SK102698A3 - Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors - Google Patents

Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors Download PDF

Info

Publication number
SK102698A3
SK102698A3 SK1026-98A SK102698A SK102698A3 SK 102698 A3 SK102698 A3 SK 102698A3 SK 102698 A SK102698 A SK 102698A SK 102698 A3 SK102698 A3 SK 102698A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
diphenylstilbene
group
alkyl
ome
cox
Prior art date
Application number
SK1026-98A
Other languages
English (en)
Inventor
Cameron Black
Mario Girard
Daniel Guay
Zhaoyin Wang
Original Assignee
Merck Frosst Canada Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9605647.8A external-priority patent/GB9605647D0/en
Application filed by Merck Frosst Canada Inc filed Critical Merck Frosst Canada Inc
Publication of SK102698A3 publication Critical patent/SK102698A3/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof
    • C07D295/182—Radicals derived from carboxylic acids
    • C07D295/185—Radicals derived from carboxylic acids from aliphatic carboxylic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/095—Sulfur, selenium, or tellurium compounds, e.g. thiols
    • A61K31/10—Sulfides; Sulfoxides; Sulfones
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/15—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings
    • C07C311/16—Sulfonamides having sulfur atoms of sulfonamide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings having the nitrogen atom of at least one of the sulfonamide groups bound to hydrogen atoms or to an acyclic carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/22—Sulfonamides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by singly-bound oxygen atoms
    • C07C311/29—Sulfonamides, the carbon skeleton of the acid part being further substituted by singly-bound oxygen atoms having the sulfur atom of at least one of the sulfonamide groups bound to a carbon atom of a six-membered aromatic ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/16—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/22—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/24—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and doubly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D295/00—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D295/16—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms
    • C07D295/18—Heterocyclic compounds containing polymethylene-imine rings with at least five ring members, 3-azabicyclo [3.2.2] nonane, piperazine, morpholine or thiomorpholine rings, having only hydrogen atoms directly attached to the ring carbon atoms acylated on ring nitrogen atoms by radicals derived from carboxylic acids, or sulfur or nitrogen analogues thereof

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

DifenyIstilbénové deriváty, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie
Oblasť techniky
Vynález sa týka nových zlúčenín, ktoré sú prekurzormi zlúčenín inhibujúcich COX-2 selektívne vzhľadom na COX-1. Prekurzory sú in vivo premieňané na selektívne inhibítory. Vynález tiež zahrnuje niektoré farmaceutické prostriedky na liečenie ochorenia ovplyvňovaných COX-2 obsahujúce zlúčeniny vzorca I.
Doterajší stav techniky
Vynález sa týka farmaceutických prostriedkov obsahujúcich prekurzory. inhibítora COX-1 na liečenie ochorení podmienených cyklooxygenázou.
Nesteroidné protizápalové liečivá vykonávajú väčšinu svojho protizápalového, analgetického a antipyretického účinku a inhibujú hormóny prostaglandín G/H syntázy, ktorá je tiež známa ako cyklooxygenáza. Zo začiatku bola známa len jedna forma cyklooxygenázy, ktorá zodpovedá cyklooxygenáze-1 (COX-1) alebo konštitutívnemu enzýmu, ako bol pôvodne identifikovaný v hovädzích semenných vačkoch. Nedávno bol klonovaný gén pre druhú inducibilnú formu cyklooxygenázy, cyklooxygenázu-2 (COX-2), ktorý bol sekvenovaný a charakterizovaný na začiatku z kuracích, myšacích a ľudských zdrojov. Enzým sa odlišuje od COX-1, ktorý bol klonovaný, sekvenovaný a charakterizovaný z rôznych zdrojov vrátane oviec, myší a človeka. Druhá forma cyklooxygenázy, COX-2, je rýchlo a ľahko indukovateľná veľkým počtom činidiel vrátane mitogénov, endotoxínov, hormónov, cytokínov a rastových faktorov. Pretože prostaglandíny majú fyziologické a patologické úlohy, autori vynálezu došli k záveru, že konštitutívny enzým COX-1 je z väčšej časti zodpovedný za endogénne bazálne uvoľňovanie prostaglandínov a preto je dôležitý pri svojej fyziologickej funkcii ako zachovaní integrity gastrointestinálneho traktu a prietoku krvi obličkami. Autori naopak došli k záveru, že indukovateľná forma COX-2 je zodpovedná hlavne za patologické účinky prostaglandínov, kde dochádza k rýchlej indukcii enzýmu ako odpoveď činidla, ako sú zápalové činidlá, hormóny, rastové
-2faktory a cytokíny. Selektívny inhibítor COX-2 bude mať podobné protizápalové, antipyretické a analgetické vlastnosti ako bežné nesteroidné protizápalové liečivá a naviac bude inhibovať hormónmi indukované kontrakcie maternice a bude mať potenciálne protirakovinové účinky, ale bude mať zmenšenú schopnosť indukovať niektoré z vedľajších účinkov založeriých na tomto mechanizme. Tieto zlúčeniny by mali mať najmä zníženú schopnosť vyvolávať gastrointestinálnu toxicitu, zníženú schopnosť vyvolávať vedľajšie účinky v obličkách, znížený účinok na dobu krvácania a možno aj zmenšenú schopnosť indukovať záchvaty astmy u astmatických pacientov citlivých na aspirín.
Tieto zlúčeniny budú naviac tiež inhibovať prostanoidne indukovanú kontrakciu hladkého svalstva zabránením syntézy kontraktilných prostanoidov a tým môžu byť využiteľné pri liečení bolestivej menštruácie, predčasného pôrodu, astmy a porúch spojených s enozinofimi. Budú tiež použiteľné pri liečení Alzheimerovej choroby, na zníženie kostného úbytku najmä u žien po menopauze (t.j. liečení osteoporózy) a na liečenie glaukomu.
Stručný opis potenciálnej použiteľnosti inhibítorov cyklooxygenázy-2 sa uvádza v článku John Vane, Náture, diel 367, str. 215 až 216 a v článku Drug News and Perspectives, diel 7, str. 501 až 512, 1994.
V literatúre je známe veľké množstvo derivátov stilbénu. Toda a ďalší v Chem. Commun, 1234-5 (1984) opisujú dialdehydy A a diol B je opisovaný v Tsuji a ďalší, J. Am. Chem. Soc.. 88, 1289-92 (1966) a diol C bol pripravený autormi Dhawau a ďalší, J. Org. Chem., 45, 922-4 (1980). Pri týchto zlúčeninách sa neuvádza žiadna použiteľnosť a nemajú ani substituent R1 podľa predkladaného vynálezu.
CH2OH ch2oh (A) X = H alebo Cl x X (B) X = H Tsuji (C) X = Cl Dhawan
-3Štruktúra D sa opisuje ako použiteľná pri liečení hyperlipidémie ako sa uvádza v Hashimoto a ďalší, európska patentová prihláška 424,541 (2. máj 1991).
X, Y sú halogén
R je Ci.6 alkyl n je 0, 1 alebo 2
Tieto zlúčeniny (D) nemajú druhý uhlíkatý substituent X podľa predkladaného vynálezu a nemajú príbuznú účinnosť.
Podstata vynálezu
Predmetom vynálezu je zlúčeninu vzorca I a použitie tejto zlúčeniny na liečenie ochorení podmienených COX-2 podávaním netoxického terapeuticky účinného množstva zlúčeniny vzorca I pacientovi v prípade potreby. Tieto zlúčeniny sú prekurzormi zlúčeniny, ktoré inhibujú COX-2 selektívne vzhľadom na COX-1. Prekurzory sa in vivo premieňajú na selektívne inhibítory.
Vynález tiež zahrnuje farmaceutické prostriedky na liečenie ochorení podmienených COX-2 s obsahom zlúčenín vzorca I.
-4V jednom uskutočnení vynález zahrnuje novú zlúčeninu Δ/zorca I rovnako ako aj použitie zlúčeniny na liečenie ochorení podmienených COX-2, ktorý zahrnuje podávanie netoxického terapeuticky účinného množstva zlúčeniny vzorca I alebo jej terapeuticky prijateľných solí pacientovi v prípade potreby.
kde
X je a) CH2OH,
b) CHO,
c) CO2R4, alebo
d) CONR42,
Y je a) CH3, alebo
b) CH2OR5,
R1 je zvolená zo skupiny
a) S(O2)CH3.
b) S(O2)NH2,
c) S(O2)NHC(O)CF3,
d) S(O)(NH)CH3,
e) S(O)(NH)NH2,
f) S(O)(NH)NHC(O)CF3i
g) P(O)(CH3)OH a
h) P(O)(CH3)NH2,
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka,
b) halogén,
c) C-i-6 alkoxy,
d) C1-6 alkyltio,
-5e) CN,
f) CF3,
g) C1-6 alkyl a
h) N3,
R4 je zvolená zo skupiny í
a) atóm vodíka,
b) C-i-6 alkyl a
c) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
1) atóm vodíka,
2) halogén,
3) Ci.6 alkyl,
4) Cv6 alkoxy,
5) Ci_6 alkyltio,
6) OH,
7) CN a
8) CF3, alebo dve skupiny R4 pripojené k rovnakému atómu dusíka môžu tvoriť nasýtený 5, 6 alebo 7-členný kruh prípadne obsahujúci atóm O alebo S alebo ďalší atóm N, pričom uvedený atóm N môže byť substituovaný atómom vodíka alebo skupinou C1.6 alkyl,
R5 je zvolená zo skupiny
a) Cve alkyl,
b) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
3) atóm vodíka,
2) halogén,
3) Ci.6 alkyl,
4) Ci_6 alkoxy,
5) Ci-6 alkyltio,
6) OH,
7) CN,
8) CF3, a
9) CO2R4.
-6Jednu triedu výhodných zlúčenín v rámci predkladaného vynálezu tvoria zlúčeniny, kde R1 je zvolený zo skupiny
a) S(O)2CH3 a
b) S(O)2NH2;
R a R sú nezávisle zvolené zo skupiny
1) atóm vodíka,
2) halogén, zvolený zo skupiny fluór, chlór a bróm.
Ďalšiu skupinu výhodných zlúčenín v rámci tohto uskutočnenia tvoria zlúčeniny, kde
Y je CH3 alebo CH2OC-i-6 alkyl.
Vo vnútri tejto skupiny sa nachádza trieda zlúčenín, kde
Y je a) CH3, alebo
b) CH2OČi.6 alkyl,
R1 je zvolená zo skupiny
a) S(O2)CH3,
b) S(O2)NH2,
c) S(O2)NHC(O)CF3,
d) S(O)NHCH3,
e) S(O)NHNH2, a
f) S(O)NHNHC(O)CF3, a
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka,
b) fluór, chlór a bróm,
c) C-j-4 alkoxy,
d) alkyltio,
e) CN,
f) cf3,
g) CV4 alkyl.
-7 Vo vnútri tejto triedy existuje podtrieda zlúčenín, kde R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
1) atóm vodíka a
2) halogén;
R4 je atóm vodíka alebo metyl a
R5 je C-i-6 alkyl.
Ďalšiu skupinu výhodných zlúčenín v rámci vyššie uvedeného uskutočnenia tvoria zlúčeniny, kde X je CO2R4.
V tejto skupine sa nachádza trieda zlúčenín, kde X je CO2R4,
Y je metyl alebo CH2OR5,
R1 je S(O)2CH3,
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka a
b) halogén;
R4 je zvolený zo skupiny
a) atóm vodíka, alebo
b) Ci.6 alkyl,
R5 je zvolený zo skupiny
a) Ci-6 alkyl,
b) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
1) atóm vodíka,
2) halogén,
3) Cvs alkoxy, a
4) OH.
Vo vnútri tejto triedy existuje podtrieda zlúčenín, kde X je CO2R4,
Y je metyl alebo CH2OR5,
-8R1je S(O)2CH3,
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka a
b) halogén;
R4 je zvolený zo skupiny
a) atóm vodíka, alebo
b) Ci-6 alkyl,
R5 je zvolený zo skupiny
a) Ci-6 alkyl,
b) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
1) atóm vodíka,
2) halogén,
1) 0^6 alkoxy, a
2) OH.
Vynález ilustrujú zlúčeniny z tabuliek II a III.
Na účely tejto špecifikácie zahrnuje definícia alkylu priame, rozvetvené a cyklické štruktúry s uvedeným počtom atómov uhlíka. Príklady alkylu sú metyl, etyl, propyl, 2-propyl, s- a t-butyl, butyl, pentyl, hexyl, 1,1-dimetyletyl, cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl a cyklohexyl. Podobne alkoxy a alkyltio znamená priame, rozvetvené a cyklické štruktúry s uvedeným počtom atómov uhlíka.
Na účely tejto špecifikácie, kde sa definícia objaví dvakrát, ako napríklad „R4“, každý výskyt je pokladaný za nezávislý na každom ďalšom výskyte. V skupine „CONR42“, nemusia byť teda skupiny „R4“ identické.
Na účely tejto špecifikácie znamená halogén F, Cl, Br alebo I.
Nasledujúce skratky majú uvedený význam:
AA = kyselina arachidónová
Ac = acetyl
AIBN = 2,2-azobisizobutyronitril
Bn = benzyl
CHO = vaječník čínskeho škrečka
CMC = 1 -cyklohexyl-3-(2-morfolinoetyl)karbodiimidmeto-p-toluénsulfonát
-9COX = cyklooxygenáza
DBU = diazabicyklo[5,4,0]undek-7-én
DMAP= 4-(dimetylamino)pyridín
DMF = Ν,Ν-dimetylformamid
DMSO= dimetylsulfoxid
Et3N = trietylamín
HBSS = Hanksov vyvážený soľný roztok
HEPES= kyselina N-[2-hydroxyetyl]piperazín-N1-[2-etánsulfónová]
HWB = ľudská úplná krv
KHMDS= hexametyldisilazan draselný
LDA = lítiumdiizopropylamid
LPS = lipopolysacharid mCPBA= kyselina metachlórperbenzoová
MMPP= monoperoxyftalát horečnatý
Ms = metánsulfonyl = mesyl
MsO = metánsulfonát = mesilát
NBS = N-brómsukcínimid
NCS = N-chlórsukcínimid
NIS = N-jódsukcínimid
NSAID= nesteroidné protizápalové liečivo
OxoneR= peroxymonosulfát draselný
PCC = chlórchromát pyridínia
PDC = dichromát pyridínia
r.t. = teplota miestnosti rac. = racemický
Tf = trifluórmetánsulfonyl = triflyl
TFAA= anhydrid kyseliny trifluóroctovej
TfO = trifluórmetánsulfonát = triflát
THF = tetrahydrofurán
TLC = chromatografia na tenkej vrstve
TMPD= N.N.N'.N'-tetrametyl-p-fenyléndiamín
Ts = p-toluénsulfonyl = tosyl
-10TsO = p-toluénsulfonát = tosylát Tz = 1H (alebo 2H)-tetrazol-5-yl So2Me = metylsulfón (aj SO2CH3) SO2NH2 = sulfónamid
Skratky, alkylových skupín Me = metyl Et = etyl n-Pr = normálny propyl i-Pr = izopropyl n-Bu = normálny butyl i-Bu = izobutyl s-Bu = sekundárny butyl t-Bu = terciárny butyl c-Pr = cyklopropyl c-Bu = cyklobutyl c-Pen = cyklopentyl c-Hex = cyklohexyl
Skratky dávok bid = bis in die = dvakrát denne qid = quarter in die = štyrikrát denne tid = ter in die = trikrát denne
Niektoré z opisovaných zlúčenín obsahujú jedno alebo viac centier chirality a môžu tiež poskytovať diastereoméry a optické izoméry. Predkladaný vynález má zahrnovať tak možné diastereoméry ako aj ich racemické formy a rozdelené enantiomérne čisté formy a ich farmaceutický prijateľné soli.
Niektoré z opisovaných zlúčenín obsahujú olefinické dvojité väzby a pokiaľ nie je špecifikované inak, majú zahrnovať geometrické izoméry E a Z.
Zlúčenina vzorca I je použiteľná na zmiernenie bolesti, horúčky a zápalu a radu stavov vrátane reumatickej horúčky, príznakov spojených s chrípkou alebo
-11 s ďalšími vírusovými infekciami, nachladením, bolesťami v krížoch a bolesťami chrbta, bolestivej menštruácie, bolesti hlavy, bolesti zubov, podvrtnutie a vykĺbenie, bolesti svalov, neuralgie, synovitida, artritída, vrátane reumatickej artritídy, degeneratívne ochorenie kĺbov (osteoartritída), dna a zápaly stavcov so stuhnutím, zápaly mazového Vačku, poranenie, stavy po chirurgických a zubárskych zákrokoch. Naviac môže táto zlúčenina inhibovať bunkové nádorové transformácie a metastatický rast tumorov a tým môže byť použitá pri liečení a/alebo prevencii cyklooxygenázou podmienených proliferatívnych porúch, ktoré sa môžu vyskytovať pri diabetickej retinopatii a tumorovej angiogenéze.
Zlúčenina I môže vykazovať v dôsledku premeny in vivo na inhibítor COX-2 inhibičné účinky na prostanoidmi indukovanú kontrakciu hladkého svalstva zabránením syntézy kontraktilných prostanoidov a tým môže byť použiteľná pri liečbe bolestivej menštruácie, astme a ochorení spojených s eozinofilmi. Môže byť tiež použiteľná pri liečbe Alzheimerovej choroby, na zníženie kostného úbytku najmä u žien a po menopauze (t.j. liečení osteoporózy) a na liečenie glaukomu.
Zlúčeniny vzorca I sú prekurzory selektívnych inhibítorov COX-2 a svoju funkciu vykonávajú in vivo na tieto aktívne a selektívne inhibítory COX-2. Aktívne zlúčeniny vytvorené zo zlúčenín podľa predkladaného vynálezu sa opisujú v nasledujúcich dokumentoch, ktoré sú týmto zaradené odkazom: WO 95/00501, publikované 5.1.1995, WO 95/18799, publikovaná 13.7.1995 a US patent 5,474,995 publikovaný 12.12.1995.
V určitých ohľadoch majú zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu výhody proti zlúčeninám opisovaným v uvedených dokumentoch v dôsledku zlepšených farmakokinetických a/alebo bezpečnostných profilov. Všeobecný opis výhod a použitia prekurzorov ako farmaceutický použiteľných zlúčenín sa uvádza v článku Waller a George v Br. J. Clin. Pharmac. diel 28, str. 497 až 507, 1989.
Na ilustráciu uvádzame premenu nasledujúcich zlúčenín podľa predkladaného vynálezu na uvedené selektívne inhibítory COX-2.
-12Príklad Prekurzor
Aktívne liečivo Odkaz
Pat. 5,474,995
Pat. 5,474,995
Pat. 5,474,995
V dôsledku premeny in vivo na zlúčeniny s vysokým inhibičným účinkom proti COX-2 a/alebo špecificky pre COX-2 vzhľadom na COX-1 budú zlúčeniny I použiteľné ako alternatíva k bežným liečivám NSAIS, najmä v prípadoch, kde môžu byť tieto nesteroidné protizápalové lieky kontraindikované, ako je tomu u pacientov s peptickými vredmi, gastritídou, miestnou enteritídou, ulceratívnou kolitídou, divertikulitídou alebo s recidivujúcou históriou gastrointestinálnych poškodení; pri krvácaní do gastrointestinálneho traktu, poruchách koagulácie vrátane anémie ako je hypoprotrombinémia, hemofília alebo iné poruchy krvácania; obličkových ochoreniach; u pacientov pred chirurgickými zákrokmi alebo u pacientov liečených antikoagulantmi.
Farmaceutické prostriedky podľa predkladaného vynálezu obsahujú zlúčeninu vzorca I ako aktívnu zložku alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ a môžu tiež obsahovať farmaceutický prijateľný nosič a prípadne ďalšie farmaceutické zložky. Termín „farmaceutický prijateľné soli“ označuje soli pripravené z farmaceutický prijateľných netoxických báz vrátane anorganických báz alebo
-13organických báz. Soli odvodené z anorganických báz zahrnujú^soli hlinité, amónne, vápenaté, meďnaté, železnaté, železité, lítne, horečnaté, manganaté, manganičité, draselné, sodné, zinočnaté a podobne. Zvlášť výhodné sú soli amónne, vápenaté, horečnaté, draselné a sodné. Soli odvodené z farmaceutický prijateľných organických netoxických báz zahrnujú soli primárnych, sekundárnych a terciárnych amínov, substituované amíny vrátane v prírode sa vyskytujúcich substituovaných amínov, cyklické amíny ako je arginín, betaín, kofeín, cholín, N,N-dibenzyletyléndiamín, dietylamín, 2-dietylaminoetanol, 2-dimetylaminoetanol, etanolamín, etyléndiaám, N-etylmorfolín, N-etylpiperidín, glukamín, glukozamín, histidín, hydrabamín, izopropylamín, lyzín, metylglukamín, morfolín, piperazín, piperidín, polyamínové živice, prokaín, puríny, treobromín, trietylamin, trimetylamín, tripropylamín, trometamín a podobne a bázické ionomeničové živice.
Je zrejmé, že v nasledujúcej diskusii o spôsoboch liečenia sa budú týkať odkazy na zlúčeniny vzorca I tiež farmaceutický prijateľných solí.
Zlúčenina vzorca I je použiteľná na zmiernenie bolestí, horúčky a zápalu a radu stavov vrátane reumatickej horúčky, príznakov spojených s chrípkou alebo s inými vírusovými infekciami, nachladením, bolesťami v krížoch a bolesťami chrbta, bolestivej menštruácie, bolesti hlavy, bolesti zubov, podvrtnutie a vykĺbenie, bolesti svalov, neuralgie, synovitida, artritída, vrátane reumatickej artritídy, degeneratívne ochorenie kĺbov (osteoartritída), dna a zápaly stavcov so stuhnutím, zápaly mazového vačku, poranenie, stavy po chirurgických a zubárskych zákrokoch. Naviac môže táto zlúčenina inhibovať bunkové nádorové transformácie a metastatický rast tumorov a tým môže byť použitá pri liečení rakoviny. Zlúčenina I môže byť tiež použitá pri liečení a/alebo prevencii cyklooxygenázou podmienených proliferatívnych porúch, ktoré sa môžu vyskytovať pri diabetickej retínopatii a tumorovej angiogenéze.
Zlúčenina I môže vykazovať v dôsledku premeny in vivo na inhibítor COX-2 inhibičné účinky na prostanoidmi indukovanú kontrakciu hladkého svalstva zabránením syntézy kontraktilných prostanoidov a tým môže byť použiteľná pri liečbe bolestivej menštruácie, predčasného pôrodu, astmy a ochoreniach spojených s eozinofilmi. Môže byť tiež použiteľná pri liečbe Alzheimerovej choroby, na zníženie kostného úbytku (t,j, liečení osteoporózy) a na liečenie glaukomu.
- 14V dôsledku premeny in vivo na zlúčeniny s vysokým inhibičným účinkom proti COX-2 a/alebo špecificky pre COX-2 vzhľadom na COX-1 budú zlúčeniny I použiteľné ako alternatíva k bežným liečivám NSAID, najmä v prípadoch, kde môžu byť tieto nesteroidné protizápalové lieky kontraindikované, ako je tomu u pacientov s peptickými vredmi,, gastritídou, miestnou enteritídou, ulceratívnou kolitídou, divertikulitídou alebo s recidivujúcou históriou gastrointestinálnych poškodení; pri krvácaní do gastrointestinálneho traktu, poruchách koagulácie vrátane anémie ako je hypoprotrombinémia, hemofília alebo iné poruchy krvácania; obličkových ochoreniach; u pacientov pred chirurgickými zákrokmi alebo u pacientov liečených anitikoagulantmi.
Podobne bude zlúčenina I použiteľná ako čiastočná alebo úplná náhrada bežných prostriedkov NSAID tam, kde sú v súčasnosti podávané spolu s inými prostriedkami alebo zložkami. V ďalších hľadiskách teda vynález zahrnuje farmaceutické prostriedky na liečenie ochorení podmienených COX-2 ako boli definované vyššie, ktoré obsahujú netoxické terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny vzorca I definovanej vyššie a jednu alebo viac zložiek ako je ďalší prostriedok na zmiernenie bolesti vrátane acetaminofénu alebo fenacetínu; látky zosilňujúcej účinok vrátane kofeínu; antagonistu H2, hydroxidu hlinitého alebo horečnatého, simeticonu, látky znižujúcej prekrvenie vrátane fenylafrínu, fenylpropanolamínu, pseudoefedrínu, oxymetazolínu, epinefrínu, naphazolínu, xylometazolínu, propylhexedrinu alebo levodezoxyefedrínu; látok proti kašľu vrátane kodeínu, hydrokodónu, caramifénu, carbetapentánu alebo dextrametorfanu; prostaglandínu vrátane misoprostolu, enprostilu, rioprostilu, ornoprostolu alebo rosaprostolu, diuretiká; sedatívne alebo nesedatívne antihistaminiká. Naviac vynález zahrnuje spôsob liečenia cyklooxygenázou podmienených ochorení, zahrnujúcich podávanie netoxického terapeuticky účinného množstva zlúčeniny vzorca I, pripadne podávané spolu s jedným alebo viacerými prostriedkami uvedenými bezprostredne vyššie, pacientovi v prípade potreby.
Na liečenie ktorejkoľvek z týchto ochorení podmienených cyklooxygenázou, môže byť zlúčenina I podávaná orálne, miestne, parenterálne, inhalačným sprejom alebo rektálne v jednotkových dávkach, obsahujúcich bežné netoxické farmaceutický prijateľné nosiče, adjuvans a vehikulá. Termín parenterálny ako sa tu
- 15používa zahrnuje subkutánne, intravenózne, intramuskulárne, intrasternálne injekcie alebo infúzie. Naviae na liečenie teplokrvných zvierat ako sú myši, potkany, kone, hovädzí dobytok, ovce, psy, mačky a podobne sú použiteľné zlúčeniny podľa vynálezu.
Ako je uvedené vyššie, farmaceutické prostriedky na liečenie ochorení podmienených COX-2 definovaných vyššie môžu prípadne obsahovať jednu alebo viac vyššie uvedených zložiek.
Farmaceutické prostriedky obsahujúce aktívnu zložku môžu byť vo forme vhodnej na orálne použitie, napríklad ako sú tablety, pilulky, pastilky, vodné alebo olejové suspenzie, dispergovateľné prášky alebo granuly, emulzie, tvrdé alebo mäkké kapsuly alebo sirupy alebo elixíry. Prostriedky určené na orálne použitie môžu byť vyrobené akoukoľvek metódou známou v danej oblasti techniky na výroby farmaceutických prostriedkov a tieto prostriedky môžu obsahovať jednu alebo viac látok zvolených zo skupiny sladidiel, ochucovacích prostriedkov, farbív a ochranných prostriedkov na získanie farmaceutický elegantných a chuťovo prijateľných prostriedkov. Tablety obsahujú aktívnu zložku v zmesi s netoxickými farmaceutický prijateľnými pomocnými látkami, ktoré sú vhodné na výrobu tabliet. Pomocnými látkami môžu byť napríklad inertné riedidlá, ako je uhličitan vápenatý, uhličitan sodný, laktóza, fosforečnan vápenatý alebo fosforečnan sodný; granulačné činidlá a dezintegračné látky, napríklad kukuričný škrob alebo kyselina alginová; spojivá, napríklad škrob, želatína alebo akácia a klzné látky, napríklad stéaran horečnatý, kyselina stearová alebo mastenec. Tablety môžu byť nepoťahované alebo môžu byť známymi spôsobmi poťahované na oneskorenie rozpadávania a absorpcie v gastrointestinálnom trakte a tým poskytnutie predĺženého pôsobenia počas dlhšej doby. Môže byť napríklad použitý materiál na oneskorenie účinku ako je monostearát alebo distearát glycerolu. Tablety môžu byť tiež poťahované spôsobmi opísanými v US patentoch 4,256,108; 4,166,452; a 4,265,874 za vytvorenia osmotických tabliet na riadené uvoľňovanie.
Prostriedky na orálne použitie môžu byť prítomné vo forme tvrdých želatínových kapsúl, v ktorých je aktívna zložka zmiešaná s inertným tuhým riedidlom, napríklad uhličitanom vápenatým, fosforečnanom vápenatým alebo kaolínom, alebo vo forme mäkkých želatínových kapsúl, kde sú aktívne zložky
- 16zmiešané s vodou alebo miešateľnými rozpúšťadlami ako je propylénglykol, látky PEG a etanol, alebo v olejovom médiu, napríklad arašidovom oleji, parafínovom oleji alebo v olivovom oleji.
Vodné suspenzie obsahujú aktívny materiál v zmesi s pomocnými látkami vhodnými na výrobu vodných suspenzií. Týmito pomocnými látkami sú suspendujúce prostriedky, napríklad sodná soľ karboxymetylcelulózy, metylcelulóza, hydroxypropylmetyicelulóza, alginát sodný, polyvinylpyrolidónm, tragakantová guma a akáciová guma; dispergujúce alebo zmáčacie prostriedky môžu byť v prírode sa vyskytujúce fosfatidy, napríklad lecitín alebo kondenzačné produkty alkylénoxidu s mastnými kyselinami, napríklad polyoxyetylénstearát, alebo kondenzačné produkty etylénoxidu s alifatickými alkoholmi s dlhým reťazcom, ako je napríklad heptadekaetylénoxycetanol, alebo kondenzačné produkty etylénoxidu s parciálnymi estermi odvodenými z mastných kyselín a anhydridov hexitolu, napríklad polyetylénsorbitanmonooleát. Vodné suspenzie môžu tiež obsahovať jednu alebo viac ochranných látok, napríklad etyl alebo n-propyl alebo p-hydroxybenzoát, jedno alebo viac farbív, jeden alebo viac ochucujúcich prostriedkov a jedno alebo viac sladidiel, ako je sacharóza, sacharín alebo aspartam.
Olejové suspenzie môžu byť formulované suspendovaním aktívnej zložky v rastlinnom oleji, napríklad arašidovom oleji, olivovom oleji, sezamovom oleji alebo kokosovom oleji, alebo v minerálnom oleji ako je parafínový olej. Olejové suspenzie môžu obsahovať zahusťujúci prostriedok, napríklad včelí vosk, tuhý parafín alebo cetylalkohol. Na získanie prijateľných orálnych prostriedkov môžu byť použité sladidlá a ochucujúce prostriedky napríklad ako boli uvedené vyššie. Tieto prostriedky môžu byť chránené prídavkom antioxidantu, ako napríklad kyseliny askorbovej.
Dispergovateľné prášky a granuly vhodné na výrobu vodnej suspenzie prídavkom vody poskytujú aktívnu zložku v zmesi s dispergujúcim prostriedkom alebo zmáčadlom, suspendujúcim prostriedkom a jednou alebo viacerými ochrannými látkami. Vhodné dispergujúce prostriedky alebo zmáčadlá a suspendujúce prostriedky sú formou príkladov uvedené vyššie. Môžu byť tiež prítomné ďalšie pomocné látky, napríklad sladidlá, ochucujúce prostriedky a farbivá.
- 17Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu môžu byť tiež vo forme emulzií typu olej vo vode. Olejovou fázou môže byť rastlinný olej, napríklad olivový olej alebo arašidový olej alebo minerálny olej, napríklad parafínový olej alebo ich zmesi. Vhodné emulgačné činidlá môžu byť v prírode sa vyskytujúce fosfatidy, napríklad sójový lecitín a estery alebo parciálne estery odvodené od mastných kyselín a anhydridov hexitolu, napríklad sorbitan monooleát a kondenzačné produkty uvedených parciálnych esterov s etylénoxidom, napríklad polyoxyetylénsorbitanmonooleát. Emulzie môžu obsahovať aj sladidlá a ochucovacie prostriedky.
Sirupy a elixíry môžu byť formulované so sladidlami ako je napríklad glycerol, propylénglykol, sorbitol alebo sacharóza. Tieto prostriedky môžu obsahovať aj utišujúce látky, ochranné látky a ochucujúce látky a farbivá.
Farmaceutické prostriedky môžu byť vo forme sterilných injikovateľných vodných alebo olejových suspenzií. Táto suspenzia môže byť vytvorená v danej oblasti známym spôsobom použitím takých vhodných dispergujúcich látok alebo zmáčadiel a suspendujúcich prostriedkov, ktoré boli uvedené vyššie.
Sterilné injikovateľné prostriedky môžu byť tiež vo forme sterilného injikovateľného roztoku alebo suspenzie v netoxickom paranterálne prijateľnom diluente alebo rozpúšťadle, napríklad vo forme roztoku 1,3-butándiolu. Medzi prijateľné vehikulá a rozpúšťadlá, ktoré môžu byť použité patrí voda, Ringerov roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Môžu byť tiež použité pomocné rozpúšťadlá ako je etanol, propylénglykol alebo polyetylénglykoly. Naviac sa ako rozpúšťadlo alebo suspendujúce prostredie používajú bežné sterilné fixované oleje. Na tento účel môže byť použitý akýkoľvek nedráždivý fixovaný olej vrátane syntetických mono- alebo diglyceridov. Naviac môžu byť použité pri výrobe prostriedkov vo forme injekcií mastné kyseliny ako je kyselina olejová.
Zlúčenina i môže byť tiež podávaná vo forme čapíkov na rektálne podávanie liečiva. Tieto prostriedky môžu byť vyrobené miešaním liečiva s vhodným nedráždivým nosičom, ktorý je za normálnych teplôt v tuhom stave, ale skvapalnia pri rektálnej teplote a preto v rekte sa po roztopení liečivo uvoľní. Takýmito materiálmi sú kakaové maslo a polyetylénglykoly.
Na miestne použitie sa používajú krémy, masti, gély, roztoky alebo suspenzie a podobne, obsahujúce zlúčeninu vzorca I (na účely tejto prihlášky bude
- 18miestne podanie zahrnovať aj ústne vody a kloktadlá). Miestne prostriedky môžu všeobecne obsahovať farmaceutický nosič, pomocné rozpúšťadlo, emulgátor, látku zvyšujúcu prenikanie do tkaniva, ochranný systém a zmäkčovadlo.
Pri liečení vyššie uvedených stavov sú použiteľné dávky poriadku od približne 0,01 mg do približne 140 mg/kg telesnej hmotnosti za deň alebo alternatívne približne 0,5 mg až približne 7 g na pacienta za deň. Zápal môže byť napríklad účinne liečený podaním od približne 0,01 do 50 mg zlúčeniny na kg telesnej hmotnosti za deň alebo alternatívne približne 0,5 mg až približne 3,5 g na pacienta a deň.
Množstvo aktívnej zložky, ktorá môže byť kombinovaná na vytvorenie jednotlivej dávky s rôznymi nosnými materiálmi, bude závisieť na liečenom pacientovi a najmä na spôsobe podania. Napríklad prostriedok určený na orálne podanie ľuďom môže obsahovať od 0,5 mg do 5 g aktívnej zložky spojenej s vhodným množstvom nosného materiálu, ktoré môže kolísať od približne 5 do približne 95 % celkového prostriedku. Formy jednotlivých dávok budú zvyčajne obsahovať medzi približne 1 mg až približne 500 mg aktívnej zložky, typicky 25 mg, 50 mg, 100 mg, 200 mg, 300 mg, 400 mg, 500 mg, 600 mg, 800 mg alebo 1000 mg.
Je však treba rozumieť, že špecifická miera dávkovania pre akéhokoľvek konkrétneho pacienta bude závisieť na rade faktorov vrátane veku, telesnej hmotnosti, celkovom zdraví, pohlaví, diéte, dobe podávania, ceste podávania, rýchlosti vylučovania, kombinácii liečiv a závažnosti konkrétnej choroby, ktorá je liečená.
Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu je možné vyrobiť nasledujúcimi spôsobmi.
Spôsob A
Pôsobením bistrimetylketénového acetalu 2 na ketál 1 za prítomnosti vhodnej Lewisovej kyseliny ako je TiCI4 alebo Et2O.BF3 vo vhodnom rozpúšťadle ako je CH2CI2 poskytne adukt 3 ako diastereomérnu zmes. Esterifikáciou 3 CH2N2 nasledovanú pôsobením bázy ako je DBU sa získa zmes 5 a 6, ktorá sa separuje chromatografiou na silikagéli. Oxidácia 5 pomocou MMPP alebo mCPBA poskytne požadovaný produkt 7.
(5) (6) (4)
Spôsob B
Hydrolýza esteru 7 bázou ako je ĽiOH alebo NaOH vo vodnej zmesi rozpúšťadiel ako je THF/H2O alebo MeOH/H2O poskytne požadovanú karboxylovú kyselinu 8.
(7) (8)
-20Spôsob C
Pôsobením oxalylchloridu na karboxylovú kyselinu 8 a reakciou s vhodným amínom sa získa požadovaný amid 9.
Spôsob D
Difenyllaktón 10 sa redukuje na diol 11 vodným redukčným činidlom ako je diizobutylalumíniumhydrid alebo lítiumalumíniumhydrid vo vhodnom rozpúšťadle ako je toluén, hexán, tetrahydrofurán alebo éter. Diol 11 sa alkyluje alkylhalogenidom alebo benzylhalogenidom v prítomnosti bázy ako je NaH alebo KOBut. Táto alkylácia poskytne požadovaný izomér 12 a nežiadúci izomér 13, ktoré sa delia chromatograficky alebo kryštalizáciou. Zlúčenina 12 sa oxiduje na aldehyd 14 činidlom ako ej oxid manganičitý. Ďalšia oxidácia látky 14 pomocou NaCICb poskytne kyselinu 15. Alternatívne môže byť látka 12 oxidovaná pomocou Cr8+ priamo na kyselinu 15. Pôsobením bázy na 15 sa vytvorí soľ 16. Estery 17 môžu byť pripravené reakciou kyseliny 15 s alkylačným činidlom v prítomnosti bázy. Metylester kyseliny 15 sa pohodlne pripraví v malom meradle reakciou 215 s diazometánorh v éteri.
(10) (11)
-21 (11)
(17)
R3 (16)
M=Li, Na, K, Mg/2
R4 = Cve alkyl alebo substituovaný benzyl
-22Spôsob E
Anhydrid kyseliny difenylmaleínovej 18 môže byť redukovaný na diol 11 vhodným hydridovým redukčným činidlom ako je diizobutylalumíniumhydrid alebo lítiumalumíniumhydrid. NA redukciu sú vhodné reozpúšťadlá ako je toluén, tetrahydrofurán alebo éter.
Spôsob F
Anhydrid kyseliny 2,3-difenylmaleínovej 18 ej možné pripraviť metódou podľa Fieldsa {J. Org. Chem., diel 55, str. 5165 - 70 (1990); US 4,596,867}, pri ktorej sa kyselina fenyloctová 19 nechá reagovať s kyselinou a-oxofenyloctovou 20 (s výhodou vo forme jej draselnej soli) v acetanhydride za varu pod spätným chladičom.
Viacstupňový postup na získanie 18 z fenylacetonitrilov ako 21 a 22 sa opisuje v Smith a ďalší, J. Org. Chem., diel 55, str. 3351 - 62 (1990).
Florac a spolupracovníci v Tetrahedron, diel 46, str. 445 - 52 (1990) opisujú ďalšiu syntézu 18 v niekoľkých krokoch z a-brómfenylacetohydrazidov 23 a 24.
Ac2O var pod spät. chlad. (Fields)
(18)
(22)
R1
(23)
C(Br)H-C(O)-NHNHCO2-Me niekoľko krokov (Florac)
C(Br)H-C(O)-NHNHCO-Ph
V tabuľke I sú uvedené niektoré laktóny 10, z ktorých je možné pripraviť zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu spôsobom D.
V tabuľke II a III sú uvádzané zlúčeniny reprezentujúce predkladaný vynález (štruktúry la a Ib).
-24Tabuľka I
Laktón
S(O)2Me
-25Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
-26Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
S(O)2Me
-27Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
-28Tabuíkal- pokračovanie
Laktón
-29Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
- 30Tabuľka I - pokračovanie
SMe
Laktón
S(O)2Me Tabo^>'PoWa6OVan'e
LaWón
-32Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
-33Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
-34Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
O
Ci
-35Tabuľka I - pokračovanie
Laktón
O
Br
Tabuľka II °<s zP
Me-S^ R* r3>
VA u Y
X (la)
Zlúčenina R2 R3 x Y
1 H H CH2OH CH3
2 H H CH2OH CH2OMe
3 H H CHO CH3
4 H H CO2H CH3
5 H H CO2Me CH3
6 H H CO2Na CH3
7 H H CHO CH2OMe
8 H H CO2H CH2OMe
9 H H CO2Me CH2OMe
10 H H CO2Na CH'2OMe
11 H F CH2OH CH3
12 H F CHO CH2OMe
13 H F CO2Me CH3
14 H F CO2H CH3
15 H F CO2Na CH3
16 F F CO2H CH3
17 F F CO2Me CH3
18 F F CO2Me CH2OMe
19 F F CO2Na CH2OMe
20 F F CH2OH CH3
- 37Tabuľka III
Zlúčenina R2 R3 X Y
21 H H CH2OH CH3
22 H H CH2OH CH2OMe
23 H H CHO CH3
24 H H CO2H CH3
25 H H CO2Me CH3
26 H H CO2Na CH3
27 H H CHO CH2OMe
28 H H CO2H CH2OMe
29 H H CO2Me CH2OMe
30 H H CO2Na CH2OMe
31 H F CH2OH CH3
32 H F CHO CH2OMe
33 H F CO2Me CH3
34 H F CO2H CH3
35 H F CO2Na CH3
-38Testy na stanovenie biologickej účinnosti
Zlúčenina vzorca I môže byť na stanovenie aktivity inhibujúcej cyklooxygenázu-2 testovaná nasledujúcimi testami.
Inhibícia cyklooxygenázovej aktivity
Zlúčeniny sa testujú ako inhibítory cyklooxygenázovej aktivity v testoch na cyklooxygenázu v celých bunkách. Oba tieto testy merajú syntézu prostaglandínu E2 ako odpoveď na kyselinu arachidónovú s použitím rádioimunologického stanovenia. V týchto testoch je stopercentná účinnosť definovaná ako rozdiel medzi syntézou prostaglandínu E2 v neprítomnosti a v prítomnosti arachidonátu.
Testy v celých bunkách
Pre testy na cyklooxygenázu sa kultivujú bunky osteosarkómu v 1 ml média v 24-jamkových miskách (Nunclon) až do konfluentného stavu (1 až 2 x 105 buniek/jamku). Bunky U-937 rastú v rotujúcich fľašiach a resuspendujú sa na konečnú hustotu 1,5 x 106 buniek/ml v 24-jamkových miskách (Ninclon). Po premytí a resuspendovaní buniek osteosarkómu v DMSO a samotný DMSO a vzorky sa opatrne zamiešajú. Všetky testy sa uskutočňujú v triplikátorch. Vzorky sa potom inkubujú 5 alebo 15 minút pri 37 °C pred prídavkom kyseliny arachidónovej. Kyselina arachidónová (bez peroxidu, Cayman Chemical) sa pripraví ako 10 mM zásobný roztok v etanole a ďalej sa 10 x zriedi v HBSS. Alikvót 10 μΙ tohto zriedeného roztoku sa pridá k bunkám za získania konečnej koncentrácie kyseliny arachidónovej 10 μΜ. Kontrolné vzorky sa inkubujú namiesto s kyselinou arachidónovou s etanolovým vehikulom. Vzorky sa opäť opatrne zamiešajú a inkubujú sa ďalších 10 minút pri 37 °C. Pre bunky osteosarkómu sa reakcia potom zastaví prídavkom 100 μΙ 1M HCI s miešaním a rýchlym odstránením roztoku z bunkových monovrstiev. Pre bunky U-937 sa reakcia zastaví prídavkom 100 μΙ 1M
- 39HCI za miešania. Vzorky sa potom neutralizujú prídavkom 100 μΙ 1M NaOH a hladiny PGE2 sa merajú rádioimunologickým testom.
Testy na celých bunkách látok COX-2 a COX-1 s použitím transfekovaných bunkových línií CHO
Pre tento test boli použité bunkové línie vaječníkov čínskeho škrečka (CHO), ktoré boli stabilne transfekované eukaryotickým expresným vektorom pCDNAIII obsahujúcim cDNA buď ľudského COX-1 alebo COX-2. Tieto bunkové línie sa označujú ako CHO [hCOX-1] a CHO [hCOX-2]. Pre testy na cyklooxygenázu sa zozberajú bunky zo suspenzných kultúr CHO [hCOX-1] a bunky CHO [hCOX-2] pripravené trypsinizáciou prichytených kultúr centrifugáciou (300 x g, 10 minút) a premyjú sa raz v HBSS obsahujúcom 15 mM HEPES, pH 7,4, a resuspendujú sa v HBSS, 15 mM HEPES, pH 7,4 pri koncentrácii buniek 1,5 x 106 buniek/ml. Testované liečivá sa rozpustia v DMSO na 66,7-násobok najvyššej testovanej koncentrácie liečiva. Zlúčeniny sa typicky testujú v ôsmich koncentráciách v duplikátoch s použitím série trojnásobného sériového zriedenia v DMSO najvyššej koncentrácii liečiva. Bunky (0,3 x 106 buniek v 200 μΙ) sa predinkubujú s 3 μΙ testovaného liečiva alebo vehikula DMSO 15 minút pri 37 °C. Pracovné roztoky bezperoxidovej AA (5,5 μΜ a 110 μΜ pre CHO [hXCOX-1], prípadne CHO [hCOX2]) sa pripravia desaťnásobným zriedením koncentrovaného roztoku AA v etanole do HBSS obsahujúceho 15 mM HEPES, pH 7,4. Bunky sa potom testujú v prítomnosti alebo neprítomnosti liečiva s roztokom AA/HBSS za získania konečnej koncentrácie 0,5 μΜ AA v teste CHO [h-COX-1] a konečná koncentrácia 10 μΜ AA v teste CHO [h-COX-2], Reakcia sa ukončí prídavkom 10 μΙ 1M HCl následnou neutralizáciou 10 μΙ 0,5M NaOH. Vzorky sa centrifugujú pri 300 x g pri 4 °C 10 minút a alikvót vyčereného supernatantu sa príslušne zriedi na stanovenie hladín PGE2 s použitím enzymatického imunologického testu na PGE2 (Correlate PGE2 enzýme immunoassay kit, Assay Designs, Inc.). Cyklooxygenázová aktivita v neprítomnosti testovaných zlúčenín sa stanoví ako rozdiel hladín PGE2 v bunkách v prítomnosti kyseliny arachidónovej proti hladinám PGE2 v bunkách v prítomnosti
-40etanolového vehikula. Inhibícia syntézy PGE2 testovanými zlúčeninami sa vypočíta ako percento aktivity v prítomnosti liečiva proti aktivite v pozitívnych kontrolných vzorkách.
Test aktivity COX-1 z mikrozómov buniek U937
Bunky U937 sa oddelia centrifugáciou pri 500 x g 5 minút a raz sa premyjú fyziologickým roztokom s fosfátovým pufrom a znova sa centrifugujú. Bunky sa resuspendujú v homogenizačnom pufri obsahujúcom 0,1 M tris-HCI, pH 7,4, 10 mM EDTA, 2 μΙ/mi leupeptínu, 1 pg/ml sójového trypsínového inhibítora, 2 pg/ml aprotinínu a 1 mM fenyimetylsulfonylfluoridu. Bunková suspenzia sa sonikuje 4x10 s a centrifuguje sa pri 10 000 x g 10 minút pri 4 °C. Supernatant sa centrifuguje pri 100 000 x g 1 hodinu pri 4 °C. Usadené mikrozómy pri 100 000 x g sa resuspendujú v 0,1 M tris-HCI, pH 7,4, 10 mM EDTA na približne 7 mg proteínu/ml a uchovávajú sa pri -80 °C.
Mikrozomálne preparáty sa rozmrazia bezprostredne pred použitím, krátko sa sonikujú a potom sa zriedia na končentráciu proteínu 125 pg/ml v pufri 0,1 M trisHCI, pH 7,4 obsahujúcom 10 mM EDTA, 0,5 mM fenol, 1 mM redukovaný glutatión a 1 μΜ hematín. Testy sa uskutočňujú v duplikátoch v konečnom objeme 250 μΙ. Na začiatku sa pridá 5 μΙ vehikula DMSO alebo liečiva v DMSO k 20 μΙ 0,1 M tris-HCI pufra, pH 7,4, s obsahom 10 mM EDTA do jamôk 96-jamkovej polypropylénovej titračnej doštičky s hlbokými jamkami. Potom sa pridá 200 μΙ mikrozomálneho preparátu a predinkubuje sa 15 minút pri teplote miestnosti a reakcia sa zastaví prídavkom 25 μΙ 1M HCI. Vzorky sa neutralizujú 25 μΙ 1M HaOH pred kvantifikáciou obsahuj PGE2 rádioimunologickým testom (kity Dupont-NEN alebo Amersham). Aktivita cyklooxygenázy sa definuje ako rozdiel medzi hladinami PGE2 vo vzorkách inkubovaných v prítomnosti kyseliny arachidónovej a etanolového vehikula.
-41 Test aktivity čistenej ľudskej COX-2
Enzymová aktivita sa mera chromogénnym testom založený na oxidácii
N, N,N‘,N‘-tetrametyl-p-fenyléndiamínu (TMPD) pri redukcii PGG2 na PGH2 enzýmom COX-2 (Copeiand a ďalší (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. 91, 11202 až 11206.
Rekombinantná ľudská COX-2 sa čistí z buniek Sf9 ako bolo vyššie opísané (Percival a ďalší (1994) Árch. Biochem. Biophys. 15, 111 až 118). Testovacia zmes (180 μΙ obsahuje 100 mM fosforečnan sodný, pH 6,5, 2 mM genapol X-100, 1 μΜ hematín, 1mg/ml želatíny, 80 až 100 jednotiek čisteného enzýmu (jedna jednotka enzýmu je definovaná ako množstvo enzýmu nutné na vytvorenie zmeny O.D.
O, 001/min pri 610 nm) a 4 μΙ testovanej zlúčeniny v DMSO. Zmes sa predinkubuje pri teplote miestnosti (22 °C) 15 minút pred začiatkom enzymatickej reakcie prídavkom 20 μΙ sonikovaného roztoku 1 mM kyseliny arachidónovej (AA) a 1 mM TMDO v testovacom pufri (bez enzýmu alebo hematínu). Enzymatická aktivita sa meria odhadom počiatočnej rýchlosti oxidácie TMPD v priebehu prvých 36 s reakcie. Nešpecifická rýchlosť oxidácie sa pozoruje v neprítomnosti enzýmu (0,007 až 0,010 O.D./min) a odčíta sa regresnou analýzou metódou najmenších štvorcov so štyrmi parametrami z grafu log dávky proti percentu inibície.
Test v úplnej ľudskej krvi
Princíp metódy
Ľudská krv poskytuje prostredie bohaté na proteíny a bunkami vhodné na štúdium biochemickej účinnosti protizápalových zlúčenín, ako sú selektívne inhibítory COX-2. Štúdie ukázali, že normálna ľudská krv enzým COX-2 neobsahuje. To je v súlade s pozorovaním, že inhibítory COX-2 nemajú žiadny vplyv na produkciu PGE2 v normálnej krvi. Tieto inhibítory sú aktívne len na inkubáciu úplnej ľudskej krvi s LPS, ktoré indukujú COX-2. Tento test môže byť použitý na vyhodnotenie inhibičného účinku selektívnych inhibítorov COX-2 na produkciu PGE2. Taktiež doštičky v úplnej krvi obsahujú veľké množstvo enzýmu COX-1. Bezprostredne po zrážaní krvi sa doštičky aktivujú mechanizmom
-42podmienenýrn trombinom. Táto reakcia vedie v vytváraniu tromboxanu B2 (TxB2) aktiváciou COX-1. Vplyv testovaných zlúčenín na hladiny TxB2 po zrážaní krvi môže byť zistený a použitý ako index pre aktivitu COX-1. Preto stupeň selektivity poskytovanej testovacou zlúčeninou môže byť stanovený meraním hladín PGE2 po indukcii LPS (COX-2) a TxB2 po zrážaní krvi (COX-1) v rovnakom teste.
Spôsob
A. COX-2 (produkcia PGE2 indukovaná LPS)
Čerstvá krv je odobratá zo žily do heparinizovaných skúmaviek od mužských a ženských dobrovoľníkov. U dobrovoľníkov sa nevyskytuje žiadny zrejmý zápalový stav a aspoň sedem dní pred odberom krvi nebrali žiadne NSAID. Z 2 ml alikvótu krvi sa ihneď získa plazma na použitie ako blank (bazálne hladiny PGE2). Zvyšná krv sa inkubuje s LPS (100 μΙ/ml konečná koncentrácia, Sigma Chem. #L-2630 z E. coli); zriedené v 0,1 % BSA (fyziologický roztok s fosfátovým pufrom) 5 minút pri teplote miestnosti. Alikvóty krvi 500 μΙ sa inkubujú vždy s 2 μΙ vehikulá (DMSO) alebo 2 μΙ testovanej zlúčeniny, pričom konečné koncentrácie sa pohybujú od 10 nM do 30 μΜ, 24 hodín pri 37 °C. Na konci inkubácie sa krv centrifuguje 5 minút pri 12000 x g na získanie plazmy. 100 μΙ alikvót plazmy sa zmieša so 400 μΙ metanolu na vyzrážanie proteínov. Získa sa supernatant, ktorý sa testuje rádioimunologickým kitom (Amersham, RPA#530) na PGE2 po premene PGE2 na jeho metyloximátový derivát podľa doporučenia výrobcu.
B. COX-1 (Produkcia TxB2 indukovaná zrážaním)
Čerstvá krv sa odoberie do skúmaviek typu vacutainer bez antikoagulantov. Alikvóty 500 μΙ sa ihneď prevedú do silikonizovaných mikrocentrifugačných skúmaviek, do ktorých bolo vopred pridaných 2 μΙ buď DMSO alebo testovanej zlúčeniny za získania konečných koncentrácií od 10 nM do 30 μΜ. Skúmavky sa trepú a inkubujú 1 hodinu pri 37 °C, aby sa mohla krv zraziť. Na konci inkubácie sa
-43oddelí sérum centrifugáciou (5 minút 12000 x g). 100 μΙ alikvót séra sa zmieša na vyzrážanie proteínov so 400 μΙ metanolu. Oddelí sa supernatant, ktorý sa testuje na TxB2 s použitím enzýmového imunologického kitu (Cayman, #519031) podľa doporučenia výrobcu.
Test opuchu potkanej lapky
Protokol
Samcom potkanov Sprague-Dawley (150 až 200 g), ktorí cez noc hladovali, bolo podané buď vehikulum (1% metocel alebo 5% Tween 80) alebo testovaná zlúčenina. O 1 hodinu neskoršie sa nakreslila čiara s použitím permanentného fixu na úrovni nad členkom jednej zadnej tlapky na definovanie oblasti tlapky, ktorá sa bude sledovať. Použitím pletysmometra (Ugo-Basile, Taliansko) sa zmeria objem tlapky (Vo) na základe vytlačovania vody.Zvieratám sa potom vstrekne do chodidla 50 μΙ 1% roztoku karagenanu vo fyziologickom roztoku (FMC Corp. Maine) s použitím inzulínovej striekačky s ihlou 0,45 mm (t.j. 500 pg karagenanu na tlapku). O 3 hodiny neskoršie sa meria objem tlapky (V3) a vypočíta sa nárast objemu (V3 - Vo). Zvieratá sa usmrtia vdychovaním CO2 a zistí sa prítomnosť alebo neprítomnosť poškodenia žalúdka.
Získané dáta sa porovnajú s hodnotami na kontrolu s vehikulom a vypočíta sa percento inhbície. Všetky ošetrené skupiny sú kódované na odstránenie systematickej chyby spôsobenej pozorovateľom.
Gastropatia u potkanov indukovaná NSAID
Princíp metódy
Hlavným vedľajším účinkom bežných NSAID a ich schopnosť vyvolávať u človeka poškodenie žalúdka. Predpokladá sa, že tento účinok je spôsobený inhibíciou COX-1 v gastrointestinálnm trakte. Potkany sú na pôsobenie NSAID zvlášť citlivé. V skutočnosti boli skôr používané potkanie modely na vyhodnocovanie gastrointestinálnych vedľajších účinkov bežných NSAID. V uskutočňovanom teste sa pozoruje poškodenie gastrointestinálneho traktu
-44indukované NSAID meraním fekálneho vylučovania 51Cr po systémovej injekcii červených krviniek značených 51Cr. Fekálne vylučovanie 51Cr je známa a citlivá metóda na detekciu gastrointestinálnej integrity u zvierat a u ľudí.
Metódy
Samcom potkanov Sprague Dawley (150 až 200 g) sa podáva orálne testovaná zlúčenina buď raz (akútne dávkovanie) alebo dvakrát denne 5 dní (chronické dávkovanie). Ihneď po podaní poslednej dávky sa potkanom vstrekne chvostovou žilou 0,5 ml červených krviniek značených 51Cr od potkana-darcu. Zvieratá sú umiestnené individuálne do metabolických klietok so stravou a vodou podľa ľubovôle. Výkaly sa zhromažďujú 48 hodín a fekálna exkrécia 51 Cr sa vypočíta ako percento celkovej injikovateľnej dávky. Červené krvinky značené 51Cr sa pripravia s použitím nasledujúcich spôsobov. Odoberie sa 10 ml krvi do heparinizovaných skúmaviek z dutej žily potkana-darcu. Plazma sa oddelí centrifugáciou a nahradí sa rovnakým objemom HBSS. Červené krvinky sa inkubujú so 400 Ci (14,8 x 1012 Bq) 51chromanu sodného 30 minút pri 37 °C. Na konci inkubácie sa červené krvinky premyjú dvakrát 20 ml HBSS na odstránenie voľného 51chromanu sodného. Červené krvinky sa nakoniec rekonštituujú v 10 ml HBSS a kždému potkanovi sa vstrekne 0,5 ml roztoku (približne 20 Ci, 74 x 101° Bq).
Gastropatia so stratou proteínov u saimiru veveričkovitého
Princíp metódy
Gastropatia so stratou proteínov (ktorá sa prejavuje ako prítomnosť buniek z krvného obehu a plazmatických proteínov v Gl trakte) je významná a dávku obmedzujúca nepriaznivá odozva na štandardné nesteroidné protizápalové liečivá (NSAID). Môže byť kvantitatívne určená intravenóznym podaním roztoku 51CrCI3. Tento ión izotopu sa môže viazať na globíny buniek a séra a bunkové endoplazmatické retikulum. Meranie rádioaktivity, ktorá sa objaví vo výkaloch zhromažďovaných 24 hodín po podaní izotopu teda poskytuje citlivý a kvantitatívny index gastropatie so stratou proteínov.
-45Metódy
Skupinám samcom saimiru veveričkovitého (0,8 až 1,4 kg) sa podáva žalúdočnou sondou buď 1% metocel alebo 5% Tween 80 vo vehikule H2O (3 ml/kg b.i.d.) alebo testovanej zlúčeniny v dávkach od 1 do 100 mg/kg b.i.d. počas 5 dní. Jednu hodinu po poslednej dávke liečiva/vehikula sa intravenózne podá 51Cr (5 Ci/kg, 18,5 x 101° Bq/kg v 1 ml/kg fyziologického roztoku s fosfátovým pufrom (PBS) a fekálie sa 24 hodín zhromažďujú v metabolickej klietke a gama čítačom sa stanovuje vylúčený 51Cr. Vzorky žilovej krvi sa odoberajú T hodinu a 8 hodín po poslednej dávke liečiva a koncentrácia liečiva v plazme sa meria HPLC s reverznou fázou.
Hladiny v plazme u potkanov
Farmakokinetika pri podaní per os u potkanov
Postup
Starostlivosť o zvieratá, ich umiestnenie a kŕmenie sa uskutočňuje podľa doporučení organizácie Canadian Council on Animal Čare.
Samci potkanov Sprague Dawley (325 až 375 g) hladní cez noc pred každou štúdiou hladiny v krvi o podaní p.o..
Potkany sa umiestnili po jednej do obmedzovacej klietky, ktorá sa pevne zaistí. Počiatočné vzorky krvi sa získajú odrezaním malého kúsku (1 mm alebo menej) špičky chvosta. Z chvosta sa potom miernym pohybom od koreňa smerom ku koncu vytlačí krv. Do heparinizovaných skúmaviek typu vacutainer sa odoberie približne 1 ml krvi.
Zlúčeniny sa pripravia podľa potreby v štandardnom dávkovacom objeme 10 ml/kg a podajú sa ústami žalúdočnou sondou s priemerom 1,3 mm a dĺžkou 76 mm do žalúdka.
Ďalšie odbery krvi sa uskutočňujú rovnakým spôsobom ako počiatočný odber s tým rozdielom, že nie je potrebné znova odrezávať chvost. Chvost sa očistí kúskom gázy a krv sa vytlačí ako bolo opísané vyššie do príslušne označených skúmaviek.
-46Ihneď po odobratí vzorky sa krv centrifuguje, rozdelí, vloží sa do zreteľne označených skúmaviek a skladuje sa v mraziacom boxe až do analýzy.
Typické časové rozmedzia na stanovenie hladiny v krvi potkana po podaní p.o. sú:
0, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 h.
Po 4 hodinách sa po odobratí vzorky poskytne potkanom potrava podľa ľubovôle. Voda je dostupná počas celej doby štúdie.
Vehikulá
Pri stanovení hladín v krvi potkana pri podaní p.o. môžu byť použité nasledujúce vehikulá:
PEG 200/300/400- obmedzené na 2ml/kg
Metocel 0,5 % až 1,0 % 10 ml/kg
Tween 80 5 % 10 ml/kg
Zlúčeniny pri stanovení hladín v krvi po podaní p.o. môžu byť vo forme suspenzie. Kvôli lepšiemu rozpusteniu je možné vložiť roztok do sonikátora na približne 5 minút.
Intravenózna farmakokinetika u potkanov
Postup
Starostlivosť o zvieratá, ich umiestnenie a kŕmenie sa uskutočňuje podľa doporučenia organizácie Canadian Council on Animal Čare.
Samci potkanov Sprague Dawley (325 až 375 g) sa umiestnia do plastických boxov s vodou a potravou.
Zlúčenina sa pripraví podľa potreby pri štandardnom dávkovacom objeme 1 ml/kg
Počiatočná vzorka krvi a dávkovanie testovanej zlúčeniny sa uskutoční pod sedatívnym účinkom CO2. Potkany sa po jednom umiestnia do komory s CO2 a vyberú sa hneď keď stratili vystierací reflex. Potkan sa potom umiestni na dosku, kde sa pripúta a na ňufák sa mu potom umiestni maska s prívodom CO2 a potkan sa pripúta elastickými popruhmi. Pomocou pinzety a nožničiek sa obnaží krčná žila,
-47odoberie sa počiatočná nulová vzorka a do krčnej žily sa potom vstrekne odmeraná dávka liečiva. V mieste vpichu sa uskutoční mierny tlak prstom a maska sa odstráni z ňufáku. Zaznamená sa čas, ktorý je nulovým časom.
Vzorky krvi sa po 5 minútach odoberú odrezaním kúska (1 až 2 mm) špičky chvosta. Z chvosta sa potom od koreňa ku koncu vytláča krv. Približne 1 ml krvi sa odoberá do heparinizovanej odberovej skúmavky. Rovnakým spôsobom sa odoberajú ďalšie vzorky krvi stým rozdielom, že nie je potrebné odrezať chvost. Chvost sa očití kúskom gázy a uskutoční sa odber rovnakým spôsobom ako bolo opísané vyššie do vhodne označených skúmaviek.
Typické doby na určenie krvnej hladiny u potkana po dávkovaní i.v. sú buď:
0, 5 min, 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 6 h alebo
0, 5 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 6 hodín.
Vehikulá
Pri stanovení hladiny krvi u potkanov pri podaní i.v. môžu byť použité nasledujúce vehikulá:
Dextróza: 1 ml/kg
Molecusol 25 %: 1 ml/kg
DMSO: (dimetylsulfoxid) objem dávky obmedzený na 0,1 ml na zviera
PEG 200: nie viac ako 60 % v zmesi so 40 % sterilnej vody 1 mg/kg.
Pokiaľ je roztok sdextrózou zakalený, je možné pridať buď hydrogénuhličitan alebo uhličitan sodný.
Na analýzu sa zriedia alikvóty rovnakým objemom acetonitrilu a uskutoční sa centrifugácia na odstránenie zrážania proteínov. Supernatant sa nastrekne priamo na HPLC kolónu C-18 s detekciou UV. Kvantifikácia sa uskutoční vzhľadom na čistú vzorku krvi s pridaným známym množstvom liečiva. Biologická dostupnosť (F) sa stanoví porovnaním oblasti pod krivkou (AUC) i.v. proti p.o
AUCpo _ x
AUCiv dávka^ x 100% dávka po
-48Pomery clearance sa vypočítajú z nasledujúcich rovníc:
dávkaiv (mg/kg) ci = -:AUCiv
Hodnoty Cl sú ml/h.kg
Reprezentačné biologické dáta
Zlúčeniny podľa predkladaného vynálezu sú prekurzory inhibítorov COX-2 a sú preto použiteľné pri liečení ochorení podmienených COX-2 uvedených vyššie. Miera premeny týchto zlúčenín na aktívne inhibítory COX-2 môže byť sledovaná na ďalej uvedených reprezentačných výsledkoch. Uvedené hladiny vplazme sú maximálne koncentrácie v plazme potkanov aktívneho inhibítora COX-2, ktoré sú pozorované pri podaní orálnej dávky 20 mg/kg uvedeného prekurzora potkanom.
Tabuľka IV
Príklad Hladiny v plazme (μΜ)*
1,0 'Maximálna koncentrácia zodpovedajúceho laktóznu v plazme pozorovaná pri dávkovaní 20 mg/kg uvedeného prekurzora orálne potkanom.
Vynález bude teraz ilustrovaný nasledujúcimi neobmedzujúcimi príkladmi, v ktorých, pokiaľ nebolo uvedené inak, platí:
i) všetky operácie boli uskutočnené pri teplote miestnosti alebo teplote okolia, tzn. pri teplote v rozmedzí 18 až 25 °C;
ii) odparenie rozpúšťadla bolo uskutočnené s použitím rotačnej odparky za zníženého tlaku (600 až 4000 Pa: 4,5 až 30 mm Hg) s teplotou kúpeľa do 60 °C;
iii) priebeh reakcií bol sledovaný chromatografiou na tenkej vrstve (TLC) a dobe reakcie sa udávajú len na ilustráciu;
-49iv) teploty topenia sú nekorigované a „d“ označuje rozklad; uvedené teploty topenia sú teploty získané pre materiály vyrobené podľa opisu; polymorfizmus môže viesť u niektorých materiálov k izolácii látok s rozdielnymi teplotami topenia;
v) štruktúra a čistota všetkých konečných produktov bola overovaná aspoň jedným z nasledujúcich spôsobov: TLC, hmotnostná spektrometria, nukleárna magnetická rezonančná spektroskopia (NMR) alebo mikroanalytické dáta;
vi) výťažky sú uvedené len na ilustráciu;
vii) pokiaľ sú uvedené dáta NMR, sú vo forme hodnôt δ pre hlavné diagnostické protóny, uvedené v ppm relatívne k tetrametylsilánu (TMS) ako vnútornému štandardu pri stanovení pri 300 MHz alebo 400 MHz s použitím uvedeného rozpúšťadla; bežné skratky používané pre tvar signálu sú: s. singlet; d. dublet; t. triplet; m. multiplet; br. široký; a podobne. Naviac „Ar označuje aromatický signál;
viii) chemické symboly majú svoje zvyčajné významy; eq znamená ekvivalent.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Metylester kyseliny (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-2-fenylbut-2-énovej
Krok 1: Metylester kyseliny 2-metoxy-3-(4-metyltio)fenyl-2-fenylbutánovej
K roztoku 1-(1,1-dimetoxyetyl)-4-metyltiobenzénu (2,9 g, 13,7 mmol) v 100 ml
CH2CI2 ochladeného na -78 °C bol po kvapkách pridaný roztok TiCI4 (13,7 ml, 1M v CH2CI2) a potom (2,2-bistrimetylsilyloxyvinyl)benzén (4,6 g, 16,4 mmol) vyrobený podľa postupu Ainsworth, J. Organomet. Chem., 1972, 46, 73). Reakčná zmes bola miešaná 2 hodiny pri -78 °C a bola ukončená roztokom pufra pH 7 (60 ml, NaH2PO4/Na2HPO4). Zmes bola extrahovaná 3 x 50 ml CH2CI2. Extrakty boli spojené, sušené nad MgSO4 a koncentrované. Zvyšok bol rozpustený v 50 ml éteru a bol pridaný nadbytok roztoku CH2N2 v éteri. Odparením éteru bola získaná surová v názve uvedená zlúčenina ako diastereomérna zmes.
-50Krok 2: Metylester kyseliny (E) a (Z)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-2-fenylbut-2-énovej
Surový produkt z kroku 1 (0,6 g) bol rozpustený v 10 ml MeOH a ochladený na 0 °C. Po kvapkách bol pridaný roztok Oxonu (4,0 ml, 0,75 M vo vode) a zmes bola miešaná pri 0 °C10 minút a pri teplote miestnosti 2 hodiny. Zmes bola potom zriedená vodou (10 ml) a extrahovaná 3 x 20 ml CH2CI2. Extrakty boli spojené, sušené nad MgSO4 a koncentrované. Zvyšok bol rozpustený v CH3CN (10 ml) a bol pridaný DBU (0,51 ml). Zmes bola potom zahrievaná 22 hodín pod spätným chladičom a ochladená na teplotu miestnosti. Rozpúšťadlo bolo odparené a zvyšok bol čistený chromatografiou na silikagéli. Elúciou zmesi 9:1 hexán/EtOAc bol najskôr získaný požadovaný E-izomér (0,25 g) ako biela tuhá látka.
1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,69 (2H, d), 7,20 (2H, d), 7,11 (3H, m), 9,69 (2H, m),
3,78 (3H, s), 2,97 (3H, s), 2,34 (3H, s).
Pokračovaním elúcie zmesou 4:1 hexán/EtOAc bol získaný Z-izomér (0,35 g) ako biela tuhá látka.
1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,92 (2H, d), 7,48 (2H, d), 7,41 (2H, m), 7,33 (3H, m),
3,44 (3H, s), 3,07 (3H, s), 2,01 (3H, s).
Príklad 2
Kyselina (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-2-fenylbut-2-énová
Zmes metylesteru kyseliny (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-2-fenylbut-2-énovej (258 mg) a UOH.H2O (98 mg) v 5 ml dioxánu a 5 ml vody bola zahrievaná pod spätným chladičom 2 hodiny. Reakčná zmes bola potom ochladená na teplotu miestnosti, okyslená 1M HCI na pH asi 1 a extrahovaná 50 ml EtOAc. Vrstva EtOAc bola sušená nad Na2SO4 a zakoncentrovaná. Kryštalizáciou žo zmesi 1:1 hexán/EtOAc bola získaná v názve uvedená kyselina (200 mg) ako biela tuhá látka. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,69 (2H, d), 7,19 (2H, d), 7,13 (3H, m), 6,98 (2H, m), 2,97 (3H, s), 2,47 (3H, s).
Príklad 3
Metylester kyseliny (E)-2-(4-fluórfenyl)-3-(4-metylsulfonyl)fenylbut-2-énovej
-51 1H NMR (400 MHz, acetón-d6) δ 7,76 (2H, d), 7,36 (2H, d), 7,06 (2H, m), 6,90 (2H, m), 3,76 (3H, s), 3,05 (3H, s), 2,36 (3H, s).
Príklad 4 (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-1-morfolín-4-yl-2-fenylbut-2-én-1-ón
Podľa postupu opísaného v spôsobe C bola pripravená v názve uvedená zlúčenina.
1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 7,73 (2H, d), 7,28 (2H, d), 7,13 (3H, m), 2H, m), 3,72 (2H, m), 3,64 (2H, m), 3,42 (4H, bs), 3,00 (3H, s), 2,21 (3H, s).
Príklad 5
Kyselina (E)-4-metoxy-3-(4-metylsulfonyl)-2-fenylbuténová
V názve uvedená zlúčenina bola pripravená postupom opísaným v spôsobe
D.
1H NMR (400 MHz, acetón-d6) δ 7,75 (2H, m), 7,42 (2H, d), 7,15 (5H, m), 4,55 (2H, s), 3,30 (3H, s), 3,05 (3H, s).

Claims (15)

PATENTOVÉ NÁROKY
1 R2 H R3 H X CH2OH Y CH3 2 H H CH2OH CH2OMe 3 H H CHO CH3 4 H H CO2H CH3 5 H H CO2Me CH3 6 H H CO2Na CH3 7 H H CHO CH2OMe 8 H H CO2H CH2OMe 9 H H CO2Me CH2OMe 10 H H CO2Na CH20Me 11 H F CH2OI-Í CH3 12 11 F CI-10 CH20Me 13 H F CO2Me CH3 14 H F CO2H CH3 15 H F CO2Na CH3
1) atóm vodíka,
1) atóm vodíka,
1) atóm vodíka a
1) atóm vodíka,
1) atóm vodíka,
1. Difenylstilbénové deriváty všeobecného vzorca I (I) alebo ich farmaceutický prijateľné soli, kde X je a) CH2OH,
b) CHO,
c) CO2R4, alebo
d) CONR42,
Y je a) CH3, alebo
b) CH2OR5,
R1 je zvolená zo skupiny
a) S(O2)CH3,
b) S(O2)NH2,
c) S(O2)NHC(O)CF3,
d) S(O)(NH)CH3,
e) S(O)(NH)NH2,
f) S(O)(NH)NHC(O)CF3,
g) P(O)(CH3)OH a
h) P(O)(CH3)NH2,
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka,
b) halogén,
c) Ci-6 alkoxy,
-53d) Ci.g alkyltio,
e) CN,
f) cf3,
g) Ci-6 alkyl a
h) N3,
R4 je zvolená zo skupiny
a) atóm vodíka,
b) Cv6 alkyl a
c) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
2) halogén,
2) halogén, zvolený zo skupiny fluór, chlór a bróm.
2) halogén;
R4 je atóm vodíka alebo metyl a
R5 je Ci.6 alkyl.
-555. DifenyIstilbénové deriváty podľa nároku 4, kde R1 je zvolený zo skupiny
a) S(O)2CH3a
b) S(O)2NH2;
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
2. Difenylstilbénové deriváty podľa nároku 1, kde Y je CH3) alebo CH2OCV6 alkyl,
2) halogén,
2) halogén,
3) Ci-6 alkoxy, a
3. Difenylstilbénové deriváty podľa nároku 1, kde Y je a) CH3, alebo
b) CH2OC1.6 alkyl,
R1 je zvolený zo skupiny
a) S(O2)CH3,
b) S(O2)NH2,
c) S(O2)NHC(O)CF3,
d) S(O)NHCH3,
e) S(O)NHNH2, a
f) S(O)NHNHC(O)CF3, a
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka,
b) fluór, chlór a bróm,
c) C1-4 alkoxy,
d) C1.4 alkyltio,
e) CN,
f) CF3,
g) C1.4 alkyl.
3) Ci-6 alkyl,
3) C-i-6 alkyl,
4) OH.
4. Difenylstilbénové deriváty podľa nároku 3, kde R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
4) Ci-6 alkoxy,
4) Ci-6 alkoxy,
5) Ci.6 alkyltio,
5) Ci-6 alkyltio,
6. Difenylstilbénové deriváty podľa nároku 1, kde X je CO2R4.
6) OH,
-547) CN,
6) OH,
7. Difenylstilbénové deriváty podľa nároku 6, kde X je CO2R4,
Y je metyl alebo CH2OR5,
R1 je S(O)2CH3,
R2 a R3 sú nezávisle zvolené zo skupiny
a) atóm vodíka a
b) halogén;
R4 je zvolený zo skupiny
a) atóm vodíka, alebo
b) Ci_6 alkyl,
R5 je zvolený zo skupiny
a) Ci-6 alkyl,
b) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
7) CN a
8. Difenylstilbénové deriváty všeobecného vzorca la
R2 R3 X Y H H CH2OH CH3 H H CH2OH CH2OMe H H CHO CH3 H H CO2H CH3 H H CO2Me CH3 H H CO2Na CH3 H H CHO CH2OMe H H CO2H CH2OMe H H CO2Me CH2OMe H H CO2Na CH2OMe H F CH2OH CH3 H F CHO CH2OMe H F CO2Me CH3 H F CO2H CH3 H F CO2Na CH3 F F CO2H CH3 F F CO2Me CH3 F F CO2Me CH2OMe F F COžNa CH2OMe F F CH2OH CH3
-579. Difenylstilbénové deriváty všeobecného vzorca Ib
8) CF3, a
8) CF3, alebo dve skupiny R4 pripojené k rovnakému atómu dusíka môžu tvoriť nasýtený 5, 6 alebo 7-členný kruh prípadne obsahujúci atóm O alebo S alebo ďalší atóm N, pričom uvedený atóm N môže byť substituovaný atómom vodíka alebo skupinou C1-6 alkyl,
R5 je zvolená zo skupiny
a) Ci-6 alkyl,
b) mono- alebo disubstituovaný benzyl, kde substituent je zvolený zo skupiny
9) CO2R4
10. Difenylstilbénové deriváty podľa nároku 1, zvolené zo skupiny
a) metylester kyseliny (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-2-fenylbut-2-énovej,
b) kyselina (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-2-fenylbut-2-énová,
-58c) metylester kyseliny (E)-2-(4-fluórfenyl)-3-(4-metylsulfonyl)fenylbut-2-énovej,
d) (E)-3-(4-metylsulfonyl)fenyl-1 -morfolín-4-yl-2-fenylbut-2-én-1 -ón,
e) kyselina (E)-4-metoxy-3-(4-metylsulfonylfenyl)-2-fenylbuténová.
11. Farmaceutický prostriedok.-na liečenie zápalového ochorenia citlivého na liečenie nesteroidnými protizápalovými prostriedkami, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje netoxické terapeuticky účinné množstvo zlúčeniny podľa niektorého z nárokov 1 až 10 a farmaceutický prijateľný nosič.
12. Farmaceutický prostriedok na liečenie ochorení podmienených cyklooxygenázou, ktorá sa s výhodou lieči aktívnym prostriedkom selektívne inhibujúcim COX-2 oproti COX-1, vyznačujúci sa tým, že obsahuje netoxické terapeuticky účinné množstvo difenylstilbénového derivátu všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 10 a farmaceutický prijateľný nosič.
13. Farmaceutický prostriedok s protizápalovými účinkami, vyznačujúci sa t ý m, že obsahuje protizápalové účinné množstvo difenylstilbénového derivátu všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 10 alebo jeho farmaceutický prijateľnej soli spolu s farmaceutický prijateľným nosičom.
14. Difenylstilbénové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 10 alebo jej farmaceutický prijateľná soľ na použitie na liečenie ochorení podmienených cyklooxygenázou, ktoré sa s výhodou liečia prostriedkom selektívne inibujúcim COX-2 oproti COX-1.
15. Použitie difenylstilbénových derivátov všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 10 alebo ich farmaceutický prijateľnej soli na výrobu liečiva na liečenie zápalového ochorenia citlivého na liečenie nesteroidným protizápalovým prostriedkom.
- 5916. Použitie difenylstilbénových derivátov podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie ochorení podmienených cyklooxygenázou, ktoré sa s výhodou liečia aktívnym prostriedkom selektívne inhibujúcim COX-2 oproti COX-1.
SK1026-98A 1996-02-01 1997-01-29 Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors SK102698A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US1095096P 1996-02-01 1996-02-01
GBGB9605647.8A GB9605647D0 (en) 1996-03-18 1996-03-18 Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors
PCT/CA1997/000063 WO1997028120A1 (en) 1996-02-01 1997-01-29 Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK102698A3 true SK102698A3 (en) 1999-04-13

Family

ID=26308949

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1026-98A SK102698A3 (en) 1996-02-01 1997-01-29 Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors

Country Status (19)

Country Link
EP (1) EP0882015B1 (sk)
JP (1) JP3662936B2 (sk)
KR (1) KR19990082260A (sk)
CN (1) CN1214677A (sk)
AT (1) ATE198323T1 (sk)
AU (1) AU707199B2 (sk)
CA (1) CA2244134C (sk)
CZ (1) CZ241698A3 (sk)
DE (1) DE69703791T2 (sk)
EA (1) EA199800675A1 (sk)
EE (1) EE9800230A (sk)
ES (1) ES2152648T3 (sk)
HU (1) HUP9902119A3 (sk)
IL (1) IL125441A0 (sk)
NO (1) NO983511L (sk)
NZ (1) NZ326283A (sk)
PL (1) PL328225A1 (sk)
SK (1) SK102698A3 (sk)
WO (1) WO1997028120A1 (sk)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6635417B1 (en) 1996-07-31 2003-10-21 California Institute Of Technology Complex formation between DSDNA and oligomer of cyclic heterocycles
US5998140A (en) * 1996-07-31 1999-12-07 The Scripps Research Institute Complex formation between dsDNA and oligomer of cyclic heterocycles
EP1246621A4 (en) 1999-12-23 2004-11-24 Nitromed Inc NITROSED AND NITROSYLATED CYCLOOXYGENASE-2 INHIBITORS, COMPOSITIONS AND METHODS FOR THEIR USE
AR038957A1 (es) 2001-08-15 2005-02-02 Pharmacia Corp Terapia de combinacion para el tratamiento del cancer
US7199154B2 (en) 2002-07-26 2007-04-03 Merck Frosst Company Nitric oxide releasing prodrugs of diaryl-2-(5h)-furanones as cyclooxygenase-2 inhibitors
CA2493156A1 (en) 2002-07-29 2004-02-05 Nitromed, Inc. Cyclooxygenase-2 selective inhibitors, compositions and methods of use
EP1601644B1 (en) * 2003-03-05 2009-05-27 Merck Frosst Company Nitric oxide releasing prodrugs of diaryl-2-(5h)-furanones as cyclooxygenase-2 inhibitors
US7622501B2 (en) 2004-01-27 2009-11-24 Merck Frosst Canada & Co. Nitric oxide releasing prodrugs of diaryl-2-(5H)-furanones as cyclooxygenase-2 inhibitors
JP2007520484A (ja) 2004-01-27 2007-07-26 メルク フロスト カンパニー シクロオキシゲナーゼ−２インヒビターとしてのジアリール−２−（５ｈ）−フラノンの一酸化窒素放出プロドラッグ
WO2006029436A1 (de) * 2004-09-17 2006-03-23 Universität Wien Cox-ii-inhibitorverbindungen
CA3209491A1 (en) 2021-03-15 2022-09-22 Saul Yedgar Hyaluronic acid-conjugated dipalmitoyl phosphatidyl ethanolamine in combination with non-steroidal anti-inflammatory drugs (nsaids) for treating or alleviating inflammatory disease

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1990012786A1 (fr) * 1989-04-24 1990-11-01 Otsuka Pharmaceutical Factory, Inc. Derive de 3-halogeno-2,3-diphenylacrylaldehyde, son procede de fabrication et agent de traitement de l'hyperlipidemie
US5474995A (en) * 1993-06-24 1995-12-12 Merck Frosst Canada, Inc. Phenyl heterocycles as cox-2 inhibitors
US5393790A (en) * 1994-02-10 1995-02-28 G.D. Searle & Co. Substituted spiro compounds for the treatment of inflammation

Also Published As

Publication number Publication date
AU1434697A (en) 1997-08-22
AU707199B2 (en) 1999-07-08
NO983511D0 (no) 1998-07-30
JP3662936B2 (ja) 2005-06-22
KR19990082260A (ko) 1999-11-25
EP0882015B1 (en) 2000-12-27
ES2152648T3 (es) 2001-02-01
NZ326283A (en) 1998-12-23
EA199800675A1 (ru) 1999-02-25
CA2244134A1 (en) 1997-08-07
CZ241698A3 (cs) 1998-12-16
HUP9902119A3 (en) 2001-08-28
CN1214677A (zh) 1999-04-21
IL125441A0 (en) 1999-03-12
PL328225A1 (en) 1999-01-18
ATE198323T1 (de) 2001-01-15
JP2000504332A (ja) 2000-04-11
NO983511L (no) 1998-09-30
EE9800230A (et) 1998-12-15
EP0882015A1 (en) 1998-12-09
DE69703791T2 (de) 2001-06-21
MX9806213A (es) 1998-12-31
WO1997028120A1 (en) 1997-08-07
CA2244134C (en) 2005-04-26
DE69703791D1 (de) 2001-02-01
HUP9902119A2 (hu) 2001-04-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US5733909A (en) Diphenyl stilbenes as prodrugs to COX-2 inhibitors
US5922742A (en) Pyridinyl-2-cyclopenten-1-ones as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
US5677318A (en) Diphenyl-1,2-3-thiadiazoles as anti-inflammatory agents
EP0912518B1 (en) Substituted pyridines as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
US5925631A (en) Alkylated styrenes as prodrugs to COX-2 inhibitors
US5436265A (en) 1-aroyl-3-indolyl alkanoic acids and derivatives thereof useful as anti-inflammatory agents
EP1012142B1 (en) 2,3,5-trisubstituted pyridines as inhibitors of cyclooxygenase-2
SK284114B6 (sk) Fenylheterocyklické deriváty, spôsob ich výroby, ich použitie a farmaceutické prostriedky s ich obsahom
HRP960458A2 (en) (methylsulfonyl)phenyl-2-(5h)-furanones as cox-2 inhibitors
US6046217A (en) 2,3,5-trisubstituted pyridines as inhibitors of cyclooxygenase-2
JPH11500748A (ja) Ｃｏｘ−２阻害剤のプロドラッグとしての３，４−ジアリール−２−ヒドロキシ−２，５−ジヒドロフラン
US6133292A (en) Diaryl-5-alkyl-5-methyl-2-(5H)-furanones as selective cyclooxygenase-2-inhibitors
SK102698A3 (en) Diphenyl stilbenes as prodrugs to cox-2 inhibitors
AU2005206229A1 (en) Nitric oxide releasing prodrugs of diaryl-2-(5H)-furanones as cyclooxygenase-2 inhibitors
JP4004541B2 (ja) Ｃｏｘ―２阻害剤のプロドラッグとしてのアルキル化スチレン
JP2004505943A (ja) シクロオキシゲナーゼ−２阻害薬としてのピロン類
AU6818298A (en) Alpha-methylene gamma lactones as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
AU741790B2 (en) Diaryl-5-alkyl-5-methyl-2(5H)-furanones as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
CA2252401C (en) Pyridinyl-2-cyclopenten-1-ones as selective cyclooxygenase-2 inhibitors
CA2180624C (en) Diphenyl-1,2,3-thiadiazoles as anti-inflammatory agents
US6211210B1 (en) Diphenyl-1,2,3-thiadiazol-3-oxides, compositions and methods of use
MXPA98006213A (en) Diphenylesthylenes as profarmacos for inhibitors of cyclooxygenes
WO2001017996A1 (en) 1,2,3-thiadiazoles and their use as cox-2 inhibitors