SI9600181A - In ovo vaccination against coccidiosis. - Google Patents

In ovo vaccination against coccidiosis. Download PDF

Info

Publication number
SI9600181A
SI9600181A SI9600181A SI9600181A SI9600181A SI 9600181 A SI9600181 A SI 9600181A SI 9600181 A SI9600181 A SI 9600181A SI 9600181 A SI9600181 A SI 9600181A SI 9600181 A SI9600181 A SI 9600181A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
sporozoites
merozoites
dose
mixture
birds
Prior art date
Application number
SI9600181A
Other languages
English (en)
Inventor
A Nigel Evans
Craig R Findly
H Frederick Weber
Original Assignee
Pfizer
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer filed Critical Pfizer
Publication of SI9600181A publication Critical patent/SI9600181A/sl

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/002—Protozoa antigens
    • A61K39/012—Coccidia antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Description

Ozadje izuma
Novo odkritje se nanaša na metodo cepljenja udomačenih ptic proti kokcidiozi. Odkritje se še posebej povezuje z in ovo
Administracijo živih Eimeria spp sporozoitov ali merozoitov, ali mešanico obeh, v razvijajoča se jajca udomačenih ptic z namenom imunizacije zvaljenih piščancev proti kokcidiozi.
Kokcidioza je enterična bolezen udomačenih ptic, ki jo povzročajo intracelularni prašivalski paraziti iz rodu Eimeria.
Iz ekonomskega stališča je kokcidioza najbolj destruktivna parazitna bolezen udomačenih ptic. Ocenjujejo, da stanejo zdravila proti kokcidiozi in izgube zaradi te bolezni, industrijo na stotine milijone dolarjev letno.
Od leta 1950 obstajajo številna poročila o različnih poskusih cepljenja udomačenih ptic proti kokcidiozi. Sedanje metode cepljenja vključujejo administracijo živih Eimeria oocist pticam preko hrane in vode. Vendar pa so te metode neprimerne in neučinkovite, ker vse ptice ne dobijo namenjene doze oocist in mnoge ostanejo nezaščitene s cepivom ali pa dobijo patogeno infekcijo.
V J. M. Sharma in B. R. Burmester, Avian Dis. 26: 134-149,
1981, avtorji poročajo, da se je pri piščancih cepljenih in ovo z virusom herpesa purana, razvila imunost proti kasnejšim okužbam z virusom Marekove bolezni. EP št. 291173, piše o imunizacijskem postopku, za katerega je značilna administracija nedelečega se imunogena in ovo. Imunogeni, na katere se nanaša EP, so genetsko pridobljeni Eimeria antigeni in izvleček Eimeria oocist.
EP specifično vključuje žive parazitne oblike, kot so tiste, uporabljene v metodi cepljenja in obravnavane v tem članku.
Nova metoda cepljenja vključuje in ovo aplikacijo živih Eimeria sporozoitov ali merozoitov, ali mešanice obojih, v razvijajoča se jajca udomačenih ptic. Obstoječa literatura nakazuje, da bi bila takšna metoda cepljenja in ovo neučinkovita in bi morala biti uporabljena po izvalitvi. V T. K. Jeffers in G. E. Wagenbach, J. Parasit. 56 (4): 656-662, 1970, avtorji poročajo, da in ovo injekcija E. tenella sporozoitov deseti dan inkubacije ni privedla do pomembnejše imunološke zaščite proti kasnejšim okužbam z E. tenella oocistami. Poročajo pravzaprav o tem, da je bilo preživetje piščancev brez cepljenja ob kasnejši okužbi z E. tenella oocistami večje kot preživetje piščancev, ki so bili cepljeni s sporozoiti in ovo. V K. L. Watkins et al., VI th. International Coccidiosis Conf., Abstract El-2, Ontario, Canada, 1993, so avtorji opisali in ovo cepljenjem z živimi E. maxima sporocistami in sporuliranimi oocistami ter prišli do zaključka, da njihova študija ne podaja nobenega dokaza, da cepljenje in ovo ščiti pred kasnejšo kokcidialno okužbo z E. maxima oocistami 10 dni po izvalitvi. Watkins et al. so nadalje zaključili, da pride do pomembnejše imunološke zaščite, če cepimo kmalu po izvalitvi, kot pa če cepimo in ovo. Nasprotno temu, pa novo odkritje metode cepljenja in ovo povzroča nastanek nepričakovane imunosti, ki ščiti izvaljene ptice pred kasnejšo kokcidialno okužbo.
Povzetek izuma
Novo odkritje, ki ga v članku omenjamo tudi kot novo metodo cepljenja, je povezano z metodo cepljenja udomačenih ptic proti kokcidiozi, ki vsebuje administracijo efektivne imunizacijske
I doze živih Eimeria sporozoitov ali merozoitov, ali mešanice obojih, v zadnji četrtini inkubacije.
Izraz udomačena(-e) ptica(-e), kot je uporabljen v predmetnem opisu izuma, razen če ni navedeno drugače, vključuje piščance, purane, race, divjačinske ptice (prepelice, fazane in gosi) in neleteče ptice kot so na primer noji.
Izraz in ovo, kot je uporabljen v članku, predmetnem opisu izuma, pomeni administracijo v jajce udomačene ptice, ki vsebuje živ embrio v razvoju.
Izraz administracija in ovo ali in ovo administracija, kot je uporabljen predmetnem opisu izuma, razen če ni navedeno drugače, pomeni dajanje cepiva, opisanega v članku, v jajce udomačene ptice, ki vsebuje živ embrio v razvoju, s kakršnimkoli sredstvom za preboj jajčne lupine in uvajanje cepiva. Ta sredstva administracije vključujejo injekcijo cepiva, toda nanjo niso omejena.
Izraz zadnja četrtina inkubacije, kot je uporabljen v predmetnem opisu izuma, razen če ni navedeno drugače, pomeni zadnjo četrtino inkubacije razvijajočega se jajca udomačene ptice.
Izraz Eimeria, kot je uporabljen v predmetnem opisu izuma, razen če ni navedeno drugače, pomeni eno ali več vrst rodu Eimeria, ki povzročajo okužbe udomačenih ptic. Te Eimeria vrste vljučujejo tiste, ki jih najdemo pri piščancih, vključno z E.tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, E.mitis, E.praecox in E.brunetti, tiste, ki jih najdemo pri puranih, vključno z E.meleagrimitis, E.adenoeides, E.gallopavonis, E.dispersa, E.meleagridis, E.innocua in E.subrotunda. Sem spadajo tudi Eimeria vrste, ki infecirajo druge udomačene ptice, kot je že zgoraj opisano. Izraz Eimeria prav tako vključuje vse posebne vrste že omenjenega rodu Eimeria, vključujoč, ne pa tudi omejujoč se na vrste, ki se razvijejo pred določenim časom in vrste, ki so šibkejše, Le-te vključujejo tiste vrste, ki so bile izpostavljene rentgenskim žarkom, UV žarkom ali drugimi sevajočimi viri svetlobe, ali tretirane kako drugače, tako da se niso bile zmožne razviti do konca. Izraz Eimeria vključuje tudi na novo odkrite vrste ali vrste Eimeria, ki okužujejo udomačene ptice.
Izraz sporozoiti, sporociste, oociste in merozoiti so v predmetnem opisu izuma uporabljeni, razen če ni navedeno drugače, kot živi Eimeria sjoorozoiti, sporociste, oociste in merozoiti.
Izraz efektivna imunizacijska doza”, kot je uporabljen v predmetnem opisu izuma, razen če ni navedemo drugače, pomeni število sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh, ki je zadostno za nudenje imunizacijske zaščite v izvaljenih pticah, ki pa je večja kot inherentna imunost ptic, ki niso bile imunizirane. Kot je v predmetnem opisu izumu uporabljeno, sta izraza imunizirati” in cepiti sinonima in sta uporabljena izmenično.
Doza, ki je priporočljiva za administracijo glede na odkrito metodo, vsebuje od 10 do 106 sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh, za katero je značilno, da število sporozoitov in merozoitov varira od 10 do 106.
Priporočljivejša doza vsebuje od 103 do 106 sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh, za katero je značilno, da število sporozoitov in merozoitov varira od 103 do 106.
Še ena možnost za doziranje: doza naj vsebuje od 102 do 105 sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh, za katero je značilno, da število sporozoitov in merozoitov varira od 102 do 106.
Priporočena ptica, ki naj bi bila cepljena po odkriti metodi, je piščanec.
Priporočena administrirana doza za in ovo za kokošja jajca vsebuje sporozoite ali merozoite, ali mešanico obeh, iz dveh ali več vrst Eimeria, izbrane iz skupine, ki vsebujejo E.tenella, E.maxima, E.necatrix, E.mitis, E.praecox in E.brunetti. Doza vsebuje od 10 do 106 sporozoitov ali merozoitov, ali mešanico obeh, za vsako vrsto, ki je vključena v dozo.
Še ena priporočena udomačena ptica, ki bi bila cepljena po odkriti metodi, je puran.
Priporočena doza za administracijo in ovo za puranja jajca vsebuje sporozoite ali merozoite ali mešanico obeh, dveh ali več vrst Eimeria, izbrane iz skupine, ki vsebujejo E.meleagrimitis, E.adenoeides, E.gallopavonis, E.dispersa, E.meleagridis,
E.innocua in E.subrotunda. Priporočena doza vsebuje od 10 do 106 sporozoitov ali merozoitov ali mešanica obeh, za vsako vrsto, ki je vključena v dozi.
Druge udomačene ptice, ki so prav tako primerne za cepljenje po odkriti metodi, so divjačinske ptice, race in neleteče ptice.
Odkrita metoda vsebuje tudi, v kombinaciji z novo metodo cepljenja, in ovo administriran imunostimulans v kadarkoli med inkubacijo.
Priporočena metoda administriranega imunskega stimulansa je hkrati z in ovo administracijo doze sporozoitov ali merozoitov, ali že omenjeno mešanico obeh, med zadnjo četrtino inkubacije.
Podroben opis izuma
Sedanja metoda cepljenja vključuje in ovo administracijo živih Eimeria sporozoitov ali merozoitov ali že omenjene mešanice, v jajca udomačenih ptic med zadnjo četrtino inkubacije. V primeru, če gre za piščance je in ovo administracija priporočena za 15. do
20. dan inkubacije in najboljša v 18-tem dnevu inkubacije. V primeru puranov je in ovo administracija priporočena med 21-tim in 26-tim dnevom inkubacije.
Nova metoda cepljenja se lahko izvaja tako, da se uporabljajo katerekoli primerne administracijske metode. Bolje pa je, če je cepivo administrirano preko injekcije. Glede na eno metodo vbrizgavanja se naredi luknja skozi jajčno lupino pri širšem koncu jajca, pri čemer uporabljamo iglo 18, da izpostavimo jajčne zračne celice. 2.5-3.0 cm igla 22, ki je pripeta na siringo pravih mer (l-3ml), lahko gre skozi luknjo in skozi membrano zračne celice. Odgovarjajoče število sporozoitov ali merozoitov, ali mešanico obeh, suspendiramo v primeren tekočinski nosilec, na primer: 10-500pL slane vode s fosfatnim pufrom vbrizgamo v jajce. Odgovarjajoč volumen bo odvisen od velikosti obravnavanega jajca, saj je na primer nojevo jajce sposobno sprejeti večji volumen kot kokošje jajce. Mesto vbrizganja je lahko v kateremkoli področju jajca ali zarodka. Rajši pa vbrizgavamo aksialno skozi center širšega dela jajca v amnion.
Kot alternativo lahko pri tej metodi izberemo tudi avtomatsko vbrizgavanje v jajca. Taki sistemi so opisani v U. S. Patentih 4, 681,063, 4,040,388, 4,469,047 in 4,593, 646, ki so v tem patentu vključeni z navedbo. Ostale odgovarjajoče metode vbrizgavanja so izkušenim v stroki znane.
Oociste so lahko pripravljene s katerokoli znano metodo tega področja. Take metode vključujejo pristope opisane v J. F. Ryley et al., Parasitology 73:311-326, 1976 in P. L. Long et al., Folia Veterinaria Latina VI#3, 201-217, 1976, ki so tu vključeni kot reference. Po eni metodi so se potrošniški jedilni piščanci, stari približno dva tedna, okužili z Eimeria vrstami z zaužitjem pripravljene hrane za rejenje, ki je vsebovala ustrezen odmerek sporuliranih oocist. Na primer, tipični odmerek, uporabljen za E.tenella, je 200.000 sporuliranih oocist na ptico. Potem sledi zelo znani postopek zbiranja in čiščenja oocist iz okuženih ptic. Za večino vrst rodu Eimeria je odvzeto in zbrano blato iz okuženih ptic 5-7 dni po infekciji. Blato se zmeša in filtrira, da se odstranijo odvečni skupki ter centrifugira pri hitrosti, ki je zadostna za oblikovanje preostalega blata v kroglico. Za E.tenella velja podoben postopek, razen da so cekalne sredice vzete po šestem dnevu infekcije. Dobljeno kroglico resuspendiramo v nasičeni raztopini soli, v kateri oociste lebdijo in tako lahko večino kontaminirajočih ostankov odstranimo s centrifugiranjem. Oociste večkrat zaporedoma izperemo, da odstranimo sol in ponovno suspendiramo v raztopini kalijevega dikromata (2.5% w/v). Suspenzijo oocist inkubiramo pri 29°C z vmesnim stresanjem (npr. 140 rpm) približno 72 ur, da izzovemo sporulacijo oocist.
Alternativno lahko oociste obdelujemo tudi z natrijevim ^Jhipokloritom in te nato sporulirajo. Število sporuliranih oocist/ml je določeno z direktnim štetjem, pri čemer se uporablja hemocitoraeter. Nato kulture do uporabe shranimo, najbolje je, če so v hladilniku.
Za pripravo sporocist odstranimo kalijev dikromat iz suspenzije oocist s ponavljajočim spiranjem oocist, kar vključuje tudi zbiranje oocist s centrifugiranjem ter ponovno suspendiranje v deionizirani ali destilirani vodi. Ko je dikromat odstranjen, kar ocenimo po odsotnosti rumeno-oranžnega obarvanja, se suspenzija oocist zmeša z enakim volumskim delom natrijevega hipoklorita (belilo) in inkubira pri sobni temperaturi za 15 minut. Belilo odstranimo s ponovnim izpiranjem, oociste pa ponovno suspendiramo v fiziološki slani ali deionizirani vodi. Oociste se lahko prelomijo in sprostijo sporociste, za kar lahko uporabimo različice že znanih tehnik. Na primer, sproščanje sporocist lahko izzovemo z mešanjem oocist in steklenih drobcev, ki so veliki od 1-4 mm v premeru, mešamo pa lahko ročno, z vortex mešalcem, stresalnim inkubatorjem ali pa lahko uporabimo ročni homogenizator. Še nezlomljene oociste in stene le-teh lahko ločimo od že sproščenih sporocist z diferencialno centrifugo v 50% Percollu™ (prodaja Pharmacia Biotech) ali v IM saharozi, kot je opisano v Dulski et al., Avian Diseases, 32: 235-239, 1988.
Za pripravo sporozoitov ali preparata bogatega s sporozoiti
C ~ -..... .....
uporabimo, glede na sedanja odkritja, postopek v katerem so sporozoiti izrezani iz sporocist, ki jih dobimo po predhodno opisanem postopku. V prvem postopku so sporociste pripravljene, kot je opisano poprej, v obliki kroglic s centrifugiranjem, ponovno suspendirane ekscistacijskem pufru (0.5% taurodeoksiholna kislina in 0.25% tripsin v slani vodi s fosfatnim pufrom, pH 8.0) in inkubirane s stresanjem eno uro pri 41°C. Vzorec pripravljene suspenzije štejemo, da določimo število sporozoitov. Sporozoiti nato enkrat izperemo zaradi odstranitve ekscistacijskega pufra in ponovno suspendiramo v fosfatno-pufrski slani vodi pri poljubni koncentraciji za in ovo vbrizganje. Ta priprava nam da a
sporozoite, sporociste in oociste, ki se brez nadaljnega čiščenja lahko uporabljajo za novo metodo cepljenja. Očiščene sporozoite, odstranjene od sporocist in oocist, lahko pripravimo tudi z DE-52 anion-izmenjevalno kromatografijo, kot je opisana v D. M. Schmatz et al., J. Protozool. 31: 181-183, 1984, kar je v predmetni opis vključeno z referenco. Uporaba odmerka sporozoitov v novi metodi cepljenja, je odvisna od tipa udomačene cepljene ptice in vrste Eimeria, ki je uporabljena za cepljenje. V splošnem, doza lahko vsebuje od 10 do 106 sporozoitov na jajce. Boljše je, če doza varira od 10 do 105 sporozoitov na jajce, še boljši odmerek pa je od 102 do 105 sporozoitov na jajce.
Merozoite lahko pripravimo z različnimi metodami, ki so strokovnjakom iz tega področja že znane. V eni metodi so sporozoiti inficirani v primarne ledvične celice kokoši (PCK primary chick kidney; Op. prev.), ki so zrasle kot kultura v celičnih agregatih. Pri tem se uporablja modifikacija metode, opisane v D. J. Doran, J. Parasit. 57: 891-900, 1971, kar je v članku opisano pod referencami. PCK celice zrastejo pri 40°C v 3% C02 v spremenjenem RK mediju - DMEM/F12 z L-glutaminom in 15 mM HEPES, z dodanim fetalnim govejim serumom, penicilinstreptomicinom, 15 mM natrijevim karbonatom, 10 ng/ml epidermalnega rastnega faktorja, 5 gg/ml transferina, 5 ng/ml selenske kisline in Ο.ΟΙμΜ hidrokortizona HCL kot je opisano v S. D. Chung et al., J. Celi Biol. 95: 118-126, 1982. PCK celice so pripravljene iz ledvic od dveh do treh tednov starih piščancev. Ledvice sesekljamo in nato izpostavimo pri 37 °C različnim spremembam z 0.2 mg/ml kolagenazo (komercialno dostopna v prodaji Worthington Biochemical Corp. Freehold, NJ) v slani vodi s fosfatnim pufrom. Celične agregate iz že odstranjene tekočine, ki nastane nad oborino, izpiramo in ponovno suspendiramo v spremenjenem RK mediju, ki vsebuje 5% fetalnega govejega seruma in se uporablja za gojenje kultur tkiv pri gostoti 105 agregatov na cm2. PCK celice inkubiramo 18 ur pri 40°C v 3% C02 in nato inficiramo z 4xl05 sporozoitov/cm2.
Inficirane kulture zrastejo v modificiranem RK 2 mediju, ki vsebuje 2% fetalnega govejega seruma. Po 24 urah inkubacije, to je čas v katerem se dovoli vdor, nepoškodovane sporozoite odstranimo s stresanjem steklenice in odstranitvijo sredine zrasle kulture. Tanko površino celic izpiramo enkrat z modificiranim RK 2 medijem, ki vsebuje 2% fetalnega govejega seruma in ponovno odstranitvijo sredine. Dodamo svež RK 2 medij in kulture inkubiramo 48 do 54 ur, dokler se merozoiti ne sprostijo v sredino.
Čiščenje merozoitov z namenom odstranitve gostujoče neuporabne celice se lahko izvede z različnimi metodami, ki so že poznane strokovnjakom tega področja. Glede na metodo, opisano v J. A. Olson, Antimicrob. Agents Chemother. 34: 1435-1439, 1990, sredico kulture, ki vsebuje sproščene merozoite, zberemo in merozoite koncentriramo pri in 450 X g za deset minut. Kroglice, ki vsebujejo merozoite in gostujoče odvečne celice, suspendiramo v 0.1 M NaCl-0.05 M KC1- 20% govejega seruma albumina in uporabljene v DE-52 anionske izmenjevalne kolone uravnotežene v 75 mM TRIS-40 mM NaH2PO4-86mM NaCl - 100 mM glukoze pri pH 8.2. Merozoiti tečejo skozi kolono. Zbrane merozoite iz kolone lahko testiramo na čistost z elektronsko mikroskopijo, kot je opisano v A. Kilejian, J. Biol. Chem. 249: 4650-4655, 1974. V splošnem lahko odmerek merozoitov varira od 10 do 106 merozoitov na jajce. Boljši pa je odmerek od 10 do 105 merozoitov na jajce in še bolje od 102 do 105 merozoitov. Ko sporozoite in merozoite mešamo, v splošnem doza, ki vsebuje skupno število le-teh, lahko varira od 10 do 106 na jajce. Boljši odmerek lahko varira od 10 do 105 merozoitov in sporozoitov ter še boljši odmerek od 102 do 105 obeh na jajce.
Sporozoite ali merozoite ali mešanico obeh, lahko vcepimo in ovo v kateremkoli fiziološkem mediju. Najbolje je, če jih suspendiramo v fiziološko uravnoteženi slani vodi, kot je npr. slana voda s fosfatnim pufrom. Izbran medij lahko po možnosti vključuje enega ali več suspendiranih reagentov, vključujoč fiziološko primerne gele, želatine, hidrosole, celulozo ali polisaharidna lepila.
Boljše je, da pri sedanji metodi cepljenja sporozoitov ali merozoitov ali mešanice obeh, vcepimo in ovo dve ali več vrst Eimeria rodu v istem času. Glede na sedanjo metodo cepljenja lahko vbrizgamo in ovo v istem času ali pa v serijah, odgovarjajoče odmerke, ki omogočajo imunološko zaščito proti vsem vrstam.
Imunostimulansi se prav tako lahko uporabljajo v kombinaciji s to metodo cepljenja. Primerni imunostimulansi so citokini, rastni faktorji, kemokini, plavajoči deli kultur limfocitnih celic, monociti, celice limfnih organov, pripravljene celice ali celični ekstrakti (npr., Staphylococcus aureus ali lipopolisaharidni pripravki), mitogeni, ali adjuvansi, vključujoč nizko molekularne farmacevtike. Imunostimulans je lahko administriran in ovo kadarkoli med samo inkubacijo. Priporočena pa je administracija imunostimulansa in ovo v mediju, ki vsebuje odmerek Eimeria sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh.
Učinkovitost sedanjega odkritja v cepljenju proti kokcidiozi je prikazana v sledečih primerih. Vsak odmerek je bil injeciran in ovo v fiziološko sprejemljivi raztopini soli, kot je predhodno opisano. Učinkovitost posameznega preparata je bila določena z opazovanjem efektov na izvalitveno razmerje in izvalitveno težo piščancev, nadaljni izpostavitvi okužbe, pa tudi glede na proizvodnjo oocist, pridobljeno težo in obolelost (procent obolenj). Procenti obolenj so bili zadani po postopku opisanem v J. K. Johnson in W. M. Reid, Exp. Parasitol. 28:30-36, 1970.
Glede na ta postopek vrednost 0 predstavlja odsotnost bolezni in vrednost 4 maksimalno patologijo.
Primer 1
V piščančja jajca injiciramo 18.dan inkubacije preparat, ki vsebuje 105 E.tenella sporozoitov na jajce. Preparat nismo li predhodno prečistili, da bi odstranili sporociste in oociste.
Vsak odmerek je vseboval tudi približno 104 E.tenella sporocist in približno 104 E.tenella oocist. Za kontrolo so bila uporabljena jajca injicirana samo s slano raztopino s fosfatnim pufrom. V populaciji ptic, injicirani s sporozoiti, je bila sedmi dan po izvalitvi povprečna vrednost Ι.ΙχΙΟ6 oocist na ptico. Neimunizirane ptice in ptice injicirane s sporozoiti so bile izpostavljene različnim dozam sporuliranih oocist E.tenella, ki so bile administrirane v sedmem, štirinajstem ali enaindvajsetem dnevu po izvalitvi pri oralnem hranjenju.
Glej podatke v tabeli 1.
Tabela 1: Imunizirane proti neimuniziranim pticam: rezultati različnega doziranja pri različnih časih po izvalitvi
Rezultati obolenj po šestdnevnem izpostavljanju Pridobljena teža (grami) na ptico po šestdnevnem izpostavljanju
Skupina1 Odmerek (sporulirane oociste na ptico) Neimuni- zirane ptice Imunizacija in ovo (1O5 sporozoitov v 18.dnevu inkubacije) Neimuni- zirane ptice Imunizacija in ovo (105 sporozoitov v 18.dnevu inkubacije)
7. dan 0 0 0 188 167
PO 2.5xl03 3.0 0.3* 154 153
izvalitvi 5x103 3.1 1.2* 153 167
ΪχΪΟ4 3.7 1.4* 123 165*
14.dan 0 0 0 266 278
po 2.5x1O3 2.4 0.4* 260 269
izvalitvi 5xlČP 2.8 1.1* 244 265
lxlO4 3.3 1.6* 265 259
21.dan 0 0.1 0 361 357
po 2.5xl03 2.3 0.7* 375 358
izvalitvi 5xl03 2.1 0.8* 332 344
1x104 2.8 1.4* 337 395
LEGENDA:
1 Vsaka skupina je bila sporuliranim oocistam izpostavljena samo enkrat: Ί., 14. ali 21.dan. Npr. ptice, ki so bile izpostavljene sporuliranim oocistam 21.dan, niso bile izpostavljene 7. in 21.dan.
* Značilno različni rezultati glede na neimunizirane ptice (p<0.05, ANOVA)
Podatki v tabeli 1 jasno kažejo, da so bile imunizirane ptice manj dovzetne za infekcijo kot njihove neimunizirane vrstnice, kar kažejo nižji procenti obolevanja in izboljšanje pridobivanja teže pri imuniziranih pticah. Podatki kažejo tudi, da nova metoda spodbudi razvoj imunosti pri piščancih relativno zgodaj (v prvih sedmih dneh po izvalitvi). Nadalje kažejo ti podatki, da se imunost z rastjo in razvojem piščancev nadaljuje. Razvoj imunosti pri piščancih v zgodnji dobi pomeni pomembno prednost v industriji piščancev za pečenje, saj le-ti lahko pridejo na trg že pri starosti šest tednov.
Primer 2
Kokošja jajca so bila injicirana na 18.dan inkubacije s slano vodo (kontrola) ali s preparati, ki so vsebovali različne odmerke sporozoitov E.tenella kot je označeno v tabeli 2, ki prikazuje rezultate pred izpostavitvijo okužbi. Sporozoitni preparati, uporabljeni za vsak odmerek, so vsebovali 62% sporozoitov, 9% sporocist in 29% oocist. Vsak odmerek, ki je vseboval 105 sporozoitov, je vključeval 1.6 χ 105 parazitnih faz (sporozoitov, sporocist in oocist).
Tabela 2: In ovo cepljenje glede na Izvalitveno razmerje in težo
Injicirani sporozoiti na jajce (18.dan inkubacije) Izvalitveno razmerje Izvalitvena teža (grami)
0 94 48.2
0 94 48.0
Ϊ03 100 49.4
Ϊ01 97 47.0
Ϊ03 94 49.1
Podatki v tabeli 2 kažejo, da so bili piščanci, izvaljeni iz jajc injiciranih z živimi sporozoiti, identični njihovim neimuniziranim vrstnikom glede na izvalitveno razmerje in izvalitveno težo. Piščanci so bili nato 14.dan po izvalitvi izpostavljeni okužbi z 1.25xl04 sporuliranih oocist E.tenella na ptico prek hrane. Rezultati izpostavitve okužbi so v tabeli 3.
Tabela 3: Rezultati Infekcij nelmunlzlranlh ptic glede na ptice, tretlrane z In ovo cepljenjem (pri različnih odmerkih sporozoltov)
Injicirani sporozoiti na jajce (18.dan inkubacije) Pridobljena teža ptice po šestih dnevih izpostavlja- nja Procent obolelih po šestih dnevih izpostavlja- nja Število izločenih oocist na ptico šest dni po tretmanu (xl06)
0 278 3.2 12.3
0 neizzvana kontrola 321 0 0.003*
Ϊ03 289 2.6* 11.2
Ϊ01 291 2.7 12.2
Ϊ05 304* 1.4* 1.4*
LEGENDA:
* Značilno različni rezultati glede na izpostavljeno neimunizacijsko skupino (le-ta je sprejela slano vodo) (p<0.05, ANOVA)
Podatki v tabeli 3 kažejo, da piščanci iz jajc, injiciranih z različnimi odmerki sporozoitnih preparatov, z vsakim parametrom (pridobitev teže, procent obolevanja, število oocist)dokazujejo razvoj imunosti. V primerjavi s kontrolnimi pticami, ki so bile injicirane le s slano vodo in so bile izpostavljene okužbi, so ptice imunizirane in ovo s sporozoitnimi preparati, pokazale večjo pridobitev teže in manjši procent obolevanja. Poleg tega so ptice, imunizirane in ovo s sporozoitnimi preparati, po izpostavitvi okužbi izločile manj oocist kot kontrolne ptice, kar kaže na to, da je bila okužba pri imuniziranih pticah blažja.

Claims (16)

  1. Patentni zahtevki
    1. Metoda cepljenja udomačenih ptic proti kokcidiozi, značilna po tem, da vključuje administracijo efektivnega odmerka živih Eimeria sporozoitov in ovo v zadnji četrtini inkubacije.
  2. 2. Metoda po zahtevku 1, značilna po tem, da vključuje odmerek od 10 do 106 sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh,kjer je celotno število omenjenih sporozoitov in merozoitov od 10 do 106.
  3. 3. Metoda po zahtevku 1, značilna po tem, da vključuje odmerek od 103 do 106 sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh, za katero je značilno, da je celotno število omenjenih sporozoitov in merozoitov od 103 do 106.
  4. 4. Metoda po zahtevku 1, značilna po tem, da vključuje odmerek od 102 do 105 sporozoitov ali merozoitov ali mešanico obeh, za katero je značilno, da je celotno število omenjenih sporozoitov in merozoitov od 102 do 105.
  5. 5. Metoda po zahtevku 2, značilna po tem, da je udomačena ptica piščanec.
  6. 6. Metoda po zahtevku 5, značilna po tem, da vključuje odmerek sporozoite ali merozoite ali mešanico obeh, iz dveh ali večih vrst Eimeria izbranih iz skupine, ki obsega E.tenella, E.acervulina, E.maxima, E.necatrix, E.mitis, E.praecox in E.brunetti.
  7. 7. Metoda po zahtevku 6, značilna po tem, da je odmerek administriran in ovo z injekcijo.
  8. 8. Metoda po zahtevku 2, značilna po tem, da vključuje in ovo administracijo imunostimulansa kadarkoli med inkubacijo.
  9. 9. Metoda po zahtevku 8, značilna po tem, da je imunostimulans administriran in ovo istočasno z odmerkom sporozoitov ali merozoitov, ali mešanice omenjenih sporozoitov in merozoitov.
  10. 10. Metoda po zahtevku 2, značilna po tem, da odmerek vključuje merozoite.
  11. 11. Metoda po zahtevku 2, značilna po tem,da odmerek vključuje sporozoite.
  12. 12. Metoda po zahtevku 11, značilna po tem,da so bili sporozoiti očiščeni z namenom odstranitve sporocist in oocist.
  13. 13. Metoda po zahtevku 2, značilna po tem, da je udomačena ptica puran.
  14. 14. Metoda po zahtevku 13, značilna po tem, da vključuje odmerek sporozoite ali merozoite, ali mešanice obojih, iz dveh ali večih vrst Eimeria izbranih iz skupine, ki obsega E.meleagrimitis, E.adenoeides, E.gallopavonis, E.dispersa, E.meleagridis, E.innocua in E.subrotunda.
  15. 15. Metoda po zahtevku 14, značilna po tem, da je odmerek administriran in ovo z injekcijo.
  16. 16. Metoda po zahtevku 2, značilna po tem, da je udomačena ptica borbena ptica, raca ali neleteča ptica.
SI9600181A 1995-06-07 1996-06-06 In ovo vaccination against coccidiosis. SI9600181A (en)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB1995/000446 WO1996040234A1 (en) 1995-06-07 1995-06-07 In ovo vaccination against coccidiosis

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI9600181A true SI9600181A (en) 1997-04-30

Family

ID=40909824

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI9600181A SI9600181A (en) 1995-06-07 1996-06-06 In ovo vaccination against coccidiosis.

Country Status (37)

Country Link
US (2) US6500438B2 (sl)
EP (1) EP0831897B1 (sl)
JP (1) JP3120860B2 (sl)
KR (1) KR0167417B1 (sl)
CN (1) CN1153510C (sl)
AR (3) AR002157A1 (sl)
AT (1) ATE200029T1 (sl)
AU (1) AU694872B2 (sl)
BG (1) BG63035B1 (sl)
BR (1) BR9602667A (sl)
CA (1) CA2223700C (sl)
CO (1) CO4440630A1 (sl)
CZ (1) CZ290810B6 (sl)
DE (1) DE69520509T2 (sl)
DK (1) DK0831897T3 (sl)
DZ (1) DZ2048A1 (sl)
ES (1) ES2155129T3 (sl)
FI (1) FI974439A (sl)
GR (1) GR3035938T3 (sl)
HU (1) HU223707B1 (sl)
IL (1) IL118490A (sl)
MA (1) MA23890A1 (sl)
MX (1) MX9709868A (sl)
MY (1) MY121973A (sl)
NZ (1) NZ286754A (sl)
PE (1) PE2998A1 (sl)
PL (1) PL184002B1 (sl)
PT (1) PT831897E (sl)
RO (1) RO113716B1 (sl)
RU (1) RU2125890C1 (sl)
SI (1) SI9600181A (sl)
SK (1) SK282004B6 (sl)
TR (1) TR199600471A2 (sl)
TW (1) TW430558B (sl)
UA (1) UA41381C2 (sl)
WO (1) WO1996040234A1 (sl)
ZA (1) ZA964726B (sl)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK282004B6 (sk) * 1995-06-07 2001-10-08 Pfizer Inc. Použitie živých sporozoitov alebo merozoitov rodu eimeria na výrobu očkovacej látky na in ovo očkovanie domestikovaných vtákov proti kokcidióze
US6627205B2 (en) * 1997-12-01 2003-09-30 Pfizer Incorporated Ovo vaccination against coccidiosis
DE19828322A1 (de) * 1998-06-25 1999-12-30 Hoechst Roussel Vet Gmbh Coccidienvakzine, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
US6984378B1 (en) 1999-02-26 2006-01-10 Pfizer, Inc. Method for the purification, recovery, and sporulation of cysts and oocysts
WO2001034187A2 (en) * 1999-11-08 2001-05-17 Novus International, Inc. Preparation and method for prevention of coccidiosis
US20070077256A1 (en) 1999-11-19 2007-04-05 Los Angeles Biomedical Research Institute Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis and other infectious agents
US6682754B2 (en) * 1999-11-24 2004-01-27 Willmar Poultry Company, Inc. Ovo delivery of an immunogen containing implant
EP1359799A2 (en) 2000-11-08 2003-11-12 Novus International, Inc. Methods and compositions for the control of coccidiosis
DE60237977D1 (de) 2001-08-30 2010-11-25 Embrex Inc Verbesserte verfahren zur herstellung von oozysten
US7250286B2 (en) * 2002-05-21 2007-07-31 Schering-Plough Corporation Methods for the in vitro culture of Sporozoea sp. and uses thereof
JP5014413B2 (ja) * 2006-03-30 2012-08-29 エンブレックス・インコーポレイテッド 家禽のワクチン接種のための方法及び組成物
US20080194006A1 (en) * 2007-02-08 2008-08-14 Embrex, Inc. Methods of releasing sporocysts from oocysts using controlled shear forces
MX2010012869A (es) 2008-05-29 2010-12-14 Intervet Int Bv Vacunas contra coccidiosis.
MX2011005133A (es) 2008-11-13 2011-08-04 Intervet Int Bv Vacuna contra eimeria para pavos.
US8858959B2 (en) 2011-07-15 2014-10-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Gel vaccine delivery system for treating poultry
CN103998056B (zh) 2011-07-22 2017-09-12 诺瓦蒂格姆疗法有限公司 用于接种抗金黄色葡萄球菌疫苗的方法和组合物
AU2014227748B2 (en) 2013-03-15 2019-02-14 Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center Compositions and methods for treating fungal and bacterial pathogens
EP3426287A4 (en) 2016-03-09 2020-03-11 Los Angeles Biomedical Research Institute at Harbor-UCLA Medical Center METHODS AND KITS FOR USE IN THE PREVENTION AND TREATMENT OF VULVO-VAGINAL CANDIDOSIS
US20180208885A1 (en) 2017-01-24 2018-07-26 Mary Ann Pfannenstiel Antibiotic-free compositions for the prevention or control of coccidiosis
JP2021531262A (ja) * 2018-07-10 2021-11-18 アプライド ライフサイエンシズ アンド システムズ エルエルシー ゲルを準備及び送達するシステム及び方法
WO2023170057A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Hipra Scientific, S.L.U. In ovo vaccine compositions against coccidiosis

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5345595B2 (sl) 1972-07-27 1978-12-07
US4040388A (en) 1976-02-27 1977-08-09 Agrimatic Corporation Method and apparatus for automatic egg injection
FR2408351A1 (fr) 1977-11-14 1979-06-08 Unilever Nv Procede et composition destines a la lutte contre la coccidiose chez la volaille
JPS5649323A (en) 1979-09-29 1981-05-02 Nisshin Flour Milling Co Ltd Coccidiostat
US4357320A (en) 1980-11-24 1982-11-02 Gist-Brocades N. V. Infectious bronchitis vaccine for poultry
PT72077B (en) 1979-11-30 1981-09-29 Gist Brocades Nv Infectious bronchitis vaccines for poultry and process forthe preparation of such vaccines
US4500638A (en) 1979-11-30 1985-02-19 Gist-Brocades N.V. Infectious bronchitis virus strain
US4735801A (en) 1982-09-07 1988-04-05 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Novel non-reverting salmonella live vaccines
JPS5780325A (en) 1980-09-05 1982-05-19 Nat Res Dev Coccidial disease vaccine
GB2114438A (en) 1982-02-05 1983-08-24 Akzo Nv Infectious bronchitis vaccines
US4593646A (en) 1982-06-01 1986-06-10 Agrimatic Corporation Egg injection method and apparatus
US4458630A (en) 1982-06-22 1984-07-10 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Disease control in avian species by embryonal vaccination
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4650676A (en) 1983-08-19 1987-03-17 American Cyanamid Company Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp.
US4469047A (en) 1983-10-25 1984-09-04 Miller Gary E Apparatus and method for injecting eggs
US5279960A (en) 1984-07-05 1994-01-18 Enzon Corp. 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella
US4681063A (en) 1986-07-02 1987-07-21 Embrex Inc. High speed automated injection system for avian embryos
JP2573189B2 (ja) 1986-08-08 1997-01-22 新技術事業団 カリクレインの検出方法
US5496550A (en) 1986-08-14 1996-03-05 Chilwalner Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick
DE3752263T2 (de) 1986-08-18 1999-07-08 Btg Int Ltd Impfstoffe
US4935007A (en) 1986-08-28 1990-06-19 Eli Lilly And Company Anticoccidial method
NZ221560A (en) 1986-08-28 1989-10-27 Lilly Co Eli Method of protecting animals against coccidiosis by the oral administration of infective coccidial organisms
IL85980A (en) * 1987-04-16 1992-03-29 Embrex Inc Disease control in avian species by embryonal vaccination with a nonreplicating immunogen
GB8711256D0 (en) 1987-05-13 1987-06-17 Unilever Plc Protection
US5004607A (en) 1987-08-25 1991-04-02 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Method of immunizing poultry
US4808404A (en) 1988-01-11 1989-02-28 A. H. Robins Company, Inc. Live vaccine for coccidiosis utilizing coccidial sporozoites
ZA893740B (en) 1988-06-03 1990-02-28 Hoffmann La Roche Recombinant coccidiosis vaccines
JPH01313437A (ja) 1988-06-14 1989-12-18 Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho 飼料内投与用の粒子状生ワクチン及びその製法並びに鶏コクシジウム症生ワクチン
US5068104A (en) 1988-08-01 1991-11-26 A. H. Robins Company Incorporated Live vaccine for coccidiosis utilizing coccidial sporozoites
NL8802399A (nl) 1988-09-29 1990-04-17 Marcus Theodorus Martinus Pete Preparaat, geschikt voor gebruik inzake de preventie van de bij coccidiosis optredende schade bij pluimvee, voedsel resp. drinkwater, dat een dergelijk type preparaat bevat, werkwijze voor het voorkomen van de bij coccidiosis optredende schade bij pluimv
US5028421A (en) 1989-05-25 1991-07-02 Embrex, Inc. Method of treating birds
US5106617A (en) 1989-06-27 1992-04-21 Embrex, Inc. Method of treating immature birds with IL-2
ZA9010461B (en) 1990-01-26 1991-10-30 Hoffmann La Roche Recombinant coccidiosis vaccines-5-7 eimeria surface antigen
US5288845A (en) 1991-05-29 1994-02-22 Merck And Co., Inc. Eimeria necatrix 16s rDNA probes
US5359050A (en) 1991-05-29 1994-10-25 Merck And Co., Inc. Eimeria mitis 16S or DNA probes
US5403581A (en) 1991-07-12 1995-04-04 Hoffmann-La Roche Inc. Coccidiosis vaccines
EP0594743B1 (en) 1991-07-12 1999-09-22 Pfizer Inc. Continuous cell line and vaccine against avian coccidia
US5311841A (en) 1992-07-10 1994-05-17 Thaxton J Paul Administration of medicaments of poultry
WO1994016725A1 (en) * 1993-01-19 1994-08-04 Merck & Co., Inc. Live coccidiosis vaccine
CA2098773C (en) 1993-06-18 1999-09-21 Eng-Hong Lee Recombinant coccidia and its use in a vaccine
JPH07206705A (ja) * 1993-11-03 1995-08-08 American Cyanamid Co 生インオボ（ｉｎ ｏｖｏ）ワクチン
US5339766A (en) 1993-11-03 1994-08-23 Embrex, Inc. Method of introducing material into eggs during early embryonic development
EP0653489B1 (en) 1993-11-12 2003-02-19 Akzo Nobel N.V. Coccidiosis poultry vaccin
DK0831896T3 (da) * 1995-06-07 2001-09-03 Pfizer In ovo-vaccination mod coccidiosis
SK282004B6 (sk) * 1995-06-07 2001-10-08 Pfizer Inc. Použitie živých sporozoitov alebo merozoitov rodu eimeria na výrobu očkovacej látky na in ovo očkovanie domestikovaných vtákov proti kokcidióze
US5888518A (en) 1995-10-06 1999-03-30 Beretich, Sr.; Guy R. Method for preventing and treating coccidiosis
US5807551A (en) 1996-04-01 1998-09-15 Iowa State University Research Foundation, Inc. Method to provide artificial passive immunity in birds
WO1998008699A1 (fr) 1996-08-29 1998-03-05 Kabushiki Kaisha Toyoda Jidoshokki Seisakusho Dispositif de chauffage visqueux
US6440408B2 (en) * 1996-09-30 2002-08-27 University Of Arkansas Method of treatment
US6048535A (en) * 1997-06-12 2000-04-11 Regents Of The University Of Minnesota Multivalent in ovo avian vaccine
US6627205B2 (en) * 1997-12-01 2003-09-30 Pfizer Incorporated Ovo vaccination against coccidiosis
US6019985A (en) 1998-02-27 2000-02-01 Munova Corporation Immunostimulation methods for providing disease protection in poultry
US6608033B1 (en) * 1999-08-27 2003-08-19 Pfizer Inc. Treatment or prevention of coccidiosis
WO2004052393A1 (en) * 2002-12-09 2004-06-24 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Coccidial vaccine and methods of making and using same

Also Published As

Publication number Publication date
DE69520509D1 (de) 2001-05-03
KR970000245A (ko) 1997-01-21
JPH10506920A (ja) 1998-07-07
JP3120860B2 (ja) 2000-12-25
GR3035938T3 (en) 2001-08-31
SK282004B6 (sk) 2001-10-08
HU223707B1 (hu) 2004-12-28
EP0831897A1 (en) 1998-04-01
PL184002B1 (pl) 2002-08-30
US6500438B2 (en) 2002-12-31
UA41381C2 (uk) 2001-09-17
MA23890A1 (fr) 1996-12-31
AR044235A2 (es) 2005-09-07
PL314639A1 (en) 1996-12-09
CN1153510C (zh) 2004-06-16
CA2223700C (en) 2002-05-07
US7018640B2 (en) 2006-03-28
ATE200029T1 (de) 2001-04-15
DE69520509T2 (de) 2001-07-12
IL118490A (en) 2000-07-26
RO113716B1 (ro) 1998-10-30
IL118490A0 (en) 1996-09-12
CA2223700A1 (en) 1996-12-19
DZ2048A1 (fr) 2002-07-21
ES2155129T3 (es) 2001-05-01
AU5478296A (en) 1996-12-19
HUP9601554A2 (en) 1997-03-28
CO4440630A1 (es) 1997-05-07
PE2998A1 (es) 1998-03-02
AR044236A2 (es) 2005-09-07
KR0167417B1 (ko) 1999-01-15
FI974439A0 (fi) 1997-12-05
TR199600471A2 (tr) 1996-12-21
TW430558B (en) 2001-04-21
AR002157A1 (es) 1998-01-07
CN1145168A (zh) 1997-03-19
EP0831897B1 (en) 2001-03-28
MY121973A (en) 2006-03-31
RU2125890C1 (ru) 1999-02-10
PT831897E (pt) 2001-07-31
FI974439A (fi) 1998-01-27
US20020031530A1 (en) 2002-03-14
NZ286754A (en) 1998-06-26
DK0831897T3 (da) 2001-04-30
US20020146435A1 (en) 2002-10-10
BR9602667A (pt) 1998-04-22
AU694872B2 (en) 1998-07-30
HUP9601554A3 (en) 2003-08-28
BG100642A (en) 1997-07-31
SK72896A3 (en) 1997-11-05
CZ290810B6 (cs) 2002-10-16
ZA964726B (en) 1997-12-08
BG63035B1 (bg) 2001-02-28
CZ164396A3 (en) 1997-03-12
WO1996040234A1 (en) 1996-12-19
MX9709868A (es) 1998-03-31

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI9600181A (en) In ovo vaccination against coccidiosis.
RU2126267C1 (ru) Способ вакцинации домашней птицы против кокцидиоза
US7816118B2 (en) Methods for the in vitro culture of Sporozoea sp. and uses thereof
US6627205B2 (en) Ovo vaccination against coccidiosis
AU2007203386A1 (en) Methods for the in vitro culture of sporozoea SP. and user thereof

Legal Events

Date Code Title Description
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20050406