FI70596B - Foerfarande foer enzymatisk hydrolysering av raffinos - Google Patents
Foerfarande foer enzymatisk hydrolysering av raffinos Download PDFInfo
- Publication number
- FI70596B FI70596B FI804090A FI804090A FI70596B FI 70596 B FI70596 B FI 70596B FI 804090 A FI804090 A FI 804090A FI 804090 A FI804090 A FI 804090A FI 70596 B FI70596 B FI 70596B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- cells
- raffinose
- enzyme
- medium
- activity
- Prior art date
Links
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 14
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 abstract description 13
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 13
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 abstract description 13
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 abstract description 9
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 abstract description 9
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 7
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 abstract description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 abstract description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 7
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 2
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 11
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N beta-melibiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O1 DLRVVLDZNNYCBX-ZZFZYMBESA-N 0.000 description 7
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 7
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 6
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007836 KH2PO4 Substances 0.000 description 4
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 4
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 4
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 4
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 4
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 4
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 2
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 2
- 102000005840 alpha-Galactosidase Human genes 0.000 description 2
- 108010030291 alpha-Galactosidase Proteins 0.000 description 2
- 108010051210 beta-Fructofuranosidase Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 2
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 2
- 235000011073 invertase Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 229910017464 nitrogen compound Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002830 nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 2
- FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N potassium nitrate Chemical compound [K+].[O-][N+]([O-])=O FGIUAXJPYTZDNR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- HHBOUFYYHJJTNU-UHFFFAOYSA-N 1,3,6-thiadiazepane-2,7-dithione Chemical compound S=C1NCCNC(=S)S1 HHBOUFYYHJJTNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000228212 Aspergillus Species 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001450911 Circinella Species 0.000 description 1
- 244000182625 Dictamnus albus Species 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 description 1
- 241000235575 Mortierella Species 0.000 description 1
- 241000228143 Penicillium Species 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 1
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019764 Soybean Meal Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000001573 invertase Substances 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002897 organic nitrogen compounds Chemical class 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 239000004323 potassium nitrate Substances 0.000 description 1
- 235000010333 potassium nitrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004455 soybean meal Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2465—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1) acting on alpha-galactose-glycoside bonds, e.g. alpha-galactosidase (3.2.1.22)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/12—Disaccharides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/94—Saccharomyces
- Y10S435/942—Saccharomyces cerevisiae
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
! 70596
Menetelmä raffinnosin entsymaattiseksi hydrolysoi- misfkr.i F ö r f a ra n d e för e n 7 y n a t i s k hy d r o J y a e r i n g av r a f f i n o s Tämä keksintö koskee menetelmää raffinnosin entsymäntti seksi h y d r o J y so imi seksi Saccharomyces cerevisia e v a r . oleaceus NR RL Y 12036 kokonaisten solujen tai rikotuista soluista saadun aLfa-qalaktosidaasia sisältävän uutteen 5 läsnäollessa.
Raffinoosia, joka on trisakkaridi, esiintyy huomattavia määriä sokerijuurikkaissa, ja se haittaa sakkaroosin kiteytymistä ja näin ollen heikentää uutesaantoa. Tämä seikka on vakava taloudellinen ongelma sokeritehtaissa, ja näin .10 ollen raffinoosi pitää hydrolysoida, jos halutaan parantaa sokerin laatua ja tehostaa uutetun sokerin kiteytymistä.
Lukuisissa julkaisuissa on kuvattu raffinoosin ent.sy-maattisia hydrolysoin timenetel m iä, joissa käytetään sellaisia entsyymejä, jotka on uutettu mikro-organismila-15 j e i s t a, jotka kuuluvat sukuihin A b s i d i a , Aspergillus ,
Bacillus , Circinella , Escher _ici_a, Micrococcus , Mortierella , Penicillium jne.
Kuitenkin useiden mikro-organismien viljelyn jälkeen saatu solu-uute sisältää alfa-qalaktosidaasin lisäksi myös 20 invertaasia niin, että sokerijuurikasmelassin hydrolyysin yhteydessä raffinoosin lisäksi hydrolysoituu myös sakkaroosi .
Nyt käsillä olevaan keksintöön liittyvät ne huomattavat edut, että keksinnöntekijöiden valitsemilla mikro-orga-25 nismeiila, jotka kuuluvat Saccharomyces-sukuun, on lyhyempi kasvatusaika kuin homeilla ja niillä on korkea alfa-galakto-sidaasiaktiivisuus ilman invertaasiaktiivisuutta.
Nämä mikro-organismit on eristetty aliiviöljytehtaan jätevedestä Monterotondosta (Rooma, Italia) ja ne on luoki-30 teltu kannoiksi Saccharomyces cerevisiae, var. oleaceus j a Saccharomyces cerevisiae, var. oleaqinosus ja ne on toimitettu säilytettäviksi Northern Regional Center of the US Depart- 2 70596 merit of Agriculture,Pe oria, 111., kokoelmiin, jossa niille on annettu numerot N R R t V 12 0 5 6 ja N R R1 Y 12057,
Niiden kasvulliset., morfologiset ja fysiologiset omi-5 naisuudet ovat seuraavat: A - kasvulliset ominaisuudet 1. Kiinteä kasvualusta (3 vuorokautta): Mallasagar Pesäkkeet ovat voimaisia, kermanvärisiä ja kiiltäviä.
10 2. Nestemäinen kasvualusta (3 vuorokautta): Mallasuute
Muodostui laskeuma (S.cerevisiae, var. oleaqinosus muodosti heikon renkaan).
B - Morfologiset ominaisuudet 1. Vegeta tiivisten solujen ominaisuudet: 13 Solut ovat. ellipsinmuotoisia, sylinterimäisiä ja joskus suippenevia.
2. Pseudomysee1 in tai todellisen myseelin muodostus: Anaerobisissa olosuhteissa havaitaan vähäinen pseudo myseeli.
2Π C - Suvulliset ominaisuudet
Vegetat. iiviset solut muuttuvat suoraan itiökot e loiksi, jotka sisältävät 1-4 pallomaista itiötä.
D - Fysyio 1 ogiset ominaisuudet: 1. Hii1i1 ähteiden käyttö: 25 a) F ermentaatio: 5. cerevisiae S.cerevisiae var. oleaceus var. oleaqinosus glukoosi + + galaktoosi - + ^ maltoosi - + trehaloosi melibioosi + + raffinoosi - + 11 3 70596 b) Assimilaatio: S.cerevisiae Scerevisiae var . oleaceus var. oleaqinosus glukoosi + + 5galaktoosi - + maltoosi - + trehaloosi - - melibioosi + + raffinoosi - - 10D-mannitoli - D-glusitoli - etanoli i - glyseroli - - DL-maitohappo - 13 Muut yhdisteet eivät assimiloidu.
1. Typpiyhdisteiden assimilaatio:
Ka 1iumnitraa11i : negatiivinen 3. Kasvu 37 °C:ssa: positiivinen
Luokituksessa on käytetty kaaviota, jonka J.P. der 20 Walt on esittänyt teoksessa "The Yeasts", 2nd Edition, toim.
J . L odde r.
Tämän keksinnön mukaisia kantoja voidaan viljellä aerobisissa olosuhteissa millä tahansa tunnetulla menetelmällä kuten pintakasvatuksina tai mielellään pinnanalaisvil-25 jelininä fermentoreissa sekoituksen alaisena.
Kasvatusalusta, joka voi olla joko kiinteä tai nestemäinen, sisältää assimiloituvan hiililähteen, typpi lähteen ja minera a 1isuo1 oja.
Hi 11i1 ähteinä voidaan käyttää glukoosia, melibioosia, 30 rafinoosia tai muita sokereita, glyserolia ja natriumasetaat-t i a .
Typpi1 ähteik si sopivat epäorgaaniset ja orgaaniset typpiyhdisteet kuten lihauute, hiivauute, peptoni, tryptöni, aminohapot, kaseiinihydrolysaattit, soijajauho ja ammonium-35 suolat.
4 70596
Vielä eräs nyt kyseessä oleviin mikro-orqanismeihin liittyvä huomattava etu on se, että entsyymiä syntyy, kun kasvatus tapahtuu glukoosissa (entsyymi on konstitutiivinen).
Sopiva kasvatusalusta on koostumukseltaan esim. seu- 5 r a a v a : hiivauute 5-20 g/1 glukoosi 10 g/1
NaH^PO^ (pieni määrä)
MgS04, (NH4)2S04 1 g/1 10 Kasvatuksen pH-alue on 4-7, mielellään 5,0-5,5, ja sopiva lämpötila on välillä 20-40 °C, mielellään välillä 25-28 °C.
Enltsyymin muodostumista voidaan tehostaa lisäämällä kasvualustaan pieni määrä melibioosia, joka tunnetusti on 15 raffinoosin osittaisessa hydro 1yysissä syntyvä disakkaridi. Melibioosi voidaan lisätä kasvualustaan ennen siirrostamis-ta tai sen jälkeen, kun logaritminen kasvuvaihe on ohitettu. Induktioaika voi olla 16-72 tuntia, mielellään 40-48 tuntia.
E erme ntoinnin aikana tai sen jälkeen ta 11eenotetut so-20 lut voidaan käyttää sellaisinaan tai kuivattuna jauheena.
Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää soluista valmistettua epäpuhdasta tai puhdistettua uutetta.
Tätä tarkoitusta varten solut rikotaan millä tahansa tunnetulla menetelmällä ja käyttöön otetaan epäpuhdas tai 25 puhdistettu uute.
Voidaan myös soveltaa teknillistä tai taloudellista parannusta siten, että entsyymi immobi1isoidaan liittämällä se makromolekulaariseen yhdisteeseen tai muodostamalla kemiallisia sidoksia kantaja-aineen kanssa tai muodostamalla 30 ionisidoksia tai immobi1isoima11a entsyymi tai solut fysikaalisesti .
Saadut solut lisätään sellaisinaan tai immobi1isoitui-na reaktioseokseen , joka sisältää melassia, ja jonka pH on välillä 4-7 ja lämpötila välillä 30-60 °C. Melassin sisal-35 tämä raffinoosi hydrolysoituu näin galaktoosiksi ja sakkaroosiksi ja samalla sakkaroosin saanto paranee.
Keksintöä valaistaan seuraavi1 la esimerkeillä.
Il 5 70596
Esimerkki 1
Kasvualustalla oli seuraava koostumus: (NH4)2S0^ 5 g/1
MgS04.7H20 5 g/1 5 Na2HP04.12H20 4,6 g/1 KH2P04 3 g/1
NaC1 0,1 g/1
CaC12 0,03 g/1 hiivauute 10 g/1 10 melibioosi 10 g/1 Nämä yhdisteet liuotettiin tislattuun veteen ja pH säädettiin suolahapolla arvoon 3,3.
Näin valmistettu kasvatusalusta laitettiin leveä-suisiin 300 ml:n Erlenmeyer-pu1loihin (100 ml pulloa kohti, 15 sterilointi 116 °C , 30 min). Pulloihin siirroste11iin 1 ml Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus -kasvustoa, deponoi ntitunnus NRRL-Y-12056 , joka oli kasvatettu 250 ml:n Er1 enmeyer-pu 11 oiss a, jotka sisälsivät 50 ml edellä mainittua kasvualustaa, ja kasvatus oli tapahtunut 25 °C:ssa 16 20 tunnin aikana sekoituksen alaisena (180 k/min).
Pulloja inkuboitiin 25 °C:ssa sekoituksen alaisina (1801/min).
40 tunnin kuluttua siirrostamisesta solut sentrifugoi-tiin talteen kasvualustasta ja pestiin fosfaattipuskurilla 25 (0,1 M, pH 5,6). 10 mlrsta kasvualustaa saatiin 0,55 g kui vattuja soluja.
100 ml:sta kasvualustaa kerätyt kosteat solut suspen-doitiin 100 ml:aan fosfaattipuskuria ja entsymaattinen aktiivisuus määritettiin. 1 g kuivattuja soluja sisälsi 1.10^ 30 entsyymiyksikköä . Entsyymiaktiivisuus mitattiin seuraavalla menetelmällä.
1 ml:aan puskuroitua solususpensiota lisättiin 4 ml fosfaattipuskuria (o,l M, pH 5,6) ja muutama tippa toluee-nia solujen rikkomiseksi. Kun seosta oli sekoitettu 15 mi-35 nuuttia 40 °C:ssa, siihen lisättiin 10 ml melibioosin 1¾ ( paino/tilav. ) fosfaa11ipuskuri1iuosta (o,l M, pH 5,6).
6 70596
Reaktioseosta s .koitettiin 2 tuntia 40 °C:ssa vesihauteella ja sen jälkeen reaktio katkaistiin keittämällä 15 minuuttia ja otettiin näytteet.
Melibioosin hydrolyysissä muodostuneen glukoosin 5 väkevyys määritettiin ko1 or imetrise11 a GOD-menete 1mä 11ä (Boehringer Mannheim GmbH).
Värillisten näytteiden optinen tiheys mitattiin huoneenlämpötilassa Perkin-Elmer Coleman 55 spektrofotomet-rillä, optinen 0,1 dm, aallonpituus 436 nm.
10 Jos yksikkö määritellään siksi määräksi entsyymiä, joka tuottaa 1 ^ug glukoosia 2 tunnissa edellä kuvatuissa määritysolosuhteissa, entsyyrniyksikkömäärä grammasta kuivattuja soluja voidaan laskea seuraavasta kaavasta: 15 U (E2h -W ' 1B'2 · 15 ' 100
E C
gramma kuivattuja soluja standardi jossa E2on 2 tunnin kuluttua otetun näytteen optinen tiheys, on 0 tunnin kuluttua otetun näytteen optinen tiheys.
20 ^"standardi on optinen tiheys glukoosin s t anda r d i 1 i uok s e 11 e , joka sisältää 18,2 mikrogrammaa glukoosia milli-litraa kohti.
C on solumäärä grammoina 100 ml:ssa kasvu 1iuonta.
Esimerkki 2 25 Kasvualustalla oli seuraava koostumus: (NH4)2S04 5 g/1
MgS04.7H20 0,5 g/1
Na2HP04. 12H20 4,6 g/1 KH2P04 3 g/1 30 NaC1 0,1 g/1
CaC12 0,05 g/1 hiivauute 10g/l glukoosi 10 g/1
Luetellut aineet liuotettiin tislattuun veteen ja pH 35 säädettiin suolahapolla arvoon 5,3.
7 70596
Saccharoroyces cerevisiae var. oleaceus -kantaa viljeltiin esimerkin 1 mukaisesti sekoituksen alaisena (orbi-taali, 180 1/min) 27 °C:ssa.
39 tunnin kuluttua siirrostamisesta solut sentrifugoi-5 tiin talteen k asvu 1 iuoksesta ja pestiin fosfaattipuskurilla (0,1 M, pH 5,6).
100 m1:sta kasvuliuosta saatiin 0,546 g kuivattuja soluja. 100 ml :sta kasvuliuosta saadut solut suspendoitiin 100 ml:aan puskuria (0,1 M, pH 5,6) ja määritettiin entsyy-10 miaktiivisuus: 1 g kuivattuja soluja sisälsi 9,4 . 10^ e n t - syymiyksikköä.
Esimerkki 3
Kasvatusalustalla oli seuraava koostumus: (NH4)2S04 5,00 g/1 15 MgS04.7H20 0,5 g/1
Na2HP04.12H20 4,6 g/1 KH2P04 3,00 g/1
NaC1 0,1 g/1
CaCl2 0,05 g/1 20 hiivauute 10 g/1 glukoosi 10 g/1 melibioosi 1 g/1
Luetellut aineet liuotettiin tislattuun veteen ja pH säädettiin suolahapolla arvoon 5,3.
25 Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus -kantaa kasvatettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla 27 °C:ssa käyttämällä orbitaa 1isekoitusta (180 1/min). 43 tunnin ku luttua siirrostamisesta solut sentrifugoitiin talteen kasvu-liuoksesta ja pestiin fosfaattipuskurilla (0,1 M, pH 5,6).
30 100 ml:sta kasvuliuosta saatiin 0,594 g kuivattuja soluja.
100ml:sta kasvuliuosta otettiin talteen solut ja sus-pendoitiin uudelleen 100 ml:aan fosfaattipuskuria (0,1 M, pH 5,6) ja entsyymiaktiivisuus määritettiin: 1 g kuivattuja soluja sisälsi 1,6 . 10^ entsyymiyksikköä.
35 Esimerkki 4
Kasvualustalla oli seuraava koostumus: 70596
O
(Nh4)2S04 3,00 g/1
MgS04.7H20 0,05 g/1
NaHP04.12H20 4,6 g/1 KH2P04 3,0 g/1 5 NaCl 0,1 g/1
CaC12 0,05 g/1 hi ivauute 10,0 g/1 glukoosi 5,0 g/1 melibioosi 5,0 g/1 10 Luetellut yhdisteet liuotettiin tislattuun veteen ja pH sää- detiin suolahapolla arvoon 5,3.
Saccharomyces cerevisiae var. oleaceus -kantaa kasvatettiin esimerkissä 1 kuvatulla tavalla 29 °C:ssa käyttämällä orbitaali-sekoitusta (180 1 / m i n ) . 48 tunnin kuluttua siirrostamisesta 15 solut sentrifugoitiin talteen kasvu 1 iuoksesta ja pestiin fosfaattipuskurilla (0,1 M, pH 5,6). 100 ml:sta kasvuliuosta saatiin 0,365 g kuivattuja soluja.
6 ml kasvuliuosta lisättiin 50 ml:aan melassia (35°Brix), joka sisälsi 1,6 paino-% raffinoosia kokonaiskuiva-aineesta lasket-20 tuna, ja pH säädettiin rikkihapolla arvoon 5,2. Käsittely suoritettiin sekoittamalla 40 °C:ssa 16 tuntia. Galaktoosiväkevyys, joka on reaktiossa syntyvä raffinoosin hy dro 1 y so i t omi s t uo t e , määritettiin o a 1 a k t o o s i / 1 a k t o o s i - U \l - kok ee 11 a (Boehringer Mannheim GmbH). Kuvatuissa olosuhteissa syntyi 153 mikromooli? 25 galaktoosia, joka vastaa läsnä olevan raffinoosin 30-prosent-tista hydrolysoitumista.
il
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT1961880 | 1980-02-01 | ||
| IT19618/80A IT1130242B (it) | 1980-02-01 | 1980-02-01 | Procedimento per la produzione dell'enzima alfa-galattosidasi e per l'idrolisi del raffinosio mediante l'impiego dell'enzima stesso |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI804090L FI804090L (fi) | 1981-08-02 |
| FI70596B true FI70596B (fi) | 1986-06-06 |
| FI70596C FI70596C (fi) | 1986-09-24 |
Family
ID=11159686
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI804090A FI70596C (fi) | 1980-02-01 | 1980-12-31 | Foerfarande foer enzymatisk hydrolysering av raffinos |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US4376167A (fi) |
| JP (1) | JPS56121485A (fi) |
| BE (1) | BE887293A (fi) |
| BG (1) | BG42525A3 (fi) |
| CA (1) | CA1163939A (fi) |
| CS (1) | CS248014B2 (fi) |
| DD (1) | DD157564A5 (fi) |
| DE (1) | DE3049308C2 (fi) |
| DK (1) | DK153410C (fi) |
| FI (1) | FI70596C (fi) |
| FR (1) | FR2481315A1 (fi) |
| GB (1) | GB2068972B (fi) |
| HU (1) | HU183303B (fi) |
| IE (1) | IE51009B1 (fi) |
| IT (1) | IT1130242B (fi) |
| LU (1) | LU83094A1 (fi) |
| NL (1) | NL8100476A (fi) |
| NO (1) | NO162347C (fi) |
| PL (1) | PL127026B1 (fi) |
| RO (1) | RO80915A (fi) |
| SE (1) | SE453836B (fi) |
| SU (1) | SU1090262A3 (fi) |
| TR (1) | TR21577A (fi) |
| YU (1) | YU42232B (fi) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1140312B (it) * | 1981-12-03 | 1986-09-24 | Anic Spa | Procedimento per la produzione di alfa-galattosidasi e impieghi dell'enzima cosi' ottenuto |
| US4643901A (en) * | 1983-06-10 | 1987-02-17 | Universal Foods Corporation | Yeast strains, method of production and use in baking |
| JPS61231993A (ja) * | 1985-04-09 | 1986-10-16 | Oriental Yeast Co Ltd | 新規パン酵母 |
| US5055401A (en) * | 1987-04-10 | 1991-10-08 | Alko Ltd. | Construction of new α-galactosidase producing yeast strains and the industrial application of these strains |
| NZ233582A (en) * | 1989-05-16 | 1992-05-26 | Akpharma Inc Formerly Aek Dev | Oral composition comprising alpha-galactosidase |
| JPH07102138B2 (ja) * | 1989-07-19 | 1995-11-08 | 日本甜菜製糖株式会社 | 新規組換えプラスミド |
| US5356804A (en) * | 1990-10-24 | 1994-10-18 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City Of New York | Cloning and expression of biologically active human α-galactosidase A |
| US5401650A (en) * | 1990-10-24 | 1995-03-28 | The Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Cloning and expression of biologically active α-galactosidase A |
| WO2006007560A2 (en) * | 2004-07-01 | 2006-01-19 | University Of Pennsylvania | Targeted protein replacement for the treatment of lysosomal storage disorders |
| EP3741384A1 (en) | 2011-09-07 | 2020-11-25 | Mount Sinai School Of Medicine | Ceramidase and cell differentiation |
| WO2013181530A1 (en) | 2012-06-01 | 2013-12-05 | Icahn School Of Medicine At Mount Sinai | Ceramide levels in the treatment and prevention of infections |
| PL2968479T3 (pl) | 2013-03-14 | 2019-10-31 | Icahn School Med Mount Sinai | Kompozycje terapeutyczne ceramidazy kwasowej i sposoby ich wytwarzania i stosowania |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1485502A (en) * | 1974-06-05 | 1977-09-14 | Aarhus Oliefabrik As | Process for removal of water-soluble carbohydrates in the production of plant protein products |
| CH627626A5 (fr) * | 1978-01-04 | 1982-01-29 | Nestle Sa | Procede d'elimination des sucres flatulents du soja. |
-
1980
- 1980-02-01 IT IT19618/80A patent/IT1130242B/it active
- 1980-12-05 US US06/213,657 patent/US4376167A/en not_active Expired - Lifetime
- 1980-12-29 DE DE3049308A patent/DE3049308C2/de not_active Expired
- 1980-12-30 IE IE2742/80A patent/IE51009B1/en not_active IP Right Cessation
- 1980-12-30 DK DK557080A patent/DK153410C/da not_active IP Right Cessation
- 1980-12-31 CA CA000367758A patent/CA1163939A/en not_active Expired
- 1980-12-31 FI FI804090A patent/FI70596C/fi not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-01-08 BG BG050349A patent/BG42525A3/xx unknown
- 1981-01-08 PL PL1981229117A patent/PL127026B1/pl unknown
- 1981-01-13 YU YU58/81A patent/YU42232B/xx unknown
- 1981-01-20 TR TR21577A patent/TR21577A/xx unknown
- 1981-01-23 RO RO81103195A patent/RO80915A/ro unknown
- 1981-01-27 LU LU83094A patent/LU83094A1/fr unknown
- 1981-01-27 GB GB8102439A patent/GB2068972B/en not_active Expired
- 1981-01-28 FR FR8101643A patent/FR2481315A1/fr active Granted
- 1981-01-29 NO NO810306A patent/NO162347C/no unknown
- 1981-01-29 BE BE0/203642A patent/BE887293A/fr not_active IP Right Cessation
- 1981-01-30 SU SU813288200A patent/SU1090262A3/ru active
- 1981-01-30 JP JP1178881A patent/JPS56121485A/ja active Granted
- 1981-01-30 HU HU81220A patent/HU183303B/hu not_active IP Right Cessation
- 1981-01-30 SE SE8100741A patent/SE453836B/sv not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 NL NL8100476A patent/NL8100476A/nl not_active Application Discontinuation
- 1981-01-30 CS CS81692A patent/CS248014B2/cs unknown
- 1981-02-02 DD DD81227378A patent/DD157564A5/de not_active IP Right Cessation
-
1982
- 1982-11-05 US US06/439,378 patent/US4450238A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| FI70596B (fi) | Foerfarande foer enzymatisk hydrolysering av raffinos | |
| IE862776L (en) | 2-keto-2-gulonic acid production | |
| KR0173124B1 (ko) | 7-아미노 세팔로스포란산의 효소적 제조방법 | |
| US4774179A (en) | Process for preparing a 7-aminocephalosporanic acid compound | |
| Yoshida et al. | Production and application of maltose phosphorylase and trehalose phosphorylase by a strain of Plesiomonas | |
| Yoshida et al. | Isolation and identification of a pyrogallol producing bacterium from soil | |
| Kurono et al. | Alkaline catalase produced by Bacillus no. Ku-1 | |
| Lowe et al. | Enzymatic hydrolysis of penicillin V to 6-aminopenicillanic acid by Fusarium oxysporum | |
| Yi et al. | Formation of α, ω-dodecanedioic acid and α, ω-tridecanedioic acid From different substrates by immobilized cells of a mutant of Candida tropicalis | |
| US4420562A (en) | Method for producing creatinase | |
| EP0032987A1 (en) | Thermophilic aspartase, processes for producing, culture used, and L-aspartic acid preparation process using the same | |
| US4357425A (en) | Process for producing L-amino acid oxidase | |
| US6716617B1 (en) | Fermentation method with continuous mass cultivation of ciliates (protozoa) for producing biogenous valuable substances | |
| Lakshmi et al. | Rapid relase of protoplasts from Eremothecium ashbyii in comparison with Trichoderma reesei and Penicillium chrysogenum using Novozyme and Funcelase | |
| EP0206595B1 (en) | Thermally stable tryptophanase process for producing the same, and thermally stable tryptophanase-producing microorganism | |
| JP2712331B2 (ja) | アシルアミノ酸ラセマーゼ、その製造法および用途 | |
| JP3514799B2 (ja) | リパーゼ及びこれを産生する微生物 | |
| US5565343A (en) | Process for the production of dulcitol from lactose | |
| KR910004451B1 (ko) | 담자포자 형성 효모 세포벽 파괴능이 높은 스트렙토마이세스속균(Streptomyces sp.) KCTC 8466P, 이를 이용한 세포벽 분해효소의 제조방법 및 세포벽 용해 효소제 | |
| KR910007849B1 (ko) | 신균주 스트렙토마이세스 sp.Y-183 및 이로부터 생산되는 히단토인에이즈의 생산방법 | |
| KR100232638B1 (ko) | 글루타릴 7-아미노세팔로스포란산 아실레이즈를 생산하는 슈도모나스속 세균 kac-1 | |
| Bashir et al. | Shake flask studies for the production of penicillin G acylase from Aspergillus niger | |
| JPH04325096A (ja) | （Ｒ）−２−ハロプロピオン酸および（Ｒ）−２−ハロ−ｎ−酪酸の製造法 | |
| EP0643139A2 (en) | Process for preparing indigo | |
| KR930008972B1 (ko) | 신균주 슈도모나스속 y-132 및 이로부터 생산되는 글루타릴-7-아미노세팔로스포린산 아실라아제 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: ENI - ENTE NAZIONALE IDROCARBURI |