NO162347B - Fremgangsmaate for enzymatisk hydrolyse av raffinose. - Google Patents
Fremgangsmaate for enzymatisk hydrolyse av raffinose. Download PDFInfo
- Publication number
- NO162347B NO162347B NO810306A NO810306A NO162347B NO 162347 B NO162347 B NO 162347B NO 810306 A NO810306 A NO 810306A NO 810306 A NO810306 A NO 810306A NO 162347 B NO162347 B NO 162347B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- cells
- enzyme
- raffinose
- hours
- saccharomyces cerevisiae
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 13
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 title claims description 3
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 title claims description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 16
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 16
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 claims description 12
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 claims description 12
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 claims description 11
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 claims description 11
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 claims description 5
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 29
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 description 19
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 8
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 8
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 6
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 6
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 5
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical class N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 4
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 4
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 4
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 4
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 3
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 2
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 241000235389 Absidia Species 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 235000016068 Berberis vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 1
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 1
- 241001450911 Circinella Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 150000003863 ammonium salts Chemical class 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001722 carbon compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Chemical class 0.000 description 1
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2465—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on alpha-galactose-glycoside bonds, e.g. alpha-galactosidase (3.2.1.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/94—Saccharomyces
- Y10S435/942—Saccharomyces cerevisiae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
Foreliggende oppfinnelse vedrører en fremgangsmåte for enzymatisk hydrolyse av raffinose i forbindelse med fremstil-e
ling av sukker, og det særegne ved fremgangsmåten i henhold til oppfinnelsen er at reaksjonen gjennomføres ved hjelp av:
a) celler,
b) urenset eller renset enzymholdig ekstrakt fra de nedbrutte cellene, c) immobiliserte enzymer oppnådd ved en kombinering av enzymet med makromolekylære forbindelser ved dannelse av
kjemiske bindinger med grunnmassen eller ved hjelp av
ionebinding eller ved fysikalsk immobilisering, eller
d) en fysikalsk immobilisering av cellene, erholdt fra Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus NRRL Y 12056
eller Saccharomyces cerevisiae var. oleaginosus NRRL Y 12057.
Alfa-galaktosidase-enzym, (E.C 3.2.1.22) som anvendes ved fremgangmåten i henhold til oppfinnelsen fremstilles ved dyrking av mikroorganismer av slekten Saccharomyces.
Raffinose, et trisakkarid som forekommer i betydelige mengder i sukkerroer, hindrer krystallisering av sukrose og ekstrak-sjonsutbyttene nedsettes således. Dette forhold er et alvorlig økonomisk problem for sukkerfabrikker, slik at hydrolyse av raffinose blir en nødvendighet både for å forbedre kvaliteten og virkningsgraden for prosessen med krystallisering av det ekstraherte sukker.
Mange publikasjoner beskriver enzymatiske prosesser for hydrolyse av raffinose, under anvendelse av enzymer ekstra-hert fra et antall arter av mikroorganismer av slektene Absidia, Aspergillus, Bacillus, Circinella, Escherichia, Micrococcus, Mortierella, Penicillium og andre.
Når man imidlertid dyrker mange mikroorganismer inneholder celleekstrakten ikke bare alfa-galaktosidase, men også invertase slik at ved behandling av sukkerroe-melasse er hydrolysen av raffinose uønsket fulgt av hydrolyse av sukrose. Den vesentlige fordel ved fremgangsmåte i henhold til den foreliggende oppfinnelse er at den mikroorganisme som utvelges og hører til slekten Saccharomyces betyr en gunstig kombinasjon, med fordel av en dyrkningstid som er positivt forkortet i forhold til de sopparter som har den egenskap at de har en høy alfa-galaktosidase aktivitet uten noen invertase aktivitet.
Disse mikroorganismer som er blitt isolert fra avfallsvannet fra olivenoljemøller i Monterotondo (Roma, Italia)-området har blitt klassifisert som Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus og Saccharomyces cerevisiae var. oleaginosus og er deponert i Nothern Regional Center of the US Department of Agriculture, Peoria, III, hvor de er blitt tildelt de respektive nummerbetegnelser NRRL Y 12056 og NRRL Y 12057.
Deres dyrkningsmessige, morfologiske og fysiologiske karakteristiske egenskaper er gjengitt herunder.
A. Dyrkningsmessige egenskaper.
1. Fast medium (3 døgn) : Maltagar
Koloniene har smøraktig fløtefarget glans.
2. Flytende medium (3 døgn): Maltekstrakt Sediment dannes ( i S. cerevisiae var. oleaginosus observeres en svak ring)
B Morfologiske egenskaper
1. Egenskaper av de vegetative celler: Cellene er ellipsoi-dale, sylindriske og enkelte ganger langstrakt. 2. Dannelse av pseudomycelium eller virkelig mycelium. Et rudimentert pseudomycelium er til stede under anaerobe betingelser.
C Seksuelle egenskaper
De vegetative celler omdannes direkte til asci som inneholder fra en til fire kuleformede sporer.
D Fysiologiske egenskaper
1. Utnyttelse av karbonkilder:
a) Gjæring:
b) Assimilering av:
De andre karbonforbindelser assimileres ikke.
2. Assimilering av nitrogenholdige forbindelser:
Kaliumnitrat: negativ
3. Vekst ved 37°C: Positiv
For klassifiseringen, et det beskrivende skjema av J.P. Van de Walt "The Yeasts", annen utgave, utgitt av J. Lodder blitt fulgt.
Kulturene av de stammer som hører inn under oppfinnelsen kan fremstilles under aerobe betingelser ved hvilken som helst av de kjente metoder, f. eks i dyrkningsoverflater, eller foretrukket i neddykkede kulturer under anvendelse av omrørte gjæringskar.
Et dyrkningsmedium som enten kan være fast eller flytende inneholder en kilde for assimilert karbon, en kilde for nitrogen og mineralsalter.
Som karbonkilder kan glukose, melibiose, raffinose og andre sukkerarter, samt glycerol og natriumacetat anvendes.
Som nitrogenkilder kan uorganiske og organiske nitrogenfor-bindelser som kjøttekstrakt, gjærekstrakt, pepton, tripton, aminosyre, kaseinhydrolysater, soyabønnemel og andre ammoniumsalter anvendes.
En annen vesentlig fordel som skriver seg fra anvendelsen av angjeldende mikroorganismer er det forhold at enzymet synte-tiseres ved dyrking på glukose (enzymet er konstitutivt).
Et passende dyrkningsmedium har f. eks følgende sammensetning:
pH-området for dyrkningen er fra 4 - 7 og er foretrukket fra 5,0 - 5,5 og temperaturen er mellom 25°C og 28°C.
Enzymsyntesen kan påskyndes ved tilsetning av små mengder melibiose, som det vil være kjent er det disakkarid som skriver seg fra den delvise hydrolyse av raffinose. Melibiose kan direkte tilsettes til dyrkningsmediet før inokuleringen, eller i stasjonær fase. Induksjonstiden kan variere fra 16 timer til 72 timer og er foretrukket mellom 40 timer og 48 timer. De celler som samles under gjæringen eller etter avslutningen av denne kan anvendes som sådanne eller i tørr pulverform. Som et alternativ kan urensede eller rensede ekstrakter av slike celler anvendes.
For dette formål nedbrytes cellene med hvilken som helst kjent metode og det urensede eller det rensede ekstrakt anvendes.
Til sist skal det nevnes at ytterligere teknisk og økonomisk forbedring kan oppnås ved som nevnt å immobilisere enzymet ved å kombinere det med makromolekylære forbindelser, ved dannelse av kjemiske bindinger med grunnmassen, eller ved hjelp av ionebinding, eller også ved fysikalsk immobilisering av enzymet eller cellene.
Cellene oppnådd på denne måte tilsettes som sådanne eller i immobilisert form til en reaksjonsblanding som inneholder melasse med pH fra 4 - 7 og ved en temperatur fra 30°C til 60°C. Raffinosen som inneholdes i melasse hydroliseres derved til galaktose og sukrose, og utbyttet av det sistnevnte blir derved forbedret.
De følgende eksempler illustrerer de vesentlige sider ved oppfinnelsen.
EKSEMPEL 1
Det fremstilles en dyrkningsbuljong med følgende sammensetning:
Disse forbindelser oppløses i deionisert vann og surgjøres til pH 3,5 med saltsyre.
Det således fremstilte dyrkningsmedium ble fordelt i tykkhalsede 500 ml Erlenmeyerkolber (100 ml buljong pr kolbe, sterilisering ved 116°C i 30 minutter). Kolbene ble inokulert med 1 ml av en kultur av Saccharomyces cervisiae var. oleaceus-stammen i 250 ml kolber inneholdende 50 ml av den samme dyrkingsbuljong og veksten ble fremmet ved 25°C i løpet av 16 timer under omrøring (180 omdreininger pr minutt).
Gjæringskolbene ble anbragt for inkubasjon under omrøring (180 omdreininger pr minutt) ved 25°C.
Etter 40 timer fra inokuleringen ble cellene fra dyrkingsbuljongene samlet ved sentrifugering og vasket med fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6). Fra 100 ml dyrkingsbuljong ble det oppnådd 0,55 g tørkede celler.
De fuktige celler samlet fra 100 ml buljong ble oppslemmet på nytt i 100 ml fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) og enzymaktivi-teten ble bedømt. 1 g tørkede celler inneholdt omtrent 1-10<7 >enzymenheter. Den enzymatiske aktivitet ble målt ved hjelp av følgende metode.
Til 1 ml bufret celledispersjon ble det tilsatt 4 ml fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) og noen dråper toluen for å nedbryte celleveggene. Etter 15 minutter inkubasjon med omrøring ved 40°C ble dispersjonen tilsatt 10 ml av 1 % løsning (vekt/volum) melibiose i fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6)
Reaksjonen ble inkubert ved 40°C i 2 timer i et omrørt vannbad og ble avbrutt ved koking av prøvene tatt fra reaksjonsblandingen i 15 minutter.
Konsentrasjonen av glukose, fremstilt ved hydrolyse av melibiose under reaksjonen, ble bestemt ved hjelp av den kolori-metriske GOD-Perid metode etter Boehringer Mannheim GmbH. Den optiske densitet av de fargede prøver ble målt ved romtempertur i et Perkin-Elmer Coleman 5 5 spektrofotometer, med optis lysvei = 0,1 dm (desimeter) ved bølgelengde 436 nm.
Hvis man som en enhet definerer den mengde enzym som frembringer et mikrogram glukose i løpet av 2 timer under prøvebetingelsene angitt ovenfor, kan enheter enzym pr gram tørkede celler beregnes fra følgende formel:
hvori:
E2h er ^en optiske densitet av prøven målt etter 2 timer. Egh er den optiske densitet av prøven målt ved 0 timer. Estandard er den °Pt;i-s}ce densitet av en standard løsning av glukose inneholdende 18,2 mikrogram glukose pr milliliter.
C er gram tørkede celler i 100 ml dyrkingsbuljong.
EKSEMPEL 2
En dyrkingsbuljong ble fremstilt med følgende sammensetning:
De ovenfor angitte forbindelser ble oppløst i deionisert vann og pH ble innstilt til 5,3 ved hjelp av saltsyre.
Kulturer i slike buljonger, av stammen Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus, fremstilt som angitt i eksempel 1, ble inkubert under omrøring (orbital, 180 omdreininger pr minutt) ved 27°C. 39 timer fra inokuleringen ble dyrkingsbuljongcellene samlet ved sentrifugering og vasket med fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) .
Fra 100 ml av dyrkingsbuljongen ble det oppnådd 0,546 g tørkede celler. Cellene samlet fra 100 ml buljong ble oppslemmet på nytt i 100 ml fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) og ble målt med hensyn til enzymatisk aktivitet: 1 g tørkede celler inneholdt 9,4 • 10^ enzymenheter.
EKSEMPEL 3
Et dyrkningsmedium ble fremstilt med følgende sammensetning:
De ovenfor angitte forbindelser ble oppløst i deionisert vann og pH ble innstilt med saltsyre til 5,3.
Kulturer av stammen Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus, fremstilt som i eksempel 1, ble inkubert med orbital omrøring (180 omdreininger pr minutt) ved 27°C. 43 timer etter inokuleringen ble cellene fra dyrkingsbuljongene samlet ved sentrifugering og vasket med fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6). Fra 100 ml dyrkingsbuljong ble det oppnådd 0,594 g tørkede celler.
Cellene samlet fra 100 ml dyrkingsbuljong ble oppslemmet på nytt i 100 ml fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6) og ble målt med hensyn til enzymatisk aktivitet: 1 g tørkede celler inneholdt 1,6 • 10<7> enzymenheter.
EKSEMPEL 4
Et dyrkingsmedium ble fremstilt med følgende sammensetning:
De ovenfor anførte forbindelser ble oppløst i deionisert vann og pH ble innstilt til 5,3 med saltsyre.
Kulturer av Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus i en slik buljong, fremstilt som i eksempel 1, ble inkubert med orbital omrøring (180 omdreininger pr minutt) ved 29°C. 48 timer etter inokuleringen av kulturbuljongen ble cellene samlet ved sentrifugering og vasket med fosfatbuffer (0,1 M, pH 5,6). Fra 100 ml dyrkingsbuljong ble det oppnådd 0,365 tørkede celler. 6 ml dyrkingsbuljong ble tilsatt til 50 ml 35° Brix melasse, inneholdende 1,6 vekt% raffinose i forhold til totalt faststoffinnhold og ble innstilt til pH 5,2 med H2SO4. Behandlingen ble gjennomført ved ,40°C under omrøring i 16 timer. Konsentrasjonen av galaktose, et produkt fra hydrolysen av raffinose ved reaksjonen, ble bestemt ved hjelp av metoden Laktose/Galaktose UV-test av Boehringer Mannheim GmbH. Under betingelsene angitt ovenfor ble det fremstilt 153 mikromol galaktose, ekvivalent med hydrolyse av 30 % av totalt tilstedeværende raffinose.
Claims (1)
- Fremgangsmåte for enzymatisk, hydrolyse av raffinose i forbindelse med fremstilling av sukker,karakterisert ved at reaksjonen gjennomføres ved hjelp av: a) celler, b) urenset eller renset enzymholdig ekstrakt fra de nédbrutte cellene, c) immobiliserte enzymer oppnådd ved en kombinering av enzymet med makromolekylære forbindelser ved dannelse av kjemiske bindinger med grunnmassen eller ved hjelp av ionebinding eller ved fysikalsk immobilisering, eller d) en fysikalsk immobilisering av cellene, erholdt fra Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus NRRL Y 12056 eller Saccharomyces cerevisiae var. oleaginosus NRRL Y 12057.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT19618/80A IT1130242B (it) | 1980-02-01 | 1980-02-01 | Procedimento per la produzione dell'enzima alfa-galattosidasi e per l'idrolisi del raffinosio mediante l'impiego dell'enzima stesso |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO810306L NO810306L (no) | 1981-08-03 |
| NO162347B true NO162347B (no) | 1989-09-04 |
| NO162347C NO162347C (no) | 1989-12-13 |
Family
ID=11159686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO810306A NO162347C (no) | 1980-02-01 | 1981-01-29 | Fremgangsmaate for enzymatisk hydrolyse av raffinose. |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4376167A (no) |
| JP (1) | JPS56121485A (no) |
| BE (1) | BE887293A (no) |
| BG (1) | BG42525A3 (no) |
| CA (1) | CA1163939A (no) |
| CS (1) | CS248014B2 (no) |
| DD (1) | DD157564A5 (no) |
| DE (1) | DE3049308C2 (no) |
| DK (1) | DK153410C (no) |
| FI (1) | FI70596C (no) |
| FR (1) | FR2481315A1 (no) |
| GB (1) | GB2068972B (no) |
| HU (1) | HU183303B (no) |
| IE (1) | IE51009B1 (no) |
| IT (1) | IT1130242B (no) |
| LU (1) | LU83094A1 (no) |
| NL (1) | NL8100476A (no) |
| NO (1) | NO162347C (no) |
| PL (1) | PL127026B1 (no) |
| RO (1) | RO80915A (no) |
| SE (1) | SE453836B (no) |
| SU (1) | SU1090262A3 (no) |
| TR (1) | TR21577A (no) |
| YU (1) | YU42232B (no) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1140312B (it) * | 1981-12-03 | 1986-09-24 | Anic Spa | Procedimento per la produzione di alfa-galattosidasi e impieghi dell'enzima cosi' ottenuto |
| US4643901A (en) * | 1983-06-10 | 1987-02-17 | Universal Foods Corporation | Yeast strains, method of production and use in baking |
| JPS61231993A (ja) * | 1985-04-09 | 1986-10-16 | Oriental Yeast Co Ltd | 新規パン酵母 |
| US5055401A (en) * | 1987-04-10 | 1991-10-08 | Alko Ltd. | Construction of new α-galactosidase producing yeast strains and the industrial application of these strains |
| NZ233582A (en) * | 1989-05-16 | 1992-05-26 | Akpharma Inc Formerly Aek Dev | Oral composition comprising alpha-galactosidase |
| JPH07102138B2 (ja) * | 1989-07-19 | 1995-11-08 | 日本甜菜製糖株式会社 | 新規組換えプラスミド |
| US5356804A (en) * | 1990-10-24 | 1994-10-18 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City Of New York | Cloning and expression of biologically active human α-galactosidase A |
| US5401650A (en) * | 1990-10-24 | 1995-03-28 | The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Cloning and expression of biologically active α-galactosidase A |
| WO2006007560A2 (en) * | 2004-07-01 | 2006-01-19 | University Of Pennsylvania | Targeted protein replacement for the treatment of lysosomal storage disorders |
| EP3741384A1 (en) | 2011-09-07 | 2020-11-25 | Mount Sinai School Of Medicine | Ceramidase and cell differentiation |
| WO2013181530A1 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Ceramide levels in the treatment and prevention of infections |
| PL2968479T3 (pl) | 2013-03-14 | 2019-10-31 | Icahn School Med Mount Sinai | Kompozycje terapeutyczne ceramidazy kwasowej i sposoby ich wytwarzania i stosowania |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1485502A (en) * | 1974-06-05 | 1977-09-14 | Aarhus Oliefabrik As | Process for removal of water-soluble carbohydrates in the production of plant protein products |
| CH627626A5 (fr) * | 1978-01-04 | 1982-01-29 | Nestle Sa | Procede d'elimination des sucres flatulents du soja. |
-
1980
- 1980-02-01 IT IT19618/80A patent/IT1130242B/it active
- 1980-12-05 US US06/213,657 patent/US4376167A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-12-29 DE DE3049308A patent/DE3049308C2/de not_active Expired
- 1980-12-30 IE IE2742/80A patent/IE51009B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-12-30 DK DK557080A patent/DK153410C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-12-31 CA CA000367758A patent/CA1163939A/en not_active Expired
- 1980-12-31 FI FI804090A patent/FI70596C/fi not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-01-08 BG BG050349A patent/BG42525A3/xx unknown
- 1981-01-08 PL PL1981229117A patent/PL127026B1/pl unknown
- 1981-01-13 YU YU58/81A patent/YU42232B/xx unknown
- 1981-01-20 TR TR21577A patent/TR21577A/xx unknown
- 1981-01-23 RO RO81103195A patent/RO80915A/ro unknown
- 1981-01-27 LU LU83094A patent/LU83094A1/fr unknown
- 1981-01-27 GB GB8102439A patent/GB2068972B/en not_active Expired
- 1981-01-28 FR FR8101643A patent/FR2481315A1/fr active Granted
- 1981-01-29 NO NO810306A patent/NO162347C/no unknown
- 1981-01-29 BE BE0/203642A patent/BE887293A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-01-30 SU SU813288200A patent/SU1090262A3/ru active
- 1981-01-30 JP JP1178881A patent/JPS56121485A/ja active Granted
- 1981-01-30 HU HU81220A patent/HU183303B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-01-30 SE SE8100741A patent/SE453836B/sv not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 NL NL8100476A patent/NL8100476A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 CS CS81692A patent/CS248014B2/cs unknown
- 1981-02-02 DD DD81227378A patent/DD157564A5/de not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-11-05 US US06/439,378 patent/US4450238A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA1191801A (en) | Process for the production of alpha-galactoxidase and uses of the enzyme thus obtained | |
| US3806420A (en) | Process for the preparation of creatinine amidohydrolase | |
| EP0552894A2 (en) | D-tagatose production by enzymatic isomerization of D-galactose | |
| US5294546A (en) | Method for production of a growth factor for Bifidobacterium sp. | |
| NO162347B (no) | Fremgangsmaate for enzymatisk hydrolyse av raffinose. | |
| NO128540B (no) | ||
| US4442207A (en) | Process for production of glucosone | |
| US4387163A (en) | Process for producing the enzyme cholesterol esterase and for hydrolyzing cholesterol esters of fatty acids by using the enzyme itself | |
| US2821501A (en) | Recovery of starch | |
| US3813318A (en) | Production of xylose (dextrose) isomerase enzyme preparations | |
| EP0179523B1 (en) | Process for the enzymatic hydrolysis of d-alpha-amino-acid amides | |
| US3957587A (en) | Production of xylose (dextrose) isomerase enzyme preparations | |
| Yoshida et al. | Production and application of maltose phosphorylase and trehalose phosphorylase by a strain of Plesiomonas | |
| US4283496A (en) | Preparation and use of glucose isomerase | |
| IE41489B1 (en) | Production of glucose isomerase | |
| NO139691B (no) | Fremgangsmaate for fremstilling av glukoseisomeriserende enzym fra mikroorganismer | |
| US4061539A (en) | Preparation and use of glucose isomerase | |
| Yi et al. | Formation of α, ω-dodecanedioic acid and α, ω-tridecanedioic acid From different substrates by immobilized cells of a mutant of Candida tropicalis | |
| EP0032987B1 (en) | Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and l-aspartic acid preparation process using the same | |
| US3669840A (en) | Gluconic acid production | |
| USRE29152E (en) | Process for the enzymatic isomerization of dextrose to levulose | |
| US5565343A (en) | Process for the production of dulcitol from lactose | |
| DK145679B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af fructose | |
| SU958498A1 (ru) | Способ получени @ -маннаназы | |
| Nožinić et al. | Growth of Streptomyces bambergiensis and glucose isomerase biosynthesis |