JPS5837285B2 - チヨウナイカンセンシヨウチリヨウザイノセイゾウホウホウ - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 本発明はＩｇＡ高濃度含有γ−グロプリンを主成分とす
る腸内感染症の治療剤の製造に関するものである。

更に詳しくは、人血清又は血漿由来のＩｇＡ高濃度含有
γ−グロプリン（以下ＩｇＡ！Ｊツチｒ−Ｇと称する）
を、腸溶性の被膜で覆った経口投与用腸内感染症治療剤
の製造方法に関するものである。

血漿分画が始まって以来、γ−グロプリンはアルブミン
と並んで重要な医薬として、繁用され、今日では臨床上
なくてはならないものとなっている。

しかしながら、その用途は、注射薬としての麻疹、輸血
後肝炎、その他各種感染症の予防、治療などであり、そ
の投与方法は注射に限られていた。

本発明者らは、注射薬としての薬理作用の範囲でのみ使
用されていたこのγ−グロプリンを従来になかった経口
薬として使用し、それが注射薬として投与の場合にはみ
られなかったγ−グロプリンの非常に優れた腸内感染症
の治療、予防効果を見い出し、このγ−グロプリンの腸
溶性製剤の製造方法を提供するものである。

本発明は、このような知見に基いてなされたもので、γ
−グロプリンの新しい用途を有する製剤の製造方法を提
供するものである。

ヒトの血清タンパクが、電気泳動法によって、アルブミ
ン、α−グロプリン、β−グロプリン及びγ−グロプリ
ンに分類されて以来、免疫抗体は主としてγ−グロプリ
ンに存在することが明らかにされ、注射用γ−グロプリ
ン製剤は、今日では極めて有用な予防、治療上なくては
ならない物質であり、臨床上重要な製剤である。

その後研究の進歩とともに、免疫抗体はβ−グロプリン
域にもその存在が及んでいることが認められ、それとと
もに、従来から考えられていた免疫抗体、すなわち、γ
−グロプリンはβ−グロプリンの１部を含めて細分類さ
れるに至り、今日では、ＩｇＧ、ＩｇＡ，ＩｇＭ１ Ｉ
ｇＩ）及びＩｇＥの、それぞれ生埋学的に特徴を有する
５種の主成分として分類されている。

このうちＩｇＡは血清中のみならず、乳汁や消化器、呼
吸器などの分泌器官において産出され、それらが粘膜上
皮細胞に存在することは明らかであるとされている。

分泌液中に見い出されるＩｇＡは、免疫学的に血清Ｉｇ
Ａ と同一である２分子のＩｇＡがセクレトリコンポー
ネント（ Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ（
Ｓｃ））と結合してダイマーを形或しており、このもの
は、タンパク分解酵素の作用や、酸性条件下で著しく安
定であり、これは分泌型ＩｇＡ（以後Ｓ−ＩｇＡと呼ぶ
）として、血清型ＩｇＡ（以後単にＩｇＡと呼ぶ）と区
別されている。

このように、ＩｇＡ系は他の免疫グロブリンと異なり、
Ｓ−ＩｇＡの形で分泌器官の粘膜上皮細胞に存在して、
そこへ侵入して来る細菌やウイルスを攻撃するという、
いわゆる局所免疫として大きな役割を演じているもので
ある。

乳汁中にはＳ−ＩｇＡの含量が高く（初乳で平均３００
■／ｄｌ、通常乳で５０■／ｄｉ、いまだ自己体内での
免疫抗体産生が十分でない乳児は、母乳から摂取したＳ
−ＩｇＡによって免疫学的に保護されており、このこと
は人工乳育児の乳児が母乳育児に比べて、感染に対する
抵抗力が低いことによっても明らかである。

授乳によって与えられるＳ−■ｇＡは、胃を通過して腸
管に達するが、これが免疫抗体として有効に働いている
こと、胃を通過する際、乳児の場合そこに存在するタン
パク分解酵素によって分解を受けず、又胃の酸性の条件
においても安定であることを示している。

本発明者らは、Ｓ−ＩｇＡが酸やタンパク分解酵素に対
し、ＩｇＡと比べて著しく安定であることをインビトロ
（ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ）の実験で証明した（瓜生勝
寛、上村八尋、船越哲、加納正：生物物理化学Ｌ炙（３
）、２１４（１９７４）。

授乳によって与えられたＳ 一ＩｇＡが、乳児の腸管内
で有効に働くことは、Ｓ−ＩｇＡが安定に胃を通過して
腸管に達していることを示している。

自体内で産生されたＳ一ＩｇＡが、粘膜上皮細胞に存在
することから、腸管に達したＳ−ＩｇＡは、細胞内に取
り込まれることも考えられるが、抗原抗体反応は比較的
速やかに行われ、授乳は毎日数回にわたって行われてい
るから、必ずしも細胞へ取り込まれなくて、腸管を通過
することによって、そこに存在する細菌、ウイルスを攻
撃し、有効に働いていることが容易に理解できる。

一方粘膜上皮細胞には、ＩｇＡと結合していない遊離の
ＳＣも存在して℃・ることか明らかにされている。

このものはＩｇＡ欠損症の患者においても存在している
。

ＩｇＡ欠損患者に血漿を犬量投与した場合、分泌液中に
ＩｇＡの出現をみたという報告がある〔ペツティ、Ｒ，
Ｅ．、キャッシディ、Ｊ，Ｔ，及びサリバン、Ｄ．Ｂ，
：ペディアトリックスｓ＋（１）、４ ４． （ １
９ ７ ３ ）、（Ｐｅｔｔｙ、Ｒ，Ｅ，、Ｃａｓｓｉ
ｄｙ， Ｊ，Ｔ， ａｎｄ Ｓｕｌｌｉｖａｎ， Ｄ，
Ｂ．： Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓ ５ １ （ １ ）
、４ ４ （ １ ９ ７ ３））：これは粘膜に存在
していた遊離ＳＣが関与していることも考えられるが、
これまでの広い知見から、通常血中ＩｇＡは分泌器官へ
は移行しないか、又するとしても極めてわずかであると
されている。

ＩｇＡ欠損の場合には、分泌器は代償としてＩｇＧ 、
ＩｇＭを分泌し、これによってＩｇＡの代役を務めると
の報告がある〔プロシーデイングス、オブ、ザ、ソサイ
エテイ、ホア、エキスペリメンタル、バイオロジイ、ア
ンド、メデイシン（ Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ ｏｆ
Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｂ ｉｏｌｏｇｙａｎｄ
Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ） ）。

母乳、だ液など分泌液からＳ−ＩｇＡを濃縮精製し、こ
れを薬剤として、あるいは牛乳（加工乳も含めて）など
に混じて、乳児に飲ませれば、最も良いのはいうまでも
ないが、工業的に製剤化するためには、原料の点から極
めて困難である。

このように血中ＩｇＡが分泌器官へ移行しにくいという
ことと、自然の状態において、母乳のＳＩｇＡが経口的
に乳児に与えられているという事実、又ＩｇＧやＩｇＭ
もＩｇＡ欠損の場合、局所において有効に働らき得るこ
となどから、ＩｇＡのみならず、ＩｇＧ，ＩｇＭを安定
化して、これを経口投与して医療に役立てるという、こ
れまでに類をみない新規な着想をもって本発明の内服用
ＩｇＡ リツチγ−Ｇ製剤の製法を完成したのである。

本発明は精製ＩｇＡＩＪツチγ一Ｇを、酸性では溶解せ
ず、中性若しくはアルカリ性において溶解する被膜で覆
って、腸溶性の内服用ＩｇＡ リツチγ一Ｇ製剤を製造
するものである。

本発明における原料に用いるＩｇＡ Ｉ）ッチγＧは、
血清、血漿などをそのまま粉末化して用いてもよいが、
医薬としての効率を高めるためには、出発物質からＩｇ
Ａ リツチγ−Ｇを精製したＩｇＡ高濃度含有γ−グロ
プリンを用いることが好ましい。

ＩｇＡ Ｉ）ツチγ一Ｇの製造方法は、従来公知のどの
ような方法でもよいが、その製品はＨＢ抗原、血圧降下
性物質の除去などを行ったγ−グロプリンとしての純度
が十分に高いものが望ましい。

ＩｇＡの精製法としては、ヘレマンス （ Ｈｅｒｅｍａｎｓ ）らによる亜鉛イオンによる方
法〔クリニカ、シミ力、アクタ（ＣｌｉｎｉｃａＣｈｉ
ｍｉｃａ Ａｃｔａ） ４、９６（１９５９））が最初
である。

その後も、精製法の改良はされているが、それらは塩析
、ＤＥＡＥ−セルロース、ＴＥＡＥ−セ／Ｌ／０−ス、
ＤＥＡＥ−セファデツクスなどを、適当に組み合せるこ
とによって製造されている〔イムノケミストリー（ Ｉ
ｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ） ２、２６３（１
９６３）、ジャーナル、オフ、イムノロジイ（ Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｅｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ） ９ １ ，
７（１９６３）、同誌１０７、２０１（１９７１）、
同誌旦旦、１９７（１９６５））。

このようなＩｇＡの精製法の先行文献に基いて発明者ら
は、医療用に用い得るＩｇＡを精製した。

出発物として血清、血漿を用いた場合、エタノール分画
法によって画分■のペーストを得た後、ＱＡＥ −セ
ファデツクスなどのイオン交換セファデツクスによる分
離、硫安分画、ゲル沢過の処理による方法、アンドラン
（ Ａｎｄｒａｎ ）らの方法〔ボックス、サングイニ
ス（ＶｏｘＳａｎｇｕｉｎｉｓ ）２旦、１６５（１
９７２））に準じた処理方法、塩析法としてイシザカら
の方法〔ジャーナル、オブ、イムノロジイ９５、１９７
（１９６５））などによって精製を行い、ＩｇＡ リ
ツチγ−Ｇを得た。

このようにして得たＩｇＡ リツチγ−Ｇは、そのま
ま内服すると、成人の場合はもちろん、乳児においても
、胃において分解されてしまうから、使用には耐えない
。

従って、これを腸溶性被膜で覆うことによって、安定化
して、胃を通過させ、腸に至って、被膜が溶解すること
によって、内容物が放出されることが必要である。

この腸溶性コーティングの方法は、条件を選択すること
によって、従来公知のあらゆる方法を適用できる。

その条件としては、熱処理、有機溶媒の使用などの限定
である。

本発明者らは、これらを選択することによって、実施例
に示すように、との腸溶性コーティングの工程における
製剤の崩壊を９０％に抑え、製剤として使用可能な腸溶
性製剤を作ることに成功した。

本発明において使用することのできる腸溶性被膜形戒物
質としては、メチルメタアクリレート・メタアクリル酸
共重合体、ポリビニルアセテートフタレート、セルロー
スアセテートサクシネート、ヒドロキシブロビルメチル
セルロースフタレート、セルロースアセテートフタレー
ト、セルロースプロピオネートフタレート、メチルセル
ロースフタレートを挙げられる。

これらの物質は、すべて有機溶媒可溶腸溶性フイルムコ
ーティング剤であり、アルコール、アセトンなどに適当
量溶解し、固形化されたＩｇＡ リツチｒ −Ｇにふり
かげることができる。

この腸溶性ＩｇＡ リツチγ−Ｇ製剤の形態としては、
上記の方法によって精製されたＩｇＡＩＪツチγ−Ｇを
乾燥粉末化し、ゼラチン基質などの市販カプセルに充て
んし、このカプセルに、上記の腸溶性被覆形成物質をコ
ーティングするか、あるいは、マイクロカプセル・ミニ
ペレットなどの小形粒子の腸溶剤とすることができる。

ミニペレットの製法としては、サブコーティングの方法
で腸溶化製剤を作ることが好ましい。

すなわち、固形化ＩｇＡ Ｉ）ツチγ−Ｇ粒子を水溶
性の被膜形成物質トして、ヒドロキシプロビルセルロー
ス、ヒドロキシプロビルメチルセルロース、ホリビニル
ピロリドン、ビニルピロリドンービニルアセテート共重
合体、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース
、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニル
アルコール、アラビアゴムなとで、サブコーティングし
た後、更にこの被膜の上に上記の有機溶媒可溶腸溶性フ
イルムコーティング剤を被覆する方法である。

このコーティングの方法としての条件は、腸溶性コーテ
ィングの場合は、５０℃以下、好ましくは３０℃以下の
温度で、被膜剤を有機溶媒に溶かした溶液でコーティン
グすることである。

サブコーティングの方法の条件は、同様に５０℃以下、
好ましくは３０℃以下の温度で、被膜剤を水に溶かした
溶液でコーティングすることである。

又小量の有機溶媒を加えた水溶液に被膜剤を溶解した溶
液によっても可能である。

このようにして得られた腸溶性ＩｇＡ リッチγＧ製
剤は薬剤としての対象に合せて、カプセル又はミニペレ
ットとして投与される。

この薬剤は、経口的に投与した場合、腸管内において、
はじめて被膜が溶解して、ＩｇＡ リツチγ一Ｇが放
出され、この物質の薬埋効果を腸管内において有効に発
揮するのである。

後記実施例４で示されるＩｇＡ Ｉ）ツチγ一Ｇの腸溶
剤としての薬埋効果の確認試験は、菌攻撃に対してＩｇ
Ａ！Ｊツチｒ−Ｇを腸溶剤として調製した場合にのみ有
効に働き、この製剤を人体に使用した場合における腸溶
剤としての有効性を示唆している。

本則の人体に使用する場合の投与量は、菌攻撃に対する
動物試験の結果によると、実施例に示される１カプセル
量で十分と思われるが、動物試験による大量投与による
急性毒性の結果から、大量投与によっても、何らの副作
用は見い出せないので、人体への投与量も適宜調整でき
るし、又菌の攻撃量によっても変動する。

このようにして本方法によって得られる腸溶性ＩｇＡ
リツチγ一Ｇは、従来にないγ−グロプリンの医療用途
として、注目されるもので、γ−グロプリンを腸管内に
おいて有効に薬効を発揮させ得る製剤を提供する本発明
は新規であり、有用性も高いものということができる。

実施例 １ 正常成人プール血漿１０００ｌをコーンのエタノール分
画法で分画して得られた分画■のペース｝３１ｋｇに水
３００ｌを加えて混和し、均一な懸濁液とした。

これを遠心分離して上澄液を集め、０．００６３Ｍ
ＥＯＴＡ−４Ｎａ溶液（ｐＨ６．０）で平衡化させたＱ
ＡＥ −セファデツクスＡ−５０を４５ｋｇこれに加え
てよく混合した後、沢過して吸着部分を集め、これに０
．２６Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ４．０）１５０グを加えよく
混合した後、沢過して溶出液を集めた。

溶出液は硫安沈殿法によって濃縮後、凍結真空乾燥によ
ってＩｇＡＩＪツチｒ一Ｇの粉末１８７Ｚを得た。

これの組或はＩｇＡ５２％、ＩｇＧ４４％、ＩｇＭ１．
５％、その他２．５％で、ラジオインムノアツセイ法に
よる測定で、ＨＢ抗原は陰性であった。

又これの３００ｍ９を２０±２１のマウスに内服させて
１週間経過をみたが、異常を全く認めなかった。

得られたＩｇＡ リツチｒ−ＧＩＯＯＰにコーンスター
チ５５％、アビセル４３．８％、ステアリン酸マグネシ
ウム１．２％を混合した基剤２００？を加えて混合した
ものを、３号カプセルに１２０±１０ｍ９ずつ充てんし
、これにセルロース・アセテート・フタレート８％、メ
チルエチルケトン５６％、塩化メチレン３５％、トリア
セチン１％の割合から成るフイルム剤をかげて腸溶性と
するためのコーティングを施し、ＩｇＡ リツチγ一Ｇ
の腸溶性カプセルを作った。

製品の主成分（ＩｇＡ及びＩｇＧ）の回収率は表１に示
すとおりである。

実施例 ２ コーンの分画■ペースト３ｋｇを冷水３０ｌに懸濁し、
１夜静置後、上清を分離した。

この上清にアウドランらの方法〔アウドラン、Ｌ，Ｐ，
Ｒ及びシュタインブーフ、Ｍ （ Ａｕｄｒａｎ ，Ｌ
．Ｐ， Ｒ． ａｎｄＳｔｅｉｎｂｕｃｈ１Ｍ．） ：
ホツク，ｚ．、サンクイニス（ Ｖｏｘ Ｓａｎｇｕ
ｉｎｉｓ ） ２ ３、１６５（１９７２））に従っ
てカプリル酸ナトリウム９００ｆＩを加えｐＨを５．０
に調整する。

析出した沈清を遠心分離し、得られた上清に冷エタノー
ルを終濃度３３％になるように加え、ＩｇＡ リツチγ
−Ｇを沈渣として分離した。

この沈渣を１％ＮａＣｌ 含有２％グリシン溶液に溶
解させ、不溶物を遠心分離した。

同じ溶媒で平衡化させたセファデツクスＧ２００（スウ
ェーデン、ファルマシア社製）のカラムを用いてゲル沢
過を行い、ＩｇＡ ＩＪツチγＧ画分を分離した。

それを凍結乾燥させて、得られた粉末はタンパク重量と
して２８１であり、その組或はＩｇＡ６２％、ＩｇＧ２
７％、ＩｇＭ３％、その他のタンパク８％であった。

このものはラジオインムノアツセイ法によってＨＢ抗原
は陰性であり、これのタンパクとして３００ｍ９を２０
±２１のマウスに内服させて１週間経過をみたが、異常
を認めなかった。

このようにして得たＩｇＡ リツチγ−Ｇ２５ｆにコ
ーンスターチ６０％、結晶セルロース３９％、ステアリ
ン酸マグネシウム１％よりなる賦形剤２５グを混和し、
５号カプセルを用いて５０±５■ずつ充てんし、これに
メチルメタクリレート・メチルメタアクリル酸共重合物
１０％、アセトン５０％、インプロパノール３８％、ト
リアセチン２％の割合からなるフイルム剤をかげて、腸
溶性ＩｇＡＩＪツチγ−Ｇカプセル剤を得た。

製品中のＩｇＡ及びＩｇＧの回収率は表２に示すとおり
である。

マウスに対する安全性試験では異常は認めなかつた。

実施例 ３ 正常成人プール血漿１０００ｌに冷水１００００ｌを加
え、ｐＨ５．３に調整した後、析出して来る沈渣を遠心
分離して除いた。

この上清を塩析法〔イシザカ．Ｋ．、イシザカ．Ｔ．、
り−Ｅ，Ｈ及びフーデンベルグ、Ｈ．（ Ｉ ３ｈｉｚ
ａｋａ ， Ｋ．、Ｉ ｓｈｉｚａｋａ ， Ｔ ．、
Ｌｅｅ，Ｅ．Ｈ， ａｎｄ Ｆｕｄｅｎｂｅｒｇ， Ｈ
． ）ジャーナル、オブ、イムノロジイ（ Ｊ ， Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ ， ） ９ ５、１９７（１９６５）
）によってＩｇＡ 一γ一Ｇの精製を行なった。

すなわち、得られた上清に終濃度０．０５Ｍになるよう
に硫酸亜鉛を加えると再び沈渣が析出して来るので、上
記と同様に遠心分離してこれを除いた。

この上清に硫安を加え、４５％飽和にするとＩｇＡは沈
渣として析出して来た。

遠心分離を行い沈渣部分を集め２％グリシン溶液又は生
理食塩水に対して透析した後、凍結乾燥してＩｇＡ リ
ツチγ−Ｇの粉末１８４グを得た。

その組成はＩｇＡ６７％、ＩｇＧ２２％、アルブミン８
％、その他のタンパク３％でラジオインムノアツセイ法
による測定で、ＨＢ抗原は陰性であった。

又これの３ ０ ０１ｎ９を２０±２１マウスに内服さ
せて１週間経過をみたが、全く異常を認めなかった。

このように得られたＩｇＡ リツチγ−Ｇ１５０２に
コーンスターチ７０％、アビセル２０％、カルポキシメ
チルセルロースカルシウム５０５、５％、ヒドロキシプ
口ピルセルロース（ＨＰＣ）５％よりなる基剤６００１
を混じ、水を加えて練合した後、球形顆粒に造粒して真
空乾燥し、直径約０．５關の顆粒７ ５ ０ ？を得た
。

これにポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）８０％、ＨＰＣ
２０％の割合で混合した粉末を水に溶解させ、サブコ
ーティングを施した後、セルロースプロピオネートフタ
レート１０％、アセトン４９％、イソプロパノール４０
％、トリアセチン２％よりなるフイルム剤をかげて腸溶
性ミニペレットを得た。

フイルムコーティング後の総重量の増加は４０％であっ
た。

得られた製品のＩｇＡ及びＩｇＧの残存率及び抗体活性
は表３のとおりである。

＊ 腸溶性ＩｇＡＩＪツチｒ −Ｇの薬埋的効果を確認
する動物試験として腸チフス菌感染防禦試験を行った。

試料として実施例３の方法で得た腸溶性ＩｇＡ リッ
チγ−Ｇミニペレット（Ａ）２３ｒｖ（タンパクとして
３η）を用い、対照試料として実施例３で得られる腸溶
性被膜を有しないミニペレット（Ｂ）１５■（タンパク
として３■）を用いた。

又、対照のために、腸チフス、パラチフス混合ワクチン
免疫後のヒト血漿から実施例３と同様に腸溶性■ｇＡ
リツチγ−Ｇミニペレツ｝（Ｃ）２． ３ Ｗｌｇ（タ
ンパクとして３ｍＪ９）を作り試験に供した。

生後約４週間のマウス４匹を１群とし、各群に、菌攻撃
６時間前にそれぞれ内服用ＩｇＡ リツチγ−Ｇ剤を経
口投与した。

攻撃菌は腸チフス菌６３株を１０−１〜１０″■／献に
なるように３％ムチン液に浮遊させたものを用い、それ
ぞれ小腸内に０． １ ｍｌずつ接種し、以後３日間生
死を観察し、表４の結果を得た。

すなわち、腸溶性製剤にのみ感染防禦効果がみられた。

試験例 ２ 実施例１によって得られた腸溶性ＩｇＡＩＪツチγ一Ｇ
カプセルの安全性試験を体重２０±２１のマウスを用い
て３日間連続経口投与して、１週間観察したが異常は認
められなかった。

試験例 ３ 腸溶性ＩｇＡＩＪツチγ−Ｇを用いた臨床適応例を以下
に示す。

患者は１２才の男子で無γ−グロプリン血症と診断され
、水様性下痢、貧血、胸膜炎の所見が認められた。

入院後、直ちに抗生物質、免疫血清グロプリンの筋注あ
るいは静注投与を行った。

その結果、胸膜炎の所見は改善したが、高熱、下痢は改
善せず、食思不振も続いた。

血清総タンパク４．０？／ｄｉ！、アルブミン１′ｆ！
／ｄｌと極度の低タンパク血症をきたした。

第２６病日より、実施例１と同様に得られた腸溶性Ｉｇ
Ａ ｒｉｃｈ γ一Ｇ製剤の経口投与を開始した。

カプセル製剤は１日３回（１カプセルＩｇＡ５０■含有
／回）食間に投与した。

投与開始後３日目から解熱傾向を示し、７日目には平熱
に服し、便は４日目から普通便となった。

以後、発熱なく、下痢も止まり、食欲も増し、血清総タ
ンパク６． ４ ？／ｄｌ、アルプミン４．２？／ｄｌ
と低タンパク血症の改善とともに、全身状態の著明な改
善がみられた。

第９５病日退院。退院後も投与を続けているが下痢はな
く全身状態も良好のうちに経過している。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 精製されたＩｇＡ高濃度含有γ−グロプリンを、酸
   性においては溶解せず、中性若しくはアルカリ性におい
   て溶解する被膜で覆い、酸性条件に対して安定化するこ
   とを特徴とする腸内感染症治療剤の製造方法。