SA516380131B1 - جسم مضاد igf-1r واستخدامه كناقل علاجي لعلاج السرطان - Google Patents

جسم مضاد igf-1r واستخدامه كناقل علاجي لعلاج السرطان Download PDF

Info

Publication number
SA516380131B1
SA516380131B1 SA516380131A SA516380131A SA516380131B1 SA 516380131 B1 SA516380131 B1 SA 516380131B1 SA 516380131 A SA516380131 A SA 516380131A SA 516380131 A SA516380131 A SA 516380131A SA 516380131 B1 SA516380131 B1 SA 516380131B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
ser
thr
val
leu
antibody
Prior art date
Application number
SA516380131A
Other languages
English (en)
Inventor
روبيرت ألاين
تشامبيون تييري
بيو-لارفور شارلوت
جوتستش ليلان
بروساس ماثيو
Original Assignee
بيير فابر ميديكمينت
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by بيير فابر ميديكمينت filed Critical بيير فابر ميديكمينت
Publication of SA516380131B1 publication Critical patent/SA516380131B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0005—Vertebrate antigens
    • A61K39/0011—Cancer antigens
    • A61K39/001102—Receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A61K39/001103—Receptors for growth factors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6854—Immunoglobulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد، وبشكل محدد، جسم مضاد أحادي النسيلة، قادر على الارتباط بـ IGF-1R، فضلا عن متواليات الحمض الأميني ومتواليات الحمض النووي التي تشفر الجسم المضاد المذكور. في إحدى السمات، يتعلق الاختراع بجسم مضاد، أو شظية ربط مولد ضد منه، قادر على الارتباط بـ IGF-1R، عن طريق الحث على امتصاص IGF-1R، حيث يتم امتصاصه في الخلية. يشتمل الاختراع أيضا على استخدام الجسم المضاد المذكور كمنتج أو ناقل علاجي جنبا إلى جنب مع مركبات أخرى مضادة للسرطان في صورة توكسينات، عناصر مشعة أو عقاقير، واستخدامها لعلاج أنواع معينة من السرطان. شكل 1.

Description

كر جسم ‎alias‏ 167-114 واستخدامه كناقل علاجي لعلاج السرطان ‎IGF-1R Antibody and its use as Addressing Vehicle for the Treatment of‏ ‎Cancer‏ ‏الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد ‎cana antibody‏ وبشكل محدد جسم مضاد أحادي النسيلة ‎monoclonal antibody‏ ؛ قادر على الارتباط ب ‎(IGF-1R‏ فضلا عن متواليات الحمض الأميني ‎amino acid‏ ومتواليات الحمض النووي ‎nucleic acid‏ التي تشفر ‎coding‏ الجسم المضاد المذكور. في إحدى السمات؛ يتعلق الاختراع بجسم مضاد جديد؛ أو شظية ربط ‎binding fragment‏ مولد ضد ‎(die‏ قادر على الارتباط ب ‎(IGF-IR‏ عن طريق الحث على امتصاص 114-]16؛ ‎Cua‏ ‏يتم امتصاصه في الخلية. يشتمل الاختراع أيضا على استخدام الجسم المضاد المذكور كمنتج تضميد أو ناقل ‎vehicle‏ علاجي جنبا إلى جنب مع مركبات أخرى مضادة للسرطان ‎anti-cancer‏ في صورة توكسينات 107005 ¢ عناصر مشعة ‎radio—elements‏ أو عقاقير» واستخدامها لعلاج أنواع 0 معينة من السرطان ‎.cancers‏ ‏إن مستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين ‎insulin‏ 1 الذي يُعرف اختصارًا ‎IGF-1R aul‏ (والذي يُدعى أيضا باسم 16711 أو ‎(IGF-IR‏ هو مستقبل يقوم بنشاط إنزيم تيروسين كيناز ‎tyrosine‏ ‎pila kinase‏ بنسبة 9070 مع مستقبل الإنسولين ‎(IR‏ ويعتبر ‎IGF-IR‏ بروتين سكري 007 ا بوزن جزيئي ‎molecular weight‏ يبلغ 350.000. وهو مستقبل غير متجانس 5 رباعي الوحدات البنائية ‎Cua hetero-tetrameric receptor‏ يتكون كل نصف ‎die‏ - مرتبط بجسور ثنائي كبريتيد ‎disulfide‏ - من وحدة ألفا فرعية ‎a-subunit‏ خارج الخلايا ووحدة بيتا فرعية ‎B-subunit‏ عبر الغشاء . يرتبط ‎IGF-1R‏ بكل من ‎IGF2 5 IGF]‏ بألفة عالية جدا ‎cul)‏ ‎Kd‏ 1# نانو مولار) ولكنه قادر بالمثل على الارتباط بإنسولين ‎IGF-IR‏ بألفة تقل من 100 إلى 0 مرة. وعلى العكس من ذلك»؛ فإن ‎IR‏ يرتبط بالإنسولين بألفة عالية جدا برغم أن ‎IGFs‏ ترتبط 0 بمستقبل الإنسولين بألفة أقل 100 مرة. إن نطاقات تيروسين كيناز ‎tyrosine kinase‏ ل ‎IGF-‏
‎IR‏ ول ‎IR‏ تتضمن تجانس متواليات مرتفع جدا برغم أن مناطق التجانس الأضعف تتعلق بالترتيب بمنطقة غنية بالسيستيين على وحدة ألفا الفرعية وجزء عند الطرف © من وحدة بيتا الفرعية. توجد فروق المتواليات في وحدة ألفا الفرعية في منطقة ارتباط المركبات الترابطية وبالتالي في ‎Laie‏ قيم الألفة النسبية ل ‎IGF-1R‏ ول ‎IGFS JR‏ والإنسولين بالترتيب. وتؤدي الفروق في الجزء عند الطرف © من وحدة بيتا الفرعية إلى تقارب في مسارات إصدار الإشارات للمستقبلين؛ 165-11 يتوسط الانقسام الفتيلي والتمايز والتأثيرات المضادة لموت ‎LAY‏ المبرمج؛ بينما يتضمن تنشيط ‎IR‏ بشكل
‏رئيسي تأثيرات في مستوى المسارات التأيضية ‎metabolic pathways‏ . يتم تنشيط بروتينات تيروسين كيناز السيتويلازمية ‎cytoplasmic tyrosine kinase proteins‏ عن طريق ريط المركب الترابطي بالنطاق خارج الخلايا للمستقبل. إن تنشيط إنزيمات كيناز ‎kinase‏ ‏0 بدوره ينطوي على تنبيه ركائز ‎substrates‏ مختلفة داخل الخلاياء بما في ذلك ‎١145-1‏ و-45 2 و 10 ‎.Grb‏ والركيزتان الرئيسيتان ل 167-114 هما ‎Shey IRS‏ حيث ‎(OE LE‏ عن طريق تنشيط خلايا مؤثرة عديدة بعدهاء في غالبية تأثيرات النمو والتمايز المرتبطة بربط ‎IGFs‏ بالمستقبل. يمكن أن يؤدي توافر الركائز لاحقا إلى فرض التأثير الحيوي النهائي المرتبط بتنشيط ‎IGF-IR‏ ‎Levies‏ تسود 5-1 تميل ‎WAY‏ إلى التكاثر والتحول. وعندما تسود ‎(She‏ تميل الخلايا إلى 5 التتمايز. ويبدو أن المسار المشارك بشكل رئيسي في تأثيرات الحماية ضد موت الخلايا المبرمج هو مسار فوسفاتيديل-إنوسيتول 3-كيناز ‎Pl)‏ 3-كيناز) ‎phosphatidyl-inositol 3-kinases‏
‎.(Pl 3-kinases)
‏لقد أصبح دور نظام ‎IGF‏ في تكوين السرطان هو موضوع أبحاث مكثفة في العشر سنوات الأخيرة. وجاء هذا الاهتمام بعد اكتشاف حقيقة أنه بالإضافة إلى خصائص انقسامه الفتيلي ومقاومته لموت 0 الخلايا المبرمج؛ يبدو أن هناك حاجة إلى 165-11 لتأسيس والحفاظ على نمط ظاهري محوّل وراثيا. في واقع الأمرء لقد تم التأكد من أن أي تعبير وراثي مفرط أو تنشيط بنائي 1 ‎IGF-1R‏ ‏يؤدي؛ في تشكيلة عظيمة من الخلاياء إلى نمو الخلايا بمعزل عن الدعم في أوساط خالية من مصل بقري جنيني؛ وتكوين أورام في الفئران منزوعة الشعر. وهذا بحد ذاته لا يعبر عن خاصية فريدة نظرا لأن مجموعة عظيمة من المنتجات التي ‎le‏ عن جينات ‎Jia‏ عنها بشكل وراثي مفرط يمكنها أن 5 تحول الخلايا وراثياء ‎Ly‏ في ذلك مجموعة جيدة من المستقبلات لعوامل النمو. ويرغم ذلك؛ فإن
الاكتشاف الحاسم الذي أظهر بوضوح الدور الرئيسي الذي يلعبه ‎IGF-IR‏ في التحويل الوراثي
تمثل في حقيقة أن ‎WIA‏ -114-]6) الذي تم تعطيل التشفير الجيني ل 165-11 عصية بالجملة
على التحويل بالعوامل المختلفة التي تستطيع ‎sale‏ تحويل ‎WAN‏ وراثيا مثل بروتين ‎ES‏ لفيروس
الورم الحليمي البقري ‎bovine papilloma virus‏ « والتعبير المفرط عن ‎«PDGFR 4 EGFR‏
مولد ضد ‎ras (SV 40 IT‏ المنشّط أو توليفة من العاملين الأخيرين.
يتم التعبير عن ‎IGF-IR‏ في مجموعة كبيرة من الأورام وسلالات الأورام وتضخم ‎IGFs‏ النمو
الورمي عبر الارتباط ب 167-11. وتأتي الحجج الأخرى المؤيدة للدور الذي يلعبه 165-115 في
التسرطن من الدراسات التي تستخدم الأجسام المضادة أحادية النسيلة من الفئران الموجهة نحو
المستقبل أو تستخدم الصفات الغالبة السالبة ل 11-]6!. في الواقع؛ تعمل الأجسام المضادة أحادية 0 النسيلة من الفئران الموجهة نحو ‎IGF-1R‏ على تثبيط تكاثر سلالات الخلايا المختلفة فى المستنبت
ونمو الخلايا الورمية في جسم الكائن الحي. ولقد تم بالمثل بيان أن صفة غالبة سالبة ل ‎IGF-1R‏
قادرة على تثبيط تكاثر الورم ‎.inhibiting tumor proliferation‏
‎Ay‏ مثل هذا السياق؛ تم النظر إلى ‎IGF-1R‏ لفترة طويلة كهدف مثير في ‎ale‏ السرطان. ولقد تم
‏تقديم مجموعة كبيرة من المشروعات التي تستهدف ‎IGF-1R‏ (أجسام مضادة بشرية أو متوافقة مع 5 البشر أو ‎cilia‏ صغيرة) لتطوير أجسام مضادة ‎IGF-1R‏ لعلاج أنواع السرطان وتم إجراء أكثر
‏من 70 تجربة سريرية في إرشادات مختلفة. ويرغم ذلك؛ لم ينجح أي من هذه المشروعات حتى الآن
‏ولا توجد أجسام مضادة ‎IGF-1R‏ في السوق برغم التعبير المفرط المتكرر لهذا الهدف الموصوف
‏للعديد من المرضى في سلسلة واسعة من الإرشادات.
‏وعلاوة على ذلك؛ لم تنجح سلسلة من التجارب السريرية التي تتضمن أجسام مضادة ل ‎IGF-1R‏ ‏0 مدمجة م أجسام مضادة ل ‎(EGFR‏ من أجل استهداف كل من ‎(IGF-IR EGFR‏ حيث لم
‏تتمكن أي من هذه الأجسام المضادة من ‎dallas‏ مرضى بطفرة ‎KRAS mutant‏
‏ونتيجة لذلك» لا يُعتبر 16-11 الآن هدفا رئيسيا؛ وفي أبحاث الأجسام المضادة العلاجية المحتملة؛
‏يبدو أن ‎IGF-IR‏ لم يعد مثيرا للاهتمام كسابق عهده.
برغم ذلك؛ يجب ملاحظة أن المساعي لتوليد أجسام مضادة ‎IGF-1R‏ ركزت على الأجسام المضادة المجردة؛ بمعنى أكثر تحديدا الأجسام المضادة المفيدة بخصائصها الأصلية. بهذا المعنى؛ يُعتبر ‎IGF- 1 R‏ هدفا غير مناسب لتوليد مترافق مناعي مثلما يوصف مترافق جسم مضاد -عقار (يُشار )4 باسم ‎(‘ADC”‏ مثل ‎IGF-1R‏ كهدف يتم التعبير عنه أيضا على نطاق واسع بالخلايا العادية؛ بما في ذلك أوعية الدم. بهذا المعنى؛ يمكن ملاحظة أن الجسم المضاد 167-11 الأحدث؛ بمعنى ‎AVE 1 64 2‏ ¢ يتم تطويره كجسم مضاد مجرد غير مجهز بعقار . وهو ما يحدث مع ‎f‏ لأجسام المضادة ‎IGF-1R‏ الأخرى التي تخضع للتطوير حاليا وكل الأجسام المضادة التي فشلت في التجارب السريرية. الوصف العام للاختراع 0 في إحدى السمات؛ يميل الاختراع الحالي إلى تناول هذه المسائل ويتعلق الاختراع بجسم مضاد ‎IGF-1R‏ قادر على ا لارتباط ب ‎IGF-1R‏ بطريقة معينة بحيث يكون مناسبا للاستخدام مع عقار . وبشكل أكثر تحديدا» يتعلق الاختراع بجسم مضاد 167-11 يقدم خصائص محددة مثل كونه مرشحًا ‎flies‏ للاستخدام مع مترافق مناعي . في نموذ ‎d‏ أول ¢ يتعلق ‎f‏ لاختراع بجسم مضاد أو شظية ربط مولد ضد منه بحيث ) 1 ( يرتبط = ‎G F-‏ ‎R 1 5‏ 1 بشري 4 و(2) يتم امتصاصه عقب ارتباطه = ‎IGF- 1 R‏ البشري المذكور . يتم استخدام المصطلحات "جسم مضاد ‎antibody‏ "« "أجسام مضادة ‎“Ab” “ab” (" antibodies‏ أو "جلوبيولين مناعي ‎immunoglobulin‏ " بشكل تبادلي بالمعنى الواسع لها وتشتمل على أجسام مضادة أحادية النسيلة؛ أجسام مضادة معزولة أو معالجة وراثيا أو مخلّقة كيميائيا أو ناتجة عن عودة الاتحاد الجيني ‎recombinant antibodies‏ (على سبيل المثال؛ أجسام مضادة أحادية النسيلة ‎monoclonal antibodies 0‏ سليمة أو كاملة الطول)؛ أجسام مضادة متعددة النسائل ‎polyclonal‏ ‎antibodies‏ ¢ أجسام مضادة متعددة التكافؤات ‎multivalent antibodies‏ أو أجسام مضادة متعددة النوعية ‎multispecific antibodies‏ (على سبيل المثال» أجساما مضادة ثنائية النوعية ‎(bispecific antibodies‏ وأيضا شظية جسم ‎alias‏ طالما أنها تبدي النشاط الحيوي المرغوب. في أحد النماذج؛ يتعلق الاختراع بجسم مضاد ناتج عن عودة الاتحاد الجيني.
وبشكل أكثر ‎danas‏ يتكون ‎Jie‏ هذا الجزيء من بروتين سكري ‎glycoprotein‏ يتكون من سلسلتين ‎heavy (H) chains (H) (pola‏ وسلسلتين خفيفتين (ا) ‎light (L) chains‏ على الأقل متصلتين داخليا بواسطة روابط ثنائي كبريتيد ‎(disulfide bonds‏ وتشتمل كل سلسلة ثقيلة على منطقة متغيرة ‎variable region‏ (أو نطاق) ثقيلة السلسلة (يُشار إليها اختصارا هنا ‎HCVR aul‏ أو ‎(VH‏ ومنطقة ثابتة ثقيلة السلسلة ‎Jails .heavy chain constant region‏ المنطقة الثابتة ثقيلة السلسلة على ثلاث نطاقات» ‎.CH3 3 CH2 (CHI‏ وتشتمل كل سلسلة خفيفة على منطقة متغيرة خفيفة السلسلة (يُشار إليها اختصارا هنا باسم ‎LOVR‏ أو ‎(VL‏ ومنطقة ثابتة خفيفة السلسلة. تشتمل المنطقة الثابتة خفيفة السلسلة على نطاق واحد ‎CL‏ يمكن تقسيم المناطق ‎VL 5 VH‏ أيضا إلى مناطق مفرطة التغيرء تُدعى المناطق المحددة لمناطق الاستكمال ‎complementarity‏ ‎(CDR) determining regions 0‏ المتقاطعة مع المناطق ذات السمات المحافظة الأكثر؛ التي ‎sed‏ مناطق الهيكل ‎5S. (FR) framework regions‏ كل من ‎VH‏ وا/ا من ثلاث ‎CDRs‏ ‏وأربع ‎«FRs‏ يتم ترتيبها من طرف الأمينو ‎amino-terminus‏ إلى طرف الكريوكسي ‎carboxy—‏ ‏5 بلترتيب التالي: 741 ‎«CDR3 (FR3 (CDR2 (FR2 (CDR1‏ ا . وتحتوي المناطق المتغيرة للسلاسل الثقيلة والخفيفة على نطاق ارتباط يتفاعل مع مولد ضد. يمكن للمناطق 5 الثابتة للأجسام المضادة أن تتوسط ارتباط الجلوبيولين المناعي ‎immunoglobulin‏ بأنسجة أو عوامل العائل ‎chost tissues‏ بما في ذلك ‎LIAN‏ المتنوعة للجهاز المناعي (مثل ‎WIA‏ مؤثرة ‎(effector cells‏ والمكون الأول ‎(Cl)‏ لنظام الاستكمال النمطي ‎classical complement‏ ‎.system‏
من المقرر أن يشير مصطلح ‎binding fragment Lis) Lhd‏ ب ‎'IGF-1R‏ أو ‎ly‏ ربط ‎"IGF-IR 0‏ أو 'شظية ربط مولد ضد" لجسم مضاد وفقا للاختراع إلى ببتيد ‎peptide‏ أو بولي ببتيد ‎polypeptide‏ أو بروتين يحتفظ بالقدرة على الارتباط بالهدف (يُشار إليه بصفة عامة باسم مولد
ضد ‎(antigen‏ للجسم المضاد ‎.antibody‏ ‏في أحد النماذج؛ يتم اختيار "شظيات ريط ‎alge‏ الضد ‎binding fragments‏ 801960 " المذكورة من المجموعة التي تتكون من شظيات ‎sc) scFv (Fv‏ لسلسلة مفردة ‎«Fab «(single chain‏ ‎(Fab’ (F(ab’)2 5‏ 507-06 أو أجسام مضادة ثنائية ‎pS‏ أو أي شظية سيزيد زمن عمر
‎Cail‏ الخاص بها عبر التعديل الكيميائي» على سبيل المثال إضافة بولي (ألكيلين) جليكول ‎Jie poly(alkylene) glycol‏ بولي ‎(onli)‏ جليكول ‎poly(ethylene) glycol‏ (المعالجة ببولي إيثيلين جليكول ") (الشظيات المعالجة ببولي إيثيلين جليكول تُدعى ‎scFv— (FV-PEG‏ ‎F(ab’) 2-PEG (Fab-PEG (PEG‏ أو ‎(Fab’-PEG‏ (يشير الاختصار ‎“PEG”‏ إلى
‏5 بولي(إيثيلين) جليكول ‎«(Poly(Ethylene) Glycol‏ أو بتضمين في جسيم دهني؛ تتضمن مثل تلك الشظيات واحدة على الأقل من ‎CDRs‏ المميزة للجسم المضاد ‎Wy‏ للاختراع. على نحو مفضل؛
‏سيتم بناء "شظيات ربط مولد الضد" المذكورة أو ستشتمل على متوالية جزئية لسلسلة متغيرة ثقيلة أو خفيفة للجسم المضاد التي تم اشتقاقها منهاء حيث تكفي المتوالية الجزئية المذكورة للاحتفاظ بنفس نوعية الربط للجسم المضاد الذي اشثقت منه وألفة كافية. يُفضل أن تساوي 100/1 على الأقل؛
‏0 وتفضل أكثر 10/1 على الأقل؛ من ألفة الجسم المضاد الذي اشثقت منه؛ بالنسبة للهدف. والأكثر تفضيلا؛ ستتكون 'شظيات ربط مولد الضد” المذكورة أو ستشتمل على ثلاث ‎CDRs‏ على الأقل هي ‎CDR-H3 3 CDR-H2 (CDR-H1‏ من السلسلة المتغيرة اثثقيلة ‎heavy variable chain‏ وثلاث ‎CDRs‏ على الأقل هي ‎CDR-L3 3 CDR-L2 «CDR-L1‏ من السلسلة المتغيرة الخفيفة ‎light variable chain‏ التي تم اشتقاقها منها.
‏5 .من المقرر أن يشير مصطلح ‎lay‏ 500009 "؛ 'يرتبط ‎binds‏ ¢ أو ما شابه" إلى أن الجسم المضاد؛ أو شظية ربط مولد ضد منه؛ يكوّن معدا مع مولد ضد ثابت نسبيا في ظل الظروف الفسيولوجية. يمكن تحديد خصائص الريط المعين بواسطة ابت انحلال التوازن بمقدار يبلغ حوالي 6-1 مولار أو أقل. إن طرق تحديد ما إذا كان جزيئين يرتبطان معروفة في المجال جيدا وتتضمن» على سبيل المثال» ديلزة التوازن ‎equilibrium dialysis‏ ؛ رنين البلازمون السطحي
‎surface plasmon resonance 0‏ ؛ وما شابه. لتجنب أي شكوك؛ فإن هذا لا يعني أن الجسم المضاد المذكور لا يمكنه الارتباط أو التداخل مع ‎alge‏ ضد آخرء بأدنى مستوى. ومع ذلك؛ في أحد النماذج؛ يرتبط الجسم المضاد المذكور بمولد الضد المذكور. طبقا للاستخدام في الوصف الحالي؛ يجب تفسير التعبير عن "جسم مضاد ‎"IGF-IR‏ بأنه يشبه "الجسم المضاد ل ‎IGF-IR‏ " ويعني ‎Laws‏ مضادا قادرا على الارتباط ب ‎AGF-1R‏
في أحد نماذج التطبيق الحالي؛ يتم تحديد موضع القمة اللاصقة للجسم المضاد في النطاق خارج الخلايا ل ‎IGF-1R‏ البشري (يُشار إليه أيضا باسم ‎(IGF-1R‏ ‏في نموذج محدد ‎clad‏ يتسم الجسم المضاد؛ أو شظية ربط مولد ضد منه؛ بالقدرة على الارتباط ب ‎IGF-1R‏ بقيمة 5050 تتراوح بين 10-10*10 5 10-10%1 ويشكل أكثر تفضيلا بين 10*8- 10و10-10*2 مولار. بهذا المعنى؛ يشير مصطلح قيمة ‎“ECS50”‏ إلى 9650 من التركيز الفعال ‎effective‏ ‏07 . وبشكل أكثر دقة؛ فإن مصطلح قيمة ‎(EC50)‏ أقصى نصف تركيز فعال ‎half maximal effective concentration‏ تناظر تركيز العقار أو الجسم المضاد أو المادة السامة ‎toxicant‏ التي تحث على استجابة في منتصف الطريق بين الخط القاعدي والقيمة القصوى 0 بعد وقت تعرض محدد ما. ووشضيع استخدام هذه القيمة كمقياس لفعالية العقار. لذا فإن قيمة 0 لمنحنى استجابة للجرعة متدرج يمثل تركيز عقار حيث يُلاحظ 9650 من أقصى تركيز له. ‎dad Jia‏ 050 لمنحنى استجابة للجرعة كمّي تركيز مركب حيث يبدي %50 منه استجابة؛ بعد ‎Be‏ تعرض محددة. تتبع مقاييس التركيز عادة منحنى على شكل حرف 5 حيث يزيد بسرعة على تغير صغير نسبيا في التركيز. يمكن تحديد هذا رياضيا عن طريق اشتقاق خط أفضل 5 مواءمة. وفي نموذج مفضل» فإن قيمة 5050 التي تم تحديدها في الاختراع ميزت فعالية الجسم المضاد الذي يرتبط على ‎IGF-IR ECD‏ الذي تم تعريضه على خلايا ورمية بشرية ‎human tumor‏ ‎cells‏ .يتم تحديد متغير 0050 باستخدام تحليل ‎(FACS‏ يعكس متغير 050 تركيز الجسم المضاد الذي يتم الحصول على 9650 من أقصى ارتباط له على ‎IGF-1R‏ الذي تم التعبير ‎aie‏ ‏0 على ‎WA‏ الورم البشري. وتم حساب كل ‎dad‏ 5050 كنقطة منتصف لمنحنى الاستجابة للجرعة باستخدام برنامج رسم منحنى انحسار من ‎al‏ متغيرات (برنامج ‎(Prism‏ لقد تم اختيار هذا المتغير ليمثل الظروف الفسيولوجية/المَرّضية. يشير مصطلح ‎dad‏ لاصقة ‎epitope‏ إلى منطقة من مولد ضد ترتبط ببروتين ‎alge‏ ضد؛ بما في ذلك الأجسام المضادة. يمكن تعريف القمم اللاصقة بنائيا أو وظيفيا. فالقمم اللاصقة الوظيفية هي
بصفة عامة مجموعة فرعية من القمم اللاصقة البنائية وتتضمن الوحدات البنائية التي تساهم مباشرة في ألفة التفاعل. يمكن أن تكون القمم اللاصقة بنائية؛ بمعنى أكثر تحديدا؛ أي تتكون من الأحماض الأمينية غير الخطية ‎non-linear amino acids‏ ¢ بعبارة أخرى تتكون القمم اللاصقة البنائية من أحماض بنائية غير تتابعية ‎.non-sequential amino acids‏ في نماذج معينة؛ يمكن أن تتضمن القمم اللاصقة محدّدات عبارة عن تجميعات من الجزيئات تتسم بالفعالية عند السطح مثل أحماض أمينية ‎«amino acids‏ سلاسل ‎Lula‏ سكرية ‎«sugar side chains‏ مجموعات فوسفوريل ‎cphosphoryl‏ أو مجموعات سلفونيل ‎esulfonyl‏ وفي نماذج معينة يمكن أن تتضمن خصائص بنائية معينة من ثلاث أبعاد؛ و/أو خصائص شحن معينة. في نموذج معين؛ يتعلق الاختراع ‎Jal)‏ بطريقة لاختيار جسم مضاد ‎(Sa‏ امتصاصه؛ أو شظية 0 ربط 14-]16 يمكن امتصاصه ‎dus (aie‏ ترتبط بمستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 (اختصارا ‎(IGF-1R‏ ويتم امتصاصه عقب ارتباطه ب ‎Gua IGF-IR‏ تشتمل الطريقة المذكورة خطوة اختيار جسم مضاد: حيث يرتبط ب ‎IGF-1R‏ له رقم تعريف المتوالية ¢52 و حيث لا يرتبط ب ‎IGF-IR‏ له رقم تعريف المتوالية 52 مع وجود حمض أميني خلاف هيستيدين ‎Histidine 5‏ في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52 أو مع وجود حمض أسبارتيك ‎Aspartic‏ ‎(ASP) acid‏ في الموضع 491؛ على نحو مفضل حيث لا يرتبط ب ‎IGF-IR‏ له رقم تعريف المتوالية 52 مع وجود حمض أميني خلاف هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 2 وحمض أسبارتيك ‎(ASP)‏ في الموضع 491. في نموذج أكثر ‎dass‏ يتعلق الاختراع الحالي بطريقة لاختيار جسم مضاد يمكن امتصاصه؛ أو شظية ربط ‎IGF-1R‏ يمكن امتصاصه ‎(dic‏ حيث يرتبط بمستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 البشري (114-]16) ‎aug‏ امتصاصه عقب ارتباطه ب» حيث تشتمل الطريقة المذكورة على الخطوات التالية: 1) اختيار جسم مضاد: حيث يرتبط ب ‎IGF-1R‏ له رقم تعريف المتوالية ¢52 و
-0 1 — ‎ii )‏ حيث لا يرتبط | ‎1GF- 1 R‏ له رقم تعريف المتوالية 2 5 مع وجود حمض أمينى خلاف هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52 أو مع وجود حمض أسبارتيك ‎Aspartic acid‏ ‎(ASP)‏ في الموضع 1 على نحو مفضل حيث لا يرتبط ب 16-114 له رقم تعريف المتوالية 52 مع وجود حمض أميني خلاف هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52 وحمض أسبارتيك ‎(ASP)‏ في الموضع 491
و؛ بعد ذلك؛ من خلال هذا الجسم المضاد؛
2( اختيار جسم مضاد يمكن امتصاصه؛ أو شظية ربط ‎IGF-IR‏ منه؛ حيث تبلغ النسبة المثوية للإمتصاص عقب ارتباطه ب 11-]16 على الأقل 9640؛ على نحو مفضل 9650 على الأقل؛ 0 على الأقل» 9670 على الأقل» أو 9680 على الأقل.
0 في نموذج محدد آخرء يتعلق الاختراع الحالي بطريقة لاختيار جسم مضاد يمكن امتصاصه؛ أو شظية ربط ‎IGF-1R‏ يمكن امتصاصه منه؛ حيث يرتبط بمستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 البشري ‎Jug (IGF-1R)‏ امتصاصه عقب ارتباطه ب» حيث تشتمل الطريقة المذكورة على الخطوات التالية: اختيار جسم مضاد يمكن امتصاصه؛ أو شظية ربط 167-114 ‎aie‏ حيث تبلغ النسبة ‎Logiall‏
5 للاإمتصاص عقب ارتباطه ب 11-]16 على الأقل 9640؛ على نحو مفضل 9650 على الأقل؛ 0 على ‎(JN‏ 9670 على الأقل» أو 9680 على ‎(JR‏
و» بعد ذلك؛ من خلال هذا الجسم المضاد؛ اختيار جسم مضاد: حيث يرتبط ب ‎IGF-1R‏ له رقم تعريف المتوالية 52« و حيث لا يرتبط ب ‎IGF-IR‏ له رقم تعريف المتوالية 52 مع وجود حمض أميني خلاف هيستيدين
في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52 3 أو مع وجود ‎aan‏ أسبارتيك ‎(ASP)‏ في الموضع 1 49 على نحو مفضل حيث لا يرتبط 2 ‎IGF- 1 R‏ له رقم تعريف المتوالية 52 مع وجود ‎aan‏ ‏أميني خلاف هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52 وحمض أسبارتيك ‎(ASP)‏ ‏في الموضع 1
— 1 1 — في طريقة وفقا للاختراع؛ يمكن إجراء خطوة اختيار جسم مضاد حسب خصائصه للامتصاص والارتباط أو عدم ‎J‏ لارتباط 2 ‎IGF-1R‏ بأي ترتيب تتابعي . ‎d J gail 12d‏ معين 3 يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه أو شظية ربط ‎IGF- 1 R‏ يمكن امتصاصه ‎(die‏ حيث يرتبط بمستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 البشري ‎(I GF-1 R)‏ ‘ على سبيل المثال يتم الحصول عليه بواسطة أحد الطرق المذكورة أعلاه وفقا للاختراع.
فى نموذج محدد ‎AT‏ 4 يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالى بجسم مضاد يمكن امتصاصهك أو شظية ربط ‎G F-‏ ‎(Sa IR‏ امتصاصه ‎(die‏ حيث يرتبط بمستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 البشري ‎IGF-‏ ( ‎R)‏ 1 له رقم تعريف المتوالية 52 ‎ag‏ امتصاصه عقب ارتباطه ‎co‏ وحيث لا يرتبط ب ‎IGF-1R‏ له رقم تعريف المتوالية 82 أو 92 على نحو مفضل رقم تعريف المتوالية 82 5 192
0 لجسم مضاد وفقا للاختراع ‎Jal)‏ ¢ رقم تعريف المتوالية 52 يناظر متوالية الحمض الأميني لمستقبل ‎IGF-1R‏ البشريء؛ حيث يوجد هيستيدين فى الموضع 494« بمعنى أكثر تحديدا ‎IGF-1R‏ من التمط البري» حيث رقم تعريف المتوالية 82 يناظر متوالية الحمض الأمينى المطفرة لمستقبل ‎IGF‏ ‎(gall IR‏ حيث يوجد أرجينين في الموضع 494؛ وحيث رقم تعريف المتوالية 92 يناظر متوالية الحمض الأميني المطفرة لمستقبل ‎IGF-1R‏ البشري؛ حيث يوجد ألانين في الموضع 491.
5 في نموذج أكثر ‎clans‏ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور
0 على الحمض ‎١‏ لأميني هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أمينى مكونة من 8 أحماض أمينية على الأقل. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور
-2 1 — على الحمض الأميني أسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أمينى مكونة من 8 أحماض أمينية على الأقل. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني هيستيدين ‎Histidine amino acid‏ في الموضع 494 والحمض الأميني أسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أمينى مكونة من 8 أحماض أمينية ‎amino acids‏ على الأقل. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور 0 على الحمض ‎١‏ لأميني هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني 9 0) 12+11 13« 14< 16.15 18617 19 أو 20 ‎aan‏ أميني. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور 5 على الحمض ‎١‏ لأميني هيستيدين في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أمينى مكونة من 8 أحماض أمينية على ‎JY)‏ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني يتم اختيارها من المجموعة ‎All‏ تتكون من: - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 487 إلى الحمض الأميني في الموضع 494 له رقم 0 تعريف المتوالية 52؛ - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 488 إلى الحمض الأميني في الموضع 495 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏
— 3 1 — - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل مع؛ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 489 إلى الحمض الأميني في الموضع 496 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏- متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 490 إلى الحمض الأميني في الموضع 497 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏- متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 491 إلى الحمض الأميني في الموضع 498 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏0 - متوالية حمض أميني تتطابق ‎cae‏ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 492 إلى الحمض الأميني في الموضع 499 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ و - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 493 إلى الحمض الأميني في الموضع 500 له رقم 5 تعريف المتوالية 52. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‎IR‏ يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cus‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني أسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني 9 0) 12+11 13« 14< 16.15 18617 في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cus‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني أسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة
— 4 1 — اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني مكونة من 8 أحماض أمينية على ‎(JY)‏ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني يتم اختيارها من المجموعة ‎All‏ تتكون من: - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 484 إلى الحمض الأميني في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 485 إلى الحمض الأميني في الموضع 492 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏- متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض 0 الأميني من الحمض الأميني في الموضع 486 إلى الحمض الأميني في الموضع 493 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏- متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 487 إلى الحمض الأميني في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏5 - متوالية حمض أميني تتطابق ‎cae‏ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل مع؛ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 488 إلى الحمض الأميني في الموضع 495 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏- متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 489 إلى الحمض الأميني في الموضع 496 له رقم 0 تعريف المتوالية 52؛ و - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 490 إلى الحمض الأميني في الموضع 497 له رقم تعريف المتوالية 52.
— 5 1 — في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط ‎IGF-‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني هيستيدين في الموضع 494 وحمض الأسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني 9 ¢10 11؛ 2 + 14< 15< 16 18.17 19 أو 20 حمض أميني . في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصه.؛ أو شظية ربط - ‎١6]‏ ‏1 يمكن امتصاصه منه؛ ‎Cua‏ تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني هيستيدين في الموضع 494 وحمض الأسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أمينى مكونة من 8 0 أحماض أمينية على الأقل» حيث تشتمل القمة اللاصقة المذكورة على متوالية حمض أميني يتم اختيارها من المجموعة التي تتكون من: - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 487 إلى الحمض الأميني في الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏5 - متوالية حمض أميني تتطابق ‎cae‏ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل مع؛ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 488 إلى الحمض الأميني في الموضع 495 له رقم تعريف المتوالية ‎S52‏ ‏- متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 489 إلى الحمض الأميني في الموضع 496 له رقم 0 تعريف المتوالية 52؛ - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 490 إلى الحمض الأميني في الموضع 497 له رقم تعريف المتوالية 52 و
-6 1 — - متوالية حمض أميني تتطابق مع؛ أو تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل ‎cae‏ متوالية الحمض الأميني من الحمض الأميني في الموضع 491 إلى الحمض الأميني في الموضع 498 له رقم تعريف المتوالية 52. في نموذج محدد ‎AT‏ 4 يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالي بجسم مضاد يمكن امتصاصهك أو شظية ربط ‎G F-‏ 14 يمكن امتصاصه ‎(die‏ حيث يرتبط بمستقبل عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 البشري ‎IGF-‏ ( ‎R)‏ 1 له رقم تعريف المتوالية 52 ودتم امتصاصه عقب ارتباطه ‎oo‏ وحيث لا يرتبط ب 114-]6)| له رقم تعريف المتوالية 82؛ أو حيث تشتمل القمة اللاصقة للجسم المضاد القابل للامتصاص المذكور على الحمض الأميني هيستيدين في الموضع 494 و/أو الحمض الأميني أسبارتيك في الموضع 1 له رقم تعريف المتوالية 52؛ حيث حيث تبلغ النسبة المئوية لامتصاص الجسم المضاد المذكور 0 عقب ارتباط ب ‎IGF-IR‏ 9640 على ‎(IYI‏ 9650 على ‎(IYI‏ 9660 على ‎(JY‏ 9670 على الأقل» أو 9680 على الأقل. يمكن تحديد النسبة المئوية لامتصاص جسم مضاد؛ أو شظية ربط ‎alge‏ ضد منه؛ بأي طريقة معروفة للمهرة في المجال؛ ‎Jie‏ طريقة يتم وصفها في الوصف الحالي. فى نموذج ‎[ARLYN‏ يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالى بجسم مضاد يمكن امتصاصهك أو شظية ربط ‎GF- 1 R‏ يمكن امتصاصه منه؛ وفقا للاختراع» حيث يكون الحمض الأميني المذكور خلاف هيستيدين في 5 الموضع 494 له رقم تعريف المتوالية 52 أرجينين (رقم تعريف المتوالية 82). فى نموذج ‎[ARLYN‏ يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالى بجسم مضاد يمكن امتصاصهك أو شظية ربط ‎GF- 1 R‏ يمكن امتصاصه ‎die‏ وفقا للاختراع» ‎Cun‏ يكون الحمض الأميني المذكور خلاف حمض أسبارتيك في الموضع 491 له رقم تعريف المتوالية 52 هو ألانين (رقم تعريف المتوالية 92). وفقا لأحد النماذ ج يتعلق ‎١‏ لاختراع بجسم مضادء أو شظية ربط مولد ضد ‎(die‏ حيث يرتبط بمستقبل 0 عامل النمو الشبيه بالإنسولين 1 البشري ‎(IGF-IR)‏ وحيث يتم امتصاصه عقب ارتباط ب -6]7 ‎Gus (IR‏ يتم اختيار الجسم المضاد المذكور من: ‎(i‏ جسم مضاد يشتمل على 3 سلاسل ثقيلة ‎CDRs‏ حيث يكون ل ‎CDR-H2‏ متوالية ذات رقم تعريف متوالية 2 و ‎CDR-H3‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية ¢3 و3 سلاسل خفيفة ‎CDRs‏ ‏حيث تكون ‎CDR-L2‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 5؛
— 7 1 — ‎(ii‏ جسم مضاد ينافس للارتباط ب ‎IGF=1R‏ مع الجسم المضاد المبين في النقطة (أ)؛ و ‎(iii‏ جسم مضاد يرتبط بنفس القمة اللاصقة ل ‎IGF-1R‏ كما يحدث للجسم المضاد في النقطة ‎(i)‏ ‏يمكن تحديد المنافسة للارتباط ب 167-11 بواسطة أي من الطرق والتقنيات المعروفة لدى المهرة فى المجال بما فى ذلك؛ على ‎dow‏ المثال وليس الحصرء النشاط الإشعاعى ‎radioactivity‏ ؛ ‎ELISA (Biacore 5‏ تعداد ‎LAY‏ بالتدفق» إلخ» أو وفقا لطريقة طبقا لما يتم وصفه في الوصف الحالى. كما ذُكر في ‎ode‏ وعلى عكس المعرفة العامة؛ يركز الاختراع الحالي على أجسام مضادة ‎IGF~‏ ‏1 محددة يمكن امتصاصها بقدرة عالية عقب الارتباط 2 ‎IGF-1R‏ . طيقا للاستخدام ‎Lia‏ فإن جسم مضاد "يتم امتصاصه" أو ‎"aia‏ (وكلا التعبيران متشابهين) هو جسم مضاد يتم امتصاصه 0 بواسطة (بمعنى 'يدخل في) الخلية عند الارتباط ب ‎IGF-1R‏ على خلية ثديية. وهذا الجسم المضاد مثير للاهتمام كأحد ‎lise‏ مترافق- عقار مناعي؛ ولذا فإنه يعالج أو يوجه السمية الخلوية المرتبطة إلى الخلايا المستهدفة؛ وعلى نحو مفضل خلايا السرطان. بمجرد امتصاصه؛ فإن السمية الخلوية تؤدي إلى وفاة الخلية السرطانية ‎.cancer cell death‏ على نحو ‎canbe‏ تبدي جميع الأجسام المضادة وفقا للاختراع نفس المتواليات ل ‎CDR-H2‏ ‎«CDR-L2 « CDR-H3, 5‏ وتكون ‎CDRs‏ الثلاث الأخرى مختلفة. تبدو هذه الملاحظة متماسكة حيث أنها ‎oda‏ من المعرفة العامة؛ بأنه. بخصوص نوعية ارتباط جسم ‎alias‏ يتم وصف ‎CDR-‏ ‎H3‏ على أنها الأكثر أهمية والأكثر ارتباطا بالتعرف على القمة اللاصقة. يُعتقد أن المفاتيح المهمة للعلاج بالمترافق المناعي هي نوعية مولد الضد المستهدف وامتصاص معقدات بروتين ربط مولد الضد في الخلايا السرطانية. ومن الواضح أن مولدات الضد التي لا تمتص 0 أقل فعالية من مولدات الضد التي تمتص لتوصيل العوامل السامة للخلايا. وعمليات الامتصاص متغيرة عبر مولدات الضد وتعتمد على بارامترات متعددة يمكن أن تؤثر فيها الأجسام المضادة. في المترافق المناعي؛ تدفع السمية الخلوية إلى نشاط سام للخلايا ويقوم الجسم المضاد المستخدم بتوصيل نوعيته إزاء الخلايا السرطانية؛ فضلا عن أحد النواقل للدخول فى الخلايا لمعالجة السمية
— 1 8 —
الخلوية بشكل صحيح. بالتالي» لتحسين المترافق المناعي؛ يمكن أن يبدي الجسم المضاد قدرة عالية
على الامتصاص داخل خلايا السرطان المستهدفة. تختلف فعالية مشاركة الجسم المضاد في عملية
الامتصاص كثيرا باختلاف القمة اللاصقة المستهدفة. يتطلب اختيار الأجسام المضادة القادرة على
الامتصاص بفعالية ‎IGF-IR‏ بيانات تجريبية متنوعة بحيث لا تدرس التقليل المقنن ل ‎IGF-1R‏
فحسب ‎Wily‏ تتتبّع امتصاص الجسم المضاد ‎IGF-IR‏ في الخلايا.
في أحد النماذج؛ يمكن تقييم امتصاص الجسم المضاد وفقا للاختراع بواسطة الفلورة المناعية (التي
يتم تمثيلها فيما بعد في الطلب الحالي) أو أي طريقة أو عملية معروفة للمهرة في المجال المرتبط
بألية الامتصاص.
يتم امتصاص المعقد ‎pun [IGF = IR‏ مضاد بعد تقليل ارتباط الجسم المضاد ب 560 ل ‎IGF-1R‏ ‏0 المذكور؛ تقليل كمية 167-11 عند سطح الخلايا. يمكن حساب هذا الانخفاض بواسطة أي طريقة
معروفة للمهرة في المجال؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ بقعة ويسترن ‎western—blot‏ «
‎(FACS‏ التألق المناعى ‎dimmunofluorescence‏ وما شابه.
‏في أحد النماذج؛ يمكن لهذا الانخفاض؛ وبالتالي ينعكس على الامتصاص» أن يقاس بشكل مفضل
‏بواسطة ‎FACS‏ والتعبير عنه كفرق أو دلتا بين متوسط كتافة الفلورة ‎Mean Fluorescence‏ ‎(MFI) Intensity 5‏ المقاس عند 4 درجة مثوية ب ‎MFI‏ المقاس عند 37 درجة مئوية بعد 4 ساعات
‏من حضانة الجسم المضاد.
‏كمثال غير مقيد؛ يتم تحديد هذه البيانات بناء على ‎MFIs‏ التي تم الحصول عليها بالخلايا غير
‏المعالجة والخلايا المعالجة بالجسم المضاد باستخدام )1( ‎LA‏ سرطان ‎breast cancer (sx‏
‎MCF7 cells‏ بعد 4 ساعات من الحضانة بالجسم المضاد الموصوف هنا و(2) جسم مضاد 0 موسوم ثاتوي ‎secondary antibody labelled‏ ب 81638488. يتم تعريف هذا المتغير بحسابه
‏بواسطة الصيغة التالية: ‎O(MF14°C— MFI37°C)‏
‏يعكس الفرق بين قيم ‎MFIs‏ التقليل المقنن ل 167-114 حيث تكون ‎MFIs‏ متناسبة مع ‎IGF-1R‏
‏الذي تم التعبير عنه عند سطح الخلايا.
— 1 9 —
في سمة مميزة؛ تتكون الأجسام المضادة؛ أو أي شظية ربط مولد ضد منهاء من أجسام مضادة
أحادية النسيلة تنبه ( ‎O(MFI4°C— MFI37°C‏ على 100577 بقيمة 280 على الأقل؛ على نحو
مفضل بقيمة 400 على الأقل.
وبمزيد من التفاصيل» يمكن قياس قيمة دلتا المذكورة أعلاه وفقا للعملية؛ التى يجب النظر إليها كمثال
توضيحي غير حصري:
أ) معالجة وحضانة خلايا الورم محل الاهتمام بالجسم المضاد وفقا للاختراع في وسط استنبات كامل
بارد (4 درجة مثوية) أو دافئ (37 درجة مثوية) ¢
ب) معالجة الخلايا المعالّجة بالخطوة )1( وبالتوازي ‎WAY‏ غير المعالجة بجسم مضاد ثاني؛
‎(z‏ قياس ‎Jina) MFI‏ لكمية ‎IGF- 1 R‏ الموجودة عند السطح) للخلايا المعالجة وغير المعالجة 0 1 بجسم ‎Alas‏ ثانويي موسوم قادر على ‎f‏ لارتباط = ‎I GF- 1 R‏ الجسم المضاد للاختراع؛ و
‏د) قياس الدلتا كطرح من ‎MFI‏ الذي تم الحصول عليه بالخلايا المعالّجة من ‎MFI‏ الذي تم الحصول
‏عليه بالخلايا غير المعالجة من هذه الدلتا ‎(MFI‏ يمكن تحديد النسبة المئوية للامتصاص كما يلى:
‎100x(MFI 4°C-MFI37°C) / MFI 4°C
‏تبدي الأجسام المضادة؛ أو شظية ربط مولد ضد منهاء وفقا للاختراع على 1/0577 نسبة مئوية 5 للامتصاص تتراوح من 9670 إلى 9690؛ وفضل من 9675 إلى 9687.
‏تستند ميزة معينة للأجسا المضادة هنا على نسبة امتصاصها.
‏من المعروف بصفة عامة أنه؛ بالنسبة لمترافق مناعي؛ من المرغوب أن تبدي الأجسام المضادة
‏المستخدمة معدلا عاليا من الامتصاص؛ على نحو مفضل خلال 24 ساعة من إدارة الجسم المضاد
‏في جسم الكائن الحي؛ وعلى نحو مفضل أكثر في خلال 12 ساعة؛ وعلى نحو مفضل أكثر على الإطلاق خلال 6 ساعات.
‏في الاختراع الحالي؛ يتم التعبير عن معدل الامتصاص»؛ الذي يُشار إليه أيضا باسم نقص جسم
‏مضاد مرتبط عند سطح الخلية أو انحلال الجسم المضاد عند سطح ‎Adal)‏ في صورة 11/2 (عمر
النصف) وبناظر الزمن الضروري للحصول على نقص بنسبة 9650 من ‎AMFI‏ (سيتم فهم هذه السمة بوضوح فيما يتعلق بالأمثلة التالية). هناك ‎Be‏ معينة هي أن الأجسام المضادة وفقا للاختراع تتضمن 11/2 يتراوح من 5 إلى 25 دقيقة؛ وُفضل من 10 إلى 20 دقيقة.
يتعلق نموذج معين للاختراع بجسم مضاد يشتمل على ثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 1 2 و3 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 54 و6. هناك نموذج عبارة عن جسم مضاد؛ أو شظية ربط مولد ضد ‎(die‏ حيث يشتمل على الثلاث ‎CDRS‏ ‏ثقيلة السلسلة التي تشتمل على أو تتكون من المتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 1؛ 2 و3؛ أو
0 أي متوالية تبدي 9680 على ‎(J)‏ على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 9698 من التطابق مع أرقام تعريف المتواليات 1؛ 2 و3؛ والثلاث ‎CDRs‏ خفيفة السلسلة التي تشتمل على أو تتكون من المتواليات ذات أرقام تعريف المتواليات 4 5 و6؛ أو أي متوالية تبدي على الأقل 9680؛ على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 9698 من التطابق مع أرقام تعريف المتواليات 4؛ 5 و6. في أحد النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد؛ أو أي شظية ربط مولد ضد منه؛ على الثلاث ‎CDRs‏
5 ثيلة السلسلة التي تشتمل على أو تتكون من المتواليات ذات أرقام تعريف المتواليات 1؛ 2 و3؛ والثلاث ‎CDRs‏ خفيفة السلسلة التى تشتمل على أو تتكون من المتواليات ذات أرقام تعريف المتواليات 4 5و6. يشير مصطلح مناطق ‎CDR‏ أو ‎CDRs‏ إلى المناطق مفرطة التغير للسلاسل الثقيلة والخفيفة للجلوبيولينات المناعية طبقا لتحديدها بواسطة ‎AMGT‏
0 لقد تم تعريف الترقيم الفريد ل ‎IMGT‏ لمقارنة النطاقات المتغيرة مهما كان مستقبل المولد؛ نمط السلسلة؛ أو الأنواع [انظر / )1997( 509 ,18 ‎Lefranc M.-P., Immunology Today‏ ‎Lefranc M.-P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999) / Lefranc, M.-P.,‏ ‎Thouvenin—‏ .يا ‎Pommié, C., Ruiz, M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong,‏
‎[Contet, V. and Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)‏ في الترقيم الفريد ‎(IMGT‏ يكون للأحماض الأمينية المحافظة نفس الموضع دائماء على سبيل المثال السيستيين ‎«(1st-CYS) 23 0‏ تريبتوفان ‎((CONSERVED-TRP) 41 tryptophan‏ الحمض الأميني غير الآلف للماء ‎hydrophobic amino acid‏ 89؛ سيستيين 104 (200-075)؛ فينيل ألانين ‎phenylalanine‏ أو ترببتوفان 118 ‎J-PHE)‏ أو ‎.(J-TRP‏ يقدم ترقيم ‎IMGT‏ ‏الفريد تخطيط قياسي لمناطق الهيكل ‎:FRIZIMGT)‏ المواضع 1 إلى 26 ‎:FR2-IMGT‏ 39 إلى 55 ‎:FR3-IMGT‏ 66إلى 104 و1/61١-44ا:‏ 118 إلى 128( والمناطق المحددة لمناطق الاستكمال: ‎:CDRI-IMGT‏ 27 إلى 38 ‎:CDR2-IMGT‏ 56 إلى ‎CDR3-465‏ ‎:IMGT‏ 105 إلى 117.. وبينما تشغل الفواصل المواضع غير المشغولة؛ فإن الأطوال -608 ‎IMGT 0‏ (المبينة بين الأقواس والمفصولة بالنقاط على سبيل المثال [8.8.13]) تشكل معلومات مهمة. يتم استخدام الترقيم الفريد ‎IMGT‏ في تمثيلات رسومية ثنائية الأبعاد ؛ تُدعى ‎IMGT‏ ‎Colliers de Perles [Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-‏ ‎Kaas, ©. and Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-‏ / )2002( 883 ])2007( 30« وفي صورة بنيات ثلاثية الأبعاد في ‎IMGT/3Dstructure-DB [Kaas, Q.,‏ ‎Ruiz, M. and Lefranc, M.-P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. 5‏ ‎Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)‏ يجب إدراك أن؛ بدون وصف مناقض في الوصف الحالي؛ المناطق المحددة لمناطق الاستكمال أو ‎CDRs‏ تعني أن المناطق مفرطة التغير للسلاسل الثقيلة والخفيفة للجلوبيولينات المناعية
IMGT numbering system ‏طبقا لما هو محدد وفقا لنظام ترقيم‎ immunoglobulins
Kabat et al., ( Kabat ‏وفقا لنظام ترقيم كابات‎ CDRs ‏برغم ذلك؛ يمكن أيضا تحديد‎ 0
Sequences of proteins of immunological interest, Sth Ed., U.S. Department ‏هناك ثلاث‎ (of Health and Human Services, NIH, 1991, and later editions
CDR ‏خفيفة السلسلة. وهناء يتم استخدام المصطلحين‎ CDRs ‏ثقيلة السلسلة وثلاث‎ CDRs ‏أو حتى كل؛‎ «ST ‏للإشارة؛. حسب الحالة؛ إلى كل المناطق التي تحتوي على واحدة أو‎ CDRs ‏المناطق التي تحتوي على غالبية وحدات الحمض الأميني البنائية المسؤولة عن ألفة ربط الجسم‎ 5
دود المضاد بمولد الضد أو القمة اللاصقة التي يتعرف عليها. ولتبسيط قراءة الطلب الحالي؛ لا يتم تحديد ‎CDRs‏ وفقا لترقيم كابات. برغم ذلك؛ سيكون من الواضح للمهرة في المجال؛ الذين يستخدمون تعريف ‎CDRS‏ وفقا لترقيم ‎(IMGT‏ أن يعرفوا ‎CDRS‏ وفقا لترقيم كابات ‎Kabat‏ ‏في حالة الاختراع ‎Jad)‏ فإن "نسبة التطابق المئوية” بين اثنين من متواليات الحمض النووي أو الأميني تعني نسبة النوكليوتيدات أو وحدات الحمض الأميني البنائية المتماثلة بين المتواليتين اللتين يتم مقارنتهما ببعضهما بعضاء والتي يتم الحصول عليها بعد المحاذاة المثالية؛ وتكون هذه النسبة ‎sid‏ إحصائية تماما ويتم توزيع الفرق بين المتواليتين عشوائيا على امتداد طولهما. يتم إجراء المقارنة بين اثنين من متواليات الحمض النووي أو الأميني بشكل تقليدي بمقارنة المتواليات بعد محاذاتها بشكل مثالي؛ ويمكن إجراء هذه المقارنة المذكورة بالمقطع أو باستخدام 'نافذة المحاذاة". 0 يمكن ‎shal‏ المحاذاة المثالية للمتواليات لمقارنتهاء بالإضافة إلى المقارنة ‎call‏ بواسطة خوارزم التجانس المحلي ل ]48:443 ‎(Neddleman and Wunsch (1970) [J.
Mol.
Biol.‏ بواسطة طرق بحث التشابه ل ‎Pearson and Lipman (1988) [Proc.
Natl.
Acad.
Sci.
USA‏ ]85:2444 أو بواسطة برنامج الكمبيوتر الذي يستخدم هذه الخوارزميات ‎(BESTFIT (GAP)‏ ‎FASTA‏ و51م !1 في حزمة برامج ‎«Wisconsin Genetics Software Package‏ ‎Science Dr. (Genetics Computer Group 5‏ 75ي ‎«WI (Madison‏ أو بواسطة برامج المقارنة ‎BLAST NR‏ أو © ‎(BLAST‏ . إن نسبة التطابق المئوية بين متوالياتي حمض نووي أو أميني ‎nucleic acid or amino acid‏ 85 يتم تحديدها بمقارنة المتواليتين المتحاذيتين بشكل مثالي حيث يمكن أن تتضمن متوالية الحمض النووي أو الأميني صيغ إضافة أو حذف مقارنة بالمتوالية المرجعية للمحاذاة المثالية بين 0 المتواليتين. يتم حساب النسبة المئوية للتطابق عن طريق تحديد رقم الموضع الذي يكون فيه نوكليوتيد الحمض الأميني أو الوحدة البنائية له متماثلا بين المتواليتين» على نحو مفضل بين المتواليتين الكاملتين» بقسمة رقم المواضع المتماثلة على إجمالي رقم المواضع في نافذة المحاذاة وضرب النتيجة في 100 للحصول على نسبة التطابق المئوية بين المتواليتين.
على سبيل المثال» فإن برنامج بلاست ‎BLAST‏ 'متواليات بلاست 2" ) ‎Tatusova et al., “Blast‏ ‎sequences - a new tool for comparing protein and nucleotide sequences”,‏ 2 ‎(FEMS Microbiol.,, 1999, Lett. 174:247-250‏ متوفرة على الموقع ‎chitp://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html‏ ويمكن استخدامها بالبارامترات الافتراضية (وخصوصا بارامترات ‎Ade"‏ فاصل مفتوح": 5 ‘ و"عدد امتداد فاصل" : 2 والمصفوفة ‎matrix‏ ‏المختارة هي على سبيل المثال مصفوفة ”62 ‎“BLOSUM‏ المقترحة من ‎JB‏ البرنامج)؛ يتم حساب النسبة المئوية للتطابق بين المتواليتين المراد مقارنتهما بواسطة البرنامج مباشرة. بالنسبة لمتوالية الحمض الأميني التي تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل؛ على نحو مفضل %85 9690 9695 أو 9698 مع متوالية حمض أميني مرجعية؛ تتضمن الأمثلة المفضلة تلك 0 التى تحتوي على المتوالية المرجعية؛ تعديلات معينة؛ وخصوصا صيغة حذف أو إضافة أو استبدال بحمض أمينى واحد على الأقل؛ اقتضاب أو امتداد. فى حالة استبدال واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية المحافظة أو غير المحافظة؛ يتم تفضيل استبدالات يتم فيها استبدال الأحماض الأمينية التي بها استبدال بالأحماض الأمينية "المكافئة". وهناء يُشار إلى التعبير "الأحماض الأمينية المكافئة" للإشارة إلى أي من الأحماض الأمينية التي من المرجح أن يكون بها استبدال بواحد من الأحماض 5 الأمينية البنائية بدون تعديل الأنشطة الحيوية للأجسام المضادة المناظرة والأمثلة المحددة المبينة أدناه رغم ذلك . يمكن تحديد الأحماض الأمينية المكافئة على تجانسها ‎Sl‏ مع الأحماض الأمينية التي يتم استبدالها أو على نتائج الاختبارات المقارنة للنشاط الحيوي بين بروتينات ربط مولد الضد المتنوعة المرجح أن يتم توليدها. وكمثال غير مقيد؛ يبين الجدول 1 أدناه الاستبدالات المحتملة التي من 0 المرجح تنفيذها بدون أن تؤدي إلى تعديل كبير في النشاط الحيوي لبروتين ربط مولد الضد المعدل المناظر؛ ومن الممكن إجراء استبدالات عكسية بشكل طبيي في ظل الظروف نفسها. الجدول 1 الوحدة البنائية الأصلية استبدال (استبدالات)
‎Phe, Trp Tyr (Y)‏ هناك سمة معينة للاختراع هي أن الجسم ‎oliaall‏ أو أي شظية ربط مولد ضد منه؛ لا ترتبط بمستقبل الإنسولين ‎(IR) Insulin receptor‏ وهذه السمة محل اهتمام حيث أن الجسم المضاد الموصوفة هنا لن يكون له أي تأثير سلبي على ‎le IR‏ يعني تأيض الإنسولين. في أحد النماذج» هناك ‎daw‏ مفيدة ‎(gal‏ أيضا للجسم المضاد وفقا للاختراع هي أنه قادر على الارتباط ب ‎IGF-IR‏ البشري فضلا عن ‎IGF=1R‏ من نسناس» وبشكل أكثر تحديدا 167-11 من نسناس الرياح. وهذه السمة محل اهتمام أيضا حيث أنها ستسهل التجارب على السمية والتجارب السريرية. في أحد النماذج؛ يتكون الجسم المضاد ‎Wy‏ للاختراع الحالي من جسم مضاد أحادي النسيلة. يشير مصطلح "جسم مضاد أحادي النسيلة' أو "1/85" طبقا لاستخدامه هنا إلى جسم مضاد تم 0 الحصول عليه من مجموعة من الأجسام المضادة المتجانسة بشكل كبير؛ بمعنى أكثر تحديد؛ الأجسام المضادة للمجموعة تكون متماثلة باستثناء الطفرات الطبيعية المحتملة التى يمكن أن توجد بكميات ضئيلة. وتتسم الأجسام المضادة أحادية النسيلة بنوعية عالية؛ حيث يتم توجيهها إزاء قمة لاصقة مفردة. يمكن أن يتم إنتاج مثل تلك الأجسام المضادة أحادية النسيلة بواسطة نسيلة مفردة من الخلايا البائية أو ورم هجين. يمكن ‎Lad‏ أن تكون الأجسام المضادة أحادية النسيلة ناتجة عن ‎sage‏ الاتحاد 5 الجيني؛ بمعنى أكثر تحديدا يتم إنتاجها بواسطة معالجة البروتين وراثيا. يمكن أيضا عزل الأجسام المضادة أحادية النسيلة من مجموعات جسم مضاد للخلايا الملتهمة. بالإضافة إلى ذلك على النتقيض من مستحضرات الأجسام المضادة أحادية النسيلة التى تتضمن عادة أجساما مضادة متنوعة موجهة إزاء العوامل المحيّدة المتنوعة؛ أو القمم اللاصقة؛ يتم توجيه كل جسم مضاد أحادي النسيلة إزاء قمة لاصقة مفردة من الجسم المضاد. يتعلق الاختراع بجسم مضاد معزول أو تم الحصول عليه 0 بالتنقية من مصادر طبيعية أو تم الحصول عليه بإعادة الاتحاد الجيني أو التصنيع الكيميائي ‎chemical synthesis‏ .
في أحد النماذج؛ يتضمن الجسم المضاد أحادي النسيلة هنا جسما مضادا فأريا وخيمريا ‎chimeric‏ ‏ومتوافقا مع البشر؛ طبقا لما هو مبين ‎lad‏ يلي. يمكن الحصول على الجسم المضاد من ورم هجين من منشاً فأري ممتلئ موجود بالمجموعة الفرنسية للمستنبتات الخاصة بالكائنات الحية الدقيقة ‎(CNCM, Pasteur Institute, Paris, France)‏ ‘ يتم الحصول على الورم الهجين المذكور بدمج خلايا طحالية ‎splenocytes‏ /ليمفاوية 00005 من فتران محصنة مناعيا ‎Balb/C‏ وخلايا سلالات خلايا الورم التنخاعي ‎2/O-Ag 14 myeloma‏ م5. في أحد النماذج؛ يتكون الجسم المضاد للاختراع من جسم مضاد ناتج عن عودة الارتباط الجيني. يشير مصطلح "الجسم المضاد الناتج عن ‎sage‏ الاتحاد الجيني" إلى جسم مضاد ناجم عن التعبير 0 عن الحمض النووي الصبغي ‎(DNA) Deoxyribonucleic acid‏ ناتج عن عودة الاتحاد الجيني في الخلايا الحية. يتم الحصول على جسم مضاد ناتج عن عودة الاتحاد الجيني عن طريق استخدام الطرق المختبرية لعودة الاتحاد الجيني؛ المعروفة لدى المهرة بالمجال؛ بما يؤدي لإنشاء متواليات ‎DNA‏ حيث لن توجد فى الكائنات الحية الحيوية. في أحد النماذج؛ يتكون الجسم المضاد وفقا للاختراع من جسم مضاد تم تخليقه كيميائيا. 5 في أحد النماذج؛ يتكون الجسم المضاد ‎IGF-1R‏ وفقا للاختراع من جسم مضاد فأري؛ يُشار ‎ad]‏ ‏عندئذ باسم ‎m‏ [اسم الجسم المضاد] . في أحد النماذج؛ يتكون الجسم المضاد ‎IGF-IR‏ من جسم مضاد خيمري؛ ‎HUE‏ إليه عندئذ باسم © [اسم الجسم المضاد]. في أحد النماذج؛ يتكون الجسم المضاد ‎IGF-IR‏ من جسم مضاد متوافق مع البشرء يُشار إليه عندئذ باسم ‎hz‏ [اسم الجسم المضاد] . لتجنب الشكوك؛ في الوصف التالي؛ يكون التعبيران "جسم مضاد 67-11 ' و'[اسم الجسم المضاد" متشابهين ويتضمنان (بدون وصف مناقض) الفأر؛ النسخ الخيمرية والمتوافقة مع البشر من الجسم
7ه المضاد ‎IGF-1R‏ المذكور و'[اسم الجسم المضاد]' المذكور. وعند الضرورة؛ يتم استخدام السابقة اللغوية ‎mM‏ (فأري)؛ © (خيمري 01016016)؛ أو ‎hz‏ (متوافق مع البشر). في أحد النماذج؛ يتم اختيار الجسم المضاد وفقا للاختراع من: أ) جسم مضاد يشتمل على ثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9 5 و11؛ ب) جسم مضاد يشتمل على ثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7؛ 42 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 10 5 و11؛ ج) جسم مضاد يشتمل على ثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7؛ 2 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9 5 و12؛ و ‎(d 0‏ جسم مضاد يشتمل على ثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 8؛ 2 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9< 5 و11. للتوضيح؛ يوضح الجدول التالي 2 متواليات ‎(CDR‏ التي يتم تعريفها وفقا ل ‎(IMGT‏ للأجسام المضادة المفضلة. الجدول 2 ‎Rs Ma Wis
I ‏ا‎ ‎I ‏شل ا‎ ‏ال‎ ‎I ‏نسلا‎ I
و لا ‎cc‏ ا ‎a‏ ‎208F2‏ ‏اد مسد ‎A‏ ‎I‏ ‎-٠‏ ‏- ‎212A11‏ ‎I‏ ‎I‏ ‎-٠‏ ‎ss‏
219D6
سيتضح للمهرة في المجال أن أي توليفة من ستة ‎CDRS‏ طبقا لما هو مبين أعلاه يجب اعتبارها
جزء من الاختراع الحالي.
طبقا لما يمكن ملاحظته في هذا الجدول 2؛ فإن كل الأجسام المضادة الموصوفة في الجدول لها
نفس المتوالية ل ‎«CDR-L2 5 «CDR-H3 (CDR-H2‏ وهذه الخاصية محل اهتمام خاص طبقا
لما هو مبين أعلاه .
تتعلق سمة محددة بجسم مضاد ‎(m)‏ فأري 3 أو شظيات ربط مولد ضد منه؛ تتميز بأن الجسم المضاد
المذكور يشتمل أيضا على مناطق ثابتة خفيفة السلسلة وثقيلة السلسلة مشتقة من جسم مضاد من
نوع متجانس مع الفأر؛ خصوصا الإنسان.
تتعلق سمة محددة بجسم مضاد )0( خيمري 3 أو شظيات ربط مولد ضد منه؛ تتميز بأن الجسم 0 المضاد المذكور يشتمل أيضا على مناطق ثابتة خفيفة السلسلة وثقيلة السلسلة مشتقة من جسم مضاد
من نوع متجانس مع ‎«Jal‏ خصوصا الإنسان.
في أحد نماذج الاختراع؛ يتكون الجسم المضاد من جسم مضاد خيمري.
أي جسم مضاد خيمري هو جسم مضاد يحتوي على منطقة متغيرة طبيعية (سلسلة خفيفة وسلسلة ثقيلة) مشتقة من جسم مضاد من أي نوع معين في توليفة مع المناطق الثابتة ذات السلسلة الخفيفة والثقيلة لجسم مضاد من نوع متجانس مع النوع المعين المذكور. يمكن تحضير الأجسام المضادة؛ أو شظيات خيمرية منهاء باستخدام تقنيات الأنواع الجينية الناتجة عن عودة الاتحاد الجيني. على سبيل المثال؛ يمكن أن يتم إنتاج الجسم المضاد الخيمري عن ‎Gob‏ ‎oli)‏ نسيلة من ‎DNA‏ الناتج عن عودة الاتحاد الجيني تحتوي على متوالية تعزيز ومتوالية تشفير المنطقة المتغيرة لجسم مضاد أحادي النسيلة غير بشري للاختراع» خصوصا من فأرء ومتوالية تشفير المنطقة الثابتة للجسم المضاد البشري. يمكن لجسم مضاد خيمري وفقا للاختراع تم تشفيره بواسطة مثل ذلك الجين الناتج عن عودة الاتحاد الجينى» على سبيل المثال ؛ خيمري فأري -بشري»؛ بحيث يتم 0 تحديد نوعية هذا الجسم المضاد بواسطة المنطقة المتغيرة المشتقة من ‎DNA‏ الفأري وتحديد النمط المتماثل له بواسطة المنطقة الثابتة المشتقة من ‎DNA‏ البشري. في نموذ ‎z‏ مفضل ولكن غير حصري يتم اختيار الجسم المضاد ‎ad‏ للاختراع ‎HEY‏ ‏أ) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 13 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 13 والثلاث ‎CDRS‏ ‏5 خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9< 5 و11؛ ب) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 14 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 14 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 0 11,55 ‎(z 20‏ جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 15 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 15 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9 و2]؛
-3 1 —
2( جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 16 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 16 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 5411559
ه) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون منء نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 17 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 17 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 12559 يشير مصطلح 'تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على ا لأقل على نحو مفضل 9085 9690 %95
0 أو 98مع رقم تعريف المتوالية 13 إلى 17" تعيين؛ بالترتيب؛ المتواليات التي تبدي الثلاث ‎CDRs‏ ‏ثقيلة السلسلة ذات أرقام التعريف 1 و2 و3؛ وبالإضافة إلى ذلك؛ تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على ‎(BY)‏ على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 98مع المتوالية الكاملة للمتواليات ذات أرقام التعريف 13 إلى 17 خارج المتواليات التي تناظر ‎CDRs‏ (بمعنى أكثر تحديدا؛ رقم تعريف المتوالية 1 و3)»؛ حيث أنه من المقرر للمصطلح "خارج المتواليات المناظرة ل ‎"CDRs‏ "استثناء المتواليات
5 التى تناظر 0085". في نموذ ‎AT z‏ مفضل ولكن غير حصري 13 يتم اختيار الجسم المضاد ‎ad‏ للاختراع ‎HEY‏ ‏أ) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 18 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 18 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3؛
0 0( جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 19 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 19 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3؛
ج) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 20 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 20 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3؛ د) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 21 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 21 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 8؛ 2 و3؛ و ه) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 22 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 22 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3. يشير مصطلح 'تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على الأقل على نحو مفضل 9085 9690 9695 أو 98مع رقم تعريف المتوالية 18 إلى 22" تعيين؛ بالترتيب؛ المتواليات التي تبدي الثلاث ‎CDRs‏ ‏خفيفة السلسلة ذات أرقام التعريف 4 و5 و6؛ وبالإضافة إلى ذلك؛ تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على ‎BY)‏ على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 98 مع المتوالية الكاملة للمتواليات ذات أرقام التعريف 18 إلى 22 خارج المتواليات التي تناظر ‎CDRs‏ (بمعنى أكثر تحديدا؛ رقم تعريف 5 المتوالية 18 إلى 22). يتعلق نموذج للاختراع جسم مضاد يتم اختياره من: أ) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 13 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 13 ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 18 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 980 9085 9690 9695 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم ¢18 ب) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 14 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية
رقم 14 ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 19 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 980 9085 9690 9695 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم ¢19
ج) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 15 أو
أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية
رقم 15 ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 20 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 980 9085 9690 9695 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 20؛
د) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 16 أو
أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية
رقم 16 ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 21 أو أي متوالية تبدي
نسبة تطابق تبلغ 980 9085 9690 9695 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 21 و
ه) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 17 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 17 ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 22 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 980 9085 9690 9695 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 22
5 يمكن أيضا تحديد خصائص الأجسام المضادة الخيمرية هنا بواسطة النطاق الثابت؛ وبشكل أكثر تحديدا؛ يمكن اختيار وتعيين الأجسام المضادة الخيمرية المذكورة على سبيل المثال؛ وليس الحصرء ‎«IgG2 «IgGl‏ 63وا ‎(IgM‏ هواء ‎IgD‏ أو وا. على نحو مفضل ‎«JST‏ في سياق الاختراع الحالى؛ تكون الأجسام المضادة الخيمرية المذكورة عبارة عن 0961| أو 964ا. يتعلق نموذج للاختراع بجسم مضاد خيمري يشتمل على نطاقات متغيرة ‎VH‏ وا/ا طبقا لما هو مبين
0 أعلاه بصيغة ‎IGG]‏ وعلى نحو مفضل ‎«JST‏ يشتمل الجسم المضاد الخيمري المذكور على نطاق ثابت ل ‎VH‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 43 ونطاق كابا ل ‎VL‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 45.
يتعلق نموذج للاختراع بجسم مضاد خيمري يشتمل على نطاقات متغيرة ‎VL 9 VH‏ طبقا لما هو مبين أعلاه بصيغة 964ا. وعلى نحو مفضل أكثر؛ يشتمل الجسم المضاد الخيمري المذكور على نطاق ثابت ل ‎VH‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 44 ونطاق كابا ل ‎VL‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 45. في نموذ ‎AT z‏ مفضل ولكن غير حصري 2 يتم اختيار الجسم المضاد وفقا للاختراع ‎HEY‏
أ) جسم مضاد يشتمل ‎ole‏ أو يتكون ‎ce‏ سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 23 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 23 وسلسلة خفيفة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 28 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 97680 685 9690 %95 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 26
0 _ب) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ سلسلة ‎ALE‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 24 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 24 وسلسلة خفيفة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 29 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 97680 685 9690 %95 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 9
ج) جسم مضاد يشتمل على أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 25 أو
5 أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على ‎BY)‏ مع المتوالية رقم 25 وسلسلة خفيفة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 30 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 97680 685 9690 %95 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 30؛
د) جسم مضاد يشتمل على أو يتكون من؛ سلسلة ‎AL‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 26 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية
0 رقم 26 وسلسلة خفيفة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 0231 أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 97680 685 9690 %95 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 31« و
ه) جسم مضاد يشتمل على» أو يتكون من؛ سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 27 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية
رقم 27 وسلسلة خفيفة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 32 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 0+ 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع 32 لمزيد من الوضوح؛ يوضح الجدول التالي 3 متواليات ل ‎VH‏ والاء بالترتيب؛ للأجسام المضادة الخيمرية المفضلة. الجدول 3 السلسلة الثقيلة السلسلة الخفيفة رقم تعريف د م لماص ممست الل ‎I‏ ‏ ‏ل لما ‎I‏ ‎El‏ اا لا مستا ل ‎I‏ ‏ل لما ‎I‏ ‎Kid‏ ا سكا ا ‎I‏ ‏لخ ‎I‏
— 6 3 — هناك ‎daw‏ أخرى محددة للاختراع الحالي تتعلق بجسم مضاد متوافق مع البشرء أو شظية ربط مولد ضد ‎Cus (die‏ تتميز بأن المناطق الثابتة للسلسلة الخفيفة والسلسلة الثقيلة المشتقة من الجسم المضاد البشري هىء بالترتيب؛ المنطقة لامدا أو ‎LIS‏ والمنطقة جاما-1؛ جاما-2 أو جاما-4. في أحد النماذج وفقا للاختراع؛ يتكون الجسم المضاد من جسم مضاد متوافق مع البشر.
وتشير "الأجسام المضادة” المتوافقة مع البشر إلى جسم مضاد يحتوي على مناطق ‎CDR‏ مشتقة من جسم مضاد من ‎Lite‏ غير بشري؛ وبتم اشتقاق الأجزاء الأخرى لجزيء الجسم المضاد من واحد (أو ‎(ST‏ من الأجسام المضادة البشرية. بالإضافة إلى ذلك؛ يمكن تعديل بعض الوحدات البنائية لمقطع هيكلي (يُدعى الهيكل ‎(FR‏ للحفاظ على ألفة الارتباط. يمكن تحضير الأجسام المضادة أو الشظيات المتوافقة مع البشر بواسطة التقنيات المعروفة للمهرة
0 في المجال. يتم تفضيل مثل تلك الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر لاستخدامها في طرق تتضمن تشخيص في المختبر أو معالجة وقائية و/أو علاجية في جسم الكائن الحي. يمكن ذكر التقنيات الأخرى المتوافقة مع البشرء المعروفة أيضا للمهرة في المجال» ‎Jie‏ تقنية "ترقيع ‎grafting‏ ‎"CDR‏ الموصوفة بواسطة ‎PDL‏ فى البراءات الاوروبية والامريكية التالية 0451216؛
0682040« 0939127« 0566647 أو 5.530.101 ¢6.180.370 5.585.089 و 1 . يمكن أيضا ذكر البراءات الأمريكية التالية: 515.639.641 ¢6.054.297 2 5.877.293 وكنموذج محدد للاختراع»؛ وسيتم شرحه بمزيد من التفصيل في الأمثلة التالية؛ يتم هنا وصف جسم مضاد يتكون من ‎.hz208F2‏ يمكن ‎Lad‏ تطبيق التوافق مع البشر على أجسام مضادة أخرى للاختراع الحالي. في نموذج مفضل؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع ‎all‏ على نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH)‏ يتضمن: ‎CDR-H2 (CDR-H1 (i‏ و ‎CDR-H3‏ لمتواليات لها أرقام التعريف 7( 2 و3؛ بالترتيب؛ ‎FR3 5 FR2 581 (ii 0‏ المشتقة من ‎ADL‏ البشرية ‎IGHV1-46%01‏ (رقم تعريف المتوالية 86مى”ئ ‎FRY (ii‏ المشتقة من السلالة البشرية ‎IGHI4*01‏ (رقم تعريف المتوالية 48). في نموذج مفضل؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع الحالي على نطاق متغير خفيف السلسلة ‎Cus (VL)‏ يتضمن: ‎CDR-L3 5; CDR-L2 «CDR-L1 (i 5‏ لمتواليات لها أرقام التعريف 9؛ 5 و11, بالترتيب؛ ‎FR3 5 FR2 (FRY (ii‏ المشتقة من السلالة البشرية ‎IGKVI=-39%01‏ (رقم تعريف المتوالية 117 ‎FR4 (Gi‏ المشتقة من ‎ADL‏ البشرية ‎IGKI4*01‏ (رقم تعريف المتوالية 49). في نموذج مفضل ‎(Sly‏ غير حصري» للاختراع؛ يشتمل الجسم المضاد على:
أ) سلسلة ثقيلة تتضمن ‎CDR-H2 (CDR-H1‏ و ‎CDR-H3‏ لمتواليات لها أرقام التعريف 7 2 و3؛ بالترتيب» و ‎FR3 3 FR2 (FRI‏ المشتقة من السلالة البشرية ‎IGHVI=46*01‏ (رقم تعريف المتوالية 46(¢ 5 ‎FRE‏ المشتقة من السلالة البشرية ‎IGHI4*01‏ (رقم تعريف المتوالية 48)؛ و ب) سلسلة خفيفة تتضمن ‎CDR-L2 (CDR-L1‏ و ‎CDR-L3‏ لمتواليات لها أرقام التعريف 9؛ 5 و11 بالترتيب» 5 ‎(FR1‏ 42 و43 المشتقة من السلالة البشرية ‎IGKV1-39*01‏ (رقم تعريف المتوالية 47)» 5 ‎FRA‏ المشتقة من السلالة البشرية 4*01ل16/46 (رقم تعريف المتوالية 49). في ‎al‏ النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع على نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎heavy‏ ‎(VH) chain variable domain‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 33 ونطاق متغير خفيف السلسلة ‎(VL)light chain variable domain‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 35. سيتم 0 تسمية الجسم المضاد المتوافق مع البشر المذكور ‎lad‏ يلي باسم 1220812 ‎55a)‏ متغيرة” أو “الصورة المتغيرة” 1). في أحد النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع الحالي على نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH)‏ ‏ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 33 حيث تشتمل المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 33 على طفرة تقهقرية 1 على الأقل يتم اختيارها من الوحدات البنائية 20 34 35 38 48 50 و59 ‎TT 76 4 720706261 5‏ 79 954582 يُقصد بالمصطلحات “طفرة تقهقرية” الإشارة إلى طفرة أو استبدال الوحدة البنائية البشرية الموجودة فى السلالة الجرثومية بالوحدة البنائية المناظرة الموجودة مبدئيا فى المتوالية الفأرية. في أحد النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع الحالي على نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH)‏ ‏ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 33 حيث تشتمل المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 33 على 2؛ 0 3 4 5 6» 7 8» 9 10 11 12 13 14 15 16 أو 7 طفرة تقهقرية يتم اختيارها من الوحدات البنائية 20 34 35« 38« 48« 50« 59« 61« 62 00 2 74 06 ‎TT‏ ‏9 95. لمزيد من الوضوح؛ يوضح الجدول التالي 4 الطفرات التقهقرية المفضلة.
الجدول 4 رقم الحمض |20 34 35 |38 48 |50 |59 |61 الأميني تر إلا ا * » ء " » 0 خض لا ا "8 " 1ق 4 رقم 62 |70 +72 |74 +76 ‎TI1|‏ +79 |82 95 الحمض الأميني من ‎Y| E| V| S| T| 7 M‏ في أحد النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع الحالي على نطاق متغير خفيف السلسلة ‎(VL)‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 35 حيث تشتمل المتوالية المذكورة ذات رقم تعريف المتوالية 35 على طفرة تقهقرية 1 على الأقل يتم اختيارها من الوحدات البنائية 22 53 55؛ 65« 71 72 77و87. في أحد النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع الحالي على نطاق متغير خفيف السلسلة ‎(VL)‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 35 حيث تشتمل المتوالية المذكورة ذات رقم تعريف المتوالية 35 على 65432 7 أو 8 طفرة تقهقرية يتم اختيارها من الوحدات البنائية 22 0 5553 65 71 72 87577 في أحد النماذج؛ يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع الحالي على:
أ) نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH)‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 33 حيث تشتمل المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 33 على طفرة تقهقرية 1 على الأقل يتم اختيارها من الوحدات ‎dsb)‏ 20؛ ‎TT 76 74 72 70 «62 «61 59 50 48 38 35 34‏ 79 82 و95؛ و ب) نطاق متغير خفيف السلسلة ‎(VL)‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 35« حيث تشتمل المتوالية المذكورة ذات رقم تعريف المتوالية 35 على طفرة تقهقرية 1 على الأقل يتم اختيارها من الوحدات البنائية 22( 53 55 65« 71 72 77 و87. لمزيد من الوضوح؛ يوضح الجدول 5 التالي الطفرات التقهقرية المفضلة. الجدول 5 رقم 22 53 55 65 71 72 77 87 الحمض الأميني سن ا أ نا ناا 0 نان سد نا نا ا ا ‎BERR‏ ‏في مثل هذا النموذج» يشتمل الجسم المضاد وفقا للاختراع على كل الطفرات التقهقرية المذكورة أعلاه 0 وتناظر إلى جسم ‎alias‏ يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH)‏ ذات متوالية لها رقم تعريف الجسم المضاد المتوافق مع البشر المذكور ‎Lad‏ يلي باسم 1220812 (*صورة متغيرة” أو “الصورة أل - د ‎(37s‏ . في أحد ‎oz dal)‏ يتضمن الاختراع الحالي كل الصور المتوافقة مع البشر المتضمّنة بين الصورة 5 المتغيرة 1 والصورة المتغيرة 3 أيضا. بعبارة أخرى؛ يناظر الجسم المضاد وفقا للاختراع جسمًا مضادًا يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH)‏ لمتوالية “توافقية” ذات رقم تعريف المتوالية 41 ونطاق متغير خفيف السلسلة ‎(V0)‏ لمتوالية “توافقية” ذات رقم تعريف المتوالية 42. يُشار إلى الجسم المضاد المتوافق مع لبشرء ككل؛ فيما يلي باسم 1220812 (“صورة متغيرة” أو “الصورة المتغيرة”2).
— 1 4- في نموذ ‎z‏ مفضل غير حصري 2 يتم اختيار الجسم المضاد وفقا للاختراع من: أ) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 33 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 33 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9< 5 و11؛ 2( جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 34 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 34 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9 5 و11؛ و ج) جسم مضاد يشتمل على ‎Gla‏ متغير ثقيل السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 56 62 64 66« 68« 70 2 4 6 78 و50 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 980 985 9090 9695 أو 97698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 6 62 64 66« 68« 70 72 74 76« 78 ¢80 والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9 1155 من المقرر أن يشير مصطلح “أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680؛ على نحو مفضل 9685؛ 9090 9695 أو %98 على الأقل مع أرقام تعريف المتواليات 33 34 56 62 64 66 5 727068 74؛ 76 78 أو 80” إلى تعيين المتواليات ‎All‏ تبدي الثلاث ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة بأرقام تعريف المتواليات 1؛ 2 و3 وبالإضافة إلى ذلك تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 9698؛ مع المتوالية الكاملة لأرقام تعريف المتواليات 34,33 6 62 64« 66 68« 70 72 74 76« 78 80 خارج المتواليات المناظرة ل ‎CDRs‏ ‏(بمعنى أكثر تحديدًا أرقم تعريف المتواليات 1؛ 352( في نموذ ‎z‏ مفضل غير حصري يتم اختيار الجسم المضاد وفقا للاختراع ‎HEY‏ ‏أ) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 35 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 35 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3؛ و
ب) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 36 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع المتوالية رقم 36 وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3؛ و ج) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 57 و60 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 980 9685 990 9695 أو %98 على الأقل مع المتوالية رقم 57 أو 60؛ وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 27 و3. من المقرر أن يشير مصطلح “أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680؛ على نحو مفضل 9685؛ 9690 9695 أو %98 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 36,35 57 أو 60” إلى تعيين 0 المتواليات التي تبدي الثلاث سلاسل خفيفة ‎CDRs‏ لأرقام تعريف المتواليات 4؛ 5 و6 وبالإضافة إلى ذلك تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680؛ على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 9698؛ مع المتوالية الكاملة لأرقام تعريف المتواليات 36,35 57 أو 60 خارج المتواليات المناظرة لذ ‎CDRs‏ ‏(بمعنى أكثر تحديدًا أرقام تعريف المتواليات 4؛ 5 و6). يمكن ‎Lead‏ تحديد خصائص الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر عن طريق النطاق الثابت؛ وبشكل 5 أكثر ‎danas‏ يمكن تحديد أو تعيين الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر على سبيل المثال؛ وليس الحصرء ‎(IgGl‏ 962 63وا ‎(IgM‏ هواء ‎IgD‏ أو ‎IGE‏ وعلى نحو مفضل ‎«AST‏ في سياق الاختراع الحالي؛ تكون الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر المذكورة هي 061 أو 964ا. يتعلق نموذج للاختراع بجسم مضاد متوافق مع البشر يشتمل على نطاقات متغيرة ‎VH‏ وا/ا طبقا لما تم ذكره أعلاه في صيغة 961ا؛ ‎eg‏ نحو مفضل أكثر؛ يشتمل الجسم المضاد المتوافق مع 0 البشر المذكور على نطاق ثابت ل ‎VH‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 43 ونطاق كابا ل ‎VL‏ ‏ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 45. يتعلق نموذج للاختراع بجسم مضاد متوافق مع البشر يشتمل على نطاقات متغيرة ‎VH‏ وا/ا طبقا لما تم ذكره أعلاه في صيغة 964ا؛ ‎eg‏ نحو مفضل أكثر؛ يشتمل الجسم المضاد المتوافق مع
البشر المذكور على نطاق ثابت ل ‎VH‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 44 ونطاق كابا ل ‎VL‏ ‏ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 45. لا يزال هناك نموذ ‎AT z‏ لجسم ‎Alas‏ وفقا للاختراع يتم اختياره ‎HEY‏ ‏أ) جسم مضاد يشتمل على أو يتكون من سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 37 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 37 وسلسلة خفيفة تشتمل على؛ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 9 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 39؛ ب) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 38 أو 0 أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685» 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 38 وسلسلة خفيفة تشتمل على؛ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 0 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 40؛ و ج) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 56( 62 64 66 68« 70( 72ت 1ت 76( 7868 و50 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680 %85 9690 9695, أو 98 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 56 62 64 66« 68« 70 72 74 76 78 أو 80 ونطاق متغير خفيف السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 57 60 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 8 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 57 أو 60. لمزيد من الوضوح؛ يبين الجدول 16 التالي أمثلة غير حصرية للمتواليات ‎VL VH‏ للصورة المتغيرة 1 والصورة المتغيرة 3 للجسم المضاد المتوافق مع البشر ‎.hz208F2‏ كما يشتمل على المتوالية التوافقية للصورة لمتغيرة 2. الجدول 16
السلسلة الثقيلة السلسلة الخفيفة رقم تعريف المتوالية المتغيرة 1 ض = ض ) ‎tr‏ ال ا المتغيرة 3 ض ‎j i‏ = ' اق ض ) ‎tr‏ ال ا (الصورة النطاق المتغير ‎(VL)‏ |42 المتغيرة 2( في نموذ ‎AT z‏ مفضل ولكن غير حصري 2 يتم اختيار الجسم المضاد وفقا للاختراع من؛ أ) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 6 62 64« 66« 68» 70 72( 74( 76 78 و80 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680؛ 9690 9695 أو 98 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 56» 62 64« 66« 68« 70 5 714:72 76 78 أو 80؛ والثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 9 5 1]؛
ب) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 57 و60 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 98 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 57 أو 60؛ وثلاث ‎CDRS‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3؛ و
ج) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير خفيف السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 57 و60 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 98 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 57 أو 60؛ ونطاق متغير ثقيل السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 56» 62» 64» 66» 68» 70» 72 74 76« 78 و80 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695؛ أو 98 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 56 62؛
0 64 66» 68» 70 72 74 726 78 أو 80. لا يزال هناك نموذ ‎AT z‏ لجسم مضاد وفقا للاختراع يتم اختياره من جسم مضاد ب بشتما 1 على أو يتكون من: أ) سلسلة ثقيلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 58» 63 65 67 69« 71 3 ) 717 79 و81 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680؛على نحو مفضل 9685 9690 %95 أو 98 على الأقل مع أرقام تعريف المتواليات 58 63« ذف 67« ‎T3169‏ ذ 7 أو 5481 ب) سلسلة خفيفة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 59 و61 أو أي متوالية بنسبة تطابق تبلغ 9680؛ على نحو مفضل 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع أرقام تعريف المتواليات 59 أو 61.لا يزال هناك نموذج ‎AT‏ لجسم مضاد وفقا للاختراع يتم اختياره من: أ) جسم 0 مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 56؛ 62 64« 66« 68« 70 72 74( 76 78 و80 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680؛ 5 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 56» 62 64 66« 68 70( 72( 14 76 78 أو 80؛ ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية
7 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 57؛ و ج) جسم مضاد يشتمل على نطاق متغير ثقيل السلسلة لمتوالية يتم اختيارها من أرقام تعريف المتواليات 56» 64 68 و78 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 56 64؛ 68 أو 78 ونطاق متغير خفيف السلسلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 60 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 1680 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 60. لا يزال هناك نموذ ‎AT z‏ لجسم ‎Alas‏ وفقا للاختراع يتم اختياره ‎HEY‏ ‏أ) جسم مضاد يشتمل على أو يتكون من سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 58 أو 0 أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685» 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 58 وسلسلة خفيفة تشتمل على؛ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 59؛ ب) جسم مضاد يشتمل على أو يتكون من سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 58 أو 5 أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 58 وسلسلة خفيفة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 61 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 61؛ ج) جسم مضاد يشتمل ‎cdo‏ يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 63 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم 0 تعريف المتوالية 63 وسلسلة خفيفة تشتمل ‎ode‏ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 59؛
د) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 65 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 65 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع
رقم تعريف المتوالية 59؛ ه) جسم مضاد يشتمل على» أو يتكون من؛ سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 65 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695,؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 65 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من» المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 61 أو أي متوالية تبدي نسبة تتطابق مع 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع
0 رقم تعريف المتوالية 61؛ و) جسم مضاد يشتمل على أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 67 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 67 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع
5 رقم تعريف المتوالية 59؛ ز) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 69 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695,؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 69 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع
0 رقم تعريف المتوالية 59؛ ح) جسم مضاد يشتمل ‎lo‏ يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 69 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 69 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية
61 أو أي متوالية تبدي نسبة تتطابق مع 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع
رقم تعريف المتوالية 61؛ ط) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 71 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 71 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع
رقم تعريف المتوالية 59؛ ي) جسم مضاد يشتمل على» أو يتكون من سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 73 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم 0 تعريف المتوالية 73 وسلسلة خفيفة تشتمل على» أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تتطابق مع 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع
رقم تعريف المتوالية 59؛ ك) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 75 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم 5 تعريف المتوالية 75 وسلسلة خفيفة تشتمل على أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع
رقم تعريف المتوالية 59؛ ‎(J‏ جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 77 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم 0 تعريف المتوالية 77 وسلسلة خفيفة تشتمل على» أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع
رقم تعريف المتوالية 59؛ م) جسم مضاد يشتمل علىء أو يتكون من سلسلة ‎AL‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 79 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم
تعريف المتوالية 79 وسلسلة خفيفة تشتمل على؛ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 59؛ ن) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من» سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 79 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 79 وسلسلة خفيفة تشتمل على؛ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 1 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 61؛ و ش) جسم مضاد يشتمل على؛ أو يتكون من؛ سلسلة ثقيلة ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 81 0 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680» 9685 9690 9695؛ أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 81 وسلسلة خفيفة تشتمل على؛ أو تتكون من المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 59 أو أي متوالية تبدي نسبة تطابق تبلغ 9680 9685 9690 9695 أو 9698 على الأقل مع رقم تعريف المتوالية 59. لمزيد من الوضوح؛ يوضح الجدول التالي 6ب الأمثلة غير الحصرية للمتواليات ‎VL 5 VH‏ (النطاق 5 المتغير والكامل الطول) للصور المتغيرة المختلفة للجسم المضاد المتوافق مع البشر ‎hz208F2‏ ‏الجدول 6ب السلسلة الثقيلة السلسلة الخفيفة رقم تعريف المتوالية النطاق المتغير ‎(VH)‏ 56 ‎hz208F2‏ النطاق المتغير ‎57١ (VL)‏ 1037/8 | كامل الطول 58 كامل الطول 59
النطاق المتغير ‎(VH)‏ 56 ‎Hz208F2‏ التطاق المتغير ‎(VL)‏ | 60 ‎HO37/L021‏ اكامل الطول 58 كامل الطول 61 النطاق المتغير ‎(VH)‏ 62 ‎Hz208F2‏ النطاق المتغير ‎(VL)‏ | 57 ‎is | HO47/L018‏ الطول 63 كامل الطول 59 النطاق المتغير ‎(VH)‏ 64 ‎Hz208F2‏ النطاق المتغير ‎(VL)‏ | 57 ‎is | HO49/L018‏ الطول 65 كامل الطول 59 النطاق المتغير ‎(VH)‏ 64 ‎Hz208F2‏ التطاق المتغير ‎(VL)‏ | 60 ‎HO49/L021‏ اكامل الطول 65 كامل الطول 61 النطاق المتغير ‎(VH)‏ 66 مسا
6 ‏الطول‎ Jes | 51-8
TT
68 (VH) ‏النطاق المتغير‎ 57 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 69 ‏الطول‎ Jes | 2-58 كامل الطول 59 النطاق المتغير ‎(VH)‏ 68 60 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 69 ‏الطول‎ Jes | HO52/L021 61 ‏كامل الطول‎ النطاق المتغير ‎(VH)‏ 70 57 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 71 ‏الطول‎ Jes | HOS7/LO18 59 ‏كامل الطول‎ النطاق المتغير ‎(VH)‏ 72 57 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 73 ‏الطول‎ Jes | HO68/LO18 59 ‏كامل الطول‎ sn 74 (VH) ‏النطاق المتغير‎ 57 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 75 ‏الطول‎ Lis | 070/8 59 ‏كامل الطول‎ 16 (VH) ‏النطاق المتغير‎ 57 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 77 ‏الطول‎ is | 071/8 59 ‏كامل الطول‎ 78 (VH) ‏النطاق المتغير‎ 57 | (VL) ‏النطاق المتغير‎ Hz208F2 79 ‏الطول‎ Lis | HO76/L018 59 ‏كامل الطول‎ 78 (VH) ‏النطاق المتغير‎ 60 | (VL) ‏التطاق المتغير‎ Hz208F2 79 ‏الطول‎ is | HO76/L021 61 ‏كامل الطول‎ 80 (VH) ‏النطاق المتغير‎ ‏مسا‎
1077/8 ا كامل الطول 81 كامل الطول 59 هناك سمة أخرى للاختراع الحالي هي جسم مضاد يتم اختياره من: ١-4774 ‏جسم مضاد يتم إنتاجه من الورم الهجين 4757-اء 1-4773 1-4775 4736- أو‎ (i
CNCM, Collection Nationale de Culture de Microorganismes, ‏المودّع فى‎ ‎Institut Pasteur, 25, rue du Docteur Roux, 75724 Paris, France‏ بتاريخ 30 مايو ‏5 2013؛ 26 يونيو 2013؛ 26 يونيو 2013 24 أبريل 3 و26 يونيو 2013 ؛بالترتيب» ‏أآ) جسم مضاد ينافس للارتباط ب ‎IGF-1R‏ مع الجسم المضاد المبين فى النقطة ‎si‏ ‎(i) ‏جسم مضاد يرتبط بنفس القمة اللاصقة ل 167-114 كما يحدث للجسم المضاد فى النقطة‎ (i ‏وفقا لسمة أخرى؛ يتعلق الاختراع بورم هجين فأري يتم اختياره من الورم الهجين 4757-ا 4773-ا؛ ‎30 ‏بتاريخ‎ CNCM, Institut Pasteur France ‏المودّع في‎ 1-4774 51-4736 ٠1-5 ‏مايو 2013» 26 يونيو 2013 26 يونيو 2013 24 أبريل 3 و26 يونيو 2013 بالترتيب.‎ 0 ‏تتعلق سمة جديدة وفقا للاختراع الحالي بحمض نووي معزول يشفر جسم مضادء أو شظية ربط مولد ‎Ae Lia‏ وفقا للاختراع. ‏تشير ل ] ا ات ‎n‏ 0 نووي ‎all gid’ I"‏ نووية"؛ "متوالية 0 نووي ‎I"‏ "بولي نوكليوتيد ‎sal! I"‏ ‏نوكليوتيد'» 'متوالية بولي نوكليوتيد" و'متوالية نوكليوتيد"؛ المستخدّمة بالتبادل في الوصف الحالي؛ إلى متوالية محددة لنوكليوتيدات » معدلة أو غير معدلة؛ تحدد شظية أو منطقة من حمض نووي ¢ ‏تحتوي على نوكليوتيدات غير طبيعية أو ‎cate‏ وتكون عبارة عن منتجات ‎DNA‏ مزدوجة الجديلة ‏أو ‎DNA‏ مفردة الجديلة أو انتساخ لأحماض ‎DNA‏ المذكورة. ‏لقد تم ‎Jie‏ و/أو ‎Lan‏ متواليات الحمض النووي؛ بمعنى أكثر تحديداء تم أخذ عينات منها بشكل ‏مباشر أو غير مباشرء على سبيل المثال عن ‎Goh‏ نسخة؛ حيث تم تعديل بيئتها جزئيا على الأقل. 0 يجب هنا أيضا الإشارة إلى الأحماض النووية المعزولة التي تم الحصول عليها هي عوامل جينية
ناتجة عن عودة الاتحاد الجيني؛ بواسطة؛ على سبيل المثال؛ خلايا عائلة أو تم الحصول عليها بواسطة التخليق الكيميائي. يتعلق الاختراع أيضا بناقل يشتمل على حمض نووي يشفر جسما ‎alias‏ أو شظية ربط مولد ضد ‎(Aa‏ وفقا للاختراع. يتعلق الاختراع بوجه خاص بأهداف إنشاء نسائل و/أو نواقل تعبير تحتوي على متوالية النوكليوتيد تلك . تحتوي النواقل على نحو مفضل على عناصر تسمح بالتعبير و/أو إفراز متواليات نوكليوتيد في خلية مضيفة معينة. بالتالي يجب أن يشتمل الناقل على معززء إشارات بدء وإنهاء ترجمة وراثية؛ فضلا عن مناطق تنظيم انتساخ مناسبة. يجب أن تكون هناك إمكانية الاحتفاظ بالناقل بطريقة ثابتة في 0 الخلية المضيفة ويمكن أن يشتمل على إشارات معينة تحدد إفراز البروتين المترجّم وراثيا. يتم اختيار هذه العناصر المتنوعة وتحسينها بواسطة المهرة فى المجال ‎Gay‏ للخلية العائلة المستخدمة. لهذا الغرض» يمكن إدخال متواليات النوكليوتيد في نواقل انتساخ ذاتي ضمن العائل المختار أو أن تكون نواقل تكاملية للعائل المختار. يتم تحضير مثل تلك النواقل بواسطة طرق تُستخدّم ‎sale‏ بواسطة شخص ماهر في المجال ويمكن 5 إدخال النسائل الناتجة إلى عائل مناسب بواسطة طرق قياسية مثل العدوى الشحمية؛ النقل الكهربائي؛ الصدمة الحرارية أو الطرق الكيميائية. إن النواقل هي؛ على سبيل المثال؛ نواقل ذات ‎Lite‏ بلاسميدي أو فيروسي. يتم استخدامها لتحويل الخلايا العائلة لإنشاء نسائل أو التعبير عن متواليات النوكليوتيد وفقا للاختراع. يتعلق الاختراع أيضا بخلايا عائلة معزولة تم تحويلها بواسطة أو تشتمل على ناقل طبقا لما هو مبين 0 أعلاه. يمكن اختيار العائل من بين الأنظمة بدائية النواة أو حقيقية النواة ‎Jie‏ الخلايا البكتيرية؛» على سبيل المثال؛ ولكن أيضا خلايا الخميرة أو خلايا الحيوان» وبخاصة الخلايا الثديية (باستثناء البشر). يمكن أيضا استخدام الخلايا الحشربة أوالنباتية.
يتعلق الاختراع أيضا بحيوانات» خلاف الإنسان» بها خلية محوّلة وراثيا. تتعلق سمة أخرى بطريقة لإنتاج جسم مضاد وفقا للاختراع؛ أو شظية ربط ‎Age‏ ضد منه؛ تتسم ‎Ob‏ ‏الطريقة المذكورة تشتمل على الخطوات التالية: أ) المستتب في وسط في ظل ظروف الاستنبات المناسبة لخلية عائلة وفقا للاختراع؛ _ب) استخلاص الجسم المضاد؛ أو واحدة من شظيات ربط مولد الضد منه؛ وبالتالي إنتاجه من وسط الاستنبات أو من الخلايا المستنبّتة المذكورة. يمكن استخدام الخلايا المحوّلة وراثيا في طرق لتحضير الأجسام المضادة الناتجة عن عودة الاتحاد الجيني وفقا للاختراع. يتضمن الوصف الحالي طرقا لتحضير الأجسام المضادة في صورة ناتجة عن عودة الاتحاد الجيني باستخدام ناقل و/أو خلية تم تحويلها بواسطة ناقل وفقا للاختراع. من المفضل 0 أن يتم استنبات خلية تم تحويلها بواسطة ناقل كما هو مبين أعلاه في ظل ظروف تسمح بالتعبير عن الجسم المضاد المذكور سلفا واستخلاص الجسم المضاد المذكور. طبقا لما هو مبين بالفعل؛ يمكن اختيار الخلية العائلة المحددة من ضمن الأنظمة بدائية أو حقيقية النواة. بشكل محدد؛ من الممكن تحديد متواليات نوكليوتيد تسهل الإفراز في النظام البدائي أو حقيقي النواة المذكور. بالتالي يمكن استخدام ناقل وفقا للاختراع لحمل مثل تلك المتوالية بشكل مفيد لإنتاج 5 البروتينات الناجمة عن عودة الاتحاد الجينى المراد إفرازه. في الحقيقة؛ سيتم تسهيل تنقية البروتينات الناتجة عن ‎sage‏ الاتحاد الجيني محل الاهتمام بحقيقة أنها توجد في المادة الطافية للمستنبت الخلوي بدلا من داخل الخلايا العائلة. يمكن أيضا تحضير الجسم المضاد عن طريق التخليق الكيميائي. يتمثل أحد أهداف الاختراع في إحدى طرق التحضير هذه. يعرف المهرة في المجال طرق التخليق ‎clad Jie (Shes‏ الطور 0 الصلب أو تقنيات الطور الصلب الجزئية؛ عن طريق تكثيف الشظيات أو عن طريق التخليق التقليدي في المحلول. يتضمن الاختراع أيضا البولي ببتيدات التي تم الحصول عليها بالتخليق الكيميائي والقادرة على احتواء أحماض أمينية غير طبيعية مناظرة.
يتضمن الاختراع الحالي أيضا الجسم المضاد؛ أو أي شظيات ربط ‎alge‏ ضد منه؛ التي يمكن الحصول عليها بالطريقة المبينة أعلاه. وفقا لسمة ‎(dre‏ يتعلق ‎J‏ لاختراع بجسم مضادء أو شظية ربط مولد ضد منه؛ طبقا لما هو مبين أعلاه للاستخدام كناقل علاجي لتوصيل عامل سام للخلايا في موقع استهداف عائل؛ حيث يتكون خارج ‎Wall‏ - ]4116| على نحو مفضل أكثر ‎IGF-1R‏ البشري (رقم تعريف المتوالية 50) وعلى نحو مفضل أكثر أيضا النطاق خارج الخلايا ‎IGF-1R‏ البشري (رقم تعريف المتوالية 51)؛ وعلى نحو مفضل أكثر أيضا الطرف لا للنطاق خارج الخلايا ‎IGF-1R‏ البشري (رقم تعريف المتوالية 2 )؛ أو أي متوالية متغيرة طبيعية منها.
0 في نموذج مفضل؛ يكون موع استهداف العائل المذكور هو موقع استهداف خلية ثديية؛ على نحو مفضل أكثر خلية بشرية؛ على نحو مفضل أكثر خلايا تعبر عن ‎IGF-IR‏ بشكل طبيعي أو عن طريق عودة الاتحاد الجينى. هناك سمة أخرى للاختراع هي مترافق جسم مضاد-عقار يشتمل على جسم ‎alias‏ أو شظية ربط مولد ضد ‎(die‏ طبقا لما هو مبين ‎dled‏ حيث يترافق مع عامل سام للخلايا.
يتعلق الاختراع بمترافق مناعي يشتمل على الجسم المضاد طبقا لما هو مبين في الوصف الحالي المترافق مع عامل سام للخلايا. يشير مصطلح ‎Gil‏ مناعي" بصفة عامة إلى مركب يشتمل على منتج علاجي على ‎(BY)‏ مثل جسم ‎cabins‏ مرتبط ماديا بواحد أو أكثر من العوامل العلاجية؛ وبالتالي خلق مركب مستهدف بصورة عالية.
0 في نموذج مفضل؛ تتكون ‎Jia‏ تلك العوامل العلاجية من ‎alge‏ سامة للخلايا. ومن المقرر أن يشير مصطلح "عامل سام للخلايا" أو 'سام للخلايا" إلى عامل يعمل؛ عند إعطائه إلى خاضع للعلاج؛ على علاج أو الوقاية الإصابة بتكاثر خلايا غير طبيعية؛ على نحو مفضل
الإصابة بالسرطان في جسم الخاضع للعلاج» عن طريق تثبيط أو الوقاية من وظيفة خلوية و/أو التسبب في وفاة الخلايا. لقد تم عزل عوامل عديدة سامة للخلايا أو تخليقها وهي تجعل من الممكن تثبيط تكاثر الخلاياء أو تدمير أو تقليل الخلايا الورمية بشكل كبير على الأقل؛ إن لم يكن بشكل حاسم. مع ذلك؛ فإن النشاط السام للخلايا لهذه العوامل غير مقصور على الخلايا الورمية؛ وتتأثر الخلايا غير الورمية أيضا ويمكن تدميرها. وبشكل أكثر تحديداء يتم ملاحظة الآثار الجانبية على الخلايا المتجددة بسرعة ‎Jie‏ ‏الخلايا المكوّنة للدم أو الخلايا الظهارية؛ بشكل محدد الأغشية المخاطية. وعلى سبيل التوضيح؛ تتأثر خلايا الجهاز الهضمي كثيرا باستخدام العوامل السامة للخلايا هذه. يتمثل أحد أهداف الاختراع الحالي في القدرة على توفير عامل سام للخلايا يمكن أن يقيد التأثيرات 0 الجانبية على الخلايا الطبيعية وفي نفس الوقت الحفاظ على سمية خلوية عالية على الخلايا الورمية. وبشكل أكثر تحديدًاء يمكن أن يتكون العامل السام للخلاياء بدون حصر؛ من عقار (بمعنى أكثر تحديداء 'مترافق من جسم مضاد وعقار)؛ توكسين (بمعنى أكثر تحديدا» 'توكسين مناعي' أو 'مترافق من جسم مضاد وتوكسين")؛ نظير مشع (بمعنى أكثر تحديداء 'مترافق مناعي ‎Cte‏ 'مترافق من جسم مضاد“نظير مشع)» إلخ. 5 في نموذج مفضل ‎(Jol‏ يتكون المترافق المناعي من جسم مضاد مرتبط بعقار أو دواء على الأقل. يتم الإشارة إلى مترافق مناعي باسم مترافق جسم مضاد -عقار ‎antibody—-drug conjugate‏ (أو ‎.(“ADC”‏ ‏في نموذج أول؛ يمكن وصف ‎Jie‏ تلك العقاقير فيما يتعلق بوضع تأثيرها. وكمثال غير حصري؛ يمكن ذكر عوامل ألكلة ‎Jie alkylating agents‏ خردل النيتروجين ‎mustard‏ 0100980 0 مركبات ألكيل-سلفونات ‎alkyle-sulfonates‏ « نيتروزو ‎nitrosourea Lys‏ ¢ مركبات أوكسا زوفورين ‎oxazophorins‏ « مركبات أزيريدين ‎aziridines‏ أو ‎pal‏ إيشلين ‎imine—ethylenes‏ ‏مضادات تأيض ‎anti-metabolites‏ ¢ _مضادات الحيوية مضادة للورم ‎anti-tumor‏ ‎«antibiotics‏ مثبطات إنقسام فتيلي ‎mitotic inhibitors‏ ؛ مثبطات وظيفة كروماتين ‎«chromatin function inhibitors‏ عوامل ‎Balas‏ لتكوين الأوعية الدموية ‎anti-‏
‎angiogenesis agents‏ « مضادات هرمون الاستروجين ‎anti-estrogens‏ « مضادات إندروجين ‎anti—androgens‏ » عوامل خلابية ‎chelating agents‏ ¢ منبهات امتصاص الحديد ‎Iron absorption stimulant‏ ؛ مثبطات انزيمات فوسفو ‎(gla‏ إستيراز ‎Phosphodiesterase‏ ‎inhibitors‏ ؛ مقبطات ‎«DNA inhibitors‏ منبطات تخليق ‎«DNA synthetis inhibitors‏ منبهات موت الخلايا المبرمج ‎Apopstotis stimulants‏ + مثبطات تتميديلات ‎Thymidylate‏ ‎inhibitors‏ » مثبطات ‎WAN‏ التائية ‎cell inhibitors‏ 1 ؛ مساعدات إنترفيرون ‎Interferon‏ ‎agonists‏ « مثبطات رببونوكليوسيد تراي فوسفات ربدوكتاز ‎Ribonucleoside triphosphate‏ ‎reductase inhibitors‏ ¢ مثقبطات أروماتاز ‎Aromatase inhibitors‏ « مضادات مستقبل الاستروجين ‎Estrogen receptor antagonists‏ « مثبطات تيروسين كيناز ‎Tyrosine kinase‏ ‎inhibitors 10‏ « مثبطات دورة خلايا ‎Cell cycle inhibitors‏ ؛ تكسان ‎Taxane‏ ؛ مثبطات تويولين ‎Tubulin inhibitors‏ ؛ مثبطات تكوين أوعية ‎angiogenesis inhibitors‏ « منبهات خلايا ملتهمة كبيرة ‎macrophage stimulants‏ « مضادات مستقبل نوروكينين ‎Neurokinin‏ ‎receptor antagonists‏ ؛ مساعدات مستقبل كانابينويد ‎Cannabinoid receptor agonists‏ ‎٠»‏ مساعدات مستقبل دويامين ‎Dopamine receptor agonists‏ ؛ مساعدات عامل تنبيه الخلايا 5 الحبيبية ‎granulocytes stimulating factor agonists‏ « مساعدات مستقبل إرثرويويتين ‎clas bus‏ مستقبل سوماتوستاتين ‎Erythropoietin receptor agonists‏ ¢ مساعدات ‎(LHRH‏ ‏عوامل حساسية تجاه الكالسيوم ‎Calcium sensitizers‏ « مضادات مستقبل ‎VEGF‏ مضادات مستقبل إنترلوكين ‎interleukin receptor antagonists‏ « مثبطات ‎WIA‏ ناقصة العظم ‎osteoclast inhibitors‏ « منبهات تكوين شقوق ‎radical formation stimulants‏ « مضادات مستقبل إتدوثيلين ‎endothelin receptor antagonists‏ ؛ شبيه القلوي فينكا ‎Vinca alkaloid‏ ‎٠‏ مضاد هرمون ‎anti-hormone‏ أو معدلات مناعية ‎immunomodulators‏ أو أي عقار جديد ‎Al‏ يحقق معايير نشاط عامل سام للخلايا أو توكسين ‎toxin‏
يتم ذكر مثل تلك العقاقير» على سبيل المثال في 2010 ‎VIDAL‏ في الصفحة المخصصة للمركبات المرتبطة بعمود ‎ale‏ السرطان وعلم الدم "الخصائص السامة ‎"LIAN‏ ويتم الإشارة إلى هذه المركبات
5 السامة للخلايا المذكورة بالإحالة إلى هذه الوثيقة كعوامل مفضلة سامة للخلايا.
وبشكل أكثر تحديداء بدون حصرء يتم تفضيل المركبات أو الأدوية التالية وفقا للاختراع: ‎mechlorethamine, chlorambucol, melphalen, chlorydrate, pipobromen,‏ ‎prednimustin, disodic-phosphate, estramustine, cyclophosphamide,‏ ‎altretamine, trofosfamide, sulfofosfamide, ifosfamide, thiotepa,‏ ‎triethylenamine, altetramine, carmustine, streptozocin, fotemustin, 5‏ ‎lomustine, busulfan, treosulfan, improsulfan, dacarbazine, cis—platinum,‏ ‎oxaliplatin, lobaplatin, heptaplatin, miriplatin hydrate, carboplatin,‏ ‎methotrexate, pemetrexed, S5—fluoruracil, floxuridine, 5-fluorodeoxyuridine,‏ ‎capecitabine, cytarabine, fludarabine, cytosine arabinoside, 6-‏ ‎mercaptopurine (6-MP), nelarabine, 6-thioguanine (6-TG), 10‏ ‎chlorodesoxyadenosine, 5—azacytidine, gemcitabine, cladribine,‏ ‎deoxycoformycin, tegafur, pentostatin, doxorubicin, daunorubicin, idarubicin,‏ ‎valrubicin, mitoxantrone, dactinomycin, mithramycin, plicamycin, mitomycin‏
C, bleomycin, procarbazine, paclitaxel, docetaxel, vinblastine, vincristine, vindesine, vinorelbine, topotecan, irinotecan, etoposide, valrubicin, 15 amrubicin hydrochloride, pirarubicin, elliptinium acetate, zorubicin, epirubicin, idarubicin and teniposide, razoxin, marimastat, batimastat, prinomastat, tanomastat, ilomastat, CGS-27023A, halofuginon, COL-3, neovastat, thalidomide, CDC 501, DMXAA, L-651582, squalamine, endostatin, SU5416, SU6668, interferon-alpha, EMD121974, interleukin—- 20 12, IM862, angiostatin, tamoxifen, toremifene, raloxifene, droloxifene, iodoxyfene, anastrozole, letrozole, exemestane, flutamide, nilutamide, sprironolactone, cyproterone acetate, finasteride, cimitidine, bortezomid,
Velcade, bicalutamide, cyproterone, flutamide, fulvestran, exemestane, dasatinib, erlotinib, gefitinib, imatinib, lapatinib, nilotinib, sorafenib, sunitinib, 25 retinoid, rexinoid, methoxsalene, methylaminolevulinate, aldesleukine,
001-43, denileukin diflitox, interleukin—2, tasonermine, lentinan, sizofilan, roquinimex, pidotimod, pegademase, thymopentine, poly ‏:ا‎ 6, procodazol,
Tic BCG, corynebacterium parvum, NOV-002, ukrain, levamisole, 1311- chTNT, 1-101, celmoleukin, interferon alfa2a, interferon alfa2b, interferon gammala, interleukin-2, mobenakin, Rexin-G, teceleukin, aclarubicin, 5 actinomycin, arglabin, asparaginase, carzinophilin, chromomycin, daunomycin, leucovorin, masoprocol, neocarzinostatin, peplomycin, sarkomycin, solamargine, trabectedin, streptozocin, testosterone, kunecatechins, sinecatechins, alitretinoin, belotecan hydrocholoride, calusterone, dromostanolone, elliptinium acetate, ethinyl estradiol, 0 etoposide, fluoxymesterone, formestane, fosfetrol, goserelin acetate, hexyl aminolevulinate, histrelin, hydroxyprogesterone, ixabepilone, leuprolide, medroxyprogesterone acetate, megesterol acetate, methylprednisolone, methyltestosterone, miltefosine, mitobronitol, nadrolone phenylpropionate, norethindrone acetate, prednisolone, prednisone, temsirrolimus, 15 testolactone, triamconolone, triptorelin, vapreotide acetate, zinostatin stimalamer, amsacrine, arsenic trioxide, bisantrene hydrochloride, chlorambucil, chlortrianisene, cis—diamminedichloroplatinium, cyclophosphamide, diethylstilbestrol, hexamethylmelamine, hydroxyurea, lenalidomide, lonidamine, mechlorethanamine, mitotane, nedaplatin, 20 nimustine hydrochloride, pamidronate, pipobroman, porfimer sodium, ranimustine, razoxane, semustine, sobuzoxane, mesylate, triethylenemelamine, zoledronic acid, camostat mesylate, fadrozole HCI, nafoxidine, aminoglutethimide, carmofur, clofarabine, cytosine arabinoside, decitabine, doxifluridine, enocitabine, fludarabne phosphate, fluorouracil, 25 ftorafur, uracil mustard, abarelix, bexarotene, raltiterxed, tamibarotene,
temozolomide, vorinostat, megastrol, clodronate disodium, levamisole, ferumoxytol, iron isomaltoside, celecoxib, ibudilast, bendamustine, altretamine, mitolactol, temsirolimus, pralatrexate, TS-1, decitabine, bicalutamide, flutamide, letrozole, clodronate disodium, degarelix, toremifene citrate, histamine dihydrochloride, DW-166HC, nitracrine, 5 decitabine, irinoteacn hydrochloride, amsacrine, romidepsin, tretinoin, cabazitaxel, vandetanib, lenalidomide, ibandronic acid, miltefosine, vitespen, mifamurtide, nadroparin, granisetron, ondansetron, tropisetron, alizapride, ramosetron, dolasetron mesilate, fosaprepitant dimeglumine, nabilone, aprepitant, dronabinol, TY-10721, lisuride hydrogen maleate, epiceram, 0 defibrotide, dabigatran etexilate, filgrastim, pedfilgrastim, reditux, epoetin, molgramostim, oprelvekin, sipuleucel-T, M-Vax, acetyl L-carnitine, donepezil hydrochloride, S5—aminolevulinic acid, methyl aminolevulinate, cetrorelix acetate, icodextrin, leuprorelin, metbylphenidate, octreotide, amlexanox, plerixafor, menatetrenone, anethole dithiolethione, 15 doxercalciferol, cinacalcet hydrochloride, alefacept, romiplostim, thymoglobulin, thymalfasin, ubenimex, imiquimod, everolimus, sirolimus, H- 101, lasofoxifene, ftrilostane, incadronate, gangliosides, pegaptanib octasodium, vertoporfin, minodronic acid, zoledronic acid, gallium nitrate, alendronate sodium, etidronate disodium, disodium pamidronate, 20 dutasteride, sodium stibogluconate, armodafinil, dexrazoxane, amifostine,
WF-10, temoporfin, darbepoetin alfa, ancestim, sargramostim, palifermin,
R-744, nepidermin, oprelvekin, denileukin diftitox, crisantaspase, buserelin, deslorelin, lanreotide, octreotide, pilocarpine, bosentan, calicheamicin, ‏بخاصة تلك التي تم‎ cmaytansinoids, ciclonicate and pyrrolobenzodiazepines 5 الكشف عنها في الطلب الدولي ‎PCT‏ المنشور بالرقم 2011/130598.
في أحد النماذج؛ يتكون المترافق المناعي من جسم مضاد مرتبط بنظير مشع على الأقل. يُشار إلى هذا المترافق المناعي باسم مترافق جسم مضاد-نظير مشع (أو ‎(‘ARC‏ ‏للتدمير الانتقائي للورم»؛ يمكن أن يشتمل الجسم المضاد على ذرة نشطة إشعاعيا بدرجة حارية. تتوافر مجموعة مختلفة من النظائر النشطة إشعاعيا لإنتاج ‎ARC‏ على سبيل المثال وليس الحصر ‎A211‏ ‎O17 «(N15 13 5‏ 19 123« 131ل 125« 11لا ‎«Rel188 (Rel86 «YOO‏ ‎(P32 ¢Bi212 10990 «Sm153‏ 0212© النظائر المشعة النشطة ل ‎clu‏ جادولينيوم» منجنيزء أو حديد. يمكن استخدام أي طرق أو عمليات معروفة للمهرة في المجال لتضمين مثل ذلك النظير المشع في ‎LARC‏ وكمثال غير حصري؛ يمكن الارتباط ب 19900 أو 1123« 6186 46188 و0111 0 عبر وحدة سيستيين بنائية. يمكن الارتباط ب ‎YOO‏ عبر وحدة ليسين بنائية ويمكن الارتباط ب 1123 عبر استخدام طريقة ‎/ODOGEN‏ ‏يمكن ذكر عدة أمثلة لتوضيح معلومات المهرة في المجال ل ‎Zevalin® (ie ARC‏ الذي يكون عبارة عن ‎ARC‏ مكون من جسم مضاد ل ‎CD20‏ أحادي النسيلة ونظير مشع 0111 أو 790 مرتبط ب عامل خلابي-رابط ثيو يوريا؛ أو ‎Mylotarg®‏ المكون من جسم مضاد ل ‎CD33‏ مرتبط ب كليتشيميسين» ( البراءة الأمريكية رقم 4.970.198؛ 5.079.233؛ 5.585.089؛ ¢5.606.040 5.693.762؛ ¢5.739.116 5.767.285؛ 5.773.001 ). ويمكن ‎Lad‏ ‏مؤخرا ذكر ‎ADC‏ المشار إليه ‎Adcetris aul‏ (المناظر ل ‎(Brentuximab vedotin‏ الذي تم قبوله مؤخرا من ‎JE‏ هيئة الأغذية والأدوية الأمريكية في علاج الورم ‎Glial‏ لهودجكين ‎.Hodgkin’s lymphoma‏ في أحد النماذج؛ يتكون المترافق المناعي من جسم مضاد مرتبط بتوكسين على الأقل. يُشار إلى مترافق مناعي باسم مترافق من جسم مضاد وتوكسين ‎antibody-toxin conjugate‏ (أو ‎“ATC”‏ ‏تعتبر التوكسينات فعالة وسموم خاصة من الكائنات الحية. تتكون عادة من سلسلة حمض أميني يمكن أن تتباين في الوزن الجزيئي بين زوج من مائة (ببتيد ‎(peptides‏ ومائة ‎All‏ (بروتين
‎(proteins‏ يمكن أن تكون ‎Lad‏ عبارة عن مركبات عضوية منخفضة الجزيئات. يتم إنتاج التوكسينات ‎Toxins‏ بواسطة كائنات حية عديدة؛ ‎Jie‏ البكتيرياء الفطريات؛ الطحالب؛ والنباتات. إن العديد منها يتسم بالسمية الشديدة؛ حيث تبلغ السمية عشرات أضعاف العوامل العصبية. تتضمن التوكسينات المستخدّمة في ‎(ATC‏ على سبيل المثال وليس الحصرء كل أنواع التوكسينات التي يمكن أن تبدي تأثيرات سامة للخلايا عن طريق آليات تتضمن ربط التويولين» ربط ‎DNA‏ أو تثبيط تويويزوميراز ‎.topoisomerase inhibition‏ تتضمن التوكسينات الفعالة إنزيميا وشظيات منها ‎All‏ يمكن استخدامها سلسلة دفتيريا ‎diphtheria‏ ‎A chain‏ » شظيات فعالة غير رابطة لتوكسين دفتيريا ‎diphtheria toxin‏ ؛ سلسلة توكسين خارجى ‎A diphtheria toxin‏ (من ‎(Pseudomonas aeruginosa‏ سلسلة رسين ‎ricin A chain A‏ ؛ سلسلة أبرين ‎abrin A chain A‏ سلسلة موديسين ‎modeccin A chain A‏ ؛ ألفا-سارسين 300018-07 » بروتينات ‎cAleurites fordii‏ بروتينات ديانثتين ‎dianthin proteins‏ بروتينات ‎(PAPI) Phytolaca Americana‏ ااطخط 5 ‎«(PAP-S‏ مقبط ‎charantia‏ 10071010168 كورسين ‎curcin‏ ¢ كروتين ‎crotin‏ ¢ مثبط ‎¢sapaonaria officinalis‏ جيلونين ‎gelonin‏ ؛ ميتوجيلين ‎mitogellin‏ « ريستريكتوسين ‎restrictocin‏ ؛ فينوميسين ‎phenomycin‏ ؛ إينوميسين ‎enomycin 5‏ « وتريكوثيسين ‎.tricothecenes‏ ‏يتم هنا ‎Lad‏ مراعاة توكسينات ‎Jie‏ دولاستاتين» أووبستاتين» وبخاصة مونو ميثيل أوربستاتين ع (اختصارا ‎((MMAE‏ تريكوثيسين ‎trichothecene‏ و001065؛ ومشتقات من هذه التوكسينات ‎Al‏ تتضمن نشاط توكسين ‎activity‏ 10700. لقد ثبت أن مركبات دولاستاتين ‎Dolastatins‏ ‏وأوريستاتين 5 تتداخل مع ديناميكيات النبيبات الدقيقة ‎microtubule dynamics‏ « 0 انحلال ‎GTP‏ المائي» والانقسام النووي والخلوي ولدها نشاط مضاد للسرطان ‎cellular division‏ ‎and have anticancer‏ والفطريات ‎.antifungal‏ ‏يشير مصطلح "رابط" أو 'مادة ربط" أو 'وحدة ربط" أو 'رابطة" إلى شطر كيميائي يشتمل على رابطة تساهمية أو سلسلة من الذرات التى تريط تساهميا جسم مضاد بعامل سام للخلايا واحد على الأقل.
يمكن إنشاء روابط تستخدم مجموعة من عوامل إقران بروتين ثنائي المجموعات الوظيفية ‎Nie‏ ‏سكسينيميديل -3-(2-بيريديل داي ثيو) بروبيونات ‎N-succinimidyl-3—(2-pyridyldithio)‏ ‏6456م ‎(SPDP)‏ مكسينيميديل-4-(ل-مالي إيميدو ميثيل)سيكلو هكسان-1- كريوكسيلات ‎succinimidyl-4—(N-maleimidomethyl)cyclohexane—]1-carboxylate‏ ‏5 (00/ا5)؛ إيمينو ثيولان ‎»)١1( iminothiolane‏ مشتقات ثنائية الوظيفة من إيميدو إستر 65 (مثل داي ميثيل أديبيميدات ‎«(dimethyl adipimidate HCI‏ إسترات نشطة ‎active esters‏ (مثل ‎gla‏ سكسينيميديل سويرات ‎(disuccinimidyl suberate‏ ؛ مركبات ألديهيد ‎(fic) aldehydes‏ جلورتار ألديهيد ‎(glutaraldehyde‏ ومركبات بيس-أزيدو ‎Ji) bis—azido‏ بيس-(م- داي أزيدو ‎(agin‏ هكسان داي أمين ‎«(bis (p-azidobenzoyl) hexanediamine‏ 0 مشتقات بيس-ديازونيوم 015-01820001 (مثل بيس- ‎P)‏ -داي أزونيوم بنزويل) -إيثيلين داي أمين ‎«(bis—(p-diazoniumbenzoyl)-ethylenediamine‏ مركبات ‎gla‏ أيزو سيانات ‎Jio) diisocyanates‏ تولوين 2 6 -دي أيزو سيانات ‎toluene 2,6-diisocyanate‏ « ومركبات فلورين نشطة عند بيس ‎bis—active fluorine‏ (مثل 1« 5-داي فلورو-2؛ 4-داي نيترو بنزين ‎.(1,5-difluoro-2,4~dinitrobenzene‏ يُعد حمض 1-أيزو ثيو سياناتو بنزيل-3-ميثيل داي ليثيلين تراي أمين ‎by‏ أسيتيك الموسوم بالكربون -1 ‎Carbon-14-labeled‏ ‎MX-) isothiocyanatobenzyl-3-methyldiethylene triaminepentaacetic acid‏ ‎(DTPA‏ عبارة عن عامل خلابي تمثيلي لإقران العوامل السامة للخلايا بالنظام العلاجي ‎exemplary chelating agent for conjugation of cyctotoxic agents to the‏ ‎.addressing system‏ يمكن أن تكون المواد الكاشفة الأخرى للرابط التبادلي هي ‎(BMPS‏ ‎«SIAB (SIA (SBAP (MPBH (MBS (LC-SMCC (HBVS (GMBS (EMCS 0‏ ‎sulfo—- ¢sulfo-KMUS (sulfo-GMBS (sulfo-EMCS (SMPH (SMPB (SMCC‏ ‎SVSB 4 «and sulfo-SMPB (sulfo-SMCC «sulfo-SIAB (MBS‏ (سكسينيميديل-(4- فينيل سلفون )بنزوات ‎(succinimidyl-(4-vinylsulfone)benzoate‏ المتوفرة تجاريا (على سبيل المثال من ‎(Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, ١١٠٠١ U.S.A‏
5 يمكن أن يكون الرابط "قابلا للشطر ‎cleavable‏ " أو "غير قابل للشطر ‎non cleavable‏ ".
في نموذج مفضل؛ يكمن في 'رابط قابل للشطر" يسهل إطلاق العامل السام للخلايا في الخلية. على سبيل المثال؛ يمكن استخدام رابط متحول بالحمض؛ ‎day‏ حساس للببتيداز ‎peptidase‏ « رابط متحول بالضوء» رابط داي ميثيل ‎dimethyl‏ أو رابط يحتوي على ‎SW‏ كبربتيد ‎disulfide‏ . يتسم الرابط» في نموذج مفضل؛ بأنه قابل للشطر في ظل ظروف داخل ‎(WAY‏ بحيث يؤدي
شطر الرابط إلى إطلاق العامل السام للخلايا من الجسم المضاد في بيئة داخل الخلايا. على سبيل ‎JU‏ في بعض النماذج؛ يكون الرابط ‎SLB‏ للشطر بعامل شطر يوجد في بيئة داخل الخلايا (بمعنى أكثر تحديدا؛ في جسيم حال أو جسيم داخلي أو 681760168). يمكن أن يكون الرابطء على سبيل المثال؛ عبارة عن رابط ببتيديل ‎PEPidyl‏ يتم شطره بواسطة إنزيم ببتيداز ‎peptidase‏ أو بروتياز ‎Jala protease‏ الخلاياء بما في ذلك؛ على سبيل المثال وليس
0 الحصرء بروتياز مرتبط بجسيمات حالة أو جسيمات داخلية. نمطياء يكون رابط الببتيديل بطول حمضين أمينيين ‎acids‏ 800100على الأقل أو ثلاث أحماض أمينية على الأقل. يمكن أن تتضمن عوامل الشطر مركبات كاثيبسين 8 ولا وبلازمين» وكلها معروفة بقدرتها على حل مشتقات العقار ثنائي البتيدات مائيا بما يؤدي إلى إطلاق العقار الفعال داخل الخلايا المستهدفة. على سبيل المثال؛ يمكن استخدام رابط ببتيديل يمكن شطره بواسطة بروتياز كاثيبسين 8 يتوقف
5 على ثيول؛ يتم التعبير عنه بشكل كبير في أنسجة السرطان ‎le)‏ سبيل المثال؛ رابط ‎Phe-Leu‏ ‏أو لال0-6©ا-006-ل7ا6). في نماذج محددة؛ فإن رابط الببتيديل القابل للشطر بواسطة بروتياز ‎Jala‏ الخلايا هو رابط ‎Val-Cit‏ أو 5لاا-006. هناك ميزة لإطلاق حال للبروتين داخل الخلايا للعامل السام للخلايا هي أن العامل يضمحل عادة عندما يتم إقرانه وعادة ما تكون قيم ثبات المصل للمترافقات عالية.
0 في نماذج أخرى؛ يكون الرابط القابل للشطر حساس تجاه الرقم الهيدروجيني ‎PH‏ بمعنى أكثر تحديداء حساس للانحلال المائي عند قيم رقم هيدروجيني معينة. وعادة ما يكون الرابط الحساس للرقم الهيدروجيني ‎SUE‏ للانحلال في ظل ظروف حمضية. على سبيل المثال» يمكن استخدام رابط متحول للحمض يكون قابلا للانحلال المائي في جسيم حال (على سبيل المثال» هيدرازون ‎hydrazone‏ « شبه كريازون ‎Semicarbazone‏ « سيس-أكتونيتيك أميد ‎amide‏ 015-8000106؛ أورثو إستر
‎orthoester 5‏ ؛ أسيتال ‎acetal‏ ؛ ‎ketal Jus‏ ؛ وما شابه). إن مثل تلك الروابط ثابتة نسبيا في
ظل ظروف الرقم الهيدروجيني المتعادل» على سبيل المثال تلك الموجودة في الدم؛ ولكن غير تابتة في ظل الرقم الهيدروجيني 5.5 و5.0؛ وهو الرقم الهيدروجيني التقريبي للجسيم الحال. في نماذج معينة؛ يكون الرابط القابل للحل بالماء هو رابط ثيو إيثر (مثل ثيو إيثر ‎thioether‏ مرتبط بالعامل العلاجي عبر رابطة أسيل هيدرازون ‎.(acylhydrazone‏
في نماذج ‎gal‏ أيضاء يمكن شطر الرابط في ظل ظروف اختزال (مثل رابط ثنائي كبريتيد ‎(disulfide linker‏ هناك مجموعة من روابط ثنائي الكبريتيد معروفة في المجال؛ بما في ذلك؛ على سبيل المثال؛ تلك التي يمكن تكوينها باستخدام ‎SATA‏ (ل1-سكسينيميديل -5-أسيتيل ثيو أسيتات) ‎SPDP ¢ (N-succinimidyl-S-acetylthioacetate)‏ (ل١-سكسينيميديل-3-(2-‏ 0 بيربديل داي ثيو)بروبيونات)» ‎SPDB‏ (ل١-سكسينيميديل‏ -3-(2-بيريديل داي ثيو)بيوتيرات) ‎SPDP (N-succinimidyl-3—(2-pyridyldithio)propionate)‏ و01 ‎-N)‏
سكسينيميديل- أوكسي كربونيل-ألفا-ميثيل - ألفا-(2-بيربديل-داي ثيو)تولوين)--لا) ‎SMPT‏ ‎succinimidyl-oxycarbonyl-alpha-methyl-alpha—(2-pyridyl-‏ ‎SPDB dithio)toluene)—‏ و ‎.SMPT‏ ‏5 كمثال غير حصري للروابط "غير القابلة للشغطر ‎'non—cleavable‏ أو "غير القابلة للاختزار ‎non‏ ‎Sa" reductible‏ ذكر المترافق المناعي ترستوزوماب ‎«(TDMI) (DMI - Trastuzumab‏ الذي يدمج ترستوزوماب بعامل علاج كيميائي مرتبط هو مايتانسين ‎.maytansine‏ ‏في نموذج مفضل» يمكن تحضير المترافق المناعي للاختراع بواسطة أي من الطرق المعروفة بواسطة المهرة في المجال على سبيل ‎(JU‏ وليس الحصرء 1) تفاعل مجموعة آلفة للنواة للجسم المضاد 0 مع كاشف رابط ثنائي التكافؤ متبوعا بتفاعل مع العامل السام للخلايا أو 2) تفاعل مجموعة آلفة للنواة ‎Jalal‏ سام للخلايا مع كاشف رابط ثنائي التكافؤ متبوعا بتفاعل مع المجموعة الآلفة للنواة للجسم المضاد . تتضمن المجموعات الآلفة للنواة على الجسم المضاد؛ على سبيل المثال وليس الحصر؛ مجموعات أمين عند الطرف ‎N-terminal amine N‏ ؛ مجموعات أمين عند السلسلة الجانبية؛ على سبيل
المثال ليسين ‎lysine‏ ¢ مجموعات ثيول ‎thiol‏ عند السلسلة الجانبية؛ سكر هيدروكسيل ‎sugar‏ ‎hydroxyl‏ أو مجموعات أمينو 801100 عندما يتم ربط بروتين ربط مولد الضد بالجليكوزيل ‎glycosylated‏ إن مجموعات الأمين ‎Amine‏ والثيول ‎thiol‏ وهيدروكسيل ‎hydroxyl‏ آلفة للنواة وقادرة على التفاعل لتكوين روابط تساهمية مع مجموعات آلفة للإلكترونات على شطور الرابط وكواشف الرابط ‎Lo‏ في ذلك؛ على سبيل المثال وليس الحصرء؛ إسترات فعالة مثل إسترات ‎esters‏ ‎(NHS‏ إسترات ‎(HOBt‏ مركبات هالوفورمات ‎haloformates‏ ؛ هاليدات الأحماض ‎acid‏ ‎halides‏ ¢ هاليدات ألكيل وبنزيل ‎alkyl and benzyl halides‏ مثل مركبات هالو أسيتاميد ‎haloacetamides‏ ؛ مركبات ألديهيد 5 ؛ كيتون ‎ketones‏ ؛ كريوكسيل ‎carboxyl‏ ‏¢ ومجموعات ماليإيميد ‎-maleimide‏ يمكن أن يتضمن الجسم المضاد مركبات ثنائي كبريتيد بين 0 السلاسل ‎ALE‏ للاختزال» بمعنى جسور سيستيين ‎bridges‏ 0/518106. يمكن أن يتم جعل الجسم المضاد متفاعلا لإقرانه بكواشف ‎Jad)‏ عن طريق معالجته بعامل اختزال ‎DTT Jie‏ (داي ثيول ثريتول ‎(dithiothreitol‏ بالتالي سيكوّن كل ‎jus‏ سيستيين»نظريا؛ مجموعتي ثيول تفاعليتين آلفتين للنواة. يمكن إدخال مجموعات إضافية آلفة للنواة في الجسم المضاد من خلال أي تفاعل معروف للمهرة في المجال. ‎Jog‏ سبيل المثال غير ‎celal‏ يمكن إدخال مجموعات ثيول تفاعلية إلى الجسم
5 المضاد عن طريق إدخال وحدة سيستيين بنائية ‎cysteine residues‏ أو أكثر. يمكن إنتاج مترافقات مناعية أيضا عن طريق تعديل الجسم المضاد لإدخال شطور آلفة للإلكترونات؛ حيث يمكنها التفاعل مع مجموعات استبدال غير آلفة للنواة على كاشف الرابط أو عامل سام للخلايا. يمكن أكسدة سكريات الجسم المضاد المرتبط لتكوين مجموعات ألديهيد أو كيتون يمكنها التفاعل مع مجموعة أمين كواشف الرابط أو العامل السام للخلايا. يمكن لمجموعات قاعدة شيف للإيمين ‎imine‏ ‎Schiff 5888 0‏ الناتجة أن تكوّن رابطة ثابتة أو يمكن اختزالها لتكوين روابط أمين ثابتة. في أحد ‎oz dail‏ فإن تفاعل ‎ela‏ من كريوهيدرات ‎(carbohydrate portion‏ جسم مضاد مرتبط بجليكوزيل ‎glycosylated‏ مع جالاكتوز أكسيداز ‎galactose oxidase‏ أو ميتا-فوق يودات الصوديوم ‎sodium meta—periodate‏ يمكن أن يؤدي إلى الحصول على مجموعات كربونيل ‎aldehyde agli) carbonyl‏ وكيتون ‎(ketone‏ في الجسم المضاد التي يمكن أن تتفاعل مع 5 مجموعات ملائمة على العقار. في أحد النماذج؛ يمكن أن تتفاعل الأجسام المضادة التي تحتوي
على وحدات سيرين ‎serine‏ أو ثريونين ‎threonine‏ بنائية عند الموضع ‎N‏ مع ميتا-فوق يودات الصوديوم ‎sodium meta—periodate‏ « بما يؤدي إلى إنتاج الديهيد ‎aldehyde‏ محل الحمض الأمينى ‎amino acid‏ الأول. في نماذج مفضلة معينة؛ يمكن أن تكون وحدة الرابط بالصيغة العامة التالية: ‎—-—Ta——Ww—--Yy-- 5‏ حيث: -1- تكون عبارة عن وحدة امتدادية؛ 8 تكون عبارة عن 0 أو 1؛ -//ا- تكون ‎Ble‏ عن وحدة حمض أميني؛ 10 ا تكون بشكل مستقل عبارة عن عدد صحيح يتراوح من 1 إلى 12؛ -7- تكون عبارة عن وحدة مباعدة؛ لا تكون عبارة عن 0؛ 1 أو 2. تقوم الوحدة التمددية (-1-)؛ ‎Laie‏ تكون موكمية؛ بريط الجسم المضاد بوحدة حمض ‎amino ual‏ ‎acid unit‏ (-//ا-). تتضمن المجموعات الوظيفية المفيدة ‎Al‏ تكون موكمية على الجسم المضادء بشكل ‎anh‏ أو عبر ‎dallas‏ كيميائية؛ سلهيدريل ‎sulfhydryl‏ ؛ أمينو؛ هيدروكسيل ‎chydroxyl‏ ‏مجموعة كربوهيدرات ‎carbohydrate‏ ؛ وكريوكسيل ‎carboxyl‏ والمجموعات الوظيفية المناسبة هي سلفهيدريل ‎sulfhydryl‏ وأمينو. ويمكن توليد مجموعات سلفهيدريل عن طريق اختزال روابط ثنائي كبريتيد داخل الجزيئات للجسم المضاد؛ إن جد. كبديل لذلك؛ يمكن توليد مجموعات سلفهيدريل بتفاعل مجموعة أمينو لشطر ليسين لجسم مضاد مع 2- إيمينو ثيولان أو كواشف توليد سلفهيدريل 0 أخرى. في نماذج معينة؛ يكون الجسم المضاد عبارة عن جسم مضاد ناتج عن عودة الاتحاد الجيني وبتم معالجته وراثيا لحمل واحدة أو أكثر من وحدات ليسين. وعلى نحو مفضل ‎ST‏ ¢ يمكن ‎dallas‏ ‏الجسم المضاد وراثيا لحمل واحدة أو أكثر من وحدات سيستيين ‎.(cf.
ThioMabs) Cysteines‏
في نماذج محددة؛ تكوّن الوحدة التمددية رابطة ذات ذرة كبريت بالجسم المضاد. يمكن اشتقاق ذرة الكبريت من مجموعة سلفهيدريل ‎sulfhydryl‏ (511--) لجسم مضاد مختزّل ‎.reduced antibody‏ في نماذج أخرى محددة؛ يتم ربط الوحدة التمددية بالجسم المضاد عبر رابطة ثنائي كبريتيد بين ذرة كبريت للجسم المضاد وذرة كبريت ‎sulfur atom‏ للوحدة التمددية.
في نماذج معينة أخرى؛ فإن المجموعة التفاعلية للوحدة التمددية تشتمل على موقع تفاعلي يمكن أن يكون متفاعلا مع مجموعة أمينو للجسم المضاد. يمكن لذلك أن تكون مجموعة الأمينو هي تلك الخاصة بأرجينين ‎arginine‏ أو ليسين ©7577ا. تتضمن المواضع التفاعلية مع الأمين المناسبة؛ على سبيل المثال وليس الحصرء؛ إسترات ‎Jie dade‏ إسترات سكسينيميد ‎succinimide esters‏ إسترات 4-نيترو فينيل ‎4-nitrophenyl esters‏ « إسترات بنتا فلورو فينيل
‎pentafluorophenyl esters 0‏ « مركبات أنهيدريد ‎anhydrides‏ « مركبات كلوريدات ‎chlorides‏ ‏أحماض» مركبات كلوريدات سلفونيل ‎sulfonyl chlorides‏ ؛ مركبات أيزو سيانات ‎isocyanates‏ ‏؛ ومركبات أيزو ثيو سيانات ‎.isothiocyanates‏ ‏في سمة أخرى أيضاء تتضمن الوظيفة التفاعلية للوحدة الامتدادية موقعا تفاعليا حيث يتفاعل مع مجموعة كربوهيدرات معدلة يمكن أن توجد على الجسم المضاد. في نموذج معين؛ يتم معالجة الجسم 5 المضاد بالجليكوزيل إنزيميا لتوفير شطر كربوهيدرات. يمكن أن يتم أكسدة الكربوهيدرات ‎oxidized‏ ‏0138 بصورة خفيفة بواسطة ‎sale‏ كاشفة ‎Jie‏ فوق يودات الصوديوم ‎sodium‏ ‎(Sag periodate‏ أن يتم تكثيف وحدة الكربونيل الناتجة من الكربوهيدرات المؤكسّدة بواسطة وحدة امتدادية تحتوي على ‎de gene‏ وظيفية ‎Jie‏ هيدرازيد ‎hydrazide‏ ؛ أوكسيم ‎oxime‏ ؛ أمين تفاعلى ‎reactive amine‏ ؛ هيدرازين ‎of » hydrazine‏ نصف كربازيد ‎thiosemicarbazide‏ « هيدرازين 0 كربوكسيلات ‎hydrazine carboxylate‏ » أو أريل هيدرازيد ‎.arylhydrazide‏ ‏تريط وحدة الحمض الأمينى ‎amino acid unit‏ (-//-) الوحدة الامتدادية ‎stretcher unit‏ -) (-1 بوحدة المباعدة ‎Spacer unit‏ (-7-) إذا كانت وحدة المباعدة موكمية؛ وتريط الوحدة الامتدادية بالعامل السام للخلايا إذا كانت وحدة المباعدة غير موكمية ‎.spacer unit is absent‏
-70= وكما ذكرنا أعلاه؛ يمكن أن تكون ‎~Ww—‏ عبارة عن ببتيد ‎any + dipeptide SU‏ ثلاثى ‎tripeptide‏ ¢ ببتيد ‎tetrapeptide cb)‏ ؛ ببتيد ‎pentapeptide uli‏ ؛ ببتيد سدادسى ‎hexapeptide‏ ؛ ببتيد سباعى ‎heptapeptide‏ ؛ ببتيد ثمانى ‎octapeptide‏ ؛ ببتيد تساعى 06 +؛ ببتيد عشاري ‎decapeptide‏ ؛ ‎any‏ أحد عشري ‎cundecapeptide‏ أو ببتيد اثنى عشري ‎.dodecapeptide unit‏ في بعض النماذج؛ يمكن أن تشتمل وحدة الحمض الأميني على وحدات حمض أميني ‎ily‏ على سبيل المثال وليس الحصرء ألانين ‎alanine‏ ¢ قالين ‎valine‏ ؛ لوسين ‎leucine‏ ؛ أيزو لوسين ‎isoleucine‏ ؛ ميثبونين ‎methionine‏ ؛ فينيل ألانين ‎phenylalanine‏ » تريبتوفان ‎tryptophan‏ ‏» برولين ‎proline‏ » ليسين محمية باسيتيل ‎lysine protected with acetyl‏ أو فورميل ‎formyl‏ ‏0 + أرجينين ‎arginine‏ » أرجينين ‎arginine‏ محمية بمجموعة توسيل ‎tosyl‏ أو نيترو ‎Nitro‏ ‏هيستيدين ‎histidine‏ ¢ أورنيقين ‎ornithine‏ ؛ أورنيقين محمية باسيتيل ‎acetyl‏ أو فورميل ‎formyl‏ ‏وسيترولين ‎(citrulline‏ وتشمل مكونات رابط الأحماض الأمينية المناسبة على نحو مفضل على ببتيد ثنائى ‎dipeptide‏ ؛ ببتيد ‎tripeptide DUG‏ ؛ ببتيد ‎tetrapeptide cb)‏ ويبتيد خماسى ‎.pentapeptide‏ ‏5 تتضمن أمثلة للببتيدات الثنائية: ‎Val-Cit, Ala-Val, Ala—Ala, Val-Ala, Lys—-Lys, Cit—‏ ‎Cit, Val-Lys, Ala-Phe, Phe-Lys, Ala-Lys, Phe-Cit, Leu-Cit, |٠620], Trp-‏ ‎.Cit, Phe-Ala, Phe—-N9-tosyl-Arg, Phe—N9-Nitro-Arg.‏ تتضمن أمثلة للبتيدات الثلاثية: ‎Val-Ala-Val, Ala-Asn-Val, Val-Leu-Lys, Ala-Ala—‏ ‎.Asn, Phe-Phe-Lys, Gly-Gly-Gly, D-Phe—-Phe-Lys, Gly-Phe-Lys‏ تتضمن أمثة للبتيدات الرباعية: ‎Gly-Phe-Leu-Gly‏ (رقم تعريف المتوالية 53(« ‎Ala-Leu—‏ ‎Ala-Leu‏ (رقم تعريف المتوالية 54) تتضمن أمثلة للبتيدات الخماسية: ‎Pro-Val-Gly-Val-Val‏ (رقم تعريف المتوالية 55).
— 1 7- إن وحدات الحمض الأمينى البنائية التى تشتملعلى مكون رابط حمض أمينى تتضمن الأحماض الأمينية الطبيعية فضلا عن الأحماض الأمينية الضئيلة ونظائر الحمض الأمينى غير الطبيعية؛ مثل سيترولين. يمكن تعيين مكونات رابط الحمض الأميني وتحسينها من حيث انتقائيتها للشطر الإنزيمي بواسطة إنزيم محدد؛ على سبيل المثال» بروتياز مرتبط بورم ‎tumor-associated‏ ‎protease 5‏ « كاثيبسين ‎cathepsin‏ 8 و© و0 أو ‎edu‏ بروتياز ‎plasmin protease‏ .
يمكن أن يتم شطر وحدة الحمض الأميني للرابط إنزيميا بواسطة إنزيم على سبيل المثال وليس
الحصر بروتياز مرتبط بالورم لتحرير العامل السام للخلايا. يمكن تعيين وتحسين وحدة الحمض الأميني من ‎Cus‏ انتفائيتها للشطر الإنزيمي بواسطة بروتياز معين مرتبط بورم. والوحدات المناسبة هي تلك التي يتم تحفيز شطرها بواسطة إنزيمات بروتياز
0 وكاثبسين 8 و © ونا وبلازمين ‎plasmin‏ ‏تريط وحدة المباعدة ‎spacer unit‏ (-7-) ؛ عند وجودهاء وحدة حمض ‎amino acid unit il‏ بالعامل السام للخلايا. وتنقسم وحدات المباعدة إلى نوعين رئيسيين: منتحرة ذاتية وغير منتحرة ذاتيا . وتُعد وحدة المباعدة غير المنتحرة ذاتيا ‎Sle‏ عن وحدة يبقى ‎en‏ منها أو كلها مرتبطا بالعامل السام للخلايا بعد الشطر الإنزيمى لوحدة حمض أمينى من المترافق المناعى. تتضمن أمثلة لوحدة مباعدة
غير منتحرة ذاتياء على سبيل المثال وليس الحصر؛ وحدة مباعدة (جليسين-جليسين -76106ا9 0/06 ) ووحدة مباعدة جليسين ‎unit bond‏ 970106-009. ولإطلاق العامل السام للخلاياء يقع تفاعل انحلال مائي مستقل في الخلية المستهدفة لشطر رابطة وحدة الجليسين-العقار. في أحد النماذج» هناك وحدة مباعدة غير منتحرة ‎non self-immolative the spacer Lil‏ ‎unit‏ (-7-) هي -لاا-.
0 في أحد النماذج؛ يتفقر المترافق المناعي إلى وحدة مباعدة ‎spacer unit‏ (لا = صفر). كبديل ذلك؛ يمكن لمترافق مناعي يحتوي على وحدة مباعدة منتحرة ذاتيا أن يطلق العامل السام للخلايا بدون الحاجة إلى خطوة انحلال ‎Ale‏ منفصلة. في هذه النماذج؛ تعبر -7- عن كحول م-أمينو بنزيل ‎(PAB) p—aminobenzyl alcohol‏ ترتبط ب -/0//ا- عبر ذرة النيتروجين ‎nitrogen‏
0 لمجموعة ‎(PAB‏ والمتصلة مباشرةً ب ‎—D‏ عبر مجموعة كريونات ‎carbonate‏ ؛ كريامات ‎carbamate‏ أو ‎.ether jij‏ تتضمن أمثلة أخرى للمباعدات المنتحرة ذاتياء على سبيل المثال وليس الحصرء مركبات عطرية ‎aS‏ إلكترونيا ‏ المجموعة . ‎lide fie PAB‏ 2-أمينو إيميدازول-5-ميثانول -2 ‎aminoimidazol-5-methanol 5‏ ومركبات أورثو ‎ortho‏ أو بارا-أمينو بنزيل أسيتال ‎para—‏ ‎aminobenzylacetals‏ يمكن استخدام المباعدات ‎all‏ تخضع لتحويل سهل إلى صيغة حلقية عند الانحلال المائى لرابطة ‎cae)‏ على سبيل المثال مركبات أميد لحمض 4- أمينو بيوتيريك -4 ‎aminobutyric acid amides‏ بها استبدال ‎«gag‏ وبشكل ملائم أنظمة حلقية ثنائية الحلقات [2؛ 2؛ 1] وثنائية الحلقات [2؛ 2؛ 2] وأميدات لحمض 2- أمينو فينيل بروبيونيك ‎bicyclo[2.2.2]‏ ‎.ring systems and 2-aminophenylpropionic acid amides 0‏ في نموذج بديل؛ تكون وحدة المباعدة ‎Ble‏ عن وحدة بيس(هيدروكسي ميثيل)ستيرين ‎bis(hydroxymethyl)styrene‏ متفرعة وحيث يمكن استخدامها لتضمين عوامل سامة للخلايا إضافية. إن تحميل العقار المشار إليه أيضا باسم نسبة العقار إلى الجسم المضاد 8110 ‎Drug-Antibody‏ ‎(DAR) 5‏ هو متوسط ‎sxe‏ العقاقير ‎average number‏ (ا08 لكل عامل ربط خلايا ‎cell binding‏ ‎.agent‏ ‏فى حالة النمط المتمائل ‎19G2‏ للجسم المضاد؛ عندما يتم ربط العقاقير بوحدات سيستيين بعد اختزال الجسم المضاد الجزئي؛ يمكن أن يتراوح تحميل العقار من 1 إلى 8 عقاقير ‎drugs‏ (0) لكل جسم ‎(alae‏ بمعنى أكثر تحديدا + حيث يتم ربط 1 » 3 4 5 6 7 و8 شطور عقار بالجسم 0 المضاد تساهميا. تتضمن تركيبات ‎ADC‏ مجموعات من عوامل ربط ‎(DAD‏ على سبيل المثال مضادات حيوية ‎antibodies‏ مترافقة مع مجموعة من العقاقير» من 1 إلى 8 أو من 1 إلى 12.
عندما يتم ربط العقاقير بمركبات ليسين» يمكن أن يتراوح تحميل العقار من 1 إلى 80 عقار ‎(D)‏ ‏لكل جسم مضاد للخلية برغم أنه يمكن تفضيل حد أعلى من 40 أو 20 أو 10 أو 8. تتضمن تركيبات ‎ADC‏ مجموعات من عوامل ربط ‎(WDA‏ على سبيل المثال» أجسام مضادة»؛ مترافقة مع مجموعة من العقاقير من 1 إلى 80؛ 1 إلى 40؛ 1 إلى 20؛ 1 إلى 10 أو 1 إلى 8.
يمكن تحديد متوسط عدد العقاقير لكل جسم مضاد في مستحضرات من ‎ADC‏ من تفاعلات ترافق بواسطة الوسائل التقليدية. يمكن أيضا تحديد التوزيع الكمي ل ‎ADC‏ من حيث نسبة العقار. بالنسبة لبعض مترافقات الجسم المضاد والعقار» يمكن تحديد نسبة العقار بعدد مواضع الارتباط على الجسم المضاد. على سبيل المثال؛ يمكن لجسم ‎alias‏ أن يتضمن واحدة أو أكثر من مجموعات سيستيين ثيول فقط أو يمكن أن يتضمن فقط واحدة أو أكثر من مجموعات ‎Job‏ تفاعلية بشكل كاف حيث
0 يمكن ربط رابط من خلالها. يمكن أن يتسبب تحميل العقار المرتفع؛ على سبيل المثال نسبة عقار أكبر من 5؛ في حدوث تكتل؛ انعدام ذويانية؛ سمية؛ أو فقدان النفاذية الخلوية لمترافقات معينة من الجسم المضاد والعقار. تتضمن أجسام مضادة معينة مركبات ثنائي كبريتيد قابلة للاختزال داخل السلاسل؛ بمعنى أكثر تحديدا جسور سيستيين. يمكن جعل أجسام مضادة تفاعلية من أجل ترافقها مع كواشف رابط بمعالجتها 5 بعامل مختزل ‎DTT (hie‏ (داي ثيول ثربتول ‎(dithiothreitol‏ بالتالي سيكؤن كل جسر سيستيين»نظرياء مجموعتي ثيول تفاعليتين ‎all‏ للنواة. يمكن إدخال مجموعات إضافية آلفة للنواة في الجسم المضاد من خلال تفاعل وحدات الليسين مع 2 إيمينو ثيولان (كاشف تراوت ‎Traut’s‏ ‎(reagent‏ بما يؤدي إلى تحويل أمين إلى ثيول. يمكن إدخال مجموعات ثيول تفاعلية إلى الجسم المضاد (أو شظية منه) عن طريق معالجة واحدة أو اثنتين أو ثلاث أو أريع وحدات سيستيين بنائية 0 أو أكثر وراثيا (على سبيل المثال تحضير أجسام مضادة طافرة تتضمن واحدة أو أكثر من وحدات حمض السيستيين الأميني غير الأصلية).وتخبرنا البراءة الأمريكية رقم 7521541 بمعالجة أجسام مضادة ‎Lig‏ بإخال أحماض سيستيين أمينية تفاعلية ‎reactive cysteine amino acids‏ يمكن معالجة أحماض السيستيين الأمينية وراثيا عند مواقع تفاعلية في جسم مضاد ولا تكوّن روابط ثنائي كبريتيد بين السلاسل أو الجزيئات ) ‎Junutula, et al., 20085 Nature Biotech.,‏
‎Dornan et al (2009) Blood 114(13):2721-2729; US‏ ;26(8):925-932 ‎US 7723485; WO2009/052249‏ ;7521541( يمكن أن ‎delim‏ مركبات سيستيين ثيول المعالجة الوراثيا بكواشف رابط أو كواشف العقار -الرابط وفقا للاختراع الحالي التي تتضمن مجموعات آلفة للإلكترونات متفاعلة مع ثيول ‎Jie‏ ماليإيميد أو ألفا-هالو أميد لتكوين ‎ADC‏ مع أجسام مضادة معالجة وراثيا بسيستيين وشطور عقار ‎(PBD‏ يمكن بالتالي تعيين موقع شطر العقار؛ التحكم فيه ومعرفته. يمكن التحكم في تحميل العقار نظرا ‎OF‏ مجموعات سيستيين ثيول ‎cysteine thiols‏ المعالجة وراثيا تتفاعل عادة ما كواشف رابط متفاعلة مع ثيول أو كواشف عقار -رابط بحصيلة عالية. إن معالجة جسم مضاد 06ا وراثيا لإدخال حمض سيستيين أميني باستبدال في موقع مفرد على السلسلة الثقيلة أو الخفيفة يعطي وحدتي سيستيين جديدتين على الجسم المضاد التماثلي. يمكن
0 تحقيق تحميل عقار قرب 2 بتجانس مشابه لمنتج الترافق ‎ADC‏ ‏بالإضافة إلى ذلك يتعلق الاختراع أيضا بمترافق مناعي أو مترافق جسم مضاد-عقار طبقا لما يتم وصفه للاستخدام كدواء . بالإضافة إلى ذلك» يتعلق الاختراع أيضا بمترافق مناعي أو مترافق جسم مضاد-عقار طبقا لما يتم وصفه أعلاه للاستخدام في علاج السرطان.
5 يتعلق الاختراع بمترافق مكون من جسم مضاد وعقار طبقا لما تم وصفه أعلاه للاستخدام كدواء. في نموذج محدد؛ يتعلق الاختراع بمترافق مكون من جسم ‎alias‏ وعقار طبقا لما تم وصفه أعلاه للاستخدام كعلاج للسرطان. في نموذج أكثر تحديدا؛ يتعلق الاختراع بمترافق مكون من جسم مضاد وعقار طبقا لما تم وصفه أعلاه للاستخدام في علاج سرطان يعبر عن ‎IGF-IR‏ أو أنواع سرطان ترتبط ب ‎IGF-1R‏ .
تتضمن أنواع السرطان المرتبطة ب ‎WIS IGF-IR‏ ورمية تعبر ن أو تعبر بإفراط عن جزءٍ أو كل 16-1 عند السطح. وبشكل أكثر تحديداء أنواع السرطان المذكورة هي: الثدي ‎breast‏ ؛ القولون ‎colon‏ ؛ كارسينوما المريء ‎esophageal carcinoma‏ ؛ الكبد ‎hepatocellular‏ ؛ المعدة ‎gastric‏ « الورم الدبقي 38 + الرئة ‎lung‏ ¢ سرطان الجلد ‎melanoma‏ ؛ كارسينوما عظمية ‎osteosarcoma‏ ؛
المبيض | ‎«ovarian‏ البروستاتا ‎«prostate‏ ساركوما العضلات المخططة uterine ‏سرطان بطانة الرحم‎ « thyroid ‏الغدة الدرقية‎ « renal ‏الكلى‎ « rhabdomyosarcoma
‎cendometrial cancer‏ وأية ظواهر مقاومة للعقاقير.
‏في ‎dau‏ أخرى؛ يتعلق الاختراع الحالي بمترافق مكون من جسم مضاد وعقار طبقا لما تم وصفه
‏5 أعلاه لعلاج سرطان يعبر عن ‎JAGF-1R‏
‏تتعلق سمة أخرى للاختراع بتركيبة صيدلانية تشتمل على جسم مضاد وفقا للاختراع أو مترافق مكون
‏من جسم مضاد وعقار أو مترافق مناعي طبقا لما هو مبين في الوصف.
‎(<a,‏ أكثر ‎daa‏ يتعلق الاختراع بتركيبة صيدلانية تشتمل على جسم مضاد وفقا للاختراع أو
‏مترافق جسم مضاد-عقار؛ أو المترافق المناعي الموصوف أعلاه وسواغ و/أو مادة ناقلة مقبولة 0 صيدلانيا على الأقل.
‏يتعلق الاختراع بتركيبة صيدلانية تشتمل على الجسم المضاد أو مترافق الجسم المضاد-العقار
‏الموصوف أعلاه؛ وسواغ و/أو مادة ناقلة مقبولة صيدلانيا على الأقل.
‏في الوصف الحالي؛ من المقرر أن يشير التعبير ‎sald‏ ناقلة مقبولة صيدلانيا" أو 'سواغ” إلى مركب
‏أو توليفة من المركبات التي تدخل في تركيبة صيدلانية دون إثارة تفاعلات ثانوية والتي تسمح على سيل المثال بتسهيل إعطاء المركب (المركبات) الفعالة؛ زيادة عمرها و/أو فعاليتها في الجسم؛ زيادة
‏ذويانيتها فى المحلول أو خلاف ذلك تحسين فى الاحتفاظ بها. إن المواد الناقلة والسواغات المقبولة
‏صيدلانيا معروفة جيدا وسيتم استخدامها بواسطة المهرة في المجال كدالة لطبيعة ووضع إعطاء
‏المركب (المركبات) الفعالة المختارة.
‏من المفضل أن يتم إعطاء المترافقات المناعية عبر المسار الجهازي؛ بشكل محدد بالمسار الوربدي؛ 0 في العضل؛ في الجلدء في الغشاء ‎(agin)‏ أو تحت الجلدء أو عن طريق الفم. بطريقة أكثر
‎. ‏؛ سيتم إعطاء التركيبة التي تشتمل على المترافقات المناعية عدة مرات على التتابع‎ radi
يمكن تحديد أوضاع إعطائها والجرعات والصور الصيدلانية المثالية وفقا للمعايير التي 3385 بصفة عامة في الاعتبار خلال تحديد علاج يُعطى لمريض ‎Jie‏ عمره ووزنه؛ شدة حالته/حالتها العامة مدى تقبل العلاج والتأثيرات الثانوية التي يتم ملاحظتها. في سمة أخرى 13 يتعلق ‎f‏ لاختراع الحالي بتركيبة صيد لانية تشتمل على جسم مضاد وفقا للاختراع أو مترافق مكون من جسم مضاد ‎«lies‏ أو المترافق المناعي الموصوف أعلاه وسواغ على الأقل و/أو ‎sale‏ ناقلة مقبولة صيدلانيا للاستخدام في علاج السرطان. في سمة أكثر ‎danas‏ يتعلق الاختراع الحالي بتركيبة صيدلانية تشتمل على جسم مضاد وفقا للاختراع أو مترافق مكون من جسم مضاد وعقارء أو المترافق المناعي الموصوف أعلاه وسواغ و/أو مادة ناقلة مقبولة صيدلانيا على الأقل للاستخدام في علاج سرطان يعبر عن ‎AGF-1R‏ ‏10 يتعلق ‎f‏ لاختراع أيضا بطريقة لعلاج سرطان لدى مريض ‘ ‎JS‏ محدد لعلاج سرطان يعبر عن ‎(IGF-1R‏ حيث تشتمل على إعطاء الخاضع للعلاج المذكور كمية فعالة من مترافق مكون من جسم مضاد وعقار على الأقل وفقا للاختراع. يتعلق الاختراع الحالي أيضا بطريقة لعلاج السرطان لدى خاضع للعلاج؛ ‎Jug‏ محدد لعلاج سرطان يعبر عن ‎Cus (IGF-1R‏ تشتمل على إعطاء 5 في أحد النماذج» يتعلق الاختراع الحالي بطريقة لتوصيل عقار أو دواء إلى خلية سرطان تعبر عن ‎IGF-IR‏ إلى خاضع للعلاج؛ حيث تشتمل على إعطاء الخاضع للعلاج المذكور كمية فعالة من مترافق مكون من تركيبة صيدلية وفقا للاختراع وتركيبة صيدلية وفقا للاختراع. تظهر الخصائص والمزايا الأخرى للاختراع في متابعة وصف الأمثلة والأشكال التي يتم تفسيرها فيما
شرح مختصر للرسومات الشكل 1: أمثلة لمنحنى ربط ‎Biacore‏ الذي تم الحصول عليه بثلاث أجسام مضادة على ‎hIGF-‏ ‎IR ECD‏ المحتجز بواسطة الجسم المضاد ل ‎His Tag‏
الشكل 2: مخطط تعيين ‎dad‏ لاصقة من مجموعة الأجسام المضادة الخمسة عشرة أحادية النسيلة ل 0167-4 التي حددت 5 مجموعات لقمم لاصقة. لا يرتبط عدد المجموعات بموضع بخصوص المتوالية أو البنية ثلاثية الأبعاد لمولد الضد. الأشكال 13 إلى 3ج: جسم مضاد يرتبط ب 16-114 الأصلي البشري بواسطة تحليلات ‎(FACS‏ ‏5 يبين الشكل 13 منحنى المعايرة؛ على سلالة خلايا 7= ‎(MCF‏ للجسم المضاد ‎IGF=1R Ab‏ الخيمري الممثل لكل مجموعة تجميع قمة لاصقة. ويمثل ‎MFI‏ متوسط شدة الفلورة ‎represents the mean‏ ‎of fluorescent intensity‏ . ويمثل الشكل دب ‎dad‏ 050 لكل من الأجسام لمضادة ل ‎IGF-‏ ‏1 الفأرية والخيمرية على سلالة خلايا 0]7-7/ا. ويمثل الشكل 3ج ‎Bmax des‏ للأجسام المضادة ل ‎IGF-1R‏ الخيمرية على سلالة خلايا ‎MCF-7‏ ‏0 الشكلان 14 وإ4ب: تقييم التعرف على ‎hIGF-1R‏ باستخدام ‎WIA‏ محورة وراثيا مقابل خلايا غير محورة وراثيا. يمثل الشكل 14 منحنيات معايرة للجسم المضاد ل ‎Ab‏ 167-11 الخيمري لكل مجموعة تجميع قمة لاصقة على سلالة خلايا ‎IGF-1R+‏ . ويمثل ‎MFI‏ متوسط شدة الفلورة. ويمثل الشكل ب ربط الجسم المضاد ل ‎IGF-1R Ab‏ الخيمري لكل مجموعة تجميع قمة لاصقة على سلالة خلايا ‎.IGF-1R-‏ ويمثل ‎MFI‏ متوسط شدة الفلورة. الشكلان 14 وكب: تقييم نوعية ‎Abs‏ إلى ‎hIGF-1R‏ مقابل ‎hIR‏ باستخدام الخلايا المحورة وراثيا . يبين الشكل 15 ربط الجسم المضاد ل ‎IGF=1R Ab‏ الفأري على الخلايا المحورة وراثيا .+714 يبين الشكل 5 ب ربط الجسم المضاد ل ‎Ab‏ 167-18 الخيمري على سلالة الخلية ‎IR+.‏ يمثل ‎MFI‏ ‏متوسط شدة الفلورة. في اللوحتان (أ) و(ب)؛ تم إدخال الجسم المضاد ل ‎hIR‏ المتوفر تجاريا الموصوف ‎(Calbiochem) aul‏ 6405 كعينة مقارنة موجبة. 0 الشكل 6: ربط الجسم المضاد ل ‎IGF-1R Ab‏ الفأري على سلالة خلايا ‎.IM=9‏ يمثل ١17/ا‏ متوسط شدة الفلورة. تم إدخال ‎GROS 801-0154 Mab‏ كعينة مقارنة موجبة. الأشكال 7 و7ب؛ و7ج: تقييم التعرف على ‎IGF-1R‏ من نسناس. يبين الشكل 17 منحنيات معايرة لجسم ‎alias‏ واحد ل ‎IGF-1R Ab‏ الخيمري الممثل لكل مجموعة تجميع قمة لاصقة على سلالة خلايا 6005-7. يمثل ‎MFI‏ متوسط شدة الفلورة. يبين الشكل 7ب قيمة 5050 للأجسام
المضادة ‎IGF-IR‏ الفأرية والخيمرية على حد سواء على سلالة ‎Wa‏ 005-7. يبين الشكل 7ج ‎das‏ 5050 للأجسام المضادة ‎IGF-IR‏ الخيمرية على الخلايا المتحورة وراقيا ‎hIGF-1R+‏ ‏وسلالة خلايا 6085-7 على حد سواء . تم إدخال ‎GR11L (Calbiochem)‏ كعينة مقارنة موجبة. الشكل 8: مقارنة ربط ‎c208F2‏ على ‎hIGF-1R ECD‏ أو ‎IGF-IR ECD‏ من نسناس الرياح باستخدام اختبار ©818001. مخططات حساس تم الحصول عليها على ‎Biacore X100‏ بناء على تقنية ‎SPR‏ باستخدام شريحة حساس ‎CMS‏ التي تم تنشيطها باستخدام أكثر من 11000 لجسم مضاد ل ‎Tag His‏ المطعّم كيميائيا بمصفوفة كربوكسي ميثيل ديكستران. يتم إجراء التجربة بمعدل تدفق يبلغ 30 ميكرو لتر/دقيقة عند 25 درجة مئوية باستخدام ‎HBS-EP+‏ في صورة منظم تخفيف التجرية والعينات. يبين الشكل تراكب 4 مخططات استشعار مستقلة متحاذية على المحور السيني
0 في بداية الحقنة الأولى لنواتج التحليل وعلى المحور الصادي بواسطة الخط القاعدي المحدد قبل الحقنة الأولى هذه. يتم استخدام أشكال المعيّن لوسم مخططات الاستشعار التي تم الحصول عليها باحتجاز المتوالية البشرية ل ‎IGF-1R‏ القابل للذويان الناتج عن عودة الاتحاد الجيني. يتم استخدام مثلثات لوسم مخططات الاستشعار التي تم الحصول عليها باحتجاز متوالية 6-11[ القابل للذويان الناتج عن عودة الاتحاد الجيني المأخوذة من نسناس الرياح. تناظر الرموز البيضاء الحلقات الفارغة
5 (5 حقن لمحلول منظم التجرية) وتناظر الرموز السوداء الحقن ذات المدى المتنامي للتركيزات ‎c208F2‏ )5< 10 20« 40 و80 نانو مولار). الشكل 9: تقييم التأثير الأصلي للأجسام المضادة ل 0165-11 على فسفرة المستقبل مقارنة ب ‎IGF1‏ ‏الشكل 10: تثبيط فسفرة 165-11 استجابة ل ‎IGF1‏ بواسطة ‎hIGF-1R‏ الفأري.
0 الشكل 11: يتم إنقاص ارتباط الأجسام المضادة ل 165-18 عند سطح الخلية نقصا تدريجيا عند 37 درجة مئوية. تم حضانة خلايا ‎MCF=7‏ عند 4 درجة مثوبة أو 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات باستخدام 10 ميكرو جرام/مللي لتر من كل ‎Ab‏ يمثل الشكل ‎AMF‏ ‏الأشكال 112 و12ب: انحلال سطح الجسم المضاد. تم تقييم الجسم المضاد المرتبط عند سطح الخلية بعد 10 ¢20 30 60 و120 دقيقة عند 37 درجة مئوية. يمثل الشكل 112 النسبة المئوية
ل ‎IGF-IR‏ المتبقى ‎Lee‏ بشدة الإشارة المقاسة عند 4 درجة مئوية. يمثل الشكل 12ب حساب ‎jee‏ النصف باستخدام برنامج 0115075 وباستخدام مواءمة الانحلال الأسي. الشكل 13: الخصائص الحركية لامتصاص الجسم المضاد الذي تم تقييمها بواسطة تحليل ‎FACS‏ ‏تم حضانة الخلايا باستخدام 10 ميكرو جرام/مللي لتر من الأجسام المضادة الفأرية لمدة صفرء 30 أو 60 دقيقة عند 37 درجة مثوية . تم نفاذية الخلايا أو عدمها وحضائتها باستخدام جسم مضاد ل ‎IgG-Alexa 488‏ فأري. يناظر الغشاء نفاذية 10/0 لشدة الإشارة. إن الاستجابة الإجمالية لشدة الإشارة بعد نفاذية الخلايا والسيتويلازم تناظر الجسم المضاد ‎AD‏ الممتص. يتم وصف اسم كل جسم مضاد تم تقييمه أعلى كل رسم بياني. الأشكال 14 و14ب: تصوير امتصاص 0. ‎Jal‏ 14ا: تم حضانة خلايا 1105-7 باستخدام ‎M208F2 0‏ لمدة 20 دقيقة عند 4 درجة مئوية وتم غسلها قبل ‎Lilian‏ [أ)] عند 37 درجة مئوية لمدة 15 [ب)]» 30 [ج)] و60 [د)] دقيقة. تم تثبيت الخلايا ونفاذيتها. تم الكشف عن ‎M208F2‏ ‎Ab‏ باستخدام ‎IgG Alexad88‏ الفأري وتم الكشف عن 8000-1 باستخدام الجسم المضاد ل 2000-1 من أرنب وباستخدام 555 ‎Alexa‏ 6والثانوي من الأرنب. الشكل 14ب (الجزء 1 من 3) تم حضانة الخلايا ‎sad MCF-7‏ 30 دقيقة عند 37 درجة ‎dogie‏ باستخدام الجسم المضاد 5 الفأري 0167-16 الآخر ليتم اختباره ثم صبغه كما هو مبين أعلاه. تم تحديد التموضع المشترك باستخدام خاصية تحديد التموضع المشترك ببرنامج ل ‎Image‏ ‏الشكل 5 1 . تضمين مسار جسيم حال في اتنحلال الجسم المضاد . الشكل 16 : تقييم ‎J‏ لأجسام المضادة الفأرية 016-14 عند رقم هيدروجينى ‎pH‏ مختلف ‎٠‏ تم تقييم قيم 5 لارتباط الأجسام المضادة المختلفة على ‎MCF-7 Wa‏ باستخدام محلول منظّم ذي رقم 0 هيدروجيني مختلف يتراوح من 5 إلى 8. الشكل 17: يعمل تقييم قدرة الأجسام المضادة ‎IGF-IR Abs‏ المحددة على الحث على السمية الخلوية في اختبار ‎.Fab-ZAP‏ أ) تم حضانة الخلايا ‎MCF=T7‏ بتركيزات متزايدة من الأجسام المضادة ‎IGF-IR‏ الخيمرية في توليفة مع طقم ‎Fab-ZAP‏ . تم قياس عيوشية ‎WAN‏ باستخدام
-8)0-
اختبار عيوشية ‎WAN‏ المتألق ‎CellTiter-Glo®‏ . تم استخدام الجسم المضاد الخيمري 0964
كجسم ‎alias‏ غير ذي صلة. ب) قيم 1050 من النتائج المبينة في أ).
الشكل 18: علاقة الارتباط بين 1) الفعالية السامة ‎(WDA‏ 2) تأثير الرقم الهيدروجيني على ربط
‎«Ab/IGF-1R‏ 3) تأثير ‎Abs‏ على فسفرة ‎IGF-IR‏ المستحثة ب 1-]6)؛ و4) تجميع الجسم
‏5 المضاد.
‏الأشكال 118 إلى 19د: يتسم الربط بالصورة الأولى المتوافقة مع البشر لذ ‎.C208F2‏ تم تقييم
‏خصائص ‎hall‏ ل ‎hz208F2 VH3/VL3 mAb‏ على سلالة الخلية البشرية ‎MCF=7‏ (الشكل
‏119(« على سلالة ‎WA‏ النسناس 605-7 (الشكل 19ب) وعلى سلالة الخلايا الفأرية المحورة
‏وراثيا التي تعبر عن مستقبل الإنسولين البشري (الشكل 19ج). تم تقييم ريط كل من الجسمين 0 المضادين ‎MAbs‏ 20872 الفأري والخيمري بالتوازي. تم استخدام نسيلة الجسم المضاد لذ ‎208F2‏
‎GROS a5 mAbs‏ لتأكيد التعبير عن ‎hIR‏ على سلالة الخلية المحورة وراثيا (الشكل 19د).
‏الأشكال 120 إلى 20د: سلامة ‎ELISA‏ لجسم مضاد متعدد النسائل ‎AF305-NA‏ تم استخدامه
‏لاختبارات ‎IHC‏ الشكل 20): الارتباط ب 0167-11 الشكل 20ب: الارتباط ب ‎IR‏ البشري الناتج
‏عن عودة الارتباط الجينى. عدم التعرف على ‎IR WIR EDC‏ الخلوي الذي تم التعبير ‎die‏ بواسطة الخلايا المحورة وراثيا (الشكل 20د) مقارنة بعينة المقارنة 68505 ‎Ab‏ على الخلايا المحورة ‎Lily‏
‎hiR‏ (الشكل 20ج).
‏الشكل 21: سلامة صبغ ‎hIGF-1R‏ على أقسام ‎FFPE‏ من طعوم خارجية تعبر عن مستويات
‏عديدة من ‎hIGF-1R‏ تم إدخال 157461 كعينة مقارنة سالبة.
‏الأشكال 122 و22ب: تقييم التعبير عن 1165-11 على أقسام نسيجية ‎FFPE‏ عادية. تم استخدام 0 أقسام المشيمة كعينة مقارنة موجبة للأنسجة العادية بينا تم إدخال طعوم نسيجية خارجية ورمية موجبة
‏فى كل تشغيلة لمعايرة التعبير عن 5167-11.
‏الشكل 23: تقييم التعبير عن ‎hIGF-1R‏ على أقسام أنسجة ‎FFPE‏ ا50ل2. ‎apf‏ حالات ممثلة
‏للصبغ القوي تم ملاحظتها في اللوحة الكبيرة للأنسجة التي تم تحليلها.
— 1 8- الشكل 24: تقييم التعبير عن ‎hIGF-1R‏ على أقسام أنسجة ‎FFPE‏ سرطان الثدي. تم ملاحظة ثلاث حالات ممثلة للصبغ القوي في اللوحة المختبرّة للأنسجة التي تم تحليلها. الشكل 25: تقييم التعبير عن 1657-11 على أقسام نسيج ‎FFPE‏ من الأورام المختلفة. الشكل 26: تراكب مخططات استشعار تم الحصول عليها باستخدام جهاز ‎Biacore X100‏ أساسه ‎SPR 5‏ عند درجة حرارة 25 درجة مئوية باستخدام شريحة مستشعر ‎CMS‏ تم تنشيطها على كل من خلايا التدفق ب 12.000 وحدة استجابة لأجسام مضادة أحادية النسيلة ‎TagHis‏ فأرية مطعمة كيميائيا بمصفوفة كربوكسي ميثيل ديكستران ‎carboxymethyldextran‏ باستخدام ‎HBS-EP+‏ ‏في صورة منظم التشغيل بمعدل تدفق يبلغ ب 30 ميكرو لتر/دقيقة. كل مخطط استشعار (الأول مميز بالمثلثات والثاني مميز بأشكال المعين) يناظر دورة كاملة : 0 1. الحقن خلال دقيقة من محلول ‎h=-IGF-1R‏ ناتج عن ‎sage‏ الاتحاد الجيني (10 ميكرو جرام/مللي لتر) على حجرة التدفق الثانية . بالنسبة لمخطط الاستشعار الأول: 5 حقن لكل منظم تشغيل خلال 90 ث لكل منها بالنسبة لمخطط الاستشعار الثانى: خمس حقن في المدى المتنامي للتركيزات لمحاليل الجسم المضاد 2 167-14 خلال 90ث لكل منها 3. تأجيل 300 ث لتحديد معدلات حركة فصل. 4. تجديد السطح بحقنة خلال 45 ث من جليسين بتركيز 10 مللي مولار ومحلول منظم ‎HCI‏ برقم هيدروجيني 1.5. الشكل 27: يتم تقديم مخطط الاستشعار الذي يناظر خصم مخطط الاستشعار الفارغ (5 حقن من ‎HBS-EP+‏ ) من مخطط الاستشعار الذي تم الحصول عليه بالمدى المتنامي من تركيزات محاليل ‎IGF-1R 020852 0‏ وذلك باللون الرمادي. يتم ‎and‏ مخطط الاستشعار النظري المناظر للنموذج 1:1 بالمتغيرات التالية: ‎x (0.036 +1 .206) = kon‏ 106 مولار-1 .ث-1ء ‎koff‏ = )7.81 ‎x (0.18 +‏ 5-10 ث-1ء ‎Rmax‏ = 307.6 + 0.3 وحدة استجابة وذلك بخط أسود رفيع. يتم
بيان التركيزات المحسوية ل 020852 على الرسم البياني: يتم اعتبار التركيز الأعلى (24 نانو مولار) فحسب كثابت) . الشكل 28: تناظر ثوابت الفصل متوسط أريع تجارب لكل جسم مضاد وتناظر نسبة ‎koff/kon X‏ 2 ليتم التعبير عنها بوحدة بيكو مولار. إن أعمدة الخطاً تناظر الخطأً القياسي ‎=n)‏ 4). الشكل 29: تناظر أعمار النصف متوسط الأربع تجارب لكل جسم مضاد وتناظر نسبة ‎Ln(2)/koff‏ ‏/ 00 ليتم التعبير عنها بوحدة الساعة. إن أعمدة الخطأً تناظر الخطأً القياسي ‎=n)‏ 4). الشكل 30: تراكب اثنين من مخططات الاستشعار مع دورتين لتشغيل تجرية على جهاز ‎Biacore‏ ‏0 بمعدل تدفق 30ميكرو لتر /دقيقة وعند 25 درجة مئوية. تناظر الخطوة الأولى من الدورة الحقن بمحلول من جسم ‎alias‏ 020852 عند تركيز يبلغ 10 0 ميكرو جرام/مللى لتر خلال 60 دقيقة على الخلية المتدفقة الثانية لشريحة استشعار 01/5 منشّطة بواسطة تطعيم بأكثر من 10.500 وحدة استجابة من جسم مضاد أحادي النسيلة ل ‎Fe‏ 106 بشري من ‎Oh‏ مرتبط كيميائيا بمصفوفة كريوكسى ميثيل ديكستران ‎carboxymethyldextran‏ بواسطة وظائف الأمين الخاصة به. وتناظر الخطوة الثانية حقن نطاق خارج الخلايا لمحاليل ‎h=IGF-1R‏ ‏(أشكال المعين البسيطة) أو ‎M=IGF-1R‏ (أشكال المعين الفارغة) من مواد طافية لمستنبت خلايا 5 خام خلال 120 ث بتأجيل قدره 120 ث. تدل الأسهم مزدوجة الرأس على مواضع قياس مستوى احتجاز الجسم المضاد ومستوى ربط -]6! ‎IR‏ المستخدم في هذه الدراسة. الشكل 31: تمثل المخططات التكرارية النسبة بين مستوىي ربط ‎IGF-1R‏ الذي تم الحصول عليه لكل ‎Lise ga‏ 167-11 0/00 ومستوى 020872 المحتجّز على ‎saa‏ التدفق الثانية لشريحة 0 الاستشعار خلال الدور المناظرة. الأشكال 132 و(ب):
تمثل المخططات التكرارية 5050 ل ‎hz208F2 HOT6/L024‏ بالرقم الهيدروجيني 5 إلى الرقم الهيدروجيني 8. يُنقص الرقم الهيدروجيني قدرة ارتباط الأجسام المضادة ‎IGF-IR‏ المتوافقة مع البشر وهي 1076/1024 ‎hz208F2‏ )1( و1077/1-018) ‎hz208F2‏ (ب). الأشكال 33: ربط ‎HZ208F2‏ )10 ميكرو جرارم/مللي لتر) على 170 وحدة استجابة للنمط البري من نسخة قابلة للذويان من ‎0-١618‏ (الشكل المعين الأسود) أو على 120 وحدة استجابة ل ‎C29‏ الطافر ‎(Asp491>Ala)‏ لهذا المستقبل. يتم احتجاز كل مستقبل بواسطة ‎Tag‏ 6615 عند الطرف © على شريكة استشعار 01/5 . تم إجراء التجرية بجهاز 74100 ‎Biacore‏ عند 25 درجة مئوية بمعدل تدفق 30 ميكرو لتر /دقيقة باستخدام ‎HBS-EP+‏ النمطي كمحلول منظم تشغيل. 0 الوصف التفصيلي: الأمثلة تم إيداع كل الأورام الهجين المذكورة في الاختراع الحالي في ‎CNCM‏ (معهد باستير؛ فرنسا) ويتم تحديدها في الجدول التالي ‎JT‏ ‏الجدول 7 1018 1-4733 4 أبريل 2013 ‎201F1‏ 1-4769 6 يونيو 2013 2082 7- 0 مايو 2013 21211 1-3 6 يونيو 2013 ‎214F8‏ 1-5 6 يونيو 2013
21906 1-6 4 أبريل 2013
213810 1-4 6 يونيو 2013
2013 ‏يونيو‎ 6 - 7 102H8
11069 86 - 6 يونيو 2013
2013 ‏يونيو‎ 6 - 6 415A8
2013 ‏يونيو‎ 6 - 7 410G4
2013 ‏أبريل‎ 24 1-4738 414E1
2013 ‏يونيو‎ 6 1-4780 433H9
2013 ‏أبريل‎ 24 1-4735 105G2
325 1-4765 30 مايو 2013
المثال 1: إنشاء أجسام مضادة ‎IGF-IR‏
لإنشاء أجسام مضادة أحادية النسيلة من ‎generate murine monoclonal antibodies fyi‏ ‎(Mabs)‏ إزاء نطاق بشري خارج الخلايا ‎(ECD) extracellular domain‏ من مستقبل ‎IGF-1‏ ‏بشري ‎chuman IGF-1 receptor‏ اختصارا ‎«(hIGF-1R)‏ تم تحصين خمس فثران ‎BALB/c‏ ‏5 مناعيا ثلاث مرات بالحقن تحت الجلد باستخدام 10 ميكرو ‎pba‏ من بروتين ‎(R&D 016٠-11‏ ‎Systems, Cat N°391-GR)‏ . وكبديل لذلك؛ تم إجراء ثلاث عمليات تحصين إضافية باستخدام 0 ميكرو جرام من النطاق الفأري خارج ‎(ECD) Wall‏ من ‎(R&D Systems, (GF-1R‏ ‎(Cat No. 6630-6 [Fc)‏ على بعض الكائنات الحيوانية. تم إجراء التحصين المناعي الأول في وجود مساعد فروند الكامل ‎Complete Freund Adjuvant (Sigma, St Louis, MD,‏ (5/8لا. تم إضافة مساعد فروند غير الكامل ‎Incomplete Freund adjuvant (Sigma)‏ في عمليات التحصين التالية. قبل ثلاث أيام من الاندماج؛ تم إعطاء ‎ghia)‏ المحصنة ‎Lelie‏ جرعة
تعزيزية من 10 ميكرو جرام من بروتين 071657-1. بعد ذلك؛ تم تحضير خلايا طحالية وخلايا ليمفاوية بتروية الطحال وفرم العقد الليمفاوية الأدنى؛ بالترتيب؛ حصدها 1 من 5 فئران محصنة (تم اختياره بعد معايرة مصلية لكل الفئران)» ودمجها بخلايا ورم نخاعي 502/0-8914؛ ‎(ATCC,‏ ‎Rockville, MD, USA)‏ يتم وصف بروتوكول الدمج بواسطة ‎Kohler and Milstein‏ ‎(Nature, 256:495-497, 1975) 5‏ بعد ذلك يتم إخضاع ‎WAN‏ المدمجة لاختيار ‎HAT‏ ‏بصفة عامة؛ لتحضير الأجسام المضادة أحادية النسيلة أو شظيات وظيفية منهاء وبخاصة من ‎Laie‏ ‏فأري؛ من الممكن الإشارة إلى تقنيات يتم وصفها بشكل محدد في كتيب "الأجسام المضاد" التالي: ‎“Antibodies” (Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold‏ ‎.Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY, pp. 726, 1988)‏ بعد عشرة 10 أيام من الدمج؛ تم فرز مستعمرات الخلايا الهجين. بالنسبة للفرز الأولي؛ تم تقييم مواد طافية من الأورام الهجين لفرز ‎Mabs‏ التي تم رعايتها إزاء بروتين ‎rhIGF-1R ECD‏ بواسطة تحليل ‎FACS‏ ‏باستخدام ‎WA‏ الورم الثديي البشري ‎human IGF-1 receptor‏ 4017 اختصارا (00 اخ) ‎COST WIA if‏ من نسناس (خلايا كبد 51/40 محوّرة وراثيا من نسناس أخضر أفريقي) حيث تعبر عن ‎IGF-IR‏ من نسناس على سطح خلاياه. وبشكل أكثر تحديداء بالنسبة للاختيار بواسطة تعداخ الخلايا بالتدفق؛ تم توزيع 510 خلية (سواء ‎MCFT7‏ أو ‎(COST‏ على كل عين من ‎Gib‏ ‏مكون من 96 عين في ‎PBS‏ يحتوي على 961 من ‎BSA‏ و 160.01 من أزيد صوديوم ‎sodium‏ ‏56 (محلول منظم ‎(FACS‏ عند 4 درجة متوية. ويعد طرد مركزي من دقيقتين عند 2000 دورة في الدقيقة؛ تم إزالة المحلول المنظم وتم إضافة مواد الورم الهجين الطافية المراد اختبارها. وبيعد 20 دقيقة من الحضانة عند 4 درجة مئوية؛ تم غسل الخلايا مرتين وتم إضافة الجسم المضاد للفئران من ماعز المترافق مع 488 6*8ا/عند 500/1" المخفف في محلول منظم ‎FACS‏ ( ,811017 ‎(Molecular Probes Inc., Eugene, USA‏ وحضانته لمدة 20 دقيقة عند 4 درجة مئوية. وبعد الغسل النهائي باستخدام محلول منظم ‎(FACS‏ تم تحليل الخلايا بواسطة ‎(FACS‏ ‎(Facscalibur, Becton—Dickinson)‏ بعد إضافة يوديد بروييديوم 100106 ‎propidium‏ إلى كل أنبوب عند تركيز نهائي بلغ 40 ميكرو جرام/مللي لتر. تم تضمين العيون التي تحتوي على 5 الخلايا فقط والخلايا التي تم حضانتها بالجسم المضاد الثانوبالمترافق مع 488 ‎Alexa‏ وذلك كعينات مقارنة سالبة. تم استخدام عينات مقارنة من النمط المتماتل في كل ‎(Sigma, ref dias‏
(©/ا1090351. تم تقييم 5000 خلية على الأقل لحساب متوسط قيمة متوسط شدة الفلورة ‎.(MFI) fluorescence intensity‏ بشكل إضافي تم إجراء اختبار امتصاص لتحديد الأجسام المضادة التي يمكن امتصاصها فحسب. بالنسبة لهذا ‎«laa‏ تم استنبات سلالة خلايا ورمية 1/017 في 1640 ‎RMPI‏ بدون فينول أحمر ‎phenol red‏ .ياستخدام 901 من 1-لجوتامين ‎glutamine‏ %10 من ‎FACS‏ لمدة 3 أيام قبل التجرية. بعدهاء تم إبعاد الخلايا باستخدام تريبسين 12/0510 وتم توزيع 100 ميكرو لتر من معلق ‎WIA‏ عند 510*4 على أطباق متعددة العيون بها 96 عين في 01/11640» بدون فينول أحمر باستخدام 961 من 1-جلوتامين و965 من 585. وبعد طرد مركزي ‎centrifugation‏ لمدة دقيقتين عند 2000 دورة في الدقيقة؛ تم ‎ale]‏ تعليق ‎WAN‏ في 50 ميكرو لتر من ‎Bale‏ ورم هجين 0 طافية أو محاليل جسم مضاد ‎dual‏ مقارنة (عينات مقارنة موجبة ومن نمط متماثل عند 1 ميكرو جرام/مللي لتر). بعد 20 دقيقة من الحضانة عند 4 درجة مئوية؛ تم تعريض الخلايا لطرد مركزي عند دقيقتين عند 2000 دورة في الدقيقة وإعادة تعليقها في وسط استنبات بارد (4 درجة ‎(Asie‏ أو دافئ )37 درجة مئوية). تم بعدها حضانة الخلايا لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية أو 4 درجة مئوية. وتم بعدها غسل الخلايا ثلاث مرات باستخداممحلول منظم ‎FACS‏ تم حضانة جسم مضاد 5 6و0 فأري من الماعز موسوم ب 488 ‎Alexa‏ لمدة 20 دقيقة وتم غسل ‎WAY‏ ثلاث مرات قبل تحليل ‎FACS‏ على مجموعة ‎WIA‏ سالبة ليوديد بروديديوم ‎.propidium iodide‏ عقب تحليل ‎(FACS‏ تم تحديد متغيرين: (1) فرق الإشارة المتألقة التي تم الكشف عنها على سطح الخلايا التي تم حضانتها عند 4 درجة مئوية مع تلك التي تم الحصول عليها باستخدام الخلايا التي تم حضانتها عند 37 درجة مئوية باستخدام مادة ورم هجين طافرة و )2( النسبة المئوية ل ‎IGF-1R‏ ‏0 المتبقي على سطح الخلايا. يتم حساب النسبة المئوية ل ‎hIGF-1R‏ المتبقي كما يلي: النسبة المئوية ل ‎IGF-IR‏ المتبقي = ‎x ) MFI Ab 37°C/ MFI Ab 4°C)‏ 100 بالإضافة إلى إجراء ثلاث تحليلات ‎ELISA‏ (سواء قبل أو بعد النسخ) من أجل دراسة ارتباط الأجسام المضادة على البروتينات البشرية ‎(hIGF-1R) recombinant human‏ والفأرية ‎murine‏
(00167-14) الناتجة عن ‎sage‏ الارتباط الجيني؛ وعلى بروتين مستقبل إنسولين بشري ناتج عن عودة الارتباط الجيني ‎recombinant human Insulin Receptor‏ (4اا). تم احتجاز جسم مضاد مفرز لورم هجين يبدي ريط على ‎th=IGF-1R‏ و/أو 00-167-11 ولا يبدي ربط على ‎.rhIR‏ باختصار؛ تم تغطية أطباق ‎ELISA‏ المكونة من 96 عين ( ‎Costar 3690, Corning,‏ ‎(NY, USA 5‏ باستخدام 100 ميكرو لتر /عين من بروتين ‎R&D Systems, Cat ) rhIGF-1R‏ ‎(No. 391-GR‏ عند 0.6 ميكرو جرام/مللي لتر أو بروتين ‎R&D Systems, ( rmIGF-1R‏ ‎(Cat No. 6630-4‏ عند 1 ميكرو جرام/مللي لتر أو بروتين ‎R&D Systems, ( rhIR‏ ‎(Cat No. 1544-IR/CF‏ عند 1 ميكرو جرام/مللي لتر في ‎PBS‏ طوال الليل عند 4 ‎dap‏ ‏مئوية. تم بعد ذلك إعاقة الأطباق باستخدام ‎PBS‏ يحتوي على 960.5 من جيلاتين ( ,#22151) ‎(Serva Electrophoresis GmbH, Heidelberg, Germany 0‏ لمدة ساعتين عند 37 درجة ‎Asie‏
وبمجرد أن يتم إضافة محلول تشبع ‎plate‏ بواسطة أطباق نقر سريع؛ تم إضافة 100 ميكرو لتر من كل تخفيف لمادة طافية إلى العيون (سواء مادة ورم هجين طافية غير مخففة أو تخفيفات تسلسلية لمادة طافية) وحضائتها لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. ويعد ثلاث مرات غسل؛ تم إضافة 100 ميكرو لتر من 196 فأري من ‎ele‏ متعدد النسيلة مترافق مع بيروكسيداز الفجل الحار ‎Jackson Immuno-Research Laboratories, Inc., West (‏ ,#115-035-164( ‎(Grove, PA, USA (‏ عند تخفيف بنسبة 5000/1 في 5 يحتوي على 960.1 جيلاتين و960.05 توين 20 (بالوزن : الوزن) لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. تم غسل الأطباق ‎ELISA‏ ثلاث مرات وتم إضافة ركيزة ‎.TMB (#UP664782, Uptima, Interchim, France)‏ بعد 10 دقائق من زمن الحضانة عند درجة حرارة الغرفة؛ تم إيقاف التفاعل باستخدام حمض الكبريتيك
بتركيز 1 مولار وتم قياس الكثافة البصربة ‎optical density‏ عند 450 نانو متر. تم تمديد جسم مضاد مفرز لورم هجين محل الاهتمام وإنشاء نسيلة منه بتخفيف محدود. بمجرد أن تم إنشاء نمط متماثل منه؛ تم تمديد نسيلة واحدة من كل شفرة وتجميدها. تم إنتاج كل جسم مضاد
محل اهتمام في أنظمة إنتاج في المختبر تُسمى ‎CellLine (Integra Biosciences)‏ لمزيد من تحديد الخصائتص. تم إجراء اختبارات إضافية لتحديد نوعية الريط بتحليلات ‎FACS‏ على خلايا ‎IR) IMO‏ بشرية تعبر عن خلايا ليمفاوية بائية أولية ‎(human IR expressing 8 lymphoblasts‏ فضلا عن خلايا متحورة وراثيا ‎hiIGF-1R‏ مقابل خلايا غير متحورة وراثيا . يبين الجدول 8 كل البيانات المناظرة للأجسام المضادة المحددة. من المثير ملاحظة أنه من بين الأجسام المضادة المحددة (1) على أساس انتقائيتها ل ‎hIGF-1R‏ مقابل ‎WIR‏ و(2) حسب قدرتها على ‎call‏ على امتصاص 18-]6)؛ يستطيع بعضها التعرف على أهدافها في كل من بيئة ‎Lay FACS 5 ELISA‏ كان البعض الآخر عبارة عن روابط جيدة جدا عند دراستها بواسطة القياس 0 المتري وروابط رديئة جدا عند تقييمها بواسطة ‎ELISA‏
تنتمي ‎M219D6 3 0121478 1213810 «m212A11 «m280F2‏ إلى المجموعة الأخيرة التي لم تتعرف على البروتين المغلف جيدا. الجدول 8
اسم الورم |اختبار ‎SNT) ELISA‏ عند ااختبار امتصاص ‎AD)‏ عند 5 ميكرو
الهجين |5 ميكرو جرام/مللي ‎SPRAIN EY‏
‎DO‏ بمقدار 450 نانو متر
-9م8- ‎rh IGF-‏ اد اط 4 37 ‎١‏ لنسبة المئوية أذ ‎MFI)‏ عند ‎IGF IR‏ إإنسولين |درجة ادرجة اللمتبقي من 40-37901) ‎Rl IR‏ مثوية امثوية ‎rh IGFIR|‏ ‎TT‏ ‎NE‏ ‎TT‏ ‎TT‏ ‎TT‏ ‎TL 0‏ ‎0.232|212A1 7‏ ]0.141|0.102 |390 |106 27 284 1 1 0.399 0.1100.127 386 115 30 271 0
TT B
TT
TT
TT
TT
TT
52 61| 82 134] 0.048 0.107 1.854 "7
BE ‏“م‎ ‎8 ‏تابع جدول‎ اختبار ‎Ab) FACS‏ عند 5 ميكرو جرام/مللي ‎(A‏
Tf ‏أخلايا لغير‎ TFhIGFIR+ Cos—7 IMO (h IGF1R-)
‎I‏ ‏- ‏- ‏- ‏ب بت المثال 2: تحديد خصائص تجميع قمة لاصقة لأجسام مضادة ل 161-114 عن طريق تعيين تجارب باستخدام تقنية أساسها ‎SPR‏ ل ‎Biacore‏
لدراسة تنوع الاستجابة إزاء ‎(IGF=1R‏ تم تعيين الأجسام المضادة المحددة بواسطة ‎Biacore‏ وتم
إجراء تجميع الأجسام المضادة هذه وفقا لخصائص تنافسية.
باختصارء تم إجراء تجارب تعيين القمة اللاصقة على جهاز ‎Biacore X‏ الذي يستخدم شريحة
استشعار 5 تم تنشيطها بواسطة جسم مضاد ل ‎pila) Tag His‏ احتجاز هيس برقم كتالوج -28 9950-56 وفقا ل ‎(GE Healthcare‏ تم استخدام طعوم لأكثر من 11000 وحدة استجابة
كيميائيا على مصفوفة الكريوكسي ميثيل ديكستران ‎carboxymethyldextan matrix‏ باستخدام
كيمياء طقم الأمين ‎kit chemistry‏ ©80710. تم إجراء التجارب عند 25 درجة مئوية بمعدل تدفق
1 ميكرو لتر/دقيقة باستخدام محلول منظم ‎«(GE Healthcare) (HBS-EP‏ كمحلول تخفيف
التجربة والعينة على حد سواء.
تم الحقن بمحلول من نسخة قابلة للذويان من تتيرامير غير متجانس من ‎IGF-IR‏ (سلسلة 200
والنطاقات غير الخلوية من سلسلة م2 التي تم التعبير عنها باستخدام علامة 10-115 عند الطرف
‎(R&D Systems catalog number 305-GR) C‏ عند تركيز يبلغ 5 ميكرو جرام/مللي لتر
‏على كلتا خلايا التدفق خلال دقيقة واحدة.
‏5 بعد ذلك تم الحقن باستخدام محلول من جسم مضاد ل 0161-14 ‎sale)‏ 50 ميكرو جرام/مللي لتر) فقط يُراد اختباره على حجرة التدفق 1 خلال ما بين 90-60ث لبلوغ (أو على الأقل الاقتراب من) تشبع مواقع ريط ‎IGF-IR‏ ‏يتم الحقن بمحلول من جسم مضاد ثاني؛ يُستخدم كمنافس محتمل؛ في ظل نفس الظروف على كل من خلايا التدفق أو على حجرة التدفق الثانية فقط.
‏0 أخيراء يمكن الحقن بمحلول من جسم مضاد ثالث في نفس الظروف على كلتا خلايا التدفق. يتم بعد ذلك تجديد السطح بحقنة من جليسين بتركيز 10 مللي مولار؛ محلول منظم ‎HOI‏ برقم هيدروجيني 1.5 خلال ‎B30‏
تبين مثل تلك النوعية من التجارب بوضوح ما إذا كان يمكن ارتباط اثنين من الأجسام المضادة في وقت واحد على نفس جزيء 016-114 بما يثبت أن مناطق الريط (القمم اللاصقة ‎(epitopes‏ ‏لكل جسم مضاد بعيدة بما يكفي للسماح بذلك. على النقيض من ذلك؛ إذا كان ربط جسم مضاد ب 0167-1 يمنع ربط جسم مضاد ثاني؛ أكد هذا أن نفس القمة اللاصقة يتم التعرف عليها بواسطة كلا الجسمين المضادين. ‎chal‏ في حالة المنافسة الجزئية؛ يمكن للمرء أن يعتقد في تراكب القمم اللاصقة التي يتم التعرف عليها بواسطة الجسمين المضادين المختبرين. بالتالي يتم التعرف على مجموعات مناطق القمم اللاصقة. إن تعقد النتائج يزيد بصفة عامة من حجم مجموعة الأجسام المضادة المستخدّمة في التجرية. يصف الشكل 1 مثالا لدورة نمطية لتجرية تعيين قمم لاصقة تستخدم جهاز ‎Biacore X‏ أساسه 0 4ا50. وتبين مخططات الاستشعار الاستجابة (بوحدة الاستجابة ‎(RU) response‏ كدالة في الزمن (بالثواني) ‎LAT‏ التدفق 1 (أشكال المعين السوداء) و2 (أشكال المعين البيضاء). في الطور 1 يتم الحقن بمحلول من مولد الضد: 7167-11 ناتج عن عودة الاتحاد الجيني قابل للذوبان مع اثنين من ‎10-His Tag‏ عند الطرف © وذلك على كلا من خلايا التدفق على شريحة استشعار 5 مع جسم مضاد فأري ‎His Tag‏ مرتبط كيميائيا بمصفوفة كربوكسي ميثيل ديكستران 800/0607 عند تركيز 5 ميكرو جرام/مللي لتر بمعدل تدفق يبلغ 10 ميكرو لتر /دقيقة. في الطور 2؛ يتم حقن محلول من جسم مضاد أول يُراد اختباره (21906) عند تركيز 50 ميكرو جرام/مللي لتر على حجرة التدفق 1. بعدها في الطور 3؛ يتم حقن محلول من جسم مضاد ثاني ‎(101HS)‏ عند تركيز من 50 ميكرو جرام/مللي لتر على حجرة التدفق 2 متبوعا في الطور 4؛ 0 بحقن محلول من جسم مضاد ثالث ‎(201F1)‏ عند تركيز من 50 ميكرو جرام/مللي لتر على كلتا حجرتي التدفق. تثبت الاستجابة لهذه الحقنة بوضوح أنه قد تم منع ربط 201171 على ‎IGF-1R‏ ‏بواسطة 101118 ولكن ليس بواسطة 21906 . تنتمي الأجسام المضادة ‎219D6 5 201F1‏ بوضوح إلى مجموعات قمم لاصقة مختلفة. يتم وصف التجميع الناتج عن التحليل الكامل ل 15 مرشح مختلف في الشكل 2 وأثبت أن التحصين المناعي للفئران باستخدام 0165-11 أدى إلى
سلسلة من الأجسام المضادة التي تبدي تنوعا جيدا. في الواقع؛ تم توليد 5 مجموعات مختلفة من
‎Mabs‏ التى تتعرف على القمم ‎de an‏ المختلفة. المثال 3: ربط الجسم المضاد ب ‎IGF-1R‏ الأصلى البشري بواسطة تحليلات ‎FACS analyses‏ تم تقييم خصائص ربط سلسلة من الأجسام المضادة ل 6]7-11) بواسطة تحليلات ‎FACS‏ على سلالة خلايا كارسينوما غدية ‎breast adenocarcinoma cell line dus‏ 1107-7 بشرية ‎(ATCC#HTB-22)‏ باستخدام تركيزات جسم مضاد متزايدة. ولهذا الغرض تمت حضانة خلايا ( ‎x 1‏ 610 خلية/مللي لتر) باستخدام الأجسام المضادة ل 165-11 لمدة 20 دقيقة عند 5 درجة مئوية في محلول منظم ‎.(NaN3 960.01 «BSA 960.1 (PBS) FACS‏ بعد ذلك تم غسلها 3 مرات وحضانتها باستخدام جسم مضاد ثانوي ملائم مقترن ب 488 ‎sad Alexa‏ 3 دقائق إضافية 0 عند 4 درجة ‎dig‏ في الظلام قبل غسلها 3 مرات في محلول منظم ‎FACS‏ تم ارتباط الأجسام المضادة ل ‎IGF-1R‏ فى الحال على خلايا عيوش ‎Cua‏ تم تعريفها باستخدام يوديد بروبيديوم ‎propidium iodide‏ (الذي يصبغ الخلايا الميتة). تم تعيين أقصى شدة للإشارات تم الحصول عليها لكل جسم مضاد في صورة ‎Bmax‏ والتعبير عن متوسط شدة الفلورة ‎mean of‏ ‎fluorescence intensity (MFI)‏ تم حساب قيمة ‎ECS0‏ للارتباط الذي تم التعبير ‎die‏ بالمولار 5 باستخدام تحليل الانحدار غير الخطي ‎(GraphPad nonlinear regression analysis‏
‎.Prims 4.0)
‏أظهر منحنى معايرة كل جسم مضاد فأري أو خيمري أن كل الأجسام المضادة التى تم إنشاؤها قادرة على التعرف على صورة ‎IGF-IR‏ الأصلية بمنحنى تشبع ملائم (الشكل 13( ولتصنيف الأجسام المضادة ومقارنة خصائص الربط لكل من الأجسام المضادة الفأرية والخيمرية؛ تم تحديد قيمة 050] 0 الربط لكل مركب باستخدام تحليل الانحدار غير الخطى. أظهرت مقارنة ‎dad‏ 5050 لكل جسم ‎alias‏ فأري بالصورة الخيمرية المناظرة ‎die‏ أن الصورتان أبدتا نفس خصائص الربط ‎Lay‏ يثبت أن الصورة الخيمرية للجسم المضاد لم تؤثر في التعرف على 165-11 (الشكل 3ب). تراوحت قيم 0 من 8-10*1.2 إلى ‎.10-10x4.4‏ أظهرت الأجسام المضادة التي تنتمي إلى المجموعة 2 و؟؟ التي تنتمي إلى المجموعة ‎i3‏ أفضل قيم ‎a gad . ECS50‏ تحليلات ‎Bmax‏ (الشكل
3ج)؛ فإن ثلاث أجسام مضادة ‎Abs‏ هي ‎(G3b)‏ 41451 و(64) 10562 و(65) 83255 كانت ذات قيمة ‎Bmax‏ أقل مقارنةً بالأخرى. يبين الجدول 9 قيم ‎Bmax ys EC50‏ الجدول 9
‎1.2E-08 691| c832E5 G5‏ المثال 4: تأكيد نوعية الجسم المضاد باستخدام الخلايا المتحورة ‎IGF-1R‏ أو ‎IR‏ أو خلايا ‎IMO‏ ‏التي تعبر بشكل طبيعي عن مستويات هامة من ‎IR‏ ‏لتأكيد نوعية الأجسام المضادة التي تم توليدها ل ‎NIGF-1R‏ مقابل 01/4 تم تقييم نواتج خلايا محورة وراثيا ثابتة تعبر عن 114- ]116 أو ‎hIR‏ بواسطة تحليلات ‎FACS‏ وباختصار؛ تم حضانة تركيزات زائدة لأجسام مضادة ‎MADS‏ خيمرية بخلايا لمدة 20 دقيقة عند 4 درجة مئوية في محلول منظم ‎PBS) FACS‏ 85/8960.1؛ 960.01 ‎.(NaN3‏ تم بعد ذلك غسل ‎WAY‏ 3 مرات وحضائتها باستخدام الجسم المضاد الثانوي الملائم الذي تم إقرانه ب 488 ‎Alexa‏ قبل حضانته لعشرين دقيقة إضافية عند 4 درجة مئوية في الظلام ثم غسلها 3 مرات فى محلول منظم ‎FACS‏ تم إجراء خطوة ارتباط الأجسام المضادة ل 165-11 في الحال على ‎WIA‏ عيوش حيث تم تحديدها باستخدام يوديد 0 بروبيديوم (الذي يصبغ الخلايا الميتة). تم حساب قيمة 5050 للارتباط التي تم التعبير عنها بالمولار باستخدام تحليل الانحدار غير الخطي )4.0 ‎.(GraphPad Prims‏ إن منحنيات المعايرة التى تم الحصول عليها على سلالة الخلية المحورة وراثيا ‎hIGF-1R‏ (الشكل 14( مقابل الخلايا غير المحورة وراثيا (الشكل 4ب) أكدت نوعية ارتباط الأجسام المضادة الخيمرية ل ‎IGF-1R‏ البشري. 5 يبين الشكل 10 قيم ‎EC50‏ و*8078. في هذا الاختبارء أظهرت الأجسام المضادة من مجموعتي 2 و638 ‎Jil‏ قيم ‎EC50‏ ‏الجدول 10 المجموعة ‎EC50 Bmax Ac|‏ (مولار) ‎1.2E-09 2107] cl01HS‏
1.9E-09 2265] 4141 6.5E-10 2165] c433H9 1.7E-09 2396] ¢105G2 7.3E-09 1998] c832E5 ‏تم استخدام سلالة خلية‎ hIR ‏لتأكيد غياب ربط كلا من الجسمين المضادين الفأري والخيمري على‎ ‏البشري. تم التعرف على 74 البشري عند سطح الخلية بواسطة كل من الجسم‎ IR ‏ثابتة تعبر عن‎ ‏حضانة التركيزات الزائدة من الأجسام المضادة‎ 23. FACS ‏المضاد الفأري والخيمري بواسطة تحليلات‎ ‏دقيقة عند 4 درجة مئوية فى‎ 20 sad hIR+ ‏الفأرية أوالخيمرية على سلالة الخلية المتحورة وراثيا‎ 3 ‏تم بعد ذلك تم غسل الخلايا‎ .(NaN3 960.01 ‏85/8960.1؛‎ PBS) FACS ‏محلول منظم‎ 5 ‏قبل حضائته‎ Alexa 488 ‏مرات وحضانتها باستخدام الجسم المضاد الثانوي الملائم الذي تم إقرانه ب‎
FACS ‏لعشرين دقيقة إضافية عند 4 درجة مئوية فى الظلام ثم غسلها 3 مرات في محلول منظم‎ ‏عيوش حيث تم تحديدها‎ WIA ‏تم إجراء خطوة ارتباط الأجسام المضادة ل 167-11 في الحال على‎ ‏للارتباط‎ 5650 das ‏تم حساب‎ .)0680 cells ‏باستخدام يوديد بروبيديوم (الذي يصبغ الخلايا الميتة‎ .(GraphPad Prims 4.0) hall ‏التي تم التعبير عنها بالمولار باستخدام تحليل الانحدار غير‎ 10 hIR J ‏ونسيلة الجسم المضاد‎ GR1 1 L ‏نوعي تجاري ¢ نسيلة‎ IGF- 1 R J ‏تم استخدام جسم مضاد‎ ‏كعينات مقارنة موجبة . تم إدخال 64 كجسم مضاد غير ذي صلة (عينة مقارنة‎ GROS5S ‏وهى‎ من النمط المتماثل). تم تأكيد المستوى المرتفع للتعبير عن ‎AIR‏ على سطح الخلايا المتحورة وراثيا باستخدام الجسم المضاد ل ‎hIR‏ التجاري 6805. حتى باستخدام تركيزات عالية من الجسم المضاد 5167-11 الفأري
-099- (الشكل 15( أو الخيمري (الشكل 5ب)؛ لم يتم ملاحظة ربط على سطح الخلايا المتحورة وراثيا ‎hIR+‏ أظهرت النتائج أن الجسم المضاد ‎hIGF-1R‏ الفأري والخيمري لم يتعرفا على ‎HIR‏ ‏لقد تم ‎Lad‏ إثبات هذه النوعى للتعرف على 0167-14 ‎IR Jae‏ باستخدام خلايا ‎(IMO‏ وهي سلالة خلية ورم ليمفاوي بائي ‎B-lymphoma cell line‏ تعبر عن ‎hIR‏ (الشكل 6). بالنسبة لتحليل ‎(FACS‏ البروتوكول هو نفسه المبين مسبقا وتم استخدام الأجسام المضادة ‎J‏ 65-11 الفأرية لمنع التفاعل التبادلي للجسم المضاد البشري الثانوي (خلايا ‎IMO‏ تعبر عن وا بشري على سطح خلاياها). لقد أثبتت النتائج المبينة في الشكل 6 مرة أخرى أنه قد تم ملاحظة الإشارة المتوقعة باستخدام جسم مضاد ل ‎hIR‏ هو 605 بينما لم يبدي أي من الجسم المضاد الفأري الذي تم تقييمه أي إشارة ربط ذات مغزى على سلالة الخلية المذكورة. 0 المثال 5: ارتباط الجسم المضاد ب ‎IGF-1R‏ الأصلى من نسناس بواسطة تحليلات ‎FACS‏ ‏و ‎Biacore‏ ‏من المتطلبات الأولى لدراسات السمية المنتظمة تحديد نوع حيوان ذي صلة لتقييم المركب المحدد. ونظرا لعدم تمكن سلسلة من الأجسام المضادة الموصوفة هنا من التعرف على ‎IGF-1R‏ الفأري؛ فإن النوع الأكثر ترجيحا لتقييم السمية هو أحد الرئيسيات دون ‎non human primate al‏ ‎(NHP) 5‏ ولتقييم ارتباط الأجسام المضاد ل 167-11 على 167-114 من نسناس» تم تقييم ارتباط كل من الجسمين المضادين ‎hIGF-1R‏ الفأري والخيمري بواسطة تحليلات ‎FACS‏ على سلالة خلايا 0055-7 باستخدام تركيزات الجسم المضاد المتزايدة. تم حضانة ‎x 1( WA‏ 610 خلية/مللي ‎(A‏ ‏باستخدام أجسام مضادة ل ‎١6-114‏ لمدة 20 دقيقة عند 4 درجة مئوية في محلول منظم ‎FACS‏ ‎(PBS) 0‏ 858460.1؛ 960.01 ‎.(NaN3‏ تم ‎WAN Jue‏ 3 مرات وحضانتها باستخدام الجسم المضاد الثانوي الملائم الذي تم إقرانه ب 488 ‎Alexa‏ قبل حضانته لعشرين دقيقة إضافية عند 4 درجة مئوية في الظلام ثم غسلها 3 مرات في محلول منظم ‎FACS‏ تم إجراء خطوة ارتباط الأجسام المضادة ل ‎IGF-1R‏ فى الحال على خلايا عيوش حيث تم تحديد ها باستخدام يوديد بروديديوم (الذي
يصبغ الخلايا الميتة). تم حساب ‎dad‏ 5050 للارتباط التي تم التعبير عنها بالمولار باستخدام تحليل الانحدار غير الخطي ‎.(GraphPad Prims 4.0) nonlinear regression analysis‏ أظهرت منحنيات المعايرة التي تم الحصول عليها من سلالة خلايا النسناس 6058-7 أن كل الأجسام المضادة ل ‎hIGF-1R Abs‏ تعرف ‎Legs‏ على ‎IGF-IR‏ الذي تم التعبير عنه على سطح سلالة خلية النسناس (الشكل ‎o17‏ وهو ما تم توقعه لكل ‎L832E5 MAb‏ أثبت تحديد قيمة 5050 لكل من الجسمين المضادين ‎GUI‏ والخيمري تشابه الصورتين ‎lus‏ بشأن خصائص ارتباطهما على 16-1 من النسناس (الشكل 7ب). وأكدت هذه النتائج أن كل الأجسام المضادة ل 1165-18 التي تم تكوينها باستثناء 853215 ‎mAb‏ قد تعرفت على ‎IGF-IR‏ من النسناس. تم إجراء مقارنة لقيمة 5050 للارتباط على ‎WIA‏ 605-7 مقارنةٌ بالخلايا المتحورة وراثيا - ‎١6]‏ ‏0 1# من أجل تأكيد مقدار تعرف الجسم المضاد الخيمري على ‎IGF-1R‏ بشري مقارنة ب ‎IGF-1R‏ ‏من نسناس. وأوضحت النتائج ‎dnd)‏ في الشكل 7ب تعرف مشابه للأجسام المضادة باستثناء ‎mAb‏ 8325 على ‎IGF-1R‏ البشري 5 ‎IGF-1R‏ من نسناس. لتأكيد التعرف على نمط آخر من ‎cabal)‏ تم تحوير الخلايا وراثيا باستخدام 165-11 من نسناس الرياح لإنتاج ‎IGF-IR ECD‏ من نسناس الرياح قابلة للذويان وتم إجراء تجارب ‎Biacore‏ باستخدام 5 أحد الأجسام المضادة الخيمرية ‎(C208F2)‏ لمقارنة خصائص ارتباطه سواء 0167-11 أو ‎IGF~‏ ‎IR‏ من نسناس الرياح. تم إجراء تجارب التعرف على جهاز ‎Biacore X100‏ باستخدام شريحة استشعار ‎CMS‏ المنشطة بواسطة الجسم المضاد ل ‎Tag His‏ (طقم احتجاز ‎(GE Healthcare (His‏ رقم الكتالوج -28 9950-6). تم تطعيم أكثر من 11000 وحدة استجابة من الأجسام المضادة المطعّمة كيميائيا 0 بمصفوفة كريوكسي ميثيل ديكستران باستخدام كيمياء طقم الأمين. تم إجراء التجارب عند 25 درجة مئوية بمعدل تدفق 30 ميكرو لتر /دقيقة باستخدام محلول منظم ‎«(GE Healthcare) (HBS-EP‏ كمحلول تخفيف التجرية والعينة على حد سواء. تم استخدام مخطط حركة الدورة المفردة لتحديد متغيرات الحركة لريط الصورة الخيمرية من الجسم المضاد ل ‎«(C208F2) «208F2 IGF-1R‏ على 1167-14 مقارنةً ب ‎Macaca IGF-1R‏
تم الحقن بمحلول عبارة عن نسخة قابلة للذويان ناتجة عن عودة الاتحاد الجيني لتيترامير غير متجانس 165-114 متكون من سلاسل ]2 ونطاقات خارج الخلايا من سلاسل 200 التي تم التعبير عنها بعلامة ‎tag‏ 10-1115 إضافية عند الطرف ؛ بناء على متوالية من بشر ( ‎R&D Systems‏ ‎(catalogue number 305-68-0‏ أو من نسناس الرياح (تم إنتاجها محليا)؛ وذلك لمدة 1 دقيقة في حجرة التدفق الثانية عند تخفيف محدد لاحتجاز 160 وحدة استجابة تقريبا من مولد الضد. يتم حقن بمحلول من جسم مضاد ثاني في نفس الظروف على كل من حجرتي التفقد أو في حجرة التدفق الثانية فقط. بعد طور ‎aia)‏ تم الحقن بمحلول التجرية المنظم 5 مرات (90 ث كل حقنة) أو مدى متنامي من 5 تركيزات من ‎C208F2‏ (90 ث كل حقنة) على كلتا حجرتي التدفق. في نهاية الحقنة الخامسة؛ تم تمرير محلول التجرية المنظم لتحديد معدل الفصل. بعد ذلك تم تجديد 0 السطح باستخدام حقنة من جليسين بتركيز 10 ‎(Me‏ مولار؛ محلول منظم ‎HO‏ برقم هيدروجيني ‎PH‏ ‏5 خلال 30 ث. تناظر الإشارة المحوسبة الفرق بين استجابة حجرة التدفق 2 (ب ‎IGF-IR‏ محتجّز) واستجابة حجرة التدفق 1 (بدون أي جزيئات ‎(IGF-1R‏ (الشكل 8). لكل جزيء 167-14 (بشري أو من نسناس الرياح. )؛ تم تصحيح الإشارة بسبب حقنات بمدى 5 متنامي من التركيزات من ‎C208F2‏ عن طريق طرح الإشارة التي تم الحصول عليها بخمس حقنات من المحلول المنظم (إشارة مزدوجة). تم تحليل مخططات الاستشعار الناتجة باستخدام برنامج 007 بنموذج 1 : 1. تم تقييم المعدلات الحركية بشكل مستقل (2 من المعدلات الحركية لربط 620812 على كل من ‎(IGF-1R‏ أو بشكل مشترك (نفس المعدلات الحركية لربط ‎C208F2‏ ‏على ‎all IGF-IR‏ ومن نسناس الرياح). أو بشكل مشترك (نفس المعدلات الحركية ‎Ll‏ ‏0 020862 على ‎IGF-IR‏ من البشر أو نسناس الرياح). تم تقييم جودة المنحنى بنسبة ‎Chi2/Rmax‏ أقل من 0.05 وحدة استجابة. إن المعدلات الحركية للارتباط (انظر الجدول 11) المحددة بشكل منفصل لكل ‎١67-14‏ تكون قريبة ويتسم منحنى لمخططات الاستشعار ‎sensorgrams‏ بنفس المعدلات الحركية بجودة عالية. يتعرف الجسم المضاد 620862 ‎Lad‏ على 167-14 من البشر ونسناس ‎ZL‏ بثابت انحلال
‎KD dissociation constant‏ حوالي 0.2 نانو مولار. وتناظر قيم ‎aay‏ المحددة في هذه الدراسة قيم الألفة الوظيفية (ألفة الارتباط) للأجسام المضادة لمستوى من 165-114 محتجز من بشر ونسناس الرياح حول 160 وحدة استجابة. الجدول 11 ‎Kon IGF1R‏ [/مولار.ث] | ‎Koff‏ [1/ث] ‎Chi2/Rmax | si] Kd‏ مولار] ‎3.40E-04| 1.52E+06‏ 0.045 من نسناس | ‎3.10E-04 1.85E+06‏ 0.17 0.032 ‎cl‏ ‏من بشر ومن | ‎3.33E-04 1.52E+06‏ 0.22 0.039 نسناس الرياح المثال 6: ‎alll‏ الأصلى للأجسام المضادة ‎ll‏ تم إنشاؤها على فسفرة ‎phosphorylation‏ ‎IGF-1R‏ ‏من المعروف جيدا أن الأجسام المضادة يمكن أن تحث على تأثير مساعد عندما ترتبط بمستقبلات تيروسين كيناز ‎tyrosine kinase‏ . وعندما لا نرغب في اختيار مثل تلك الأجسام المضادة المساعدة» تم دراسة تقييم فسفرة ‎phosphorylation‏ 167-114 باستخدام الأجسام المضادة 0 الخيمرية . لتلك الأغر/رض؛ تم حضانة ‎incubated‏ خلايا ‎MCF=7‏ في وسط خال من المصل طوال الليل. بعد ذلك»؛ تم إضافة 16-1 )100 نانو مولار) أو ‎Abs‏ يراد اختبارها )10 ميكرو جرام/مللي لتر) لمدة 10 دقائق عند 37 درجة مئوية. تم طرد الوسط وتم تنظيف الحجيرات في محلول منظم انحلال
(الرقم الهيدروجيني 7.5) تحتوي على محلول منظم حمض الهيدروكلوريك ‎Tris HOI‏ بتركيز 10 مللي مولار (الرقم الهيدروجيني 7.5( 9615 من ‎NaCl‏ )1 مولار)؛ 9010 من خليط منظف (105-1101 بتركيز 10 مللي ‎«Ye‏ 9610 من محلول انحلال منظم ‎(Sigma ) (Igepal‏ ‎(Chemical Co.)‏ %5 من ديوكسي كولات الصوديوم ‎Sigma ( sodium deoxycholate‏ ‎(Chemical Co 5‏ 1 قرص ‎TM‏ كامل خليط من مثبط بروتياز ‎«(Roche) protease‏ %1 من مثبط فوسفاتاز ‎phosphatase‏ ل ‎(Calbiochem)‏ ل 90 درجة عند 4 درجات مثئوية. تم ترويق نواتج انحلال عن طريق الطرد المركزي عند 4 درجة مئوية؛ وتسخينها لمدة 5 دقائق عند 100 درجة مئوية والاحتفاظ بها عند -20 درجة مئوية أو تحميلها مباشرة على 9612-4 من أنواع هلام ‎SDS-PAGE‏ . تم إجراء حضانة الجسم المضاد الأولي لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة ثم ‎glass 0‏ باستخدام أجسام مضادة ثانوية مرتبطة ب ‎HRP‏ لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة . تم غسل الأغشية في ‎TBST‏ قبل تصوير البروتينات بواسطة ‎ECL‏ تم حساب البقع باستخدام ‎Image‏ ‏63 ل. تم قياس ‎aid‏ فوسفو-بروتين ‎Phospho— protein‏ باستخدام ‎.GAPDH‏ تم اعتبار فسفرة ‎Phosphorylation‏ 016-114 استجابة ل 1657-1 في صورة 96100 من التنبيه. تم تحديد تأثير الأجسام المضادة ل ‎hIGF-1R‏ على فسفرة ‎IGF-IR‏ في صورة النسبة المئوية المستحثة بواسطة ‎AGF-1‏ ‎Jia‏ النتائج المبينة في الشكل 9 متوسط النسبة المثوية ل 016-114 استجابة للجسم المضاد ل ‎IGF-1R Ab‏ لثلاث نتائج مستقلة +/- .5.10 مقارنة ب 167-1. طبقا لما هو مبين؛ تم الكشف عن فسفرة مهملة أو ضئيلة (أقل من %20( من ‎hIGF-1R‏ عندما تم حضانة خلايا ‎MCF-7‏ ‏باستخدام 10 ميكرو ‎aha‏ من الأجسام الماضدة ل ‎AGF-1R‏ ‏0 المثال 7: تثبيط فسفرة ‎IGF-1R‏ استجابة ل 1657-1 بواسطة أجسام مضادة ل ‎hIGF-1R‏ فأرية لتحديد خصائص الأجسام المضادة المحددة؛ تم دراسة قدرتها على تثبيط الفسفرة المستحثة ب ‎١6171‏ ‎٠‏ لهذا ‎(pall‏ تم حضانة خلايا ‎MCF=T7‏ في وسط خال من المصل طوال الليل. بعد ذلك؛ تم حضانة الخلايا ‎sad‏ 5 دقائق بأجسام مضادة ‎hIGF-1R Abs‏ فأرية قبل إضافة 1657-1 لمدة دقيقتين عند 37 درجة مئوية. تم طرد الوسط وتم تنظيف الخلايا في محلول منظم انحلال (الرقم
الهيدروجيني 7.5) يحتوي على محلول منظم ‎Tris HCL‏ بتركيز 10 مللي مولار (الرقم الهيدروجيني 7.5(« %15 من ‎NaCl‏ )1 مولار)؛ %10 من خليط منظف (175-1101 بتركيز 10 مللي ‎«Ysa‏ 9610 من محلول انحلال منظم ‎«(Sigma Chemical Co.)) (Igepal‏ 965 من ديوكسي كولات الصوديوم ‎«(Sigma Chemical Co)‏ 1 قرص ‎TM‏ كامل خليط من مثبط بروتياز ‎(Roche) 5‏ %1 من مثبط فوسفاتاز ل ‎(Calbiochem)‏ ل 90 درجة عند 4 درجات مثوية. تم ترويق نواتج انحلال عن طريق الطرد المركزي عند 4 درجة مئوية؛ وتسخينها لمدة 5 دقائق عند 0 درجة ‎Liste‏ والاحتفاظ بها عند -20 درجة مئوية أو تحميلها مباشرة على 9612-4 من أنواع هلام +505-0/86. تم إجراء حضانة الجسم المضاد الأولي لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة ثم حضانتها باستخدام أجسام مضادة ثانوية مرتبطة ب ‎HRP‏ لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة 0 الغرفة . تم غسل الأغشية في ‎TBST‏ قبل تصوير البروتينات بواسطة ‎(ECL‏ تم حساب البقع باستخدام ‎Image J software‏ تم قياس قيم فوسفو-بروتين باستخدام ‎GAPDH‏ تم اعتبار فسفرة 0167-15 استجابة ل ‎IGF-1‏ في صورة 916100 من التنبيه. تم تحديد تأثير الأجسام المضادة ل 0167-1 على فسفرة ‎IGF-IR‏ في صورة النسبة المئوية المستحّثة بواسطة ‎AGF-1‏ ‏إن إضافة 0010562 أو 00101118 أو 71964ن جسم مضاد فأري غير مرتبط» لم يثبط فسفرة 016-18 استجابة ل ‎IGF-1‏ (الشكل 10). إن إضافة 0120151 ‎calli‏ من فسفرة ‎hIGF-1R‏ ‏بشكل معتدل استجابة ل 1657-1 (حوالي 9640 من التقليل). وعملت كل الأجسام المضادة الأخرى ل ‎IGF-1R Abs‏ على تقليل فسفرة ‎hIGF-1R‏ بقوة استجابة ل 65-1 (تقليل أكبر من 9680). إن أفضل مثبطات للفسفرة المستحثة ل ‎hIGF-1R‏ هي ‎m212A11 3 m208F2‏ و 00121458 ‎.Mabs‏ ‏0 المثال 8: دراسة امتصاص ‎IGF-IR‏ بعد ارتباط الأجسام لمضادة ل ‎IGF-1R‏ التي تم تكوبنها بواسطة ‎FACS‏ ‏تم حضانة خلايا 1005-7 باستخدام 10 ميكرو جرام/مللي لتر من أجسام مضادة خيمرية عند 4 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. بعد ذلك؛ تم غسل الخلايا وحضانتها عند 4 درجة مثوية أو 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات. تم تحديد كمية الجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية باستخدام جسم مضاد
‎SG‏ على مقياس الخلايا بالتدفق ‎(Becton Dickinson) FacsCalibur‏ حدد ‎IMF‏ الفرق بين ‎MFI‏ المقاس عند 4 درجة مثوية ‎MFI,‏ المقاس عند 37 درجة مثوية بعد 4 ساعات من زمن الحضانة؛ وقد ناظر كمية الجسم المضاد ‎Ab‏ الممتص. تم تقديم ‎DMF]‏ في الأشكال 11 ‎C115‏ ‏والجدول 12. تم حساب النسبة المئوية للامتصاص عند 10 ميكرو جرام/مللي لتر كما هو مبين ‎MFD*100 5‏ عند 4 درجة مثوية-١7/ا‏ عند 37 درجة مثوية)/ا7/ا عند 4 درجات ‎Lighe‏ وتقديم ذلك في الجدول 11. أظهر أقصى ١7/ا[]‏ تم حسابه لكل جسم مضاد خيمري (الشكلين 111 و11ب) عدم وجود علاقة بين المجموعة وأقصى امتصاص. الجدول 12 " ا ا ‎١‏ - 7 ‎j . 'ً = j‏ ) ‎j i‏ = ا ‎j ١‏ ‎j‏ ا . ا ‎i | 2 ١‏ ً' ب ا ل ا ‎j ١‏ ’ | ' ’ ° ا ا ل 7 ‎i j‏ | ا . ا 3 7 ‎i j‏ ) ° ا 3 7 ‎j‏ '
‎3.1E-09 229 68| 4141 G3b‏ لتحديد ما إذا كانت الأجسام المضادة التي تعرفت أيضا على 165-114 من نسناس الرياح كانت قادرة على امتصاص هذا المستقبل؛ تم إجراء نفس تجربة الامتصاص. أظهرت لنتائج المبينة في الجدول 13 أن كل الأجسام المضادة التي تم اختبارها كانت قادرة على المشاركة في امتصاص ‎IGF-1R‏ من النسناس. الجدول 13 ‎Gs #‏ - شال ‎TG cc‏ شال ‎TG i‏ عا ‎TG HG i‏ ‎TG Os Bs *‏
61 93 59 69 11069 G3a
تم أيضا تقييم الخصائص الحركية للجسم المضاد المرتبط عند السطح. لهذا الغرض» تم نثر ‎Lgl‏ ‏خلايا 1007-7 في أطباق 96 عين وحضانتها باستخدام 10 ميكرو جرام / ‎Al‏ لتر من فأر لمدة 0 دقيقة عند 4 درجة مئوية. تم بعد ذلك غسل ‎WAY‏ لإزالة الجسم المضاد غير المرتبط وفي أوساط عند 37 درجة مئوية لمدة 10 20؛ 30؛ 60 أو 120. في كل نقطة زمنية؛ تم تعريض الخلايا للطرد المركزي»؛ ثم وسم السطح على الثلج باستخدام ‎19G-Alexad88‏ ثانوي مضاد للفئران لتحديد كمية الجسم المضاد التي تبقى على سطح الخلية. تم قياس شدة الفلورة لكل جسم مضاد فأري ولكل نقطة زمنية بالإشارة عند 4 درجة مئوية )% للمتبقي من ‎(IGF-IR‏ ورسم منحنى للانحلال الأسي لتحدي ‎jee‏ النصف 11/2 تم اعتبار عمر النصف 11/2 الزمن اللازم للحصول على نقص في 9650 من الإشارة المقاسة عند 4 درجة مئوية. طبقا لما هو موضح في الأشكال 125112( 0 فإن مستوى السطح لكل الأجسام المضادة الفأرية التي سقطت بسرعة على مدار الثلاثين دقيقة الأولى وبلغ النقص أقصاه تقريبا بعد 60 دقيقة من الحضانة (الشكل 112( يتراوح عمر النصف المحسوب بين 10 و18 دقيقة بشأن الجسم المضاد الفأري (الشكل 12ب). لم تكن هناك علاقة بين انحلال
سطح الجسم المضاد ومجموعة الأجسام المضادة. للتحقق من صحة أن نقص إشارة السطح الخلوي كانت بسبب امتصاص الجسم المضاد ‎Ab‏ وليس 5 بسبب تساقط المستقبل؛ تم حضانة الخلايا بالأجسام المضادة الفأرية لمدة صفرء 30 و60 دقيقة عند 37 درجة مثئوية (الشكل 13). تم بعد ذلك تثبيت الخلايا وإنفاذيتها أو عدمه لتحديد جسم مضاد مرتبط بسطح الخلايا (الإنفاذية ‎(W/o permeabilization‏ وإشارة الجسم المضاد الإجمالية التي
تناظر الجسم المضاد الممتص المرتبط عند سطح الخلية (بالإنفاذية). تم تحديد كمية الجسم المضاد الذي يمكن امتصاصه (السيتوبلازمي ‎(cytoplasmic‏ كما يلي: ‎MFI‏ بعد الإنفاذية - الإنفاذية ‎MFI w/o‏ أثبتت تلك التجرية أن نقص الجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية كان يرجع إلى نقص في الأجسام المضادة السيتوبلازمية التي تبين أن الأجسام المضادة قد تم امتصاصها (الشكل 13). بالإضافة إلى ذلك؛ بدا انحلال الأجسام المضادة بعد ساعة واحدة من الحضانة كما هو ‎(pe‏ بنتقص الإشارة بعد الإنفاذية (الإجمالي). المثال 9: ‎duly‏ امتصاص 167-18 بعد ارتباط الجسم المضاد ل ‎IGF-1R‏ الذي تم تكوينه بواسطة تحليلات موحدة البؤرة لتأكيد امتصاص الأجسام المضادة أيضاء تم إجراء قياس ميكروسكوبي موحدة البوّرة لتقييم التوزيع 0 الخلوي الفرعي للأجسام المضادة عقب انتقال الخلايا. تم حضانة ‎WAY‏ باستخدام 0167-11 ‎xe Abs‏ 37 درجة مئوية؛ تثبيتها وإنفاذها. لذاء تم صبغ الخلايا باستخدام جسم مضاد ثانوي 0168-8 وجسم مضاد 8000-1 أرنبي تم الكشف عنه باستخدام جسم مضاد ثانوي ‎IgG‏ ‎Alexa 555‏ أرنبي. قبل الحضانة عند 37 درجة مئوية؛ تم تحديد موقع ‎Ab‏ 20872 الفأري على غشاء الخلايا ‎MCF-7‏ (الشكل 114( وتم ملاحظة عدم تحديد ‎alse‏ مشترك باستخدام واسم جسيم ‎damp-1 Js 5‏ باستخدام واسم تحديد موقع مشترك ببرنامج ‎ImageJ software‏ لقد قل الجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية كثيرا بعد 15 دقيقة من الحضانة. ‎(Sing‏ مصاحب لنقص الجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية؛ تمالكشف عن جسم مضاد داخل الخلايا إلى حويصلات. تم التمكن من ملاحظة تحديد مواقع مشتركة بشكل نادر باستخدام 1800-1 . بعد 30 دقيقة من الحضانة؛ لم يتم الكشف عن الجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية. ويرغم ذلك؛ زاد تحديد المواقع المشتركة للجسم المضاد في الجسيم الحال. ‎amg‏ ساعة من الحضانة؛ قل صبغ ‎Ab‏ داخل الخلايا ‎Sad‏ عن عدد المواقع المشتركة باستخدام 18000-1. لقد ارتبطت الخاصية الحركية للجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية والتراكم داخل ‎WAN‏ بالخاصية الحركية لانحلال سطح الجسم المضاد المقاس ب ‎FACS‏ ‏بالإضافة إلى ذلك؛ طبقا لما هو مبين بدراسات ‎(FACS‏ بدء انحلال الأجسام المضادة الفأرية بعد ‎dela‏ واحدة من الحضانة بواسطة القياس الميكروسكوبي أحادي البؤرة.
تم ‎Load‏ تقييم امتصاص الأجسام المضادة الفأرية الأخرى 7167-11 كلها وتحديد المواق المشتركة فيها باستخدام 8070-1 (الشكل 14[ب). المثال 10: تثبيط انحلال ‎Abs‏ باستخدام مثبط جسيم حال؛ ‎Bafilomycin Al‏ لتأكيد أن الأجسام المضادة التي بلغت الجسيم الحال تم حلهاء تم معالجة الخلايا أو عدم معالجتها باستخدام ‎<bafilomycine Al‏ وهو مثبط فعال لوظائف الجسيم الحال. تم بعد ذلك حضانة الخلايا باستخدام 10 ميكرو جرام / مللي لتر من ‎Ab‏ تم اختباره عند 4 درجة مثئوية؛ وغسلها وحضانتها لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية. تم الكشضف عن ‎Ab‏ الذي تم امتصاصه بعد إنفاذية الخلايا باستخدام ‎IgG-Alexa 488 Ab‏ فأري ثانوي. أدت إضافة ‎bafilomycine Al‏ إلى منع انحلال ‎Ab‏ بين الخلايا (الشكل 1) بما دل على امتصاص ‎Abs‏ بفعالية وانحلالها إلى أجسام حالة. 0 المثال 11: تأثير الرقم الهيدروجيني على ارتباط الجسم المضاد 11-]6)| والعلاقة بفعالية السمية الخلوية بينما تم اختيار الأجسام المضادة على أساس الفعالية الامتصاصية وثبت أعلاه تحديد الموضع بشكل مشترك بالأجسام الحالة الداخلية الأولية قبل الدخول إلى حيز حال ‎DAL‏ تم تعديل نهج مثير تمثل فى تحديد أجسام مضادة تم تعديل ثبات ربط الجسم المضاد 7167-11 بشأن بيئة الرقم الهيدروجيني 5 والأجسام المضادة المفضلة التي انفصلت بشكل مفضل من ‎IGF-1R‏ عندما أصبحت بيئة الرقم الهيدروجيني حمضية. في الواقع؛ فإن الفرق الأولي بين الأجسام الداخلية الأولية والحالة هو الرقم الهيدروجيني اللمعي: في حيز الجسيم الداخلي؛ يكون الرقم الهيدروجيني حوالي 6 عندما يكون الرقم الهيدروجيني حوالي 4.5 في حيز الجسيم الحال. من المعروف جيدا أنه بمجرد الامتصاص بعد ارتباط المركب الترابطى ‎(IGF1‏ 7167-11 يعود 0 مرة أخرى إلى سطح الخلية خلال مسار إعادة تدوير. بدون التقيد بنظرية؛ هناك افتراضية يتم وصفها هنا أن الأجسام المضادة أكثر عرضة للتحرر من هدفها مبكرا عندما يفضل الرقم الهيدروجيني الحمضي بشكل محتمل إعادة تدوير الهدف إلى الغشاء ويمكن اعتباره بالتالي كمرشحات مفضلة لطرق المترافقات المناعية. وللتحقق ما إذا كان بعض
الأجسام المضادة يبدي ‎Jie‏ تلك الخاصية وتريط هذه الخاصية بالنشاط السام للخلاياء تم إجراء ريط الأجسام المضادة الفأرية ‎hIGF-1R Mabs‏ على سلالة خلية ‎MCF-7‏ في محاليل منظمة عند رقم هيدروجيني مختلف. تم حضانة تركيز متزايد ل 01/5 فأرية على سلالة خلية ‎MCF-7‏ لمدة 0 دقيقة عند 4 درجة مئوية عند الرقم الهيدروجيني الذي يتراوح من 5 إلى 8. تم بعد ذلك غسل الخلايا 3 مرات وحضانتها باستخدام الجسم المضاد الثاني الملائم المقترن ب 488 ‎Alexa‏ في محلول منظم ‎FACS‏ . تم حضانة الخلايا لمدة 20 دقيقة إضافية عند 4 درجات مئوية في الظلام ثم غسلها 3 مرات في محلول منظم ‎FACS‏ . تم ربط الأجسام المضادة 114- ]116 مباشرة على خلايا عيوش حيث تم تحديدها باستخدام يوديد بروبيديوم الذي صبغ الخلايا الميتة. تم حساب ‎dad‏ ريط ‎EC50‏ ‏التي تم التعبير عنها بالمولار باستخدام تحليل الانحدار غير ‎.(GraphPad Prims 4.0) hall‏
0 للم يتم التأثير بشكل كبير على قيمة 5050 ‎Jal‏ مجموعة تجميع قمة لاصقة ‎hIGF-1R‏ آب؛ بواسطة الرقم الهيدروجيني (الشكل 16). لقد تم تحسين قدرة ربط ‎Abs‏ 7167-11 التي تنتمي لمجموعة تجميع القمة اللاصقة؛ 3؛ عند الرقم الهيدروجيني الحمضي. على النقيضن تم إنقاص قدرة ربط ‎Abs‏ 016-114 التي تنتمي إلى مجموعات تجميع القمة اللاصقة 1 و2 و4 عند الرقم الهيدروجيني الحمضي.
5 وخلال الهدف لتحديد ما إذا كان الرقم الهيدروجيني يتضمن تأثير موجب على السمية الخلوية المستحّثة بمترافق مناعي؛ تم استخدام الاختبار البشري ‎Fab-ZAP‏ المتوفر تجاريا ‎(ATS BIO)‏ ‎(Sau‏ موجزء تم استزراع خلايا 1/0577 عند 2000 خلية/عين على أطباق 96 عين وتركها طوال الليل لتتماسك. وبعد ‎cas‏ تم معالجة الخلايا باستخدام 0.45 ميكرو جرام/مللي لتر من ‎Fab-ZAP‏ ‏وتركيزات زائدة من الأجسام المضادة الخيمرية ‎Ab‏ 167-11 . تم استخدام الجسم المضاد أحادي
0 النسيلة 0964 الذي لا يرتبط بسطح الخلية كعينة مقارنة سالبة. في اليوم 6؛ تم قياس عيوشية الخلايا باستخدام اختبار عيوشية خلايا تألق ‎CellTiter Glo Luminesence Cell Viability‏ من ‎.Promega (Madison, Wi)‏ كما هو موضح في الشكل 117( فإن الأجسام المضادة ل ‎IGF-‏ ‎IR Abs‏ من المجموعتين 4 و5 لم تحث على أي سمية خلوية على 1005-7 حيث تم قياس سمية خلوية معتدلة (المجموعات 1 35135( إلى سمية خلوية عالية (المجموعة 2) باستخدام
5 مجموعات أخرى. في الشكل 17ب؛ وأكد تحديد قيمة 1050 أن المجموعةالتانية تميزت بأكبر فعالية
سمية للخلايا بما يؤكد أن هذه الأجسام المضادة ستكون المناسبة على الإطلاق لطريقة ‎ADC‏ ‏(مترافق الجسم المضاد والعقار) أو ‎ATC‏
يبين الشكل 17 النتائج التي أكدت أنه ضمن 15 جسم مضاد خيمري تم تقييمه تحقق أكبر تأثير سام ‎WAL‏ باستخدام ‎€214F8 5 0213810 «c212A11 «c219D5 «c208F2‏ التي تنتمي كلها للمجموعة 2. ومع ذلك؛ فإن الأجسام المضادة في المجموعات ‎GAY‏ من 1 إلى 4 تبدي أيضا حساسية للرقم الهيدروجيني الحمضي لارتباط ‎IGF-IR‏ ولم يتم تجميعها كأفضل عناصر مرشحة للسمية الخلوية بما يؤكد أن هذه الخاصية يمكن الحاجة إليها ولكن لا تكفي لتفسير الخصائص المحددة للأجسام المضادة من المجموعة 2. ولفهم الخصائص المحددة لهذه المجموعة من الأجسام المضادة فهما أفضل؛ تم إجراء دراسات علاقات ارتباط بشأن البيانات المتوفرة لكل الأجسام المضادة. 0 وأكدت نتائج هذه التحليلات أن كلا من تثبيط فسفرة وتقليل قدرة الارتباط ب 7165-11 في بيئة رقم هيدروجيني حمضي تكون مطلوبة للحصول على أفضل نشاط سام للخلايا (الشكل 18). في الواقع؛ أكدت (61) 101018 ‎(G4) 20171 (Gl)‏ 10562 التي قل ارتباطها في بيئة الرقم الهيدروجيني الحمضي أنشطة سامة للخلايا منخفضة ولكنها شكلت مثبطات فسفرة رديئة. من الناحية الأخرىء شكلت (638) 102018 ‎(G3b) 41588 (G3a) 11069 (G3a)‏ 41064 ‎433H9 (G3b) 5 41451 (G3b) 5‏ مثبطات فعالة لفسفرة مستحثة ب ‎IGF]‏ ولكن غير حساسة لتباين الرقم الهيدروجيني أو تم تحسين ارتباطها عند الرقم الهيدروجيني الحمضيء وأظهرت أنشطة
سامة للخلايا معتدلة فحسب في اختبار 86-285 البشري. تم ربط الأجسام المضادة ‎IGF-1R‏ المتوافقة مع البشر على سلالة خلايا ‎MCF-7‏ في محاليل منظمة عند رقم هيدروجيني مختلف. تم حضانة التركيزات المتزايدة من الأجسام المضادة المتوافقة 0 مع البشر على سلالة خلايا 7- 0/057 لمدة 20 دقيقة عند 4 درجة مئوية في مدى رقم هيدروجيني مختلف يتراوح من 5 إلى 8.تم بعدها غسل الخلايا ثلاث مرات وحضانتها بجسم مضاد ثاني ملائم مقترن ب 488 ‎Alexa‏ في محلول منظم 0/85. تم حضانة الخلايا لمدة 20 دقيقة إضافية عند 4 درجة مئوية في الظلام ثم تم غسلها ثلاث مرات في محلول منظم ‎FCAS‏ تم في الحال ربط الأجسام المضادة 167-114 على ‎WIA‏ عيوش حيث تم تحديدها باستخدام يوديد بروييديوم الذي صبغ الخلايا 5 الميتة. تم حساب قيمة 5050 للارتباط التي تم التعبير عنها بالمولار باستخدام تحليل الانحدار غير
الخطي )4.0 ‎(GraphPad Prims‏ أظهرت الأجسام المضادة ‎IGF-IR‏ المتوافقة مع البشر قدرة
ربط أقل عند رقم هيدروجيني حمضي كما هو مبين في الأشكال 132 و32ب.
المثال 12: تقييم الصور المتوافقة مع البشر ل ‎208F2 Mab‏
1-12 تقييم ربط وامتصاص الصورة المتوافقة مع البشر الأولى ‎hz208F2 VH3/VL3‏ (التي شار إليها ‎Lad‏ باسم 1026/1024 ‎(h2208F2‏ تم تقييم ربط الصورة الأولى المتوافقة مع البشر من ‎mAb‏ 020872 على سلالات خلايا ‎NIH 313 IR+; 0605-7 (MCF-7‏ تم إضافة التركيزات الزائدة ل ‎«m208F2‏ 20872 أو ‎VH3VL3‏ 1220872 على سلالة كل خلية لمدة 0 دقيقة عند 4 درجة مئوية. بعدها تم غسل الخلايا وتم الكشف عن ربط ‎mAb‏ المختبّر باستخدام الجسم المضاد الثاني المناظر. من أجل التحقق من صحة التعبير عن ‎IR‏ البشري على سلالة الخلية 0 المحورة وراثياء تم استخدام نسيلة الجسم المضاد ل ‎WIR‏ التجارية 6805 ومنحنى التعرف عليها المبين في (الشكل 19د). أكدت مقارنة الصورة المتوافقة مع البشر باستخدام أي من الجسمين المضادين الخيمري أو الفأري على خلايا ‎MCF-7‏ (الشكل 119( أو 0605-7 من نسناس (الشكل 9ب) منحنيات متقارية للصور الثلاث المختبّرة. لم تعدل عملية التوافق مع البشر نوعية التعرف على الجسم المضاد التي يمكن أن تشبه بصورة ممتازة الصور الفأرية والخيمرية بشأن غياب التفاعل ‎Jalal) 5‏ على مستقبل الإنسولين البشري (الشكل 19ج). كانت قيم 5050 المحسوية للصورة الأولى المتوافقة مع البشر ل 020862 على سلالة الخلية البشرية ‎MCF-T7‏ وسلالة الخلية 605-7 من النسناس متشابهة لتلك التي تم تحديدها باستخدام الصورة الفأرية أو الخيمرية من 20862. تم تقييم القدرة على امتصاص ‎MAb hz208F2 VH3/VL3‏ بواسطة تعداد الخلايا بالتدفق. تمت حضانة خلايا 1007-7 باستخدام 10 ميكرو جرام/مللي لتر من الأجسام المضادة عند 4 درجة مئوية لمدة 0 20 دقيقة. بعد ذلك؛ تم غسل الخلايا وحضانتها عند 4 درجة ‎Augie‏ أو 37 درجة مئوية لمدة 4 ساعات. تم تحديد كمية الجسم المضاد المرتبط بسطح الخلية باستخدام جسم مضاد ثانوي. حدد ‎DMF‏ الفرق بين ‎MFI‏ المقاس عند 4 درجة مئوية ‎MFI‏ المقاس عند 37 درجة مئوية بعد 4 ساعات من زمن الحضانة؛ وقد ناظر كمية الجسم المضاد ‎AD‏ الممتص. تم تقديم ‎IMF‏ في الشكل 4. تم حساب النسبة المئوية للامتصاص عند 10 ميكرو جرام/مللي لتر من 80 كما هو مبين 5 1021*100 عند 4 درجة مئوية-ا1/7 عند 37 درجة مئوية)/ا/ا عند 4 درجات مئوية وتقديم
ذلك في الجدول ‎L114‏ لذاء كان ‎hz208F2 VH3/VL3 J‏ المتوافق مع البشر خصائص ارتباط وامتصاص مشابهة لذلك المقاس بالأجسام المضادة 20852 الفأرية والخيمرية. الجدول 014 2-2 تقييم امتصاص الصور المتوافقة مع البشر اللاحقة ‎hz208F2‏ ‏5 تم جعل ‎mAb 208F2‏ متوافقا مع البشر وتم تقييم خصائص الصور المتغيرة الست المتوافقة مع البشر (بما في ذلك الصورة الأولى الموصوفة في 1-12). تم تقييم خصائص الربط للصور المتغيرة المتوافقة مع البشر بواسطة تحليلات ‎FACS‏ على سلالة خلية كارسينوما غدية ثديية ‎MCF-7‏ ‏بشرية وسلالة خلية 0605-7 من النسناس الرياح باستخدام تركيزات متزايدة من الجسم المضاد. لهذا الغرض» تم حضانة ‎WA‏ (1 * 610 خلية/مللى ‎(ie‏ باستخدام أجسام ‎alias‏ ل 7-114 6)| المتوافق 0 مع البشر لمدة 20 دقيقة عند 4 درجة مئوية في محلول منظم ‎PBS) FACS‏ 858960.1؛ ‎(NaN3 %0.01‏ تم غسل ‎WAN‏ 3 مرات وحضانتها باستخدام الجسم المضاد الثانوي الملائم الذي تم إقرانه ب 488 ‎Alexa‏ قبل حضانته لعشرين دقيقة إضافية عند 4 درجة متوية في الظلام ثم غسلها 3 مرات فى محلول منظم 805 . تم إجراء خطوة ارتباط الأجسام المضادة ل 167-11 في الحال على ‎LIA‏ عيوش ‎Cua‏ تم تحديدها باستخدام يوديد بروييديوم (الذي يصبغ الخلايا الميتة). تتم حساب ‎dad‏ 5050 للارتباط التي تم التعبير عنها بالمولار باستخدام تحليل الانحدار غير الخطي ‎.(GraphPad Prims 4.0)‏ أظهرت ‎dad‏ 5050 لصور المتغيرة المتوافقة مع البشر أن كل الصور المتغيرة المتوافقة مع البشر أبدت خصائص الارتباط المكافئة على كل من سلالات الخلايا من البشر ومن نسناس الرياح.
يبين الجدول 14ب قيم 5050 للأجسام المضادة المتوافقة مع البشر. الجدول 14ب قيمة ‎com‏ (نانو مولار) الصور المتغيرة المتوافقة مع البشر ' ' 2 1 -3 تقييم امتصاص صورة أخرى متوافقة مع البشر 022082 تم حضانة ‎MCF-7 WDA‏ باستخدام 10 ميكرو جرام/مللي لتر من الأجسام المضادة المتوافقة مع البشر عند 4 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. ‎(Wax‏ تم غسل الخلايا وحضانتها عند 4 درجة مئوية أو 7 درجة مثوية لمدة 4 ساعات. تم تحديد كمية الجسم المضاد المرتبط عند سطح الخلية باستخدام جسم مضاد ثانوي على مقياس الخلايا بالتدفق 7لا10ا8056:8-. حدد ١17/الا‏ الفرق بين ‎MFI‏ المقاس عند 4 درجة مئوية ‎MFI‏ المقاس عند 37 درجة مئوية بعد 4 ساعات من زمن الحضانة؛ وقد ناظر 0 كمية الجسم المضاد ‎AD‏ الممتص. تم تقديم ‎DMF]‏ في الشكل 14ج. تم حساب النسبة المئوية للامتصاص عند 10 ميكرو جرام/مللي لتر كما هو مبين ‎MFD*100‏ عند 4 درجة مئوية-١17/ا‏ عند 37 درجة 5% ‎MFI1/(4‏ عند 4 درجات مثوية) . يتسم الجسم المضاد المتوافق مع البشر 1077/8 1220872 بالقدرة على الحث على امتصاص ذي مغزى ل ‎AGF-1R‏ ‏الجدول 14 ‎z‏
‏سا الحا‎ I 88 468 hz208F2 دي ان ‎I‏ المثال 13: ‎IGF-1R‏ كهدف لطريقة ترافق مناعي تم إعداد دراسات ‎IHC‏ للتحقق من صحة ‎hIGF-1R‏ كهدف لطريقة ترافق مناعي. بالفعل يتطلب هدف مفيد لمثل تلك الطريقة تعبير مفرط ذي مغزى على خلايا ورمية مقارنة بخلايا عادية. هناك خاصية أخرى لهدف ملائم لطريقة ترافق مناعي هي سيادة فرط تعبير وراثي على نسبة مئوية ذات مغزى لمجموعة مرضى في أعراض عدة. ولتقييم ما إذا كان يمكن اعتبار 1165-11 هدفا ملائما لطريقة ترافق مناعي؛ تم اختيار جسم مضاد متعدد النسائل متوفر تجاريا ‎AF305-NA)‏ من ‎(R&D Systems‏ تم وصفه كنطاق نوعي خارج
AF305-NA ‏مقابل 014 . كانت الخطوة الأولى للعملية هي التأكد من نوعية‎ 0165-11 WAY تجاه ‎hIGF-1R ECD‏ وغياب تعرفه على 014. لهذا الغرض؛ تم إجراء سلسلة من اختبارات ‎ELISA 0‏ على كل من البروتينات ‎IGF-1R‏ البشري 5 ‎ECD‏ »71 باستخدام بروتوكولات تم وصفها أعلاه بالتفصيل بالفعل. أظهرت النتائج المبينة في الشكل 20 أن الجسم المضاد متعدد النسائل 716-11 تعرف بشكل فعال على ‎.hIGF-1R ECD‏ إن الجسم المضاد ‎(Calbiochem) (GR11L‏ الذي تم استخدامه كعينة مقارنة موجبة أعطى الخصائص المتوقعة. طبقا لما هو مبين بصاحب الطلب؛ أظهر الشكل 5 20ب أن ‎AF305-NA‏ لا يتعرف على ‎WIR‏ على النقيض من الجسم المضاد ‎hIR 6805 J‏ ‎(Calbiochem) (Mab‏ المستخدّم في ‎due‏ مقارنة موجبة في اختبار ‎ELISA‏ وبالمثال؛ أكد ‏تقييم ارتباط ‎AF305-NA‏ متعدد النسائل على الخلايا المتحورة +714 بواسطة تحليلات ‎FACS‏ ‏أنه لا يتعرف على الصورة الخلوية ل ‎hIR‏ (الشكل 20د) بينما الجسم المضاد 68405 ‎hIR‏ (الشكل ‏0)) قدم الخصائص المتوقعة على ‎LIAN‏ المتحورة وراثيا التي تبين أنها تعبر عن مستوى مرتفع 0 من 04. كما هو متوقع؛ فإن ‎(GRILL‏ الذي يتعرف على ‎hIGF-1R‏ وتم إدخاله في التجرية ‏كعينة مقارنة سالبة؛ لا يبدي أي إشارة على الخلايا المتحورة ‎hIR+‏ (الشكل 20ج).
وعند التحقق تماما من الجسم المضاد ‎AF305-NA‏ لدراسة توزيع ‎IGF-IR‏ تم إعداد بروتوكول ‎IHC‏ على ‎Discovery Ultra autostainer Ventana‏ بإيجاز ؛ بعد نزع الشمع؛ تم إجراء خطوة استرجاع ‎alge‏ الضد باستخدام ‎CCI‏ مناظر لمحلول منظم ‎EDTA‏ برقم هيدروجيني 8 لمدة 32 دقيقة عند 96 درجة مئوية. تم حضانة الجسم المضاد الرئيسي ‎(AF305-NA)‏ لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية. بعد الغسل؛ تم حضانة جسم ‎alias‏ ل ‎IgG‏ ماعزي وفقا ل ‎«HRP-OMap‏ ‎(Ventana)‏ لمدة 16 دقيقة عند 37 درجة مثوية ثم الكشف عن ذلك باستخدام مولد لوني ‎DAB‏ ‏أخيراء تم إخضاع الأنسجة لصبغ مضاد باستخدام ‎Hematoxilin‏ . بعدها تم تثبيت الشرائح في وسط 50/68 وللتحقق من صبغ ‎(JHC‏ تم اختيار مجموعة من الأنسجة الورمية من طعم خارجي ‎Lod‏ يتعلق بالتعبير عن 0167-114 في المختبر . طبقا لما هو مبين في الشكل 21؛ يتم ملاحظة 0 صبغ غشائي قوي على الأنسجة الموجبة ‎((NCI-H82 5 NCI-H23 MCF-7)‏ لم يتم ملاحظة صبغ غشائي على 1897464 المحددة كورم سالب. بالنسبة لتحليل الصبغ؛ تم مسح الشرائح باستخدام ماسحة ‎HT‏ من ‎Roche Ventana‏ وتم حساب صبغ ‎IGF-1R‏ باستخدام برنامج ‎Virtuoso‏ ‎Ventana)‏ 40008)). بالنسبة لتحليل الأنسجة؛ تم تسجيل نقاط أريع حقول عرض ‎(FOVS)‏ لكل ورم؛ حسب الإمكان» بأكثر من 50 خلية لزيادة الدقة الإحصائية للخوارزم. تم تسجيل نقاط الأنسجة 5 +++ (يوصف ‎Lad‏ باسم 3+)؛ ++ إلى +++ ‎WS)‏ يوصف ‎Load‏ باسم 2+ إلى 3+ أو باسم ++/+++)؛ ++ (يوصف ‎Lind‏ باسم 2+)؛ + (يوصف أيضاباسم 1+) وفقا للخوارزم الغشائي 2 . تم تحديد مجموع النقاط عقب إرشادات اختبار ‎CAPJASCO‏ على أنها )+( للصبغ الغشائي الضعيف أو غير المكتمل؛ أو الصبغ الغشائي الضعيف والمكتمل في أقل من 9610 من الخلايا في العينة.
0 إن مجموع نقاط (++) تم وصفه على أنه صبغ غشائي كامل يتسم بأنه غير منتظم أو ضعيف ولكن بتوزيع محيطي واضح في 9610 على ‎BY)‏ من ‎(DAY‏ أو صبغ غشائي كامل كثيف في %30
أو أقل من الخلايا الورمية. ويناظر مجموع نقاط (+++) صبغ غشائي كثيف منتظم بأكثر من 9630 من الخلايا الورمية التغلغلية. عندما يكون مجموع نقاط الورم (++) إلى ‎(HH)‏ فإن عدم التجانس في الأنسجة المتحللة 5 الورمية (-) يعني عدم الكشف عن تعبير عن 0165-18 و(©) تعني أن الصبغ يتسم بأنه
سيتوبلازمي على وجه الحصر. يتسم الصبغ السيتوبلازمي بغياب الصبغ الغشائي الذي يكون خلايا معزولة. تم إجراء دراسة موسعة عندئذ على الأنسجة الورمية والعادية باستخدام البروتوكول المذكور أعلاه (الشكل 22 وب). بالنسبة لهذه الدراسات؛ تم استخدام ورم طبيعي بشري ‎TMA‏ من 5006101000105 لإجراء دراسات توزيع وانتشار. تم إدخال عينتي مقارنة مختلفتين من كل دورة +©801051810. تمثلت عينة مقارنة في أقسام المشيمة المعروفة بعينة مقارنة موجبة لتعبيرها عن ‎IGF-IR‏ وتم تزويدها بأنسجة ‎TMA‏ ‏تمثلت سلسلة ثانية من عينات المقارنةعلى 3 شرائح من أنسجة طعوم خارجية ورخية تقدم مجموع 0 تقاط 2+ أو 3+ ‎MCF-7)‏ و ‎NCI-H82 (NCI-H23‏ بالترتيب). يتم إضافة عينة التحكم الأخيرة في كل تشغيلة صبغ لمعايرة التعبير الوراثي. طبقا لما هو متوقع؛ كانت المشيمة والأنسجة من الطعم الخارجي موجبة ل 0167-1. تم ملاحظة صبغ غشائي قوي في اربع عينات مقارنة. في اللوحة الأولى للأنسجة الطبيعية البشرية (الشكل 122(¢ تم ملاحظة صبغ غشائي خفيف ل ‎IGF-IR‏ لم يتخطى 1+ في جهاز المّعدة (المريء؛ 5 الأمعاء الدقيقة؛ القولون» والمستقيم). بالنسبة لكل الأنسجة الأخرى التي تم تحليلها؛ لم يتم ملاحظة تعبير غشائى عن 65-185 . في اللوحة الثانية للأنسجة البشرية الطبيعية (الشكل 22ب)؛ تم ملاحظة صبغ غشائي طفيف عن ‎JIGF-1R‏ يتخطى 1+ في بنيات الكُلى. تم ملاحظة صبغ غشائي قوي (++) على ظهارة البروستاتا والظهارة البولية. 0 الم يتم ملاحظة صبغ غشائي قوي كما هو متوقع لهذه الأنسجة. وأكد هذا النمط من التعبير القوي أن 7161-11 يمكن أن يكون هدفا جيدا لطرق ‎ADC‏ أو ‎ATC‏
لتحديد الأعراض المحتملة لاستهداف ترافق ‎elie‏ 167-114 تم تحليل عينات من أورام بالرئة والثدي والرأس والرقبة والمثانة والكُلى للتعبير الوراثي عن 167-11 باستخدام البروتوكول المبين أعلاه. ومن بين 69 عينة من الرئة التي تم دراستهاء تم التمكن من تفسير 67. تم حساب التعبير عن ‎IGF-IR 5‏ كما هو مبين أعلاه. كما هو مبين في الشكل 23؛ تم الكشف عن تعبير غشائي قوي على العديد من أنواع الكارسينوم مقارنة بالأنسجة المجاورة الطبيعية التي تكون سالبة تماشيا ما تم وصفه أعلاه على الأنسجة الطبيعية. تم تلخيص الحالات التي تم تحليلها كلها في الجدول 15. تم ملاحظة 9655 من الحالات ++ أو +++ ‎La‏ فى ذلك كل الأنماط الفرعية من سرطان الرئة. كانت كارسينوما الرئة للخلايا الحرشفية هي الأورام الأكثر تعبيرا عن ‎hIGF-1R‏ بنسبة 91670 من الحالات 0 جم يجب أو +++ و9643 احتفاظا بالأورام +++ و++/+++. وتأتي هذه النتائج تماشيا مع البيانات المنشورة التى وصفت الرببوسومات المتعددة أو تضخمات 116-114 فى مرضى كارسينوما الرئة للخلايا الحرشفية. الجدول 15 التعبير عن النسيج ‎IGF-1R‏ الطبيء كارسينوما غدية رئوية؛ متمايزة جيدا )-( )-( 6 هااا ‎T2bN2MO‏ 18/30 كارسينوما غدية رئوية؛ متمايزة جيدا ‎T2aNOMO IB‏ 0/15 |(-) -( 1046 كارسينوما غدية رئوية؛ متمايزة جيدا ‎T2aNOMO ١8‏ 0/39 ا(+) -( 1086
كارسينوما غدية رثوية؛ متمايزة جيدا 13082040 22/22 ا() 5 ‎IA 157 6‏ كارسينوما غدية رئوية؛ متمايزة بشكل معتدل 0/6 )+( 6 ‎T2aNOMO IB 156 6‏ كارسينوما غدية رثوية؛ متمايزة بشكل معتدل 0/30 )+( )-( ‎T2aNOMO 1B 102 6‏ كارسينوما غدية رثوية؛ متمايزة بشكل معتدل 0/12 )+( 6 ‎T2aNOMO IB 158 6‏ كارسينوما غدية رثوية؛ متمايزة بشكل معتدل 2/15 6 6 ‎T3N2MO IIA 159 6‏ ‎IGF-IR‏ الطبيعي كارسينوما الرئة ذات ‎WIAD‏ الحرشفية»؛ متمايزة جيدا 5/43 أ(+) إلى )++( ‎(OY‏ ‎T2aN1MO IA 101 6‏ كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 0/15 أ(+) إلى )++( ‎(OY)‏ ‎T2aNOMO 1B 109 6‏ كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 2/20 ا|(+++) )-( ‎T3N2MO IIA 113 6‏ كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 4/61 |(++) إلى )-( ‎1١281100 IA 115 6‏ (+++)
كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 0/17 ا|(++) إلى )-( ‎T2aNOMO IB 120 6‏ (+++) كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 1/46 |(++) إلى )-( ‎T2bNIMO 196 66‏ (+++) كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 1/43 ا|(++) إلى )-( ‎T2aN1MO lA 123 6‏ (+++) كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 8/28 )++( )-( 6 عغااا ‎T2aN2MO‏ ‏كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 0/17 )++( )-( 66 1280/1082 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 0/19 |)++( )-( ‎IB 139 6‏ 1280/10 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 4/32 )++( )-( ‎T2aN2MO IIA 144 6‏ كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 0/24 |(+++) )7( 6 خا ‎T2bNOMO‏ ‏كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة جيدا 5/40 ا(+++) )-( ‎T2bNIMO 196 6‏ كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل )+++( )-( ‎IB 155 6‏ 1280/00 0/20
كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل )1( )-( ‎T2bNIMO 18 6‏ 1/15 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل أ(+) إلى )1+( |)( ‎T2aNOMO IB 106 6‏ 0/8 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل ا|(+++) )-( ‎T3NOMO 1958 6‏ 0/16 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل )7( 0( ‎T2aNOMOQ IB 118 6‏ 0/16 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل |(++) )-( ‎T2bNOMO IIA 119 6‏ 0/34 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل ا|(+++) )-( 6 عغاا ‎T2aN2MO‏ 5/18 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل ا|(+++) )-( ‎T2aN1MO IIA 129 6‏ 1/25 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل |(++) إلى )-( ‎T2bNOMO IIA 130 6‏ 0/22 )+++( كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل )7( )-( ‎١281/0 IIA 131 6‏ 3/21 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل أ(+) إلى )1+( |)( ‎TIbNIMO IIA 134 6‏ 2/18
كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل أ(++) )- 6 ها 1281/0 1/33 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل |(+++) )- 6 خا ‎T2aN1IMO‏ 1/25 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل أ(++) إلى )- ‎T2aNOMO IB 146 6‏ 0/21 (+++) كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل معتدل أ(++) )- ‎T3NOMO IIB 151 6‏ 0/28 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل سيء ‎(HHH)‏ )-( ‎IIIA 132 6‏ 140/0 0/50 كارسيتوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة ‎I<‏ سيء )7( )7( ‎IIA 135 6‏ 1282/0 1/3 كارسيتوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة ‎I<‏ سيء )+( إلى )++( )7( 6 18584 130100 0/22 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل سيء ‎(HHH)‏ )-( ‎IB 141 6‏ 1280/00 0/22 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل سيء ا(++) )-( ‎T2bNOMO IIA 128 6‏ 0/18 كارسيتوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة ‎I<‏ سيء )+( إلى )++( )7( ‎T2aNOMO IB 147 6‏ 0/11
كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل سيء أ(++) 5 ‎T2aNOMO 98 6‏ 0/12 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ متمايزة بشكل سيء أ(-) 0( ‎T3NOMO 1898 6‏ 0/14 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الحرشفية؛ الخلايا المغزلية )++( 5 6 ها ‎bNOMO‏ 71 0/10 التعبير عن النسيج ‎IGF-IR‏ الطبيعي التعبير عن النسيج ‎IGF-IR‏ الطبيعي كارسينوما عصبية صماوية للرئة ذات الخلايا الصغيرة 0/7 )++( 0( ‎T2aNOMO IB 112 6‏ كارسينوما عصبية صماوية للرئة ذات الخلايا الصغيرة 0/38 {)+( )7( ‎T3NOMO IIB 133 6‏ التعبير ‎Ge‏ النسيج ‎IGF-IR‏ الطبيعي كارسينوما الرئة ذات الخلايا الكبيرة ‎T2aNOMO ١8‏ 0/9 ا(++) إلى أ( 6 114 )44+(
كارسينوما الرئة ذات الخلايا الكبيرة ها ‎bNOMO‏ 11 0/14 |)+( 65 1256 كارسينوما الرئة ذات الخلايا الكبيرة ‎T2aNOMO IB‏ 0/33 |)++( -( 1426 التعبير عن النسيج ‎IGF-1R‏ الطبيعىي كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرئوية؛ غير موسينية ‏ أ() 6 7/17 T3N2MO ‏عغااا‎ 6 كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرئوية؛ غير موسينية ‏ أ() 6 0/8 T2bNOMO ‏عا‎ 6 كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرئوية؛ غير موسينية ‏ أ(+) 6 2/24 T1aNIMO IIA 149 6 كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرئوية؛ موسينية 0/8 أ(-) 6
T2aNOMO IB 117 6 كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرئوية؛ موسينية 0/24 أ(++) 6
T2aNOMO IB 124 6 كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرئوية؛ موسينية 0/9 ‎nfal‏ 6
T3NOMO 1858 6 كارسينوما الشعبيات والحويصلات الرثوية؛ موسينية 1/11 أ(+) )-( ‎TIbNIMO IIA 143 6‏ تم إجراء هناك دراسة أخرى للتعبير عن ‎IGF-IR‏ على سلسلة من 10 عينات من سرطان الثدي. أظهرت الدراسات المبينة في الشكل 24 أنه تم التعبير بدرجة مرتفعة عن 167-114 على أنسجة
السرطان مقارنةٌ بالأنسجة الطبيعية المجاورة. وأظهرت بيانات الصبغ المبينة في الجدول 16 أن 6 من حالات التحليل كانت ++ ++/ +++ أو +++ و9622 من الحالة التي تم تحليليها +++ ‎STARE‏ ‏الجدول 16
التعبير ‎Shhh‏ | النسيج
(لصيع 0 المي ‎EEE‏ ‏كارسينوما حليمية متسللة بالتدي مع كارسينوما ‎WIA‏ ختمية | ‎to‏ )++( )+( ا كارسينوما قنوات وفصوص مختلطة متسللة بالثدي )++( ‎Cc‏ ‏مانا ‎I‏
أخيرا؛ ظهر التعبير المفرط عن 114- ]16 في سلسلة من الأورام منها الرأس والرقبة؛ المثانة البولية؛ ‎A,‏ (الشكل 25). مرة ‎(gal‏ لوحظ تعبير مفرط كبير عن ‎IGF-IR‏ على عينات أورام مقابل الأنسجة المجاورة الطبيعية. وبوضع النتائج جنبا إلى جنب»؛ نجد أنها تتماشى مع طريقة الترافق المناعي لمعالجة أورام عديدة موجبة ل ‎IGF-1R‏ بما في ذلك الرئة؛ الثدي» الرأس والرقبة؛ المثانة البولية؛ والكُلى . المثال 14: تحديد ثابت فصل ‎(KD) dissociation constants‏ لربط الأجسام المضادة الخيمرية الخمس ل ‎IGF-1R‏ وهي ‎(€219D6 5 «c214F8 «¢212A11 «¢213B10 «c208F2)‏ ونسخة متوافقة مع البشر ‎(VH3/VL3) recombinant soluble human‏ للجسم المضاد ‎208F2‏ على جسم مضاد بشري قابل للذويان ناتج عن عودة الاتحاد الجيني 0 .تم تعريف ثوابت الفصل ‎(KD)‏ لربط الأجسام المضادة على ‎IGF-1R‏ بشري قابل للذويان ناتج عن عودة الاتحاد الجيني بالنسبة بين معدل الفصل ‎dissociation rate‏ (07») ومعدل الريط ‎(kon) association rate‏ . تم تشغيل التجارب الحركية على جهاز 20100 8180016 باستخدام شريحة استشعار ‎CMS‏ منشطة بواسطة جسم مضاد أحادي النسيلة ‎Tag His‏ من فأر. تم أيضا أخذ طعوم من حوالي 1200 وحدة استجابة من الجسم المضاد كيميائيا على مصفوفة كربوكسي 5 ميثيل ديكستران باستخدام كيمياء طقم الأمين. تم إجراء التجارب عند 25 درجة مثوية بمعدل تدفق يبلغ 30 ميكرو لتر/دقيقة باستخدام محلول منظم ‎(GE Healthcare) HBS-EP+‏ في صورة محلول منظم تخفيف إجراء التجرية والعينة. تم استخدام المخطط الحركي أحادي الدورة لتحديد المتغيرات الحركية لربط الأجسام المضادة ل -]6! 14 على ‎IGF-IR‏ بشري ‎LB‏ للذويان ناتج عن عودة الاتحاد الجيني تم احتجازه بواسطة علامتي 10 هيستيدين ‎Histidine‏ عند الطرف ‎.C‏ ‏محلول من نسخة ‎ALE‏ للذويان ناتجةعن ‎sage‏ الاتحاد الجينى من تترامير غير متجانس ‎IGF-1R‏ ‏البشري: تم الحقن بسلاسل 20 والنطاقات خارج الخلايا للسلاسل 28 التي تم التعبير عنها بعلامة 0-هيس إضافية عند الطرف ‎(R&D Systems catalogue number 305-GR-50) C‏
خلال دقيقة على حجرة التدفق الثانية عند تركيز بلغ 10 ميكرو جرام/مللي لتر. تم احتجاز متوسط 7 وحدة استجابة (بانحراف معياري 24 وحدة استجابة) من المستقبل القابل للذويان عند كل من ال24 دورة التى تم تحقيقها فى هذه الدراسة. بعد طور ‎J‏ لاحتجاز تم الحقن بمحلول منظم إجراء التجرية 5 مرات (90 ث لكل حقنة) أو مدى متنامي من تركيزات من واحد من ستة أجسام مضادة (90 ث لكل حقنة) على كلتا حجرتي التدفق. فى نهاية الحقنة الخامسة؛ تم تمرير محلول منظم إجراء التجرية خلال 5 دقائق لتحديد معدل الفصل. الهيدروجيني 5 خلال ‎S45‏ ‏تناظر ‎slay)‏ المحوسبة الفرق بين استجابة حجرة التدفق 2 (مع 167-11 المحتجّز) واستجابة 0 حجرة التدفق 1 (بدون أي جزيئات ‎(IGF-IR‏ ‏بالنسبة لكل ‎dGF-1R‏ تم تصحيح بسبب الحقن والمدى المتنامي من التركيزات لجسم مضاد واحد عن طريق خصم الإشارة الناتجة بخمس حقن من المحلول المنظم (إشارة مزدوجة) انظر الشكل 26. تم تحليل مخططات الاستشعار الناتجة ببرنامج 818678118100 بنموذج 1 : 1. تم إجراء ‎af‏ تجارب لكل جسم مضاد باستخدام اثنين من المدى المختلف من التركيزات: 40؛ 20 5 510 و2.5 نانو مولار لأول تجريتين و: 24؛ 12؛ 6؛ 3 و1.5 نانو مولار لآخر تجريتين لكل جسم مضاد. بالنسبة للأجسام المضادة الست المختبرّة في التجرية؛ ‎Gl‏ بيانات التجرية تواءمت جيدا مع نموذج 1 بقيم ‎KOff‏ ذات المغزى عندما تم تحديد التركيز الأعلى كثابت وتم حساب التركيزات ‎eV)‏ ‏الأخرى (انظر الشكل 27). 0 ايبين الشكلان 28 و29 ثوابت الفصل ‎(KD)‏ المحسوية كنسب ‎KOFF/KON‏ وعمر النصف للمعقدات المحسوية كثابت ‎LN(2)/KOff‏ . وتناظر متوسط أريع تجارب مستقلة لكل من الأجسام المضادة. تناظر أشرطة الأخطاء الأخطاء القياسية للقيم ‎=n)‏ 4).
تكون ثوابت الفصل في مدى من 10 إلى 100 بيكو مولار. يمثل الجسم المضاد 20812 ‎ZN)‏ ‏الأضعف ‎dad)‏ ثابت فصل أعلى ) ل ‎h=IGF-1R‏ (بثابت ‎KD‏ حوالي 75 بيكو مولار) وتكون النسخة المتوافقة مع البشر جيدة ‎ie‏ النسخة الخيمرية على الأقل (بثابت ‎KD‏ حوالي 60 بيكو مولار). يبدي الأجسام المضادة الخيمرية الأريع الأخرى ‎IGF-1R‏ ألفة مشابهة تماما ل ‎hIGF1-‏ ‎KD cli) R 5‏ حوالي 30 بيكو مولار). إن الفرق في قيم الألفة يرتبط بشكل أساسي بمعدل الفصل وعمر النصف الناتج للمعقدات. وباستخدام ‎208F2‏ يتراوح عمر النصف للمعقد بين 2 و3 ساعات مع النسخ ‎(VH3/VL3)‏ الخيمرية والمتوافقة مع البشر. بالنسبة للأجسام المضادة الخيمرية الأربع الأخرى؛ يتراوح متوسط قيم عمر النصف بين 7.0 و9.4. وترتبط قيم ثابت الفصل البطيئة جدا هذه بوضوح بالبنية ثنائية التكافؤ للأجسام المضادة القادرة على 0 ربط كل من أذرع ‎Fab‏ بجزيئين متجاورين ‎h=IGF-1R‏ في هذه الحالة؛ يمكن أن يكون لمستوى جزيئات 167-114 المحتجزة تأثيرا على معدل الفصل. تناظر قيم الألفة المحددة في هذه الدراسة قيم الألفة الوظيفية للأجسام المضادة ‎h=IGF-1R (ssid‏ المحتّجز حول 600 وحدة استجابة. يتم ربط الفرق المضاعف ثلاث مرات ل ‎KD‏ الملحوظ بين البيانات المبينة أعلاه (الجدول 10) والقيم المبينة في المثال 13 بتغير في مستوى احتجاز ‎NIGF-1R‏ )600 وحدة استجابة مقابل 160 وحدة استجابة في المثال 5). المثال 15: تحديد الوحدات البنائية الخاصة ب ‎IGF-IR‏ الفأري الذي يمنع ربط 020812 باستخدام صور قابلة للذويان من بروتينات 165-114 خيمرية ناتجة عن عودة الاتحاد الجيني من بشر/فأر تم إجراء ربط الصور القابلة للذويان للبروتينات الخيمرية الناتجة عن عودة الاتحاد الجيني -]6! ‎IR‏ على تجارب الجسم المضاد 62082 بواسطة جهاز ‎Biacore X100‏ باستخدام شريحة 0 استشعار ‎sensor chip‏ 5/ا© بواسطة جسم مضاد أحادي النسيلة ‎Fe‏ 196 بشري من ماعز. يتم أخذ طعوم من أكثر من 10500 وحدة استجابة من الجسم المضاد ‎FC‏ على مصفوفة كربوكسي ميثيل ديكستران ‎carboxymethyldextan‏ لكل من خليتي التدفق باستخدام كيمياء طقم الأمين ‎.amine kit chemistry‏
تم إجراء التجارب عند 25 درجة مثوية بمعدل تدفق يبلغ 30 ميكرو لتر/دقيقة باستخدام محلول
منظم ‎HBS-EP+‏ في صورة محلول منظم تخفيف إجراء التجربة والعينة.
كان إعداد التجرية كما يلى:
تم الحقن بمحلول من 020872 بتركيز يبلغ 10 ميكرو جرام/مللي لتر خلال 60 على خلية التدفق ‎All‏
تناظر الأجزاء المنشأة ‎IGF-1R‏ المواد الطافية المركزة لوسط المستنبت المخففة 10 مرات فى
المحلول المنظم لإجراء التجرية. تم الحقن بجزء منشأ عند كل دورة خلال 120ث بتأخير 120 ث.
الهيدروجيني 1.7 خلال 30ث.
0 يبين الشكل 30 تراكب الدورتين؛ وتم الحقن بالمواد الطافية ‎M=IGF-1R 5 h-IGF-1R‏ خلال الدورة الأولى والثانية بالترتيب. تبين هذه التجرية بوضوح عدم قدرة 01-167-11 على الارتباط بالجسم المضاد ‎C208F2‏ . وبتم بيان المواضع المستخدمة لتحديد مستوى احتجاز ‎C208F2‏ ‏ومستوى ربط ‎IGF- 1 R‏ بواسطة الأسهم مزدوجة الرأس . تتكون النطاقات خارج الخلايا ل ‎IGFR‏ (بدون ببتيد الإشارة) من 805 و806 حمض أميني لمتوالية
5 .من بشر وفأر بالترتيب. وتتطابق 869 وحدة بنائية (9696) في كلتا البنيتين. وتختلف 37 وحدة بنائية من متوالية الفأر عن المتوالية المناظرة من البشر. ويناظر أحد الفروق فجوة فاصلة. وكما هو مبين في الشكل 13( ضمن الأجزاء المنشأة الخيمرية السبع التي تم اختبارها ترتبط ‎af‏ 4 ‎Cl)‏ (رقم تعريف المتوالية 83) 04 (رقم تعريف المتوالية 86(« 067(رقم تعريف المتوالية 88) و08 (رقم تعريف المتوالية 89)) فضلا عن ‎h=IGF-1R‏ ب 020852؛ لا ترتبط 3 أجزاء منشأة
0 (02(رقم تعريف المتوالية 84(¢ 03 (رقم تعريف المتوالية 85( و6 (رقم تعريف المتوالية 87(( فضلا عن ‎MIGF-1R‏ (رقم تعريف المتوالية 91) ب 0208172.
ويؤكد ريط ‎C1‏ وافتقار الريبط ل ‎C2‏ أن الوحدات البنائية الخاصة بالفأر التى تعوق ربط ‎C208F2‏ ‏توجد في نصف البروتين عند الطرف ل8. وبالتالي فإن آخر 11 حمض أميني فأري يوجد في النصف عند الطرف © لا تؤثر على ربط ‎.C208F2‏ ‏إن عدم ارتباط ‎C3‏ يؤكد مشاركة كبيرة من وحدة بنائية خاصة بفأر هي ‎Arg‏ بدلا من ‎His‏ ‏5 الموضع 494. وتأكدت هذه النتيجة بعدم ارتباط ‎C6‏ الذي يحتوي على وحدتين بنائيتين من فأر: ‎.Ser501>Trp 4 His494>Arg‏ ويؤكد ربط ‎C4‏ أن الوحدة البنائية الفأرية الوحيدة ‎Trp‏ في الموضع 501 ل ‎IGF-1R‏ الخيمري غير مسؤولة عن انعدام ربط 2© و06. ويؤكد ربط ‎CF‏ أن أي من الوحدات البنائية الفأرية السبعة عشرة الموجودة في هذا الجزء المنشاً لا 0 يمتلك أي وزن في إعاقة ربط ‎.C208F2‏ ‏بالمثل» فإن ربط ‎C8‏ يستبعد 4 وحدات بنائية أخرى فأرية. إن الطافر 612 ل ‎IGFIR‏ البشري الذي يبدي الوحدات البنائية الفأرية الثلاث في نطاق ؟؟؛ ؟؟؛ في الموضع 28 بدلا من ‎Tyre‏ عند الموضع 125 بدلا من ‎Leu g Val‏ عند الموضع 156 بدلا من ‎Met‏ يرتبط ب 020812 عند ثابت انحلال أقل من نانو مولار. وتؤكد هذه التجرية أن نطاق ‎L1‏ ‏5 لا يشارك في ربط الجسم المضاد أو على الأقل لا يكون الموضع 3 الذي ميز المتواليات الفأرية والبشرية غير مسؤول عن غياب ارتباط الجسم المضاد على الصورة الفأرية من ‎AGFIR‏ ‏كما هو مبين في الشكل 33« فإن ‎hz208F2‏ لا يستطيع الارتباط 2 120 وحدة استجابة للطافر ‎((Asp491>Ala) «C29‏ للصورة القابلة للذويان من ‎h=IGFIR‏ المحتجّز على شريحة استشعار بواسطة علامة ‎6His‏ عند الطرف © (أشكال المعين البيضاء) حيث يرتبط نفس محلول 0 الجسم المضاد بوضوح (أشكال المعين السوداء) ب 170 وحدة استجابة من النمط البري للمستقبل القابل للذويان. وفي صورة 494 ‎(His‏ فإن 491 ‎Asp‏ تتسم بالأهمية لألفة ‎hZ208F2‏ تجاه 61 . تبين بيانات التصوير البلوري أنه يتم تعريض كلا الوحدتين البنائيتين عند سطح المستقبل فى نطاق ‎FnR3‏
وبوضع هذه النتائج جنبا إلى جنب»؛ فإنها تثبت أن ‎hz208F2‏ يرتبط بنطاق ‎FnR3‏ ل ‎IGF-1R‏ ‏وأن القمة اللاصقة التي تم التعرف عليها بواسطة هذا الجسم المضاد تحتوي على 494 ‎Asp His‏ 1 اللتين يتسمان بأهمية في ربط الجسم المضاد. قائمة المتواليات ‎PIERRE FABRE MEDICAMENT >110< 5‏ ‎IGF-1R ANTIBODY AND ITS USE AS ADDRESSING VEHICLE <120>‏ ‎FOR THE‏ ‎TREATMENT OF CANCER‏
D33596367603 <130>
US61984160 <150> 10 25-04-2014 >151< 92 <160>
Patentln version 3.5 <170> 1 <210> 8 <211> 15
PRT <212> artificial <213> <220>
Consensus CDR -H]1 <223> <220> 20
MISC FEATURE >221< (3)--(3) <222>
Thr may be replaced by Ser <223> <220>
MISC FEATURE <221> 5 (8)..(8) <222>
Tyr may be replaced by Phe <223> 1 <400>
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr 1 10 2 <210> 8 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 15
Consensus CDR-H2 <223> 2 <400> lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr 5 1
3 <210> 13 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 5
Consensus CDR-H3 <223> 3 <400>
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr 5 1 4 <210> 10 6 <211>
PRT <212> artificial <213> <220>
Consensus CDR-L1 <223> 15 <220>
MISC FEATURE <221> (4)..(4) <222>
Ser may be replaced by Asn <223>
4 >400< ‎Asp lle Ser Lys Tyr‏ ماك ‎5 1 ‎5 <210> 3 <211> 5 ‎PRT <212> ‎artificial <213> ‎<220> ‎Consensus CDR-L2 <223> <400> 10 ‎Tyr Thr Ser ‎1 ‎6 <210> ‎9 <211>
PRT <212> 15 ‎artificial <213> ‎<220> ‎Consensus CDR-L3 <223> ‎<220>
MISC FEATURE >221< (5).-(5) <222>
Thr may be replaced by Ala <223> 6 <400>
GIn Gin Gly Ser Thr Leu Pro Tyr Thr 5 1 7 <210> 8 <211>
PRT <212> artificial <213> 10 <220>
CDR-H1 <223> 7 <400>
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr 5 1 15 8 <210> 8 <211>
PRT <212> artificial <213>
<220>
CDR-H1 <223> 8 <400>
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Phe 1 5 9 <210> 6 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 10
CDR-L1 <223> 9 <400>
Gln Asp lle Ser Lys Tyr 5 1 <210> 15 6 <211>
PRT <212> artificial <213> <220>
CDR-L1 <223> 10 <400>
Gln Asp lle Asn Lys Tyr 1 11 <210> 5 9 <211>
PRT <212> artificial <213> <220>
CDR-L3 <223> 10 11 <400>
GIn GIn Gly Ser Thr Leu Pro Tyr Thr 5 1 12 <210> 9 <211> 15
PRT <212> artificial <213> <220>
CDR-L3 <223>
12 <400>
GIn GIn Gly Ser Ala Leu Pro Tyr Thr 1 13 <210> 120 <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220> c208F2, heavy chain, VH <223> 13 <400> 10
Gln Val GIn Leu GIn Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle Tyr Trp Val Lys ‏ماي‎ Arg Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Leu 5 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 60 55 50
Lys Asp Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr
80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 110 105 100 5
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 120 115 14 <210> 120 <211>
PRT <212> 10 artificial <213> <220> c212A11, heavy chain, VH <223> 14 <400>
GIn Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 5 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp lle
45 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 60 55 50
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 80 75 70 65 5
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 0 120 115 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> 15 <220> c214F8, heavy chain, VH <223> 15 <400>
Gln Val GIn Leu GIn Gin Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
10 5 1
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lle 40 35 5
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 60 55 50
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 0 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 120 115 15 16 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213>
<220> c219D6, heavy chain, VH <223> 16 <400>
Gln Val GIn Leu GIn 60 Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Asp 10 5 1 5
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 25 20
Phe lle His Trp Val Lys 60 Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lle 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 10 60 55 50
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85 15
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 120 115
17 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 5 c213B10, heavy chain, VH <223> 17 <400>
Gln Val GIn Leu GIn Gin Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 0 25 20
Tyr lle His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp lle 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 60 55 50 15
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser 120 115 18 <210> 5 107 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> c208F2, light chain, VL <223> 10 18 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20 15
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin GIn Pro Asp Gly Thr lle Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Val Glu 07 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 Gin Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys 5 105 100 19 <210> 107 <211>
PRT <212> artificial <213> 10 <220> c212A11, light chain, VL <223> 19 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1 15
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Asn Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu Glu 07 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 ‏ماي‎ Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 5 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys 105 100 20 <210> 107 <211> 10
PRT <212> artificial <213> <220> c214FS8, light chain, VL <223> 20 <400> 15
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr lle Lys Leu Leu lle 45 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Thr Asn Leu Glu GIn 5 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 Gin Gly Ser Ala Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys 105 100 10 21 <210> 107 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 15 21906, light chain, VL <223> 21 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu Glu 07 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 Gin Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85 10
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys 105 100 22 <210> 107 <211>
PRT <212> 15 artificial <213> <220> c213B10, light chain, VL <223> 22 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Gin Pro Asp Gly Thr lle Lys Leu Leu lle 5 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Thr Asn Leu Glu GIn 80 75 70 65 10
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 Gin Gly Ser Ala Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys 105 100 23 <210> 15 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> c208F2, heavy chain, full length <223> 23 <400>
Gln Val GIn Leu GIn Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 5 25 20
Tyr lle Tyr Trp Val Lys GIn Arg Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Leu 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 60 55 50 10
Lys Asp Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GIn 5 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165 5
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 0 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 5 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355 10
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 5 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn ‏ماي‎ Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
445 440 435
Gly 24 <210> 449 <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220> c212A11, heavy chain, full length <223> 24 <400> 10
Gln Val GIn Leu GIn Gin Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp lle 5 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 60 55 50
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100 5
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 0 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180 15
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 5 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290 10
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly 60 Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 5 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp
380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405 5
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 10 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213> 15 <220> c214F8, heavy chain, full length <223> 25 <400>
Gln Val GIn Leu GIn 60 Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
10 5 1
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp lle 40 35 5
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 60 55 50
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 0 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115 15
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 5 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225 0
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 15 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340 5
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 0 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420 15
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly
26 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 5 c219D6, heavy chain, full length <223> 26 <400>
Gln Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Asp 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr 0 25 20
Phe lle His Trp Val Lys Gin Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lle 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 60 55 50 15
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Thr Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 110 105 100
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 5 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165 10
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 15 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle
255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275 5
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 0 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu 365 360 355 15
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 5 445 440 435
Gly 27 <210> 449 <211> 10
PRT <212> artificial <213> <220> c213B10, heavy chain, full length <223> 27 <400> 15
Gln Val GIn Leu GIn Gin Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp lle 45 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Arg Phe 60 55 50
Lys Gly Lys Thr Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 5 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100 10
Gly Ala Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 15 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210 5
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 0 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290 15
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 5 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405 10
Lys Ser Arg Trp GIn Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 15 28 <210> 214 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> c208F?2, light chain, full length <223> 28 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 5 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr lle Lys Leu Leu lle 40 35 10
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Val Glu 0 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys GIn ‏دا‎ Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 15 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly
125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser Gin 160 155 150 145 5
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 0 205 200 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 29 <210> 214 <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220> c212A11, light chain, full length <223>
29 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Asn Lys Tyr 25 20 5
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu Glu 60١ 10 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys GIn Gin Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100 15
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser Gin 160 155 150 145
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 5 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 10 30 <210> 214 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 15 c214F8, light chain, full length <223> 30 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr Phe Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin GIn Pro Asp Gly Thr lle Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Thr Asn Leu Glu 07 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 Gin Gly Ser Ala Leu Pro Tyr 95 90 85 10
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 5 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser Gin 160 155 150 145
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195 5
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 31 <210> 214 <211>
PRT <212> 10 artificial <213> <220> c219D6, light chain, full length <223> 31 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 15 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr Val Lys Leu Leu lle
45 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu Glu Gin 80 75 70 65 5
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys Gln GIn Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu 60 Leu Lys Ser Gly 0 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130
Lys Val GIn Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser 07 160 155 150 145 15
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 32 <210> 5 214 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> c213B10, light chain, full length <223> 0 32 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Thr Thr Ser Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20 15
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Gln Pro Asp Gly Thr lle Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Thr Asn Leu Glu 0 80 75 70 65
Glu Asp lle Ala Thr Tyr Phe Cys 60 Gin Gly Ser Ala Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 5 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130 10
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser Gin 160 155 150 145
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 15 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His GIn Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
33 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> 5 <220> hz208F2 (var.1) heavy chain, VH <223> 33 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 10
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg GIn Ala Pro Gly GIn Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly lle lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala GIn Lys Phe 5 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 5 34 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 10 hz208F2 (var. 3), VH <223> 34 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 5 25 20
Tyr lle Tyr Trp Val Lys GIn Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Leu 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe
60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85 5
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 35 <210> 10 107 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 (var. 1), VL <223> 15 35 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lle Ser Lys Tyr
25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu 60 Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50 5
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu 60 Pro 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 60 0 Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 0 105 100 36 <210> 107 <211>
PRT <212> artificial <213> 15 <220> hz208F2 (var.3), VL <223> 36 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35 5
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu 60 Pro 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 60 Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 0 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 37 <210> 449 <211> 15
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 (var. 1), heavy chain, full length <223>
37 <400>
Gln Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20 5
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly lle lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gin Lys Phe 60 55 50
GIn Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 0 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100 15
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 5 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210 10
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 5 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325 5
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 0 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405 15
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 38 <210> 449 <211>
PRT <212> 5 artificial <213> <220> hz208F2 (var.3), heavy chain full length <223> 38 <400>
GIn Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 0 10 5 1
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle Tyr Trp Val Lys GIn Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Leu 40 35 15
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 0 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 5 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145 10
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 15 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260 5
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 10 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340 15
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp ‏ما‎ Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 5 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 39 <210> 214 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 15 hz208F2 (var. 1), light chain, full length <223> 39 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Ser Leu 60 Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5 60 55 50
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu 60 Pro 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 60 GIn Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85 10
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 5 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser Gin 160 155 150 145
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195 5
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 40 <210> 214 <211>
PRT <212> 10 artificial <213> <220> hz208F2 (var.3), light chain, full length <223> 40 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 15 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gin Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle
45 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu 60 Pro 80 75 70 65 5
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 GIn Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin Leu Lys Ser Gly 10 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser 07 160 155 150 145 15
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 41 <210> 5 120 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 (var.2) heavy chain, VH <223> 0 <220>
MISC FEATURE <221> (20)..(20) <222>
Met may be replaced by Val <223> <220> 15
MISC FEATURE <221> (34)..(34) <222> lle may be replaced by Met <223> <220>
MISC FEATURE >221< (35)..(35) <222>
Tyr may be replaced by His <223> <220>
MISC FEATURE <221> 5 (38)..(38) <222>
Lys may be replaced by Arg <223> <220>
MISC FEATURE <221> (48)..(48) <222> 10
Leu may be replaced by Met <223> <220>
MISC FEATURE <221> (50)..(50) <222>
Trp may be replaced by lle <223> 5 <220>
MISC FEATURE <221> (59)-.(59) <222>
Lys may be replaced by Ser <223>
<220>
MISC FEATURE <221> (61)..(61) <222>
Asn may be replaced by Ala <223> <220> 5
MISC FEATURE <221> (62)..(62) <222>
Glu may be replaced by Gln <223> <220>
MISC FEATURE <221> 10 (70)..(70) <222>
Leu may be replaced by Met <223> <220>
MISC FEATURE <221> (72)..(72) <222> 5
Ala may be replaced by Arg <223> <220>
MISC FEATURE <221> (74)..(74) <222>
Lys may be replaced by Thr <223> <220>
MISC FEATURE <221> (76)..(76) <222>
Ser may be replaced by Thr <223> 5 <220>
MISC FEATURE <221> (77)..(7T7) <222>
Asn may be replaced by Ser <223> <220> 10
MISC FEATURE <221> (79)..(79) <222>
Ala may be replaced by Val <223> <220>
MISC FEATURE <221> 15 (82)..(82) <222>
Phe may be replaced by Glu <223> <220>
MISC FEATURE <221>
(95)..(95) <222>
Phe may be replaced by Tyr <223> 41 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 5
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle Tyr Trp Val Lys GIn Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Leu 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Glu Lys Phe 10 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Asn Thr Ala Tyr 80 75 70 65
Met Phe Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85 15
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115
42 <210> 107 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 5 hz208F2 (var. 2), light chain, VL <223> <220>
MISC FEATURE <221> (22)..(22) <222>
Ser may be replaced by Thr <223> 10 <220>
MISC FEATURE <221> (53)..(53) <222>
Arg may be replaced by Ser <223> <220> 15
MISC FEATURE <221> (55)..(55) <222>
His may be replaced by Gln <223> <220>
MISC FEATURE >221< (65)..(65) <222>
Arg may be replaced by Ser <223> <220>
MISC FEATURE <221> 5 (71)..(71) <222>
Tyr may be replaced by Phe <223> <220>
MISC FEATURE <221> (72)..(72) <222> 10
Ser may be replaced by Thr <223> <220>
MISC FEATURE <221> (77)..(7T7) <222>
Asn may be replaced by Ser <223> 15 <220>
MISC FEATURE <221> (87)..(87) <222>
Phe may be replaced by Tyr <223>
42 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Gln Asp lle Ser Lys Tyr 25 20 5
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Asn Leu 60 Pro 0 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 ١0 Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 15 43 <210> 329 <211>
PRT <212> artificial <213>
<220>
Constant domain (VH) IgG1 <223> 43 <400>
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys 10 5 1 5
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 25 20
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser 40 35
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 0 60 55 50
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr 60 Thr 80 75 70 65
Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 95 90 85 15
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys 110 105 100
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro 125 120 115
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys 140 135 130
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp 160 155 150 145
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu 5 175 170 165
Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 190 185 180
His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn 205 200 195 10
Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly 220 215 210
Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu 240 235 230 225
Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 5 255 250 245
Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 60 Pro Glu Asn 270 265 260
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
285 280 275
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gin Gin Gly Asn 300 295 290
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr 320 315 310 305 5
GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 325 44 <210> 326 <211>
PRT <212> 10 artificial <213> <220>
Constant domain (VH) IgG4 (S228P) <223> 44 <400>
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg 5 10 5 1
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr 25 20
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
45 40 35
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser 60 55 50
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr 80 75 70 65 5
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys 95 90 85
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro 110 105 100
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys 0 125 120 115
Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val 140 135 130
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe Asn Trp Tyr Val Asp 160 155 150 145 15
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Phe 175 170 165
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp 190 185 180
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu 205 200 195
Pro Ser Ser lle Glu Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg 220 215 210
Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser GIn Glu Glu Met Thr Lys 5 240 235 230 225
Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp 255 250 245 lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys 270 265 260 10
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser 285 280 275
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser 300 295 290
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gin Lys Ser 5 320 315 310 305
Leu Ser Leu Ser Leu Gly 325 <210>
107 <211>
PRT <212> artificial <213> <220>
Domain kappa (VL) <223> 5 45 <400>
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu 10 5 1
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe 25 20 10
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val GIn Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 07 40 35
Ser Gly Asn Ser GIn Glu Ser Val Thr Glu GIn Asp Ser Lys Asp Ser 60 55 50
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu 5 80 75 70 65
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser 95 90 85
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
105 100 46 >210< 98 <211>
PRT <212> artificial <213> 5 <220>
Human germline IGHV1-46*01 <223> 46 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 10
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly lle lle Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala GIn Lys Phe 5 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
95 90 85
Ala Arg 47 <210> 95 <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220>
Human germline IGKV1-39*01 <223> 47 <400> 10
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser 60 Ser lle Ser Ser Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr Gln Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 15 40 35
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu GIn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser Ser Leu 60 Pro
80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys 60 GIn Ser Tyr Ser Thr Pro 95 90 85 48 <210> <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220>
Human germline IGHJ4*01 <223> 48 <400> 10
Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 15 10 5 1 49 <210> 12 <211>
PRT <212> 15 artificial <213> <220>
Human germline IGKJ4*(Q1 <223> 49 <400>
Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 5 1 50 <210> 1367 <211>
PRT <212> 5 artificial <213> <220>
IGF-1R (human) <223> 50 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 0 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35 15
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 5 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145 10
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 15 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser
240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260 5
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 300 295 290
GIn Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser GIn Ser Met Tyr 0 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala 60 Met Leu GIn Gly 350 345 340 15
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly 415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn GIn Asn Leu GIn 60 Leu Trp 5 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450 10
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 5 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gin Asp Ala Cys
540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 560 555 550 545
Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gin 575 570 565 5
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala 605 600 595
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 10 620 615 610
Ser Gin Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 640 635 630 625
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gin Arg Gin Pro Gin Asp Gly Tyr 655 650 645 15
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys 670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 685 680 675
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 720 715 710 705
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 5 735 730 725
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 750 745 740
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro 765 760 755 10
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 7175 770
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 800 795 790 785 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 15 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle
845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 880 875 870 865 5
Ser Arg 60 Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle Gln Ala Thr Ser Leu Ser Gly 910 905 900
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gin Ala Lys Thr 0 925 920 915
Gly Tyr Glu Asn Phe lle His Leu lle lle Ala Leu Pro Val Ala Val 940 935 930
Leu Leu lle Val Gly Gly Leu Val lle Met Leu Tyr Val Phe His Arg 960 955 950 945 15
Lys Arg Asn Asn Ser Arg Leu Gly Asn Gly Val Leu Tyr Ala Ser Val 975 970 965
Asn Pro Glu Tyr Phe Ser Ala Ala Asp Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp 990 985 980
Glu Val Ala Arg Glu Lys lle Thr Met Ser Arg Glu Leu Gly Gin Gly 1005 1000 995
Ser Phe Gly Met Val Tyr Glu Gly Val Ala Lys Gly Val Val Lys 1020 1015 1010
Asp Glu Pro Glu Thr Arg Val Ala lle Lys Thr Val Asn Glu Ala 5 1035 1030 1025
Ala Ser Met Arg Glu Arg lle Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val 1050 1045 1040
Met Lys Glu Phe Asn Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val 1065 1060 1055 10
Val Ser Gln Gly Gin Pro Thr Leu Val lle Met Glu Leu Met Thr 1080 1075 1070
Arg Gly Asp Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Met 1095 1090 1085
Glu Asn Asn Pro Val Leu Ala Pro Pro Ser Leu Ser Lys Metlle 15 1110 1105 1100
Gln Met Ala Gly Glu lle Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala 1125 1120 1115
Asn Lys Phe Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val
1140 1135 1130
Ala Glu Asp Phe Thr Val Lys lle Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg 1155 1150 1145
Asp lle Tyr Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu 1170 1165 1160 5
Leu Pro Val Arg Trp Met Ser Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val 1185 1180 1175
Phe Thr Thr Tyr Ser Asp Val Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp 1200 1195 1190
Glu lle Ala Thr Leu Ala Glu GIn Pro Tyr ‏مي‎ Gly Leu Ser Asn 0 1215 1210 1205
Glu GIn Val Leu Arg Phe Val Met Glu Gly Gly Leu Leu Asp Lys 1230 1225 1220
Pro Asp Asn Cys Pro Asp Met Leu Phe Glu Leu Met Arg Met Cys 1245 1240 1235 15
Trp GIn Tyr Asn Pro Lys Met Arg Pro Ser Phe Leu Glu lle lle 1260 1255 1250
Ser Ser lle Lys Glu Glu Met Glu Pro Gly Phe Arg Glu Val Ser 1275 1270 1265
Phe Tyr Tyr Ser Glu Glu Asn Lys Leu Pro Glu Pro Glu Glu Leu 1290 1285 1280
Asp Leu Glu Pro Glu Asn Met Glu Ser Val Pro Leu Asp Pro Ser 1305 1300 1295
Ala Ser Ser Ser Ser Leu Pro Leu Pro Asp Arg His Ser Gly His 5 1320 1315 1310
Lys Ala Glu Asn Gly Pro Gly Pro Gly Val Leu Val Leu Arg Ala 1335 1330 1325
Ser Phe Asp Glu Arg Gin Pro Tyr Ala His Met Asn Gly Gly Arg 1350 1345 1340 10
Lys Asn Glu Arg Ala Leu Pro Leu Pro GIn Ser Ser Thr Cys 1365 1360 1355 51 <210> 932 <211>
PRT <212> 15 artificial <213> <220>
IGF-1R ECD (human) <223> 51 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin ‏ماي‎ Leu Lys Arg 5 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 10 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 5 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle
160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180 5
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 0 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260 15
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser 0 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala GIn Met Leu 60 Gly 5 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 380 375 370 10
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly 415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Ash Gln Asn Leu Gin ‏مي‎ Leu Trp 5 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu
460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg ‏داك‎ Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 495 490 485 5
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly ‏م6‎ Asp Ala Cys 10 540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 560 555 550 545
Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gin 575 570 565 15
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala 605 600 595
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 620 615 610
Ser Gin Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 640 635 630 625
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gln Arg GIn Pro 60 Asp Gly Tyr 5 655 650 645
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys 670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 685 680 675 10
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 720 715 710 705
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 5 735 730 725
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gin Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 750 745 740
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro
765 760 755
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 775 770
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 800 795 790 785 5 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle 10 845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 880 875 870 865 15
Ser Arg 60 Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser Gly 910 905 900
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gin Ala Lys Thr 925 920 915
Gly Tyr Glu Asn 930 52 <210> 5 512 <211>
PRT <212> artificial <213> <220>
IGF-1R ECD Nterminal (human) <223> 0 52 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20 15
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 5 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130 10
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 5 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys
220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245 5
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 10 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser GIn Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325 15
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala 60 Met Leu Gin Gly 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu GIn Leu Glu Gly 5 415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn GIn Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435 10
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 15 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500 53 <210>
4 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> tetrapeptide (linker) <223> 5 53 <400>
Gly Phe Leu Gly 1 54 <210> 4 <211> 10
PRT <212> artificial <213> <220> tetrapeptide (linker) <223> 54 <400> 15
Ala Leu Ala Leu 1 55 <210> <211>
PRT <212> artificial <213> <220> tetrapeptide (linker) <223> 55 <400> 5
Pro Val Gly Val Val 1 56 <210> 120 <211>
PRT <212> 10 artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain HQ37, VH <223> 56 <400>
GIn Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 5 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg GIn Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65 5
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 10 120 115 57 <210> 107 <211>
PRT <212> artificial <213> 15 <220> hz208F2 light chain L018, VL <223> 57 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35 5
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu GIn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Ser Leu Gin Pro 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 GIn Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 0 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys 105 100 58 <210> 449 <211> 15
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain 1037 full length <223>
58 <400>
Gln Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20 5
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
GIn Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr 0 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100 15
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 5 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210 10
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 5 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325 5
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 0 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405 15
Lys Ser Arg Trp GIn Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 59 <210> 214 <211>
PRT <212> 5 artificial <213> <220> hz208F2 light chain LO18 full length <223> 59 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 0 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser GIn Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35 15
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu GIn Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Ser Leu Thr lle Ser Ser Leu GIn Pro 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 ١ Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly 5 125 120 115
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser 07 160 155 150 145 10
Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His Gin Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 5 205 200 195
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 60 <210>
107 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 light chain L021, VL <223> 5 60 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 5 1
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp lle Ser Lys Tyr 25 20 10
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr lle Ser Ser Leu 60 Pro 15 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 0 Gly Ser Thr Leu Pro Tyr 95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys
105 100 61 <210> 214 <211>
PRT <212> artificial <213> 5 <220> hz208F2 light chain L021 full length <223> 61 <400>
Asp lle GIn Met Thr GIn Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 10 5 1 10
Asp Arg Val Thr lle Thr Cys Arg Ala Ser GIn Asp lle Ser Lys Tyr 25 20
Leu Asn Trp Tyr GIn Gin Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu lle 40 35
Tyr Tyr Thr Ser Arg Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 5 60 55 50
Arg Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr lle Ser Ser Leu GIn Pro 80 75 70 65
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys 60 0 Gly Ser Thr Leu Pro Tyr
95 90 85
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg Thr Val Ala Ala 110 105 100
Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu GIn Leu Lys Ser Gly 125 120 115 5
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 140 135 130
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser Gly Asn Ser Gin 160 155 150 145
Glu Ser Val Thr Glu GIn Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 0 175 170 165
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 190 185 180
Ala Cys Glu Val Thr His 60 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 205 200 195 15
Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 62 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain 1047, VH <223> 62 <400> 5
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 0 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65 5
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 63 <210> 449 <211>
PRT <212> 5 artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain ١1047 full length <223> 63 <400>
GIn Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 0 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 40 35 15
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 5 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145 10
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 15 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260 5
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys 0 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly 60 Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340 15
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp ‏ما‎ Gin Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 5 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 64 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 15 hz208F2 heavy chain 1049, VH <223> 64 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly GIn Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 5 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85 10
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GIn 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 65 <210> 15 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain 11049 full length <223> 65 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 5 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50 10
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GIn 5 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala
140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165 5
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 10 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245 15
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 5 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355 10
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 5 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
445 440 435
Gly 66 <210> 120 <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain 1051, VH <223> 66 <400> 10
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 5 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr
80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gin 110 105 100 5
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 67 <210> 449 <211>
PRT <212> 10 artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain ١11051 full length <223> 67 <400>
GIn Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 5 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met
45 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65 5
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 10 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145 15
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 5 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260 10
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 5 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr
350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370 5
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp ‏ماك ما‎ Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 0 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 68 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213>
<220> hz208F2 heavy chain 1052, VH <223> 68 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 5
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Phe 10 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85 15
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 0 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115
69 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 5 hz208F2 heavy chain ١11052 full length <223> 69 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 0 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50 15
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 5 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165 10
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 5 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle
255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275 5
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 0 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355 15
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr ‏ماي‎ Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 5 445 440 435
Gly 70 <210> 120 <211> 10
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain HQ57, VH <223> 70 <400> 15
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 45 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
GIn Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Thr Asn Thr Val Tyr 5 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100 10
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 71 <210> 449 <211>
PRT <212> 15 artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain 1057 full length <223> 71 <400>
Gln Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 5 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Lys Ser Thr Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65 10
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 15 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180 5
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 0 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260 15
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr 5 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370 10
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp ‏ما‎ GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 15 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly
72 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> 5 <220> hz208F2 heavy chain 1068, VH <223> 72 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 10
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala ‏ماي‎ Lys Phe 15 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys
95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 5 73 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 10 hz208F2 heavy chain HO68 full length <223> 73 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 15 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe
60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85 5
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 10 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165 15
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 5 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275 10
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 5 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385 5
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 0 445 440 435
Gly 74 <210> 120 <211> 15
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain HQ70, VH <223>
74 >400<
Gln Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20 5
Tyr Met His Trp Val Arg GIn Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
GIn Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 0 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GIn 110 105 100 15
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 75 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain HQ70 full length <223> 75 <400> 5
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 0 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65 5
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 5 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180 10
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 15 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290 5
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly 60 Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 0 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370 15
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 5 76 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> 10 <220> hz208F2 heavy chain 1071, VH <223> 76 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg GIn Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 5 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GIn 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 10 77 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> 15 hz208F2 heavy chain ١1071 full length <223> 77 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr Met His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gin Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 5 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Asn Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85 10
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 5 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195 5
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 0 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275 15
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly Gin Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu 5 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385 10
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr ‏ماي‎ Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 5 445 440 435
Gly 18 <210>
120 <211>
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain 1076, VH <223> 5 78 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20 10
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
GIn Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 5 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60
110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 79 <210> 449 <211> 5
PRT <212> artificial <213> <220> hz208F2 heavy chain ١11076 full length <223> 79 <400> 10
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 5 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
GIn Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100 5
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 0 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180 15
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 5 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290 10
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gin Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly 60 Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr 5 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp
380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405 5
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 10 80 <210> 120 <211>
PRT <212> artificial <213> 15 <220> hz208F2 heavy chain 1077, VH <223> 80 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
10 5 1
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 40 35 5
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala GIn Lys Phe 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 0 95 90 85
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly GIn 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 120 115 15 81 <210> 449 <211>
PRT <212> artificial <213>
<220> hz208F2 heavy chain 11077 full length <223> 81 <400>
Gln Val GIn Leu Val GIn Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 10 5 1 5
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 25 20
Tyr lle His Trp Val Arg Gin Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 40 35
Gly Trp lle Trp Pro Gly Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Ala Gin Lys Phe 10 60 55 50
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 80 75 70 65
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 95 90 85 15
Ala Ser Pro Met lle Thr Pro Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly 60 110 105 100
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 125 120 115
Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 140 135 130
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 160 155 150 145
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 5 175 170 165
Leu GIn Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 190 185 180
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gin Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys 205 200 195 10
Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 220 215 210
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 240 235 230 225
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle 15 255 250 245
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 270 265 260
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
285 280 275
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gin Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 300 295 290
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys 320 315 310 305 5
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu 335 330 325
Lys Thr lle Ser Lys Ala Lys Gly 60 Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr 350 345 340
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu 0 365 360 355
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp 380 375 370
Glu Ser Asn Gly Gin Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 400 395 390 385 15
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 415 410 405
Lys Ser Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 430 425 420
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 445 440 435
Gly 82 <210> 5 512 <211>
PRT <212>
Artificial <213> <220>
Mutated IGF-1R ECD Nterminal with Arginine at position 494 <223> 0 82 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20 15
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 5 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130 10
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 5 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys
220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245 5
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 10 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser GIn Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325 15
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala GIn Met Leu Gin Gly 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu GIn Leu Glu Gly 5 415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn GIn Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435 10
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe Thr 5 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500 83 <210>
941 >211<
PRT <212>
Artificial <213> <220>
C1 fragment with His Tag <223> 5 83 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20 10
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 15 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe
110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130 5
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 0 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210 15
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 5 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325 10
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala 60 Met Leu GIn Gly 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 5 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly
415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn GIn Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435 5
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 0 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515 15
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly GIn Asp Ala Cys 540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 560 555 550 545
Glu Gly Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 60 575 570 565
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala 5 605 600 595
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 620 615 610
Ser Gin Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly Asn 640 635 630 625 10
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gln Arg Gin Pro Gln Asp Gly Tyr 655 650 645
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys 670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 15 685 680 675
Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys
720 715 710 705
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 735 730 725
Arg Arg Arg Arg Asp Val Met Gin Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 750 745 740 5
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro 765 760 7155
Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 775 770
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 0 800 795 790 785 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820 15
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle 845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 880 875 870 865
Ser Arg 60 Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle Gin Ala Thr Ser Leu Ser Gly 5 910 905 900
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys Thr 925 920 915
Thr Tyr Glu Asn Phe Met His His His His His His His 940 935 930 10 84 <210> 939 <211>
PRT <212>
Artificial <213> <220> 15
C2 fragment with His Tag <223> 84 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Phe Leu His lle Leu Leu lle 5 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85 10
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 5 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr lle Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys
175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Leu Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195 5
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 240 235 230 225
Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 0 255 250 245
Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Pro Asn Ala 285 280 275 15
Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val lle His Asp Asp Glu Cys Met 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Ser Thr 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 335 330 325
Lys Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu GIn 350 345 340
Gly Cys Thr lle Leu Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly 5 365 360 355
Asn Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val 380 375 370
Val Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 400 395 390 385 10
Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu 415 410 405
Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn Gin Leu 430 425 420
Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr 5 445 440 435
Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu 460 455 450
Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr
480 475 470 465
Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe 495 490 485
Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg 510 505 500 5
Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 525 520 515
Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly GIn Asp Ala 540 535 530
Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn 0 560 555 550 545
Lys Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 575 570 565
Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 590 585 580 15
Asp His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn 605 600 595
Ala Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser 620 615 610
Ser Ser GIn Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly 640 635 630 625
Asn Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gin Arg Gin Pro GIn Asp Gly 655 650 645
Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg 5 670 665 660
Lys Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 685 680 675
Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 700 695 690 10
Lys Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 720 715 710 705
Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro 735 730 725
Glu Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gin Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 5 750 745 740
Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp 765 760 7155
Pro Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp
780 775 770
Asn Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 800 795 790 785
Arg lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 815 810 805 5
Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 830 825 820
Asp Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 845 840 835 lle Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu 10 860 855 850
Met Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser GIn Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys 880 875 870 865
Val Ser Arg GIn Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 895 890 885 15
Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser 910 905 900
Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gin Ala Lys 925 920 915
Thr Gly Tyr Glu Asn His His His His His His 935 930 85 <210> 938 <211>
PRT <212> 5
Artificial <213> <220>
C3 fragment with His Tag <223> 85 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 0 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Glin GIn Leu Lys Arg 40 35 15
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 5 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145 10
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 15 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser
240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260 5
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 300 295 290
GIn Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser GIn Ser Met Tyr 0 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala 60 Met Leu GIn Gly 350 345 340 15
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly 415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn GIn Asn Leu GIn 60 Leu Trp 5 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450 10
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe Thr 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 5 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gin Asp Ala Cys
540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 560 555 550 545
Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gin 575 570 565 5
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala 605 600 595
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 0 620 615 610
Ser Gin Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 640 635 630 625
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gln Arg Gin Pro Gln Asp Gly Tyr 655 650 645 15
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys 670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 685 680 675
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 720 715 710 705
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 5 735 730 725
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gin Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 750 745 740
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro 765 760 755 10
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 7175 770
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 800 795 790 785 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 15 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle
845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 880 875 870 865 5
Ser Arg GIn Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser Gly 910 905 900
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gin Ala Lys Thr 0 925 920 915
Gly Tyr Glu Asn His His His His His His 935 930 86 <210> 938 <211> 15
PRT <212>
Artificial <213> <220>
C4 fragment with His Tag <223>
86 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20 5
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 0 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100 15
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 5 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210 10
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 5 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met
300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325 5
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala GIn Met Leu Gin Gly 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 0 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu GIn Leu Glu Gly 415 410 405 15
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn GIn Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg Gln Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr 5 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515 10
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly GIn Asp Ala Cys 540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 560 555 550 545
Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr GIn 5 575 570 565
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala
605 600 595
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 620 615 610
Ser Gin Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 640 635 630 625 5
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gln Arg Gin Pro Gln Asp Gly Tyr 655 650 645
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys 670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 10 685 680 675
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 720 715 710 705 5
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 735 730 725
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gin Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 750 745 740
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro 765 760 755
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 7175 770
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 5 800 795 790 785 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820 10
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle 845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser GIn Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 5 880 875 870 865
Ser Arg 60 Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser Gly
910 905 900
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gin Ala Lys Thr 925 920 915
Gly Tyr Glu Asn His His His His His His 935 930 5 871 <210> 938 <211>
PRT <212>
Artificial <213> <220> 10
C6 fragment with His Tag <223> 87 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 5 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Glin GIn Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle
60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85 5
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 0 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165 15
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 5 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275 10
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 15 335 330 325
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala 60 Met Leu GIn Gly 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn
365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385 5
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly 415 410 405
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gin Asn Leu GIn Gin Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 0 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465 15
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe Thr 495 490 485
Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gin Asp Ala Cys 540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 5 560 555 550 545
Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr Gin 575 570 565
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580 10
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala 605 600 595
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 620 615 610
Ser GIn Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 5 640 635 630 625
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gln Arg Gin Pro Gln Asp Gly Tyr 655 650 645
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys
670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 685 680 675
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690 5
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 720 715 710 705
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 735 730 725
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met ‏ماى‎ Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 0 750 745 740
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro 765 760 7155
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 775 770 15
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg 800 795 790 785 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle 845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 5 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 880 875 870 865
Ser Arg GIn Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885 10
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser Gly 910 905 900
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr 925 920 915
Gly Tyr Glu Asn His His His His His His 15 935 930 88 <210> 939 <211>
PRT <212>
Artificial >213< <220>
C7 fragment with His Tag <223> 88 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 5 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35 10
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 5 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle
125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145 5
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 0 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 240 235 230 225 15
Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Pro Asn Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val lle His Asp Asp Glu Cys Met 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Ser Thr GIn Ser Met Tyr 5 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 335 330 325
Lys Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala Glin Met Leu Gin 350 345 340 10
Gly Cys Thr lle Leu Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly 365 360 355
Asn Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val 380 375 370
Val Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 15 400 395 390 385
Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu 415 410 405
Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn Gin Leu
430 425 420
Trp Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr 445 440 435
Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu 460 455 450 5
Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr 480 475 470 465
Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe 495 490 485
Thr Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg 0 510 505 500
Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 525 520 515
Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly GIn Asp Ala 540 535 530 15
Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn 560 555 550 545
Lys Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 575 570 565
‏ماك‎ Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 590 585 580
Asp His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn 605 600 595
Ala Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser 5 620 615 610
Ser Ser GIn Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly 640 635 630 625
Asn Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gin Arg Gin Pro Gin Asp Gly 655 650 645 10
Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg 670 665 660
Lys Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 685 680 675
Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 5 700 695 690
Lys Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 720 715 710 705
Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro
735 730 725
Glu Arg Lys Arg Arg Asp Val Met ‏ماي‎ Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 750 745 740
Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp 765 760 7155 5
Pro Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp 780 775 770
Asn Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 800 795 790 785
Arg lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 0 815 810 805
Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 830 825 820
Asp Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 845 840 835 15 lle Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu 860 855 850
Met Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser Gln Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys 880 875 870 865
Val Ser Arg GIn Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 895 890 885
Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle Gin Ala Thr Ser Leu Ser 910 905 900
Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys 5 925 920 915
Thr Gly Tyr Glu Asn His His His His His His 935 930 89 <210> 938 <211> 10
PRT <212>
Artificial <213> <220>
C8 fragment with His Tag <223> 89 <400> 15
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Glin GIn Leu Lys Arg 45 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 5 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100 10
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 5 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys
190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210 5
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 0 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 300 295 290 15
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala Glin Met Leu GIn Gly 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val 5 380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly 415 410 405 10
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gin Asn Leu GIn Gin Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 5 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe Thr
495 490 485
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500
Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr Lys 525 520 515 5
Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gin Asp Ala Cys 540 535 530
Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn Lys 560 555 550 545
Asp Val Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr GIn 0 575 570 565
Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn Asp 590 585 580
His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn Ala 605 600 595 15
Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser Ser 620 615 610
Ser Gin Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Ser Leu Pro Asn Gly Asn 640 635 630 625
Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gln Arg Gin Pro Gln Asp Gly Tyr 655 650 645
Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg Lys 670 665 660
Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp lle Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro Lys 5 685 680 675
Thr Glu Val Cys Gly Gly Glu Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro Lys 700 695 690
Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg Lys 720 715 710 705 10
Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro Glu 735 730 725
Arg Lys Arg Arg Asp Val Met Gin Val Ala Asn Thr Thr Met Ser Ser 750 745 740
Arg Ser Arg Asn Thr Thr Ala Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp Pro 5 765 760 7155
Glu Glu Leu Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp Asn 780 775 770
Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr Arg
800 795 790 785 lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys Ser 815 810 805
Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala Asp 830 825 820 5
Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser lle 845 840 835
Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu Met 860 855 850
Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser GIn Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys Val 0 880 875 870 865
Ser Arg GIn Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg Leu 895 890 885
Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser Gly 910 905 900 15
Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Gln Ala Lys Thr 925 920 915
Gly Tyr Glu Asn His His His His His His 935 930
90 >210< 942 <211>
PRT <212>
Artificial <213> <220> 5
C9 fragment with His Tag <223> 90 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 10 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Phe Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50 15
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 5 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr lle Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165 10
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Leu Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys 60 Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 5 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 240 235 230 225
Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr
255 250 245
Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Pro Asn Ala 285 280 275 5
Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val lle His Asp Asp Glu Cys Met 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Ser Thr 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 0 335 330 325
Lys Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala Gin Met Leu GIn 350 345 340
Gly Cys Thr lle Leu Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly 365 360 355 15
Asn Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val 380 375 370
Val Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 400 395 390 385
Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu 415 410 405
Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn Gin Leu 430 425 420
Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr 5 445 440 435
Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu 460 455 450
Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr 480 475 470 465 10
Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu His Phe 495 490 485
Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg 510 505 500
Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 5 525 520 515
Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly GIn Asp Ala 540 535 530
Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn
560 555 550 545
Lys Glu Gly Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 575 570 565
Gln Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 590 585 580 5
Asp His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn 605 600 595
Ala Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser 620 615 610
Ser Ser GIn Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly 0 640 635 630 625
Asn Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp GIn Arg Gin Pro Gin Asp Gly 655 650 645
Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg 670 665 660 15
Lys Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 685 680 675
Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 700 695 690
Lys Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 720 715 710 705
Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro 735 730 725
Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Met GIn Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 5 750 745 740
Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp 765 760 755
Pro Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp 780 7175 770 10
Asn Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 800 795 790 785
Arg lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 815 810 805
Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 5 830 825 820
Asp Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 845 840 835 lle Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu
860 855 850
Met Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser GIn Val Glu Asp Gin Arg Glu Cys 880 875 870 865
Val Ser Arg GIn Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 895 890 885 5
Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser 910 905 900
Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys 925 920 915
Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His His His His His His His 0 940 935 930 91 <210> 942 <211>
PRT <212> artificial <213> 15 <220>
IGF-1R (murine), extracellular domain with His Tag <223> 91 <400>
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu
10 5 1
Val Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gln Leu Lys Arg 40 35 5
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Phe Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val 80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 0 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115 15
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr lle Asp Trp Ser Leu lle 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Leu Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 5 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Val Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys His 240 235 230 225 10
Thr Pro Asp Asp Asn Thr Thr Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Lys Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Gly Thr Tyr Arg Phe Glu 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Pro Asn Ala 5 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Asp Gly Phe Val lle His Asp Asp Glu Cys Met 300 295 290
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Ser Thr Gln Ser Met Tyr
320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Gly Asp Glu Glu 335 330 325
Lys Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala GIn Met Leu GIn 350 345 340 5
Gly Cys Thr lle Leu Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly 365 360 355
Asn Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val 380 375 370
Val Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu 10 400 395 390 385
Ser Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu 415 410 405
Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn Gln Asn Leu GIn Gin Leu 430 425 420 15
Trp Asp Trp Asn His Arg Asn Leu Thr Val Arg Ser Gly Lys Met Tyr 445 440 435
Phe Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu 460 455 450
Glu Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr 480 475 470 465
Arg Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Asp Val Leu Arg Phe 495 490 485
Thr Ser Thr Thr Thr Trp Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg 5 510 505 500
Tyr Arg Pro Pro Asp Tyr Arg Asp Leu lle Ser Phe Thr Val Tyr Tyr 525 520 515
Lys Glu Ala Pro Phe Lys Asn Val Thr Glu Tyr Asp Gly Gin Asp Ala 540 535 530 10
Cys Gly Ser Asn Ser Trp Asn Met Val Asp Val Asp Leu Pro Pro Asn 560 555 550 545
Lys Glu Gly Glu Pro Gly lle Leu Leu His Gly Leu Lys Pro Trp Thr 575 570 565
GIn Tyr Ala Val Tyr Val Lys Ala Val Thr Leu Thr Met Val Glu Asn 5 590 585 580
Asp His lle Arg Gly Ala Lys Ser Glu lle Leu Tyr lle Arg Thr Asn 605 600 595
Ala Ser Val Pro Ser lle Pro Leu Asp Val Leu Ser Ala Ser Asn Ser
620 615 610
Ser Ser GIn Leu lle Val Lys Trp Asn Pro Pro Thr Leu Pro Asn Gly 640 635 630 625
Asn Leu Ser Tyr Tyr lle Val Arg Trp Gin Arg Gin Pro Gin Asp Gly 655 650 645 5
Tyr Leu Tyr Arg His Asn Tyr Cys Ser Lys Asp Lys lle Pro lle Arg 670 665 660
Lys Tyr Ala Asp Gly Thr lle Asp Val Glu Glu Val Thr Glu Asn Pro 685 680 675
Lys Thr Glu Val Cys Gly Gly Asp Lys Gly Pro Cys Cys Ala Cys Pro 0 700 695 690
Lys Thr Glu Ala Glu Lys GIn Ala Glu Lys Glu Glu Ala Glu Tyr Arg 720 715 710 705
Lys Val Phe Glu Asn Phe Leu His Asn Ser lle Phe Val Pro Arg Pro 735 730 725 15
Glu Arg Arg Arg Arg Asp Val Met Gln Val Ala Asn Thr Thr Met Ser 750 745 740
Ser Arg Ser Arg Asn Thr Thr Val Ala Asp Thr Tyr Asn lle Thr Asp 765 760 7155
Pro Glu Glu Phe Glu Thr Glu Tyr Pro Phe Phe Glu Ser Arg Val Asp 780 7175 770
Asn Lys Glu Arg Thr Val lle Ser Asn Leu Arg Pro Phe Thr Leu Tyr 800 795 790 785
Arg lle Asp lle His Ser Cys Asn His Glu Ala Glu Lys Leu Gly Cys 5 815 810 805
Ser Ala Ser Asn Phe Val Phe Ala Arg Thr Met Pro Ala Glu Gly Ala 830 825 820
Asp Asp lle Pro Gly Pro Val Thr Trp Glu Pro Arg Pro Glu Asn Ser 845 840 835 10 lle Phe Leu Lys Trp Pro Glu Pro Glu Asn Pro Asn Gly Leu lle Leu 860 855 850
Met Tyr Glu lle Lys Tyr Gly Ser GIn Val Glu Asp GIn Arg Glu Cys 880 875 870 865
Val Ser Arg Gin Glu Tyr Arg Lys Tyr Gly Gly Ala Lys Leu Asn Arg 5 895 890 885
Leu Asn Pro Gly Asn Tyr Thr Ala Arg lle GIn Ala Thr Ser Leu Ser 910 905 900
Gly Asn Gly Ser Trp Thr Asp Pro Val Phe Phe Tyr Val Pro Ala Lys
925 920 915
Thr Thr Tyr Glu Asn Phe Met His His His His His His His 940 935 930 92 <210> 512 <211> 5
PRT <212>
Artificial <213> <220>
Mutated IGF-1R ECD Nterminal with Alanine at position 491 <223> 92 <400> 10
Met Lys Ser Gly Ser Gly Gly Gly Ser Pro Thr Ser Leu Trp Gly Leu 10 5 1
Leu Phe Leu Ser Ala Ala Leu Ser Leu Trp Pro Thr Ser Gly Glu lle 25 20
Cys Gly Pro Gly lle Asp lle Arg Asn Asp Tyr Gin Gin Leu Lys Arg 5 40 35
Leu Glu Asn Cys Thr Val lle Glu Gly Tyr Leu His lle Leu Leu lle 60 55 50
Ser Lys Ala Glu Asp Tyr Arg Ser Tyr Arg Phe Pro Lys Leu Thr Val
80 75 70 65 lle Thr Glu Tyr Leu Leu Leu Phe Arg Val Ala Gly Leu Glu Ser Leu 95 90 85
Gly Asp Leu Phe Pro Asn Leu Thr Val lle Arg Gly Trp Lys Leu Phe 110 105 100 5
Tyr Asn Tyr Ala Leu Val lle Phe Glu Met Thr Asn Leu Lys Asp lle 125 120 115
Gly Leu Tyr Asn Leu Arg Asn lle Thr Arg Gly Ala lle Arg lle Glu 140 135 130
Lys Asn Ala Asp Leu Cys Tyr Leu Ser Thr Val Asp Trp Ser Leu lle 0 160 155 150 145
Leu Asp Ala Val Ser Asn Asn Tyr lle Val Gly Asn Lys Pro Pro Lys 175 170 165
Glu Cys Gly Asp Leu Cys Pro Gly Thr Met Glu Glu Lys Pro Met Cys 190 185 180 15
Glu Lys Thr Thr lle Asn Asn Glu Tyr Asn Tyr Arg Cys Trp Thr Thr 205 200 195
Asn Arg Cys GIn Lys Met Cys Pro Ser Thr Cys Gly Lys Arg Ala Cys 220 215 210
Thr Glu Asn Asn Glu Cys Cys His Pro Glu Cys Leu Gly Ser Cys Ser 240 235 230 225
Ala Pro Asp Asn Asp Thr Ala Cys Val Ala Cys Arg His Tyr Tyr Tyr 255 250 245
Ala Gly Val Cys Val Pro Ala Cys Pro Pro Asn Thr Tyr Arg Phe Glu 5 270 265 260
Gly Trp Arg Cys Val Asp Arg Asp Phe Cys Ala Asn lle Leu Ser Ala 285 280 275
Glu Ser Ser Asp Ser Glu Gly Phe Val lle His Asp Gly Glu Cys Met 300 295 290 10
Gln Glu Cys Pro Ser Gly Phe lle Arg Asn Gly Ser 60 Ser Met Tyr 320 315 310 305
Cys lle Pro Cys Glu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys Glu Glu Glu Lys 335 330 325
Lys Thr Lys Thr lle Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Met Leu GIn Gly 5 350 345 340
Cys Thr lle Phe Lys Gly Asn Leu Leu lle Asn lle Arg Arg Gly Asn 365 360 355
Asn lle Ala Ser Glu Leu Glu Asn Phe Met Gly Leu lle Glu Val Val
380 375 370
Thr Gly Tyr Val Lys lle Arg His Ser His Ala Leu Val Ser Leu Ser 400 395 390 385
Phe Leu Lys Asn Leu Arg Leu lle Leu Gly Glu Glu Gin Leu Glu Gly 415 410 405 5
Asn Tyr Ser Phe Tyr Val Leu Asp Asn GIn Asn Leu 60 Gin Leu Trp 430 425 420
Asp Trp Asp His Arg Asn Leu Thr lle Lys Ala Gly Lys Met Tyr Phe 445 440 435
Ala Phe Asn Pro Lys Leu Cys Val Ser Glu lle Tyr Arg Met Glu Glu 0 460 455 450
Val Thr Gly Thr Lys Gly Arg GIn Ser Lys Gly Asp lle Asn Thr Arg 480 475 470 465
Asn Asn Gly Glu Arg Ala Ser Cys Glu Ser Ala Val Leu His Phe Thr 495 490 485 15
Ser Thr Thr Thr Ser Lys Asn Arg lle lle lle Thr Trp His Arg Tyr 510 505 500
عناصر الحماية
1- جسم مضاد ‎antibody‏ يمكن امتصاصه مضاد ل ‎IGF-1R‏ ؛ أو شظية ربط ‎binding‏
1 يمكن امتصاصها ‎(IGF-IR‏ حيث يتم اختيار الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور
من:
أ. جسم مضاد ‎antibody‏ يشتمل على ثلاث ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ‎heavy chain of‏ ‎sequences 5‏ ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3 وثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات
‎light chain of sequences‏ ذات رقم تعريف المتواليات 9؛ 5 و11؛
‏ب. جسم ‎antibody alias‏ يشتمل على ثلاث ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ‎heavy chain‏
‎of sequences‏ ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3 وثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات
‎light chain of sequences‏ ذات رقم تعريف المتواليات 10؛ 5 و11؛
‏0 ج. جسم مضاد ‎antibody‏ يشتمل على ثلاث ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ‎heavy chain‏ ‎of sequences‏ ذات رقم تعريف المتواليات 7 2 و3 وثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات ‎light chain of sequences‏ ذات رقم تعريف المتواليات 9؛ 5 و12؛ و
‏د. جسم ‎antibody alias‏ يشتمل على ثلاث ‎CDRs‏ ثقيلة السلسلة للمتواليات ‎heavy chain of‏ ‎ld sequences‏ رقم تعريف المتواليات 8؛ 2 و3 وثلاث ‎CDRS‏ خفيفة السلسلة للمتواليات
‎light chain of sequences 5‏ ذات رقم تعريف المتواليات 9 5 و11.
‏2- الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-IR‏ ؛ أو شظية ربط ‎binding fragment‏ يمكن امتصاصها 67-114 منه وفقا لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور جسم مضاد خيمري ‎chimeric antibody‏ .
‏20 ‏3- الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-IR‏ ؛ أو شظية ريط ‎binding fragment‏ يمكن امتصاصها ‎ai IGF-IR‏ وفقا لعنصر الحماية 1؛ حيث يكون الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور جسم ‎antibody alias‏ متوافق مع البشر.
4— الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-IR‏ ؛ أو شظية ريط
‎(Sa binding fragment‏ امتصاصها ‎IGF-1R‏ منه وفقا لعنصر الحماية 3؛ حيث يشتمل الجسم
‏المضاد ‎antibody‏ المذكور على:
‏أ) سلسلة ثقيلة تتضمن ‎CDR-H3 3 CDR-H2 (CDR-H1‏ لمتواليات لها أرقام التعريف 7 ¢ 2 و3؛ بالترتيب» و ‎FR3 3 FR2 (FR1‏ المشتقة من السلالة الجرثومية البشرية ‎human germline‏
‎IGHVI-46*01‏ (رقم تعريف المتوالية 44)؛ 5 ‎FR4‏ المشتقة من السلالة الجرثومية البشرية
‎IGHJI4*01 human germline‏ (رقم تعريف المتوالية 46)؛ و
‏ب) سلسلة خفيفة تتضمن ‎CDR-L3 3 CDR-L2 (CDR-L1‏ لمتواليات لها أرقام التعريف 9؛ 5
‏11( بالترتيب» 5 ‎FR3 3 FR2 (FR1‏ المشتقة من السلالة الجرثومية البشرية ‎human germline‏
‎IGKV1I-39*01 0‏ (رقم تعريف المتوالية 45( 5 ‎FR4‏ المشتقة من السلالة الجرثومية البشرية ‎IGKJ4*01 human germline‏ (رقم تعريف المتوالية 47). 5- الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-IR‏ ؛ أو شظية ريط ‎binding fragment‏ يمكن امتصاصها ‎IGF-IR‏ منه ‎Wy‏ لعنصر الحماية 4؛ حيث يشتمل
‏5 الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور على:
‏1 نطاق متغير ثقيل السلسلة ‎(VH) heavy chain variable domain‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 33 حيث تشتمل المتوالية ذات رقم تعريف المتوالية 33 على طفرة تقهقرية ‎back—‏ ‎mutation‏ 1 على الأقل يتم اختيارها من الوحدات البنائية 20 34 35 38 48 50 59 ‎TT 76 4 72 00 6 61‏ 79 82 و95؛ و
‏0 ب) نطاق متغير خفيف السلسلة ‎(VL) light chain variable domain‏ ذات متوالية لها رقم تعريف متوالية 35» حيث تشتمل المتوالية المذكورة ذات رقم تعريف المتوالية 35 على طفرة تقهقرية ‎back-mutation‏ 1 على الأقل يتم اختيارها من الوحدات البنائية 22 53 55 65« 71 72 7 و87.
6- ورم هجين ‎hybridoma‏ فأري يتم اختياره من الورم الهجين 4757ل 4773-ل 4775-ل ‎٠-6‏ و4774-| المودّع في /ا01[0؛ ‎Institut Pasteur France‏ بتاريخ 30 مايو 2013؛ 6 يونيو 2013« 26 يونيو 2013 24 أبريل 3 و26 يونيو 2013؛ على التوالي.
7- مترافق مكون من جسم مضاد ‎antibody‏ وعقار يشتمل على الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي ‎(Sa‏ امتصاصه المضاد ل ‎IGF-IR‏ ؛ أو شظية ربط ‎binding fragment‏ يمكن امتصاصها 167-14 منه وفقا لعنصر الحماية 1 ؛ حيث يتم ترافقه مع عامل سام للخلايا ‎.cytotoxic agent‏ 8- تركيبة صيدلانية تشتمل على جسم ‎antibody alias‏ يمكن امتصاصه مضاد ل ‎IGF-1R‏ وفقا
0 لعنصر الحماية 1؛ وسواغ ‎excipient‏ و/أو ناقل ‎vehicle‏ مقبول صيدلانيا على الأقل. 9- المترافق المكون من جسم مضاد ‎antibody‏ وعقار ‎Wy‏ لعنصر الحماية 7 المستخدم في تصنيع علاج لمعالجة سرطان ‎cancer‏ يعبر عن ‎AGF-1R‏
5 10- المترافق المكون من جسم مضاد ‎antibody‏ وعقار وفقا لعنصر الحماية 7 المستخدم في تصنيع علاج لتوصيل عقار أو دواء إلى خلية سرطانية ‎cancer cell‏ تعبر عن 167-114 في 1- الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-1R‏ ؛ أو شظية ريط
‎(Sa binding fragment 0‏ امتصاصها مضادة ل 167-114 منه وفقا لعنصر الحماية 5 المستخدم في تصنيع علاج لتوصيل عامل سام للخلايا ‎cytotoxic agent‏ عند موقع الهدف بالمضيف ؛ يتكون موقع الهدف بالمضيف المذكور من حاتمة موضوعة داخل نطاق ‎IGF- 1 R‏ خارج الخلية . 2- الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-1R‏ ؛ أو شظية ربط
‎binding fragment 5‏ يمكن امتصاصها مضادة ل ‎IGF-1R‏ منه تم استخدامه وفقا لعنصر الحماية
11 حيث يكون المجال خارج الخلية ‎IGF-1R‏ المذكور هو المجال خارج الخلية ‎IGF-1 R‏ البشري برقم تعريف للمتوالية 51. 3- الجسم المضاد ‎antibody‏ الذي يمكن امتصاصه المضاد ل ‎IGF-1R‏ ؛ أو شظية ريط ‎binding fragment 5‏ يمكن امتصاصها مضادة ل ‎ake ١67-114‏ تم استخدامه ‎Wg‏ لعنصر الحماية 11 حيث يكون المجال خارج الخلية ‎IGF- 1 R‏ هو منطقة طرفية ‎N‏ بالمجال خارج الخلية ‎IGF-‏ ‎IR‏ البشري برقم تعريف للمتوالية عند 52 4- المترافق المكون من جسم مضاد ‎antibody‏ وعقار وفقا لعنصر الحماية 7؛ للاستخدام في 0 تصنيع دواء لعلاج السرطان ‎cancer‏ . 5- المترافق المكون من جسم مضاد ‎antibody‏ وعقار تم استخدامه وفقا لعنصر الحماية 14؛ ‎Gus‏ يكون السرطان ‎cancer‏ المذكور هو سرطان يعبر عن ‎AGF-1R‏ ‏5 16- تركيبة صيدلانية تشتمل على مترافق مكون من جسم مضاد ‎antibody‏ وعقار وفقا لعنصر الحماية 7» وسواغ ‎excipient‏ و/أو ناقل مقبول صيدلانيا على الأقل. 7- التركيبة الصيدلانية وفقا لعنصر الحماية 8 تم استخدامها في تصنيع علاج لمعالجة سرطان ‎ya cancer‏ عن ‎AGF-1R‏ ‏20 ‏8- التركيبة الصيدلانية وفقا لعنصر الحماية 8 تم استخدامها في تصنيع علاج لتوصيل عقار أو دواء إلى خلية سرطانية ‎cancer cell‏ تعبر عن 167-114 في خاضع. 9- التركيبة الصيدلانية وفقا لعنصر الحماية 8 تم استخدامها في تصنيع دواء لعلاج السرطان ‎.cancer 5‏
0- التركييبة الصيدلانية المستخدمة وفقا لعنصر الحماية 19 ؛ حيث يكون السرطان ‎cancer‏ ‏المذكور هو سرطان ‎cancer‏ يعبر عن ‎AGF-1R‏ ‏1- التركيبة الصيدلانية وفقا لعنصر الحماية 16 تم استخدامها في تصنيع علاج لمعالجة سرطان ©0806 يعبر عن ‎AGF-1R‏ ‏2- التركيبة الصيدلانية وفقا لعنصر الحماية 16 تم استخدامها في تصنيع علاج لتوصيل عقار أو دواء إلى خلية سرطانية ‎cancer cell‏ تعبر عن 167-114 في خاضع. 0 23- التركيبة الصيدلانية وفقا لعنصر الحماية 16 تم استخدامها في تصنيع دواء لعلاج السرطان ‎.cancer‏ ‏4- التركيبة الصيدلانية المستخدمة وفقا لعنصر الحماية 23 ¢ حيث يكون السرطان ‎cancer‏ ‏المذكور هو سرطان ‎cancer‏ يعبر عن ‎AGF-1R‏ fc
A ® & re : ‏سه‎ 1 8 Ed i ¥ % 8 0 ْ ‏لمجا‎ i 1 0 i 2 =. ade] - ; ; 1# 777 Re a TE SL ‏وا‎ 1 ‏ا‎ eat pe oh 4 ْ Pg PO ‏اها‎ ‎pg 4 : 8 ٍْ ‏إٍْ المي‎ ّ \
EY 0 H
SA SFR § 0 1 - & "٠ ‏الا‎ i 1 1 4 ‏ض لمم لم حيطا‎ ‏اق ات‎ Fi ‏إْ‎ ‎> 0 ْ: + : § ‏إٍْ‎ ‎4 Yeo. 0 )' 53. 8 : ‏ب لك‎ ! '
Yau £ ‏إٍْ‎ ‎J ْ ‏الود الها شت‎ i 1 ‏نح م‎ ’ 4 1 3 E J 1 a 3 4 8 3 ‏ل‎ NECRIFRRIRRRERRERC LR ‏ان رون رت الممسسسسيسية ل لا را‎ a Yow Tae Fou g EI TF Troe ¥en ‏خب‎ ¥ 0 ‏كي‎ IR 3 + ‏نْ‎ ‎3 ‏د د‎ (A) ‏صل‎ i e FO ee FOR 0 Bae gu 1 ‏الل‎ J ‏ب‎ i §
ee TH ie pai | ‏المجموعة‎ ‎[I TT A028 een : ١ Aegean deez 00 + ‏ا الل :ا‎ vet BCU I 2 ‏المجموعةاء المجدد ع‎ 1 ‏#ل#ثتة :0 ل‎ ST | ‏#ثتةة‎ ‏اح لس ا ا‎
Ea EE ‏ديد‎ |: ‏الشكل ؟‎ ! la moss Abs ‏أجسام مضادة‎ £3 0" ‏فأرية‎ Abs ‏أجسام مضادة‎ EER ‏لد دن‎ Sift Gn ‏ذا‎ ‎1 ‏"م‎ oor ' i: { | od 3 Vig CHEFR{G2) ©
TV 1025 638( ‏م مال م ول وه ” يا و 0 بن‎ 3 Ried + conic #5 pe ‏الا‎ AY THE 8 ‏وم 8# - وقح‎ * 1 $7 dn th. Ein Fag Rim ‏ا‎ MIE IE HIE HE IB iis EB ‏ا‎ ‎= © ‏ذا ا ذا 1 أ 4 ري له (050204اة‎ iim ‏ا‎ 118 jig 118 IE ‏خم‎ iE DE
EE IRE i. all 8 ‏م‎ 3, Ian BIE. HIE HE iE 0g iE {EE ‏ذا‎ iE LIE HE iE HE ‏جم‎ ‎3 8 ‏اال وم ومتع‎ TBE ‏م ا ا ا‎ ‏ب ل ا‎ 13 {dl AHHH ‏ا ا ا ا ذا ا‎ ‏]ابش 2 بج‎ ]]0 018] 8 tia. & AL HEH ‏ا ا ا ا ا ا ذا ا ا ا‎ = spa ld” ‏ا‎ WE ME ME 3! 81 BE ‏ل‎ 8] 8! 8! 8! 8] 8 8)
Sd 4 RR " - i ERY Y ِ 3 ‏ل‎ % % ¥
RSL EVR PU 4 ‏كن فى ص فى قن في كي ل كي ل د دلا م‎ As Sg ‏اي‎ FoF a AF ‏الو قي قب أي‎ at ‏تي‎ ‏ا لو [مولا]‎ A
Gt 274 (ia Ba ‏ل‎ GB fr ‏الشكل‎ ‏الشكل “اب‎
Weg 1
Lo Yea I ‏يد ل‎ . a : Be 5
FABER EEE DEL a = EEE EERE EYEE M™
T wf 1 1 EE EE EEE § EEE EEE ‏ااا ااا نط‎
IRR 11 11 1] 1 ‏د‎ BRBEEE EE EEE ‏ل‎ ‎LODE DL ED DDS PD DD
HE FREESE FEF FE AE
‏و ار اتح نر رار را تر & اد يق‎ 8 2 a 3 ‏من الت‎
Zr ‏الشكل‎
‎SLING‏ وهيل ‎0B‏ ع« ا ‎PA RRR ¥ 3, & EOBER ER‏ ,3 ا 5 جح ‎MT‏ : 3 ‎wimpy Es a 3 wad 7 ote se‏ * و 4 ‎(am‏ تفتلن # له ‎J let‏ لدم م جه 0 ل ل 4 ‎(Bn 8 Ed‏ لوف 9 1 3 ‎esas‏ و 2 3 ل 3 ‎ay 53 ARH‏ ب بي 3 ‎Byer i ghee‏ ‎ry oo PERTTI TRITIY‏ ٍ > مد : ّ : 1 3 0 1 1 ‎A PYLON hel 4 AL Yo‏ ا 4 4ق ‎eth be‏ ‎j 3 ce x‏ لو [مولا| لو ‎Bsa‏ ‏الشكل ‎wi‏ الشكل +1 $5 ‎FE | id‏ ‎teed EA‏ ,4 ‎E Te wr‏ ‎ST ak +‏ ‎uy‏ £80 ص ااا ‎Pe.‏ ‏ب : 4 و ‎١‏ . سا ‎LI Va FH decd JOE‏ 4 ‎ps >‏ 1 ااا ‎i‏ م با 3 ‎pet‏ ‎a ١‏ قبا 7ع ‎A‏ 1 ور ‎x‏ ده 3 م ‎EN S|‏ ب ‎hey a sa viol‏ 7 ‎vend 0‏ اله 2 ‎wa EI‏ ‎TE > 0 >‏ تت 0 حجن تت جو تح 2 ‎ay on‏ = ‎BRIA a oo OO A ORR, 2 Yo E oo‏ + جم ‎PT‏ ‎ad -‏ ل ‎AL WL ML‏ لخ ‎Th.
Yeo‏ ‎SREY‏ حون ‎RR Rec RE‏ لهال | ‎x‏ ‏> ب ‎Hed " 8 8 N‏ الو ‎[esd‏ ‏« سا = = ص 3 5 يي © مضعم « 8 [مولا! مصوع ‎X‏ ا واد ال ا ‎a TET oad‏ مد «* ‎and iBAs 4 oTHou TD eRIEA‏ »* 30 + ال * ‎redtnss + eRRES‏ 8 ‎Wi 8‏ * م« 441 ‎X‏ اد ا 8 الي 08 ادا ا ل ل نا ل ا ‎PR FINE GRAS ® AIREY‏ كمض ‎Tole FOUR‏ مات فض 5 * ‎mone‏ 7 ‎INT‏ ‏جر 1007 7< ان ‎rer‏ ‏لم ‏الشكل دب ‎fn ba at‏ ‎١‏ الشكل *1 ‎(a‏ # 1 4 4 ‎I.‏ ‏التي ‎¥i‏ } 4 ‎LE a i‏ | 3 1 “ني :8م أي سل" للا ‎AL‏ الخ ‎TA.
Yeo‏ لى ‎[asf‏ ‏لاع ا تا ل ل ناو جد ‎we‏ ان & ادا دكن عن ‎mRUSRE‏ +« ‎ATEASR‏ *«* ا اي + مي +9 من جمدو« ‎NIE‏ قت ود 8 الال ‎Bn‏ تمص كد ‎FLT‏ ‏ممق تل +« ف ‎LS Sek‏ ‎RHE‏ & الشكل +
8 1 حا الوا ا + 7 ‎LE]‏ ‎os‏ أجسام مضصادة ‎Abs‏ كمرية م ور ‎TTT‏ لكام 5 2 ‎dy B 1 i‏ ‎plant‏ مضادة ‎a Abs‏ 4 1 1 + 1 5 £4 ا دي ‎١ A‏ ! ,3 ا ‎Yao saa UGH gs 7 El‏ : و : ‎CHGS REECE ahs > 0 4 rl IR.‏ د 4 ‎i] 01g 5 .‏ !ا« با 3 ين م 8 ‎weiss‏ يا ا - ا ا ا( واة 5 ا :ا ‎if. 1 Ei iE‏ ** بن وضعو و ‎AE‏ 43 4 ىق ا 5 ا 5 ذا ذا ذا © ‎dig‏ )ا ‎a‏ أ اللي جو تووم وأ ا ‎R11 1 2 = CIEE CE = go ge 88 2‏ ا ا ا 3 8 “وب ‎{hay‏ اناا * ‎vi. pr id oy HELEN HR EMH‏ ا ‎Gh 2 pha JHE He ii HE HEHE HE UB HL HE 1 8‏ : م 1 ‎RE‏ 1 أ ‎EE‏ !1 ألا بع ب" 0 8 ‎wy‏ ‏ا الا ل ‎he CLA Gen HHL‏ ا ا ل ل ‎Sl‏ ل ارا اللخ ان ني ل ل ا | ا م 4 ‎11١.‏ ؟؟ أب لع ين ري ني لطيو لزي ين على ب ا الى ا ا ‎SU‏ با 4 ‎SE TL‏ 11 .1 اا اد ا ا للد يد ‎SF‏ ‎a oe cnx am Gann‏ لو ‎fg]‏ ‎i —‏ ل الشكل أب الشكل ‎W‏ ‏» ‏1 ‏بمجعوزم وجو وريم كسم وعبات ‎i! : 8807‏ يا ال ‎MERITS HEHEHNRELITE 1‏ ‎Be 1‏ ويم ‎Wo i = IE iE (iE NE IEEE]‏ وا ‎Hh i EHTEL ne EE‏ ذا م 8 ا ا اا ا ا اال بلدا آي ‎EE BE WE BI EE EE RH BEB 2‏ !ا ذا ا ذا ا ‎EE:‏ ¥ 3 ‎BIE 2 ig gt i: = Boi | 2‏ = 5 = ا ‎il‏ ‏0 ل ا ا من ا ا ‎LEE‏ ‏: ا ل ا ا ا ‎bE iH AEH BERR‏ 7 ‎had HEN BY EE EE BE BY BE BE BL BEBE BN BE OB :‏ ‎RL RE 8! 8! 8! RL 8! RL RE 8! 8! RE Rim R‏ !8 اللي نكي الم هن كي م اه ار اهن ان هم ناي اك الا حي © 2 ان ان ان ‎FFF‏ ان ال ال الي ‎FEF‏ ‏أت الت لدت اا نت فت اا الات للا اف د اله ف ا لا £3 بببسسسسس | بست البسسسسسسسسس ثثث ‎G1 32 33a xis 34 38‏ ‎te =‏ الشكل ب &
ا م ل ا i ‏وتوم‎ Aaah Sige FTA ga ‏0م > تفمقة‎ :
Aye = : — then 0 ‏ايو‎ : 1 Pra COW pa ‏يي‎ R wisi Planes ] 1 : <7] : 1 : + : 0 8 1 Sed Foire ! ‏لا‎ 1 ; ١ 8 3 Yo 1 / : 1 , Oo 085 ‏مع‎ :
FF er HEHE Ere ‏مم حا ماس‎ SE A SRE hE AE ESR refined : nin, i : 7 220 0 EE 4 H : — H N :
Bowvo_l |] ; . bo ْ:
MR ERT i H : 1 | امح ب ‎Yoo. | :‏ ل ا ب 3 ‎NE‏ ا
Evi Yui Baa Fra des Ud Ave ‏يك .413ةخ| دوم #جة0 ليية0‎ itd oa 4d {Sy ‏الزمن‎
Fro HEEFT ‏من بش‎ AFAR ce ‏من بشر و عقوي‎ 15515 der HBG EP fond GE 1 Rae ‏عقوا‎ 5 BFR fate wht ١
A ‏الشكل‎
YY .
RI i 0 \ =
EE 8 2 i = 1 \ B= wt ed a = | 8
LE & [= A oo ‏يت‎ i 5 eel Pl = ‏الح ل ال تت لا ا و‎ ‏إٍْ‎ ©. > =
VB 1 <2 = o 3 os 8 ‏م ب ل‎ x pas
Se HE em. Bow ‏ةق‎ EEE RFE ‏الم‎ NE ‏لعا‎ TE TE ‏نعم «جط_ دةء ةم‎ + ES ‏م ات اج‎ 8
TE 0% oz: * ‏_ةة &§ «# _؟#‎ # 3 * 8% 85 9 ‏م‎ ‎5 8 8 © 5 »_ 3» 2 2 3% 3 9 5# #* > ‏ة‎ A - 4 5 - al G2 33a ‏تاج‎ ad G5 re § ‏الشكل‎
Ye 4
Vie 5 H aa
PO 5 5 1 Ver ‏بال‎ 3, Hl a 8 EE ةا = = لان ال
EERE I. = ‏نا‎ 1 1 aa aes go 0 a [9 {EE BB = = == ‎FB‏ 2 188 6 تي ‎a‏ م ‎EE IE‏ 1 ا جيب نا - ‎el‏ ‎Se 8 8# eee, Bom BBB ‏ا ا اس‎ ‏هه الم للع الم ل بكب للم لي مم د عا هيم «ن الى ل الى «« آي انمي لكي خم حكن الى لآ مجن ‎SUE SN SH TC SH‏ الى ا ا ب & ‎a » 2 NY‏ 3 ب 5 ‎pn gs a =a‏ نب دي نب ‎Can £54‏ مل يق 1 ‎eenneenssemssemssimssimsssmssssssssmsissimssimssimsssmsseriniee™‏ ايع ممم ممم ممم مم ااه ‎NE ‎RELY ‎ERS + ٠١ ‏الشكل‎
86 uy $ ru o = #8 i oa ‏ا ل‎ | x wm © ‏بج‎ ‎pst 1 3 8 BR B ‏ند‎ 2B 0 = ‏لا‎ of = = ‏م‎ © ==
SI {Ff RE I 2 3121 3 ‏ا‎ S82 » ‏لال دك‎ § 3 § 5 BB BN FB RB BB BR BB =< ii 8S BR BR 2B BR BR RR BR BR BR BR ® ‏اويا‎ 2 BR 2 2 BR BR BRR RR R BR ‏م‎ ٠
Nr 1 8 313211!)
Ne: RE RR RRR RRB
PWR WPF FPP
Log or ‏لا‎ + a" SAT LS & ‏كن‎ A ‏د ني ال‎ Sh x A ‏اط‎ ht SN Ral a EF
Fa 22 $i : ‏إل 8 و ل ف رما : ل‎ F
SEELPELEEEFFEE
31 GR 338 ‏قي 4ه متهت‎
A ‏الشكل‎ ‎ْ abs En.
Tra Lia ‏لبمس‎ | vy va
RR 8 midi | a— pry os # 01018 | Gi ‏مسيم‎ | YEAY a! & 102 ; 1
BRET 028 | Ge maneFs ‏الف‎ ‏ا 2 ; 2 *؟ + محر‎ 1 ٍّ 1 2 ‏يق 1 اش‎ 22817 i N 8 > i ‏الحا‎ 2 woe ‏اا مستا‎ SU ‏تت - عنمب »* ب انا‎ BIE ‏ا اا‎ ‏ل‎ ae UR — a + Red marae | YVAe ih ‏اويا‎ & wR1281 Ret MAAEIG | AY
Fond beatin SURE . ‏ادي‎ 1 1 0 1 5] ‏ا‎ ” 7 owEiastg ‏ا ا‎ 105 1 FY 3 ‏ع 8 + مسسسشسسسسيسسسيسسسيسسيسسلة صقر‎ atlas ‏الم “د‎ ‏صقر‎ XS Ba. WE Yew YE NEO 5 aS ‏م4‎ 1 LR 5 ‏حفص‎ Rg Pe ‏ده ده مس‎ a rr atl fal * 4104 | GE MATH Poyraov
Fe ‏سس : ا 4 + رسن‎ ‏ا‎ 443 i ¥ oad # ‏الس — ا ل 4س‎ ‏الا ا اتن تا ل‎ 14# 5 41 « 5 34 7108 1 1752
BRE aL BH i BPE
BE MESES ] 3 ‏ك4‎ ‎5 ‎CER ‏الشكا‎ méFaHY suid] ma 8 ‏حي الغشاء‎
Ng 1 ‏ب‎ X 3 ‏تيب‎ ‏مها لإجمالي ا الإجماتي‎
To mh FREE A 4 he © 2350 glug = 1 ‏هت السيتوبزم اللي‎ ‏ان‎ Bas 1 NRE OW ‏ا‎ i "١! i : oy Sy SN ‏ل اس اط الا‎
SERIE ‏االبكة”‎ 5 8 DEE SI ‏اا‎ ee NAN ‏الا‎ ‏ااي ا العا‎ - a] 3 Yoo od TN ‏مسن‎ ; RSS = = ror pre > 34 ‏اا به ع‎ Tg ‏حص ميل‎ > J - ‏هلد بال حم‎ o ga y + 5 " 1 ‏اميق‎ ‎Ir a, ‏بايا انار رااان‎ hhh eh ett ee | Fie .
Pl a x oul A A AA TEA AAA AAA TA RA A 7 A A Ap ‏“ما :ا اا‎ 1 Le x £ [=] 4 + . : = ‏صكل.‎ * ١ A ١ . ‏صر‎ CT ©“. ‏.ةا‎ PR ‏و 4 ذا الو كه ّ الحضناتة‎ ‏يز مل الحشضانة الل‎ 0 ‏الغشاء‎ > RICH pr 07019 ‏عا الي‎ dt ‏ا“ لخو‎ ‏جمانلي‎ A ‏مع الإجمالي‎ ‏ل‎ d ‏حي‎ ‎See A Fea! fn i fails ‏بلازم‎ Hu ‏ايند إل‎
A EE ‏ال ج57*اا7 اس ا ب‎ i SAR ‏مب جا 0 يتم ا‎ ; ~~ a Te ‏ححا‎ 2
Et Ee UU ‏اله + اا‎
SIRI. TT 5 Tax | ee eg 3 3 1 ‏اا ال تت م ل‎ EEN ty Tr reassess,
Yed a ‏نم الى‎ ESR ce wee ET ‏تيع ال اال‎ ! ‏لي كا‎ Se ‏اا ا ا ا ل ل ل‎ ‏ا ا ا كد دي د ند عن رز ار ا‎ SE EE CE- ‏من الحخضاتة‎ A elma! ‏من‎ 3 1870 ARETE ‏2055م‎ lll wie ‏سج الإجمالي مه الإجمالي‎ * x 5 iy ‏اخن‎ ‏ميا السيتويلازم 3 مهد السيتويلازم ا‎ " 1 inl Aas a tT 7 ‏...»م‎ JE 3 ‏ا‎ ee en
SF 7 fay J TR rg sol rE 1006 a Se
LE Tres ‏اج‎ Xero} Ten” TR
PE SUN TT 5 ‏ال عن ل‎ 3 Yui + a SY hy Yew oad dl ani J 3 2 a ‏ل‎ R i Lo 0 ‏مش"‎ BET ‏ا‎ ‎ٍ ‏لاغ م و 3 صر‎ pil Te REN . ‏ا 3 صقر‎ a ‏بغ‎ Ta Won ‏العا‎ wo. n rR I . ‏الحضاثة‎ ye ‏رمن الحضاتة ز‎ ‏ل‎ - Ural ‏ا 2 د‎ Lael aes mat ‏حل‎ Fons 1 Fant ‏الإجمالي -ج- الإجمالي‎ 1 Veen 5 ‏سق ال بتو باحزم‎ El Rian ‏د ال سستوبلازم‎
HERE REE SS ERR ere in 5 - Tn ‏سس‎ . a Fn HA 7: i Tee 2 4 face rE RR CE Fl Tans Rat? en Than
FRI ‏حل .الح 407 3 = صر مج‎ ~8 5 Xr ed Pe SER TE peel 3 vo ~~ ‏مي 3 امحل‎ Treg - Yew Ad [a ‏الاح معت‎ “ AEE) 5 ‏ا‎ aaa ‏امام ممم‎ 0 | ‏7ج‎ fr} . Wat i ‏ناالتتالالاللللاللتتالاللل ال‎ as ee ‏اخ د ل‎
Shea x ‏لع عن د أ اد‎ Wa ‏صشر‎ NO FTE EE 6.00 ‏ملا‎ ‏ام‎ 5 0 - oT 5 0 ‏نت‎ ‏رمن الحضاتة ز من الحضاتة‎ ‏الل‎ ‎ir EEE Lal] sa ‏8م‎ pls] ‏هم‎ ‏سوم الإجمالي‎ ‏سه السيتو لازم مم‎
FE JERS SE d IEE nem Ri ‏اا ا‎
ERE: ‏ته‎ ‎a SE ‏و الس‎ Tel ‏ا‎ ‎a Yeu vd 7 ‏لاسا هخ‎ a a ~~ Reese ——— ‏ال يي‎ 0 R - ‏ص صني‎ ‏صنق‎ Nox A Ton £ & 5 * Now ‏رسن الحضاتة‎
Ve ‏(الجز‎ ١# ‏الشكل‎ ‎3 i a 0 ‏حي الغشاج‎ wi 0218 ‏فمحق تف حت الغشاء‎ Nd
NN ‏الإجمالي‎ ‏مه الإجمالي‎ SE. ‏سيت الم 8 اح ءا‎
CE ‏سف السيتوباتزم‎ ERNE TTT
H 7 . " Be A N i Sew Fe ‏يهاس‎ ‏ا ا ا‎ AE ‏ان 4 جلي 4 0 الاين اا محص ةحص ا‎ 1 TN Seg : ‏ل"‎ a mmm pes ‏الله السك‎ RD ‏ولع‎ ‏لني 020و — دا 0ك‎
RE BI ‏احيسسسكشتتت»”“(‎ SARE ‏ب" مر‎ ‏ل‎ Ra on o > i Pa
Pad Be 2 000000 eB ‏بلطا‎ I a, ‏صم‎ FE EE CE FA ‏ولخ .لج ل‎ Fea he Yoo We fe ‏لد‎ Te Wo ‏رشن الخحضاتة ز من الحضاثنة‎ ٍ ‏حت أل غشاع ب‎ 7 Xe) $3 I = 77050 JTS J mata] ‏شه الإجمالي‎ ‏ا اد امال‎
FE ETE ‏عه السليتوبلازم ااا #- الإجماني‎
ESN PE ‏مهيب‎ 4, bed ‏سييست سا اتا اس‎ ‏ل‎ Favs 1 i fen h . i el RR SN
Trl a ‏ا‎ Treen Te ll ——
I - : ‏ااا 1 ولس‎ at ot i on” ‏.تا‎ ‎3 ‏مرا‎ i ‏سا‎ TT q RE i Le de
KET ‏ل الست اا فس تس ل‎ BE ‏:اا‎ ‎» ‏ىن » ا‎ Vs . ‏ضفر‎ LIS ‏و‎ Te a oF qe “a aa RI Xo EY HEY o& Tow A ‏زمن الحضانة زمن الحضانة‎ ‏اللاي‎ om ‏جرال‎ ‎08011 ‏5ت العسات‎ PUTTS Je
Mami ‏جه‎ ; ‏ص الك“ <- الاجمانيى‎ 0 ‏اوري‎ x eal ‏و‎ ‎§ oven a ‏باد‎ fail wile 1 ‏ا 5 جا لماجا‎ ‏مه السيثوبلازم 0 يتوبدز+ ا‎ i FER 2 ‏ب‎ i EXE 4 ‏ا اا نع حب ب ارا‎ i 1 ] Toe a i ee = 1 ‏يت امم‎ 1 EER 1 0 Yous 4 ‏ا‎ Treg 3 ! went ‏سايق‎ rs
PA TE ‏دار‎ mt ‏ااا ات ا‎ EATER ‏ا سات الات‎ AAA en ‏ا‎ Ry ‏ا ب" م‎ i
Te BE rg, TTT Tepe : ‏فر‎ Ye 5 ‏الا ةي = و جم‎ : fleas Yow Xo X i = 346 ‏اب‎ ‏سين الحنانة صر ن الحضانة‎ a FH (Y ‏(الجزء‎ VY ‏الشكل‎
‎I J‏ ا هه ل ‎ly I J‏ ‎I NR ne‏ 0 ‎A‏ ‎ENA A A‏ ‎SEE ES‏ 1 ا 1 ‎rey‏ 0 ل ‎RS‏ ‎Roe aes‏ ‎a A‏ ‎A DR RR 0‏ ل ل ‎a A‏ ‎aR Ra a‏ 1 ‎Colima a i a Ee a ae Rl St‏ ‎I IR YN a J SL RA Sa SR SE BAe SM A DU RAS ATO RRR YR A He ans‏ ‎RE RE‏ 0 ‎aE‏ ل ‎a‏ ا لت ا تا ع ا جح ا ‎EEE aE‏ ل ل ل ‎a a a a‏ 0 ‎a‏ ‏0 ‏0 ‎EN‏ 0 ‎nn‏ ا 0 ‎LA LARA LO DL LD SARA DE (SEED RSNA SD LESSEE AR LOH KEE ALAS ROS LO ERAS SL EAU SR SRSA E UR SR ARBOR ERR CERMAK ALEK‏ 0 0 ‎RAS SU SE URIS RS ae, Isp ESRD NNO:‏ ات ل ا ا تت ل ل ‎EE EE a NG‏ ‏ا اجلتت .تفي ا ‎a‏ ‏0 له ل ا 0 اه ‎SR :‏ ا ‎IR i ‎EE 7‏ ‎SSR CROSS BRR SLUR on at‏ ا ل ا ل ب ل ا ارو جر .»ا ل ل يا ل 0 ‎ey‏ ا ‎A a‏ ا ا ‎EE ae‏ ا ‎ROO LIOR ROR AS‏ ا ‎Se‏ مي لبا جل دبي تيد ولي يوي م ‎OO aa sos OE a On‏ ‎a is‏ ل ال ب ‎I‏ ‎a‏ ‎RE‏ ‎A‏ ‏ا ‏8% رن :0 0 ل ا 8 + 0 ‎a ee‏ ‎ee 52‏ 2 1 * 0 ‎el‏ 1 ل ا 0 ‎‘e 5‏ 0 1 ‎Rs‏ 1 ‎= tv ig ‏الشكل‎ ‏ا‎ AR Sy
RE
0 a eS psn li
A AE a EE
A ‏ل ل ا امم تا ل تي م ان لم ات‎ ‏ل مت ا ل متي مم م م م ل ل لتو لا ا ل ا ا‎ ‏ا‎ rR a ay ‏ل لحك لكي الح جر ان حيري موه ال ال ل اا ا ا ا‎ Rd ‏ليمي واج ل‎ REO. Ja WOR
A ‏مح اي ل و > د ا لت ا ا اج ا ا ل ل‎ ns Rens 1 as ‏ا‎ ‎0 ‏ال‎ ae a a ee
A ‏ل ل‎ NS ‏ل‎ & OE ‏ال‎ ‏ا ا‎ ay Rey 20)
EE EF a aE ‏ا ال ل ةا‎ ea ‏ل‎ ee ‏ا ع م ل ا جود ا ا ا ل‎ 1 ‏ا ا ل ا ا ا‎ SA ‏حت م ا ا ل ل ا‎ SSSR ‏ال ل ا ل سير لت ا‎ SBR ‏م ل ل ا ا‎ IN SRLS 0 ‏م تت ل‎ ‏ل ل‎ ss ‏ا ا‎ A LS Ra ‏ل‎ A
A a ‏حت ا‎ A ‏ا حم تي ته‎
A a a Re ‏ل‎ as A A a a
Ee EE a a eA ee ny
EEE a a
ON RE REE
RN
0 ‏ننجي يم ري الماش اج ل ات ري لج مارج لا ل اماج المج ا تن ل ا ا مج‎ Ry a ne a a De Re a a Eh RAY
Bs
OS SE ROE SA
‏ل ا‎ 0 ‏ل‎ NN ANE ‏و‎ NL ‏ل‎ CA ‏ا اا ا ل ا ا ا‎ x ER ‏هه و‎ BS ARO Re Sa SRI SEE ASSIA A SON URN SRSA SAARI ‏ته‎ ‎EE ‏م 0 مب ل ا‎ ‏ل ل ا ل م ا ل ل م ل ا‎ ‏ل ل‎ a 1 ‏اا ف‎ ‏مح ل ل الي مد الم لي ا مم ل ا ا ل‎ ‏و ل‎ a a ‏ل وج ل ل‎ Es AE a ‏لمجتت ا الت ا م ا و لي اش‎ ‏ال ا ل ا ل ل ا ا لحي ل ل ل‎ SR! 2 ‏م‎ ARR 3 RR CE 1 AL
EE Nae nr ‏الم‎ ‏لجلا لجل ميج يديا لك نمدا جح وي ا تت لجا لاج الات كر جيه لوقي الجر ان جا واج جود لج نا جد تج ل ادي ا ل‎ 0 ‏ل‎ A ‏ا‎ ‏ا ل‎ CA RR ‏ا‎ ‏ا‎ ‎iy ‎0 ‏ل‎ EE ‏ا ل م ل ا ا لاا بج ل‎ ‏ا ا‎ [| % ET SY [£28 a I% xe
BR LES I ‏و ا ل ل ا‎ 2 sees 2 ‏ا ل‎ 5 ‏ل‎ I I Tm A a esa aR
I ES a RR EE en ‏ل‎ =
J ‏يا الت ا ا ا ام ا اا ال ا ا ا‎ 0 0 ‏ا‎ A SRSA ‏ال م‎ 0 2 ey RAR SOR SR ESAT a A ORR SA IO AN SA SRSA +3 ssa ca Rss eRe ees ‏ا ا‎ > ‏ا ا ل 0 ل‎ 8 ‏ل‎ na 1 ‏ا ا‎ 3 seer Sassy Sas ss seas Seo ‏ا‎ 0 8 ‏ل ا ا ا‎ NEE ‏ل ل ا‎ Dee ‏ل ىا‎ ‏ا‎ CE A ‏م ل‎ RE > ‏ا بها ل ل م جا ا ا ا ا ا ا ا 2 ا‎ 00 0 ‏ا 1 ل‎ 5 ‏ا‎ 1 as AA 1 AS CR AI SURRY HE Ry 3 2
I © i Ne
EL LO ‏ا‎ RN RR SS RR
SR EE a ER : ‏يح ا‎ a ١٠ ‏ع‎ adh wt + ‏الشكل‎ ‎ْ + »
Areas
Co
Voor] i i cil a = lam vl Bg ‏م اا‎ a 110 W ‏تم 8 | #2 | م © ا‎ ‏ا اا ا‎ BBE ّ 0 a ‏ا اخ يخ‎ = Nn ‏ا‎ PEE ER 3 di 1 | o 0 EEE ‏ص‎ a B : : 4 iF 7 ‏ال د‎ 2 PL ‏قبل الحطاقة وام بفيلوميسين ته‎ ©
PEER = 8 ‏ا‎ 2 {= AT ‏الحضانة + بالبلوميسين‎ Gf ® 12 BNE 2 ‏بالينوميسين 41 لي اا ا‎ Min pls 2 = IN BEE BEE ‏ها‎ EEE BEE ha i ‏ا‎ BE © EE TEE HE 17
WEN 8 Zz iz ‏ا‎ ‎POE 5 ‏الا | نان | لا‎ ! ‏ا | ل ين | سا ا ا ا | ا‎
CEE Ee ‏ل‎ EEE Se i BB BTEC
AE ‏اخ‎ 2 Bora | ‏م ا ا ا‎ ‏ا‎ Ba ‏سر ةا | سما || سات‎ ‏ا ا ا‎ nn ‏د | ناا ةا قا قاطن‎
Poa EY SURES | ‏فض«8عع | «معة‎ 37 ‏الشكل <؟‎
SESEY 1018 ERT
A on i 0 ‏بج‎ fle goad gf | 0 2011 ‏ال | العا‎ BY Ho pend ‏ل ةذ‎ 1 aa Toni B
Susi ll ‏بي م 8 ة‎ BH ‏ل ةا‎ om
Tuell B 2B 2 8 ‏نم‎ 2 Jase | 8 ‏ا 8# عمال‎ # RR RRR ‏وج‎ BB. “1 SB pn Te Dn Te Te FTE, CTR, TR, ‏الح‎ STH TER
CR AD AR ‏اك‎ SN es ‏عل‎ Toe 7 ‏عقت‎ “She ‏علب‎ Tike ‏تلع‎ Ey Pa ‏اين ا رن اناج م جين نه جين م‎ 201 0 331-171 3 ‏م‎ ‏د د الا ا او 4 ف كي د دلج تج تي‎ ‏ا ا‎ 1-1 4331414 4
LEE CJS LC ‏جار‎ ab en ae #3 ee aa ee - pie = = ©. id . ‏ا : نض و‎ 38 5 ‏يا ا المجموحة 2 ا‎ : =
UBER Sun Sees og ‏الح‎ HM I NH I ‏ل‎ boson w BL
Tuell BE © ‏ساعد © © يي ىم‎ B OB © ‏د § ا‎ ” ‏م #5 _ذ ا‎ OB ‏نا 2 = = | 0 © ب‎ aka ‏اك‎ RR BR RR RRR py RR RAB B.R.8,
SR a SERA pA Ry 34 - k i 5 ‏َه ل 2 ل‎ a Kk jimi rl kd i
LEE LLLE LAL 1 ‏ا‎ ‏نخد لادب لل اكد لم لاا للا تا الام اسيلا الل احجان الام الم‎ ‏لض عبج اشير ل‎ = met 41548 men 1am : BE 0 838 ‏لمجموعة‎ ‏اب المجبوحة و23 من‎ 8 Heed ‏بج‎ :
ERIE mm BE oo DEEL EE ‏خخ‎ em BOE OB 8
JETRO ww ‏يي‎ BB = SES EE BE OB 8 OB OB 8 [RE wm © © 8 i ‏ان‎ BE ‏م م‎ ‏لت‎ Bog 2 @ ‏بخ‎ rl BD BB BEEBE
Viens 8B 8 | 8B 3 1 rl BE EERE
NED + = < ‏ب سب‎ 8# - = » = i = 3 = 8 ‏عع اق‎ = SR. BR i. oe... HE. 1 ‏ا م‎ ‏ارقا‎ SR, EL SE, ‏وا روي‎ on ‏وحم يوم يوم روجا فوا لوجم‎ ‏الو كج يج يج ته لما الو تو تود توا نه نه نا‎ 4 4 31 3 ol Cg Fe Tk ‏جا ااا‎ Fe oh ‏عدا الأ الأ الحم الع‎ 4 js x 3 + 4 *
LAEELL LE LAE LAL
‏اقم اه‎ aR ‏د اهم ا بخ‎ x ‏تب ألنت انا الم اع الح‎ “x wr ‏ل م حم‎ ot )+ ‏(الجزء‎ ١6 ‏الشكل‎
دجا الحم لاا © ال جا احور لان ‎FRESE EROS Savage‏ مع ‎ed‏ © ا ‎TREE‏ اح يا جا ‎SRR‏ م امج ‎ROR‏ : = الج 0 اا الات تيا ا ‎wil 0 0‏ جد ا ا ا ممممم معدم مدعت 0 ‎x i 5 pA 3 # 8 8 4 NY‏ ون اد ارب ‎Ng]‏ 4 الت حش ‎ER JAE‏ تتا ‎١‏ ‎rah atoll: TR 0 Ji‏ وجي ‎Ry‏ الاين ب ل 8 الل الما يحل 25 ‎ETE‏ أرق لون حل 22 ‎FRE EX]‏ 2 ات عي 8 أ أ الل جد 22 ب" لم در زعي ". ووو | ‎PEA‏ ‎RBCS stat 1 yuh dl RY‏ ياي ال 7 اللي نينا ديد 22 ‎TR SE go JETER RR] 8# pH RANGA § ars) eee pa‏ ‎SE [al] sania B NES LAER 8‏ الجر ‎Til I 2 Pig‏ ‎DE SAY ie‏ الم تهار وجني 8 ‎Tara ER TE mm‏ 1 8 ارا ‎FIERA SE‏ # اليه بهد 12 3 ارم ‎Sx Asai‏ لارام اهيار رجي ! ‎١ . 2 Lat da | REN ! 7‏ ترا ‎PRE roms wi SIA‏ ووو ‎NRE Cy ead‏ اس 0 زر اليد عل 12 ‎t ¥ asd ap EE Voc ab SX FREE BF‏ ولواح ‎ES‏ ‎FEASTS Yay ] on NYY‏ ل ‎XE tected‏ ال ار ال : ل ‎a‏ جلي 2 ‎B‏ أ لد بيد ‎ngs mm VO‏ 2 ار تار زهي ا ‎a Pt‏ الج ‎Ye‏ أ 1 الا ليان الا + جممجمتتددموعمط ‎٠:‏ 7 ‎TA ١ dag dh)‏ ا ‎EY HR‏ . ل ‎YR mgd‏ يج أل ‎gtd‏ كنا : 8 ‎PL SERRE. dof Eh ARS‏ الج الا ‎Bal‏ 8 ا ‎RE SHER 8 Sid‏ ‎Yon a7) 4 dont) FRIES‏ 1 ال ا ماري أل ‎Adm did‏ لكين رع الي ‎mn‏ لوأف كار 1 ‎any‏ ورا ‎SITE © et fe Lo eww‏ ‎in i ook‏ ا © 3 :5 ‎ann‏ 0 2 دةةة»* خا ‎IE} TER TR A‏ جد كا هد ‎SN Er‏ بلا د سر ‎J‏ لين ‎Eas $9 aE Pag‏ م سس ل ‎fo‏ الا 28 انل ؟ على ‎ir Oh . PIE‏ ا هذ ا 3د ان د وأا ار ل أ اليل تل 8 ¢ ‎J Co ¥ FRI‏ ‎A‏ آرم لبر رجن ‎AL‏ رين ديد 2 ال كد ‎RRR 2d Sat gd PN aa‏ لا بي ‎a on‏ # كه مر ‎os‏ و ...م ‎do‏ ا د و م سج 0 ‎d‏ ييز رحبي م 1 ‎WE a‏ 8 ‎ir 2 0‏ 1 رتيل ري 2 .ةق ‎SRA‏ ل . أل ل لين ؟ جيل ! 6 رو الم ا 3 ‎AIS‏ الاين بيط 38 ‎LI‏ = رع ‎Yds d 3 mm Ha Ff FRI‏ اج ع ا 8 ‎Sn‏ 1 دا 1 ‎CR‏ ‏© الا جور ال قر ‎E RLS ER 3, aa‏ دما ‎١ ٠‏ = 1 الاي ا ‎FUE‏ اانا د اي ‎Ne‏ ا لي ل لين بعد“ ‎FI SUI = AN 5 EL‏ الا § الل ليد حل 10 8 ا اران ع ‎Ie Ce‏ أل ‎mm rE : 2 mega‏ ا 17 ‎Spier ANT‏ اللا ‎aad mm | RA‏ 2 الرخر ادر جني ' سدور لي ل اليل كن أن ‎CEES 5 atta‏ ‎ETE‏ لو اليدرريني ! ‎Fas‏ ووو | أ ‎EAC‏ ‏ال ل اما ار م 2 ا ا ‎TYREE) ua‏ ووو ‎ve SRE ٠ Sand A}‏ - برجي ‎NE)‏ ار ‎mmm CTRL Vi‏ أ أ ل ‎SPRUE fered‏ و يي اليل ردن + ‎gm‏ ألزلم لبد بلي + ‎SER A asad 3) ums EYE‏ ‎fo‏ ارام نهر ان ‎Ea‏ ال مق بي ‎Lod 4 |} VeeTT—‏ ِ ا عب ارام لبي جل 1 ور لير رجي الشكل 7 لالجزء 8{ . جا عت ‎E - -‏ ‎x» $‏ مك 0 ال . 86-0 لعبوشية ‎Evy Wik‏ لنوشية الخفب ‏ + 2 ‎i J‏ ‎lid‏ شالب تم حي تب 2 ال جد يج ديدج = = > ‎toy Mo iN A PE - 1‏ ‎x‏ : سسا يت ‎CH‏ ‎Vo, 0‏ = - = لس ‎Ln 3 by‏ { ‎H he H 1 ph‏ ‎{oon Nn ismessesetin . -‏ ‎i‏ سم 2 ‎H Bs, RRR.‏ ا السك 001 ‎i"‏ ...سس الل أ ‎am — By. a & z bhi‏ م ‎Ei‏ ‎TO SS oe EE ; Lib‏ ‎H‏ : 7 5 8 و تت 7 ص 3 ‎=a a]‏ ب 1 ‎lS 58‏ 9 ل 8 ل ل قي ‎is‏ و : ‎SS Doreen PEARL rinses ETN‏ لا ‎HH te‏ ا 8 ‎He Fg‏ ‎a i # § Se #‏ ,2 1 .0 ‎Pr 1‏ 1 07 الم ل 2 ‎oR 3 Sma - ig oo 5 . py 8‏ < ‎al ; SET :‏ : 1 سد ‎CN me‏ 2 ‎Fp Sn : = oh ‘ [is #‏ م أن > ‎FRR‏ £1 ليسي ‎CS‏ ‎H Ree ES 5‏ م ‎Os, PROD H :‏ : نح ‎SE‏ ل ‎H‏ ب ‎RD‏ د يدهت ‎Gy v - od +X noes = FAR‏ § ٍ م ‎H £4 SN‏ ‎LER‏ لا ان 3 ‎at Gs, Somme EC‏ ‎am 29 LHRABR & Rau 22% RE‏ رن ا وي اليا ل ‎B= Te Ts J‏ ابيا ‎possess 8 [RCRA‏ & ددا ‎REE she‏ لد و ‎FT NR san‏ شل + 0 ل ‎wR LO‏ = ا لمممممة ممع ‎DEY AEE YS‏ ام ¥2 ‎HE ky Be‏ صصص ‎x, TE‏ - " ا ‎EEE‏ ‎bY 8 & *‏ 8 لضي ‎EY‏ . ‎Dy = 7 be:‏ ‎TFB»‏ ام ب ‎BO‏ ‎RY 2‏ » #734 الشكل ‎hy‏ ‏لكا أب لشكل كب
; الت ; ¢ ‎EN : : er fd ae‏ ‎Pat RAPA IGF-IR aud bale‏ 0 212 : بواسظطة ‎q 1 2 . IGF‏ ‎IED 2 $=‏ 8 لمجموعة ؟ ‎a3 i ERT,‏ يه 2082 : ‎FR‏ 3 ‎Q0% 1‏ { ; ‎po 1038 i‏ ‎i Eh me‏ د ‎N pe aps ti ase] B 81588 i HES‏ عدم =< ‎puttidapid & ong i Wik 7 IGF- 11 Bed‏ 3 13-11 المتاكثة بواسطة 101 أ ‎FLORIO LI ; halt‏ : بشكل ‎ms‏ بت" ‎gS . dale H‏ - ‎Grins d‏ ا 1 421 بواسطة ‎HGF}‏ ‏00 ‏.. ا 1 ‎ma‏ ات اه الل ميال ب نقض القنرة على الارتباط بواسطة إيادة الكذرة على الإرتباط أو ‎plo‏ ‏الرقم الهيدر 5 ‎mall an‏ لتأثر بالرقم الهيدروجيني للحمض 3 الشكل ‎VA‏ ‏لوا لوا 1 قر دقوي و 61 ‎Fan‏ ‏موي ¥ وام 3 سي ماو بو ا 1721 3 4 ‎cA‏ * 4 ‎aR‏ | مجه ‎vas‏ ويم و 3 ‎i‏ ‏ميا با 1 ا الم إٍ ‎i ae‏ . ]1 #- ره ‎Az } Ae Tg‏ ب ‎CS‏ ‎pa Pg LB 8‏ 3 هته ‎a Tas TY‏ # را اد ‎T ve‏ و ‎a NEF i‏ ل ‎ig Pot § A‏ ‎ad IE‏ = 8 م 3 ‎Tv 9% 83 . AE‏ م مع 3 وان ؟ ا 8 ا م ‎o Fay‏ ا ‎era FECES‏ ا اس ين 2058 7 م5740 يودي ‎Tua . ESE 3 2Rde-130 Xe Seg‏ ‎YE he z ”‏ ا م من م3:05 | لالع و0218 8 4 ‎a Ete‏ ‎La chi eau J‏ : ‎A I‏ دعا ونكد دق ‎I SR STE‏ قدا لسر ل صا لو [مولاز] [مولا لو [مولار] الشكل 4 أب : 7 & الشكل 114 لد ‎NEHIT‏ ج23 ب 2 ا ‎LIne‏ مووي ‎i‏ ‎od : we > 4 ¥en BE 8‏ 3 ‎pel ¥‏ ؟ ‎LIE BI‏ 3 ‎ps H 0 a‏ ‎vey‏ 3 متخوض افو ا | ‎e‏ 4 ‎TE 4 Yes‏ ‎i Ax‏ 7“ ‎EE‏ 34 1 5 ‎PE‏ 3 4 و 4 ‎f= Yen §‏ 8 ِ 1 == ‎١‏ 21 :و عوةة#:#؟#وءدةوءوة ‎Yel‏ 34 ‎es‏ 1 ‎y‏ 4 فر » 0 — ‎Ke She EE‏ ب ‎LIE PURE 3 Pa‏ لا ‎Yao 4 Ao‏ -؟؟ ‎LI 1‏ + لق [مولار] لو [مولار] ب الشكل 24 ا الشكل 4 ‎z‏
‏بشري‎ IGF-IR (TAG His) o eG erred 3 ‏الس‎ kaa ‏من. كأر)‎ 71
Foy SE, Wis { Bl ‏من‎ HRP 4 ~ ‏ا يت‎ ‏ممما‎ ‎0 9 ‏توي بالخ ا‎ 3 > 3 ‏ا‎ ‎4 ha ce LA 0 ِ = ‏مسحت تسا صفر‎ ll a a ee
Ne X PEE [RY tLe
A ‏جرام/مللي‎ gh ‏؟1‎ ٠ ‏الشكل‎ ‏من فارع مشفف انم #ايشري‎ HRPY ‘ perenne eine mp ففخم ‏من ماعل‎ HERP ‏سهب‎ : 0. ‏حدم سدح ةًًإأوأوأاتعستتىوسسوعكو[ وى‎ 7 | ‏سه‎ AF305-NA (AG) 3 ' ‏ست متر:٠::٠7٠887ا7ة7٠٠5؟ة #99 0ق‎ 084 ir ٍْ ‏ااا تت إٍ ا‎ ‏المتت“متنتنشسل شششٍٍسٍسٍسس سس لللسلسلللسسستتا ا يي‎ 2 3, | SS i | ‏نبا‎ ‎a A ‏م‎ REEL dss ‏و‎ ‎7 > el I ‏ممع‎ he. x a x EE ‏جد«‎ IEE
A Al 180 b ‏؟ب‎ ٠ ‏الشكل‎
ب« 4 سسٍسسسسسس-وس_ .م سين ف ولا 3 > ‎[RENE J :‏ م الآ ,3 وبي ‎2a ~i‏ 4 ‎i 5‏ ا دا ‎ped‏ ‏ال 3 كج مي السهه 5 ‎Yoo gum‏ © الجه ‎pi‏ ‎EY =‏ 3 ‎H — SE, Re at S080,‏ ‎EL a‏ ا لا دا الت د الت ع ا ل كا د اد سح الت ‎Shed BE Th‏ ‎A 5 5‏ ن 34 ‎x kf £ a‏ 3 صقر التركيز (ميكرى جر ام/ملني لتر الشكل . ؟*ج بحا لصاوتن تادودعم اق ا ا 3 بي 3 ‎Vor =‏ 3 >“ 3 ا ب + + 1 ‎I‏ ‏:8 4 3 9 . ‎EY : 3‏ ‎x 0 3‏ 0 نما
4 3 ين ىا 3 . ‎Yk 3‏ ¥ 5 يا ‎Yea 3‏ ‎EE‏ ‏8 — ل ل مسد مس ممت * ‎a BE LEIA I Se‏ ‎A ~‏ 8 & 3 = 0 # ب } ‎aa‏ ‏التركيز ‎ERR STENT LEE J‏ الشكل + ‎AY‏
‏كارسيتوما الثدي‎ < BAER oman wad
MUGGED ER hai TR aan a = a
NW RE FS STEEN NN RN 3 NN RR Raa a . a ‏ا‎ NR oa 0 ‏ااا‎ = La NL NN ao ae ‏اا‎ =
LL = wn 0 ‏ا‎ SL NN aa =. x RNs Nak a
Eg . = Ce "0 ‏اك‎ a = i a Bae = 0 ‏ا‎ A HR lhe
Ia =» al (RRAN » jay [ DL . a ‏ا‎ ‏ال لي ذا لتحت كك كد‎ ‏اس حال اا ا ا ا‎ 0 0 RN NR : 3 A 2 RT a ‏ا‎ ‏ا ااا‎ 8 N NA I 8 : ‏ا‎ 8 Ny i 8 NN NR a NN
AR ANN Le NRT aa LL LL
AR RH Hi RT’ NE SN Nak RN SRA NN
LL , NE LL 1 an NN eC Boe a 8 ‏ا ٍ ا‎ Na ae f 8 ‏اد‎ ha XX res = Ea ‏التق‎ NN a \ . nal eee ‏ا . لسن‎ -
Reis: ‏اد ا‎ ‏ا ا ا ا‎ ‏عاد‎ = aE
SL 4 -
NRRng THREE NHR NEE 3 aha Nn NL 0 =
SL NL Tha aaa
LL La Ne
Ly Nae RN aaa 3
Raat NN \ Nahm nt Na Le . LL x ‏ا‎ ‎083 ‏ا ا‎ ‏ا 07 وم‎ : | N | Lh NS 3 N TR Nina TINY
RI RE a NL X Ths haa ie ‏ا 8 1 : كاز سينو‎ ‏الس : كارسينوما المعدة‎ ER ay
HERS TER TEN NE at i ‏م‎ ‏تلاش الاك ال ا‎ ‏الا م‎ a ‏ا ا ا الايد ا‎ ‏ال ل‎ Shea ‏ا ا‎ NT ‏ال‎ ‏ا 8 ا‎ a Ne 1 8 ERR ea TR RR NENG
Towa Clea Sates ‏ال الها‎
Tee Sanaa Callies ns BRE © TAB ‏ا اكد ا‎ ‏ا ا ا‎ ‏اال ا الا ال ااا‎ an ae a ee LL
Ll Le a
SE Paige en Bone Sos : , To 2. aaa ‏اا اواج تا‎ ‏هاي ااال بحاي اا القن‎ ne a a TC
ERE TE ea oan aa
ETRE ae ‏؟‎ ١ ‏الشكل‎
} ‏أنسجة طببعية‎ :15 8 ‏ال‎ OVENS ACAI HE uv FR a SU = EA ‏نر جح مكبح‎ ZK SA ANNAN =< SEER nT ‏اا التدي‎ i Hadad) EES Ag than ‏عقدة‎ ++ DE ‏مسج‎ " pol py 8
RRS BI A wo, ol of Rha a " ‏ان 25 انر‎ - 3 ‏مسي ال ا اليب‎ A ‏امسج ال‎ ET ‏م‎ TRAN § ‏مقارنة في الشريحة‎ Ade
Cate he ee ETRY Is A ‏الم م سس سسة اللا‎
TSE RUT EE ee OY aN EI ‏ا ا‎ © ‏لل ل‎ lL ‏ا‎ ‏ا ا ل ل‎ RRR MT ‏ل‎ NN ON Ey TW I 3 8 ‏ب ا لت الاي‎ NE EIR 3 ‏ا‎ WN TER EY 85 ‏ا لك ال لاني لا ا‎ NN EP ‏بذ‎ ‎ast EI ‏اا‎ I nna ERC
CAN TR B ERR TE RIO RPS HA RN 8 ROR SN ‏ل تاي ا‎ A
Renee ‏ل تا‎ ee, vie | BET OY Nn RW NN ‏ال لاا ا‎ ‏ال ا ل ااا‎ i“ EERE IT) EE TE ARE YY REN Et
CTT TTT eee ‏الما تت ا‎ SS Ss
IYI I ‏ا رك اما ا‎ a ‏ل الا ات حو م لوا وا ار الج م ار أده او ال ات‎ ‏عضلات هيكلية‎ © I'he | 1 ‏اللعانية | اذ تخت القلب‎ Sad GEN ‏ااي ال ا‎ pe ana TE CR ‏اتا ا ا ا و ا ا ا ل‎ TNE
SEERA ‏الا من ا اللا لل‎ Bi ‏ال‎ ke ‏ا ا ب ا ات‎ SE ‏القت لاد د ات ا‎ -_ ‏ال ا‎
EL REA ‏الاح الأ‎ I SE RE LS I ‏دالج‎ Ny om Ne ‏رجام‎ a : ‏لا ا لا | الست ا ااا أي ا‎ Di i FA pal ‏ضيغ عينات المقارنة‎ 1 ‏سي ام ا ل ال ا م ال ا ا ال ا ا ل ا‎ ‏الا لل ا ال اي ا يا‎ a ‏ا‎ a ‏الا ال د ا ل ل ب‎ TAR 7 RRS
Le TI 8 do ‏ال ا ال‎ 8 5 x nN WN
RRA ‏عا‎ OF TEN EN ‏اح الج ال أ ا الاش ل‎ 8 1 ‏ل‎ NE ‏ا‎ Je Scales 8 0 ‏ا‎ mem = or wr = 0 ‏اا‎ 1 RY TU 2 3 NE Pa NN NN nN AR RY ‏الكيد‎ NESE ody Sl San {al NR ‏المريء‎ © TER LL TN | Bares x 8 NO ‏المج ججة الإ أ أ ا ا م ايل الات ات الت اتا‎ NE NY Br NRE SER SR 8 3 RR 2 ‏ا ان ل 8 للق اا الا‎
REI el RRR ‏ال ا‎ Rea RAN ESTER TN EN BAN NN RRR ‏ا ال ا ا‎ ER RA RE IS RR RN RR RRS nN
RR IANS Re A RRR SHEER RRR RY N N ‏ا ل ا‎ IE 8 RH a
REE ‏ل‎ PRR na ‏ا ل ا‎ - RE RR ian ey, ‏م‎ RE HEE ‏الاب‎ hn Sb EEN BE ‏ا‎ NN A ND NRT ER fe RN] REE EERE aa 2 NY FR RE EN SIR RE ‏ا‎ x 8 RNS NER a nea SENS SERIES ER ‏إل الت ها ا ال ا‎ RRR RN HS
ENE IN ‏الل لخ‎ EEE WR ERNE 8 ‏الس ا‎ RN 8 NR Ta TR 3 = ‏ا‎ Dl 00 ١ك‎
Coe ‏ا ست 8 ا الست حا لص ا اا ال ا ا ا‎ ‏سس ال ال‎ RD NR aN ‏ا‎ RNY, ey HEMT er tl ram AE XN SER ‏لتاب و ند -- ال‎ mee 1 ٠ ‏م‎ ‎TERA ‏لال كا‎ hemi Beale re 1 RRS ‏ل ل‎ ARO ‏جيل 8 لل‎ 8 ‏الحا ل ل‎ Naa Wave A Raa RRR ‏دا‎ ‎NE Nal Sa SEELEY ‏ا ا‎ ‏ا‎ = =
Shae La HEAR & ER Se ‏اا‎ ER RR Ray URRER SENATE ‏ا‎ ‎EAR RN a SNES J ‏ا ل 5 الدب حي ال تال ا و‎ ‏لان ال الا ا ا‎ 5 ER PTR ‏ا ا نتم حو ام‎ ‏بيعي ا ا‎ RE ‏الاش ا‎ A ‏ال‎ : ‏ا لل ا‎ ARES PEERY ‏ا ا ا ال‎ ‏ا‎ oY an | Ea se Ea we fry ‏الشكل‎ ‎' ‏أنسجة طبيعية‎ TMA | ‏ل‎ ‏ف ل(‎ RRR ERe ‏ا‎ BGT Pa = ‏تل‎ (SRR aE er I Ry INE ~ FE ‏فى الشريحة 8 تل‎ ET TINE EO . ‏_قشرة الغلي‎ NNN as, ‏ا‎ PEE | ‏المثانة البولية‎ NN ‏الاك الا سا سس‎ ‏ا الت ا م ا الات ل ا ا يخا‎ I ‏حم و ب اله اا أ‎ ‏ممع ا اا الت الح اكد‎ NR ‏ا ا ال خخ‎ RE Re aa er Alas
Na ES DARREN ‏ا‎ ERASER A FR CR A FSO. ‏اج‎ ‎: ‏ا ا ل‎ SRE BNE ‏ل‎ EER RRS i RA I I NE RENE CURR RAE A SEER SE 8 5 8 ‏الل ا ا‎ ORIRNE SUE SOE ‏ا‎ NE SE
AE ee RY BO ‏تالتش ا‎ a RO RAD BREE Rdg RN Rm NER
SL NEN SAR EE ae ‏ال‎ Se aes 8 SE EH
La . ‏ا‎ a. Lal ae
RNR ‏اا‎ I CA SRE EY ey RE: RRR
HON NER oy ‏اا ال ا اا‎ EEE aw ‏ا ا را‎ SI 4 RY OR
RENE ‏ا ا‎ I BR CS eR Rl OE Ne aA Manes] Baan] Baan Hh ae
RACING, pte sess magne renee ene ges gre eee A EE EN ‏ل > ا ا‎ Ge, Duusesosemns ‏ا‎ iN AUER aE ‏مر‎ ‎ii g gt a ‏ا الخصية؟‎ Dak Sb ‏بطاتة‎ pt ‏ا الا اا | بطاتة‎ ‏العا مه ال ال‎ 3 :
RENEE TE BERT CE
RRR ‏الت ال ا ا‎ a. © NE ‏وجوه مجه مجاه جاه كه مج جحت مهمجح تجح ججح مجه‎ 5# RNY EIA NEE, BY RRR RX RR RS SNE aa B 8 2
EER XN N FRE a 88 an NR Re NEON RES Rot 33 ‏المقة‎ oil i. 3
RE NER DN N a TIRE Nn NN La 8 ‏حينات المقارنة الدوريةه‎ fa §
AARNE ‏ا‎ NNER TR RE. ‏ل لا‎
I > ‏ا ا‎ Na NL Ea 0
EEE NER CRORE. RE Re AAR NL AAD 3
EEN N VRIES Na Ne CR Ne ARR RX [RE 3 BR NR SRA Dhan ws | Raa JR:
ARN 5 ‏ل‎ INE RRR ‏ا‎ SIREN ed
Neale oul ‏ا انع ااا تالالا ان الا‎ ‏ل ? + ا اللا ا رن ا ا‎ RR ov >
HC a SR en Roe HEY 2 ‏ات الل‎ HY J] © a near 3 ER Fm IRR
SIN RN 8 ] RENE 0 ‏اكد ا‎ Ea RR RN WCLHED 0 12 kod Baa i Se san ba LEN dia lapel NN nN Jo ١ ‏ال ل الل مح ا امحل أ تاجات جح جا ان ا ا‎ : \ 3 3 RN RR ae La pire ‏انا‎ Nan wi LL
SO RR ER, an Neha] 8 RR 3 ‏الح كحك‎ hh
ThE Tass ‏ا‎ ay Ba ast] RR NR Ra HR RRR
Ra Sai RTRs See RR Nh ‏يح مححة جح‎ ‏ل ا‎ AER ‏ا‎ RRR a Sessa Ts RN SIN Haines
SHEAR ‏ل‎ Ne JERE Raa aR NN HEH hah
NE hha. = NRT da LL ‏ااال لاد تال الك ات‎ RE ‏ا ا ا ا‎ ‏ا ا الت ا ا‎ PR INNER da Trane al ® X RX 8 RR RR. ‏ا‎ ee] RONNIE Ba DIETER a ‏كا‎ ‏ااا السكتش ا‎ REE NN re inane dps odaaaaa edie nnn
TT SOE ‏ل‎ tik
Raat ‏المع‎ ee Ball ‏المشخيخ ا 88 الخ‎ Saw RN RN RN SR 1 ee : 2 1 8 ‏جا‎ 9 : TRE
Vela NE ean ‏سي‎ Rn ‏أيه‎ ‎1 ‏ا ا‎ 2 ais REE RR IN
RR ii LEAT 8 ALL
Raa RR EEE EAE hina nae Ee Raa Naa
SERRE Ras Saas RRR 0 ‏ا‎ SE aaa ‏ل‎ SAAR SEE SERN Samal
CEI RENN SER SE
I SEAR SHEET
SEER wd RE EEN wn ‏لا د‎ aa i 237 ‏ارد‎ : ‏إْ‎ a db Ast :1 14 58 fo ed iran | UU ‏كارسيتوما الخلايا العرشفية‎ © ١ ‏المح : | ا الصو مج مج منج ممح لمحي‎ ga i NNN WAN NAUMAN NNR MN KANON RAN,
JE ont ‏ممصت نض ال‎ ,' ‏سم الي ل الح ل‎ maa se 1 ‏ممست حت‎ = ‏ا ا لج ايج‎ El mE Ea ‏ال‎ ‎Be ‏الا ل‎ FLUENT Sms 1 > ً 0 ‏ل‎ SS RA, SEE PUTS NRL TERE HR RR RRR RE ‏ا‎ Et La La saa -
LE LL ‏ا‎ Frey TREE ‏ا‎ ‏الم م‎ Re EN A CREE RS JS SRN IN SEs aE 8 La Le ‏لا ا ل لا ا‎ EER ‏ا‎ ae
La Nha EE. oo
Nan ‏ا ل ا ا ل ا ا‎ ٍ ‏ا ا اا اد ا‎ RE SaaS SRE
RRR a RI Coma ARR SER NEON SAN La
LL - La a
RRS DERE Eee Saale Ca BEERS RY ERE SEINE
NN NG ae La Le ‏ا‎ ‎NY NECA SESE ‏ب اا ال ا اا ال ال‎ ‏ا‎ TT ‏ا اب ته ا‎ TN TENG Saas ‏الت‎ Re a SEER NOW Tad ap {asd 8 ‏اا‎ ‎TRA J ‏ا بس ااا‎ : § Bl fred] ‏ا ا ااا ال‎ ‏ان‎ che ‏اما الس اج‎ ‏جوج ا ل‎ ٍ 5 ‏ا‎ ed ae a
PEE ae eee Vis Ia ; i aa baa ane a ‏الا‎ ‏اد ا أ اا ا ا اتات أ‎ ‏ا لات‎ Pa ‏ااام اا تا الا‎ ‏أ م ا ااا اي ا اا لا ا لات اا‎ ‏ا ا اا ا وات‎ ee [5 SER aaa ‏ا الا ا الى اف‎ a . ‏ا‎ Via ma Ra EE Nhe RR 8 ‏ااا ب اا ا ا اال ا‎ . en La aa ‏ل اا الات‎ NN = ‏ااا ا ا د لسر‎ TENE :
Ne ol i a ‏ا 1 ا ل حا‎ . ey a ‏ل‎ PRE Coenen i = 0 ‏ا‎ ‎0 AE ne 0
Sl Rad B EW om; on
YY ‏الشكل‎ ‎| Ud pad & rt xe]
BE ‏سس امس : ل ررحي نيان رحس‎ | NA AAA A AA AA RRA A RA ARAB ARAN ‏يت ميات‎ ‏ب‎ 0 Reena ‏كار سيتوما ل‎ hE EH
RN NN The tTtTh aaa
Ak NE No 8 Xe Lake RN ... = 49 Mea
AN 2 Nahe Lhe NN
ITH Ee NE nate y hit 3 N RN a TR NN a Ln a
Ra LOE La
NR 3 8 RRR RA 5 RR NR ERY a ‏ا »...= ا‎ La
Ll ‏ااا اا ا د‎ 8 RRR 3 8 AR N NRE RRR NNR \ N
Ll Le a = ant RARE R aaa Re NN 3
CL BB ‏ا‎ BB dl 3 RR LL NN RR Ng ERR EATER 8 AN NS . 0 ‏ا ل 8 8 ا ا‎ 5 RRR RR NN 5 555 ROR 8 0 X Ln \ LL a a . 8 NN Fe eh 3 8 Ne RRR NES a 3 BREE 3 RR Ne 1
AR NNN ‏جيل‎ ARS nN WS SN a 3 Na MIN - 5 RE SR 8 NER 13a FESS ae 3 " :ٍ 0 ‏معز اس ا ا الاب‎ i - - ant RN SR ae ei }
J [ _ ‏النسعة الطيعة مزر:‎ __ SRLS
TTI: ‏ض : : محا 0-0 الل م‎ 0 ‏ا لاا‎ Yas ‏ل‎ ‏ا ل ل ل‎ OR ‏يديه مم سه لسري‎ ‏ان ااا‎ 0 NN TIER A a ]
RRR aR RESON nny [REAR 1 0 SR Fae )
La a ‏الى‎ aa She aa
So DEANE TR REN A is a REIN ae San
NESTE i EE Rie ae REI SN (a Ne : ‏اا ال اا لا ا ا اللا‎ : Selita
Tan 1 ‏ل‎ [ER Nea EER 5 ‏ات اال‎ ‏ليت اال ا‎ a Lae 0 ‏ا‎ REE eRe ‏ا‎ ENS Le ‏ا‎ ‎RRR CERN 0 RRS Sra) [RE ERAN EE AR a ‏اا‎ '
La ae aan Ne
NN a BONN ea ‏تا‎ ‏ا‎ Sosa OAR RAE [RE SRR) RE SNe FER N a
Naa i La aa an ‏ا‎ aa EUAN ee ae Law
Se ae ah ‏ا‎ aha of
NE Naat FREE Same EN
Na Sens ‏ا ا‎ © Le ‏ال‎ ‏و ا اا ال ااا‎ ERT . fe} ON ‏ال‎ ‎SN ‏ا‎ aaa Ne Nala ee
ENE ‏م‎ Nm 5 ‏ا اتا‎ i 5 ‏اه ل ل‎
Ee ‏الأ‎ ‎ve ‏الشكل‎
‎١ 1 i ‘IMA‏ مجح محمد ‎i ;‏ : اا 1 أعدانية مشهرة ‎I‏ ‏كلية انتقائية ; إٍْ 0 1 5 71 3 ‎i‏ 1 أنسحة ‎ORC Aue Ag‏ ختية ‎x SUE‏ : ' من - | 0 ابح ب" ض - £52 ليون ْ ‎Ly‏ ل ل 27 ‎a TEE — uty —‏ 5 ‎ada‏ ل . ٍْ 1 . دج 1 ‎H‏ جم ل ‎a]‏ 1 د ل ‎ER‏ ‎Fr‏ ِ ِ - ع اكد ‎SN SRR =n‏ - ض 8 | ااي اق ‎Lo RE ow Saal Aa‏ 5 ا ‎a‏ : ‎RTS ain NE 5 L‏ ا ا ا 1 : ‎HERR‏ ‏ال 777 لست ‎NN =X ERR eR RR Soa Raa Be ET TE‏ 0 ‎FF Sar‏ التي الاق ااا ال اا 1 ٍ"' . و ‎me‏ و ‎PE San NN INR SIAR Bs‏ ‎a . a RNa Bre Na ey & x Soe i 3 a 0. So NE 8 7‏ 0 : ‎Aan NN NN LE Take Lee I NE NaN‏ 8 ‎a Li a a RK 7}‏ 0 ‎SAR Nd Ee WT Ee Tal BN RRR NN CURRY SEE §‏ ‎a aan NE SORE SEI Shed WN NR ERA RRR NN 3 EEE anna SR‏ ‎ARNE 2 REE Sad SERRE RY SEN Nas RRR =R SURE 8 8 AEE‏ ‎LL NN NN TR Lr a Sh Ld‏ ا ا 8 ‎aaa NE Sona Saw IN LL N‏ ‎Fang x‏ 03 - اا ‎A er‏ ض : ‎i‏ ‎Ca NY Na Na Sh aan RE.
Sy SE‏ ‎a‏ د ا اي ‎SL Nd ae Lae NN‏ :00س 8 ‎N RE‏ 8 0 ا ا ل . ا لا الإ ا ا ااام ا سي ‎ER i Daa ae NY Fh Trani‏ ‎REN NN Sa NEY AREY Rar‏ ال ‎CNR‏ ‎NN Hla bn WS FB AN‏ لاي 3 انعبتا لمات دج بجي ‎N BR RRR 8‏ ينا )#4 ‎L 0 No‏ ا - = ض , - ِ ا : ٍ- —— ِ ٍ | مع ا ‎er ET oe : — - 0‏ اله ‎URE‏ التق اي = ض ا ان ا لحك جحت ‎Sn SN SE SE fog CENTRO TIES EEE SERRE‏ . ‎aaa tm )‏ ا ‎os Sonia Sri ek SRE‏ ‎Po EEE a EE Rib‏ وا ال اا« ‎be‏ ‎CR REE 5 XN Da TE Ee ene 8 FREE ahaa ina‏ ‎N SUSE RN nn a [oan . ST ae‏ مت ا إ ‎a Nh EE a Seed Doe‏ \ ‎UNE Laban TEETER EE) EE‏ ا ‎of ma Los‏ 0 : ب 3 ‎HELE 8 SE‏ ل اا د 8 ‎a RRR RE NN Uo hand en EEE‏ § 0 ا ما الا لا ‎aa.
Na EOI i Lah NER‏ ‎iy‏ اا ع ٍْ ل ا سم ‎ey SEE Fou 0‏ ال ال ‎EERE SHAS RRR REE‏ ا ‎Fe BRE.‏ الخ ‎SEE‏ ‎AR aa REL REGS & Sa‏ اي الت ‎RR NN Vos‏ :0 ا ا ل 5 ‎RR NE Ne‏ ب ال اا د م - ‎dee Le 2 a ae‏ قا د ال ا ا ‎Na‏ ا ل ال ‎EL‏ ‏' اللا اا 3 ل اا و ‎FUR‏ ل ‎mm NN a) be‏ ‎TREES REY Bein ani aaa EON La ili hadi SE aay 5:‏ 8 ‎ERE aa Waitt BE Sh‏ ال ا اا ا اا 1 لاخ ‎Vo La 4 Sa SRNR 1 Ee a Say i‏ ال ‎En A a SE | Lan‏ ‎RENE JERR NE Raha‏ ا ا ل ‎Salen TE aes ;‏ ال اي ال ‎waa‏ ا الح الي ع ‎Sa EEE Bl‏ 5 ‎RE ede ewe LE 8‏ الا اا ض ض ‎oy |‏ 4 (إضفر-الخط القاعدي) [وحدة الاستجابة] الاستجابة (ضشر: 8 ! ‎SP eT ETE‏ ‎BL wa‏ ع امع = ’ ‎Lok‏ ‎nl 2‏ —— سات ‎od‏ ‏ض ‎ei‏ ا ‎wo 4 q. deans E :‏ ‎LI Az ‘ 1 SI : ! ; :‏ ‎Wi 3 Crp :‏ 3 أ الست ض . 1 1 وا 7 وروم 8# اي : ‎IS‏ 1 ‎2d Pow : Dd : i : 0‏ ‎vod 3 ps : © 0 : 1 ْ: 0‏ ‎LL | ! 1 ; : Po‏ ‎J I ٠ BE‏ : بجا 3 ‎Pod‏ 2 2 : أو الك : ‎wd i T, : sd H | i ig 0‏ 0 الل 1 : 2 } : 4[ ‎hy‏ 2 ا ‎Ld LU ; | { hu‏ = ا ل 1 سس : الك ب ‎co | J i 8 $ 3 ood‏ ‎ny : i H K hy Bi Pod‏ 2 : ‎HRN 8‏ : : | 0 مم : ‎LT NG‏ ‎rE BEET‏ نالا أ ؟© ‎er 7 i = : Eo p ; 8 1‏ ‎Eo ECT 7‏ ال : ‎A‏ + © الل الج ب" 1 ‎Ee Py : = H 8 + 3 0: : :‏ ‎NE wi : | : fn‏ "0 ‎Boo J 1 1180‏ & ا 8 ا ; ¢ 4 > : ‎ar‏ : ‎i ; 8 EO‏ ا ال ب 0 ج08 ‎co EE BE‏ 7 ‎p ; i iy‏ } : 1 ا | 1 ع : 1 2 0 2 ! 0 3 ‎Po SEE ]‏ ‎a] iF : H & 5 ¥ : 4 Co‏ ‎Td ious wd : 1 LE‏ فا ٌ ا ص ا 1 ‎Er‏ 2 1 :اس 2 ; ‎TR‏ 1 ا : ا : ‎yh‏ ض تم ‎CIR‏ 4« |( الشكل ‎TV‏ ‎REA‏
NF TRI IR ie reat Eat ‏لوابت الفصل [بيكو مولار]‎ [rela] ADAG ‏عمر النصف لمعقدات‎ — ‏بن‎ 0 Re ‏احم لهذا‎ [CRN Ge J ‏دفي احا‎ pe 13 ‏ب = يب بعر ات‎ Rad Be 0 - > a ‏ب - = ب‎ 0 + - - - - - - : - " » 7 - ‏ب : ب - : - " ا‎ bs a ‏ب‎ ‏أن ان اننا لذ‎ - »:L.. | : ‏بد‎ ‏ان عقو‎ : co: TE ‏د‎ ‎I con ER oo ‏وا‎ |- oo wet eT =e Cl he20aF2 ‏امم ممما يوط { | : اشع‎ onesie : ٍْ :
HIV EEE | 1 1 : ‏الس ا‎ Pod
WHE tate mean | i 1 vhs ‏سس‎ 0 a % 4 ! ES ‏الشكل 4 ؟‎ YA ‏لشكل‎ ‏الاستجابة النسبية [وحدة استجابة]‎
FER Sits pt ler fade ox ‏الى‎ TOS Te oy ‏عب‎ ‎6 3 ‏دج د ده‎ BoB ‏كل = © ج و‎ Lt ‏ع ج «ةه ج‎ ‏»ا »© © .ا #ة ا + بت‎ CO © . Pi -~ 0 - - > 8 ‏ا ل‎ TO ‏1ط ذا م ا‎ 0 R 1 1 i 1 H H i H
HER Em i i
Coo 1 ‏ال‎ i SY ! 1 8 1 1 H H i Nan H 4 : 8 ١ 1 H H i Raa H ‏اليم‎ 1 1 1 ١ 1 1 H i + H
LEE ‏إْ إْ 00 ل‎ | i
SE ْ : | $
HE EE i i i wd ih i ‏ب‎ SE NE NE NA A i ! GROBF2 ‏امستوى احتجان‎ | 1 :: a EEE 3 >40 ‏اليه‎ : 2 RAMA H . 1 Fn H
H 1 : i | H 3 i 4 ‏ب‎ : d 4 1 8 H 1 1 i H 1 > H 8 TE SE i i ! 4 : ‏إ» الل‎ ِ : ; i ‏"م‎ ‎LN SE EE SE | ; ‏اج + ا‎
SE EE 0 ‏الهاي‎ 0 1 1 010 \ ‏ات‎ ST +1 |: ‏ا اد‎ ES H 8 i rom HE { I i ١ 00 i i < | =e |)
Fob i i 1 2 10 0] 3 ‏؟‎ | 10 01 ] 1 i Se 1 LI : 1 H i H 3 by = 1 H = ١ 0 0 8 Ra be 1 ‏متسيس ماسوو ات ال‎ ١ ‏ل"‎ NS 77 ‏لع لما‎ i ‏ا ب‎ i ot RR RR ‏ل‎ i H GQ 8 2 ‏ا‎ i i ! : 5 HE EE I | 1 | I ‏إْ ٍْ 00 ] م‎ | : 8 ‏اال‎ i i | 1 7 4 SE 0 i i 0 ‏بسي‎ ٍ [STURT SUL i i I; ;
J EE i 1 1 :
RRR | 3 PRU H ‏نز نا‎ ٠ 1 :
H 1 : 1 H : i H pe i ٍْ
Sil 3 8 ‏ا لاا‎
ES)
EA
Loh ‏الشكل‎ Y ‏؛الشكل‎
‏مولا 8 مرلان‎ 0 ‏الاير هر خاي‎ ee ‏ا ا لد ا‎ Wa wo . 5 ‏ب‎ - x ١ 3 x x ‏م‎ ‏لي ب نا ب . ب‎
Sn z ‏انحل ا‎ 7 F
T } 8 ١ َ | SE sparen i - sas ‏ل‎ ‎a Ca, ‏الج إ‎ ‏وعم ا أرق الصو فت‎ LIT PR ‏وحم‎ ‎2.5 ‏الهيدروجيني ب" 8 ب الرلم الهيدروجيني‎ a) | NN 8 1 PE |. 3 a a. 8 ETE ~~ : ! ‏الرقم الهيدروجيني‎ AN © * asl & 1 ‏يد‎ [a ‏ع إْ‎
Cael ‏أل لقو‎ FOE es neta dE se
Lo ‏الرثم الهبذروجبني‎ 1 = ٠.2 ‏الهيدروجيني‎ ad Ee 2 ‏فق اعد‎ N 5 ‏بج "م‎ Lo ‏م‎ ‎١ ‏الرلم الهيدروجيني‎ R = ¥ ‏الرقم الهيدروجيني‎ RN = . ‏ا‎ 2 2 7.8 ‏الرقم الهيدروجيني‎ > 2 v8 ‏الرقم الهيدروجيني‎ 1 8 8 agin N sds
ARE ‏لرقم‎ 8 A ‏الهبدروجيني‎ ap 8
Al ‏(وحذة استجابة)‎ HZROBFZ bid 2 = w- ‏ممم‎ 0 py 3 v3 ‏ض ل"‎
I Sam. ‏إ]‎ ‏ا‎ | TTT,
Ce | ْ ‏إٍْ # ا‎ ‏ال ' | اما‎
Car) ١ 0 0 ‏إٍْ > : | إ‎
EEE SE I ES SE
NE GE I EE ١ § +r | I # 3 & ْ | | 1 ْ: ‏الها 0 الا‎ «3 ‏ال ا‎ ‏ل ال‎ ‏ا ا‎
Po | | bi !
IE
4 7 | | | 1 [ECR + J ICCC ‏صصصصتاااااظقلا, اات335اةللو7883‎ dd 18 A
‎dia SF‏ السعودية للملكية الفكرية نا ‎Saudi Authority For intellectual Property‏ ‎PI a Xow R i. 5 SLA « Ye.
NE‏ ‎Ne we = SCENES‏ ‎TTL UE EE‏ 0 ا 5 وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. هذا صادرة عن جح + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > هذا ص ب ‎1021١‏ ؛ الرياض ‎1١١‏ , المملكة العربية السعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA516380131A 2014-04-25 2016-10-24 جسم مضاد igf-1r واستخدامه كناقل علاجي لعلاج السرطان SA516380131B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201461984160P 2014-04-25 2014-04-25
PCT/EP2015/059050 WO2015162292A1 (en) 2014-04-25 2015-04-27 Igf-1r antibody and its use as addressing vehicle for the treatment of cancer

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA516380131B1 true SA516380131B1 (ar) 2019-12-04

Family

ID=53373391

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA516380131A SA516380131B1 (ar) 2014-04-25 2016-10-24 جسم مضاد igf-1r واستخدامه كناقل علاجي لعلاج السرطان

Country Status (29)

Country Link
US (2) US10202458B2 (ar)
EP (2) EP3783033A1 (ar)
JP (2) JP6835591B2 (ar)
KR (3) KR20220018620A (ar)
CN (2) CN106459204B (ar)
AU (1) AU2015250760C1 (ar)
BR (1) BR112016024575B1 (ar)
CA (1) CA2946795C (ar)
CY (1) CY1123743T1 (ar)
DK (1) DK3134438T3 (ar)
ES (1) ES2841249T3 (ar)
HR (1) HRP20202047T1 (ar)
HU (1) HUE052223T2 (ar)
IL (2) IL248357B (ar)
LT (1) LT3134438T (ar)
MA (2) MA39378B2 (ar)
MX (2) MX2016014000A (ar)
MY (1) MY182444A (ar)
NZ (1) NZ725423A (ar)
PL (1) PL3134438T3 (ar)
PT (1) PT3134438T (ar)
RS (1) RS61379B1 (ar)
RU (1) RU2698977C2 (ar)
SA (1) SA516380131B1 (ar)
SI (1) SI3134438T1 (ar)
TN (1) TN2016000445A1 (ar)
UA (1) UA122390C2 (ar)
WO (1) WO2015162292A1 (ar)
ZA (1) ZA201607095B (ar)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK3134124T3 (da) * 2014-04-25 2019-05-06 Pf Medicament Igf-1r-antistof-lægemiddel-konjugat og dens anvendelse til behandling af kræft
JP6968790B2 (ja) 2015-10-26 2021-11-17 ピエール、ファーブル、メディカマン Ｉｇｆ−１ｒ発現癌の処置のための組成物
JP7183163B2 (ja) * 2017-01-06 2022-12-05 クレシェンド・バイオロジックス・リミテッド プログラム細胞死（ｐｄ－１）に対するシングルドメイン抗体
KR20200083574A (ko) 2017-11-13 2020-07-08 크레센도 바이오로직스 리미티드 Cd137 및 psma에 결합하는 분자
GB201802573D0 (en) 2018-02-16 2018-04-04 Crescendo Biologics Ltd Therapeutic molecules that bind to LAG3
BR112021000934A2 (pt) 2018-07-20 2021-04-27 Pierre Fabre Medicament receptor para vista
MX2021003295A (es) 2018-09-27 2021-07-16 Pf Medicament Enlazadores basados en sulfomaleimida y sus correspondientes conjugados.
JP2022512716A (ja) * 2018-10-19 2022-02-07 メドイミューン・リミテッド ピロロベンゾジアゼピン複合体
KR20220088847A (ko) 2019-09-04 2022-06-28 주식회사 와이바이오로직스 항-vsig4 항체 또는 항원-결합 단편 및 이들의 용도
EP4353220A1 (en) 2022-10-12 2024-04-17 Pierre Fabre Medicament Use of a liquid aqueous composition for solubilization and stabilization of an antibody-drug conjugate
WO2024206858A1 (en) 2023-03-30 2024-10-03 Revolution Medicines, Inc. Compositions for inducing ras gtp hydrolysis and uses thereof

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4970198A (en) 1985-10-17 1990-11-13 American Cyanamid Company Antitumor antibiotics (LL-E33288 complex)
US5079233A (en) 1987-01-30 1992-01-07 American Cyanamid Company N-acyl derivatives of the LL-E33288 antitumor antibiotics, composition and methods for using the same
US5606040A (en) 1987-10-30 1997-02-25 American Cyanamid Company Antitumor and antibacterial substituted disulfide derivatives prepared from compounds possessing a methyl-trithio group
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
FR2661000B1 (fr) 1990-04-12 1992-08-07 Aerospatiale Machine d'essais d'eprouvettes en cisaillement.
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5773001A (en) 1994-06-03 1998-06-30 American Cyanamid Company Conjugates of methyltrithio antitumor agents and intermediates for their synthesis
US5561427A (en) 1994-12-30 1996-10-01 Psc Inc. Analog to digital converter with continuous conversion cycles and large input signal range
FR2873699B1 (fr) * 2004-07-29 2009-08-21 Pierre Fabre Medicament Sa Nouveaux anticorps anti igf ir rt leurs utilisations
NZ553500A (en) 2004-09-23 2009-11-27 Genentech Inc Genentech Inc Cysteine engineered antibodies and conjugates withCysteine engineered antibodies and conjugates with a free cysteine amino acid in the heavy chain a free cysteine amino acid in the heavy chain
FR2888850B1 (fr) * 2005-07-22 2013-01-11 Pf Medicament Nouveaux anticorps anti-igf-ir et leurs applications
AU2007245164A1 (en) * 2006-03-28 2007-11-08 Biogen Idec Ma Inc. Anti-IGF-IR antibodies and uses thereof
TW200833711A (en) * 2006-12-22 2008-08-16 Genentech Inc Antibodies to insulin-like growth factor receptor
WO2008141044A2 (en) 2007-05-08 2008-11-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-muc16 antibodies and antibody drug conjugates
US8937161B2 (en) 2007-10-19 2015-01-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered anti-TENB2 antibodies and antibody drug conjugates
AR080793A1 (es) * 2010-03-26 2012-05-09 Roche Glycart Ag Anticuerpos biespecificos
JP5972864B2 (ja) 2010-04-15 2016-08-17 メディミューン リミテッド ピロロベンゾジアゼピン及びそれらのコンジュゲート
WO2012145507A2 (en) * 2011-04-19 2012-10-26 Merrimack Pharmaceuticals, Inc. Monospecific and bispecific anti-igf-1r and anti-erbb3 antibodies

Also Published As

Publication number Publication date
EP3134438B1 (en) 2020-09-30
IL274226A (en) 2020-06-30
EP3783033A1 (en) 2021-02-24
MX2016014000A (es) 2017-05-30
JP2017513898A (ja) 2017-06-01
PT3134438T (pt) 2020-12-31
PL3134438T3 (pl) 2021-04-06
WO2015162292A1 (en) 2015-10-29
LT3134438T (lt) 2021-01-11
RS61379B1 (sr) 2021-02-26
CN106459204A (zh) 2017-02-22
CA2946795A1 (en) 2015-10-29
TN2016000445A1 (en) 2018-04-04
HUE052223T2 (hu) 2021-04-28
AU2015250760B2 (en) 2020-10-22
RU2016145277A (ru) 2018-05-28
MA53069B1 (fr) 2022-04-29
JP2021073279A (ja) 2021-05-13
JP6835591B2 (ja) 2021-02-24
MY182444A (en) 2021-01-25
ZA201607095B (en) 2020-07-29
SI3134438T1 (sl) 2021-04-30
ES2841249T3 (es) 2021-07-07
BR112016024575B1 (pt) 2024-02-27
MX2021002144A (es) 2021-03-09
KR102357032B1 (ko) 2022-02-08
JP7191134B2 (ja) 2022-12-16
UA122390C2 (uk) 2020-11-10
MA39378A1 (fr) 2018-05-31
KR20220018620A (ko) 2022-02-15
US11365259B2 (en) 2022-06-21
RU2016145277A3 (ar) 2018-12-13
HRP20202047T1 (hr) 2021-02-19
EP3134438A1 (en) 2017-03-01
IL248357B (en) 2020-05-31
AU2015250760A1 (en) 2016-11-03
CN112851808A (zh) 2021-05-28
US10202458B2 (en) 2019-02-12
KR20160145110A (ko) 2016-12-19
US20190330353A1 (en) 2019-10-31
MA53069A1 (fr) 2021-10-29
KR20200128210A (ko) 2020-11-11
NZ725423A (en) 2023-07-28
AU2015250760C1 (en) 2023-11-16
DK3134438T3 (da) 2020-12-07
KR102177436B1 (ko) 2020-11-12
IL248357A0 (en) 2016-11-30
CA2946795C (en) 2021-03-30
RU2698977C2 (ru) 2019-09-02
MA39378B2 (fr) 2021-02-26
CN106459204B (zh) 2021-02-02
BR112016024575A2 (pt) 2017-10-10
CY1123743T1 (el) 2022-03-24
US20170267766A1 (en) 2017-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA516380131B1 (ar) جسم مضاد igf-1r واستخدامه كناقل علاجي لعلاج السرطان
AU2017219091B2 (en) Antigen binding protein and its use as addressing product for the treatment of cancer
SA519401371B1 (ar) أجسام مضادة لألفا بروتين منظم للإشارة وطرق لاستخدامها
TWI609887B (zh) 新穎的抗原結合蛋白及其作爲治療癌症之定址產物的用途
SA517390370B1 (ar) عوامل ربط للمستقبلات المناعية من نوعية واستخداماتها (tigit)
CN102812047B (zh) 抗C4.4a抗体及其用途
SA516380120B1 (ar) مترافق من جسم مضاد- عقار يرتبط بـ igf-1r واستخدامه لعلاج السرطان
US20230027475A1 (en) Anti-oncolytic virus antigen antibodies and methods of using same
CN107530443A (zh) 工程化的位点特异性抗体和使用方法
KR20200143634A (ko) 탈면역된 시가 독소 a 서브유닛 스캐폴드를 포함하는 her2-표적화 분자
CN102573902A (zh) 用于基于亚单位的痘病毒疫苗的包含痘病毒衍生肽和针对抗原呈递细胞的抗体的免疫偶联物
CN106687476A (zh) 抗brdu抗体及使用方法
AU2016202118B2 (en) Carrier immunoglobulins and uses thereof
OA18172A (en) IGF-1R antibody and its use as addressing vehicle for the treatment of cancer
NZ624989B2 (en) Antigen binding protein and its use as addressing product for the treatment cancer