RU2178309C2 - Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения - Google Patents
Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения Download PDFInfo
- Publication number
- RU2178309C2 RU2178309C2 RU2000100565/14A RU2000100565A RU2178309C2 RU 2178309 C2 RU2178309 C2 RU 2178309C2 RU 2000100565/14 A RU2000100565/14 A RU 2000100565/14A RU 2000100565 A RU2000100565 A RU 2000100565A RU 2178309 C2 RU2178309 C2 RU 2178309C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- plasma
- rivanol
- blood
- volume
- supernatant
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 28
- 102000006395 Globulins Human genes 0.000 title claims description 6
- 108010044091 Globulins Proteins 0.000 title claims description 6
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 title abstract 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 28
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 19
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 18
- IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N Acrinol Chemical compound CC(O)C(O)=O.C1=C(N)C=CC2=C(N)C3=CC(OCC)=CC=C3N=C21 IYLLULUTZPKQBW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 17
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 claims abstract description 14
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 9
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 229920002584 Polyethylene Glycol 6000 Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 8
- 238000000746 purification Methods 0.000 claims abstract description 7
- 231100000355 lymphocytotoxic Toxicity 0.000 claims abstract description 3
- 230000001391 lymphocytotoxic effect Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 3
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 claims description 23
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 19
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 17
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 17
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims description 12
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 8
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 5
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 claims description 4
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 claims description 3
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 claims 2
- 229940093429 polyethylene glycol 6000 Drugs 0.000 claims 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 claims 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 abstract description 13
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 abstract description 6
- 239000008118 PEG 6000 Substances 0.000 abstract description 5
- 208000032467 Aplastic anaemia Diseases 0.000 abstract description 3
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 abstract description 3
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 abstract description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 abstract description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 abstract 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 abstract 1
- 239000013067 intermediate product Substances 0.000 abstract 1
- 229940008228 intravenous immunoglobulins Drugs 0.000 abstract 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 abstract 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 16
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 6
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 4
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 3
- 206010034674 peritonitis Diseases 0.000 description 3
- 239000003634 thrombocyte concentrate Substances 0.000 description 3
- MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 1,2-Divinylbenzene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1C=C MYRTYDVEIRVNKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010003497 Asphyxia Diseases 0.000 description 2
- 208000021657 Birth injury Diseases 0.000 description 2
- PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N Styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1 PPBRXRYQALVLMV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 2
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 230000002980 postoperative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 2
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229930105110 Cyclosporin A Natural products 0.000 description 1
- PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N Cyclosporin A Chemical compound CC[C@@H]1NC(=O)[C@H]([C@H](O)[C@H](C)C\C=C\C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N(C)C(=O)CN(C)C1=O PMATZTZNYRCHOR-CGLBZJNRSA-N 0.000 description 1
- 108010036949 Cyclosporine Proteins 0.000 description 1
- PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N Ethylenediamine Chemical compound NCCN PIICEJLVQHRZGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 206010018367 Glomerulonephritis chronic Diseases 0.000 description 1
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 1
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 208000029836 Inguinal Hernia Diseases 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 208000024780 Urticaria Diseases 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 238000011316 allogeneic transplantation Methods 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000000781 anti-lymphocytic effect Effects 0.000 description 1
- 229940125715 antihistaminic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000739 antihistaminic agent Substances 0.000 description 1
- OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N biuret Chemical compound NC(=O)NC(N)=O OHJMTUPIZMNBFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003633 blood substitute Substances 0.000 description 1
- 239000002327 cardiovascular agent Substances 0.000 description 1
- 229940125692 cardiovascular agent Drugs 0.000 description 1
- 229920002301 cellulose acetate Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 1
- 208000022831 chronic renal failure syndrome Diseases 0.000 description 1
- 229960001265 ciclosporin Drugs 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 1
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000003754 fetus Anatomy 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036571 hydration Effects 0.000 description 1
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003907 kidney function Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000002271 resection Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 231100000046 skin rash Toxicity 0.000 description 1
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 1
- IMCGHZIGRANKHV-AJNGGQMLSA-N tert-butyl (3s,5s)-2-oxo-5-[(2s,4s)-5-oxo-4-propan-2-yloxolan-2-yl]-3-propan-2-ylpyrrolidine-1-carboxylate Chemical compound O1C(=O)[C@H](C(C)C)C[C@H]1[C@H]1N(C(=O)OC(C)(C)C)C(=O)[C@H](C(C)C)C1 IMCGHZIGRANKHV-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- 210000000626 ureter Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Изобретение относится к медицине, а именно к получению иммунобиологических лекарственных препаратов, используемых при коррекции иммунодефицитных состояний различного генеза (предупреждение и купирование кризов отторжения трансплантатов органов, а также лечение апластической анемии, борьба с гнойно-септическими состояниями и др. ). Способ заключается в иммунизации животных клетками вилочковой железы человека, выделении иммунной плазмы, истощении ее белками плазмы АВ (1V) группы крови человека, последующем риванольном фракционировании смеси (полупродукта), истощении ее клеточными компонентами смеси всех четырех групп крови человека и выделении целевого продукта с помощью ПЭГ-6000. В качестве стабилизатора используется глицин. Готовый лиофилизированный препарат обладает высокой степенью очистки, содержит более 90% иммуноглобулинов (в основном lgG), активность препарата в лимфоцитотоксическом тесте составляет не менее 1024, он свободен от консервантов и антибиотиков. Препарат отвечает национальным и международным требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения. Преимущество изобретения состоит в том, что препарат является высокоочищенным и высокоактивным и может применяться для внутривенного введения. 2 с. и 7 з. п. ф-лы.
Description
Изобретение относится к медицине, а именно к получению иммунобиологических лекарственных препаратов, используемых для внутривенного введения при коррекции иммунодефицитных состояний различного генеза.
Известен способ получения иммуноглобулина из биологических жидкостей путем их адсорбции на активированном угле (1).
Недостатком этого способа является малая емкость углей в отношении иммуноглобулинов и низкая избирательная способность указанного сорбента, что позволяет выделять не более 1% иммуноглобулинов от общего количества адсорбированного белка.
Известен также способ извлечения иммуноглобулинов из биологических жидкостей путем их пропускания через сорбенты, в качестве которых используются макропористый сополимер стирола и дивинилбензола, содержащий группы несимметричных диметилэтилен-бис-аммониевых оснований (2).
Недостатком указанного способа является его трудоемкость и невысокая степень очистки, что не позволяет использовать препарат для внутривенного введения ввиду его несоответствия современным требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения.
Известен способ получения иммуноглобулинов путем фракционирования белков крови с использованием этанола (3).
Недостатком указанного способа является необходимость использования высоких концентраций этанола, создающих опасность денатурации белков, что делает необходимым проведение процесса при отрицательных температурах.
Другим недостатком этого способа является необходимость последующего восстановления гидратных оболочек иммуноглобулина методом молекулярной фильтрации путем создания градиента концентрации низкомолекулярных веществ по разные стороны полупроницаемой мембраны, что значительно усложняет процесс и повышает стоимость целевого продукта.
Наиболее близким к заявляемому изобретению является способ приготовления антилимфоцитарного глобулина, основанный на получении препарата из сыворотки крови животных, иммунизированных клетками вилочковой железы человека, освобождении иммунной сыворотки от гетероагглютининов путем адсорбции эритроцитами человека с последующим фракционированием риванолом для освобождения от балластных белков (4).
Недостатком указанного способа является низкий выход иммунной сыворотки, использующейся для получения целевого продукта.
Другим недостатком является контаминация иммунной сыворотки свободным гемоглобином крови животных в результате гемолиза эритроцитов в процессе заготовки сыворотки, что ухудшает физико-химические свойства целевого продукта (изменяют его прозрачность и цветность) и требует проведения дополнительного контроля и очистки.
Следующим недостатком указанного способа является необходимость использования 1,5-2-кратного объема донорских эритроцитов человека по отношению к объему обрабатываемой иммунной сыворотки для освобождения последней от гетероагглютининов, что увеличивает продолжительность технологического процесса и значительно повышает стоимость целевого продукта.
Еще одним недостатком указанного способа является низкая степень очистки целевого продукта, содержащего не более 70% иммуноглобулинов, что не соответствует современным международным требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения людям.
Задачей данного изобретения является получение высокоочищенного ареактогенного препарата иммуноглобулина для внутривенного введения.
Сущность предлагаемого изобретения заключается в том, что животных, например коз, кроликов, лошадей, иммунизируют клетками вилочковой железы человека, выделяют плазму иммунизированных животных, истощают ее плазмой донорской AB (IV) группы крови человека, добавляя последнюю в соотношении 20-25: 1-1,5 (об. /об. ) соответственно. Затем смесь разбавляют дистиллированной водой до концентрации по белку 10-15 м/мл, фракционируют риванолом при добавлении его к полученной смеси в соотношении 0,2-0,6: 1 (об. /об. ) соответственно, с последующим удалением избытка риванола центрифугированием и последующей адсорбцией активированным углем. Потом фракционированную смесь, так называемый полупродукт, последовательно истощают эритроцитами человека, вносимыми в соотношении 1: 0,5-1, и тромбоцитами, добавляемыми из расчета 1,5-2 мл/л исходной иммунной плазмы. После центрифугирования из надосадочной жидкости осаждают целевой продукт с помощью полиэтиленгиколя (ПЭГ)-6000, вносимого в объемно-весовом соотношении до конечной концентрации 10-12%, с последующим центрифугированием. Полученный осадок белка, состоящий в основном из иммуноглобулинов, растворяют физиологическим раствором хлористого натрия, добавляют в качестве стабилизатора глицин в концентрации 15-25 г/л растворенного белка, а затем проводят осветляющую и стерилизующую фильтрацию, после чего осуществляют розлив и лиофильное высушивание препарата. Активность целевого продукта в лимфоцитотоксическом тесте (ЛЦТТ) равна - 1024-2048.
Техническим результатом использования изобретения является получение высокоочищенного антитимоцитарного глобулина (АТГ), который полностью соответствует требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения, и может быть использован для предупреждения и купирования кризов отторжения трансплантатов органов, в частности почек, печени, а также для лечения апластической анемии, борьбы с гнойно-септическими состояниями и т. д.
Способ осуществляется следующим образом. Многократно иммунизируют животных, например коз, кроликов, лошадей, взвесью клетками вилочковой железы человека, взятой от плода, погибшего в результате асфиксии или родовой травмы (при первой иммунизации используют полный адъювант Фрейнда). Спустя 2 недели после последней иммунизации проводят эксфузию крови животных-продуцентов, используя гемоконсерванты для предотвращения гемолиза эритроцитов, и последующее отделение иммунной плазмы. К полученной плазме добавляют плазму донорской крови человека AB (IV) группы в соотношении 20-25: 1-1,5 соответственно. Затем смесь разбавляют дистиллированной водой до концентрации белка 10-15 мг/мл, фракционируют 2%-ным раствором риванола, добавляемым в соотношении 0,2-0,6 (об. /об. ), центрифугируют, избыток риванола сорбируют активированным углем. Надосадочную жидкость (полупродукт) собирают, истощают последовательно эритроцитами и тромбоцитами смеси четырех групп крови человека и центрифугируют. Из полученной надосадочной жидкости целевой продукт осаждают с помощью ПЭГ-6000, вносимого в конечной концентрации 10-12% (вес/объем). После центрифугирования осадок белков, представляющий собой в основном иммуноглобулины, растворяют физиологическим раствором хлористого натрия и добавляют в качестве стабилизатора глицин (15-25 г/л растворенного белка), затем проводят осветляющую и стерилизующую фильтрацию, розлив и последующую лиофилизацию. Целевой продукт перед использованием растворяют в физиологическом растворе.
Пример 1. Здоровых коз обоего пола в возрасте 1-3 года весом 18-30 кг 6-кратно иммунизируют взвесью клеток, полученных из вилочковых желез трупов новорожденных детей, погибших в результате асфиксии или родовой травмы. При первой иммунизации животных антиген вводят одновременно с полным адьювантом Фрейнда. Смесь, состоящую из 2 мл взвеси клеток вилочковой железы человека в концентрации 3•108 и 2 мл адьюванта, вводят козам внутримышечно по 1 мл в четыре точки. Через две недели проводят 5 последующих иммунизаций с интервалом в 3-5 дней. Каждому животному вводят по 2 мл антигена. Через две недели после последней иммунизации производят заготовку крови с гемоконсервантом, что исключает гемолиз эритроцитов. Иммунную плазму отделяют от клеток крови центрифугированием. Затем эту плазму обрабатывают плазмой крови человека AB (IV) группы, добавляя последнюю в соотношении 25: 1,5. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на ночь в холодильнике.
На следующий день к смеси добавляют 2%-ный раствор риванола в соотношении 1: 0,4 (об. /об. ) соответственно при непрерывном перемешивании в условиях комнатной температуры. Затем смесь центрифугируют 15 мин при температуре 10oC. Надосадочную жидкость сливают в стерильную емкость. Избыток риванола сорбируют активированным углем.
Для освобождения фракционированной смеси (полупродукта) от антител к нелимфоидным антигенам вносят последовательно донорскую эритроцитарную массу и концентраты тромбоцитов смеси четырех групп крови человека. Суспензию отмытых эритроцитов добавляют к полупродукту в соотношении 0,75: 1 (об. /об. ). Спустя 10 мин смесь полупродукта с клеточной суспензией центрифугируют 10 мин при 2500 об/мин при 10oC, а затем добавляют тромбоциты человека из расчета 1,75 мл/л исходной плазмы, оставляют на 30-минутный контакт при комнатной температуре, после чего центрифугируют 20 мин при 3900 об/мин при температуре 10oC. Надосадок собирают в стерильную посуду и проводят выделение целевого продукта с помощью ПЭГ-6000, который вносят в объемно-весовом соотношении до конечной концентрации 11% при непрерывном перемешивании в течение 30 мин. Потом смесь центрифугируют в течение 10 мин при 3000 об/мин, надосадок удаляют, а к осадку белка добавляют физиологический раствор хлористого натрия до полного растворения осадка. Содержание общего белка в полупродукте, определяемое, например, биуретовым методом, составляет 10-15 мг/мл. На следующем этапе добавляют в качестве стабилизатора глицин из расчета 20 г/л растворенного белка, доводят pH до 7,3-7,5, а затем проводят осветляющую и стерилизующую фильтрацию препарата через мембранные фильтры типа "Миллипор" с соответствующими размерами пор, розлив препарата в ампулы и его лиофилизацию.
В одной ампуле целевого продукта объемом 3-5 мл содержится 40-60 мг белка, который при контроле методом электрофореза на ацетатцеллюлозных пленках на 90% и более состоит из иммуноглобулинов (преимущественно IgG и IgM). Такая степень очистки соответствует национальным и международным требованиям, предъявляемым к иммуноглобулинам для внутривенного введения. Препарат не содержит консервантов и антибиотиков, его активность в ЛЦТТ равна не менее 1024 - 2048.
Пример 2. Кроликов весом 2,5-3 кг иммунизируют 6-кратно взвесью клеток вилочковой железы человека в концентрации 1,5•108, как описано в примере 1. Через две недели после первой иммунизации проводят 5 последующих иммунизаций с интервалом в 3-5 дней. Каждому животному внутримышечно вводят по 2 мл антигена. Через две недели после последней иммунизации производят заготовку крови с гемоконсервантом. Иммунную плазму отделяют от клеток крови центрифугированием в условиях стерильного бокса. Затем полученную плазму обрабатывают плазмой крови человека в соотношении 20: 1. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на ночь в холодильнике.
На следующий день доводят pH смеси до 8,2 и добавляют 2%-ный раствор риванола при непрерывном помешивании в течение 30 мин при комнатной температуре в соотношении 0,2: 1 (об. /об. ), соответственно. Затем смесь центрифугируют в течение 15 мин при температуре 10oC. Надосадочную жидкость (полупродукт) сливают в стерильную емкость. Избыток риванола сорбируют активированным углем.
Для освобождения полупродукта от антител к нелимфоидным антигенам вносят донорскую эритроцитарную массу и концентраты тромбоцитов четырех групп крови человека. Смесь отмытых эритроцитов добавляют к полупродукту в соотношении 0,5: 1 (об. /об. ). После перемешивания в течение 10 мин смесь полупродукта с клеточной суспензией центрифугируют 10 мин при 2500 об/мин при 10oC. Надосадок сливают в стерильную емкость и добавляют тромбоциты человека из расчета 1,5 мл на 1 л исходной иммунной плазмы. Смесь инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин, после чего центрифугируют. Надосадок собирают в стерильную посуду и выделяют целевой продукт с помощью ПЭГ-6000, который вносят в объемно-весовом соотношении до конечной концентрации 10%, проводят непрерывное перемешивание в течение 30 мин и потом центрифугируют. Надосадок удаляют, а к осадку белка при непрерывном перемешивании добавляют физиологический раствор хлористого натрия до полного растворения осадка. На следующем этапе к растворенному осадку добавляют в качестве стабилизатора глицин из расчета 15 г/л растворенного осадка и доводят pH до 7,3-7,5, а затем проводят операции, как описано в примере 1. Активность целевого продукта в ЛЦТТ составляет не менее 1024.
Пример 3. Лошадей в возрасте 1-2 лет иммунизируют 6-кратно взвесью клеток вилочковой железы человека в концентрации 1•1010, как описано в примере 1. Иммунную плазму заготавливают, как описано в примерах 1, 2, и истощают плазмой крови человека в соотношении 20: 1. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на ночь в холодильнике.
На следующий день доводят pH смеси до 8,2 и при непрерывном помешивании в течение 30 мин при комнатной температуре вносят в нее 2%-ный раствор риванола в соотношении 1: 0,6 (об. /об. ) соответственно. Затем смесь центрифугируют в течение 15 мин при температуре 10oC. Надосадочную жидкость сливают в стерильную емкость. Избыток риванола сорбируют активированным углем.
Для освобождения полученного полупродукта от антител к нелимфоидным антигенам вносят последовательно донорскую эритроцитарную массу и концентраты тромбоцитов смеси четырех групп крови человека. Отмытые эритроциты добавляют к полупродукту в соотношении 1: 1 (об. /об. ). После перемешивания в течение 10 мин смесь полупродукта с клеточной суспензией центрифугируют 10 мин при 2500 об/мин при 10oC. Надосадок сливают в стерильную емкость и добавляют тромбоциты человека из расчета 2 мл на 1 л исходной плазмы. Смесь инкубируют при комнатной температуре 30 мин, после чего проводят центрифугирование в течение 10 мин при 3900 об/мин при 10oC. Надосадок собирают в стерильную посуду и затем проводят выделение целевого продукта с помощью ПЭГ-6000, который вносят в объемно-весовом соотношении до конечной концентрации 12%. После непрерывного перемешивания в течение 30 мин проводят центрифугирование в течение 10 мин при 3000 об/мин. Надосадок удаляют, а к осадку белка добавляют физиологический раствор до полного растворения осадка. На следующем этапе к растворенному белку добавляют в качестве стабилизатора глицин из расчета 25 г/л и доводят pH до 7,3-7,5. Все последующие операции проводят, как описано в примере 1. Активность целевого продукта в ЛЦТТ составляет 1024-2048.
Высокая эффективность препарата АТГ, полученного предлагаемым методом, и его ареактогенность, иллюстрируется примерами 4-6.
Пример 4. Полученный предлагаемым способом АТГ был использован для лечения больного Б. 86 лет (история б-ни N 6537) с общим серозным перитонитом после резекции по поводу ушивания паховой грыжи. Лечение проводилось в Главном военном госпитале им. Н. Н. Бурденко. Больной поступил в отделение в тяжелом состоянии, через сутки произведена операция по поводу основного заболевания. Послеоперационное состояние тяжелое с явлениями перитонита и присоединившейся бронхопневмонии. Больному проводилось интенсивное лечение антибиотиками, коллоидными и кристаллоидными кровезаменителями, сердечно-сосудистыми средствами, но состояние оставалось крайне тяжелым. Добавлено лечение АТГ, который вводили двукратно внутривенно из расчета 0,7 мг/кг массы тела. Обе трансфузии препарата протекали без осложнений и побочных реакций. На 4-й день после введения указанного препарата состояние больного заметно улучшилось. Объективно отмечалось стихание явлений перитонита, нормализовалась иммунограмма. В удовлетворительном состоянии больной был выписан домой.
Пример 5. Больной Ш. 42 лет находился на лечении в Главном военном госпитале им. Н. Н. Бурденко в августе 1998 г. Диагноз - хронический гломерулонефрит, хроническая почечная недостаточность III степени. 11.08.1998 г. произведена аллотрансплантация донорской почки. Послеоперационный период был осложнен некрозом терминального отдела мочеточника. На фоне повторных оперативных вмешательств у больного начался криз отторжения, который не удавалось купировать, несмотря на комплексное лечение с применением циклоспорина A и иммурана. В программу лечения был добавлен АТГ, приготовленный предлагаемым способом, в дозе 7 мг/кг/сутки. Всего проведено 6 внутривенных введений. Уже после второго введения препарата снизился индекс резистентности сосудов трансплантата, что свидетельствовало о начавшемся купировании криза отторжения. После курса лечения АТГ отмечено улучшение показателей крови. В удовлетворительном состоянии больной был выписан домой в ноябре 1998 г. До настоящего времени он находится под наблюдением врачей госпиталя. Трансплантированная почка функционирует удовлетворительно.
Пример 6. Больной Г. , 23 лет в январе-феврале 1996 г. находился на лечении в гематологическом отделении клиники Российского НИИ геронтологии с диагнозом апластическая анемия.
Больному проведен курс лечения АТГ. Препарат вводили внутривенно капельно в физрастворе. Разовая доза составляла 15 мг/кг веса тела. Курс лечения длился 5 дней. На 6-й день с начала введения АТГ у больного появились кожные высыпания типа крапивницы (реакция на введение чужеродного белка), которые купировались преднизолоном и антигистаминными препаратами. Через 3 месяца у больного улучшились показатели крови, он был выписан домой в состоянии клинико-гематологической ремиссии. До настоящего времени сохраняется стойкая ремиссия.
ЛИТЕРАТУРА
1. Лопухин Ю. М. , Молоденков М. Н. Гемосорбция. - М. - Медицина. - 1978. С. 31-34; 139-141.
1. Лопухин Ю. М. , Молоденков М. Н. Гемосорбция. - М. - Медицина. - 1978. С. 31-34; 139-141.
2. Авторское свидетельство СССР N 1121619 от 30.10.84.
3. Заявка N 96124332/14 от 26.12.96.
4. Авторское свидетельство СССР N 523696 от 05.08.76.
Claims (8)
1. Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения, представляющий собой фракцию иммуноглобулинов с содержанием IgG и IgM не менее 90%, глицин и забуференный физиологический раствор хлористого натрия рН 7,3-7,5, при следующем соотношении компонентов в 1 мл препарата:
Фракция иммуноглобулинов с содержанием IgG и IgM не менее 90% с активностью в лимфоцитотоксическом тесте - 1024-2048
Глицин - 15-25 мг
Забуференный физиологический раствор хлористого натрия рН 7,3-7,5 - До 1 мл
2. Антитимоцитарный глобулин по п. 1, отличающийся тем, что он представляет собой лиофилизированную форму.
Фракция иммуноглобулинов с содержанием IgG и IgM не менее 90% с активностью в лимфоцитотоксическом тесте - 1024-2048
Глицин - 15-25 мг
Забуференный физиологический раствор хлористого натрия рН 7,3-7,5 - До 1 мл
2. Антитимоцитарный глобулин по п. 1, отличающийся тем, что он представляет собой лиофилизированную форму.
3. Способ получения антитимоцитарното глобулина для внутривенного введения путем иммунизации животных клетками вилочковой железы человека и последующего фракционирования и очистки белков крови риванолом, отличающийся тем, что плазму иммунизированных животных истощают человеческой плазмой АВ (IV) группы крови, из смеси после фракционирования риванолом оставшийся риванол удаляют сорбцией активированным углем, а полученную надосадочную жидкость последовательно истощают путем обработки ее эритроцитами и тромбоцитами четырех групп крови человека, целевой продукт осаждают из надосадочной жидкости полиэтиленгликолем-6000, растворяют его в физиологическом растворе хлористого натрия, добавляют к нему глицин и проводят осветляющую и стерилизующую фильтрацию.
4. Способ по п. 3, отличающийся тем, что истощение плазмы иммунизированных животных проводят плазмой АВ (IV) группы крови человека при соотношении 20-25: 1-1,5 объем/объем.
5. Способ по п. 3, отличающийся тем, что фракционирование белков плазмы проводят 2%-ным риванолом при соотношении риванол : плазма= 0,2-0,6: 1 объем/объем.
6. Способ по п. 3, отличающийся тем, что истощение надосадочной жидкости проводят эритроцитами четырех групп крови человека при соотношении надосадочная жидкость : эритроциты, равном 1: 0,5-1 объем/объем.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что истощение надосадочной жидкости тромбоцитами человека четырех групп крови после истощения эритроцитами проводят из расчета 1,5-2 мл/л исходной плазмы крови иммунизированных животных.
8. Способ по п. 3, отличающийся тем, что конечная концентрация полиэтиленгликоля-6000 при осаждении целевого продукта составляет 10-12%.
9. Способ по п. 3, отличающийся тем, что после осветляющей и стерилизующей фильтрации дополнительно проводят лиофилизацию.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000100565/14A RU2178309C2 (ru) | 2000-01-12 | 2000-01-12 | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2000100565/14A RU2178309C2 (ru) | 2000-01-12 | 2000-01-12 | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2178309C2 true RU2178309C2 (ru) | 2002-01-20 |
| RU2000100565A RU2000100565A (ru) | 2003-07-10 |
Family
ID=20229201
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2000100565/14A RU2178309C2 (ru) | 2000-01-12 | 2000-01-12 | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2178309C2 (ru) |
Cited By (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2264826C1 (ru) * | 2004-12-30 | 2005-11-27 | Голубева Вера Леонидовна | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения |
| US7951368B2 (en) | 2007-06-25 | 2011-05-31 | Amgen Inc. | Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor |
| RU2519765C1 (ru) * | 2012-12-17 | 2014-06-20 | Вера Леонидовна Голубева | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения |
| US9243056B2 (en) | 2010-04-22 | 2016-01-26 | Biotest Ag | Process for preparing an immunoglobulin composition |
| RU2662172C2 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-07-24 | Акаев Ислам Умарович | Способ получения регенеративного ветеринарного препарата на основе экстракта мезенхимальных стволовых клеток и кондиционной среды |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4276283A (en) * | 1978-09-19 | 1981-06-30 | Immuno Aktiengesellschaft Fur Chemisch-Medizinische Produkte | Method of preparing an intravenously administrable immune globulin preparation containing antibodies and preparations produced according to this method |
| EP0085747A2 (de) * | 1982-02-08 | 1983-08-17 | Schweizerisches Serum- und Impfinstitut und Institut zur Erforschung der Infektionskrankheiten | Intravenös verabreichbares humanes Immunglobulin und Verfahren zu dessen Herstellung |
| US4541953A (en) * | 1981-02-12 | 1985-09-17 | Thimel Baumer Heidi | Preparation of anti-T-lymphocyte globulin |
| RU2122863C1 (ru) * | 1996-09-26 | 1998-12-10 | Институт ревматологии РАМН | Способ получения иммунорегуляторного глобулина |
-
2000
- 2000-01-12 RU RU2000100565/14A patent/RU2178309C2/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4276283A (en) * | 1978-09-19 | 1981-06-30 | Immuno Aktiengesellschaft Fur Chemisch-Medizinische Produkte | Method of preparing an intravenously administrable immune globulin preparation containing antibodies and preparations produced according to this method |
| US4541953A (en) * | 1981-02-12 | 1985-09-17 | Thimel Baumer Heidi | Preparation of anti-T-lymphocyte globulin |
| EP0085747A2 (de) * | 1982-02-08 | 1983-08-17 | Schweizerisches Serum- und Impfinstitut und Institut zur Erforschung der Infektionskrankheiten | Intravenös verabreichbares humanes Immunglobulin und Verfahren zu dessen Herstellung |
| RU2122863C1 (ru) * | 1996-09-26 | 1998-12-10 | Институт ревматологии РАМН | Способ получения иммунорегуляторного глобулина |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2264826C1 (ru) * | 2004-12-30 | 2005-11-27 | Голубева Вера Леонидовна | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения |
| US7951368B2 (en) | 2007-06-25 | 2011-05-31 | Amgen Inc. | Compositions of specific binding agents to hepatocyte growth factor |
| US9243056B2 (en) | 2010-04-22 | 2016-01-26 | Biotest Ag | Process for preparing an immunoglobulin composition |
| US9518110B2 (en) | 2010-04-22 | 2016-12-13 | Biotest Ag | Antibody preparations |
| RU2612899C2 (ru) * | 2010-04-22 | 2017-03-13 | Биотест Аг | Способ получения композиции иммуноглобулинов |
| US10059759B2 (en) | 2010-04-22 | 2018-08-28 | Biotest Ag | Antibody preparations |
| US10954290B2 (en) | 2010-04-22 | 2021-03-23 | Biotest Ag | IgG, IgA and IgM antibody preparations, method of making and method of use in treatment |
| RU2765738C2 (ru) * | 2010-04-22 | 2022-02-02 | Биотест Аг | Способ получения композиции иммуноглобулинов |
| US11780909B2 (en) | 2010-04-22 | 2023-10-10 | Biotest Ag | Methods of treating viral infections by administering an antibody preparation comprising IGG, IGA and IGM |
| RU2519765C1 (ru) * | 2012-12-17 | 2014-06-20 | Вера Леонидовна Голубева | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения |
| RU2662172C2 (ru) * | 2016-12-13 | 2018-07-24 | Акаев Ислам Умарович | Способ получения регенеративного ветеринарного препарата на основе экстракта мезенхимальных стволовых клеток и кондиционной среды |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2009227872B2 (en) | Method and system to remove soluble TNFR1, TNFR2, and IL2 in patients | |
| ES2199234T3 (es) | Procedimiento para la eliminacion simultanea del factor alfa de necrosis de tumores y de lipopolisacaridos bacterianos a partir de un liquido acuoso. | |
| ES2032802T5 (es) | Sucedaneo de sangre semisintetico extrapuro. | |
| Cheung et al. | Compartmental distribution of complement activation products in artificial kidneys | |
| JPH0761956B2 (ja) | 静注可能な免疫グロブリン | |
| DK175473B1 (da) | Antiinflammatorisk faktor, fremgangsmåde til isolation og anvendelse heraf | |
| Barandun et al. | Clinical tolerance and catabolism of plasmin-treatedγ-globulin for intravenous application | |
| JP2002504831A (ja) | 自己抗体の除去による心筋症の処置 | |
| BG61231B1 (en) | A method for isolating factor viii | |
| RU2178309C2 (ru) | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения | |
| JPS6053009B2 (ja) | 肝炎ウイルスｂによる急性または慢性の感染治療用の新規医薬 | |
| JPH0585529B2 (ru) | ||
| RU2264826C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения | |
| COOKE et al. | Cryoprecipitate concentrates of factor VIII for surgery in hemophiliacs | |
| Bendien et al. | Investigations on hemophilia | |
| RU2019190C1 (ru) | Способ получения моноспецифической антисыворотки | |
| RU2519765C1 (ru) | Способ получения антитимоцитарного глобулина для внутривенного введения | |
| RU2000100565A (ru) | Антитимоцитарный глобулин для внутривенного введения и способ его получения | |
| RU2287345C2 (ru) | Средство для стимуляции выработки фактора viii свертывания крови | |
| RU2188654C1 (ru) | Препараты крови для трансфузии и способ их получения | |
| RU2092107C1 (ru) | Способ лечения печеночной недостаточности у больных с асцитом | |
| RU2797844C1 (ru) | Способ дискретного плазмафереза | |
| JPS625131B2 (ru) | ||
| JPS6236483B2 (ru) | ||
| Griswold et al. | Glomerular localization of antigen and antibody in rabbits following intravenous administration of serum cryoproteins from homologous animals with acute serum sickness |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20050113 |