HU223707B1 - Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására - Google Patents

Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására Download PDF

Info

Publication number
HU223707B1
HU223707B1 HU9601554A HU9601554A HU223707B1 HU 223707 B1 HU223707 B1 HU 223707B1 HU 9601554 A HU9601554 A HU 9601554A HU 9601554 A HU9601554 A HU 9601554A HU 223707 B1 HU223707 B1 HU 223707B1
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
sporozoites
merozoites
use according
ovo
dose
Prior art date
Application number
HU9601554A
Other languages
English (en)
Other versions
HUP9601554A3 (en
HUP9601554A2 (en
Inventor
Nigel Anthony Evans
Robert Craig Findly
Frederick Henry Weber
Original Assignee
Pfizer Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pfizer Inc. filed Critical Pfizer Inc.
Publication of HUP9601554A2 publication Critical patent/HUP9601554A2/hu
Publication of HUP9601554A3 publication Critical patent/HUP9601554A3/hu
Publication of HU223707B1 publication Critical patent/HU223707B1/hu

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/002—Protozoa antigens
    • A61K39/012—Coccidia antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/522—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

A találmány tárgyát élő Eimeria fajhoz tartozó sporozoiták vagymerozoiták, vagy azok keverékének alkalmazása képezi olyan vakcinaelőállítására, amely háziasított madarak fejlődő tojásaiba in ovoadagolható, abból a célból, hogy a kikelt madarakat coccidiózissalszemben immunizálják. ŕ

Description

A leírás terjedelme 8 oldal
HU 223 707 B1
HU 223 707 Bl
A találmány tárgyát élő Eimeria fajhoz tartozó sporozoiták vagy merozoiták, vagy azok keverékének alkalmazása képezi olyan vakcina előállítására, amely háziasított madarak fejlődő tojásaiba in ovo adagolható, abból a célból, hogy a kikelt madarakat cocccidiózissal szemben immunizáljuk.
A coccidiózis háziasított madarak enterális megbetegedése, melyet az Eimeria nemzetséghez tartozó egysejtű parazitákkal történő fertőződés okoz. A coccidiózis a háziasított madarak között a legnagyobb gazdasági kárt okozó parazitaeredetű megbetegedés. Becslések szerint, a coccidiózisellenes gyógyszerek és a coccidiózis következtében fellépő veszteségek a baromfiiparnak több száz millió dollár veszteséget okoznak minden évben.
Az 1950-es évek elejétől kezdve különböző próbálkozásokról jelentek meg közlemények háziasított madarak coccidiózissal szemben történő vakcinázására. A jelenlegi vakcinázási eljárások szerint, táplálékkal vagy vízzel, élő Eimeria oocisztákat adagolnak. Ezek az eljárások azonban nehézkesek és nem hatékonyak, mivel nem mindegyik madárba jut kellő oocisztamennyiség, és sok madárban a vakcina nem hoz létre védettséget, vagy a madár kórokozóval fertőződik.
Leírták, hogy pulykaherpeszvírussal in ovo vakcinázott csirkékben immunitás jött létre Marek-féle megbetegedés vírusával történő későbbi fertőzéssel szemben [J. M. Sharma és B. R. Burmester: Avian Dis. 26, 134-149 (1981)]. Az EP 291 173 számú szabadalmi leírásban olyan immunizálási eljárást említenek, melyben egy nem replikálódó immunogént adagoltak in ovo. Az európai szabadalmi leírásban közelebbről említett immunogének géntechnikai úton módosított Eimeria-antigén és f/werm-oociszta-kivonat voltak. A fenti európai szabadalmi leírás határozottan kizárja élő parazitaformák alkalmazását, azaz a találmány szerinti eljárásban alkalmazott formákét.
A találmány tárgyát olyan vakcina előállítása képezi, amellyel Eimeria fajhoz tartozó élő sporozoitákat vagy merozoitákat, vagy azok keverékét adjuk be in ovo háziasított madarak fejlődő tojásaiba. A rendelkezésre álló szakirodalom azt sugallja, hogy egy ilyen vakcinázási eljárás nem lesz hatékony in ovo, és a vakcinázást a kikelést követően kell végezni. Leírták, hogy az inkubáció 10. napján E. tenella sporozoitákkal végzett injektálás nem hozott létre jelentős immunológiai védettséget E. tenella oocisztákkal történő későbbi fertőzéssel szemben [T. K. Jeffers és G. E. Wagenbach: J. Parasit. 56 (4), 656-662 (1970)]. A szerzők valójában azt írták le, hogy a kezelésben nem részesült csirkéknél nagyobb túlélési arányt figyeltek meg E. tenella oocisztákkal történő későbbi fertőzést követően, mint az in ovo sporozoitákkal kezelt csirkék esetében. Watkins és munkatársai élő E. maxima sporocisztákkal és sporulálódott oocisztákkal történő in ovo beoltást imák le, a szerzők arra a következtetésre jutottak, hogy vizsgálataik nem bizonyítják, hogy az in ovo kezelés védettséget hozna létre a kikelést követően 10 nappal E. maxima oocisztákkal történő coccidiózisfertőzéssel szemben [K. L. Watkins és munkatársai: „Proc. VI. th. International Coccidiosis Conf.”kivonat: El-2, Ontario, Kanada (1993)]. Watkins és munkatársai azt a következtetést vonták le továbbá, hogy jelentős immunológiai védettség jön létre abban az esetben, ha a beoltást a kikelést követően rövid idővel végzik az in ovo beoltás helyett. Ezzel a nézettel szemben, a találmány szerinti in ovo vakcinázási eljárás a várakozással ellentétben immunitást hoz létre, amely a kikelt madarakat megvédi egy későbbi coccidiózisfertőzéssel szemben.
A találmány szerinti vakcina vakcinázási eljárásban alkalmazható háziasított madarak coccidiózis elleni vakcinázására, mely eljárás szerint, az inkubáció utolsó negyedében élő Eimeria sporozoiták vagy merozoiták, vagy azok keverékének hatékony immunizáló dózisát adjuk be in ovo.
„Háziasított madár (háziasított madarak)” alatt a leírásban, hacsak másképp nem kötjük ki, csirkéket, pulykákat, kacsákat, vadmadarakat (ezen belül, de anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk íurjeket, fácánokat és libákat), valamint futómadarakat (ezen belül, de anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk struccokat) értünk.
A leírásban „in ovo kifejezés alatt, hacsak másképp nem kötjük ki, egy háziasított madár élő, fejlődő embriót tartalmazó tojásán belül lejátszódó eseményt értünk.
„In ovo adagolni” kifejezés vagy „in ovo adagolás” alatt, hacsak másképp nem kötjük ki, a találmány szerinti vakcina adagolását értjük egy háziasított madár élő, fejlődő embriót tartalmazó tojásába bármely olyan módszer alkalmazásával, amely alkalmas a tojás héján keresztül történő áthatolásra és a vakcina bejuttatására. Az adagolás módja anélkül, hogy igényünket az alábbira korlátoznánk, lehet a vakcina injektálása.
„Az inkubáció utolsó negyede” kifejezés, hacsak másképp nem kötjük ki, egy háziasított madár fejlődő tojása inkubációs idejének utolsó negyedére vonatkozik.
„Eimeria alatt, hacsak másképp nem kötjük ki, az Eimeria nemzetségbe tartozó egy vagy több fajt értünk, amely képes háziasított madarak fertőzésére. Ilyen Eimeria fajok lehetnek csirkékben előforduló fajok, például E. tenella, Eimeria acervulina, E. maxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. brunetti, valamint lehetnek pulykákban megtalálható Eimeria fajok, például E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua és E. subrotunda, lehetnek továbbá egyéb, a fent említett háziasított madarak fertőzésére képes Eimeria fajok. Az „Eimeria kifejezés magában foglalja ezenkívül valamennyi, a fent említett Eimeria fajhoz tartozó törzset, például, de anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk, koraérett törzseket, gyengített törzseket, melyek lehetnek besugárzott vagy más módszerrel kezelt törzsek, úgy, hogy azok nem fejlődnek ki teljesen. Az „Eimeria kifejezés magában foglal ezenkívül bármely újonnan felfedezett Eimeria-tÖTZset vagy Eimeria fajt, amelyik a fent definiáltak szerint, képes háziasított madarak fertőzésére.
A leírásban „sporozoiták”, „sporociszták”, „oociszták” és „merozoiták” alatt, hacsak másképp nem kötjük
HU 223 707 Bl ki, élő „Eimeria sporozoitákat, sporocisztákat, oocisztákat és merozoitákat értünk.
A leírásban „hatékony immunizáló dózis” alatt hacsak másképp nem kötjük ki, sporozoitáknak, merozoitáknak - vagy ha azok keverékéről van szó - sporozoiták és merozoiták összességének azon mennyiségét értjük, ami elegendő kikelt madarakban olyan immunológiai védettség létrehozására, amely nagyobb, mint a nem immunizált madarakban eleve meglevő immunitás. A leírásban az „immunizálást” és „vakcinázást” szinonim kifejezésekként, felcserélhető módon használjuk.
A találmány értelmében adagolandó előnyös dózis 10-106 sporozoita vagy merozoita, vagy azok olyan keveréke, amelyben az említett sporozoiták és merozoiták száma összesen 10-106.
Egy előnyösebb dózis 103— 106 sporozoitát vagy merozoitát tartalmaz, vagy azok olyan keverékét, melyben az említett sporozoiták és merozoiták száma összesen 103— 106 közé esik.
Egy másik előnyös dózis 102—105 sporozoitát vagy merozoitát tartalmaz, vagy azok olyan keverékét, melyben az említett sporozoiták és merozoiták száma összesen 102-105.
A találmány szerinti vakcinával vakcinázható előnyös háziasított madarak csirkék.
Tyúktojásokba in ovo adagolandó előnyös dózis az alább felsorolt két vagy több Eimeria fajhoz tartozó sporozoitákat, merozoitákat tartalmaz vagy azok keverékét tartalmazza: E. tenella, E. acervulina, E. maxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox és E. brunetti. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a dózis valamennyi alkalmazott fajból 10-106 sporozoitát, merozoitát vagy azok keverékét tartalmazza.
A találmány szerinti vakcinával vakcinázható másik előnyös háziasított madár pulyka.
Pulykatojásokba in ovo adagolandó előnyös dózis az alább felsorolt két vagy több Eimeria fajhoz tartozó sporozoitákat, merozoitákat vagy azok keverékét tartalmazza : E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua és E. subrotunda. A találmány egy előnyös megvalósítási módja szerint, a dózis valamennyi alkalmazott fajból 10-106 sporozoitát, merozoitát vagy azok keverékét tartalmazza.
A találmány szerinti vakcinával vakcinázható további előnyös háziasított madarak vadmadarak, kacsák és futómadarak.
A találmány értelmében a vakcinázási eljárással kombinálva, az inkubáció során valamikor egy immunstimuláns in ovo adagolása.
A találmány értelmében az immunstimulánst előnyösen a sporozoitákat vagy merozoitákat, vagy az említett sporozoiták és merozoiták keverékét tartalmazó dózis in ovo adagolásával egyidőben adjuk be, az inkubációs idő utolsó negyedében.
A találmány értelmében tehát olyan vakcinázási eljárást végzünk, amely szerint, az inkubációs idő utolsó negyedében, élő Eimeria sporozoitákat vagy merozoitákat, vagy azok keverékét adagoljuk in ovo háziasított madarak tojásaiba. Csirkék esetében, az in ovo adagolást előnyösen az inkubációs idő 15-20. napján, még előnyösebben az inkubációs idő 18. napján végezzük. Pulykák esetében, az in ovo adagolást előnyösen az inkubációs idő 21-26. napján végezzük.
A vakcinázási eljárás bármely alkalmas in ovo adagolási módszerrel végezhető. A találmány szerinti vakcinát előnyösen injektálással adjuk be. Egy lehetséges injektálási mód szerint, a tojáshéjon egy 18 guage méretű tűvel lyukat készítünk a tojás szélesebb végén, hogy a tojás légzsákjába jussunk. A lyukon át megfelelő méretű (1-3 ml térfogatú) fecskendőhöz csatlakoztatott 2,5-3,8 cm hosszúságú, 22 guage méretű tűt vezetünk be a légzsák membránján keresztül. Megfelelő számú sporozoitát vagy merozoitát, vagy amennyiben keverékről van szó, megfelelő számú sporozoitát és merozoitát alkalmas folyékony hordozóanyagban, például 10-500 pl foszfátpufferes fiziológiás sóoldatban szuszpendálunk, majd az elegyet a tojásba injektáljuk. A megfelelő térfogat függ a kezelendő tojás méretétől, strucctojások nyilvánvalóan nagyobb térfogatot képesek felvenni, mint tyúktojások. Az injektálás helye lehet a tojás vagy embrió bármely régiójában. Az injektálást előnyösen a tojás szélesebb végének közepén át tengelyirányban végezzük, az amnionba.
Más eljárás szerint, a vakcinázási eljárásban automatizált tojásinjektor-rendszert alkalmazhatunk. Ilyen rendszert írnak le az US 4 681 063, US 4 040 388, US 4 469 047 és az US 4 593 646 számú leírásokban. Szakember számára egyéb alkalmazható injektálási eljárások is ismeretesek.
Oocisztákat bármely, szakember számára ismert eljárással előállíthatunk. Ilyen eljárást ismertetnek például J. F. Ryley és munkatársai [Parasitology 73, 311-326 (1976)], valamint P. L. Long és munkatársai [Fólia Veterinaria Latina VI (3), 201-217 (1976)]. Az egyik eljárás szerint, kereskedelemben hozzáférhető, körülbelül 2 hetes korú broilercsirkéket fertőztünk a kérdéses Eimeria fajjal oly módon, hogy orális úton, mesterséges táplálással, sporulálódott oocisztákból megfelelő dózist adtunk be. Például, az E. tenella esetében alkalmazott dózis madaranként tipikusan 200 000 sporulálódott oocisztát tartalmazott. Ezt követően, a fertőzött madarakból oociszták gyűjtésére és tisztítására a gyakorlatban jól ismert módszereket alkalmaztunk. A legtöbb Eimeria faj esetében a fertőzött madarakból a fertőzést követően 5-7 nappal székletet gyűjtöttünk, elkevertük és szűrtük a törmelék eltávolítása céljából, majd a megmaradt széklet ül építésé céljából megfelelő fordulatszám mellett centrifugáltuk. E. te-nella esetében hasonló eljárást alkalmaztunk, azzal az eltéréssel, hogy a fertőzést követően hat (6) nappal vakbélbennéket vettünk. Az üledéket telített sóoldatban szuszpendáltuk, melyben az oociszták lebegnek, a szennyező törmelék nagy része pedig centrifugálással eltávolítható. Az oocisztaszuszpenziót ezután a sókoncentráció csökkentése céljából hígítottuk. Az oocisztákat a só eltávolítása céljából ismételten mostuk, és kálium-dikromát-oldatban (2,5 tömeg/térfogat%) szuszpendáltuk. Az oocisztaszuszpenziót körülbelül 72 órán át, rázás mellett (körülbelül 140 ford/perc), 29 °C-on inkubáltuk, hogy az oociszták
HU 223 707 BI sporulációja meginduljon. Másképp eljárva, az oocisztákat nátrium-hipoklorittal kezeljük, majd sporulálódni hagyjuk. A sporulálódott oociszták számát 1 ml elegyben hemocitométer alkalmazásával, azok közvetlen megszámlálásával határoztuk meg, és a tenyészetet a felhasználásig előnyösen hűtés mellett tároltuk.
Sporociszták előállítása céljából a fenti oocisztaszuszpenzióból a kálium-dikromátot ismételt mosásokkal eltávolítottuk, mely szerint az oocisztákat centrifúgálással összegyűjtöttük, és deionizált vagy desztillált vízben szuszpendáltuk. Amikor a dikromátot eltávolítottuk, amit a narancssárgás színeződés megszűnése alapján állapítottunk meg, az oocisztaszuszpenziót azonos térfogatú nátrium-hipokloritban (fehérítőben) szuszpendáltuk, és 15 percig, szobahőmérsékleten inkubáltuk. Ezt követően a fehérítőszert ismételt mosásokkal eltávolítottuk, és az oocisztákat fiziológiás sóoldatban vagy deionizált vízben szuszpendáltuk. Az oociszták különböző ismert technikák alkalmazásával feltárhatók, hogy azokból sporociszták szabaduljanak ki. Az oocisztákat sporociszták kiszabadítása céljából feltárhatjuk például oly módon, hogy az oocisztákat 1-4 mm átmérőjű üveggyöngyökkel keverjük össze, majd kézzel, vortexkeverővel vagy rázóinkubátorral rázzuk, vagy feltárhatjuk azokat kézi homogenizátor alkalmazásával. Az épen maradt oocisztákat és oocisztafalakat a kiszabadult sporocisztáktól szétválaszthatjuk 50% Percoll™-ban (Pharmacia Biotech) vagy 1 mol/1 szacharózban végzett differenciáló centrifúgálással, Dulski és munkatársai eljárása szerint [Avian Diseases, 32, 235-239 (1988)].
A találmány szerinti megoldásban alkalmazható sporozoitákat vagy sporozoitadús készítményt előállíthatjuk oly módon, hogy a fenti sporocisztakészítményben található cisztákból sporozoitákat szabadítunk ki. Egy eljárás szerint, a fent leírtak szerint előállított sporocisztákat centrifugálással ülepítjük, a cisztafeltáró pufferben (foszfátpufferes fiziológiás sóoldatban 0,5% taurodezoxikólsav és 0,25% tripszin, pH=8,0) szuszpendáljuk, és rázás mellett, 1 órán át, 41 °C-on inkubáljuk. A kapott szuszpenzióból vett mintában megszámoljuk a sporozoiták számát, a sporozoitákat a cisztafeltáró puffer eltávolítása céljából egyszer mossuk, és az in ovo injektálás céljára, a kívánt koncentrációban foszfátpufferes fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk. Ez a készítmény sporozoitákat, sporocisztákat és oocisztákat tartalmaz, és további tisztítás nélkül alkalmazható a találmány szerinti vakcinázási eljárásban. Sporocisztáktól és oocisztáktól szétválasztott, tisztított sporozoitákat DE-52 anioncserélő kromatográfiával állíthatunk elő D. M. Schmatz és munkatársai eljárása szerint [J. Protozool., 31, 181-183 (1984)], amely teljes egészében a kitanítás részét képezi. A találmány szerinti vakcinázási eljárásban alkalmazandó sporozoitadózis függ a vakcinázandó háziasított madár fajtájától és a vakcinában alkalmazandó Eimeria fajtól. Általánosságban, a dózis tojásonként 10-106 sporozoita lehet. Előnyösen, a dózis tojásonként 10-105 sporozoitát tartalmaz, még előnyösebben a dózis tojásonként ΙΟ2—105 sporozoitát tartalmaz.
Merozoitákat szakember számára ismert különböző eljárásokkal állíthatunk elő. Egy eljárás szerint, sejtaggregátumokként tenyésztett elsődleges csirkevesesejteket (PKC) sporozoitákkal fertőztünk D. J. Dórán módosított eljárásával [J. Parasit., 57, 891-900 (1971)]. PKC-sejteket S. D. Chung szerint [J. Cell Bioi., 95, 118-126 (1982)], 3% CO2 jelenlétében, 40 °C-on, módosított RK2-tápfolyadékban - borjúembrió-szérummal, penicillin és streptomycin antibiotikumokkal, 15 mmol/1 nátrium-hidrogén-karbonáttal, 10 ng/ml epidermális növekedési faktorral, 5 pg/ml inzulinnal, 5 pg/ml transzferrinnel, 5 ng/ml szelénessavval és 0,01 pmol/1 hidrokortizon-HCl-dal kiegészített, L-glutamint és 15 mmol/1 HEPES-t tartalmazó DMEM/F12-tápfolyadékban - tenyésztettünk. PKCsejteket 2-3 hetes korú csirkék veséjéből állítottunk elő oly módon, hogy a veséket összevagdaltuk, majd a szövetet 37 °C-on, foszfátpufferes fiziológiás sóoldatban, többször cserélt 0,2 mg/ml kollagenázzal kezeltük (Worthingon Biochemical Corp. Freehold, NJ). A felülúszóban található sejtaggregátumokat mostuk, 5% borjúembrió-szérumot tartalmazó módosított RK2-tápfolyadékban szuszpendáltuk, majd 105 aggregátum/cm2 sűrűségben szövettenyésztő palackokba oltottuk. A PKC-sejteket 18 órán át, 3% CO2 mellett, 40 °C-on inkubáltuk, majd 1 cm2-re számítva 4x 105 sporozoitával fertőztük. A fertőzött tenyészeteket 2% boquembrió-szérumot tartalmazó módosított RK2-tápfolyadékban tenyésztettük. 24 órás inkubációt követően, mely alatt az inváziónak végbe kellett mennie, a sejtekbe be nem jutott sporozoitákat oly módon távolítottuk el, hogy a palackot rázattuk és a tenyésztő tápfolyadékot eltávolítottuk. A sejtréteget 2% boíjúembrió-szérumot tartalmazó módosított RK2-tápfolyadékkal egyszer mostuk, és a tenyésztő tápfolyadékot ismét eltávolítottuk. A sejtekhez friss RK2-tápfolyadékot adtunk, és a tenyészeteket további 48-54 órán át inkubáltuk, amíg a tenyésztő tápfolyadékba merozoiták szabadultak ki,
A merozoiták gazdasejttörmeléktől való tisztítását szakember számára ismert különböző eljárásokkal végezhetjük. Egy eljárás szerint [J. A. Olson: Antimicrob. Agents Chemother., 34, 1435-1439 (1990)] a kiszabadult merozoitákat tartalmazó tápfolyadékot összegyűjtöttük, és 10 percig, 450 χ g mellett centrifúgáltuk a merozoiták koncentrálása céljából. A merozoitákat és gazdasejttörmeléket tartalmazó üledéket 20% szarvasmarha-szérumalbumint tartalmazó, 0,1 mol/1 NaCl0,05 mol/1 KC1 oldatban szuszpendáltuk, és az alábbi összetételű pufferrel ekvilibrált DE-52 anioncserélő oszlopra vittük fel: 75 mmol/1 Tris, 40 mmol/1 NaH2PO4, 86 mmol/1 NaCl, 100 mmol/1 glükóz, (pH=8,2). A merozoiták átmennek az oszlopon. Az oszlopról összegyűjtött, merozoitákat tartalmazó minta tisztaságát elektronmikroszkóppal ellenőrizhetjük A. Kilejian módszerével [J. Bioi. Chem., 249, 4650-4655 (1974)]. Általánosságban, a merozoitadózis tojásonként 10— 106 merozoita közé eshet. Előnyösen, a dózis tojásonként 10-105 merozoitát tartalmaz, még előnyösebben a dózis tojásonként ΙΟ2—105 merozoitát tartalmaz. Amennyiben sporozoiták és merozoiták elegyét alkal4
HU 223 707 Bl mázzuk, általánosságban, a sporozoiták és merozoiták száma a dózisban tojásonként összesen 10—106 lehet. Előnyösen, a dózis tojásonként 10-105 sporozoitát és merozoitát tartalmaz, még előnyösebben a dózis tojásonként 102—105 sporozoitát és merozoitát tartalmaz.
A sporozoitákat, merozoitákat vagy azok elegyét bármely fiziológiásán megfelelő közegben injektálhatjuk in ovo. Előnyösen, fiziológiásán kiegyensúlyozott sóoldatban, például foszfátpufferes fiziológiás sóoldatban szuszpendáljuk. A választott közeg tartalmazhat ezenkívül egy vagy több szuszpendáló anyagot, például fiziológiásán megfelelő géleket, zselatinokat, hidroszolokat, cellulózt vagy poliszacharidgyantákat.
Előnyösen, a találmány szerinti vakcinában két vagy több Eimeria fajhoz tartozó sporozoitákat, merozoitákat, vagy azok elegyét injektáljuk in ovo, ugyanabban az időben. A találmány szerinti vakcinában valamennyi olyan azonosított Eimeria fajhoz tartozó sporozoitákat, merozoitákat vagy azok elegyét injektálhatjuk megfelelő dózisban in ovo, ugyanabban az időben vagy 20 sorozatos oltások során, melyek képesek egy adott háziasított madár, például csirke megfertőzésére, abból a célból, hogy valamennyi Eimeria fajjal szemben immunológiai védettséget hozzunk létre.
A vakcinázási eljárásban immunstimulánsokat is al- 25 kalmazhatunk. Alkalmas immunstimulánsok, anélkül, hogy igényünket az alábbiakra korlátoznánk, citokinek, növekedési faktorok, kemokinek, limfociták, monociták vagy limfoid szervekből származó sejtek tenyészeteinek felülúszói, sejtkészítmények vagy sejtkivonatok 30 (például Staphylococcus aureus vagy lipopoliszacharid-készítmények), mitogének vagy adjuvánsok, ezen belül alacsony molekulatömegű gyógyszerek. Immunstimulánst az inkubációs idő során bármikor beadhatunk in ovo. Előnyösen, az immunstimulánst az Eimeria sporozoitákat vagy merozoitákat, vagy azok elegyét tartalmazó közegben, in ovo adjuk be.
A találmány szerinti, coccidiózis ellen történő vak5 cinázási eljárás hatékonyságát az alábbi példákkal szemléltetjük. Valamennyi dózist a fent ismertetettek szerint, fiziológiásán elfogadható sóoldatban, in ovo injektáltuk. Az adott készítmény hatékonyságát úgy határoztuk meg, hogy követtük annak a kelési arányra és a 10 csirkék kelési testtömegére kifejtett hatását, majd kísérletes fertőzést követően követtük az oocisztaürítést, testtömeg-növekedést és patogenezist (betegségtünetek pontszámát). A betegségtüneteket J. K. Johnson és W. M. Reid módszere szerint pontoztuk [Exp. Párásítói., 15 28, 30-36 (1970)], mely szerint nulla (0) a betegség hiányát jelenti, 4-es érték pedig maximális kórtani elváltozásokra utal.
1. példa
Tyúktojásokat injektáltunk az inkubációs idő 18. napján, tojásonként 105 E. tenella sporozoitát tartalmazó készítménnyel. A készítményt sporocisztáktól és oocisztáktól nem tisztítottuk meg. Valamennyi dózis körülbelül 104 E. tenella sporocisztát és körülbelül 104 E. tenella oocisztát is tartalmazott. Kontrollként tojásokat csak foszfátpufferes fiziológiás sóoldattal injektáltunk. A sporozoitákkal kezelt populációhoz tartozó madarak esetében az átlagos oocisztaürítés a kikelést követő 7. napon madaranként 1,1 χ 106 oociszta volt. Nem immunizált madarakat és a sporozoitákkal kezelt madarakat sporulálódott E. tenella oociszták különböző dózisaival fertőztünk orális úton, a kikelést követő 7., 14. vagy 21. napokon. Az adatokat az 1. táblázatban összegeztük.
1. táblázat
A kikelést követően különböző időpontokban beadott különböző fertőző dózisokra adott válaszreakció: immunizált madarak versus nem immunizált madarak
Kóros elváltozások pontszáma a kísérletes fertőzést követő hatodik napon Egy madárra eső testtömeg-növekedés (gramm) a kísérletes fertőzést követő hatnapos időszak során
Csoport1 Kísérletes fertőzés dózisa (madaranként beadott sporulálódott oociszták száma) Nem immunizált In ovo immunizált (105 sporozoita az inkubálás 18. napján) Nem immunizált In ovo immunizált (105 sporozoita az inkubálás 18. napján)
Kísérletes fertőzés 0 0 0 188 167
a kikelést követő 2,5x103 3,0 0,3* 154 153
7. napon 5x103 3,1 1,2* 153 167
lxlO4 3,7 1,4* 123 165*
Kísérletes fertőzés 0 0 0 266 278
a kikelést követő 2,5x103 2,4 0,4* 260 269
14. napon 5x103 2,8 1,1* 244 265
lxlO4 3,3 1,6* 235 259
Kísérletes fertőzés 0 0,1 0 361 357
a kikelést követő 2,5x103 2,3 0,7* 375 358
21. napon 5x103 2,1 0,8* 332 344
lxlO4 2,8 1,4* 337 395*
1: Valamennyi csoportot sporulálódott oocisztákat tartalmazó egyetlen dózissal kísérletesen fertőztünk a kikelést követő 7., 14. vagy 21. napokon. Például, a kikelést követően a 21. napon kísérletesen fertőzött madarakat nem fertőztük a kikelést követő 7. vagy 14. napokon.
*: Szignifikánsan eltér a nem immunizált madaraktól (p<0,05, ANOVA).
HU 223 707 Bl
Az 1. táblázatban szereplő adatok alapján világos, hogy az immunizált madarak kevésbé voltak érzékenyek fertőzésre, mint az azonos keltetésből származó nem immunizált társaik, amint azt az immunizált madarak esetében tapasztalt alacsonyabb kórtani pontszámok és a fokozott testtömeg-növekedés mutatják. Az adatok alapján az is megállapítható, hogy a találmány szerinti eljárással viszonylag korai életkorban (a kikelést követően 7 napon belül) hoztunk létre immunitást csirkékben. Az eredmények azt mutatják továbbá, hogy az immunitás fennmarad a csirkék növekedése és fejlődése során. A csirkékben korai életkorban létrehozott immunitásjelentős előnyt jelent a broilercsirke-iparágban, mivel a broilerek rendesen 6 hetes korban piacra kerülnek.
2. példa
Tyúktojásokat injektáltunk az inkubációs idő 18. napján, fiziológiás sóoldattal (kontroll) vagy a 2. táblázatban megadottak szerint, tojásonként különböző E. tenella sporozoitadózist tartalmazó készítményekkel az adatok a kísérletes fertőzést megelőző eredményeknek felelnek meg. Az egyes dózisokban alkalmazott sporozoitakészítmények 62% sporozoitát, 9% sporocisztát és 29% oocisztát tartalmaztak. Valamennyi 105 sporozoitát tartalmazó dózis összesen 1,6 χ 105 parazitaállapotot (sporozoitákat, sporocisztákat és oocisztákat) tartalmazott.
2. táblázat
In ovo vakcinázás hatása a kelési arányra és a kelési testtömegre
Az inkubáció 18. napján tojásonként injektált sporozoiták száma Kelési arány (%) Kelési testtömeg (gramm)
0 94 48,2
0 94 48,0
103 100 49,4
104 97 47,0
105 94 49,1
A 2. táblázatban összegzett adatok alapján látható, hogy az élő sporozoitákkal injektált tojásokból kikelt csirkék kelési aránya és kelési testtömege lényegében azonos volt az azonos keltetésből származó társaikéval. A csirkéket ezután a kikelést követő 14. napon madaranként 1,25 χ 104 sporulálódott E. tenella oocisztával fertőztük, orális úton. A kísérletes fertőzést követően kapott eredményeket a 3. táblázat mutatja.
3. táblázat
Nem immunizált madarak és in ovo különböző j q sporozoitadózissal kezelt madarak kísérletes fertőzésre adott válasza
Az inkubálás 18. napján tojásonként injektált sporozoiták száma Madaranként testtömeggyarapodás a kísérletes fertőzést követő hat nap alatt Kóros elváltozások pontszáma a kísérletes fertőzést követő hatodik napon Egy madárra eső oocisztaürítés (χ 106) a kísérletes fertőzést követő hatodik napon
0 278 3,2 12,3
0 (nem fertőzött kontroll) 321 0 0,003*
103 289 2,6* 11,2
104 291 2,7 12,2
105 304 1,4* 1,4*
*: Szignifikánsan eltér a kísérletes fertőzésnek alávetett, nem immunizált (fiziológiás sóoldattal kezelt) csoporttól (p<0,05, ANOVA).
A 3. táblázatban szereplő adatok szerint, a sporozoi30 takészítmény különböző dózisaival injektált tojásokból kikelt csirkék valamennyi paraméter vonatkozásában (testtömeg-gyarapodás, kóros elváltozások pontszáma, oocisztaürítés) immunisnak bizonyultak. A kontrollmadarakkal összehasonlítva, melyeket csak fiziológiás só35 oldattal kezeltünk és kísérletes fertőzésnek vetettünk alá, a sporozoitakészítménnyel in ovo immunizált madarak esetében nagyobb testtömeg-növekedést tapasztaltunk, valamint a kóros elváltozásokat értékelő pontszám alacsonyabb volt. Továbbá, a sporozoitakészít40 ménnyel in ovo immunizált madarak kísérletes fertőzést követően kevesebb oocisztát ürítettek, mint a kontrolimadarak, ami arra utal, hogy a fertőzés az immunizált madarakban kevésbé volt súlyos.

Claims (16)

  1. SZABADALMI IGÉNYPONTOK
    1. Élő Eimeria sporozoiták vagy merozoiták, vagy azok elegyének alkalmazása vakcina előállítására, amely háziasított madarak coccidiózis elleni védelmére szolgál, hatékony immunizáló dózis in ovo adagolásával az inkubáció utolsó negyedében.
  2. 2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis 10-106 sporozoitát, merozoitát vagy azok elegyét tartalmazza, és abban az említett sporozoiták és merozoiták száma összesen 10-106.
  3. 3. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis 103—106 sporozoitát, merozoitát vagy azok elegyét tartalmazza, és abban az említett sporozoiták és merozoiták száma összesen 103-106.
  4. 4. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis ΙΟ2—105 sporozoitát, merozoitát vagy azok elegyét tartalmazza, és abban az említett sporozoiták és merozoiták száma összesen ΙΟ2—105.
  5. 5. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a háziasított madár csirke.
  6. 6. Az 5. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis az alább felsoroltak közül bármely két vagy több Eimeria fajhoz tartozó sporozoitát, merozoitát vagy azok elegyét tartalmazza: E. tenella, Eimeria acervulina, E. maxima, E. necatrix, E. mitis, E. praecox, E. brunetti.
  7. 7. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózist in ovo injektálással adjuk be.
    HU 223 707 Bl
  8. 8. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az inkubáció során bármikor, in ovo egy immunstimulánst is beadunk.
  9. 9. A 8. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy az immunstimulánst a sporozoitákat, merozoitákat vagy az említett sporozoiták és merozoiták elegyét tartalmazó dózissal egyszerre adjuk be in ovo.
  10. 10. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis merozoitákat tartalmaz.
  11. 11. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis sporozoitákat tartalmaz.
  12. 12. A 11. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a sporozoiták meg vannak tisztítva a sporocisztáktól és oocisztáktól azok eltávolításával.
  13. 13. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a háziasított madár pulyka.
  14. 14. A 13. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a dózis a felsoroltak közül bármely két vagy több Eimeria fajhoz tartozó sporozoitát, merozoitát vagy azok elegyét tartalmazza: E. meleagrimitis, E. adenoeides, E. gallopavonis, E. dispersa, E. meleagridis, E. innocua és E. subrotunda.
  15. 15. A 6. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jelle10 mezve, hogy a dózist in ovo injektálással adjuk be.
  16. 16. A 2. igénypont szerinti alkalmazás, azzal jellemezve, hogy a háziasított madár vadmadár, kacsa vagy futómadár.
HU9601554A 1995-06-07 1995-06-07 Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására HU223707B1 (hu)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB1995/000446 WO1996040234A1 (en) 1995-06-07 1995-06-07 In ovo vaccination against coccidiosis

Publications (3)

Publication Number Publication Date
HUP9601554A2 HUP9601554A2 (en) 1997-03-28
HUP9601554A3 HUP9601554A3 (en) 2003-08-28
HU223707B1 true HU223707B1 (hu) 2004-12-28

Family

ID=40909824

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU9601554A HU223707B1 (hu) 1995-06-07 1995-06-07 Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására

Country Status (37)

Country Link
US (2) US6500438B2 (hu)
EP (1) EP0831897B1 (hu)
JP (1) JP3120860B2 (hu)
KR (1) KR0167417B1 (hu)
CN (1) CN1153510C (hu)
AR (3) AR002157A1 (hu)
AT (1) ATE200029T1 (hu)
AU (1) AU694872B2 (hu)
BG (1) BG63035B1 (hu)
BR (1) BR9602667A (hu)
CA (1) CA2223700C (hu)
CO (1) CO4440630A1 (hu)
CZ (1) CZ290810B6 (hu)
DE (1) DE69520509T2 (hu)
DK (1) DK0831897T3 (hu)
DZ (1) DZ2048A1 (hu)
ES (1) ES2155129T3 (hu)
FI (1) FI974439A (hu)
GR (1) GR3035938T3 (hu)
HU (1) HU223707B1 (hu)
IL (1) IL118490A (hu)
MA (1) MA23890A1 (hu)
MX (1) MX9709868A (hu)
MY (1) MY121973A (hu)
NZ (1) NZ286754A (hu)
PE (1) PE2998A1 (hu)
PL (1) PL184002B1 (hu)
PT (1) PT831897E (hu)
RO (1) RO113716B1 (hu)
RU (1) RU2125890C1 (hu)
SI (1) SI9600181A (hu)
SK (1) SK282004B6 (hu)
TR (1) TR199600471A2 (hu)
TW (1) TW430558B (hu)
UA (1) UA41381C2 (hu)
WO (1) WO1996040234A1 (hu)
ZA (1) ZA964726B (hu)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
HU223707B1 (hu) 1995-06-07 2004-12-28 Pfizer Inc. Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására
US6627205B2 (en) 1997-12-01 2003-09-30 Pfizer Incorporated Ovo vaccination against coccidiosis
DE19828322A1 (de) * 1998-06-25 1999-12-30 Hoechst Roussel Vet Gmbh Coccidienvakzine, Verfahren zu ihrer Herstellung und ihre Verwendung
US6984378B1 (en) 1999-02-26 2006-01-10 Pfizer, Inc. Method for the purification, recovery, and sporulation of cysts and oocysts
WO2001034187A2 (en) * 1999-11-08 2001-05-17 Novus International, Inc. Preparation and method for prevention of coccidiosis
US20070077256A1 (en) 1999-11-19 2007-04-05 Los Angeles Biomedical Research Institute Pharmaceutical compositions and methods to vaccinate against disseminated candidiasis and other infectious agents
US6682754B2 (en) * 1999-11-24 2004-01-27 Willmar Poultry Company, Inc. Ovo delivery of an immunogen containing implant
EP1359799A2 (en) 2000-11-08 2003-11-12 Novus International, Inc. Methods and compositions for the control of coccidiosis
EP1421178B1 (en) 2001-08-30 2010-10-13 Embrex, Inc. Improved methods for producing oocysts
CA2486618C (en) * 2002-05-21 2013-04-09 Schering-Plough Ltd. Methods for the in vitro culture of sporozoea sp. and uses thereof
AU2007245198B2 (en) * 2006-03-30 2010-08-12 Zoetis Services Llc Methods and compositions for vaccination of poultry
US20080194006A1 (en) * 2007-02-08 2008-08-14 Embrex, Inc. Methods of releasing sporocysts from oocysts using controlled shear forces
TW201010717A (en) 2008-05-29 2010-03-16 Intervet Int Bv Coccidiosis vaccines
MX2011005133A (es) 2008-11-13 2011-08-04 Intervet Int Bv Vacuna contra eimeria para pavos.
US8858959B2 (en) 2011-07-15 2014-10-14 The United States Of America, As Represented By The Secretary Of Agriculture Gel vaccine delivery system for treating poultry
GEP201706766B (en) 2011-07-22 2017-10-25 Los Angeles Biomedical Res Center Methods and compositions for vaccinating against staphylococcus aureus
WO2014144211A2 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Los Angeles Biomedical Research Institute At Harbor-Ucla Medical Center Compositions and methods for treating fungal and bacterial pathogens
EP3426287A4 (en) 2016-03-09 2020-03-11 Los Angeles Biomedical Research Institute at Harbor-UCLA Medical Center METHODS AND KITS FOR USE IN THE PREVENTION AND TREATMENT OF VULVO-VAGINAL CANDIDOSIS
US20180208885A1 (en) 2017-01-24 2018-07-26 Mary Ann Pfannenstiel Antibiotic-free compositions for the prevention or control of coccidiosis
MX2021000344A (es) * 2018-07-10 2021-03-25 Applied Lifesciences And Systems Llc Metodo para preparar y suministrar soluciones de ovoquistes.
WO2023170057A1 (en) 2022-03-08 2023-09-14 Hipra Scientific, S.L.U. In ovo vaccine compositions against coccidiosis

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5345595B2 (hu) 1972-07-27 1978-12-07
US4040388A (en) 1976-02-27 1977-08-09 Agrimatic Corporation Method and apparatus for automatic egg injection
FR2408351A1 (fr) 1977-11-14 1979-06-08 Unilever Nv Procede et composition destines a la lutte contre la coccidiose chez la volaille
JPS5649323A (en) 1979-09-29 1981-05-02 Nisshin Flour Milling Co Ltd Coccidiostat
US4357320A (en) 1980-11-24 1982-11-02 Gist-Brocades N. V. Infectious bronchitis vaccine for poultry
US4500638A (en) 1979-11-30 1985-02-19 Gist-Brocades N.V. Infectious bronchitis virus strain
PT72077B (en) 1979-11-30 1981-09-29 Gist Brocades Nv Infectious bronchitis vaccines for poultry and process forthe preparation of such vaccines
US4735801A (en) 1982-09-07 1988-04-05 Board Of Trustees Of Leland Stanford Jr. University Novel non-reverting salmonella live vaccines
JPS5780325A (en) 1980-09-05 1982-05-19 Nat Res Dev Coccidial disease vaccine
GB2114438A (en) 1982-02-05 1983-08-24 Akzo Nv Infectious bronchitis vaccines
US4593646A (en) 1982-06-01 1986-06-10 Agrimatic Corporation Egg injection method and apparatus
US4458630A (en) 1982-06-22 1984-07-10 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Disease control in avian species by embryonal vaccination
SE8205892D0 (sv) 1982-10-18 1982-10-18 Bror Morein Immunogent membranproteinkomplex, sett for framstellning och anvendning derav som immunstimulerande medel och sasom vaccin
US4650676A (en) 1983-08-19 1987-03-17 American Cyanamid Company Antigens and monoclonal antibodies reactive against merozoites of Eimeria spp.
US4469047A (en) 1983-10-25 1984-09-04 Miller Gary E Apparatus and method for injecting eggs
US5279960A (en) 1984-07-05 1994-01-18 Enzon Corp. 25 KD coccidial antigen of eimeria tenella
US4681063A (en) 1986-07-02 1987-07-21 Embrex Inc. High speed automated injection system for avian embryos
JP2573189B2 (ja) 1986-08-08 1997-01-22 新技術事業団 カリクレインの検出方法
US5496550A (en) 1986-08-14 1996-03-05 Chilwalner Method of reducing the output of Eimeria oocysts from a newborn chick
JP3020226B2 (ja) 1986-08-18 2000-03-15 ブリティッシュ・テクノロジー・グループ・リミテッド ワクチン
US4935007A (en) 1986-08-28 1990-06-19 Eli Lilly And Company Anticoccidial method
NZ221560A (en) 1986-08-28 1989-10-27 Lilly Co Eli Method of protecting animals against coccidiosis by the oral administration of infective coccidial organisms
IL85980A (en) * 1987-04-16 1992-03-29 Embrex Inc Disease control in avian species by embryonal vaccination with a nonreplicating immunogen
GB8711256D0 (en) 1987-05-13 1987-06-17 Unilever Plc Protection
US5004607A (en) 1987-08-25 1991-04-02 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Method of immunizing poultry
US4808404A (en) 1988-01-11 1989-02-28 A. H. Robins Company, Inc. Live vaccine for coccidiosis utilizing coccidial sporozoites
ZA893740B (en) 1988-06-03 1990-02-28 Hoffmann La Roche Recombinant coccidiosis vaccines
JPH01313437A (ja) 1988-06-14 1989-12-18 Nippon Seibutsu Kagaku Kenkyusho 飼料内投与用の粒子状生ワクチン及びその製法並びに鶏コクシジウム症生ワクチン
US5068104A (en) 1988-08-01 1991-11-26 A. H. Robins Company Incorporated Live vaccine for coccidiosis utilizing coccidial sporozoites
NL8802399A (nl) 1988-09-29 1990-04-17 Marcus Theodorus Martinus Pete Preparaat, geschikt voor gebruik inzake de preventie van de bij coccidiosis optredende schade bij pluimvee, voedsel resp. drinkwater, dat een dergelijk type preparaat bevat, werkwijze voor het voorkomen van de bij coccidiosis optredende schade bij pluimv
US5028421A (en) 1989-05-25 1991-07-02 Embrex, Inc. Method of treating birds
US5106617A (en) 1989-06-27 1992-04-21 Embrex, Inc. Method of treating immature birds with IL-2
ZA9010461B (en) 1990-01-26 1991-10-30 Hoffmann La Roche Recombinant coccidiosis vaccines-5-7 eimeria surface antigen
US5288845A (en) 1991-05-29 1994-02-22 Merck And Co., Inc. Eimeria necatrix 16s rDNA probes
US5359050A (en) 1991-05-29 1994-10-25 Merck And Co., Inc. Eimeria mitis 16S or DNA probes
US5403581A (en) 1991-07-12 1995-04-04 Hoffmann-La Roche Inc. Coccidiosis vaccines
EP0594743B1 (en) 1991-07-12 1999-09-22 Pfizer Inc. Continuous cell line and vaccine against avian coccidia
US5311841A (en) 1992-07-10 1994-05-17 Thaxton J Paul Administration of medicaments of poultry
WO1994016725A1 (en) * 1993-01-19 1994-08-04 Merck & Co., Inc. Live coccidiosis vaccine
CA2098773C (en) 1993-06-18 1999-09-21 Eng-Hong Lee Recombinant coccidia and its use in a vaccine
JPH07206705A (ja) * 1993-11-03 1995-08-08 American Cyanamid Co 生インオボ（ｉｎ ｏｖｏ）ワクチン
US5339766A (en) 1993-11-03 1994-08-23 Embrex, Inc. Method of introducing material into eggs during early embryonic development
EP0653489B1 (en) 1993-11-12 2003-02-19 Akzo Nobel N.V. Coccidiosis poultry vaccin
HU223707B1 (hu) * 1995-06-07 2004-12-28 Pfizer Inc. Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására
EP0831896B1 (en) * 1995-06-07 2001-06-27 Pfizer Inc. In ovo vaccination against coccidiosis
US5888518A (en) 1995-10-06 1999-03-30 Beretich, Sr.; Guy R. Method for preventing and treating coccidiosis
US5807551A (en) 1996-04-01 1998-09-15 Iowa State University Research Foundation, Inc. Method to provide artificial passive immunity in birds
WO1998008699A1 (fr) 1996-08-29 1998-03-05 Kabushiki Kaisha Toyoda Jidoshokki Seisakusho Dispositif de chauffage visqueux
EA199900342A1 (ru) 1996-09-30 1999-10-28 Эмбрекс, Инк. Способ создания активного иммунитета вакцинным конъюгатом
US6048535A (en) * 1997-06-12 2000-04-11 Regents Of The University Of Minnesota Multivalent in ovo avian vaccine
US6627205B2 (en) * 1997-12-01 2003-09-30 Pfizer Incorporated Ovo vaccination against coccidiosis
US6019985A (en) 1998-02-27 2000-02-01 Munova Corporation Immunostimulation methods for providing disease protection in poultry
US6608033B1 (en) * 1999-08-27 2003-08-19 Pfizer Inc. Treatment or prevention of coccidiosis
RU2324498C2 (ru) * 2002-12-09 2008-05-20 Юниверсити Оф Джорджия Рисерч Фаундейшн, Инк. Кокцидиальная вакцина и методы ее приготовления и использования

Also Published As

Publication number Publication date
MX9709868A (es) 1998-03-31
ATE200029T1 (de) 2001-04-15
DZ2048A1 (fr) 2002-07-21
CO4440630A1 (es) 1997-05-07
PL184002B1 (pl) 2002-08-30
MY121973A (en) 2006-03-31
RO113716B1 (ro) 1998-10-30
FI974439A0 (fi) 1997-12-05
AU5478296A (en) 1996-12-19
TW430558B (en) 2001-04-21
JP3120860B2 (ja) 2000-12-25
CZ164396A3 (en) 1997-03-12
CN1145168A (zh) 1997-03-19
NZ286754A (en) 1998-06-26
EP0831897A1 (en) 1998-04-01
ES2155129T3 (es) 2001-05-01
IL118490A0 (en) 1996-09-12
SK282004B6 (sk) 2001-10-08
GR3035938T3 (en) 2001-08-31
ZA964726B (en) 1997-12-08
BG100642A (en) 1997-07-31
TR199600471A2 (tr) 1996-12-21
BG63035B1 (bg) 2001-02-28
US7018640B2 (en) 2006-03-28
CZ290810B6 (cs) 2002-10-16
IL118490A (en) 2000-07-26
HUP9601554A3 (en) 2003-08-28
JPH10506920A (ja) 1998-07-07
BR9602667A (pt) 1998-04-22
EP0831897B1 (en) 2001-03-28
PT831897E (pt) 2001-07-31
HUP9601554A2 (en) 1997-03-28
US6500438B2 (en) 2002-12-31
CA2223700C (en) 2002-05-07
DE69520509T2 (de) 2001-07-12
AR002157A1 (es) 1998-01-07
WO1996040234A1 (en) 1996-12-19
PL314639A1 (en) 1996-12-09
RU2125890C1 (ru) 1999-02-10
KR0167417B1 (ko) 1999-01-15
SK72896A3 (en) 1997-11-05
US20020031530A1 (en) 2002-03-14
FI974439A (fi) 1998-01-27
DK0831897T3 (da) 2001-04-30
CA2223700A1 (en) 1996-12-19
UA41381C2 (uk) 2001-09-17
CN1153510C (zh) 2004-06-16
US20020146435A1 (en) 2002-10-10
SI9600181A (en) 1997-04-30
DE69520509D1 (de) 2001-05-03
MA23890A1 (fr) 1996-12-31
PE2998A1 (es) 1998-03-02
KR970000245A (ko) 1997-01-21
AU694872B2 (en) 1998-07-30
AR044235A2 (es) 2005-09-07
AR044236A2 (es) 2005-09-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
HU223707B1 (hu) Eimeria sporozoiták vagy merozoiták alkalmazása coccidiózis elleni in ovo vakcinázásra szolgáló vakcina előállítására
EP0831896B1 (en) In ovo vaccination against coccidiosis
WO1993001276A1 (en) Continuous cell line and vaccine against avian coccidia
US6627205B2 (en) Ovo vaccination against coccidiosis
US7211265B2 (en) Vaccination modalities
AU3128899A (en) Vaccination modalities

Legal Events

Date Code Title Description
HFG4 Patent granted, date of granting

Effective date: 20041026

MM4A Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees