RU95120587A

RU95120587A - Способ очистки поверхностного антигена вируса гепатита в, включающего преs2 пептид, и антивирусная вакцина гепатита в

Info

Publication number: RU95120587A
Application number: RU95120587/13A
Authority: RU
Inventors: Парк Сун-Джае; Ли Янг-Ми; Юн Киунг-Хи; Лим Кук-Джин; Квон Янг-Сан
Original assignee: Эл Джи Кемикал Лтд.
Priority date: 1994-12-10
Filing date: 1995-12-08
Publication date: 1998-02-27

Claims

1. Способ очистки поверхностного антигена вируса гепатита В, включающего пре S2 пептид, из рекомбинантных клеток организма, отличающийся тем, что стадию разрушения клеток пpоводят с использованием буфера, содержащего хаотропную соль для получения клеточного гомогената.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что хаотропная соль выбирается из группы, состоящей из тиоцианата натрия, тиоцианата калия, тиоцианата аммония, гуанидий хлорида и мочевины.

3. Способ по п.1, отличающийся тем, что концентрация хаотропной соли в буфере лежит в пределах 1 - 8 М.

4. Способ по п.1, который далее включает стадии: (а) добавления ПАВ к клеточному гомогенату для экстракции поверхностного антигена из клеточной мембраны клеток; (б) повышения растворимости и ускорения образования частиц поверхностного антигена в экстракте, полученном на стадии (а) с помощью подщелачивания экстракта; (в) осаждения и удаления остатков клеток, липидов и примесей белков из экстракта, образованного в стадии (б), окислением и затем центрифугированием экстракта для получения раствора, содержащего поверхностный антиген; (г) контактирования раствора, полученного в стадии (в), с ангидридом кремния с целью адсорбировать поверхностный антиген на ангидриде кремния, вымывания примесей белков и десорбции поверхностного антигена из ангидрида кремния с использованием буфера для получения фракции очищенного поверхностного антигена; (д) проведения гидрофобного колоночного хроматографирования фракции очищенного поверхностного антигена, полученного в стадии (г), с получением фракций, содержащих поверхностный антиген; (е) очистки фракций, полученных в стадии (д), гельфильтрационной хроматографией методом молекулярных сил для получения поверхностного антигена в чистом виде.

5. Способ по п.4, который далее включает стадии: добавления соли к клеточному экстракту, полученному в стадии (а) или (б); удаления остатков клеток и примесей и проведения диафильтрации надосадочной жидкости до стадии (в).

6. Способ по п.4, отличающийся тем, что используемым в стадии (а) ПАВ являются Твин 20, Твин 80, Тритон Х-100 или деоксихолат натрия.

7. Способ по п.4, отличающийся тем, что концентрация ПАВ, используемого в стадии (а), колеблется от 0,1 до 0,5% (вес/об.) от объема клеточного гомогената.

8. Способ по п.4, отличающийся тем, что рН клеточного экстракта, полученного в стадии (а), доводится до 11,0 - 13,5 в стадии (б).

9. Способ по п.4, отличающийся тем, что в стадии (в) рН клеточного экстракта доводится до 4,5 - 6,0.

10. Способ по п.4, отличающийся тем, что ангидрид кремния, используемый в стадии (г), имеет площадь поверхности в пределах 100 - 500 м²/г.

11. Способ по п.4, отличающийся тем, что поверхностный антиген десорбируется из ангидрида кремния в стадии (г) с использованием буфера, рН которого составляет 8,8 - 11,0, содержащего мочевину с концентрацией 1 - 8 М и ПАВ с концентрацией 0,1 - 0,3 вес.%.

12. Способ по п.11, отличающийся тем, что ПАВ представляет собой деоксихолат натрия.

13. Способ по п.4, отличающийся тем, что гидрофобной смолой в стадии (д) является агарозный гель, имеющий фениловые группы.

14. Способ по п.4, отличающийся тем, что гидрофобная колоночная хроматография в стадии (д) проводится пропусканием фракции, содержащей поверхностный антиген, через колонку, уравновешенную буфером, рН которого 8,8 - 11,0 и который содержит мочевину в концентрации 1 - 4 М, промыванием колонки уравновешивающим буфером, содержащим 10 - 40 вес.% этиленгликоля и элюированием поверхностного антигена уравновешивающим буфером, содержащим 60 - 80 вес.% этиленгликоля.

15. Способ по п.4, отличающийся тем, что хроматография методом молекулярных сит в стадии (е) проводится с использованием декстранового геля или полиакриламидного геля с пределом эксклюзии по меньшей мере 1000000.

16. Способ по п.4, отличающийся тем, что хроматография методом молекулярных сит в стадии (е) проводится пропусканием фракции, содержащей поверхностный антиген, через колонку, уравновешенную Трис или фосфатным буфером с рН 6 - 8, содержащим хлорид натрия в концентрации 0,1 - 0,2 М, и элюированием поверхностного антигена тем же самым буфером.

17. Антивирусная вакцина гепатита В, содержащая поверхностный антиген, очищенный в соответствии со способом пункта 1.