RU2765738C2 - Способ получения композиции иммуноглобулинов - Google Patents
Способ получения композиции иммуноглобулинов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2765738C2 RU2765738C2 RU2016140455A RU2016140455A RU2765738C2 RU 2765738 C2 RU2765738 C2 RU 2765738C2 RU 2016140455 A RU2016140455 A RU 2016140455A RU 2016140455 A RU2016140455 A RU 2016140455A RU 2765738 C2 RU2765738 C2 RU 2765738C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- igm
- antibody preparation
- treatment
- immunoglobulins
- activity
- Prior art date
Links
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 title claims abstract description 76
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 title claims abstract description 76
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 46
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims abstract description 34
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 30
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 27
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 claims abstract description 23
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 17
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 claims abstract description 13
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 107
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 65
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 claims description 37
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 18
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 12
- 230000002391 anti-complement effect Effects 0.000 claims description 9
- 108010008730 anticomplement Proteins 0.000 claims description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 6
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 5
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims description 4
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 claims description 4
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 claims description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims description 3
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims 1
- 230000003171 anti-complementary effect Effects 0.000 abstract description 15
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 abstract description 10
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 abstract description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 abstract description 2
- 229940125644 antibody drug Drugs 0.000 abstract 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 94
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 46
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 43
- 239000000047 product Substances 0.000 description 22
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 20
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 19
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 15
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 14
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 10
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 10
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 9
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 9
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 9
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 8
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 8
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 8
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 8
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 8
- 238000011993 High Performance Size Exclusion Chromatography Methods 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 7
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 7
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 229910000394 calcium triphosphate Inorganic materials 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 6
- 239000007982 barbital buffer Substances 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 5
- RFWLACFDYFIVMC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;[oxido(phosphonatooxy)phosphoryl] phosphate Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O RFWLACFDYFIVMC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 5
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 5
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 4
- 108010071241 Factor XIIa Proteins 0.000 description 4
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 4
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 4
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 4
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000007385 chemical modification Methods 0.000 description 4
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 4
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 4
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 4
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 4
- 238000003805 vibration mixing Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 241000710780 Bovine viral diarrhea virus 1 Species 0.000 description 3
- 241000710803 Equine arteritis virus Species 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 description 3
- 241000702263 Reovirus sp. Species 0.000 description 3
- 241000710960 Sindbis virus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 3
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 3
- 230000001032 anti-candidal effect Effects 0.000 description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000011118 depth filtration Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 3
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000000543 intermediate Substances 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000001728 nano-filtration Methods 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 3
- 241000606161 Chlamydia Species 0.000 description 2
- 241000194032 Enterococcus faecalis Species 0.000 description 2
- 108010006464 Hemolysin Proteins Proteins 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003916 acid precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 230000004872 arterial blood pressure Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 229940032049 enterococcus faecalis Drugs 0.000 description 2
- 210000002196 fr. b Anatomy 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 description 2
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- XHTORJWGZKCDGL-GRGSLBFTSA-N (2s)-1-[(2r,3r)-2-amino-3-methylpentanoyl]-n-[(2s)-5-(diaminomethylideneamino)-1-(4-nitroanilino)-1-oxopentan-2-yl]pyrrolidine-2-carboxamide Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 XHTORJWGZKCDGL-GRGSLBFTSA-N 0.000 description 1
- FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 10,10-dioxo-2-[4-(N-phenylanilino)phenyl]thioxanthen-9-one Chemical compound O=C1c2ccccc2S(=O)(=O)c2ccc(cc12)-c1ccc(cc1)N(c1ccccc1)c1ccccc1 FGRBYDKOBBBPOI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108010075016 Ceruloplasmin Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 101001065501 Escherichia phage MS2 Lysis protein Proteins 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 241000710831 Flavivirus Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 description 1
- 241000709721 Hepatovirus A Species 0.000 description 1
- 241000702617 Human parvovirus B19 Species 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000036772 blood pressure Effects 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000005352 clarification Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 201000002491 encephalomyelitis Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 230000009144 enzymatic modification Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 231100000776 exotoxin Toxicity 0.000 description 1
- 239000002095 exotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000013213 extrapolation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 description 1
- 108010075079 isoleucyl-prolyl-arginine-4-nitroanilide Proteins 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000010494 opalescence Effects 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940127557 pharmaceutical product Drugs 0.000 description 1
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 230000036470 plasma concentration Effects 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M sodium;5,5-diethylpyrimidin-3-ide-2,4,6-trione Chemical compound [Na+].CCC1(CC)C([O-])=NC(=O)NC1=O RGHFKWPGWBFQLN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 1
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 1
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/06—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations
- A61K49/08—Nuclear magnetic resonance [NMR] contrast preparations; Magnetic resonance imaging [MRI] contrast preparations characterised by the carrier
- A61K49/10—Organic compounds
- A61K49/14—Peptides, e.g. proteins
- A61K49/16—Antibodies; Immunoglobulins; Fragments thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/08—Solutions
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/06—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies from serum
- C07K16/065—Purification, fragmentation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/121—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Helicobacter (Campylobacter) (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/1228—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K16/1232—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia from Escherichia (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1203—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria
- C07K16/125—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-negative bacteria from Chlamydiales (O)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
- C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
- C07K16/1275—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Streptococcus (G)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/14—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from fungi, algea or lichens
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
- A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
- C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
- C07K1/30—Extraction; Separation; Purification by precipitation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Radiology & Medical Imaging (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к иммунологии, в частности к препарату антител из плазмы человека и его применению при лечении иммунологического нарушения. Препарат антитела является пригодным для внутривенного введения человеку и содержит от 15% до 30% от всех иммуноглобулинов IgM, от 45% до 70% от всех иммуноглобулинов IgG и от 15% до 30% от всех иммуноглобулинов IgA. Препарат обладает вирусной безопасностью по отношению к оболочечным и безоболочечным вирусам, имеет антикомплементарную активность ≤1 CH50/мг белка и является стабильным в жидкой форме в течение по меньшей мере 2 лет при хранении при 2-8°C, при этом препарат антитела не обрабатывают во время процесса его получения β-пропиолактоном. Опосредованная IgM и IgA активность в предложенном препарате по меньшей мере в 1,5 раза выше по сравнению с активностью IgM и IgA в препарате, полученном с применением обработки β-пропиолактоном. 4 н. и 10 з.п. ф-лы, 10 табл., 9 пр., 1 ил.
Description
Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способу получения композиции иммуноглобулинов с вирусной безопасностью, и к препаратам антител и фармацевтическим композициям, которые можно получать с применением этого способа.
Предпосылки создания изобретения
Композиции иммуноглобулинов, полученные из плазмы человека и пригодные для внутривенного введения, известны в данной области и в течение нескольких десятилетий играют важную роль в лечении широкого ряда заболеваний. Иммуноглобулины применяют, например, для лечения инфекций у человека, и их можно отнести к различным классам с различными биохимическими и физиологическими свойствами. Иммуноглобулин G участвует в защите против вирусных антигенов, в то время как IgM является преимущественно активным в иммунных ответах против бактерий и токсинов.
Растворы иммуноглобулинов содержат IgG, IgA и IgM в разных процентных соотношениях, где различные препараты имеют различные применения в лечении, например, препараты с более высоким процентным содержанием IgM применяют для профилактики или лечения бактериальных инфекций. В отличие от препаратов IgG антитела IgM легко агрегируют в растворе. Препараты IgM сложно стабилизировать, особенно если их обогащают в сравнении с концентрациями в плазме и сохраняют в жидком растворе.
Растворы иммуноглобулинов обычно получают из фракций плазмы или сыворотки крови, например, фракций Коэна. Затем эти фракции подвергают ряду стадий очистки для удаления загрязнений, таких как вирусы, денатурированные белки, протеазы и липиды. Плазму человека для фракционирования собирают от тысяч доноров, и она может содержать патогенные вирусы, несмотря на тестирование источника плазмы. Таким образом, стадии способа инактивации или удаления вирусов являются необходимыми для получения безопасных продуктов для применения в медицине. В данной области известно несколько способов инактивации/удаления вирусов, например, химическая обработка, облучение УФС-светом или фильтрация через нанометровые фильтры, которые осуществляют для обеспечения полной вирусной безопасности. Однако такие стадии могут оказывать негативное влияние на активность иммуноглобулинов; например, увеличенные периоды времени облучения УФС могут снижать выход нативного и активного IgM, полученного в конечном растворе иммуноглобулина.
Способность стадий способа удалять или инактивировать вирус подтверждают с применением моделей способа получения в лабораторном масштабе, и для каждой стадии определяют степень удаления или инактивации. Увеличение степени инактивации/удаления добавляет фармацевтическому продукту дополнительную вирусную безопасность. Современные руководства регулирующих органов требуют, по меньшей мере, двух эффективных стадий для оболочечных и безоболочечных вирусов в производстве происходящих из плазмы лекарственных средств.
В дополнение к вирусам, которые потенциально присутствуют, является также необходимым удаление других загрязнений, подобно липидам, протеазам, агрегатам белка и денатурированным иммуноглобулинам, для поучения продукта с хорошей переносимостью. Денатурированные иммуноглобулины особенно представляют потенциальный риск для пациентов, поскольку они обладают высокой способностью неспецифически активировать комплемент, приводя к тяжелым побочным эффектам у пациентов, которым вводят эти денатурированные иммуноглобулины. Эту антикомплементарную активность (ACA) измеряют посредством стандартизированного теста, описанного в Европейской фармакопее.
Удаление всех этих загрязнений является необходимым для того, (1) чтобы продукт являлся переносимым пациентом после внутривенного введения, (2) чтобы обеспечить соответствие продукта инструкциям по биологической безопасности, относящимся к загрязнению вирусами, (3) чтобы дать возможность продукту оставаться стабильным во время долгосрочного хранения и (4) чтобы получить желаемую смесь соединений/фармацевтическую композицию.
Начальную очистку растворов IgM человека проводят классическими способами фракционирования плазмы Коэна или их хорошо известными модификациями (например, Коэна/Онкли, Кистлера/Нитшманна). С применением способа осаждения холодным этанолом фракцию IgM выделяют во фракции III или фракции I/III (также называемые B или B+I). Описаны способы очистки растворов белка, обогащенных IgM, начиная с фракции III или I/III. В EP0013901 описан способ очистки, начиная с фракции III, включающий стадии с применением обработки октановой кислотой, β-пропиолактоном и стадию адсорбции с применением анионообменной смолы. Этот способ применяют для получения Pentaglobin® (пентаглобин®) - до настоящего времени единственного коммерчески доступного внутривенного продукта IgM. В EP0352500 описано получение концентрата IgM для внутривенного введения с уменьшенной антикомплементарной активностью при использовании анионообменной хроматографии, β-пропиолактона, облучения УФС-светом и стадии инкубации при повышенной температуре (40°C-60°C). Поскольку β-пропиолактон является очень реакционноспособным веществом, вызывающим химическую модификацию белков, существует также значительная потеря противовирусной и антибактериальной активности иммуноглобулинов. Препарат, полученный таким способом, являлся стабильным в жидком растворе в течение ограниченного времени из-за химической модификации. Концентрация IgM составляла более 50% общего содержания иммуноглобулинов.
Получение растворов белка, обогащенных IgM без химической модификации β-пропиолактоном, описано в EP0413187 (Biotest) и EP0413188 (Biotest). Эти способы включают подвергание подходящего раствора белка обработке октановой кислотой и анионообменной хроматографии, начиная с фракции Коэна III или II/III. В патенте EP0413187 (Biotest) обработку октановой кислотой проводят путем перемешивания в течение 15 мин для удаления липидов, присутствующих во фракции Коэна III.
Поскольку большие количества иммуноглобулинов внутривенно вводят пациентам, необходимо получение переносимого фармацевтического препарата. Препараты IgM описаны как трудно получаемые для внутривенного введения. IgM по природе является сильным активатором комплемента после связывания антигенов. Таким образом, неспецифическая антикомплементарная активность денатурированных молекул IgM является намного более опасной для пациентов, чем у денатурированных молекул IgG. Препарат по EP0413187 обладал низкой антикомплементарной активностью, от 0,6 до 0,8 CH50/мг белка, но нуждался в стабилизации и инактивации вируса β-пропиолактоном. Считается, что низкая антикомплементарная активность составляет ≤1 CH50/мг белка согласно монографии EP для иммуноглобулинов.
В EP0413188B1 (Biotest) описано получение обогащенного IgM препарата для внутривенного введения при использовании анионообменной хроматографии для снижения антикомплементарной активности. Кроме того, описана термическая обработка при pH 4-4,5 при 40-60°C, предпочтительно, от 50 до 54°C, для снижения антикомплементарной активности. Этот препарат необходимо было лиофилизировать для обеспечения стабильности препарата в течение нескольких месяцев. Не смогли показать долгосрочной стабильности в форме жидкого раствора.
По другому способу описано применение мягкой термической обработки препаратов IgM при 40-62°C, предпочтительно, 45-55°C, при pH 4,0-5,0 (EP 0450412, Miles) для уменьшения неспецифической активации комплемента. В этой патентной заявке октановую кислоту добавляют к суспензии фракции Коэна III для удаления активатора прекалликреина и липопротеинов центрифугированием. Тем не менее, эта мягкая термическая обработка приводит к частичной потере антигенных детерминант IgM. Это может увеличивать риск образования неоантигенов, приводя к увеличенной иммуногенности для человека или потере активности.
Получение содержащего IgM раствора белка для внутривенного введения с использованием обработки протеазой (например, пепсином) после стадии осаждения октановой кислотой описано в EP0835880 (US 6136312, ZLB). Обработка протеазой приводит к частичной фрагментации молекулы иммуноглобулина, уменьшающей полную функциональную активность частей Fab и Fc. Таким образом, обработанные протеазой иммуноглобулины нельзя рассматривать как немодифицированные. Этот способ получения приводит также приблизительно к 5% фрагментов с молекулярной массой <100 кДа.
Описанные способы проведения обработки октановой кислотой (EP0413187 и EP0835880) обладают таким недостатком, при котором обработка октановой кислотой не является эффективной в отношении удаления и инактивации безоболочечных вирусов, и по существу не удаляет всю протеолитическую активность.
В EP 0345543 (Bayer, Miles) описан высококонцентрированный препарат IgM, по меньшей мере, с 33% IgM для терапевтического применения, где препарат является по существу свободным от титров изоагглютинина. В этой патентной заявке осаждение октановой кислотой проводят путем добавления октановой кислоты, и изоагглютинины удаляют аффинной хроматографией на Synsorb. Конечный препарат необходимо лиофилизировать.
В целом, получение содержащего IgM препарата с низкой антикомплементарной активностью является возможным, если иммуноглобулины химически или ферментативно модифицируют и/или дополнительно очищают хроматографией и/или подвергают мягкой термической обработке.
Тем не менее, способами предшествующего уровня техники, приводящими к препарату немодифицированного иммуноглобулина, невозможно достигать возможности инактивации вирусов для всех потенциально присутствующих вирусов. Хотя несколько способов, таких как обработка растворителем/детергентом, обработка октановой кислотой, фильтрация через нанометровые фильтры и термическая обработка, являются эффективными для инактивации или удаления оболочечных вирусов, существует только немного способов для инактивации или удаления безоболочечных вирусов, например, парвовирусов. Эти безоболочечные вирусы по большей части являются чрезвычайно малыми, обычно проходя через нанометровые фильтры с размерами пор более 20 нм. Этот размер пор является слишком малым для молекул IgM, имеющих диаметр вплоть до 30 нм. Безоболочечные вирусы эффективно инактивируют химическими веществами, подобными β-пропиолактону, которые, однако, также приводят к модифицированному иммуноглобулину с нарушенными функциями. Другой эффективной обработкой является облучение УФС (EP 1842561, CAF-DCF). Однако известные обработки растворителем/детергентом, обработка октановой кислотой и слабая термическая обработка не оказывают существенного эффекта на безоболочечные вирусы.
Таким образом, все препараты, содержащие химически немодифицированные IgM, которые получены способами предшествующего уровня техники, и которые обладают низкой антикомплементарной активностью, не являются безопасными для применения человеку по отношению к безоболочечным вирусам, например, парвовирусам.
Таким образом, способы предшествующего уровня техники, которыми выделяют содержащие IgM препараты с переносимостью при внутривенном введении, обладают определенными недостатками, такими как неспособность эффективно инактивировать или удалять безоболочечные вирусы, и ограниченная способность удалять протеолитическую активность при сохранении в то же время IgM в растворе с высоким выходом. (Протеолитическая активность относится к сумме протеаз, присутствующих в препарате). Поскольку жидкий препарат белка должен поддаваться хранению в течение длительных периодов времени (например, 2 года), остаточную активность протеаз необходимо исключать, поскольку эта активность может приводить к деградации фармацевтического препарата.
Таким образом, цель настоящего изобретения направлена на эти недостатки.
Краткое описание сущности изобретения
В первом аспекте настоящее изобретение относится к способу получения композиции иммуноглобулинов IgM из фракции плазмы, содержащей иммуноглобулины, включающему:
(a) обеспечение фракции плазмы в виде раствора, содержащего иммуноглобулины;
(b) смешивание C7-C9 карбоновой кислоты с раствором и обработку смешанного раствора вибросмесителем для осаждения загрязняющих белков; и
(c) отделение осажденных белков от раствора для получения содержащей IgM композиции иммуноглобулинов.
Авторы настоящего изобретения неожиданно обнаружили, что применение вибросмесителя на стадии, когда раствор иммуноглобулина смешивают с карбоновой кислотой, обладает необычайными преимуществами. Эта стадия способа обеспечивает более эффективное удаление нежелательных белков (включая протеазы) и образует промежуточный продукт, лучше подходящий для стадий дальнейшей переработки, используемых для получения иммуноглобулинового лекарственного средства; промежуточный продукт дает возможность стадиям дальнейшей переработки быть более эффективными. В частности, содержащую иммуноглобулин IgM композицию, полученную на стадии (c), можно комбинировать с дополнительными стадиями обработки, такими как обработка в слабокислых условиях и обработка облучением УФС, для получения содержащего IgM иммуноглобулинового продукта или препарата антитела, который является пригодным для внутривенного введения и который обладает следующими преимущественными свойствами: (i) является химически немодифицированным; (ii) обладает вирусной безопасностью, (iii) обладает низкой протеолитической активностью (и таким образом является стабильным в ходе долгосрочного хранения); (iv) обладает низкой антикомплементарной активностью; и (v) сохраняет высокий уровень нативного и активного IgM. Уровень вирусной безопасности, достигаемый способами, описанными в данном описании, ранее не мог быть получен. Кроме того, с применением способа по настоящему изобретению получают содержащий IgM иммуноглобулиновый продукт или препарат антитела с комбинацией этих свойств, которая ранее не могла быть получена.
В частности, стадии способа по настоящему изобретению приводят к более высокой инактивации и удалению вирусных частиц, особенно очень устойчивых, безоболочечных вирусов, таких как парвовирусы, которые обычно являются не очень чувствительными к обработке октановой кислотой. Более того, достигают улучшенного удаления протеолитической активности по сравнению с общепринятым перемешиванием. Этих свойств достигают, сохраняя в то же время высокий уровень IgM, который является химически немодифицированным. Эти открытия противоречат общепринятой точке зрения, что обработка октановой кислотой не является эффективной стадией против безоболочечных вирусов, и улучшенной вирусной безопасности необходимо достигать посредством инактивации вируса более жесткими способами, такими как обработка β-пропиолактоном. Также было хорошо известно, что, например, повышение концентрации октановой кислоты для полного удаления протеолитической активности приводит к массовой потере IgM.
Результатов по настоящему изобретению достигают путем использования смешивающих устройств с применением режима вибрации в сочетании с обработкой октановой кислотой. Это является особенно неожиданным, поскольку известно, что IgM является очень чувствительным к напряжению сдвига, которое может приводить к нежелательной высокой антикомплементарной активности. Соответственно, невозможно было предусмотреть использования вибросмесителя для получения композиции IgM и невозможно было ожидать настолько благоприятного вклада применения вибросмешивания в ходе получения содержащего IgM раствора.
Более того, способом по настоящему изобретению, разделение, осуществляемое на стадии (c), такой как осветление фильтрацией обработанного октановой кислотой раствора, полученного на стадии (b), улучшается при использовании вибросмесителя. Разделения достигают более просто, с уменьшением времени обработки и производственной себестоимости, и стадия (c) приводит к прозрачному раствору, что создает преимущества для дальнейшей переработки. Общепринятые растворы, получаемые фильтрацией продуктов обработанных октановой кислотой содержащих IgM растворов, подвергнутых перемешиванию, являются опалесцирующими или мутными.
Содержащую IgM композицию, полученную на стадии (c), предпочтительно подвергают обработке в слабокислых условиях (например, pH 4) и стадии облучения УФС для дополнительного улучшения вирусной безопасности и стабилизации конечного продукта. Благодаря улучшенному осветлению содержащей IgM композиции иммуноглобулинов, полученной на стадии (c), становится возможным уменьшить необходимое время облучения УФС для достижения вирусной инактивации безоболочечных вирусов более 3 или 4 log10. Это приводит к более высокому выходу нативного и активного IgM в ходе обработки УФС.
Неожиданно, эти стадии приводят к содержащему химически и ферментативно немодифицированный IgM раствору, обладающему более высокими выходами нативного и активного IgM, обладающему низкой антикомплементарной активностью и низкой протеолитической активностью, и обладающему высокой антибактериальной и противовирусной активностью, выдающейся вирусной безопасностью по отношению к оболочечным и безоболочечным вирусам; ключевой характеристикой для лекарственных средств, предназначенных для внутривенного введения. Более того, обработанный содержащий IgM раствор обладает улучшенной долгосрочной стабильностью, являясь очень стабильным в жидком растворе в течение более 12 месяцев при 2-8°C.
Соответственно, в следующем аспекте настоящее изобретение относится к препарату антитела, получаемому с применением способа по настоящему изобретению, указанного выше, и к препарату антитела, содержащему IgM и обладающему протеолитической активностью менее 8 Ед./л. В частности, препарат антитела является пригодным для внутривенного введения человеку и содержит IgG, IgA и IgM, где, по меньшей мере, 5% от общего количества иммуноглобулинов составляют IgM.
Кроме того, настоящее изобретение относится к препарату антитела по настоящему изобретению для применения в медицине. В одном варианте осуществления препарат антитела предназначен для применения в лечении иммунологических нарушений и бактериальных инфекций.
Следующий аспект настоящего изобретения относится к способу лечения, включающему введение препарата антитела по настоящему изобретению пациенту.
Настоящее изобретение в настоящее время описано более подробно только посредством примера, со ссылкой на сопутствующие фигуры.
На фиг.1 предоставлен обзор варианта осуществления настоящего изобретения, в котором показаны стадии, которые можно применять для получения препарата антитела, пригодного для внутривенного введения. На стадии обработки октановой кислотой с использованием устройства вибросмесителя большое значение придается обработке pH4 и обработке УФС. Исходный материал получают общепринятым способом осаждения плазмы человека холодным этанолом.
Подробное описание изобретения
Как описано выше, настоящее изобретение относится к способу получения содержащей IgM композиции иммуноглобулинов из фракции плазмы, содержащей иммуноглобулины. Фракции плазмы, пригодные для получения фармацевтических композиций иммуноглобулинов, и способы их получения хорошо известны в данной области. В частности, когда фармацевтические композиции иммуноглобулинов предназначены для введения человеку, фракцию плазмы получают из плазмы человека. Фракция плазмы предпочтительно представляет собой осажденную фракцию плазмы и наиболее предпочтительно, осажденную фракцию плазмы, полученную способом фракционирования по Коэну или с помощью его хорошо известных модификаций (например, Кистлера-Нитшманна). Наиболее предпочтительно, фракция представляет собой фракцию I/III или фракцию III (известные также как фракция B+I или фракция B) после фракционирования холодным этанолом. Предпочтительным является, чтобы иммуноглобулины фракции плазмы содержали, по меньшей мере, 5% IgM.
Стадия (a) включает предоставление фракции плазмы в виде раствора, содержащего иммуноглобулины. Во многих случаях фракция плазмы, содержащая иммуноглобулины, находится в твердой или полутвердой форме. Таким образом, задачей этой стадии является обеспечение перехода или перевод белка из фракции плазмы в раствор, так чтобы он находился в состоянии, подходящем для смешивания с карбоновой кислотой на стадии (b). Эта стадия может включать смешивание фракции плазмы с подходящим буфером. Предпочтительно, буфер имеет низкую молярность (т.е. менее 1M) и имеет pH от 4,5 до 5,5, например, 0,1M буфер ацетата натрия pH 5,05±0,1. Смешивание можно выполнять с использованием лопастной мешалки или вибросмесителя.
На стадии (b) раствор, образованный на стадии (a), смешивают с использованием вибросмесителя с C7-C9 карбоновой кислотой для осаждения загрязняющих белков (например, протеаз, вирусов и т.д.). Карбоновая кислота может быть разветвленной и/или может включать заместители, которые по существу не изменяют эффект стадии (b). Карбоновая кислота предпочтительно представляет собой октановую кислоту. Кислоту предпочтительно добавляют в концентрации, по меньшей мере, 0,075 кг/кг фракции плазмы, вплоть до концентрации 0,2 кг/кг. Более предпочтительно, кислоту добавляют при 0,8-0,15 кг/кг фракции плазмы, и наиболее предпочтительно, от 0,09 кг/кг до 0,13 кг/кг. Кислоту любой подходящей молярности можно применять для обеспечения правильной концентрации.
Можно использовать любой тип коммерчески доступного вибросмесителя, пригодного для применения в химической/фармацевтической промышленности. Примеры пригодных вибросмесителей доступны от Graber+Pfenninger GmbH. В частности, вибросмеситель «Labormodell Typ 1» можно использовать для экспериментов в лабораторном масштабе, и «Industriemixer Typ 4» можно использовать для препаратов в промышленном масштабе. Вибросмесители можно использовать согласно инструкциям производителя, и в частности, при установках, описанных производителями как подходящие для перемешивания растворов, содержащих белки. Например, вибросмесители обычно можно эксплуатировать при менее 100 Гц с амплитудой менее 10 мм, например, авторы настоящего изобретения проводили вибросмешивание в лабораторном масштабе с использованием «Labormodell Typ 1» при 50 Гц, с применением источника электропитания 230 В. Амплитуду вибрации процесса смешивания меняли от 0 до 3 мм, и для препарата IgM предпочтительно применяли 3 мм. Смесители с диаметром от 23 мм до 65 мм использовали для экспериментов в лабораторном масштабе. Для промышленного масштаба применяли диаметр смесителя 395 мм (диаметры отверстий 13,5 мм и 16 мм).
На стадии (b) pH смешанного раствора предпочтительно составляет 4,5-5,5, и более предпочтительно, от pH 4,8 до pH 5,3. Стадию можно проводить в буфере ацетата натрия, и, например, в буфере приблизительно 0,1M ацетата натрия. Температура, при которой проводят стадию (b), предпочтительно составляет от 10°C до 35°C, и более предпочтительно, 14-30°C.
Время смешивания с использованием вибросмесителя не является конкретно ограниченным, но оно предпочтительно составляет, по меньшей мере, 30 минут и не более 3 часов, и более предпочтительно, 40-110 минут. Периоды времени инкубации менее 30 минут могут снижать уровень инактивации вируса.
В одном варианте осуществления стадии (b) трифосфат кальция смешивают с раствором на стадии (b). Предпочтительно, его добавляют при 0,01-0,02 кг/кг фракции плазмы (как таковой в твердой или полутвердой форме). Трифосфат кальция можно добавлять одновременно, отдельно или последовательно с карбоновой кислотой. В предпочтительном варианте осуществления трифосфат кальция добавляют, по меньшей мере, через 20 минут после карбоновой кислоты.
На стадии (c) загрязняющие белки, осажденные на стадии (b), отделяют от раствора для получения содержащей IgM композиции иммуноглобулина (т.е. содержащего иммуноглобулин раствора). Эта стадия разделения не является конкретно ограниченной, но ее можно проводить любым пригодным способом, известным в данной области. Однако стадию разделения предпочтительно проводят с применением фильтрации, и более предпочтительно, ультрафильтрации, и результатом стадии (c), таким образом, является фильтрованный раствор.
Как описано выше, способ по настоящему изобретению является преимущественным в отношении производства, поскольку он, по-видимому, обеспечивает более эффективное осаждение загрязняющих белков, и, в результате, стадию (c) проще проводить. Когда разделяют смесь, полученную в результате стадии (b), достигают прозрачного очищенного раствора, т.е. содержащей IgM композиции иммуноглобулина. Фильтрация, таким образом, является более быстрой и простой.
Дополнительные стадии способа необходимы для перевода содержащей IgM композиции иммуноглобулина, полученной на стадии (c), в препарат антитела, пригодный для внутривенного введения.
Соответственно, в предпочтительном варианте осуществления способ по настоящему изобретению включает дополнительные стадии обработки содержащей IgM композиции иммуноглобулинов, полученной на стадии (c), в слабокислых условиях и, кроме того, подвергания обработанной кислотой композиции облучению УФС.
Для обработки в слабокислых условиях содержащую IgM композицию иммуноглобулинов, полученную на стадии (c), инкубируют от pH 3,5 до pH 4,5, и предпочтительно, от pH 3,8 до pH 4,2, для получения инкубированного раствора. Слабокислые условия можно создавать добавлением пригодной кислоты к содержащей IgM композиции иммуноглобулинов, например, pH можно доводить добавлением 0,2M HCl.
Стадию инкубации предпочтительно проводят от 32 до 42°C, и более предпочтительно, от 35 до 39°C. Время инкубации составляет предпочтительно, по меньшей мере, 2 часа и не более 24 часов, и более предпочтительно, по меньшей мере, 9 часов, но не более 16 часов.
На стадии облучения инкубированный раствор, полученный после обработки слабой кислотой, описанной выше, обрабатывают УФС-светом для получения облученного УФС раствора. Эту стадию можно проводить с использованием устройств, которые являются коммерчески доступными, таких как устройство UVivatec® (Bayer Technology Services). Предпочтительным является, чтобы инкубированный раствор обрабатывали при 254±10 нм от 200 до 500 Дж/м2, более конкретно, от 200 до 300 Дж/м2, для дополнительной инактивации вирусов и протеаз, которые потенциально присутствуют. Отмечено, что обработка УФС в мягких условиях, которая в норме является необходимой, возможна только для осветленного прозрачного фильтрата, который получают по настоящему изобретению после обработки октановой кислотой с вибросмешиванием. Более опалесцирующие или мутные растворы, в норме получаемые общепринятыми способами смешивания, могут нуждаться в более длительных периодах времени облучения, которые могут приводить к большей денатурации активного IgM и меньшим степеням инактивации вируса.
В дополнение к обработке слабой кислотой и облучению УФС, дополнительные стадии получения препарата иммуноглобулина для внутривенного введения могут также необязательно включать одну или более дополнительных стадий фильтрации. В одном варианте осуществления раствор белка можно адсорбировать на DEAE-Sephadex и затем отделить от Sephadex глубинной фильтрацией. Например, его можно дополнительно подвергать периодической адсорбции с помощью 75 мг на кг белка DEAE Sephadex при pH 5,8 для удаления нежелательного сопутствующего белка церулоплазмина.
В особенно предпочтительном варианте осуществления инкубированный раствор, полученный после обработки слабой кислотой, подвергают адсорбции на DEAE-Sephadex и затем отделяют от Sephadex глубинной фильтрацией, перед обработкой облучением УФС.
В другом варианте осуществления обрабатываемый раствор иммуноглобулина можно фильтровать через нанометровый фильтр. Фильтры с размером пор 75±5 нм-35±5 нм, или фильтры с номинальным размером пор 75-35 нм (например, Pall Ultipor DV50), можно использовать на различных стадиях в ходе процесса. (Номинальный размер пор, например, 50 нм, означает степень удержания ≥4 log10 для вируса размером 50 нм или более). В предпочтительном варианте осуществления раствор, полученный на стадии DEAE-Sephadex, описанной в вышестоящем разделе, фильтруют через фильтр 0,2 мкм перед облучением УФС. В дополнительном предпочтительном варианте осуществления раствор иммуноглобулина, полученный после облучения УФС, подвергают нанофильтрации, предпочтительно, через фильтр, имеющий размер пор 40-50 нм. Предпочтительно, эту стадию следует проводить в стерильных условиях.
Конечным препаратом антитела (т.е. обработанным содержащим IgM раствором иммуноглобулина), полученным способом, определенным выше, можно непосредственно заполнять контейнер в стерильных условиях. Альтернативно, препарат антитела можно составлять со стабилизирующим средством, таким как глицин. В частности, препарат можно составлять в глицинсодержащем буфере при pH от 4 до 5,5 и, предпочтительно, от 4,1 до 4,5. Препарат антитела можно также разводить до концентрации белка от 40 до 80 г/л и, предпочтительно, от 55 до 70 г/л.
Предпочтительно, способ по настоящему изобретению не включает стадию, состоящую из одной или более химических модификаций антител в препарате, ферментативной модификации антител или термической обработки антител (например, обработку антител при температуре 40°C или выше в течение 10 минут или более). Более конкретно, способ по настоящему изобретению не включает стадию контакта антител с β-пропиолактоном и/или пепcином.
Кроме того, настоящее изобретение относится к препарату иммуноглобулинов или препарату антитела, которые могут быть получены способом, описанным выше. Препарат иммуноглобулинов является поликлональным и может включать, по меньшей мере, 5% IgM, предпочтительно, по меньшей мере, 15% IgM и наиболее предпочтительно, по меньшей мере, 20% IgM. Другие иммуноглобулины представляют собой IgG и IgA. Предпочтительно, препарат иммуноглобулинов содержит от 5 до 30% IgM (наиболее предпочтительно, приблизительно от 15 до 30%), от 5 до 30% IgA (наиболее предпочтительно, от 15 до 30%) и от 40 до 70% IgG (наиболее предпочтительно, от 45 до 70%). В наиболее предпочтительном продукте содержание IgG составляет приблизительно 50%, и содержание каждого из IgM и IgA составляет приблизительно 25%. Значения обозначают процентное содержание, например, IgM от суммы IgG+IgA+IgM. Тем не менее, также возможно дополнительное обогащение IgM хорошо известными способами, подобно, например, анионообменной хроматографии. Значения могут быть определены нефелометрией или иммунопреципитацией согласно Ph. Eur. (current edition (2010) 2.9.17).
В частности, иммуноглобулины в препарате иммуноглобулинов не являются химически модифицированными. Препарат иммуноглобулинов не обрабатывают в ходе процесса его получения химическим веществом, таким как β-пропиолактон, для стерилизации продукта. Подобным образом, препарат не обрабатывают добавленной протеазой, такой как пепcин, для стерилизации продукта. Поэтому иммуноглобулины находятся в основном в нативной форме.
Препарат антитела обладает более низкой протеолитической активностью, чем препараты антител, описанные в предшествующем уровне техники. В частности, невозможно детектировать протеолитическую активность в препарате при его хранении в пределах 2-8°C. Протеолитическую активность можно измерять стандартизованными способами тестирования, известными в данной области, такими как способ с применением хромогенного субстрата, описанный ниже в примере 6. В таких способах протеолитическую активность оценивают смешиванием хромогенного субстрата (в частности, субстрата, чувствительного, по меньшей мере, к одной сериновой протеазе) и образца препарата антитела (обычно разведенного в буфере для соответствия линейному диапазону анализа) при 37°C и мониторингом кинетики поглощения с использованием спектрофотометра. Протеолитическую активность образца рассчитывают из начальной разницы поглощения (ΔAbs/мин) с применением уравнения C (Ед./л)=S×ΔAbs/мин×F(C=протеолитическая активность; S=коэффициент перевода, относящийся к специфическому изменению поглощения хромогенного субстрата; и F=коэффициент разведения). Применение субстрата осуществляют согласно инструкциям производителя.
Протеолитическую активность можно, в частности, оценивать посредством следующих стадий:
(a) 25 мг субстрата S-2288 (Chromogenix) растворяют в 7,2 мл воды для инъекций;
(b) образец препарата антитела разводят в буфере (100 мМ Трис.HCl pH 8,4, 106 мМ NaCl) для соответствия линейному диапазону анализа, и температуру доводят до 37°C;
(c) смешивают равные количества (например, 200 мкл) разведенного препарата антитела и растворенного субстрата;
(d) измеряют кинетику поглощения при 405 нм в течение 1-3 минут при 37°C с использованием спектрофотометра;
(e) протеолитическую активность образца рассчитывают из начальной разницы поглощения (ΔAbs/мин) с применением уравнения C (Ед./л)=313×ΔAbs/мин×F (C=протеолитическая активность, F=коэффициент разведения).
Предел количественного определения по данному способу составляет 8 Ед./л, и с применением образца препарата антитела по настоящему изобретению протеолитическая активность не поддается детекции. Поэтому уровень протеолитической активности в конечном продукте по настоящему изобретению составляет ниже 8 Ед./л.
Как и препараты, известные в данной области, препарат антитела по настоящему изобретению можно хранить при 5±3°C. Однако благодаря эффективной очистке способом по настоящему изобретению, стабильность препарата антитела является необычайно хорошей. Конечный продукт является стабильным в жидкой форме в течение, по меньшей мере, 3 месяцев, предпочтительно, по меньшей мере, 6 месяцев и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, двух лет при 2-8°C, что означает, что отсутствует фрагментация или полимеризация IgM более 5%, измеренных в HPSEC, увеличение протеолитической активности, уменьшение активности антитела IgM против Escherichia coli и активности антитела IgM против Pneumococcus saccharide более 25% и увеличение антикомплементарной активности более 25%, остающейся ниже 1 CH50/мг белка. Кроме того, конечный продукт, полученный способом по настоящему изобретению, является стабильным в жидкой форме в течение, по меньшей мере, 3 месяцев, предпочтительно, по меньшей мере, 6 месяцев и, наиболее предпочтительно, по меньшей мере, одного года при комнатной температуре (от 23 до 27°C), как оценено по таким же критериям.
Способ по настоящему изобретению, кроме того, обеспечивает более высокий уровень удаления вирусов, чем способы предшествующего уровня техники, с получением препарата антитела, который является более безопасным, чем препараты антител из предшествующего уровня техники, особенно по отношению к активным безоболочечным вирусам, подобным, например, парвовирусам. Способом по настоящему изобретению можно удалять/инактивировать вирусы, и, в частности, безоболочечные вирусы, более чем на 3 log10, предпочтительно, более чем на 4 log10 и, наиболее предпочтительно, более чем на 5 log10. Это приводит в результате к препарату антитела, который является по существу свободным от вирусов и, в частности, по существу свободным от безоболочечных вирусов (т.е. обладает вирусной безопасностью). Кроме того, способом по настоящему изобретению можно достигать этого уровня удаления/инактивации вирусных частиц без существенного влияния на количество активного IgM или на антикомплементарную активность препарата антитела. Соответственно, можно получать препараты антител, обладающие вирусной безопасностью по отношению к оболочечным и безоболочечным вирусам, которые содержат, по меньшей мере, 15%, более предпочтительно, по меньшей мере, 20% уровень IgM, и которые обладают антикомплементарной активностью ≤1 CH50/мг белка.
Препарат антитела по настоящему изобретению является пригодным для применения в медицине, и его можно применять для лечения иммунологических нарушений и инфекций, в частности, нарушения с дефицитом IgM и бактериальных инфекций. Обогащенный IgM человека препарат поливалентных иммуноглобулинов для внутривенного введения, который можно получать способом по настоящему изобретению, содержит более высокие титры антител против клинически значимых грамотрицательных и грамположительных бактерий, а также более высокие титры антител против эндотоксинов грамотрицательных бактерий и экзотоксинов грамотрицательных и грамположительных бактерий по сравнению с препаратами поливалентного иммуноглобулина G.
В частности, препараты антител по настоящему изобретению являются пригодными для внутривенного введения пациентам и особенно пригодны для внутривенной инъекции человеку.
Изобретение относится также к способу лечения пациента, включающему стадию введения препарата антитела по настоящему изобретению пациенту. В частности, пациент может страдать иммунологическим нарушением или бактериальной инфекцией.
Настоящее изобретение в настоящее время описано дополнительно только путем примеров.
Описание способа тестирования для определения антикомплементарной активности
Анализ для определения антикомплементарной активности проводили согласно способу, описанному в Европейской Фармакопее (способ 2.6.17, Ph. Eur. 6. Edition, 2008).
Для предварительно обработанных гемолизином эритроцитов овцы проводили гемолиз посредством комплемента. Посредством комплементсвязывающих антител в образце гемолиз супрессируется. Определяют количество комплемента, которое связывается (инактивируется) 1 мг иммуноглобулина.
Определенное количество иммуноглобулина (10 мг) смешивают с комплементом морской свинки и титруют свободный комплемент. Антикомплементарная активность выражает применяемый комплемент относительно применяемого комплемента из эталонного раствора. Гемолитическая единица активности комплемента (CH50) представляет собой количество комплемента, приводящее к гемолизу 2,5×108 оптимально подготовленных эритроцитов из общего количества 5×108 эритроцитов в оптимальных буферных условиях.
Оптимально подготовленные эритроциты (8 мл стабилизированных эритроцитов овцы, промытых три раза желатиново-барбиталовым буфером, конечный 1 мл осадка эритроцитов суспендирован в 24 мл желатиново-барбиталового буфера) получают смешиванием 20 мл суспензии эритроцитов с 20 мл гемолизина (доведенного до 2 MHE/мл - минимальной гемолитической единицы) и инкубацией в течение 15 мин при 37°C.
Эквивалент 10 мг иммуноглобулина разводят в желатиново-барбиталовом буфере (1 г желатина в 1 л барбиталового буфера, pH 7,3, 5-кратный раствор барбиталового буфера: 83 г хлорид натрия, 10,192 г барбитала натрия в 2 литрах воды, pH 7,3). К конечному объему 1 мл добавляют 200 мкл комплемента 100 CH50/мл. Пробирки инкубируют при встряхивании в течение 1 час при 37°C. Образцы разводят и титруют против оптимально подготовленных эритроцитов. После инкубации в течение 1 час при 37°C образцы центрифугируют и определяют оптическую плотность с использованием спектрофотометра при длине волны 541 нм.
Пример 1 - Получение обогащенного IgM препарата из фракции I/III
180 кг фракции Коэна I/III, полученной фракционированием плазмы человека холодным этанолом, суспендируют в 720 л 0,1М буфера ацетата натрия pH 5,05 и перемешивают в течение 15-30 минут после достижения температуры суспензии (22±4°C).
Раствор обрабатывают добавлением 19,8 кг октановой кислоты (используют 0,110 кг на кг массы I/III) при комнатной температуре и раствор белка дополнительно перемешивают в течение 80 минут, с использованием вибросмесителя (Vibromixer®, размер 4, Graber+Pfenniger GmbH, Vibromixer, доведенный до уровня 2-3). Октановую кислоту добавляют медленно в течение 30 мин.
Добавляют приблизительно 3 кг трифосфата кальция (Ca3(PO4)2), и раствор белка дополнительно перемешивают в течение, по меньшей мере, 15 мин. Преципитат удаляют осветляющей фильтрацией с использованием фильтр-пресса. Проводят дополнительную фильтрацию через 0,2 мкм и раствор белка подвергают ультрафильтрации с помощью мембран 10 кДа. Раствор белка подвергают диафильтрации против раствора 0,04M NaCl и затем доводят до концентрации белка 40 г/л.
Раствор белка обрабатывают при pH 4,0±0,1 после разведения 1+1 водой для инъекций. Доведение pH проводят с использованием 1M HCl, и раствор белка инкубируют в течение 9 час при 37°C±2°C. После инкубации при pH 4 раствор белка доводят до pH 5,8, с использованием 1M NaOH. Полученный раствор белка дополнительно очищают добавлением DEAE Sephadex в периодическом режиме (75 г DEAE Sephadex на кг белка). Раствор белка инкубируют при перемешивании в течение ≥60 мин при комнатной температуре. DEAE Sephadex удаляют осветляющей фильтрацией. Раствор белка подвергают фильтрации через 0,2 мкм.
Раствор белка фильтруют через фильтр 0,1 мкм и фильтр Pall, Ultipor VF DV50, 20”. Фильтрат далее обрабатывают УФС-светом при 254 нм, с использованием устройства для проточного процесса UVivatec® (Bayer Technology Services/Sartorius Stedim) при дозе УФС 240 Дж/м2. Скорость потока через УФС-реактор рассчитывают с применением инструкций производителя. Облученный раствор белка концентрируют до концентрации белка 50-70 г/л посредством ультрафильтрации и подвергают диафильтрации (мембрана 10 кДа, с применением буфера 0,32M глицина pH 4,3). Конечный продукт фильтруют через фильтр 0,2 мкм и сохраняют при 2-8°C.
Пример 2 - Исследование условий на стадии обработки октановой кислотой
Для обработки октановой кислотой тестировали следующие экспериментальные диапазоны, также в сочетании друг с другом, с применением способа, описанного в примере 1 (результаты не показаны).
- Количество октановой кислоты: 0,09 кг/кг - 0,13 кг/кг (Количество октановой кислоты на кг применяемой фракции I/III) (120-180 мМ октановая кислота).
- pH при обработке октановой кислотой от pH 4,8 до 5,3.
- Диапазон температур реакции: 14°C-30°C.
- Время инкубации: 40-110 мин.
Все тестированные условия приводили к промежуточным соединениям, которые легко было осветлять для дальнейшей переработки, и со значительным снижением протеолитической активности от нескольких тысяч Ед./л в суспендированной фракции Коэна I/III. Эти промежуточные соединения приводили к конечному продукту с протеолитической активностью ниже 8 Ед./л (рассчитанной, как описано ниже в примере 6), что составляет предел количественного определения.
Пример 3 - Снижение количества вируса посредством использования
вибросмесителя - Определение степеней удаления вируса для обработки октановой кислотой с и без использования
вибросмесителя
250 мл суспендированной фракции I/III гомогенизировали в течение 30 мин при pH 5,05 и 22°C. В суспензию добавляли 2,6 мл исходного раствора вируса. Добавляли октановую кислоту (110 г/кг) и гомогенизировали в течение 60 мин с использованием вибросмесителя. В параллельном эксперименте такую же смесь гомогенизировали со стандартным перемешиванием. Через 60 мин добавляли трифосфат кальция (0,15 г/кг октановой кислоты) и суспензию перемешивали в течение 15 мин. Суспензию осветляли глубинной фильтрацией с использованием дискового фильтра. Дисковый фильтр предварительно промывали 70-80 мл буфера. После фильтрации фильтр промывали 80 мл буфера. Фильтрат и смыв объединяли и отбирали образец для титрования вирусов.
Титры вирусов из образцов, взятых до добавления октановой кислоты и после фильтрации, определяли на подходящих индикаторных клетках для SV40, Reo и PPV (CV-1, CCL.7.1 и PK13). Наконец, рассчитывали степень удаления в соответствии с современными руководствами для валидационных исследований вирусов.
В валидационных исследованиях вирусов безоболочечные вирусы, такие как SV40 и Reo, эффективно удаляли с порядком более 4 log10 и более 5 log10, соответственно. Более того, PPV удаляли более чем на 3 log10. Эти значения более чем в 10 раз и вплоть до 1000 раз выше, чем при такой же обработке октановой кислотой в условиях стандартного перемешивания без вибросмешивания.
| Таблица 1 | ||
| Сравнение степеней снижения количества вирусов (log 10 ) для обработки октановой кислотой с и без использования вибросмесителя | ||
| Реакция с октановой кислотой, стандартное перемешивание [log 10 снижения] | Реакция с октановой кислотой с вибросмешиванием [log 10 снижения] | |
| PPV | 2,15±0,32 | 3,39±0,36 |
| REO | 2,34±0,38 | 5,346±0,28 |
| SV40 | 2,05±0,4 | 4,71±0,34 |
Пример 4 - Оценка обработки УФС
Оценивали оптимальный диапазон для дозы облучения УФС. Существует равновесие между минимально необходимой дозой для достижения инактивации, по меньшей мере, 4 log10 для безоболочечных вирусов и максимально переносимой дозой для избегания денатурации молекул IgM, приводящей к нарушенной функции Fab для связывания антигенов и нарушенной функции Fc, влияющей на активацию комплемента. В диапазоне 200-400 Дж/м2 можно наблюдать только слабое увеличение количества агрегатов иммуноглобулинов и отсутствие существенного влияния на содержание фрагментов.
Для экспериментов оптическую плотность (OD) исходного раствора белка применяют для расчета скорости потока в системе UVivatec lab с помощью предоставленного поставщиком Excel-Sheet из BTS (Master Calculation Sheet UVivatec Lab II версии 3.0 покупателя). Скорость потока рассчитывают, принимая во внимание производительность лампы, заданное положение датчика УФ-сигнала лампы и желаемую дозу облучения УФС.
Содержащий IgM раствор с содержанием белка приблизительно 55 г/л (партия 86 GB005BE07) прокачивали насосом со скоростью потока 5,8 л/час через систему UVivatec для достижения дозы 200 Дж/м2 за однократный проток. Дозы 300 Дж/м2 достигали прокачиванием насосом раствора белка со скоростью потока 3,9 л/м2 через систему. 400 Дж/м2 достигали прокачиванием насосом раствора белка со скоростью потока 2,9 л/м2 через систему.
| Таблица 2 | |||||
| Аналитические результаты определений активности и титра до и после обработки УФС в концентрированном конечном продукте | |||||
| Продукт IgM без облучения УФС | Продукт IgM после УФС 200 Дж/м 2 | Продукт IgM после УФС 300 Дж/м 2 | Продукт IgM после УФС 400 Дж/м 2 | ||
| Содержание белка | г/л | 56,3 | 56,2 | 57,6 | 54,4 |
| Содержание IgG (нефелометрия) | % | 56,1 | 55,5 | 55,7 | 54,9 |
| Содержание IgA (нефелометрия) | % | 20,1 | 20,6 | 20,5 | 20,7 |
| Содержание IgM (нефелометрия) | % | 23,7 | 23,9 | 23,7 | 24,4 |
| HPSEC | |||||
| агрегаты >1200 кДа | % площади | 1,9 | 2,6 | 3,3 | 4,0 |
| фрагменты <100 кДа | % площади | 0,66 | 0,73 | 0,76 | 0,79 |
| АСА | CH50/мг белка | 0,68 | 0,48 | 0,46 | 0,46 |
| PA | Ед./л | <8 | <8 | <8 | <8 |
Невозможно было наблюдать существенных различий для содержания иммуноглобулинов, протеолитической активности или ACA в диапазоне 200-400 Дж/м2. Предпочтительный диапазон для дозирования устанавливали от 200 до 300 Дж/м2, поскольку 200 Дж/м2 являются достаточно хорошими для инактивации безоболочечных вирусов, и при 300 Дж/м2 невозможно было наблюдать существенного влияния на образование агрегатов и титры антител. Предпочтительная доза составляет 225 Дж/м2.
Разведенный содержащий IgM раствор с содержанием белка 8-12 г/л (партия 86BB059BE07) прокачивали насосом со скоростью потока 5,8 л/час через систему UVivatech для достижения доз от 200 до 300 Дж/м2 за однократный проток.
| Таблица 3 | ||||||
| Аналитические результаты для растворов IgM до и после облучения УФС при различных дозах УФС | ||||||
| Фракция I/III партии 86BB059BE07 | До УФС | УФС: 200 Дж/м 2 | УФС: 225 Дж/м 2 | УФС: 250 Дж/м 2 | УФС: 300 Дж/м 2 | |
| Белок | г/л | 11,34 | 10,56 | 10,65 | 10,69 | 10,56 |
| Содержание IgG | % | 59,2 | 59,1 | 58,5 | 58,6 | 57,1 |
| Содержание IgA | % | 19,6 | 19,6 | 20,2 | 20,1 | 20,3 |
| Содержание IgM | % | 21,1 | 21,3 | 21,2 | 21,4 | 22,6 |
| HSEC | ||||||
| агрегаты >1200 кДа | % | 0,20 | 0,39 | 0,54 | 0,3 | 0,47 |
| фрагменты <100 кДа | % | 0,47 | 0,46 | 0,25 | 0,26 | 0,47 |
| PA | Ед./л | <8 | <8 | n.t. | n.t. | n.t. |
| PKA | Ед./мл | 3 | 3 | 3 | 3 | 3 |
| АСА | СН50/мг белка | 0,1 | 0,08 | 0,1 | 0,1 | 0,18 |
| Анти-E.coli O1:K1-IgG | Ед./мг | 24,7 | 20,5 | 18,9 | 19,5 | 20,2 |
| Анти-E.coli O1:K1-IgA | Ед./мг | 9,4 | 9,5 | 9,5 | 9,1 | 8,9 |
| Анти-E.coli O1:K1-IgM | Ед./мг | 14,1 | 13,0 | 15,1 | 13,9 | 13,4 |
| Анти-Candida albicans-IgG | Ед./мг | 15,6 | 16,8 | 17,9 | 17,3 | 17,0 |
| Анти-Candida albicans-IgA | Ед./мг | 11,3 | 11,6 | 10,5 | 10,3 | 10,4 |
| Анти-Candida albicans-IgM | Ед./мг | 13,8 | 13,3 | 13,7 | 13,9 | 13,1 |
| Анти-Enterococcus laecalis-IgG | Ед./мг | 13,0 | 15,5 | 13,5 | 14,8 | 15,0 |
| Анти-Enterococcus faecalis-IgA | Ед./мг | 11,3 | 10,5 | 10,1 | 9,7 | 9,6 |
| Анти-Enterococcus faecalis-IgM | Ед./мг | 17,2 | 14,1 | 16,7 | 14,0 | 13,9 |
| Анти-Pneumococcus Saccharid-IgG | Ед./мг | 23,2 | 24,1 | 24,7 | 24,0 | 25,7 |
| Анти-Pneumococcus Saccharid-IgA | Ед./мг | 13,3 | 12,1 | 18,0 | 16,5 | 14,8 |
| Анти-Pneumococcus Saccharid-IgM | Ед./мг | 17,5 | 15,1 | 18,0 | 16,4 | 16,6 |
Распределение между классами иммуноглобулинов остается без влияния облучения УФ при способе в пределах этого диапазона дозирования. Характер распределения молекулярной массы, анализированного посредством HPSEC, также не изменяется. Уровень чистоты, анализированный посредством CZE, остается неизменным. Протеолитическая активность (PA), активатор прекалликреина (PKA) и антикомплементарная активность (ACA) остаются неизменными. Антибактериальная активность, измеренная способом Elisa, также существенно не изменяется для всех классов иммуноглобулинов.
Аликвоты - облученные УФ с увеличивающимися значениями интенсивности - далее перерабатывали до конечного продукта и подвергали такой же панели аналитических тестов. В конечных продуктах также не существовало поддающихся наблюдению различий. Все тестированные титры антител всегда лежат в диапазоне 100±10% от контрольного препарата, не обработанного УФC.
Пример 5 - Общее снижение количества вирусов посредством использования
вибросмесителя/обработки pH4 и обработки УФC - Определение степеней удаления вирусов
Подтверждение удаления/инактивации вируса для трех стадий обработки октановой кислотой с вибросмешиванием, обработки pH4 и обработки УФC (215 Дж/м2) проводили с применением следующих моделей вирусов: вирус бычьей вирусной диареи (BVDV) в качестве модели вируса для вируса гепатита C, вирус псевдобешенства (PRV) в качестве модели вируса для вирусов герпеса человека, вируса иммунодефицита человека (HIV-1), вируса конского артерита (EAV) в качестве модели вируса для коронавирусов, вируса Синдбис (SinV) в качестве модели вируса для флавивирусов, вируса энцефаломиелита мышей (MEV) в качестве модели вируса для вируса гепатита A, реовируса (Reo) в качестве модели вируса для других безоболочечных вирусов, парвовируса свиней (PPV) в качестве модели вируса для парвовируса B 19 человека.
Результаты этих исследований для трех стадий обработки октановой кислотой, обработки pH4 и обработки УФC перечислены в следующей таблице 4.
| Таблица 4 | ||||||||
| Общее снижение количества вирусов способом получения IgM | ||||||||
| Модель вируса | BVDV | PRV | HIV-1 | EAV | SinV | MEV | Reo | PPV |
| Общее снижение (log 10 ) | >12,5 | >10,1 | >12,7 | >8,4а | >13,7а | 9,2 | >11,0 | >8,4 |
| a Степень снижения без данных для валидации стадии облучения УФС | ||||||||
Необязательная нанофильтрация с фильтрами с номинальным размером пор приблизительно 50 нм добавляет дополнительную безопасность посредством увеличения общего снижения вплоть до более 17 log10 в зависимости от размера вируса. Например, >17,5 log10 достигают затем для HIV-1, в то время как PPV дополнительно не удалялся нанофильтрацией.
Таким образом, способ очистки по изобретению приводит к препарату IgM с выдающейся вирусной безопасностью с недостижимыми до настоящего времени для такого содержащего IgM препарата степенями инактивации/снижения количества вирусов более 8 log10. Это является особенно важным для безоболочечных вирусов, подобных MEV, Reo и PPV, которые, как правило, более устойчивы против способов инактивации и удаления вирусов из-за их малого размера и отсутствия липидной оболочки.
Пример 6: Определение остаточной протеолитической активности для обработки октановой кислотой с и без использования
вибросмесителя
Обработку октановой кислотой проводили, как в примере 1, и в параллельном эксперименте без вибросмесителя, но с интенсивным стандартным перемешиванием с помощью лопастной мешалки. Протеолитическую активность в образцах после обработки октановой кислотой/трифосфатом кальция и ультра/диафильтрации определяли с применением хромогенного субстрата S-2288 (Chromogenix), следуя инструкциям производителя.
25 мг субстрата S-2288 (Chromogenix) растворяют в 7,2 мл воды для инъекций. Образцы разводят в буфере (100 мМ Трис/HCl pH 8,4, 106 мМ NaCl) для соответствия линейному диапазону анализа, например, 200 мкл буфера смешивают с 200 мкл образца (смешивание и доведение температуры до 37°C) и 200 мкл раствора хромогенного субстрата. Кинетику поглощения измеряют при 405 нм (1-3 мин) при 37°C, с использованием спектрофотометра. Протеолитическую активность образца рассчитывают из начальной разницы поглощения (ΔAbs/мин) с применением уравнения C (Ед./л)=313×ΔAbs/мин×F (C=протеолитическая активность. F=коэффициент разведения).
| Таблица 5 | ||
| Снижение протеолитической активности посредством обработки октановой кислотой | ||
| Обработка октановой кислотой без вибросмешивания | Обработка октановой кислотой с вибросмешиванием | |
| Исходный материал (Ед./л) | 5630 | 5630 |
| Средняя остаточная протеолитическая активность после обработки октановой кислотой (Ед./л) | 42 | <8 (LOD) |
Фильтрат после обработки октановой кислотой был прозрачным, когда применяли вибросмешивание. В сравнительном эксперименте фильтрат после обработки октановой кислотой с лопастной мешалкой был очень мутным и сложным для фильтрации.
Пример 7: Антибактериальные титры в препарате IgM по изобретению
Для сравнения с единственным коммерчески доступным переносимым при внутривенном введении содержащим IgM препарата пентаглобина, антибактериальную активность анализировали в трех партиях этого общепринятого лекарственного средства и сравнивали с препаратом по изобретению. Определение антител класса IgA или IgM против антибактериальных или противогрибковых антигенов в препарате IgM проводили посредством ELISA. Планшеты для микротитрования покрывали соответствующим антигеном и инкубировали со стандартом или препаратом IgM. Антитела, связанные с антигеном, детектировали с помощью конъюгата против IgA человека или против IgM человека. Детекцию проводили с применением субстрата фермента. Полученное изменение окраски соответствует количеству антител, присутствующих в препарате IgM.
| Таблица 6 | |||
| Сравнение антибактериальной связывающей активности IgM в препарате по изобретению и в коммерчески доступном пентаглобине | |||
| Параметр | Единицы | Препарат IgM по изобретению, среднее | Коммерческий продукт пентаглобин, среднее |
| Антитела IgM против Pneumococcus saccharide | Ед./мг IgM | 72 | 21 |
| Антитела IgM против Escherichia coli | Ед./мг IgM | 62 | 39 |
| Антитела IgM против Enterococcus faecalis | Ед./мг IgM | 69 | 27 |
| Антитела IgM против Candida albicans | Ед./мг IgM | 61 | 41 |
| Антитела IgM против Chlamydia | Ед./мг IgM | 71 | 6 |
| Таблица 7 | |||
| Сравнение антибактериальной связывающей активности IgA в препарате по изобретению и в коммерчески доступном пентаглобине | |||
| Параметр | Единицы | Препарат IgM по изобретению, среднее | Коммерческий продукт пентаглобин, среднее |
| Антитела IgA против Pneumococcus saccharide | Ед./мг IgA | 86 | 25 |
| Антитела IgA против Escherichia coli | Ед./мг IgA | 83 | 26 |
| Антитела IgA против Enterococcus faecalis | Ед./мг IgA | 93 | 21 |
| Антитела IgA против Chlamydia | Ед./мг IgA | 65 | 38 |
| Антитела IgA против Helicobacter pylori | Ед./мг IgA | 59 | 24 |
Опосредованная IgM и IgA активность в новом препарате, как правило, по меньшей мере, в 1,5 раза превышала активность в пентаглобине, что можно объяснить тем фактом, что IgM и IgA в пентаглобине являются химически модифицированными β-пропиолактоном. По настоящему изобретению эта стадия заменена более мягкими процедурами.
В целом эти данные показывают, что связывающая область молекул IgM в конечном препарате является функционально полностью активной.
Пример 8 Исследования стабильности при хранении для жидкого продукта IgM
Продукт согласно примеру 1 без обработки УФC сохраняли в стеклянных флаконах по 10 или 100 мл (объем заполнения 5 мл или 50 мл) при 2-8°C и анализировали по всем параметром согласно спецификации. Результаты показаны в таблице 8. Параметрами, важными, чтобы показать стабильность, являются содержание агрегатов и фрагментов, измеренные с помощью высокоэффективной эксклюзионной хроматографии (HPSEC), протеолитическая активность (PA) и антикомплементарная активность (ACA). Эти параметры являются критическими для переносимости при внутривенном введении и, по-видимому, изменяются в ходе долгосрочного хранения. При 2-8°C не присутствовало существенного изменения этих параметров. Даже при хранении при комнатной температуре (23-27°C) эти значения оставались в пределах спецификации, хотя присутствует небольшое увеличение количества фрагментов через 24 месяца при комнатной температуре. Определяли также другие параметры, подобно окрашиванию, опалесценции, значению pH, и они оставались неизменными в течение всего периода исследования. Титры IgM и IgA против различных бактерий оставались стабильными в течение 2 лет при 2-8°C.
Продукт согласно примеру 1 с обработкой УФC также сохраняли в стеклянных флаконах по 10 или 100 мл (объем заполнения 5 мл или 50 мл) при 2-8°C и комнатной температуре и анализировали по всем параметрам согласно спецификации. Результаты показаны в таблице 9. В этом текущем исследовании стабильности доступные в настоящее время данные за 12 месяцев показывают такой же профиль стабильности продукта, как без обработки УФC, что позволяет экстраполяцию на стабильность в течение 24 месяцев.
| Таблица 8 | |||||||||
| Стабильность партии A586067, тестированная при 2-8°C в лежачем положении. Объем заполнения: 5 мл | |||||||||
| Тестированные параметры | Требование (Устойчивость) |
Хранение в месяцах
2-8°C |
23-27°C | ||||||
| 0 | 3 | 6 | 9 | 12 | 18 | 24 | 24 | ||
| Белок (г/л) | 45-55 | 50,3 | 51,4 | 50,3 | 50,4 | 50,5 | 49,6 | 50,8 | 49,8 |
| HPSEC | |||||||||
| % агрегатов >1200 кДа | <5 | 0,9 | 0,6 | 0,5 | 0,8 | 0,6 | 1,0 | 1,3 | 1,7 |
| % фрагментов <100 кДа | <5 | 0,2 | 0,6 | 1,1 | 0,7 | 1,6 | 0,9 | 1,2 | 4,1 |
| Протеолитическая активность (Ед./л) | <8 | <8 | <8 | <8 | n.t. | <8 | n.t. | <8 | <8 |
| Содержание иммуноглобулинов (%) | >95% | 96,7 | 99,0 | 100 | n.t. | 99,5 | n.t. | 98,4 | 97,5 |
| Содержание IgM | >20% | 21,6 | 22,1 | 22,1 | n.t. | 22,3 | n.t. | 20,9 | 20,5 |
| Антикомплементарная активность (CH50/мг белка) | <1,0 | 0,48 | 0,56 | 0,48 | 0,66 | 0,70 | 0,64 | 0,54 | 0,38 |
| n.t.=не тестировали | |||||||||
| Таблица 9 | |||||||||
| Стабильность партии A586057, тестированная при 2-8°C в лежачем положении. Объем заполнения: 50 мл | |||||||||
| Тестированные параметры | Требование (Устойчивость) | Хранение в месяцах 2-8°C | 23-27°C | ||||||
| 0 | 3 | 6 | 9 | 12 | 18 | 24 | 24 | ||
| Белок (г/л) | 45-55 | 50,2 | 50,8 | 49,7 | 50,4 | 50,3 | 49,4 | 50,3 | 49,7 |
| HPSEC | |||||||||
| % агрегатов >1200 кДа | <5 | 0,9 | 0,5 | 0,4 | 0,8 | 0,6 | 1,0 | 1,3 | 1,5 |
| % фрагментов <100 кДа | <5 | 0,3 | 0,6 | 1,0 | 0,9 | 1,4 | 1,2 | 1,2 | 4,2 |
| Протеолитическая активность (Ед./л) | <8 | <8 | <8 | <8 | n.t. | <8 | n.t. | <8 | <8 |
| Содержание иммуноглобулинов (%) | >95% | 98,6 | 98,9 | 100 | n.t. | 99,5 | n.t. | 98,5 | 98,0 |
| Содержание IgM | >20% | 21,3 | 22,3 | 24.5 | n.t. | 22,0 | n.t. | 20,9 | 20,1 |
| Антикомплементарная активность (CH50/мг белка) | <1,0 | 0,48 | 0,82 | 0,52 | 0,64 | 0,68 | 0,48 | 0,60 | 0,40 |
Пример 9 Эксперименты
in vivo
с продуктом IgM
Для подтверждения безопасности и переносимости исследовали эффекты препарата IgM на артериальное кровяное давление после повторяющихся внутривенных инфузий в течение 5 суток 8 бодрствующим яванским макакам. Вводили дозу 190 мг/IgM/кг/сутки препарата IgM, полученного способами, описанными в данном описании. Пентаглобин, коммерчески доступный, содержащий IgM препарат с переносимостью при внутривенном введении, вводили некоторым обезьянам в качестве сравнительного вещества. Пентаглобин вводили таким способом, как такую же дозу IgM. Контрольную дозу 0,9% NaCl вводили животным за некоторое время до введения препаратов иммуноглобулинов. Кровяное давление определяли после инъекции, чтобы определить, было ли введение ассоциировано с непереносимым уровнем неспецифической активации комплемента.
Введение препарата IgM (15 мл/кг/сут) оказывало только незначительные эффекты на артериальное кровяное давление (среднее, систолическое и диастолическое). Различия вплоть до 4 часов после каждой инфузии по сравнению со значениями до тестирования не превышали 4 мм рт.ст. (533,3 Па). Эти различия можно рассматривать как биологически не значимые.
| Таблица 10a | ||
| Уровни C3a [нг/мл] после введения препарата IgM | ||
| Контроль (0,9% NaCl, pH 4,5) C3a [нг/мл] | Введение препарата IgM C3a [нг/мл] | |
| Среднее | 229 | 240 |
| SD | 83 | 37 |
| N | 8 | 8 |
Никаких значительных токсикологических обнаружений нельзя приписать препарату IgM, и не присутствовало значимых изменений, которых не наблюдали с пентаглобином. Поскольку безопасность пентаглобина хорошо установлена в многолетней клинической практике, на этом обосновании можно заключить, что эти изменения не имеют какой-либо клинической значимости.
| Таблица 10b | ||
| Уровни C3a [нг/мл] после введения эталонного препарата пентаглобина | ||
| Контроль (0,9% NaCl, pH 6,8) C3a [нг/мл] | Введение препарата IgM C3a [нг/мл] | |
| Среднее | 204 | 263 |
| SD | 20 | 61 |
| N | 4 | 4 |
Хорошую переносимость и безопасность препарата IgM также верифицировали в исследовании фазы I на людях для 24 здоровых мужчин и женщин - добровольцев. Систолическое кровяное давление в первые 4 часа после введения в среднем уменьшалось только приблизительно на 9% (11,9 мм рт.ст. (1,587 Па)) после инфузии 91-274 мг препарата IgM на кг BW/d при 0,5 мл/мин.
Это находилось в таком же диапазоне, как и плацебо - 0,9% NaCl-раствор (9,4%, 11,7 мм рт.ст. (1,56 Па)).
Не зарегистрировано тяжелых неблагоприятных событий, и все не тяжелые неблагоприятные события являлись самоограничивающимися. Кроме того, не существовало доказательств переноса инфекционного агента, как показано посредством определений PCT.
Отмечено, что полезность исследований эффективности на животных моделях соответствующих заболеваний является ограниченной из-за иммуногенности и преформированных Gal-антител в препаратах IgM, полученных из плазмы человека. Однако, принимая во внимание знания предшествующего уровня техники относительно применения пентаглобина в лечении заболеваний и титры антител против бактерий в препаратах IgM, полученных способом по настоящему изобретению (как показано в примере 7), можно заключить, что препарат IgM обладает клинической эффективностью.
Claims (14)
1. Препарат антитела, полученный из плазмы человека, для применения при лечении иммунологического нарушения, где препарат антитела является пригодным для внутривенного введения человеку и содержит иммуноглобулины IgG, IgA и IgM, где от 15% до 30% от всех иммуноглобулинов представляют собой IgM, от 45% до 70% от всех иммуноглобулинов представляют собой IgG и от 15% до 30% от всех иммуноглобулинов представляют собой IgA, где препарат обладает вирусной безопасностью по отношению к оболочечным и безоболочечным вирусам, имеет антикомплементарную активность ≤1 CH50/мг белка и является стабильным в жидкой форме в течение по меньшей мере 2 года при хранении при 2-8°C и где препарат антитела не обрабатывают во время его процесса получения β-пропиолактоном.
2. Препарат антитела по п. 1, где иммуноглобулины являются ферментативно немодифицированными.
3. Препарат антитела по п. 2, где препарат не обрабатывают добавленной протеазой.
4. Препарат антитела по п. 2, где препарат не обрабатывают добавленным пепсином.
5. Препарат антитела по п. 1, где препарат содержит по меньшей 20% IgM.
6. Препарат антитела по п. 1, дополнительно содержащий стабилизирующее средство.
7. Препарат антитела по п. 6, где стабилизирующее средство содержит глицин.
8. Препарат антитела по п. 1, имеющий протеолитическую активность менее чем 8 ед/л, где препарат содержит по меньшей мере 20% IgM.
9. Препарат антитела по п. 8, где иммуноглобулины являются ферментативно немодифицированными.
10. Применение препарата антитела по любому из пп. 1-9 в лечении иммунологического нарушения.
11. Применение препарата антитела по п.10, где иммунологическое нарушение представляет собой нарушение с дефицитом IgM.
12. Применение препарата антитела по любому из пп. 1-9 для изготовления лекарственного средства для лечения иммунологического нарушения.
13. Способ лечения пациента, страдающего иммунологическим нарушением, включающий введение препарата антитела по любому из пп.1-9.
14. Способ лечения по п.13, где препарат антитела вводят пациенту внутривенно.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB1006753.6 | 2010-04-22 | ||
| GBGB1006753.6A GB201006753D0 (en) | 2010-04-22 | 2010-04-22 | Process for preparing an immunolobulin composition |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2012149743A Division RU2612899C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Способ получения композиции иммуноглобулинов |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016140455A RU2016140455A (ru) | 2018-12-17 |
| RU2016140455A3 RU2016140455A3 (ru) | 2020-04-02 |
| RU2765738C2 true RU2765738C2 (ru) | 2022-02-02 |
Family
ID=42270688
Family Applications (4)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017111820A RU2749732C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Препараты антител |
| RU2012149743A RU2612899C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Способ получения композиции иммуноглобулинов |
| RU2012149741A RU2617532C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Препараты антител |
| RU2016140455A RU2765738C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Способ получения композиции иммуноглобулинов |
Family Applications Before (3)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017111820A RU2749732C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Препараты антител |
| RU2012149743A RU2612899C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Способ получения композиции иммуноглобулинов |
| RU2012149741A RU2617532C2 (ru) | 2010-04-22 | 2011-04-21 | Препараты антител |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (6) | US8900806B2 (ru) |
| EP (2) | EP2560691B1 (ru) |
| JP (4) | JP6118248B2 (ru) |
| KR (2) | KR101860459B1 (ru) |
| CN (3) | CN102939107B (ru) |
| AU (2) | AU2011244241B2 (ru) |
| BR (2) | BR112012026934A2 (ru) |
| CA (2) | CA2796263C (ru) |
| CO (2) | CO6640238A2 (ru) |
| ES (2) | ES2553385T3 (ru) |
| GB (1) | GB201006753D0 (ru) |
| HK (2) | HK1177600A1 (ru) |
| HU (2) | HUE025853T2 (ru) |
| IL (2) | IL222373A (ru) |
| MX (2) | MX338195B (ru) |
| PL (2) | PL2560691T3 (ru) |
| RU (4) | RU2749732C2 (ru) |
| SG (2) | SG184843A1 (ru) |
| WO (2) | WO2011131787A2 (ru) |
| ZA (2) | ZA201208541B (ru) |
Families Citing this family (22)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB201006753D0 (en) | 2010-04-22 | 2010-06-09 | Biotest Ag | Process for preparing an immunolobulin composition |
| FR2959821B1 (fr) * | 2010-05-05 | 2012-07-06 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de mesure de l'activation du complement par des igg |
| FR2974301B1 (fr) | 2011-04-20 | 2013-08-23 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un produit plasmatique deplete en un ou plusieurs facteurs thrombogenes |
| FR2977893B1 (fr) * | 2011-07-11 | 2015-02-20 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation d'un concentre d'immunoglobulines polyvalentes |
| AU2013201393B2 (en) | 2012-03-09 | 2015-08-27 | Csl Behring Ag | Compositions |
| EP2636684A1 (en) | 2012-03-09 | 2013-09-11 | CSL Behring AG | Prevention of infection |
| EP2636681A1 (en) | 2012-03-09 | 2013-09-11 | CSL Behring AG | Process for enriching IgA |
| KR20150115639A (ko) * | 2014-04-04 | 2015-10-14 | 전숙영 | 치료용 면역글로불린 제제 제조에 사용되는 산성 완충액, 이를 이용한 치료용 면역글로불린 제제 제조방법 및 이 제조방법으로 제조된 치료용 면역글로불린 제제 |
| US20170210793A1 (en) * | 2014-07-15 | 2017-07-27 | The Regents Of The University Of California | Novel Treatment for Polycystic Kidney Disease |
| EP3334747B1 (en) | 2015-08-13 | 2023-09-27 | Amgen Inc. | Charged depth filtration of antigen-binding proteins |
| CA3013849A1 (en) * | 2016-03-14 | 2017-09-21 | Biotest Ag | Treatment of severe community acquired pneumonia |
| EP3275897A1 (en) | 2016-07-27 | 2018-01-31 | Biotest AG | Process for preparing immunoglobulin compositions |
| RU2660584C1 (ru) * | 2017-06-06 | 2018-07-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" | Способ определения FC-функции препаратов иммуноглобулина человека |
| WO2019105916A1 (en) * | 2017-11-29 | 2019-06-06 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Target interference suppressed anti-drug antibody assay |
| EP3747903A1 (en) | 2019-06-07 | 2020-12-09 | Biotest AG | Method and kit for testing potency of immunoglobulin compositions |
| US20230295281A1 (en) * | 2020-04-10 | 2023-09-21 | Vanudis GmbH | Natural antibodies in prophylaxis and therapy |
| TW202200205A (zh) * | 2020-06-03 | 2022-01-01 | 愛爾蘭商格里佛全球營運有限公司 | 超免疫ｉｇｇ及／或ｉｇｍ組合物及其製備方法及從供體中獲得超免疫人血漿的方法 |
| CN115768789A (zh) * | 2020-07-10 | 2023-03-07 | 基立福环球运营有限公司 | 用于获得包含人血浆来源的免疫球蛋白m的组合物的方法 |
| CN111944043B (zh) * | 2020-09-01 | 2023-05-09 | 华兰生物工程重庆有限公司 | 一种从血浆废弃物中提取IgM的方法 |
| CA3195385A1 (en) | 2020-11-19 | 2022-05-27 | Biotest Ag | Method and kit for testing immunomodulatory potency of immunoglobulin compositions, e.g., for treatment of covid-19 |
| KR20240040107A (ko) | 2021-07-29 | 2024-03-27 | 체에스엘 베링 아게 | 면역글로불린 g를 정제하는 방법 및 이의 용도 |
| WO2024200757A1 (en) | 2023-03-29 | 2024-10-03 | Csl Behring Ag | Methods of identifying immunoglobulin associated with adverse reactions |
Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4318902A (en) * | 1979-01-18 | 1982-03-09 | Biotest-Serum-Institut Gmbh | Concentrated immunoglobulin solution suited for intravenous administration |
| EP0352500A2 (de) * | 1988-07-27 | 1990-01-31 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verabreichbaren polyklonalen immunoglobulin-Präparates mit hohemIgM-Gehalt. |
| EP0413188A2 (de) * | 1989-08-17 | 1991-02-20 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung nicht modifizierter intravenös verabreichbarer IgM- und/oder IgA-haltige Immunglobulinpräparate |
| EP0450412A1 (en) * | 1990-04-03 | 1991-10-09 | Bayer Corporation | Heat-treated IgM antibody preparations |
| US5075425A (en) * | 1989-08-17 | 1991-12-24 | Biotest Pharma Gmbh | Process for the preparation of a pharmaceutical which contains igg, iga and igm and can be administered intravenously |
| EP0835880A1 (de) * | 1996-10-14 | 1998-04-15 | Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Blutspendedienst Srk | Verfahren zur Herstellung eines IgM Präparates für die intravenöse Applikation |
| RU2178309C2 (ru) * | 2000-01-12 | 2002-01-20 | Российский научно-исследовательский институт геронтологии | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения |
| RU2255766C2 (ru) * | 2003-03-05 | 2005-07-10 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габрического Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций, иммуноглобулиновый препарат для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций (варианты) и суппозитории на основе иммуноглобулинового препарата |
| RU2457861C2 (ru) * | 2008-08-05 | 2012-08-10 | Виктор Владимирович Чалов | Композиция, обладающая противовирусным и антимикробным действием, содержащая консорциум иммуноглобулинов |
Family Cites Families (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US136556A (en) | 1873-03-04 | Improvements in button-fastenings | ||
| US4371520A (en) * | 1981-10-28 | 1983-02-01 | The Green Cross Corporation | Process for preparing immunoglobulin suitable for intravenous injection |
| DE3310150A1 (de) * | 1983-03-21 | 1984-09-27 | Lentia GmbH Chem. u. pharm. Erzeugnisse - Industriebedarf, 8000 München | Verfahren zur herstellung einer nebenwirkungsfreien igg-immunglobulinloesung fuer die intravenoese applikation |
| IL90281A (en) | 1988-06-06 | 1994-10-07 | Miles Inc | Preparations containing MGI antibodies |
| US4939176A (en) | 1988-12-20 | 1990-07-03 | Miles Inc. | Viral inactivation process |
| US5367054A (en) * | 1993-04-12 | 1994-11-22 | Stolle Research & Development Corp. | Large-scale purification of egg immunoglobulin |
| DE69637181T2 (de) | 1995-07-14 | 2008-04-17 | Caf - Dcf Cvba - Scrl | Vorrichtung zur inaktivierung von viralen verunreinigungen in blutprodukten |
| DE59509979D1 (de) | 1995-09-22 | 2002-02-07 | Zlb Bioplasma Ag Bern | Verfahren zur Gewinnung von Immunglobulinen aus Fraktionen, die bei der Fraktionierung von menschlichem Blutplasma entstehen |
| JP3987599B2 (ja) * | 1996-12-05 | 2007-10-10 | 日本製薬株式会社 | 筋ジストロフィー治療剤 |
| JPH10167894A (ja) * | 1996-12-11 | 1998-06-23 | Mitsubishi Gas Chem Co Inc | ビスマス置換希土類鉄ガーネット単結晶膜の製造法 |
| US5886154A (en) | 1997-06-20 | 1999-03-23 | Lebing; Wytold R. | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies |
| US6955917B2 (en) * | 1997-06-20 | 2005-10-18 | Bayer Healthcare Llc | Chromatographic method for high yield purification and viral inactivation of antibodies |
| AU753468B2 (en) | 1998-06-09 | 2002-10-17 | Csl Behring Ag | Process for producing immunoglobulins for intravenous administration and other immunoglobulin products |
| RU2192279C2 (ru) * | 2000-09-07 | 2002-11-10 | Нижегородское государственное предприятие по производству бактерийных препаратов | Способ получения иммуноглобулинового препарата |
| DK1337280T3 (da) | 2000-11-13 | 2013-12-02 | Bayer Ip Gmbh | Fremgangsmåde til inaktivering af mikroorganismer i en fluid ved anvendelse af ultraviolet stråling |
| FR2824568B1 (fr) | 2001-05-11 | 2004-04-09 | Lab Francais Du Fractionnement | Procede de preparation de concentres d'immunoglobulines humaines a usage therapeutique |
| US7727974B2 (en) | 2001-08-10 | 2010-06-01 | Eisai R & D Management Co., Ltd. | Methods of reducing the severity of mucositis |
| WO2003037504A1 (fr) | 2001-11-02 | 2003-05-08 | Japan Techno Co., Ltd. | Agitateur vibratoire pour sterilisation et sterilisateur ainsi que procede de sterilisation faisant appel a cet agitateur vibratoire |
| JP4939929B2 (ja) | 2003-03-26 | 2012-05-30 | ポール，サッドヒル | タンパク質分解抗体および共有結合抗体 |
| RU2409591C2 (ru) | 2003-10-27 | 2011-01-20 | Вайет | Удаление агрегатов с высокой молекулярной массой путем хроматографии на гидроксиапатитах |
| EP1532983A1 (en) | 2003-11-18 | 2005-05-25 | ZLB Bioplasma AG | Immunoglobulin preparations having increased stability |
| KR20070009995A (ko) | 2004-01-30 | 2007-01-19 | 수오멘 푸나이넨 리스티 베리팔베루 | 바이러스 안전성 면역글로불린을 제조하는 방법 |
| DK1718675T3 (da) | 2004-02-27 | 2013-07-15 | Octapharma Ag | Fremgangsmåde til at tilvejebringe en oprenset virussikker antistoftilberedning |
| US8029794B2 (en) | 2004-12-10 | 2011-10-04 | Novimmune S.A. | Combining therapies targeting multiple toll-like receptors |
| WO2006064373A2 (en) | 2004-12-16 | 2006-06-22 | Genzyme Polyclonals S.A.S. | Methods of purifying immunologlobulins |
| KR101157174B1 (ko) | 2005-11-24 | 2012-06-20 | 삼성전자주식회사 | 세포 또는 바이러스의 신속한 파괴 방법 및 장치 |
| DE102005062634A1 (de) | 2005-12-23 | 2007-06-28 | Blutspendedienst der Landesverbände des Deutschen Roten Kreuzes Niedersachsen, Sachsen-Anhalt, Thüringen, Oldenburg und Bremen gGmbH | Verfahren zur Inaktivierung von Pathogenen in Spenderblut, Blutplasma oder Erythrozytenkonzentraten in flexiblen Behältnissen unter Bewegung |
| FR2899111B1 (fr) | 2006-03-31 | 2010-09-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Concentre d'immunoglobulines specifiques du chikungunya en tant que medicament. |
| FR2899112B1 (fr) | 2006-03-31 | 2010-09-03 | Lab Francais Du Fractionnement | Concentre d'immunoglobulines et de fragments f (ab)'2 et/ou fab specifiques d'un arbovirus en tant que medicament. |
| US8354076B2 (en) | 2006-10-02 | 2013-01-15 | Palo Alto Research Center Incorporated | Fluid stirring mechanism |
| EP1950225A1 (de) | 2007-01-25 | 2008-07-30 | Octapharma AG | Verfahren zur Steigerung von Proteinausbeuten |
| EP2291196A4 (en) | 2008-05-12 | 2012-05-30 | Strox Biopharmaceuticals Llc | FOR STAPHYLOCOCCUS AUREUS SPECIFIC ANTIBODY PREPARATIONS |
| RU2457863C2 (ru) * | 2008-08-05 | 2012-08-10 | Виктор Владимирович Чалов | Композиция, обладающая противовирусным и антимикробным действием, содержащая консорциум иммуноглобулинов |
| GB201006753D0 (en) | 2010-04-22 | 2010-06-09 | Biotest Ag | Process for preparing an immunolobulin composition |
| NZ591514A (en) | 2011-03-03 | 2013-11-29 | Kode Biotech Ltd | Assay method |
-
2010
- 2010-04-22 GB GBGB1006753.6A patent/GB201006753D0/en not_active Ceased
-
2011
- 2011-04-21 ES ES11715928.5T patent/ES2553385T3/es active Active
- 2011-04-21 SG SG2012076055A patent/SG184843A1/en unknown
- 2011-04-21 ES ES11715567T patent/ES2551605T5/es active Active
- 2011-04-21 BR BR112012026934A patent/BR112012026934A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-04-21 PL PL11715928T patent/PL2560691T3/pl unknown
- 2011-04-21 CA CA2796263A patent/CA2796263C/en active Active
- 2011-04-21 HU HUE11715567A patent/HUE025853T2/en unknown
- 2011-04-21 CN CN201180029337.XA patent/CN102939107B/zh active Active
- 2011-04-21 WO PCT/EP2011/056487 patent/WO2011131787A2/en active Application Filing
- 2011-04-21 HU HUE11715928A patent/HUE028581T2/en unknown
- 2011-04-21 JP JP2013511591A patent/JP6118248B2/ja active Active
- 2011-04-21 AU AU2011244241A patent/AU2011244241B2/en active Active
- 2011-04-21 AU AU2011244240A patent/AU2011244240B2/en active Active
- 2011-04-21 PL PL11715567.1T patent/PL2560682T5/pl unknown
- 2011-04-21 CA CA2796409A patent/CA2796409A1/en not_active Abandoned
- 2011-04-21 EP EP11715928.5A patent/EP2560691B1/en active Active
- 2011-04-21 CN CN201611045494.0A patent/CN107080842A/zh active Pending
- 2011-04-21 MX MX2012012263A patent/MX338195B/es active IP Right Grant
- 2011-04-21 KR KR1020127030528A patent/KR101860459B1/ko active IP Right Grant
- 2011-04-21 BR BR112012026937A patent/BR112012026937A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2011-04-21 JP JP2013511592A patent/JP6283517B2/ja active Active
- 2011-04-21 KR KR1020127030527A patent/KR101872747B1/ko active IP Right Grant
- 2011-04-21 RU RU2017111820A patent/RU2749732C2/ru active
- 2011-04-21 CN CN201180029338.4A patent/CN102939111B/zh active Active
- 2011-04-21 MX MX2012012262A patent/MX337060B/es active IP Right Grant
- 2011-04-21 RU RU2012149743A patent/RU2612899C2/ru active
- 2011-04-21 RU RU2012149741A patent/RU2617532C2/ru active
- 2011-04-21 RU RU2016140455A patent/RU2765738C2/ru active
- 2011-04-21 WO PCT/EP2011/056486 patent/WO2011131786A2/en active Application Filing
- 2011-04-21 SG SG2012076063A patent/SG184844A1/en unknown
- 2011-04-21 EP EP11715567.1A patent/EP2560682B2/en active Active
-
2012
- 2012-10-11 IL IL222373A patent/IL222373A/en active IP Right Grant
- 2012-10-11 IL IL222374A patent/IL222374A/en active IP Right Grant
- 2012-10-19 US US13/655,686 patent/US8900806B2/en active Active
- 2012-10-19 US US13/655,649 patent/US9243056B2/en active Active
- 2012-11-13 ZA ZA2012/08541A patent/ZA201208541B/en unknown
- 2012-11-13 ZA ZA2012/08540A patent/ZA201208540B/en unknown
- 2012-11-22 CO CO12211854A patent/CO6640238A2/es not_active Application Discontinuation
- 2012-11-22 CO CO12211856A patent/CO6640239A2/es unknown
-
2013
- 2013-05-07 HK HK13105491.8A patent/HK1177600A1/zh unknown
- 2013-07-08 HK HK13107957.1A patent/HK1180601A1/zh active IP Right Maintenance
-
2014
- 2014-10-31 US US14/529,400 patent/US9518110B2/en active Active
-
2016
- 2016-06-01 JP JP2016110121A patent/JP6612182B2/ja active Active
- 2016-06-15 JP JP2016118887A patent/JP6612186B2/ja active Active
- 2016-11-10 US US15/348,121 patent/US10059759B2/en active Active
-
2018
- 2018-07-09 US US16/029,781 patent/US10954290B2/en active Active
-
2021
- 2021-02-05 US US17/168,848 patent/US11780909B2/en active Active
Patent Citations (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4318902A (en) * | 1979-01-18 | 1982-03-09 | Biotest-Serum-Institut Gmbh | Concentrated immunoglobulin solution suited for intravenous administration |
| EP0352500A2 (de) * | 1988-07-27 | 1990-01-31 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung eines intravenös verabreichbaren polyklonalen immunoglobulin-Präparates mit hohemIgM-Gehalt. |
| EP0413188A2 (de) * | 1989-08-17 | 1991-02-20 | Biotest Pharma Gmbh | Verfahren zur Herstellung nicht modifizierter intravenös verabreichbarer IgM- und/oder IgA-haltige Immunglobulinpräparate |
| US5075425A (en) * | 1989-08-17 | 1991-12-24 | Biotest Pharma Gmbh | Process for the preparation of a pharmaceutical which contains igg, iga and igm and can be administered intravenously |
| EP0450412A1 (en) * | 1990-04-03 | 1991-10-09 | Bayer Corporation | Heat-treated IgM antibody preparations |
| EP0835880A1 (de) * | 1996-10-14 | 1998-04-15 | Rotkreuzstiftung Zentrallaboratorium Blutspendedienst Srk | Verfahren zur Herstellung eines IgM Präparates für die intravenöse Applikation |
| RU2178309C2 (ru) * | 2000-01-12 | 2002-01-20 | Российский научно-исследовательский институт геронтологии | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения |
| RU2255766C2 (ru) * | 2003-03-05 | 2005-07-10 | Государственное учреждение "Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габрического Министерства здравоохранения Российской Федерации" | Способ получения иммуноглобулинового препарата для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций, иммуноглобулиновый препарат для профилактики и терапии бактериальных и вирусных инфекций (варианты) и суппозитории на основе иммуноглобулинового препарата |
| RU2457861C2 (ru) * | 2008-08-05 | 2012-08-10 | Виктор Владимирович Чалов | Композиция, обладающая противовирусным и антимикробным действием, содержащая консорциум иммуноглобулинов |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| BURNOUF ET AL. "Modern Plasma Fractionation", TRANSFUSION MEDICINE REVIEWS, 28.03.2007, v. 21, no.2, p.101-117, DOI: 10.1016/J.TMRV.2006.11.001. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2765738C2 (ru) | Способ получения композиции иммуноглобулинов |