SE453508B - Bestatinkristall av gamma-form och sett att framstella densamma - Google Patents

Description

453 508 den utsättes för höga fuktighetsbetingelser eller vid värmning.

Kristallen är därför ytterst lätthanterlig vid framställning av farmaceutiska doseringsformer innehållande bestatin.

Bestatin I(2S,3R)-3-amino-2-hydroxi-4-fenylbutanoyl-(S)- leucin] är en substans med ytterst låg toxicitet, isolerad av Umezawa et al. ur ett kulturfiltrat av Streptomyces olivoreticuli som en inhibitor för aminopeptidas (se den amerikanska patentskrif- ten 4 052 449; japanska utläggninšsskriften 7187/1976) . och denna förening har visat sig ha den effekten att den förbättrar immunsvaret, såsom fördröjd överkänslighet, och därigenom aktiverar den defensiva mekanismen hos en levande kropp att visa en karcino- statisk effekt (se den japanska utläggningsskriften 117435/ 1977). Föreningen har visat sig lovande såsom ett farmaceutiskt me- del.

Som kända processer för framställning av bestatin kan nämnas en jäsningsprocess som beskrives i den ovannämnda amerikanska patent- skriften 4 052 449, en syntetisk process beskriven i den amerikanska patentskriften 4 189 604 ( japanska utläggningsskriften _ 136118/ 1977)_ den amerikanska patentskriften 4 281 180 ( japanska utlägg-' Biflgsskriften 79353/1980) etc, samt andra processer.

Vid försök avseende framställningen av farmaceutiska medel innehållande bestatin i enlighet med den metod som beskrives i den ovannämnda amerikanska patentskriften 4 281 180, exempel 19, vilken metod ansetts vara industriellt fördelaktig, har det visat sig att bestatin är besvärligt att handskas med på grund av dess hygrosko- picitet och många olika försök har gjorts för att minska hygro- skopiciteten. Som ett resultat har man funnit att hygroskopiciteten hos bestatin beror på närvaron av en hygroskopisk bestatinkristall (vilken i fortsättningen benämnes kristall av B-form), att denna kristall av B-form, när den står i fria luften, förändras till en icke-hygroskopisk dihydratkristall (vilken i fortsättningen benäm- nes kristall av a-form) genom absorption av vatten, och att både kristallen av a-form och kristallen av B-form, när de suspenderas i eller knådas med ett speciellt lösningsmedel, omvandlas till en vattenfri, icke-hygroskopisk och mycket stabil kristall med ett spe- cificerat röntgendiffraktionsmönster (kristallen enligt uppfinningen benämnes i fortsättningen kristall av y-form).

Föreliggande uppfinning baserar sig på denna upptäckt. 453 508 Fig l visar ett röntgendiffraktionsmönster för kristallen av Y-form enligt föreliggande uppfinning.

Fig 2 är ett differentialtermogram för kristallen av Y-form enligt föreliggande uppfinning.

Kristallen av Y-form enligt uppfinningen har följande fysi- kalisk-kemiska egenskaper: 1. Röntgendiffraktionsmönster Tabell l och fig l visar röntgendiffraktionsmönster erhållna vid mätningar utförda med ett Rikagakudenki röntgendiffraktions~ instrument utrustat med en Cu-bestrålningsanordning försedd med ett Ni-foliefilter och en scintillationsräknare.

Tabell 1 d(Å) I/Il d(Å) I/Il 27,59 0,23 4,79 0,02 13,80 1,00 4,55 0,28 6,86 0,08 4,41 0,03 5,57 0,03 3,78 0,03 5,47 0,03 3,43 0,04 5,09 0,02 (elektrisk källa: Cu; Ni, 30 KV, 20 mA Ä=l,5405) 2. Termisk analys Vid differentialtermisk analys medelst ett termiskt Shimadzu DT-Model 30 analysinstrument observerades ingen exotermisk eller endotermisk reaktion upp till 233°C, vid vilken temperatur bestatin smälter och sönderdelas. Vid termogravimetrisk analys observerades vidare ingen viktförändring upp till sönderdelningen. Vid termogra- vimetrisk analys observerades att kristallen av a-form började minska i vikt vid ca 48°C och förlorade ca 9-10% av vikten. 3. Sann specifik vikt Den sanna specifika vikten var l,l73 g/ml vid mätning med användning av pyknometermetoden och med fotogen som dispergermedium. 4. Hygroskopicitet Y-kristallen, med en torkförlust lägre än 0,5%, lämnades att stå vid följande betingelser: temperatur 25°C och 37°C samt 31% och 83% relativ fuktighet. Ingen viktförändring observerades i något av 453 'S08 4 fallen. Följaktligen är kristallen av Y-form ej hygroskopisk. Å andra sidan uppvisade kristallen av B-form en viktökning av 8,2% och 9,7% när den fick stå under 6 timmar vid en relativ fuktighet av 31% och 82%.

Kristallen av Y-form enligt uppfinningen kan framställas på något av de följande sätten (a) och (b).

Sättet (a) innebär att en kristall av a-form eller ß-form värmes vid en temperatur från l48°C upp till smältpunkten för bes- tatin, eller företrädesvis mellan 150 och é00°C. Temperaturen l48°C är den temperatur vid vilken kristallen av B-form omvandlas till kristall av Y-form. Vid temperaturer lägre än denna omvandlas en- dast kristallen av u-form till B-kristall och kristallen av y-form kan ej erhållas. Dessutom sönderdelas tyvärr bestatin vid tempera- turer högre än smältpunkten.

Uppvärmningstiden är företrädesvis ej kortare än 1 timme.

Om den är kortare blir omvandlingen till 7-form ej fullständig.

Sättet (b) innebär att en kristall av u-form eller 8-form suspenderas i ett speciellt organiskt lösningsmedel eller att kristallen av a-form eller B-form knådas med lösningsmedlet.

Som speciellt organiskt lösningsmedel kan man använda vatten- haltig metanol, företrädesvis metanol innehållande 6-86 volym/vo- lym%, företrädesvis 10-80 volym/volym% vatten, aceton, metyletyl- keton, dietylketon, tetrahydrofuran, etylacetat, dioxan eller iso- propylalkohol. Dessa lösningsmedel kan användas som en kombination av tvâ eller flera. Alla de ovannämnda lösningsmedlen, med undantag av vattenhaltig metanol, skall företrädesvis vara fria från vatten, även om de kan innehålla vatten i en mängd som ej väsentligt pâver- kar kristallformen. Exempelvis kan aceton innehålla upp till 20 vo- lym/volym% och företrädesvis upp till 15 volym/volym% vatten.

Av de ovannämnda lösningsmedlen föredrages ett lösningsmedel med låg kokpunkt, såsom metanol med låg vattenhalt (t ex 50-10 vo- lym/volym%), aceton och tetrahydrofuran, med tanke på avlägsnandet av lösningsmedlet, och det mest lämpliga är aceton. Även om suspenderings- eller knadningstiden varierar beroende på betingelserna, såsom temperaturen, så är den exempelvis längre än 10 minuter och i praktiken mellan ca 20 minuter och 3 timmar. Vida- re är temperaturen vid suspenderingen eller knâdningen ej särskilt speciell, men en ordinär temperatur är lämplig. ll s ' '4ss sus Vad gäller mängden av det ovannämnda lösningsmedlet i för- hållande till kristaller av a-form eller B-form behöver den ej speciellt anges bara den är tillräcklig för att fullständigt väta kristallerna, och en proportion av exempelvis 0,3 viktdelar lös- ningsmedel/l viktdel kristaller är tillräcklig.

'Kristallen av a-form som användes enligt uppfinningen kan syntetiseras på det sätt som beskrives i den ovannämnda amerikanska patentskriften 4 281 180, och den kan erhållas genom utfällning vid den isoelektriska punkten, vilket innebär att kristallen separeras ur en vattenlösning med ett pH av 5-6. Kristallen av B-form kan er- hållas genom torkning av kristallen av a-form vid en temperatur un- aer 14a°c.

Sättet att framställa kristallen av Y-form enligt uppfin- ningen beskrives nedan mer konkret under hänvisning till exempel.

Exempel l 100 g bestatin (kristall av a-form)erhållen genom utfällning vid isoelektriska punkten lämnades att stå i ett torkskåp vid l50°C under 3 timmar för att få kristallen av Y-form. Kristallens form be- kräftades genom en röntgendiffraktionsmetod.

Exempel 2 10 g kristaller av B-forms erhållna genom torkning av kris- tallerna av a-form som användes i exempel 1 vid 60°C, suspenderades i 100 ml aceton. Suspensionen omrördes under 1 timme vid rumstempe- ratur varefter den filtrerades. Den erhållna kakan torkades vid re- ducerat tryck och 30°C under 3 timmar. 9,3 g kristaller av Y-form erhölls.

Exempel 3 10 g bestatinkristaller av 8-form suspenderades i 100 ml me- tyletylketon. Suspensionen omrördes under 30 minuter varefter den filtrerades. Den erhållna kakan torkades i en luftström vid 60°C under 5 timmar. 7,6 g kristaller av Y-form erhölls.

Exempel 4 100 g kristaller av a-form suspenderades i 600 g dietylketon.

Suspensionen omrördes vid rumstemperatur under 20 minuter varefter den centrifugerades. Den erhållna kakan torkades vid reducerat tryck och 30°C under 6 timmar. 91 g kristaller av Y-form erhölls. ,_'._ ~ ___ _ .....-. r--tï-...w-aavmxxïfl.. _=_________ __ __ 6 455 508 Exempel 5 10 g bestatin (kristaller av B-form) suspenderades i 100 mi' tetrahydrofuran. Suspensionen omrördes under 1 timme varefter den filtrerades. Den erhållna kakan torkades i en luftström vid 60°C under 4 timmar. 9,2 g kristaller av Y-form erhölls.

Exempel 6L. 10 g bestatin (kristaller av 8-form) blandades och knâdades med 30 ml dioxan i en mortel under 30 minuter för att ge en pasta.

Pastan torkades vid reducerat tryck och 60°C under 10 timmar. 8,6 g kristaller av Y-form erhölls.

Exempel 7 10 g bestatin isopropylalkohol. Suspensionen omrördes vid rumstemperatur under Den erhållna kakan torkades (kristaller av B-form) suspenderades i 100 ml 20 minuter varefter den filtrerades. vid reducerat tryck och 60°C under 5 timmar. 9,0 g kristaller av Y-form erhölls.

Exempel 8 10 g bestatin metanol innehållande 10% vatten. peratur under l timme varefter den filtrerades. torkades i en luftström vid SOOC under l0 timmar. (kristaller av B-form) suspenderades i l00 ml Suspensionen omrördes vid rumstem- Den erhållna kakan 8,1 g kristaller av Y-form erhölls.

Exempel 9 Till 100 g bestatin (kristaller av 8-form) sattes 70 ml me- tanol innehållande 50% vatten. Blandningen knådades i en liten knå- Den knådade produkten torkades i en luft- 94 g kristaller dare under 20 minuter. ström vid 50°C under 10 timmar. av Y-form erhölls.

Exempel.l0 10 g bestatin metanol innehållande 80% vatten. peratur under l timme varefter den filtrerades. (kristaller av B-form) suspenderades i l00 ml Suspensionen omrördes vid rumstem- Den erhållna kakan torkades vid reducerat tryck och 50°C under S timmar. 8,9 g kristal- ler av Y-form erhölls. z 453 508 Exemgeï 11 10 g bestatinkristaïïer av q-form suspenderades i 200 m1 etyïacetat. Sus- pensionen omrördes i två timmar vid 30°C och lämnades sedan. Sedan suspen- sionen fíïtrerats torkades den erhåïïna kakan vid reducerat tryck under 5 h vid 50°C. 8,7 g krístaïïer av Y-form erhölls.

Claims (5)

'453 508 Patentkrav

1. Bestatinkristall avy-form, k ä n n e t e c k n a d av att den har ett röntgendiffraktionsmönster i enlighet med nedanstående tabell A: Tabell A 3 a (A) ' 1/11 27,59 0,23 13,80 1,00 6,86 0,08 5,57 0,03 5,47 0,03 5,09 0,02 4,79 0,02 4,55 0,28 4,41 ~ 0,03 3,78 0,03 3,43 0,04

2. Sätt att framställa bestatinkristall av Y-form, k ä n n e t e c k - n a t av (a) att en hygroskopisk kristall av bestatin och/eller ett hydrat därav värms vid en temperatur mellan 14806 och upp till smältpunkten för bestatin under en tid ej understigande 1 h, eller (b) att en hygroskopisk kristall av bestatin och/eller ett hydrat därav suspenderas i ett eller flera organiska lös- ningsmedel valt frân gruppen bestående av aceton, metyletylketon, dietylketon, tetrahydrofuran, etylacetat, dioxan, isopropylalkohol och vattenhaltig metanol, eller att kristallen och/eller nämnda hydrat knådas med nämnda lösningsmedel, samt att nämnda lösningsmedel avlägsnas.

3. Sätt enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t av att värmningen sker vid en temperatur mellan 150 och 200°C.

4. Sätt enligt krav 2, k ä n n e t e c k n a t av att lösningsmedlet består av ett eller flera lösningsmedel valt från gruppen bestående av aceton, tetrahydrofuran och vattenhaltig metanol.

5. Sätt att framställa en bestatinkristall av Y-form, k ä n n e t e c k- n a t av att en hygroskopisk kristall av bestatin och/eller ett hydrat därav suspenderas i aceton. Iz)