat is tartalmaz
34. 38, A 36, Igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol az aktív részecskéket granuláloszer jelenlétében granuláljuk olyan granulált hatóanyag előállítására, amely 2 - 99.97 tömeg% hatóanyagot és 8,03 · 10 tömeg% granulálószert tartalmaz.
35. 39. A 38. Igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, ahol a granulélőszert. a pölivinitpirrolldon, víz, alkohol, szacharóz, hidroxi-ceMéz és. ezek keverékei által alkotott csoportból választjuk ki
36. 40. Hatóanyag folyékony szuszpenziója orális beadásra, ahol a szuszpenzlő hatóanyagként tartalmaz az (1) képletű

    O.J

    N (0 és a (II) képletű

    O_?N co~

    Ος-CO-CH, vegyület által alkotott csoportból kiválasztott legalább: egy vegyület szilárd részecskéit, ahol a hatóanyag olyan aktív részecskék alakjában van jelen, amelyeknek a részecskemérete kisebb, mint 200 pm és átlagos részecskemérete nagyobb, mint 10 ym; és legalább egy gyógyászatilag elfogadható savat tartalmaz és a szuszpenzió pHértéke 2 - 6.
37. 41. A 40. igénypont szerinti szuszpenzió, ahol a szuszpenzió pH-értéke 3 5.
38. 42. A 40. igénypont szerinti szuszpenzió, amely granulálószert is tartalmaz.

    A meghatalmazott eöoou.s,

    Si’SÍJSi.'foO'!! ;>·> V®<3j$így SifíJáíi T&24 S<;ö3SiK$:, & Os;

    iVsA-A sr ?.Oc6j.-;is3 Csüy Si-SiJSÍiUsí; VgVWft szaziaiekos g esttel