JPH0453848B2 - - Google Patents

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JPH0453848B2
JPH0453848B2 JP56501991A JP50199181A JPH0453848B2 JP H0453848 B2 JPH0453848 B2 JP H0453848B2 JP 56501991 A JP56501991 A JP 56501991A JP 50199181 A JP50199181 A JP 50199181A JP H0453848 B2 JPH0453848 B2 JP H0453848B2
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    • AHUMAN NECESSITIES
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Description

請求の範囲  () 分子量が3500より小さく、 () フロレスカミンに本質的に反応性の物質を
実質的に含たず、そしお () ヒト癜血球抜出物の透析物からゲル濟過お
よびオクタデシルシランカラムを甚いる逆盞高
速液䜓クロマトグラフむヌで氎䞭の゚タノヌル
募配により溶出するこずにより埗るこずがで
き、か぀たた、 () 次のおおよその゚タノヌル濃床範囲、0.0〜
0.4、36〜40、72〜76、85〜89、94〜
95、97〜99および100を有する溶出画分
ずしお前蚘募配からそれぞれ溶出するこずがで
きるヒト免疫系モゞナレヌタヌ。  おおよそ0.0〜0.4の゚タノヌル濃床範囲を
有する溶出画分ずしお募配から溶出するこずがで
きるアンプリフアむアヌである請求の範囲第
項のモゞナレヌタヌ。  おおよそ36〜40の゚タノヌル濃床範囲を有
する溶出画分ずしお募配から溶出するこずができ
るアンプリフアむアヌである請求の範囲第項
のモゞナレヌタヌ。  おおよそ72〜76の゚タノヌル濃床範囲を有
する溶出画分ずしお募配から溶出するこずができ
るアンプリフアむアヌである請求の範囲第項
のモゞナレヌタヌ。  おおよそ85〜89の゚タノヌル濃床範囲を有
する溶出画分ずしお募配から溶出するこずができ
るアンプリフアむアヌである請求の範囲第項
のモゞナレヌタヌ。  おおよそ94〜95の゚タノヌル濃床範囲を有
する溶出画分ずしお募配から溶出するこずができ
るアンプリフアむアヌである請求の範囲第項
のモゞナレヌタヌ。  おおよそ100の゚タノヌル濃床範囲を有す
る溶出画分ずしお募配から溶出するこずができる
アンプリフアむアヌである請求の範囲第項の
モゞナレヌタヌ。  おおよそ97〜99の゚タノヌル濃床範囲を有
する溶出画分ずしお募配から溶出するこずができ
る−サプレツサヌである請求の範囲第項のモ
ゞナレヌタヌ。  ヒト癜血球抜出物から、ヒト生䜓の免疫系の
盎接たたは間接応答に圱響する性質を有する免疫
系モゞナレヌタヌを補造する方法であ぀お、この
モゞナレヌタヌはフロレスカミンに本質的に反応
性の物質を実質的に含たず、そしお(1)ヒト癜血球
抜出物を透析分子量限界玄3500の透析膜で透析
し、(2)透析物をゲル濟過しお耇数個の分画に分画
化し、(3)モゞナレヌタヌ確認分画を遞択しお集
め、(4)集められたモゞナレヌタヌ確認分画を逆盞
クロマトグラフむヌカラムに付し、(5)カラムを氎
䞭の゚タノヌル募配で溶出するこずを特城ずす
る、免疫系モゞナレヌタヌの補造方法。  掻性成分ずしお () 分子量が3500より小さく、 () フロレスカミンに本質的に反応性の物質を
実質的に含たず、そしお () ヒト癜血球抜出物の透析物からゲル濟過お
よびオクタデシルシランカラムを甚いる逆盞高
速液䜓クロマトグラフむヌで氎䞭の゚タノヌル
募配により溶出するこずにより埗るこずがで
き、か぀たた、 () 次のおおよその゚タノヌル濃床範囲、0.0〜
0.4、36〜40、72〜76、85〜89、94〜
95、97〜99および100を有する溶出画分
ずしお前蚘募配からそれぞれ溶出するこずがで
きるヒト免疫系モゞナレヌタヌを含有する、ヒ
トが以前暎露された抗原に察するヒト免疫系応
答を増倧もしくは枛少させる医薬組成物。 発明の背景 ヒト免疫系はきわめお耇雑で、珟圚でも完党に
は理解されおいない。珟圚では皮の䞻芁な態
様、すなわち、埪環抗䜓によ぀お仲介される液䜓
性免疫ず、名称のずおりリンパ现胞によ぀お仲介
される现胞性免疫ずがあるず考えられおいる。䜓
液性免疫は、から非免疫受絊者に血枅免疫グロブ
リンによ぀お運搬され、このような血枅が仲介す
る茞送によ぀お免疫応答を生じ、これは倚くの堎
合即時的に生じる。现胞仲介免疫は未梢血癜血球
によ぀お茞送される。现胞によ぀お茞送される免
疫応答は、数時間ずいた期間を経お緩埐に発珟す
る。 现胞仲介免疫の代衚的な発珟は遅延型過敏性反
応であり、本明现曞ではDHず略する。DH皮膚
反応は、適圓な抗原が皮䞋泚射された堎合に認め
られる。24〜48時間以内に、局所的炎症発赀
および腫脹ず肥厚硬結が、感受性の高い個䜓
に認められ、感受性の皋床は反応のサむズおよび
匷床によ぀お枬定される。DH反応はたた、特城
的な組織孊的所芋、ずくに炎症領域における血管
呚囲にリンパ球および単球の浞最を生じる。DH
反応の郚䜍にみられる现胞は、未梢血癜血球矀に
由来するものである。 现胞仲介免疫の機構は、ただ完党にはわか぀お
いない。応答を仲介する现胞は、抗原の挑戊にさ
たざたな方法で応答できる。この皮の応答には、
䞎えられた抗原に察しお特異的な感受性をも぀现
胞の増殖、各皮の免疫機胜を仲介する现胞たずえ
ば抗䜓の誘導および増加、異物现胞や腫瘍に察す
る反応が含たれる。これらの応答パタヌンの質お
よび量は倚くの因子、たずえば胞腺や副腎皮質の
ホルモン、むンタヌプロン、その他の现胞性応
答の奏効䜓たずえばヒスタミン、セロトニン、プ
ロスタグランゞンによ぀お圱響される。 本発明は、癜血球の透析抜出液から単離され、
现胞仲介免疫応答に匷力に圱響する免疫系モゞナ
レヌタヌの発芋に基づくものである。これは、特
異的抗原に察する過剰反応たたは䞍適圓な反応に
よる各皮臚床症状の治療およびある皮のアレルギ
ヌ症状の緩和に有甚である。 埓来技術 1954幎、H.S.Lawrenceは、ツベルクリン感受
性䟛䞎者の癜血球から調補した溶解質がツベルク
リン非反応受絊者にその感受性を運ぶこずができ
るこずを報告した〔J.Clin.Invest.33、951
1954〕。この仕事に぀いおの最近の総説ずしお
Lawrence、H.S.The Harvey Lactures68、
2391974、たたその時点での論文を集めたもの
ずしおは、M.S.Ascher、A.A.Gottlieb、C.H.
Kirkpatrick線Transfer FactorBasic
Properties and ClinicalApplications、
Academic Press、Inc.、New York1976およ
びA.Kahnら線Immune Regulators in
Transfer Factor、Academic Press、Inc.、
New York1976がある。この感受性の茞送は
癜血球溶解質䞭の因子によるものず掚枬され、そ
の埌、茞送因子ずいう機胜的な名称が付された
B.Amos、H.Koprowski線Cell−Bound
Antibodies䞭でNajarian、J.S.、Feldman、J.D.
の論文に察する批評でLawrence、H.S.による。
この茞送因子による珟像はヒトでしかみられず、
このため、掻性の根源を単離し、性状を明らかに
する研究は埐々にしか進たなか぀た。 茞送因子を明確にするには、名の患者、すな
わち䞎えられた抗原に察しおDH反応を瀺すこず
がわか぀おいる䟛䞎者ず、同䞀抗原を挑戊させお
もDH反応が起こらないこの抗原に察する现胞
仲介免疫をもたないず考えられるこずがわか぀
おいる受絊者を確定する必芁がある。䟛䞎者の血
液から調補した癜血球を砎壊し、现胞内容物を透
析する。濃瞮した透析物を適圓な緩衝液にずり、
受絊者の前腕たたは他の䟿利な郚䜍に皮䞋泚射す
る。玄日埌、受絊者の同䞀郚䜍たたは他の郚䜍
に、この抗原を皮䞋泚射しお挑戊させる。兞型的
なDH反応は玄週埌に芳察される。このように
しお茞送された免疫は、受絊者に幎間ぐらい保
持されるずいう。 茞送因子の粟補および同定の䜜業は、それに䌎
う構造的ないし化孊的基準がないため、たた粟補
埌に認められる珟像が最初の透析物により誘導さ
れる珟象ず質的に異なる堎合が倚いため、進歩が
劚げられおいた。茞送因子の語が粟補プレパレヌ
シペンに぀いおも甚いられ、たたDH皮膚反応以
倖の基準でモニタヌされお文献䞭に珟れるが、こ
の語が、実際、単䞀の生化孊的実䜓を指しおいる
のか、あるいは単䞀の生化孊的機胜を衚す掻性に
察しお甚いらおいるのかも明瞭ではない。本明现
曞においおは、茞送因子の語はLawrenceによ぀
お単離され、Lawrenceによ぀お最初に特城づけ
られた掻性すなわち特定の抗原に察する免疫を高
床の感受性をも぀䟛䞎者から感受性をもたない受
絊者ぞ茞送する胜力をも぀粗癜血球溶解物に限定
しお甚いるこずにする。 ヒト茞送因子のこれたでの分別化では、各皮の
掻性物質の存圚が明らかにされおいる。
Vandenbark、A.A.ら〔J.Immunol.118、636
1977〕は、癜血球抜出液の透析物をSephadex
−25Phar−macia、Inc.、Uppsala、Sweden
の商暙名クロマトグラフむヌに付した結果を報
告しおいる。in vivoにおける生物掻性は光孊密
床254nたたは280nに瀺す個の䞻ピヌクに
のみ認められた。぀のピヌクフラクシペンは、
抗原反応性䟛䞎者からそれたでは非反応性であ぀
た受絊者に、有意な皮膚詊隓反応性を茞送するず
報告されおいる。他方のピヌクは自発掻性抗原
を加えない堎合の皮膚反応を生じ、たた抗原ず
組合せるず皮膚反応を有意に増倧させた。各ピヌ
クフラクシペンは等電集束たたは酢酞もしく
はメタノヌルの溶媒系を甚いたオクタデシル
シラン暹脂充填カラム䞊逆盞クロマトグラフむヌ
によ぀おさらに分別化された。しかしながら、こ
の再分別化埌の生物掻性詊隓の結果は報告されお
いない。 Gottlieb、A.A.らTransfer FactorBasic
Properties and Clinical Applications、263頁
は癜血球透析物分画化のモニタリングの手段ずし
おフロレスカミンを甚いた。フロレスカミン
〔Hoffman−LaRoche、Inc.、Nutley、N.J.、
Bohlen、P.らArch.Biochem、Biophys.155、
2131973〕は䞀玚アミノ基を有する物質ず反応
し、匷い螢光をも぀生成物を䞎え、これによ぀お
タンパクおよび他の䞀玚アミノ基をも぀化合物の
高感床定量が可胜である。透析された癜血球抜出
物質をSephadex −10Pharmacia、Inc.、
Uppsale、Swedenの商暙名カラムで分画化し
たずころ、生物掻性はフロレスカミン反応性䞻ピ
ヌクに぀いお認められた。抗原を加えおも加えな
くおも、遅延型過敏性反応が認められ、この応答
は抗原存圚時の方が幟分倧きか぀た。 透析された癜血球抜出物はGottlieb、A.A.らに
よりさらに分画化され、J.Reticuloendothelial
Soc.21、4031977に報告されおいる。抜出物は
たず、衚瀺された透析分子量それぞれ玄12000お
よび3500の透析膜を甚いお、分子量分別透析に付
した。埌者の膜を通過した、分子量範囲3500未満
の物質を分画、分子量範囲3500〜12000の物質
を分画ず名づけた。䞡分画をSephadex −10
䞊ゲル過に付した。生物掻性はこの堎合も、フ
ロレスカミン反応性ピヌク分画に認められた。し
かしながら、掻性は䟛䞎者の免疫状態の機胜では
ないようであ぀た。しかも、皮の異なる䜜甚が
認められた。第䞀の䜜甚は、抗原の添加なく、た
た䟛䞎者および受絊者の免疫状態ずは無関係な
DH反応の誘導であ぀た。この皮の掻性を本明现
曞では、のちに定矩するようにむンデナヌサヌず
呌ぶ。第二の掻性は、䟛䞎者が感受性を有するが
それたで暎露されたこずのない抗原に察する皮内
反応の増倧であ぀た。この、フロレスカミン反応
性クロマトグラフむヌ分画に認められた掻性は、
受絊者がすでに感受性を有する抗原に察するDH
反応を増倧するようであ぀た。いずれの堎合も、
䟛䞎者の感受性ずは無関係のようであ぀た。フ
ラクシペンをさらにヒドロキシアパタむトクロマ
トグラフむヌによ぀お分画したずころ、添加抗原
なしにDH反応を生じる生物掻性は、フロレスカ
ミンずの反応で怜知される䞻ポリペプチドフラク
シペンにはなか぀た。 さらにJ.Immunol.124、8851980には、
Gottlieb、A.A.らにより、むンデナヌサヌ抗原
を添加しないでDH反応を生じるおよびアンプ
リフアむアヌ受絊者が感受性を有する抗原の存
圚䞋にDH反応を生じるを、長い150cm、
Sephadex −10カラムで分画化した堎合のデヌ
タが瀺されおいる。アンプリフアむアヌは䞻フロ
レスカミン反応性分画に存圚したが、むンデナサ
ヌはこの分画にはなか぀た。さらにヒドロキシア
パタむトを甚いお分画したが、アンプリフアむア
ヌの掻性はフロレスカミン反応性ピヌクに留た぀
た。察照比范詊隓により、この掻性は、同䞀凊眮
を斜した赀血球溶解にも、たた同䞀粟補操䜜を行
぀た食塩氎にもないこずが確認された。 Gottlieb、A.A.らは、Immune Regulators in
Transfer Factor〔A.Kahn、C.Kirkpatrick、
Hill線、Academic Press、Inc.、New York
1979、339頁〕ず題する論文䞭で、デヌタは瀺
しおいないが、サプレツサヌず呌ばれる別の掻性
がオヌグメンタヌ掻性からヒドロキシアパタむト
クロマトグラフむヌによ぀お分離できたこずを瀺
唆しおいる。オヌグメンタヌは透析分画に発芋
され、垞に䞻フロレスカミン反応性分画に存圚し
た。このオヌグメンタヌは、以前にBCGに暎露
された無感䜜患者に党身投䞎するず有効であるず
考えられた。さらに、透析分画に認められたサ
プレツサヌ掻性は、ヒドロキシアパタむトクロマ
トグラフむヌにおいお、フロレスカミン反応性物
質の堎合より高い塩濃床で溶出するず述べられお
いる。透析癜血球抜出物の分画化が詊みられた他
の研究ずしおは、Wilson、G.B.ら〔J.Lab.Clin.
Med.93、8191979〕のin vitroにおいお癜血球
の遊走に圱響する皮の掻性、すなわち皮の抗
原非䟝存性掻性抗原なしで応答を生じる、
皮の抗原䟝存性特異的むンヒビタヌおよび皮の
抗原䟝存性゚ンハンサヌに぀いおの報告がある。
抗原䟝存性むンヒビタヌは、適圓な䟛䞎者特異性
の抗原のみがin vitroの癜血球遊走の有意な阻害
を生じたので、茞送因子ず共通の性質をも぀おい
る。抗原䟝存性の癜血球遊走匷化は、抗原特異性
に関する特城づけがなされおいない。しかしなが
ら、䞊蚘掻性がヒト免疫系のin vivo機胜に䜕ら
かの関係を有するのかどうか、たたその治療的有
甚性ずの関連に぀いおは、党く知られおいない。 発明の芁玄 本発明はヒト免疫系のモゞナレヌタヌに関す
る。より詳现には、本発明は分子量が3500
より少さく、フロレスカミンに本質的に反
応性の物質を実質的に含たず、そしおヒト
癜血球抜出物の透析物からゲル濟過およびオクタ
デシルシランカラムを甚いる逆盞高速液䜓クロマ
トグラフむヌで氎䞭の゚タノヌル募配により溶出
するこずにより埗るこずができるヒト免疫系モゞ
ナレヌタヌに関し、さらにたた本発明はこのよう
なフロレスカミンに本質的に反応性の物質を実質
的に含たない、ヒト生䜓の免疫系の盎接たたは間
接応答に圱響する性質を有する免疫系モゞナレヌ
タヌをヒト癜血球抜出物から補造する方法に関
し、この方法は(1)ヒト癜血球抜出物を透析分子量
限界箄3500の透析膜で透析し、(2)透析物をゲル濟
過しお耇数個の分画に分画化し、(3)モゞナレヌタ
ヌ確認分画を遞択しお集め、(4)集められたモゞナ
レヌタヌ確認分画を逆盞クロマトグラフむヌカラ
ムに付し、次いで(5)カラムを氎䞭の゚タノヌル募
配で溶出するこずを特城ずする方法である。本明
现曞におけるモゞナレヌタヌの語は、動物もしく
はヒト生䜓、その郚分たたはそれから埗られた成
分の、䞊蚘生䜓が以前に暎露されたこずがある抗
原に察する応答、すなわち䞊蚘動物もしくはヒト
の免疫系機胜に特異的に垰するこずができる応答
に、盎接たたは間接的に䜜甚する物質ず定矩され
る。したが぀お、免疫応答に察する䜜甚を含めた
䞀般的䜜甚を有する物質は、ここに定矩したモゞ
ナレヌタヌの語には包含されない。本明现曞に述
べるモゞナレヌタヌはDH皮膚反応詊隓においお
掻性を発珟する。したが぀お、その䞻䜜甚は现胞
仲介免疫系に察するものず考えられる。しかしな
がら、ここに述べるモゞナレヌタヌは党免疫系に
広範な䜜甚を有し、䜓液性免疫系にも䜜甚するこ
ずがある。本明现曞においお論じるに際し、茞送
因子、むンデナヌサヌ、アンプリフアむアヌおよ
びサツプレツサヌの語は、それぞれ皮膚反応にお
けるDH応答に関連したそれぞれの掻性ず定矩さ
れる。 茞送因子の語は䞊述の粗癜血球抜出液の抜出物
を瀺す。茞送因子掻性は、䞎えられた抗原に察し
お感受性を有するこずがわか぀おいる䟛䞎者の癜
血球から茞送因子プレパレヌシペンを調補し、同
䞀抗原に感受性のないこずがわか぀おいる受絊者
に皮䞋泚射した堎合に発珟する。受絊者にその埌
その抗原を挑戊させるずDH応答が芳察される。
受絊者は、正垞時、茞送因子掻性を泚射しない堎
合、応答を生じない。茞送因子は、䞎えられた抗
原に以前暎露されおいない受絊者にも䜜甚が認め
られるこずから、䞊述のモゞナレヌタヌではな
い。しかも、茞送因子の䜜甚は䞎えられた抗原に
関しお特異的であるが、ここに述べるアンプリフ
アむアヌおよびサプレツサヌは、受絊者が以前に
暎露された抗原に非特異的に䜜甚する。 むンデナヌサヌは、抗原の添加なく、䟛䞎者お
よび受絊者の感受性ずは無関係にDH応答を生じ
る掻性ず定矩される。 アンプリフアむアヌは、受絊者が感受性を有す
る抗原の泚射埌に、正垞より倧きな応答の産生を
特城ずする。アンプリフアむアヌ掻性は䟛䞎者の
特異的免疫感受性には䟝存しない。 サプレツサヌ掻性は、受絊者が感受性を有する
抗原ずサプレツサヌを同時に泚射した堎合、受絊
者に正垞より小さいDH応答を生じるずいう結果
によ぀お芳察される。 本発明においお、ヒト免疫系のモゞナレヌタヌ
は癜血球抜出液の透析物から単離された。皮の
モゞナレヌタヌはアンプリフアむアヌ掻性を有
し、皮はサプレツサヌ掻性を有する。アンプリ
フアむアヌは、無感䜜状態および免疫機胜䜎䞋状
態の治療に局所的たたは党身的に甚いお有甚ず考
えられ、䞀方、サプレツサヌは局所的感䜜亢進状
態たずえばうるしによる障害の治療に有甚であ
る。これらのアンプリフアむアヌはアンプリフア
むアヌ〜ず呜名する。サプレツサヌは−サ
プレツサヌおよび−サプレツサヌず呜名する。 奜たしい態様の詳现な説明 本発明は免疫応答をモゞナレヌトする機胜をも
぀物質の発芋に基づくものである。珟圚の技術で
は、ヒト個䜓が以前に暎露された抗原に察する応
答を増匷たたは抑制するモゞナレヌタヌの同定が
可胜である。しかしながら、この皮の物質によ぀
お、各皮の修食された機胜が珟れる。たずえば、
反応の特続、感受性の閟倀、および炎症、リンパ
球増殖もしくは埪環抗䜓産生等の応答の皮類であ
る。この皮の修食機胜はそれを怜知および定量す
るために甚いた詊隓系によ぀お定矩されるこずは
明らかである。本発明のモゞナレヌタヌにはDH
応答のアンプリむフアむアヌやサプレツサヌが含
たれるばかりでなく、他の適圓な詊隓系で怜知、
定量される免疫修食の他の衚珟も包含される。 本明现曞に述べるモゞナレヌタヌは、したが぀
お、免疫系の成分間の现胞間䌝達の自然手段を構
成するモゞナレヌタヌ物質の系の䞀郚でしかな
い。この堎合、免疫応答の状態は絶えず圓面の抗
原挑戊のレベルおよび掻性に応じおモニタヌさ
れ、修食される。したが぀お、本発明からこの皮
のモゞナレヌタヌ系の存圚が明らかである以䞊、
他のモゞナレヌタヌが発芋されるこずもあり埗
る。他の粟補技術および他の詊隓操䜜を甚いた今
埌の研究が、この皮のモゞナレヌタヌの同定およ
び粟補を導くであろう。しかしながら、本発明は
この皮のモゞナレヌタヌの存圚を明らかにし、各
皮の免疫性関連状態の治療に有甚な新しい、予期
しない性質を有する数皮のモゞナレヌタヌの単離
および特城づけを始めお行うこずにより、この皮
の発芋ぞの道を開くものである。 アンプリフアむアヌは、䞎えられた抗原に察
する感受性を有する受絊者のDH皮膚反応に察し
お促進および増匷効果を瀺す点を特城ずする。抗
原ずずもに投䞎されたアンプリフアむアヌによ
぀お生じる反応は、皮䞋泚射埌玄〜14時間で匷
床がピヌクに達し、以埌急速に消退する䞀方、
アンプリフアむアヌがない堎合には、抗原の泚
射埌24〜30時間で、正垞のDH応答はピヌクに達
する。本発明のアンプリフアむアヌは、本発
明の他のモゞナレヌタヌから、オクタデシルシラ
ンカラムを甚い〜100゚タノヌル
−氎募配で溶出する逆盞クロマトグラフむヌによ
り分離できる。アンプリフアむアヌはカラムか
ら、少なくずも氎䞭15゚タノヌルで
溶出され、このアプリフアむアヌの倧郚分は氎䞭
箄15から玄20゚タノヌ
ルパヌキン゚ルマヌ濃床枬定装眮の読み取り濃
床䞭に溶出される。埗られた溶出画分の屈折率
枬定倀1.3324〜1.3326から蚈算された゚タノヌル
濃床は〜0.4である。アンプリフアむアヌ
はフロレスカミンずはほずんど反応せず、フロレ
スカミン反応性の䞻ピヌクずは逆盞クロマトグラ
フむヌで分離される。アンプリフアむアヌは、
衚瀺の分子量透析限界3500の透析膜を通過する。 アンプリフアむアヌも、抗原に察する応答の
促進および増匷を生じるが、促進の皋床はアンプ
リフアむアヌに察する応答よりもわずかながら
小さい。反応郚䜍はアンプリフアむアヌ抗原
による堎合よりも局限され、かなり長期間日
たで特続する。驚くべきこずは、最倧増匷掻性
が適的濃床においおのみ認められ、至適濃床を超
えるず増匷䜜甚が䜎䞋するばかりかDH応答の抑
制を生じる。アンプリフアむアヌはオクタデシ
ルシランから少なくずも45゚タノヌ
ル−氎溶液によ぀お溶出し、このアンプリフアむ
アヌの倧郚分は氎䞭玄45〜玄53
゚タノヌルパヌキン゚ルマヌ濃床枬
定装眮の読み取り濃床䞭に溶出される。埗られ
た溶出画分の屈折率枬定倀1.3428〜1.3440から蚈
算された゚タノヌル濃床は36〜40である。フロ
レスカミンずは反応せず、癜血球抜出液の透析物
から単離される他のモゞナレヌタヌおよびこの抜
出液におけるフロレスカミン反応性物質の䞻ピヌ
クから、逆盞クロマドクラフむヌによ぀お分離さ
れる。アンプリフアむアヌの分子量およびサむ
ズは、衚瀺の分子量透析限界玄3500の透析膜を通
過する皋床である。 アンプリフアむアヌおよびは、抗原に
察する応答の増匷をもたらす。垌釈研究によれ
ば、アンプリフアむアヌおよびの掻性は垌釈
によ぀お増匷される。アンプリフアむアヌの掻
性も増匷されるが、デヌタは幟分あいたいであ
る。アンプリフアむアヌおよびは、オク
タデシルシランから、それぞれ少なくずも70
、80および89
゚タノヌル−氎溶液によ぀お溶出される。これら
のアンプリフアむアヌの倧郚分は、以䞋の゚タノ
ヌル−氎濃床範囲パヌキン゜ン゚ルマヌ濃床枬
定装定装眮の読み取り濃床で溶出されるアン
プリフアむアヌは70〜74
、アンプリフアむアヌは80〜
84、、アンプリフアむアヌは89
〜94。埗られた各溶出画分
の屈折率枬定倀1.3531〜1.3543、1.3567〜1.3580
および1.3592〜1.3596から蚈算された゚タノヌル
濃床はそれぞれ、72〜76、85〜89および94〜
95である。これらのアプリフアむアヌはいずれ
もフロレスカミンず反応性を瀺さず、すべおたが
いからたた本明现曞に述べた他のモゞナレヌタヌ
から、逆盞クロマトグラフむヌによ぀お分離でき
る。アンプリフアむアヌおよびは、いず
れも衚瀺透析分子量限界玄3500の透析膜を通過す
る。 アンプリフアむアヌはDH反応においお抗原
に察し増匷応答を生じ、党身䜜甚を有するこも明
らかにされおいる。アンプリフアむアヌを陀く
本明现曞蚘茉の増匷性モゞナレヌタヌの倧郚分に
共通しおいる点は、最倧応答のための至適甚量が
ある点で、これは単離されたサンプルを垌釈しお
いきながら効果を比范するこずにより確認され
る。アンプリフアむアヌはオクタデシルシラン
から100゚タノヌルパヌキン゚ル
マヌ濃床枬定装眮の読み取り濃床で溶出され
る。埗られた溶出分画の屈折率枬定倀1.3610〜
1.3620から蚈算された゚タノヌル濃床は100で
ある。このアンプリフアむアヌはフロレスカミン
ず反応せず、本明现曞に蚘茉の他のモゞナレヌタ
ヌずは逆盞クロマトグラフむヌによ぀お分離でき
る。アンプリフアむアヌの分子量およびサむズ
は、衚瀺透析分子量限界玄3500の透析膜を通過す
る皋床である。 サプレツサヌは衚瀺透析分子量限界3500の透
析膜を通過した透析物から単離される。サプレ
ツサヌは、逆盞クロマトグラフむヌにより〜
100゚タノヌル−氎募配で溶出しお
同定可胜であり、少なくずも郚分的にアンプリフ
アむアヌおよびから分離できる。サプレツ
サヌはオクタデシルシランから氎䞭゚タノヌル67
〜100の範囲で溶出され、96
〜99パヌキン゚ルマヌ濃
床枬定装眮の読み取り濃床で溶出する分画に明
瞭に存圚する。この分画の屈折率枬定倀1.3602〜
1.3606から蚈算された゚タノヌル濃床は97〜99
である。サプレツサヌは逆盞クロマトグラフむ
ヌにおける䞻フロレスカミン反応性ピヌクずの分
離性から刀断しお、フロレスカミンず反応しお螢
光を生じるこずはない。DH皮膚反応の抑制は、
サプレツサヌを受絊者がDH応答を瀺す詊隓抗
原の泚射前たたはその泚射ず同時に泚射した堎合
に発珟する。抑制は可逆性で、短時間䜜甚型で、
DHの発珟する玄72時間遅延させる。アンプリフ
アむアヌをサプレツサヌず同時に泚射するず
抑制は認められない。 サプレツサヌは、衚瀺透析分子量限界12000
の透析膜を通過するが、透析分子量限界限3500の
膜では透析されない癜血球抜出分画䞭に存圚す
る。サプレツサヌの掻性に䌌お、サプレツサ
ヌ掻性は可逆性で、抑制効果は玄72時間特続す
る。サプレツサヌはヒドロキシアパタむトクロ
マトグラフむヌにより䞻フロレスカミン反応性ピ
ヌクから分離されるこずから刀断しお、フロレス
カミンず反応しない。 以䞋の実斜䟋䞭の操䜜は、ヒト䟛䞎者から埗ら
れた材料、およびヒト受絊者に察する詊隓に぀い
お述べたものである。甚いた操䜜および詊薬は、
ヒトの治療甚の無菌、非毒性生成物が埗られるよ
うに遞択した。特定の抗原に察する䟛䞎者および
受絊者の感受性はあらかじめ詊隓した。 䟋  粟補操䜜  癜血球の調補 癜血球は、党血サンプルの分画化たたは癜血
球泳動のいずれかを甚い、暙準方法で調補し
た。前者の方法では、党血サンプル450mlを
MacrodexPharmacia Corporation、
Piscataway、N.J.の商暙名、生理食塩氎䞭
デキストラン70䞭1xgで沈降さ
せお分画化し、癜血球から赀血球を分離した。
この方法で玄〜×109の癜血球が回収され
た。癜血球泳動は倧量の现胞を埗る堎合に奜た
しか぀た。HaemoneticsHaemonetics
Corp.、Braintree、Mass.の商暙名30s型现
胞分離機を䜿甚した。この系には、末梢血から
の癜血球の回収および沈降による最終癜血球プ
レパレヌシペンからの赀血球の陀去を効果的に
するため、46.7ク゚ン酞䞉ナトリりム
Haemonetics、Braintree、Mass、30c.c.およ
び500mlのVoltexMcGaw
Co.、Irvine、Calif.の商暙名、高分子量デン
プンプレパレヌシペンを䞋塗りした。いずれの
堎合も、37℃で60分間むンキナベヌトしたの
ち、癜血球に富んだ血挿が埗られた。血挿を
400xgで15分間遠沈埌、0.5M食塩氎で回掗浄
しお癜血球を回収した。掗浄埌、癜血球ペレツ
トを−20℃で凍結保存した。现胞分離機を回
䜜動させお、癜血球の平均収量は×1010個で
あ぀た。  透析 癜血球抜出液は滅菌状態で調補した。癜血球
ペレツトを重炭酞アンモニりム10mlに再
懞濁し、ドラむアむス−アセトン济䞭で10回凍
結、融解をくり返した。溶解物をたず、透析分
子量限界12000のセルロヌス透析チナヌブ
Arthur H.Thomas、Inc.、Chicago、Ill.を
甚い、重炭酞アンモニりムに察しお透析
した。緩衝液を回亀換し、透析液を合しお凍
結也燥し、小容量の重炭酞アンモニりムに再溶
解し、透析分子量限界3500のセルロヌスチナヌ
ブを甚い、重炭酞アンモニりムに察しお
前回ず同様に透析した。第の透析における残
留液を本明现曞では分画、透析液を分画ず
呌ぶ。各分画を次の䜿甚たで−20℃で凍結保存
した。  ゲル過 Sephadex −10Pharmacia、Inc.、
Uppsala、Swedenの商暙名を重炭酞
アンモニりム䞭で䞀倜膚最させ、぀いでオヌト
クレヌブで凊理した。埮粉末を陀去したのち、
1.5cm×151cmカラムに充填し、重炭酞ア
ンモニりムで平衡化した。再溶解した分画の
フロレスカミン反応性物質400mg〔Bohlen、P.
らArch.Biochem.Biophys.155、2131973
にしたがい、定量基準ずしおのりシ血枅アルブ
ミンに基づき〕をカラムに負荷した。サンプル
は重炭酞アンモニりムにより、流速13
ml時で溶出した。カラム容量254mlを
0.8mlのフラクシペンずしお採集した。各フラ
クシペン100Όをず぀お、254nにおける玫
倖線吞収およびフロレスカミンずの反応性を調
べた。結果は第図に瀺すずおりである。 䞻フロレスカミン反応性ピヌクが埗られた。
このパタヌンは䟛䞎者間で倉動はなか぀た。フ
ロレスカミン反応性ずの関係でのモゞナレヌタ
ヌ掻性の䜍眮は䞀連の10倍垌釈液にわた぀お
DH応答を枬定しお明らかにした。DH応答の
性質は垌釈によ぀お党く予期せぬ方向に倉化し
た。フロレスカミンピヌクの領域の非垌釈サン
プルは、抗原単独に察する察照応答に比べお抗
原に察するDH応答が䜎䞋した。10-2および
10-3の垌釈で、驚くべきこずに、DH応答は察
照に比し増匷された。さらに驚くべきこずに、
10-5のオヌダヌに垌釈するずDH応答の抑制が
認められた。このような異垞な応答性を瀺す分
画を、本明现曞ではモゞナレヌタヌ確認分画ず
呌ぶ。この分画を遞びさらに粟補した。このよ
うな実隓から、問題の掻性モゞナレヌタヌ確
認分画は䞻フロレスカミン反応性ピヌクずこ
れに先立぀小フロレスカミン反応性ピヌクを含
む領域に存圚するこずがわか぀た。次の粟補工
皋では、分画〜第図に瀺す
を集め、凍結也燥した。この分画の䞡偎にさら
に収集分画を広げれば最終収率が改良される可
胜性もある。最適の分画遞択はただ確定しおい
ない。 䞀郚の実隓では、も぀ず短い80cm
SephadexG−10カラムを甚いおゲル過を行
぀た。長いカラムの方が分離が改善される点を
陀き、結果はほが同様であ぀た。ずくに、長い
カラムでは、䞻フロレスカミン反応性ピヌクか
ら抗原非䟝存性のむンデナヌサヌが分離され
た。 ゲル過に代えお、排陀分子量限界5000のス
ルホン化ポリスチレンゞビニルベれン
Shodex −802、昭和電工補の×25
cmカラムを甚い、流速0.8ml分の氎で溶出す
る高速ゲル排陀クロマトグラフむヌにより粟補
するこずも可胜であ぀た。  逆盞クロマトグラフむヌ オクタデシルシランのカラムを甚い、〜
100募配の゚タノヌル氎溶液で溶
出する逆盞高圧液䜓クロマトグラフむヌにより
さらに粟補を行぀た。カラムにサンプル30mg
フロレスカミン反応性に基づいおを負荷し、
流速0.5ml分で溶出し、ml分画を集めた。
䞀郚のプレパレヌシペンでは、゚タノヌル−氎
募配に続いお、100゚タノヌルにより同速床
で溶出を行぀た。 各フラクシペンを凍結也燥し、生理食塩氎
0.5mlに再溶解した。各フラクシペン0.1mlを、
あらかじめ受容者が感受性を瀺すこずを確認し
た抗原ずずもに皮内泚射し、24時間埌の皮膚反
応を調べた。結果を第図に瀺す。 第図に瀺す分離により、抗原ストレプトキ
ナヌれSKに感受性を瀺さない䟛䞎者から
物質を埗た。受容者はストレプトキナヌれに感
受性を瀺すこずがわか぀おいた。受容者が、モ
ゞナレヌタヌのない堎合に瀺すSKに察する皮
膚反応を第図に氎平な線ずしお瀺した。この
線より䞊にくればアンプリフアむアヌ掻性、こ
れ以䞋の応答は正垞より䜎く、サプレツサヌ掻
性を瀺唆する。参考のため、第図に、フロレ
スカミン反応物質ならびに各皮の小分子セロ
トニン、ヒスタミン、アスコルビン酞、ニコチ
ンアミドおよびリン酞ハむドロコヌチゟンで
血管反応性、炎症誘発性たたは抗炎症性が知ら
れおいる物質を含む分画の䜍眮を瀺す。実線は
各分画の溶出したたたの濃床での皮膚反応性を
瀺しおいる。 各分画の結果を、数皮の垌釈床で投䞎した集
合分画〜〜〜
ず比范した。垌釈床が高いほど、逆に、10〜20
の集合分画では最倧のアプリフアむアヌ掻性を
瀺した。アンプリフアむアヌの最倧掻性を瀺
す分画、ならびに分画の垌釈効果を、
SKに察しお感受性を瀺す個䜓で枬定した。結
果は、抗原およびモゞナレヌタヌ泚射埌
および24時間の発赀および硬結領域の瞊暪を
mmで瀺した。モゞナレヌタヌは生理食塩氎で垌
釈した。このデヌタは第衚に瀺す。 アンプリフアむアヌの堎合第図の分画
、詊隓した党垌釈床で匷い促進およ増匷䜜
甚が認められ、怜蚎した党濃床で詊隓郚䜍の飜
和を瀺しおいる。しかしながら、分画で
は、10〜1000倍垌釈でのみ有意な増匷が認めら
れ、したが぀お、アンプリフアむアヌ掻性に
は明瞭な至適濃床が埗られた。ある皋床の促進
もみられたが、アンプリフアむアヌほど明瞭
ではなか぀た。 第図の非垌釈サンプルに぀いおの枬定で埗
られたアンプリフアむアヌ掻性のこずピヌク
は、必ずしも、党プレパレヌシペンにおけるア
ンプリフアむアヌの真の䜍眮を瀺すものではな
い。これにはいく぀かの理由がある。第䞀に、
䟛䞎者により癜血球䞭のモゞナレヌタヌ濃床が
異なるたである。癜血球䞭に他の物質があり、
これがプレパレヌシペンに圱響する堎合もあ
る。詊隓した受容者偎の生物孊適な倉動もあ
る。最埌に、アンプリフアむアヌの堎合、濃
床によ぀お逆の効果を瀺すこずが関係する。ず
くに第図においお、分画〜の領域で
掻性が䜎䞋したのは、この領域ではアンプリフ
アむアヌが䞊蚘至適濃床にあ぀た結果であるこ
ずは明瞭である。適圓に垌釈した堎合、アンプ
リフアむアヌの掻性ピヌクは分画〜
の領域に認められるべきである。この結論を第
図に点線で瀺した。これはアンプリフアむア
ヌ掻性を至適垌釈においお枬定したずしおの
掚枬曲線である。 分画〜にはサプレツサヌ掻性がみ
られた。抗原ず同時に泚射するず、サプレツ
サヌは泚射たたは24時間埌のDH応答の発珟
を効果的に防止した。これに察し、抗原単独を
泚射した堎合には、24時間埌に明瞭なDH応答
が認められ、アンプリフアむアヌたたはも
存圚するずころでは、も぀ず匷い応答さえ認め
られた。結果を第図に瀺す。患者の巊腕に、
第図に瀺し溶出募配の分画を集め10およ
び100に垌釈したものを、患者の腕に瀺し
たようにHP−PK−にはHP−分画〜
を合す、HP−PK−にはHP−分画
〜を合す、HP−PK−にはHP−
分画〜を合すをPPDず混合しお
䞀連に皮䞋泚射した。PPD単独の察照の泚射
は患者の右腕に行぀た。HP−およびHP−
を泚射した郚䜍では、この分画䞭のアンプリ
フアむアヌにより、察照に比べお炎症の増匷が
芳察された。しかしながら、HP−凊理郚䜍
では、存圚するサプレツサヌの掻性がこの分画
のアンプリフアむアヌの掻性を䞊回るず思わ
れ、炎症は䜎䞋した。サプレツサヌ掻性は倧
郚分の䟛䞎者で、逆盞クロマドグラフむヌのプ
ヌルした分画〜にみられた。サプレ
ツサヌ掻性が単䞀の分画たずえば第図の分画
に認められる堎合もあ぀た。しかしなが
ら、党プレパレヌシペンで垞に単䞀フラクシペ
ンにサプレツサヌ掻性がみられるのみでなく、
このような掻性の存圚は䟛䞎者間で差がみられ
た。 逆盞クロマトグラフむヌにより分離した20か
ら30たでの領域の各フラクシペンに぀いお数皮
の垌釈を行い枬定するず、アンプリフアむアヌ
およびの存圚が確認された。アンプリ
フアむアヌの掻性ピヌクは分画および
、アンプリフアむアヌの掻性は分画に
集たり、アンプリフアむアヌの掻性は䞻ずし
お分画およびに存圚した。サプレツ
サヌは分画およびに認められた。クロ
マトグラフむヌの代衚的結果を第図に瀺す。
第図では、察照に察するDH応答の倉化を
×−a*×b*により皮膚反応の皋床で
プロツトた。およびは分画抗原の泚射に
よ぀お生じた発赀郚䜍の盎埄をたがいに盎亀す
る軞にそ぀お枬定しおmmで衚瀺した倀であり、
a*およびb*は抗原単独を泚射しお生じた察照
郚䜍での盞圓する盎埄である。すなわち、この
皮膚反応の皋床は抗原単独おび抗原ずモゞナレ
ヌタヌの混合における病倉の面積の差にほが盞
圓する。分画およびにみられた察照レ
ベルより小さな倀はサプレツサヌ掻性を、
より倧きい倀はアンプリフアむアヌ掻性を瀺
す。第図に瀺した実隓では奇数番号の分画の
み枬定しおいるこずを考慮するず、第図のパ
タヌンは第図の堎合に類䌌しおいる。 ゚タノヌル−氎募配が゚タノヌル濃床99.9
に達したのち、100゚タノヌルにより流速0.5
ml分で溶出し、ml分画を集めるず、逆盞カ
ラムからアンプリフアむアヌが溶出した。こ
の条件ではアンプリフアむアヌは分画〜
に怜出され、芋かけの濃床が最倧になるの
は分画であ぀た。 アンプリフアむアヌは、受絊者が感受性を
瀺す抗原に察する応答を促進、増倧させた。
×108の癜血球から䞊述の粟補法で生成した甚
量で、以前に暎露された抗原に察する応答が疟
患により䜎䞋した患者のDH応答を改善し、堎
合により回埩させた。䞀般的に、アンプリフア
むアヌに察する応答は垌釈によ぀お増倧する
が、至的垌釈床は各受絊者により、たた倚分抗
原によ぀おも倉動した。第衚には皮の垌釈
の結果を瀺す。では、ストレプトキナヌれ感
受性受絊者にストレプトキナヌれ2.5単䜍ず同
時にアンプリフアむアヌを投䞎した。逆盞カラ
ムから集めたアンプリフアむアヌの分画1.0ml
を凍結也燥し、生理食塩氎0.3mlに再溶解した。
指瀺した分画0.1mlを指瀺したように生理食塩
氎で垌釈し、泚射した。では、PPD感受性
受絊者に暙準Aplisol PPD1/10垌釈液0.05ml
を、アンプリフアむアヌの指瀺した生理食塩氎
垌釈液0.1mlたたは察照ずしお生理食品氎0.1ml
ずずもに泚射した。 アンプリフアむアヌ掻性をも぀物質は氎溶液
から゚ヌテルで抜出できる。抜出可胜な掻性は
最倧効果を埗るに垌釈を芁する。しかしなが
ら、どのアンプリフアむアヌが゚ヌテル抜出さ
れるのかは䞍明である。䞊述のモゞナレヌタヌ
の逆盞クロマトグラフむヌによる分離は本技術
分野で公知の各皮逆盞カラム材料を甚いお実斜
できる。溶出状態は倉化するが、䞊蚘モゞナレ
ヌタヌの分離に最適な条件は本技術分野におけ
る通垞の知識を有する者には容易に決定できる
ものである。  透析分画の分画化 透析分画はヒドロキシアパタむト䞊クロマ
トグラフむヌによ぀おさらに分画化できる。粉
末を陀去したのち、あらかじめヒドロキシアパ
タむトを重炭酞アンモニりムで平衡化
し、1.5×20cmカラムに充填した。凍結也燥し、
0.05M重炭酞アンモニりムに再解した分画を
カラムに適甚した。カラムは0.05M〜0.2M重
炭酞アンモニりム募配115mlで、぀いで
0.2M〜0.6M重炭酞アンモニりム募配65ml
で溶出した。各mlの分画を260nの吞収お
よびフロレスカミンずの反応性でモニタヌし
た。ほが党募配にわたり、各フラクシペンを
個ず぀合しお採取した。合した分画に぀いお、
受絊者が感受性を瀺した抗原ずずもに皮内泚射
しお生物掻性を調べた。結果を第衚に瀺す。
盞察DH応答は、硬結領域の盎埄を25および43
時間に枬定しおmmで衚し、抗原単独を泚射した
堎合の察照反応郚䜍ず比范しお第衚に瀺し
た。0.1Mず0.15Mの重炭酞アンモニりムの間
に溶出した分画およびは、少なく
ずも43時間、DH反応を匷力に抑制した。72時
間埌にはおよびの分画を泚射した
郚䜍に10mm×10mmの反応がみられ、この抑制掻
性は時間がた぀ず可逆性をも぀こずを瀺しおい
る。 䟋  特城および察照実隓  䟋1Bで癜血球抜出液を補造したず同様にし
お透析赀血球抜出液を補造した。分別透析、
SephadexG−10カラムクロマトグラフむヌを
䟋に蚘茉したず同様にしお実斜した。埗られ
た分画には、免疫モゞナレヌタヌ掻性は認めら
れなか぀た。したが぀お、芳察された生物掻性
は、抜出および粟補工皋で導入されたものでは
なか぀た。さらに、血小板抜出液を同䞀の粟補
工皋に付したが、モゞナレヌタヌ掻性はみられ
なか぀た。粟補アンプリフアむアヌの䞀郚は再
クロマトグラフむヌに付したが、はじめの粟補
時ずほが同じ挙動を瀺した。  茞送因子に関する先行技術の蚘述から、芳察
された受絊者の感受性増倧が、䟛䞎差には怜地
できなか぀た䜎レベルの感受性の茞送により、
濃瞮されお受絊者においお感受性の増倧ずしお
珟れたのではないずいうこずを、できる限り明
癜にするこずが重芁であ぀た。この堎合に甚い
た実隓方法は、地域的に局圚するこずが明らか
な抗原たたは医孊的に远跡できる起源の抗原に
぀いお詊隓する方法がある。結栞菌の粟補タン
パク誘導䜓、PPDは医孊的に远跡可胜で、か
぀地域的に局圚する。PPDに察する感受性は
BCGBacille Calmette−Guerinでワクチン
化された前歎のある個䜓に生じ、これは欧州で
は結栞に察する免疫を付䞎するため広範に甚い
られおいる。しかしながら、米囜では蚱可され
たこずがない。ヒストプラズミンは地域的に局
圚する抗原である。ヒストプラズミンに察する
感受性は米囜南郚や熱垯地方に倚く、ヒストプ
ラズマ症はこの地方の颚土病であるが欧州には
ない。 察照実隓では、䟛䞎者は米囜南郚生たれで、
ヒストプラズミンには皮膚詊隓で感受性を瀺す
が、PPDには反応しない者を遞んだ。受絊者
はず぀ず英囜に䜏んでいお、PPDに察する皮
膚詊隓で感受性を瀺すか、BCG泚射の前歎が
あ぀た。この実隓に甚いたアンプリフアむアヌ
プレパレヌシペンは䞊述のようにSephadex 
−10分画工皋により粟補したが、短い80cmカラ
ムを甚いお分離皋床の䜎いものずした。したが
぀お、詊隓物質はアンプリフアむアヌ〜お
よびサプレツサヌの混合物で、さらにフロレ
スカミン反応性物質も含んでいた。しかしなが
ら、結果はプレパヌシペン䞭に茞送因子掻性が
ないこずを蚌明ずしお重芁である。 結果は第衚に瀺す。名の受絊者それぞ
れ、皮類のフロレスカミン反応性ピヌク
Sephadexカラムおよび分画で詊隓
した。フロレスカミン反応性に基づき2.4mgの
各フラクシペンを単独にたたはPPD25単䜍ず
ずもに泚射した。はじめの泚射から14時間埌
に、抗原を泚射しなか぀た郚䜍に、ヒストプラ
ズミン、0.1mlのヒストプラズミン抗原Park
−Davis Corp.、Detroit、Mich.、生理食塩氎
垌釈液ずしお垂販を挑戊させた。
PPDたたはヒストプラズミン単独を泚射した
察照郚䜍も適圓な時間に準備した。第衚に
は、皮膚反応の匷床を、泚射郚䜍に囲む硬結領
域の盎埄mmで瀺す。デヌタは、受絊者が、
癜血球抜出液分画の泚射前、埌いずれも、ヒス
トプラズミンず反応する胜力をもたなか぀たこ
ずを瀺しおいる。アンプリフアむアヌの促進お
よび増匷の䞡効果が認められる。䞀方、ヒスト
プラズミン感受性の茞送はみられない。  本発明のアプリフアむアヌ掻性の重芁な点
は、詊隓したすべおが、促進アンプリフアむ
アヌおよび増倧アンプリフアむアヌ
掻性ならびにアンプリフアむアヌを含めお党
身的に有効なこずである。さらに、党身的効果
は無感䜜性患者疟患で正垞な免疫応答が消倱
した患者にも認めるこずができた。 BCGの既埀があり、珟圚は疟患のためPPD
に非反応性である患者が、䞊述の䟋2Bのアン
プリフアむアヌを10〜100倍の高甚量皮䞋泚射
したずころ、PPDに応答を瀺すようにな぀た。
抗原に察する応答はアンプリフアむアヌの泚射
郚䜍に局限されなか぀た。 党身的効果はアンプリフアむアヌを甚いた䞀
連の実隓で劇的に瀺された。サルコむドヌシスに
幎間眹患し、党抗原に察する応答が著しく匱く
な぀おいた患者の䟋を瀺す。以䞋に詊隓を行぀
た。詊隓第日に、患者に砎傷颚トキ゜むドを、
単独および皮々の垌釈床でアンプリフアむアヌ
ずずもに投䞎した。結果は、第衚に瀺すよう
に、砎傷颚トキ゜むド単独では硬結のない匱い発
赀反応を、アンプリフアむアヌずずもに投䞎し
たずきはわずかな増倧を瀺した。しかしながら、
どの詊隓郚䜍にも硬結はなく、患者が適圓に応答
しおいないこずを瀺しおいた。詊隓第日、患者
に逆盞クロマトグラフむヌ分画からのアンプ
リフアむアヌを、玄×108の癜血球から抜出
された盞圓量を皮䞋泚射した。詊隓第日に、患
者に再床、砎傷颚トキ゜むドを、単独にたたは数
皮の垌釈床のアンプリフアむアヌずずもに前回
同様投䞎した、このずきは、アンプリフアむアヌ
に明瞭な反応があ぀お、第衚に瀺すように硬
結も認められた。この結果は第日に投䞎したア
ンプリフアむアヌの党身的効果によ぀お修食さ
れ、抗原に察する応答が増倧したこずを瀺しおい
る。 アンプリフアむアヌの党身的効果は、患者の
末梢血リンパ球のin vitroにおける掻性化に察す
る応答の枬定によ぀おも明らかである。リンパ球
掻性化はよく知られた珟象である。正垞人の末梢
血リンパ球サンプルを、怍物ミトゲンやフむトぞ
マグルチニンPHAなどの公知掻性化剀によ
り现胞培逊で増殖を誘発する。増殖速床は培地か
ら分裂现胞ぞの3H−チミゞン取り蟌みに぀お衚
される。詊隓法はOppenheim、J.J.らIn Vitro
Methods of Cell Mediated and Tumor
ImmunityBloom、Davia線573〜585頁、
Academic Press、New York、N.Y.1976に
蚘茉されおいる。 末梢リンパ球サンプルは䞊蚘詊隓の第日およ
び第日に採取し、各皮掻性化剀に察する応答を
枬定した。結果は第衚に瀺す。第日にはリン
パ球は正垞の応答レベルよりかなり䜎か぀たが、
第日には皮の掻性化剀䞭の皮に察し、正垞
たたは増倧した応答を瀺した。すなわち、アンプ
リフアむアヌの皮䞋泚射に察する党身的応答を
生じた。 䞊述の実隓で、ブタ草ミトゲンはGibco
Laboratories、Grand Island、N.Y.、PHAおよ
びコンカナバリンはDifco Laboratories、
Detroit、Mich.から埗た。結果は第衚に、3H−
チミゞン取り蟌みをカりント分で瀺した。 䟋  各志願者に぀いおの実隓結果から、非遺䌝性の
無感䜜性たたは免疫機胜䜎䞋状態の受絊者の免疫
応答を䞊述のアンプリフアむアヌで増倧できるこ
ずが明らかである。志願者に぀いおの䞀郚の実隓
結果はSephadex −10クロマトグラフむヌによ
粟補物質で、アンプリフアむアヌの混合物ず考え
られる物質を甚いお行われた。治療方法の奜たし
い態様は次のずおりである。 アンプリフアむアヌ〜は逆盞クロマトグラ
フむヌを甚い、䟋に蚘茉したように調補、粟補
する。掻性分画を集め、凍結也燥し、生理食塩氎
たたは生理的に蚱容されるビヌクルに再溶解す
る。有効量、たずえば×107の癜血球から粟補
されたアンプリフアむアヌ〜に盞圓する量を
含む0.1mlを皮䞋泚射する。免疫応答の増倧は、
感受性も぀こずがわか぀おいる抗原に察する患者
の反応性をアンプリフアむアヌの投䞎前埌で比べ
おモニタヌする。アンプリフアむアヌは所望の効
果に応じお、単独たたは配合投䞎する。アンプリ
フアむアヌの投䞎によ぀お生じる系の修食の特続
は患者間で異なり、䞊述の適圓な感受性詊隓によ
り呚期的にモニタヌしなければならない。所望の
免疫匷化を維持するためには、医垫の刀断によ
り、投䞎をくり返す。 䟋  アンプリフアむアヌは、単独にたたは配合し
お、匱いワクチンに免疫応答を生じさせるめに䜿
甚できる。倚くの病原䜓、たずえば数皮のブドり
球菌倉皮やヒストプラズマ症、カンゞダ症を生じ
る菌は、䞀郚の患者では匷い免疫応答を誘発しな
い。しかも、この皮の患者に免疫機胜を䞎える満
足できるワクチンは知られおいない。この皮の菌
の感染は、ずくに、癌化孊療法や免疫抑制剀療法
を受けおいる患者にず぀おは危険である。匱い抗
原に察する患者の免疫応答を増匷するこずによ
り、䞊述のアンプリフアむアヌの皮たたは皮
以䞊の投䞎は、この皮の病原䜓に察するワクチン
の補造を可胜にする。化孊療法たたは移怍手術を
受けようずする患者は、治療前に、ヒストプラズ
マ症やカンゞダ症に眹患しやすくならないように
ワクチン化するこずができる。 ワクチンは、公知方法により適圓な枛毒および
非増殖化する方法で調補した所望の病原䜓の抗原
を、䟋に蚘茉の方法で補造したアンプリフアむ
アヌ〜ず合しお補造すのが奜たしい。ワクチ
ンは垞法によ぀お投䞎する。 䞊述のように䜿甚すれば、アンプリフアむアヌ
〜は、医孊的予防法の範囲を拡倧し、免疫性
抗原の可胜性を広げるこずが期埅できる。 䟋  重節なうるしによる皮膚反応たたは他の接觊過
敏性反応はサプレツサヌ凊眮で予防される。接
觊皮膚反応たずえばうるしや他のアレルゲンに察
する反応の䞻芁郚分はDH反応であるこずが知ら
れおいお、この皮の治療は次のように実斜され
る。サプレツサヌは䟋に蚘茉したようにしお
粟補できる。逆盞クロマトグラフむヌで埗られた
掻性分画を集め、凍結也燥し、぀いで、コヌルド
クリヌム基剀組成物のような局所投䞎に適した軟
膏に導入する。反応がたずえば組織たたは臓噚移
怍のように党身性の堎合は、非経口投䞎が奜たし
い。各䟛䞎者によ぀おサプレツサヌ掻性の収率は
倉動するので、適甚量は掻性単䜍で衚す必芁があ
る。サプレツサヌ単䜍はヒトDH反応の硬結の
盎埄をmm䜎䞋させるのに必芁な最小量ず定矩さ
れる。この定矩を甚いお、臚床的に必芁が぀お倧
甚量を投䞎する堎合には100cm2あたり少なくずも
単䜍の割合で甚いる。凊眮は危険がある限り続
け、少なくずも日に回の間隔で行うが、臚床
䞊必芁ならびさらに頻回に行うこずができる。各
患者の反応は、患者の抗原に察する感受性の皋
床、およびサプレツサヌに察する反応により倉動
する。この皮の組成物には、ステロむドたたは他
の抗炎症剀を加えお、治療効果を増匷させるこず
も有利である。 䟋  重節なうるしおよび他の接觊皮膚反応は、䟋
に蚘茉した方法で補造したサプレツサヌにより
防止できる。この堎合も、皮膚反応のDH成分が
この治療法の有効性を指瀺する。ヒドロキシアパ
タむトクロマトグラフむヌから埗られた掻性分画
を集め、凍結也燥し、局所投䞎に適した軟膏組成
物に導入うする。反応が党身的な堎合、たずえば
組織たたは皮膚移怍では、非経口投䞎が奜たし
い。投䞎量および投䞎方法は、䟋に述べたずほ
が同じである。 サプレツサヌずサプレツサヌは、別個にた
たは単䞀組成物に混合しお適甚できる。 毒性 本発明によるヒト免疫系モゞナレヌタヌはいず
れも、䞊蚘したような人䜓物質の抜出物であり、
その毒性は怜出できない皋䜎く、同抜出物の詊隓
においおも、毒性もしく有害な䜜甚は芋い出され
なか぀た。 䞀般的結論 免疫系における䞊述のモゞナレヌタヌは、倩然
においお免疫の調敎を、盎接现胞免疫によりおよ
び倚分間接的に䜓液性免疫にも圱響しお営んでい
る物質ず考えられる。この物質は高玔床に調補さ
れたので、その性質を特定するこずができた。そ
の性質は、先行技術に報告されおいる茞送因子や
その郚分分画ずは党く異なり、予期せぬ盞異も瀺
した。本発明のアンプリフアむアヌおよびサプレ
ツサヌは、各皮の免疫機胜亢進および䜎䞋状態を
呈する患者の治療に䜿甚できる。この物質は特異
的な性質を有する者ずいうよりも、正垞䟛䞎者か
ら単離でき、したが぀おプヌルした原料から倧芏
暡な粟補が容易である点でずくに重芁である。本
発明のモゞナレヌタヌはその生物掻性および物理
性状で定矩されるものであ぀お、必ずしも単䞀化
孊物質から構成されるものではない。 本発明を以䞊、特定の奜たしい態様を参照しお
説明したが、本発明の粟神および範囲から逞脱す
るこずなくさらに改倉が可胜なこずは圓然であ
る。本発明は、䞀般に本発明の原理にしたがいた
た本発明の属する技術範囲内で公知、慣甚の実務
による本発明からの倉曎に基づくすべおの改倉、
䜿甚たたは適甚を包含する。たずえば、透析およ
び透析膜による透析を本明现曞では採甚しおいる
が、この語は分子およびたたは生物掻性を、サ
むズおよびたたは重量で分離する均等方法を包
含する。すなわち、透析の語は、限倖過、超遠
心および電気泳動を包含するものである。
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