JPS6053009B2 - 肝炎ウイルスｂによる急性または慢性の感染治療用の新規医薬 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は肝炎ウィルスＢ（ウィルス旧またはウィルス
Ｂとも称される）による急性及び慢性の感染を治療し得
る新規な医薬を、その目的とするものである。

大部分はウィルスＢによる肝炎に冒された患者の血清を
原料として、多分ウィルスＢに特異的な抗原であつてオ
ーストラリア抗原と称される抗原が同定されて以来、ウ
ィルスＢによる肝炎に対するワクチンを製造する目的で
、この抗原を、精製したりまた場合によつてはその力を
弱めたりして使用することが提案されてきた（フランス
特許第７０．３４５７４号明細書参照）。

オーストラリア抗原は肝炎ウィルスＢそれ自体を示すも
のではない。

事実、オーストラリア抗原を有するが症状は出ない供血
者の大部分については、彼等の血清中でその中を循環し
ているウィルスは皆無かまたはほんのわずかであるとい
うことが確認されている。オーストラリア抗原を保有す
る数多くの患者の血清には別の抗原が含まれていること
が知られており、これは抗原−ｅ、略してＡｇ−ｅとい
われているが、この点についてはマグニウス等の文献〔
Ｌ．Ｏ．Ｍａｇｒｌｌｕｓ及びＡｋｅＥｓｐｍａｒｋ．
．Ａｃｔａ．ｐａｔｈ．ｍｉｃｒＯｂｌＯｌ．ｓｃａｎ
ｄ．、ＳｅｃｔｌＯｎＢ８Ｏ、３３５〜３３７（１９７
２）〕を参照されたい。

水溶性蛋白質（ｅ１、Ｅ２・・・ ・・と称する）の集
合体として示される抗原複合体を抗原−ｅと呼ぶことに
するが、これらの水溶性蛋白質は通常の場合にヒトの血
清中には存在していないものであるけれども何人かのオ
ーストラリア抗原保有者の血清中、特に慢性肝炎に冒さ
れた人には存在していることがわかり、また、血液透析
（Ｈ６ｍＯｄｉａｌ，８≦ｍｌを受けた患者、免疫機能
が低下した（ＩｍｍｕｎＯｄ≦ＰｒｉＩｎＪ）患者、モ
ンゴリスムスに冒された患者にも存在していることが見
出された。

これらのいろいろな抗原決定因子は免疫学的にみてオー
ストラリア抗原とは異るものである。本発明においては
抗原−ｅを構成する蛋白質と反応する抗体を抗体Ａｎｔ
ｉ−ｅということにする。

これらの抗体はウィルスＢによつて汚染された患者の血
清、特に、肝臓病をわずらつてはいないがオーストラリ
ア抗原は慢性的に保有している人の血清中に見ることが
できる。抗原−ｅを投与することによつて、抗体頷Ｔｉ
−ｅの生成を伴なつて、免疫学的応答をひき出せるとい
うことが判明した。

現在次のことも判明している。

ウィルスＢによる急性又は慢性の感染に悩まされている
患者に抗体Ａｎｔｉ−ｅを投与することによつて特に肝
臓組織の症候及び病害を消失せしめることができるので
ある。また、抗体Ａｎｔｉ−ｅを抗原−ｅ及び（又は）
ウィルスＢを含有する生物液体に加えることによつて、
これら液体の感染性を完全に消滅させるか、または感染
性を極度に弱めることができるということも判明した。

実際のところ急性肝炎の積極的な治療法は存在していな
いし、特にすぐ死に到るような悪化を止めたりまた肝硬
変へつながる慢性的な進行を止めたりすることを可能に
する治療法も存在していな゛い。

潜状しているかまたはしていないウィルスＨＢによる慢
性感染（ウィルスＨＢによる慢性肝炎、結節性動脈周囲
炎、糸球体腎炎）においてもこれと同様である。

この第２番目のグループに属する上記の病気に対して、
消炎剤（コルチコステロイド）や免疫制止（Ｉｍｍｕｒ
ｌＯｓｕｐｐｒｅｓｓｅｕｒ′）剤を使用しても炎症反
応が鎮まるだけであつて何も有利な作用を及ぼすもので
はなく、これらの病気のもとになつているウィルス感染
については何の力も有するものではなくて、これとは逆
に、これら薬剤の使用によつてこれらの病気がむしろ長
びくことが助長されるのである。

ウィルスＢによる肝炎の治療における抗（有）Ｎｔｉ一
ｅの有用性の発見は意外なことであつてその理由は次の
とおりである。

つまり肝炎ウィルスＢ表面の抗原（抗原ＡｇＨＢｓと称
される）へと方向づけられている抗体■Ｔｉ−ＨＢｓを
含有する血漿を、ヒトまたはチンパンジーに注入する試
みがなされてきたが、現在までのところいつでも失敗に
終つていたからである。従つて、抗体釦Ｔｉ−ＨＢｓ含
有血漿を使用し得るとされていた条件のもとでは、抗体
■Ｔｉ−ＨＢｓを多量に含む結果として選択された血漿
を注入することによつて治療作用が得られるとはどうし
ても思えなかつたのである。この点については例えば次
の文献を参照されたい；Ｒｅｅｄｅｔａｌ．、Ｌｌｎｃ
ｅｔｌ２、１３４７（１９７３）、Ｃ．Ｇ．ＴｒｅｐＯ
ＮＴｌｌｅＡｍｅｒｉｃａｎＪＯｕｒ′ＲｌａｌＯｆＵ
ｌｅＭｅｄｉｃａｌＳＣｉｅｒｌＣｅＳｌ２７Ｏｌ２４
８（１９７５）及び゜゜肝炎Ｂ免疫グロブリンによる劇
発性肝炎の治療：協同研究゛ＧａｓｔｒＯｅｎｔｅｒＯ
ｌＯｇｙｌ６ｆＫＡ９８−７５２（１９７４）。この発
明は、新規な医薬をその目的としているのであるが、該
新規医薬は、生理的に許容しうる媒質内に抗体Ａｎｔｉ
−ｅを含むガンマグロブリンのフラクシヨンを含有する
ものであり、且つ該フラクシヨンは血清もしくは血液プ
ラズマまたは胎盤工キズを出発原料として得たものであ
ることを特徴とするものである。次のことは既知となつ
ている。

即ち抗原の投与に対応して器官によつて生成する抗体は
一群の蛋白質から成るものであるが、この蛋白質は数多
くの共通の性質を有していてガンマグロブリンと呼ばれ
ている。抗体Ａｎｔｉ−ｅを含有するガンマグロプリン
フラクシヨンはガンマグロブリンを調製するための古典
的な方法によつて得られることができ、その出発原料は
、その中に抗体Ａｎｔｉ−ｅが存在することが予じめ確
認されている血清、血漿又は胎盤工キズである。

これら古典的な方法は特に次の諸文献に記載されている
：Ｈ．Ｊ．ＣＯＨＮｅｔａＩ．．Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．、錫
、４５９（１９４６）；Ｊ．Ｌ．ＯＮＣＬＥＹｅｔａｌ
、Ｊ．Ａ．Ｃ．Ｓ．７ｌ、５４１（１９４９）；Ｈ．Ｌ
．ＴＡＹｌＯＲｅｔａｌＪ・Ａ．Ｃ．Ｓ．、７８、１３
５６（１９５６）；Ｊ．ＨＯＲＫＪＳＬ及びＲ．ＳＭＥ
ＴＡＮＡ，．ＡｃｔａＭｅｄｉｃａＳｃａｎｄｉｎａｖ
ｉａｌ■０１．ＣＬＶ１６５（１９５６） ，及びＰ．
Ｋ［．５ＴＬＥＲ．Ｎｓ．ＮＩ′ＹＳＣＨＭＡＮＮ，．
ＶＯｘＳａｎｇ．、７、４１４（１９６２）。抗体Ａｎ
ｔｉ−ｅは、これらの抗体が自然発生的に形成された患
者から発見できるし、また精製して感染の危険性をすべ
て除去した抗原調製品を用いて故意に免疫化し、免疫学
上の応答の結果として抗体Ａｎｔｉ−ｅが形成された患
者からも発見することができる。免疫拡散法、電気免疫
拡散法又はその他すべての古典的血清学技術（放射免疫
定量及びその他）を用い、特に抗原−ｅ含有試薬によつ
て抗体Ａｎｔｉ−ｅの存在を検出することができる。免
疫的応答の結果生成する抗体■ｔｌ−ｅの生成を助長す
るため、また該抗体の存在を検知するためには、一部又
は全部を精製した抗原−ｅ調製品を処理するのが好まし
い。この精製抗原−ｅ調製品は例えば多抗性物質担体か
らなる免疫吸着剤上での親和クロマトグラフィによつて
精製することができる。この場合に該多孔性材料の表面
上は、結合剤を介して該担体に結合せしめた抗体頷Ｔｉ
一ｅ粒子からなる被覆物によつてコーティングされてい
る。上記担体としては例えばセフアローズ （Ｓ≦ＰｈａｒＯｓｅ）が挙げられ、結合剤としては例
え”ばハロゲン化シアンが挙げられる。

特に担体としてはセフアローズ小を使用するのが良く、
結合剤として好適なものは臭化シアンである。免疫吸着
処理において使用可能であるとされている既知の多孔性
担体であればどのようなもので・も使用できることは勿
論のことであるし、結合剤としてもジアルデヒドのよう
に二官能性誘導体からなる既知の結合剤が使用され得る
ことも勿論である。

抗原−ｅを含む精製フラクシヨンは少なくとも）次に記
載する各段階の１つからなる方法によつて得られること
もできるし、場合によつては免疫吸着段階と組合わせて
もよい：ゲル淵過段階； 膜による限外ろ過段階、但しその膜の孔の大きさは分子
量３００００以上の分子を保持できるような大きさであ
る：予じめ例えばシヨ糖勾配を用いるゾーン超遠心分離
段階特に次の特徴を有する方法を用いるのがよい。

抗体Ａｎｔｉ−ｅを結合したセフアローズを含有したカ
ラムをＰＨ８．４のボレート バッファで平衡化し、同
一バッファ中に抗原−ｅを含有する溶液をカラム内に添
加し、最大吸着が助長されるのに充分な時間だけこれら
を接触させ、そしてＰＨｌＯ．８〜１０．９のホスフェ
ート バッファを用いて抗原−ｅを溶出するのである。
そこで抗原−ｅ含有フラクシヨンを集めるのであるが、
抗原−ｅ蛋白質の存在は例えば２８０ｒ１７Ｔ１．ての
光学密度を測定することによつて決定される。

続いて塩酸を加えて、精製された抗原−ｅフラクシヨン
のＰＨを生理的ＰＨに戻してやり、そして、希望するの
であれば、これらのフラクシヨンを限外ろ過によつて濃
縮し、次いで免疫拡散（ＩｍｍｕｎＯｄｊｆｆｕｓｉＯ
ｎ）によつてＡｇ−ｅの存在を確かめるのである。

上述したように抗原−ｅ含有フラクシヨンはシヨ糖密度
勾配ゾーン超遠心分離（Ｕｌｔｒａ−Ｃｅｎｔｒｉｆｕ
？ＴｉＯｎｚＯｎａｌｅｅｎｇｒａｄｉｅｎｔｄｅｓｕ
ｃｒＯｓｅ）によつても調製されることができる。

このためには出発物質として脱線維素処理した血清又は
血漿を用い、これを２〜１皓、好ましくは５倍に濃縮す
るであるが、この場合に濃縮処理としては例えばポリエ
チレングリコールによつて蛋．白質を沈殿させそして緩
衝水溶液中に再溶解する方法が挙げられる。このように
して得られた溶液は、線状勾配１０〜２７％のシヨ糖を
含有する管の上面にこれをのせ、そして４〜８゜Ｃの温
度で１８〜２５時間１９０００〜２２０００回転／分で
予備的なゾーン遠心．分離にかける。続いて管底部から
のフラクシヨンを集め、抗原−ｅ含有フラクシヨンを合
わせる。更に精製度を上げるためにこの超遠心分離をく
り返してもよく、そしてゲル淵過によつて完全なものと
するのもよい。続いてホスフェートバッファ・を用いて
、合わせたＡｇ−ｅフラクシヨンを透析すると良い。続
いて所望により３００００以上の分子量を有する生成物
を保持できる程度の大きさの孔を有する膜を備えた淵過
器を用い、限外淵過処理することによつてこれを濃縮す
ることもできる。このようにして得られた溶液は加熱、
フオルモリゼーシヨン（ＦＯｒｍＯｌｉｓａｔｉＯｎ）
、紫外線による照射、又はその他すべての照射処理とい
つた常法によつて、時として存在する感染性残渣を除去
するための処理を注意して行つた後で、該溶液は皮下又
は筋肉内投与によつてヒトに対して投与されることがで
きる。このようにして生理学的に許容できる抗原−ｅフ
ラクシヨンが得られるのである。Ｌ 希望する人に対し
て抗体の応答をひき起すためには、生理学的に許容でき
る抗原−ｅフラクシヨンは、それのみで投与しても良い
し、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウムまたは天
然もしくは人工のすべての佐薬といつた佐薬と一諸に投
与されてもよい。抗原−ｅを含有した精製フラクシヨン
を調製するための出発物質は、抗体Ａｎｔｉ−ｅと沈殿
反応を生する脱線維素処理した血漿又は血清に由来する
溶液である。

この場合に抗体頷ｔｌ−ｅの存在の確認及び分離は後述
する方法によつて行われる。前記の文献（Ｍａｇｎｉｕ
ｓ及びＥｓｐｍａｒｋの文献）から明らかになつたこと
であるが抗原−ｅは、急性の肝炎Ｂに冒された病人の血
液中に一時的に表われてくるし、次のような人々の血液
中には存続的に表われている。即ち血液透析したり慢性
的な肝炎Ｂにかかつた数多くの患者の血液の中、及び特
にいくつかの民族集団又はいくつかの地域（アジア）内
での、比率については変動があるけれども、症状はない
オーストラリアＡｇ保有者の血液の中には存続的に抗原
−ｅが現われている。従つて抗原−ｅの精製フラクシヨ
ンを調製するためにはこれら供与体の血清又は血漿を利
用することになり、場合によつてはプラズマフアレーゼ
（Ｐｌａｓｍｐｈ？ｒ≦Ｓｅ）によつて採取したものを
使用することになる。前記した文献（Ｍａｇｒｌｉｕｓ
（５Ｅｓｐｍａｒｋ）が記載しているように、免疫拡散
または向流電気泳動（ＣＯｎｔｒｅ≦１ｅｃｔｒ０ｐｈ
０ｒ≦Ｓｅ）によつて抗原−ｅの存在を明らかにするこ
とができるということが想起される。

抗原−ｅの存在を検出するために上述した様な方法によ
つて精製された抗原−ｅ調製物を完全なフロイントの補
助液またはその他ずべての佐薬と混せ、これを動物に対
して少くとも１回投与し、好ましくは複数回投与し、こ
の場合に注射による投与はこれをおよそ１ケ月毎に行つ
て例えば３ケ月間続け、このようにして抗原−ｅ調製品
を動物に対して投与することからなる方法によつて抗原
検出用試薬を作ることもできる。

精製抗原−ｅ／フロイントの補助液からなる配合物を毎
月投与するのである。このようにして動物体内に抗体■
Ｔｉ一ｅを生成せしめる。そこで動物の血液を一部又は
全部採取して血清を集める。

通常のヒトの蛋白質に対して悪い影響を与えるような抗
体をこの血清が含有していないことがわかる。免疫拡散
によれば、ヒトを起原とする血清に抗原−ｅが含まれて
いるときには、上記によつて得られた血清からなる試薬
はヒトの血清と接触すると沈殿直線を与えることになろ
う。

試験されたヒトの血清が、上記試薬との接触によつて沈
殿直線を与える場合には、この検体は感染しており、恐
らくしつこい肝炎にかかつているはずである。

この方法によつて肝炎の急性相中に抗原−ｅの存在がし
ばしば明らかになつたり、とりわけ抗原一ｅの存続が明
らかになつたりすれば、それは慢性肝炎へと進行する危
険性が増大していることを示唆しているのである。

またひどく惑染した患者を発見することもできるし、慢
性肝炎へと進行する危険性も早期に且つ簡単に見つけ出
すこともできる。

抗原−ｅの存在を明らかにするための抗体■Ｔｉ−ｅの
起原としてはヒトでもよいしまた動物てもよい。

ヒト用のワクチン調製のために抗原−ｅを精製するには
ヒトを起原とした抗体Ａｎｔｊ−ｅと結合した担体を使
用するのが好ましい。抗体■ｔ１−ｅの存在は既述した
文献（ＭａｇｎｉｕｓとＥｓｐｍａｒｋ）が指摘してい
る方法によつて明らかにすることができるし、その他す
べての血清学的方法によつてもそれは可能である。

抗体Ａｎｔｉ−ｅは例えばこの抗体の存在が予じめ検知
されている血清をゾーン遠心分離することによつても得
られるが、ガンマグロブリンを調製するための古典的方
法による方が好ましく、この点については、上記した参
考文献を再度参照されたい。

既知のエタノール分画、硫安分画及び（又は）りパノー
ル（ＲｉｖａｎＯり分画といつた技術が利用できる。例
えば硫安４０％飽和溶液を添加して抗体を沈殿させ、こ
の沈殿を溶解させた後に硫安を除去するために透析処理
を行うことができる。

本発明をこれのみに限定することなく、これら既知の方
法を説明するために、後記する実験の項においてエタノ
ール分画の例について述べることにする。

本発明の医薬は通常は抗体頷ｔ１−ｅ精製フラクシヨン
であつて、該フラクシヨンからは、普通の血液中に存在
する（ガンマグロブリン以外の）他のすべての蛋白性構
成分及びすべての感染性汚染物は取り除かれてしまつて
いる。

しかし、本発明の医薬は、この抗体の存在が既知となつ
ている血清又は血漿をそのまま構成成分とすることもで
きる。

本発明に係る活性成分として利用てきる抗体Ａｎｔｉ−
ｅを含有するガンマグロブリンは、ガンマグロブリンを
静脈から投与できるように変化加工するための古典的な
処理に付すこともてきる。

この処理は、ガン了グロブリンの抗補体能（ＰＯｕｖＯ
ｉｒａｎｔｉｃＯｍｐｌｅｍｅｎｔａｉｒｅ）、抗原一
抗体コンプレックスのように補体と結合しうるような集
合体の存在による抗補体能を除去または減少させること
からなるものであることは知られているところである。

静脈経由で注入できるガンマグロブリンを得るための別
の方法も知られている。その方法としては例えば、ガン
マグロブリンをＰＨ４でインキユーベートする方法とか
、ペプシン、パパイ“ンまたはプラスミンのような酵素
で消化させる方法が挙げられる。本発明の医薬は特に急
性のウィルスＢによる感染または肝炎の間中、この治癒
を促進したり慢性的に進行したりするすべての危険性を
予防する目的でこれを投与することができる。

この医薬は筋肉注射または静脈注射によつて注入される
ものである。

ガンマグロブリンＡｎｔｉ−ｅによる治癒は、それのみ
を用いて行われてもよいし、抗アレルギーｌ剤、消炎剤
及びその他各種薬剤と組合わせて行われてもよい。

生物学的及び血清学的結果に応じて１回の注射で済ませ
てもよいし、連続して複数回注入することもできる。ま
た本発明の医薬はウィルスＢによる各種肝炎及びその他
すべての慢性感染の期間中投与されてもよい。

これらの病気は通常の臨床学的方法、生物学的方法、組
織学的方法、及び血清学的方法によつて診断されるので
あるが、とりわけ〜−ＨＢｓの検出によつて診断がなさ
れる。またこれらの病気は血清学的に見ると、抗体Ａｎ
ｔｉ−ｅの充分な応答がないことが特徴であるが、Ａｇ
−ｅが存続しているという特徴もしばしば見られる。ひ
どい慢性肝炎は最も重い外観を呈するので抗体Ａｎｔｉ
−ｅによる治癒を余儀なくされる。

このような慢性病の場合には抗体Ａｎｔｉ−ｅの投与は
必ず更に長びくものであつて、静脈投与に頼らねばなら
ない場合がしばしばとなることもあろうし、静脈投与に
適合しているガンマグロブリンの代りに抗体Ａｎｔｉ−
ｅ含有血漿を用いることもできよう。抗原−ｅの量が多
い場合にはこの抗原一ｅを予め除去する処理がとられよ
う。この予備的処理としては、その間中、〜−ｅ含有血
漿がＡｇ一ｅ及びオーストラリア抗原の欠如したイソグ
ループ（ＩｓＯｇｒＯｕｐｅ）血漿に取つて代られるか
、もしくはＡｇ−ｅが例えば抗体Ａｎｔｉ−ｅと結合し
た多孔性担体を有する適宜なフィルター上に保持されて
いる間中、連続的にプラズマフアレーゼ処理する方法、
または予め除血注入（ＥｘｓａｎｇｕｉｎＯ一Ｔｒａｎ
ｓｆｕｓｉＯｎ）処理する方法がある。手術するには、
患者の血漿フラクシヨンに代えて抗体Ａｎｔｉ−ｅに富
んだ血漿またはその他すべてのヒトの蛋白性溶液（アル
ブミン・・・・・・）、または静脈投与用に処理された
その他のガンマグロブリンＡｎｔｉ−ｅ含有物を用いる
ことになろう。抗アレルギー薬及び消炎剤（コルチコス
テロイド、抗ヒスタミン剤、その他）を投与することに
よつて、この手術中における厄介な反応をすべて除去す
ることができる。この手術は失敗すれば何回もくり．返
されることができるし、とりわけ後に行うガンマグロブ
リンＡｎｔｉ−ｅによる処置によつて完結されることの
できるものである。この治癒法はその他のすべての自然
療法、化学療法、免疫療法と組み合わされてもよい。

抗体■Ｔｉ−ｅによる慢性肝炎の治療については静脈投
与または筋肉内投与があり、しかもこれらの処置は除去
一注入をするかしないかてわかれ、且つ他の処置と合わ
せて行うかこれのみを単独で行うかでわかれ、各種の形
態が考えられるけれども、どの治療法を採るかの指示は
、患者の完全な免疫生物学的及び臨床学的統計をとつた
結果、決定されることになる。

患者の肝臓及び血清中にウィルスＨＢｌそれらの粒子、
これと結合した抗原（Ａｇ−オーストラリア、Ｎ−１１
ＢＣ，．Ａｇ−ｅ）が存在することは、血清学的検査、
並びに、免疫螢光（ＩｍｍｕｎＯｆｌｕＯｒｅｓｃｅｎ
ｃｅ）または電子顕微鏡を用いｌる肝臓のバイオプシイ
による研究によつて明確にされることになろう。

これら３種の抗原に対する体液及び細胞の免疫応答に関
する研究は、抗体の血清滴定（ＴｉｒａｔｉＯｎｓｅｒ
ＯｌＯｇＩｑｕｅ）及ひこれら３種の抗原に対する感受
性克進遅延試験（白血球の移動阻害及び時として、精製
し且つ非感染性のオーストラリア、ＨＢＣｌ及びｅの３
種の各抗原とのツベルクリン反応）によつて評価される
ことができよう。

患者の全体的な免疫応答状態を探診した結果と同様に、
これらすべての試験結果は採用すべき治療法のタイプを
決定するのに役立つものであり、その薬用量はガンマグ
ロブリンによる治療を行うための薬用量を決定するのに
通常用いられる方法によつて決定されるものである。自
然発生的、輸血後、その他によるウィルス旧感染の予防
処置として、適当な使用量でガンマグロブリンＡｎｔｉ
−ｅを使用することができよう。

この場合に施用方法としては、ヒトに注射するときウィ
ルスＨＢを中和する目的で時として分画処理を行うこと
があるが、この分画の前又は後に、危険にさらされてい
る患者にこれを注射してもよいし、また血液もしくはそ
の誘導体を添加してもよい。前述したように実際には、
抗原−ｅは蛋白質の集合体を呈する抗原複合体である。

これらの蛋白質の内の２つはアラン等（Ｗｌｌｌｌａｍ
ｓＡＬＬＡＮ及びＧｅＯｒｇｅＬＥＢＯＵＶＩＥＲ）に
よってＡｇ−ｅ１及び鮪−Ｅ２と決められた。彼等はこ
れを１９７５年４月１４日〜１８日にバリの国立輸血セ
ンター（ＣｅｎｔｒｅＮａｔｉＯｒｌａｌｄｅＴｒａｎ
ｓｆｕｓｉＯｎＳａｎｇｕｉｎｅ）で開かれた抗原ＨＢ
ｓのサブタイプ（ＳＯｕｓ−Ｔｙｐｅ）に関する国際シ
ンポジウムで発表し、そして研究報告〔ＢｉｂｌｌＯｔ
ｈｅｃａＨｅｍａｔＯｌＯｇｉｃａ．．欽、６５〜７０
（１９７６）〕を出している。例えばＥ３・・・・・・
等と称することもできるという人々も居る。

抗原−ｅ保有者において各種抗原一ｅの比率はそれぞれ
変動があることが確認された。同じく各種抗体Ａｎｔｉ
−ｅ１、Ａｎｔｉ−Ｅ２・・・・・・等の比率も変動す
るものである。抗原複合体構成々分．の１つに富んだＮ
−ｅ調製品を用いて検体を免疫化させたり、また対応す
る抗体の内の１つに富んだ抗体Ａｎｔｉ−ｅを既に保有
している検体の血漿を選んだりすることによつて、これ
ら各種抗体の内の１つを多量に含むガンマグロブリン
フラクシヨンを得ることができる。本発明は例えば抗体
頷Ｔｉ−ｅ１またはＡｎｔｉ−Ｅ２に富んだこれらガン
マグロブリン フラクシヨンをもその範囲内に含むもの
である。

抗体Ａｎｔｉ−ｅを含有するガンマグロブリン フラク
シヨンの応用としては上記の外に、感染性ウィルスＨＢ
及び抗原−ｅを現に含有しているかまたは含有する恐れ
のあるすべての生物液体から、抗原−ｅ及び感染性ウィ
ルスＨＢを完全に除去する処置が挙げられ、その処置の
ためには例えば該一生物液体に抗体Ａｎｔｉ−ｅを加え
るといつたように、抗体Ａｎｔｉ−ｅと接触させること
によつて、凝集及び（又は）中和させる処理をすればよ
い。

例えば大急ぎで潅注に使用せねばならないものであつて
、それが無害であること、つまりその現時点においては
ウィルスＨＢの不存在が確認されていないような、血液
、血漿、又はその他すべての生物液体を入れた容器内に
、抗体■Ｔｉ−ｅを含有したガンマグロブリン フラク
シヨンを添加すればよいのである。またその表面を抗体
Ａｎｔｉ−ｅ粒子て被覆した免疫吸着剤上に該生物液体
を通してもよい。このためには例えば部分的又は全部を
精製した抗原−ｅ調製品を得る目的で既に述べたのと同
様の親和クロマトグラフィを用いることができる、つま
り抗体頷Ｔｉ−ｅを結合させた多孔性担体上でクロマト
グラフィー処理すればよいのである。吸着された抗原を
溶出することによつて行われる担体の再生処理の結果、
Ａｇ−ｅ調製品がまた得られることになり、その利用法
については先述の記載を想起されたい。この場合に本発
明の医薬は、潅注（Ｐｅｒｆｕｓｅｒ）すべき血液、血
漿、又はその他すべての生物液体からなるものであつて
、この中に抗体Ａｎｔｉ−ｅ含有ガンマグロブリン フ
ラクシヨンを添加しておいたり、あるいは抗体Ａｎｔｉ
−ｅ粒子を被覆した免疫一吸着剤上にこれらのものを通
過させておいたりしておくものである。

これら生物液体に添加するガンマグロプリンフラクシヨ
ンは静脈投与ができるように処理されていても良いこと
は勿論である。また本発明はウィルスＢによる慢性惑染
及び肝炎を治療する方法もその目的としており、該方法
の特徴は、先に定義した医薬を、感染した生体に対して
筋肉内投与又は静脈投与によつて投与するものである。

次に本発明の諸例について記載するけれども本発明はこ
れらの例のみに限定されるものではない。

例１ ゾーン超遠心分離による抗厚−ｅの精製 例えば好ましくは抗原−ｉに対する免疫拡散による同定
反応によつて、上記したように抗原−ｅ保有者の血漿を
選定する。

この血漿に塩化カルシウムを加え２峙間放置してフィブ
リンを除去する。

ＰＨ７、０．０２％のリン酸水素二ナトリウム バッフ
ァ中の最終濃度が１３％（重量／容量）となるまで分子
量６０００〜７５００ポリエチレングリコール（ＣＡＲ
ＢＯＷＡＸ６ＯＯＯ）を加える。＋４℃で２橋間経過し
た後に注意深くデカンテーシヨンを行つて上澄と沈殿と
を分離する。

続いて０．２５Ｍ酢酸ナトリウム バッファ中で該沈殿
のＰＨを５に調節して、沈殿の最大部分であるポリエチ
レングリコールを除去する。＋４℃で２４Ｊ！Ｉｆ間経
過した後に４００（２）転／分で遠心分離を行つて沈殿
を分離する。この上澄には鮪−ｅが含まれているのでこ
の上澄をセフアデツクスＧ２ＯＯのカラム上に置き、各
フラクシヨンを集める。免疫拡散及び（又は）電気免疫
拡散の結果Ａｇ−ｅが陽性であることがわかつたフラク
シヨンは、これを合わせた後にＰＭ３ＯＯＯＯフィルタ
ーを備えたアミコン（ＡｍｉｃＯｎ）社の超遠心分離機
にかけて濃縮する。

冫 このようにして得られた濃縮溶液は３本の管の上面
に置くのであるが、これらの管の中にはＰＨ７．４のホ
スフェート バッファ中、１０〜３０％（重量／重量）
のシヨ糖の線状勾配が得られるようシヨ糖が入れられて
いる。

そして４℃で１ＳＩ間の間２００００回転／分で予備的
にゾーン遠心分離にかける。管の底部から３ｍ１だけフ
ラクシヨンを集める。抗原−ｅ陽性のフラクシヨン（例
えば免疫拡散試験による）を合わせる。Ａｇ−ｅ陽性フ
ラクシヨンについて同様にして遠心分離をくり返して純
度を増加させる。続いてＰＨ７．４のホスフェートバッ
ファを用いる透析を２＠間行い、次いでメンブランフイ
ルタを用いる限外ろ過によつてこれを濃縮するのである
がこのメンブランの孔の大きさは分子量３００００以上
の分子を保持できるようなものである。このようにして
得られた抗原−ｅ溶液はこれを熱、フオルモール、β−
プロビオラクトンまたは紫外線照射の作用によつて注意
しながらその力を弱め、定量し、そして抗原としての力
を消失させることなく、時として存在する感染性残渣を
すべて除去する操作に付した後にＡＣａｎｔｉ−ｅの生
成をひき起させるために、この抗原−ｅ溶液を用いるこ
とができる。

例２ 親和クロマトグラフィによる抗原−ｅの精製（ａ）免疫
吸着剤セフアローズ／Ａｎｔｉ−ｅの調製Ａｎｔｉ−ｅ
陽性であることが判明している血清からガンマグロブリ
ン フラクシヨンを調製するにはＰＨ７、最終濃度４０
％の硫安による沈殿処乏理を行う。

この沈殿は０．１Ｍ（７）ＮａＨＣＯ３バッファに溶か
され、そして０．５ＭＮａＣ１−０．１ＭＮａＨＣ０３
溶液を用いて透析処理される。Ａｎｔｉ−ｅガンマグロ
ブリンはキユアトルカ等の方法（ＣＵＡＴＲＥＣＡＳ及
びＡＦＩＮＳＥＮ３ＡＮＮＲＥＶＢｌＯＣＨＥＭ４Ｏ：
２５９、１９７１に記述された方法）に従つて臭化シア
ンで活性化したセフアローズ４Ｂ（スウエーデン、ＰＨ
ＡＲＭＡ一ＣＩＡ−ＦＩＮＥＵＰＳＡＬＡ）に結合させ
られる。ＢｒＣＮて賦活した４ｙのセフアローズａはこ
３れを膨潤させた後にガラスフィルタ上で０．００１Ｍ
のＨＣｌを用いて３紛間染滌する。

洗滌後直ちにこのゲルは２００Ｔｎｇのガンマグロブリ
ンＡｎｔｉ−ｅの重炭酸塩溶液と混合されそして、室温
で２時間攪拌される。 ４１続いて
このゲルは、０．５Ｍ（７）ＮａＣｌを含有する０．１
ＭＮａＨＣ０３溶液６００ｍ１で洗滌され２５℃で２時
間の間、ＰＨ８、１Ｍのエタノールアミン溶液５０ｍ１
で処理される。このようにして結合処理を受けたセフア
ローズはＰＨ４．Ｏの１ＭＮａＣ１−０．１Ｍアセテー
トバッファ及びＰＨ８．４の１ＭＮａＣ１一０．１Ｍボ
レートバッファを用いて、後で、交互に洗滌処理される
。この後者の方の洗滌処理は０．５Ｍｆ）ＮａＣｌ及び
０．００５ｒ！４のＥＤＴＡを含有するＰＨ＆４の０．
１Ｍホウ酸塩バッファを使用して行われる。

（ｂ）抗原−ｅの分離 Ａｎｔｉ−ｅと結合したセフアローズの２刈１ｃｆｆ１
のカラムを用いる。

室温のもとでバッファによりこのカラムを平衡化する。
例１において得られた抗原を含有し且つバッファを用い
て１１２に稀釈した溶液を２５ｍ１加え、そして最大吸
着が助長されるように３ｒＣに１時間放置する。続いて
このカラムを４℃に保ち、そしてこれらフラクシヨンの
光学密度が零になるまでホウ酸塩バッファで洗滌する。
ＰＨｌＯ．＆０．１Ｍのホスフェートバッファを用いて
、カラムから抗原−ｅを溶離する。２８０ｒ１７Ｔ１，
での光学密度を測定して抗原一ｅの存在が確かめられた
フラクシヨンを直ちにボのＨＣｌを加えて生理的ＰＨに
もつていく。これらのフラクシヨンを全部集め、アミコ
ンＰＭ３Ｏフィルタ上で限外泊過して濃縮する。試験を
行つた結果、このようにして得られたものの中にはオー
ストラリア抗原は含まれていないことがわかつた。この
〜−ｅ調製品はその抗原能を消失させることなく、時と
して残つている感染性残渣を除去するために、フオルモ
ール、β−プロビオラクトン、または紫外線を用いて注
意しながらその力を弱めるようにしてもよい。

このようにして得た調製品には感染力はないが医薬とし
ての効力を有することはチンパンジーを用いる試験によ
つて評価される。

このような試験としては特にオーストラリア抗原及び抗
体Ａｎｔｉ−…℃の定量によるウィルス反復（Ｒｅｐｌ
ｌｃａｔｉＯｎｖｉｒａｌｅ）の研究、トランスアミナ
ーゼの研究及び肝臓のバイオプシイによる組織学上の監
視が包含される。このような調製品を投与することによ
つて希望する供与者に抗体Ａｎｔｉ−ｅを出現せしめる
ことができ、そしてこれら供与者に由来する血液は以下
の例３に記載するように、抗体卸Ｔｉ−ｅを含有する精
製フラクシヨンを得るための出発物質として使用される
ことができる。

例３ 抗体Ａｎｔｉ−ｅを含有するガンマグロブリン フラク
シヨンの調製原料として血液内に抗体Ａｎｔｉ−ｅが含
まれている供与者を選び出し、これより得たものをプラ
ズマフアレーゼによつて処理した脱線維素血漿を原料と
して用いる。

温度−５℃、ＰＨ５．８５で１９％の濃度になるまでこ
の血漿にエタノールを加えるが、エタノールの使用量は
、最終蛋白濃度が約５％となるようにそれぞれ定める。
遠心分離して沈殿を分離するが、この沈殿中にはガンマ
グロブリンは全部含まれており、アルファ及びベータグ
ロブリンは一部含まれている。この沈殿を沈殿１ｋ９当
り水１０ｅの割合で、０℃の水懸濁液とする。

０．０５Ｍ（７）Ｎａ２ＨＰＯ４の１容と０．０５Ｍの
酢酸の６容とを混合して得られるＰＨ４のバッファ混液
を加えてそのＰＨを４．６に調節する。

続いてイオン強度を高めるために１容の０．０５ＭのＮ
ａ２ＨＰＯ４と１．６熔の０．０５Ｍ酢酸とからなるＰ
Ｈ４．８の混合バッファを加える。ＰＨ４のバッファを
約２．３５ｅ加えねばならない。次に１容の０．０５Ｍ
（７）Ｎａ２ＨＰＯ４と０．８３容の０．０５Ｍ酢酸と
を混合して得られるバッファを約４．５ｅ加えてそのＰ
Ｈを５．１に調節するが、この間に温度を一５℃に保つ
ておく。

１容の０．０５Ｍ（７）Ｎａ２ＨＰＯ４と１．２５容の
酢酸とからなるＰＨ５．ｌのバッファの０．４ｅを加え
てイオン強度の調節を行う。

続いてこの懸濁液を９．７ｅの水中に稀釈する。

そこで沈殿１ｋｇ当りの溶媒の総量は１９．４５ｆとな
る。エタノール濃度が１２％になるまでエタノールを加
える。

遠心分離して上澄を集める。

０．０３〜０．０４のイオン強度が得られるまで塩化ナ
トリウムを加える。

続いてＰＨを７．２に調節し、エタノールを加えてその
濃度を２５％にするがこの間の温度は−７℃にしておく
。ここでガンマグロブリンの沈殿が得られるのでこれを
遠心分離して集める。次いで常法即ち溶液化、清澄化、
凍結乾燥、そして次に１６％水溶液の調製という方法に
よつて最終医薬品を調製する。最高の溶解性と安定性と
を発揮する等張溶液とするために１ｆ当り０．３モルの
グリシンを加える。保存剤として１ｅ当り０．１ｙのメ
ルチオレート（ＭｅｒｔｈｉＯｌａｔｅ）も加えておく
。静脈注射され得るようなガンマグロブリンを得るため
に更に追加して行う処理はこれを常法によつて行つても
よい。例４ 抗体凹Ｔｉ−ｅ１に富むガンマグロブリン フラクシヨ
ンの調製原料の血漿として抗体Ａｎｔｉ−ｅ１に富んだ
ものを選んで使う外は例３と同様の操作を行つて、抗体
Ａｎｔｉ−ｅ１に富んだガンマグロブリン フラクシヨ
ンを得、これを凍結乾燥品として貯蔵する。

例５抗体頷Ｔｉ−Ｅ２に富むガンマグロブリン フラク
シヨンの調製原料の血漿として抗体Ａｎｔｉ−Ｅ２に富
んだものを選んで使う外は例３と同様の操作を行つて抗
体Ａｎｔｉ−Ｅ２に富んだガンマグロブリン フラクシ
ヨンを得、これを凍結乾燥品として貯蔵する。

参考例本発明による抗体Ａｎｔｉ−ｅを電撃性肝炎（Ｆ
ｕｌｍｉｎａｎｔｈｅｐａｔｉｔｉｓ）の５例に対する
臨床試験に供した。

電撃性肝炎は肝炎のうちでも最重症のものであつて患者
の９０％は死に至るものであり、本例における本症（即
ち゜゜ｇａｓｔｒ０ｅｎｔ１１９７屯Ａ一９８／７５２
″）については抗−オーストラリア抗体も電撃性肝炎の
治療に成功しなかつた。該電撃性肝炎に罹つた５名の患
者に対する本発明による抗体Ａｎｔｉ−ｅの治療の結果
、３名は回復し、他の２名についてはその生存期間が電
撃性肝炎患者における通常の生存期間よりもかなり延長
された。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ Ｂ型肝炎のウィルスにより誘発される肝炎又は急性
   もしくは慢性の感染症の治療用の医薬において、抗体ａ
   ｎｔｉ−ｅを主剤として含有することを特徴とする前記
   の医薬。 ２ 医薬が精製された抗体ａｎｔｉ−ｅフラクシヨンか
   らなるものであつて該フラクシヨンからは、通常の血液
   中に存在する蛋白性構成々分が（ガンマグロブリンのほ
   かは）すべて除去され、且つ感染性の汚染物もすべて除
   去されている特許請求の範囲第１項に記載の医薬。 ３ 静脈投与ができるように、ガンマグロブリンが、抗
   補体能を全部消失させるか又はそれを減少させるための
   処理に付されたものである特許請求の範囲第１及び２項
   のいづれか１項に記載された医薬。 ４ 医薬が血液、血漿又はその他すべての生物液体から
   成るものであつて、これら構成々分に抗体ａｎｔｉ−ｅ
   含有ガンマグロブリンフラクシヨンを添加しておき、し
   かも該ガンマグロブリンフラクシヨンは、抗補体能を消
   滅させてしまうか又はそれを減少させるための処理に予
   じめ付されているものである特許請求の範囲第１項に記
   載の医薬。 ５ ガンマグロブリンフラクシヨンが抗体ａｎｔｉ−ｅ
   の中の１に富んだものである特許請求の範囲第１〜４項
   のいづれか１項に記載の医薬。 ６ ガンマグロブリンフラクシヨンが抗体ａｎｔｉ−ｅ
   ＿１及びａｎｔｉ−ｅ＿２の中のどちらか１つに富んだ
   ものである特許請求の範囲第５項に記載の医薬。 ７ ウィルスＨＢ又は抗原−ｅを含有しているか或はそ
   れらを含有している可能性のある生物流体から、感染を
   消失せしめるか又はそれを減少せしめるための方法であ
   つて、必要量の抗体ａｎｔｉ−ｅを有し且つ（ａ）抗体
   ａｎｔｉ−ｅを含有する胎盤エキスから、或は血漿又は
   血清から採取されたガンマグロブリンフラクシヨン；（
   ｂ）静脈投与可能となるように、抗補体能を全部消失さ
   せるか又はそれを減少させるための処理に予じめ付され
   たガンマグロブリンフラクシヨン；（ｃ）抗体ａｎｔｉ
   −ｅの中の１つに富んだガンマグロブリンフラクシヨン
   ；及び（ｄ）抗体ａｎｔｉ−ｅ＿１及びａｎｔｉ−ｅ＿
   ２の中のどちらか１つに富んだガンマグロブリンフラク
   シヨンのうちのいづれかの該ガンマグロブリンフラクシ
   ヨンを上記生物流体と接触させることを特徴とする方法
   。 ８ 流体に抗体ａｎｔｉ−ｅ含有ガンマグロブリンフラ
   クシヨンを添加する特許請求の範囲第７項に記載の方法
   。 ９ その表面を抗体ａｎｔｉ−ｅで被覆した免疫吸着剤
   上を、該流体をして通過せしめる特許請求の範囲第７項
   に記載の方法。 １０ 血清、血漿又は胎盤エキスを抗体ａｎｔｉ−ｅの
   存在について分析し、次いで常法によるガンマグロブリ
   ン製法に従つて、抗体ａｎｔｉ−ｅの検出される血清、
   血漿又は胎盤エキスよりガンマグロブリンのフラクシヨ
   ンを調製することを特徴とするＢ肝炎に対する医薬の製
   造方法。 １１ 抗体ａｎｔｉ−ｅを含有する血清、血漿又は胎盤
   エキスを選択し、次いでガンマグロブリンの通常の製法
   に従つて血清、血漿又は胎盤エキスからグロブリンのフ
   ラクシヨンを調製し、このグロブリンフラクシヨンから
   あらゆる感染性不純物を除去し、そして必要に応じ得ら
   れたフラクシヨンに、抗補体能を消失又は低下させるた
   めの処理を施すことを特徴とするＢ肝炎に対する医薬の
   製造方法。