SE453836B - Biologiskt ren kultur av saccharomyces cerevisiae samt dess anvendning for hydrolys av raffinos - Google Patents
Biologiskt ren kultur av saccharomyces cerevisiae samt dess anvendning for hydrolys av raffinosInfo
- Publication number
- SE453836B SE453836B SE8100741A SE8100741A SE453836B SE 453836 B SE453836 B SE 453836B SE 8100741 A SE8100741 A SE 8100741A SE 8100741 A SE8100741 A SE 8100741A SE 453836 B SE453836 B SE 453836B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- saccharomyces cerevisiae
- culture
- hydrolysis
- var
- cells
- Prior art date
Links
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 title claims abstract description 13
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 title claims abstract description 13
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 title claims abstract description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims abstract description 8
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims abstract description 8
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 5
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 5
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 5
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 claims description 4
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 claims 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 claims 1
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 claims 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims 1
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 claims 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 claims 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 12
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 26
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 12
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 5
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 229910000041 hydrogen chloride Inorganic materials 0.000 description 4
- IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N hydrogen chloride Substances Cl.Cl IXCSERBJSXMMFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 3
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 101100283604 Caenorhabditis elegans pigk-1 gene Proteins 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000004737 colorimetric analysis Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 229960000448 lactic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 235000019799 monosodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- WTGQALLALWYDJH-AKTDCHNFSA-N scopolamine hydrobromide Chemical compound Br.C1([C@@H](CO)C(=O)OC2C[C@@H]3N([C@@H](C2)[C@H]2[C@@H]3O2)C)=CC=CC=C1 WTGQALLALWYDJH-AKTDCHNFSA-N 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M sodium dihydrogen phosphate Chemical compound [Na+].OP(O)([O-])=O AJPJDKMHJJGVTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 229960002920 sorbitol Drugs 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 229940055835 triptone Drugs 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2465—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on alpha-galactose-glycoside bonds, e.g. alpha-galactosidase (3.2.1.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/94—Saccharomyces
- Y10S435/942—Saccharomyces cerevisiae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
20 25 30 35 453 836 A. Odlíngsegenskaper: Fast medium (3'dygn) : maltagar.
Kolonierna är smörartade, gräddfärgade och blanka.
Flytande medium (3 dygn): maltextrakt.
Ett sediment bildas (för S.cerevisiae, var. oleaginosus observeras en blek ring); B. Morfologiska egenskaper: Egenskaper hos de vegetativa cellerna: 'cellerna är ellipsoida, cylindriska och ibland avlånga.
Bildning av pseudomycelium eller sant mycelium: Ett rudimentärt pseudomycelium förekommer under anaero- biska förhållanden.
C.Sexuella egenskaper: _De vegetativa cellerna omvandlas direkt till asci, som innehåller från en till fyra sfäroidiska sporer.
D. Fysiologiska egenskaper: Kolkällor: a) Fermenteringa _ S. cerevisiae S. cerevisiae var.oleaceus var.oleaginosus Glukos + + Galaktos - + Maltos - + Trealos - - Melibios I + Raffinos - b) Assimileringz S. cerevisiae S. cerevisiae var.oleaceus var.oleaginosus Glukos + Galaktos of _ + Maltos - + Trealos 1 1 Melibios + + Raffinos f É D-mannitol + - 10 15 20 25 30 35 453 836 D-glucitol 1 ~ Etanol 1 1 Glycerol 3 1 DL-mjölksyra 1 - De övriga kolföreningarna assimileras inte. 2. Assimilering av kväveföreningar: negativ positiv Kaliumnitrat : 3. Tillväxt via 37°c = För klassificeringen har schemat enligt J.P. Van der Walt i "The Yeast", upplaga 2, utgiven av J. Lodder, använts.
Kulturerna av de varieteter som avses enligt denna uppfinning kan framställas under aeroba förhållanden pâ vil- ket känt sätt som helst, exempelvis i odlingsfat eller före- trädesvis i dränkta kulturer med användning av fermentorer under omröring.
Ett kulturmedium, som kan vara antingen fast eller flytande, innehåller en assimilerbar kolkälla, en kväve- källa och mineralsalt.
Som kolkälla kan glukos, melibios, raffinos och även andra sockerarter, glycerol och natriumacetat använ- das. , Som kvävekälla kan oorganiska och organiska kväve- föreningar,“exempelvis köttextrakt, jästextrakt, pepton, tripton, aminosyror, kaseinhydrolysat, sojabönmjöl och ammoniumsalter användas.
En annan viktig fördel, som uppnås med användning av ifrågavarande mikroorganismer, är att enzymet produce- ras när de odlas på glukos (enzymet är konstitutivt).
Ett bra kulturmedium har exempelvis följande samman- sättning: Jästextrakt 5-20 g/l Glukos 10 g/l Spår av NaH2PO4, MQSO4, (NH4)2SO4 1 g/l f 10 15 20 25 30 35 453 836 pH-området för odlingen är från 4 till 7 och före- trädesvis från 5,0 till 5,5, temperaturen bör hållas mellan 2o°c een 4o°c, företrädesvis mellan 2s°c och 2a°c.
Enzymproduktionen kan ökas genom tillsats av mindre mängder melibios, vilken som bekant är en disackarid som härrör från delvis hydrolys av raffinos. Melibios kan sät- tas direkt till kulturmediet före inokulering eller när det logaritmiska tillväxtstadiet är över. Induktionstiden kan variera från 16 h till 72 h och är företrädesvis mellan 40.h och 48 h.
De under fermenteringen eller efter densamma upp- samlade cellerna kan användas som sådana eller i form av torrt pulver. Alternativt kan råa eller renade extrakt av cellerna användas. 7 För detta ändamål krossas cellerna på vilket känt sätt som helst och det enzymhaltiga extraktet används, rätt eller renat.
Slutligen må framhållas att en ytterligare teknisk och ekonomisk förbättring kan uppnås genom att man immobi- liserar enzymet genom att kombinera det med makromolekulära föreningar genom bildning av kemiska bindningar med dessa föreningars matris eller genom jonbindning eller också ge- nom fysisk immobilisering av enzymet eller av cellerna.
Cellerna sätts, som sådana eller immobiliserade, till en reaktionsblandning, som innehåller melasser, vid ett pH-omrâde från 4 till 7 och vid en temperatur från 30°C till 60°C. Den raffinos, som förekommer i melasserna, hyd- rolyseras sålunda till galaktos och sackaros, varvid ut- bytet av den senare ökas.
Följande exempel ger andra procedurmässiga anvis- ningar enligt uppfinningen, men det må framhållas att upp- finningen inte är begränsad till dem.
Exempel l En kultur framställs med följande sammansättning: (Nulflzsoq 5 g/l MgSO4.7H20 5 g/l Na2HPO4.l2H2O 4,69/l 10 15 20 25 30 35 453 836 KH2P°4 3 g¿1 NaCl 0,19/1 CaCl2 0,05 g[l Jästextrakt 10 g/1 Melibios 10 g/1 Man löser föreningarna pH 3,5 med väteklorid.
Det därmed framställda halsade, 50-ml-Erlenmayerkolvar i avjoniserat vatten och sur- gör till kulturmediet fördelas i bred- (100 ml brygd per kolv, ste- rilisering vid ll6°C under 30 min). Kolvarna inokuleras med l ml av en kultur av Saccharomyces cerevisiae, var. oleaceus i 250-ml-kolvar innehållande 50 ml av samma brygd och till- växten understöddes vid 25°C under 16 h med omröring (180 varv/min).
Fermenteringskolvarna placerades för inkubering un- der omröring (180 varv/min) vid 25°C.
Efter 40 h från inokuleringen uppsamlades cellerna ur kulturen genom centrifugering och tvättades med fosfat- buffer (0,1 M, pH 5,6). Av 100 ml kultur erhölls 0,55 g tor- kade celler.
De fuktiga cellerna uppsamlades från 100 ml brygd och âteruppslammades i 100 ml fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6), varefter den enzymatiska aktiviteten undersöktes» 1 g tor- kade celler innehöll omkring 1.107 enzymenheter.
Den enzymatiska aktiviteten mättes på följande sätt: Till l ml buffrad celluppslamning sattes 4 ml fos- fatbuffer (0,1 M, pH 5,6) och nâgra droppar toluen för bryt- ning av cellväggarna. Efter 15 min inkubation med omröring vid 4000 sattes 10 ml av en l-procentig (vikt/volym) lösning av melibios i fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) till uppslamningen.
Reaktionsblandningen inkuberades vid 40oC under 2 h i ett omrört vattenbad och avbröts genom kokning under l5 mi- nuter av ur reaktionsblandningen tagna prov.
Koncentrationen av glykos, som bildats genom hydro- lysen av melibios under reaktionen, bestämdes med den kolori- metriska GOD-Perid-metoden enligt Boehringer Mannheim GmbH. 10 15 20 25 30 35 4553 8256 Den optiska densiteten hos de färgade proven mät- tes vid rumstemperatur i en Perkin-Elmer Coleman 55 spekt- rofotometer optisk bana hos skeppet = lcm vid våglängden 436 nm.
Om man som enhet bestämmer den mängd enzym, som producerar l ug glukos på 2 h under de ovan beskrivna prov- ningsförhållandena, kan enheterna enzym per g torkade cel- ler beräknas enligt följande formel: a där: U _ (Ezh-Eohl . 18,2 -.l5. 100 E .C g torkade celler standard Ezh är den optiska densiteten hos provet, tagen efter 2 h ' Eoh är den optiska densiteten hos provet, tagen efter 0 h Estanaarfl är den optiska densiteten hos en standard- lösning av glukos, som innehåller 18,2 um glukos/ml C är g torkade celler/100 ml kulturbrygd.
Exempel 2 5 En kulturbrygd framställdes med följande samman- sättning: (nH4)2so4 _ 5 g/1 MgSO¿-7H2Q 0,5 gál _Na2HPO4.l2H2O 4,6 g/l KHZPO4 3 9/l NaCl 0,1 g/l CaCl2 0,05 g/l Jästextrakt 10 g/l Glukos 10 g/l De ovan angivna föreningarna löstes i avjoniserat vatten och pH inställdes till 5,3 med väteklorid. i denna brygd, framställda på samma sätt som enligt exempel 1, Kulturer av Saccharomyces cerevisiae, var. oleaceus, inkuberades med omröring (cirkulerande, 180 varv/min) vid 27°c. 39 h efter inokuleringen, uppsamlades de odlade *IA 1") 10 15 20 25 30 35 453 836 cellerna medelst centrifugering och tvättades med fosfat- buffer (0,1 M, pH 5,6).
Av 100 ml kulturbrygd erhölls 0,546 g torkade cel- ler. Celler från 100 ml brygd återuppslammades i 100 ml fos- fatbuffer (0,1 M, pH 5,6) och provades pâ enzymatisk aktivi- tet. l g torkade celler innehöll 9,4.l06 enzymenheter.
Exemgel 3 _ Ett kulturmedium med följande sammansättning fram- ställdes: (NH S04 4): 5,00 g/l Mgso4.7n2/ 0,5 g/1 Na2HPO4.l2H2O 4,6 g/l KH2PO4 3,00 g/1 NaCl 0,1 g/l CaCl2 0,05 g/l Jästextrakt 10 g/1 Glukos 10 g/1 Melibios l g/1 De ovan angivna föreningarna löstes i avjoniserat vatten och pH inställdes med väteklorid till 5,3.
Kulturer av Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus, framställda som i exempel 1, inkuberades under cirkulerande omröring (180 varv/min) vid 27°C. 43 h från inokuleringen uppsamlades cellerna ur kulturen genom centrifugering och tvättades med fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6). Av 100 ml kul- tur erhölls 0,594 g torkade celler.
Celler uppsamlade från 100 ml kultur återuppslam- mades i 100 ml fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) och provades på enzymatisk aktivitet. l g torkade celler innehöll l,6.l07 enzymenheter.
Exemgel 4 Ett kulturmedium med följande sammansättning fram- ställdes: (NH4) 2504 5,ÛÛ g/l MgSO4.7H2O 0,05 g/1 NaHPO4.12H2O 4,6 g/l 10 15 20 453 836 8 . xn2Po4 ' 3,0 g/1 NaCl 0,1 9/1 CaCl2 0,05 g/1 Jästextrakt 10,0 g/l Glukos g 5,0 g/1 Melibios 5,0 g/l De ovan angivna föreningarna löstes i avjoniserat vatten och pH inställdes till 5,3 med väteklorid.
Kulturer av Saccharomyces cerevisiae, var. oleaceus i denna brygd, framställd som i exempel 1, inkuberades under cirkulerande omröring (180 varv/min) vid 29°C. 48 h från ino- kuleringen av kulturen uppsamlades cellerna genom centrifu- gering och tvättades med fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6ï. Av 100 ml kultur erhölls 0,365 g torkade celler.
I 6 ml kulturbrygd sattes till 50 ml melass av 350 Brix, innehållande l,6% (vikt) raffinos, räknat på totala mängden fast material, och inställdes till pH 5,2 med H SO . Behandlingen genomfördes vid 40°C med omröring under 2 4 16 h. Koncentrationen av galaktos, som bildas vid hydroly- 'sen av raffinos under reaktionen, bestämdes med metoden laktos/galaktos-UV-prov enligt Boehringer Mannheim GmbH.
Under ovan angivna förhållanden framställdes 153 umol galak~ tos, motsvarande.hydro1ys av 30% av all förekommande raffinos. f)
Claims (3)
1. l. Biologiskt ren kultur av mikrooganismer av en stam av Saccharomyces cerevisiae, k ä n n e t e c k n a d därav, att stammen är Saccharomyces cerevisiae, var. oleaceous, som deponerats under beteck- ningen NRRL Y 12 056, eller Saccharomyces cerevisiae, var. oleaginosus, som deponerats under beteckningen NRRL Y 12 D57, vilka stammar har förmåga att producera a-galaktoxidas utan invertasaktivitet.
2. Användning av kulturen enligt krav 1 för hydrolys av i en sackaroshaltig produkt ingående raffinos, varvid den sackaroshaltiga produk- ten' bringas att reagera med kulturen av Saccharomyces cerevisiae, var. oleaceous, NRRL Y 12 056, eller var. oleaginosus, NRRL Y l2 057 utan att i produkten ingående sackaros hydrolyseras. _
3. Användning enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a d därav, att mikro- organismer-na föreligger i form av hela celler eller ett a-galaktoxidashaltigt extrakt. ä. Användning enligt krav 2 eller 3, k ä n n e t e c k n a d därav, att den sackaroshaltiga produkten är sockerbeta eller melass.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT19618/80A IT1130242B (it) | 1980-02-01 | 1980-02-01 | Procedimento per la produzione dell'enzima alfa-galattosidasi e per l'idrolisi del raffinosio mediante l'impiego dell'enzima stesso |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8100741L SE8100741L (sv) | 1981-08-02 |
| SE453836B true SE453836B (sv) | 1988-03-07 |
Family
ID=11159686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8100741A SE453836B (sv) | 1980-02-01 | 1981-01-30 | Biologiskt ren kultur av saccharomyces cerevisiae samt dess anvendning for hydrolys av raffinos |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4376167A (sv) |
| JP (1) | JPS56121485A (sv) |
| BE (1) | BE887293A (sv) |
| BG (1) | BG42525A3 (sv) |
| CA (1) | CA1163939A (sv) |
| CS (1) | CS248014B2 (sv) |
| DD (1) | DD157564A5 (sv) |
| DE (1) | DE3049308C2 (sv) |
| DK (1) | DK153410C (sv) |
| FI (1) | FI70596C (sv) |
| FR (1) | FR2481315A1 (sv) |
| GB (1) | GB2068972B (sv) |
| HU (1) | HU183303B (sv) |
| IE (1) | IE51009B1 (sv) |
| IT (1) | IT1130242B (sv) |
| LU (1) | LU83094A1 (sv) |
| NL (1) | NL8100476A (sv) |
| NO (1) | NO162347C (sv) |
| PL (1) | PL127026B1 (sv) |
| RO (1) | RO80915A (sv) |
| SE (1) | SE453836B (sv) |
| SU (1) | SU1090262A3 (sv) |
| TR (1) | TR21577A (sv) |
| YU (1) | YU42232B (sv) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1140312B (it) * | 1981-12-03 | 1986-09-24 | Anic Spa | Procedimento per la produzione di alfa-galattosidasi e impieghi dell'enzima cosi' ottenuto |
| US4643901A (en) * | 1983-06-10 | 1987-02-17 | Universal Foods Corporation | Yeast strains, method of production and use in baking |
| JPS61231993A (ja) * | 1985-04-09 | 1986-10-16 | Oriental Yeast Co Ltd | 新規パン酵母 |
| US5055401A (en) * | 1987-04-10 | 1991-10-08 | Alko Ltd. | Construction of new α-galactosidase producing yeast strains and the industrial application of these strains |
| NZ233582A (en) | 1989-05-16 | 1992-05-26 | Akpharma Inc Formerly Aek Dev | Oral composition comprising alpha-galactosidase |
| JPH07102138B2 (ja) * | 1989-07-19 | 1995-11-08 | 日本甜菜製糖株式会社 | 新規組換えプラスミド |
| US5401650A (en) * | 1990-10-24 | 1995-03-28 | The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Cloning and expression of biologically active α-galactosidase A |
| US5356804A (en) * | 1990-10-24 | 1994-10-18 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City Of New York | Cloning and expression of biologically active human α-galactosidase A |
| US8889127B2 (en) * | 2004-07-01 | 2014-11-18 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Targeted protein replacement for the treatment of lysosomal storage disorders |
| EP3741384A1 (en) | 2011-09-07 | 2020-11-25 | Mount Sinai School Of Medicine | Ceramidase and cell differentiation |
| EP2854910B1 (en) | 2012-06-01 | 2020-04-15 | Icahn School of Medicine at Mount Sinai | Ceramide levels in the treatment and prevention of infections |
| PL2968479T3 (pl) | 2013-03-14 | 2019-10-31 | Icahn School Med Mount Sinai | Kompozycje terapeutyczne ceramidazy kwasowej i sposoby ich wytwarzania i stosowania |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1485502A (en) * | 1974-06-05 | 1977-09-14 | Aarhus Oliefabrik As | Process for removal of water-soluble carbohydrates in the production of plant protein products |
| CH627626A5 (fr) * | 1978-01-04 | 1982-01-29 | Nestle Sa | Procede d'elimination des sucres flatulents du soja. |
-
1980
- 1980-02-01 IT IT19618/80A patent/IT1130242B/it active
- 1980-12-05 US US06/213,657 patent/US4376167A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-12-29 DE DE3049308A patent/DE3049308C2/de not_active Expired
- 1980-12-30 IE IE2742/80A patent/IE51009B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-12-30 DK DK557080A patent/DK153410C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-12-31 CA CA000367758A patent/CA1163939A/en not_active Expired
- 1980-12-31 FI FI804090A patent/FI70596C/fi not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-01-08 PL PL1981229117A patent/PL127026B1/pl unknown
- 1981-01-08 BG BG050349A patent/BG42525A3/xx unknown
- 1981-01-13 YU YU58/81A patent/YU42232B/xx unknown
- 1981-01-20 TR TR21577A patent/TR21577A/xx unknown
- 1981-01-23 RO RO81103195A patent/RO80915A/ro unknown
- 1981-01-27 GB GB8102439A patent/GB2068972B/en not_active Expired
- 1981-01-27 LU LU83094A patent/LU83094A1/fr unknown
- 1981-01-28 FR FR8101643A patent/FR2481315A1/fr active Granted
- 1981-01-29 BE BE0/203642A patent/BE887293A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-01-29 NO NO810306A patent/NO162347C/no unknown
- 1981-01-30 CS CS81692A patent/CS248014B2/cs unknown
- 1981-01-30 SE SE8100741A patent/SE453836B/sv not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 SU SU813288200A patent/SU1090262A3/ru active
- 1981-01-30 NL NL8100476A patent/NL8100476A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 HU HU81220A patent/HU183303B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-01-30 JP JP1178881A patent/JPS56121485A/ja active Granted
- 1981-02-02 DD DD81227378A patent/DD157564A5/de not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-11-05 US US06/439,378 patent/US4450238A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Updegraff | Utilization of cellulose from waste paper by Myrothecium verrucaria | |
| CA1202921A (en) | Hyperproducing cellulase microorganism | |
| US4701414A (en) | Method for producing ethanol from xylose-containing substance | |
| JPS5828289A (ja) | 発酵法によるアルコ−ルの製造法 | |
| SE453836B (sv) | Biologiskt ren kultur av saccharomyces cerevisiae samt dess anvendning for hydrolys av raffinos | |
| FI70924C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av enzymen kolesteras | |
| Liu et al. | Cultural conditions and some properties of the lipase of Humicola lanuginosa S-38 | |
| Yi et al. | Formation of α, ω-dodecanedioic acid and α, ω-tridecanedioic acid From different substrates by immobilized cells of a mutant of Candida tropicalis | |
| Burgess et al. | Alcohol production by yeast in concentrated ultrafiltration permeate from cheddar cheese whey | |
| HU181488B (en) | Process for the hydrolysis of racemic hydantoins into optically active n-carbamoyl-aminoacid derivatives and for preparing the hydrolyzing enzymatic complex | |
| IL95692A (en) | 5-Decanolide and 5-Dodecanolide are natural and a process for their production | |
| Satomura et al. | Intracellular Lipase Formation by Washed Mycelium Biochemical Studies on Sclerotinia Libertiana. Part 13 | |
| JPH0121957B2 (sv) | ||
| US4425436A (en) | Process for the production of amine oxidase | |
| SU1643608A1 (ru) | Штамм гриба АLLеSснеRIа теRRеSтRIS - продуцент целлюлаз | |
| JPS5840466B2 (ja) | アシル−ＣｏＡ・オキシダ−ゼの製造法 | |
| US5565343A (en) | Process for the production of dulcitol from lactose | |
| SU362871A1 (sv) | ||
| KR820000907B1 (ko) | 글루코오스 산화효소의 제조방법 | |
| JPH04141096A (ja) | Ｒ（―）―１，３―ブタンジオールの製造法 | |
| JPS5914787A (ja) | 新規微生物 | |
| JPS58152489A (ja) | エチルアルコ−ルの製造法 | |
| JPS5823783A (ja) | 微生物菌体の製造方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAV | Patent application has lapsed |
Ref document number: 8100741-1 Effective date: 19940601 |